JP2018513850A - がんの処置用のホスホイノシチド３キナーゼ阻害化合物とｃｄｋ４／６阻害剤化合物との組み合わせ - Google Patents

Abstract

治療上有効な量のタセリシブ及びパルボシクリブ、若しくはその立体異性体、幾何異性体、互変異性体、又はその薬学的に許容可能な塩を含む治療用組み合わせにより、患者におけるがんを処置するための方法及び組成物が提供される。【選択図】図８

Description

関連出願
本出願は、２０１５年３月２６日に出願された米国仮出願第６２／１３８５５６号の利益を主張するものであり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
発明の分野

本発明は一般的に、がん等の過剰増殖性障害に対する活性を有する化合物の薬学的組み合わせに関する。本発明はまた、哺乳動物細胞又は関連する病的状態のインビトロでの、インサイチュでの及びインビボでの診断又は処置のための化合物の使用方法に関する。

投薬レジメンにおいて同時に又は順次に投与される抗がんの薬学的治療の組み合わせは、がんの処置において今や一般的である。成功した組み合わせ治療は、単独治療、即ち１種の薬剤に限定された薬学的処置よりも改善され更に相乗的な効果をもたらす（Ouchi et al (2006) Cancer Chemother. Pharmacol. 57:693-702; Higgins et al (2004) Anti-Cancer Drugs 15:503-512）。前臨床研究は、乳がんを処置するためのカペシタビン及びタキサン等の抗がんの薬学的治療の組み合わせの臨床段階での相乗作用を予測するための基礎となっている（Sawada et al (1998) Clin. Cancer Res. 4:1013-1019）。組み合わせ治療のある種の用量及びスケジュールは、有効性を損なうことなく安全性を向上させることができる（O'Shaughnessy et al (2006) Clin. Breast Cancer Apr 7(1):42-50). Synergistic effects in vitro have been correlated with clinical stage synergy (Steinbach et al (2003) Clin. Inf. Dis. Oct 1:37 Suppl 3:S188-224）。

ホスホイノシチド−３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／Ａｋｔシグナル伝達経路の上方制御は、ほとんどのがんにおいて共通する特徴である（Yuan and Cantley (2008) Oncogene 27:5497-510）。本経路での遺伝的な偏向は、多くのヒトがんにおいて検出されており（Osaka et al (2004) Apoptosis 9:667-76）、細胞の増殖、遊走及び生存を刺激するように主に作用する。ｐ１１０ａＰＩ３ＫアイソフォームをコードするＰＩＫ３ＣＡ遺伝子の点変異又は増幅を活性化した後に本経路の活性化が起こる（Hennessy et al (2005) Nat. Rev. Drug Discov. 4:988-1004）。ＰＩ３Ｋと反対の機能を有するホスファターゼである腫瘍抑制因子ＰＴＥＮ内での遺伝子欠失又は機能喪失変異によっても、ＰＩ３Ｋ経路でのシグナル伝達が増加する（Zhang and Yu (2010) Clin. Cancer Res. 16:4325-30）。これらの異常により、Ａｋｔ及びｍＴＯＲ等のキナーゼをとおして下流シグナル伝達の増加がもたらされ、ＰＩ３Ｋ経路の活性の増加をがん処置に対する耐性の特質とすることが提案されている（Opel et al (2007) Cancer Res. 67:735-45; Razis et al (2011) Breast Cancer Res. Treat. 128:447-56）。

ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）は、リンパ腫にとって重要な生存シグナル及び増殖シグナルに関する主要なシグナル伝達のノードであり、ホスファターゼＰＴＥＮの活性とは対立するものである。ＰＩ３Ｋ経路は、侵攻性のリンパ腫では調節不全である（Abubaker (2007) Leukemia 21:2368-2370）。ＤＬＢＣＬ（びまん性大Ｂ細胞型リンパ腫）がんの８パーセントがＰＩ３ＣＡ（ホスファチジルイノシトール−３キナーゼ触媒サブユニットアルファ）のミスセンス変異を有し、３７％が免疫組織化学検査によりＰＴＥＮ陰性である。

ホスファチジルイノシトールは細胞膜で見出された多くのリン脂質の内の１つであり、細胞内シグナル伝達に関与する。３’−リン酸化ホスホイノシチドを介する細胞シグナル伝達は、様々な細胞プロセス、例えば悪性形質転換、増殖因子シグナル伝達、炎症及び免疫に関与している（Rameh et al (1999) J. Biol Chem. 274:8347-8350）。これらのリン酸化シグナル伝達産物の生成に関与する酵素であるホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３−キナーゼ又はＰＩ３Ｋとも称される）は、ウイルスの腫瘍性タンパク質とホスファチジルイノシトール（ＰＩ）及びそのリン酸化誘導体をイノシトール環の３’−ヒドロキシルでリン酸化する増殖因子レセプターチロシンキナーゼとに関連する活性として元々は同定された（Panayotou et al (1992) Trends Cell Biol 2:358-60）。ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）は、イノシトール環の３−ヒドロキシル残基において脂質をリン酸化する脂質キナーゼである（Whitman et al (1988) Nature, 332:664）。ＰＩ３−キナーゼによって生成される３−リン酸化リン脂質（ＰＩＰ３）は、Ａｋｔ及びＰＤＫ１、ホスホイノシチド依存性キナーゼ−１等の脂質結合ドメイン（プレクストリン相同（ＰＨ）領域を含む）を有するキナーゼをリクルートするセカンドメッセンジャーとして作用する（Vivanco et al (2002) Nature Rev. Cancer 2:489; Phillips et al (1998) Cancer 83:41）。

ＰＩ３キナーゼファミリーは、構造的相同性によって細分類される少なくとも１５種の異なる酵素を含み、配列相同性と酵素触媒作用によって形成される産物とに基づいて３種のクラスに分けられる。クラスＩのＰＩ３キナーゼは２つのサブユニット、即ち１１０ｋｄの触媒サブユニット及び８５ｋｄの調節サブユニットから構成される。調節サブユニットはＳＨ２ドメインを含有しており、チロシンキナーゼ活性を有する増殖因子レセプター又はがん遺伝子産物によりリン酸化されたチロシン残基に結合し、それによって脂質基質をリン酸化するｐ１１０触媒サブユニットのＰＩ３Ｋ活性が誘導される。クラスＩのＰＩ３キナーゼは、サイトカイン、インテグリン、増殖因子及び免疫レセプターの下流の重要なシグナル伝達事象に関与していることから、この経路を制御することにより細胞増殖及び発癌の調節等の重要な治療効果がもたらされうることが示唆される。クラスＩのＰＩ３Ｋは、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルイノシトール−４−リン酸及びホスファチジルイノシトール−４，５−二リン酸（ＰＩＰ２）をリン酸化してホスファチジルイノシトール−３−リン酸（ＰＩＰ）、ホスファチジルイノシトール−３，４−二リン酸及びホスファチジルイノシトール−３，４，５−三リン酸をそれぞれ生成することができる。クラスＩＩのＰＩ３Ｋは、ＰＩ及びホスファチジルイノシトール−４−リン酸をリン酸化する。クラスＩＩＩのＰＩ３ＫはＰＩのみをリン酸化することができる。がんにおいて鍵となるＰＩ３−キナーゼアイソフォームは、ｐ１１０αにおける再発性の発がん性変異によって示されるクラスＩのＰＩ３−キナーゼ、ｐ１１０αである（Samuels et al (2004) Science 304:554；米国特許５８２４４９２号；米国特許５８４６８２４号；米国特許６２７４３２７号）。他のアイソフォームが、がんにおいて重要である可能性があり、心血管系疾患及び免疫炎症性疾患においても関与している（Workman P (2004) Biochem Soc Trans 32:393-396; Patel et al (2004) Proc. Am. Assoc. of Cancer Res. (Abstract LB-247) 95th Annual Meeting, March 27-31, Orlando, Florida, USA; Ahmadi K and Waterfield MD (2004) “Phosphoinositide 3-Kinase: Function and Mechanisms" Encyclopedia of Biological Chemistry (Lennarz W J, Lane M D eds) Elsevier/Academic Press)。ｐ１１０アルファの発がん性変異は、結腸、***、脳、肝臓、卵巣、胃、肺及び頭頸部の固形腫瘍において著しい頻度で見出されている。ホルモンレレセプター陽性（ＨＲ＋）乳がん腫瘍の約３５−４０％は、ＰＩＫ３ＣＡ変異を持つ。ＰＴＥＮ異常は、神経膠芽腫、メラノーマ、前立腺、子宮内膜、卵巣、***、肺、頭頸部、肝細胞及び甲状腺のがんにおいて見出されている。

ＰＩ３キナーゼは、ｐ８５サブユニット及びｐ１１０サブユニットから成るヘテロ二量体である（Otsu et al (1991) Cell 65:91-104; Hiles et al (1992) Cell 70:419-29）。それぞれが異なる１１０ｋＤａの触媒サブユニット及び調節サブユニットから成る、ＰＩ３Ｋα（アルファ）、β（ベータ）、δ（デルタ）及びω（ガンマ）と称される４種の異なるクラスＩのＰＩ３Ｋが同定されている。３種の触媒サブユニット、即ちｐ１１０アルファ、ｐ１１０ベータ及びｐ１１０デルタはそれぞれ、同じ調節サブユニットであるｐ８５と相互作用するが、ｐ１１０ガンマは異なる調節サブユニットであるｐ１０１と相互作用する。ヒトの細胞及び組織におけるこれらのＰＩ３Ｋの各々の発現パターンは異なる。ＰＩ３Ｋアルファ、ベータ及びデルタのサブタイプの各々では、ｐ８５サブユニットは、ｐ８５サブユニットのＳＨ２ドメインと標的タンパク質において（適切な配列構成中に存在する）リン酸化チロシン残基との相互作用によってＰＩ３キナーゼを形質膜に局在化させるように作用する（Rameh et al (1995) Cell, 83:821-30; Volinia et al (1992) Oncogene, 7:789-93）。

バイオマーカー（例えば血漿中に分泌されたタンパク質）の発現レベルの測定は、例えば化学療法剤による処置を含む特定の治療に反応することができる患者及び患者集団を同定するのに有効な手段となりえる。化学療法剤が単剤として使用されるか他の薬剤と組み合わされるかにかかわらず、がん等の過剰増殖性障害を患うどの患者が化学療法剤によるどの処置に反応することができることを決定するための、及びそのような決定を患者のより有効な処置レジメンに組み込むための、より有効な手段が必要とされている。

ＰＩ３キナーゼ／Ａｋｔ／ＰＴＥＮ経路は、がん薬剤の開発のための魅力的な標的であり、なぜならば、そのような薬剤は、細胞増殖を阻害すること、がん細胞の生存性及び化学治療抵抗性を付与する間質細胞からのシグナルを抑制すること、アポトーシスの抑制を逆転させてがん細胞の細胞傷害剤に対する内因性の耐性を克服することが予期されるであろうからである。ＰＩ３Ｋキナーゼ阻害剤が報告されている（Yaguchi et al (2006) Jour. of the Nat. Cancer Inst. 98(8):545-556；米国特許７１７３０２９号；米国特許７０３７９１５号；米国特許６６０８０５６号；米国特許６６０８０５３号；米国特許６８３８４５７号；米国特許６７７０６４１号；米国特許６６５３３２０号；米国特許６４０３５８８号；米国特許７７５０００２号；国際公開第２００６／０４６０３５号；米国特許７８７２００３号；国際公開第２００７／０４２８０６号；国際公開第２００７／０４２８１０号；国際公開第２００４／０１７９５０号；米国特許出願第２００４／０９２５６１号；国際公開第２００４／００７４９１号；国際公開第２００４／００６９１６号；国際公開第２００３／０３７８８６号；米国特許出願第２００３／１４９０７４号；国際公開第２００３／０３５６１８号；国際公開第２００３／０３４９９７号；米国特許出願第２００３／１５８２１２号；欧州特許１４１７９７６号；米国特許出願第２００４／０５３９４６号；日本国特許出願第２００１２４７４７７号；日本国特許０８１７５９９０号；日本国特許０８１７６０７０号）。

ある種のチエノピリミジン化合物は、ｐ１１０アルファ結合活性、ＰＩ３キナーゼ阻害活性を有し、がん細胞の増殖を阻害する（Wallin et al (2011) Mol. Can. Ther. 10(12):2426-2436; Sutherlin et al (2011) Jour. Med. Chem. 54:7579-7587；米国特許出願第２００８／０２０７６１１号；米国特許７８４６９２９号；米国特許７７８１４３３号；米国特許出願第２００８／００７６７５８号；米国特許７８８８３５２号；米国特許出願第２００８／０２６９２１０号）。ピクチリシブ（Ｐｉｃｔｉｌｉｓｉｂ）（ｐｉｃｔｒｅｌｉｓｉｂ、ＧＤＣ−０９４１、ＲＧ−７３２１、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ Ｉｎｃ．、ＣＡＳ登録番号９５７０５４‐３０‐７）は、ＰＩ３Ｋアイソフォームの強力な多標的クラスＩ（パン）阻害剤であり、進行した固形腫瘍の治療のための第ＩＩ相臨床試験にある。ピクチリシブは、４−（２−（１Ｈ−インダゾール−４−イル）−６−（（４−（メチルスルホニル）ピペラジン−１−イル）メチル）チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−イル）モルホリンと命名されている（米国特許７７８１４３３号；米国特許７７５０００２号；Folkes et al (2008) Jour. of Med. Chem. 51(18):5522-5532；米国特許７７８１４３３号；Belvin et al, American Association for Cancer Research Annual Meeting 2008, 99th:April 15, Abstract 4004; Folkes et al, American Association for Cancer Research Annual Meeting 2008, 99th:April 14, Abstract LB-146; Friedman et al, American Association for Cancer Research Annual Meeting 2008, 99th:April 14, Abstract LB-110）。ピクチリシブは、固形腫瘍細胞株に対する特定の化学療法剤と組み合わせて、インビトロ及びインビボでの相乗的活性を示す（米国特許８２４７３９７号）。

２−（４−（２−（１−イソプロピル−３−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）−５，６−ジヒドロベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，２−ｄ］［１，４］オキサゼピン−９−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−２−メチルプロパンアミドと命名されているタセリシブ（Ｔａｓｅｌｉｓｉｂ）（ＧＤＣ−００３２、Ｒｏｃｈｅ ＲＧ７６０４、ＣＡＳ登録番号１２８２５１２−４８−４、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ Ｉｎｃ．）は強力なＰＩ３Ｋ活性を有し（国際公開第２０１１／０３６２８０号；米国特許８２４２１０４号；米国特許８３４３９５５号）、局所進行性の又は転移性の固形腫瘍を患う患者で研究されている。

細胞周期制御の喪失はがんの特徴である。サイクリン依存性キナーゼＣＤＫ ４／６は、多数のがんにおいて高度に活性であり、増殖制御の喪失をもたらす（Shapiro GI (2006) J Clin Oncol.; 24(11):1770-1783; Weinberg RA. (2013) The Biology of Cancer. New York, NY. Garland Science）。細胞周期制御因子ＣＤＫ ４／６は、増殖段階（Ｇ１）からＤＮＡ複製に関連するＳ期への細胞の進行を誘発する（Hirama T and H. Phillip Koeffler. (1995) Blood.; 86:841-854; Fry D et al (2004) Molecular Cancer Therapeutics.; 3:1427-1437）。エストロゲンレセプター陽性（ＥＲ＋）乳がん（ＢＣ）において活性が増加するＣＤＫ ４／６は、ＥＲ＋ＢＣにおけるＥＲシグナル伝達の重要な下流標的である（Finn RS et al. (2009) Breast Cancer Res.; 11(5):R77; Lamb R, et al (2013) Cell Cycle; 12(15):2384-2394）。前臨床データは、ＣＤＫ４／６及びＥＲシグナル伝達の二重阻害がＧ１期におけるＥＲ＋ＢＣ細胞株の増殖を停止させることを示唆している。

パルボシクリブ（ＰＤ−０３３２９９１、ＩＢＲＡＮＣＥ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ、Ｉｎｃ．）は、進行性（転移性）乳がんの処置のために認可された薬剤（Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．）であり、サイクリン依存性キナーゼＣＤＫ４及びＣＤＫ６の選択的阻害剤である（Finn et al (2009)Breast cancer research: BCR 11 (5):R77; Rocca et al (2014) Expert Opin Pharmacother 15 (3):407-20；米国特許７８６３２７８号；米国特許７２０８４８９号；米国特許７４５６１６８号）。パルボシクリブは、米国特許７３４５１７１号に記載されるように調製し、特徴づけることができる。．レトロゾール単独と比較したパルボシクリブとレトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｉｎｃ．）の組み合わせは、エストロゲンレセター陽性（ＥＲ＋）、ヒト上皮増殖因子レセプター２陰性（ＨＥＲ２−）局所進行性又は新たに診断された転移性乳がんを有する閉経後の女性の無増悪生存期間（ＰＦＳ）の有意かつ臨床的に有意な改善を示した（Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．、プレスリリース、２０１４年２月３日）。

