JP2018109002A

JP2018109002A - Ｐｄ−１系結合アンタゴニスト及びｖｅｇｆアンタゴニストを用いた癌の治療方法

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Publication number: JP2018109002A
Application number: JP2018006588A
Authority: JP
Inventors: ヘザーメッカー，; Maecker Heather; ブライアンアーヴィング，; Irving Bryan
Original assignee: Genentech Inc
Current assignee: Genentech Inc
Priority date: 2012-05-31
Filing date: 2018-01-18
Publication date: 2018-07-12
Also published as: US9895441B2; EP3556776A1; SG10201603055WA; CN104271601A; MX2014014485A; MX2019003942A; AU2013267267A1; RU2014147867A; AU2020202203A1; EP2855528B1; CA2874144A1; AU2013267267B2; CN104271601B; JP2020033355A; RU2689760C2; BR112014029887A8; SG11201407859YA; IL235779B; US20150320859A1; CA2874144C

Abstract

【課題】ＰＤ−１系結合アンタゴニストと、化学療法と、任意選択でＶＥＧＦアンタゴニストとを含む併用療法及びその使用法で、癌の治療を目的とした、腫瘍免疫原性の上昇といった免疫原性の亢進が望ましい状態の治療方法の提供。【解決手段】個体における癌を治療する又は癌の進行を遅らせる方法であって、個体に対し、有効量のＰＤ−１系結合アンタゴニスト、オキサリプラチン、ロイコボリン、及び５−ＦＵを投与することを含む方法。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、2012年5月31日に出願された米国仮出願第61/653861号の利益を主張し、それは、参照によりその全体が本明細書に援用される。

配列表
本出願は、ＥＦＳ−Web経由でＡＳＣＩＩフォーマットで提出された配列表を含み、その全体が本明細書中で参照することにより援用される。前記ASCIIコピーは、2013年5月28日に作成され、P4926R1WO.txtと命名され、14,285バイトの大きさである。

Ｔ細胞に対して二つの別個のシグナルを提供することは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）による休止Ｔリンパ球のリンパ球活性化について広く受け入れられたモデルである。Lafferty et al, Aust. J. Exp. Biol. Med. ScL 53: 27-42 (1975)。このモデルは、さらに非自己及び免疫寛容からの自己の識別を行う。Bretscher et al, Science 169: 1042-1049 (1970); Bretscher, P.A., P.N.A.S. USA 96: 185-190 (1999); Jenkins et al, J. Exp. Med. 165: 302-319 (1987)。一次シグナル、又は抗原特異性シグナルは、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）に関連して提示された外来抗原ペプチドの認識後、Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）を通して形質導入される。二次、又は同時刺激シグナルは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上に発現した同時刺激分子によりＴ細胞に伝達され、これによりＴ細胞は、クローン性増殖、サイトカイン分泌、及びエフェクター機能を促進させる。Lenschow et al., Ann. Rev. Immunol. 14:233 (1996)。同時刺激を行わないと、Ｔ細胞は、抗原刺激に不応性になることがあり、有効な免疫応答を呈さず、さらには消耗するか、又は外来抗原に対して寛容になりうる。

二シグナルモデルでは、Ｔ細胞はポジティブ及びネガティブ両方の二次同時刺激シグナルを受け取る。このようなポジティブ及びネガティブシグナルの制御は、免疫寛容を維持し、且つ自己免疫を防ぎながら、宿主の防御免疫応答を最大化するために極めて重要である。ポジティブシグナルがＴ細胞活性を促進する一方、ネガティブ二次シグナルはＴ細胞寛容の誘導に必要と考えられる。単純な二シグナルモデルが依然として天然リンパ球の有効な説明を提供する一方、宿主の免疫応答は動的プロセスであり、同時刺激シグナルは抗原にさらされたＴ細胞にも提供されうる。同時刺激シグナルの操作が、細胞に基づく免疫応答を亢進又は終了させる手段を提供することが示されたことにより、同時刺激のメカニズムには治療的関心が集まっている。最近、抑制性レセプターであるプログラム死１ポリペプチド（ＰＤ−１）の発現誘発及び維持と同時にＴ細胞の機能不全又はアネルギーが発生することが発見された。結果として、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）及びプログラム死リガンド２（ＰＤ−Ｌ２）といったＰＤ−１との相互作用によりシグナル伝達するＰＤ−１及び他の分子の治療標的は、強い関心を集めている。

ＰＤ−Ｌ１は、多くの癌において過剰発現され、多くの場合予後不良に関連付けられる（Okazaki T et al., Intern. Immun. 2007 19(7):813) (Thompson RH et al., Cancer Res 2006, 66(7):3381)。興味深いことに、正常組織及び末梢血Ｔリンパ球と比較して、腫瘍湿潤性Ｔリンパ球の大多数は圧倒的にＰＤ−１を発現し、これは、腫瘍反応性Ｔ細胞上におけるＰＤ−１の上方制御が抗腫瘍免疫応答の不全に寄与しうることを示す（Blood 2009 114(8):1537）。これは、ＰＤ−１発現Ｔ細胞と相互作用するＰＤ−Ｌ１発現腫瘍細胞により媒介されたＰＤ−Ｌ１シグナル伝達の活用によるものである可能性があり、この結果Ｔ細胞の活性が弱まり、免疫監視は回避される（Sharpe et al., Nat Rev 2002) (Keir ME et al., 2008 Annu. Rev. Immunol. 26:677）。したがって、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１相互作用の阻害により、ＣＤ８＋Ｔ細胞媒介の腫瘍の死滅が亢進される。

その直接的リガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２）を通したＰＤ−１系シグナル伝達の阻害が、癌の治療のためのＴ細胞免疫（例えば、腫瘍免疫）を亢進させる手段として提案されている。さらに、結合パートナーＢ７−１に対するＰＤ−Ｌ１の結合を阻害することにより、Ｔ細胞免疫に対する同様の亢進が観察されている。最適な治療的処置は、ＰＤ−１レセプター／リガンドの相互作用の遮断を他の抗癌剤と組み合わせることができる。種々の癌の発現を治療する、安定化させる、予防する、及び／又は遅らせるためのこのような最適な治療法に対する需要が存在する。

本明細書に開示される全ての参照物、刊行物、及び特許出願は、その全体が参考としてここに援用される。

本発明は、ＶＥＧＦアンタゴニストを含む又は含まない、ＰＤ−１系結合アンタゴニストと、オキサリプラチン、ロイコボリン、及び５−ＦＵと、の併用療法について記載する。

本明細書では、個体における癌を治療する又は癌の進行を遅らせる方法であって、個体に対し、有効量のＰＤ−１系結合アンタゴニストと、オキサリプラチン、ロイコボリン、及び５−ＦＵとを投与することを含む方法が提供される。いくつかの態様では、方法は、ＶＥＧＦアンタゴニストを投与することをさらに含む。

癌は、メラノーマ、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、乳癌、前立腺癌、膵臓癌、血液悪性腫瘍、又は腎細胞癌でありうる。癌は、早期又は末期でありうる。いくつかの実施態様では、治療される被験体はヒトである。

いくつかの実施態様では、治療により、治療の中止後個体における応答が持続する。いくつかの実施態様では、治療により、被験体の完全寛解、部分寛解、又は疾患の安定がもたらされる。

いくつかの実施態様では、ＰＤ−１系結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、又はＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストである。いくつかの実施態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１に対する結合、及び／又はＰＤ−１のＰＤ−Ｌ２に対する結合を阻害する。いくつかの実施態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗体（例えば、本明細書に記載される抗体ＭＤＸ−１１０６、ＣＴ−０１１、及びＭｅｒｃｋ３７４５）、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、又はオリゴペプチドである。いくつかの実施態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１に対する結合、及び／又はＰＤ−Ｌ１のＢ７−１に対する結合を阻害する。いくつかの実施態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗体（例えば、本明細書に記載される抗体ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、及びＭＤＸ−１１０５）、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、又はオリゴペプチドである。いくつかの実施態様では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１に対する結合を阻害する。いくつかの実施態様では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン（例えば、本明細書に記載されるＡＭＰ−２２４）、融合タンパク質、又はオリゴペプチドである。
いくつかの実施態様では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、抗体、例えば、モノクローナル抗体である。いくつかの実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗体が、ハイブリドーマＡＴＣＣＨＢ１０７０９により生成されるモノクローナル抗ＶＥＧＦ抗体Ａ４．６．１と同じエピトープに結合する。抗ＶＥＧＦ抗体は、ヒト化抗体、又はヒト抗体とすることができる。いくつかの実施態様において、抗ＶＥＧＦ抗体はベバシズマブである。いくつかの実施態様では、抗VEGF抗体は、アミノ酸配列：
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGYTFT NYGMNWVRQA PGKGLEWVGW
INTYTGEPTY AADFKRRFTF SLDTSKSTAY LQMNSLRAED TAVYYCAKYP
HYYGSSHWYF DVWGQGTLVT VSS (配列番号２２)
を含む重鎖可変領域と、
アミノ酸配列：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCSASQDIS NYLNWYQQKP GKAPKVLIYF
TSSLHSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YSTVPWTFGQ
GTKVEIKR (配列番号２３）
を含む軽鎖可変領域と
を含む。

別の態様では、個体の癌を治療すること又は癌の進行を遅らせること、或いは癌を有する個体の免疫機能の亢進を目的とした、ＶＥＧＦアンタゴニストを含む又は含まない、ＰＤ−１系結合アンタゴニスト、オキサリプラチン、ロイコボリン、及び５−ＦＵを含むキットが提供される。キットは、ＰＤ−１系結合アンタゴニストと、個体の癌を治療するため又は癌の進行を遅らせるため、或いは癌を有する個体の免疫機能を亢進させるために、オキサリプラチン、ロイコボリン、及び５−ＦＵと組み合わせてＰＤ−１系結合アンタゴニストを使用するための指示を含むパッケージ挿入物とを含みうる。キットは、ＶＥＧＦアンタゴニストと、個体の癌を治療するため又は癌の進行を遅らせるために、或いは癌を有する個体の免疫機能を亢進させるために、ＰＤ−１系結合アンタゴニスト、並びにオキサリプラチン、ロイコボリン、及び５−ＦＵと組み合わせてＶＥＧＦアンタゴニストを使用するための指示を含むパッケージ挿入物とを含みうる。キットは、ＰＤ−１系結合アンタゴニスト及びＶＥＧＦアンタゴニストと、個体の癌を治療するため又は癌の進行を遅らせるために、或いは癌を有する個体の免疫機能を亢進させるために、ＰＤ−１系結合アンタゴニスト及びＶＥＧＦアンタゴニストを使用するための指示を含むパッケージ挿入物とを含みうる。

抗ＰＤ−Ｌ１抗体及びＦＯＬＦＯＸ併用療法による腫瘍体積の変化を示すグラフである。データは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はＦＯＬＦＯＸ治療のみと比較した場合の、腫瘍増殖の有意な低減と、抗腫瘍効果の持続を実証している。図１に示す治療群の体重変化を示すグラフである。ＦＯＬＦＯＸ及び抗ＶＥＧＦ抗体と組み合わせた抗ＰＤ−Ｌ１抗体と比較した場合の、ＦＯＬＦＯＸと組み合わせた抗ＰＤ−Ｌ１抗体による腫瘍体積の変化を示すグラフである。このデータは、ＦＯＬＦＯＸと組み合わせた抗ＰＤ−Ｌ１抗体による治療と比較して、抗ＶＥＧＦ抗体の追加投与が腫瘍成長を有意に低減させ、それにより抗腫瘍効果が持続したことを実証する。図３に示す治療群の体重変化を示すグラフである。

Ｉ．一般的な技術
ここに記載される又は参照とされる技術及び手続は、一般によく理解されており、当業者により従来の方法論を用いて広く採用されている。そのような従来の方法論は、例えば、以下に記載の広く利用されている方法論である：Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3d edition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel, et al. eds., (2003)); the series Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.): PCR 2: A Practical Approach(M.J. MacPherson, B.D. Hames and G.R. Taylor eds. (1995)), Harlow and Lane, eds. (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, and Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed. (1987)); Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney), ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and Sons; Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology(Wiley and Sons, 1999); Immunobiology(C.A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies(P. Finch, 1997); Antibodies: A Practical Approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies(M. Zanetti and J. D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995); and Cancer: Principles and Practice of Oncology(V.T. DeVita et al., eds., J.B. Lippincott Company, 1993)。

ＩＩ．定義
「ＰＤ−１系結合アンタゴニスト」なる用語は、ＰＤ−１シグナル伝達系でのシグナル伝達に起因するＴ細胞機能不全を排除するために、ＰＤ−１系結合パートナーとその結合パートナーの一又は複数との相互作用を阻害することにより、結果としてＴ細胞機能の回復又は亢進をもたらす分子である。本明細書で使用されるＰＤ−１系結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、及びＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストを含む。

「ＰＤ−１結合アンタゴニスト」なる用語は、ＰＤ−１と、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２といったその結合パートナーのうちの一又は複数との相互作用に起因するシグナル伝達を低減、遮断、阻害、抑制、又は妨害する分子である。いくつかの実施態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１の、その結合パートナーに対する結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１及び／又はＰＤ−Ｌ２に対する結合を阻害する。例えば、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、並びにＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１及び／又はＰＤ−Ｌ２との相互作用に起因するシグナル伝達を低減、遮断、阻害、抑制、又は妨害する他の分子を含む。一実施態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１を通したＴリンパ球媒介性シグナル伝達上に発現される細胞表面タンパク質により媒介されるか、又はそのようなタンパク質を通したネガティブ同時刺激シグナルを低減させて、機能不全Ｔ細胞の非機能不全性を低下させる。いくつかの実施態様において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは抗ＰＤ−１抗体である。特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＭＤＸ−１１０６である。別の特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるMerck3745である。別の特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＣＴ−０１１である。

「ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト」なる用語は、ＰＤ−Ｌ１と、ＰＤ−１、Ｂ７−１といったその結合パートナーのうちの一又は複数との相互作用に起因するシグナル伝達を低減、遮断、阻害、抑制、又は妨害する分子である。いくつかの実施態様では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストはＰＤ−Ｌ１の、その結合パートナーに対する結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１及び／又はＢ７−１に対する結合を阻害する。いくつかの実施態様では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、並びにＰＤ−Ｌ１の、ＰＤ−１、Ｂ７−１といったその結合パートナーのうちの一又は複数との相互作用に起因するシグナル伝達を低減、遮断、阻害、抑制、又は妨害する他の分子を含む。一実施態様では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１を通したＴリンパ球媒介性シグナル伝達上に発現される細胞表面タンパク質により媒介されるか、又はそのようなタンパク質を通したネガティブ同時刺激シグナルを低減させて、機能不全Ｔ細胞の非機能不全性を低下させる。いくつかの実施態様において、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。特定の態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である。別の特定の態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＤＸ−１１０５である。

「ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニスト」なる用語は、ＰＤ−Ｌ２と、ＰＤ−１といったその結合パートナーのうちの一又は複数との相互作用に起因するシグナル伝達を低減、遮断、阻害、抑制、又は妨害する分子である。いくつかの実施態様では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストはＰＤ−Ｌ２の、その結合パートナーに対する結合を阻害する分子である。いくつかの実施態様では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１に対する結合を阻害する。いくつかの実施態様では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、並びにＰＤ−Ｌ２の、ＰＤ−１といったその結合パートナーのうちの一又は複数との相互作用に起因するシグナル伝達を低減、遮断、阻害、抑制、又は妨害する他の分子を含む。一実施態様では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２を通したＴリンパ球媒介性シグナル伝達上に発現される細胞表面タンパク質により媒介されるか、又はそのようなタンパク質を通したネガティブ同時刺激シグナルを低減させて、機能不全Ｔ細胞の機能不全性を低下させる。いくつかの実施態様において、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストはＰＤ−Ｌ２イムノアドヘシンである。特定の態様では、ＰＤ−Ｌ２イムノアドヘシンは、本明細書に記載されるＡＭＰ−２２４である。

「ＶＥＧＦアンタゴニスト」は、一又は複数のＶＥＧＦレセプターへの結合を含むＶＥＧＦ活性を中和、遮断、阻害、抑制、低減又は妨害することができる分子を指す。ＶＥＧＦアンタゴニストは、抗ＶＥＧＦ抗体及びその抗原結合断片、レセプター分子、並びにＶＥＧＦに特異的に結合することにより一又は複数のレセプター、抗ＶＥＧＦレセプター抗体、及びＶＥＧＦレセプターアンタゴニスト、例えばＶＥＧＦＲチロシンキナーゼの小分子インヒビターに対するその結合を隔離する誘導体を含む。

