JP2017528418A - 抗葉酸受容体アルファ（ｆｒａ）抗体−薬物コンジュゲート及びその使用方法 - Google Patents

抗葉酸受容体アルファ（ｆｒａ）抗体−薬物コンジュゲート及びその使用方法 Download PDF

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Abstract

本開示は、親水性自壊性リンカーを含む抗葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）抗体−薬物コンジュゲートを提供する。本開示は、がんを治療するための組成物及び方法を更に提供する。【選択図】なし

Description

関連出願とのクロスリファレンス
本出願は、２０１４年６月２０日に出願された米国仮特許出願第６２／０１５３２１号の優先権の利益を主張し、その開示は参照により全体が本明細書に援用される。
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出物の内容は、参照により全体が本明細書に援用される：コンピューター読み取り可能な形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：６０６５９２００１０４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、データ記録日：２０１５年６月１６日、サイズ：４４ＫＢ）。
発明の分野
本発明は、がん治療の分野にあり、抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）フォーマットを通じてがん細胞に細胞傷害性薬物を特異的に送達するための有効性及び特異性を提供する。
抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の特異性を細胞傷害性分子の力価と組み合わせる治療薬のクラスである。ＡＤＣの使用は、コンジュゲートされた細胞傷害性剤による抗体のがん死滅活性を可能とする一方で、標的特異的送達により、遊離の毒性剤に対する曝露によって引き起こされる全身毒性を回避する。２０１４年５月現在、二種のＡＤＣが、ヒトがんを治療するためにＦＤＡによって承認されている。細胞傷害性剤ＭＭＡＥとコンジュゲートした抗ＣＤ３０抗体であるＡｄｃｅｔｒｉｓ（ブレンツキシマブベドチン又はＳＧＮ−３５）は、ＣＤ３０陽性再発リンパ腫を治療するために設計されている。細胞傷害性剤ＤＭ１とコンジュゲートした抗ＨＥＲ２抗体であるＫａｄｃｙｌａ（Ｔ−ＤＭ１）は、ＨＥＲ２陽性転移性乳がんを治療するために設計されている。
リンカー技術は、ＡＤＣの力価、特異性、及び安全性に強い影響を及ぼす。酵素不安定リンカーは、細胞の内側及び外側のプロテアーゼの活性の差を利用して、薬物放出のコントロールを達成する。薬物は、ペプチド結合を介して抗体にコンジュゲートさせることができ、細胞の内側に存在するリソソームプロテアーゼの作用により、また、ある腫瘍型における上昇値で、抗体から特異的に切断され得るにすぎない（Koblinskiら(2000) Clin. Chem. Acta 291:113-135）。このことは、血流でのリンカーの安定性を確実にして健康な組織に対するダメージを制限する。しかしながら、いくつかの酵素不安定リンカーの疎水性の増加は、特に、高い疎水性を持つ薬物とのＡＤＣの凝集をもたらし得る。親水性の自壊性リンカーは、特異的酵素に対して不安定となる設計を介してより良好な血清安定性をもたらし、及び不均一ながん細胞に対するバイスタンダー効果を介してより良好な有効性を達成し得る。
葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）は、高い親和性で葉酸に結合して、受容体媒介エンドサイトーシスを介して葉酸塩の細胞取り込みを媒介する膜タンパク質である（Leamonら、1991, PNAS 88:5572-5576）。ＦＲＡの過剰発現は、９０％の上皮卵巣がん、並びに子宮内膜がん、腎臓がん、肺がん、中皮腫、乳がん、脳がん、及び骨髄性白血病を含む多数のその他のがんで見られたが、ほとんどの正常組織が低レベルからごくわずかなレベルを発現する（Coneyら、1991, Cancer Res. 51:6125-6132）。がんと正常組織のＦＲＡの発現プロファイルの差により、抗体に基づく治療の開発が正しいことが保証される。マウスモノクローナル抗ＦＲＡ抗体のヒト化形態は、前臨床試験において有効であることが示されており（Ebelら、2007, Cancer Immun 7:1-8）、現在、ＦＲＡ発現腫瘍を有する患者において評価されている（Kalliら、2007, Curr Opin Investig 8:1067-1073）。更に、ＦＲＡがエンドサイトーシスを媒介できることにより、ＦＲＡは、がんを標的とするＡＤＣの開発のための魅力的な候補となる。今日まで、様々な薬物コンジュゲート及び抗ＦＲＡ抗体が臨床試験で試験されており、安全性が実証されている（Xiaら、2010, J Med Chem. 53:6811-6824; Zacchettiら、2009, Nucl Med Biol. 36: 759-770）。
抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）フォーマットを通じて、細胞傷害性薬物をがん細胞に送達することができる改善された有効性を有する抗がん治療が必要である。
本開示の化合物は、薬物部分、選択された細胞集団（例えば、葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）を発現する細胞集団）を標的とすることができる抗体である標的化部分、及びアシル単位を含有するリンカー、薬物部分と標的化部分（例えば、抗ＦＲＡ抗体）との間に距離を与えるための任意のスペーサー単位、適切な条件下で開裂可能であり得るペプチドリンカー、親水性の自壊性リンカー、及び任意の第二の自壊性スペーサー又は環化自己脱離リンカーを含む。
本開示は、式（Ｉ）：
Figure 2017528418
［式中：
Ｄは薬物部分であり；
Ｔは葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）（例えば、ヒトＦＲＡ）に特異的に結合する抗体である標的化部分であり；
Ｘは親水性の自壊性リンカーであり；
Ｌ１は結合、第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーであり；
Ｌ２は結合又は第二の自壊性リンカーであって；
ここで、Ｌ１が第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーである場合に、Ｌ２は結合であり；
ここで、Ｌ２が第二の自壊性リンカーである場合に、Ｌ１は結合であり；
Ｌ３はペプチドリンカーであり；
Ｌ４は結合又はスペーサーであり；且つ
Ａはアシル単位である］
の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を提供する。
本開示は、式（ＩＩ）：
Figure 2017528418
［式中、
Ｄは薬物部分であり；
Ｔは葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）（例えば、ヒトＦＲＡ）に特異的に結合する抗体である標的化部分であり；
Ｒ１は水素、無置換若しくは置換Ｃ１−３アルキル、又は無置換若しくは置換ヘテロシクリルであり；
Ｌ１は結合、第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーであり；
Ｌ２は結合又は第二の自壊性リンカーであって；
ここで、Ｌ１が第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーである場合に、Ｌ２は結合であり；
ここで、Ｌ２が第二の自壊性リンカーである場合に、Ｌ１は結合であり；
Ｌ３はペプチドリンカーであり；
Ｌ４は結合又はスペーサーであり；且つ
Ａはアシル単位である］
の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を提供する。
本開示は、式（Ｉａ）：
Figure 2017528418
［式中、
ｐは、１から２０であり；
Ｄは薬物部分であり；
Ｔは葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）（例えば、ヒトＦＲＡ）に特異的に結合する抗体である標的化部分であり；
Ｘは親水性の自壊性リンカーであり；
Ｌ１は結合、第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーであり；
Ｌ２は結合又は第二の自壊性リンカーであって；
ここで、Ｌ１が第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーである場合に、Ｌ２は結合であり；
ここで、Ｌ２が第二の自壊性リンカーである場合に、Ｌ１は結合であり；
Ｌ３はペプチドリンカーであり；
Ｌ４は結合又はスペーサーであり；且つ
Ａはアシル単位である］
の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を提供する。
本開示は、式（ＩＩａ）：
Figure 2017528418
［式中、
ｐは、１から２０であり；
Ｄは薬物部分であり；
Ｔは葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）（例えば、ヒトＦＲＡ）に特異的に結合する抗体である標的化部分であり；
Ｒ１は水素、無置換若しくは置換Ｃ１−３アルキル、又は無置換若しくは置換ヘテロシクリルであり；
Ｌ１は結合、第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーであり；
Ｌ２は結合又は第二の自壊性リンカーであって；
ここで、Ｌ１が第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーである場合に、Ｌ２は結合であり；
ここで、Ｌ２が第二の自壊性リンカーである場合に、Ｌ１は結合であり；
Ｌ３はペプチドリンカーであり；
Ｌ４は結合又はスペーサーであり；且つ
Ａはアシル単位である］
の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を提供する。
上記の化合物のある実施態様において、ｐは１から４である。ある実施態様において、Ｌ１は結合である。ある実施態様において、Ｌ１は、第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーである。ある実施態様において、Ｌ１は、アミノベンジルオキシカルボニルリンカーである。ある実施態様において、Ｌ１は、
Figure 2017528418
［式中ｎは１又は２である］
からなる群より選択される。
ある実施態様において、Ｌ１は、
Figure 2017528418
からなる群より選択される。
上記の化合物のある実施態様において、Ｌ２は結合である。ある実施態様において、Ｌ２は、第二の自壊性リンカーである。ある実施態様において、Ｌ２は、アミノベンジルオキシカルボニルリンカーである。ある実施態様において、Ｌ２は、
Figure 2017528418
［式中ｎは１又は２である］
から選択される。
上記の化合物のある実施態様において、Ｌ３は、１から１０のアミノ酸残基のペプチドリンカーである。ある実施態様において、Ｌ３は、２から４のアミノ酸残基のペプチドリンカーである。ある実施態様において、Ｌ３は、少なくとも一のリジン又はアルギニン残基を含むペプチドリンカーである。ある実施態様において、Ｌ３は、リジン、Ｄ−リジン、シトルリン、アルギニン、プロリン、ヒスチジン、オルニチン、及びグルタミンから選択されるアミノ酸残基を含むペプチドリンカーである。ある実施態様において、Ｌ３は、バリン、イソロイシン、フェニルアラニン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、アラニン、ロイシン、トリプトファン、及びチロシンから選択されるアミノ酸残基を含むペプチドリンカーである。ある実施態様において、Ｌ３は、バリン−シトルリン、プロリン−リジン、メチオニン−Ｄ−リジン、アスパラギン−Ｄ−リジン、イソロイシン−プロリン、フェニルアラニン−リジン、及びバリン−リジンから選択されるジペプチド単位である。ある実施態様において、Ｌ３は、バリン−シトルリンである。
上記の化合物のある実施態様において、Ｌ４は結合である。ある実施態様において、Ｌ４はスペーサーである。ある実施態様において、スぺ−サーは、ポリアルキレングリコール、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、又はポリアミンである。ある実施態様において、Ｌ４は、Ｌ４ａ−Ｃ（Ｏ）、Ｌ４ａ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ、Ｌ４ａ−Ｓ（Ｏ）２、又はＬ４ａ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＨであって、各Ｌ４ａは、独立してポリアルキレングリコール、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、又はポリアミンである。ある実施態様において、Ｌ４はＬ４ａ−Ｃ（Ｏ）であって、Ｌ４ａは、ポリアルキレングリコール、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、又はポリアミンである。ある実施態様において、Ｌ４はＬ４ａ−Ｃ（Ｏ）であって、Ｌ４ａはポリアルキレングリコールである。ある実施態様において、Ｌ４はＬ４ａ−Ｃ（Ｏ）であって、Ｌ４ａはポリエチレングリコールである。ある実施態様において、スペーサーは、式−ＣＨ２−（ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｍ−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−のスペーサーであって、ｍは０から３０の整数である。ある実施態様において、Ｌ４はＬ４ａ−Ｃ（Ｏ）であって、Ｌ４ａはアルキレンである。
上記の化合物のある実施態様において、Ａは、
Figure 2017528418
［式中、Ｑ２はＮＨ又はＯであり、各ｑは独立して１から１０の整数であり、各ｑ１は独立して１から１０の整数である］からなる群より選択される。ある実施態様において、ｑは、２、３、４、又は５である。ある実施態様において、ｑ１は、２、３、４、又は５である。ある実施態様において、Ａは、
Figure 2017528418
［式中、各Ｑ２は、独立してＮＨ又はＯであり、各ｑは独立して１から１０の整数である］からなる群より選択される。ある実施態様において、ｑは、２、３、４又は５である。ある実施態様において、Ａは、
Figure 2017528418
［式中、各Ｑ２は独立してＮＨ又はＯである］からなる群より選択される。
上記の化合物のある実施態様において、抗葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）抗体の重鎖の一又は複数のアミノ酸残基は、一又は複数のシステイン残基で置き換えられている。ある実施態様において、抗体は重鎖定常領域（例えば、ヒトＩｇＧの重鎖定常領域）を含み、重鎖定常領域（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、又はＣＨ３）における一又は複数のアミノ酸残基は、一又は複数のシステイン残基で置き換えられている。ある実施態様において、抗体は重鎖定常領域（例えば、ヒトＩｇＧの重鎖定常領域）を含み、重鎖定常領域における１５５、１５７、１６５、１６９、１９７、１９９、及び４４２位から選択される一又は複数のアミノ酸残基は、一又は複数のシステイン残基で置き換えられており、番号付けはカバットのＥＵインデックスに従う。ある実施態様において、抗体は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、ヒトＩｇＧ４、又はヒトＩｇＧ４ｐの重鎖定常領域を含み、重鎖定常領域における１５５、１５７、１６５、１６９、１９７、１９９、及び４４２位から選択される一又は複数のアミノ酸残基は、一又は複数のシステイン残基で置き換えられており、番号付けはカバットのＥＵインデックスに従う。ある実施態様において、抗体は配列番号３２及び配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含み、重鎖定常領域における１５５、１５７、１６５、１６９、１９７、１９９、及び４４２位から選択される一又は複数のアミノ酸残基は、一又は複数のシステイン残基で置き換えられており、番号付けはカバットのＥＵインデックスに従う。
上記の化合物のある実施態様において、抗葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）抗体の軽鎖の一又は複数のアミノ酸残基は、システイン残基で置き換えられている。ある実施態様において、抗体は軽鎖定常領域（例えば、ヒトカッパ軽鎖定常領域）を含み、抗体の軽鎖定常領域における一又は複数のアミノ酸残基は一又は複数のシステイン残基で置き換えられている。ある実施態様において、抗体は、軽鎖定常領域を含み、軽鎖定常領域における２０１及び２０６位から選択される一又は複数のアミノ酸残基は、一又は複数のシステイン残基で置き換えられており、番号付けはカバットのＥＵインデックスに従う。ある実施態様において、抗体は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、ヒトＩｇＧ４、又はヒトＩｇＧ４ｐの軽鎖定常領域（例えば、カッパ軽鎖定常領域）を含み、軽鎖定常領域における２０１及び２０６位から選択される一又は複数のアミノ酸残基は、一又は複数のシステイン残基で置き換えられており、番号付けはカバットのＥＵインデックスに従う。ある実施態様において、抗体は、配列番号３４のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含み、軽鎖定常領域における２０１及び２０６位から選択される一又は複数のアミノ酸残基は、一又は複数のシステイン残基で置き換えられており、番号付けはカバットのＥＵインデックスに従う。
上記の化合物のある実施態様において、Ｄは、追加されたシステイン残基を経由して（又は介して）Ｔに結合している。いくつかの実施態様において、Ｄは、リンカー部分（−Ａ−Ｌ４−Ｌ３−Ｌ２−Ｘ−Ｌ１−）を通じて結合した追加されたシステイン残基のチオール基を介してＴに結合している。ある実施態様において、Ｄは、薬物がアミノ基を通じてＬ１又はＸに結合しているアミノ含有薬物部分である。ある実施態様において、Ｄは、デュオカルマイシン、ドラスタチン、ツブリシン、ドキソルビシン（ＤＯＸ）、パクリタキセル若しくはマイトマイシンＣ（ＭＭＣ）、又はそのアミノ誘導体である。ある実施態様において、Ｄは、
Figure 2017528418
からなる群より選択されるデュオカルマイシンのアミノ誘導体である。ある実施態様において、Ｄは、ドラスタチン（例えば、モノメチルドラスタチン１０）：
Figure 2017528418
のアミノ誘導体である。ある実施態様において、−Ａ−Ｌ４−Ｌ３−Ｌ２−は、
Figure 2017528418
である。ある実施態様において、−Ａ−Ｌ４−Ｌ３−Ｌ２−Ｘ−Ｌ１−Ｄは、
Figure 2017528418
である。ある実施態様において、−Ａ−Ｌ４−Ｌ３−Ｌ２−Ｘ−Ｌ１−Ｄは、
Figure 2017528418
である。ある実施態様において、−Ａ−Ｌ４−Ｌ３−Ｌ２−Ｘ−Ｌ１−Ｄは、
Figure 2017528418
である。
上記の化合物のある実施態様において、抗葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）抗体は、ヒト化抗体、キメラ抗体、又はヒト抗体である。
ある実施態様において、抗葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、
（１）重鎖可変領域は、抗体ｈＬＫ２６の三の重鎖ＨＶＲ（例えば、配列番号１４、１５、及び１６）を含み、及び／若しくは軽鎖可変領域は、抗体ｈＬＫ２６の三の軽鎖ＨＶＲ（例えば、配列番号１７、１８、及び１９）を含み；
（２）重鎖可変領域は、抗体２６Ｂ３の三の重鎖ＨＶＲ（例えば、配列番号２０、２１、及び２２）を含み、及び／若しくは軽鎖可変領域は、抗体２６Ｂ３の三の軽鎖ＨＶＲ（例えば、配列番号２３、２４、及び２５）を含み；又は
（３）重鎖可変領域は、抗体ｈＭｏｖ１９の三の重鎖ＨＶＲ（例えば、配列番号２６、２７、及び２８）を含み、及び／若しくは軽鎖可変領域は、抗体ｈＭｏｖ１９の三の軽鎖ＨＶＲ（例えば、配列番号２９、３０、及び３１）を含む。
ある実施態様において、抗葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、
（１）重鎖可変領域は、配列番号８のアミノ酸配列の三の重鎖ＨＶＲ（例えば、配列番号１４、１５、及び１６）を含み、及び／若しくは軽鎖可変領域は、配列番号９のアミノ酸配列の三の軽鎖ＨＶＲ（例えば、配列番号１７、１８、及び１９）を含み；
（２）重鎖可変領域は、配列番号１０のアミノ酸配列の三の重鎖ＨＶＲ（例えば、配列番号２０、２１、及び２２）を含み、及び／若しくは軽鎖可変領域は、配列番号１１のアミノ酸配列の三の軽鎖ＨＶＲ（例えば、配列番号２３、２４、及び２５）を含み；又は
（３）重鎖可変領域は、配列番号１２のアミノ酸配列の三の重鎖ＨＶＲ（例えば、配列番号２６、２７、及び２８）を含み、及び／若しくは軽鎖可変領域は、配列番号１３のアミノ酸配列の三の軽鎖ＨＶＲ（例えば、配列番号２９、３０、及び３１）を含む。
ある実施態様において、抗葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、
（１）重鎖可変領域は配列番号８のアミノ酸配列を含み、及び／若しくは軽鎖可変領域は配列番号９のアミノ酸配列を含み；
（２）重鎖可変領域は配列番号１０のアミノ酸配列を含み、及び／若しくは軽鎖可変領域は配列番号１１のアミノ酸配列を含み；又は
（３）重鎖可変領域は配列番号１２のアミノ酸配列を含み、及び／若しくは軽鎖可変領域は配列番号１３のアミノ酸配列を含む。
ある実施態様において、抗葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、
（１）重鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含み、及び／若しくは軽鎖は配列番号３のアミノ酸配列を含み；
（２）重鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、及び／若しくは軽鎖は配列番号３のアミノ酸配列を含み；
（３）重鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む可変領域と配列番号３２若しくは３３のアミノ酸配列を含む定常領域とを含み、及び／若しくは軽鎖は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む可変領域と配列番号３４のアミノ酸配列を含む定常領域とを含み；又は
（４）重鎖は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、及び／若しくは軽鎖は配列番号７のアミノ酸配列を含む。
ある実施態様において、抗体は、配列番号３２又は配列番号３３のアミノ酸配列を含むヒト重鎖定常領域、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含み、重鎖定常領域におけるＴ１５５、Ｓ１５７、Ｓ１６５、Ｔ１６９、Ｔ１９７、Ｔ１９９、及びＳ４４２から選択される一若しくは複数のアミノ酸残基、並びに／又は軽鎖定常領域におけるＬ２０１及びＴ２０６から選択される一若しくは複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられており、番号付けはカバットのＥＵインデックスに従う。これらの実施態様のいくつかにおいて、重鎖定常領域におけるＴ１５５、Ｓ１５７、Ｓ１６５、Ｔ１６９、Ｔ１９７、Ｔ１９９、及びＳ４４２から選択される少なくとも一つ（例えば、一）のアミノ酸残基、並びに／又は軽鎖定常領域におけるＬ２０１及びＴ２０６から選択される少なくとも一つ（例えば、一）のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられている。ある実施態様において、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びＳｃＦｖからなる群より選択される抗原結合断片である。
本開示は、上記の及び本明細書に記載される化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体；及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物を提供する。
本開示は、細胞を死滅させるために十分な量の本明細書に記載される化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を細胞に投与することを含む、ヒト葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）を発現する細胞を死滅させる方法を提供する。ある実施態様において、細胞は、がん細胞である。ある実施態様において、がん細胞は、個体（例えば、ヒト）に存在する。ある実施態様において、がん細胞は、リンパ腫又は白血病細胞である。ある実施態様において、がん細胞は、葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）陽性リンパ腫又は葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）陽性白血病細胞である。
本開示は、本明細書に記載される化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体の有効量を個体に投与することを含む、個体におけるがんを治療する方法を提供する。ある実施態様において、個体はがんを有するか、又はがんを有すると診断されている。ある実施態様において、がんは、卵巣がん、肺がん、子宮がん、精巣絨毛癌、上衣腫、中皮腫、乳がん、結腸がん、又は腎細胞癌である。いくつかの実施態様において、がんは、葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）陽性がんである。ある実施態様において、個体はヒトである。
本開示は、本明細書に記載される化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を含むキットを提供する。ある実施態様において、キットは、がんの治療における使用説明書を更に含む。
本明細書において、式（ＩＩ）
Figure 2017528418
［式中、
Ｄは薬物部分であり；
Ｔは葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）（例えば、ヒトＦＲＡ）に特異的に結合する抗体である標的化部分であり；
Ｒ１は水素、無置換若しくは置換Ｃ１−３アルキル、又は無置換若しくは置換ヘテロシクリルであり；
Ｌ１は結合、第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーであり；
Ｌ２は結合又は第二の自壊性リンカーであって；
ここで、Ｌ１が第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーである場合に、Ｌ２は結合であり；
ここで、Ｌ２が第二の自壊性リンカーである場合に、Ｌ１は結合であり；
Ｌ３はペプチドリンカーであり；
Ｌ４は結合又はスペーサーであり；且つ
Ａはアシル単位である］
の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を調製するための方法であって、
抗体を化合物Ｚ
Figure 2017528418
又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体と反応させることを含む方法が提供される。
本明細書において、式（ＩＩａ）：
Figure 2017528418
［式中、
ｐは、１から２０であり；
Ｄは薬物部分であり；
Ｔは葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）（例えば、ヒトＦＲＡ）に特異的に結合する抗体である標的化部分であり；
Ｒ１は水素、無置換若しくは置換Ｃ１−３アルキル、又は無置換若しくは置換ヘテロシクリルであり；
Ｌ１は結合、第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーであり；
Ｌ２は結合又は第二の自壊性リンカーであって；
ここで、Ｌ１が第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーである場合に、Ｌ２は結合であり；
ここで、Ｌ２が第二の自壊性リンカーである場合に、Ｌ１は結合であり；
Ｌ３はペプチドリンカーであり；
Ｌ４は結合又はスペーサーであり；且つ
Ａはアシル単位である］
の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を調製するための方法であって、
抗体を化合物Ｚ
Figure 2017528418
又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体と反応させることを含む方法が提供される。
本明細書における方法（ｍｅｔｈｏｄ）及び方法（ｐｒｏｃｅｓｓ）のある実施態様において、抗体は、一又は複数のスルフヒドリル基を含む。ある実施態様において、抗葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）抗体の重鎖の一又は複数のアミノ酸残基は、一又は複数のシステイン残基で置き換えられている。ある実施態様において、重鎖定常領域（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、又はＣＨ３）における一又は複数のアミノ酸残基は、一又は複数のシステイン残基で置き換えられている。ある実施態様において、抗体は重鎖定常領域（例えば、ヒトＩｇＧの重鎖定常領域）を含み、重鎖定常領域における１５５、１５７、１６５、１６９、１９７、１９９、及び４４２位から選択される一又は複数のアミノ酸残基は、一又は複数のシステイン残基で置き換えられており、番号付けはカバットのＥＵインデックスに従う。ある実施態様において、抗体は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、ヒトＩｇＧ４、又はヒトＩｇＧ４ｐの重鎖定常領域を含み、重鎖定常領域における１５５、１５７、１６５、１６９、１９７、１９９、及び４４２位から選択される一又は複数のアミノ酸残基が、一又は複数のシステイン残基で置き換えられており、番号付けはカバットのＥＵインデックスに従う。ある実施態様において、抗体は配列番号３２及び配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含み、重鎖定常領域における１５５、１５７、１６５、１６９、１９７、１９９、及び４４２位から選択される一又は複数のアミノ酸残基は、一又は複数のシステイン残基で置き換えられており、番号付けはカバットのＥＵインデックスに従う。
本明細書に記載する方法（ｍｅｔｈｏｄ）及び方法（ｐｒｏｃｅｓｓ）のある実施態様において、抗体の軽鎖の一又は複数のアミノ酸残基は、一又は複数のシステイン残基で置き換えられている。ある実施態様において、抗体の軽鎖定常領域における一又は複数のアミノ酸残基は、一又は複数のシステイン残基で置き換えられている。ある実施態様において、抗体は、軽鎖定常領域（例えば、ヒトカッパ軽鎖定常領域）を含み、軽鎖定常領域における２０１及び２０６位から選択される一又は複数のアミノ酸残基は、一又は複数のシステイン残基で置き換えられており、番号付けはカバットのＥＵインデックスに従う。ある実施態様において、抗体は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、ヒトＩｇＧ４、又はヒトＩｇＧ４ｐの軽鎖定常領域を含み、軽鎖定常領域における２０１及び２０６位から選択される一又は複数のアミノ酸残基は、一又は複数のシステイン残基で置き換えられており、番号付けはカバットのＥＵインデックスに従う。ある実施態様において、抗体は、配列番号３４のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含み、軽鎖定常領域における２０１及び２０６位から選択される一又は複数のアミノ酸残基は、一又は複数のシステイン残基で置き換えられており、番号付けはカバットのＥＵインデックスに従う。
本明細書における方法（ｍｅｔｈｏｄ）又は方法（ｐｒｏｃｅｓｓ）のある実施態様において、Ｄは、追加されたシステイン残基を経由して（又は介して）Ｔに結合している。いくつかの実施態様において、Ｄは、リンカー部分（−Ａ−Ｌ４−Ｌ３−Ｌ２−Ｘ−Ｌ１−）を通じて結合した追加されたシステイン残基のチオール基を介してＴに結合している。
本明細書における方法（ｍｅｔｈｏｄ）又は方法（ｐｒｏｃｅｓｓ）のある実施態様において、抗葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）抗体は、ヒト化抗体、キメラ抗体、又はヒト抗体である。ある実施態様において、抗葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、
（１）重鎖可変領域は、抗体ｈＬＫ２６の三の重鎖ＨＶＲ（例えば、配列番号１４、１５、及び１６）を含み、及び／若しくは軽鎖可変領域は、抗体ｈＬＫ２６の三の軽鎖ＨＶＲ（例えば、配列番号１７、１８、及び１９）を含み；
（２）重鎖可変領域は、抗体２６Ｂ３の三の重鎖ＨＶＲ（例えば、配列番号２０、２１、及び２２）を含み、及び／若しくは軽鎖可変領域は、抗体２６Ｂ３の三の軽鎖ＨＶＲ（例えば、配列番号２３、２４、及び２５）を含み；又は
（３）重鎖可変領域は、抗体ｈＭｏｖ１９の三の重鎖ＨＶＲ（例えば、配列番号２６、２７、及び２８）を含み、及び／若しくは軽鎖可変領域は、抗体ｈＭｏｖ１９の三の軽鎖ＨＶＲ（例えば、配列番号２９、３０、及び３１）を含む。
