JP2020055846A - 抗ptk7抗体−薬物コンジュゲート - Google Patents
抗ptk7抗体−薬物コンジュゲート Download PDFInfo
- Publication number
- JP2020055846A JP2020055846A JP2019220041A JP2019220041A JP2020055846A JP 2020055846 A JP2020055846 A JP 2020055846A JP 2019220041 A JP2019220041 A JP 2019220041A JP 2019220041 A JP2019220041 A JP 2019220041A JP 2020055846 A JP2020055846 A JP 2020055846A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- seq
- ptk7
- drug conjugate
- variable region
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
- A61K47/6817—Toxins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6847—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a hormone or a hormone-releasing or -inhibiting factor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6871—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting an enzyme
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/77—Internalization into the cell
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Abstract
Description
2014年4月30日に出願された米国仮出願第61/986,520号に対して優先権が主張され、それは参照により本明細書にそのまま援用される。
この出願は、EFS−Webを介して電子出願されており、.txt形式の電子的に提出された配列リストを含む。.txtファイルは、2014年4月30日に作成された、57.7KBの大きさを有する“PC072045_Sequence_Listing.txt”と題された配列リストを含有する。この.txtファイルに含有される配列リストは、本明細書の一部であり、それは参照により本明細書にそのまま援用される。
、および療法におけるそれらの使用も提供する。本発明のPTK7抗体−薬物コンジュゲートは、一般に式:Ab−(L−D)のものであり、式中、Abは、PTK7に結合する抗体、またはその抗原結合断片、またはそのPTK7結合断片であり;そしてL−Dはリンカー−薬物部分であり、ここでLはリンカーであり、そしてDはオーリスタチンである。
ID NO:39と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、
例えば、SEQ ID NO:25として示されている重鎖可変領域およびSEQ ID
NO:39として示されている軽鎖可変領域を含む。
ID NO:63と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、例えば、SEQ ID NO:49として示されている重鎖可変領域およびSEQ ID
NO:63として示されている軽鎖可変領域を含む。
u24またはhu58抗体である。
本明細書で開示されるPTK7抗体−薬物コンジュゲートの全てが、切断可能または切断不能であるリンカーを用いて調製されることができる。一側面において、切断可能なリンカーは、マレイミドカプロイル−バリン−シトルリン−p−アミノベンジルオキシカルボニル(vc)であることができる。別の側面において、切断可能なリンカーは、4−(4’−アセチルフェノキシ)ブタン酸(AcBut)であることができる。別の側面において、切断不能なリンカーは、マレイミドカプロイル(mc)であることができる。
2−メチルアラニル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S)−1−カルボキシ−2−フェニルエチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドであることができる。
O:23として示されている軽鎖を含む抗体、またはその抗原結合断片、Ab;ならびに(b)リンカー−薬物部分、L−D、式中、Lはリンカーであり、Dは薬物である;を含み、ここで、リンカーは、マレイミドカプロイル−バリン−シトルリン−p−アミノベンジルオキシカルボニル(vc)であり、ここで、薬物は、0101である。
:47として示されている軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、Ab;ならびに(b)リンカー−薬物部分、L−D、式中、Lはリンカーであり、Dは薬物である;を含み、ここで、リンカーは、AcBut(4−(4’−アセチルフェノキシ)ブタン酸)であり、ここで、薬物は、CM(N−アセチル−γ−カリケアマイシンジメチルヒドラジド)である。
可能なキャリヤーを含む医薬組成物が提供される。
他の側面において、本明細書で開示されるPTK7抗体−薬物コンジュゲートを含む療法上有効量の組成物を投与することによりPTK7関連障害を処置する方法が、提供される。代表的なPTK7関連障害は、過剰増殖性障害、例えば新生物性障害、例えば固形腫瘍(例えば、乳癌、例えばトリプルネガティブ乳癌(TNBC)、プロゲステロン受容体陽性乳癌(PR+)、エストロゲン受容体陽性乳癌(ER+)およびダブルポジティブ乳癌;卵巣癌;結腸直腸癌;食道癌;胃癌;黒色腫;肉腫;腎臓癌;膵臓癌;前立腺癌;肝臓癌、例えば肝細胞癌(HCC);ならびに肺癌、例えば非小細胞肺癌(NSCLC)および小細胞肺癌(SCLC)等)および血液悪性疾患(例えば、白血病、例えば成人骨髄性白血病(AML)および急性リンパ芽球性白血病(ALL)等)を含む。対象におけるPTK7関連障害を処置するための医薬品の製造のための開示されるPTK7抗体−薬物コンジュゲートの使用も、提供される。PTK7関連障害の処置における使用のためのPTK7抗体−薬物コンジュゲートも、提供される。
本発明の他の側面は、本明細書で開示される抗体−薬物コンジュゲート、容器、および処置を示す添付文書またはラベルを含む製品、すなわちキットを含む。
および薬物を用いてコンジュゲートを調製するためのプロセスを提供する。本発明の抗体−薬物コンジュゲートは、PTK7発現を特徴とする過剰増殖性障害の診断、予防、および/または処置において用いられることができる組成物、例えば医薬品の調製および製造に関して有用である。本発明のある側面において、開示される抗体−薬物コンジュゲートは、腫瘍開始細胞(TIC)の頻度を低減することができ、それは腫瘍永続化細胞(TPC)および高増殖性腫瘍前駆細胞(TProg)の両方を包含する。
結腸癌キナーゼ4(CCK4)としても知られているタンパク質チロシンキナーゼ(PTK7)は、正常なヒトメラニン形成細胞から最初にクローニングされ(Lee et al., Oncogene 8(12):3403-3410, 1993)、別途結腸癌組織からクローニングされた(Mossie et al., Oncogene 11(10):2179-2184, 1995)受容体チロシンキナーゼである。PTK7遺伝子は、6p21.1−pl2.2に位置している。ヒトPTK7の5種類のスプライスイソ型が、精巣のcDNAからクローニングされている(Jung, et al., Biochim Biophys Acta 1579, 2002)。イソ型の互いに関する相対存在度は、精巣および肝細胞癌または結腸癌株の間で異なるが、これらのイソ型の機能的重要性は、たとえあるとしても未知である。生物情報学分析は、マウスはオルタナティブスプライシングされたmRNAから可溶性のPTK7のイソ型を発現している可能性があることを示唆している(Forrest, Taylor et al., Genome Biol 7, 2006)。
ecruit)可能性もある。PTK7は、胚発生を制御するための細胞接着、細胞移動、細胞極性、増殖、アクチン細胞骨格の再編成、およびアポトーシス、上皮組織の組織化、神経管閉鎖、神経堤形成、ならびに軸索誘導において機能している可能性があることが、示されている(Peradziryi, H. et al. Arch Biochem Biophys. 524, 2012)。
2012)。可溶性PTK7(sPTK7)は、VEGFに誘導される血管新生、ならびにヒト内皮細胞のインビトロでの管形成、移動および浸潤におけるPTK7に関する役割を示すために用いられた。
本発明は、式Ab−(L−D)の抗体−薬物コンジュゲートを提供し、式中、(a)Abは、PTK7に結合する抗体、またはその抗原結合断片であり、そして(b)L−Dは、リンカー−薬物部分であり、ここでLはリンカーであり、そしてDは薬物である。そのような抗体−薬物コンジュゲートを調製および製造する方法、ならびにその同じ物の臨床適用における使用も、提供される。“抗体−薬物コンジュゲート”または“ADC”は、PTK7に結合する抗体誘導体を含む抗体またはその抗原結合断片を指し、本明細書にお
いて下記でさらに記載されるように、薬物、例えば細胞毒性、細胞増殖抑制、および/または療法剤にコンジュゲートされている。例えば、細胞毒性剤は、細胞毒性剤の腫瘍(例えばPTK7発現腫瘍)への標的化された局所送達のために、本明細書で記載されるように抗PTK7抗体に連結またはコンジュゲートされることができる。
本発明と関連して用いられている追加の科学用語および技術用語は、本明細書で別途示されない限り、当業者により一般的に理解されている意味を有するものとする。さらに、別途文脈により要求されない限り、単数形の用語は、複数を含むものとし、複数形の用語は、単数を含むものとする。一般に、本明細書で記載される細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学ならびにタンパク質および核酸化学ならびにハイブリダイゼーションと関連して用いられている命名法およびその技法は、当該技術で周知であり、一般的に用いられている命名法および技法である。
、質量分析、ELISAアッセイ、放射測定法、疎水性相互作用クロマトグラフィー(HIC)、電気泳動およびHPLCにより決定されることができる。
本発明のPTK7抗体−薬物コンジュゲートの調製に関して、抗体、またはその抗原結合断片は、PTK7に特異的に結合するあらゆる抗体、またはその抗原結合断片であることができる。本発明の抗体は、PCT国際公開第2012/112943号においてさらに開示され、特性付けられており、それは参照により本明細書にそのまま援用される。より詳細には、その中で開示されているPTK7抗体の配列は、完全な重鎖および軽鎖、その可変領域、ならびにそのCDRを含め、本明細書に参照により援用される。PTK7抗体−薬物コンジュゲートの調製における使用のために、抗体、またはその抗原結合断片は、単離、精製、または誘導体化されることができる。
び/またはより大きな持続時間で結合する場合、標的または抗原に“特異的に結合する”または“優先的に結合する”。例えば、PTK7エピトープに特異的または優先的に結合する抗体は、このエピトープに、それが他のPTK7エピトープまたは非PTK7エピトープに結合するよりも大きい親和性、結合力で、より容易に、および/またはより大きな持続時間で結合する抗体である。
施することである。抗体をそれらの交差競合に基づいて‘棚入れする(binning)’ための高スループットプロセスが、PCT国際公開第03/48731号において記載されている。本明細書で用いられる際、用語‘棚入れする’は、抗体をそれらの抗原結合特徴および互いとの競合に基づいてグループ分けするための方法を指す。
“単離された抗体”は、本明細書で用いられる際、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す(例えば、PTK7に特異的に結合する単離された抗体は、PTK7以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない)。さらに、単離された抗体は、他の細胞性物質および/または化学物質を実質的に含まないことができる。しかし、PTK7に特異的に結合する単離された抗体は、他の抗原、例えば他の種からのPTK7分子(すなわちオルソログ)に対する、またはPTK7の1より多くのイソ型との交差反応性を有し得る。
いて大規模に異なっている事実を指す。
する受容体を記載する。好ましいFcRは、天然配列のヒトFcRである。さらに、好ましいFcRは、IgG抗体に結合するFcR(ガンマ受容体)であり、FcγRI、FcγRII、およびFcγRIII下位クラスの受容体を、これらの受容体の対立遺伝子バリアントおよびオルタナティブスプライシングされた形態を含めて含む。FcγRII受容体は、FcγRIIA(“活性化受容体”)およびFcγRIIB(“阻害受容体”)を含み、それは、主にその細胞質ドメインにおいて異なる類似のアミノ酸配列を有する。FcRは、Ravetch and Kinet, Ann. Rev. Immunol., 9:457-92, 1991; Capel et al., Immunomethods, 4:25-34, 1994;およびde Haas et al., J. Lab. Clin. Med., 126:330-41, 1995において総説されている。“FcR”は、新生児型受容体FcRnも含み、それは、母親のIgGの胎児への移動の原因である(Guyer et al., J. Immunol., 117:587-593 (1976);およびKim et al., European J. Immunol., 24:2429-2434 (1994))。
l., 2005, Nucleic Acids Res. 33(データベース特集号):D671-D674を参照)。
のhu23 CDRを有する抗体、またはその抗原結合断片を含む。例えば、PTK7抗体−薬物コンジュゲートは、少なくとも1個の重鎖可変領域および少なくとも1個の軽鎖可変領域を有する抗体、またはその抗原結合断片を含むことができ、ここで、その少なくとも1個の重鎖可変領域は、Chothiaにより定められた3個のhu23 CDR(表1参照)またはVBASE2データベースの分析から得られた3個のhu23 CDR(PCT国際公開第2012/112943号参照)を含む。別の例として、PTK7抗体−薬物コンジュゲートは、少なくとも1個の重鎖可変領域および少なくとも1個の軽鎖可変領域を有する抗体、またはその抗原結合断片を含むことができ、ここで、その少なくとも1個の軽鎖可変領域は、Chothiaにより定められた3個のhu23 CDR(表1参照)またはVBASE2データベースの分析から得られた3個のhu23 CDR(PCT国際公開第2012/112943号参照)を含む。本発明のある側面において、本発明のPTK7抗体−薬物コンジュゲートは、(a)Chothiaに従って定められた3個のhu23 CDR(表1参照)を有する重鎖可変領域;および(b)Chothiaに従って定められた3個のhu23 CDR(表1参照)を有する軽鎖可変領域を有する抗体、またはその抗原結合断片を含むことができる。本発明のある側面において、本発明のPTK7抗体−薬物コンジュゲートは、(a)VBASE2データベースの分析から得られた3個のhu23 CDR(PCT国際公開第2012/112943号参照)を含む重鎖可変領域;および(b)VBASE2データベースの分析から得られた3個のhu23 CDR(PCT国際公開第2012/112943号参照)を含む軽鎖可変領域を有する抗体、またはその抗原結合断片を含むことができる。
に従って定められた3個のhu24 CDR(表1参照)を有する軽鎖可変領域を有する抗体、またはその抗原結合断片を含むことができる。本発明のある側面において、本発明のPTK7抗体−薬物コンジュゲートは、(a)VBASE2データベースの分析から得られた3個のhu24 CDR(PCT国際公開第2012/112943号参照)を含む重鎖可変領域;および(b)VBASE2データベースの分析から得られた3個のhu24 CDR(PCT国際公開第2012/112943号参照)を含む軽鎖可変領域を有する抗体、またはその抗原結合断片を含むことができる。
集団から得られたものとしての抗体の性質を示し、いずれかの特定の方法によるその抗体の生成を必要するものとして解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って用いられるべきモノクローナル抗体は、Kohler and Milstein, Nature 256:495-497 (1975)により最初に記載されたハイブリドーマ法により作製されることができ、または例えば米国特許第4,816,567号において記載されている組み換えDNA法により作製されることもできる。モノクローナル抗体は、例えばMcCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990)において記載された技法を用いて生成されたファージライブラリーから単離されることもできる。
L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2、またはCDR H3)を有し、それは、元の抗体からの1個以上のCDR“に由来する”1個以上のCDRとも呼ばれる。
-525 (1986); Riechmann et al. Nature 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al. Science 239:1534-1536 (1988))に従って、齧歯類または変異体齧歯類CDRまたはCDR配列でヒト抗体の対応する配列を置き換えることにより実施されることができる。米国特許第5,225,539号;第5,585,089号;第5,693,761号;第5,693,762号;第5,859,205号も参照;それは参照により本明細書にそのまま援用される。一部の場合において、ヒト免疫グロブリンの1個以上の可変領域のフレームワーク領域内の残基が、対応する非ヒト残基により置き換えられる(例えば、米国特許第5,585,089号;第5,693,761号;第5,693,762号;および第6,180,370号を参照)。さらに、ヒト化抗体は、受容抗体中にも供与抗体中にもない残基を含むことができる。これらの改変は、抗体の性能をさらに改良するため(例えば所望の親和性を得るため)に行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも1個、典型的には2個の可変ドメインの実質的に全部を含むと考えられ、ここで、超可変領域の全部または実質的に全部は、非ヒト免疫グロブリンの超可変領域に対応し、フレームワーク領域の全部または実質的に全部は、ヒト免疫グロブリン配列のフレームワーク領域である。ヒト化抗体は、場合により、免疫グロブリンの定常領域(Fc)、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部も含むであろう。さらなる詳細に関しては、Jones et al. Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al. Nature 332:323-327 (1988);およびPresta Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)を参照;それは参照により本明細書にそのまま援用される。従って、そのような“ヒト化”抗体は、完全なヒト可変ドメインより実質的に少ない部分が非ヒト種からの対応する配列により置き換えられている抗体を含むことができる。実際、ヒト化抗体は、典型的には、一部のCDR残基およびおそらく一部のフレームワーク残基が、齧歯類抗体中の類似の部位からの残基により置き換えられているヒト抗体である。例えば、米国特許第5,225,539号;第5,585,089号;第5,693,761号;第5,693,762号;第5,859,205号を参照。予め決定された抗原に関する向上した親和性を有するヒト化抗体およびヒト化抗体を生成するための技法が開示されている、米国特許第6,180,370号、およびPCT国際公開第01/27160号も参照。
ペットヘモシニアン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、またはダイズトリプシンインヒビターに、二官能性薬剤または誘導体化剤、例えばマレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル(システイン残基を通したコンジュゲーション)、N−ヒドロキシスクシンイミド(リジン残基を通したコンジュゲーション)、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、SOCl2、またはR1N=C=NR(式中、RおよびR1は異なるアルキル基である)を用いてコンジュゲートさせたヒトPTK7または標的アミノ酸配列を含有する断片を用いた宿主動物の免疫処置は、抗体(例えばモノクローナル抗体)の集団をもたらし得る。
法論/技法、ならびに(4)ヒト化抗体のトランスフェクションおよび発現。例えば、米国特許第4,816,567号;第5,807,715号;第5,866,692号;第6,331,415号;第5,530,101号;第5,693,761号;第5,693,762号;第5,585,089号;および第6,180,370号を参照。