「ＶＥＧＦ」又は「ＶＥＧＦ−Ａ」なる用語は、１６５アミノ酸ヒト血管内皮細胞増殖因子と、例えばLeung et al. Science, 246:1306 (1989), and Houck et al. Mol. Endocrin., 5:1806 (1991)によって記載されるような関連の１２１−、１４５−、１８９−、及び２０６−アミノ酸ヒト血管内皮細胞増殖因子、並びに自然発生の対立遺伝子及びにその処理形態を指すために用いられる。ＶＥＧＦ−Ａは、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ｅ、ＶＥＧＦ−Ｆ及びＰＩＧＦを含む遺伝子ファミリーの一部である。ＶＥＧＦ-Ａは、ＶＥＧＦＲ-１(Ｆｌｔ-１)及びＶＥＧＦＲ-２(Ｆｌｋ−１／ＫＤＲ)の二つの高親和性レセプターチロシンキナーゼに主に結合し、後者はＶＥＧＦ−Ａの血管内皮細胞***促進シグナルの主な伝達物質である。また、ニューロピリン−１は、ヘパリン結合ＶＥＧＦ−Ａアイソフォームのレセプターとして同定されており、血管発生の一役を担っている可能性がある。「ＶＥＧＦ」又は「ＶＥＧＦ−Ａ」なる用語は、マウス、ラット、又は霊長類といった非ヒト種由来のＶＥＧＦも指す。時には特定の種由来のＶＥＧＦは、ヒトＶＥＧＦについてはｈＶＥＧＦ、マウスＶＥＧＦについてはｍＶＥＧＦなどの用語で表される。また、「ＶＥＧＦ」なる用語は、１６５アミノ酸のヒト血管内皮細胞増殖因子のアミノ酸８〜１０９、又は１〜１０９を含むポリペプチドの切断型ないしはその断片を意味する。そのようなＶＥＧＦ型を指すときは、本明細書では、例えば、「ＶＥＧＦ(８−１０９)」、「ＶＥＧＦ(１−１０９)」又は「ＶＥＧＦ１６５」と表す。「切断した(切断型の)」天然のＶＥＧＦのアミノ酸位置は、天然のＶＥＧＦ配列に示される数で示す。例えば、切断型の天然ＶＥＧＦのアミノ酸位置１７(メチオニン)は、天然のＶＥＧＦ中の位置１７(メチオニン)でもある。切断型の天然ＶＥＧＦは天然ＶＥＧＦに匹敵するＫＤＲ及びＦｌｔ−１レセプター結合親和性を有する。

「抗ＶＥＧＦ抗体」は、十分な親和性及び特異性でＶＥＧＦに結合する抗体である。選択された抗体は通常、ＶＥＧＦに対して結合親和性を有し、例えば、抗体は１００ｎＭ〜１ｐＭのＫｄ値でｈＶＥＧＦに結合しうる。抗体親和性は、例えば、表面プラズモン共鳴に基づくアッセイ（ＰＣＴ出願国際公開第2005/012359号に記載のビアコアアッセイなど）；酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）；及び拮抗実験（例えば、ＲＩＡ）により決定されうる。特定の実施態様では、本発明の抗ＶＥＧＦ抗体は、ＶＥＧＦ活性が関与する疾患及び症状を標的とし、干渉する際の治療上の薬剤として有用でありうる。また、抗体は、例えばその治療法としての有効性を評価するために、他の生物活性アッセイの対象となりうる。このようなアッセイは、当技術分野において既知であり、標的抗原及び抗体に意図される用途に応じて決まる。例として、ＨＵＶＥＣ阻害アッセイ；腫瘍細胞増殖阻害アッセイ（例えば、国際公開第８９／０６６９２号に記載）；抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体媒介細胞毒性（ＣＤＣ）アッセイ（米国特許第５５００３６２号）；及びアゴニスト活性又は造血アッセイ（国際公開第９５／２７０６２号参照）が挙げられる。抗ＶＥＧＦ抗体は通常、ＶＥＧＦ−Ｂ、又はＶＥＧＦ−Ｃなどの他のＶＥＧＦホモログにも、ＰｌＧＦ、ＰＤＧＦ又はｂＦＧＦなどの他の増殖因子にも結合しないだろう。

「キメラＶＥＧＦレセプタータンパク質」は、少なくとも一つがＶＥＧＦレセプタータンパク質である少なくとも二つの異なるタンパク質に由来するアミノ酸配列を有するＶＥＧＦレセプター分子である。特定の実施態様では、キメラＶＥＧＦレセプタータンパク質は、ＶＥＧＦに結合してＶＥＧＦの生物活性を阻害することができる。

「抗血管新生剤」又は「血管新生インヒビター」は、小分子量物質、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、単離されたタンパク質、組換えタンパク質、抗体、又はこれらのコンジュゲートないし融合タンパク質を指し、直接又は間接的に、血管新生、脈管形成又は望ましくない血管透過を阻害するものである。抗血管新生剤には、血管新生因子又はそのレセプターに結合してその血管新生活性を遮断する薬剤が含まれると理解されるべきである。例えば、抗血管新生剤は、上述に定義した血管新生剤に対する抗体又は他のアンタゴニスト、例えば、ＶＥＧＦ−Ａ又はＶＥＧＦ−Ａレセプター（例えば、ＫＤＲレセプター、又はＦｌｔ−１レセプター）に対する抗体、Ｇｌｅｅｖｅｃ^ＴＭ（メシル酸イマシニブ）のような抗ＰＤＧＦＲインヒビターである。抗血管新生剤には、天然血管新生インヒビター、例えばアンジオスタチン、エンドスタチンなども含まれる。例としてKlagsbrun and D'Amore, Annu. Rev. Physiol., 53:217-39 (1991)；Streit and Detmar, Oncogene, 22:3172-3179 (2003)(例えば、悪性メラノーマの抗血管新生療法を列挙する表３)；Ferrara & Alitalo, Nature Medicine 5: 1359-1364 (1999)；Tonini等, Oncogene, 22:6549-6556 (2003)(例えば、既知の抗血管新生因子を列挙する表２)；及び、Sato Int. J. Clin. Oncol., 8:200-206 (2003)(例えば、臨床試験で用いられる抗血管新生剤を挙げる表１)を参照のこと。

免疫機能不全に関する「機能不全」なる用語は、抗原刺激に対する免疫が低下した応答性を指す。この用語は、抗原認識が起こりうる消耗及び／又はアネルギー両方の共通要素を含むが、免疫応答を確実にすることは、感染又は腫瘍増殖を制御するために効果的でない。

「Ｔ細胞機能の亢進」とは、生物学的機能を持続又は増幅させるように、或いは消耗した又は不活性のＴ細胞を再生させる又は再活性化するように、Ｔ細胞を誘導する、働きかける、又は刺激することを意味する。Ｔ細胞機能の亢進の例には、治療介入前の同値と比較した場合の、ＣＤ８^＋Ｔ細胞由来のγインターフェロンの分泌増加、増殖増大、抗原応答性の上昇（例えば、ウィルス又は病原菌クリアランス）が含まれる。一実施態様では、亢進のレベルは少なくとも５０％、或いは６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２０％、１５０％、２００％である。このような亢進の測定方式は、当業者には既知である。

「Ｔ細胞機能不全異常」は、抗原刺激に対する応答性の低下を特徴とするＴ細胞の異常又は状態である。特定の実施態様では、Ｔ細胞機能不全異常は、ＰＤ−１を通した不適当なシグナル伝達の増大に特に関連付けられる異常である。別の実施態様では、Ｔ細胞機能不全異常は、Ｔ細胞が不応答性であるか、或いは、サイトカインを分泌する能力、増殖する能力、又は細胞溶解活性を発揮する能力が低下している異常である。特定の態様では、応答性の低下により、イムノゲンを発現する病原菌又は腫瘍の制御の効果がなくなる。Ｔ細胞の機能不全を特徴とするＴ細胞機能不全異常の例には、消散していない急性感染症、慢性感染症、及び腫瘍免疫が含まれる。

「腫瘍免疫」は、腫瘍が免疫認識及びクリアランスを回避するプロセスを指す。したがって、治療コンセプトとして、このような回避が弱まるとき、腫瘍免疫は「治療され」、腫瘍が認識されて免疫系により攻撃される。腫瘍認識の例には、腫瘍結合、腫瘍縮小、及び腫瘍クリアランスが含まれる。

「免疫原性」は、免疫応答を引き起こす特定の物質の能力を指す。腫瘍は免疫原性であり、腫瘍原性を亢進させることは、免疫応答による腫瘍細胞のクリアランスを助ける。腫瘍原性の亢進の例には、ＶＥＧＦアンタゴニストを含む又は含まない、抗ＰＤＬ抗体オキサリプラチン、ロイコボリン、及び５−ＦＵによる治療が含まれる。

「応答の持続」は、治療の中止後も腫瘍増殖の低減に対する効果が持続することを指す。例えば、投与フェーズの開始時におけるサイズと比べて、腫瘍サイズが同じであるか、又は小さい。いくつかの実施態様では、応答の持続は、治療期間と少なくとも同じ期間、例えば、治療期間の１．５倍、２．０倍、２．５倍、又は３．０倍の長さを有する。

用語「抗体」は、（免疫グロブリンＦｃ領域を有する完全長抗体を含めた）モノクローナル抗体、ポリエピトープ特異性を持つ抗体組成物、多特異的抗体（例えば、二重特異性抗体，ダイアボディ，及び単鎖分子）、並びに抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、及びＦｖ）を含む。用語「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、本明細書中においては、「抗体」と同義的に使用される。

基本的な４鎖抗体単位は、２つの同一軽（Ｌ）鎖及び２つの同一重（Ｈ）鎖からなるヘテロ四量体糖タンパク質である。ＩｇＭ抗体は、Ｊ鎖と呼ばれる付加的なポリペプチドを備えた５つの基本的ヘテロ四量体からなり、よって１０の抗原結合部位を含む一方、分泌ＩｇＡ抗体は、重合して、Ｊ鎖と共に多価集合体を形成することができる２−５の基本的４鎖単位を含む。ＩｇＧの場合、４鎖単位は一般的に約１５００００ダルトンである。各Ｌ鎖は一つの共有ジスルフィド結合によりＨ鎖に連結している一方、二つのＨ鎖はＨ鎖のアイソタイプに応じて一又は複数のジスルフィド結合により互いに連結されている。また各Ｈ及びＬ鎖は、規則的に離間した鎖内ジスルフィド架橋を有している。各Ｈ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン(Ｖ_Ｈ)と、これに続くα及びγ鎖それぞれに対する三つの定常ドメイン(Ｃ_Ｈ)と、μ及びεアイソタイプに対する四つのＣ_Ｈドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン(Ｖ_Ｌ)と、これに続く定常ドメイン(Ｃ_Ｌ)をその他端に有する。Ｖ_ＬはＶ_Ｈに整列しており、Ｃ_Ｌは重鎖の第１定常ドメイン(Ｃ_Ｈ１)に整列している。特定のアミノ酸残基は軽鎖と重鎖の可変ドメインの界面を形成すると考えられている。Ｖ_ＨとＶ_Ｌは対になって単一の抗原結合部位を形成する。異なったクラスの抗体の構造及び特性について、例えば、Basic and Clinical Immunology, 8版, D. Stites, A. Terr及びT. Parslow編, Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, 71頁, 6章を参照のこと。任意の脊椎動物種由来のＬ鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ及びラムダと呼ばれる明確に区別される二つのタイプのうちの一つに割り当てることができる。それらの重鎖の定常ドメイン(ＣＨ)のアミノ酸配列に基づき、免疫グロブリンは、種々のクラス又はアイソタイプに割り当てることができる。免疫グロブリンには五つの主要なクラス、すなわち：それぞれα、δ、ε、γ、及びμと命名された重鎖を有するＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがある。γ及びαクラスはさらにＣＨ配列及び機能の比較的小さな差異に基づいてサブクラスに分割され、例えばヒトでは、次のサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２を発現する。

抗体の「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗体の重鎖又は軽鎖のＮ末端ドメインを指す。重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ「ＶＨ」及び「ＶＬ」とも呼ばれる。これらドメインは、一般に、（同じクラスの他の抗体と比較して）抗体の最も可変の部分であり、抗原結合部位を含有する。

「可変」なる用語は、可変ドメインの所定のセグメントが抗体間で配列の点で広範囲に相違していることを意味する。Ｖドメインは抗原結合を媒介し、特定の抗体のその特定の抗原に対する特異性を定める。しかしながら、可変性は可変ドメインの全スパンにわたって均一に分布しているのではない。そうではなく、軽鎖及び重鎖可変ドメイン両方の高頻度可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれる三つのセグメントに集中する。可変ドメインのより高度に保持された部分はフレームワーク領域(ＦＲ)と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ四つのＦＲ領域を含み、βシート構造を接続する（場合によってはその一部を形成する）ループ結合を形成する三つのＨＶＲにより連結された、βシート配置を主にとる。各鎖のＨＶＲはＦＲ領域によって極めて近接して一緒に保持され、他の鎖由来のＨＶＲとともに、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する(Kabat et al., Sequences of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, MD (1991)を参照)。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関連しているものではないが、種々のエフェクター機能、例えば抗体依存性細胞毒性への抗体の関与を示す。

本明細書中で用いる用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体をいい、すなわちこの集団を含む個々の抗体は、微量で存在するかも知れない可能な天然に生じる突然変異及び／又は翻訳後修飾（例えば、異性体化、アミド化）を除いて同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であって、単一の抗原部位に対するものである。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体製剤とは対照的に、各モノクローナル抗体は抗原上の単一の決定基に対するものである。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、それらが、他の免疫グロブリンが混合していないハイブリドーマ培養によって合成される点で有利である。修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集団から得られる抗体の特徴を示し、いずれかの特定の方法による抗体の生産を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は様々な技術によって作製することができ、それらの技術には、例えば、ハイブリドーマ法(例えば、Kohler and Milstein., Nature, 256:495-97 (1975); Hongoet al., Hybridoma, 14 (3): 253-260 (1995), Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2^nd ed. 1988); Hammerling et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas563-681 (Elsevier, N.Y., 1981))、組換えＤＮＡ法(例えば、米国特許第４８１６５６７号参照)、ファージディスプレイ技術(例えば、Clackson et al., Nature, 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Sidhu et al., J. Mol. Biol.338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA101(34): 12467-12472 (2004); 及びLee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132 (2004)）、並びに、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の一部又は全部、或るいはヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子を有する動物にヒト又はヒト様抗体を生成する技術(例えば、国際公開第９８／２４８９３号；国際公開第９６／３４０９６号；国際公開第９６／３３７３５号；国際公開第９１／１０７４１号；Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA90: 2551 (1993); Jakobovits et al., Nature 362: 255-258 (1993); Bruggemann et al., Year in Immunol. 7:33 (1993)；米国特許第５５４５８０７号；同第５５４５８０６号；同第５５６９８２５号；同第５６２５１２６号；同第５６３３４２５号；同第５６６１０１６号; Marks et al., Bio/Technology 10: 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature 368: 812-813 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnol. 14: 845-851 (1996); Neuberger, Nature Biotechnol. 14: 826 (1996); and Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93 (1995)参照)が含まれる。

「ネイキッド抗体」なる用語は、細胞傷害性部分又は放射性標識にコンジュゲートしていない抗体を指す。

「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、又は「全抗体」なる用語は、本明細書では交換可能に使用され、実質的にインタクトな形態の抗体を指し、抗体断片は意味しない。具体的には、全抗体は、Ｆｃ領域を含む重鎖及び軽鎖を伴うものを含む。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）又はそのアミノ酸配列変異体であり得る。いくつかの事例では、インタクトな抗体は、一又は複数のエフェクター機能を有する。

「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部、好ましくはインタクトな抗体の抗原結合及び／又は可変領域を含む。抗体断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ_’、Ｆ（ａｂ_’）_２及びＦｖ断片、ダイアボディ、直鎖抗体(米国特許第5641870号実施例２;Zapata et al., Protein Eng. 8(10): 1057-1062 [1995]を参照);抗体断片から形成された単鎖抗体分子及び多重特異性抗体を含む。抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる二つの同一な抗原結合断片、及び残りの「Ｆｃ」断片（名称は容易に結晶化する能力を反映している）を生成した。Ｆａｂ断片は、Ｈ鎖の可変領域ドメイン（Ｖ_Ｈ）と一緒のＬ鎖の全体、及び一方の重鎖の第一の定常ドメイン（Ｃ_Ｈ１）からなる。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関して一価であり、すなわち単一の抗原結合部位を持っている。抗体のペプシン処理は、異なる抗原結合活性を有し、かつ抗原に尚も架橋可能である、二つのジスルフィド結合型Ｆａｂ断片に大まかに相当するＦ(ａｂ')２断片を生じる。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの一又は複数のシステインを含むＣ_Ｈ１ドメインのカルボキシル末端で２〜３の付加残基を有する点がＦａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ_’−ＳＨは、本明細書において、Ｆａｂ’の一般名称であり、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を持つ。Ｆ（ａｂ_’）_２抗体断片は元々はＦａｂ’断片の対として生成されたもので、その間にヒンジシステインを有する。抗体断片の他の化学結合も知られている。