インビトロ及びインビボにおけるがん細胞の増殖の阻害における相加効果又は相乗効果を、パルボシクリブ（ＰＤ−０３３２９９１、ＩＢＲＡＮＣＥ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ、Ｉｎｃ．）と組み合わせてタセリシブ（ＧＤＣ−００３２、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ Ｉｎｃ．）又はその薬学的に許容可能な塩を投与することにより実現することができるとの結論に至っている。本組み合わせ及び本方法は、がん等の過剰増殖性障害の処置において有用であることができる。

タセリシブ及びパルボシクリブは、
若しくはその立体異性体、幾何異性体、互変異性体、又はその薬学的に許容可能な塩である構造を有する。

図１ａ−ｃは、アロマターゼ（ＭＣＦ７ｘ２．３．ＡＲＯ）を発現するように操作されたＭＣＦ７乳がん細胞株に対するＧＤＣ−００３２（タセリシブ）、パルボシクリブ及びＧＤＣ−００３２＋パルボシクリブの組み合わせの効果のプロットを示す；親（図１ａ）、レトロゾール耐性、レトロゾール−Ｒ１（図１ｂ）、二重耐性、Ｌｅｔ−Ｒ１、ＧＤＣ−００３２−Ｒ（図１ｃ）。インビトロアッセイ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイ、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．）は、ＣＴＧ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標））単位で生細胞を測定した。ＧＤＣ−００３２の開始用量は、親及びレトロゾール−Ｒ１株については８０ｎＭであり、ＧＤＣ−００３２については１０μＭであった。パルボシクリブの開始用量は、３つの株全てについて１０μＭであった。レトロゾール／ＧＤＣ−００３２二重耐性細胞株は、ＧＤＣ−００３２＋パルボシクリブの組み合わせに対して感受性である。 図２は、親、レトロゾール耐性、レトロゾール−Ｒ１、二重耐性、Ｌｅｔ−Ｒ１、ＧＤＣ−００３２−Ｒ細胞株における、薬剤なし、ＧＤＣ−００３２、パルボシクリブ及びＧＤＣ−００３２＋パルボシクリブの組み合せへの２４時間の曝露後に収集した、細胞溶解物のゲル電気泳動のウェスタンブロットオートラジオグラムによる経路シグナル伝達効果を示す。細胞を、２０ｎＭのＧＤＣ−００３２（親及びレトロゾール−Ｒ１）又は２．５μＭ（Ｌｅｔ−Ｒ１．ＧＤＣ−００３２−Ｒ）及び／又は２．５μＭのパルボシクリブで２４時間処置した。 図３は、ＭＣＦ７ｘ２．３．ＡＲＯ乳がん細胞の、ＧＤＣ−００３２、レトロゾール、パルボシクリブ、及びＧＤＣ−００３２＋レトロゾール、ＧＤＣ−００３２＋パルボシクリブ、レトロゾール＋パルボシクリブの組み合わせ、及びＧＤＣ−００３２＋レトロゾール＋パルボシクリブの３つの組み合わせの用量滴定による処置によるインビトロ細胞増殖データのプロットを示す。インビトロアッセイ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイ、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．）は、ＣＴＧ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標））単位で生細胞を測定した。 図４は、ＭＣＦ７ｘ２．３．ＡＲＯ．ＬｅｔＲレトロゾール耐性乳がん細胞の、ＧＤＣ−００３２、レトロゾール、パルボシクリブ、及びＧＤＣ−００３２＋レトロゾール、ＧＤＣ−００３２＋パルボシクリブ、レトロゾール＋パルボシクリブの組み合わせ、及びＧＤＣ−００３２＋レトロゾール＋パルボシクリブの３つの組み合わせの用量滴定による処置によるインビトロ細胞増殖データのプロットを示す。インビトロアッセイ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイ、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．）は、ＣＴＧ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標））単位で生細胞を測定した。 図５は、ＭＣＦ７ｘ２．３．ＣＭＶ．ＡＲＯ乳がん細胞の、ＧＤＣ−００３２、レトロゾール、パルボシクリブ、及びＧＤＣ−００３２＋レトロゾール、ＧＤＣ−００３２＋パルボシクリブ、レトロゾール＋パルボシクリブの組み合わせ、及びＧＤＣ−００３２＋レトロゾール＋パルボシクリブの３つの組み合わせの用量滴定による処置によるインビトロ細胞増殖データのプロットを示す。インビトロアッセイ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイ、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．）は、ＣＴＧ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標））単位で生細胞を測定した。 図６は、ＭＣＦ７ｘ２．３．ＣＭＶ．ＡＲＯ．ＬｅｔＲレトロゾール耐性乳がん細胞の、ＧＤＣ−００３２、レトロゾール、パルボシクリブ、及びＧＤＣ−００３２＋レトロゾール、ＧＤＣ−００３２＋パルボシクリブ、レトロゾール＋パルボシクリブの組み合わせ、及びＧＤＣ−００３２＋レトロゾール＋パルボシクリブの３つの組み合わせの用量滴定による処置によるインビトロ細胞増殖データのプロットを示す。インビトロアッセイ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイ、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．）は、ＣＴＧ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標））単位で生細胞を測定した。 図７は、ビヒクル、７５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−０９４１（ピクチリシブ）、５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２、５０ｍｇ／ｋｇのパルボシクリブ、７５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−０９４１＋５０ｍｇ／ｋｇのパルボシクリブの組み合わせ、及び５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２＋５０ｍｇ／ｋｇのパルボシクリブの組み合わせをＰＯ（経口）投与により２１日間毎日投与された、ＭＣＦ−７乳がん異種移植片を保有する免疫不全マウスのコホートにおける２２日にわたるインビボ腫瘍体積変化のプロットを示す。 図８は、ビヒクル、５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２、５０ｍｇ／ｋｇのパルボシクリブ、及び５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２＋５０ｍｇ／ｋｇのパルボシクリブの組み合わせをＰＯ（経口）投与により２１日間毎日投与された、ホルモンレセプター陰性（ＨＲ ｎｅｇ）、ＨＥＲ２陽性（ＨＥＲ２＋）であり、かつＰＩＫ３ＣＡ変異（Ｈ１０４７Ｒ）を有するＭＤＡ−ＭＢ−４５３異種移植片を保有する免疫不全マウスのコホートにおける１６日にわたるインビボ腫瘍体積変化のプロットを示す。 図９ａ−ｄは、５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２、５０ｍｇ／ｋｇのパルボシクリブ、及び５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２＋５０ｍｇ／ｋｇのパルボシクリブの組み合わせにより処置されたマウスの、１時間及び４時間で測定された、タンパク質レベルの比を示す。図９ａは、総Ａｋｔ（ｔＡｋｔ）に対するホスホＡｋｔ（ｐＡｋｔ）の比を示す。図９ｂは、総ＰＲＡＳ４０（ｔＰＲＡＳ４０）に対するホスホＰＲＡＳ４０（ｐＰＲＡＳ４０）の比を示す。図９ｃは、総Ｓ６ＲＰ（ｔＳ６ＲＰ）に対するホスホＳ６ＲＰ（ｐＳ６ＲＰ）の比を示す。図９ｄは、総Ｒｂ（ｔＲｂ）に対するホスホＲｂ（ｐＲｂ）の比を示す。 図９ｅは、５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２、５０ｍｇ／ｋｇのパルボシクリブ、及び５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２＋５０ｍｇ／ｋｇのパルボシクリブの組み合わせにより処置され、１時間及び４時間で測定されたマウスの切断されたＰＡＲＰの濃度［ｎｇ／ｍＬ］を示す。 図１０ａ及び１０ｂは、ＭＤＡ−ＭＢ−４５３異種移植片における、薬剤なし（ビヒクル）、５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２、５０ｍｇ／ｋｇのパルボシクリブ、及びＧＤＣ−００３２＋パルボシクリブの組み合わせへの曝露の１時間後（図１０ａ）及び４時間（図１０ｂ）後に収集した細胞溶解物のゲル電気泳動のウェスタンブロットオートラジオグラムによる経路シグナル伝達効果を示す。ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、サイクリンＤ１、サイクリンＥ２、ｐ２１、及びアクチンのレベルを可視化した。

例示的な実施態様の詳細な説明
ここで、本発明のある実施態様を詳細に言及し、その例を添付の構造及び式で例証する。列挙する実施態様と併せて本発明を説明するが、このことが本発明をこれらの実施態様に限定することを意図するものではないことが理解されるだろう。それどころか、本発明は、特許請求の範囲により規定される本発明の範囲内に含まれ得る全ての代替、改変及び等価物を包含することを意図する。当業者は、本発明の実施で使用され得る、本発明に記載のものと類似又は等価の多くの方法及び材料を認識するだろう。本発明は、記載された方法及び材料に限定されるものでは決してない。援用される文献、特許及び類似の資料の内の１つ又は複数が、定義した用語、用語の使用、記載した技術等を含むがこれらに限定されない本願と異なる又は矛盾する場合、本願が優先される。

定義
単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、及び「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は本明細書及び特許請求の範囲で使用される場合、述べた特徴、整数、成分又は工程の存在を特定することを意図するが、これらは、１つ又は複数の他の特徴、整数、成分、工程又はそれらの群の存在又は追加を除外しない。

用語「処置する（ｔｒｅａｔ）」及び「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、治療的処置と予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）手段又は予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）手段との両方を指し、その目的は、がんの増殖、発症若しくは転移等の望ましくない生理学的変化又は障害を予防する又は遅延させる（緩和する）ことである。本発明の目的のために、有益な又は所望の臨床結果には、検出可能又は検出不能にかかわらず、症状の緩和、疾患の程度の縮小、病態の安定化（即ち悪化させない）、疾患の進行の遅延（ｄｅｌａｙ）又は遅延（ｓｌｏｗｉｎｇ）、病態の改善又は緩和、及び寛解（部分的又は全体的）が含まれるがこれらに限定されない。「処置」はまた、処置を受けない場合に予測される生存期間と比較して生存期間が延びることも意味する。処置を必要とするものには、既にその状態若しくは障害を患うものだけでなく、その状態若しくは障害を有する傾向があるもの、又はその状態若しくは障害を予防すべきであるものが含まれる。

語句「治療上有効な量」は、本明細書に記載の、（ｉ）特定の疾患、状態若しくは障害を処置する、（ｉｉ）特定の疾患、状態若しくは障害の１つ若しくは複数の症状を軽減する、改善する若しくは除去する、又は（ｉｉｉ）特定の疾患、状態若しくは障害の１つ若しくは複数の症状の発症を予防する若しくは遅延させる、本発明の化合物の量を意味する。がんの場合、治療上有効な量の薬剤は、がん細胞の数を減少させることができ；腫瘍サイズを縮小させることができ；がん細胞の末梢器官への浸潤を阻害すること（即ち、ある程度遅延させること、好ましくは停止させること）ができ；腫瘍転移を阻害すること（即ち、ある程度遅延させること、好ましくは停止させること）ができ；ある程度、腫瘍増殖を阻害することができ；及び／又はがんに関連する１つ若しくは複数の症状をある程度緩和することがでる。薬剤が生存するがん細胞の増殖を予防する及び／又は生存するがん細胞を死滅させることができる範囲で、薬剤は、細胞増殖抑制性及び／又は細胞傷害性であることができる。がん治療の場合、例えば疾患の進行時間（ＴＴＰ）を評価することより、及び／又は反応速度（ＲＲ）を決定することにより、有効性を測定することができる。

用語「検出」には、直接的検出及び間接的検出を含む任意の検出手段が含まれる。

用語「診断」は本明細書において、分子状態若しくは病的状態、疾患又は状態の同定又は分類を指すために使用される。例えば、「診断」は特定の種類のがんの同定、例えば肺がんの同定を指すことができる。「診断」はまた、例えば組織学的による（例えば非小細胞肺癌腫）、分子の特徴による（例えば特定の遺伝子若しくはタンパク質におけるヌクレオチド及び／若しくはアミノ酸の多様性を特徴とする肺がん）又はその両方による、特定の種類のがんの分類を指すこともできる。

用語「予後」は本明細書において、がん等の腫瘍性疾患の例えば再発、転移拡散及び薬剤耐性を含むがんに起因する死又は進行の可能性の予測を指すために使用される。

用語「予測」（及び予測する等のバリエーション）は本明細書において、患者がある薬剤又は薬剤のセットに対して有利に又は不利に反応するであろう可能性を指すために使用される。一実施態様では、予測は、これらの反応の程度に関する。別の実施態様では、予測は、処置後に、例えば特定の療法剤による処置及び／若しくは原発性腫瘍の外科的切除後に、並びに／又はがんが再発することなくある期間にわたる化学治療後に、患者が生存するであろうかどうか及び／又はその可能性に関する。任意の特定の患者に関しては、本発明の予測方法を臨床的に使用して、最も適切な処置様式を選択することにより処置の決断を行なうことができる。本発明の予測方法は、患者が、例えば所定の療法剤又は組み合わせの投与、外科的介入、化学治療等を含む所定の治療レジメン等の処置レジメンに対して有利に反応する可能性があるかどうか、又は治療レジメン後に患者の長期生存の可能性があるかどうかの予測における価値あるツールである。

特定の療法剤又は処置の選択肢に対する用語「耐性の増加」は、本発明に従って使用する場合、薬剤の標準的な用量に対する又は標準的な処置プロトコルに対する反応性の低下を意味する。

特定の療法剤又は処置の選択肢に対する用語「感受性の低下」は、本発明に従って使用する場合、薬剤の標準的な用量に対する又は標準的な処置プロトコルに対する反応性の低下を意味し、反応性の低下を薬剤の用量の増加により又は強度５の処置により（少なくとも部分的に）補うことができる。

「患者反応」を、（１）遅延若しくは完全な増殖の停止を含む、腫瘍増殖のある程度までの阻害；（２）腫瘍細胞の数の減少；（３）腫瘍サイズの縮小；（４）隣接する末梢器官及び／若しくは末梢組織への腫瘍細胞の浸潤の阻害（例えば減少、遅延若しくは完全な停止）；（５）転移の阻害（例えば減少、遅延若しくは完全な停止）；（６）腫瘍の退縮若しくは除去をもたらすことができるがもたらさなくてもよい抗腫瘍免疫反応の増強；（７）腫瘍に関連する１つ若しくは複数の症状のある程度までの軽減；（８）処置後の生存期間の長さの増加；並びに／又は（９）処置後の所定の時点での死亡率の減少を含むがこれらに限定されない患者に対する利益を示す任意のエンドポイントを使用して評価することができる。

「バイオマーカー」は、正常な生物学的過程、発病過程又は治療介入に対する薬理学的反応の指標として客観的に測定される及び評価されることを特徴とする。バイオマーカーは、幾つかの種類、即ち予測的、予後的又は薬力学的（ＰＤ）であることができる。予測的バイオマーカーにより、どの患者が特定の治療に反応する又は該治療の利益を受ける可能性があることが予測される。予後的バイオマーカーにより、患者の疾患の起こりうる経過が予測され、処置が導かれ得る。薬力学的バイオマーカーにより、薬剤活性が確認され、用量及び投与スケジュールの最適化が可能になる。「バイオマーカー変異」は、タンパク質バイオマーカーの野生型形態における変異である。

ＰＩＫ３ＣＡ変異又はＰＩＫ３ＣＡ変異のセットを含む、バイオマーカーの状態の「変化」又は「モジュレーション」は、それがインビトロ又はインビボで起こる場合、（１）生体試料のゲノムＤＮＡ又は逆転写ＰＣＲ産物をシークエンシングすること（これにより１種又は複数種の変異が検出される）；（２）メッセージレベルの定量化により又はコピー数の評価により遺伝子発現レベルを評価すること；及び（３）免疫組織化学、免疫細胞化学、ＥＬＩＳＡ、又は質量分析によるタンパク質の分析（これによりタンパク質の分解、安定化、又はリン酸化若しくはユビキチン化等の翻訳後修飾が検出される）を含む、薬力学（ＰＤ）の確立に一般に用いられる１つ又は複数の方法を使用する生体試料の分析により検出される。

用語「がん」及び「がん性」は、典型的には未制御の細胞増殖を特徴とする哺乳動物における生理学的状態を指す、又は説明する。「腫瘍」は１つ又は複数のがん細胞を含む。がんの例には、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病又はリンパ性悪性疾患が含まれるがこれらに限定されない。そのようながんのより具体的な例には、扁平上皮細胞がん（例えば上皮扁平上皮細胞がん）、小細胞肺がん、非小細胞肺がん（「ＮＳＣＬＣ」）、肺腺癌及び肺の扁平上皮癌腫を含む肺がん、腹膜がん、肝細胞がん、消化管がんを含む胃がん（gastric or stomach cancer）、膵臓がん、神経膠芽腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、肝細胞癌、乳がん、結腸がん、直腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜癌又は子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓がん又は腎がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝癌腫、肛門癌腫、陰茎癌腫、並びに頭頸部がんが含まれる。胃がん（Gastric cancer）は本明細書で使用する場合、胃がん（stomach cancer）を含み、胃の任意の部分で発症する可能性があり、並びに胃の全体にわたって及び他の器官に、特に食道、肺、リンパ節及び肝臓に拡散する可能性がある。