本明細書における方法（ｍｅｔｈｏｄ）又は方法（ｐｒｏｃｅｓｓ）のある実施態様において、抗葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）抗体は、ヒト化抗体、キメラ抗体、又はヒト抗体である。ある実施態様において、抗葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、
（１）重鎖可変領域は、配列番号８のアミノ酸配列の三の重鎖ＨＶＲ（例えば、配列番号１４、１５、及び１６）を含み、及び／若しくは軽鎖可変領域は、配列番号９のアミノ酸配列の三の軽鎖ＨＶＲ（例えば、配列番号１７、１８、及び１９）を含み；
（２）重鎖可変領域は、配列番号１０のアミノ酸配列の三の重鎖ＨＶＲ（例えば、配列番号２０、２１、及び２２）を含み、及び／若しくは軽鎖可変領域は、配列番号１１のアミノ酸配列の三の軽鎖ＨＶＲ（例えば、配列番号２３、２４、及び２５）を含み；又は
（３）重鎖可変領域は、配列番号１２のアミノ酸配列の三の重鎖ＨＶＲ（例えば、配列番号２６、２７及び２８）を含み、及び／若しくは軽鎖可変領域は、配列番号１３のアミノ酸配列の三の軽鎖ＨＶＲ（例えば、配列番号２９、３０、及び３１）を含む。
本明細書における方法（ｍｅｔｈｏｄ）又は方法（ｐｒｏｃｅｓｓ）のある実施態様において、抗葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、
（１）重鎖可変領域は配列番号８のアミノ酸配列を含み、及び／若しくは軽鎖可変領域は配列番号９のアミノ酸配列を含み；
（２）重鎖可変領域は配列番号１０のアミノ酸配列を含み、及び／若しくは軽鎖可変領域は配列番号１１のアミノ酸配列を含み；又は
（３）重鎖可変領域は配列番号１２のアミノ酸配列を含み、及び／若しくは軽鎖可変領域は配列番号１３のアミノ酸配列を含む。
ある実施態様において、抗葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、
（１）重鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含み、及び／若しくは軽鎖は配列番号３のアミノ酸配列を含み；
（２）重鎖は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、及び／若しくは軽鎖は配列番号３のアミノ酸配列を含み；
（３）重鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む可変領域と配列番号３２若しくは３３のアミノ酸配列を含む定常領域とを含み、及び／若しくは軽鎖は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む可変領域と配列番号３４のアミノ酸配列を含む定常領域とを含み；又は
（４）重鎖は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、及び／若しくは軽鎖は配列番号７のアミノ酸配列を含む。
本明細書における方法（ｍｅｔｈｏｄ）及び方法（ｐｒｏｃｅｓｓ）のある実施態様において、抗体は、配列番号３２又は配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むヒトカッパ軽鎖定常領域を含み、重鎖定常領域におけるＴ１５５、Ｓ１５７、Ｓ１６５、Ｔ１６９、Ｔ１９７、Ｔ１９９、及びＳ４４２から選択される一若しくは複数のアミノ酸残基、並びに／又はカッパ軽鎖定常領域におけるＬ２０１及びＴ２０６から選択される一若しくは複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられており、番号付けはカバットのＥＵインデックスに従う。これらの実施態様のいくつかにおいて、重鎖定常領域におけるＴ１５５、Ｓ１５７、Ｓ１６５、Ｔ１６９、Ｔ１９７、Ｔ１９９、及びＳ４４２から選択される少なくとも一つ（例えば、一）のアミノ酸残基、並びに／又は軽鎖定常領域におけるＬ２０１及びＴ２０６から選択される少なくとも一つ（例えば、一）のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられている。
本開示は、化合物が本明細書に記載される方法（ｍｅｔｈｏｄ）又は方法（ｐｒｏｃｅｓｓ）によって調製され、抗体が一又は複数のスルフヒドリル基を含む化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を提供する。
本開示は、化合物が本明細書に記載される方法によって調製され、抗体が一又は複数のスルフヒドリル基を含む化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体、及び薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物を提供する。
本明細書に記載した様々な実施態様の特性の一、いくつか、又は全てを組み合わせて、本発明の他の実施態様を形成してもよいと理解される。本発明のこれら及び他の態様は、当業者に明らかとなるであろう。
図１は、Ｔａｐ−１８ＨのＮＭＲスペクトルを示す。 図２は、Ｔａｐ−１８Ｈｒ１のＮＭＲスペクトルを示す。 図３は、Ｔａｐ−１８Ｈｒ２のＮＭＲスペクトルを示す。 図４は、卵巣がん細胞株ＳＫ−ＯＶ−３に由来する異種移植片に対するｈＬＫ２６−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒ１のインビボ抗腫瘍活性を示す。 図５は、卵巣がん細胞株ＳＫ−ＯＶ−３に由来する異種移植片に対する部位特異的コンジュゲートｈＬＫ２６−Ｔａｐ１８Ｈｒ１ ＡＤＣｓであるｈＬＫ２６−Ｓ４４２Ｃ−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒ１、ｈＬＫ２６−Ｔ１５５Ｃ−ＩｇＧ４ｐ−Ｔａｐ１８Ｈｒ１、及びｈＬＫ２６−Ｓ４４２Ｃ−ＩｇＧ４ｐ−Ｔａｐ１８Ｈｒ１のインビボ抗腫瘍活性を示す。 図６は、肺がん細胞株ＮＣＩ−Ｈ２１１０に由来する異種移植片に対する通常のｈＬＫ２６−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒ１、並びに部位特異的コンジュゲートｈＬＫ２６−Ｔａｐ１８Ｈｒ１ ＡＤＣｓであるｈＬＫ２６−Ｔ２０６Ｃ−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒ１、ｈＬＫ２６−Ｔ１５５Ｃ−ＩｇＧ４ｐ−Ｔａｐ１８Ｈｒ１、ｈＬＫ２６−Ｔ１９９Ｃ−ＩｇＧ４ｐ−Ｔａｐ１８Ｈｒ１、及びｈＬＫ２６−Ｌ２０１Ｃ−ＩｇＧ４ｐ−Ｔａｐ１８Ｈｒ１のインビボ抗腫瘍活性を示す。
定義
以下の用語は、別段の指示がない限り、以下の意味を有する。定義されていないあらゆる用語は、当該技術分野で認識される意味を有する。
「アルキル」とは、１から１０個の炭素原子、好ましくは１から６個の炭素原子を有する一価の飽和脂肪族ヒドロカルビル基を指す。例として、この用語は、直鎖状及び分枝状のヒドロカルビル基、例えば、メチル（ＣＨ３−）、エチル（ＣＨ３ＣＨ２−）、ｎ−プロピル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２−）、イソプロピル（（ＣＨ３）２ＣＨ−）、ｎ−ブチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、イソブチル（（ＣＨ３）２ＣＨＣＨ２−）、ｓｅｃ−ブチル（（ＣＨ３）（ＣＨ３ＣＨ２）ＣＨ−）、ｔ−ブチル（（ＣＨ３）３Ｃ−）、ｎ−ペンチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ネオペンチル（（ＣＨ３）３ＣＣＨ２−）、及びｎ−ヘキシル（ＣＨ３（ＣＨ２）５−）を含む。
「アルキレン」とは、好ましくは１から１０個、より好ましくは１から３個の炭素原子を有する、直鎖状又は分枝鎖状の、二価の脂肪族ヒドロカルビレン基を指す。例として、この用語は、メチレン（−ＣＨ２−）、エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、イソ−プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−）、（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２−）、（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）−）、（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ−）、（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−）等を含む。
「アルケニル」とは、２から１０個の炭素原子、好ましくは２から４個の炭素原子を有し、少なくとも１、好ましくは１から２の二重結合不飽和部位を有する、直鎖状又は分枝状のヒドロカルビル基を指す。例として、この用語は、ビ−ビニル、アリル、及びブタ−３−エン−１−イルを含む。この用語に含まれるものは、シス及びトランス異性体又はこれらの異性体の混合物である。
「アルケニレン」とは、２から１０個の炭素原子、好ましくは２から４個の炭素原子を有し、少なくとも１、好ましくは１から２の二重結合不飽和部位を有する、直鎖状又は分枝状のヒドロカルビレン基を指す。アルケニレンの例は、ビニレン（−ＣＨ＝ＣＨ−）、アリレン（−ＣＨ２Ｃ＝Ｃ−）、及びブタ−３−エン−１−イレン（−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ＝ＣＨ−）を含むが、これらに限定されない。この用語には、これらの異性体のシス及びトランス異性体又は混合物が含まれる。
「アルキニル」とは、２から６個の炭素原子、好ましくは２から３個の炭素原子を有し、少なくとも１、好ましくは１から２の三重結合不飽和部位を有する、直線状又は分枝状のヒドロカルビル基を指す。そのようなアルキニル基の例は、アセチレニル（−Ｃ≡ＣＨ）、及びプロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）を含む。
「アルキニレン」とは、２から６個の炭素原子、好ましくは２から３個の炭素原子を有し、少なくとも１、好ましくは１から２の三重結合不飽和部位を有する、直線状又は分枝状のヒドロカルビレン基を指す。アルキニレンの例は、アセチレニレン（−Ｃ≡Ｃ−）、及びプロパルギレン（−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ−）を含むが、これらに限定されない。
「アミノ」とは、基−ＮＨ２を指す。
「置換アミノ」とは、少なくとも一のＲは水素ではないことを条件として、各Ｒが、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アルケニル、置換アルケニル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルからなる群より独立して選択される基−ＮＲＲを指す。
「アリール」とは、単環（例えばフェニル基に存在）又は複数の縮合環（結合点が芳香族環の原子を通じていることを条件として、縮合環は芳香族であっても、そうでなくてもよい）を有する環系（そのような芳香族環系の例は、ナフチル、アントリル及びインダニルを含む）を有する、６から１８個の炭素原子の一価の芳香族炭素環式基を指す。例として、この用語は、フェニル及びナフチルを含む。アリール置換基の定義により別段制約されない限り、そのようなアリール基は、アシルオキシ、ヒドロキシ、チオール、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、置換アルキル、置換アルコキシ、置換アルケニル、置換アルキニル、置換シクロアルキル、置換シクロアルケニル、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アルカリール、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルエステル、シアノ、ハロゲン、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、スルホニルアミノ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール及びトリハロメチルから選択される１から５の置換基、又は１から３の置換基で置換されていてもよい。
「シクロアルキル」とは、縮合、架橋及びスピロ環系を含む単環又は複環を有する、３から１０個の炭素原子の環状アルキル基を指す。適切なシクロアルキル基の例は、例えばアダマンチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチル等を含む。例として、そのようなシクロアルキル基は、単環構造、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチル等、又は複環構造、例えばアダマンチル等を含む。
「ヘテロアリール」とは、１から１５個の炭素原子、例えば１から１０個の炭素原子並びに酸素、窒素及び環中の硫黄からなる群より選択される１から１０個のヘテロ原子の芳香族基を指す。そのようなヘテロアリール基は、単環（例えばピリジニル、イミダゾリル若しくはフリル）、又は環系中の複数の縮合環（環系中の少なくとも一の環は芳香族であり、結合点が芳香族環の原子を通じていることを条件として、環系中の少なくとも一の環が芳香族である）（この基の例としては、インドリジニル、キノリニル、ベンゾフラニル、ベンズイミダゾリル又はベンゾチエニル）を有し得る。ある実施態様において、ヘテロアリール基の窒素及び／又は硫黄環原子（複数可）は、Ｎ−オキシド（Ｎ→Ｏ）、スルフィニル又はスルホニル部分を提供するために酸化されていてもよい。例として、この用語は、ピリジニル、ピロリル、インドリル、チオフェニル、及びフラニルを含む。ヘテロアリール置換基の定義により別段制約されない限り、そのようなヘテロアリール基は、アシルオキシ、ヒドロキシ、チオール、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、置換アルキル、置換アルコキシ、置換アルケニル、置換アルキニル、置換シクロアルキル、置換シクロアルケニル、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アルカリール、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルエステル、シアノ、ハロゲン、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、スルホニルアミノ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール及び−ＳＯ２−ヘテロアリール、並びにトリハロメチルから選択される１から５の置換基、又は１から３の置換基で置換されていてもよい。
ヘテロアリールの例は、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、インドール、プリン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、フェナントロリン、イソチアゾール、フェナジン、イソキサゾール、フェノキサジン、フェノチアジン、ピペリジン、ピペラジン、フタルイミド、４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン、チアゾール、チオフェン、ベンゾ［ｂ］チオフェン等を含むが、これらに限定されない。
「複素環」、「複素環式」、「ヘテロシクロアルキル」又は「ヘテロシクリル」とは、縮合、架橋、若しくはスピロ環系を含む単環又は複数の縮合環を有し、且つ１から１０個のヘテロ原子を含む３から２０個の環原子を有する、飽和した基又は部分的に不飽和の基を指す。これらの環原子は、炭素、窒素、硫黄、又は酸素からなる群より選択され、ここで、縮合環系において、結合点が非芳香族環を通じていることを条件として、一又は複数の環は、シクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールであり得る。ある実施態様において、複素環式基の窒素及び／又は硫黄原子（複数可）は、Ｎ−オキシド、−Ｓ（Ｏ）−、又は−ＳＯ２−部分を提供するために酸化されていてもよい。
複素環の例は、アゼチジン、ジヒドロインドール、インダゾール、キノリジン、イミダゾリジン、イミダゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドリン、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、チアゾリジン、モルホリニル、チオモルホリニル（チアモルホリニルとも称される）、１，１−ジオキソチオモルホリニル、ピペリジニル、ピロリジン、テトラヒドロフラニル等を含むが、これらに限定されない。
ヘテロアリール基又は複素環式基が「置換されている」場合、ヘテロアリール置換基又は複素環式置換基の定義により別段制約されない限り、そのようなヘテロアリール基又は複素環式基は、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルエステル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、スルホニルアミノ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ−ヘテロシクリル、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、及び−ＳＯ２−ヘテロシクリルから選択される１から５、又は１から３の置換基で置換され得る。
「ポリアルキレングリコール」とは、直線状又は分枝状のポリアルキレングリコールポリマー、例えばポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、及びポリブチレングリコールを指す。ポリアルキレングリコールのサブユニットは、単一ポリアルキレングリコールユニットである。例えば、ポリエチレングリコールサブユニットの例は、鎖終結点で水素でキャップされた、エチレングリコール、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−、又はプロピレングリコール、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−であろう。ポリ（アルキレングリコール）のその他の例は、ＰＥＧ、ＰＥＧ誘導体、例えばメトキシポリ（エチレングリコール）（ｍＰＥＧ）、ポリ（エチレンオキシド）、ＰＰＧ、ポリ（テトラメチレングリコール）、ポリ（エチレンオキシド−コ−プロピレンオキシド）、又はコポリマー及びそれらの組合せを含むが、それらに限定されない。
「ポリアミン」とは、ポリアルキレンイミンにあるような骨格中に包含されているか、又は、ポリビニルアミンにあるようなペンダント基中のモノマー単位においてアミン機能性を有するポリマーを指す。
本明細書中の開示に加えて、用語「置換（された）」は、特定の基又はラジカルを修飾するのに使用される場合、特定の基又はラジカルの一又は複数の水素原子はそれぞれ、互いに独立して、以下に定義される同一又は異なる置換基で置き換えられることも意味し得る。
本明細書中の個々の用語に関して開示された基に加えて、特定の基又はラジカル中飽和炭素原子上の一又は複数の水素（単一の炭素原子上の任意の二の水素は＝Ｏ、＝ＮＲ７０、＝Ｎ−ＯＲ７０、＝Ｎ２又は＝Ｓで置き換えられ得る）を置換する置換基は、別記されない限り、−Ｒ６０、ハロ、＝Ｏ、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、−ＮＲ８０Ｒ８０、トリハロメチル、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、−Ｓ（Ｏ）Ｒ７０、−ＳＯ２Ｒ７０、−ＳＯ３ −Ｍ＋、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ７０、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ７０、−ＯＳＯ３ −Ｍ＋、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲ７０、−ＰＯ３ ２−（Ｍ＋）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）Ｏ−Ｍ＋、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｍ＋、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−Ｍ＋、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ７０、−ＯＣ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−ＮＲ７０ＣＯ２ −Ｍ＋、−ＮＲ７０ＣＯ２Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０及び−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０であって、Ｒ６０は、置換されていてもよいアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール及びヘテロアリールアルキルからなる群より選択され、各Ｒ７０は、独立して水素又はＲ６０であり；各Ｒ８０は、独立してＲ７０あるいは、二のＲ８０’は、それが結合する窒素原子と共に、３員、４員、５員、６員、又は７員ヘテロシクロアルキル（Ｏ、Ｎ及びＳからなる群より選択される同一若しくは異なる追加のヘテロ原子を１から４個含んでいてもよく、そのＮは−Ｈ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−４アルキル、−ＣＯ２Ｃ１−４アルキル、若しくは−Ｓ（Ｏ）２Ｃ１−４アルキル置換基を有していてもよい）を形成し；且つ各Ｍ＋は、正味単一正電荷を持つ対イオンである。各Ｍ＋は、独立して、例えば、Ｋ＋、Ｎａ＋、Ｌｉ＋等のアルカリイオン；＋Ｎ（Ｒ６０）４等のアンモニウムイオン；［Ｃａ２＋］０．５、［Ｍｇ２＋］０．５、又は［Ｂａ２＋］０．５等のアルカリ土類イオン（下付きの０．５は、そのような二価のアルカリ土類イオンに対する対イオンのうちの一方が実施態様の化合物のイオン化形態であり、他方が塩化物等の典型的な対イオンであり得るか、又は本明細書中に開示される二のイオン化化合物がそのような二価のアルカリ土類イオンに対する対イオンとして作用し得るか、又は実施態様の二重イオン化化合物がそのような二価のアルカリ土類イオンに対する対イオンとして作用し得ることを意味する）であってもよい。
本明細書中の開示に加えて、「置換」アルケン、アルキン、アリール及びヘテロアリール基中の不飽和炭素原子上の水素に対する置換基は、別記されない限り、−Ｒ６０、ハロ、−Ｏ−Ｍ＋、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、−Ｓ−Ｍ＋、−ＮＲ８０Ｒ８０、トリハロメチル、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−Ｓ（Ｏ）Ｒ７０、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ７０、−ＳＯ３ −Ｍ＋、−ＳＯ３Ｒ７０、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ７０、−ＯＳＯ３ −Ｍ＋、−ＯＳＯ３Ｒ７０、−ＰＯ３ ２−（Ｍ＋）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）Ｏ−Ｍ＋、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、−ＣＯ２ −Ｍ＋、−ＣＯ２Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）Ｒ７０、−ＯＣＯ２ −Ｍ＋、−ＯＣＯ２Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−ＮＲ７０ＣＯ２ −Ｍ＋、−ＮＲ７０ＣＯ２Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０及び−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０であって、置換アルケン又はアルキンの場合、置換基は−Ｏ−Ｍ＋、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、又は−Ｓ−Ｍ＋ではないことを条件として、Ｒ６０、Ｒ７０、Ｒ８０及びＭ＋は先に定義された通りである。
本明細書中の個々の用語に関して開示された置換基に加えて、「置換」ヘテロシクロアルキル及びシクロアルキル基中の窒素原子上の水素に対する置換基は、別記されない限り、−Ｒ６０、−Ｏ−Ｍ＋、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、−Ｓ−Ｍ＋、−ＮＲ８０Ｒ８０、トリハロメチル、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、−Ｓ（Ｏ）Ｒ７０、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ７０、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−Ｍ＋、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ７０、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ７０、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−Ｍ＋、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲ７０、−ＰＯ３ ２−（Ｍ＋）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）Ｏ−Ｍ＋、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）（ＯＲ７０）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ７０、−ＯＣ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０及び−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０であって、Ｒ６０、Ｒ７０、Ｒ８０及びＭ＋は先に定義された通りである。
本明細書中の開示に加えて、ある実施態様において、置換されている基は、１、２、３若しくは４の置換基、１、２若しくは３の置換基、１若しくは２の置換基、又は１の置換基を有する。
上で定義された全ての置換基において、置換基をそれら自体に対する更なる置換基（例えば、それ自体が置換アリール基で置換された置換基としての置換アリール基を有する置換アリール、これは置換アリール基等により更に置換される）で定義することにより導かれたポリマーは、本明細書中に含まれることを意図されていない。そのような場合、かかる置換基の最大数は３である。例えば、本明細書中で特に検討される置換アリール基の一連の置換基は、置換アリール−（置換アリール）−置換アリールに限定される。
別段の指示がない限り、本明細書中に明確に定義されていない置換基の命名法は、官能基の末端部、続いて結合点に向かって隣接する官能基を名づけることにより導かれる。例えば、置換基「アリールアルキルオキシカルボニル」は、（アリール）−（アルキル）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−基を指す。
一又は複数の置換基を含有する、本明細書中に開示される何れかの基に関し、当然、そのような基は立体的に非現実的な及び／又は合成的に実現不可能な任意の置換又は置換パターンを含有しないことが理解される。加えて、対象化合物は、これらの化合物の置換により生じる全ての立体化学異性体を含む。
用語「薬学的に許容される塩」とは、哺乳動物等の患者に対して投与するための許容される塩（所定の投与レジームに対して許容できる哺乳動物の安全性を有する対イオンを含む塩）を意味する。そのような塩は、薬学的に許容される無機又は有機塩基、及び薬学的に許容される無機又は有機酸に由来し得る。「薬学的に許容される塩」とは、化合物の薬学的に許容される塩を指し、その塩は、当該技術分野でよく知られている様々な有機及び無機対イオンに由来し、単なる例として、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウムテトラアルキルアンモニウム等を含み；分子が塩基機能性を含有する場合は、有機又は無機酸の塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ギ酸塩、酒石酸塩、ベシル酸塩、メシル酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩等を含む。
構造において基を描写する波線は、親構造に対する基の結合点を表す。
用語「その塩」とは、酸のプロトンが陽イオン、例えば金属陽イオン又は有機陽イオン等で置き換えられた場合に形成される化合物を意味する。患者への投与が意図されていない中間体化合物の塩に必要とされないが、必要に応じて、塩は薬学的に許容される塩である。例として、本化合物の塩は、化合物が、塩の陰イオン成分としての無機又は有機酸のコンジュゲート塩基と共に、無機又は有機酸によりプロトン化され、陽イオンを形成する塩を含む。
「溶媒和物」とは、溶媒分子と溶質の分子又はイオンとを組み合わせることにより形成された複合体を指す。溶媒は、有機化合物、無機化合物又は両方の混合物であり得る。溶媒のいくつかの例は、メタノール、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド及び水を含むが、これらに限定されない。溶媒が水である場合、形成される溶媒和物は水和物である。
「立体異性体」とは、同一の原子連結性と異なる原子の空間配列を有する化合物を指す。立体異性体は、シス−トランス異性体、Ｅ及びＺ異性体、光学異性体、並びにジアステレオマーを含む。
「互変異性体」とは、原子の電子結合及び／又はプロトンの位においてのみ異なる分子の代替形態、例えば、エノール−ケト及びイミン−エナミン互変異性体、又は−Ｎ＝Ｃ（Ｈ）−ＮＨ−環原子配列を含有するヘテロアリール基の互変異性形態、例えば、ピラゾール、イミダゾール、ベンズイミダゾール、トリアゾール、及びテトラテトラゾールを指す。当業者は、他の互変異性環原子配列も可能であることを認識するであろう。
用語「又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体」は、塩、溶媒和物及び立体異性体、例えば、対象化合物の立体異性体の薬学的に許容される塩の溶媒和物の全順列を含むことを意図されることが理解されるであろう。
本明細書中で使用される場合、薬物、化合物、コンジュゲート、薬物コンジュゲート、抗体薬物コンジュゲート若しくは薬学的組成物の「有効用量」又は「有効量」とは、有益な又は所望の結果をもたらすのに十分な量である。予防的使用に関し、有益な若しくは所望の結果は、リスクを排除する若しくは低減する、重症度を緩和する、又は疾患の生化学的、組織学的及び／若しくは行動上の症状、その合併症及び疾患の進行中に出現する中間体病理学的表現型を含む疾患の発病を遅らせる等の結果を含む。治療的使用に関し、有益な若しくは所望の結果は、疾患により生じる一又は複数の症状を減少させる、疾患に罹患している対象の生活の質を向上させる、疾患を治療するのに必要な他の投薬用量を減少させる、例えば標的化を介して別の投薬の効果を増強する、疾患の進行を遅らせる、及び／又は生存期間を延長する等の臨床結果を含む。がん又は腫瘍の場合、有効量の薬物は、がん細胞数を縮小させ；腫瘍の大きさを縮小させ；末梢器官へのがん細胞浸潤を阻害し（すなわち、ある程度遅らせ、好ましくは停止させる）；腫瘍転移を阻害し（すなわち、ある程度遅らせ、好ましくは停止させる）；腫瘍増殖をある程度阻害し；及び／又は障害に関連する一又は複数の徴候をある程度緩和する効果を有し得る。有効投薬量は、一又は複数回の投与で投与され得る。本開示の目的上、薬物、化合物又は薬学的組成物の有効投薬量は、予防的又は治療的処置を直接的又は間接的に達成するのに十分な量である。臨床状況において理解されるように、薬物、化合物又は薬学的組成物の有効投薬量は、別の薬物、化合物又は薬学的組成物と併せて達成されても、そうでなくてもよい。したがって、「有効投薬量」は、一又は複数の治療剤を投与する状況において考慮されてもよく、一又は複数の他の薬剤とのコンジュゲートにおいて所望の結果が達成され得るか又は達成される場合、単一薬剤が有効量で与えられると考えられてもよい。
本明細書中で使用される場合、「〜と併せて」とは、一の治療モダリティーを別の治療モダリティーに加えて投与することを指す。又は、「〜と併せて」とは、一の治療モダリティーを他の治療モダリティーの投与の前、最中若しくは後に、個体に投与することを指す。
本明細書中で使用される場合、「治療」又は「治療する」とは、好ましくは臨床結果を含む有益な又は所望の結果を得るための手法である。本開示の目的上、有益な又は所望の臨床結果は、一又は複数の以下を含むが、これらに限定されない：がん性細胞の増殖を減少させる（若しくは破壊する）こと、疾患により生じる症状を減少させること、疾患に罹患する対象の生活の質を向上させること、疾患を治療するのに必要な他の投薬用量を減少させること、疾患の進行を遅らせること、及び／又は個体の生存期間を延長すること。
本明細書中で使用される場合、「疾患の発病を遅らせること」とは、疾患（例えばがん）の発病を引き延ばす、妨げる、減速させる、遅滞させる、安定させる、及び／又は延期させることを意味する。病歴及び／又は治療されている個体により、この遅れの時間は様々である。当業者にとっては明白であるように、十分な又は有意な遅れには、実質的に、個体が疾患を発病しない予防が含まれる。例えば、末期がん、例えば転移発症は遅らせられ得る。
「個体」又は「対象」は、哺乳類、より好ましくはヒトである。哺乳類は、家畜、競技用動物、ペット（ネコ、イヌ、ウマ等）、霊長類、マウス及びラットも含むが、これらに限定されない。