導入を含む追加の変更が、抗体の結合、機能性、コドン使用率、発現レベル等を最適化するために、供与および/または受容配列中になされることができる。例えば、PCT国際公開第91/09967号を参照。
本発明のある側面において、PTK7に結合する抗体−薬物コンジュゲートは、SEQ
ID NO:1、25、または49のいずれか1つとして示されている重鎖可変領域および/またはSEQ ID NO:15、39、または63のいずれか1つとして示されている軽鎖可変領域を有する抗体、またはその抗原結合断片を含む。例えば、本発明のPTK7抗体−薬物コンジュゲートは、SEQ ID NO:1に少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域およびSEQ ID NO:15に少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体、もしくはその抗原結合断片;またはSEQ ID NO:1として示されている重鎖可変領域およびSEQ ID NO:15として示されているアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体、もしくはその抗原結合断片を含むことができる。別の例として、本発明のPTK7抗体−薬物コンジュゲートは、SEQ ID NO:25に少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域およびSEQ ID NO:39に少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体、もしくはその抗原結合断片;またはSEQ ID NO:25として示されている重鎖可変領域およびSEQ ID NO:39として示されているアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体、もしくはその抗原結合断片を含むことができる。別の例として、本発明のPTK7抗体−薬物コンジュゲートは、SEQ ID NO:49に少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域およびSEQ ID NO:63に少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体、もしくはその抗原結合断片;またはSEQ ID NO:49として示されている重鎖可変領域およびSEQ ID NO:63として示されているアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有する抗体、もしくはその抗原結合断片を含むことができる。
のような抗体は、しばしば、生殖細胞系列の配列と比較して変異している。ヒトVHおよびVL遺伝子に関する生殖細胞系列DNA配列は、当該技術で既知である(例えば、“Vbase”ヒト生殖細胞系列配列データベースを参照;Kabat, E. A., et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版, 米国保健福祉省、NIH公開番号91-3242; Tomlinson et al., J. Mol. Biol. 227:776-798, 1992;およびCox et al., Eur. J. Immunol. 24:827-836, 1994も参照)。
もできる。他のヒドロキシルも、標準的な保護基に誘導体化されることができる。ポリヌクレオチドは、例えば2’−O−メチル−、2’−O−アリル、2’−フルオロ−または2’−アジド−リボース、炭素環式糖類似体、アルファまたはベータアノマー糖、エピマー糖、例えばアラビノース、キシロースまたはリキソース、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース類、非環式類似体および脱塩基ヌクレオシド類似体、例えばメチルリボシドを含む、当該技術で一般的に知られているリボースまたはデオキシリボース糖の類似形態を含有することもできる。1個以上のホスホジエステル結合が、代替の連結基により置き換えられることができる。これらの代替の連結基は、ホスフェートがP(O)S(“チオエート”)、P(S)S(“ジチオエート”)、(O)NR2(“アミデート”)、P(O)R、P(O)OR’、COまたはCH2(“ホルムアセタール(formacetal)”)により置き換えられている特徴を含むが、それに限定されず、ここでそれぞれのRまたはR’は、独立してH、または場合によりエーテル(−O−)結合、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニルもしくはアラルキルを含有する置換もしくは非置換アルキル(1〜20C)である。ポリヌクレオチド中の全部の結合が同一である必要はない。先行する記載は、RNAおよびDNAを含む本明細書で言及される全てのポリヌクレオチドに適用される。
NO:2(hu23 VH DNA)、SEQ ID NO:16(hu23 VL DNA)、SEQ ID NO:26(hu24 VH DNA)、SEQ ID NO:40(hu24 VL DNA)、SEQ ID NO:50(hu58 VH DNA)およびSEQ ID NO:64(hu58 VL DNA)として示されている。抗PTK抗体重鎖および軽鎖をコードする代表的なDNAは、SEQ ID NO:14(hu23 HC DNA)、SEQ ID NO:24(hu23 LC DNA)、SEQ ID NO:38(hu24 HC DNA)、SEQ ID NO:48(hu24 LC DNA)、SEQ ID NO:62(hu58 HC DNA)、およびSEQ ID NO:72(hu58 LC DNA)として示されている。
リヌクレオチド配列は、FASTA、GapまたはBestfitを用いて比較されることができ、それはWisconsinパッケージバージョン10.0、Genetics
Computer Group(GCG)、ウィスコンシン州マディソン中のプログラムである。例えばプログラムFASTA2およびFASTA3を含むFASTAは、クエリー配列および検索配列の間の最高の重複の領域のアラインメントおよびパーセント配列同一性を提供する(Pearson, Methods Enzymol. 183:63-98 (1990); Pearson, Methods Mol. Biol. 132:185-219 (2000); Pearson, Methods Enzymol. 266:227-258 (1996); Pearson, J. Mol. Biol. 276:71-84 (1998);それは参照により本明細書にそのまま援用される)。別途明記されない限り、個々のプログラムまたはアルゴリズムに関する初期設定のパラメーターが用いられる。例えば、核酸配列間のパーセント配列同一性は、FASTAをその初期設定のパラメーター(6のワードサイズおよびスコア行列に関してNOPAM因子(NOPAM factor))と共に用いて、またはGapをGCGバージョン6.1において提供されているようなその初期設定のパラメーターと共に用いて決定されることができ、それは参照により本明細書にそのまま援用される。
et al. (1985) J. Biol. Chem. 260:2605-2608;およびRossolini et al. (1994) Mol. Cell Probes 8:91-98を参照。
Immunological Interest, 第5版, 米国保健福祉省、NIH公開番号91-3242を参照)、これ
らの領域を包含するDNA断片は、標準的なPCR増幅により得られることができる。重鎖定常領域は、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgMまたはIgD定常領域であることができるが、最も好ましくは、IgG1またはIgG2定常領域である。IgG定常領域配列は、異なる個体間で生じることが知られている様々な対立遺伝子またはアロタイプ、例えばGm(1)、Gm(2)、Gm(3)、およびGm(17)のいずれであることもできる。これらのアロタイプは、IgG1定常領域中の自然発生アミノ酸置換に相当する。Fab断片重鎖遺伝子に関して、VHをコードするDNAは、重鎖CH1定常領域のみをコードする別のDNA分子に作動的に連結されることができる。CH1重鎖定常領域は、重鎖遺伝子のいずれに由来することもできる。
Eng. 10:949-57, 1997)、“ミニボディ”(Martin et al., EMBO J., 13:5303-9, 1994)、“ダイアボディ”(Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448, 1993)、または“ジャヌシン(Janusins)”(Traunecker et al., EMBO J. 10:3655-3659, 1991およびTraunecker et al., Int. J. Cancer (補遺) 7:51-52, 1992)が、本明
細書の教示に従って、標準的な分子生物学の技法を用いて調製されることができる。
本発明の抗PTK7抗体−薬物コンジュゲートは、薬物を抗PTK7抗体に連結またはコンジュゲートするためのリンカーを用いて調製されることができる。リンカーは、薬物および抗体を連結して抗体−薬物コンジュゲート(ADC)を形成するために用いられることができる二官能性化合物である。そのようなコンジュゲートは、例えば、腫瘍関連抗原に対して向けられた免疫コンジュゲートの形成において有用である。そのようなコンジュゲートは、細胞毒性薬物の腫瘍細胞への選択的送達を可能にする。適切なリンカーは、例えば、切断可能および切断不能なリンカーを含む。切断可能なリンカーは、典型的には細胞内条件の下で切断を受けやすい。コンジュゲートされた薬物が抗体から切断される主な機序は、リソソームの酸性pHにおける加水分解(ヒドラゾン類、アセタール類、およびシス−アコニテート様アミド類)、リソソーム酵素(カテプシン類および他のリソソーム酵素)によるペプチド切断、およびジスルフィドの還元を含む。切断に関するこれらの様々な機序の結果として、薬物を抗体に連結する機序も広く異なり、あらゆる適切なリン
カーが用いられることができる。
ルコールおよび細胞毒性剤の間で作られる。ペプチドの切断は、アミノベンジルカルバメートまたはカーボネートの崩壊、または自己犠牲(self−immolation)をもたらす。この戦略を用いて例示される細胞毒性剤は、アントラサイクリン類、タキサン類、マイトマイシンC、およびオーリスタチン類を含む。一例において、フェノールも、カルバメートの代わりにリンカーの崩壊により遊離されることができる。別のバリエーションにおいて、ジスルフィド還元が、パラ−メルカプトベンジルカルバメートまたはカーボネートの崩壊を開始するために用いられる。
る方法およびプロセスを用いて生成されることができ、それは参照により本明細書にそのまま援用される。本発明のある側面において、AcButCM部分は、米国仮出願第61/899,682号において記載されているような向上した合成プロセスを用いて生成されることができ、それは参照により本明細書にそのまま援用される。
(2001) Ann. Nucl. Med. 15: 267-270;米国特許第6,024,938号)。あるいは、標的化分子は、放射性同位体が直接それに結合し得るように誘導体化されることができる(Yoo et al. (1997) J. Nucl. Med. 38: 294-300)。ヨウ素化法も、当該技術で既知であり、代表的なプロトコルは、例えばKrenning et al. (1989) Lancet 1:242-4において、およびBakker et al. (1990) J. Nucl. Med. 31:1501-9において見付けられることができる。
開示されるPTK7抗体−薬物コンジュゲートの調製において有用な薬物は、生物学的または検出可能な活性を有するあらゆる物質、例えば療法剤、検出可能な標識、結合剤等、およびインビボで代謝されて有効薬剤になるプロドラッグを含む。薬物は、薬物誘導体であることもでき、ここで、薬物は、本発明の抗体とのコンジュゲーションを可能にするように官能化されている。開示される方法によれば、薬物は、式Ab−(L−D)の抗体−薬物コンジュゲートを調製するために用いられ、式中、(a)Abは、PTK7に結合する抗体、またはその抗原結合断片であり;そして(b)L−Dは、リンカー−薬物部分であり、ここでLはリンカーであり、そしてDは薬物である。薬物対抗体比(DAR)または薬物装填は、抗体あたりにコンジュゲートしている薬物(D)分子の数を示す。本発明の抗体−薬物コンジュゲートは、1〜8の範囲内であるDARを有する。従って、本発明の側面において、PTK7抗体−薬物コンジュゲートは、1個の薬物分子(1のDAR)、または2個の薬物分子(2のDAR)、または3個の薬物分子(3のDAR)、または4個の薬物分子(4のDAR)、または5個の薬物分子(5のDAR)、または6個の薬物分子(6のDAR)、または7個の薬物分子(7のDAR)、または8個の薬物分子(8のDAR)を含むことができる。DARは、様々な従来の手段、例えばUV分光法、質量分析、ELISAアッセイ、放射測定法、疎水性相互作用クロマトグラフィー(HIC)、電気泳動およびHPLCにより決定されることができる。
ARの範囲において用いられる際、用語“約”は、+/−0.5%を意味する。
なく、従って療法剤は、上記の用語の1以上を用いて記載されることができる。例えば、選択される放射性同位体は、細胞毒素でもある。療法剤は、上記のいずれかの薬学的に許容可能な塩類、酸、または誘導体として調製されることができる。一般に、放射性同位体を薬物として有するコンジュゲートは、放射性免疫コンジュゲートと呼ばれ、化学療法剤を薬物として有するコンジュゲートは、化学免疫コンジュゲートと呼ばれる。
別の例において、オーリスタチンは、次の構造を有する8261(8261 2−メチルアラニル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S)−1−カルボキシ−2−フェニルエチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド)である:
デュオカルマイシンおよびCC−1065は、細胞毒性効力を有するDNAアルキル化剤である。Boger and Johnson, PNAS 92:3642-3649, 1995を参照。典型的なドラスタチン類およびオーリスタチン類は、(+)−デュオカルマイシンAおよび(+)−デュオカルマイシンSA、ならびに(+)−CC−1065を含むが、それらに限定されない。
り、それは参照により本明細書にそのまま援用される。これらの化合物は、メチルトリスルフィドを含有し、それは適切なチオール類と反応してジスルフィドを形成し、同時に官能基、例えばヒドラジドまたはカリケアマイシンを抗PTK7抗体にコンジュゲートさせるために有用である他の官能基を導入することができる。カリケアマイシンのジスルフィド類似体、例えば米国特許第5,606,040号および第5,770,710号において記載されている類似体が用いられることもでき、それは参照により本明細書にそのまま援用される。本発明のある側面において、ジスルフィド類似体は、N−アセチル−γ−カリケアマイシンジメチルヒドラジド(以下“CM”)である。
ホスファミド、ブロモクリプチン、ダナゾール、ダプソン、グルタルアルデヒド、MHC抗原およびMHC断片に関する抗イディオタイプ抗体、シクロスポリンA、ステロイド類、例えば糖質コルチコステロイド類、サイトカインまたはサイトカイン受容体拮抗薬(例えば、抗インターフェロン抗体、抗IL10抗体、抗TNFα抗体、抗IL2抗体)、ストレプトキナーゼ、TGFβ、ラパマイシン、T細胞受容体、T細胞受容体断片、ならびにT細胞受容体抗体を含む。
毒素タンパク質(またはポリペプチド)の例は、ジフテリア(例えばジフテリアA鎖)、シュードモナス属の外毒素および内毒素、リシン(例えばリシンA鎖)、アブリン(例えばアブリンA鎖)、モデッシン(例えばモデッシンA鎖)、アルファ−サルシン、アレウリテス・フォルディ(Aleurites fordii)タンパク質、ジアンチンタンパク質、リボヌクレアーゼ(RNアーゼ)、DNアーゼI、スタフィロコッカス属の腸毒素A、ヨウシュヤマゴボウの抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、ジフテリア毒素、フィトラカ・アメリカーナ(Phytolaca americana)タンパク質(PAPI、PAPII、およびPAP−S)、モモルディカ・カランティア(momordica charantia)阻害剤、クルシン、クロチン、サポナリア・オフィシナリス(sapaonaria officinalis)阻害剤、ミトゲリン(mitogellin)、レストリクトシン、フェノマイシン(phenomycin)、エノマイシン(enomycin)、トリコテセン類(tricothecenes)、阻害剤シスチンノット(ICK)ペプチド(例えばセラトトキシン類(ceratotoxins))、ならびにコノトキシン(例えばKIIIAまたはSmIIIa)を含むが、それらに限定されない。
本発明のある側面において、細胞毒性薬剤は、リポソームまたは生体適合性ポリマーを用いて作られることができる。本明細書で記載されるような抗PTK7抗体は、血清半減期および生理活性を増大させるために、および/またはインビボでの半減期を延長するために、生体適合性ポリマーにコンジュゲートさせることができる。生体適合性ポリマーの例は、水溶性ポリマー、例えばポリエチレングリコール(PEG)またはその誘導体および双性イオン含有生体適合性ポリマー(例えばホスホリルコリン含有ポリマー)を含む。
本発明において有用な追加の薬物は、血管形成を阻害する抗血管新生剤、例えばファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、COX−2阻害剤、VEGF阻害剤、bFGF阻害剤、ステロイドスルファターゼ阻害剤(例えば2−メトキシエストラジオールビス−スルファメート(2−MeOE2bisMATE))、インターロイキン−24、トロンボスポンジン、メタロスポンジンタンパク質、クラスIインターフェロン類、インターロイキン12、プロタミン、アンジオスタチン、ラミニン、エンドスタチン、およびプロラクチン断片を含む。
剤(FEMARA(登録商標)(レトロゾン(letrozone)))、テロメラーゼ阻害剤、鉄キレート剤(例えば3−アミノピリジン−2−カルボキシアルデヒドチオセミカルバゾン(トリアピン))、アポプチン(ニワトリ貧血ウイルスからのウイルスタンパク質3−VP3)、Bcl−2およびBcl−X(L)の阻害剤、TNF−アルファ、FASリガンド、TNF関連アポトーシス誘導リガンド(TRAIL/Apo2L)、TNF−アルファ/FASリガンド/TNF関連アポトーシス誘導リガンド(TRAIL/Apo2L)シグナル伝達の活性化物質、ならびにPI3K−Akt生存経路シグナル伝達の阻害剤(例えばUCN−01およびゲルダナマイシン)を含む。
カルボプラチン;ビンブラスチン;白金;エトポシド(VP−16);イホスファミド;マイトマイシンC;ミトキサントロン;ビンクリスチン;ビノレルビン;ナベルビン;ノバントロン;テニポシド;ダウノマイシン;アミノプテリン;ゼローダ;イバンドロネート;CPT−11;トポイソメラーゼ阻害剤RFS2000;ジフルオロメチルオルニチン(DMFO);レチノイン酸;エスペラミシン類;ならびにカペシタビンを含む。
本発明の抗体−薬物コンジュゲートを調製するための方法も、提供される。例えば、本明細書で開示されるようなPTK7抗体−薬物コンジュゲートを生成するためのプロセスは、(a)リンカーを薬物に連結し;(b)そのリンカー−薬物部分を抗体にコンジュゲートさせ;そして(c)その抗体−薬物コンジュゲートを精製することを含むことができる。vc0101およびmc8261の合成のための代表的な方法が、実施例9において記載されており、抗PTK7−vc0101、抗PTK7−mc8621 ADCおよび抗PTK7−AcButCM ADCのコンジュゲーションのための代表的な方法が、実施例10において記載されている。
し、ここで、抗体の濃度は、1〜25mg/mlの範囲であることができ、リンカー−薬物部分は、約1〜15対1の抗PTK7抗体の範囲のモル比であり;(b)リンカー−薬物部分および抗PTK7抗体を、非求核性、タンパク質適合性の約7〜9の範囲のpHを有する緩衝溶液中でインキュベートして単量体性抗体−薬物コンジュゲートを生成し、ここで溶液は、さらに(i)適切な有機性共溶媒、および(ii)少なくとも1種類のC6〜C18カルボン酸またはその塩を有する添加剤を含有し、ここで、そのインキュベーションは、約0℃〜約45℃の範囲の温度で、約1分間〜約24時間の範囲の期間の間実施され;そして(c)工程(b)において生成されたコンジュゲートに、クロマトグラフィー分離プロセスを施して、DAR1〜8を有する抗体−薬物コンジュゲートを分離することにより調製されることができ;そして未コンジュゲート抗PTK7抗体、リンカー−薬物部分、および凝集したコンジュゲートからの10%未満の低コンジュゲート率(low
conjugated fraction)(LCF)を提供する。
2008を参照。
酸の例えばシステインによる置換に適しており、従って様々な薬剤へのコンジュゲーションが可能な部位を設計するために有用である。
はその抗原結合断片は、IgG1重鎖定常領域、例えばSEQ ID NO:13として示されているhu23重鎖、SEQ ID NO:37として示されているhu24重鎖、またはSEQ ID NO:61として示されているhu58重鎖を含む。他の側面において、開示されるPTK7抗体−薬物コンジュゲートの抗体またはその抗原結合断片は、カッパ軽鎖定常領域、例えばSEQ ID NO:23として示されているhu23軽鎖、SEQ ID NO:47として示されているhu24軽鎖、またはSEQ ID NO:71として示されているhu58軽鎖を含む。本発明の特定の側面において、PTK7抗体−薬物コンジュゲートは、IgG1重鎖定常領域およびカッパ軽鎖定常領域、例えばSEQ ID NO:13として示されている重鎖およびSEQ ID NO:23として示されている軽鎖;または別の例としてSEQ ID NO:37として示されている重鎖およびSEQ ID NO:47として示されている軽鎖;または別の例としてSEQ ID NO:61として示されている重鎖およびSEQ ID NO:71として示されている軽鎖を含むことができる。