用語「造血器悪性腫瘍」は、白血球、リンパ球、ナチュラルキラー細胞、形質細胞、並びに好中球及び単球等の骨髄性細胞等の細胞を含む造血中に生じるがん又は過剰増殖性障害を指す。造血器悪性腫瘍には、非ホジキンリンパ腫、びまん性大型造血リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、慢性のリンパ性白血病、多発性骨髄腫、急性の骨髄性白血病、及び骨髄球性白血病が含まれる。リンパ性（又は「リンパ芽球性」）白血病には、急性のリンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）及び慢性のリンパ性白血病（ＣＬＬ）が含まれる。骨髄性（又は「骨髄球性」若しくは「非リンパ性」）白血病には、急性の骨髄性（又は骨髄芽球性）白血病（ＡＭＬ）及び慢性の骨髄性白血病（ＣＭＬ）が含まれる。

「化学療法剤」は、作用機序にかかわらず、がんの処置に有用である生物学的な（大分子の）又は化学的な（小分子の）化合物である。

用語「哺乳動物」にはヒト、マウス、ラット、モルモット、サル、イヌ、ネコ、ウマ、雌ウシ、ブタ、及びヒツジが含まれるがこれらに限定されない。

用語「添付文書」は、治療用製品の市販のパッケージに習慣的に含まれる説明書を指すために使用され、そのような治療用製品の使用に関する指示、用法、投薬量、投与法、禁忌及び／又は警告についての情報が含有される。

用語「薬学的に許容可能な塩」は本明細書で使用する場合、本発明の化合物の薬学的に許容可能な有機塩又は無機塩を指す。例示的な塩には、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩「メシレート」、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩及びパモ酸塩（即ち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエ酸塩））が含まれるがこれらに限定されない。薬学的に許容可能な塩は、酢酸イオン、コハク酸イオン又は他の対イオン等の別の分子の介在を含むことができる。対イオンは、親化合物上の電荷を安定化させる任意の有機部分又は無機部分であることができる。更に、薬学的に許容可能な塩は、その構造中に複数の荷電原子を有することができる。複数の荷電原子が薬学的に許容可能な塩の一部である場合、薬学的に許容可能な塩は複数の対イオンを有することができる。従って、薬学的に許容可能な塩は、１つ若しくは複数の荷電原子及び／又は１つ若しくは複数の対イオンを有することができる。

所望の薬学的に許容可能な塩を、当分野で利用可能な任意の適切な方法により調製することができる。例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、メタンスルホン酸、リン酸等の無機酸による、又は酢酸、マレイン酸、コハク酸、マンデル酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、ピラノシジル酸、例えばグルクロン酸若しくはガラクツロン酸、アルファヒドロキシ酸、例えばクエン酸若しくは酒石酸、アミノ酸、例えばアスパラギン酸若しくはグルタミン酸、芳香族酸、例えば安息香酸若しくはケイ皮酸、スルホン酸、例えばｐ−トルエンスルホン酸若しくはエタンスルホン酸等の有機酸による、遊離塩基の処理。塩基性の薬学的化合物からの薬学的に有用な又は許容可能な塩の形成に適切であると一般に考えられている酸が、例えば P. Stahl et al, Camille G. (eds.) Handbook of Pharmaceutical Salts. Properties, Selection and Use. (2002) Zurich: Wiley-VCH; S. Berge et al, Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1) 1 19; P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33 201 217; Anderson et al, The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New York; Remington's Pharmaceutical Sciences, 18^th ed., (1995) Mack Publishing Co., Easton PAにより論じられており、及びThe Orange Book (Food & Drug Administration, Washington, D.C. ウェブサイト上）において論じられている。これらの開示は、出典明示により本明細書に援用される。

語句「薬学的に許容可能な」は、物質又は組成物が、製剤を含む他の成分及び／又は該成分により処置される哺乳動物と化学的に及び／又は毒性学的に適合する必要があることを示す。

用語「相乗的」は本明細書で使用する場合、２種以上の単剤の相加効果よりも有効である治療用組み合わせを指す。ＧＤＣ−００３２又はその薬学的に許容可能な塩である化合物と１種又は複数種の化学療法剤との間の相乗的相互作用の決定は、本明細書に記載したアッセイから得た結果に基づくことができる。これらのアッセイの結果をＣｈｏｕ及びＴａｌａｌｙ組み合わせ方法及びＣａｌｃｕＳｙｎソフトウェアによる用量効果分析を使用して分析し、組み合わせ指数を得ることができる（Chou and Talalay, 1984, Adv. Enzyme Regul. 22:27-55）。本発明により提供される組み合わせが幾つかのアッセイシステムにおいて評価されており、例えば、「New Avenues in Developmental Cancer Chemotherapy」、Academic Press,1987,Chapter2においてＣｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙにより説明されているように、抗がん剤間の相乗作用、相加性、及び拮抗作用の定量化のための標準的なプログラムを利用してデータを分析することができる。０．８未満の組み合わせ指数値は相乗作用を示し、１．２よりも高い値は拮抗作用を示し、０．８から１．２の値は相加効果を示す。組み合わせ治療は「相乗作用」をもたらすことができ、及び「相乗的」であることを証明することができ、即ち、その効果は、一緒に使用する活性成分が化合物の別々の使用により得られる結果の合計よりも大きい場合に実現される。相乗効果は、活性成分が（１）共製剤化されて投与される、若しくは組み合わされて同時に送達される単位投薬製剤である場合に；（２）別々の製剤として交互に若しくは並行して送達される場合に；又は（３）幾つかの他のレジメンによって、実現され得る。交互の治療において送達される場合、相乗効果は、化合物が例えば別々のシリンジにおける異なる注射剤、又は別々の丸剤若しくは錠剤により順次に投与される又は送達される場合に実現され得る。一般に、交互の治療中に有効投薬量の各活性成分は、順次に、即ち連続して投与されるが、組み合わせ治療では、有効投薬量の２種以上の活性成分が一緒に投与される。組み合わせ効果を、ＢＬＩＳＳ独立モデル及び最高単剤（ＨＳＡ）モデルの両方を用いて評価した（Lehar et al. 2007, Molecular Systems Biology 3:80）。ＢＬＩＳＳスコアは単剤からの増強の程度を定量化し、ＢＬＩＳＳスコア＞０は、単純な相加よりも大きいことを示唆する。ＨＳＡスコア＞０は、対応する濃度で単剤応答の最大値よりも大きい組み合わせ効果を示唆する。

「ＥＬＩＳＡ」（酵素連結免疫吸着アッセイ）は、液体試料又はウェット試料中に存在する物質を検出するために不均一固相酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）の１つのサブタイプを使用する一般的なフォーマットの「ウェットラボ」タイプの分析的生化学アッセイである（Engvall E, Perlman P (1971). "Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Quantitative assay of immunoglobulin G". Immunochemistry 8 (9): 871-4; Van Weemen BK, Schuurs AH (1971). "Immunoassay using antigen-enzyme conjugates". FEBS Letters 15 (3): 232-236）。ＥＬＩＳＡは、厳密な「免疫」アッセイの代わりに他の形態のリガンド結合アッセイを実施することができるが、この方法の一般的な使用及び開発の歴史に起因して、その名称には元々の「免疫」が付されている。本技術には、適切に定量化され得るシグナルを生成するために、酵素に特異的に結合して該酵素を使用することができる検出試薬と共に、固相上に固定化され得る任意の結合試薬が本質的に必要である。洗浄の間では、リガンドとその特異的結合対応物のみが抗原−抗体相互作用により固相に特異的に結合し続ける又は「免疫吸着」し続けるが、非特異的な又は非結合の成分は洗い流される。同じ反応ウェル（例えばキュベット）を洗浄後に再利用することができる他の分光光度的なウェットラボアッセイフォーマットとは異なり、ＥＬＩＳＡプレートは該プレートの一部である固相上に免疫吸着した反応生成物を有し、そのため、ＥＬＩＳＡプレートを容易に再利用することができない。ＥＬＩＳＡの実施には、特定の抗原に対する特異性を有する少なくとも１種の抗体が必要である。未知の量の抗原を有する試料を、非特異的に（表面への吸着により）又は特異的に（「サンドイッチ」ＥＬＩＳＡにおいて、同じ抗原に特異的な別の抗体による捕捉により）固相支持体（通常はポリスチレンマイクロタイタープレート）上に固定化する。抗原を固定化した後、検出抗体を添加して抗原との複合体を形成する。検出抗体を酵素に対して共有結合的に連結させることができ、又はバイオコンジュゲートを介して酵素に連結される二次抗体で検出抗体自体を検出することができる。各工程の間にプレートを典型的には中性洗剤溶液で洗浄し、特異的に結合していない任意のタンパク質又は抗体を除去する。最終洗浄工程後に、酵素基質を添加することによりプレートを現像して可視的シグナルを作成する、該可視的シグナルは試料中の抗原の量を示す。

「免疫組織化学」（ＩＨＣ）は、生体組織中において抗原に特異的に結合する抗体の原理を利用することによる、組織切片の細胞における抗原（例えばタンパク質）の検出方法を指す。免疫組織化学的染色が、がん性腫瘍で見出されるもの等の異常細胞の診断で広く使用される。特異的分子マーカーは、増殖又は細胞死（アポトーシス）等の特定の細胞的事象を特徴とする。ＩＨＣはまた、バイオマーカー及び生体組織の異なる部位で差次的に発現されるタンパク質の分布及び局在化を理解するために広く使用される。抗体−抗原相互作用の可視化を様々な方法で実現することができる。最も一般的な例では、抗体をペルオキシダーゼ等の酵素にコンジュゲートさせ、このことにより発色反応を触媒することができる（免疫組織化学的染色を参照）。あるいは、抗体に、フルオレセイン又はローダミン等の蛍光色素分子を標識付けることもできる（免疫蛍光を参照）。

「免疫細胞化学」（ＩＣＣ）は、特異的エピトープにより細胞における特異的なペプチド抗原又はタンパク質抗原を標的とする抗体を使用する一般的な実験室技術である。特異的なペプチド抗原又はタンパク質抗原が結合した抗体を、次に、幾つかの異なる方法を使用して検出することができる。ＩＣＣにより、特定の試料における細胞が問題の抗原を発現するかどかを評価することができる。免疫陽性シグナルが見られる場合、ＩＣＣにより、どの細胞内区画が抗原を発現しているかも決定される。

タセリシブ
タセリシブ、ＧＤＣ−００３２、Ｒｏｃｈｅ ＲＧ７６０４、及びＧｅｎｅｎｔｅｃｈ Ｉｎｃ．、（ＣＡＳ登録番号１２８２５１２−４８−４）として知られる化合物は、ＩＵＰＡＣ名：２−（４−（２−（１−イソプロピル−３−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）−５，６−ジヒドロベンゾ［ｆ］イミダゾ［１，２−ｄ］［１，４］オキサゼピン−９−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−２−メチルプロパンアミドを有し、立体異性体、幾何異性体、互変異性体及びそれらの薬学的に許容可能な塩を含む構造：
を有する。

タセリシブは、国際公開第２０１１／０３６２８０号、米国特許第８２４２１０４号及び米国特許第８３４３９５５号に記載されているように調製及び特徴付けることができる。

パルボシクリブ
パルボシクリブ（ＰＤ−０３３２９９１、ＩＢＲＡＮＣＥ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ、Ｉｎｃ．、ＣＡＳ登録番号５７１１９０−３０−２）として知られる化合物は、ＩＵＰＡＣ名：６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イルアミノ）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オンを有し、構造
を有する。

ＩＢＲＡＮＣＥ（登録商標）は乳がんの処置のために承認されている。パルボシクリブは、サイクリン依存性キナーゼＣＤＫ４及びＣＤＫ６の選択的阻害剤である（Finn et al (2009)Breast cancer research:BCR 11 (5):R77; Rocca et al (2014) Expert Opin Pharmacother 15 (3):407-20；米国特許６９３６６１２号；米国特許７８６３２７８号；米国特許７２０８４８９号；米国特許７４５６１６８号）。パルボシクリブは、米国特許７３４５１７１号に記載されるように調製し、特徴づけることができる。

タセリシブとパルボシクリブとの組み合わせのインビトロ活性
タセリシブとパルボシクリブとの治療用組み合わせを、親及び耐性細胞株モデルにおいて試験した（図１ａ−ｃ）。単剤処置と比較して、各細胞株モデルにおいてタセリシブとパルボシシブの組み合わせにより生存率の減少が観察された。

アロマターゼ発現ＭＣＦ７乳がん細胞（ＭＣＦ７．ＡＲＯ）は、培養中にアンドロステンジオンをエストロゲンに変換する。ほとんどのがん細胞株はアロマターゼを発現しないが、ＭＣＦ７．ＡＲＯは、ＰＩ３Ｋ阻害剤及び他の治療と組み合わせて、アロマターゼ阻害剤を研究するモデルとして使用することができる。図１ａ、１ｂ及び１ｃは、ＭＣＦ７．ＡＲＯ細胞における単剤（タセリシブ及びパルボシクリブ）及び組み合わせ効果を示す。ＭＣＦ７．ＡＲＯ親（図１ａ）及びレトロゾール耐性ＭＣＦ７ ＬｅｔＲ（図１ｂ）細胞株における単剤のインビトロ細胞増殖データを、タセリシブ及びパルボシクリブを用いて収集した。ＬｅｔＲ細胞は、パルボシクリブに対してより耐性であり、タセリシブに対して同様に感受性である。

二重耐性細胞は、パルボシクリブによるＣＤＫ４／６阻害と組み合わせて、タセリシブに対して依然として感受性である。タセリシブは、二重耐性のＭＣＦ７−ＡＲＯ細胞において、パルボシクリブと良好に併用される（図１ｃ）。単剤としてのタセリシブ及びパルボシクリブの生存率への影響がそれぞれ示されている。２つの薬剤の組み合わせ効果が示されている。タセリシブの開始用量は、親及びレトロゾール−Ｒ１株については８０ｎＭであり、タセリシブについては１０μＭであった。パルボシクリブの開始用量は、３つの株全てについて１０μＭであった（図１ａ−ｃ）。２０ｎＭのタセリシブ（親及びレトロゾール−Ｒ１）又は２．５μＭ（Ｌｅｔ−Ｒ１．タセリシブ−Ｒ）で２４時間処置した試料からのイムノブロット。（Ｄ）ＰＩ３Ｋ及びＣＤＫ４／６の組み合わせ阻害により、増殖停止の増加が観察される。２０ｎＭのタセリシブ（親及びレトロゾール−Ｒ１）又は２．５μＭ（Ｌｅｔ−Ｒ１−００３２−Ｒ）及び／又は２．５μＭのパルボシクリブで２４時間処置した試料からのイムノブロット。全ての生存率データについて点線は、薬剤処置の開始時のＣＴＧカウントを示している。エラーバーは、平均値周辺の標準偏差を示す。

タセリシブ（ＧＤＣ−００３２）、パルボシクリブ、及びタセリシブ＋パルボシクリブの組み合わせで２４時間処置した後、バイオマーカーのサイクリンＤ１、サイクリンＥ、リン酸化Ｒｂ（Ｓｅｒ８０７／８１１）及び切断されたＰＡＲＰを評価した。切断されたＰＡＲＰは全てのタセリシブ処置で検出された。タセリシブとパルボシクリブとの組み合わせによりサイクリンＥの減少が検出された。８０７及び８１１を含む複数の部位でのＲｂの過リン酸化は、細胞周期に入り、増殖している細胞の指標である。レトロゾール耐性（レトロゾール−Ｒ１）及びレトロゾール／タセリシブ二重耐性細胞（ＬｅｔＲ１．ＧＤＣ−００３２−Ｒ）の両方が、パルボシクリブとタセリシブの組み合わせ薬剤処置により減少したＲｂＳｅｒ８０７／８１１のリン酸化を増加させた。この分子メカニズムは、ＭＣＦ７及びＴ４７Ｄ親細胞を用いた、追加のＰＩ３Ｋ及びＣＤＫ４／６阻害剤を使用した最近の報告と一致する（Vora SR, et al (2014) Cancer cell, 26(1):136-149）。予想どおり、ＰＩ３Ｋ経路シグナル伝達の減少は、タセリシブ処置で観察された。

図３は、ＭＣＦ７ｘ２．３．ＡＲＯアロマターゼ発現乳がん細胞の、ＧＤＣ−００３２、レトロゾール、パルボシクリブ、及びＧＤＣ−００３２＋レトロゾール、ＧＤＣ−００３２＋パルボシクリブ、レトロゾール＋パルボシクリブの組み合わせ、及びＧＤＣ−００３２＋レトロゾール＋パルボシクリブの３つの組み合わせの用量滴定による処置によるインビトロ細胞増殖データのプロットを示す。細胞生存率の最大の減少は、ＧＤＣ−００３２＋レトロゾールの組み合わせに由来するようである。同様の結果は、３つの組み合わせにより得られる。

図４は、ＭＣＦ７ｘ２．３．ＡＲＯ．ＬｅｔＲレトロゾール耐性乳がん細胞の、ＧＤＣ−００３２、レトロゾール、パルボシクリブ、及びＧＤＣ−００３２＋レトロゾール、ＧＤＣ−００３２＋パルボシクリブ、レトロゾール＋パルボシクリブの組み合わせ、及びＧＤＣ−００３２＋レトロゾール＋パルボシクリブの３つの組み合わせの用量滴定による処置によるインビトロ細胞増殖データのプロットを示す。このレトロゾール耐性株においては、ＧＤＣ−００３２には効力が残っている。ＧＤＣ−００３２を含む任意の組み合わせは、ＧＤＣ−００３２単独と同様の効力を有する。