本明細書中で使用される場合、用語「特異的に認識する」又は「特異的に結合する」とは、測定可能及び再現可能な相互作用、例えば標的と抗体（又は分子若しくは部分）との間の引力又は結合を指し、これは、生物学的分子を含む分子の不均一集団の存在中の標的の存在を決定する。例えば、エピトープと特異的に又は優先的に結合する抗体は、標的若しくは非標的エピトープの他のエピトープに結合するよりも、より高い親和性（affinity、avidity）で、より容易に、及び／又はより長い持続時間で、このエピトープを結合する抗体である。また、例えば、第一の標的と特異的に又は優先的に結合する抗体（又は部分若しくはエピトープ）は、第二の標的と特異的に又は優先的に結合しても、そうでなくてもよい。このように、「特異的な結合」若しくは「優先的な結合」とは、排他的な結合を（含み得るが）必ずしも必要としない。標的と特異的に結合する抗体は、少なくとも約１０３Ｍ−１若しくは１０４Ｍ−１、時には約１０５Ｍ−１若しくは１０６Ｍ−１、他の例では約１０６Ｍ−１若しくは１０７Ｍ−１、約１０８Ｍ−１から１０９Ｍ−１、又は約１０１０Ｍ−１から１０１１Ｍ−１あるいはそれ以上の結合定数を有してもよい。特定のタンパク質と特異的に免疫反応する抗体を選択するための様々なイムノアッセイフォーマットが使用され得る。例えば、固体相ＥＬＩＳＡイムノアッセイは、タンパク質と特異的に免疫反応するモノクローナル抗体を選択するために、常套的に使用される。特定の免疫反応を決定するために使用され得るイムノアッセイフォーマット及び条件についての記載に関しては、例えば、Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ （１９８８） Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。
用語「がん」、「腫瘍」、「がん性」及び「悪性」は、本明細書で使用される場合、調節されない細胞増殖によって典型的に特徴づけられる、哺乳動物の生理学的状態を指すか又は表わす。がんの例は、腺癌、リンパ腫、芽細胞腫、メラノーマ及び肉腫を含む癌を含むが、これらに限定されない。更に特定の例は、扁平上皮がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺腺癌、肺扁平上皮癌、胃腸がん、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫、膵臓がん、膠芽細胞腫、子宮頸がん、神経膠腫、卵巣がん、肝がん及び肝細胞癌等の肝臓がん、膀胱がん、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜若しくは子宮癌、唾液腺癌、腎細胞癌及びウィルムス腫瘍等の腎臓がん、基底細胞癌、メラノーマ、中皮腫、前立腺がん、甲状腺がん、精巣がん、食道がん、胆嚢がん、並びに様々な種類の頭頸部がんを含む。
本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他を指さない限り複数形を含む。例えば、「抗体」への言及は、一から多数の抗体、例えばモル量に対する言及であり、当業者に知られているそれらと同等のものなどを含む。
本明細書中の「約」の値又はパラメータへの言及は、その値又はパラメータ自体に対する実施態様を含む（記載する）。例えば、「約Ｘ」との記載には「Ｘ」の記載が含まれる。
本明細書に記載の本発明の態様及び変形形態は、態様及び変形形態「からなる」及び／又は「本質的にからなる」を含む。
別段の規定がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を持つ。本明細書中に記載されるものと類似又は同等の任意の方法及び物質も本発明の実施又は試験において使用され得るが、好ましい方法及び物質はここに記載される。本明細書中で言及される全ての出版物は、出版物が引用されることに関連する方法及び／又は物質を開示し、記載するために、参照により本明細書に援用される。
別記されない限り、本実施態様の方法及び技術は、当該技術分野でよく知られている従来からの方法に従って、並びに、本明細書を通して引用及び検討される様々な一般的な及びより具体的な参照文献に記載されているように、一般的に実施される。例えば、Ｌｏｕｄｏｎ， Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ， ２００２， ｐｐ． ３６０−３６１， １０８４−１０８５；Ｓｍｉｔｈ及びＭａｒｃｈ， Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ： Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ， Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ， ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ， ５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ， ２００１を参照のこと。
対象化合物を命名するための本明細書中で使用される命名法は、本明細書中の実施例で説明される。この命名法は、一般的に市販のＡｕｔｏＮｏｍソフトウェア（MDL, San Leandro, Calif.）を使用して生成される。
明確にするために別個の実施態様の文脈中に記載される本発明のある特徴は、一の実施態様中で組合せで提供されてもよいことが理解される。反対に、簡潔にするために一の実施態様の文脈中に記載される本発明の様々な特徴は、別々に又は任意の適切なサブコンビネーションで提供されてもよい。変数により表される化学基に関連する実施態様の全ての組合せは、本発明に特に包含され、且つそのような組合せが安定した化合物（すなわち、単離され、特徴づけられ、生物学的活性に関して試験され得る化合物）を包含する程度に、一つ一つの組合せが個別に且つ明確に開示されるかのように、本明細書中に開示される。加えて、そのような変数を記載する実施態様に列挙される化学基の全てのサブコンビネーションもまた、本発明によって特に包含され、且つ化学基の一つ一つのそのようなサブコンビネーションが個別に且つ明白に本明細書に開示されるかのように、本明細書中に開示される。
詳細な説明
本開示は、適切な条件下で開裂可能であってもよく、親水基を包含してコンジュゲートの溶解度を高める、親水性の自壊性リンカーを有する化合物（抗ＦＲＡ抗体薬物コンジュゲート）を提供する。親水性の自壊性リンカーは、しばしば疎水性である細胞傷害性薬物に関する薬物コンジュゲートの溶解度の増加を提供し得る。薬物コンジュゲートに親水性の自壊性リンカーを使用するその他の利点は、薬物コンジュゲートの安定性の増加及び薬物コンジュゲートの凝集の低下を含む。
本開示は、優れた血清安定性を有し得る抗体薬物コンジュゲートを提供する。例えば、薬物のヒドロキシル基が水性バッファー又はヒト血清中の急速な加水分解の影響を受けやすい不安定な炭素結合を介してスペーサーに結合している、抗体薬物コンジュゲートとは対照的に、ベンジルオキシカルボニル結合を利用した本実施態様の抗体薬物コンジュゲートは、同一条件下で比較的より安定し得、且つ選択的に断片化を受けて、プロテアーゼ、例えばカテプシンＢでの治療の際に薬物を放出し得る。血清安定性は、抗体薬物コンジュゲートに対する望ましい特性であり、不活性な薬物を患者の血清に投与し、リガンドを用いてその不活性な薬物を標的で濃縮させ、次いでその抗体薬物コンジュゲートを標的の付近においてのみ活性型に変換させることが望ましい。
本開示は、低下した凝集を有し得る抗体薬物コンジュゲートを提供する。いくつかの酵素不安定リンカーの関連した疎水性の増加は、特に、高い疎水性を持つ薬物との抗体薬物コンジュゲートの凝集をもたらし得る。親水基をリンカーへ包含することにより、抗体薬物コンジュゲートの凝集が減少されてもよい。
本開示の化合物（抗体薬物コンジュゲート）は、薬物部分、選択された細胞集団（例えば、ＦＲＡ発現細胞）を標的とする能力のある標的化部分、並びに、アシル単位、薬物部分と標的化部分との間に距離を与えるための任意のスペーサー単位、適切な条件下で開裂可能であるペプチドリンカー、親水性の自壊性リンカー、及び任意の第二の自壊性スペーサー又は環化自己脱離リンカーを含むリンカーを含む。それぞれの特徴を以下で説明する。
本開示は、式（Ｉ）：
Figure 2017528418
［式中：
Ｄは薬物部分であり；
Ｔは標的化部分であり；
Ｘは疎水性の自壊性リンカーであり；
Ｌ１は結合、第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーであり；
Ｌ２は結合又は第二の自壊性リンカーであって；
ここで、Ｌ１が第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーである場合に、Ｌ２は結合であり；
ここで、Ｌ２が第二の自壊性リンカーである場合に、Ｌ１は結合であり；
Ｌ３はペプチドリンカーであり；
Ｌ４は結合又はスペーサーであり；且つ
Ａはアシル単位である］
の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を提供する。
いくつかの実施態様において、標的化部分は、ＦＲＡ（例えば、ヒトＦＲＡ）に特異的に結合する抗体である。いくつかの実施態様において、標的化部分は、薬物部分との結合のために一又は複数の結合部位を有する抗ＦＲＡ抗体である。例えば、標的化部分Ｔは、リンカー−薬物部分（例えば、Ａ−Ｌ４−Ｌ３−Ｌ２−Ｘ−Ｌ１−Ｄ）との結合のために多数の部位を有し得る。このように、式（Ｉａ）：
Figure 2017528418
［式中、Ｄ、Ｔ、Ｘ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、及びＡが式（Ｉ）に関して定義した通りであり、ｐが１から２０である］の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体も同様に提供される。いくつかの実施態様において、ｐは１から８である。いくつかの実施態様において、ｐは１から６である。いくつかの実施態様において、ｐは１から４である。いくつかの実施態様において、ｐは２から４である。いくつかの実施態様において、ｐは、１、２、３又は４である。いくつかの実施態様において、ｐは２である。いくつかの実施態様において、ｐは３である。いくつかの実施態様において、ｐは４である。
ペプチドリンカー
式（Ｉ）において、Ｌ３はペプチドリンカーである。ある実施態様において、Ｌ３は、１から１０のアミノ酸残基のペプチドリンカーである。ある実施態様において、Ｌ３は、２から４のアミノ酸残基のペプチドリンカーである。ある例において、Ｌ３は、ジペプチドリンカーである。
アミノ酸残基は、天然に存在するか又は非天然のアミノ酸残基であり得る。用語「天然アミノ酸」及び「天然に存在するアミノ酸」は、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、及びＴｙｒを指す。「非天然アミノ酸」（すなわち、天然には存在しないアミノ酸）は、非制限的な例として、ホモセリン、ホモアルギニン、シトルリン、フェニルグリシン、タウリン、ヨードチロシン、セレノ−システイン、ノルロイシン（「Ｎｌｅ」）、ノルバリン（「Ｎｖａ」）、ベータ−アラニン、Ｌ−又はＤ−ナフタラニン、オルニチン（「Ｏｒｎ」）等を含む。
アミノ酸は、Ｄ型の天然及び非天然アミノ酸も含む。「Ｄ−」は、天然に存在する（「Ｌ−」）アミノ酸の構造とは対照的に、「Ｄ」（右旋性の）立体構造を有するアミノ酸を指す。特定の立体構造が示されない場合、当業者は、アミノ酸とはＬ−アミノ酸であることを理解するであろう。しかしながら、アミノ酸は、Ｄ−及びＬ−立体構造のラセミ混合物中にあり得る。天然及び非天然アミノ酸は、購入され得るか（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．； Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｃｈｅｍｔｅｃｈ）又は当該技術分野で知られている方法を使用して合成され得る。アミノ酸置換基は、その生物学的活性が保持される限り、残基の両極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性及び／又は両親媒性の性質における類似性に基づいて作製され得る。
アミノ酸残基配列は、一又は複数の腫瘍関連プロテアーゼによって生じたペプチジル誘導体薬物コンジュゲートから選択的に酵素により切断されるように、特に適合され得る。
ある実施態様において、Ｌ３は、少なくとも一のリジン又はアルギニン残基を含むペプチドリンカーである。
ある実施態様において、Ｌ３は、リジン、Ｄ−リジン、シトルリン、アルギニン、プロリン、ヒスチジン、オルニチン及びグルタミンから選択されるアミノ酸残基を含むペプチドリンカーである。
ある実施態様において、Ｌ３は、バリン、イソロイシン、フェニルアラニン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、アラニン、ロイシン、トリプトファン及びチロシンから選択されるアミノ酸残基を含むペプチドリンカーである。
ある実施態様において、Ｌ３は、バリン−シトルリン、プロリン−リジン、メチオニン−Ｄ−リジン、アスパラギン−Ｄ−リジン、イソロイシン−プロリン、フェニルアラニン−リジン、及びバリン−リジンから選択されるジペプチドリンカーである。ある実施態様において、Ｌ３はバリン−シトルリンである。
本開示での使用に適した多数の特定のペプチドリンカー分子は、特定の腫瘍関連プロテアーゼによる酵素的切断に関するその選択性において設計され、最適化され得る。本開示での使用のためのあるペプチドリンカーは、プロテアーゼ、カテプシンＢ及びＤに対して最適化されたものである。
親水性の自壊性リンカー
式（Ｉ）において、Ｘは親水性の自壊性リンカーである。
本開示の化合物は、スペースを空け、薬物部分及び標的化部分と共有結合し、親水基を包含する親水性の自壊性スペーサー部分を採用しており、これは、化合物の高い溶解度を提供する。いくつかの酵素不安定リンカーの関連した疎水性の増加は、特に、高い疎水性を持つ薬物との薬物コンジュゲートの凝集をもたらし得る。親水基をリンカーへ包含することにより、薬物コンジュゲートの凝集が減少されてもよい。
自壊性スペーサーは、通常安定している三構成の分子中に二のスペースが空いた化学的部分と共有結合する能力があり、酵素的切断の手段により三構成の分子からスペースが空いた化学的部分のうちの一方を放出し得、且つ酵素的切断に続いて、残りの分子から自発的に切断してスペースが開いた化学的部分のうちの他方を放出し得る、二官能性の化学的部分として定義されてもよい。
ある実施態様において、Ｘは、ベンジルオキシカルボニル基である。ある実施態様において、Ｘは、
Figure 2017528418
［式中、Ｒ１は水素、無置換若しくは置換Ｃ１−３アルキル、又は無置換若しくは置換ヘテロシクリルである］である。
そのような例において、本開示は、式（ＩＩ）：
Figure 2017528418
［式中：
Ｄは薬物部分であり；
Ｔは標的化部分であり；
Ｒ１は水素、無置換若しくは置換Ｃ１−３アルキル、又は無置換若しくは置換ヘテロシクリルであり；
Ｌ１は結合、第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーであり；
Ｌ２は結合、第二の自壊性リンカーであって；
ここで、Ｌ１が第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーである場合に、Ｌ２は結合であり；
ここで、Ｌ２が第二の自壊性リンカーである場合に、Ｌ１は結合であり；
Ｌ３はペプチドリンカーであり；
Ｌ４は結合又はスペーサーであり；且つ
Ａはアシル単位である］
の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を提供する。
いくつかの実施態様において、式（ＩＩａ）：
Figure 2017528418
［式中、Ｄ、Ｔ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４及びＡは、式（ＩＩ）に定義される通りであり、ｐは１から２０である］の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体が提供される。いくつかの実施態様において、ｐは１から８である。いくつかの実施態様において、ｐは１から６である。いくつかの実施態様において、ｐは１から４である。いくつかの実施態様において、ｐは２から４である。いくつかの実施態様において、ｐは１、２、３又は４である。いくつかの実施態様において、ｐは２である。いくつかの実施態様において、ｐは３である。いくつかの実施態様において、ｐは４である。
式（ＩＩ）又は（ＩＩａ）のある実施態様において、Ｒ１は水素である。ある例において、Ｒ１はメチルである。
式（Ｉ）又は（Ｉａ）に関して記載されるＤ、Ｔ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、及びＡの一つ一つの変化形が、一つ一つの変化形及び組み合わせが個別に記載されているかのように、式（ＩＩ）又は（ＩＩａ）に適用され得ると意図及び理解される。例えば、いくつかの実施態様において、式（ＩＩ）又は（ＩＩａ）の標的化部分は、葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）（例えば、ヒトＦＲＡ）に特異的に結合する抗体である。式（Ｉ）に関して記載されたＤ、Ｔ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、及びＡの一つの一つ一つの変化形を、必要に応じて、一つ一つの組み合わせが個別に記載されているかのように、式（Ｉ）に関して記載されたＤ、Ｔ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、及びＡの別の一つの一つ一つの変化形と組み合わせてもよいと更に意図及び理解される。
薬物部分の放出は、アミノベンジルオキシカルボニル基の自己脱離反応に基づく。便宜上、結合した薬物及びペプチドと共にアミノベンジルオキシカルボニル基を用いた反応スキームを以下に示す。
Figure 2017528418
スキーム１に関して、ペプチドからの切断の際、アミノベンジルオキシカルボニルが形成され、自発的な１，６脱離を受けてシクロヘキサ−２，５−ジエニミン誘導体及び二酸化炭素を形成し、薬物を放出し得る。
任意選択的な第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカー
第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーは、薬物部分を放出するために化合物の切断を微調整することを可能にするための追加のリンカーを提供する。
式（Ｉ）又は（Ｉａ）において、Ｌ１は、結合、第二の自壊性リンカー、又は環化自己脱離リンカーであり；Ｌ２は、結合又は第二の自壊性リンカーであって；ここで、Ｌ１が第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーである場合に、Ｌ２は結合であり；ここで、Ｌ２が第二の自壊性リンカーである場合に、Ｌ１は結合である。したがって、親水性の自壊性リンカーに隣接する任意選択的な第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーが存在する。
ある実施態様において、Ｌ１は結合であり、且つＬ２は結合である。ある実施態様において、Ｌ１は第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーであり、Ｌ２は結合である。ある実施態様において、Ｌ１は結合であり、Ｌ２は第二の自壊性リンカーである。
ある実施態様において、式（Ｉ）又は（Ｉａ）では、Ｌ１は結合である。ある実施態様において、Ｌ１は第二の自壊性スペーサー又は環化自己脱離リンカーであり、親水性の自壊性リンカーと薬物部分を分離する。ある実施態様において、Ｌ１はアミノベンジルオキシカルボニルリンカーである。
ある実施態様において、Ｌ１は：
Figure 2017528418
［式中、ｎは、１又は２である］
から選択される。
ある例において、第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーは、使用され得る多種多様な部分に関する設計潜在性を提供する。例えば、式（ＩＩ）又は（ＩＩａ）において、親水性の自壊性リンカーと薬物部分との間のカルバメート結合（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｈ）−）結合は、安定した薬物コンジュゲートを提供し、遊離薬物部分を提供するために容易に切断するであろう。親水性の自壊性リンカーは、典型的にはオキシカルボニル基（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−）で終結する。薬物部分が、カルバメート基を形成するよう反応するために使用され得るアミノ反応基を有する場合、第二の自壊性ユニット又は環化自己脱離リンカーは、採用されてもよいが、必要ではない。しかしながら、薬物がアミノ基を含有せず、他の反応官能基を含有する場合、そのような薬物は、薬物部分とアミノベンジルオキシカルボニル基との間の第二の、中間体自壊性スペーサー又は環化自己脱離リンカーを含めることにより、本実施態様のアミノベンジルオキシカルボニル含有化合物中に包含されていてもよい。
以下のＬ１の環化自己脱離リンカーは、親水性の自壊性リンカーのアミノベンジルオキシカルボニル基
Figure 2017528418
に対するヒドロキシル含有又はチオール含有薬物部分の結合を提供する。
実施態様の化合物中の環化自己脱離リンカーは、化合物の切断を提供し、薬物部分を放出する。隣接する親水性の自壊性リンカーの脱離メカニズムは、Ｌ１のアミノ基を示すであろう。次いで、アミノ基は、Ｌ１のカルバメート基又はチオカルバメート結合及びヒドロキシル含有又はチオール含有薬物部分を放出する環化反応中の薬物部分と反応し得る。
ある実施態様において、式（Ｉ）又は（Ｉａ）では、Ｌ２は結合である。ある実施態様において、Ｌ２は第二の自壊性スペーサーであり、親水性の自壊性リンカーとペプチドリンカーを分離する。ある実施態様において、Ｌ２はアミノベンジルオキシカルボニルリンカーである。
ある実施態様において、Ｌ２は、
Figure 2017528418
［式中、ｎは、１又は２である］
から選択される。
任意選択的なスペーサー
式（Ｉ）又は（Ｉａ）において、Ｌ４は結合又はスペーサーである。ある実施態様において、Ｌ４は結合である。ある実施態様において、Ｌ４はスペーサーであり、それは薬物部分と標的化部分との間に距離を提供し得る。
ある実施態様において、スペーサーは、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式、置換複素環式及びヘテロ原子、並びにそれらの組合せから選択される。スペーサーは、その原子含有量（例えば、炭素原子のみを含有するスペーサー又は炭素原子とスペーサー上に存在する一又は複数のヘテロ原子を含有するスペーサー）において均一又は不均一であり得る。好ましくは、スペーサーは、１から５０個の炭素原子並びに酸素、窒素及び硫黄から選択される０から３０個のヘテロ原子を含有する。スペーサーはまた、キラル若しくはアキラル、直鎖状、分枝状又は環状であってもよい。
ある実施態様において、Ｌ４は、ポリアルキレングリコール、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、及びポリアミンから選択されるスペーサーである。アルケニレンの例は、ビニレン（−ＣＨ＝ＣＨ−）、アリレン（−ＣＨ２Ｃ＝Ｃ−）、及びブタ−３−エン−１−イレン（−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ＝ＣＨ−）を含むが、これらに限定されない。アルケニレンの例は、アセチレニレン（−Ｃ≡Ｃ−）、及びプロパルギレン（−ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）を含むが、これらに限定されない。
ある実施態様において、Ｌ４は、ペプチド結合の末端に結合を提供し得る官能基を含むスペーサーである。官能基、例えばＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）−ＮＨ、Ｓ（Ｏ）２、及びＳ（Ｏ）２−ＮＨは、ペプチド結合の末端に結合を提供し得る。ある例において、Ｌ４はＬ４ａ−Ｃ（Ｏ）、Ｌ４ａ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ、Ｌ４ａ−Ｓ（Ｏ）２、Ｌ４ａ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＨであって、Ｌ４ａはポリアルキレングリコール、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、及びポリアミンから選択される。ある例において、Ｌ４はＬ４ａ−Ｃ（Ｏ）であって、Ｌ４ａはポリアルキレングリコール、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、及びポリアミンから選択される。
ある実施態様において、Ｌ４はＬ４ａ−Ｃ（Ｏ）であって、Ｌ４ａはポリアルキレングリコールである。ある実施態様において、Ｌ４はＬ４ａ−Ｃ（Ｏ）であって、Ｌ４ａはポリエチレングリコールである。ある実施態様において、スペーサーは−ＣＨ２−（ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｍ−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−の式であって、ｍは０から３０の整数である。
ある実施態様において、Ｌ４はＬ４ａ−Ｃ（Ｏ）であって、Ｌ４ａはアルキレンである。ある実施態様において、Ｌ４はＬ４ａ−Ｃ（Ｏ）であって、Ｌ４ａはＣ１−１０アルキレン、Ｃ１−８アルキレン、又はＣ１−６アルキレンである。ある実施態様において、Ｌ４はＬ４ａ−Ｃ（Ｏ）であって、Ｌ４ａはＣ４アルキレン、Ｃ５アルキレン、又はＣ６アルキレンである。ある実施態様において、Ｌ４はＬ４ａ−Ｃ（Ｏ）であって、Ｌ４ａはＣ５アルキレンである。
アシル単位
式（Ｉ）又は（Ｉａ）において、Ａはアシル単位である。ある実施態様において、アシル単位「Ａ」は、硫黄原子を含み、標的化部分に由来する硫黄原子を介して標的化部分に結合される。そのような例において、ジチオ結合は、アシル単位と標的化部分との間で形成される。
ある実施態様において、Ａは、
Figure 2017528418
［式中、Ｑ２はＮＨ又はＯであり、各ｑは独立して１から１０の整数であり、各ｑ１は、独立して１から１０の整数である］から選択される。ある実施態様において、ｑは、２から５の整数、例えば２、３、４、又は５である。いくつかの実施態様において、ｑ１は、２から５の整数、例えば２、３、４、又は５である。
ある実施態様において、Ａは、
Figure 2017528418
［式中Ｑ２はＮＨ又はＯであり、ｑは１から１０の整数である］である。ある例において、ｑは、２から５の数、例えば２、３、４、又は５である。
ある実施態様において、Ａは
Figure 2017528418
［式中、Ｑ２はＮＨ又はＯであり、ｑは１から１０の整数である］である。ある例において、ｑは２から５の数字、例えば、２、３、４、又は５である。
ある実施態様において、Ａは、
Figure 2017528418
［式中、Ｑ２はＮＨ又はＯである］から選択される。
薬物部分
本実施態様の薬物コンジュゲートは、対応する薬物が効果的である通常の目的に有効であり、標的化部分に固有の能力により、特に有益な所望の細胞に薬物を輸送する優れた有効性を有する。
本実施態様での使用のための好ましい薬物は、細胞傷害性薬物、例えばがんの治療のために使用されるものなどである。そのような薬物は、一般的に、ＤＮＡ損傷剤、抗代謝物、天然産物及びそれらの類似体を含む。細胞傷害性剤のあるクラスは、例えば、酵素阻害剤、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素阻害剤、チミジル酸合成酵素阻害剤、ＤＮＡインターカレーター、ＤＮＡ切断剤、トポイソメラーゼ阻害剤、薬物のアントラサイクリンファミリー、ビンカ薬物、マイトマイシン、ブレオマイシン、細胞傷害性ヌクレオシド、薬物のプテリジンファミリー、ジイネン、ポドフィロトキシン、分化誘導剤及びタキソールを含む。これらのクラスのある有用な要素は、例えば、メトトレキサート、メトプテリン、ジクロロメトトレキサート、５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、シトシンアラビノシド、メルファラン、ロイロシン、ロイロシデイン、アクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、マイトマイシンＣ、マイトマイシンＡ、カルミノマイシン、アミノプテリン、タリソマイシン、ポドフィロトキシン及びポドフィロトキシン誘導体（例えばエトポシド又はリン酸エトポシド）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、タキソール、タキソテールレチノイン酸、酪酸、Ｎ８−アセチルスペルミジン、並びにそれらの類似体を含む。その他の薬物は、ドラスタチン及びデュオカルマイシンを含む。
当業者は、本発明のコンジュゲートを作成する目的で化合物の反応をより簡便にするために、所望の化合物に対して化学修飾をなしてもよい。
ある実施態様において、Ｄは、薬物がＬ１又はＸに結合されていることにより、化学的に反応性のある官能基を有する薬物部分である。ある例において、官能基は、第一級アミン、第二級アミン、ヒドロキシル及びスルフヒドリルから選択される。ある例において、官能基は第一級アミン又は第二級アミンである。ある例において、官能基はヒドロキシルである。ある例において、官能基はスルフヒドリルである。
上記のように、親水性の自壊性リンカーは、典型的にはオキシカルボニル基（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−）で終結する。したがって、アミノ含有薬物部分は、オキシカルボニル基と容易に反応し、カルバメート基を形成するであろう。ある実施態様において、Ｄはアミノ含有薬物部分であり、薬物は、アミノ基を通じてＬ１又はＸに結合されている。
しかしながら、薬物部分がアミノ基を含有しない場合、Ｌ１の第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーは、使用され得る多種多様な部分に関する設計可能性を提供し得る。ある実施態様において、Ｄはヒドロキシル含有又はスルフヒドリル含有薬物部分であり、薬物は、ヒドロキシル又はスルフヒドリル基を通じてＬ１に結合されている。
代表的なアミノ含有薬物は、マイトマイシン−Ｃ、マイトマイシン−Ａ、ダウノルビシン、ドキソルビシン、アミノプテリン、アクチノマイシン、ブレオマイシン、９−アミノカンプトテシン、Ｎ８−アセチルスペルミジン、１−（２−クロロエチル）−１，２−ジメタンスルホニルヒドラジド、タリソマイシン、シタラビン、ドラスタチン及びそれらの誘導体を含む。アミノ含有薬物は、天然にはアミノ基を含有しない薬物のアミノ誘導体も含む。ある実施態様において、Ｄはデュオカルマイシン、ドラスタチン、ツブリシン、ドキソルビシン（ＤＯＸ）、パクリタキセル若しくはマイトマイシンＣ（ＭＭＣ）、又はそのアミノ誘導体である。
代表的なヒドロキシル含有薬物は、エトポシド、カンプトテシン、タキソール、エスペラマイシン、１，８−ジヒドロキシ−ビシクロ［７．３．１］トリデカ−４−９−ジエン−２，６−ジイン−１３−オン（米国特許第５１９８５６０号）、ポドフィロトキシン、アングイジン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、モルホリン−ドキソルビシン、ｎ−（５，５−ジアセトキシ−ペンチル）ドキソルビシン、デュオカルマイシン及びそれらの誘導体を含む。
代表的なスルフヒドリル含有薬物は、エスペラマイシン及び６−メルカプトプリン、並びにそれらの誘導体を含む。
本実施態様における薬物としての使用のための細胞傷害性剤のある基は、以下の式：
Figure 2017528418
の薬物を含む。
標的化部分
本開示において記載されるような標的化部分とは、所与の細胞集団（例えば、ＦＲＡ発現細胞）を特異的に結合する、それと複合体を形成する、それと反応する、又はそれと会合する部分又は分子を指す。本明細書中に記載されるコンジュゲートにおいて、本明細書中に記載される標的化部分は、リンカーを介してコンジュゲート中の薬物部分に結合される。いくつかの実施態様において、標的化部分は、標的化部分がそれと結合し、それと複合体を形成し、それと反応し、又はそれと会合する特定の標的細胞集団に薬物部分（例えば、治療目的で使用される薬物部分）を送達する能力がある。
いくつかの実施態様において、標的化部分は抗体（又は抗体部分若しくは抗体標的化部分）である。いくつかの実施態様において、標的化部分は、スルフヒドリル（−ＳＨ）基（例えば遊離した反応性スルフヒドリル（−ＳＨ）基）を含むか、又はそのようなスルフヒドリル基を含有するように改変され得る。いくつかの実施態様において、標的化部分は、スルフヒドリル基（例えば遊離した反応性スルフヒドリル基）を有する抗体を含む。いくつかの実施態様において、標的化部分は、遊離したチオール基、例えば遊離したチオール基を有する抗体を含むか、又はそのようなチオ基を含有するように改変され得る。いくつかの実施態様において、標的化部分は、スルフヒドリル基中の硫黄原子を介した、リンカーへのスルフヒドリル基又はチオール基結合を含む。
いくつかの実施態様において、標的化部分（例えば抗体標的化部分）は、薬物部分への結合に関して一又は複数の結合部位を有する。例えば、標的化部分Ｔ（例えば抗体）は、リンカー−薬物部分（例えば、Ａは標的抗体のスルフヒドリル基への結合に適している、Ａ−Ｌ４−Ｌ３−Ｌ２−Ｘ−Ｌ１−Ｄ）への結合のための複数の部位（例えば複数のスルフヒドリル基）を有し得る。いくつかの実施態様において、標的化部分は、１から２０の結合部位を有し得る。いくつかの実施態様において、標的化部分は、１から２０、１から１０、１から８、１から６、１から４、２から８、２から６、又は２から４の結合部位を有し得る。いくつかの実施態様において、標的化部分は、１、２、３、４、５、６、７、又は８の結合部位を有する。いくつかの実施態様において、標的化部分は、２の結合部位を有する。いくつかの実施態様において、標的化部分は、１の結合部位を有する。いくつかの実施態様において、標的化部分は、４の結合部位を有する。いくつかの例において、ある潜在的な結合部位は薬物部分への結合に利用できなくてもよい。したがって、標的化部分Ｔ中の結合部位の数は、潜在的な結合部位の数よりも少ない数の結合した薬物部分を有する薬物コンジュゲートをもたらす。いくつかの実施態様において、一又は複数の結合部位は薬物部分の結合に利用されてもよい。例えば、抗体標的化部分は、抗体の各鎖上にリンカーを介した薬物部分への結合に利用できる一又は二のスルフヒドリル基を有し得る。