LQPGK(SEQ ID NO:82)、LLQGAPGK(SEQ ID NO:83)、LLQGAPG(SEQ ID NO:84)、LLQGAP(SEQ ID NO:85)、LLQX1X2X3X4X5(ここで、X1はGまたはPであり、ここでX2はA、G、Pであるかまたは存在せず、ここでX3はA、G、K、Pであるかまたは存在せず、ここでX4はG、Kであるかまたは存在せず、ここでX5はKであるかまたは存在しない(SEQ ID NO:86))、またはLLQX1X2X3X4X5(ここで、X1はあらゆる天然存在アミノ酸であり、ここでX2、X3、X4、およびX5はあらゆる天然存在アミノ酸であるかまたは存在しない(SEQ ID NO:87)))および抗体の222、340、または370位(EU番号付けスキーム)におけるアミノ酸改変を含むことができる。
Flowクロマトグラフィー媒体を用いて実施されることができる。カスタマイズされた勾配を用いる場合、カラムに結合したままであるより高いDARの種が除去される。ある側面において、精製プロセスは、濃縮および配合のための、遠心分離細胞除去工程、場合によりプロテインA親和性捕捉工程、続いて1つまたは2つの直交する(orthogonal)クロマトグラフィー仕上げ工程、ウイルス濾過工程、および接線流濾過工程を含むことができる。
本発明はさらに、PTK7結合活性、細胞表面上に存在するPTK7抗原への結合後の細胞内在化、および対象中のPTK7発現細胞に対する標的化を含む、PTK7抗体−薬物コンジュゲートの活性を特性付けるためのインビトロおよびインビボのアッセイを開示する。本発明のある側面において、PTK7抗体−薬物コンジュゲートは、抗体またはその抗原結合断片の側面を中和する、または枯渇させることにより特性付けられる。本発明のある側面において、PTK7抗体−薬物コンジュゲートは、代替の薬物の有効性の欠如と比較した場合の特定の薬物の予想外の有効性により特性付けられる。本発明のある側面において、PTK7抗体−薬物コンジュゲートは、その薬物と同じ作用様式を有する標準治療の療法剤より性能が優れていることとして特性付けられる。
排除する、停止する、低減する、または逆行させる抗体の能力を意味する。例えば、本発明のある側面において、抗PTK7抗体−薬物コンジュゲートは、抗体−薬物コンジュゲートの内在化の際に細胞の殺傷を促進する。例えば、中和抗体または拮抗薬は、好ましくはPTK7の機能を少なくとも約20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、97%、99%またはより大きく減少させるであろう。
することを含む様々な機序により、枯渇させる、静める、中和する、排除する、または阻害することができるPTK7抗体−薬物コンジュゲートを提供する。
ことができる。本発明の特定の側面において、開示された化合物は、TICの頻度を70%、75%、80%、85%、90%またはさらに95%低減することができる。TICの頻度のあらゆる低減は、おそらく結果として新生物の腫瘍形成性、持続性、再発および侵攻性における対応する低減をもたらすことは、理解されるであろう。
いて標的細胞の溶解を引き起こす、細胞に媒介される反応を指す。対象の分子のADCC活性は、インビトロADCCアッセイ、例えば米国特許第5,500,362号または第5,821,337号において記載されているインビトロADCCアッセイを用いて評価されることができる。そのようなアッセイに関する有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞(PBMC)およびNK細胞を含む。あるいは、または加えて、対象の分子のADCC活性は、インビボで、例えば動物モデル、例えばClynes et al., PNAS (USA), 95:652-656 (1998)において開示されている動物モデルにおいて評価されることができる。
本発明の抗体および抗体−薬物コンジュゲートは、療法処置法および診断処置法を含むがそれらに限定されない様々な適用において有用である。
本発明は、PTK7抗体−薬物コンジュゲートを用いるインビトロの方法を提供する。例えば、開示される抗体は、単独または細胞毒性薬剤もしくは他の薬物との組み合わせのどちらにおいても、PTK7陽性癌細胞に特異的に結合してそのような細胞を細胞試料から枯渇させるために用いられることができる。PTK7発現細胞をPTK7抗体−薬物コンジュゲートと接触させることにより、アポトーシスおよび/または細胞増殖の阻害を誘導するための方法も、提供される。代表的なインビトロの方法は、本明細書において上記で“PTK7抗体−薬物コンジュゲートの特性付けのための機能的アッセイ”の見出しの下で記載されている。
語“腫瘍開始細胞”は、様々な血液悪性疾患の癌幹細胞も指し、それは腫瘍自体によって特性付けられない。代表的な腫瘍試料は、腫瘍細胞を含有するあらゆる生物学的試料または臨床試料、例えば、組織試料、生検、血液試料、血漿、唾液、尿、***等を含む。
PTK7関連障害は、中皮腫、肝胆道(肝臓および胆管)癌、肝細胞癌、原発性または続発性CNS腫瘍、原発性または続発性脳腫瘍、肺癌(NSCLCおよびSCLC)、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部の癌、黒色腫、卵巣癌、結腸癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌、胃腸の癌(例えば胃癌、結腸直腸癌、および十二指腸癌)、乳癌(例えばトリプルネガティブ乳癌(TNBC)、プロゲステロン受容体陽性乳癌(PR+)、エストロゲン受容体陽性乳癌(ER+)およびダブルポジティブ乳癌)、子宮癌、卵管の癌腫、子宮内膜の癌腫、子宮頸部の癌腫、膣の癌腫、外陰部の癌腫、ホジキン病、食道癌、小腸の癌、内分泌系の癌、甲状腺の癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟組織の肉腫、尿道の癌、陰茎の癌、前立腺癌、精巣癌、白血病(例えば急性骨髄性白血病(AML)および急性リンパ芽球性白血病(ALL)、慢性骨髄性白血病)、リンパ球性リンパ腫、膀胱の癌、腎臓または尿管の癌、腎細胞癌、腎盂の癌、中枢神経系(CNS)の新生物、原発性CNSリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、脊椎軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、副腎皮質癌、胆嚢癌、多発性骨髄腫、胆管癌、線維肉腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、ならびに表8および9において示されているPTK7を発現する細胞型により表される全ての癌または本明細書で開示された癌の1種類以上の組み合わせを含むが、それらに限定されない。
およびダブルポジティブ乳癌)、子宮癌、卵管の癌腫、子宮内膜の癌腫、子宮頸部の癌腫、膣の癌腫、外陰部の癌腫、ホジキン病、食道癌、小腸の癌、内分泌系の癌、甲状腺の癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟組織の肉腫、尿道の癌、陰茎の癌、前立腺癌、精巣癌、白血病(例えば急性骨髄性白血病(AML)および急性リンパ芽球性白血病(ALL)、慢性骨髄性白血病)、リンパ球性リンパ腫、膀胱の癌、腎臓または尿管の癌、腎細胞癌、腎盂の癌、中枢神経系(CNS)の新生物、原発性CNSリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、脊椎軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、副腎皮質癌、胆嚢癌、多発性骨髄腫、胆管癌、線維肉腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、ならびに表8および9において示されているPTK7を発現する細胞型により表される全ての癌または本明細書で開示された癌の1種類以上の組み合わせ。
現を検出することにより測定されることもできる。
付けられない。接触工程は、インビトロで実施されることもでき、ここで、本明細書において上記で記載されたように、腫瘍細胞集団が、生物学的試料中に含有される。あるいは、接触工程は、PTK7抗体−薬物コンジュゲートの対象への投与後に起こるように、インビボで実施されることができる。
別の側面において、PTK7発現と関係する障害を検出、診断、および/またはモニターする方法が提供される。例えば、本明細書で記載されたPTK7抗体は、検出可能部分、例えば画像化剤および酵素−基質標識で標識されることができる。本明細書で記載された抗体は、インビボ診断アッセイ、例えばインビボ画像化(例えばPETまたはSPECT)または染色試薬のために用いられることもできる。
本発明はさらに、本明細書で開示されたPTK7抗体−薬物コンジュゲートのいずれかおよび薬学的に許容可能なキャリヤーを含む医薬組成物を提供する。さらに、組成物は、1種類より多くのPTK7抗体またはPTK7抗体−薬物コンジュゲート(例えば、PTK7の異なるエピトープを認識するPTK7抗体の混合物)を含むことができる。他の典型的な組成物は、PTK7(例えばヒトPTK7)の同じエピトープ(単数または複数)を認識する1種類より多くのPTK7抗体もしくはPTK7抗体−薬物コンジュゲート、または異なるエピトープに結合するPTK7抗体もしくはPTK7抗体−薬物コンジュゲートの異なる種を含む。
ンパク質複合体);および/または非イオン性界面活性剤、例えばTWEEN(商標)、PLURONICS(商標)もしくはポリエチレングリコール(PEG)を含むことができる。“薬学的に許容可能な塩”は、本明細書で用いられる際、分子または高分子の薬学的に許容可能な有機または無機塩類を指す。薬学的に許容可能な賦形剤は、本明細書においてさらに記載される。
Pharmacy 第20版. Mack Publishing, 2000において述べられている。
,013,556号において開示されている。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロールおよびPEG誘導体化ホスファチジルエタノールアミン(PEG−PE)を含む脂質組成物を用いた逆相蒸発法により生成されることができる。リポソームは、定められた孔径のフィルターを通して押し出され、所望の直径を有するリポソームを生成する。
きる。様々な材料が、そのような腸溶層またはコーティングのために用いられることができ、そのような材料は、いくつかのポリマー性の酸ならびにポリマー性の酸のシェラック、セチルアルコールおよび酢酸セルロースのような材料との混合物を含む。
るが、機械で読み取り可能な説明書(例えば磁気または光学記憶ディスク上に保持された説明書)も許容可能である。
インビトロおよびインビボ適用に関して、PTK7抗体−薬物コンジュゲートは、有効投与量で提供または投与される。臨床的状況では、薬物、化合物、または医薬組成物の有効投与量は、直接または間接的にのどちらかで予防的または療法的処置を成し遂げるために十分な量である。有効投与量は、1回以上の投与において投与されることができる。薬物、化合物、または医薬組成物の有効投与量は、別の薬物、化合物、または医薬組成物と合わせて達成される可能性があり、またはそうでない可能性もある。従って、“有効投与量”は、1種類以上の療法剤を投与する文脈において考えられることができ、単剤は、1種類以上の他の薬剤と合わせて望ましい結果が達成され得る、または達成される場合に、有効量で与えられていると考えられることができる。開示されたPTK7抗体−薬物コンジュゲートを用いたPTK7陽性細胞の検出に関して、本発明の組成物の検出可能な量、すなわちコンジュゲートの存在がインビトロまたはインビボで決定され得るようなコンジュゲートの用量が、対象に投与される。
ができる。あるいは、PTK7抗体またはPTK7抗体−薬物コンジュゲートは、フルオロカーボン配合物および計量吸入器を用いてエアロゾル化されることができ、または凍結乾燥および製粉された粉末として吸入されることもできる。
、症状の処置および/または抑制および/または改善および/または遅延、例えば腫瘍成長の阻害または遅延等に基づくが、必ずそうであるわけではない。あるいは、PTK7抗体またはPTK7抗体−薬物コンジュゲートの持続的連続放出配合物が、適切である可能性がある。持続放出を達成するための様々な配合物およびデバイスが、当該技術で既知である。
本発明のある側面において、本明細書で記載される方法は、さらに対象を療法の追加の形態により処置する工程を含む。ある側面において、療法の追加の形態は、化学療法、放射線、手術、ホルモン療法、および/または追加の免疫療法を含むがそれらに限定されない追加の抗癌療法である。
)抗体(例えばIMC−1C11)、抗Ep−CAM抗体(例えばING−1)、抗FAP抗体(例えばシブロツヅマブ)、抗DR4抗体(例えばTRAIL−R)、抗プロゲステロン受容体抗体(例えば2C5)、抗CA19.9抗体(例えばGIVAREX(登録商標))および抗フィブリン抗体(例えばMH−1)を含む。
ax)、微小管阻害剤(MST−997、TTI−237)と、または標的化された細胞毒素、例えばCMD−193およびSGN−15との組み合わせで用いられることができる。追加の有用な抗癌剤は、TAXOTERE(登録商標)、TARCEVA(登録商標)、GEMZAR(登録商標)(ゲムシタビン)、5−FU、AVASTIN(登録商標)、ERBITUX(登録商標)、TROVAX(登録商標)、アナツモマブマフェナトキス(anatumomab mafenatox)、レトロゾール、ドセタキセル、およびアントラサイクリン類を含む。
抗PTK7抗体の生成およびヒト化
マウス抗体の形態のPTK−7抗体が、当該技術で既知の、およびPCT国際公開第2012/112943号において記載されているような手順に従って生成された。生成されたマウス抗体は、相補性決定領域(CDR)移植を用いてヒト化された。重鎖および軽鎖に関するヒトのフレームワークは、機能性ヒト生殖細胞系列遺伝子に関する配列および構造類似性に基づいて選択された。構造類似性は、Chothia et al.(上記)において記載されているように、マウスのカノニカルCDR構造を同じカノニカル構造を有するヒトの候補に対して比較することにより評価された。
16.1(D)およびJH4として同定された。全ての3つの軽鎖は、κクラスであった。軽鎖遺伝子が、mu23に関してIGKVI4−111およびJK5、mu24に関してIGKV3−5およびJK1、そしてmu58に関してIGKV17−121およびJK4生殖細胞系列配列として同定された。これらの結果が、下記の表2において要約されている。
ID NO:2、SEQ ID NO:26、およびSEQ ID NO:50において示されている。hu23、hu24、およびhu58のカッパVL領域のアミノ酸配列が、それぞれSEQ ID NO:15、SEQ ID NO:39、およびSEQ ID NO:63において示されており、対応する核酸配列が、それぞれSEQ ID NO:16、SEQ ID NO:40、およびSEQ ID NO:64において示されている。
実施例2
ヒト化抗体の発現
抗PTK7抗体hu23、hu24、およびhu58を、当該技術で認められている技法を用いて、そしてPCT国際公開第2012/112943号において記載されているように発現させ、単離した。重鎖の合成ヒト化可変DNA断片(Integrated DNA Technologies)を、ヒトIgG1発現ベクター中にクローニングした。可変軽鎖断片を、ヒトC−カッパ発現ベクター中にクローニングした。それぞれの抗体を、対応する重鎖および軽鎖のCHO細胞中への同時トランスフェクションにより発現させた。
およびmc8261に対する一貫した再現性のあるバイオコンジュゲーションを達成するために必要とされた。追加の精製工程を用いない場合、チオール還元の効率、従って結果として生じるADCの薬物対抗体比(DAR)(実施例10で記載される)は劇的かつ予測不能に変動した。追加の精製に関する必要性は、予想されなかったが、経験的に決定された。
hu24結合の特性付け
キメラおよびヒト化クローン24 mAbの比較を、Biacore(商標)2000(GE Healthcare)を用いたSPRにより決定した。抗ヒト抗体捕捉キットを用いて、捕捉mAbをCM5バイオセンサーチップ上に固定した。それぞれの抗原注入サイクルの前に、2μg/mLの濃度のヒト化mAbを表面上に、2分間の接触時間および5μL/分の流速で捕捉させた。捕捉されたmAbのベースラインからの装填(loading)は、80〜120応答単位で一定であった。試験物の捕捉および1分間のベースラインの後、単量体性ヒトPTK7タンパク質を、2分間の会合相の間に表面上を5μL/分の流速で50、25、および12.5nMの濃度で流し、続いて2分間の解離相を行った。それぞれのサイクルの後、抗ヒト捕捉表面を、10μL/分で30秒間の接触時間の3M MgCl2で再生させた。
るプライマーを用いて、コンストラクトを設計した。結果として得られた配列を、標準的な分子生物学の技法を用いて、ヒト免疫グロブリンG2(IgG2)Fcドメインとインフレームで上流に融合させた。そのFc融合タンパク質を、哺乳類細胞中にトランスフェクションし、上清を72時間後に回収した。抗PTK7 mAb hu24を、定められたIgドメインを有するPTKタンパク質バリアントに結合するその能力に関してELISAにより試験した。
記載された濃度のmAbを含む染色緩衝液(3%BSAを含むPBS)中で再懸濁し、氷上で30分間インキュベートした。細胞を染色緩衝液中で洗浄し、フィコエリトリン(PE)標識抗ヒト抗体(Jackson ImmunoResearch 商品番号109−115−098)を含む染色緩衝液中で再懸濁し、氷上で30分間インキュベートした。細胞を洗浄し、7−AAD死細胞染色試薬(BD Biosciences,Pharmingen 商品番号51−68981E)を含む染色緩衝液中で再懸濁し、BD FACSCalibur(商標)を用いてフローサイトメトリーにより分析した。生存可能な細胞集団のPEチャンネルにおける平均蛍光強度(MFI)を、それぞれの試料に関して決定した。
様々な癌細胞株におけるPTK7の発現
抗PTK7抗体hu23およびhu24は、固形および血液学的適応症を含む広い範囲の腫瘍型から確立された培養された癌細胞株への特異的結合を示した(下記の表8参照)。接着細胞をTrypLE Express(GIBCO)を用いて解離させ、細胞培養培地で中和し、計数した。細胞をU底96ウェルプレート中に5×105細胞/100μL培地/ウェルでまいた。プレートを300×gで4℃において5分間遠心分離して細胞をペレット化し、上清を廃棄した。それぞれのペレットをPBS中3%BSA中10μg/mLのhu23、hu24または非結合対照抗体中で再懸濁し、プレートを氷上で30分間インキュベートした。プレートを遠心分離し、細胞のペレットを200μLの氷冷PBS3%BSA中で洗浄した。それぞれの細胞のペレットを、PBS中3%BSA中で1:50希釈したR−フィコエリトリン(PE)コンジュゲートヤギ抗ヒトIgG Fc断片100μL中で再懸濁し、プレートを氷上で30分間インキュベートした。プレートを遠心分離し、細胞のペレットを4℃において200μLのPBS3%BSA中で洗浄した。それぞれのペレットを100μLのPBS3%BSA中で再懸濁し、250μLのPBS3%BSAを含有する5mLのポリカーボネートチューブに移した。試料を、死細胞染色試薬として試料あたり5μLの7−アミノ−アクチノマイシンD(7−AAD)染色溶液を用いてフローサイトメトリーにより分析した。生存不能細胞は、分析から除外された。
Signaling Technologies 商品番号8114)を室温で30分間用いて検出した。染色を、DAB+(3’,3’−ジアミノベンジジン;DAKO)を室温で5分間用いて発色させた。スライドガラスをCATヘマトキシリン(Biocare Medical)中で短時間対比染色し、水中で洗浄し、段階的なアルコール類中で脱水し、キシレン中で透徹し、Permount(商標)封入剤(Fisher Chemicals)と一緒にカバーガラスをかぶせた。
実施例5
様々な腫瘍組織におけるPTK7の発現
PTK7のmRNA発現を、原発ヒト腫瘍において決定した。簡潔には、凍結された腫瘍および正常組織を断片化し、mRNAをQiagen RNeasy Miniキット(Qiagen、カタログ番号74106)を用いて単離した。RNAの定量化および質の評価を、HT RNA微小流体LabChipアッセイおよびLabChip GX微小流体キャピラリー電気泳動機器(Perkin Elmer)を用いて実施した。試料のそれぞれに関するRNAを、量が機器の線形範囲(25〜250ng/μL)内に入るように希釈した。単離されたRNA試料を、Life Technologies,High Capacity RNA−to−cDNAキット(カタログ番号4387406)を製造業者の指示において概説されているプロトコルに従って用いて逆転写してcDNAにした。qRT−PCR反応を、TaqManプローブベース遺伝子発現分析およびABI ViiA7リアルタイムPCRシステム(Life Technologies)を用いて実施した。標的遺伝子および内因性対照を、予め製作された(pre−fabricated)TaqMan低密度アレイカード上に配置されたそれぞれのプローブに関して4通りで運転した。ExpressionSuiteソフトウェアv1.0.3(Life Technologies)を用いて、試料の大部分に関する信号増幅に関する自動化された閾値を生成した。自動化された閾値を手作業で調整することは稀にしかなかった。結果として35より大きいCt値をもたらす増幅プロットは破棄され、Ct値を生成したが対数増幅の傾向を示さなかったプロットも破棄された。全てのCt値は、ExpressionSuiteソフトウェアから送出され、相対的定量化計算がMicrosoft Excel 2010(Microsoft Corporation,Inc)において実施された。