図５は、ＭＣＦ７ｘ２．３．ＣＭＶ．ＡＲＯ乳がん細胞の、ＧＤＣ−００３２、レトロゾール、パルボシクリブ、及びＧＤＣ−００３２＋レトロゾール、ＧＤＣ−００３２＋パルボシクリブ、レトロゾール＋パルボシクリブの組み合わせ、及びＧＤＣ−００３２＋レトロゾール＋パルボシクリブの３つの組み合わせの用量滴定による処置によるインビトロ細胞増殖データのプロットを示す。ＧＤＣ−００３２＋レトロゾールの組み合わせについて、細胞生存率の減少に対する最大の寄与が観察される。同様の結果は、この株においては３つの組み合わせにより得られる。

図６は、ＭＣＦ７ｘ２．３．ＣＭＶ．ＡＲＯ．ＬｅｔＲレトロゾール耐性乳がん細胞の、ＧＤＣ−００３２、レトロゾール、パルボシクリブ、及びＧＤＣ−００３２＋レトロゾール、ＧＤＣ−００３２＋パルボシクリブ、レトロゾール＋パルボシクリブの組み合わせ、及びＧＤＣ−００３２＋レトロゾール＋パルボシクリブの３つの組み合わせの用量滴定による処置によるインビトロ細胞増殖データのプロットを示す。このレトロゾール耐性株においては、ＧＤＣ−００３２には効力が残っている。ＧＤＣ−００３２を含む任意の組み合わせは、ＧＤＣ−００３２単独と同様の効力を有する。

これらのインビトロの結果は、ＧＤＣ−００３２単独又はパルボシクリブと組み合わせた選択的ＰＩ３Ｋ阻害が、レトロゾール処置などの単剤内分泌療法に対して感受性又は難治性であるＨＲ＋腫瘍において有効である可能性が高いことを示唆している。

タセリシブとパルボシクリブとの組み合わせのインビボ異種移植片活性
ＧＤＣ−００３２は、ＰＩ３Ｋ経路シグナル伝達を強力に阻害し、アロマターゼ発現細胞株においてレトロゾールと良好に併用される。レトロゾール耐性のモデルでは、ＰＩ３Ｋ経路は上昇したが、ＧＤＣ−００３２によって減少する可能性があることを見出した。更に、レトロゾール耐性のこれらの条件下で、我々は細胞がＧＤＣ−００３２に同等に感受性であることを見出した。また、レトロゾール耐性細胞を、ＧＤＣ−００３２の用量漸増とともに培養し、ＰＩ３Ｋ／内分泌療法に対する二重耐性のモデルを導いた。これらの条件下で、細胞は、ＣＤＫ４／６阻害剤又はドセタキセルと組み合わせて、ＧＤＣ−００３２に対して同等に感受性を維持した。まとめると、我々は、感受性及び難治性ＥＲ＋乳がん細胞におけるＰＩ３Ｋ及び内分泌療法の使用を評価するためのモデルを開発し、この腫瘍適応におけるクラスＩ ＰＩ３Ｋの新規阻害剤の活性を実証する。

図７及び表１は、ＭＣＦ−７乳がん異種移植片を有するマウスにおける、単剤タセリシブ、単剤パルボシクリブ、タセリシブとパルボシクリブとの組み合わせ、及び陰性対照ビヒクルのインビボ腫瘍有効性試験を示す。

図７は、ビヒクル、７５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−０９４１、５ｍｇ／ｋｇのタセリシブ（ＧＤＣ−００３２）、５０ｍｇ／ｋｇのパルボシクリブ、７５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−０９４１（ピクチリシブ）＋５０ｍｇ／ｋｇのパルボシクリブの組み合わせ、及び５ｍｇ／ｋｇのタセリシブ（ＧＤＣ−００３２）＋５０ｍｇ／ｋｇのパルボシクリブの組み合わせをＰＯ（経口）投与により２１日間毎日投与された、ＭＣＦ−７乳がん異種移植片を保有する免疫不全マウスのコホートにおける２２日にわたるインビボ腫瘍体積変化のプロットを示す。

図８は、ビヒクル、５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２、５０ｍｇ／ｋｇのパルボシクリブ、及び５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２＋５０ｍｇ／ｋｇのパルボシクリブの組み合わせをＰＯ（経口）投与により２１日間毎日投与された、ホルモンレセプター陰性（ＨＲ ｎｅｇ）、ＨＥＲ２陽性（ＨＥＲ２＋）であり、かつＰＩＫ３ＣＡ変異（Ｈ１０４７Ｒ）を有するＭＤＡ−ＭＢ−４５３異種移植片を保有する免疫不全マウスのコホートにおける１６日にわたるインビボ腫瘍体積変化のプロットを示す。

図９ａ−ｄは、５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２、５０ｍｇ／ｋｇのパルボシクリブ、及び５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２＋５０ｍｇ／ｋｇのパルボシクリブの組み合わせにより処置されたマウスの、１時間及び４時間で測定された、タンパク質レベルの比を示す。図９ａは、総Ａｋｔ（ｔＡｋｔ）に対するホスホＡｋｔ（ｐＡｋｔ）の比を示す。図９ｂは、総ＰＲＡＳ４０（ｔＰＲＡＳ４０）に対するホスホＰＲＡＳ４０（ｐＰＲＡＳ４０）の比を示す。図９ｃは、総Ｓ６ＲＰ（ｔＳ６ＲＰ）に対するホスホＳ６ＲＰ（ｐＳ６ＲＰ）の比を示す。図９ｄは、総Ｒｂ（ｔＲｂ）に対するホスホＲｂ（ｐＲｂ）の比を示す。

図９ｅは、５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２、５０ｍｇ／ｋｇのパルボシクリブ、及び５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２＋５０ｍｇ／ｋｇのパルボシクリブの組み合わせにより処置され、１時間及び４時間で測定されたマウスの切断されたＰＡＲＰの濃度［ｎｇ／ｍＬ］を示す。

図１０ａ及び１０ｂは、ＭＤＡ−ＭＢ−４５３異種移植片における、薬剤なし（ビヒクル）、５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−００３２、５０ｍｇ／ｋｇのパルボシクリブ、及びＧＤＣ−００３２＋パルボシクリブの組み合わせへの曝露の１時間後（図１０ａ）及び４時間（図１０ｂ）後に収集した細胞溶解物のゲル電気泳動のウェスタンブロットオートラジオグラムによる経路シグナル伝達効果を示す。ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、サイクリンＤ１、サイクリンＥ２、ｐ２１、及びアクチンのレベルを可視化した。

ＧＤＣ−００３２（タセリシブ）とパルボシクリブとの組み合わせは、各薬剤単独と比較した場合、ＭＤＡ−ＭＢ−４５３ ＨＲ−／ＨＥＲ２＋異種移植モデルにおいて、増加した腫瘍増殖阻害及び腫瘍退縮をもたらす。注目すべきことに、ＧＤＣ−００３２と組み合わせた場合のパルボシクリブの増強された有効性は、ＰＩＫ３ＣＡ（ｐ１１０ａ）におけるＨ１０４７ＲホットスポットＰＩ３Ｋ変異を有する、図８に示すＭＤＡ−ＭＢ−４５３腫瘍モデルにある。ＧＤＣ−００３２は、ＰＩＫ３ＣＡ変異及びＨＥＲ２過剰発現の結果としての経路活性化の増加により上昇した、ＭＤＡ−ＭＢ−４５３腫瘍におけるｐＡｋｔ（図９ａ）、ｐＰＲＡＳ４０（図９ｂ）及びｐＳ６ＲＰ（図９ｃ）などのＰＩ３Ｋ経路マーカーのレベルを効果的に減少させた。後者の薬力学的効果は、ＧＤＣ−００３２が薬理学的に活性な用量で試験されたことを裏付けている。ＧＤＣ−００３２及びパルボシクリブの両方が、ＭＤＡ−ＭＢ−４５３腫瘍におけるｐＲＢのレベルを減少させ（図９ｄ）、それらの作用機序に基づいて予測されるように、両方の薬剤が細胞周期のＧ１の細胞を遮断したことを実証しており、薬理学的に活性な用量でパルボシリブも試験されたことが確認された。最後に、特有のＰＩＫ３ＣＡ変異選択的作用機序に基づいて、ＧＤＣ−００３２は、ＭＤＡ−ＭＢ−４５３腫瘍における細胞死（増加した切断されたＰＡＲＰに基づく）を誘導し（図９ｅ）、このモデルが増殖のためのＰＩＫ３ＣＡ変異に依存し、ＰＩ３Ｋ阻害に感受性であることが確認された。

薬学的組成物及び製剤
本発明の薬学的組成物又は製剤は、タセリシブとパルボシクリブとの治療用組み合わせ、及び１つ又は複数の薬学的に許容可能な担体、滑剤、希釈剤又は賦形剤との組み合わせを含む。

タセリシブ及びパルボシクリブは、例えば水、エタノール等の薬学的に許容可能な溶媒との非溶媒和形態及び溶媒和形態で存在することができ、本発明が溶媒和形態及び非溶媒和形態の両方を包含することが意図される。

本発明の化合物はまた様々な互変異性体形態で存在することもでき、そのような形態全てが本発明の範囲内に包含される。用語「互変異性体」又は「互変異性体形態」は、低いエネルギー障壁を介して相互転換可能である、エネルギーが異なる構造異性体を指す。例えば、プロトン互変異性体（プロトン性互変異性体としても知られている）には、プロトンの移動による相互変換、例えばケト−エノール異性化及びイミン−エナミン異性化が含まれる。原子価互変異性体には、結合電子の内の幾つかの再編成による相互変換が含まれる。

薬学的組成物は、ＧＤＣ−００３２及び本明細書に記載したタセリシブとパルボシクリブとの治療用組み合わせを含む、複数種（例えば２種）の薬学的に活性な薬剤と、任意の薬学的に不活性な賦形剤、希釈剤、担体又は滑剤を含むバルク組成物及び個々の投薬単位の両方を包含する。バルク組成物及びそれぞれ個々の投薬単位は、定量の前述した薬学的に活性な薬剤を含有することができる。バルク組成物とは、個々の投薬単位にまだ形成されていない物質のことである。例示的な投薬単位は、例えば錠剤、丸薬、カプセル剤等の経口投薬単位である。同様に、薬学的組成物を投与することによる患者の処置方法もバルク組成物及び個々の投薬単位の投与を包含することが意図される。

薬学的組成物はまた、本明細書に列挙されたものと同一であるが１種又は複数種の原子が天然で通常見出される原子質量又は質量数とは異なる原子質量又は質量数を有する原子に置き換えられている、タセリシブ及びパルボシクリブの同位体標識形態も包含する。規定した任意の特定の原子又は元素の全ての同位体が本発明の化合物及びその用途の範囲内であると考えられる。本発明の化合物に組み入れることができる例示的な同位体には、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、塩素及びヨウ素の同位体、例えば^２Ｈ、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１３Ｎ、^１５Ｎ、^１５Ｏ、^１７Ｏ、^１８Ｏ、^３２Ｐ、^３３Ｐ、^３５Ｓ、^１８Ｆ、^３６Ｃｌ、^１２３Ｉ及び^１２５Ｉが含まれる。本発明のある種の同位体標識化合物（例えば^３Ｈ及び^１４Ｃで標識したもの）は、化合物及び／又は基質の組織分布アッセイにおいて有用である。トリチウム標識（^３Ｈ）同位体及び炭素−１４（^１４Ｃ）同位体は、それらの調製の容易さ及び検出可能性のために有用である。更に、重水素（２Ｈ）等のより重い同位体との置換により、より大きな代謝安定性から生じるある種の治療上の利点（例えば、インビボでの半減期の増加又は必要な投薬量の減少）をもたらすことができ、従って、該置換は、ある環境下では好ましいものであることができる。^１５Ｏ、^１３Ｎ、^１１Ｃ、及び^１８Ｆ等の陽電子放出同位体は、基質レセプター占有率を調べるための陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）研究に有用である。本発明の同位体標識化合物は一般的に、非同位体標識試薬の代わりに同位体標識試薬を用いることにより、以下の本明細書の実施例で開示したものと類似する手順に従って調製され得る。

タセリシブ及びパルボシクリブは、ヒトを含む哺乳動物における過剰増殖性障害の治療的処置（予防的処置を含む）のための治療用組み合わせで使用するために、標準的な薬務に従って製剤化される。本発明は、１種又は複数種の薬学的に許容可能な担体、滑剤、希釈剤、添加剤又は賦形剤と共にタセリシブ及びパルボシクリブを含む薬学的組成物を提供する。

適切な担体、希釈剤、添加剤及び賦形剤は当業者に公知であり、これらには、炭水化物、ロウ、水溶性ポリマー及び／又は膨潤性ポリマー、親水性の又は疎水性の物質、ゼラチン、油、溶媒、水等の物質が含まれる。使用される具体的な担体、希釈剤又は賦形剤は、本発明の化合物が適用される手段及び目的に依存するだろう。溶媒は一般的に、哺乳動物への投与に安全（ＧＲＡＳ）であると当業者に認識されている溶媒に基づいて選択される。一般的に、安全な溶媒は、水等の無毒な水溶性溶媒、及び水に溶解する又は混和する他の無毒な溶媒である。適切な水性溶媒には、水、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（例えばＰＥＧ４００、ＰＥＧ３００）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、クレモフォール（例えばＣＲＥＭＯＰＨＯＲ ＥＬ（登録商標）、ＢＡＳＦ）及びこれらの混合物が含まれる。製剤はまた、１種又は複数種の緩衝剤、安定化剤、表面活性剤、湿潤剤、潤滑剤、乳化剤、懸濁剤、防腐剤、抗酸化剤、不透明化剤、滑剤、加工助剤、着色料、甘味料、芳香剤、香料、及び薬剤（即ち、本発明の化合物又はその薬学的組成物）の美しい見栄えをもたらすための又は薬学的製品（即ち医薬）の製造を補助するための他の既知の添加剤を含むこともできる。

製剤は、従来の溶解手段及び混合手段を使用して調製され得る。例えば、バルク薬剤物質（即ち、本発明の化合物又は該化合物の安定化形態（例えば、シクロデキストリン誘導体又は他の既知の錯化剤との錯体））を、上述した賦形剤の内の１種又は複数種の存在下で適切な溶媒に溶解させる。本発明の化合物は、典型的には薬学的投薬形態に製剤化され、薬剤の投薬量の制御が容易となり、処方されたレジメンを患者が順守することが可能となる。

適用される薬学的組成物（又は製剤）を、薬剤の投与に使用される方法に応じて様々な方法で包装することができる。一般的に、流通用の物品は、適切な形態の薬学的製剤が蓄積されている容器を含む。適切な容器は当業者に公知であり、該容器には瓶（プラスチック及びガラス）、小袋、アンプル、プラスチックバッグ、金属シリンダ等の物質が含まれる。容器はまた、包装の内容物への軽率なアクセスを防止するために、不正開封防止集合体を含むこともできる。加えて、容器には、容器の内容物を説明するラベルが付着されている。ラベルはまた、適切な警告を含むこともできる。

本発明の化合物の薬学的製剤を、様々な経路及びタイプの投与用に調製することができる。例えば、所望の程度の純度を有するタセリシブ及びパルボシクリブを、凍結乾燥製剤、粉砕粉末又は水溶液の形態で、薬学的に許容可能な希釈剤、担体、賦形剤又は安定化剤と任意選択的に混合することができる（Remington's Pharmaceutical Sciences (1995) 18th edition, Mack Publ. Co., Easton, PA）。製剤化を、生理学的に許容可能な担体、即ち用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに非毒性である担体と適切なｐＨで、及び所望の程度の純度で、室温にて混合することにより行なうことができる。製剤のｐＨは特定の用途及び化合物の濃度に主に依存するが、約３から約８の範囲であることができる。

薬学的製剤は、好ましくは無菌である。特に、インビボ投与に使用される製剤は無菌でなければならない。そのような無菌化は、無菌ろ過膜を通すろ過により容易に達成される。

薬学的製剤を通常、固形組成物、凍結乾燥製剤又は水溶液として保存することができる。

本発明の薬学的製剤を、良好な医療行為と一致した様式で、即ち投与の量、濃度、スケジュール、経過、ビヒクル及び経路で投薬する及び投与することができる。これに関連して考慮される因子には、処置される具体的な障害、処置される具体的な哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール及び医師に既知の他の因子が含まれる。そのような考慮が、投与される化合物の「治療上有効な量」に影響を与えることができ、該「治療上有効な量」は、凝固因子媒介障害を予防する、改善する又は処置するのに必要な最小量である。そのような量は好ましくは、宿主に対して毒性である又は宿主を有意により出血させ易くさせる量未満である。