本明細書中に記載される抗体とは、少なくとも一の抗原認識部位を通じて、免疫グロブリン分子の可変領域に存在する標的（すなわち、ＦＲＡ）に特異的に結合することができる免疫グロブリン分子を指す。本明細書中で使用される場合、用語「抗体」とは、インタクトなポリクローナル又はモノクローナル抗体だけではなく、その抗原結合断片（例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、一本鎖、その変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、及び抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子のその他修正された立体配置を包含する。抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、若しくはＩｇＭ（又はそれらのサブクラス）等のあらゆるクラスの抗体を含み、特定のクラスに属している必要はない。その重鎖の定常ドメインの抗体アミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは異なるクラスが割り当てられ得る。免疫グロブリンには５つの主要なクラスがあり：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭがあり、これらのいくつかは、更にサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２に分けられ得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインはそれぞれアルファ、デルタ、エプシロン、ガンマ、及びミューと称される。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造及び三次元立体配位はよく知られている。
本明細書中に記載される標的化部分（又は抗体標的化部分）中に含まれるか又は使用される抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片（例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃ等）、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体（例えば完全ヒト抗体）、一本鎖（ＳｃＦｖ）、二重特異性抗体、多重特異性抗体、その変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、及び必要な特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子のその他修正された立体配置を包含し得る。抗体は、マウス、ラット、ラクダ、ヒト、又はその他起源（ヒト化抗体を含む）であってもよい。いくつかの実施態様において、本明細書中に記載される標的化部分（又は抗体標的化部分）中に使用される抗体は、以下のうちの何れか一つである：二重特異性抗体、多重特異性抗体、一本鎖、二官能性、並びに少なくとも一の抗体の超可変領域（ＨＶＲ）又は相補性決定領域（ＣＤＲ）によりもたらされたポリペプチドに対する親和性を有するキメラ及びヒト化分子。本開示中に使用される抗体は、抗体重鎖の可変領域か又は抗体軽鎖の可変領域である単一ドメイン抗体も含む。Ｈｏｌｔら， Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２１：４８４−４９０， ２００３。抗体から天然に存在する六のＨＶＲ又はＣＤＲのうちの三を含有する、抗体重鎖の可変領域か又は抗体軽鎖の可変領域を含むドメイン抗体を作製する方法は、当該技術分野で知られている。Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ， Ｒｅｖ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ７４：２７７−３０２， ２００１を参照のこと。
いくつかの実施態様において、本明細書中に記載される標的化部分（又は抗体標的化部分）中に含まれるか又は使用される抗体は、モノクローナル抗体である。本明細書中で使用される場合、モノクローナル抗体とは、実質的に均一な抗体の抗体、すなわち、集団を含む個々の抗体が、若干存在してもよい天然に存在する突然変異の可能性を除いて同一であることを指す。更に、異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体は個別抗体の混合物ではない。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体集団から得られているという抗体の特徴を示し、抗体を何か特定の方法で生成しなければならないことを意味するものではない。例えば、本開示で使用されるモノクローナル抗体は、及びＭｉｌｓｔｅｉｎ， １９７５， Ｎａｔｕｒｅ， ２５６：４９５により最初に記載されたハイブリドーマ法により作製されてもよく、又は、米国特許第４８１６５６７号に記載されるような組換えＤＮＡ法により作製されてもよい。モノクローナル抗体はまた、例えばＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら，１９９０， Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２−５５４に記載される技術を使用して生成されるファージライブラリーから単離されてもよい。
いくつかの実施態様において、本明細書中に記載される標的化部分（又は抗体標的化部分）中に含まれるか又は使用される抗体は、キメラ抗体である。本明細書中で使用される場合、キメラ抗体とは、第一の種から可変領域又は可変領域の一部と第二の種から定常領域を有する抗体を指す。インタクトなキメラ抗体は、キメラ軽鎖の二のコピーとキメラ重鎖の二のコピーを含む。キメラ抗体の生成は当該技術分野で知られている（Cabillyら (1984), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:3273-3277； Harlow及びLane (1988), Antibodies: a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory）。典型的には、これらのキメラ抗体において、軽鎖及び重鎖の両方の可変領域は、哺乳動物の一種に由来する抗体の可変領域を模倣し、その一方、定常部分は、別の種に由来する抗体中の配列と相同である。そのようなキメラ形態に対する一つの明確な利点は、例えば、可変領域は、非ヒト宿主生物体からの容易に利用できるハイブリドーマ又はＢ細胞を使用して、例えばヒト細胞調製物に由来する定常領域との組み合わせで、現在知られている源に簡便に由来し得る点である。可変領域が調製を容易にする利点を有し、特異性がその源に影響されないのに対し、ヒトである定常領域は、抗体が注入された場合、非ヒト源からの定常領域よりも、ヒト対象からの免疫反応を引き起こす可能性が低い。しかしながら、定義はこの特定の例に限定されない。
いくつかの実施態様において、本明細書中に記載される標的化部分（又は抗体標的化部分）中に含まれるか又は使用される抗体は、ヒト化抗体である。本明細書中で使用される場合、ヒト化抗体とは、特異的なキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又は非ヒト免疫グロブリン由来の最小限の配列を含有するそれらの断片（例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２若しくはその他抗体の抗原結合配列）である非ヒト（例えばマウス）抗体の形態を指す。大抵の場合、ヒト化抗体は、レシピエントのＨＶＲ又はＣＤＲ由来の残基が、非ヒト種、例えば、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット又はウサギのＨＶＲ又はＣＤＲ（ドナー抗体）由来の残基により置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの例においては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）の残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられている。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも移入されたＨＶＲ又はＣＤＲ又はフレームワーク配列にも見られないが、抗体パフォーマンスを更に改良し最適化するために含まれる残基を含んでもよい。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも一つ、典型的には二つの可変ドメインの全てを実質的に含み、ＨＶＲ若しくはＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。また、ヒト化抗体は、最適には、免疫グロブリン、通常はヒト免疫グロブリンの定常領域又はドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部を含む。抗体は国際公開第９９／５８５７２号に記載されるように修飾されたＦｃ領域を有してもよい。ヒト化抗体のその他形態は、元の抗体に関して変更された一又は複数のＨＶＲ又はＣＤＲ（一、二、三、四、五、六）を有し、これは、元の抗体からの一又は複数のＨＶＲ又はＣＤＲ「に由来する」一又は複数のＨＶＲ又はＣＤＲとも称される。
いくつかの実施態様において、本明細書中に記載される標的化部分（又は抗体標的化部分）中に含まれるか又は使用される抗体は、ヒト抗体である。本明細書中で使用される場合、ヒト抗体とは、ヒトによって産生される抗体のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を有する抗体を意味し、及び／又は当該技術分野で知られるヒト抗体を作製するための任意の技術を使用して作製されている。本明細書中で使用されるヒト抗体は、少なくとも一のヒト重鎖ポリペプチド又は少なくとも一のヒト軽鎖ポリペプチドを含む抗体を含む。そのような例の一つは、マウスの軽鎖及びヒト重鎖ポリペプチドを含む抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で公知の様々な技術を用いて産生することができる。一実施態様において、ヒト抗体は、ヒト抗体を発現させるファージライブラリーから選択される（Vaughanら, 1996, Nature Biotechnology, 14:309-314；Sheets ら, 1998, PNAS, (USA) 95:6157-6162；Hoogenboom及びWinter, 1991, J. Mol. Biol., 227:381；Marksら, 1991, J. Mol. Biol., 222:581）。ヒト抗体はまた、内因性の免疫グロブリン遺伝子が部分的に又は完全に不活性化されている、マウス等のトランスジェニック動物にヒト免疫グロブリン遺伝子座を導入することにより、作製され得る。この手法は、米国特許第５５４５８０７号；同第５５４５８０６号；同第５５６９８２５号；同第５６２５１２６号；同第５６３３４２５号；及び同第５６６１０１６号に記載されている。あるいは、ヒト抗体は、標的抗原に対する抗体を産生する不死化ヒトＢリンパ球により調製されてもよい（そのようなＢリンパ球は個体から回収されてもよく、又はインビトロで免疫化されてもよい）。例えば、Ｃｏｌｅら， Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ， Ａｌａｎ Ｒ． Ｌｉｓｓ， ｐ． ７７ （１９８５）； Ｂｏｅｒｎｅｒら， １９９１， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １４７（１）：８６−９５；及び米国特許第５７５０３７３号を参照のこと。
いくつかの実施態様において、本明細書中に記載される標的化部分（又は抗体標的化部分）中に含まれるか又は使用される抗体は、葉酸受容体アルファ（即ち、ＦＲＡ）（例えば、ヒトＦＲＡ）に特異的に結合する。いくつかの実施態様において、本明細書に記載される標的化部分（又は抗体標的化部分）に含まれるか又は使用される抗体は、ＦＲＡの細胞外ドメイン（例えば、ヒトＦＲＡの細胞外ドメイン）に特異的に結合する。本明細書で使用されるように、「ＦＲＡ」は、野生型配列及び天然に存在する変異体配列の両方を指す。本発明の抗体によって認識されるＦＲＡの非制限的な例は、ヒトＦＲＡ（寄託番号：Ｐ１５３２８）である。
以下に、ヒト葉酸受容体アルファのアミノ酸配列：配列番号３５（ヒトＦＲＡ）を提供する。
ＭＡＱＲＭＴＴＱＬＬ ＬＬＬＶＷＶＡＶＶＧ ＥＡＱＴＲＩＡＷＡＲ ＴＥＬＬＮＶＣＭＮＡ ＫＨＨＫＥＫＰＧＰＥ
ＤＫＬＨＥＱＣＲＰＷ ＲＫＮＡＣＣＳＴＮＴ ＳＱＥＡＨＫＤＶＳＹ ＬＹＲＦＮＷＮＨＣＧ ＥＭＡＰＡＣＫＲＨＦ
ＩＱＤＴＣＬＹＥＣＳ ＰＮＬＧＰＷＩＱＱＶ ＤＱＳＷＲＫＥＲＶＬ ＮＶＰＬＣＫＥＤＣＥ ＱＷＷＥＤＣＲＴＳＹ
ＴＣＫＳＮＷＨＫＧＷ ＮＷＴＳＧＦＮＫＣＡ ＶＧＡＡＣＱＰＦＨＦ ＹＦＰＴＰＴＶＬＣＮ ＥＩＷＴＨＳＹＫＶＳ
ＮＹＳＲＧＳＧＲＣＩ ＱＭＷＦＤＰＡＱＧＮ ＰＮＥＥＶＡＲＦＹＡ ＡＡＭＳＧＡＧＰＷＡ ＡＷＰＦＬＬＳＬＡＬ
ＭＬＬＷＬＬＳ
いくつかの実施態様において、本明細書に記載される抗ＦＲＡ抗体は、ヒト細胞（例えば、ヒトがん細胞）の細胞表面上に発現される成熟ＦＲＡ（例えば、ヒトＦＲＡ）に結合する。いくつかの実施態様において、本明細書に記載される抗ＦＲＡ抗体は、ヒトがん細胞（例えば、卵巣がん細胞、肺がん細胞、子宮がん細胞、精巣絨毛癌細胞、上衣腫細胞、中皮腫細胞、乳がん細胞、結腸がん細胞、又は腎細胞癌細胞）の細胞表面上に発現される成熟ＦＲＡに結合する。
抗ＦＲＡ抗体の例及びそのアミノ酸配列を以下の表１に提供する。
Figure 2017528418
ＩｇＧ４ｐは、Ｓｅｒ２２８のＰｒｏへの突然変異（Ｓ２２８Ｐ）を有するヒトＩｇＧ４抗体を指し、これによってインビボでＦａｂアームの別のＩｇＧ４との交換が防止されるＳｔｕｂｅｎｒａｕｃｈら（２０１０）Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂ． Ｄｉｓｐｏｓ．３８（１）：８４−９１。
以下に示す配列の下線部分は、可変領域の配列を示す。以下に示す配列の太字部分は、ＣＤＲを示す。
配列番号１（ｈＬＫ２６−ＩｇＧ１重鎖）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＳＡＳＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＡＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＦＬＱＭＤＳＬＲＰＥＤＴＧＶＹＦＣＡＲＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＰＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号２（ｈＬＫ２６−ＩｇＧ４ｐ重鎖）：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＳＡＳＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＡＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＦＬＱＭＤＳＬＲＰＥＤＴＧＶＹＦＣＡＲＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＰＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３（ｈＬＫ２６−カッパ軽鎖）：
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＰＷＩＹＧＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号４（２６Ｂ３（マウス）ＩｇＧ１重鎖）：
ＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＤＹＳＦＴＧＹＦＭＮＷＶＭＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＲＩＦＰＹＮＧＤＴＦＹＮＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＨＭＥＬＲＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＧＴＨＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＡＫＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡＰＧＳＡＡＱＴＮＳＭＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＰＳＳＰＲＰＳＥＴＶＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＱＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳＡＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴＤＦＦＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱＰＩＭＮＴＮＧＳＹＦＶＹＳＫＬＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＫ
配列番号５（２６Ｂ３（マウス）カッパ軽鎖）：
ＰＡＳＬＳＡＳＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＴＳＥＮＩＦＳＹＬＡＷＹＱＱＫＱＧＩＳＰＱＬＬＶＹＮＡＫＴＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＦＳＬＫＩＮＳＬＱＰＥＤＦＧＳＹＹＣＱＨＨＹＡＦＰＷＴＦＧＧＧＳＫＬＥＩＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ
配列番号６（ｈＭｏｖ１９−ＩｇＧ１重鎖）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＦＭＮＷＶＫＱＳＰＧＱＳＬＥＷＩＧＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＮＴＡＨＭＥＬＬＳＬＴＳＥＤＦＡＶＹＹＣＴＲＹＤＧＳＲＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号７（ｈＭｏｖ１９−カッパ軽鎖）：
ＤＩＶＬＴＱＳＰＬＳＬＡＶＳＬＧＱＰＡＩＩＳＣＫＡＳＱＳＶＳＦＡＧＴＳＬＭＨＷＹＨＱＫＰＧＱＱＰＲＬＬＩＹＲＡＳＮＬＥＡＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＫＴＤＦＴＬＴＩＳＰＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＳＲＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号８（ｈＬＫ２６重鎖可変領域）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＳＡＳＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＡＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＦＬＱＭＤＳＬＲＰＥＤＴＧＶＹＦＣＡＲＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＰＶＴＶＳＳ
配列番号９（ｈＬＫ２６軽鎖可変領域）
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＰＷＩＹＧＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号１０（２６Ｂ３重鎖可変領域）
ＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＤＹＳＦＴＧＹＦＭＮＷＶＭＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＲＩＦＰＹＮＧＤＴＦＹＮＱＫＦＫＧＲＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＨＭＥＬＲＳＬＡＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＧＴＨＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
配列番号１１（２６Ｂ３軽鎖可変領域）
ＰＡＳＬＳＡＳＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＴＳＥＮＩＦＳＹＬＡＷＹＱＱＫＱＧＩＳＰＱＬＬＶＹＮＡＫＴＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＦＳＬＫＩＮＳＬＱＰＥＤＦＧＳＹＹＣＱＨＨＹＡＦＰＷＴＦＧＧＧＳＫＬＥＩＫ
配列番号１２（ｈＭｏｖ１９重鎖可変領域）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＦＭＮＷＶＫＱＳＰＧＱＳＬＥＷＩＧＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＮＴＡＨＭＥＬＬＳＬＴＳＥＤＦＡＶＹＹＣＴＲＹＤＧＳＲＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１３（ｈＭｏｖ１９軽鎖可変領域）
ＤＩＶＬＴＱＳＰＬＳＬＡＶＳＬＧＱＰＡＩＩＳＣＫＡＳＱＳＶＳＦＡＧＴＳＬＭＨＷＹＨＱＫＰＧＱＱＰＲＬＬＩＹＲＡＳＮＬＥＡＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＫＴＤＦＴＬＴＩＳＰＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＳＲＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
上記抗ＦＲＡ抗体のＣＤＲを以下の表２に提供する。
Figure 2017528418
重鎖定常領域のアミノ酸配列を以下に提供する：
配列番号３２（ＩｇＧ１重鎖定常領域）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号３３（ＩｇＧ４ｐ重鎖定常領域）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３４（カッパ軽鎖定常領域）
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、抗体ｈＬＫ２６、ｈＭｏｖ１９であるか、又はこれらの抗体の何れかに由来する抗体である。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、抗体２６Ｂ３又は抗体２６Ｂ３に由来する抗体（例えばヒト化又はキメラ抗体）である。抗体ｈＬＫ２６、ｈＭｏｖ１９、及び２６Ｂ３の軽鎖及び重鎖可変配列は、表１において上記の通りである。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、抗体ｈＬＫ２６又はｈＭｏｖ１９（又はこれらの抗体の何れか一つに由来する抗体）の軽鎖及び／又は重鎖からの一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、抗体ｈＬＫ２６又はｈＭｏｖ１９（又はこれらの抗体の何れか一つに由来する抗体）の軽鎖又は重鎖からの一、二、又は三のＣＤＲ、例えば表２に上記のＣＤＲ配列を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、抗体ｈＬＫ２６又はｈＭｏｖ１９（又はこれらの抗体の何れか一つに由来する抗体）の軽鎖及び重鎖からの一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）、例えば表２に上記のＣＤＲ配列を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、抗体２６Ｂ３又は抗体２６Ｂ３に由来する抗体（例えば、ヒト化抗体又はキメラ抗体）の軽鎖及び／又は重鎖からの一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、抗体２６Ｂ３又は抗体２６Ｂ３に由来する抗体（例えば、ヒト化抗体又はキメラ抗体）の軽鎖又は重鎖からの一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）、例えば表２に上記のＣＤＲ配列を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、抗体２６Ｂ３又は抗体２６Ｂ３に由来する抗体（例えば、ヒト化抗体又はキメラ抗体）の軽鎖及び重鎖からの一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）、例えば表２に上記のＣＤＲ配列を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、抗体ｈＬＫ２６又はｈＭｏｖ１９の断片又は領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、抗体２６Ｂ３に由来する抗体（例えば、ヒト化抗体又はキメラ抗体）の断片又は領域を含む。一実施態様において、断片は、抗体ｈＬＫ２６又はｈＭｏｖ１９の軽鎖可変領域を含む。一実施態様において、断片は、抗体２６Ｂ３又は抗体２６Ｂ３に由来する抗体（例えば、ヒト化抗体又はキメラ抗体）の軽鎖可変領域を含む。別の実施態様において、断片は、抗体ｈＬＫ２６又はｈＭｏｖ１９の重鎖可変領域を含む。別の実施態様において、断片は、抗体２６Ｂ３又は抗体２６Ｂ３に由来する抗体（例えば、ヒト化抗体又はキメラ抗体）の重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、抗体ｈＬＫ２６又はｈＭｏｖ１９の軽鎖及び重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、抗体２６Ｂ３又は抗体２６Ｂ３に由来する抗体（例えば、ヒト化抗体又はキメラ抗体）の軽鎖及び重鎖可変領域を含む。更に別の実施態様において、断片は、抗体ｈＬＫ２６、２６Ｂ３、又はｈＭｏｖ１９の軽鎖及び／又は重鎖からの一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む。更に別の実施態様において、断片は、抗体ｈＬＫ２６、２６Ｂ３、又はｈＭｏｖ１９の軽鎖又は重鎖からの一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む。更に別の実施態様において、断片は、抗体ｈＬＫ２６、２６Ｂ３、又はｈＭｏｖ１９の軽鎖及び重鎖からの一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む。いくつかの実施態様において、抗体ｈＬＫ２６、２６Ｂ３、又はｈＭｏｖ１９に由来する一又は複数のＨＶＲ（又はＣＤＲ）は、ｈＬＫ２６、２６Ｂ３、又はｈＭｏｖ１９の少なくとも一つ、少なくとも二つ、少なくとも三つ、少なくとも四つ、少なくとも五つ、又は少なくとも六つのＨＶＲ（又はＣＤＲ）と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％同一である。
いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号８からの一、二若しくは三のＨＶＲ（若しくはＣＤＲ）を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号９からの一、二若しくは三のＨＶＲ（若しくはＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号８からの一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号９からの一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号８からの一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む重鎖可変領域、及び配列番号９からの一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号１４〜１６から選択される一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号１７〜１９から選択される一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号１４〜１６から選択される一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１７〜１９から選択される一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号８からの三のＨＶＲ（若しくはＣＤＲ）を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号９からの三のＨＶＲ（若しくはＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号８からの三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号９からの三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号８からの三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む重鎖可変領域、及び配列番号９からの三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号１４に記載の重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１配列、配列番号１５に記載のＶＨ ＣＤＲ２配列、及び配列番号１６に記載のＶＨ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号１７に記載の軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１配列、配列番号１８に記載のＶＬ ＣＤＲ２配列、及び配列番号１９に記載のＶＬ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号１４に記載のＶＨ ＣＤＲ１配列、配列番号１５に記載のＶＨ ＣＤＲ２配列、及び配列番号１６に記載のＶＨ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、並びに配列番号１７に記載のＶＬ ＣＤＲ１配列、配列番号１８に記載のＶＬ ＣＤＲ２配列、及び配列番号１９に記載のＶＬ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号８の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号９の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号８の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、又は配列番号９の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号８の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号９の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１若しくは配列番号２の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び／又は配列番号３の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１若しくは配列番号２の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、又は配列番号３の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１若しくは配列番号２の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１若しくは配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖、及び／又は配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体はヒト化抗体である。
いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号１０からの一、二、若しくは三のＨＶＲ（若しくはＣＤＲ）を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１１からの一、二、若しくは三のＨＶＲ（若しくはＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号１０からの一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号１１からの一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号１０からの一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む重鎖可変領域、及び配列番号１１からの一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号２０〜２２から選択される一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号２３〜２５から選択される一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号２０〜２２から選択される一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２３〜２５から選択される一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号から１０の三のＨＶＲ（若しくはＣＤＲ）を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１１からの三のＨＶＲ（若しくはＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１０からの三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１１からの三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１０からの三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む重鎖可変領域、及び配列番号１１からの三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号２０に記載の重鎖可変領域（ＶＨ） ＣＤＲ１配列、配列番号２１に記載のＶＨ ＣＤＲ２配列、及び配列番号２２に記載のＶＨ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号２３に記載の軽鎖可変領域（ＶＬ） ＣＤＲ１配列、配列番号２４に記載のＶＬ ＣＤＲ２配列、及び配列番号２５に記載のＶＬ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号２０に記載のＶＨ ＣＤＲ１配列、配列番号２１に記載のＶＨ ＣＤＲ２配列、及び配列番号２２に記載のＶＨ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２３に記載のＶＬ ＣＤＲ１配列、配列番号２４に記載のＶＬ ＣＤＲ２配列、及び配列番号２５に記載のＶＬ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１０の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１１の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１０の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、又は配列番号１１の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１０の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１１の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号３２若しくは配列番号３３の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖定常領域、及び／又は配列番号３４の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号３２若しくは配列番号３３の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、又は配列番号３４の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号３２若しくは配列番号３３の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号３４の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号３２若しくは配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域、及び／又は配列番号３４のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号３２又は配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号３４のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号３２又は配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体はキメラ抗体である。いくつかの実施態様において、抗体はヒト化抗体である。
いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号１２からの一、二、若しくは三のＨＶＲ（若しくはＣＤＲ）を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１３の一、二、若しくは三のＨＶＲ（若しくはＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号１２からの一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号１３からの一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号１２からの一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３からの一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号２６〜２８から選択される一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号２９〜３１から選択される一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号２６〜２８から選択される一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２９〜３１から選択される一、二、又は三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１２からの三のＨＶＲ（若しくはＣＤＲ）を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１３からの三のＨＶＲ（若しくはＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１２からの三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１３からの三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１２からの三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３からの三のＨＶＲ（又はＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号２６に記載の重鎖可変領域（ＶＨ） ＣＤＲ１配列、配列番号２７に記載のＶＨ ＣＤＲ２配列、及び配列番号２８に記載のＶＨ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号２９に記載の軽鎖可変領域（ＶＬ） ＣＤＲ１配列、配列番号３０に記載のＶＬ ＣＤＲ２配列、及び配列番号３１に記載のＶＬ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、配列番号２６に記載のＶＨ ＣＤＲ１配列、配列番号２７に記載のＶＨ ＣＤＲ２配列、及び配列番号２８に記載のＶＨ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、並びに配列番号２９に記載のＶＬ ＣＤＲ１配列、配列番号３０に記載のＶＬ ＣＤＲ２配列、及び配列番号３１に記載のＶＬ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１２の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１３の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１２の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、又は配列番号１３の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１２の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号３２若しくは配列番号３３の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖定常領域、及び／又は配列番号３４の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号３２若しくは配列番号３３の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、又は配列番号３４の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号３２若しくは配列番号３３の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号３４の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号３２若しくは配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域、及び／又は配列番号３４のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号３２又は配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号３４のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号３２又は配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。
いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号６の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び／又は配列番号７の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号６の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号７の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号６の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号７の配列と少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖及び／又は配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体はヒト化抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書中に記載される標的化部分に含まれる又は使用される抗ＦＲＡ抗体（又は抗体標的化部分）は、がん細胞（例えば、ＦＲＡ陽性卵巣がん細胞、肺がん細胞、子宮がん細胞、精巣絨毛癌細胞、上衣腫細胞、中皮腫細胞、乳がん細胞、結腸がん細胞、又は腎細胞癌細胞）によって発現されるＦＲＡ（例えば、ヒトＦＲＡ）に特異的に結合する。
本明細書中で使用される場合、配列に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」及び「相同性」とは、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入した後、如何なる保存的置換も配列同一性の一部と考えないとした、特定の配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセントを指す。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当業者の技量の範囲にある種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、又はＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアのような公に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用することにより達成可能である。当業者であれば、比較される配列の完全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。
いくつかの実施態様において、本明細書中に記載されるＣＤＲは、カバットＣＤＲ、コチアＣＤＲ、又は接触ＣＤＲである。いくつかの実施態様において、ＣＤＲはカバットＣＤＲである。いくつかの実施態様において、ＣＤＲはコチアＣＤＲである。その他の実施態様において、ＣＤＲはカバット及びＣｈｏｃｉａ ＣＤＲの組合せである（「組合せＣＤＲ」又は「拡大ＣＤＲ」とも称される）。言い換えれば、一以上のＣＤＲを含有する所与の実施態様に関し、ＣＤＲは、カバット、Ｃｈｏｃｈｉａ及び／又は組合せの何れかであってもよい。ＣＤＲを決定する方法は、当分野で知られている。
抗体の可変領域とは、抗体軽鎖の可変領域若しくは抗体重鎖の可変領域の単独又は組合せを指す。一般的に、可変領域は、抗原結合を媒介し、特定の抗体の特定の抗原に関する特異性を定義する。可変領域は、「超可変領域」（「ＨＶＲ」）（例えばそれぞれ９〜１２アミノ酸長であるＨＶＲ）と呼ばれる極度の可変性のより短い領域で分割されている、フレームワーク領域（ＦＲ）（例えば１５〜３０個のアミノ酸のＦＲ）と呼ばれる比較的不変のストレッチを有してもよい。いくつかの実施態様において、天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ四つのＦＲを含み、大部分がベータシート立体配置をとり三つの超可変領域により繋がっており、この三つの超可変領域はベータシート構造と繋がり、場合によってはβシート構造の一部を形成している、ループを形成する。各鎖における超可変領域は、ＦＲにより互いに極めて近接した状態で保持されてもよく、他の鎖由来の超可変領域と共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与してもよい（Kabatら, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)を参照のこと）。定常ドメインは、抗原との抗体の結合には直接関わっていなくてもよいが、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）における抗体の関与など、多様なエフェクター機能を呈してもよい。抗体の定常領域とは、抗体軽鎖の定常領域若しくは抗体重鎖の定常領域の単独又は組合せを指す。抗体の定常領域は、一般的に、構造安定性並びに抗体鎖会合、分泌、経胎盤可動性、及び補体結合等のその他生物学的機能を提供するが、抗原に対する結合には関係していない。定常領域の遺伝子中のアミノ酸配列及び対応するエクソン配列は、それが由来する種に依拠することになるが、アロタイプをもたらすアミノ酸配列中の変異体は、種における特定の定常領域に比較的限定されることになる。各鎖の可変領域は、結合ポリペプチド配列により定常領域につながっている。結合配列は、軽鎖遺伝子中の「Ｊ」配列、及び重鎖遺伝子中の「Ｄ」配列と「Ｊ」配列との組み合わせによりコードされる。
用語「超可変領域」（「ＨＲＶ」）とは、本明細書中で使用される場合、抗原結合性を生じる抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、一般的に、「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基（例えば、ＶＬの残基２４−３４（Ｌｌ）、５０−５６（Ｌ２）及び８９−９７（Ｌ３）、並びにＶＨの残基約３１−３５Ｂ（Ｈ１）、５０−６５（Ｈ２）及び９５−１０２（Ｈ３）（一実施態様において、Ｈ１は約３１−３５）； Ｋａｂａｔら， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ． ５ｔｈ Ｅｄ． Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ． （１９９１））、及び／又は「超可変ループ」からの残基（例えば、ＶＬの残基２６−３２（Ｌ１）、５０−５２（Ｌ２）及び９１−９６（Ｌ３）、並びにＶＨの残基２６−３２（Ｈ１）、５３−５５（Ｈ２）及び９６−１０１（Ｈ３）；Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６：９０１−９１７（１９８７））を含む。ＣＤＲを決定するための方法が多数あり、例えば、異種間配列変化に基づく手法（すなわち、Kabatら Sequences of Proteins of Immunological Interest, (5th ed., 1991, National Institutes of Health, Bethesda MD)）；及び抗原抗体複合体の結晶学的研究に基づく手法（Al-lazikaniら(1997)J. Mol. Biol. 273:927-948)）がある。カバット相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＨＶＲは、配列変化に基づいており、最も一般的に使用されている（Kabatら、上記）。Ｃｈｏｔｈｉａは、代わりに構造的ループの位置に言及している（Chothia及びLesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）。ＡｂＭ ＨＶＲは、カバットＣＤＲとコチア構造的ループの間の妥協を表し、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアにより使用される。「接触」ＨＶＲは、利用できる複合体結晶構造の解析に基づく。本明細書中で使用される場合、ＣＤＲは、該手法のうちの何れかにより、又は該手法のうちの二若しくは三の組合せにより定義されるＣＤＲであってもよい。ＣＤＲは、カバットＣＤＲ、コチアＣＤＲ、又は接触ＣＤＲであってもよい。これらの各ＨＶＲからの残基は以下に記される。
Figure 2017528418
ＨＶＲは次のような「拡大ＨＶＲ」を含んでもよい：ＶＬの２４−３６又は２４−３４（Ｌ１）、４６−５６又は５０−５６（Ｌ２）及び８９−９７又は８９−９６（Ｌ３）と、ＶＨの２６−３５（Ｈ１）、５０−６５又は４９−６５（好ましい実施態様）（Ｈ２）及び９３−１０２、９４−１０２、又は９５−１０２（Ｈ３）。可変ドメイン残基には、これらの拡大ＨＶＲ各々を定義するために、上記のＫａｂａｔらに従って番号を付した。
いくつかの実施態様において、抗体は、重鎖又は軽鎖（例えば、重鎖及び／若しくは軽鎖定常領域、並びに／又は重鎖及び／若しくは軽鎖可変領域）において遊離のシステインアミノ酸を含むシステイン操作抗体である。抗体中の遊離システインアミノ酸の操作は、特定の部位で薬物分子を有する（すなわち、部位特異的コンジュゲーション）抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）化合物等の抗体コンジュゲート化合物を更に可能にする、反応性の求電子的機能を提供し得る。システイン操作抗体及びシステイン操作抗体の生成手段の例は、Ｊｕｎｕｔｕｌａ, ＪＲら, （２００８） Ｎａｔ. Ｂｉｏｔｅｃｈ. ２６（８）：９２５−９３２；Ｌｙｏｎｓ， Ａら， （１９９０） Ｐｒｏｔ． Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ３（８）：７０３−７０８；及びＳｔｉｍｍｅｌ， ＪＢら， （２０００） Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７５（３９）：３０４４５−３０４５０により提供される。いくつかの実施態様において、システイン残基の反応性チオール基が、抗体の折り畳み若しくは集合にほとんど影響を及ぼさないか又は全く影響を及ぼさず、且つ抗原結合を有意に変更しないことを条件として、抗体は、（例えば定常領域における）重鎖又は（例えば定常領域における）軽鎖上のアミノ酸残基（例えば、天然に存在するアミノ酸）を一又は複数のシステイン残基と置換するために操作される。いくつかの実施態様において、システイン残基は、新たに導入、操作されたシステインチオール基の反応性に関して評価される。チオール反応性値は、相対的な、０から１．０の範囲の数値であり、任意のシステイン操作抗体に関して測定され得る。いくつかの実施態様において、本発明のシステイン操作抗体のチオール反応性値は、約０．６から１．０；０．７から１．０；又は０．８から１．０の何れか一つである。部位特異的コンジュゲートに関するシステイン操作抗体は国際公開第２００６／０３４４８８号、国際公開第２０１０／１４１９０２号、国際公開第２０１３／０９３８０９号、国際公開第２００８／０３８０２４号、国際公開第２００８／０７０５９３号、国際公開第２００９／０９２０１１号、国際公開第２０１１／００５４８１号及び国際公開第２０１１／１５６３２８号により提供される。
システイン操作抗体は、一又は複数のアミノ酸残基をシステインで置き換えてシステイン操作抗体をコードすることにより、親抗体の核酸配列を突然変異させること；システイン操作抗体を発現させること；及びシステイン操作抗体を単離することにより調製され得る。いくつかの実施態様において、システイン操作抗体は抗体断片；例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、又は一本鎖（ＳｃＦｖ）抗体である。いくつかの実施態様において、抗体は、重鎖のアミノ酸残基Ｔ１５５、Ｓ１５７、Ｓ１６５、Ｔ１６９、Ｔ１９７、Ｔ１９９、及びＳ４４２、並びに軽鎖のＬ２０１、Ｖ２０５、及びＴ２０６（ＥＵ番号付け）の一又は複数のシステイン置換を含むように操作されている。本発明のいくつかの実施態様において、本明細書中に記載される抗体（例えば、抗体ｈＬＫ２６、ｈＭｏｖ１９、又は抗体２６Ｂ３に由来する抗体、例えばヒト化抗体又はキメラ抗体）、又はこれらの抗体の何れかに由来する抗体は、一又は複数の遊離システイン残基を含むように操作されている。操作されたシステイン残基はまた、「追加されたシステイン残基」とも呼ばれる。
いくつかの実施態様において、ＩｇＧ重鎖の任意の一又は複数の以下の位置における一又は複数のアミノ酸残基は、ＫａｂａｔらのＥＵインデックス（1991, NIH Publication 91-3242, National Technical Information Service, Springfield, VA、以下「カバット」と称する）に従って番号付けされたシステイン残基：４０、４３、８４、８８、１０３、１１２、１１３、１１４、１１５、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１６１、１６８、１７２、２３４、２３５、２３７、２３９、２４６、２４９、２６５、２６７、２６９、２７０、２７６、２７８、２８２、２８３、２８４、２８７、２８９、２９２、２９３、２９７、２９８、２９９、３００、３０２、３０３、３１２、３１４、３１５、３１８、３２０、３２４、３２６、３２７、３３０、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３３７、３３９、３４５、３４７、３５４、３５５、３５６、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３７０、３７３、３７６、３７８、３８０、３８２、３８３、３８４、３８６、３８８、３９８、３９０、３９２、３９３、４００、４０１、４０４、４１１、４１３、４１４、４１６、４１８、４１９、４２１、４２２、４２８、４３１、４３２、４３７、４３８、４３９、４４０、４４２、４４３、及び４４４で置き換えられる。
いくつかの実施態様において、ＩｇＧ重鎖の以下の位置の組合せにおける一、二、三、四、五、六、七、八、九若しくは十、又はそれ以上のアミノ酸残基は、カバットのＥＵインデックスに従って番号付けされたシステイン残基：４０、４３、８４、８８、１０３、１１２、１１３、１１４、１１５、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１６１、１６８、１７２、２３４、２３５、２３７、２３９、２４６、２４９、２６５、２６７、２６９、２７０、２７６、２７８、２８２、２８３、２８４、２８７、２８９、２９２、２９３、２９７、２９８、２９９、３００、３０２、３０３、３１２、３１４、３１５、３１８、３２０、３２４、３２６、３２７、３３０、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３３７、３３９、３４５、３４７、３５４、３５５、３５６、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３７０、３７３、３７６、３７８、３８０、３８２、３８３、３８４、３８６、３８８、３９８、３９０、３９２、３９３、４００、４０１、４０４、４１１、４１３、４１４、４１６、４１８、４１９、４２１、４２２、４２８、４３１、４３２、４３７、４３８、４３９、４４０、４４２、４４３、及び４４４で置き換えられる。
いくつかの実施態様において、ＩｇＧ１重鎖（例えば、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、ヒトＩｇＧ４、又はヒトＩｇＧ４ｐ）の以下の位置：Ｔ１５５、Ｓ１５７、Ｓ１６５、Ｔ１６９、Ｔ１９７、Ｔ１９９、及びＳ４４２の何れかの一若しくは複数の位置で一若しくは複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられており、番号付けはカバットのＥＵインデックスに従う。突然変異の位置（ＥＵ番号付け）及びアミノ酸の隣接配列を以下の表３に列挙する。
Figure 2017528418
いくつかの実施態様において、本明細書に記載される抗ＦＲＡ抗体は、配列番号３２又は配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様において、本明細書に記載される抗ＦＲＡ抗体は、配列番号３４のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様において、本明細書に記載される抗ＦＲＡ抗体は、配列番号３２又は配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域、及び配列番号３４のアミノ酸を含む軽鎖定常領域を含む。
部位特異的コンジュゲーションのための操作されたシステインであり得るＩｇＧ重鎖上の追加の位置（ＥＵ番号付け）は、１１８−２１５、２３４−２３９、２４６、２４８、２４９、２５４、２６５、２６７、２６９、２７０、２７３、２７６、２７８、２７９、２８２、２８３、２８４、２８６、２８７、２８９、２９２、２９３、２９４、２９７、２９８、２９９、３００、３０２、３０３、３１２、３１４、３１５、３１８、３２０、３２４、３２６、３２７、３３０、３３２−３３７、３３９、３４１−４４７位（ＵＳ２０１２／０１４８５８０Ａ１；国際公開第２０１３／０９３８０９Ａ１号；ＵＳ２００９／０２５８４２０Ａ１；ＵＳ７５２１５４１Ｂ２；ＵＳ７８５５２７５Ｂ２；ＵＳ２０１１／０１３７０１７Ａ１；ＵＳ２０１２／０２１３７０５Ａ１；ＵＳ２０１１／００３３３７８Ａ１；ＵＳ８４５５６２２Ｂ２に記載されている）を含む。
部位特異的コンジュゲーションのための操作されたシステインであり得るＩｇＧ軽鎖の追加の位置（ＥＵ番号付け）は、１０８−２１１（国際公開第２０１３／０９３８０９Ａ１号；ＵＳ２００９／０２５８４２０Ａ１；ＵＳ７８５５２７５Ｂ２；ＵＳ８４５５６２２Ｂ２に記載されている）を含む。
いくつかの実施態様において、ＩｇＧラムダ軽鎖の一又は複数の以下の位置における一又は複数のアミノ酸残基は、カバットのＥＵインデックスに従ってシステイン残基：７、１５、２０、２２、２５、４３、１１０、１１１、１２５、１４４、１４９、１５５、１５８、１６１、１６８、１８５、１８８、１８９、１９１、１９７、２０５、２０６、２０７、２０８及び２１０で置き換えられる。
いくつかの実施態様において、ＩｇＧラムダ軽鎖の以下の位置の組合せにおける一、二、三、四、五、六、七、八、九若しくは十、又はそれ以上のアミノ酸残基は、カバットのＥＵインデックスに従って、システイン残基：７、１５、２０、２２、２５、４３、１１０、１１１、１２５、１４４、１４９、１５５、１５８、１６１、１６８、１８５、１８８、１８９、１９１、１９７、２０５、２０６、２０７、２０８及び２１０で置き換えられる。
いくつかの実施態様において、ＩｇＧカッパ軽鎖の一又は複数の以下の位置における一又は複数のアミノ酸残基は、カバットの番号付けに従ってシステイン残基：７、１５、２０、２２、２５、４３、１１０、１１１、１４４、１６８、１８３及び２１０で置き換えられる。
いくつかの実施態様において、ＩｇＧカッパ軽鎖の以下の位置の組合せにおける一、二、三、四、五、六、七、八、九若しくは十、又はそれ以上のアミノ酸残基は、カバットの番号付けに従って、システイン残基：７、１５、２０、２２、２５、４３、１１０、１１１、１４４、１６８、１８３及び２１０で置き換えられる。
いくつかの実施態様において、ＩｇＧカッパ軽鎖の以下の位置：Ｌ２０１、Ｖ２０５、及びＴ２０６の何れかの一又は複数での一又は複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられており、番号付けはカバットのＥＵインデックスに従う。変異位置（ＥＵ番号付け）及びアミノ酸の隣接配列を以下の表４に記載する。
Figure 2017528418
いくつかの実施態様において、抗体は、重鎖定常領域及び軽鎖定常領域を含み、重鎖定常領域におけるＴ１５５、Ｓ１５７、Ｓ１６５、Ｔ１６９、Ｔ１９７、Ｔ１９９、及びＳ４４２から選択される一若しくは複数のアミノ酸残基、又は軽鎖定常領域におけるＬ２０１及びＴ２０６から選択される一若しくは複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられており、番号付けはカバットのＥＵインデックスに従う。いくつかの実施態様において、抗体は、重鎖定常領域及び軽鎖定常領域を含み、重鎖定常領域におけるＴ１５５、Ｓ１５７、Ｓ１６５、Ｔ１６９、Ｔ１９７、Ｔ１９９、及びＳ４４２から選択される一若しくは複数のアミノ酸残基、並びに軽鎖定常領域におけるＬ２０１及びＴ２０６から選択される一若しくは複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられており、番号付けはカバットのＥＵインデックスに従う。
いくつかの実施態様において、抗体は単離されている。単離された抗体とは、その自然環境の成分から単離され、分離され、及び／又は回収された抗体を指す。いくつかの実施態様において、抗体は実質的に純粋である。用語「実質的に純粋」とは、少なくとも５０％純粋（すなわち、混入物が存在しない）、より好ましくは少なくとも９０％純粋、より好ましくは少なくとも９５％純粋、より好ましくは少なくとも９８％純粋、より好ましくは少なくとも９９％純粋である物質を指してもよい。いくつかの実施態様において、抗体はモノクローナル抗体である。いくつかの実施態様において、抗体はヒト化抗体である。いくつかの実施態様において、抗体はキメラ抗体である。いくつかの実施態様において、抗体はヒト抗体である。いくつかの実施態様において、抗体は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４）である。いくつかの実施態様において、抗体は、ヒトＩｇＧ、例えばヒトＩｇＧ１である。いくつかの実施態様において、抗体は、ＩｇＧ４ｐ定常ドメインを含むヒトＩｇＧである。
共有結合によって抗体がその抗原結合免疫特異性を保持することが可能となる限り、本明細書中に記載される抗体は、任意の型の分子の共有結合により修飾されている類似体及び誘導体を更に含んでもよい。例えば、抗体の誘導体及び類似体は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既知の保護基／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解的切断、細胞リガンド又はその他タンパク質に対する結合等により更に修飾されたものを含む。化学修飾は、特異的な化学的切断、アセチル化、処方等を含むがこれらに限定されない既知の技術によって行われ得る。加えて、類似体又は誘導体は、一又は複数の非天然アミノ酸を含み得る。
いくつかの実施態様において、式（Ｉ）−（Ｖ）の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体中の抗体標的化部分Ｔは、追加の薬物部分と更に結合し得るように、薬物部分と部分的にコンジュゲートされている。したがって、いくつかの実施態様において、式（Ｉ）の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体は、式（Ｉａ）の化合物又はその塩若しくはその溶媒和物若しくは立体異性体を包含することが意図される。同様に、式（ＩＩ）の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体は、式（ＩＩａ）の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を包含することが意図され；式（ＩＩＩ）の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体は、式（ＩＩＩａ）の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を包含することが意図され；式（ＩＶ）の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体は、式（ＩＶａ）の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を包含することが意図され；且つ式（Ｖ）の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体は、式（Ｖａ）の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を包含することが意図される。