Ｆｃ断片は、ジスルフィドにより一緒に保持される、両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域における配列によって決定され、その領域はまた、特定の種類の細胞に見出されるＦｃレセプター（ＦｃＲ）によって認識される。

「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び抗原結合部位を含む最小抗体断片である。この断片は１本の重鎖と１本の軽鎖の可変領域ドメインが、堅固な非共有結合をなした二量体からなる。これら二つのドメインの折り畳みから、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、抗体に対する抗原結合特異性を付与する六つの高頻度可変ループ(Ｈ及びＬ鎖から、それぞれ三つのループ)が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は抗原に特異的な三つのＨＶＲのみを含んでなるＦｖの半分）でさえ、結合部位全体よりは低い親和性であるが、抗原を認識し結合する能力を持つ。

「ｓＦｖ」又は「ｓｃＦｖ」とも略称される「単鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖内に結合したＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドはＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメイン間にポリペプチドリンカーを更に含み、それはｓＦＶが抗原結合に望まれる構造を形成するのを可能にする。ｓＦｖの総説については、Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)を参照。

本発明の抗体の「機能性断片」には、インタクトな抗体の抗原結合領域又は可変領域を通常含むインタクトな抗体の一部分、或いはＦｃＲ結合能が保持された又は修飾された抗体のＦｃ領域が含まれる。抗体断片の例には、直鎖状抗体、単鎖抗体分子、及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれる。

用語「ダイアボディ(diabodies)」は、鎖内ではなく鎖間でＶドメインの対を形成させ、その結果として二価の断片、すなわち２つの抗原−結合部位を有する断片が得られるように、Ｖ_ＨとＶ_Ｌドメインとの間に、短いリンカー（約５−１０残基）を持つｓＦｖ断片（前の段落を参照）を構築することにより調製される小型の抗体断片を意味する。二重特異性ダイアボディは２つの「交差」ｓＦｖ断片のヘテロダイマーであり、そこでは２つの抗体のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在する。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４０９７号；国際公開第９３／１１１６１号；及びHollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)にさらに詳しく記載されている。

本発明のモノクローナル抗体は、具体的には、重鎖及び／又は軽鎖の一部分が特定の種に由来する又は特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一又は相同であるが、その（それらの）鎖の残部は別の種に由来する又は別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一又は相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）、並びにそのような抗体の断片（但し、それらが所望の生物活性を示すことを条件とする）を含む（米国特許第４８１６５６７号；Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)）。本明細書で対象とするキメラ抗体にはPRIMATIZED（登録商標）抗体が含まれ、この抗体の抗原結合領域は、例えば対象抗原を用いてマカクザルを免疫化することにより生成される抗体に由来している。本明細書で用いる「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットとして用いられる。

非ヒト(例えばマウス)抗体の「ヒト化」型は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ抗体である。一実施態様では、ヒト化抗体は、レシピエントのＨＶＲ（後述で定義する）の残基が、マウス、ラット、ウサギ又は所望の特異性、親和性及び／又は能力を有する非ヒト霊長類のような非ヒト種(ドナー抗体)のＨＶＲの残基によって置換されたヒト免疫グロブリン(レシピエント抗体)である。いくつかの例においては、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク（「ＦＲ」）の残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられている。更に、ヒト化抗体はレシピエント抗体又はドナー抗体において見いだされない残基を含み得る。これらの修飾は、結合親和性といった抗体の特性をさらに洗練するために作成される場合がある。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも一つ、典型的には二つの可変ドメインのほぼすべてを含み、このような可変ドメインでは、高頻度可変ループのすべて又はほぼすべては非ヒト免疫グロブリン配列の同ループに対応し、ＦＲ領域のすべて又はほぼすべてはヒト免疫グロブリン配列の同領域に対応するが、ＦＲ領域は、結合親和性、異性化、免疫原性などの抗体特性を改善する一又は複数の個別ＦＲ残基の置換を有し得る。ＲＦにおけるこのようなアミノ酸置換の数は、典型的にＨ鎖において６以下であり、Ｌ鎖では３以下である。ヒト化抗体はまた、任意選択で、免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部（Ｆｃ）、典型的には、ヒト免疫グロブリンのそれを含むであろう。更なる詳細については、例えば、Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); and Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)を参照されたい。また、例えば、Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1:105-115 (1998); Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995); Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433 (1994);及び米国特許第 6982321号及び同第7087409号も参照されたい。

「ヒト抗体」は、ヒトによって生産される抗体のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を有する抗体、及び／又はここに開示されたヒト抗体を作製する技術のいずれかを使用して製造された抗体である。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリを含む当技術分野で既知の様々な技術を用いて生産することができる。Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991)。ヒトモノクローナル抗体の調製にさらに利用可能なのは、Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al., J. Immunol., 147(1):86-95 (1991)に記載されている方法である。van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol., 5: 368-74 (2001)も参照のこと。ヒト抗体は、抗原投与に応答してこのような抗体を生成するように修飾されているが、その内因性の遺伝子座が機能していないトランスジェニック動物、例えば免疫化キセノマウス（XENOMOUSE^ＴＭ技術に関する米国特許第６０７５１８１号及び同第６１５０５８４号参照）に対して抗原を投与することにより調製することができる。例えば、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されるヒト抗体に関するLi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006) も参照されたい。

本明細書で使用されるとき、用語「高頻度可変領域」、「ＨＶＲ」、又は「ＨＶ」は、配列が高頻度可変である、及び／又は構造的に定義されたループを形成する抗体可変ドメインの領域を指す。一般的に、抗体は、ＶＨに三つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、及びＶＬに三つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）の、六つのＨＶＲを含む。天然抗体では、Ｈ３及びＬ３は六つのＨＶＲという最大の多様性を示し、特にＨ３は、抗体に良好な特異性を授けるうえで固有の役割を果たしていると考えられる。例えば、Xu et al., Immunity 13:37-45 (2000); Johnson and Wu, in Methods in Molecular Biology 248:1-25 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003)を参照されたい。実際、重鎖のみから構成される天然発生ラクダ抗体は、軽鎖不在下において機能性且つ安定である。例えば、Hamers-Casterman et al., Nature 363:446-448 (1993); Sheriff et al., Nature Struct. Biol. 3:733-736 (1996)を参照されたい。

多数のＨＶＲの描写が使用され、ここに含まれる。カバット相補性決定領域(ＣＤＲ)は配列変化に基づいており、最も一般的に使用されている(Kabat等, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991))。Chothiaは、代わりに構造的ループの位置に言及している(Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))。ＡｂＭＨＶＲは、カバットＨＶＲとChothia構造的ループの間の妥協を表し、Oxford MolecularのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアにより使用される。「接触」ＨＶＲは、利用できる複合体結晶構造の解析に基づく。これらのＨＶＲの各々からの残基を以下に記す。

ＨＶＲは、次のような「拡大ＨＶＲ」を含むことができる：ＶＬの２４−３６又は２４−３４(Ｌ１)、４６−５６又は５０−５６(Ｌ２)及び８９−９７又は８９−９６(Ｌ３)と、ＶＨの２６−３５(Ｈ１)、５０−６５又は４９−６５(Ｈ２)及び９３−１０２、９４−１０２、又は９５−１０２(Ｈ３)。可変ドメイン残基には、これら各々を定義するために、Kabat等,上掲に従って番号を付した。

「カバット(Kabat)による可変ドメイン残基番号付け」又は「カバットに記載のアミノ酸位番号付け」なる表現及びその異なる言い回しは、上掲のKabat 等の抗体の編集の軽鎖可変ドメイン又は重鎖可変ドメインに用いられる番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを用いると、実際の線形アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲ又はＨＶＲの短縮又はそれらへの挿入に対応して、含まれるアミノ酸が二〜三減るか、又は増える。例えば、重鎖可変ドメインは、重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入された残基(例えばカバットによる残基８２ａ、８２ｂ及び８２ｃなど)と、Ｈ２の残基５２の後の単一のアミノ酸の挿入(カバットによる残基５２ａ)とを含むことができる。残基のカバット番号付けは、「標準の」カバット番号付け配列を用いて抗体の配列の相同領域で整列させることによって与えられる抗体について決定されてもよい。

「フレームワーク」又は「ＦＲ」残基は、本明細書で定義されるＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。

「ヒトコンセンサスフレームワーク」又は「アクセプターヒトフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に存在するアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般的には、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからのものである。一般に、配列のサブグループは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5^thEd. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)にあるサブグループである。ＶＬの例に含まれるものとして、サブグループは上掲のKabat et al.のサブグループカッパＩ、カッパＩＩ、カッパＩＩＩ又はカッパＩＶとすることができる。加えて、ＶＨの場合、サブグループは上掲のKabat et al.のサブグループＩ、サブグループＩＩ、又はサブグループＩＩＩ又はカッパＩＶとすることができる。或いは、ヒトコンセンサスフレームワークは上記から取得することができ、様々なヒトフレームワーク配列の収集物に合わせてドナーフレームワーク配列を整列させることにより、ドナーフレームアークに対する相同性に基づいてヒトフレームワーク残基が選択されるときのような特定の残基。ヒト免疫グロブリンのフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、それと同一のアミノ酸配列を含んでもよく、又は既存のアミノ酸配列の変化を含んでもよい。幾つかの実施態様において、既存のアミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。

「ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワーク」は、上掲のＫａｂａｔらの可変重鎖サブグループＩＩＩのアミノ酸配列から得られたコンセンサス配列を含む。一実施態様において、ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークアミノ酸配列は、以下の配列のそれぞれの少なくとも一部又はすべてを含む。
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS（ＨＣ−ＦＲ１）（配列番号３０）
WVRQAPGKGLEWV （ＨＣ−ＦＲ２）、（配列番号３１）
RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR（ＨＣ−ＦＲ３，配列番号３２）
WGQGTLVTVSA（ＨＣ−ＦＲ４）、（配列番号３３）

「ＶＬカッパＩコンセンサスフレームワーク」は、上掲のKabatらの可変軽鎖サブグループＩのアミノ酸配列から得られたコンセンサス配列を含む。一実施態様において、ＶＨサブグループＩコンセンサスフレームワークアミノ酸配列は、以下の配列のそれぞれの少なくとも一部又はすべてを含む。DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC（ＬＣ−ＦＲ１）(配列番号３４）
WYQQKPGKAPKLLIY（ＬＣ−ＦＲ２）（配列番号３５）
GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC（ＬＣ−ＦＲ３）（配列番号３６）
FGQGTKVEIKR（ＬＣ−ＦＲ４）（配列番号３７）

例えばＦｃ領域の、特定の位置における「アミノ酸修飾」は、特定の残基の置換又は削除、或いは特定の残基に隣接する少なくとも一つのアミノ酸残基の挿入を指す。特定の残基に「隣接する」挿入とは、その一〜二の残基内の挿入を意味する。挿入は、特定の残基へのＮ末端又はＣ末端でありうる。本明細書における好ましいアミノ酸修飾は置換である。

「親和成熟」抗体とは、その改変を有していない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性に改良を生じさせる、その一又は複数のＨＶＲに一又は複数の改変を持つものである。一実施態様では、親和性成熟抗体は、標的抗原に対して、ナノモル単位の、又は場合によってはピコモル単位の親和性を有する。親和成熟抗体は、当技術分野において既知の方法により生産できる。例えば、Marks他は、Bio/Technology, 10:779-783(1992年)において、ＶＨドメインとＶＬドメインのシャフリングによる親和成熟を開示している。ＨＶＲ及び／又はフレームワーク残基のランダムな突然変異誘発は、例えば、Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813 (1994); Schier et al. Gene 169:147-155 (1995); Yelton et al. J. Immunol. 155:1994-2004 (1995); Jackson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995); and Hawkins et al, J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992)によって記載されている。

本明細書で使用される場合、「〜に特異的に結合する」又は「〜に特異的な」なる表現は、標的抗体間の結合のような測定可能且つ再現可能な相互作用を指し、生体分子を含む分子の不均一集団の存在下における標的の存在を決定する。例えば、標的（エピトープでありうる）に特異的に結合する抗体は、他の標的への結合より高い親和性と結合活性で、さらに容易に、及び／又はさらに長期間にわたり、この標的に結合する。一実施態様では、抗体の、無関係な標的への結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（RIA）によって測定される場合、抗体の標的への結合の約１０％未満である。特定の実施態様では、標的に特異的に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、又は≦０．１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）を有する。特定の実施態様において、抗体は、異なる種由来のタンパク質の間で保存されているタンパク質上のエピトープに特異的に結合する。別の実施態様では、特異的結合は、排他的結合を含むことができるが、必ずしも排他的結合でなくともよい。

本明細書において用いる場合、用語「イムノアドヘシン」は、異種タンパク質（「アドヘシン」）の結合特異性と免疫グロブリン定常ドメインのエフェクター機能を兼備する抗体様分子を示す。構造的には、イムノアドヘシンは、所望の結合特異性を持ち、抗体の抗原認識及び結合部位以外である（即ち「異種の」）アミノ酸配列と、免疫グロブリン定常ドメイン配列との融合体を含む。イムノアドヘシン分子のアドへシン部分は、典型的には少なくともレセプター又はリガンドの結合部位を含む隣接アミノ酸配列である。イムノアドヘシンの免疫グロブリン定常ドメイン配列は、ＩｇＧ−１、ＩｇＧ−２（ＩｇＧ２Ａ及びＩｇＧ２Ｂを含む）、ＩｇＧ−３又はＩｇＧ−４サブタイプ、ＩｇＡ（ＩｇＡ−１及びＩｇＡ−２を含む）、ＩｇＥ、ＩｇＤ又はＩｇＭなどの任意の免疫グロブリンから得ることができる。Ｉｇ融合体は、好ましくは、Ｉｇ分子内の少なくとも一つの可変領域の、本明細書に記載のポリペプチド又は抗体のドメインによる置換を含む。特に好ましい実施態様において、免疫グロブリン融合体は、ＩｇＧ１分子の、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３の領域、或いはヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３の領域を含む。免疫グロブリン融合体の生産については、１９９５年６月２７日に発行された米国特許第5428130号も参照のこと。例えば、本明細書における併用療法に有用な第２の薬物として有用なイムノアドヘシンには、それぞれＰＤ−Ｌ１ＥＣＤ−Ｆｃ、ＰＤ−Ｌ２ＥＣＤ−Ｆｃ、及びＰＤ−１ＥＣＤ−Ｆｃのような、免疫グロブリン配列の定常ドメインに融合された、ＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２の細胞外又はＰＤ−１結合部分、或いはＰＤ−１の細胞外又はＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２結合部分を含むポリペプチドが含まれる。細胞表面レセプターのＩｇＦｃ及びＥＣＤのイムノアドヘシンの組み合わせは、ときに可溶性レセプターと称される。

「融合タンパク質」及び「融合ポリペプチド」は、互いに共有結合する二つの部分を有するポリペプチドであって、各部分が異なる特性を有するポリペプチドであるポリペプチドを指す。特性は、インビトロ又はインビボ活性のような生物学的特性である。特性は、標的分子への結合、応答の触媒作用などといった単純な化学的又は物理的特性でもよい。二つの部分は単一のペプチド結合又はペプチドリンカーにより直接リンクされてもよいが、互いにリーディングフレーム内でリンクされる。

「ＰＤ−１オリゴペプチド」、「ＰＤ−Ｌ１オリゴペプチド」、又は「ＰＤ−Ｌ２オリゴペプチド」は、本明細書に記載されるようなレセプター、リガンド、又はシグナル伝達成分をそれぞれ含む、それぞぞれＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、又はＰＤ−Ｌ２のネガティブ同時刺激ポリペプチドに対して好ましくは特異的に結合するオリゴペプチドである。このようなオリゴペプチドは既知のオリゴペプチド合成手法を用いて化学的に合成することができるか、組換え技術を用いて調製し、精製することができる。このようなオリゴペプチドは通常少なくとも5アミノ酸長であり、或いは少なくとも約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００アミノ酸長以上である。このようなオリゴペプチドは、周知の技術を用いて同定される。これに関して、ポリペプチド標的に特異的に結合できるオリゴペプチドについてオリゴペプチドライブラリをスクリーニングする技術は当技術分野において周知であることに注意されたい（例えば、米国特許第５５５６７６２号、同第５７５０３７３号、同第４７０８８７１号、同第４８３３０９２号、同第５２２３４０９号、同第５４０３４８４号、同第５５７１６８９号、同第５６６３１４３；国際公開第８４／０３５０６号、同第８４／０３５６４号；Geysen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81:3998-4002 (1984); Geysen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 82:178-182 (1985); Geysen et al., in Synthetic Peptides as Antigens, 130-149 (1986); Geysen et al., J. Immunol. Meth., 102:259-274 (1987); Schoofs et al., J. Immunol., 140:611-616 (1988), Cwirla, S. E. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:6378 (1990); Lowman, H.B. et al. Biochemistry, 30:10832 (1991); Clackson, T. et al. Nature, 352: 624 (1991); Marks, J. D. et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991); Kang, A.S. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:8363 (1991), and Smith, G. P., Current Opin. Biotechnol., 2:668 (1991)参照）。