経口で又は非経口で投与されるタセリシブ及びパルボシクリブの用量当たりの初回の薬学的に有効な量は約０．０１−１０００ｍｇ／ｋｇの範囲であることができ、即ち１日当たり患者の体重の約０．１から２０ｍｇ／ｋｇであることができ、使用される化合物の典型的な初回の範囲は０．３から１５ｍｇ／ｋｇ／日である。投与されるタセリシブ及びパルボシクリブの用量及び化学療法剤の用量はそれぞれ、単位投薬形態当たり約１ｍｇから約１０００ｍｇの範囲であることができ、又は単位投薬形態当たり約１０ｍｇから約１００ｍｇの範囲であることができる。タセリシブ及びパルボシクリブの用量を約１：５０から約５０：１の重量比で投与することができ、又は約１：１０から約１０：１の重量比で投与することができる。

許容可能な希釈剤、担体、賦形剤及び安定化剤は、用いられる投薬量及び濃度でレシピエント対して非毒性であり、これらには、リン酸、クエン酸及び他の有機酸等の緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤（例えば塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルアルコール若しくはベンジルアルコール；メチルパラベン若しくはプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン若しくは免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン若しくはリジン等のアミノ酸；グルコース、マンノース若しくはデキストリンを含む、単糖類、二糖類及び他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース若しくはソルビトール等の糖類；ナトリウム等の塩形成対イオン；金属錯体（例えばＺｎ−タンパク質錯体）；及び／又は非イオン性界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮ（商標）、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ ＥＬ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が含まれる。活性な薬学的成分を、それぞれコロイド性の薬剤送達系（例えばリポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマクロエマルションで、例えばコアセルベーション技術により又は界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えばヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に捕捉することもできる。そのような技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences 18th edition, (1995) Mack Publ. Co., Easton, PAに開示されている。

タセリシブ及びパルボシクリブの徐放性製剤を調製することができる。徐放性製剤の適切な例には、固形の疎水性ポリマーの半透性マトリクスが含まれ、マトリクスは成形品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリクスの例には、ポリエステル、ハイドロゲル（例えばポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）又はポリ（ビニルアルコール））、ポリ乳酸（米国特許３７７３９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とガンマ−エチル−Ｌ−グルタメートとのコポリマー、非分解性のエチレン−酢酸ビニル、分解性の乳酸−グリコール酸コポリマー、例えばＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマー及び酢酸リュープロリドから構成される注射可能なミクロスフェア）並びにポリ−Ｄ（−）３−ヒドロキシ酪酸が含まれる。

薬学的製剤には、本明細書で詳述した投与経路に適したものが含まれる。製剤を好都合なことに単位投薬形態で提供することができ、及び薬学の分野で公知の任意の方法により調製することができる。技術及び製剤は一般的に、Remington's Pharmaceutical Sciences 18^th Ed. (1995) Mack Publishing Co., Easton, PA中に見出される。そのような方法は、活性成分と１種又は複数種の副成分を構成する担体とを会合させる工程を含む。一般的に、製剤は、活性成分と、液状担体若しくは微細に分割された固形担体又は両方とを均一に及び十分に会合させ、次いで必要に応じて生成物を成形することにより調製される。

経口投与に適したタセリシブ及びパルボシクリブを別々の単位として調製することができ、例えばそれぞれが所定量のＧＤＣ−００３２及び／又は化学療法剤を含有する、丸薬、硬カプセル剤若しくは柔カプセル剤、例えばゼラチンカプセル剤、カシェ剤、トローチ、ロゼンジ、水性若しくは油性の懸濁液、分散性の粉末若しくは顆粒、エマルション、シロップ又はエリキシル剤として調製することができる。所定量のＧＤＣ−００３２及び所定量の化学療法剤を、組み合わせ製剤として丸薬、カプセル剤、溶液又は懸濁液に製剤化することができる。あるいは、ＧＤＣ−００３２及び化学療法剤を、交互投与用の丸薬、カプセル剤、溶液又は懸濁液に別々に製剤化することができる。

製剤を、薬学的組成物を製造するための当分野で既知の任意の方法に従って調製することができ、そのような組成物は、口当たりが良い製剤を提供するために、甘味料、香料、着色料及び保存料を含む１種又は複数種の薬剤を含有することができる。任意選択的にバインダー、潤滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、界面活性剤又は分散剤と混合した、粉末又は顆粒等の自由に流動する形態で活性成分を適切な機械で圧縮することにより、圧縮錠剤を調製することができる。不活性な液状希釈剤で湿らせた粉末化活性成分の混合物を適切な機械で成形することにより、湿製錠剤を作ることができる。任意選択的に錠剤を被覆することでき、又は錠剤に割線を入れることができ、及び任意選択的に錠剤からの活性成分の放出を遅延させる又は制御するように錠剤を製剤化することができる。

本発明の薬学的製剤の錠剤賦形剤は、錠剤を構成する粉末化薬剤のバルク体積を増加させるためのフィラー（又は希釈剤）；摂取される場合に錠剤の小さな断片への、理想的には個々の薬剤粒子への分解を助長し、薬剤の速やかな溶解及び吸収を促進するための崩壊剤；顆粒及び錠剤を必要とされる機械的強度で形成することができ、該顆粒及び錠剤が圧縮された後に共に錠剤を保持することができ、包装、輸送及び通常の取り扱い中における成分粉末への分解が防止され得るようにするためのバインダー；製造中に錠剤を構成する粉末の流動性を改善するための滑剤；製造中に錠剤をプレスするのに使用される装置に錠剤化粉末が付着しないようにするための潤滑剤であって、潤滑剤は、完成した錠剤が装置から放出される場合に、プレスを通過する粉末化混合物の流れを改善し、並びに摩擦及び破損を最小化する；滑剤と類似の機能を有し、製造中に、錠剤を構成する粉末と錠剤の形状を打ち抜くために使用される機械との間の付着を低減する抗付着剤；錠剤により心地よい味を与えるために又は不快な味をマスクするために錠剤に組み入れられるフレーバー、並びに認識及び患者コンプライアンスを補助するための着色料を含むことができる。

錠剤の製造に適している非毒性の薬学的に許容可能な賦形剤との混合物で活性成分を含有する錠剤が許容可能である。これらの賦形剤は、例えば炭酸カルシウム又は炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム又はリン酸ナトリウム等の不活性希釈剤；トウモロコシデンプン又はアルギン酸等の顆粒化剤及び崩壊剤；デンプン、ゼラチン又はアカシア等の結合剤；及びステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸又はタルク等の潤滑剤であることができる。錠剤は非被覆であることができ、又は消化管中での崩壊及び吸着を遅延させるためのマイクロカプセル化を含む既知の技術で錠剤を被覆することができ、これにより長期間にわたる持続作用がもたらされる。例えば、モノステアリン酸グリセリル又はジステアリン酸グリセリル等の時間遅延物質を単独で又はロウと共に用いることができる。

目又は他の外部組織、例えば口及び皮膚を処置するために、製剤は、好ましくは例えば０．０７５から２０％ｗ／ｗの量で活性成分を含有する局所用の軟膏又はクリームとして適用される。軟膏に製剤化される場合、活性成分をパラフィン系の又は水混和性の軟膏基剤と共に用いることができる。あるいは、水中油型クリーム基剤により活性成分をクリームに製剤化することができる。

クリーム基剤の水性相は、多価アルコール、即ち２個以上のヒドロキシル基を有するアルコール、例えばプロピレングリコール、ブタノン１，３−ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロール及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ４００を含む）並びにこれらの混合物を含むことができる。局所用製剤は望ましくは、皮膚又は他の患部を通して活性成分の吸収又は浸透を増強させる化合物を含むことができる。そのような皮膚浸透増強剤の例には、ジメチルスルホキシド及び関連類似体が含まれる。

本発明のエマルションの油性相は、少なくとも１種の乳化剤と脂肪若しくは油との又は脂肪及び油の両方との混合物を含む、既知の方法で既知の成分から構成され得る。好ましくは、親水性乳化剤が、安定化剤として作用する親油性乳化剤と一緒に含まれる。併せて、安定化剤を伴う又は伴わない乳化剤は乳化ロウを構成し、ロウは油及び脂肪と一緒に、クリーム製剤の油性分散相を形成する乳化軟膏基剤を構成する。本発明の製剤での使用に適した乳化剤及びエマルション安定化剤には、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０、Ｓｐａｎ（登録商標）８０、セトステアリルアルコール、ベンジルアルコール、ミリスチルアルコール、モノ−ステアリン酸グリセリル及びラウリル硫酸ナトリウムが含まれる。

本発明の薬学的製剤の水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に適した賦形剤との混合物で活性物質を含有する。そのような賦形剤には、懸濁剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、クロスカルメロース、ポビドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム及びアカシアガム、並びに分散剤又は湿潤剤、例えば天然に生じるリン脂質（例えばレシチン）、アルキレンオキシドと脂肪酸との縮合産物（例えばステアリン酸ポリオキシエチレン）、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合産物（例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール）、エチレンオキシドと脂肪酸及びヘキシトール無水物由来の部分エステルとの縮合産物（例えばモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン）が含まれる。水性懸濁液はまた、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチル又はｐ−ヒドロキシ安息香酸ｎ−プロピル等の１種又は複数種の防腐剤、１種又は複数種の着色料、１種又は複数種の香料、及びスクロース又はサッカリン等の１種又は複数種の甘味料を含有することができる。

薬学的組成物は、無菌注射用製剤の形態であることができ、例えば無菌注射用水性懸濁液又は無菌注射用油性懸濁液であることができる。この懸濁液を、上述した好適な分散剤又は湿潤剤と懸濁剤とを使用する既知の技術に従って製剤化することができる。無菌注射用製剤は、非毒性の非経口的に許容可能な希釈剤若しくは溶媒の溶液若しくは懸濁液であることができ、例えば１，３−ブタンジオール溶液であることができ、又は該無菌注射用製剤を凍結乾燥粉末から調製することができる。用いることができる許容可能なビヒクル及び溶媒には、水、リンガー溶液及び等張塩化ナトリウム溶液がある。加えて、無菌固定油を、溶媒又は懸濁媒質として慣習的に用いることができる。この目的のために、合成モノグリセリド又は合成ジグリセリドを含む任意の無刺激の固定油を用いることができる。加えて、オレイン酸等の脂肪酸も同様に、注射剤の調製に使用することができる。

単一投薬形態を作るために担体物質と組み合わせることができる活性成分の量は、処置されるホスト及び投与の具体的な態様に応じて変化することができる。例えば、ヒトへの経口投与を目的とするタイムリリース製剤は、全組成物の約５％から約９５％（重量：重量）へと変化することができる適切で好都合な量の担体物質と共に調合される約１から１０００ｍｇの活性物質を含有することができる。投与のために容易に測定可能な量をもたらすように薬学的組成物を調製することができる。例えば、約３０ｍＬ／ｈｒの速度で適切な体積の点滴を行なうことができるように、静脈内点滴を目的とする水溶液は溶液１ミリリットル当たり約３から５００μｇの活性成分を含有することができる。

非経口投与に適した製剤には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤及び製剤を目的のレシピエントの血液と等張にする溶質を含有することができる水性の及び非水性の無菌注射用溶液；並びに懸濁剤及び増粘剤を含むことができる水性の及び非水性の無菌懸濁液が含まれる。

目への局所投与に適した製剤には、活性成分が好適な担体中に、特に活性成分用の水性溶媒中に溶解している又は懸濁されている点眼剤も含まれる。そのような製剤中に、活性成分は好ましくは約０．５から２０％ｗ／ｗの、例えば約０．５から１０％ｗ／ｗの、例えば約１．５％ｗ／ｗの濃度で存在する。

口への局所投与に適した製剤には、香味基剤中に、通常はスクロール及びアカシア又はトラガカント中に活性成分を含むロゼンジ；ゼラチン及びグリセリン、又はスクロール及びアカシア等の不活性基剤中に活性成分を含む香錠；並びに適切な液状担体中に活性成分を含むうがい薬が含まれる。

直腸投与用の製剤を、例えばココアバター又はサリチレートを含む適切な基剤を有する坐薬として提供することができる。

肺内投与又は経鼻投与に適した製剤は、例えば０．１から５００ミクロンの範囲の粒径（例えば０．５、１、３０ミクロン、３５ミクロン等のミクロン刻みで０．１から５００ミクロンの範囲の粒径を含む）を有し、該製剤は、鼻経路を通って速やかに吸入されることにより又は肺胞嚢に達するように口を通って吸入されることにより投与される。適切な製剤には、活性成分の水性溶液又は油性溶液が含まれる。エアゾール又は乾燥粉末投与に適した製剤を従来の方法に従って調製することができ、及び以下に記載するように障害の処置又は予防に従来使用されている化合物等の他の治療薬と共に送達することができる。

膣投与に適した製剤を、適切であることが当分野で知られている担体を活性成分に加えて含有する、膣坐薬、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム又はスプレー製剤として提供することができる。

製剤を、単位用量の又は複数用量の容器に、例えば密閉されたアンプル及びバイアルに包装することができ、使用直前に注射用の無菌液状担体の、例えば水の添加のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）条件下で保存することができる。即時注射の溶液及び懸濁液は、既に記載した種類の無菌粉末、顆粒及び錠剤から調製される。好ましい単位投薬製剤は、活性成分の本明細書において前述した毎日の投薬若しくは毎日の副投薬単位又はその適切な画分を含有するものである。

本発明は、獣医学的担体と一緒に、上記で定義した少なくとも１種の活性成分を含む獣医学的組成物を更に提供する。獣医学的担体は組成物を投与する目的に有用な物質であり、並びに不活性又は獣医学分野で許容可能であり及び活性成分と相溶性である固体物質、液体物質又は気体物質であることができる。これらの獣医学的組成物は、非経口的に、経口的に又は任意の他の所望の経路により投与することができる。

組み合わせ治療
タセリシブとパルボシクリブとの治療用組み合わせを、前悪性の及び非腫瘍性の又は非悪性の過剰増殖性障害と共に、固形腫瘍がん型又は造血器悪性腫瘍を含む過剰増殖性障害の処置用のある種の化学療法剤との組み合わせで用いることができる。タセリシブとパルボシクリブとの治療用組み合わせは、がんを処置するための「カクテル」又は他の投薬レジメンにおいて特定の化学療法剤と組み合わせて更に使用することができる。ある実施態様では、タセリシブ及びパルボシクリブは、組み合わせの同時投与のために、単一の錠剤、丸剤、カプセル剤又は溶液として単一製剤（同時処方）で組み合わせられる。他の実施態様では、タセリシブ及びパルボシクリブの順次又は偶発的投与のための別個の錠剤、丸薬、カプセル又は溶液としての別個の製剤中において、投与レジメン又は治療コースに従って、タセリシブ及びパルボシクリブが投与される。タセリシブとパルボシクリブとの組み合わせは、相乗的な特性を有し得る。治療用組み合わせのタセリシブ及びパルボシクリブは、意図された目的に有効な量で投与され得る。一実施態様では、本発明の薬学的製剤は、タセリシブ及びパルボシクリブを含む。別の実施態様では、治療用組み合わせは投薬レジメンにより投与され、ここで、治療上有効な量のタセリシブが１日に２回から３週毎に１回（ｑ３ｗｋ）の範囲で投与され、治療上有効な量のパルボシクリブが１日に２回から３週毎に１回の範囲で別々に、交互に投与される。

本発明の治療用組み合わせには、がんなどの過剰増殖性障害の処置における別個の、同時に又は順次に使用するための、タセリシブ及びパルボシクリブが含まれる。

組み合わせ治療を、同時レジメン又は順次レジメンとして投与することができる。順次に投与する場合、組み合わせを２回以上の投与で投与することができる。組み合わせ投与には、別々の製剤又は単一の薬学的製剤を使用する同時投与、及び好ましくは両方の（又は全ての）活性な薬剤が同時にそれらの生物学的活性を発揮させる期間がある何れかの順での逐次投与が含まれる。

上記の同時投与薬剤の何れかに適切な投薬量は現在使用されているものであり、該投薬量を、新たに同定された薬剤及び他の化学療法剤又は処置の組み合わせ作用（相乗作用）に起因して、例えば治療指数を増加させる又は毒性又は他の副作用若しくは事象を緩和するために低下させることができる。

抗腫瘍治療の特定の実施態様では、治療用組み合わせを、アジュバント治療として手術治療及び放射線治療と組み合わせることができる。本発明に係る組み合わせ治療は、タセリシブ及びパルボシクリブの投与と、１種又は複数種のがん処置の方法又は様式とを含む。タセリシブ及びパルボシクリブの量と投与の相対的なタイミングとを、所望の組み合わせ治療効果を達成するために選択することができる。

薬学的組成物の投与
タセリシブとパルボシクリブとの治療用組み合わせを、処置する状態に適した任意の経路により投与することができる。適切な経路には、経口、非経口（皮下、筋肉内、静脈内、動脈内、吸入、皮内、くも膜下腔内、硬膜外、及び注入法を含む）、経皮、直腸、経鼻、局所（頬側及び舌下を含む）、膣、腹腔内、肺内並びに鼻腔内が含まれる。局所投与には、経皮パッチ又はイオン泳動装置等の経皮投与の使用も含まれ得る。薬剤の製剤化がRemington's Pharmaceutical Sciences, 18^th Ed., (1995) Mack Publishing Co., Easton, PAで論じられている。薬剤の製剤化の他の例を、Liberman, H. A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, Vol 3, 2^nd Ed., New York, NY中に見出すこともできる。局所的な免疫抑制処置のために、化合物を、移植前に移植片と阻害剤とを灌流する又は接触させることを含む病巣内投与により投与することができる。当然のことながら、好ましい経路を例えばレシピエントの状態によって変更することができる。治療用組み合わせの化合物が経口投与される場合、化合物を、薬学的に許容可能な担体、滑剤又は賦形剤と共に丸薬、カプセル剤、錠剤等として製剤化することができる。治療用組み合わせの化合物が非経口的に投与される場合、以下に詳述するように、化合物を、薬学的に許容可能な非経口のビヒクル又は希釈剤と共に及び単位投薬注射可能な形態で製剤化することができる。