mRNA発現を示した(図4A〜C)。TNBCにおける過剰発現は、最も顕著であり、一方で、卵巣腫瘍における過剰発現は、中程度であった。
血清中のPTK7タンパク質の測定
文献における報告は、結果として細胞外ドメインの一部の脱落をもたらす形質膜におけるPTK7の切断を特性付けている(Golubkov et al., 2010, J Biol Chem 285(46):35740-9; Golubkov et al., 2012, J Biol Chem 287(50):42009-18; Na et al., 2012, J Biol Chem 287(30):25001-9)。循環する抗原は、PTK7 ADCのような療法化合物の薬物動態に影響を及ぼし得る。脱落したPTK7の循環レベルを、様々な血清の源から評価した。PTK7タンパク質レベルを、Meso Scale Discovery(MSD(登録商標))プラットフォームを用いる定量アッセイにより測定した。
内在化
抗体の内在化は、ADCをPTK7発現細胞における細胞毒性のために送達するための重要な特徴である。抗PTK7抗体hu24は、癌細胞中に内在化することが観察され、それは、その抗体が毒素を細胞中に送達するための適切なビヒクルであることを示唆している。接着細胞を、TrypLE Express(Gibco)を用いて解離させ、細胞培養培地で中和し、次いで計数した。細胞を、U底96ウェルプレート中にウェルあたり5×105細胞/100μL培地で分割した(aliquoted)。プレートを300×gで4℃において5分間遠心分離して細胞をペレット化し、上清を吸引した。全ての試薬は、その後の工程のために氷上で保たれた。
μL/ウェルの氷冷PBS中3%BSAで洗浄し、100μL/ウェルの氷冷PBS中3%BSA中で再懸濁し、氷上に置いた。次いで、全ての試料を遠心分離し、上清を吸引し、それぞれの細胞のペレットを、100μLの氷冷PBS中3%BSA中で1:50希釈されたアロフィコシアニン(APC)コンジュゲート抗ヒトIgG Fc断片中で再懸濁した。プレートを氷上で30分間インキュベートし、次いで遠心分離し、細胞のペレットを200μLのPBS中3%BSA中で洗浄し、100μLのPBS中3%BSA中で再懸濁し、250μLのPBS中3%BSAを含有する5mLのポリカーボネートチューブに移した。試料を、死細胞染色試薬として試料あたり5μLの7−AADを用いてフローサイトメトリーにより分析した。平均蛍光強度(MFI)を、それぞれの試料に関して、生存不能細胞を分析から除外して測定した。“%内在化”に関する値を、(100%−[インキュベーション後のMFI/インキュベーション前のMFI])として計算した。表13における結果は、hu24抗体が試験された全ての細胞株中に内在化したこと、そして内在化は温度依存性であり、従って細胞による能動的な(受動的ではない)内在化を反映していたことを示している。
サポリンコンジュゲート抗ヒトFab断片により媒介される細胞毒性
hu23またはhu24抗体が細胞株への細胞毒性剤の送達を媒介することができるかどうかを決定するため、インビトロ細胞毒性アッセイを実施した。これに関して、サポリン毒素に共有結合した抗ヒトIgG Fab断片(Advanced Targeting Systems)を未標識のhu23、hu24または8.84 Ab(結合しない陰性対照抗体)と組み合わせ、次いで細胞と一緒に4日間(PTK発現細胞H446およびDMS114)または7日間(OE19非PTK7発現細胞;OE21 PTK7発現細胞)インキュベートし、その後細胞生存度を測定した。
ad Prism Software)を行った。
Fluor647(Jackson Immunoresearch)と共に20分間インキュベートした。細胞を再度洗浄し、DAPI中で再懸濁し、次いでBD FACSCanto上で分析して平均蛍光強度における変化(ΔMFI)を決定した。OE19細胞は、イソ型対照を上回る染色蛍光を示さず(ΔMFI=0)、一方でOE21細胞は、蛍光強度におけるほぼ2ログの増大を示し(ΔMFI=5976)、それは、OE21(食道扁平上皮癌)の表面上のPTK7の発現を示した。
vc0101およびmc8261の合成
vc0101(vcはリンカーであり、0101は薬物である)およびmc8261(mcはリンカーであり、8261は薬物である)の合成は、国際公開第2013/072813号において記載されている方法に従って調製され、それは参照により本明細書にそのまま援用される。
N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]−L−バリル−N−{4−[(21S,24S,25R)−24−[(2S)−ブタン−2−イル]−25−(2−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(1,3−チアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−2−オキソエチル)−18,18,23−トリメチル−3,16,19,22−テトラオキソ−21−(プロパン−2−イル)−2,7,10,13,26−ペンタオキサ−4,17,20,23−テトラアザヘプタコサ−1−イル]フェニル}−N〜5〜−カルバモイル−L−オルニチンアミド(vc0101)の調製。
(ddd, J=11.4, 8.4, 4.1 Hz)および5.52 (ddd, J=11.7, 8.8, 4.2 Hz), 総1H], [4.49 (dd, J=8.6, 7.6 Hz)および4.59 (dd, J=8.6, 6.8 Hz), 総1H], 3.13, 3.17, 3.18および3.24 (4 s, 総6H), 2.90および3.00 (2 br s, 総3H), 1.31および1.36 (2 br s, 総6H), [
1.05 (d, J=6.7 Hz)および1.09 (d, J=6.7 Hz), 総3H]。
[M+H+]、保持時間=0.70分(プロトコルF-下記);HPLC (プロトコルA-下記): m/z 743.4 [M+H+]、保持時間=6.903分、(純度>97%);1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)(回転異性体の混合物であると推定される)、特徴的な信号:δ[8.64 (br d, J=8.5 Hz)および8.86 (br
d, J=8.7 Hz), 総1H], [8.04 (br d, J=9.3 Hz)および8.08 (br d, J=9.3 Hz), 総1H], [7.77 (d, J=3.3 Hz)および7.80 (d, J=3.2 Hz), 総1H], [7.63 (d, J=3.3 Hz)および7.66 (d, J=3.2 Hz), 総1H], 7.13-7.31 (m, 5H), [5.39 (ddd, J=11, 8.5, 4 Hz)および5.53 (ddd, J=12, 9, 4 Hz), 総1H], [4.49 (dd, J=9, 8 Hz)および4.60 (dd, J=9, 7 Hz), 総1H], 3.16, 3.20, 3.21および3.25 (4 s, 総6H), 2.93および3.02 (2 br s, 総3H), 1.21 (s, 3H), 1.13および1.13 (2 s, 総3H), [1.05 (d, J=6.7 Hz)および1.10 (d, J=6.7 Hz), 総3H], 0.73-0.80 (m, 3H)。
N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]−2−メチルアラニル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−
[(1R,2R)−3−{[(1S)−1−カルボキシ−2−フェニルエチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド(mc8261)の調製。
br s, 総3H), 1.36および1.37 (2 br s, 総3H), 1.30および1.32 (2 s, 総3H), [1.02 (d, J=6.8 Hz)および1.06 (d, J=6.6 Hz), 総3H]。
#68(143mg、0.152mmol、1当量)のテトラヒドロフラン中における溶液(5mL、0.02M)に、水酸化リチウム(9.10mg、0.378mmol、2.5当量)の水(3mL)中における溶液を添加した。5時間後、反応を真空中で濃縮し、ヘプタンと共に3回共沸させ、ジメチルスルホキシド(2.2mL)中で溶解させ、逆相クロマトグラフィー(方法C−下記)により精製すると、#69(56mg、52%)が得られた。HPLC (45℃におけるプロトコルA-下記): 704.4 [M+H+]、保持時間=6.623分;1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)(回転異性体の混合物であると推定される)、特徴的な信号:δ8.08-8.22および8.37-8.49 (2 m, 総5H), 7.12-7.28 (m, 5H), 3.18, 3.20および3.24 (3 s, 総6H), 2.95および3.04 (2 br s, 総3H), 1.52および1.53 (2 s, 総3H), 1.39および1.41 (2 s, 総3H), [1.02 (d, J=6.8 Hz)および1.05 (d, J=6.6 Hz), 総3H], 0.74-0.81 (m, 3H)。
一般手順C:ジオキサン中の塩酸を用いるBoc除去またはtert−ブチルエステル(t−Buエステルとも呼ばれる)の切断。Boc含有化合物またはtert−ブチルエステル含有化合物のどちらかのジオキサン(またはある場合には溶液なし、または他の適切な溶媒)中における溶液に、塩酸のジオキサン中における4M溶液を添加した。反応の進行を、LC−MS(またはHPLCまたはTLC)によりモニターした。反応を真空中で濃縮し、ある場合にはヘプタン類と共に1〜4回共沸させた。
down)シリカもしくはC18結合シリカ上に載せ、シリカゲルまたは逆相クロマトグラフィーにより精製した。
、ヘプタンと共に3回共沸させた。粗製の物質を、明記された方法に従う逆相クロマトグラフィーにより精製すると、所望の物質が得られた。
抗PTK7抗体のバイオコンジュゲーション
A.抗PTK7−vc0101抗体−薬物コンジュゲート
本発明において、抗PTK7抗体hu23、hu24、およびhu58をvc0101にコンジュゲートさせて、hu23−vc0101 ADC、hu24−vc0101 ADCおよびhu58−vc0101 ADCを生成し、またはmc8261にコンジュゲートさせて、hu23−mc8261 ADC、hu24−mc8261 ADCおよ
びhu58−mc8261 ADCを生成した。hu23、hu24、およびhu58のvc0101、mc8261へのコンジュゲーションは、システイン残基の側鎖の誘導体化により達成された。これらのシステインは、通常は鎖間ジスルフィド架橋として対になっており、IgG1抗体上には4個のその保存された対(8個のシステイン残基を含む)が存在する。これらのジスルフィド結合の部分的還元は、vcリンカー上のマレイミドハンドルを用いて官能化されることができる遊離のチオールの分布を提供する。具体的には、本発明の抗PTK7抗体は、100mM HEPES(4−(2−ヒドロキシエチル)−1−ピペラジンエタンスルホン酸緩衝剤)、pH7.0および1mMジエチレントリアミン五酢酸(DTPA)中の2.4モル過剰量のトリス(2−カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)の37℃で2時間の添加により部分的に還元された。次いで、vc0101またはmc8261リンカー−ペイロードを反応混合物に7のリンカー−ペイロード/抗体モル比で添加し、15%v/vのジメチルアセトアミド(DMA)の存在下で25℃でさらに1時間反応させた。1時間のインキュベーション期間の後、未反応のチオールをキャップするために3倍過剰量のN−エチルマレイミドを添加し、15分間反応させた後、6倍過剰量のL−Cysを添加して全ての未反応のリンカー−ペイロードを停止させた(quench)。
200)により精製した。最終的なADC薬物物質を、20mMヒスチジン、85mg/mLスクロース、pH5.8緩衝液中で配合した。
本発明において、抗PTK7抗体hu23、hu24およびhu58を、AcBut−N−アセチル−γ−カリケアマイシンジメチルヒドラジド(AcButCM) OSuエステルにコンジュゲートさせて、下記に示されるようなhu23−AcButCM ADC、hu24−AcButCM ADCおよびhu58−AcButCM ADCを生成し、ここで、Xはいずれかの抗体、例えばhu23、hu24およびhu58であることができる。
対抗PTK7抗体比を4〜4.5対1まで低下させて、より低いDARを有するADCを生成し、2)ActButCMの抗PTK7抗体への添加の間に高い撹拌を実施して、低い量の未コンジュゲート抗体(遊離抗体)を有するADCを生成し、3)インキュベーション時間を60〜90分間と比較して5分間に低減して、少ない凝集体を提供し、そして4)エタノール量を6〜8%に低減して、少ない凝集体を提供する。両方のバッチからの精製されたプールされたピークを、凍結状態での保管を促進するため、配合された緩衝液に対して2回透析した。配合された緩衝液の組成は、20mMトリス、7.5%スクロース、0.01%ポリソルベート80、10mM NaCl、pH8.0であった。
hu24 mAbおよびhu24 ADCの結合特徴
hu24 mAbおよびhu24−vc0101 ADCがPTK7のカニクイザルのオルソログに結合するかどうかを決定するため、カニクイザルのPTK7タンパク質をクローニングし、発現させた。配列分析は、そのタンパク質がヒトのPTK7タンパク質に97.9%同一であることを明らかにした。
結果は、カニクイザルのPTK7への交差反応性を確証し、バイオコンジュゲーションプロセスがmAbの観察された結合特徴を変化させないことを実証した。しかし、mAbもADCも、ヒトPTK7への結合を観察するために必要な抗原濃度よりも100倍高い抗原濃度において、ラットまたはマウスのPTK7タンパク質への検出可能な結合を示さなかった(表17)。ラットおよびマウスの抗原は、既知の交差反応する抗体への結合により、正しく折り畳まれていることが確証された(データは示されていない)。
インビトロ細胞毒性アッセイ
抗体−薬物コンジュゲートhu24−vc0101の細胞毒性を、標的PTK7を発現する細胞株において評価した。操作されたHEK293T−PTK7過剰発現細胞株を、透明な平底組織培養プレート(BD Falcon)中に、ウェルあたり180μLの細
胞培養培地あたり500細胞でまいた。ヒト癌細胞株もこのアッセイで試験し、以前にそれらの増殖速度に従ってそれぞれの細胞株に最適であることが決定された密度でまいた(150μl中でH661は1500細胞/ウェル、H446は9600細胞/ウェル)。細胞を37℃において5%CO2インキュベーター中で一夜培養した。次の日に、hu24−vc0101 ADCおよび8.84 Ab−vc0101 ADC(陰性対照)を、細胞に、3または10μg/mLで出発して細胞培養培地中で1:3希釈する3通りの試料での10点濃度曲線において添加した。プレートを37℃の5%CO2インキュベーター中で4日間インキュベートした。MTSアッセイ(Promega Cell Titer 96 水性非放射性細胞増殖アッセイ)を、供給業者の説明書に従って用いた。30μL(H446、H661)または40μL(HEK293T−PTK7)の組み合わせられたMTS試薬をそれぞれのウェルに添加し、プレートを37℃の5%CO2インキュベーター中で2時間インキュベートした。ODを、96ウェルプレートリーダーを用いて490nmにおいて決定した。培地のみを含むウェルからの平均の読みを、バックグラウンドODに関して対照するために細胞を含むウェルの読みから減算した。細胞生存度が50%阻害される抗体−薬物コンジュゲートの濃度(IC50)を決定するため、データに対してロジスティック非線形回帰分析(GraphPad Prism Software)を行った。
抗PTK7抗体−薬物コンジュゲートのインビボ有効性
抗PTK7抗体−薬物コンジュゲートの作用を、ヒト腫瘍患者由来異種移植片(PDX)のインビボ成長においてさらに評価した。原発腫瘍摘除試料を、被験者保護に関する施設内審査委員会の承認に従って、そしてHIPAAの規制に従って臨床現場から調達した。腫瘍断片は、氷上でHypothermasol(Biolife Solutions)中で保管および輸送され、成長因子の専売の混合物を含有するMatrigel(BD)中に包理され、摘除の24時間以内にメスのNOD/SCIDマウスの乳腺脂肪体中に皮下移植された。マウスを、健康状態に関して毎日、そして腫瘍増殖に関して最初に目視検査により週2回モニターした。一度腫瘍が触知可能になったら、腫瘍体積の測定を始めて腫瘍成長を追跡し、細胞の倍加時間を概算した。腫瘍体積は、方程式V=(A*B2)/2を用いて概算され、ここでAは長軸であり、Bは短軸である。腫瘍が500mm3〜1,500mm3の体積に達した際に、それらを研究のためおよび患者由来異種移植片(PDX)としての再移植のために回収した。系統に応じて、機械的および/または化学的解離を用いて個々の細胞を継代のために分離することができる。生きた細胞を、実験を
受けていない(naive)動物中に、動物あたり10,000〜50,000細胞で接種した。
表20および図8は、hu23−vc0101、hu24−vc0101、およびhu58−vc0101 ADCが全て、ヒト***−13(BR13)トリプルネガティブ乳癌(TNBC)PDXモデル(高PTK7発現)を用いたPDXモデルにおいて、ビヒクルおよび薬物対照と比較して有効であることを示している。hu24−vc0101 ADCは、BR13 PDXモデルにおいてhu23−vc0101およびhu58−vc0101の両方よりも有効であった。試験されたPTK7 ADCの全ては、TNBCに関する標準治療処置であるドキソルビシンよりも有効であった。
ADCと比較してより大きい腫瘍成長の阻害を実証した。
表27〜28におけるデータは、hu24−vc0101およびhu24−AcButCM ADCの小細胞肺癌−64(LU64)PDXモデル(低PTK7発現)における有効性を説明している。このモデルにおいて、両方のADCは、この低PTK7発現のPDXにおいて有効であることが示されたが、AcButCMリンカーペイロードを有するADCは、vc0101リンカーペイロードを有するADCよりも有効であった。hu24−vc0101およびhu24−AcButCMは両方とも、SCLCに関する標準治療(シスプラチンおよびエトポシドである)よりも有効であった。
表33および図20は、hu24−vc0101 ADCが、ヒト非小細胞肺癌−135(LU135)PDXモデル(高PTK7発現)において、ビヒクルおよび薬物対照と比較して有効であったことを示している。このデータは、hu24−vc0101のNSCLC PDXにおける腫瘍成長の抑制における有効性を実証している。hu24−vc0101は、NSCLCにおける標準治療であるパクリタキセルよりも有効であった。
表35は、hu24−vc0101およびhu24−AcButCM ADCの卵巣−55(OV55)PDXモデル(中程度のPTK7発現)におけるビヒクルおよび薬物対照と比較した有効性を示している。このデータは、PTK7標的の中程度の発現を有する卵巣PDXモデルが両方のADCにより有効に標的とされることを実証している。驚くべきことに、hu24−vc0101で処置された動物は、実験が終了した際に腫瘍を有さず、hu24−AcButCM ADCは、このモデルにおいて有効性がより低かった。
表36は、hu24−vc0101 ADCが、ヒト黒色腫−23(SK23)PDXモデル(中程度のPTK7発現)においてビヒクルおよび薬物対照と比較して有効であったことを示している。このデータは、PTK7標的の中程度の発現を有する黒色腫PDXモデルにおけるhu24−vc0101の有効性を実証しており、ADCの使用に関する可能性のある適応症を提供している。
動物は、同じスケジュールでの静脈内注射によるものであったBR5試験を除いて、4日ごとに4サイクル(Q4Dx4)、腹腔内注射により投与された。腫瘍の測定結果は、1週間につき1または2回、デジタルキャリパーを用いて記録され、腫瘍体積は、方程式V=(A×B2)/2を用いて概算され、ここでAは長軸であり、Bは短軸である。動物の体重が、少なくとも週1回測定および記録された。試験群は、個々のマウスまたは群全体の腫瘍の測定結果が1200mm3に達するまで追跡され、その時点でIACUCプロトコルに従って屠殺の必要が示された。BR5試験に関して、動物は、IACUCプロトコルに従って病期分類において一度腫瘍体積が体重の15%に近付いたら屠殺された。
0101の作用機序
hu24−vc0101 ADCの作用機序を研究するため、細胞をADCで処理し、次いでそれらの微小管構造を評価した。オーリスタチンは、完全に合成によるドラスタチンベースの5ペプチドのチューブリン重合阻害剤であり、G2/M細胞周期停止および細胞死を低ピコモル濃度の細胞内濃度で誘導する(Sapra et al., 2011, Expert Opin Investig Drugs 20(8):1131-49およびTurner et al., 1998, Prostate 34(3):175-81)。