「遮断(ブロック)」抗体又は「アンタゴニスト」抗体は、結合する抗原の生物活性を阻害するか又は低減させるものである。いくつかの実施態様では、遮断抗体又はアンタゴニスト抗体は、抗原の生物活性を、実質的に又は完全に阻害する。例えば、ＶＥＧＦに特異的なアンタゴニスト抗体は、ＶＥＧＦに結合し、血管内皮細胞の増殖を誘発する又は血管透過性を誘発するＶＥＧＦの能力を阻害する。本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＰＤ−１を通したシグナル伝達を遮断することにより、機能不全状態から抗原刺激までＴ細胞による機能的反応を回復させる。

「アゴニスト」又は活性化抗体は、結合先である抗原によるシグナル伝達を亢進させる又は開始させるものである。いくつかの実施態様では、アゴニスト抗体は、天然リガンドの存在なしで、シグナル伝達を引き起こす又は活性化する。

本明細書中の「Ｆｃ領域」なる用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異体Ｆｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変化するかもしれないが、通常、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域はＣｙｓ２２６の位置又はＰｒｏ２３０からのアミノ酸残基からそのカルボキシル末端まで伸長すると定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン(ＥＵ番号付けシステムによれば残基４４７)は、例えば、抗体の産生又は精製中に、或いは抗体の重鎖をコードする核酸を組み換え遺伝子操作することによって取り除かれてもよい。したがって、インタクト抗体の成分は、すべてのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、及びＫ４４７残基を有する抗体と有さない抗体の混合を含む抗体集団を含みうる。本発明の抗体に使用するために適切な天然配列Ｆｃ領域には、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２（ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ）、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４が含まれる。

「Ｆｃレセプター」又は「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合するレセプターを記載するものである。好適なＦｃＲは、天然配列ヒトＦｃＲである。さらに、好適なＦｃＲは、ＩｇＧ抗体(γレセプター)に結合し、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲII及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスのレセプターを含み、これらのレセプターの対立遺伝子変異体及び選択的スプライシング型を含む。ＦｃγＲＩＩレセプターは、ＦｃγＲＩＩＡ(「活性化レセプター」)及びＦｃγＲＩＩＢ(「阻害レセプター」)を含み、それらは、主としてその細胞質ドメインにおいて異なる類似のアミノ酸配列を有する。活性型レセプターＦｃγＲＩＩＡは、細胞質ドメインに免疫受容活性化チロシンモチーフ(ＩＴＡＭ)を含んでいる。阻害型レセプターＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに、免疫受容抑制性チロシンモチーフ(ＩＴＩＭ)を含む。（M. Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997). FcRs are reviewed in Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods 4: 25-34 (1994); and de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126: 330-41 (1995)を参照。）他のＦｃＲは、将来同定されるものを含み、本明細書にて用語「ＦｃＲ」により網羅される。

また、「Ｆｃレセプター」又は「ＦｃＲ」なる用語は、胎児への母性ＩｇＧｓの移動に関与する、新生児レセプターのＦｃＲｎを含む。Guyer et al., J. Immunol. 117: 587 (1976)及びKim et al., J. Immunol. 24: 249 (1994).ＦｃＲｎへの結合の測定方法は既知である(例としてGhetie and Ward., Immunol. Today 18(12):592-8(1997); Ghetie et al., Nature Biotechnology, 15(7):637-40 (1997); Hinton et al., J. Biol. Chem. 279(8):6213-6 (2004); 国際公開第２００４／９２２１９号(Hinton et al.)を参照)。インビボでのヒトＦｃＲｎへの結合とヒトＦｃＲｎ高親和性結合ポリペプチドの血清半減期は、例えばヒトＦｃＲｎを発現するトランスジェニックマウス又は形質転換されたヒト細胞株、或いはＦｃ領域変異形ポリペプチドを投与された霊長類動物においてアッセイすることができる。国際公開第２００４／４２０７２号(Presta) にＦｃＲへの結合を向上又は減弱させた抗体変異型が述べられている。例えば、Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)も参照されたい。

本明細書で用いる「実質的に減少した」、又は「実質的に異なる」という句は、当業者が、二つの値の間の差異が、その値(例えばＫｄ値)によって測定される生物学的特性という文脈において、統計学的に有意であると考慮するほど、二つの数値(一般には、一つは分子に関連するもの、他方は参照／比較分子に関連するもの）間の差異が十分に高度であることを意味する。前記２つの値の間の差異は、参照／比較分子の値に応じて、例えば約１０％より大きいく、約２０％より大きい、約３０％より大きい、約４０％より大きい、及び／又は約５０％より大きい。

本明細書で用いる「実質的に類似」、又は「実質的に同じ」なる用語は、当業者が、二つの値の間の差異が、その値(例えばＫｄ値)によって測定される生物学的特性という文脈において、ほとんど又は全く生物学的及び／又は統計学的有意性がないと考慮するほど、二つの数値(例えば、一つは本発明の抗体に関連するもの、他方は参照／比較抗体に関連するもの)の間の類似性が十分に高度であることを意味する。前記２つの値の間の差異は、参照／比較値に応じて、例えば約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、及び／又は約１０％未満である。

本明細書で使用される「担体」は、使用される用量及び濃度でそれにさらされる細胞又は哺乳動物に毒性を有さない、薬学的に受容可能な担体、賦形剤、又は安定剤を含む。多くの場合、生理的に受容可能な担体は、ｐＨ緩衝水溶液である。生理的に許容可能な担体の例には、リン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸などのバッファ；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量(およそ１０未満の残基)のポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン、アミノ酸、例として、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリジン；単糖、二糖及びグルコース、マンノース又はデキストリンを含む他の炭水化物、；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；糖アルコール、例えばマンニトール又はソルビトール；塩形成対イオン、例えばナトリウム；及び／又は非イオン性界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮ^ＴＭ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ^ＴＭが含まれる。

「パッケージ挿入物」は、薬剤の市販用パッケージに慣例として含まれる、パッケージ中の製品に関する適応症、使用法、用量、投与、禁忌、組み合わせられる他の薬剤に関する情報、及び／又はこのような薬剤の使用に関する警告などを網羅した指示書である。

本明細書で使用される場合、「治療」なる用語は、臨床病理学の経過の間に治療される個体又は細胞の自然の経過を変えるように計画された臨床的介入を指す。治療の望ましい効果には、疾患進行の速度を低下させること、疾患状態を改善又は軽減すること、並びに予後の寛解又は改善が含まれる。例えば、癌に関連付けられる一又は複数の症状が緩和又は消去される場合、個体は成功裏に「治療」されたことになる。このような症状の緩和又は消去には、癌細胞の増殖の低減（又は癌細胞の破壊）、疾患に起因する症状の低減、疾患罹患者の生活の質の上昇、疾患を治療するために必要な他の薬剤の用量の減少、疾患の進行が遅くなること、及び／又は個体生存の延長が含まれる。

本明細書において使用される場合、「疾患の進行を遅らせる」とは、疾患（例えば、癌）の発生を延ばす、妨げる、遅くする、遅らせる、安定させる、及び／又は先にすることを意味する。このような遅れは、疾患歴及び／又は治療されている個体に応じて、時間の長さを変えることでありうる。当業者には自明であるように、十分な又は有意な遅れは、実際に、個体が疾患を発症しないという意味で予防を包含する。例えば、転移の発生といった末期癌を遅らせることができる。

「有効量」とは、特定の疾患の測定可能な改善又は予防を達成するために必要な最小濃度である。本明細書において、個体に所望の反応を引き出すための有効量は、病状、年齢、性別、患者の体重、及び抗体の能力といった要因に応じて変わり得る。また、有効量は、治療の毒性又は有害な影響を、治療的に有益な効果が上回るものである。予防的使用の場合、有益な又は所望の結果には、疾患の、リスクを排除又は低減すること、重症度を下げること、或いは開始を遅らせることといった結果が含まれ、疾患の開始には、疾患の生化学的、組織学的、及び／又は行動の症状、その合併症、並びに疾患の進行中に呈される中間の病理学的表現型が含まれる。治療的使用の場合、有益な又は所望の結果には、疾患に起因する一又は複数の症状を低減すること、疾患罹患者の生活の質を向上させること、疾患の治療に必要な他の薬剤の用量を減らすこと、ターゲッティングによるなどして別の薬剤の効果を亢進させること、疾患の進行を遅らせること、及び／又は延命することといった臨床結果が含まれる。癌又は腫瘍の場合、有効量の薬剤は、癌細胞の数を減少させる、腫瘍の大きさを小さくする、癌細胞の周辺器官への浸潤を阻害する（即ち、ある程度遅くする、望ましくは止める）、腫瘍の転移を阻害する（即ち、ある程度遅くする、望ましくは止める）、腫瘍の増殖をある程度阻害する、及び／又は疾患に関連する一又は複数の症状をある程度和らげるうえで効果を有しうる。有効量は、一又は複数の投与において投与することができる。本発明の目的のために、有効量の薬剤、化合物、又は医薬組成物は、直接的に又は間接的に、予防的又は治療的処置を達成するために十分な量である。臨床的観点から理解されるように、有効量の薬剤、化合物、又は医薬組成物は、別の薬剤、化合物、又は医薬組成物と併せて達成されても、達成されなくてもよい。このように、「有効量」は、一又は複数の治療薬を投与するという観点から考慮されてよく、一又は複数の他の薬剤と併せて、所望の結果が達成可能である、又は達成される場合、単一の薬剤が有効量で与えられたと考慮される。

本明細書で使用される場合、「〜と併せて」とは、一の治療様式と別の治療様式との投与を指す。したがって、「〜と併せて」は、個体に対し、一治療様式の投与の後、最中、又は前に、他の治療様式の投与を行うことを指す。

「癌」及び「癌性」なる用語は、一般的に調節されない細胞増殖を特徴とする哺乳動物の生理学的状態を指す又は表わす。この定義に含まれるのは、良性及び悪性の癌並びに休眠腫瘍又は微小転移巣である。癌の例には、これらに限定するものではないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫及び白血病が含まれる。このような癌のさらに詳細な例には、扁平上皮癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌、及び肺の扁平上皮癌）、腹膜の癌、肝細胞癌、胃又は腹の癌（消化管癌を含む）、膵臓癌、グリア芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、大腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓又は腎癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、及び様々な種類の頭部及び頸部の癌、並びにＢ細胞リンパ腫（低悪性度の／小胞の非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球型（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度の／小胞のＮＨＬ；中悪性度のびまん性ＮＨＬ；高悪性度の免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度のリンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度の小型非開裂性細胞ＮＨＬ；巨大病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；及びヴァルデンストレームマクログロブリン血症）；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリー細胞白血病；慢性骨髄芽球性白血病；及び移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、並びに母斑症、浮腫（脳腫瘍に関連付けられるものなど）、及びメーグス症候群に関連付けられる異常血管増殖が含まれる。

「転移」とは、身体のその原発部位から他の場所への癌の広がりを意味する。癌細胞は、原発腫瘍から離脱してリンパ管や血管に浸透し、血流を介して循環し、体の他の部分の正常組織中の離れた病巣で増殖する（転移する）ことができる。転移は、局所的であることも、又は離れていることもありうる。転移は、腫瘍細胞が原発腫瘍から離脱し、血流を介して移動し、離れた部位で停止することを条件とした逐次プロセスである。新しい部位で、細胞は血液供給を確立し、そして増殖して生命を脅かす塊を形成することができる。腫瘍細胞内の刺激性と抑制性の両方の分子経路がこの挙動を制御し、離れた部位における腫瘍細胞と宿主細胞間の相互作用も重要である。

「被験体」は哺乳動物を意味し、哺乳動物には、ヒト、或いはウシ、ウマ、イヌ、羊、又はネコのような非ヒトの哺乳動物が含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、被験体はヒトである。本明細書では、患者も被験体である。

本明細書で使用される場合、「完全寛解」又は「ＣＲ」は、すべての標的病変の消失を指し；「部分寛解」又は「ＰＲ」は、基準としてベースライン長径和をとった場合の標的病変の長径和（ＳＬＤ）の少なくとも３０％の低減を指し；「安定した疾患」又は「ＳＤ」は、基準として治療開始以来の最小ＳＬＤをとった場合の、ＰＲを満たす標的病変の十分な縮小でも、ＰＤを満たすのに十分な増大でもないものを指す。

本明細書で使用される場合、「進行性の疾患」又は「ＰＤ」は、基準として治療開始以来最小のＳＬＤをとった場合の、標的病変のＳＬＤの少なくとも２０％の増大か、或いは一又は複数の新規病変の存在を指す。

本明細書で使用される場合、「無憎悪生存率」（ＰＦＳ）は、治療される疾患（例えば、癌）が進行しない治療中及び治療後の期間の長さを指す。無憎悪生存率は、患者が完全寛解又は部分寛解した時間の量、並びに患者の疾患が安定していた時間の量を含む。

本明細書で使用される場合、「全奏効率」（ＯＲＲ）は、完全寛解（ＣＲ）率と部分寛解（ＰＲ）率との和を指す。

本明細書で使用される場合、「全奏功」は、グループの中で、特定の期間後生存しそうな個体の割合を指す。

「化学療法剤」は、癌の治療に有用な化学物質である。化学療法剤の例には、アルキル化剤、例えばチオテパ及びシクロホスファミド(ＣＹＴＯＸＡＮ(登録商標))；スルホン酸アルキル、例えばブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファン(piposulfan)；アジリジン類、例えばベンゾドーパ(benzodopa)、カルボコン、メツレドーパ(meturedopa)、及びウレドーパ(uredopa)；アルトレトアミン(altretamine)、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド(triethylenethiophosphaoramide)及びトリメチローロメラミン(trimethylolomelamine)を含むエチレンイミン類及びメチラメラミン類；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン）；デルタ−９−テトラヒドロカナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標）；βラパチョーネ；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトセシン（合成アナログトポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標）、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標）を含む）、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン(scopolectin)及び９−アミノカンプトテシン；ブリオスタチン；ペメトレキセド；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン及びビゼレシン合成アナログを含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸(podophyllinic acid)；テニポシド；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；ドゥオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エロイテロビン；パンクラチスタチン；ＴＬＫ−２８６；ＣＤＰ３２３、経口α−４インテグリンインヒビター；サルコジクチン；スポンギスタチン；クロランブシル、クロロナファジン(chlornaphazine)、チョロホスファミド(cholophosphamide)、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン(novembichin)、フェネステリン(phenesterine)、プレドニムスチン(prednimustine)、トロフォスファミド(trofosfamide)、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン(chlorozotocin)、フォテムスチン(fotemustine)、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチンなどのニトロスレアス(nitrosureas)；抗生物質、例えばエネジイン抗生物質(例えば、カリケアマイシン(calicheamicin)、特にカリケアマイシンγ１Ｉ及びカリケアマイシンωＩ１（例えばNicolaou et al., Agnew Chem Intl. Ed. Engl. 33:183-186(1994)参照）；ダイネマイシン(dynemicin)Ａを含むダイネマイシン；エスペラマイシン；並びにネオカルチノスタチン発色団及び関連する色素タンパクエネジイン抗生物質発色団)、アクラシノマイシン類(aclacinomysins)、アクチノマイシン、オースラマイシン(authramycin)、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン(cactinomycin)、カラビシン(carabicin)、カルミノマイシン、カルジノフィリン(carzinophilin)、クロモマイシン類、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン(detorbicin)、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標)、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射剤（ＤＯＸＩＬ（登録商標）、及びデオキシドキソルビシンを含む)、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マーセロマイシン(marcellomycin)、マイトマイシンＣのようなマイトマイシン、マイコフェノール酸(mycophenolic acid)、ノガラマイシン(nogalamycin)、オリボマイシン(olivomycins)、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン(potfiromycin)、ピューロマイシン、ケラマイシン(quelamycin)、ロドルビシン(rodorubicin)、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン(tubercidin)、ウベニメクス、ジノスタチン(zinostatin)、ゾルビシン(zorubicin)；代謝拮抗剤、例えばメトトレキセート、ゲムシタビン(gemcitabine) (ＧＥＭＺＡＲ（登録商標))、テガフル(tegafur) (ＵＦＴＯＲＡＬ(登録商標))、カペシタビン(capecitabine)(ＸＥＬＯＤＡ（登録商標))、エポチロン(epothilone)、及び５−フルオロウラシル(５−ＦＵ)；葉酸アナログ、例えばデノプテリン(denopterin)、メトトレキセート、プテロプテリン(pteropterin)、トリメトレキセート(trimetrexate)；プリンアナログ、例えばフルダラビン(fludarabine)、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えばアンシタビン、アザシチジン(azacitidine)、６−アザウリジン(azauridine)、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン(enocitabine)、フロキシウリジン(floxuridine)、及びイマチニブ（２−フェニルアミノピリミジン派生物）、並びに他のｃ−Ｋｉｔインヒビター；抗副腎剤、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸リプレニッシャー(replenisher)、例えばフロリン酸(frolinic acid)；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン(amsacrine)；ベストラブシル(bestrabucil)；ビサントレン(bisantrene)；エダトラキセート(edatraxate)；デフォファミン(defofamine)；デメコルシン(demecolcine)；ジアジコン(diaziquone)；エルフォルニチン(elfornithine)；酢酸エリプチニウム(elliptinium)；エトグルシド(etoglucid)；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン(lonidainine)；メイタンシン(maytansine)及びアンサマイトシン類(ansamitocins)のようなメイタンシノイド類(maytansinoids)；ミトグアゾン(mitoguazone)；ミトキサントロン；モピダンモール(mopidanmol)；ニトラクリン(nitracrine)；ペントスタチン；フェナメット(phenamet)；ピラルビシン；ロソキサントロン(losoxantron)；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ(登録商標)多糖類複合体(JHS Natural Products, Eugene, OR)；ラゾキサン(razoxane)；リゾキシン(rhizoxin)；シゾフィラン；スピロゲルマニウム(spirogermanium)；テニュアゾン酸(tenuazonic acid)；トリアジコン(triaziquone)；２,２',２''−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン(trichothecenes)(特に、Ｔ−２トキシン、ベラキュリンＡ(verracurin A)、ロリジンＡ(roridin A)及びアングイジン(anguidine))；ウレタン；ビンデシン(ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標))；ダカルバジン；マンノムスチン(mannomustine)；ミトブロニトール；ミトラクトール(mitolactol)；ピポブロマン(pipobroman)；ガシトシン(gacytosine)；アラビノシド(「Ara-C」)；チオテパ；タキソイド、例えばパクリタキセル(ＴＡＸＯＬ(登録商標))、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥ^ＴＭ）、及びドキセタキセル(ＴＡＸＯＴＥＲＥ(登録商標))；クロランブシル；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；プラチナアナログ、例えばシスプラチン、及びカルボプラチン；ビンブラスチン(ＶＥＬＢＡＮ(登録商標)；プラチナ；エトポシド(ＶＰ−１６)；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン(ＯＮＣＯＶＩＮ(登録商標)；オキサリプラチン；ロイコボビン(leucovovin)；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；ノバントロン(novantrone)；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロナート(ibandronate)；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ２０００；ジフルオロメチロールニチン(ＤＭＦＯ)；レチノイン酸などのレチノイド；上述したものの何れかの薬学的に許容可能な塩、酸又は誘導体；並びに上記のうち２以上の組み合わせ、例えば、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニソロンの併用療法の略称であるＣＨＯＰ、及び５−ＦＵ及びロイコボリンと組み合わせたオキサリプラチン(ＥＬＯＸＡＴＩＮ^ＴＭ)を含む治療法の略称であるＦＯＬＦＯＸが含まれる。