ヒト患者を処置するための用量は、タセリシブ及びパルボシクリブのそれぞれが約１ｍｇから約１０００ｍｇの範囲であることができ、例えば約３ｍｇから約２００ｍｇの化合物の範囲であることができる。用量を、具体的な化合物の吸収、分布、代謝及び排出を含む薬物動態学的（ＰＫ）特性及び薬力学的（ＰＤ）特性に応じて、１日に１回（ＱＤ）、１日当たり２回（ＢＩＤ）又はより頻繁に投与することができる。加えて、毒性要因が投薬量及び投与投薬レジメンに影響を及ぼす可能性がある。経口投与される場合、丸薬、カプセル剤又は錠剤を、特定の期間にわたり１日に２回、毎日又は低い頻度、例えば毎週、２週に１回又は３週に１回、摂取させることができる。レジメンを多くの治療サイクルにわたり繰り返すことができる。

処置方法及び医学的用途
本発明の方法には：
・ バイオマーカーの同定に基づく診断方法；
・ 患者がタセリシブとパルボシクリブとの治療用組み合わせに反応することができるかどうかの決定方法；
・ タセリシブ、パルボシクリブ、又はタセリシブとパルボシクリブとの組み合わせのクリアランスをモニタリングすることによる、治療効果の最適化方法；
・ 治療耐性変異の発生をモニタリングすることによる、タセリシブとパルボシクリブとの治療用組み合わせの治療レジメンの最適化方法；並びに
・ タセリシブとパルボシクリブとの治療用組み合わせによる処置が最も有効である患者の同定方法、及びタセリシブとパルボシクリブとの治療用組み合わせによる処置に対する患者の感受性及び応答性に関する患者のモニタリング方法
が含まれる。

本発明の方法は、哺乳動物（例えば、がんのような過剰増殖性障害を有するヒト患者）における異常細胞増殖の阻害に又はがん等の過剰増殖性障害の処置に有用である。例えば、本方法は、哺乳動物（例えばヒト）における多発性骨髄腫、リンパ腫、白血病、前立腺がん、乳がん、肝細胞癌腫、膵臓がん及び／又は大腸がんの診断、モニタリング及び処置に有用である。

タセリシブとパルボシクリブとの治療用組み合わせは、ＰＩ３キナーゼ経路の活性化を特徴とするものを含むがこれに限定されない疾患、状態及び／又は障害の処置に有用である。従って、本発明の別の態様は、ＰＩ３を含む脂質キナーゼを阻害することにより処置することができる疾患又は状態の処置方法を含む。一実施態様では、固形腫瘍又は造血器悪性腫瘍の処置方法は、治療用組み合わせを組み合わせ製剤として又は交互に哺乳動物に投与することを含み、治療用組み合わせは、治療上有効な量のタセリシブ、及び治療上有効な量のパルボシクリブを含む。タセリシブとパルボシクリブとの治療用組み合わせを、前癌性の及び非腫瘍性の又は非悪性の過剰増殖性障害と共に、造血器悪性腫瘍、腫瘍、がん及び腫瘍生組織を含む過剰増殖性の疾患又は障害の処置に用いることができる。一実施態様では、ヒト患者は治療用組み合わせと薬学的に許容可能な担体、アジュバント又はビヒクルとで処置され、前記治療用組み合わせのタセリシブ又はその代謝産物は、ＰＩ３キナーゼ活性を検出可能な程度に阻害する量で存在する。

造血器悪性腫瘍には、非ホジキンリンパ腫、びまん性大型造血リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、慢性のリンパ性白血病、多発性骨髄腫、ＡＭＬ、及びＭＣＬが含まれる。

本発明の別の態様は、本明細書に記載の疾患又は状態を罹患している哺乳動物における、例えばヒト患者におけるそのような疾患又は状態の処置に使用するための薬学的組成物又は治療用組み合わせを提供する。また、本明細書に記載の障害を罹患している温血動物における、例えばヒト患者等の哺乳動物における本明細書に記載の疾患及び状態の処置用の医薬の調製での薬学的組成物の使用も提供される。

本発明の別の態様は、治療上有効な量のタセリシブ及び治療上有効な量のパルボシリブを含む、がんの処置において使用するための組み合わせ製剤として又は交互に投与される治療用組み合わせを提供し；
ここで、タセリシブ及びパルボシクリブは、
若しくはその立体異性体、幾何異性体、互変異性体、又はその薬学的に許容可能な塩である構造を有する。

本発明の別の態様は、治療上有効な量のタセリシブ及びパルボシクリブが組み合わせ製剤として投与される、使用のための上記の組み合わせを提供する。

本発明の別の態様は、治療上有効な量のタセリシブ及びパルボシクリブが交互に投与される、使用のための上記の組み合わせを提供する。

本発明の別の態様は、患者にタセリシブが投与され、続いてパルボシクリブが投与される、使用のための上記の組み合わせを提供する。

本発明の別の態様は、治療上有効な量のタセリシブが１日に２回から３週毎に１回の範囲で投与され、治療上有効な量のパルボシクリブが１日に２回から３週毎に１回の範囲で投与される投薬レジメンで治療用組み合わせが投与される、使用のための上記の組み合わせを提供する。

本発明の別の態様は、がんが、乳がん、子宮頸がん、結腸がん、子宮内膜がん、神経膠芽腫、肺がん、メラノーマ、卵巣がん、膵臓がん、及び前立腺がんから選択される、使用のための上記の組み合わせを提供する。

本発明の別の態様は、がんがホルモン依存性がんである、使用のための上記の組み合わせを提供する。

本発明の別の態様は、がんが抗ホルモン処置に耐性である、使用のための上記の組み合わせを提供する。

本発明の別の態様は、抗ホルモン処置が、タモキシフェン、フルベストラント、ステロイドアロマターゼ阻害剤、及び非ステロイド性アロマターゼ阻害剤から選択される少なくとも１つの薬剤による処置を含む、使用のための上記の組み合わせを提供する。

本発明の別の態様は、がんがホルモンレセプター陽性転移性乳がんである、使用のための上記の組み合わせを提供する。

本発明の別の態様は、治療上有効な量のタセリシブ及び治療上有効な量のパルボシリブを含む、がんの処置用の医薬の製造における組み合わせ製剤として又は交互に投与される治療用組み合わせの使用を提供し；
ここで、タセリシブ及びパルボシクリブは、
若しくはその立体異性体、幾何異性体、互変異性体、又はその薬学的に許容可能な塩である構造を有する。

本発明の別の態様は、治療上有効な量のタセリシブ及びパルボシクリブが組み合わせ製剤として投与される、上記の使用を提供する。

本発明の別の態様は、治療上有効な量のタセリシブ及びパルボシクリブが交互に投与される、上記の使用を提供する。

本発明の別の態様は、患者にタセリシブが投与され、続いてパルボシクリブが投与される、上記の使用を提供する。

本発明の別の態様は、治療上有効な量のタセリシブが１日に２回から３週毎に１回の範囲で投与され、治療上有効な量のパルボシクリブが１日に２回から３週毎に１回の範囲で投与される投薬レジメンで治療用組み合わせが投与される、上記の使用を提供する。

本発明の別の態様は、がんが、乳がん、子宮頸がん、結腸がん、子宮内膜がん、神経膠芽腫、肺がん、メラノーマ、卵巣がん、膵臓がん、及び前立腺がんから選択される、上記の使用を提供する。

本発明の別の態様は、がんがホルモン依存性がんである、上記の使用を提供する。

本発明の別の態様は、がんが抗ホルモン処置に耐性である、上記の使用を提供する。

本発明の別の態様は、抗ホルモン処置が、タモキシフェン、フルベストラント、ステロイドアロマターゼ阻害剤、及び非ステロイド性アロマターゼ阻害剤から選択される少なくとも１つの薬剤による処置を含む、上記の使用を提供する。

本発明の別の態様は、がんがホルモンレセプター陽性転移性乳がんである、上記の使用を提供する。

本発明の別の態様は、治療上有効な量のタセリシブ及び治療上有効な量のパルボシリブを含む、がんの処置のための組み合わせ製剤として又は交互に投与される治療用組み合わせの使用を提供し；
ここで、タセリシブ及びパルボシクリブは、
若しくはその立体異性体、幾何異性体、互変異性体、又はその薬学的に許容可能な塩である構造を有する。

本発明の別の態様は、治療上有効な量のタセリシブ及びパルボシクリブが組み合わせ製剤として投与される、上記の使用を提供する。

本発明の別の態様は、治療上有効な量のタセリシブ及びパルボシクリブが交互に投与される、上記の使用を提供する。

本発明の別の態様は、患者にタセリシブが投与され、続いてパルボシクリブが投与される、上記の使用を提供する。

本発明の別の態様は、治療上有効な量のタセリシブが１日に２回から３週毎に１回の範囲で投与され、治療上有効な量のパルボシクリブが１日に２回から３週毎に１回の範囲で投与される投薬レジメンで治療用組み合わせが投与される、上記の使用を提供する。

本発明の別の態様は、投薬レジメンが１回以上繰り返される、上記の使用を提供する。

本発明の別の態様は、がんが、乳がん、子宮頸がん、結腸がん、子宮内膜がん、神経膠芽腫、肺がん、メラノーマ、卵巣がん、膵臓がん、及び前立腺がんから選択される、上記の使用を提供する。

本発明の別の態様は、がんがホルモン依存性がんである、上記の使用を提供する。

本発明の別の態様は、がんが抗ホルモン処置に耐性である、上記の使用を提供する。

本発明の別の態様は、抗ホルモン処置が、タモキシフェン、フルベストラント、ステロイドアロマターゼ阻害剤、及び非ステロイド性アロマターゼ阻害剤から選択される少なくとも１つの薬剤による処置を含む、上記の使用を提供する。

本発明の別の態様は、がんがホルモンレセプター陽性転移性乳がんである、上記の使用を提供する。

本発明の別の態様は、治療上有効な量のタセリシブ及び治療上有効な量のパルボシリブを含む、がんの処置のための組み合わせ製剤として又は交互に投与のための製品を提供し；
ここで、タセリシブ及びパルボシクリブは、
若しくはその立体異性体、幾何異性体、互変異性体、又はその薬学的に許容可能な塩である構造を有する。

本発明の別の態様は、治療上有効な量のタセリシブ及び治療上有効な量のパルボシリブを含む、がんの処置のための組み合わせ製剤として又は交互に投与される治療用組み合わせの使用を提供し；
ここで、タセリシブ及びパルボシクリブは、
若しくはその立体異性体、幾何異性体、互変異性体、又はその薬学的に許容可能な塩である構造を有する。

先に記載される本発明。

製造品
本発明の別の実施態様では、上述した疾患及び障害の処置に有用なタセリシブ及びパルボシクリブを含有する製造品又は「キット」が提供される。一実施態様では、キットはタセリシブ及びパルボシクリブを含む容器を含む。キットは、容器上に又は容器と関連してラベル又は添付文書を更に含むことができる。用語「添付文書」は、治療用製品の市販のパッケージに習慣的に含まれる説明書を指すために使用され、そのような治療用製品の使用に関する指示、用法、投薬量、投与法、禁忌及び／又は警告についての情報が含有される。適切な容器には、例えば瓶、バイアル、シリンジ、ブリスターパック等が含まれる。容器を、ガラス又はプラスチック等の様々な材料から形成することができる。容器は、状態を処置するのに有効なタセリシブ及びパルボシクリブ又はその同時処方製剤を収容することができ、無菌アクセスポートを有することができる（例えば、容器は、皮下注射針で貫通可能なストッパを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであることができる）。ラベル又は添付文書は、含有物ががん等の選択した状態の処置に使用されることを示す。一実施態様では、ラベル又は添付文書は、タセリシブとパルボシクリブとの治療用組み合わせを、異常細胞増殖から生じる障害の処置するために使用することができることを示す。ラベル又は添付文書はまた、他の障害の処置に組成物を使用することができることも示すことができる。あるいは又は加えて、製造品は、薬学的に許容可能な緩衝液、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンガー溶液及びデキストロース溶液を含む第２の容器を更に含むこともできる。第２の容器は、他の緩衝液、希釈剤、フィルタ、針及びシリンジを含む、商業的な及び使用者の観点から望ましい他の物質を更に含むことができる。

キットは、タセリシブ及びパルボシクリブの投与に関する説明書を更に含むことができる。例えば、キットがタセリシブを含む第１の組成物とパルボシクリブを含む第２の組成物とを含む場合、キットは、第１の及び第２の薬学的組成物の、それを必要とする患者への同時の、順次の又は別々の投与に関する説明書を更に含むことができる。

別の実施態様では、キットは、錠剤又はカプセル剤等のタセリシブ及びパルボシクリブの固形経口形態の送達に適している。そのようなキットは、多くの単位投薬量を好ましくは含む。そのようなキットは、それらの意図した使用の順に配列された投薬量を記載したカードを含むことができる。そのようなキットの一例は「ブリスターパック」である。ブリスターパックは包装産業において公知であり、薬学的単位投薬形態の包装に広く使用されている。必要に応じて、例えば数字、文字、若しくは他のマーキングの形態で、又は投薬量が投与される処置スケジュールにおける日を指定するカレンダー挿入物により、記憶を補助することができる。

一実施態様によれば、キットは、（ａ）タセリシブが収容された第１の容器；及び（ｂ）パルボシクリブが収容された第２の容器を含むことができる。あるいは又は加えて、キットは、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液及びデキストロース溶液等の薬学的に許容可能な緩衝液を含む第３の容器を更に含むことができる。第３の容器は、他の緩衝液、希釈液、フィルタ、針及びシリンジを含む、商業的な及び使用者の観点から望ましい他の物質を更に含むことができる。

キットがタセリシブとパルボシクリブとを含む場合、キットは、分割された瓶又は分割されたホイルパケット等の、別々の組成物を収容するための容器を含むことができるが、別々の組成物を単一の分割されていない容器内に収容することもできる。典型的には、キットは、別々の成分を投与するための説明書を含む。別々の成分が異なる投薬形態（例えば経口及び非経口）で好ましく投与される場合、異なる投薬間隔で投与される場合、又は処方医師による組み合わせの個々の成分の用量設定が望まれる場合、キット形態は特に有利である。

実施例１ ｐ１１０α（アルファ）ＰＩ３Ｋ結合アッセイ
結合アッセイ：最初の偏光実験はＡｎａｌｙｓｔ ＨＴ ９６−３８４（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｃｏｒｐ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ．）で行った。蛍光偏光親和性測定のための試料は、偏光緩衝液（１０ｍＭのＴｒｉｓ ｐＨ７．５、５０ｍＭのＮａＣｌ、４ｍＭのＭｇＣｌ_２、０．０５％のＣｈａｐｓ、及び１ｍＭのＤＴＴ）中で、２０μｇ／ｍＬの最終濃度で開始して、１０ｍＭのＰＩＰ２（Ｅｃｈｅｌｏｎ−Ｉｎｃ．、Ｓａｌｔ Ｌａｋｅ Ｃｉｔｙ、ＵＴ．）最終濃度まで、ｐ１１０アルファＰＩ３Ｋ（Ｕｐｓｔａｔｅ Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ、Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ、ＶＡ）の１：３連続希釈物の添加により調製された。室温で３０分間のインキュベーション時間の後、ＧＲＰ−１及びＰＩＰ３−ＴＡＭＲＡプローブ（Ｅｃｈｅｌｏｎ−Ｉｎｃ．、Ｓａｌｔ Ｌａｋｅ Ｃｉｔｙ、ＵＴ．）それぞれ１００ｎＭ及び５ｎＭの最終濃度の添加により反応を停止させた。３８４ウェルの黒色低容量Ｐｒｏｘｉｐｌａｔｅ（登録商標）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ、ＭＡ．）中のローダミンフルオロフォア（λｅｘ＝５３０ｎｍ；λｅｍ＝５９０ｎｍ）用の標準的なカットオフフィルターで読み取る。蛍光偏光値をタンパク質濃度の関数としてプロットした。ＥＣ_５０値は、ＫａｌｅｉｄａＧｒａｐｈ（登録商標）ソフトウェア（Ｓｙｎｅｒｇｙ ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｒｅａｄｉｎｇ、ＰＡ）を使用して、４パラメーター方程式にデータを適合させることによって得られた。この実験はまた、阻害剤を用いたその後の競合実験に用いる適切なタンパク質濃度を確立する。