商品番号T9026、クローンDM1A)と共に室温で1時間インキュベートした。その後、細胞をPBSで洗浄し、Alexa Fluor(登録商標)488コンジュゲート二次抗体(Invitrogen Corp)およびDNAを染色するための4’,6−ジアミジノ−2−フェニルインドール(DAPI)と共に30分間インキュベートした。細胞を、Zeiss LSM 510 Meta共焦点顕微鏡上で可視化した。
結果は、hu24−vc0101 ADCは、細胞毒性を、抗原依存性の様式で、微小管構造を崩壊させ、G2/M停止を引き起こすことにより引き出すことができることを実証している。この機序は、未コンジュゲートオーリスタチンに関する以前の研究と一致している。
内皮細胞に対するhu24−vc0101 ADCの作用
図23は、hu24−vc0101 ADCが標準的なインビトロHUVEC出芽(sprouting)アッセイにおいて血管新生を阻害することを示している。簡潔には、HUVEC細胞(Lonza−商品番号CC−2517)を用いてCytodexビーズ(Sigma 商品番号C0646−5G)をおおよそ1×106細胞/2500ビーズの比率でコートし、次いで内皮細胞増殖培地(Lonza 商品番号CC−3162)と共に37℃/5%CO2インキュベーター中に一夜置いた。次の日に、ビーズを内皮細胞増殖培地で洗浄し、2.0mg/mlフィブリノーゲンI型(フィルター滅菌済み)のDPBSおよび0.15単位/mlアプロチニン中における溶液中で再懸濁した。24ウェルプレートのそれぞれのウェル中に、0.3125単位のトロンビンを添加した後、500ulのビーズ溶液を添加した。凝固を促進するため、プレートを37℃のインキュベーター中に15分間置いた。最後に、内皮細胞増殖培地中で懸濁された皮膚線維芽細胞(Detroit 551 − ATCC 商品番号CCL−110)を、形成されたフィブリノーゲン凝塊の上に注意深く置いた。その細胞に、それらのそれぞれの薬物処理を1日おきに与え、8日間成長させた。HUVEC出芽および分枝している血管の形成の程度を観察した。
腫瘍開始細胞(TIC)の低減
抗PTK7抗体−薬物コンジュゲート処置が腫瘍中の腫瘍開始細胞(TIC)の頻度を低減するかどうかを決定するため、BR13 TNBC***腫瘍を、4mg/kgのhu24−vc0101 ADC、4mg/kgの対照IgG ADC、または20mg/kgのドセタキセル化学療法で週2回、合計3用量(0、3および7日目)で処置した。生きた残留するヒト腫瘍細胞(すなわちhESA+ mCD45− mH−2Kd−)を、10日目に分離された腫瘍から単離し、限界希釈分析(LDA)において未処置の動物中に再移植した。結果として生じた腫瘍の発生率を、移植後40週までの間モニターした。腫瘍回収の日(10日目)および累代移植の日は、hu24−vc0101曝露後にいつ腫瘍が退縮し始めたかに基づいて選択された。腫瘍を分離し、抗ヒトESA、抗マウスCD45、および抗マウスH−2Kd抗体により染色した。処置群あたり3個の腫瘍をプールし、生きたヒト腫瘍細胞をフローサイトメトリーにより選別した。10匹のマウスの群に、対照IgG ADCで処置された腫瘍から選別された293、73、37もしくは15個の腫瘍細胞;hu24−vc0101で処置された腫瘍から選別された159、90、40、もしくは10個の腫瘍細胞;またはドセタキセルで処置された腫瘍から選別された257、33もしくは15個の腫瘍細胞のいずれかを注入した。受容マウス中の腫瘍を毎週測定し、受容マウス中の200mm3を超える腫瘍を陽性と採点した。L−Calcソフトウェア(Stemcell Technologies,ブリティッシュコロンビア州バンクーバー)によるポアソン分布統計を用いて、移植後40週までに腫瘍を有した、および有しない受容マウスの注入された細胞の用量を用いてそれぞれの処置後のTICの頻度を計算した。
[態様1]式:
Ab−(L−D)
[式中:
(a)Abは、タンパク質チロシンキナーゼ7(PTK7)に結合する抗体またはその抗原結合断片であり;そして
(b)L−Dは、リンカー−薬物部分であり、ここでLはリンカーであり、Dはオーリスタチンである]
の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様2]Abがキメラ抗体、CDR移植抗体、ヒト化抗体、または組み換えヒト抗体である、態様1に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様3]Abが内在化抗体である、態様1または2に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様4]Abが中和抗体である、態様1または2に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様5]Abが、ヒトPTK7への結合に関して、以下:
(a)SEQ ID NO:25として示されている重鎖可変領域およびSEQ ID NO:39として示されている軽鎖可変領域;
(b)SEQ ID NO:1として示されている重鎖可変領域およびSEQ ID NO:15として示されている軽鎖可変領域;または
(c)SEQ ID NO:49として示されている重鎖可変領域およびSEQ ID NO:63として示されている軽鎖可変領域;
を含む抗体と競合する、および/または該抗体と同一のエピトープに結合する、態様1〜4のいずれか1に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様6]Abが、少なくとも1個の重鎖可変領域および少なくとも1個の軽鎖可変領域を含み、該少なくとも1個の重鎖可変領域が、SEQ ID NO:27、31、および35として示される3個のCDRを含む、態様5に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様7]Abが、少なくとも1個の重鎖可変領域および少なくとも1個の軽鎖可変領域を含み、該少なくとも1個の軽鎖可変領域が、SEQ ID NO:41、43、および45として示される3個のCDRを含む、態様5に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様8]Abが、以下:
(a)SEQ ID NO:27、31、および35として示される3個のCDRを含む重鎖可変領域;ならびに
(b)SEQ ID NO:41、43、および45として示される3個のCDRを含む軽鎖可変領域;
を含む、態様5〜7のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様9]Abが、SEQ ID NO:25と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域およびSEQ ID NO:39と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、態様5〜8のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様10]Abが、SEQ ID NO:25として示されている重鎖可変領域およびSEQ ID NO:39として示されている軽鎖可変領域を含む、態様9に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様11]Abが、IgG1重鎖定常領域を含む、態様10に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様12]Abが、SEQ ID NO:37として示されている重鎖を含む、態様11に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様13]Abが、カッパ軽鎖定常領域を含む、態様10〜12のいずれか1に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様14]Abが、SEQ ID NO:47として示されている軽鎖を含む、態様13に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様15]Abが、SEQ ID NO:37として示されている重鎖およびSEQ ID NO:47として示されている軽鎖を含む、態様10〜14のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様16]Abが、少なくとも1個の重鎖可変領域および少なくとも1個の軽鎖可変領域を含み、該少なくとも1個の重鎖可変領域が、SEQ ID NO:3、7、および11として示されている3個のCDRを含む、態様5に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様17]Abが、少なくとも1個の重鎖可変領域および少なくとも1個の軽鎖可変領域を含み、該少なくとも1個の軽鎖可変領域が、SEQ ID NO:17、19、および21として示されている3個のCDRを含む、態様5に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様18]Abが、以下:
(a)SEQ ID NO:3、7、および11として示されている3個のCDRを含むを重鎖可変領域;ならびに
(b)SEQ ID NO:17、19、および21として示されている3個のCDRを含む軽鎖可変領域;
を含む、態様5及び16〜17のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様19]Abが、SEQ ID NO:1と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域およびSEQ ID NO:15と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、態様5及び16〜18のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様20]Abが、SEQ ID NO:1として示されている重鎖可変領域およびSEQ ID NO:15として示されている軽鎖可変領域を含む、態様19に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様21]Abが、IgG1重鎖定常領域を含む、態様20に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様22]Abが、SEQ ID NO:13として示されている重鎖を含む、態様21に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様23]Abが、カッパ軽鎖定常領域を含む、態様20〜22のいずれか1に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様24]Abが、SEQ ID NO:23として示されている軽鎖を含む、態様23に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様25]Abが、SEQ ID NO:13として示されている重鎖およびSEQ ID NO:23として示されている軽鎖を含む、態様20〜24のいずれか1に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様26]Abが、少なくとも1個の重鎖可変領域および少なくとも1個の軽鎖可変領域を含み、該少なくとも1個の重鎖可変領域が、SEQ ID NO:51、55、および59として示されている3個のCDRを含む、態様5に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様27]Abが、少なくとも1個の重鎖可変領域および少なくとも1個の軽鎖可変領域を含み、該少なくとも1個の軽鎖可変領域が、SEQ ID NO:65、67、および69として示されている3個のCDRを含む、態様5に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様28]Abが、以下:
(a)SEQ ID NO:51、55、および59として示される3個のCDRを含む重鎖可変領域;ならびに
(b)SEQ ID NO:65、67、および69として示される3個のCDRを含む軽鎖可変領域;
を含む、態様5及び26〜27のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様29]Abが、SEQ ID NO:49と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域およびSEQ ID NO:63と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、態様5に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様30]Abが、SEQ ID NO:49として示されている重鎖可変領域およびSEQ ID NO:63として示されている軽鎖可変領域を含む、態様29に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様31]Abが、IgG1重鎖定常領域を含む、態様30に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様32]Abが、SEQ ID NO:61として示されている重鎖を含む、態様31に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様33]Abが、カッパ軽鎖定常領域を含む、態様30〜32のいずれか1に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様34]Abが、SEQ ID NO:71として示されている軽鎖を含む、態様33に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様35]Abが、SEQ ID NO:61として示されている重鎖およびSEQ ID NO:71として示されている軽鎖を含む、態様30〜34のいずれか1に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様36]Abが、SEQ ID NO:25、1、または49として示されている重鎖可変領域を含む、態様5に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様37]Abが、SEQ ID NO:39、15、または63として示されている軽鎖可変領域を含む、態様5に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様38]リンカーが、マレイミドカプロイル−バリン−シトルリン−p−アミノベンジルオキシカルボニル(vc)およびマレイミドカプロイル(mc)からなる群から選択される、態様1〜37のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様39]リンカーが、マレイミドカプロイル−バリン−シトルリン−p−アミノベンジルオキシカルボニル(vc)である、態様1〜38のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様40]リンカーが、マレイミドカプロイル(mc)である、態様1〜38のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様41]オーリスタチンが、0101(2−メチルアラニル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(1,3−チアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド)である、態様1〜40のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様42]リンカーおよびオーリスタチンが、vc0101(N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]−L−バリル−N−{4−[(21S,24S,25R)−24−[(2S)−ブタン−2−イル]−25−(2−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(1,3−チアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−2−オキソエチル)−18,18,23−トリメチル−3,16,19,22−テトラオキソ−21−(プロパン−2−イル)−2,7,10,13,26−ペンタオキサ−4,17,20,23−テトラアザヘプタコサ−1−イル]フェニル}−N〜5〜−カルバモイル−L−オルニチンアミド)である、態様41に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様43]オーリスタチンが、8261 2−メチルアラニル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S)−1−カルボキシ−2−フェニルエチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドである、態様1〜40のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様44]リンカーおよびオーリスタチンが、mc8261 N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]−2−メチルアラニル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S)−1−カルボキシ−2−フェニルエチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドである、態様43に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様45]式:
Ab−(L−D)
[式中:
(a)Abは、以下:
(i)SEQ ID NO:37として示されている重鎖およびSEQ ID NO:47として示されている軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片;
(ii)SEQ ID NO:13として示されている重鎖およびSEQ ID NO:23として示されている軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片;ならびに
(iii)SEQ ID NO:61として示されている重鎖およびSEQ ID NO:71として示されている軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片;
からなる群から選択される抗体またはその抗原結合断片であり;そして
(b)L−Dは、リンカー−薬物部分であり、ここで、Lはリンカーであり、Dはオーリスタチンであり、ここで、該リンカーは、マレイミドカプロイル−バリン−シトルリン−p−アミノベンジルオキシカルボニル(vc)であり、該オーリスタチンは、0101である]
の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様46]態様1〜45のいずれか1に記載の抗体−薬物コンジュゲートおよび薬学的に許容可能なキャリヤーを含む、医薬組成物。
[態様47]態様1〜45のいずれか1に記載の複数の抗体−薬物コンジュゲートおよび場合により医薬用キャリヤーを含む組成物であって、該組成物が、1〜8の範囲内の平均DARを有する、前記組成物。
[態様48]以下の工程:
(a)該リンカーを該薬物に連結し;
(b)該リンカー−薬物部分を該抗体にコンジュゲートさせ;そして
(c)該抗体−薬物コンジュゲートを精製する;
を含む、態様1〜45のいずれか1に記載の抗体−薬物コンジュゲートを製造するための方法。
[態様49]態様1〜45のいずれか1に記載の抗体−薬物コンジュゲートを含む組成物の治療的有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、PTK7関連障害を処置する方法。
[態様50]PTK7関連障害が過剰増殖性障害である、態様49に記載の方法。
[態様51]過剰増殖性障害が新生物性障害である、態様50に記載の方法。
[態様52]新生物性障害が固形腫瘍である、態様51に記載の方法。
[態様53]新生物性障害が、トリプルネガティブ乳癌(TNBC)、プロゲステロン受容体陽性乳癌(PR+)、エストロゲン受容体陽性乳癌(ER+)およびダブルポジティブ乳癌のような乳癌;卵巣癌;結腸直腸癌;食道癌;胃癌;黒色腫;肉腫;腎臓癌;膵臓癌;前立腺癌;肝細胞癌(HCC)のような肝臓癌;ならびに非小細胞肺癌(NSCLC)のような肺癌である、態様52に記載の方法。
[態様54]新生物性障害が血液悪性疾患である、態様53に記載の方法。
[態様55]血液悪性疾患が白血病である、態様54に記載の方法。
[態様56]白血病が成人骨髄性白血病(AML)または急性リンパ芽球性白血病(ALL)である、態様55に記載の方法。
[態様57]対象においてPTK7関連障害を処置するための医薬品の製造における、態様1〜45のいずれか1に記載の抗体−薬物コンジュゲートの使用。
[態様58]PTK7関連障害が過剰増殖性障害である、態様57に記載の使用。
[態様59]過剰増殖性障害が新生物性障害である、態様58に記載の使用。
[態様60]新生物性障害が固形腫瘍である、態様59に記載の使用。
[態様61]固形腫瘍が、トリプルネガティブ乳癌(TNBC)、プロゲステロン受容体陽性乳癌(PR+)、エストロゲン受容体陽性乳癌(ER+)およびダブルポジティブ乳癌のような乳癌;卵巣癌;結腸直腸癌;食道癌;胃癌;黒色腫;肉腫;腎臓癌;膵臓癌;前立腺癌;肝細胞癌(HCC)のような肝臓癌;ならびに非小細胞肺癌(NSCLC)のような肺癌である、態様60に記載の使用。
[態様62]新生物性障害が血液悪性疾患である、態様59に記載の使用。
[態様63]血液悪性疾患が白血病である、態様62に記載の使用。