同様にこの定義に含まれるものには、癌の成長を助けるホルモンの作用を調節、低減、遮断又は阻害するように働き、多くの場合全身治療の形態で使用される抗ホルモン剤がある。これらはホルモン類自体でもよい。例には、抗エストロゲン及び選択的エストロゲンレセプター調節物質（ＳＥＲＭ）を含み、例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ(登録商標)タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン(raloxifene)（ＥＶＩＳＴＡ（登録商標））、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン(trioxifene)、ケオキシフェン(keoxifene)、ＬＹ１１７０１８、オナプリストーン(onapristone)、及びトレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標））；抗プロゲステロン；エストロゲンレセプター下方調節剤（ERD）；エストロゲンレセプターアンタゴニスト、例えばフルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標））；卵巣を抑止又は停止させる機能がある作用剤、例えば酢酸ロイプロリド（ＬＵＰＲＯＮ（登録商標）及びＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標））等の黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アゴニスト、酢酸ゴセレリン、酢酸ブセレリン及びトリプテレリン(tripterelin)；抗アンドロゲン、例えばフルタミド(flutamide)、ニルタミド(nilutamide)、ビカルタミド；並びに副腎のエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば４(５)−イミダゾール、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロール（ＭＥＧＡＳＥ(登録商標））、エキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ(登録商標)）、フォルメスタニー(formestanie)、ファドロゾール、ボロゾール（ＲＩＶＩＳＯＲ(登録商標）)、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ(登録商標)）、及びアナストロゾール（ＡＲＩＭＩＤＥＸ(登録商標)）が含まれる。加えて、このような化学療法剤の定義には、ビスフォスフォネート、例えばクロドロネート（例えばＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）又はＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロン酸（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ−５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロン酸（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロン酸（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、又はリセドロン酸（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））；並びにトロキサシタビン(troxacitabine)（１,３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に接着細胞の増殖に結びつくシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えばＰＫＣ−α、Ｒａｆ、及びＨ−Ｒａｓ、及び上皮細胞増殖因子レセプター（ＥＧＦ−Ｒ）；ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチン及び遺伝子治療ワクチン等のワクチン、例えばＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ(登録商標)ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ(登録商標)ワクチン、及びＶＡＸＩＤ(登録商標)ワクチン；トポイソメラーゼ１インヒビター（ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ(登録商標)）；フルベストラントのような抗エストロゲン；イマチニブ又はＥＸＥＬ−０８６２（チロシンキナーゼインヒビター）のようなＫｉｔインヒビター；ＧＥＧＲインヒビター、例えばエルロチニブ又はセツキシマブ；抗ＶＥＧＦインヒビター、例えばベバシズマブ；イリノテカン；ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ(登録商標)）；ラパチニブ及びラパチニブジトシネート（lapatinib ditosylate）（ＧＷ５７２０１６としても知られるＥｒｂＢ−２及びＥＧＦＲ二重チロシンキナーゼ小分子インヒビター）；１７ＡＡＧ（熱ショックタンパク質（Ｈｓｐ）９０毒であるゲルダナマイシン誘導体）、及び上記のもののいずれかの製薬的に許容される塩類、酸類又は誘導体が含まれる。

本明細書で使用される場合、「サイトカイン」なる用語は、細胞間メディエーターとして別の細胞上に作用するか、又はタンパク質を生成する細胞上に自己分泌作用を有する一の細胞集団により放出されるタンパク質の総称である。このようなサイトカインの例には、リンホカイン、モノカイン、インターロイキン（「ＩＬ」）、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、Ｌ−１７Ａ−Ｆ、ＩＬ−１８〜ＩＬ−２９（例えばＩＬ−２３）、ＩＬ−３１（ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒＩＬ−２を含む）；腫瘍壊死因子、例えばＴＮＦ−α、又はＴＮＦ−β、ＴＧＦ−β１−３；並びに、白血病抑制因子（「ＬＩＦ」）、毛様体神経栄養因子（「ＣＮＴＦ」）、ＣＮＴＦ様サイトカイン（「ＣＬＣ」）、カルジオトロフィン（「ＣＴ」）、及びキットリガンド（「ＫＬ」）を含む他のポリペプチド因子が含まれる。

本明細書で使用される場合、「ケモカイン」なる用語は、白血球の走化性及び活性を選択的に誘導する能力を有する可溶性因子（例えば、サイトカイン）を指す。それらはまた、血管新生、炎症、創傷治癒、及び腫瘍形成のプロセスを引き起こす。例示的なケモカインには、ＩＬ−８、ネズミ科のケラチノサイト化学誘引物質（ＫＣ）のヒト相同体が含まれる。

本明細書及び特許請求の範囲に使用される場合、単数形の「ａ」、「ｏｒ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈から明らに否定されない限り、複数の指示対象を含む。

本明細書中の「約」の値又はパラメーターへの言及は、その値又はパラメーター自体のバリエーションを含む(記載する)。例えば、「約Ｘ」との記載には「Ｘ」の記載が含まれる。

「薬学的に受容可能な塩」なる語句は、本明細書中で使用される場合、本発明の化合物の薬学的に受容可能な有機もしくは無機の塩をいう。典型的な塩としては、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酸性酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、メシラート、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、パモ酸塩（pamoate）（すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエート））塩、アルカリ金属（例えば、ナトリウム及びカリウム）塩、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）塩、並びにアンモニウム塩が挙げられるが、これらに限定されない。薬学的に受容可能な塩は、酢酸イオン、コハク酸イオンもしくは他の対イオンのような別の分子の包含を含み得る。対イオンは、親化合物上の電荷を安定化させる任意の有機部分もしくは無機部分であり得る。さらに、薬学的に受容可能な塩は、一を上回る荷電した原子をその構造内に有し得る。多数の荷電した原子がその薬学的に受容可能な塩の一部分である場合、多数の対イオンを有し得る。したがって、薬学的に受容可能な塩は、一又は複数の荷電した原子及び／又は一又は複数の対イオンを有し得る。

本発明の化合物が塩基である場合、所望の薬学的に受容可能な塩は、当技術分野で利用可能な任意の適切な方法、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、メタンスルホン酸、リン酸などの無機酸、或いは、酢酸、マレイン酸、コハク酸、マンデル酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、ピラノシジル（pyranosidyl）酸、例えばグルクロン酸又はガラクツロン酸、αハイドロキシ酸、例えばクエン酸又は酒石酸、アミノ酸、例えばアスパラギン酸又はグルタミン酸、芳香族酸、例えば安息香酸又は桂皮酸、スルホン酸、例えばｐ−トルエンスルホン酸又はエタンスルホン酸などの有機酸を用いた遊離塩基の処理により調製することができる。

本発明の化合物が酸である場合、所望の薬学的に受容可能な塩は、任意の適切な方法、例えば、アミン（一次、二次、又は三次）、アルカリ金属水酸化物、或いはアルカリ土類金属水酸化物などの無機又は有機塩基を用いた遊離酸の処理により調製することができる。適切な塩の具体的な例には、アミノ酸、例えばグリシン及びアルギニン、アンモニア、一次、二次、及び三次アミン、並びに環状アミン、例えばピペリジン、モルホリン、及びピペラジン由来の有機塩と、ナトリウム、カルシウム、カリウム、マグネシウム、マンガン、鉄、銅、亜鉛、アルミニウム、及びリチウム由来の無機塩とが含まれるが、これらに限定されない。

「薬学的に受容可能」という表現は、物質又は組成物が、製剤を含む他の成分、及び／又はそれを用いて治療される哺乳動物と、化学的に及び／又は毒物学的に適合しなければならない。

本明細書に記載される本発明の態様及びバリエーションは、態様及びバリエーションを「含む」及び／又は「から本質的になる」を含む。

ＩＩＩ．方法
本発明の方法は、癌の治療のために腫瘍免疫原生を増大させるなどの免疫原性の亢進が望ましい状態の治療に用途を見出すことができる。様々な癌を治療することができる、又はそれらの進行を遅らせることができる。

いくつかの実施態様では、個体はメラノーマを有する。メラノーマは、早期又は末期でありうる。いくつかの実施態様では、個体は結腸直腸癌を有する。結腸直腸癌は、早期又は末期でありうる。いくつかの実施態様では、個体は非小細胞肺癌を有する。非小細胞肺癌は、早期又は末期でありうる。いくつかの実施態様では、個体は膵臓癌を有する。膵臓癌は、早期又は末期でありうる。いくつかの実施態様では、個体は血液悪性腫瘍を有する。血液悪性腫瘍は、早期又は末期でありうる。いくつかの実施態様では、個体は卵巣癌を有する。卵巣癌は、早期又は末期でありうる。いくつかの実施態様では、個体は乳癌を有する。乳癌は、早期又は末期でありうる。いくつかの実施態様では、個体は腎細胞癌である。腎細胞癌は、早期又は末期でありうる。

いくつかの実施態様では、治療される被験体はヒトである。

本発明の併用療法は、ＰＤ−１系結合アンタゴニストと、オキサリプラチン、ロイコボリン、及び５−ＦＵとを投与することを含む。別の態様では、本発明は、ＰＤ−１系結合アンタゴニストと、ＶＥＧＦアンタゴニスト、及びオキサリプラチン、ロイコボリン、及び５−ＦＵとの投与を含む併用療法を提供する。ＰＤ−１系結合アンタゴニスト及びＶＥＧＦアンタゴニストは、当技術分野において任意の適切な既知の方式で投与することができる。例えば、ＰＤ−１系結合アンタゴニスト及びＶＥＧＦアンタゴニストは、連続して（異なる時点で）、又は同時に（同じ時点で）投与することができる。

いくつかの実施態様では、本発明の方法は、付加療法を施すことをさらに含む。付加療法は、放射線治療、外科手術（例えば、腫瘍摘出手術及び乳腺切除）、化学療法、遺伝子治療、ＤＮＡ治療、ウィルス性治療、ＲＮＡ治療、免疫療法、骨髄移植、ナノセラピー（nanotherapy）、モノクローナル抗体療法、又は上記の組み合わせでありうる。付加療法は、アジュバント又はネオアジュバント療法の形式でもよい。いくつかの実施態様では、付加療法は、小分子酵素インヒビター又は抗転移薬の投与である。いくつかの実施態様では、付加療法は、副作用制限薬剤（例えば、嘔吐抑制剤のような、治療の副作用の発生及び／又は重症度を抑えることを意図した薬剤）の投与である。いくつかの実施態様では、付加療法は、放射線治療である。いくつかの実施態様では、付加療法は、外科手術である。いくつかの実施態様では、付加療法は、放射線治療と外科手術の組み合わせである。付加療法は、上記の化学療法剤の一又は複数である。

後述するＰＤ−１系結合アンタゴニスト及びＶＥＧＦアンタゴニストのいずれかを、本発明の方法に使用することができる。

ＰＤ−１系結合アンタゴニスト
本明細書において提供される、個体の癌を治療する又は癌の進行を遅らせる方法は、個体に対し、有効量のＰＤ−１系結合アンタゴニストを、オキサリプラチン、ロイコボリン、及び５−ＦＵと組み合わせてを投与することを含み、ＶＥＧＦアンタゴニストの投与は含まれても含まれなくてもよい。例えば、ＰＤ−１系結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、及びＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストを含む。

いくつかの実施態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストはＰＤ−１の、そのリガンド結合パートナーに対する結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ−１リガンド結合パートナーは、ＰＤ−Ｌ１及び／又はＰＤ−Ｌ２である。別の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１の、その結合パートナーに対する結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ−１結合パートナーは、ＰＤ−１及び／又はＢ７−１である。別の実施態様では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２の、その結合パートナーに対する結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ−Ｌ２結合パートナーはＰＤ−１である。アンタゴニストは、抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、又はオリゴペプチドである。

いくつかの実施態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＭＤＸ−１１０６、Ｍｅｒｃｋ３４７５、及びＣＴ０１１でからなる群より選択される。いくつかの実施態様では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０及びＭＤＸ−１１０５でからなる群より選択される。いくつかの実施態様において、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストはＡＭＰ−２２４である。ＭＤＸ−１１０５は、ＢＭＳ−９３６５５９としても知られ、国際公開第２００７／００５８７４号に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。抗体ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０（配列番号２０）は、国際公開第２０１０／０７７６３４Ａ１号に記載される抗ＰＤ−Ｌ１である。ＭＤＸ−１１０６は、ＭＤＸ−１１０６−０４、ＯＮＯ−４５３８又はＢＭＳ−９３６５５８としても知られ、国際公開第２００６／１２１１６８号に記載される抗ＰＤ−１抗体である。Ｍｅｒｃｋ３７４５は、ＭＫ−３４７５又はＳＣＨ−９００４７５としても知られ、国際公開第２００９／１１４３３５号に記載される抗ＰＤ−１抗体である。ＣＴ−０１１は、ｈＢＡＴ又はｈＢＡＴ−１としても知られ、国際公開第２００９／１０１６１１号に記載される抗ＰＤ−１抗体である。ＡＭＰ−２２４は、Ｂ７−ＤＣＩｇとしても知られ、国際公開第２０１０／０２７８２７号及び同第２０１１／０６６３４２号に記載されるＰＤ−Ｌ２−Ｆｃ融合可溶性レセプターである。

この発明の方法に有用な抗ＰＤ−Ｌ１抗体、及びその作製方法の実施例が、ＰＣＴ特許出願国際公開第２０１０／０７７６３４Ａ１号に記載されており、これを参照により本明細書に援用する。

いくつかの実施態様において、ＰＤ−１系結合アンタゴニストは抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。いくつかの実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１との間、及び／又はＰＤ−Ｌ１とＢ７−１との間の結合を阻害することができる。いくつかの実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体はモノクローナル抗体である。いくつかの実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）_２断片からなる群より選択される抗体断片である。いくつかの実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体はヒト化抗体である。いくつかの実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体はヒト抗体である。

本発明に有用な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、国際公開第２０１０／０７７６３４Ａ１号に記載されるものといったこのような抗体を含有する組成物を含み、ＶＥＧＦアンタゴニストありで、又はなしで、癌を治療するためにオキサリプラチン、ロイコボリン、５−ＦＵと組み合わせて使用することができる。