阻害剤のＩＣ_５０値は、ＰＩＰ_２（最終濃度１０ｍＭ）と合わせた０．０４ｍｇ／ｍＬのｐ１１０アルファＰＩ３Ｋ（最終濃度）を、偏光緩衝液中で２５ｍＭのＡＴＰ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．、Ｄａｎｖｅｒｓ、ＭＡ）の最終濃度においてアンタゴニストの１：３連続希釈物を含むウェルに添加することによって決定した。室温で３０分間のインキュベーション時間の後、ＧＲＰ−１及びＰＩＰ３−ＴＡＭＲＡプローブ（Ｅｃｈｅｌｏｎ−Ｉｎｃ．、Ｓａｌｔ Ｌａｋｅ Ｃｉｔｙ、ＵＴ．）それぞれ１００ｎＭ及び５ｎＭの最終濃度の添加により反応を停止させた。３８４ウェルの黒色低容量Ｐｒｏｘｉｐｌａｔｅ（登録商標）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ、ＭＡ．）中のローダミンフルオロフォア（λｅｘ＝５３０ｎｍ；λｅｍ＝５９０ｎｍ）用の標準的なカットオフフィルターで読み取る。蛍光偏光値をアンタゴニスト濃度の関数としてプロットし、ＩＣ_５０値を、Ａｓｓａｙ Ｅｘｐｌｏｒｅｒソフトウェア（ＭＤＬ、Ｓａｎ Ｒａｍｏｎ、ＣＡ．）で４パラメータ方程式にデータを適合させることによって得た。

あるいは、ＰＩ３Ｋの阻害は、精製された組み換え酵素及び１μＭ（マイクロモル）の濃度のＡＴＰを用いた放射分析アッセイで決定された。この化合物を１００％ＤＭＳＯで連続希釈した。キナーゼ反応物を室温で１時間インキュベートし、ＰＢＳを添加して反応を停止させた。ＩＣ_５０値はその後、シグモイド用量反応曲線適合（可変勾配）を用いて決定した。

実施例２ インビトロ細胞増殖アッセイ
細胞培養。ＭＣＦ７細胞株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、ＶＡ）から入手した。細胞は、遺伝子発現及び一塩基多型遺伝子型判定アレイを用いて試験し、認証し（Hoeflich KP, et al (2009) Clin Cancer Res, 15(14):4649-4664; Hu X, et al (2009) Mol Cancer Res, 7(4):511-522）、１０％ウシ胎仔血清、１００単位／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、２ｍＭのＬ−グルタミン及びＮＥＡＡを添加したＲＰＭＩ中、３７℃、５％ＣＯ_２下で培養した。完全アロマターゼ遺伝子及びネオマイシン選択遺伝子を含むプラスミドベクターのトランスフェクションにより、安定なアロマターゼ発現ＭＣＦ７細胞（ＭＣＦ７−ＡＲＯ）を生成した。細胞をアンドロステンジオン中で維持し、全ての実験は、指示されている場合を除いて、アンドロステンジオンの存在下で行った。

以下のプロトコル（Mendoza et al (2002) Cancer Res. 62:5485-5488）を用いる細胞増殖アッセイにより、ＧＤＣ−００３２及び化学治療化合物の有効性を評価した。

ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイはＡＴＰの存在の定量化に基づいて、培養液中の生細胞の数を決定するための均一法であり、ＡＴＰの存在は代謝的に活性な細胞の存在を示す。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイは、マルチウェルプレートフォーマットと共に使用するように設計されており、自動化ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）アッセイ、細胞増殖アッセイ及び細胞傷害性アッセイに理想的なものになっている。均一アッセイの手順は、血清補充培地で培養した細胞に単一試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を直接添加することを含む。細胞の洗浄工程、培地の除去工程又は複数回のピペット操作工程は必要ではない。試薬及びプロコトルを含むＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイは商業的に入手可能である（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ、Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ＴＢ２８８）。

本アッセイにより、化合物が細胞に入って細胞増殖を阻害する能力が評価される。本アッセイの原理は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬の添加により細胞溶解とルシフェラーゼ反応を介した発光シグナルの生成とがもたらされる均一アッセイにおいてＡＴＰの存在を定量化することによる、存在する生細胞の数の決定に基づく。発光シグナルは、存在するＡＴＰの量に比例する。

手順：１日目−細胞プレート（Ｆａｌｃｏｎ＃３５３９６２の３８４ウェル ブラック、透明な底部、マイクロクリア、蓋つきＴＣプレート）播種、細胞を収集し、３日のアッセイにわたり３８４ウェル細胞プレート中に１０００個の細胞／５４μｌ／ウェルで細胞を播種する。細胞培養培地：ＲＰＭＩ又はＤＭＥＭ高グルコース、１０％ウシ胎仔血清、２ｍＭのＬ−グルタミン、Ｐ／Ｓ。５％ＣＯ_２、３７℃でインキュベートＯ／Ｎ（終夜）。

細胞生存率アッセイ。３８４ウェルプレートにウェル当たり５４μｌの容量で２０００細胞／ウェルで播種し、続いて３７℃、５％ＣＯ_２下で一晩（約１６時間）インキュベートした。化合物をＤＭＳＯで希釈して、所望のストック濃度を生成し、次いでウェル当たり６μＬの容量で加えた。全ての処置を４回繰り返した。４日間のインキュベーション後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を用いて生存細胞の相対数を推定し、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ）で総発光を測定した。Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を用いて、細胞生存率の５０％阻害（ＩＣ_５０）をもたらす薬剤の濃度又は５０％最大有効濃度（ＥＣ_５０）を決定した。

２日目−細胞、化合物希釈液、ＤＭＳＯプレート（９ポイントについて１：２段階希釈）に薬剤を添加する。９６ウェルプレートの２番目のカラム中に１０ｍＭで２０μｌの化合物を添加する。Ｎｕｎｃの精密培地プレート９６ウェル円錐底ポリプロピレンプレート（カタログ番号２４９９４６）（１：５０希釈）を使用して、全９ポイントについてプレート全体で１：２段階希釈を実施する（１０μｌ＋２０μｌの１００％ＤＭＳＯ）。１４７μｌの培地を全てのウェルに添加する。Ｒａｐｉｄｐｌａｔｅ（登録商標）（Ｃａｌｉｐｅｒ、ａ Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｃｏ．）を使用して、ＤＭＳＯプレート中の各ウェルから３μｌのＤＭＳＯ＋化合物を培地プレート上の各対応するウェルに移す。２種の薬剤の組み合わせを研究するために、ＤＭＳＯプレート中の各ウェルからの１．５μｌのＤＭＳＯ＋化合物である一方の薬剤を、Ｒａｐｉｄｐｌａｔｅを使用して培地プレート上の各対応するウェルに移す。次いで、別の薬剤１．５μｌを培地プレートに移す。

細胞、細胞プレート（１：１０希釈）への薬剤の添加：６μｌの培地＋化合物を細胞（既に細胞上に５４μｌの培地）に直接添加する。頻繁に開けられないであろうインキュベーター中において５％ＣＯ_２、３７℃で３日間インキュベートする。

５日目−プレートを展開し、室温でＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ緩衝液を解凍する：細胞プレートを３７℃から取り出し、約３０分にわたり室温に平衡化する。Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）緩衝液をＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）基質に添加する（瓶から瓶へ）。３０μｌのＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａカタログ番号Ｇ７５７２）を細胞の各ウェルに添加する。約３０分にわたりプレート振盪機上に置く。Ａｎａｌｙｓｔ ＨＴプレートリーダー上で発光を読み取る（ウェル当たり０．５秒）。

細胞生存率アッセイ及び組み合わせアッセイ：１６時間にわたり３８４ウェルプレート中に１０００−２０００個の細胞／ウェルで細胞を播種した。２日目に、９６ウェルプレート中においてＤＭＳＯで９回の段階１：２化合物希釈を行なった。Ｒａｐｉｄｐｌａｔｅ（登録商標）ロボット（Ｚｙｍａｒｋ Ｃｏｒｐ．、ホプキントン、マサチューセッツ州）を使用して、化合物を増殖培地中に更に希釈した。次いで、希釈した化合物を３８４ウェル細胞プレート中の４組のウェルに添加し、３７℃及び５％ＣＯ_２でインキュベートした。４日後、生細胞の相対数を、製造者の指示に従ってＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して発光により測定し、Ｗａｌｌａｃ Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ Ｒｅａｄｅｒ（登録商標）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、フォスターシティ）で読み取った。Ｐｒｉｓｍ（登録商標）４．０ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ、サンディエゴ）を使用してＥＣ５０値を算出した。組み合わせアッセイにおいては、薬剤を４×ＥＣ_５０濃度で開始して投薬した。薬剤のＥＣ５０が＞２．５μＭであった場合、使用した最高濃度は１０μＭであった。全てのアッセイにおいて、ＧＤＣ−００３２及び化学療法剤を同時に又は４時間を空けて（他方の前に一方を）添加した。

レトロゾール耐性細胞株の選択。ＭＣＦ７−ＡＲＯ細胞を、レトロゾール濃度６．５μｍｏｌ／Ｌで正常に成長するまで、１０％チャコールデキストラン処理済ＦＢＳ（Ｃｈａｒｃｏａｌ ｄｅｘｔｒａｎ ｓｔｒｉｐｐｅｄ ＦＢＳ）を補充した、フェノールレッドを含まないＲＰＭＩ培地中でアンドロステンジオンの存在下、レトロゾールの濃度を増加させながら増殖させた。レトロゾール及びＧＤＣ−００３２の両方に耐性の細胞について、レトロゾール耐性細胞は、ＧＤＣ−００３２の濃度を、２．５μｍｏｌ／Ｌの濃度で正常に成長するまで増加させながら増殖させた。全てのレトロゾール感受性及び耐性クローンにおけるアロマターゼ発現の維持をＴａｑＭａｎを用いて確認した。

更なる例示的なインビトロ細胞増殖アッセイは以下の工程を含む：
１． 培地中に約１０^４個の細胞を含有する１００μｌの細胞培養物のアリコート（細胞株及び腫瘍タイプに関して表３を参照）を、３８４ウェルの不透明な壁のプレートの各ウェル中に沈着させた。
２． 培地を含有するが細胞を含有しない対照ウェルを調製した。
３． 化合物を実験ウェルに添加し、３−５日にわたりインキュベートした。
４． プレートを約３０分にわたり室温に平衡化した。
５． 各ウェル中に存在する細胞培養培地の体積と等しい体積のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬を添加した。
６． 内容物を軌道振盪機上で２分にわたり混合して細胞溶解を誘発した。
７． プレートを１０分にわたり室温でインキュベートし、発光シグナルを安定化させた。
８． 発光を記録し、ＲＬＵ＝相対発光単位としてグラフで報告した。
９． Ｃｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙの組み合わせ法及びＣａｌｃｕＳｙｎ（登録商標）ソフトウェア（Ｂｉｏｓｏｆｔ、ケンブリッジ、イギリス）による用量効果解析を使用して分析し、組み合わせ指数を得る。

あるいは、細胞を９６ウェルプレートに最適密度で播種し、試験化合物の存在下で４日にわたりインキュベートした。その後、Ａｌａｍａｒ Ｂｌｕｅ（商標）をアッセイ培地に添加し、細胞を６時間にわたりインキュベートした後に５４４ｎｍの励起、５９０ｎｍの発光で読み取った。シグモイド用量反応曲線の当てはめを使用してＥＣ５０値を算出した。

あるいは、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｉｎｃ．、マディソン、ウィスコンシン州）を使用して増殖／生存率を薬剤処理から４８時間後に分析した。全ての生存率アッセイにおいてＤＭＳＯ処理をコントロールとして使用した。ＸＬフィットソフトウェア（ＩＤＢＳ、アラメダ、カリフォルニア州）を使用してＩＣ_５０値を算出した。

細胞株を、ＡＴＣＣ（アメリカンタイプカルチャーコレクション、マナッサス、バージニア州）又はＤＳＭＺ（Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ、ブラウンシュワイク、ドイツ）から得た。５％ＣＯ_２下における３７℃で、１０％ウシ胎仔血清、１００単位／ｍｌのペニシリン、２ｍＭのＬ−グルタミン及び１００ｍｇ／ｍｌのストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ１６４０培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、グランドアイランド、ニューヨーク州）中で細胞を培養した。

レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｐｈａｒｍ．）は、手術後のホルモン応答性乳がんの処置のための経口非ステロイド性アロマターゼ阻害剤である（Bhatnagar et al (1990) J. Steroid Biochem. and Mol. Biol. 37:1021; Lipton et al (1995) Cancer 75:2132; Goss, P.E. and Smith, R.E. (2002) Expert Rev. Anticancer Ther. 2:249-260; Lang et al (1993) The Journal of Steroid Biochem. and Mol. Biol. 44 (4-6):421-8；欧州特許第２３６９４０号；米国特許第４９７８６７２号）。ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）は、閉経後の女性において、ホルモンレセプター陽性（ＨＲ＋）であるか又は未知のレセプター状態を有する局所若しくは転移性乳がんの処置のためにＦＤＡの承認を受けている。レトロゾールは、４，４’−（（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）メチレン）ジベンゾニトリル（ＣＡＳ登録番号１１２８０９−５１−５）と命名され、構造：
を有する。

実施例３ インビボマウス腫瘍異種移植片の有効性
マウス：雌の重篤な複合免疫不全マウス（Ｆｏｘ Ｃｈａｓｅ ＳＣＩＤ（登録商標）、Ｃ．Ｂ−１７／ＩｃｒＨｓｄ、Ｈａｒｌａｎ）又はヌードマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ Ｆａｒｍｓ、Ｈａｒｌａｎ）は８から９週齢であり、研究の０日目で１５．１から２１．４グラムのＢＷ範囲を有した。動物に、水（逆浸透、１ｐｐｍＣｌ）と１８．０％粗タンパク質、５．０％粗脂肪及び５．０％粗繊維から成るＮＩＨ ３１改変及び照射Ｌａｂ Ｄｉｅｔ（登録商標）とを適宜与えた。１２時間の照明周期、２１−２２℃（７０−７２ｏＦ）及び４０−６０％湿度での静的マイクロアイソレーター中において、照射されたＡＬＰＨＡ−Ｄｒｉ（登録商標）ｂｅｄ−ｏ’ｃｏｂｓ（登録商標）実験動物床敷上でマウスを飼育した。ＰＲＣは、拘束、飼育、手術手順、餌及び液体の調節、並びに獣医学的管理に関する実験動物の管理及び使用に関する指針の推奨を特に順守する。ＰＲＣでの動物管理及び使用プログラムは国際実験動物管理公認協会（ＡＡＡＬＡＣ）の認定を受けており、実験動物の管理及び使用に関する承認された標準の順守を保障する。

腫瘍移植：異種移植を、乳がん細胞株ＭＣＦ−７を含むがん細胞で開始した。（Soule H.D. etal (1973) Jour. Nat. Cancer Inst. 51 (5): 1409-1416; Levenson A.S. et al (1997) Cancer Res. 57 (15): 3071-3078; LaCroix M. et al (2004) Breast Res. and Treatment 83 (3): 249-289) and MDA-MB-453 (Vranic S. et al (2011) Onc. Letters 2: 1131-1137; Hall R.E. et al (1994) Euro. Jour. Cancer 30(4):484-490）。細胞を、１０％ウシ胎仔血清、２ｍＭのグルタミン、１００単位／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬの硫酸ストレプトマイシン及び２５μｇ／ｍＬのゲンタマイシンを補充したＲＰＭＩ１６４０培地で培養した。細胞を指数的増殖中に収集し、細胞株の倍加時間に応じて５×１０^６個又は１０×１０^６個の細胞／ｍＬの濃度でリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に再懸濁させた。腫瘍細胞を右脇腹の皮下に移植し、平均サイズが１００から１５０ｍｍ３の標的範囲に近づいたときに腫瘍増殖をモニタリングした。腫瘍移植後２１日目を研究の０日目とし、マウスを、７５−１７２ｍｍ３の範囲の個々の腫瘍体積及び１２０−１２１ｍｍ３の群平均腫瘍体積を有する１０匹のマウスからそれぞれ成る４つの群に分けた（付録Ａを参照）。体積を、式：
腫瘍体積（ｍｍ^３）＝（ｗ^２×ｌ）／２（式中、Ｗ＝腫瘍の幅（ｍｍ）及びｌ＝腫瘍の長さ（ｍｍ））を使用して算出した。腫瘍重量を、１ｍｇが１ｍｍ３の腫瘍体積に相当すると仮定して推定することができる。

治療薬剤：ＧＤＣ−００３２を、７３％の活性な薬剤を含有した塩形態の乾燥粉末として供給し、光から保護して室温で保存した。薬剤用量を０．５％メチルセルロース：脱イオン水中の０．２％のＴｗｅｅｎ８０（「ビヒクル」）で毎週調製し、４℃で保存した。７３％の活性な薬剤を含有する塩形態はＧ−０３３８２９用量の製剤に含まれる。無菌生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）でストックのアリコートを希釈することにより、ＧＤＣ−００３２の用量を各投薬日に調製した。体重２０グラム当たり０．２ｍＬの体積（１０ｍＬ／ｋｇ）で所定のｍｇ／ｋｇの投薬量を送達するように全用量を製剤化した。