[態様64]白血病が成人骨髄性白血病(AML)または急性リンパ芽球性白血病(ALL)である、態様63に記載の使用。
[態様65]PTK7関連障害の処置における使用のための、態様1〜45のいずれか1に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
[態様66]PTK7関連障害が過剰増殖性障害である、態様65に記載の使用のための抗体−薬物コンジュゲート。
[態様67]過剰増殖性障害が新生物性障害である、態様66に記載の使用のための抗体−薬物コンジュゲート。
[態様68]新生物性障害が固形腫瘍である、態様67に記載の使用のための抗体−薬物コンジュゲート。
[態様69]固形腫瘍が、トリプルネガティブ乳癌(TNBC)、プロゲステロン受容体陽性乳癌(PR+)、エストロゲン受容体陽性乳癌(ER+)およびダブルポジティブ乳癌のような乳癌;卵巣癌;結腸直腸癌;食道癌;胃癌;黒色腫;肉腫;腎臓癌;膵臓癌;前立腺癌;肝細胞癌(HCC)のような肝臓癌;ならびに非小細胞肺癌(NSCLC)のような肺癌である、態様68に記載の使用のための抗体−薬物コンジュゲート。
[態様70]新生物性障害が血液悪性疾患である、態様69に記載の使用のための抗体−薬物コンジュゲート。
[態様71]血液悪性疾患が白血病である、態様70に記載の使用のための抗体−薬物コンジュゲート。
[態様72]白血病が成人骨髄性白血病(AML)または急性リンパ芽球性白血病(ALL)である、態様71に記載の使用のための抗体−薬物コンジュゲート。
[態様73]腫瘍細胞集団をPTK7抗体−薬物コンジュゲートと接触させることを含み、該集団が、腫瘍開始細胞および腫瘍開始細胞以外の腫瘍細胞を含み;それにより、腫瘍細胞集団中の腫瘍開始細胞の頻度が低減する、腫瘍細胞集団において腫瘍開始細胞を低減する方法。
[態様74]接触がインビボで実施される、態様73に記載の方法。
[態様75]接触がインビトロで実施される、態様73に記載の方法。
Claims (75)
- 式:
Ab−(L−D)
[式中:
(a)Abは、タンパク質チロシンキナーゼ7(PTK7)に結合する抗体またはその抗原結合断片であり;そして
(b)L−Dは、リンカー−薬物部分であり、ここでLはリンカーであり、Dはオーリスタチンである]
の抗体−薬物コンジュゲート。 - Abがキメラ抗体、CDR移植抗体、ヒト化抗体、または組み換えヒト抗体である、請求項1に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが内在化抗体である、請求項1または2に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが中和抗体である、請求項1または2に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、ヒトPTK7への結合に関して、以下:
(a)SEQ ID NO:25として示されている重鎖可変領域およびSEQ ID
NO:39として示されている軽鎖可変領域;
(b)SEQ ID NO:1として示されている重鎖可変領域およびSEQ ID NO:15として示されている軽鎖可変領域;または
(c)SEQ ID NO:49として示されている重鎖可変領域およびSEQ ID
NO:63として示されている軽鎖可変領域;
を含む抗体と競合する、および/または該抗体と同一のエピトープに結合する、請求項1〜4のいずれか1項に記載の抗体−薬物コンジュゲート。 - Abが、少なくとも1個の重鎖可変領域および少なくとも1個の軽鎖可変領域を含み、該少なくとも1個の重鎖可変領域が、SEQ ID NO:27、31、および35として示される3個のCDRを含む、請求項5に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、少なくとも1個の重鎖可変領域および少なくとも1個の軽鎖可変領域を含み、該少なくとも1個の軽鎖可変領域が、SEQ ID NO:41、43、および45として示される3個のCDRを含む、請求項5に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、以下:
(a)SEQ ID NO:27、31、および35として示される3個のCDRを含むを重鎖可変領域;ならびに
(b)SEQ ID NO:41、43、および45として示される3個のCDRを含む軽鎖可変領域;
を含む、請求項5〜7のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲート。 - Abが、SEQ ID NO:25と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域およびSEQ ID NO:39と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、請求項5〜8のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、SEQ ID NO:25として示されている重鎖可変領域およびSEQ ID NO:39として示されている軽鎖可変領域を含む、請求項9に記載の抗体−薬物コ
ンジュゲート。 - Abが、IgG1重鎖定常領域を含む、請求項10に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、SEQ ID NO:37として示されている重鎖を含む、請求項11に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、カッパ軽鎖定常領域を含む、請求項10〜12のいずれか1項に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、SEQ ID NO:47として示されている軽鎖を含む、請求項13に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、SEQ ID NO:37として示されている重鎖およびSEQ ID NO:47として示されている軽鎖を含む、請求項10〜14のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、少なくとも1個の重鎖可変領域および少なくとも1個の軽鎖可変領域を含み、該少なくとも1個の重鎖可変領域が、SEQ ID NO:3、7、および11として示されている3個のCDRを含む、請求項5に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、少なくとも1個の重鎖可変領域および少なくとも1個の軽鎖可変領域を含み、該少なくとも1個の軽鎖可変領域が、SEQ ID NO:17、19、および21として示されている3個のCDRを含む、請求項5に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、以下:
(a)SEQ ID NO:3、7、および11として示されている3個のCDRを含むを重鎖可変領域;ならびに
(b)SEQ ID NO:17、19、および21として示されている3個のCDRを含む軽鎖可変領域;
を含む、請求項5及び16〜17のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲート。 - Abが、SEQ ID NO:1と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域およびSEQ ID NO:15と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、請求項5及び16〜18のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、SEQ ID NO:1として示されている重鎖可変領域およびSEQ ID
NO:15として示されている軽鎖可変領域を含む、請求項19に記載の抗体−薬物コンジュゲート。 - Abが、IgG1重鎖定常領域を含む、請求項20に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、SEQ ID NO:13として示されている重鎖を含む、請求項21に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、カッパ軽鎖定常領域を含む、請求項20〜22のいずれか1項に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、SEQ ID NO:23として示されている軽鎖を含む、請求項23に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、SEQ ID NO:13として示されている重鎖およびSEQ ID NO:23として示されている軽鎖を含む、請求項20〜24のいずれか1項に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、少なくとも1個の重鎖可変領域および少なくとも1個の軽鎖可変領域を含み、該少なくとも1個の重鎖可変領域が、SEQ ID NO:51、55、および59として示されている3個のCDRを含む、請求項5に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、少なくとも1個の重鎖可変領域および少なくとも1個の軽鎖可変領域を含み、該少なくとも1個の軽鎖可変領域が、SEQ ID NO:65、67、および69として示されている3個のCDRを含む、請求項5に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、以下:
(a)SEQ ID NO:51、55、および59として示される3個のCDRを含むを重鎖可変領域;ならびに
(b)SEQ ID NO:65、67、および69として示される3個のCDRを含む軽鎖可変領域;
を含む、請求項5及び26〜27のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲート。 - Abが、SEQ ID NO:49と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域およびSEQ ID NO:63と少なくとも90%同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、請求項5に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、SEQ ID NO:49として示されている重鎖可変領域およびSEQ ID NO:63として示されている軽鎖可変領域を含む、請求項29に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、IgG1重鎖定常領域を含む、請求項30に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、SEQ ID NO:61として示されている重鎖を含む、請求項31に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、カッパ軽鎖定常領域を含む、請求項30〜32のいずれか1項に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、SEQ ID NO:71として示されている軽鎖を含む、請求項33に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、SEQ ID NO:61として示されている重鎖およびSEQ ID NO:71として示されている軽鎖を含む、請求項30〜34のいずれか1項に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、SEQ ID NO:25、1、または49として示されている重鎖可変領域を含む、請求項5に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- Abが、SEQ ID NO:39、15、または63として示されている軽鎖可変領域を含む、請求項5に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- リンカーが、マレイミドカプロイル−バリン−シトルリン−p−アミノベンジルオキシカルボニル(vc)およびマレイミドカプロイル(mc)からなる群から選択される、請求項1〜37のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- リンカーが、マレイミドカプロイル−バリン−シトルリン−p−アミノベンジルオキシカルボニル(vc)である、請求項1〜38のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- リンカーが、マレイミドカプロイル(mc)である、請求項1〜38のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- オーリスタチンが、0101(2−メチルアラニル−N−[(3R,4S,5S)−3−メトキシ−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(1,3−チアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミド)である、請求項1〜40のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- リンカーおよびオーリスタチンが、vc0101(N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]−L−バリル−N−{4−[(21S,24S,25R)−24−[(2S)−ブタン−2−イル]−25−(2−{(2S)−2−[(1R,2R)−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソ−3−{[(1S)−2−フェニル−1−(1,3−チアゾール−2−イル)エチル]アミノ}プロピル]ピロリジン−1−イル}−2−オキソエチル)−18,18,23−トリメチル−3,16,19,22−テトラオキソ−21−(プロパン−2−イル)−2,7,10,13,26−ペンタオキサ−4,17,20,23−テトラアザヘプタコサ−1−イル]フェニル}−N〜5〜−カルバモイル−L−オルニチンアミド)である、請求項41に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- オーリスタチンが、8261 2−メチルアラニル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S)−1−カルボキシ−2−フェニルエチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドである、請求項1〜40のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- リンカーおよびオーリスタチンが、mc8261 N−[6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサノイル]−2−メチルアラニル−N−[(3R,4S,5S)−1−{(2S)−2−[(1R,2R)−3−{[(1S)−1−カルボキシ−2−フェニルエチル]アミノ}−1−メトキシ−2−メチル−3−オキソプロピル]ピロリジン−1−イル}−3−メトキシ−5−メチル−1−オキソヘプタン−4−イル]−N−メチル−L−バリンアミドである、請求項43に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- 式:
Ab−(L−D)
[式中:
(a)Abは、以下:
(i)SEQ ID NO:37として示されている重鎖およびSEQ ID NO:47として示されている軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片;
(ii)SEQ ID NO:13として示されている重鎖およびSEQ ID NO:23として示されている軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片;ならびに
(iii)SEQ ID NO:61として示されている重鎖およびSEQ ID NO:71として示されている軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片;
からなる群から選択される抗体またはその抗原結合断片であり;そして
(b)L−Dは、リンカー−薬物部分であり、ここで、Lはリンカーであり、Dはオーリスタチンであり、ここで、該リンカーは、マレイミドカプロイル−バリン−シトルリン−p−アミノベンジルオキシカルボニル(vc)であり、該オーリスタチンは、0101である]
の抗体−薬物コンジュゲート。 - 請求項1〜45のいずれか1項に記載の抗体−薬物コンジュゲートおよび薬学的に許容可能なキャリヤーを含む、医薬組成物。
- 請求項1〜45のいずれか1項に記載の複数の抗体−薬物コンジュゲートおよび場合により医薬用キャリヤーを含む組成物であって、該組成物が、1〜8の範囲内の平均DARを有する、前記組成物。
- 以下の工程:
(a)該リンカーを該薬物に連結し;
(b)該リンカー−薬物部分を該抗体にコンジュゲートさせ;そして
(c)該抗体−薬物コンジュゲートを精製する;
を含む、請求項1〜45のいずれか1項に記載の抗体−薬物コンジュゲートを製造するための方法。 - 請求項1〜45のいずれか1項に記載の抗体−薬物コンジュゲートを含む組成物の治療的有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、PTK7関連障害を処置する方法。
- PTK7関連障害が過剰増殖性障害である、請求項49に記載の方法。
- 過剰増殖性障害が新生物性障害である、請求項50に記載の方法。
- 新生物性障害が固形腫瘍である、請求項51に記載の方法。
- 新生物性障害が、トリプルネガティブ乳癌(TNBC)、プロゲステロン受容体陽性乳癌(PR+)、エストロゲン受容体陽性乳癌(ER+)およびダブルポジティブ乳癌のような乳癌;卵巣癌;結腸直腸癌;食道癌;胃癌;黒色腫;肉腫;腎臓癌;膵臓癌;前立腺癌;肝細胞癌(HCC)のような肝臓癌;ならびに非小細胞肺癌(NSCLC)のような肺癌である、請求項52に記載の方法。
- 新生物性障害が血液悪性疾患である、請求項53に記載の方法。
- 血液悪性疾患が白血病である、請求項54に記載の方法。
- 白血病が成人骨髄性白血病(AML)または急性リンパ芽球性白血病(ALL)である、請求項55に記載の方法。
- 対象においてPTK7関連障害を処置するための医薬品の製造における、請求項1〜45のいずれか1項に記載の抗体−薬物コンジュゲートの使用。
- PTK7関連障害が過剰増殖性障害である、請求項57に記載の使用。
- 過剰増殖性障害が新生物性障害である、請求項58に記載の使用。
- 新生物性障害が固形腫瘍である、請求項59に記載の使用。
- 固形腫瘍が、トリプルネガティブ乳癌(TNBC)、プロゲステロン受容体陽性乳癌(PR+)、エストロゲン受容体陽性乳癌(ER+)およびダブルポジティブ乳癌のような乳癌;卵巣癌;結腸直腸癌;食道癌;胃癌;黒色腫;肉腫;腎臓癌;膵臓癌;前立腺癌;肝細胞癌(HCC)のような肝臓癌;ならびに非小細胞肺癌(NSCLC)のような肺癌である、請求項60に記載の使用。
- 新生物性障害が血液悪性疾患である、請求項59に記載の使用。
- 血液悪性疾患が白血病である、請求項62に記載の使用。
- 白血病が成人骨髄性白血病(AML)または急性リンパ芽球性白血病(ALL)である、請求項63に記載の使用。
- PTK7関連障害の処置における使用のための、請求項1〜45のいずれか1項に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
- PTK7関連障害が過剰増殖性障害である、請求項65に記載の使用のための抗体−薬物コンジュゲート。
- 過剰増殖性障害が新生物性障害である、請求項66に記載の使用のための抗体−薬物コンジュゲート。
- 新生物性障害が固形腫瘍である、請求項67に記載の使用のための抗体−薬物コンジュゲート。
- 固形腫瘍が、トリプルネガティブ乳癌(TNBC)、プロゲステロン受容体陽性乳癌(PR+)、エストロゲン受容体陽性乳癌(ER+)およびダブルポジティブ乳癌のような乳癌;卵巣癌;結腸直腸癌;食道癌;胃癌;黒色腫;肉腫;腎臓癌;膵臓癌;前立腺癌;肝細胞癌(HCC)のような肝臓癌;ならびに非小細胞肺癌(NSCLC)のような肺癌である、請求項68に記載の使用のための抗体−薬物コンジュゲート。
- 新生物性障害が血液悪性疾患である、請求項69に記載の使用のための抗体−薬物コンジュゲート。
- 血液悪性疾患が白血病である、請求項70に記載の使用のための抗体−薬物コンジュゲート。
- 白血病が成人骨髄性白血病(AML)または急性リンパ芽球性白血病(ALL)である、請求項71に記載の使用のための抗体−薬物コンジュゲート。
- 腫瘍細胞集団をPTK7抗体−薬物コンジュゲートと接触させることを含み、該集団が、腫瘍開始細胞および腫瘍開始細胞以外の腫瘍細胞を含み;それにより、腫瘍細胞集団中の腫瘍開始細胞の頻度が低減する、腫瘍細胞集団において腫瘍開始細胞を低減する方法。
- 接触がインビボで実施される、請求項73に記載の方法。
- 接触がインビトロで実施される、請求項73に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201461986520P | 2014-04-30 | 2014-04-30 | |