標的化部分（例えば抗体、ポリペプチド、ペプチド又は非ペプチジル部分）を作製する方法は、米国特許第７６７４６０５号、同第７９８２０１７号、ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０１３５８７（国際公開第２００７／１４６１７２号）、又はＰＣＴ／ＵＳ２００８／０８７５１５（国際公開第２００９／０７９６４９号）に記載されている方法のように当該技術分野で知られている。
代表的なリンカー
ある例において、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）又は（ＩＩａ）の化合物中の「−Ａ−Ｌ４−Ｌ３−Ｌ２−」又は「−Ａ−Ｌ４−Ｌ３−」部分は：
Figure 2017528418
である。
ある例において、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）又は（ＩＩａ）の化合物中の「−Ａ−Ｌ４−Ｌ３−Ｌ２−」又は「−Ａ−Ｌ４−Ｌ３−」部分は：
Figure 2017528418
である。
ある例において、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）又は（ＩＩａ）の化合物中の「−Ａ−Ｌ４−Ｌ３−Ｌ２−」又は「−Ａ−Ｌ４−Ｌ３−」部分は：
Figure 2017528418
である。
ある例において、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）、又は（ＩＩａ）の化合物における「−Ａ−Ｌ４−Ｌ３−Ｌ２−Ｘ−Ｌ１−Ｄ」部分は、
Figure 2017528418
である。
そのような例において、本開示は、式（ＩＩＩ）：
Figure 2017528418
［式中、Ｔは標的化部分である］
の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を提供する。ある例において、式（ＩＩＩ）中、Ｔは抗体である。いくつかの実施態様において、Ｔは抗ＦＲＡ抗体である。いくつかの実施態様において、Ｔは、抗体ｈＬＫ２６又はｈＭｏｖ１９である。いくつかの実施態様において、Ｔは、抗体２６Ｂ３の誘導体（例えば、ヒト化抗体又はキメラ抗体）である。
いくつかの実施態様において、式（ＩＩＩａ）：
Figure 2017528418
［式中、Ｔは標的化部分であり、ｐは１から２０である］の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体が提供される。いくつかの実施態様において、ｐは１から８である。いくつかの実施態様において、ｐは１から６である。いくつかの実施態様において、ｐは１から４である。いくつかの実施態様において、ｐは２から４である。いくつかの実施態様において、ｐは１、２、３又は４である。いくつかの実施態様において、ｐは２である。いくつかの実施態様において、ｐは３である。いくつかの実施態様において、ｐは４である。ある例において、式（ＩＩＩａ）中、Ｔは抗体であり、抗体の重鎖及び／又は軽鎖の一又は複数のアミノ酸残基はシステイン残基で置き換えられていてもよい。ある実施態様において、抗体は、抗ＦＲＡ抗体である。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、ｈＬＫ２６又はｈＭｏｖ１９、若しくはその誘導体である、又は抗体の重鎖及び／若しくは軽鎖の一若しくは複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられているｈＬＫ２６、若しくは抗体の重鎖及び／若しくは軽鎖の一若しくは複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられているｈＭｏｖ１９である。いくつかの実施態様において、抗ＦＲＡ抗体は、２６Ｂ３の誘導体（例えば、ヒト化抗体若しくはキメラ抗体）、又は抗体の重鎖及び／若しくは軽鎖の一若しくは複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられている２６Ｂ３の誘導体（例えば、ヒト化抗体若しくはキメラ抗体）である。
ある実施態様において、式（Ｉ）又は式（Ｉａ）の化合物、例えば式（ＩＩＩ）又は（ＩＩＩａ）の化合物は、合成中間体、例えば式（ＶＩ）の化合物若しくはその塩若しくは溶媒和物、及び／又は式（ＩＸ）の化合物若しくはその塩若しくは溶媒和物を使用して調製することができる。
Figure 2017528418
ある例において、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）又は（ＩＩａ）の化合物中の「−Ａ−Ｌ４−Ｌ３−Ｌ２−Ｘ−Ｌ１−Ｄ」部分は：
Figure 2017528418
である。
そのような例において、本開示は、式（ＩＶ）：
Figure 2017528418
［式中、Ｔは標的化部分である］の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を提供する。ある例において、式（ＩＶ）中、Ｔは抗体である。いくつかの実施態様において、Ｔは抗ＦＲＡ抗体である。いくつかの実施態様において、抗体は、抗体ｈＬＫ２６又はｈＭｏｖ１９である。いくつかの実施態様において、抗体は、抗体２６Ｂ３の誘導体（例えば、ヒト化抗体又はキメラ抗体）である。
いくつかの実施態様において、式（ＩＶａ）：
Figure 2017528418
［式中、Ｔは標的化部分であり、ｐは１から２０である］の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体が提供される。いくつかの実施態様において、ｐは１から８である。いくつかの実施態様において、ｐは１から６である。いくつかの実施態様において、ｐは１から４である。いくつかの実施態様において、ｐは２から４である。いくつかの実施態様において、ｐは１、２、３又は４である。いくつかの実施態様において、ｐは２である。いくつかの実施態様において、ｐは３である。いくつかの実施態様において、ｐは４である。ある例において、式（ＩＶａ）中、Ｔは抗体であり、抗体の重鎖及び／又は軽鎖の一又は複数のアミノ酸残基はシステイン残基で置き換えられていてもよい。いくつかの実施態様において、抗体は抗ＦＲＡ抗体である。いくつかの実施態様において、抗体は、ｈＬＫ２６又はｈＭｏｖ１９、若しくはその誘導体、又は抗体の重鎖及び／若しくは軽鎖の一若しくは複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられているｈＬＫ２６、若しくは抗体の重鎖及び／若しくは軽鎖の一若しくは複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられているｈＭｏｖ１９である。いくつかの実施態様において、抗体は、２６Ｂ３の誘導体（例えば、ヒト化抗体若しくはキメラ抗体）、又は抗体の重鎖及び／若しくは軽鎖の一若しくは複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられている２６Ｂ３の誘導体（例えば、ヒト化抗体若しくはキメラ抗体）である。
ある実施態様において、式（Ｉ）又は（Ｉａ）の化合物、例えば式（ＩＶ）又は（ＩＶａ）の化合物は、合成中間体、例えば式（ＶＩＩ）の化合物若しくはその塩若しくは溶媒和物、及び／又は式（Ｘ）の化合物若しくはその塩若しくは溶媒和物を使用して調製することができる。
Figure 2017528418
ある例において、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）又は（ＩＩａ）の化合物中の「−Ａ−Ｌ４−Ｌ３−Ｌ２−Ｘ−Ｌ１−Ｄ」部分は：
Figure 2017528418
である。
そのような例において、本開示は、式（Ｖ）：
Figure 2017528418
［式中、Ｔは標的化部分である］の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を提供する。ある例において、式（Ｖ）中、Ｔは抗体である。いくつかの実施態様において、抗体は抗ＦＲＡ抗体である。いくつかの実施態様において、抗体は、抗体ｈＬＫ２６又はｈＭｏｖ１９である。いくつかの実施態様において、抗体は、抗体２６Ｂ３の誘導体（例えば、ヒト化抗体又はキメラ抗体）である。
いくつかの実施態様において、式（Ｖａ）：
Figure 2017528418
［式中、Ｔは標的化部分であり、ｐは１から２０である］の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体が提供される。いくつかの実施態様において、ｐは１から８である。いくつかの実施態様において、ｐは１から６である。いくつかの実施態様において、ｐは１から４である。いくつかの実施態様において、ｐは２から４である。いくつかの実施態様において、ｐは１、２、３又は４である。いくつかの実施態様において、ｐは２である。いくつかの実施態様において、ｐは３である。いくつかの実施態様において、ｐは４である。ある例において、式（Ｖａ）中、Ｔは抗体であり、抗体の重鎖及び／又は軽鎖の一又は複数のアミノ酸残基はシステイン残基で置き換えられていてもよい。いくつかの実施態様において、抗体は、抗ＦＲＡ抗体である。いくつかの実施態様において、抗体は、抗体ｈＬＫ２６又はｈＭｏｖ１９、若しくはその誘導体、又は抗体の重鎖及び／若しくは軽鎖の一若しくは複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられているｈＬＫ２６、若しくは抗体の重鎖及び／若しくは軽鎖の一若しくは複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられているｈＭｏｖ１９である。いくつかの実施態様において、抗体は、２６Ｂ３の誘導体（例えば、ヒト化抗体若しくはキメラ抗体）、又は抗体の重鎖及び／若しくは軽鎖の一若しくは複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられている２６Ｂ３の誘導体（例えば、ヒト化抗体若しくはキメラ抗体）である。
ある実施態様において、式（Ｉ）又は（Ｉａ）の化合物、例えば式（Ｖ）又は（Ｖａ）の化合物は、合成中間体、例えば式（ＶＩＩＩ）の化合物若しくはその塩若しくは溶媒和物、及び／又は式（ＸＩ）の化合物若しくはその塩若しくは溶媒和物を使用して調製することができる。
Figure 2017528418
ある実施態様において、式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）の化合物、又は本明細書に記載されるその任意の変化形は、式（ＸＩＩ）
Figure 2017528418
［式中、ＲはＮＯ２又はＮＨ２である］
の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を使用して調製することができる。
式（Ｉ）−（Ｖ）又は（Ｉａ）−（Ｖａ）の化合物は、薬学的に許容される塩として調製及び／又は製剤化され得る。薬学的に許容される塩は、遊離塩基の所望の薬理的活性を有する化合物の遊離塩基形態の非毒性の塩である。これらの塩は、無機又は有機酸に由来してもよい。薬学的に許容される塩の非限定的な例は、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、亜硫酸水素塩、リン酸塩、一水素リン酸塩、二水素リン酸塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソブチル酸塩、カプロン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオル酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン−１，４−二酸塩、ヘキシン−１，６−二酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、スルホン酸塩、メチルスルホン酸塩、プロピルスルホン酸塩、ベシル酸塩、キシレンスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニルブチル酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、γ−ヒドロキシブチル酸塩、グリコール酸塩、酒石酸塩、及びマンデル酸塩を含む。他の適した薬学的に許容される塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ‘ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １７ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａ．， １９８５にある。
塩基性窒素を含有する式（Ｉ）−（Ｖ）又は（Ｉａ）−（Ｖａ）の何れか一つの化合物に関し、薬学的に許容される塩は、当該技術分野で利用できる適切な方法により調製されてもよく、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、硝酸、ボロン酸、リン酸等の無機酸を有するか、又は酢酸、フェニル酢酸、プロピオン酸、ステアリン酸、乳酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、イセチオン酸、コハク酸、バレリアン酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、オレイン酸、パルミチン酸、ラウリン酸、ピラノシジル酸（例えばグルクロン酸若しくはガラクツロン酸）、アルファ−ヒドロキシ酸（例えばマンデル酸、クエン酸若しくは酒石酸）、アミノ酸（例えばアスパラギン酸若しくはグルタミン酸）、芳香族酸（例えば安息香酸、２−アセトキシ安息香酸、ナフトエ酸若しくは桂皮酸）、スルホン酸（例えばラウリルスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸若しくはエタンスルホン酸）等の有機酸を有する遊離基、あるいは本明細書中で例として挙げられたような酸の任意の互換性のある混合物、並びにこの技術において通常のレベルを考慮すると同等物若しくは許容される置換基としてみなされるその他酸及びその混合物の処理により調製されてもよい。
また、式（Ｉ）−（Ｖ）若しくは（Ｉａ）−（Ｖａ）の一又は複数の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体も提供される。式（Ｉ）−（Ｖ）若しくは（Ｉａ）−（Ｖａ）の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体において、標的化部分は、薬物部分に結合するための一又は複数の結合部位を有し得る。標的化部分中の結合部位への可触性及びコンジュゲートを形成する際の薬物部分の相対濃度に応じて、結合部位の一部分は、形成されたコンジュゲートにおける薬物部分に結合されなくてもよい。各標的化部分に数多くの薬物部分を有する化合物の混合物を形成してもよい。したがって、式（Ｉａ）−（Ｖａ）の一若しくは複数の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を含む組成物も提供される。例えば、４の結合部位を有する標的分子に関して、組成物は、ｐが１である式（Ｉａ）の化合物、ｐが２である式（Ｉａ）の化合物、ｐが３である式（Ｉａ）の化合物、及びｐが４である式（Ｉａ）の化合物から選択される一又は複数の化合物を含んでもよい。組成物中の化合物の相対的な量は、薬物部分と標的化部分との間の所望の比率を達成するよう調整されてもよい。いくつかの実施態様において、組成物は、主に一又は二の化合物を含む。
本発明の化合物又は組成物中の「薬物抗体比」（ＤＡＲ）は、化合物又は組成物中の薬物部分と化合物又は組成物中の抗体との間のモル比率として定義される。抗体が一以上の結合部位を有する場合、一以上の薬物部分が各抗体に結合されてもよい。いくつかの例において、一以上の抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）分子を含む混合物が得られる。抗体薬物コンジュゲートの薬物抗体比は、当該技術分野で知られる分析的方法、例えば、Ｊｅｆｆｒｅｙら， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ． Ｃｈｅｍ． ２４（７）：１２５６−１２６３ （２０１３）；及びＳｕｎら， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ． Ｃｈｅｍ． １６（５）：１２８２−１２９０ （２００５）に記載される方法により測定され得る。いくつかの実施態様において、本明細書中で詳述される一又は複数のＡＤＣを含む組成物は、約０．５から約６、約１から約５、約１から約４、約１．５から約３．５、又は約２から約４の平均ＤＡＲを有する。いくつかの実施態様において、組成物は、約１．５から約３．５、又は約２から約３．５、又は約２．７から約３．５、又は約２から約３、又は約３から約３．３、又は約２、又は約３の平均ＤＡＲを有する。いくつかのその他好ましい実施態様において、組成物は、約２．５±１０％（例えば、約２．２５から約２．７５）の平均ＤＡＲを有する。いくつかの実施態様において、標的化抗体は、システイン操作結合部位を含有し、組成物は、約１．６から約２．１、又は約２．０の平均ＤＡＲを有する。
薬学的組成物及び治療方法
治療目的上、実施態様の薬学的組成物は、式（Ｉ）−（Ｖ）若しくは（Ｉａ）−（Ｖａ）の少なくとも一の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む。薬学的組成物は、一又は複数の薬学的に許容される賦形剤又は薬学的に許容される担体を更に含んでもよい。薬学的に許容される賦形剤は、非毒性であり、そうでなければ対象への投与に関して生物学的に適している物質である。そのような賦形剤は、本明細書に記載される化合物の投与を容易にし、活性成分と互換性がある。薬学的に許容される賦形剤の例は、安定剤、潤滑剤、界面活性剤、希釈剤、酸化防止剤、結合剤、着色料、充填剤、乳化剤又は呈味改変剤を含む。好ましい実施態様において、実施態様による薬学的組成物は無菌の組成物である。薬学的組成物は既知の配合技術又は当業者が利用できるようになる配合技術を使用して調製されてもよい。
無菌の組成物は実施態様により検討もされており、そのような組成物を支配する国及び地方の規制に従う組成物を含む。
本明細書中に記載される薬学的組成物及び化合物は、溶液、乳液、懸濁液、分散液、又は適切な薬学的溶媒若しくは担体中のシクロデキストリン等の包接錯体として、あるいは、様々な剤形の調製に関して当該技術分野で知られている従来からの方法に従って丸薬、錠剤、ロゼンジ、坐剤、サシェ、ドラジェ、顆粒、粉末、再構成用粉末、又は固形担体を伴うカプセルとして製剤化されてもよい。実施態様の薬学的組成物は、経口、非経口、経直腸、経鼻、局所若しくは眼球経路等の適切な送達経路により、又は吸入により投与されてもよい。好ましくは、組成物は、静脈内投与又は経口投与のために製剤化される。
経口投与に関して、実施態様の化合物は、錠剤又はカプセル等の固形形態で、又は溶液、乳液若しくは懸濁液として提供されてもよい。経口組成物を調製するために、実施態様の化合物は例えば、一日当たり約０．０１から約５０ｍｇ／ｋｇ、又は一日当たり約０．０５から約２０ｍｇ／ｋｇ、又は一日当たり約０．１から約１０ｍｇ／ｋｇの投薬量を生じるように製剤化されてもよい。経口錠剤は、互換性のある薬学的に許容される賦形剤、例えば希釈剤、崩壊剤、結合剤、潤滑剤、甘味料、香味料、着色料及び保存料と混合された活性成分（複数可）を含んでもよい。適切な不活性な充填剤は、炭酸ナトリウム及び炭酸カルシウム、リン酸ナトリウム及びリン酸カルシウム、ラクトース、澱粉、糖類、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、ソルビトール等を含む。典型的な液体経口賦形剤は、エタノール、グリセロール、水等を含む。澱粉、ポリビニル−ピロリドン（ＰＶＰ）、デンプングリコール酸ナトリウム、微結晶性セルロース、及びアルギン酸は典型的な崩壊剤である。結合剤は澱粉及びゼラチンを含んでもよい。潤滑剤は、存在する場合、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、又はタルクであってもよい。必要である場合、錠剤は、消化管での吸収を遅らせるために、モノステアリン酸グリセリン若しくはジステアリン酸グリセリル等の物質でコーティングされてもよく、又は腸溶コーティングでコーティングされてもよい。
経口投与のためのカプセルは、硬質及び軟質ゼラチンカプセルを含む。硬質ゼラチンカプセルを調製するために、活性成分（複数可）は固体、半固体又は液体の希釈剤と混合されてもよい。軟質ゼラチンカプセルは、活性成分を水、油例えば落花生油若しくはオリーブ油、流動パラフィン、短鎖脂肪酸のモノグリセリドとジグリセリドの混合物、ポリエチレングリコール４００、又はプロピレングリコールと混合させることにより調製されてもよい。
経口投与のための液体は、懸濁液、溶液、乳液又はシロップの形態であってもよく、使用前に水又はその他適切なビヒクルとの再構成のための乾燥製品として凍結乾燥又は提示されてもよい。そのような液体組成物は、薬学的に許容される賦形剤、例えば懸濁剤（例えばソルビトール、メチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル等）；非水性ビヒクル、例えば油（例えばアーモンド油若しくはヤシ油）、プロピレングリコール、エチルアルコール又は水；保存料（例えばメチル若しくはプロピルｐ−ヒドロキシベンゾエート又はソルビン酸）；湿潤剤、例えばレシチン；並びに、必要であれば、香味料若しくは着色料を含有してもよい。
実施態様の組成物は、坐薬のような直腸投与のために製剤化されてもよい。実施態様の薬剤は、静脈内、筋肉内、腹腔内、鼻腔内又は皮下経路を含む非経口使用のために、適切なｐＨ及び等張性に緩衝された無菌の水溶液若しくは懸濁液中で、又は非経口的に許容される油中で提供されてもよい。適切な水性ビヒクルは、リンゲル液及び等張の塩化ナトリウムを含む。そのような形態は、アンプル若しくは使い捨て注入器具等の単位投与形態、適切な用量が取り出され得るバイアル等の複数回投与形態、又は固体形態若しくは注射可能な製剤を調製するのに使用され得る予備濃縮物で提示されてもよい。実例となる注入量は、数分から数日の範囲の期間にわたり薬学的担体と混合された薬剤の約１から１０００μｇ／ｋｇ／分の範囲である。
実施態様の薬学的組成物は、鼻腔、吸入又は経口投与のために、例えば、適切な担体も含有するスプレー製剤を使用して投与されてもよい。
実施態様の化合物は、局所適用のために、好ましくは、クリーム若しくは軟膏又は局所投与に適した同様のビヒクルとして製剤化される。本発明の化合物は、局所投与のために、ビヒクルに対して約０．１％から約１０％の薬物の濃度で薬学的担体と混合されてもよい。実施態様の薬剤の別の投与様式は、経皮送達に作用するパッチ製剤を利用してもよい。
本開示は、有効量の式（Ｉ）−（Ｖ）の化合物、又は式（Ｉａ）−（Ｖａ）の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を細胞に投与することを含む、葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）を発現する細胞を死滅させる方法を提供する。いくつかの実施態様において、細胞を死滅させるのに十分な量の式（Ｉ）−（Ｖ）又は（Ｉａ）−（Ｖａ）の化合物、又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を細胞に投与することを含む、ヒト葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）を発現する細胞を死滅させる方法が提供される。ある実施態様において、細胞はがん細胞である。ある実施態様において、がん細胞は、卵巣がん細胞、肺がん細胞、子宮がん細胞、精巣絨毛癌細胞、上衣腫細胞、中皮腫細胞、乳がん細胞、結腸がん細胞、又は腎細胞癌細胞である。ある実施態様において、がん細胞は、ＦＲＡ陽性卵巣がん細胞、ＦＲＡ陽性肺がん細胞、ＦＲＡ陽性子宮がん細胞、ＦＲＡ陽性精巣絨毛癌細胞、ＦＲＡ陽性上衣腫細胞、ＦＲＡ陽性中皮腫細胞、ＦＲＡ陽性乳がん細胞、ＦＲＡ陽性結腸がん細胞、又はＦＲＡ陽性腎細胞癌細胞である。
別の態様において、本開示は、式（Ｉ）−（Ｖ）の化合物、又は式（Ｉａ）−（Ｖａ）の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体の有効量を個体に投与することを含む、個体におけるがんを治療する方法を提供する。本明細書中に記載される方法によって治療され得るがんの例は、腺癌、リンパ腫、芽細胞腫、メラノーマ、及び肉腫を含むカルシノーマを含むがこれらに限定されない。そのようながんのより特定の例は、扁平上皮がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺腺癌、肺扁平上皮癌、胃腸がん、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫、膵臓がん、膠芽細胞腫、子宮頸がん、神経膠腫、卵巣がん、肝臓がん、例えば肝細胞癌及び肝がん、膀胱がん、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜癌又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓がん、例えば腎細胞癌及びウィルムス腫瘍、基底細胞癌、メラノーマ、中皮腫、前立腺がん、甲状腺がん、精巣がん、食道がん、胆嚢がん、及び様々な型の頭頚部がんを含むがこれらに限定されない。
がんを治療する方法のある実施態様において、がんは、卵巣がん、肺がん、子宮がん、精巣絨毛癌、上衣腫、中皮腫、乳がん、結腸がん、又は腎細胞癌から選択される。いくつかの実施態様において、がんは、ＦＲＡ陽性がんである。ある実施態様において、がんは、ＦＲＡ陽性卵巣がん、ＦＲＡ陽性肺がん、ＦＲＡ陽性子宮がん、ＦＲＡ陽性精巣絨毛癌、ＦＲＡ陽性上衣腫、ＦＲＡ陽性中皮腫、ＦＲＡ陽性乳がん、ＦＲＡ陽性結腸がん、又はＦＲＡ陽性腎細胞癌である。ある実施態様において、個体は、がんを有する又はがんを有すると診断されている。ある実施態様において、個体は、ＦＲＡ陽性悪性腫瘍を有する、又はＦＲＡ陽性悪性腫瘍（例えば、卵巣がん、肺がん、子宮がん、精巣絨毛癌、上衣腫、中皮腫、乳がん、結腸がん、又は腎細胞癌）を有すると診断されている。ある実施態様において、個体はヒトである。いくつかの実施態様において、方法は、化合物を投与する前に、がん細胞上のＦＲＡの発現レベルを検出する工程を更に含む。いくつかの実施態様において、化合物は、腹腔内、静脈内、筋肉内、皮下、髄腔内、脳室内、経口、経腸、非経口、鼻腔内、皮内、舌下、又は吸入によって投与される。
キット
本開示は、がんの治療又は予防において有用な、式（Ｉ）−（Ｖ）又は式（Ｉａ）−（Ｖａ）の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を含む一又は複数の容器を含む薬学的パック又はキットを提供する。キットはがんの治療における使用説明書を更に含み得る。
本開示は、本実施態様の一又は複数の薬学的組成物の成分を含む一又は複数の容器を含む薬学的パック又はキットも提供する。そのような容器（複数可）に関連してもよいものは、医薬品若しくは生物学的製品の製造、使用又は販売を規制する行政機関により規定された形態の注記であってもよく、その注記はヒトへの投与に関する製造、使用又は販売の当局による承認を反映させる。
薬物コンジュゲートの合成
実施態様はまた、対象化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を調製するのに有用な方法及び中間体に向けられている。
開示された化合物を合成するのに有用な一般的に知られる化学合成スキーム及び条件を提供する多くの一般的な参照文献が入手可能である（例えばSmith及びMarch, March’s Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, Fifth Edition, Wiley-Interscience, 2001を参照のこと）。
本明細書中に記載されるような化合物は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、分取薄層クロマトグラフィー、フラッシュカラムクロマトグラフィー及びイオン交換クロマトグラフィー等のクロマトグラフィー手段を含む当該技術分野で知られる手段の何れかにより精製され得る。順相及び逆相並びにイオン樹脂を含む任意の適切な固相が使用され得る。最も典型的には、開示された化合物は、シリカゲル及び／又はアルミニウムクロマトグラフィーを介して精製される。例えば、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｍｏｄｅｒｎ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ， ２ｎｄ ｅｄ．，Ｌ． Ｒ． Ｓｎｙｄｅｒ及びＪ． Ｊ． Ｋｉｒｋｌａｎｄ編， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ， １９７９；及びＴｈｉｎ Ｌａｙｅｒ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ， Ｅ． Ｓｔａｈｌ （編）， Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９６９を参照のこと。
対象化合物の調製のための方法の何れかの間、関係する分子の何れかの感受性又は反応基を保護することが必要及び／又は所望とされてもよい。これは、Ｔ． Ｗ． Ｇｒｅｅｎｅ及びＰ． Ｇ． Ｍ． Ｗｕｔｓ， “Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，” ４ｔｈｅｄ．， Ｗｉｌｅｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ２００６等の標準的な著作物に記載されるような従来の保護基の手段により達成され得る。保護基は、当該技術分野で知られる方法を使用して、後に続く簡便な段階で除去されてもよい。
実施態様の方法において有用な例示的な化学物質は、本明細書中の一般的な調製のための実例となる合成スキーム及び後に続く特定の実施例を参照することにより、記載されることになる。当業者は、本明細書中の様々な化合物を得るためには、最終的な所望の置換基が、所望の生成物を得るために必要に応じて、保護の有無にかかわらず、反応スキームを通じて運ばれるように出発物質が適切に選択されてもよいことを認識するであろう。あるいは、最終的な所望の置換基の代わりに、反応スキームを通じて運ばれ得、所望の置換基で必要に応じて置き換えられ得る適切な基を用いることが必要又は所望とされてもよい。更に、当業者は、以下のスキームに示される変換が、特定のペンダント基の機能性と互換性のある任意の順序で実施されてもよいことを認識するであろう。一般スキームに表される反応のそれぞれは、好ましくは、約０℃から使用される有機溶媒の還流温度で実行される。別段の記載がない限り、変数は式（Ｉ）に関して上で定義された通りである。
本実施態様のコンジュゲートは、親水性の自壊性スペーサーを含むリンカーを通じて薬物部分を抗体と結合させることにより構築されてもよい。
式（Ｉ）の化合物のリンカー部分に関する代表的な合成は以下のスキームに記載され、特定の実施例が続く。
Figure 2017528418
４−ニトロベンゼンアルデヒドからの化合物Ｃの合成をスキーム２で示す。ＳＯＣｌ２、ＰＣｌ３、又はＰＣｌ５等の塩素化剤を使用して、４−ニトロフェニルグリコール酸を対応する酸塩化物に変換する。次いで、酸塩化物を１−メチルピペラジンと反応させ、ケトンアミド中間体を得る。あるいは、ＥＤＣＩ等のカップリング剤を使用して、４−ニトロフェニルグリコール酸を１−メチルピペラジンとカップリングさせ得る。ケトンアミド中間体はケト基を含有し、次いでこれをＤＩＢＡＬ−Ｈ、ＢＨ３、ＬｉＡｌＨ４−ＡｌＣｌ３、ＬｉＡｌＨ４−ＢＦ３−Ｅｔ２Ｏ、又はホウ化水素ナトリウム等の還元試薬を用いて還元して、化合物Ｃを生成する。
Figure 2017528418
スキーム３に関し、化合物Ｃのニトロ基を還元して、パラジウム、ニッケル又は白金等の触媒での接触水素化により、化合物Ｉ中のアニリン基を得る。適切な水素化触媒の例は、Ｐｄ／Ｃ及びＲａｎｅｙニッケルを含む。
Figure 2017528418
スキーム４に関し、化合物Ｉは本実施態様の化合物中の親水性の自壊性リンカー部分を提供する。化合物Ｉのアミノ基は、化合物Ｘを生成するための標準的なペプチドカップリング条件を通じて化合物Ｗと反応し得る。ＤＩＥＡ等の塩基又は当業者に知られているその他塩基の存在下、適切な溶媒中でＥＤＣＩ／ＨＯＢｔ、ＨＯＢｔ、ＰｙＢＯＰ、ＨＡＴＵ若しくはＢＥＭ（Carpino, L. A. J. Am. Chem. Soc. 1993, 115, 4397. Carpino, L. A.；El-Faham, A. J. Am. Chem. Soc. 1995, 117, 5401. Li, P.；Xu, J. C. J. Pept. Res. 2001, 58, 129.）等の試薬が使用され得る。
更にスキーム４に関し、４−ニトロフェニルクロロホルメートを使用して、化合物Ｘのヒドロキシル基を活性炭酸塩に変換する。化合物Ｙを用いて、アミノ基を有する薬物と反応させることにより化合物Ｚを生成し得る。薬物がアミノ基を含有しない場合、第二の、中間体自壊性スペーサー又は環化自己脱離リンカーは、上記のように薬物部分とアミノベンジルオキシカルボニル基との間に位置し得る。
ある実施態様において、以下のスキーム５に関し、リンカーの−Ｌ３−Ｌ２−部分は化合物Ｉに結合される。次いで、−Ａ−Ｌ４−部分が結合される。
Figure 2017528418
本実施態様の化合物を調製するための方法は、バッファー中の抗体の溶液を調製すること及びＴＣＥＰ等の還元剤の溶液で処理することを含む。遊離チオールの量を決定する。遊離チオールの量が所定量に達した場合、部分的に還元した抗体はリンカー−薬物部分でアルキル化される。
いくつかの実施態様において、式（Ｉ）又は（Ｉａ）：
Figure 2017528418