一実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含む重鎖可変領域ポリペプチドを含有し、ここで：
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１配列は、GFTFSX₁SWIH（配列番号１）であり、
（ｂ）ＨｖＲ−Ｈ２配列は、AWIX₂PYGGSX₃YYADSVKG（配列番号２）であり、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３配列は、RHWPGGFDY（配列番号３）であり、
さらに、Ｘ_１はＤ又はＧであり；Ｘ_２はＳ又はＬであり；Ｘ_３はＴ又はＳである。

特定の一態様では、Ｘ_１はＤであり；Ｘ_２はＳであり、Ｘ_３はＴである。別の態様では、ポリペプチドは、以下の式に従ってＨＶＲ間に並置された可変領域重鎖フレームワーク配列を含む。（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｈ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｈ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｈ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）また別の態様では、フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来するものである。さらなる態様では、フレームワーク配列は、ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークである。またさらなる態様では、フレームワーク配列の少なくとも一つは以下である。
ＨＣ−ＦＲ１：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS（配列番号４）
ＨＣ−ＦＲ：WVRQAPGKGLEWV（配列番号５）
ＨＣ−ＦＲ３：RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR（配列番号６）
ＨＣ−ＦＲ４：WGQGTLVTVSA（配列番号７）

またさらなる態様において、重鎖ポリペプチドは、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む可変領域軽鎖とさらに組み合わせられる。
（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１配列：RASQX₄X₅X₆TX₇X₈A（配列番号８）；
（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２配列：SASX₉LX₁₀S（配列番号９）；
（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３配列：QQX₁₁X₁₂X₁₃X₁₄PX₁₅T（配列番号１０）：
さらに、Ｘ_４はＤ又はＶであり；Ｘ_５はＶ又はＩであり；Ｘ_６はＳ又はＮであり；Ｘ_７はＡ又はＦであり；Ｘ_８はＶ又はＬであり；Ｘ_９はＦ又はＴであり；Ｘ_１０はＹ又はＡであり；Ｘ_１１はＹ、Ｇ、Ｆ、又はＳであり；Ｘ_１２はＬ、Ｙ、Ｆ又はＷであり；Ｘ_１３はＹ、Ｎ、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｆ又はＩであり；Ｘ_１４はＨ、Ｖ、Ｐ、Ｔ又はＩであり；Ｘ_１５はＡ、Ｗ、Ｒ、Ｐ又はＴである。

またさらなる態様では、Ｘ_４はＤであり；Ｘ_５はＶであり；Ｘ_６はＳであり；Ｘ_７はＡであり；Ｘ_８はＶであり；Ｘ_９はＦであり；Ｘ_１０はＹであり；Ｘ_１１はＹであり；Ｘ_１２はＬであり；Ｘ_１３はＹであり；Ｘ_１４はＨであり；Ｘ_１５はＡである。またさらなる態様では、軽鎖はさらに、以下の式に従ってＨＶＲ間に並置された可変領域軽鎖フレームワーク配列を含む。（ＬＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）またさらなる態様では、フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来するものである。またさらなる態様では、フレームワーク配列は、ＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークである。またさらなる態様では、フレームワーク配列の少なくとも一つは以下である。
ＬＣ−ＦＲ１：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC（配列番号１１）
ＬＣ−ＦＲ２：WYQQKPGKAPKLLIY（配列番号１２）
ＬＣ−ＦＲ３：GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC（配列番号１３）
ＬＣ−ＦＲ４：FGQGTKVEIKR（配列番号１４）

別の実施態様では、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む、単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体又は抗原結合断片が提供され、ここで、
（ａ）重鎖はＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、さらに：
（ｉ）ＨＶＲ−Ｈ１配列はGFTFSX₁SWIH（配列番号１)であり、
（ｉｉ）ＨＶＲ−Ｈ２配列は、AWIX₂PYGGSX₃YYADSVKG（配列番号２)であり、
（ｉｉｉ）ＨＶＲ−Ｈ３配列は、RHWPGGFDY（配列番号３)であり、
（ｂ）軽鎖はＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含み、さらに：
（ｉ）ＨＶＲ−Ｌ１配列はRASQX₄X₅X₆TX₇X₈A（配列番号８）であり、
（ｉｉ）ＨＶＲ−Ｌ２配列はSASX₉LX₁₀S（配列番号９）であり、
（ｉｉｉ）ＨＶＲ−Ｌ３配列はQQX₁₁X₁₂X₁₃X₁₄PX₁₅T（配列番号１０）であり、
さらに、Ｘ_１はＤ又はＧであり；Ｘ_２はＳ又はＬであり；Ｘ_３はＴ又はＳであり；Ｘ_４はＤ又はＶであり；Ｘ_５はＶ又はＩ；Ｘ_６はＳ又はＮであり；Ｘ_７はＡ又はＦであり；Ｘ_８はＶ又はＬであり；Ｘ_９はＦ又はＴであり；Ｘ_１０はＹ又はＡであり；Ｘ_１１はＹ、Ｇ、Ｆ、又はＳであり；Ｘ_１２はＬ、Ｙ、Ｆ又はＷであり；Ｘ_１３はＹ、Ｎ、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｆ又はＩであり；Ｘ_１４はＨ、Ｖ、Ｐ、Ｔ又はＩであり；Ｘ_１５はＡ、Ｗ、Ｒ、Ｐ又はＴである。

特定の態様では、Ｘ_１はＤであり；Ｘ_２はＳであり、Ｘ_３はＴである。別の態様では、Ｘ_４はＤであり；Ｘ_５はＶであり；Ｘ_６はＳであり；Ｘ_７はＡであり；Ｘ_８はＶであり；Ｘ_９はＦであり；Ｘ_１０はＹであり；Ｘ_１１はＹであり；Ｘ_１２はＬであり；Ｘ_１３はＹであり；Ｘ_１４はＨであり；Ｘ_１５はＡである。また別の態様では、Ｘ_１はＤであり；Ｘ_２はＳであり、Ｘ_３はＴであり、Ｘ_４はＤであり；Ｘ_５はＶであり；Ｘ_６はＳであり；Ｘ_７はＡであり；Ｘ_８はＶであり；Ｘ_９はＦであり；Ｘ_１０はＹであり；Ｘ_１１はＹであり；Ｘ_１２はＬであり；Ｘ_１３はＹであり；Ｘ_１４はＨであり、Ｘ_１５はＡである。

さらなる態様では、重鎖可変領域は、（ＬＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）のように、ＨＶＲ間に並置された一又は複数のフレームワーク配列を含み、軽鎖可変領域は、（ＬＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）のように、ＨＶＲ間に並置された一又は複数のフレームワーク配列を含む。またさらなる態様では、フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来するものである。またさらなる態様では、重鎖フレームワーク配列は、ＫａｂａｔサブグループＩ、ＩＩ、又はＩＩＩ配列由来である。またさらなる態様では、重鎖フレームワーク配列は、ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークである。またさらなる態様では、重鎖フレームワーク配列の一又は複数は、以下である。
ＨＣ−ＦＲ１ EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS（配列番号４）
ＨＣ−ＦＲ２ WVRQAPGKGLEWV（配列番号５）
ＨＣ−ＦＲ３ RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR（配列番号６）
ＨＣ−ＦＲ４ WGQGTLVTVSA（配列番号７）

またさらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、ＫａｂａｔカッパＩ、ＩＩ、ＩＩＩ又はＩＶサブグループ配列由来である。またさらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、ＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークである。またさらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列の一又は複数は、以下である。
ＬＣ−ＦＲ１ DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC（配列番号１１）
ＬＣ−ＦＲ２ WYQQKPGKAPKLLIY（配列番号１２）
ＬＣ−ＦＲ３ GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC（配列番号１３）
ＬＣ−ＦＲ４ FGQGTKVEIKR（配列番号１４）

またさらなる特定の態様では、抗体はヒト又はマウスの定常領域をさらに含む。またさらなる態様では、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群より選択される。またさらなる特定の態様では、ヒト定常領域はＩｇＧ１である。またさらなる態様では、マウス定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３からなる群より選択される。またさらなる態様では、マウス定常領域はＩｇＧ２Ａである。またさらなる態様では、抗体は低い又は最低限のエフェクター機能を有する。またさらなる特定の態様では、最低限のエフェクター機能は、「エフェクターなしＦｃ突然変異」又は非グリコシル化に起因している。またさらなる実施態様では、エフェクターなしＦｃ突然変異は、定常領域における置換Ｎ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａである。

また別の実施態様では、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む、抗ＰＤ−Ｌ１抗体が提供され、ここで、
（ａ）重鎖はさらに、GFTFSDSWIH（配列番号１５）、AWISPYGGSTYYADSVKG（配列番号１６）、及びRHWPGGFDY（配列番号３）それぞれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３をさらに含むか、或いは
（ｂ）軽鎖はさらに、RASQDVSTAVA（配列番号１７）、SASFLYS（配列番号１８）及びQQYLYHPAT（配列番号１９）それぞれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３
をさらに含む。

特定の態様では、配列同一性は、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％である。別の態様では、重鎖可変領域は、（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｈ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｈ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｈ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）のように、ＨＶＲ間に並置された一又は複数のフレームワーク配列を含み、軽鎖可変領域は、（ＬＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）のように、ＨＶＲ間に並置された一又は複数のフレームワーク配列を含む。また別の態様では、フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来するものである。またさらなる態様では、重鎖フレームワーク配列は、カバットサブグループＩ、ＩＩ、又はＩＩＩ配列由来である。またさらなる態様では、重鎖フレームワーク配列は、ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークである。またさらなる態様では、重鎖フレームワーク配列の一又は複数は、以下である。
ＨＣ−ＦＲ１ EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS（配列番号４）
ＨＣ−ＦＲ２ WVRQAPGKGLEWV（配列番号５）
ＨＣ−ＦＲ３ RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR（配列番号６）
ＨＣ−ＦＲ４ WGQGTLVTVSA（配列番号７）

またさらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、カバットカッパＩ、ＩＩ、ＩＩＩ又はＩＶサブグループ配列由来である。またさらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、ＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークである。またさらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列の一又は複数は、以下である。
ＬＣ−ＦＲ１ DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC（配列番号１１）
ＬＣ−ＦＲ２ WYQQKPGKAPKLLIY（配列番号１２）
ＬＣ−ＦＲ３ GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC（配列番号１３）
ＬＣ−ＦＲ４ FGQGTKVEIKR（配列番号１４）

またさらなる実施態様では、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む、単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体が提供され、ここで、
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWIS PYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSA (配列番号２０)に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する、又は
(b)軽鎖配列は、軽鎖配列： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIY SASF LYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR (配列番号２１)に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。

特定の態様では、配列同一性は、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％である。別の態様では、重鎖可変領域は、（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｈ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｈ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｈ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）のように、ＨＶＲ間に並置された一又は複数のフレームワーク配列を含み、軽鎖可変領域は、（ＬＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）のように、ＨＶＲ間に並置された一又は複数のフレームワーク配列を含む。また別の態様では、フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来するものである。さらなる態様では、重鎖フレームワーク配列は、カバットサブグループＩ、ＩＩ、又はＩＩＩ配列由来である。またさらなる態様では、重鎖フレームワーク配列は、ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークである。またさらなる態様では、重鎖フレームワーク配列の一又は複数は、以下である。
ＨＣ−ＦＲ１ EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS（配列番号４）
ＨＣ−ＦＲ２ WVRQAPGKGLEWV（配列番号５）
ＨＣ−ＦＲ３ RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR（配列番号６）
ＨＣ−ＦＲ４ WGQGTLVTVSA（配列番号７）

またさらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、カバットカッパＩ、ＩＩ、III又はＩVサブグループ配列由来である。またさらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、ＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークである。またさらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列の一又は複数は、以下である。
ＬＣ−ＦＲ１ DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC（配列番号１１）
ＬＣ−ＦＲ２ WYQQKPGKAPKLLIY（配列番号１２）
ＬＣ−ＦＲ３ GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC（配列番号１３）
ＬＣ−ＦＲ４ FGQGTKVEIKR（配列番号１４）

またさらなる特定の態様では、抗体はヒト又はマウスの定常領域をさらに含む。またさらなる態様では、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群より選択される。またさらなる特定の態様では、ヒト定常領域はＩｇＧ１である。またさらなる態様では、マウス定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３からなる群より選択される。またさらなる態様では、マウス定常領域はＩｇＧ２Ａである。またさらなる態様では、抗体は低い又は最低限のエフェクター機能を有する。またさらなる特定の態様では、最低限のエフェクター機能は、原核細胞内の産生に起因している。またさらなる特定の態様では、最低限のエフェクター機能は、「エフェクターなしＦｃ突然変異」又は非グリコシル化に起因している。またさらなる実施態様では、エフェクターなしＦｃ突然変異は、定常領域における置換Ｎ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａである。

またさらなる実施態様では、本発明は、少なくとも一つの薬学的に受容可能な担体と組み合わせた上記抗ＰＤ−Ｌ１抗体のいずれかを含む組成物を提供する。

またさらなる実施態様では、抗ＰＩ−Ｌ１抗体の軽鎖又は重鎖可変領域配列をコードする単離された核酸が提供され、ここで、
（ａ）重鎖はさらに、GFTFSDSWIH（配列番号１５）、AWISPYGGSTYYADSVKG（配列番号１６）、及びRHWPGGFDY（配列番号３）それぞれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３をさらに含み、且つ
（ｂ）軽鎖はさらに、RASQDVSTAVA（配列番号１７）、SASFLYS（配列番号１８）及びQQYLYHPAT（配列番号１９）それぞれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３
をさらに含む。

特定の態様では、配列同一性は、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％である。一態様では、重鎖可変領域は、（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｈ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｈ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｈ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）のように、ＨＶＲ間に並置された一又は複数のフレームワーク配列を含み、軽鎖可変領域は、（ＬＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）のように、ＨＶＲ間に並置された一又は複数のフレームワーク配列を含む。また別の態様では、フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来するものである。さらなる態様では、重鎖フレームワーク配列は、カバットサブグループＩ、ＩＩ、又はＩＩＩ配列由来である。またさらなる態様では、重鎖フレームワーク配列は、ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークである。またさらなる態様では、重鎖フレームワーク配列の一又は複数は、以下である。
ＨＣ−ＦＲ１ EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS（配列番号４）
ＨＣ−ＦＲ２ WVRQAPGKGLEWV（配列番号５）
ＨＣ−ＦＲ３ RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR（配列番号６）
ＨＣ−ＦＲ４ WGQGTLVTVSA（配列番号７）

またさらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、カバットカッパＩ、ＩＩ、ＩＩＩ又はＩＶサブグループ配列由来である。またさらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、ＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークである。またさらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列の一又は複数は、以下である。
ＬＣ−ＦＲ１ DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC（配列番号１１）
ＬＣ−ＦＲ２ WYQQKPGKAPKLLIY（配列番号１２）
ＬＣ−ＦＲ３ GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(配列番号１３）
ＬＣ−ＦＲ４ FGQGTKVEIKR（配列番号１４）

またさらなる特定の態様では、抗体はヒト又はマウスの定常領域をさらに含む。またさらなる態様では、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群より選択される。またさらなる特定の態様では、ヒト定常領域はＩｇＧ１である。またさらなる態様では、マウス定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３からなる群より選択される。またさらなる態様では、マウス定常領域はＩｇＧ２Ａである。またさらなる態様では、抗体は低い又は最低限のエフェクター機能を有する。またさらなる特定の態様では、最低限のエフェクター機能は、原核細胞内の産生に起因している。またさらなる特定の態様では、最低限のエフェクター機能は、「エフェクターなしＦｃ突然変異」又は非グリコシル化に起因している。またさらなる態様では、エフェクターなしＦｃ突然変異は、定常領域における置換Ｎ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａである。

またさらなる態様では、核酸は、先述の抗ＰＤ−Ｌ１抗体のいずれかをコードする核酸を発現するために適したベクターをさらに含む。またさらなる特定の態様では、ベクターは、核酸の発現に適した宿主細胞をさらに含む。またさらなる特定の態様では、宿主細胞は真核細胞又は原核細胞である。またさらなる態様では、真核細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）のような哺乳動物の細胞である。

抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合断片は、当技術分野において既知の方法、例えば、発現に適した形態の先述の抗ＰＤ−Ｌ１抗体又は抗原結合断片のいずれかをコードする核酸を含有する宿主細胞を、そのような抗体又は断片の産生に適した条件下で培養し、抗体又は断片を回収するプロセスを用いて作製することができる。

またさらなる実施態様では、本発明は、本明細書において提供される抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合断片と、少なくとも一つの薬学的に受容可能な担体を含む組成物を提供する。

ＶＥＧＦアンタゴニスト
本発明は、個体の癌を治療する又は癌の進行を遅らせる方法を提供するものであり、この方法は、有効量のＰＤ−１経路アンタゴニスト及びＶＥＧＦアンタゴニストを、オキサリプラチン、ロイコボリン、及び５−ＦＵと共に投与することを含む。いずれかの既知のＶＥＧＦアンタゴニストが意図される。