US61/986,520 | 2014-04-30 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017509591A Division JP6629837B2 (ja) | 2014-04-30 | 2015-04-27 | 抗ptk7抗体−薬物コンジュゲート |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020055846A true JP2020055846A (ja) | 2020-04-09 |
JP2020055846A5 JP2020055846A5 (ja) | 2020-06-11 |
Family
ID=54249561
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017509591A Active JP6629837B2 (ja) | 2014-04-30 | 2015-04-27 | 抗ptk7抗体−薬物コンジュゲート |
JP2019220041A Pending JP2020055846A (ja) | 2014-04-30 | 2019-12-05 | 抗ptk7抗体−薬物コンジュゲート |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017509591A Active JP6629837B2 (ja) | 2014-04-30 | 2015-04-27 | 抗ptk7抗体−薬物コンジュゲート |
Country Status (28)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US9777070B2 (ja) |
EP (2) | EP3711780A3 (ja) |
JP (2) | JP6629837B2 (ja) |
KR (2) | KR102275513B1 (ja) |
CN (1) | CN106659801B (ja) |
AR (1) | AR100215A1 (ja) |
AU (2) | AU2015253422B2 (ja) |
BR (1) | BR112016025291A2 (ja) |
CA (1) | CA2947148C (ja) |
CY (1) | CY1124131T1 (ja) |
DK (1) | DK3137114T3 (ja) |
ES (1) | ES2856927T3 (ja) |
HR (1) | HRP20210292T1 (ja) |
HU (1) | HUE053287T2 (ja) |
IL (1) | IL248475B (ja) |
LT (1) | LT3137114T (ja) |
MX (1) | MX2016014247A (ja) |
PE (1) | PE20170517A1 (ja) |
PH (1) | PH12016502142B1 (ja) |
PL (1) | PL3137114T3 (ja) |
PT (1) | PT3137114T (ja) |
RS (1) | RS61516B1 (ja) |
RU (1) | RU2708075C2 (ja) |
SG (2) | SG11201608953WA (ja) |
SI (1) | SI3137114T1 (ja) |
TW (1) | TWI679022B (ja) |
WO (1) | WO2015168019A2 (ja) |
ZA (1) | ZA201607385B (ja) |
Families Citing this family (23)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SA112330278B1 (ar) | 2011-02-18 | 2015-10-09 | ستيم سينتركس، انك. | مواد ضابطة جديدة وطرق للاستخدام |
MX368234B (es) * | 2014-01-10 | 2019-09-25 | Synthon Biopharmaceuticals Bv | Conjugados de anticuerpo-fármaco (adcs) que contienen duocarmicina para usarse en el tratamiento de cáncer endometrial. |
KR20170058432A (ko) | 2014-10-10 | 2017-05-26 | 화이자 인코포레이티드 | 상승 효과적 아우리스타틴 조합 |
US11583593B2 (en) | 2016-01-14 | 2023-02-21 | Synthis Therapeutics, Inc. | Antibody-ALK5 inhibitor conjugates and their uses |
KR20210025522A (ko) | 2018-06-25 | 2021-03-09 | 유니버시티 오브 워싱톤 | 강력하고 선택적인 인터루킨 모방체의 드 노보 디자인 |
AU2019365238A1 (en) * | 2018-10-24 | 2021-05-13 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Conjugated chemical inducers of degradation and methods of use |
CA3119472A1 (en) | 2018-11-20 | 2020-05-28 | University Of Washington | Split interleukin mimetics and their use |
WO2020256721A1 (en) * | 2019-06-19 | 2020-12-24 | Synthis, Llc | Antib0dy-alk5 inhibitor conjugates and their uses |
US20230181750A1 (en) * | 2020-05-06 | 2023-06-15 | Crispr Therapeutics Ag | Mask peptides and masked anti-ptk7 antibodies comprising such |
AR122014A1 (es) | 2020-05-06 | 2022-08-03 | Crispr Therapeutics Ag | Receptor de antígenos quimérico enmascarado específico para la proteína tirosina cinasa de tipo 7 (ptk7) y células inmunitarias que expresan el mismo |
WO2021231762A2 (en) * | 2020-05-13 | 2021-11-18 | The Trustees Of Indiana University | Combination therapy for the treatment of tnbc with a pi3k pathway inhibitor that targets pi3kdelta and pi3kgamma tnbc |
US20230220067A1 (en) * | 2020-06-05 | 2023-07-13 | The Johns Hopkins University | Humanized antibodies directed against kcnk9 |
CN112394166A (zh) * | 2020-11-09 | 2021-02-23 | 广东希格生物科技有限公司 | 六氟磷酸盐在制备抑制elisa反应基质效应的制剂中的应用 |
US11883432B2 (en) | 2020-12-18 | 2024-01-30 | Century Therapeutics, Inc. | Chimeric antigen receptor system with adaptable receptor specificity |
CN115894696A (zh) * | 2021-08-18 | 2023-04-04 | 和迈生物科技有限公司 | 抗ptk7单域抗体及其应用 |
WO2023052541A1 (en) | 2021-09-30 | 2023-04-06 | Imcheck Therapeutics | Combination of an anti-btn3a activating antibody and an il-2 agonist for use in therapy |
CN114028579B (zh) * | 2021-12-01 | 2023-09-05 | 中南大学湘雅三医院 | 核酸适配体-药物结合物PTK7-GEMs在制备治疗膀胱癌药物中的应用 |
WO2023180484A1 (en) | 2022-03-23 | 2023-09-28 | Synaffix B.V. | Antibody-conjugates for targeting of tumours expressing ptk7 |
WO2024037621A1 (en) * | 2022-08-19 | 2024-02-22 | Sichuan Kelun-Biotech Biopharmaceutical Co., Ltd. | Ptk7-binding protein and use thereof |
WO2024054030A1 (ko) * | 2022-09-06 | 2024-03-14 | 연세대학교 산학협력단 | 항-ptk7 항체 및 이의 용도 |
WO2024078586A1 (en) | 2022-10-14 | 2024-04-18 | Sichuan Kelun-Biotech Biopharmaceutical Co., Ltd. | Antibody-drug conjugate binding to human ptk7 and method for preparation and use thereof |
WO2024080325A1 (ja) * | 2022-10-14 | 2024-04-18 | Jsr株式会社 | 抗体及びその使用 |
CN115990264A (zh) * | 2022-12-21 | 2023-04-21 | 中国科学院基础医学与肿瘤研究所(筹) | 一种ptk7靶向核酸适体偶联药物 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2012112943A1 (en) * | 2011-02-18 | 2012-08-23 | Stem Centrx, Inc. | Novel modulators and methods of use |
WO2013072813A2 (en) * | 2011-11-17 | 2013-05-23 | Pfizer Inc. | Cytotoxic peptides and antibody drug conjugates thereof |
Family Cites Families (91)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3773919A (en) | 1969-10-23 | 1973-11-20 | Du Pont | Polylactide-drug mixtures |
US4485045A (en) | 1981-07-06 | 1984-11-27 | Research Corporation | Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes |
US4671958A (en) | 1982-03-09 | 1987-06-09 | Cytogen Corporation | Antibody conjugates for the delivery of compounds to target sites |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US4544545A (en) | 1983-06-20 | 1985-10-01 | Trustees University Of Massachusetts | Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting |
US5807715A (en) | 1984-08-27 | 1998-09-15 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin |
US4970198A (en) | 1985-10-17 | 1990-11-13 | American Cyanamid Company | Antitumor antibiotics (LL-E33288 complex) |
CA1319120C (en) | 1985-04-01 | 1993-06-15 | John Henry Kenten | Transformed myeloma cell-line and a process for the expression of a gene coding for a eukaryotic polypeptide employing same |
GB8601597D0 (en) | 1986-01-23 | 1986-02-26 | Wilson R H | Nucleotide sequences |
US5225539A (en) | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
IL85035A0 (en) | 1987-01-08 | 1988-06-30 | Int Genetic Eng | Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same |
US5037651A (en) | 1987-01-30 | 1991-08-06 | American Cyanamid Company | Dihydro derivatives of LL-E33288 antibiotics |
US5079233A (en) | 1987-01-30 | 1992-01-07 | American Cyanamid Company | N-acyl derivatives of the LL-E33288 antitumor antibiotics, composition and methods for using the same |
US5108912A (en) | 1987-01-30 | 1992-04-28 | American Cyanamid Company | Antitumor antibiotics (LL-E33288 complex) |
GB8717430D0 (en) | 1987-07-23 | 1987-08-26 | Celltech Ltd | Recombinant dna product |
US5606040A (en) | 1987-10-30 | 1997-02-25 | American Cyanamid Company | Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group |
US5053394A (en) | 1988-09-21 | 1991-10-01 | American Cyanamid Company | Targeted forms of methyltrithio antitumor agents |
GB8809129D0 (en) | 1988-04-18 | 1988-05-18 | Celltech Ltd | Recombinant dna methods vectors and host cells |
GB8823869D0 (en) | 1988-10-12 | 1988-11-16 | Medical Res Council | Production of antibodies |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
US5013556A (en) | 1989-10-20 | 1991-05-07 | Liposome Technology, Inc. | Liposomes with enhanced circulation time |
GB8928874D0 (en) | 1989-12-21 | 1990-02-28 | Celltech Ltd | Humanised antibodies |
US5859205A (en) | 1989-12-21 | 1999-01-12 | Celltech Limited | Humanised antibodies |
US5625126A (en) | 1990-08-29 | 1997-04-29 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
US5545806A (en) | 1990-08-29 | 1996-08-13 | Genpharm International, Inc. | Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
US5633425A (en) | 1990-08-29 | 1997-05-27 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
ES2108048T3 (es) | 1990-08-29 | 1997-12-16 | Genpharm Int | Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos. |
US5661016A (en) | 1990-08-29 | 1997-08-26 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes |
EP0564531B1 (en) | 1990-12-03 | 1998-03-25 | Genentech, Inc. | Enrichment method for variant proteins with altered binding properties |
JP4124480B2 (ja) | 1991-06-14 | 2008-07-23 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | 免疫グロブリン変異体 |
GB9116610D0 (en) | 1991-08-01 | 1991-09-18 | Danbiosyst Uk | Preparation of microparticles |
AU669124B2 (en) | 1991-09-18 | 1996-05-30 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Process for producing humanized chimera antibody |
US7744877B2 (en) | 1992-11-13 | 2010-06-29 | Biogen Idec Inc. | Expression and use of anti-CD20 Antibodies |
EP0752248B1 (en) | 1992-11-13 | 2000-09-27 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma |
US5981568A (en) | 1993-01-28 | 1999-11-09 | Neorx Corporation | Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells |
US6214345B1 (en) | 1993-05-14 | 2001-04-10 | Bristol-Myers Squibb Co. | Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates |
US5773001A (en) | 1994-06-03 | 1998-06-30 | American Cyanamid Company | Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis |
ZA955642B (en) | 1994-07-07 | 1997-05-06 | Ortho Pharma Corp | Lyophilized imaging agent formulation |
US5663149A (en) | 1994-12-13 | 1997-09-02 | Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University | Human cancer inhibitory pentapeptide heterocyclic and halophenyl amides |
US5952329A (en) | 1996-01-23 | 1999-09-14 | The General Hospital Corporation | Benzophenothiazine and benzoporphyrin dye combination photodynamic therapy of tumors |
GB9809951D0 (en) | 1998-05-08 | 1998-07-08 | Univ Cambridge Tech | Binding molecules |
CA2341029A1 (en) | 1998-08-17 | 2000-02-24 | Abgenix, Inc. | Generation of modified molecules with increased serum half-lives |
WO2000053211A2 (en) | 1999-03-09 | 2000-09-14 | University Of Southern California | Method of promoting myocyte proliferation and myocardial tissue repair |