処置：全用量を個々の動物の体重に合わせて調整し、各図に示した経路で与えた。

エンドポイント：腫瘍体積を、Ｕｌｔｒａ Ｃａｌ ＩＶキャリパー（モデル５４ １０ １１１；Ｆｒｅｄ Ｖ．Ｆｏｗｌｅｒ Ｃｏｍｐａｎｙ）を使用して次のように２次元（長さ及び幅）で測定し：腫瘍体積（ｍｍ^３）＝（長さ×幅^２）×０．５、Ｅｘｃｅｌバージョン１１．２（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して分析した。線形混合効果（ＬＭＥ）モデリングアプローチを使用し、同じ動物の腫瘍体積の反復測定を経時的に分析した（Pinheiro, J. et al (2009); Tan, N. et al (2011) Clin. Cancer Res. 17(6):1394-1404）。このアプローチは、反復測定と研究終了前の動物の任意の非処置関連死に起因する少量のドロップアウトとの両方に対応する。三次回帰スプラインを使用して、非線形プロファイルを各用量レベルでのｌｏｇ２腫瘍体積の時間経過に適合させた。次いで、これらの非線形プロファイルを混合モデル内の用量に関連づけた。ビヒクルコントロールに対する割合としての腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ％）を、次式：ＴＧＩ％＝１００×（１−ＡＵＣ用量／ＡＵＣビヒクル）を使用し、ビヒクルに関する１日当たりのそれぞれの用量群に対する近似曲線下の面積（ＡＵＣ）の割合として算出した。この式を使用して、１００％のＴＧＩ値は腫瘍停滞を示し、＞１％であるが＜１００％のＴＧＩ値は腫瘍増殖の遅延を示し、＞１００％のＴＧＩ値は腫瘍退縮を示す。動物に関する部分反応（ＰＲ）を、開始腫瘍体積の＞５０％であるが＜１００％の腫瘍退縮として定義した。完全反応（ＣＲ）を、研究中の任意の日における１００％腫瘍退縮（即ち測定不可能な腫瘍）として定義した。

毒性：動物の体重を、研究の最初の５日にわたり毎日測定し、その後、週に２回測定した。動物の体重を、Ａｄｖｅｎｔｕｒｅｒ Ｐｒｏ（登録商標）ＡＶ８１２スケール（Ｏｈａｕｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して測定した。パーセント重量変化を次のように算出した：体重変化（％）＝［（重量新規日−重量０日）／重量０日］×１００。マウスを任意の有害な処置関連の副作用の明白な兆候について頻繁に観察し、観察時に毒性の臨床徴候を記録した。許容可能な毒性を、研究中における２０％未満の群平均体重（ＢＷ）減少及び１０匹の処置動物中で処置関連（ＴＲ）死が１匹を超えないものとして定義する。より高い毒性を生じる任意の投薬レジメンは最大耐量（ＭＴＤ）を超えると考えられる。死を、臨床徴候及び／若しくは剖検により証明された処置の副作用に起因する場合にはＴＲと分類し、又は投薬期間中の若しくは最後の投薬の１０日以内の不明の原因に起因する場合にもＴＲと分類することができる。死が処置の副作用に関連したという証拠がない場合、死をＮＴＲと分類する。

前述の本発明は、理解を明確にするために例示及び例としていくらか詳細に説明されているが、説明及び例は本発明の範囲を限定するものとして解釈されてはならない。本明細書に引用される全ての特許及び科学文献の開示は、その全体が出典明示により明示的に援用される。

Claims (63)

1. 治療用組み合わせが治療上有効な量のタセリシブ及び治療上有効な量のパルボシクリブを含む、治療用組み合わせを組み合わせ製剤として又は交互に患者に投与することを含む、がんの処置方法であって、
   ここで、タセリシブ及びパルボシクリブは、
   若しくはその立体異性体、幾何異性体、互変異性体、又はその薬学的に許容可能な塩である構造を有する、方法。
2. 治療上有効な量のタセリシブ及びパルボシクリブが組み合わせ製剤として投与される、請求項１に記載の方法。
3. 治療上有効な量のタセリシブ及びパルボシクリブが交互に投与される、請求項１に記載の方法。
4. 患者にタセリシブが投与され、続いてパルボシクリブが投与される、請求項１に記載の方法。
5. 治療上有効な量のタセリシブが１日に２回から３週毎に１回の範囲で投与され、治療上有効な量のパルボシクリブが１日に２回から３週毎に１回の範囲で投与される投薬レジメンで治療用組み合わせが投与される、請求項１に記載の方法。
6. 投薬レジメンが１回以上繰り返される、請求項５に記載の方法。
7. 治療用組み合わせの投与が相乗効果を生じる、請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
8. がんが、乳がん、子宮頸がん、結腸がん、子宮内膜がん、神経膠芽腫、肺がん、メラノーマ、卵巣がん、膵臓がん、及び前立腺がんから選択される、請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
9. がんが、Ｅ５４２Ｋ、Ｅ５４５Ｋ、Ｑ５４６Ｒ、Ｈ１０４７Ｌ及びＨ１０４７Ｒから選択されるＰＩＫ３ＣＡ変異体を発現する、請求項８に記載の方法。
10. がんがＫ−ｒａｓ変異体を発現する、請求項８に記載の方法。
11. がんがＰＴＥＮ変異体を発現する、請求項８に記載の方法。
12. がんが乳がんである、請求項８に記載の方法。
13. 乳がんがＨＥＲ２陽性である、請求項１２に記載の方法。
14. 乳がんが、ＨＥＲ２陰性、ＥＲ（エストロゲンレセプター）陰性、及びＰＲ（プロゲステロンレセプター）陰性である、請求項１２に記載の方法。
15. 乳がんが基底（Ｂａｓａｌ）サブタイプ又はルミナル（Ｌｕｍｉｎａｌ）サブタイプである、請求項１４に記載の方法。
16. タセリシブ及びパルボシクリブがそれぞれ、単位投薬形態当たり約１ｍｇから約１０００ｍｇ量で投与される、請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
17. タセリシブ及びパルボシクリブが約１：５０から約５０：１の重量比で投与される、請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
18. がんがホルモン依存性がんである、請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
19. がんが抗ホルモン処置に耐性である、請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
20. 抗ホルモン処置が、タモキシフェン、フルベストラント、ステロイドアロマターゼ阻害剤、及び非ステロイド性アロマターゼ阻害剤から選択される少なくとも１つの薬剤による処置を含む、請求項１９に記載の方法。
21. がんがホルモンレセプター陽性転移性乳がんである、請求項１９に記載の方法。
22. 治療用組み合わせが抗エストロゲン治療後に疾患進行を伴う閉経後女性に投与される、請求項２１に記載の方法。
23. タセリシブ又はパルボシクリブの薬学的に許容可能な塩が、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、エタンスルホン酸、アスパラギン酸及びグルタミン酸を用いて形成された塩から選択される、請求項１の方法。
24. がんを処置するための製造品であって、
    ａ）治療上有効な量のタセリシブ及び治療上有効な量のパルボシクリブを含む治療用組み合わせであって；
    ここで、タセリシブ及びパルボシクリブは、
    若しくはその立体異性体、幾何異性体、互変異性体、又はその薬学的に許容可能な塩である構造を有する治療用組み合わせ；及び
    ｂ）使用説明書
    を含む、製造品。
25. 患者への治療用組み合わせの投与の前に、患者から得られた生物学的試料がＰＩＫ３ＣＡ又はＰＴＥＮ変異状態について試験されており、ＰＩＫ３ＣＡ又はＰＴＥＮ変異状態が治療用組み合わせに対する患者による治療応答性の指標である、請求項１に記載の方法。
26. がんがＨＥＲ２発現乳がんである、請求項２５に記載の方法。
27. がんがエストロゲンレセプター陽性（ＥＲ＋）乳がんである、請求項２５に記載の方法。
28. 生物学的試料が、タセリシブ又はその治療用組み合わせの投与後に機能的ＰＩ３Ｋタンパク質レベルを測定することによって試験されており、機能的ＰＩ３Ｋタンパク質のレベルの変化は、患者が治療用組み合わせに対して耐性又は応答性であることを示す、請求項２５に記載の方法。
29. がんを有する患者が、治療上有効な量のタセリシブ及び治療上有効な量のパルボシクリブを含む治療用組み合わせによる処置に応答するであろうかどうかをモニタリングする方法であって；
    ここで、タセリシブ及びパルボシクリブは、
    若しくはその立体異性体、幾何異性体、互変異性体、又はその薬学的に許容可能な塩である構造を有し；
    該方法が、
    （ａ）タセリシブ又はその治療用組み合わせの少なくとも１用量の投与後に患者から得られた生物学的試料中のＰＩＫ３ＣＡ又はＰＴＥＮ変異を検出すること；及び
    （ｂ）患者から得られた生物学的試料中のＰＩＫ３ＣＡ又はＰＴＥＮ変異状態を、患者へのタセリシブ又はその治療用組み合わせの投与前に比較することを含み、
    ここで、タセリシブ又はその治療用組み合わせの投与後に得られた試料中のＰＩＫ３ＣＡ又はＰＴＥＮ変異状態の変化又はモジュレーションは、治療用組み合わせによる処置に応答するであろう患者を同定する、方法。
30. がんがＨＥＲ２発現乳がんである、請求項２９に記載の方法。
31. 治療上有効な量のタセリシブ及び治療上有効な量のパルボシクリブを含む治療用組み合わせの治療効果の最適化方法であって；
    ここで、タセリシブ及びパルボシクリブは、
    若しくはその立体異性体、幾何異性体、互変異性体、又はその薬学的に許容可能な塩である構造を有し；
    該方法が、
    （ａ）タセリシブ又はその治療用組み合わせの少なくとも１用量の投与後に患者から得られた生物学的試料中のＰＩＫ３ＣＡ又はＰＴＥＮ変異を検出すること；及び
    （ｂ）患者から得られた生物学的試料中のＰＩＫ３ＣＡ又はＰＴＥＮの状態を、患者へのタセリシブ又はその治療用組み合わせの投与前に比較することを含み、
    ここで、タセリシブ又はその治療用組み合わせの投与後に得られた試料中のＰＩＫ３ＣＡ又はＰＴＥＮ変異状態の変化又はモジュレーションが、治療用組み合わせによる処置からの利益の増大した可能性を有する患者を同定する、方法。
32. がんがＨＥＲ２発現乳がんである、請求項３１に記載の方法。
33. 治療上有効な量のタセリシブ及び治療上有効な量のパルボシクリブを含む治療用組み合わせに対する応答性をモニタリングするためのバイオマーカーを同定する方法であって；
    ここで、タセリシブ及びパルボシクリブは、
    若しくはその立体異性体、幾何異性体、互変異性体、又はその薬学的に許容可能な塩である構造を有し；
    該方法が、
    （ａ）タセリシブ又はその治療用組み合わせの少なくとも１用量を受けた患者から得られた生物学的試料中のＰＩＫ３ＣＡ又はＰＴＥＮ変異から選択されるバイオマーカー変異の発現、モジュレーション、又は活性を検出すること；及び
    （ｂ）バイオマーカー変異の発現、モジュレーション、又は活性を、タセリシブ又はその治療用組み合わせの患者への投与前に患者から得られた生物学的試料である基準試料中のバイオマーカーの状態と比較することを含み；
    ここで、基準試料と比較して少なくとも２分の１か又は２倍のバイオマーカーのモジュレーションの変化が、治療用組み合わせに対する応答性をモニタリングするために有用なバイオマーカーとして同定される、方法。
34. がんがＨＥＲ２発現乳がんである、請求項３３に記載の方法。
35. バイオマーカー変異が、ＰＩＫ３ＣＡのＨ１０４７Ｒ、Ｈ１０４７Ｌ、Ｅ５４２Ｋ、Ｅ５４５Ｋ又はＱ５４６Ｒ変異である、請求項３３に記載の方法。
36. がんを有する患者に治療上有効な量のタセリシブ及び治療上有効な量のパルボシクリブを含む治療用組み合わせを投与することを含む、患者における治療用組み合わせの使用であって；
    ここで、タセリシブ及びパルボシクリブは、
    若しくはその立体異性体、幾何異性体、互変異性体、又はその薬学的に許容可能な塩である構造を有し；
    治療用組み合わせの投与の前に、患者から得られた生物学的試料がＰＩＫ３ＣＡ又はＰＴＥＮ変異状態について試験されており、ＰＩＫ３ＣＡ又はＰＴＥＮ変異状態が治療用組み合わせに対する患者による治療応答性の指標である、使用。
37. がんがＨＥＲ２発現乳がんである、請求項３６に記載の使用。
38. がんがエストロゲンレセプター陽性（ＥＲ＋）乳がんである、請求項３６に記載の使用。
39. 治療上有効な量のタセリシブ及び治療上有効な量のパルボシリブを含む、がんの処置において使用するための組み合わせ製剤として又は交互に投与される治療用組み合わせであって；
    ここで、タセリシブ及びパルボシクリブは、
    若しくはその立体異性体、幾何異性体、互変異性体、又はその薬学的に許容可能な塩である構造を有する、治療用組み合わせ。
40. 治療上有効な量のタセリシブ及びパルボシクリブが組み合わせ製剤として投与される、請求項３９に記載の使用のための組み合わせ。
41. 治療上有効な量のタセリシブ及びパルボシクリブが交互に投与される、請求項３９に記載の使用のための組み合わせ。
42. 患者にタセリシブが投与され、続いてパルボシクリブが投与される、請求項３９に記載の使用のための組み合わせ。
43. 治療上有効な量のタセリシブが１日に２回から３週毎に１回の範囲で投与され、治療上有効な量のパルボシクリブが１日に２回から３週毎に１回の範囲で投与される投薬レジメンで治療用組み合わせが投与される、請求項３９に記載の使用のための組み合わせ。
44. 投薬レジメンが１回以上繰り返される、請求項４３に記載の使用のための組み合わせ。
45. がんが、乳がん、子宮頸がん、結腸がん、子宮内膜がん、神経膠芽腫、肺がん、メラノーマ、卵巣がん、膵臓がん、及び前立腺がんから選択される、請求項３９から４４の何れか一項に記載の使用のための組み合わせ。
46. がんがホルモン依存性がんである、請求項３９から４４の何れか一項に記載の使用のための組み合わせ。
47. がんが抗ホルモン処置に耐性である、請求項３９から４４の何れか一項に記載の使用のための組み合わせ。
48. 抗ホルモン処置が、タモキシフェン、フルベストラント、ステロイドアロマターゼ阻害剤、及び非ステロイド性アロマターゼ阻害剤から選択される少なくとも１つの薬剤による処置を含む、請求項４７に記載の使用のための組み合わせ。
49. がんがホルモンレセプター陽性転移性乳がんである、請求項４７に記載の使用のための組み合わせ。
50. 治療上有効な量のタセリシブ及び治療上有効な量のパルボシリブを含む、がんの処置用の医薬の製造における組み合わせ製剤として又は交互に投与される治療用組み合わせの使用であって；
    ここで、タセリシブ及びパルボシクリブは、
    若しくはその立体異性体、幾何異性体、互変異性体、又はその薬学的に許容可能な塩である構造を有する、使用。
51. 治療上有効な量のタセリシブ及びパルボシクリブが組み合わせ製剤として投与される、請求項５０に記載の使用。
52. 治療上有効な量のタセリシブ及びパルボシクリブが交互に投与される、請求項５０に記載の使用。
53. 患者にタセリシブが投与され、続いてパルボシクリブが投与される、請求項５０に記載の使用。
54. 治療上有効な量のタセリシブが１日に２回から３週毎に１回の範囲で投与され、治療上有効な量のパルボシクリブが１日に２回から３週毎に１回の範囲で投与される投薬レジメンで治療用組み合わせが投与される、請求項５０に記載の使用。
55. 投薬レジメンが１回以上繰り返される、請求項５４に記載の使用。
56. がんが、乳がん、子宮頸がん、結腸がん、子宮内膜がん、神経膠芽腫、肺がん、メラノーマ、卵巣がん、膵臓がん、及び前立腺がんから選択される、請求項５０から５５の何れか一項に記載の使用。
57. がんがホルモン依存性がんである、請求項５０から５５の何れか一項に記載の使用。
58. がんが抗ホルモン処置に耐性である、請求項５０から５５の何れか一項に記載の使用。
59. 抗ホルモン処置が、タモキシフェン、フルベストラント、ステロイドアロマターゼ阻害剤、及び非ステロイド性アロマターゼ阻害剤から選択される少なくとも１つの薬剤による処置を含む、請求項５８に記載の使用のための組み合わせ。
60. がんがホルモンレセプター陽性転移性乳がんである、請求項５８に記載の使用のための組み合わせ。
61. 治療用組み合わせが、治療上有効な量のタセリシブ及び治療上有効な量のパルボシリブを含む、がんの処置のための組み合わせ製剤として又は交互に投与される製品であって；
    ここで、タセリシブ及びパルボシクリブは、
    若しくはその立体異性体、幾何異性体、互変異性体、又はその薬学的に許容可能な塩である構造を有する、製品。
62. 治療上有効な量のタセリシブ及び治療上有効な量のパルボシリブを含む、がんの処置のための組み合わせ製剤として又は交互に投与される治療用組み合わせの使用であって；
    ここで、タセリシブ及びパルボシクリブは、
    若しくはその立体異性体、幾何異性体、互変異性体、又はその薬学的に許容可能な塩である構造を有する、使用。
63. 先に記載される本発明。