（ｉ）ＶＥＧＦ抗原
抗体の産生に使用されるＶＥＧＦ抗原は、例えば、所望のエピトープを含むＶＥＧＦ_１６５分子、並びにＶＥＧＦの他のアイソフォーム、又はその断片とすることができる。本発明の抗ＶＥＧＦ抗体を生成するために有用なＶＥＧＦの他の形態は当業者には明らかであろう。

ヒトＶＥＧＦは、ウシＶＥＧＦｃＤＮＡをハイブリダイゼーションプローブとして用いて、ヒト細胞から調製されたｃＤＮＡライブラリーをまずスクリーニングすることにより取得された。Leung et al. (1989) Science, 246:1306。これにより同定された一のｃＤＮＡは、ウシＶＥＧＦに対して９５％を上回る相同性を有する１６５アミノ酸タンパク質をコードし；この１６５アミノ酸タンパク質は、典型的にヒトＶＥＧＦ（ｈＶＥＧＦ）又はＶＥＧＦ_１６５と呼ばれる。ヒトＶＥＧＦのマイトジェン活性は、哺乳動物の宿主細胞のヒトＶＥＧＦｃＤＮＡを発現することにより確認された。ヒトＶＥＧＦｃＤＮＡを用いてトランスフェクトされた細胞により条件付けされた培地は、毛細血管内皮細胞の増殖を促進し、一方コントロール細胞は促進しなかった。Lindmark et al（上掲）。

天然源から血管内皮細胞増殖因子を単離及び精製してその後の治療に使用することができたが、ＶＥＧＦ回収の濾胞細胞におけるタンパク質の濃度が比較的低く、労力及び費用両面で高コストであることにより、商業的に無益であった。したがって、組み換えＤＮＡ技術によりＶＥＧＦをクローン化して発現させるために、さらなる労力をかけた。（例えば、Ferrara, Laboratory Investigation 72:615-618 (1995)、及びその引用文献を参照のこと。）

ＶＥＧＦは、代替的なＲＮＡスプライシングの結果得られる複数のホモ二量体型（単量体毎に１２１、１４５、１６５、１８９、及び２０６アミノ酸）として、様々な組織に発現される。ＶＥＧＦ_１２１は、ヘパリンに結合させない可溶性マイトジェンであり；ＶＥＧＦの形態が長くなる程漸次高い親和性でヘパリンに結合させる。ＶＥＧＦヘパリン結合形態は、プラスミンによりカルボキシ端末において切断することで、ＶＥＧＦの拡散性形態を放出することができる。プラスミン切断後に同定されるカルボキシ端末ペプチドのアミノ酸配列決定は、Ａｒｇ_１１０−Ａｌａ_１１１である。アミノ末端「コア」タンパク質である、ホモ二量体として単離されたＶＥＧＦ（１−１１０）は、インタクトなＶＥＧＦ_１６５ホモ二量体と同様の親和性で、中和モノクローナル抗体（例えば、４．６．１及び３．２Ｅ３．１．１と呼ばれる抗体）及びＶＥＧＦレセプターの可溶性形態に結合させる。

ＶＥＧＦに構造的に関連する複数の分子も同定されており、これには胎盤増殖因子（ＰＩＧＦ）、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、及びＶＥＧＦ−Ｅが含まれる。Ferrara and Davis-Smyth (1987) Endocr. Rev., supra; Ogawa et al. J. Biological Chem. 273:31273-31281(1998); Meyer et al. EMBO J., 18:363-374(1999)。レセプターチロシンキナーゼ、Ｆｌｔ４（ＶＥＧＦＲ−３）が、ＶＥＧＦ−Ｃ及びＶＥＧＦ−Ｄのレセプターとして同定されている。Joukov et al. EMBO. J. 15:1751(1996); Lee et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:1988-1992(1996); Achen et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:548-553。ＶＥＧＦＣは、リンパ性血管新生の制御に関与していることが示されている。Jeltsch et al. Science276:1423-1425(1997)。

二つのＶＥＧＦレセプター、Ｆｌｔ−１（ＶＥＧＦＲ−１とも呼ぶ）及びＫＤＲ（ＶＥＧＦＲ−２とも呼ぶ）が同定されている。Shibuya et al. (1990) Oncogene 8:519-527; de Vries et al. (1992) Science 255:989-991; Terman et al. (1992) Biochem. Biophys. Res. Commun. 187:1579-1586。ニューロピリン−１は、選択的なＶＥＧＦレセプターであり、ヘパリン結合ＶＥＧＦアイソフォームに結合できることが示されている（Soker et al. (1998) Cell 92:735-45)）。Ｆｌｔ−Ｉ及びＫＤＲは共にレセプターチロシンキナーゼ（ＲＴＫ）のファミリーに属する。ＲＴＫは、多様な生物活性を有する膜貫通レセプターの大きなファミリーを含む。現在、少なくとも十九（１９）の別個のＲＴＫサブファミリーが同定されている。レセプターチロシンキナーゼ（ＲＴＫ）ファミリーは、様々な細胞種類の増殖及び分化に極めて重要なレセプターを含む（Yarden and Ullrich (1988) Ann. Rev. Biochem.57:433-478; Ullrich and Schlessinger (1990) Cell61:243-254）。ＲＴＫの内因性機能はリガンド結合により活性化され、その結果、レセプター及び複数の細胞基質のリン酸化が起こり、次いで様々な細胞応答が起こる（Ullrich & Schlessinger (1990) Cell61:203-212）。このように、レセプターチロシンキナーゼの媒介によるシグナル伝達は、特定の増殖因子（リガンド）との細胞外相互作用により開始され、その後典型的にはレセプターの二量体化、内因性タンパク質チロシンキナーゼ活性の刺激及びレセプターのリン酸転移が起こる。これにより、細胞内シグナル伝達分子のための結合部位がつくられ、これは適切な細胞応答を促す一連の細胞性シグナル伝達分子との複合体の形成につながる（例えば、細胞***、分化、代謝効果、細胞外微小環境の変化）。Schlessinger and Ullrich (1992) Neuron 9:1-20参照。構造的に、Ｆｌｔ−１及びＫＤＲは共に、細胞外ドメイン内の七つの免疫グロブリン様ドメインと、単一の膜貫通ドメインと、キナーゼ挿入ドメインにより中断されるコンセンサスチロシンキナーゼ配列とを有する。Matthews et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:9026-9030; Terman et al. (1991) Oncogene 6:1677-1683。

（ｉｉ）抗ＶＥＧＦ抗体
本発明の方法において有用な抗ＶＥＧＦ抗体は、ＶＥＧＦに十分な親和性と特異性で結合し、ＶＥＧＦの生物活性を減少させる又は阻害することができる任意の抗体、又はその抗原結合断片を含む。抗ＶＥＧＦ抗体は通常、ＶＥＧＦ−Ｂ、又はＶＥＧＦ−Ｃなどの他のＶＥＧＦホモログにも、ＰｌＧＦ、ＰＤＧＦ又はｂＦＧＦなどの他の増殖因子にも結合しないだろう。

本発明の特定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗体は、ハイブリドーマＡＴＣＣＨＢ１０７０９により産生されるモノクローナル抗ＶＥＧＦ抗体Ａ４．６．１；Presta et al. (1997) Cancer Res. 57:4593-4599に従って生成される組み換えヒト化抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体と同じエピトープに結合するモノクローナル抗体を含むが、これに限定されない。一実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗体は、「ｒｈｕＭＡｂＶＥＧＦ」又は「ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）」としても知られる「ベバシズマブ（ＢＶ）」である。これは、ヒトＶＥＧＦのそのレセプターへの結合を遮断するマウスの抗ｈＶＥＧＦモノクローナル抗体Ａ．４．６．１由来の変異したヒトのＩｇＧ１フレームワーク領域と抗原結合性相補性決定領域を含む。フレームワーク領域のほとんどを含め、ベバシズマブのアミノ酸配列のおよそ９３％は、ヒトのＩｇＧ１に由来し、配列のおよそ７％はマウスの抗体Ａ４．６．１に由来する。

ベバシズマブ及び他のヒト化抗ＶＥＧＦ抗体は、２００５年２月２６日に発行された米国特許第６８８４８７９号にさらに記載されている。さらなる抗体として、国際公開第２００５／０１２３５９号、同第２００５／０４４８５３号、及び米国特許出願第６０／９９１３０２号に記載されているようなＧ６又はＢ２０シリーズの抗体（例えば、Ｇ６−３１、Ｂ２０−４．１）が含まれ、上記特許文献を参照により本明細書に包含することを明記する。さらなる抗体については、米国特許第７０６０２６９号、同第６５８２９５９号、同第６７０３０２０；同第６０５４２９７号；国際公開第９８／４５３３２号；同第９６／３００４６号；同第９４／１０２０２；ＥＰ０６６６８６８Ｂ１；米国特許出願公開第２００６００９３６０号、同第２００５０１８６２０８号、同第２００３０２０６８９９号、同第２００３０１９０３１７号、同第２００３０２０３４０９号、及び同第２００５０１１２１２６；並びにPopkov et al., Journal of Immunological Methods 288:149-164 (2004)を参照のこと。他の抗体には、残基Ｆ１７、Ｍ１８、Ｄ１９、Ｙ２１、Ｙ２５、Ｑ８９、Ｉ９１、Ｋ１０ｌ、Ｅ１０３、及びＣ１０４を含む、又は、代わりに、残基Ｆ１７、Ｙ２１、Ｑ２２、Ｙ２５、Ｄ６３、Ｉ８３及びＱ８９を含む、ヒトＶＥＧＦ上の機能的エピトープに結合するものが含まれる。

本発明の一実施態様において、抗ＶＥＧＦ抗体は、以下のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGYTFT NYGMNWVRQA PGKGLEWVGW
INTYTGEPTY AADFKRRFTF SLDTSKSTAY LQMNSLRAED TAVYYCAKYP
HYYGSSHWYF DVWGQGTLVT VSS（配列番号２２）、
及び以下のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCSASQDIS NYLNWYQQKP GKAPKVLIYF
TSSLHSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YSTVPWTFGQ
GTKVEIKR（配列番号２３）
を含む。

いくつかの実施態様において、抗ＶＥＧＦ抗体は、
以下のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１：GYTFTNYGMN （配列番号２４）、
以下のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２：WINTYTGEPTYAADFKR （配列番号２５）、
以下のアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３：YPHYYGSSHWYFDV （配列番号２６）、
以下のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１：SASQDISNYLN （配列番号２７）、
以下のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２：FTSSLHS （配列番号２８）、及び
以下のアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３：QQYSTVPWT （配列番号２９）
を含む。

本発明に係る「Ｇ６シリーズ抗体」は、国際公開第２００５／０１２３５９号の、図７、図２４〜２６、及び３４〜３５のいずれか一つに記載のＧ６抗体又はＧ６由来抗体の配列に由来する抗ＶＥＧＦ抗体であり、その全開示は、参照により本明細書に援用される。また、開示全体が参照により本明細書に援用される国際公開第２００５／０４４８５３号も参照のこと。一実施態様において、Ｇ６シリーズ抗体は、残基Ｆ１７、Ｙ２１、Ｑ２２、Ｙ２５、Ｄ６３、Ｉ８３及びＱ８９を含むヒトＶＥＧＦ上の機能的なエピトープに結合する。

本発明に係る「Ｂ２０シリーズ抗体」は、国際公開第２００５／０１２３５９号の、図２７〜２９のいずれか一つに記載のＢ２０抗体又はＢ２０由来抗体の配列に由来する抗ＶＥＧＦ抗体であり、その全開示は、参照により本明細書に援用される。また、内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２００５／０４４８５３号及び米国特許出願第６０／９９１３０２号も参照されたい。一実施態様では、Ｂ２０シリーズの抗体は、残基Ｆ１７、Ｍ１８、Ｄ１９、Ｙ２１、Ｙ２５、Ｑ８９、Ｉ９１、Ｋ１０ｌ、Ｅ１０３、及びＣ１０４を含むヒトＶＥＧＦ上の機能的エピトープに結合する。

本発明による「機能的エピトープ」は、抗体の結合にエネルギー的に貢献する抗原のアミノ酸残基を指す。エネルギー的に貢献する抗原の残基のいずれか一つの突然変異（例えば、アラニン又はホモログの突然変異による野生型ＶＥＧＦの突然変異）は抗体の結合を破壊することになり、その場合抗体の相対的な親和性の比（ＩＣ５０突然変異ＶＥＧＦ／ＩＣ５０野生型ＶＥＧＦ）は５を上回る（国際公開第２００５／０１２３５９号）の実施例２を参照）。一実施態様では、相対的な親和性の比は、ＥＬＩＳＡを発現する溶液結合ファージにより決定される。簡単に説明すると、９６ウェルのＭａｘｉｓｏｒｐイムノプレート（ＮＵＮＣ）を、ＰＢＳ中において濃度２ｕｇ／ｍｌの試験対象抗体のＦａｂ形態により４℃で一晩コーティングし、ＰＢＳ、０．５％のＢＳＡ、及び０．０５％のＴｗｅｅｎ２０（ＰＢＴ）を用いて室温で２時間遮断する。ＰＢＴ中にｈＶＥＧＦアラニン点突然変異体（残基８〜１０９の形態）又は野生型ｈＶＥＧＦ（８〜１０９）を発現するファージを段階希釈したものを、まず、Ｆａｂコーティングされたプレート上において室温で１５分間インキュベートし、このプレートをＰＢＳ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０（ＰＢＳＴ）で洗浄する。ＰＢＴ中１：５０００で希釈された抗Ｍ１３モノクローナル抗体西洋わさびペルオキシダーゼ（ＡｍｅｒｓｈａｍＰｈａｒｍａｃｉａ）コンジュゲートにより結合されたファージを検出し、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＢＭ、Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ＆ＰｅｒｒｙＬａｂｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）基体により約５分間発育し、１．０ＭのＨ３ＰＯ４を用いてクエンチし、分光光度法により４５０ｎｍにおいて読み取りを行う。ＩＣ５０値の比（ＩＣ５０，ａｌａ／ＩＣ５０，ｗｔ）は、結合親和性（相対的結合親和性）の減少の倍数を表す。

（ｉｉｉ）ＶＥＧＦレセプター分子
最も特徴づけの済んだ二つのＶＥＧＦレセプターは、ＶＥＧＦＲ１（Ｆｌｔ−１としても知られる）と、ＶＥＧＦＲ２（マウスホモログのＦＬＫ−１及びＫＤＲとしても知られる）である。各ＶＥＧＦファミリーメンバーの各レセプターの特異性は様々であるが、ＶＥＧＦ−ＡはＦｌｔ−１及びＫＤＲの両方に結合する。完全長Ｆｌｔ−１レセプターは、七つのＩｇドメイン、膜貫通ドメインを有する細胞内ドメインと、チロシンキナーゼ活性を有する細胞外ドメインとを含む。細胞外ドメインは、ＶＥＧＦの結合に関与しており、細胞内ドメインは信号伝達に関与している。

ＶＥＧＦに特異的に結合するＶＥＧＦレセプター分子、又はその断片は、ＶＥＧＦタンパク質に結合して隔離することで、シグナル伝達することを阻止するために、本発明の方法で使用することができる。特定の実施態様では、ＶＥＧＦレセプター分子又はそのＶＥＧＦ結合断片は、ｓＦｌｔ−１といった可溶性の形態である。レセプタードの可溶性形態は、ＶＥＧＦに結合することにより、標的細胞の表面上に存在する天然レセプターに結合することを防ぐことによって、ＶＥＧＦタンパク質の生物活性に対する阻害効果を発揮する。さらにはＶＥＧＦレセプター融合タンパク質が含まれ、その例を後述する。

キメラＶＥＧＦレセプタータンパク質は、少なくとも二つの異なるタンパク質由来のアミノ酸配列を有するレセプター分子であり、タンパク質のうちの少なくとも一つは、ＶＥＧＦに結合してその生物活性を阻害することのできるＶＥＧＦレセプタータンパク質（例えば、ｆｌｔ−１又はＫＤＲレセプター）である。特定の実施態様では、本発明のキメラＶＥＧＦレセプタータンパク質は、二つの異なるＶＥＧＦレセプターのみに由来するアミノ酸配列からなるが、ｆｌｔ−１及び／又はＫＤＲレセプターの細胞外リガンド結合領域のＩｇ様ドメインのうちの一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、六つ、又は七つすべてを含むアミノ酸配列を他の無関係なタンパク質由来のアミノ酸配列、例えば免疫グロブリン配列にリンクすることができる。Ｉｇ様ドメインを組み合わせる他のアミノ酸配列は、当業者であれば容易に分かるであろう。キメラＶＥＧＦレセプタータンパク質の例には、例えば、可溶性Ｆｌｔ−１／Ｆｃ、ＫＤＲ／Ｆｃ、又はＦＬｔ−１／ＫＤＲ／Ｆｃ（ＶＥＧＦトラップとしても知られる）が含まれる。（例えば、国際公開第９７／４４４５３号を参照のこと。）