US6309633B1 (en) | 1999-06-19 | 2001-10-30 | Nobex Corporation | Amphiphilic drug-oligomer conjugates with hydroyzable lipophile components and methods for making and using the same |
US6849425B1 (en) | 1999-10-14 | 2005-02-01 | Ixsys, Inc. | Methods of optimizing antibody variable region binding affinity |
AU2001257577A1 (en) | 2000-02-28 | 2001-09-03 | Shearwater Corporation | Water-soluble polymer conjugates of artelinic acid |
US7498029B2 (en) | 2001-05-01 | 2009-03-03 | The General Hospital Corporation | Photoimmunotherapies for cancer using combination therapies |
US7321026B2 (en) | 2001-06-27 | 2008-01-22 | Skytech Technology Limited | Framework-patched immunoglobulins |
US6997863B2 (en) | 2001-07-25 | 2006-02-14 | Triton Biosystems, Inc. | Thermotherapy via targeted delivery of nanoscale magnetic particles |
ATE395413T1 (de) | 2001-12-03 | 2008-05-15 | Amgen Fremont Inc | Antikörperkategorisierung auf der grundlage von bindungseigenschaften |
US20040001835A1 (en) | 2002-03-04 | 2004-01-01 | Medimmune, Inc. | Prevention or treatment of cancer using integrin alphavbeta3 antagonists in combination with other agents |
US20050276812A1 (en) * | 2004-06-01 | 2005-12-15 | Genentech, Inc. | Antibody-drug conjugates and methods |
GB0219776D0 (en) | 2002-08-24 | 2002-10-02 | Oxford Glycosciences Uk Ltd | A protein involved in carcinoma |
WO2004028551A1 (en) | 2002-09-24 | 2004-04-08 | The Burnham Institute | Novel agents that modulate eph receptor activity |
ATE516047T1 (de) | 2003-05-09 | 2011-07-15 | Diadexus Inc | Ovr110-antikörperzusammensetzungen und anwendungsverfahren |
JP2007508801A (ja) | 2003-10-24 | 2007-04-12 | エスバテック・アーゲー | 受容体チロシンキナーゼ阻害剤の同定および/または確認のための方法 |
CA2577370A1 (en) | 2004-08-16 | 2006-03-02 | Medimmune, Inc. | Integrin antagonists with enhanced antibody dependent cell-mediated cytotoxicity activity |
WO2006052409A2 (en) | 2004-10-23 | 2006-05-18 | Case Western Reserve University | Peptide and small molecule agonists of epha and their uses |
AU2006236508B2 (en) | 2005-04-15 | 2012-02-02 | Precision Biologics, Inc. | Recombinant monoclonal antibodies and corresponding antigens for colon and pancreatic cancers |
JP2009506790A (ja) | 2005-09-07 | 2009-02-19 | メディミューン,エルエルシー | 毒素とコンジュゲートしたeph受容体抗体 |
SI1957539T1 (sl) | 2005-12-08 | 2013-05-31 | Medarex, Inc. | Humana monoklonska protitelesa proti protein tirozin kinazi 7 (PTK7) in njihova uporaba |
US8058252B2 (en) | 2005-12-30 | 2011-11-15 | Institut Gustave Roussy | Use of inhibitors of scinderin and/or ephrin-A1 for treating tumors |
TW200806685A (en) | 2006-02-21 | 2008-02-01 | Wyeth Corp | Processes for the convergent synthesis of calicheamicin derivatives |
US8343461B2 (en) | 2006-03-08 | 2013-01-01 | Wake Forest University Health Sciences | Molecular signature of cancer |
CN101501187A (zh) | 2006-06-06 | 2009-08-05 | 田纳西大学研究基金会 | 富含赘生干细胞的组合物及包含其的方法 |
CA3153438C (en) | 2006-09-07 | 2024-03-12 | Scott & White Memorial Hospital | Methods and compositions based on diphtheria toxin-interleukin-3 conjugates |
CN102558001B (zh) | 2007-05-22 | 2015-09-23 | 惠氏有限责任公司 | 制造酰肼的改良方法 |
WO2008149803A1 (ja) | 2007-06-06 | 2008-12-11 | The University Of Tokyo | 表面抗原マーカーを用いた急性リンパ性白血病における癌幹細胞の分離同定方法 |
EP2190481B1 (en) | 2007-07-17 | 2014-12-24 | The General Hospital Corporation | Methods to identify and enrich for populations of ovarian cancer stem cells and somatic ovarian stem cells and uses thereof |
WO2009043051A2 (en) | 2007-09-27 | 2009-04-02 | Biogen Idec Ma Inc. | Cd23 binding molecules and methods of use thereof |
WO2009070767A2 (en) | 2007-11-28 | 2009-06-04 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Systemic instigation systems to study tumor growth or metastasis |
WO2009073546A2 (en) | 2007-11-30 | 2009-06-11 | Medarex, Inc. | Monoclonal antibody partner molecule conjugates directed to protein tyrosine kinase 7 (ptk7) |
KR101123130B1 (ko) | 2008-03-17 | 2012-03-30 | 연세대학교 산학협력단 | Ptk7 단백질의 기능 저해를 통한 세포의 이동, 침윤 또는 혈관신생 억제제 |
WO2009116764A2 (ko) | 2008-03-17 | 2009-09-24 | 연세대학교 산학협력단 | Ptk7 단백질의 기능 저해를 통한 세포의 이동, 침윤 또는 혈관신생 억제제 |
EP2207803B1 (en) | 2008-06-25 | 2013-05-01 | Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology | Cd9-specific human antibodies |
US8788213B2 (en) | 2009-01-12 | 2014-07-22 | Intrexon Corporation | Laser mediated sectioning and transfer of cell colonies |
US20110020221A1 (en) | 2009-04-09 | 2011-01-27 | The Johns Hopkins University | Cancer stem cell expression patterns and compounds to target cancer stem cells |
EP2380909A1 (en) | 2010-04-26 | 2011-10-26 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | PTK-7 protein involved in breast cancer |
US9778264B2 (en) | 2010-09-03 | 2017-10-03 | Abbvie Stemcentrx Llc | Identification and enrichment of cell subpopulations |
WO2013119964A2 (en) | 2012-02-08 | 2013-08-15 | Stem Centrx, Inc. | Identification and enrichment of cell subpopulations |
US20130061342A1 (en) | 2011-09-02 | 2013-03-07 | Stem Centrx, Inc. | Identification and Enrichment of Cell Subpopulations |
AU2011295722B2 (en) | 2010-09-03 | 2016-04-21 | Abbvie Stemcentrx Llc | Identification and enrichment of cell subpopulations |
US20130061340A1 (en) | 2011-09-02 | 2013-03-07 | Stem Centrx, Inc. | Identification and Enrichment of Cell Subpopulations |
EP2446895A1 (en) | 2010-10-01 | 2012-05-02 | Stemgen S.P.A. | EPH receptor expression in tumor stem cells |
EP2635310A2 (en) | 2010-11-05 | 2013-09-11 | Rinat Neuroscience Corp. | Engineered polypeptide conjugates and methods for making thereof using transglutaminase |
US8852599B2 (en) * | 2011-05-26 | 2014-10-07 | Bristol-Myers Squibb Company | Immunoconjugates, compositions for making them, and methods of making and use |
AU2012335205A1 (en) * | 2011-11-11 | 2014-05-29 | Rinat Neuroscience Corp. | Antibodies specific for Trop-2 and their uses |
CA2859755C (en) | 2011-12-23 | 2021-04-20 | Pfizer Inc. | Engineered antibody constant regions for site-specific conjugation and methods and uses therefor |
EP4035689A1 (en) * | 2012-12-13 | 2022-08-03 | Immunomedics Inc. | Dosages of immunoconjugates of antibodies and sn-38 for improved efficacy and decreased toxicity |
EP3892294A1 (en) | 2013-08-28 | 2021-10-13 | AbbVie Stemcentrx LLC | Site-specific antibody conjugation methods and compositions |
WO2016064749A2 (en) | 2014-10-20 | 2016-04-28 | Igenica Biotherapeutics, Inc. | Novel antibody-drug conjugates and related compounds, compositions, and methods of use |
-
2015
- 2015-04-27 KR KR1020217009876A patent/KR102275513B1/ko active IP Right Grant
- 2015-04-27 LT LTEP15774735.3T patent/LT3137114T/lt unknown
- 2015-04-27 WO PCT/US2015/027791 patent/WO2015168019A2/en active Application Filing
- 2015-04-27 DK DK15774735.3T patent/DK3137114T3/da active
- 2015-04-27 MX MX2016014247A patent/MX2016014247A/es active IP Right Grant
- 2015-04-27 RS RS20210270A patent/RS61516B1/sr unknown
- 2015-04-27 SG SG11201608953WA patent/SG11201608953WA/en unknown
- 2015-04-27 EP EP20159103.9A patent/EP3711780A3/en active Pending
- 2015-04-27 AU AU2015253422A patent/AU2015253422B2/en active Active
- 2015-04-27 US US14/696,663 patent/US9777070B2/en active Active
- 2015-04-27 PT PT157747353T patent/PT3137114T/pt unknown
- 2015-04-27 SI SI201531546T patent/SI3137114T1/sl unknown
- 2015-04-27 EP EP15774735.3A patent/EP3137114B8/en active Active
- 2015-04-27 RU RU2016143119A patent/RU2708075C2/ru active
- 2015-04-27 ES ES15774735T patent/ES2856927T3/es active Active
- 2015-04-27 CA CA2947148A patent/CA2947148C/en active Active
- 2015-04-27 JP JP2017509591A patent/JP6629837B2/ja active Active
- 2015-04-27 HU HUE15774735A patent/HUE053287T2/hu unknown
- 2015-04-27 KR KR1020167033089A patent/KR102238032B1/ko active IP Right Grant
- 2015-04-27 SG SG10201809628SA patent/SG10201809628SA/en unknown
- 2015-04-27 PL PL15774735T patent/PL3137114T3/pl unknown
- 2015-04-27 CN CN201580030255.5A patent/CN106659801B/zh active Active
- 2015-04-27 PE PE2016002152A patent/PE20170517A1/es unknown
- 2015-04-27 BR BR112016025291A patent/BR112016025291A2/pt active Search and Examination
- 2015-04-28 AR ARP150101275A patent/AR100215A1/es unknown
- 2015-04-30 TW TW104113994A patent/TWI679022B/zh active
-
2016
- 2016-10-25 IL IL248475A patent/IL248475B/en active IP Right Grant
- 2016-10-26 ZA ZA2016/07385A patent/ZA201607385B/en unknown
- 2016-10-26 PH PH12016502142A patent/PH12016502142B1/en unknown
-
2017
- 2017-09-01 US US15/693,687 patent/US20180094075A1/en not_active Abandoned
-
2019
- 2019-12-05 JP JP2019220041A patent/JP2020055846A/ja active Pending
-
2020
- 2020-12-03 AU AU2020281105A patent/AU2020281105A1/en not_active Abandoned
-
2021
- 2021-02-22 HR HRP20210292TT patent/HRP20210292T1/hr unknown
- 2021-03-05 CY CY20211100189T patent/CY1124131T1/el unknown
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2012112943A1 (en) * | 2011-02-18 | 2012-08-23 | Stem Centrx, Inc. | Novel modulators and methods of use |
WO2013072813A2 (en) * | 2011-11-17 | 2013-05-23 | Pfizer Inc. | Cytotoxic peptides and antibody drug conjugates thereof |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6629837B2 (ja) | 抗ptk7抗体−薬物コンジュゲート | |
JP6157575B2 (ja) | Trop−2に対して特異的な抗体およびこれらの使用 | |
KR101809072B1 (ko) | 항-cxcr4 항체 및 항체-약물 접합체 | |
JP2019506398A (ja) | 上皮増殖因子受容体変異体iiiおよびcd3の単一および二重特異性抗体およびそれらの使用 | |
US20180296691A1 (en) | Anti-efna4 antibody-drug conjugates |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200106 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200106 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200421 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210104 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20210401 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20210730 |