本発明の可溶性ＶＥＧＦレセプタータンパク質又はキメラＶＥＧＦレセプタータンパク質には、膜貫通ドメインを介して細胞表面に固定されないＶＥＧＦレセプタータンパク質が含まれる。したがって、ＶＥＧＦレセプターの可溶性形態は、キメラレセプタータンパク質を含めて、ＶＥＧＦに結合して不活性化できる一方、膜貫通ドメインを含まず、したがって通常は分子を発現する細胞の細胞膜に関連付けられることはない。

ＩＶ．キット
別の態様では、個体の癌を治療すること又は癌の進行を遅らせること又は癌を有する個体の免疫機能を亢進させることを目的とした、ＰＤ−Ｌ１系結合アンタゴニスト、及び／又はＶＥＧＦアンタゴニストを含むキットが提供される。いくつかの実施態様では、キットは、ＰＤ−１系結合アンタゴニストと、個体の癌を治療するため又は癌の進行を遅らせるため、或いは癌を有する個体の免疫機能を亢進させるために、ＶＥＧＦアンタゴニストを含む又は含まない、オキサリプラチン、ロイコボリン、５−ＦＵと組み合わせて、ＰＤ−１系結合アンタゴニストを使用するための指示を含むパッケージ挿入物とを含む。いくつかの実施態様では、キットは、ＶＥＧＦアンタゴニストを含む又は含まない、オキサリプラチン、ロイコボリン、５−ＦＵと、個体の癌を治療するため又は癌の進行を遅らせるため、或いは癌を有する個体の免疫機能を亢進させるために、ＶＥＧＦアンタゴニストを含む又は含まない、オキサリプラチン、ロイコボリン、５−ＦＵと組み合わせてＰＤ−１系結合アンタゴニストを使用するための指示を含むパッケージ挿入物とを含む。いくつかの実施態様では、キットは、ＰＤ−１系結合アンタゴニストと、ＶＥＧＦアンタゴニストを含む又は含まない、オキサリプラチン、ロイコボリン、５−ＦＵと、個体の癌を治療するため又は癌の進行を遅らせるため、或いは癌を有する個体の免疫機能を亢進させるために、ＰＤ−１系結合アンタゴニストと、ＶＥＧＦアンタゴニストを含む又は含まない、オキサリプラチン、ロイコボリン、５−ＦＵとを使用するための指示を含むパッケージ挿入物とを含む。本明細書に記載するＰＤ−１系結合アンタゴニスト及び／又はＶＥＧＦアンタゴニストのいずれかを、キットに含めることができる。

限定ではなく、例示を目的として提供される以下の実施例を参照することにより、本発明に対する理解をさらに深めることができる。

実施例１：抗ＶＥＧＦ抗体を含む又は含まないＦＯＬＦＯＸは抗ＰＤ−Ｌ１の抗腫瘍活性を亢進させた
ＦＯＬＦＯＸ（オキサリプラチン、ロイコボリン、及び５−フルオロウラシル）が抗ＰＤ−Ｌ１の抗腫瘍活性を亢進させたかどうかを決定するために、結腸直腸癌のマウスモデルを併用療法により治療した。簡単に説明すると、メスＣ５７ＢＬ／６マウスの片側の胸部領域に、ＨＢＳＳマトリゲル１００マイクロリットル中１００，０００個のＭＣ３８マウス結腸直腸細胞を皮下播種した。平均腫瘍体積２２０ｍｍ^３に達したら、マウスを以下に概要を記載した治療群の一つにランダムに割り付けて、実験０日目とした。治療は実験１日目に開始した。試験期間中、週に２〜３回にわたり、マウスの体重測定と腫瘍の計測を行った。

実験群は以下の通りであった。
１）コントロール（アイソタイプコントロール抗体（抗ｇｐ１２０抗体））、１０ｍｇ／ｋｇｉｐ、１００マイクロリットル、週に３回、３週間にわたり投与。ｎ＝１０。
２）抗ＰＤ−Ｌ１抗体、１０ｍｇ／ｋｇｉｐ、１００マイクロリットル、週に３回、３週間にわたり投与。ｎ＝１０。
３）ＦＯＬＦＯＸ（下記参照）、週に１回、２週間にわたり投与。ｎ＝１０。
４）ＦＯＬＦＯＸ（下記参照）、週に１回、２週間にわたり投与＋抗ＰＤ−Ｌ１抗体、１０ｍｇ／ｋｇｉｐ、１００マイクロリットル、週に３回、３週間にわたり投与。ｎ＝１０。
５）ＦＯＬＦＯＸ（下記参照）、週に１回、２週間にわたり投与＋抗ＶＥＧＦ抗体、５ｍｇ／ｋｇｉｐ、１００マイクロリットル、週に２回、３週間にわたり投与。ｎ＝１０。
６）ＦＯＬＦＯＸ（下記参照）、週に１回、２週間にわたり投与＋抗ＶＥＧＦ抗体、５ｍｇ／ｋｇｉｐ、１００ｕＬ、週に２回、３週間にわたり投与＋抗ＰＤ−Ｌ１抗体、１０ｍｇ／Ｋｇｉｐ、１００マイクロリットル、週に３回、３週間にわたり投与。ｎ＝１０。
ｉｐ＝腹腔内
ｓｃ＝皮下

これらの試験のために、ＦＯＬＦＯＸの投与を次のように行った：実験１日目及び実験８日目に、マウスに対し、水１５マイクロリットル中５ｍｇ／ｋｇのオキサリプラチンをｉｐ投与した直後に、水２５０マイクロリットル中１００ｍｇ／ｋｇのロイコボリンを投与し（投与時間＝０時間）、２５ｍｇ／ｋｇの５−ＦＵをいｐ投与した直後に２５ｍｇ／ｋｇの５ＦＵをｓｃ投与した（投与時間＝２時間）。抗ＰＤ−Ｌ１抗体及び抗ｇｐ１２０抗体を、実験１、３、５、８、１０、１２、１５、１７及び１９日目に投与した（投与時間＝４時間）、抗ＶＥＧＦ抗体を、実験１、４、８、１１、１５、１８日目に投与した（投与時間＝６時間）。

腫瘍の増殖及び体重の変化についてマウスをモニタリングした。ＵｌｔｒａＣａｌＩＶキャリパー（モデル５４−１０−１１１；ＦｒｅｄＶ．ＦｏｗｌｅｒＣｏｍｐａｎｙ；Ｎｅｗｔｏｎ，ＭＡ）を用いて腫瘍体積を計測した。以下の公式を使用して腫瘍体積を算出した。
腫瘍体積（ｍｍ^３）＝（長さ×幅^２）×０．５
長さ及び幅の計測値は互いに直交していた。動物の体重はＡｄｖｅｎｔｕｒａＰｒｏＡＶ８１２スケール（ＯｈａｕｓＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；ＰｉｎｅＢｒｏｏｋ，ＮＪ）を用いて測定した。体重変化の割合は、次の式を用いて算出した。
体重の変化（％）＝［（重量_当日−重量_０日目）×１００

Ｒのバージョン２．９．２（ＲＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＣｏｒｅＴｅａｍ２００８；ＲＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒＳｔａｔｉｓｔｉｃａｌＣｏｍｐｕｔｉｎｇ；Ｖｉｅｎｎａ，Ａｕｓｔｒｉａ）を用いてデータを解析し、ｎｌｍｅパッケージのバージョン３．１−９６（Ｐｉｎｈｅｉｒｏｅｔａｌ．２００９）を用いてＲ内部に混合モデルを適合させた。ＰｒｉｓｍのＭａｃ用バージョン５．０ｂ（ＧｒａｐｈＰａｄＳｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．；ＬａＪｏｌｌａ，ＣＡ）においてプロッティングを実行した。

混合モデル化法を使用して、経時的に同じ動物由来の腫瘍体積の反復測定を解析した（ＰｉｎｈｅｉｒｏａｎｄＢａｔｅｓ２０００）。この方法は、統計的にランダムな欠損（ＭＡＲ）として分類可能な理由のために、反復測定と、試験終了前の適度なドロップアウトとの両方に対処する。時間及び用量によるｌｏｇ_２（体積）の、固定された効果の変化は、時間における自然な三次回帰スプライン基底の主要な効果及び相互作用と、用量における自動決定された自然なスプライン規定との和としてモデル化される。切片及び増加率（傾き）は、動物によってランダムに変動すると思われた。コントロール治療群の割合（％ＴＧＩ）としての腫瘍増殖阻害は、以下の式を用いて、コントロール治療マウスがまだ試験中である間に、コントロールに対する、一日あたり各治療群に関する近似曲線下面積（ＡＵＣ）の割合として算出した。
％ＴＧＩ = １００ ×（１ - ＡＵＣ_用量／ＡＵＣ_溶媒）

このような試験のために、完全寛解（ＣＲ）を、試験期間中のいずれかの時点で個々の動物の腫瘍体積が検出限界（ＬＯＤ）を下回った場合と定義づけた。部分寛解（ＰＲ）は、試験期間中のいずれかの時点で、個々の動物の腫瘍体積がその初期腫瘍体積の５０％減少した場合と定義づけた。全奏効率（ＯＲＲ）は、完全寛解と部分寛解との合計と定義づけた。腫瘍増殖停止時間５Ｘ（ＴＴＰ５Ｘ）は、ある群の適合する腫瘍体積（上述の混合モデル化解析に基づく）が、開始時体積の５倍を超えるのに要した日数を、半日単位で丸めたものと定義し、その群のＴＴＰ５Ｘとして報告した。同じ動物の体重の経時的な反復測定を解析するために、線形混合効果解析も採用した。

抗ＰＤ−Ｌ１抗体を用いたＰＤ−１系の遮断は、腫瘍増殖を防ぐために、単剤療法として効果的であった。抗ＰＤ−Ｌ１抗体と、オキサリプラチン、ロイコボリン、及び５−ＦＵ（ＦＯＬＦＯＸ）との併用療法は腫瘍増殖を有意に阻害し、これによりこの化学療法の組み合わせが抗ＰＤ−Ｌ１抗体の抗腫瘍活性を亢進させることが示された（図１）。この併用療法への抗ＶＥＧＦの追加は、この抗腫瘍活性と、さらには治療の中止後の抗腫瘍応答の持続性とをさらに亢進させた（図４）。

実施例２：修飾されたＦＯＬＦＯＸ−６を含む又は含まないベバシズマブを有するＭＰＤＬ３２８０Ａのフェーズ１ｂ試験
本試験の主要な目的は、転移性結腸直腸癌（ｍＣＲＣ）を含む固形腫瘍を有する患者に対し、ベバシズマブ（治療群Ａ）、及びベバシズマブ＋ＦＯＬＦＯＸ（具体的には、修飾したＭＯＬＦＯＸ−６、又はｍＦＯＬＦＯＸ−６；治療群Ｂ）と共に投与されたＭＰＤＬ３２８０Ａの、安全性、薬効薬理、及び予備効能を評価することである。治療群Ａは、ベバシズマブ（１５ｍｇ／ｋｇ）と共に１０ｍｇ／ｋｇ（又は単剤のＭＴＤ又はＭＡＤ）を超えない選択された用量レベル）で、一年間にわたり３週間毎に（ｑ３ｗ）投与されるＭＰＤＬ３２８０Ａを評価する。転移性疾患のためにオキサリプラチンを投与されない患者は、治療群Ｂに登録されて、ベバシズマブ及びＦＯＬＦＯＸと共にＭＰＤＬ３２８０Ａを２週間毎に（ｑ２ｗ）投与される。ｍＦＯＬＦＯＸ−６治療計画の構成は下記のとおりである：オキサリプラチン（８５ｍｇ／ｍ^２）を静脈内（ＩＶ）投与、それと同時にロイコボリン（４００ｍｇ／ｍ^２）を約１２０分かけてＩＶ投与、その後５−ＦＵ（４００ｍｇ／ｍ^２）をＩＶボーラスとして投与し、その後２４００ｍｇ／ｍ^２を約４６時間かけて継続的ＩＶ点滴により投与した。オキサリプラチンは８サイクルまで投与する。治療は一年間継続する。

Claims

個体における癌を治療する又は癌の進行を遅らせる方法であって、個体に対し、有効量のＰＤ−１系結合アンタゴニスト、オキサリプラチン、ロイコボリン、及び５−ＦＵを投与することを含む方法。
ＰＤ−１系結合アンタゴニストが、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、及びＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
ＰＤ−１系結合アンタゴニストがＰＤ−１結合アンタゴニストである、請求項２に記載の方法。
ＰＤ−１結合アンタゴニストが、そのリガンド結合パートナーに対するＰＤ−１の結合を阻害する、請求項３に記載の方法。
ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ１に対するＰＤ−１の結合を阻害する、請求項４に記載の方法。
ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ２に対するＰＤ−１の結合を阻害する、請求項４に記載の方法。
ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２両方に対するＰＤ−１の結合を阻害する、請求項４に記載の方法。
ＰＤ−１結合アンタゴニストが抗体である、請求項４に記載の方法。
ＰＤ−１結合アンタゴニストがＭＤＸ−１１０６である、請求項８に記載の方法。
ＰＤ−１結合アンタゴニストがＭｅｒｃｋ３７４５である、請求項８に記載の方法。
ＰＤ−１結合アンタゴニストがＣＴ−０１１である、請求項８に記載の方法。
ＰＤ−１系結合アンタゴニストがＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストである、請求項２に記載の方法。
ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストが、ＰＤ−１に対するＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する、請求項１２に記載の方法。
ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストが、Ｂ７−１に対するＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する、請求項１２に記載の方法。
ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストが、ＰＤ−１及びＢ７−１両方に対するＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する、請求項１２に記載の方法。
ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストが抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項１２に記載の方法。
抗ＰＤ−Ｌ１抗体がモノクローナル抗体である、請求項１６に記載の方法。
抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）_２断片からなる群より選択される抗体断片である、請求項１６に記載の方法。
抗ＰＤ−Ｌ１抗体がヒト化抗体である、請求項１６に記載の方法。
抗ＰＤ−Ｌ１抗体がヒト抗体である、請求項１６に記載の方法。
ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストが、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０及びＭＤＸ−１１０５からなる群より選択される、請求項１６に記載の方法。
ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストがＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である、請求項２１に記載の方法。
ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストがＭＤＸ−１１０５である、請求項２１に記載の方法。
ＰＤ−１系結合アンタゴニストがＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストである、請求項２に記載の方法。
ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストが抗体である、請求項２４に記載の方法。
ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストがイムノアドヘシンである、請求項２４に記載の方法。
ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストがＡＭＰ−２２４である、請求項２４に記載の方法。
ＶＥＧＦアンタゴニストを投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
ＶＥＧＦアンタゴニストが抗ＶＥＧＦ抗体である、請求項２８に記載の方法。
前記抗ＶＥＧＦ抗体が、ハイブリドーマＡＴＣＣＨＢ１０７０９により生成されるモノクローナル抗ＶＥＧＦ抗体Ａ４．６．１と同じエピトープに結合する、請求項２９に記載の方法。
抗ＶＥＧＦ抗体がヒト化抗体である、請求項２９に記載の方法。
抗ＶＥＧＦ抗体がベバシズマブである、請求項２９に記載の方法。
抗ＶＥＧＦ抗体が、以下のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGYTFT NYGMNWVRQA PGKGLEWVGW
INTYTGEPTY AADFKRRFTF SLDTSKSTAY LQMNSLRAED TAVYYCAKYP
HYYGSSHWYF DVWGQGTLVT VSS（配列番号２２）、
及び以下のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCSASQDIS NYLNWYQQKP GKAPKVLIYF
TSSLHSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YSTVPWTFGQ
GTKVEIKR（配列番号２３）
を含む、請求項２９に記載の方法。
治療により、治療中止後個体における応答が持続する、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
被験体が結腸直腸癌を有する、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
ＰＤ−１系結合アンタゴニストと、個体の癌を治療するため又は癌の進行を遅らせるために、オキサリプラチン、ロイコボリン、及び５−ＦＵと組み合わせてＰＤ−１系結合アンタゴニストを使用するための指示書を含むパッケージ挿入物とを含むキット。
ＰＤ−１系結合アンタゴニスト、オキサリプラチン、ロイコボリン、及び５−ＦＵと、個体の癌を治療するため又は癌の進行を遅らせるために、ＰＤ−１系結合アンタゴニスト、並びにオキサリプラチン、ロイコボリン、及び５−ＦＵを使用するための指示書を含むパッケージ挿入物とを含むキット。
ＰＤ−１系結合アンタゴニストが抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項３６又は３７に記載の方法。
ＰＤ−１系結合アンタゴニストが抗ＰＤ−１抗体である、請求項３６又は３７に記載の方法。
ＰＤ−１系結合アンタゴニストがＰＤ−Ｌ２イムノアドヘシンである、請求項３６又は３７に記載の方法。