［式中、Ｄ、Ｔ、Ｘ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、Ａ及びｐは、適用できる場合、式（Ｉ）又は（Ｉａ）のために定義された通りであり、標的化部分Ｔを含む化合物を式：Ａ−Ｌ４−Ｌ３−Ｌ２−Ｘ−Ｌ１−Ｄの化合物と反応させることを含む］の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を調製するための方法が提供される。いくつかの実施態様において、Ｔは葉酸受容体アルファ（例えば、ヒトＦＲＡ）に特異的に結合する抗体である。いくつかの実施態様において、方法によって生成される化合物が提供される。更に、この方法により生成される一又は複数の化合物を含む組成物が提供される。
いくつかの実施態様において、式（ＩＩ）又は（ＩＩａ）：
Figure 2017528418
［式中、Ｄ、Ｔ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、Ａ及びｐは、適用できる場合、式（ＩＩ）又は（ＩＩａ）のために定義された通りであり、一又は複数の遊離チオール（又はスルフヒドリル基）を生じさせる抗体を化合物Ｚ：
Figure 2017528418
又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体と反応させることを含む］の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を調製するための方法が提供される。いくつかの実施態様において、一又は複数の遊離チオール（又はスルフヒドリル基）を有する抗体は抗ＦＲＡ抗体である。いくつかの実施態様において、一又は複数の遊離チオール（又はスルフヒドリル基）を有する抗体は、抗体ｈＬＫ２６又はｈＭＯＶ１９である。いくつかの実施態様において、一又は複数の遊離チオール（又はスルフヒドリル基）を有する抗体は、抗体２６Ｂ３の誘導体（例えば、ヒト化抗体又はキメラ抗体）である。いくつかの実施態様において、一又は複数の遊離チオール（又はスルフヒドリル基）を有する抗体は、ｈＬＫ２６、又は抗体の重鎖及び／若しくは軽鎖の一若しくは複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられているｈＭｏｖ１９である。いくつかの実施態様において、一又は複数の遊離チオール（又はスルフヒドリル基）を有する抗体は、抗体２６Ｂ３の誘導体（例えば、ヒト化抗体又はキメラ抗体）、又は抗体の重鎖及び／若しくは軽鎖の一若しくは複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられている２６Ｂ３の誘導体（例えば、ヒト化抗体又はキメラ抗体）である。いくつかの実施態様において、該方法は、本明細書中で詳述されるような化合物Ｚを調製するための方法を更に含む。いくつかの実施態様において、該方法は、本明細書中で詳述されるような化合物Ｚをもたらす一又は複数の合成中間体（例えば化合物Ｙ及び化合物Ｘ）を調製するための方法を更に含む。いくつかの実施態様において、本明細書中で詳述される方法の何れかにより生成される化合物が更に提供される。本明細書中で詳述される方法の何れかにより生成される一又は複数の化合物を含む組成物が更に提供される。
いくつかの実施態様において、式（ＩＩ）
Figure 2017528418
［式中、
Ｄは薬物部分であり；
Ｔは抗体であり；
Ｒ１は水素、無置換若しくは置換Ｃ１−３アルキル、又は無置換若しくは置換ヘテロシクリルであり；
Ｌ１は結合、第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーであり；
Ｌ２は結合又は第二の自壊性リンカーであって；
ここで、Ｌ１が第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーである場合に、Ｌ２は結合であり；
ここで、Ｌ２が第二の自壊性リンカーである場合に、Ｌ１は結合であり；
Ｌ３はペプチドリンカーであり；
Ｌ４は結合又はスペーサーであり；且つ
Ａはアシル単位である］
の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を調製するための方法であって、
抗体を化合物Ｚ
Figure 2017528418
又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体と反応させることを含む方法が提供される。いくつかの実施態様において、Ｔは、葉酸受容体アルファ（例えば、ヒトＦＲＡ）に特異的に結合する抗体である。
いくつかの実施態様において、式（ＩＩａ）：
Figure 2017528418
［式中、
ｐは、１から２０であり；
Ｄは薬物部分であり；
Ｔは抗体であり；
Ｒ１は水素、無置換若しくは置換Ｃ１−３アルキル、又は無置換若しくは置換ヘテロシクリルであり；
Ｌ１は結合、第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーであり；
Ｌ２は結合又は第二の自壊性リンカーであって；
ここで、Ｌ１が第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーである場合に、Ｌ２は結合であり；
ここで、Ｌ２が第二の自壊性リンカーである場合に、Ｌ１は結合であり；
Ｌ３はペプチドリンカーであり；
Ｌ４は結合又はスペーサーであり；且つ
Ａはアシル単位である］
の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を調製するための方法であって、
抗体を化合物Ｚ
Figure 2017528418
又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を抗体と反応させることを含む方法が提供される。いくつかの実施態様において、Ｔは、葉酸受容体アルファ（例えば、ヒトＦＲＡ）に特異的に結合する抗体である。
化合物を作製する方法及び／又は本明細書中で詳述される化合物を調製する方法の何れかにより生成される化合物が更に提供される。化合物を作製する方法及び／又は本明細書中で詳述される化合物を調製する方法の何れかにより生成される一又は複数の化合物を含む組成物（例えば薬学的組成物）もまた提供される。
本開示は、スキーム４及び５中の化合物及び中間体の調製のための方法を提供する。スキーム４及び５中に提示される化合物は、完全原子価を有する又は、適切な場合、任意の保護基若しくは脱離基で適切に覆われていることを意図されている。例えば、「化合物ＴＡＰ−１８Ｈの合成」のスキームに示されるＬ３−Ｌ２は
Figure 2017528418
であり得る。
本開示は、化合物Ｘ：
Figure 2017528418
［式中、
Ｒ１は水素、無置換若しくは置換Ｃ１−３アルキル、又は無置換若しくは置換ヘテロシクリルであり；
Ｌ２は結合又は第二の自壊性リンカーであり；
Ｌ３はペプチドリンカーであり；
Ｌ４は結合又はスペーサーであり；且つ
Ａはアシル単位である］
又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を調製する方法であって、
化合物Ｗ：Ａ−Ｌ４−Ｌ３−Ｌ２及び化合物Ｉ
Figure 2017528418
を反応させることを含む方法を提供する。
本開示は、化合物Ｚ：
Figure 2017528418
［式中：
Ｄは薬物部分であり；
Ｒ１は水素、無置換若しくは置換Ｃ１−３アルキル、又は無置換若しくは置換ヘテロシクリルであり；
Ｌ１は結合、第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーであり；
Ｌ２は結合又は第二の自壊性リンカーであって；
ここで、Ｌ１が第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーである場合に、Ｌ２は結合であり；
ここで、Ｌ２が第二の自壊性リンカーである場合に、Ｌ１は結合であり；
Ｌ３はペプチドリンカーであり；
Ｌ４は結合又はスペーサーであり；且つ
Ａはアシル単位である］
又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を調製する方法であって
化合物Ｘ：
Figure 2017528418
をクロロギ酸ｐ−ニトロフェニルを反応させて、化合物Ｙ
Figure 2017528418
を形成すること、及びＬ１−Ｄを含む化合物を化合物Ｙと反応させることを含む方法を提供する。
本開示は、化合物Ｘ１：
Figure 2017528418
［式中、
Ｒ１は水素、無置換若しくは置換Ｃ１−３アルキル、又は無置換若しくは置換ヘテロシクリルであり；
Ｌ２は結合又は第二の自壊性リンカーであり；且つ
Ｌ３はペプチドリンカーである］
又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を調製する方法であって、
化合物Ｗ１：Ｌ３−Ｌ２、及び化合物Ｉ
Figure 2017528418
を反応させることを含む、方法が提供される。
本開示は、化合物Ｙ１
Figure 2017528418
［式中、
Ｒ１は水素、無置換若しくは置換Ｃ１−３アルキル、又は無置換若しくは置換ヘテロシクリルであり；
Ｄは薬物部分であり、
Ｌ１は結合、第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーであり；
Ｌ２は結合又は第二の自壊性リンカーであって；
ここで、Ｌ１が第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーである場合に、Ｌ２は結合であり；
ここで、Ｌ２が第二の自壊性リンカーである場合に、Ｌ１は結合であり；及び
Ｌ３はペプチドリンカーである］
又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を調製する方法であって、
化合物Ｘ１
Figure 2017528418
及びＬ１−Ｄを含む化合物を反応させることを含む、方法を提供する。
本開示は、化合物Ｚ
Figure 2017528418
［式中、
Ｄは薬物部分であり、
Ｒ１は水素、無置換若しくは置換Ｃ１−３アルキル、又は無置換若しくは置換ヘテロシクリルであり；
Ｌ１は結合、第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーであり；
Ｌ２は結合又は第二の自壊性リンカーであって；
ここで、Ｌ１が第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーである場合に、Ｌ２は結合であり；
ここで、Ｌ２が第二の自壊性リンカーである場合に、Ｌ１は結合であり；
Ｌ３はペプチドリンカーであり；
Ｌ４は結合又はスペーサーであり；且つ
Ａはアシル単位である］
又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を調製する方法であって、
化合物Ｙ１
Figure 2017528418
及びＡ−Ｌ４を含む化合物を反応させることを含む方法を提供する。
本開示は、式：
Figure 2017528418
［式中、
Ｒ１は水素、無置換若しくは置換Ｃ１−３アルキル、又は無置換若しくは置換ヘテロシクリルであり；
Ｌ２は結合又は第二の自壊性リンカーであり；
Ｌ３はペプチドリンカーであり；
Ｌ４は結合又はスペーサーであり；且つ
Ａはアシル単位である］
の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を提供する。
本開示は、式
Figure 2017528418
［式中、
Ｒ１は水素、無置換若しくは置換Ｃ１−３アルキル、又は無置換若しくは置換ヘテロシクリルであり；
Ｄは薬物部分であり；
Ｌ１は結合、第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーであり；
Ｌ２は結合又は第二の自壊性リンカーであって；
ここで、Ｌ１が第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーである場合に、Ｌ２は結合であり；
ここで、Ｌ２が第二の自壊性リンカーである場合に、Ｌ１は結合であり；
Ｌ３はペプチドリンカーであり：
Ｌ４は結合又はスペーサーであり；且つ
Ａはアシル単位である］
の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を提供する。
本開示は、式
Figure 2017528418
［式中、
Ｒ１は水素、無置換若しくは置換Ｃ１−３アルキル、又は無置換若しくは置換ヘテロシクリルであり；
Ｌ２は結合又は第二の自壊性リンカーであり；且つ
Ｌ３はペプチドリンカーである］
の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を提供する。
本開示は、式
Figure 2017528418
［式中、
Ｒ１は水素、無置換若しくは置換Ｃ１−３アルキル、又は無置換若しくは置換ヘテロシクリルであり；
Ｄは薬物部分であり、
Ｌ１は結合、第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーであり；
Ｌ２は結合又は第二の自壊性リンカーであって；
ここで、Ｌ１が第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーである場合に、Ｌ２は結合であり；
ここで、Ｌ２が第二の自壊性リンカーである場合に、Ｌ１は結合であり；
Ｌ３はペプチドリンカーである］
の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を提供する。
本明細書は、当業者が本発明を実践することができるように十分に考慮されている。本明細書に示され、説明される内容に加えて、本発明の様々な変更が前述の説明から当業者に明らかとなるが、それらは添付の特許請求の範囲内に含まれる。本明細書において引用した全ての出版物、特許、及び特許出願は、全ての目的に関して参照により全体が本明細書に援用される。
本発明は、説明のために提供され、制限的であることを意味しない、以下の実施例を参照して更に理解することができる。
実施例１： 実施例２〜６についての材料及び方法
リンカー−薬物の合成
化合物Ｔａｐ−１８Ｈの合成を以下のスキームに示す。中間体化合物Ｍ及びＯの合成も以下のスキームに示す。
化合物Mの合成
Figure 2017528418
化合物TAP-18Hの合成
Figure 2017528418
化合物Ｔａｐ−１８Ｈの合成スキームに関して、ＰＣｌ５か、又はＥＤＣｌとＮｉＰｒ２Ｅｔが入ったＤＭＦか、又は２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジンが入ったＣＨ２Ｃｌ２及びＮ−メチルモルホリンをカップリング剤として使用して、市販の４−ニトロフェニルグリオキシル酸を、Ｎ−メチルピペラジンと縮合させ、所望のケトアミドを生成した。典型的な手順において、ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（１５ｍｍｏｌ）に２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン（５ｍｍｏｌ）が入った溶液を連続撹拌下で０−５℃で添加した。３０−４０分後、白色の懸濁液が形成され、この混合物に４−ニトロフェニルグリオキシル酸が入ったＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）を添加し、透明な溶液の形成をもたらした。混合物を１時間撹拌した後、Ｎ−メチルピペラジン（５ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応（ＴＬＣ、１０分間）の完了後、混合物を１０％のＮａＨＣＯ３水溶液（２×１０ｍｌ）、続いてＨ２Ｏ（３×１０ｍｌ）で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で溶媒を除去して粗生成物を得、これを再結晶化又はカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝８：２）により更に精製した。
ＴＨＦ又はＤＩＢＡＬ−Ｈ又は水素化ホウ素ナトリウムの存在下、ＬｉＡｌＨ４の０．５当量でケトンアミド化合物を更に還元してニトロ化合物Ｃを生成した［B. P. Bandgar及びS. S. Pandit, Tetrahedron Letters 44 (2003) 3855-3858］。
ＳｎＣｌ２での処理か又はメタノール中の触媒としてのＰｄ／Ｃ（１０％ｗ／ｗ）との接触水素化により、室温で約６−１１時間、収率６５−８１％でニトロ化合物Ｃをアニリン化合物Ｉに還元した。それをＲＢ０４−５０ Ｒｅａｃｔｏｒ Ｂを備えるＭｕｌｔｉＭａｘＩＲシステムを使用した以下の手順を通じて得た。反応器を初めに３５ｍｌのメタノール、０．０３ｍｇの１０％Ｐｄ／Ｃ及び０．０２５２モルのニトロ化合物Ｃで充填し、水素を６．３バールの気圧まで反応器中に添加した（Ｈ２、ｃｏｎｓｔ．）。
化合物Ｍの合成のスキームに関して、Ｂｏｃ保護Ｌ−バリンをＮ−ヒドロキシスクシンイミドとＥＤＡＣ−ＨＣｌが入ったＤＣＭ又はＮ−ヒドロキシスクシンイミドとＥＤＣが入ったＤＣＭで処理し、スクシンイミドエステルを得た。この活性化エステルをＬ−シトルリン及びＣＨ３ＣＮ、Ｈ２Ｏ、ＮａＨＣＯ３と反応させ、Ｂｏｃ保護化合物Ｍを得た。
化合物Ｔａｐ−１８Ｈの合成のスキームに関して、アニリン化合物Ｉを、ＤＣＣ／ＨＯＢｔが入ったＤＭＦを用いて、室温で３２時間Ｂｏｃ保護化合物Ｍとカップリングさせ、化合物Ｎ（収率７８−８２％）を得たか又は、ＰＳ−カルボジイミドとカップリングさせた（この反応において、２当量のＰＳ−カルボジイミド及び１．７当量のＨＯＢｔが入ったＤＣＭの存在下、１．５当量のアニリン化合物Ｉで１００ｍｇの化合物Ｍから出発させて、２４時間、化合物Ｎの合成を行った）。ＬＣ／ＭＳによる分析は、所望の質量を有するピーク及びおよそ５０−６０％の変換を示した。
カップリングした生成物である化合物Ｎを４−ニトロフェニルクロロホルメートで、２，６−ルチジンが入ったＤＣＭの存在下、室温で８時間反応させて炭酸塩化合物Ｐを得、ＬＣ／ＭＳは所望の質量を有するピークを示した。
ＨＯＡｔとＥｔ３Ｎが入ったＤＭＦの存在下のモノメチルドラスタチン１０での炭酸塩化合物Ｐの処理は、化合物Ｑの形成をもたらした。
化合物Ｏの合成のスキームに関して、βアラニンを無水マレイン酸が入ったＤＭＦで処理し、そのように得た酸をＤＣＣカップリング下、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）と反応させ、ＮＨＳ−エステルを得た。市販のｔ−ｂｏｃ−Ｎ−アミド−ｄＰＥＧ４−酸中のＢＯＣ保護基をＴＦＡでの処理により除去し、アミンのＴＦＡ塩を得、これを先で合成させたＮＨＳエステルと反応させた。そのように得たカルボキシル酸を単離させ、ＥＤＣＩを使用してＮ−ヒドロキシスクシンイミドとカップリングさせ、ＮＨＳエステル化合物Ｏを得た。
化合物Ｔａｐ−１８Ｈの合成のスキームに関して、化合物Ｑ中のＢｏｃ保護基をＴＦＡで除去し、無水アセトニトリル及びＮａＨＣＯ３中、室温で１２−３６時間、遊離アミンをＮＨＳエステル化合物Ｏとカップリングさせ、最終生成物Ｔａｐ−１８Ｈを収率３５−４５％で生成させた。
図１はＴａｐ−１８ＨのＮＭＲスペクトルを示す。
化合物ＴＡＰ−１８Ｈｒ１の合成
Ｔａｐ−１８Ｈｒ１を以下の式を用いて合成した。図２はＴａｐ−１８Ｈｒ１のＮＭＲスペクトルを示す。
Figure 2017528418
化合物ＴＡＰ−１８Ｈｒ２の合成
Ｔａｐ−１８Ｈｒ２を以下の式を用いて合成した。図３はＴａｐ−１８Ｈｒ２のＮＭＲスペクトルを示す。
Figure 2017528418
細胞株
卵巣がん細胞ＳＫ−ＯＶ−３（ＡＴＣＣ（登録商標）、カタログ番号ＨＴＢ−７７（商標））を、１０％ＦＢＳ（ＨＹＣＬＯＮＥ（登録商標）、カタログ番号ＳＨ３００７１．０３）及び１００Ｕ／ｍＬペニシリン／１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（ＧＩＢＣＯ（登録商標）、カタログ番号１５１４０）が補充されたＭｃＣｏｙ’ｓ５Ａ培地（ＧＩＢＣＯ（登録商標）、カタログ番号１６６００）中で培養した。卵巣がん細胞ＯＶＣＡＲ−３（Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ（登録商標）、カタログ番号６０５５１）を、２０％ＦＢＳ、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（ＧＩＢＣＯ（登録商標）、カタログ番号１１３６０）、０．０１ｍｇ／ｍＬウシインスリン（ＳＩＧＭＡ（登録商標）、カタログ番号１６６３４）及び１００Ｕ／ｍＬペニシリン／１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンが補充されたＲＰＭＩ培地１６４０（ＧＩＢＣＯ（登録商標）、カタログ番号２２４００）中で培養した。卵巣がん細胞ＯＶＣＡＲ−３Ｂを、ＯＶＣＡＲ−３から適応させて、１０％ＦＢＳ、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（ＧＩＢＣＯ（登録商標）、カタログ番号１１３６０）及び１００Ｕ／ｍＬペニシリン／１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンが補充されたＲＰＭＩ培地１６４０（ＧＩＢＣＯ（登録商標）、カタログ番号２２４００）中で培養した。膵臓がん細胞Ｐａｎｃ０２．０３Ｂを、Ｐａｎｃ０２．０３（ＡＴＣＣ（登録商標）、カタログ番号ＣＲＬ−２５５３（商標））から適応させて、１５％ＦＢＳ、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、及び１００Ｕ／ｍＬペニシリン／１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンが補充されたＲＰＭＩ培地１６４０中でインスリンの非存在下で培養した。肺がん細胞ＮＣＩ−Ｈ２１１０（ＡＴＣＣ（登録商標）、カタログ番号ＣＲＬ−５９２４（商標））を、１０％ＦＢＳ、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、２．５ｇ／Ｌ Ｄ−グルコース（ＳＩＧＭＡ（登録商標）、カタログ番号Ｇ８２７０）及び１００Ｕ／ｍＬペニシリン／１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンが補充されたＲＰＭＩ培地１６４０中で培養した。肺がん細胞ＮＣＩ−Ｈ２９２（ＢＩＯＲＥＳＯＵＲＣＥ ＣＯＬＬＥＣＴＩＯＮ ＡＮＤ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＣＥＮＴＥＲ（登録商標）、カタログ番号６０３７２）を、１０％ＦＢＳ、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、及び１００Ｕ／ｍＬペニシリン／１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンが補充されたＲＰＭＩ培地１６４０中で培養した。
試薬
ＤＴＴ及びＤＴＰＡをＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ（登録商標）（Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から入手した。ＴＣＥＰをＡｃｒｏｓＭｏｒｒｉｓ Ｐｌａｉｎｓ、ＮＪ）から入手した。ＤＴＮＢを、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）から入手した。リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、塩化ナトリウムは、Ｊ．Ｔ．ＢＡＫＥＲ（商標）（Ｃｅｎｔｅｒ Ｖａｌｌｅｙ、ＰＡ）から入手した。システインは、ＡＬＦＡ ＡＥＳＡＲ（登録商標）（Ｗａｒｄ Ｈｉｌｌ、ＭＡ）から入手した。
Figure 2017528418
配列番号１（ｈＬＫ２６−ＩｇＧ１重鎖）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＳＡＳＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＡＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＦＬＱＭＤＳＬＲＰＥＤＴＧＶＹＦＣＡＲＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＰＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号２（ｈＬＫ２６−ＩｇＧ４ｐ重鎖）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＳＡＳＧＦＴＦＳＧＹＧＬＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＭＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＡＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＦＬＱＭＤＳＬＲＰＥＤＴＧＶＹＦＣＡＲＨＧＤＤＰＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＰＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号３（ｈＬＫ２６−カッパ軽鎖）
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＶＳＳＳＩＳＳＮＮＬＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＰＷＩＹＧＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＹＰＹＭＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
ｈＬＫ２６−システイン変異体の生成
システイン残基を、部位特異的変異誘発法によって、ｈＬＫ２６抗体の重鎖（ＣＨ）又はカッパ軽鎖（ＣＬ）の定常領域に導入した。簡潔には、変異誘発は、オーバーラップＰＣＲによって実施した。ヌクレオチドを変化させたプライマーを組み込むことによって、所望の塩基に特異的変化を導入することができる。プライマーが伸長すると、得られたアンプリコンに突然変異が作り出された。突然変異の位置（ＥＵ番号付け）及びアミノ酸の隣接配列を以下の表６に列挙する。
Figure 2017528418
ｈＬＫ２６−Ｃｙｓ変異体を発現する安定な細胞株の生成
ｈＬＫ２６−システイン（ｈＬＫ２６−Ｃｙｓ）変異体をＦｌｐ−Ｉｎ ＣＨＯ細胞（ＩＮＶＩＴＲＯＧＥＮ（商標）、カタログ番号Ｒ７５８−０７）において安定に発現させて生成した。システイン置換抗体変異体のＤＮＡ配列を、ｐｃＤＮＡ５／ＦＲＴベクター（ＩＮＶＩＴＲＯＧＥＮ（商標）、カタログ番号Ｖ６０１０−２０）に挿入して、製造業者によって提供される標準手順書に従ってｐＯＧ４４（ＩＮＶＩＴＲＯＧＥＮ（商標）、カタログ番号Ｖ６００５−２０）と同時トランスフェクトした。確立された細胞株の培養上清を収集して、プロテインＡセファロースビーズ（ＧＥ ＨＥＡＬＴＨＣＡＲＥ（商標）、カタログ番号１７−５２８０−０４）によって精製した。精製されたタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びサイズ排除クロマトグラフィーによって分析して、抗体の品質を確保した。
ｈＬＫ２６−ＩｇＧ１抗体の通常のコンジュゲーション
通常の薬物コンジュゲートは、四つの鎖間ジスルフィド結合の還元を通じてリンカーペイロードを抗体にコンジュゲートさせることによって達成され、このため、コンジュゲーションは、遊離システインの八の露出したスルフヒドリル基に限定される。抗体あたりのリンカー−薬物は、０−８の範囲であり得る。ｈＬＫ２６−ＩｇＧ１抗体を、１．８５当量のＴＣＥＰが入った０．０２５Ｍホウ酸ナトリウム、ｐＨ８、０．０２５Ｍ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＤＴＰＡで３７℃で２時間部分的に還元した。１．０ｍｇ／ｍＬ溶液に関して２８０ｎｍで１．６１６の吸光度値を使用してタンパク質濃度を数値化し、１４５，０５５ｇ／ｍｏｌの分子量を使用してモル濃度を決定した。生成されたｍＡｂ−システインチオールの濃度を、ＤＴＮＢで滴定して決定した。典型的に、ｍＡｂあたり３．２２のチオールが得られた。部分的に還元された抗体を１．２モル濃度のマレイミドカプロイル−薬物（Ｔａｐ１８Ｈｒｌ、Ｔａｐ−１８Ｈｒｌ）／ｍＡｂ−システインチオール又はマレイミド−薬物／ｍＡｂ−システインチオールによってアルキル化した。アルキル化反応を４℃で１２−１６時間実施した。システイン（最終濃度１ｍＭ）を使用して、任意の未反応物の余剰マレイミドカプロイル−薬物又はマレイミド−薬物をクエンチした。コンジュゲーション混合物を初めに、結合バッファー、１０ｍＭリン酸ナトリウム、１０ｍＭＮａＣｌ、５％ＤＭＳＯ、ｐＨ７．０で５倍希釈して、ヒドロキシアパタイトカラム（マクロプレップセラミックタイプＩ ４０μｍ、ＢＩＯＲＡＤ（登録商標）、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ， ＣＡ）に、ｈＬＫ２６−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒｌ精製のためにコンジュゲート抗体２０ｍｇあたりヒドロキシアパタイト１ｍＬのローディング容量で適用した。カラムを先に５カラム容量の結合バッファーで平衡化した。試料の適用に続き、カラムを３カラム容量の結合バッファーで洗浄し、次いで５カラム容量の１０ｍＭリン酸ナトリウム、１０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．０で平衡化した。次いで、結合したＡＤＣを２００ｍＭリン酸ナトリウム、１０ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ７．０で溶出した。溶出後、ＨＩＰＲＥＰ（商標）２６／１０脱塩カラム（任意選択的）を使用して、バッファーをダルベッコリン酸緩衝生理食塩水に交換した。
ｈＬＫ２６−Ｃｙｓ変異体の部位特異的コンジュゲーション
部位特異的薬物コンジュゲートは、二つの操作されたシステイン残基の還元を通じてリンカーペイロード（すなわち、薬物部分に結合したリンカーを含む分子）を抗体の定常ドメイン（ＣＨ又はＣＬ）にコンジュゲートさせることによって達成され、このため、コンジュゲーションは、遊離システインの２つの露出したスルフヒドリル基に限定される。導入されたシステインのリンカーペイロードを特異的にコンジュゲートするために、還元／酸化手順を使用した。培養条件の際に起こり得る、導入されたシステイン部位のシステイン又はグルタチオンを除去するために、ｈＬＫ２６−Ｃｙｓ変異体−Ｔａｐ１８Ｈｒ１、並びにｈＬＫ２６−Ｔ１５５Ｃ及びｈＬＫ２６−Ｓ４４２Ｃの重鎖変異体を初めに、１ｍＭ ＤＴＰＡ（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ（登録商標）、カタログ番号Ｄ６５１８）を含有するＰＢＳ（ＧＩＢＣＯ（登録商標）、カタログ番号２１６００−０６９）中で、１０−１５倍モル余剰のＴＣＥＰ（ＡＣＲＯＳ ＯＲＧＡＮＩＣＳ（登録商標）、カタログ番号３６３８３０１００）で３７℃で２−５時間処理した。余剰のＴＣＥＰを除去した後、抗体を、タンパク質に対して２０−３０倍モル余剰のデヒドロアスコルビン酸（ＤＨＡ）（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ（登録商標）、カタログ番号２６１５５６）で室温で３−５時間再酸化して、鎖間ジスルフィド結合を確実に再形成させた。試料を、ＰＢＳにバッファー交換した。次いで、マレイミド結合薬物ペイロード、Ｔａｐ１８Ｈｒ１を添加して、処理した抗体における遊離のチオールと反応させた。余剰のペイロードをＮ−アセチル−Ｌ−システイン（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ（登録商標）、カタログ番号Ａ７２５０）でクエンチして、ＣＨＴセラミックヒドロキシアパタイトビーズ（ＢＩＯ−ＲＡＤ（登録商標）、カタログ番号１５７−００４０）を使用して、部位特異的コンジュゲートｈＬＫ２６−Ｃｙｓ変異体−Ｔａｐ１８Ｈｒ１、ｈＬＫ２６−Ｔ１５５Ｃ−Ｔａｐ１８Ｈｒ１、及びｈＬＫ２６−Ｓ４４２Ｃ−Ｔａｐ１８Ｈｒ１を精製した。
還元／酸化手順もまた何らかの改変を加えて使用し、重鎖のＴ１９９、並びにカッパ軽鎖のＬ２０１及びＴ２０６に導入されたシステインにリンカーペイロードを特異的にコンジュゲートした。Ｔ１９９ＣのｈＬＫ２６重鎖変異体並びにＬ２０１Ｃ及びＴ２０６Ｃの軽鎖変異体を初めに、１〜５０ｍＭ ＤＴＰＡ（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ（登録商標）、カタログ番号Ｄ６５１８又はＥ５１３４）を含有するＰＢＳ（ＧＩＢＣＯ（登録商標）、カタログ番号２１６００−０６９）中で、１５−５０倍モル余剰のＴＣＥＰ（ＡＣＲＯＳ ＯＲＧＡＮＩＣＳ（登録商標）、カタログ番号３６３８３０１００）で３７℃で２−５時間処理した。余剰のＴＣＥＰを除去した後、抗体を、タンパク質に対して５０−７０倍モル余剰のデヒドロアスコルビン酸（ＤＨＡ）（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ（登録商標）、カタログ番号２６１５５６）で４℃で２−５時間再酸化して、鎖間ジスルフィド結合を確実に再形成させた。試料を、ＰＢＳにバッファー交換した。次いで、マレイミド結合薬物ペイロードであるＴａｐ１８Ｈｒ１を添加して、処理した抗体の遊離チオールと反応させた。余剰のペイロードをＮ−アセチル−Ｌ−システイン（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ（登録商標）、カタログ番号Ａ７２５０）でクエンチして、ＣＨＴセラミックヒドロキシアパタイトビーズ（ＢＩＯ−ＲＡＤ（登録商標）、カタログ番号１５７−００４０）を使用して、これらの部位特異的ＡＤＣを精製した。
逆相ＨＰＬＣ分析による薬物抗体比（ＤＡＲ）の決定
逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）の還元及び変性からなる方法を開発して、様々な軽鎖及び重鎖種を分離及び定量して、コンジュゲートＡＤＣのＤＡＲを決定した。ＨＰＬＣ分析の前に、コンジュゲート試料を６Ｍグアニジン塩酸塩及び２０ｍＭ ＤＴＴで５０℃未満で１５分間加熱して処理した。処理したコンジュゲート試料１００μｇをＰＬＲＰ−Ｓカラム（２．１×１５０ｍｍ、８μｍ、１０００Å、Ａｌｉｇｅｎｔ）に適用した。流速を０．８ｍＬ／分に設定して、カラム温度を、分析を通して一定の８０℃に設定した。溶媒Ａは０．０５％トリフルオロ酢酸が入ったＭｉｌｌｉＱ水であり、溶媒Ｂは０．０４％トリフルオロ酢酸の入ったアセトニトリルであった。勾配プログラムは以下からなった：アイソクラチック２５％Ｂを３ｍｌ；５０％Ｂへ２５ｍｌの直線勾配；９５％Ｂへ２ｍｌの直線勾配；２５％Ｂへ１ｍｌの直線勾配；及びアイソクラチック２５％Ｂを２ｍｌ。この方法において、余剰のＤＴＴを用いたＡＤＣの前処理は、鎖内及び鎖間ジスルフィドを切断し、０又は１の薬物を有する軽鎖（Ｌ０及びＬ１）、及び０、１、２、又は３の薬物を有する重鎖（Ｈ０、Ｈ１、Ｈ２、及びＨ３）の分離を可能にする。各分離種のピークは、その溶出時間及びＵＶスペクトルによって指定された（Ａ２４８／２８０比は薬物のローディングと共に増加する）。試験したＡＤＣに関するＲＰ−ＨＰＬＣプロファイルの個々のピーク面積に基づいて計算されたＤＡＲを表７Ａ及び表７Ｂに列挙する。
Figure 2017528418
ｈＬＫ２６−Ｃｙｓ変異体及びＴａｐ１８Ｈｒ１コンジュゲートのがん細胞に対する結合
１×１０５細胞／ウェルを、ｖ−底９６ウェルプレートに播種して、５０μｌの非コンジュゲートＡｂ又は滴定した濃度のＡＤＣ又は１０μｇ／ｍＬのアイソタイプコントロール抗体ヒトＩｇＧと共にインキュベートした。４℃で６０分間インキュベーション後、細胞を２００μｌのＦＡＣＳバッファー（１％ＦＢＳを含有する１×ＰＢＳ）で１回洗浄し、１μｇ／ｍｌヤギＦ（ａｂ‘）２−抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）−ＲＰＥ又はヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＲＰＥ（ＳＯＵＴＨＥＲＮ ＢＩＯＴＥＣＨ（登録商標）、カタログ番号２０４３−０９又は２０４０−０９）が入ったＦＡＣＳバッファー５０μｌで染色した後、４℃で３０分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳバッファーで１回洗浄して、フローサイトメーター（ＢＤ ＬＳＲ、ＢＤ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析した。
インビトロＷＳＴ−８細胞傷害性アッセイ
ＳＫ−ＯＶ−３、ＯＶＣＡＲ−３、ＯＶＣＡＲ−３Ｂ及びＰａｎｃ０２．０３Ｂ細胞を、９６ウェルマイクロタイタープレートに１×１０３−１×１０４細胞／ウェルで播種した。Ｔａｐ１８Ｈｒ１コンジュゲートＡＤＣ又は非コンジュゲート抗体を、最終容積２００μＬ／ウェル中で、ＳＫ−ＯＶ−３及びＰａｎｃ０２．０３Ｂに関して２．５倍又は３倍段階希釈で、６００ｎＭから０．０３ｎＭの表記の最終濃度範囲（９０μｇ／ｍｌから０．００５μｇ／ｍｌ）、並びにＯＶＣＡＲ−３及びＯＶＣＡＲ−３Ｂに関して３倍段階希釈で２００ｎＭから０．０１ｎＭの表記の最終濃度範囲（３０μｇ／ｍｌから０．００５μｇ／ｍｌ）となるように三重複製又は四重複製で添加した。ＯＶＣＡＲ−３に関して３日間、並びにＳＫ−ＯＶ−３、Ｐａｎｃ０２．０３Ｂ、及びＯＶＣＡＲ−３Ｂに関して３−６日間インキュベートした後、細胞生存率を細胞計数キット−８（Ｄｏｊｉｎｄｏ、カタログ番号ＣＫ０４）によって、製造業者の説明書に従って測定した。簡潔には、インキュベーション終了後、１００μｌ／ウェルの培地を取り出し、１０μＬ／ウェルの反応試薬（ＷＳＴ−８）を各ウェルに添加した。最適な発色後（未治療コントロールのＯＤ４５０≧１の場合）、４５０ｎｍでの吸光度（ＯＤ４５０値）を分光光度計（ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＤＥＶＩＣＥＳ（登録商標）、ＶＥＲＳＡＭＡＸ（商標）マイクロプレートリーダー）により測定した。複製の平均を得、バックグラウンド（培地コントロール）を差し引いた。次いで、得られたＯＤ４５０値を使用して、以下の式：［ＯＤ４５０未治療−ＯＤ４５０試料］／［ＯＤ４５０未治療］＊１００に従って、％成長阻害を計算した。
がん異種移植モデルにおけるＡＤＣ治療
ｈＬＫ２６−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒ１で治療した卵巣腫瘍ＳＫ−ＯＶ−３
皮下異種移植片モデルを確立するために、１×１０７細胞のＳＫ−ＯＶ−３が入った２５％高濃度ＢＤ ＭＡＴＲＩＧＥＬ（商標）基底膜マトリックス（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号３５４２４８）を含有する１２０μｌのＰＢＳを６週齢の雌性Ｃ．Ｂ−１７ＳＣＩＤマウス（Ｌａｓｃｏ、台北、台湾）の右脇腹に移植した。腫瘍細胞接種（第１日として記録）のおよそ１時間後に、ｈＬＫ２６−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒ１を１００μｌ中３ｍｇ／ｋｇで静脈内注射した。二垂直寸法中キャリパーで腫瘍体積を週に１回測定し、式（０．５２＊長さ＊幅＊幅）に従って計算した。治療したマウスにおける潜在的薬物毒性を決定するために、体重を毎週記録した。
Ｔａｐ１８Ｈｒ１とコンジュゲートしたｈＬＫ２６−Ｃｙｓ変異体で治療した卵巣腫瘍ＳＫ−ＯＶ−３
皮下異種移植片モデルを確立するために、１×１０７細胞のＳＫ−ＯＶ−３が入った５０％ＢＤ ＭＡＴＲＩＧＥＬ（商標）基底膜マトリックス（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号３５４２４８）を含有する１００μＬのＰＢＳを６週齢の雌性Ｃ．Ｂ−１７ＳＣＩＤマウス（Ｌａｓｃｏ、台北、台湾）の右脇腹に移植した。腫瘍細胞接種（第１日として記録）のおよそ２時間後に、部位特異的ＡＤＣであるｈＬＫ２６−Ｃｙｓ変異体−Ｔａｐ１８Ｈｒ１をそれぞれ、１５０μＬ中５ｍｇ／ｋｇで静脈内注射した。二垂直寸法中キャリパーで腫瘍体積を週に１回測定し、式（０．５２＊長さ＊幅＊幅）に従って計算した。治療したマウスにおける潜在的薬物毒性を決定するために、体重を毎週記録した。
通常のｈＬＫ２６−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒ１及び部位特異的コンジュゲートｈＬＫ２６−Ｃｙｓ変異体−Ｔａｐ１８Ｈｒ１で治療した肺腫瘍ＮＣＩ−Ｈ２１１０
皮下異種移植片肺腫瘍モデルを確立するために、５×１０６細胞のＮＣＩ−Ｈ２１１０が入った１００μｌのＰＢＳを６週齢の雌性Ｃ．Ｂ−１７ＳＣＩＤマウス（Ｌａｓｃｏ、台北、台湾）の右脇腹に移植した。腫瘍細胞接種（第１日として記録）のおよそ６時間後に、通常のコンジュゲートｈＬＫ２６−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒ１及び部位特異的ｈＬＫ２６−Ｃｙｓ変異体−Ｔａｐ１８Ｈｒ１をそれぞれ、１５０μＬ中５ｍｇ／ｋｇで静脈内注射した。二垂直寸法中キャリパーで腫瘍体積を週に１回測定し、式（０．５２＊長さ＊幅＊幅）に従って計算した。治療したマウスにおける潜在的薬物毒性を決定するために、体重を毎週記録した。
実施例２： 卵巣がん及び肺がん細胞におけるｈＬＫ２６に基づく抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の結合活性
ｈＬＫ２６−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒ１の結合活性
ｈＬＫ２６−ＩｇＧ１ネイキッドＡｂ及びｈＬＫ２６−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒ１の結合活性を、ＦＲＡ発現ＳＫ−ＯＶ−３、ＯＶＣＡＲ−３、ＮＣＩ−Ｈ２１１０及びＮＣＩ−Ｈ２９２細胞においてフローサイトメトリー分析によって評価した。結果（表８）を、一連のＡｂ／ＡＤＣ濃度で最適な結合が得られた平均蛍光強度（ＭＦＩ）として示す。ｈＬＫ２６−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒ１は、試験した全てのＦＲＡ発現細胞株に対して明確に結合し、ネイキッドＡｂのｈＬＫ２６−ＩｇＧ１と同等の結合能を示す。これらのデータは、通常のＡＤＣであるｈＬＫ２６−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒ１が、ｈＬＫ２６−ＩｇＧ１の抗原反応性を保持して、ＦＲＡ発現がん細胞に有効に結合することを実証する。
Figure 2017528418
ｈＬＫ２６−Ｃｙｓ変異体−Ｔａｐ１８Ｈｒ１の部位特異的コンジュゲートの結合活性を、卵巣がんＳＫ−ＯＶ−３及びＯＶＣＡＲ−３Ｂ（表９−１０）並びに肺がんＮＣＩ−Ｈ２１１０及びＮＣＩ−Ｈ２９２（表１１−１２）細胞においてフローサイトメトリー分析によって評価した。表の平均蛍光強度（ＭＦＩ）の値は、試験した濃度でのＡＤＣの結合活性を表す。ＩｇＧ１変異体において、ｈＬＫ２６−Ｔ１５５Ｃ−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８ｈｒ１及びｈＬＫ２６−Ｔ２０６Ｃ−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒ１は、野生型のネイキッドｈＬＫ２６−ＩｇＧと同等に結合したが、ｈＬＫ２６−Ｓ４４２Ｃ−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒ１は、結合反応性のわずかな減少を示した。ＩｇＧ４ｐ変異体−Ｔａｐ１８Ｈｒ１コンジュゲートはまた、本明細書において試験した全てのＦＲＡ陽性がん細胞に結合するが、蛍光強度は、一般的にＩｇＧ１変異体で観察されたものより低かった。結合活性のこの減少は、おそらくシステイン突然変異よりむしろＩｇＧ４アイソタイプに起因する。全体として、部位特異的コンジュゲートｈＬＫ２６−Ｃｙｓ変異体は、試験した卵巣がん及び肺がん細胞に対する抗原反応性を保持する。
Figure 2017528418
Figure 2017528418
Figure 2017528418
Figure 2017528418
実施例３： ＦＲＡ発現細胞におけるｈＬＫ２６−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒ１ ＡＤＣ及びｈＬＫ２６−ＩｇＧ１のインビトロ細胞傷害性
ｈＬＫ２６−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒ１のインビトロ細胞傷害活性をＦＲＡ陽性がん細胞株（ＳＫ−ＯＶ−３及びＯＶＣＡＲ−３）及びＦＲＡ陰性細胞株（Ｐａｎｃ０２．０３Ｂ）において評価した。ネイキッドｈＬＫ２６−ＩｇＧ１抗体による細胞傷害性も同様に同時に試験した。ＡＤＣｈＬＫ２６−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒ１は、ＦＲＡ陽性がん細胞（ＳＫ−ＯＶ−３及びＯＶＣＡＲ−３）に対して特異的且つ用量依存的な増殖阻害を誘導したが、ＦＲＡ陰性細胞であるＰａｎｃ０２．０３Ｂに対しては非常に弱い増殖阻害を有したに過ぎず、この細胞傷害性の抗原特異性を実証している（表１３）。ＡＤＣと比較すると、ネイキッドＡｂのｈＬＫ２６−ＩｇＧ１が処理した細胞の生存率に及ぼす影響は、ごくわずかであった。
Figure 2017528418
部位特異的コンジュゲートｈＬＫ２６−Ｃｙｓ変異体−Ｔａｐ１８Ｈｒ１のインビトロ細胞傷害活性を同様に、ＳＫ−ＯＶ−３及びＯＶＣＡＲ−３Ｂ細胞においても評価した。表１４は、ＩｇＧ１変異体の結果を示し、表１５は、ＩｇＧ４ｐ変異体を示す。通常のコンジュゲートＡＤＣ（表１３）と同様に、ｈＬＫ２６ Ｃｙｓ変異体−Ｔａｐ１８Ｈｒ１は、ＦＲＡ陽性がん細胞（ＳＫ−ＯＶ−３及びＯＶＣＡＲ−３Ｂ）に対して特異的且つ用量依存的な増殖阻害を誘導した。それらがＦＲＡ陰性細胞株Ｐａｎｃ０２．０３Ｂの生存率に及ぼす影響はかなり小さく、この細胞傷害性の抗原特異性を実証した（表１４及び１５）。これらの結果は、通常の及び部位特異的コンジュゲートｈＬＫ２６−Ｔａｐ１８Ｈｒ１ＡＤＣが、抗原特異性をもって標的がん細胞に細胞傷害性薬物を送達できることを実証する。
Figure 2017528418
Figure 2017528418
実施例４： 卵巣がんにおける通常のＡＤＣであるｈＬＫ２６−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒ１のインビトロ有効性
ｈＬＫ２６−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒ１の力価を、卵巣がん細胞株ＳＫ−ＯＶ−３に由来する異種移植片モデルにおいてインビボで評価した。マウスを、腫瘍細胞移植のおよそ１時間後にビヒクル（ＰＢＳ）又は３ｍｇ／ｋｇＡＤＣの１回用量の静脈内投与によって治療した（第１日として記録、図４に矢印で示す）。第１日の腫瘍サイズは、細胞−マトリゲル混合物の接種体積により、１２０ｍｍ３として記録された。注入したマトリゲルは、第１５日までに吸収されるように思われ、そのあいだに腫瘍が確立して、ビヒクルコントロール群で観察されるように着実に成長した。第５７日までに、ビヒクルコントロールの平均腫瘍サイズは、５００ｍｍ３超に達したが（図４）、ｈＬＫ２６−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒ１で治療したマウスの群では、腫瘍の成長は試験終了まで検出されなかった（６匹中６匹）。いずれの群の体重変化も差がなかったことから毒性は観察されなかった（データは示していない）。それゆえ、試験は、ｈＬＫ２６−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒ１ ＡＤＣ単独が卵巣がんに関して強力な抗腫瘍剤であることを実証した。
実施例５： 卵巣がんにおける部位特異的ＡＤＣであるｈＬＫ２６Ｃｙｓ変異体−Ｔａｐ１８Ｈｒ１のインビボ有効性
ＳＣＩＤマウスにおけるＳＫ−ＯＶ−３異種移植片モデルも同様に使用して、インビボで部位特異的コンジュゲートｈＬＫ２６Ｃｙｓ変異体−Ｔａｐ１８Ｈｒ１の抗腫瘍効果を評価した。がん細胞をＳＣＩＤマウスの皮下に移植して、５ｍｇ／ｋｇＡＤＣの１回用量又はビヒクルコントロールを、腫瘍細胞移植の約２時間後に投与した（第１日として記録）。各治療群あたりマウス６匹の四つの治療群：ｈＬＫ２６−Ｓ４４２Ｃ−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒ１、ｈＬＫ２６−Ｔ１５５Ｃ−ＩｇＧ４Ｐ−Ｔａｐ１８Ｈｒ１、ｈＬＫ２６−Ｓ４４２Ｃ−ＩｇＧ４Ｐ−Ｔａｐ１８Ｈｒ１、及びビヒクルコントロールを比較した。腫瘍のサイズを週に１回測定した。結果を図５に示す。第１日の腫瘍サイズは、接種した細胞−マトリゲル混合物の体積により１００ｍｍ３として記録された。ビヒクルコントロールと比較すると、５ｍｇ／ｋｇのｈＬＫ２６Ｃｙｓ変異体−Ｔａｐ１８Ｈｒ１の１回用量は、全てのＡＤＣ治療群において腫瘍の成長を有意に遅延させた（治療後第１６日以降でｐ値＜０．００５）。図５の矢印は、治療を行った日を示す。同様に、全ての群の体重増加の差がなかったことから（データは示していない）ＡＤＣで治療したマウスの群において明白な毒性は観察されない。試験は、部位特異的コンジュゲートｈＬＫ２６Ｃｙｓ変異体−Ｔａｐ１８Ｈｒ１が、いくつかの変異体で細胞結合活性の何らかの減少が認められたものの、卵巣がんに関する有効な抗腫瘍剤であることを実証した。
実施例６： 肺がんに対する抗ＦＲＡに基づくＴａｐ１８Ｈｒ１コンジュゲートのインビボ抗腫瘍活性
通常の及び部位特異的抗ＦＲＡ−Ｔａｐ１８Ｈｒ１コンジュゲートの有効性を、肺がん細胞ＮＣＩ−Ｈ２１１０に由来する異種移植片モデルにおいてインビボで評価した。がん細胞をＳＣＩＤマウスの皮下に移植して、ｈＬＫ２６−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒ１、ｈＬＫ２６−Ｔ２０６Ｃ−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒ１、ｈＬＫ２６−Ｔ１５５Ｃ−ＩｇＧ４ｐ−Ｔａｐ１８Ｈｒ１、ｈＬＫ２６−Ｔ１９９Ｃ−ＩｇＧ４ｐ−Ｔａｐ１８Ｈｒ１、及びｈＬＫ２６−Ｌ２０１Ｃ−ＩｇＧ４ｐ−Ｔａｐ１８Ｈｒ１を含む５ｍｇ／ｋｇＡＤＣの１回用量又はビヒクルコントロールを、腫瘍細胞移植の約６時間後に投与した（第１日として記録、図６の矢印を参照のこと）。第１日の腫瘍サイズは、接種した細胞混合物の体積により１００ｍｍ３として記録された。５匹の動物の各治療群の腫瘍サイズを週に１回測定した。通常のｈＬＫ２６−ＩｇＧ１−Ｔａｐ１８Ｈｒ１又は部位特異的ｈＬＫ２６Ｃｙｓ変異体−Ｔａｐ１８Ｈｒ１コンジュゲートの何れかの５ｍｇ／ｋｇの１回用量は、治療したマウスにおける腫瘍の成長を完全に阻害した。全てのＡＤＣ治療群において第２９日まで腫瘍の成長は検出されなかった。これに対し、ビヒクル群の腫瘍は急速に成長して、第２９日までに１０００ｍｍ３に達した（治療後第７日以降でｐ値＜００５）。全ての群の体重増加の差がなかったことから（データは示していない）、ＡＤＣで治療したマウスの群において明白な毒性は観察されない。試験は、通常又は部位特異的な抗ＦＲＡに基づくＴａｐ１８Ｈｒ１コンジュゲートのいずれも単独で、肺がんに対して強力な抗腫瘍剤であることを実証した。
参考文献
1.Carter, PJ and Senter, PD. Antibody-drug conjugates for cancer therapy. Cancer J. 2008; 14: 154-169.
2.Teicher, BA. Antibody-drug conjugate targets. Current cancer Drug Targets 2009, 9: 982-1004.
3.Ducry, L and Stump, B. Antibody-drug conjugates: linking cytotoxic payloads to monoclonal antibodies. Bioconjugate chem., 2010, 21: 5-13
4.Koblinski, JE., Ahram, M and Sloane, BF. Unraveling the role of proteases in cancer. Clin. Chem. Acta 2000; 291:113-135.
本明細書において引用した全ての特許、特許出願、文書、及び記事は、参照により全体が本明細書に援用される。

Claims (78)

  1. 式（Ｉ）
    Figure 2017528418
    ［式中：
    Ｄは薬物部分であり；
    Ｔはヒト葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）に特異的に結合する抗体である標的化部分であり；
    Ｘは親水性の自壊性リンカーであり；
    Ｌ１は結合、第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーであり；
    Ｌ２は結合又は第二の自壊性リンカーであって；
    ここで、Ｌ１が第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーである場合に、Ｌ２は結合であり；
    ここで、Ｌ２が第二の自壊性リンカーである場合に、Ｌ１は結合であり；
    Ｌ３はペプチドリンカーであり；
    Ｌ４は結合又はスペーサーであり；且つ
    Ａはアシル単位である］
    の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体。
  2. 式（ＩＩ）：
    Figure 2017528418
    ［式中、
    Ｄは薬物部分であり；
    Ｔはヒト葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）に特異的に結合する抗体である標的化部分であり；
    Ｒ１は水素、無置換若しくは置換Ｃ１−３アルキル、又は無置換若しくは置換ヘテロシクリルであり；
    Ｌ１は結合、第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーであり；
    Ｌ２は結合又は第二の自壊性リンカーであって；
    ここで、Ｌ１が第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーである場合に、Ｌ２は結合であり；
    ここで、Ｌ２が第二の自壊性リンカーである場合に、Ｌ１は結合であり；
    Ｌ３はペプチドリンカーであり；
    Ｌ４は結合又はスペーサーであり；且つ
    Ａはアシル単位である］
    の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体。
  3. 式（Ｉａ）：
    Figure 2017528418
    ［式中、
    ｐは、１から２０であり；
    Ｄは薬物部分であり；
    Ｔはヒト葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）に特異的に結合する抗体である標的化部分であり；
    Ｘは親水性の自壊性リンカーであり；
    Ｌ１は結合、第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーであり；
    Ｌ２は結合又は第二の自壊性リンカーであって；
    ここで、Ｌ１が第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーである場合に、Ｌ２は結合であり；
    ここで、Ｌ２が第二の自壊性リンカーである場合に、Ｌ１は結合であり；
    Ｌ３はペプチドリンカーであり；
    Ｌ４は結合又はスペーサーであり；且つ
    Ａはアシル単位である］
    の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体。
  4. 式（ＩＩａ）：
    Figure 2017528418
    ［式中、
    ｐは、１から２０であり；
    Ｄは薬物部分であり；
    Ｔはヒト葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）に特異的に結合する抗体である標的化部分であり；
    Ｒ１は水素、無置換若しくは置換Ｃ１−３アルキル、又は無置換若しくは置換ヘテロシクリルであり；
    Ｌ１は結合、第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーであり；
    Ｌ２は結合又は第二の自壊性リンカーであって；
    ここで、Ｌ１が第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーである場合に、Ｌ２は結合であり；
    ここで、Ｌ２が第二の自壊性リンカーである場合に、Ｌ１は結合であり；
    Ｌ３はペプチドリンカーであり；
    Ｌ４は結合又はスペーサーであり；且つ
    Ａはアシル単位である］
    の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体。
  5. ｐが１から４である、請求項３又は４に記載の化合物。
  6. Ｌ１が結合である、請求項１から５の何れか一項に記載の化合物。
  7. Ｌ１が第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーである、請求項１から５の何れか一項に記載の化合物。
  8. Ｌ１がアミノベンジルオキシカルボニルリンカーである、請求項７に記載の化合物。
  9. Ｌ１が、
    Figure 2017528418
    ［式中、ｎは１又は２である］
    からなる群より選択される、請求項７に記載の化合物。
  10. Ｌ１が、
    Figure 2017528418
    からなる群より選択される、請求項７に記載の化合物。
  11. Ｌ２が結合である、請求項１から１０の何れか一項に記載の化合物。
  12. Ｌ２が第二の自壊性リンカーである、請求項６に記載の化合物。
  13. Ｌ２がアミノベンジルオキシカルボニルリンカーである、請求項１２に記載の化合物。
  14. Ｌ２が
    Figure 2017528418

    ［式中、ｎは１又は２である］
    から選択される、請求項１２に記載の化合物。
  15. Ｌ３が、１から１０のアミノ酸残基のペプチドリンカーである、請求項１から１４の何れか一項に記載の化合物。
  16. Ｌ３が、２から４のアミノ酸残基のペプチドリンカーである、請求項１５に記載の化合物。
  17. Ｌ３が、少なくとも一のリジン又はアルギニン残基を含むペプチドリンカーである、請求項１から１４の何れか一項に記載の化合物。
  18. Ｌ３が、リジン、Ｄ−リジン、シトルリン、アルギニン、プロリン、ヒスチジン、オルニチン及びグルタミンから選択されるアミノ酸残基を含むペプチドリンカーである、請求項１から１６の何れか一項に記載の化合物。
  19. Ｌ３が、バリン、イソロイシン、フェニルアラニン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、アラニン、ロイシン、トリプトファン及びチロシンから選択されるアミノ酸残基を含むペプチドリンカーである、請求項１から１６の何れか一項に記載の化合物。
  20. Ｌ３が、バリン−シトルリン、プロリン−リジン、メチオニン−Ｄ−リジン、アスパラギン−Ｄ−リジン、イソロイシン−プロリン、フェニルアラニン−リジン、及びバリン−リジンから選択されるジペプチド単位である、請求項１５に記載の化合物。
  21. Ｌ３がバリン−シトルリンである、請求項２０に記載の化合物。
  22. Ｌ４が結合である、請求項１から２１の何れか一項に記載の化合物。
  23. Ｌ４がスペーサーである、請求項１から２１の何れか一項に記載の化合物。
  24. スペーサーがポリアルキレングリコール、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、又はポリアミンである、請求項２３に記載の化合物。
  25. Ｌ４がＬ４ａ−Ｃ（Ｏ）、Ｌ４ａ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ、Ｌ４ａ−Ｓ（Ｏ）２、又はＬ４ａ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＨであって、各Ｌ４ａが独立してポリアルキレングリコール、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、又はポリアミンである、請求項２３に記載の化合物。
  26. Ｌ４がＬ４ａ−Ｃ（Ｏ）であって、Ｌ４ａがポリアルキレングリコール、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、又はポリアミンである、請求項２３に記載の化合物。
  27. Ｌ４がＬ４ａ−Ｃ（Ｏ）であって、Ｌ４ａがポリアルキレングリコールである、請求項２３に記載の化合物。
  28. Ｌ４がＬ４ａ−Ｃ（Ｏ）であって、Ｌ４ａがポリエチレングリコールである、請求項２３に記載の化合物。
  29. スペーサーが式−ＣＨ２−（ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｍ−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−のものであって、ｍが０から３０の整数である、請求項２３に記載の化合物。
  30. Ｌ４がＬ４ａ−Ｃ（Ｏ）であって、Ｌ４ａがアルキレンである、請求項２３に記載の化合物。
  31. Ａが
    Figure 2017528418
    ［式中、各Ｑ２はＮＨ又はＯであり、各ｑは独立して１から１０の整数であり、各ｑ１は独立して１から１０の整数である］
    からなる群より選択される、請求項１から３０の何れか一項に記載の化合物。
  32. Ａが、
    Figure 2017528418
    ［式中、各Ｑ２は独立してＮＨ又はＯであり、各ｑは独立して１から１０の整数である］
    からなる群より選択される、請求項３１に記載の化合物。
  33. ｑが２、３、４、又は５である、請求項３２に記載の化合物。
  34. Ａが、
    Figure 2017528418
    ［式中、各Ｑ２は独立してＮＨ又はＯである］
    からなる群より選択される、請求項１から３０の何れか一項に記載の化合物。
  35. 抗体の重鎖の一又は複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられている、請求項１から３４の何れか一項に記載の化合物。
  36. 抗体が重鎖定常領域を含み、重鎖定常領域における一又は複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられている、請求項３５に記載の化合物。
  37. 抗体が重鎖定常領域を含み、重鎖定常領域における１５５、１５７、１６５、１６９、１９７、１９９、及び４４２位の一又は複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられており、番号付けがカバットのＥＵインデックスに従う、請求項３６に記載の化合物。
  38. 抗体の軽鎖の一又は複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられている、請求項１から３７の何れか一項に記載の化合物。
  39. 抗体が軽鎖定常領域を含み、抗体の軽鎖定常領域における一又は複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられている、請求項３８に記載の化合物。
  40. 抗体が軽鎖定常領域を含み、軽鎖定常領域における２０１及び２０６位の一又は複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられており、番号付けがカバットのＥＵインデックスに従う、請求項３９に記載の化合物。
  41. Ｄが、追加されたシステイン残基を介してＴに結合している、請求項３５から４０の何れか一項に記載の化合物。
  42. Ｄがアミノ含有薬物部分であって、該薬物がアミノ基を通じてＬ１又はＸに結合している、請求項１から４１の何れか一項に記載の化合物。
  43. Ｄがデュオカルマイシン、ドラスタチン、ツブリシン、ドキソルビシン（ＤＯＸ）、パクリタキセル若しくはマイトマイシンＣ（ＭＭＣ）、又はそのアミノ誘導体である、請求項４２に記載の化合物。
  44. Ｄが、
    Figure 2017528418
    からなる群より選択される、請求項４２に記載の化合物。
  45. Ｄが
    Figure 2017528418
    である、請求項４２に記載の化合物。
  46. −Ａ−Ｌ４−Ｌ３−Ｌ２−が
    Figure 2017528418
    である、請求項１から５の何れか一項に記載の化合物。
  47. −Ａ−Ｌ４−Ｌ３−Ｌ２−Ｘ−Ｌ１−Ｄが
    Figure 2017528418
    である、請求項１から５の何れか一項に記載の化合物。
  48. −Ａ−Ｌ４−Ｌ３−Ｌ２−Ｘ−Ｌ１−Ｄが
    Figure 2017528418
    である、請求項１から５の何れか一項に記載の化合物。
  49. −Ａ−Ｌ４−Ｌ３−Ｌ２−Ｘ−Ｌ１−Ｄが
    Figure 2017528418
    である、請求項１から５の何れか一項に記載の化合物。
  50. 抗葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）抗体が、ヒト化抗体、キメラ抗体、又はヒト抗体である、請求項１から４９の何れか一項に記載の化合物。
  51. 抗葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）抗体が重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、
    （１）重鎖可変領域が抗体ｈＬＫ２６の三の重鎖ＨＶＲを含み、及び／若しくは軽鎖可変領域が抗体ｈＬＫ２６の三の軽鎖ＨＶＲを含み；
    （２）重鎖可変領域が抗体２６Ｂ３の三の重鎖ＨＶＲを含み、及び／若しくは軽鎖可変領域が抗体２６Ｂ３の三の軽鎖ＨＶＲを含み；又は
    （３）重鎖可変領域が抗体ｈＭｏｖ１９の三の重鎖ＨＶＲを含み、及び／若しくは軽鎖可変領域が抗体ｈＭｏｖ１９の三の軽鎖ＨＶＲを含む、
    請求項１から４９の何れか一項に記載の化合物。
  52. 抗葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）抗体が重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、
    （１）重鎖可変領域が配列番号８のアミノ酸配列を含み、及び／若しくは軽鎖可変領域が配列番号９のアミノ酸配列を含み；
    （２）重鎖可変領域が配列番号１０のアミノ酸配列を含み、及び／若しくは軽鎖可変領域が配列番号１１のアミノ酸配列を含み；又は
    （３）重鎖可変領域が配列番号１２のアミノ酸配列を含み、及び／若しくは軽鎖可変領域が配列番号１３のアミノ酸配列を含む、
    請求項１から４９の何れか一項に記載の化合物。
  53. 抗体が、配列番号３２又は配列番号３３のアミノ酸配列を含むヒト重鎖定常領域、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むヒト軽鎖定常領域を含み、重鎖定常領域におけるＴ１５５、Ｓ１５７、Ｓ１６５、Ｔ１６９、Ｔ１９７、Ｔ１９９、及びＳ４４２位の一若しくは複数のアミノ酸残基、並びに／又は軽鎖定常領域におけるＬ２０１及びＴ２０６位の一若しくは複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられており、番号付けがカバットのＥＵインデックスに従う、請求項１から５２の何れか一項に記載の化合物。
  54. 抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖからなる群より選択される抗原結合断片である、請求項１から５２の何れか一項に記載の化合物。
  55. 請求項１から５４の何れか一項に記載の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体；及び薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
  56. 細胞を死滅させるために十分な量の請求項１から５４の何れか一項に記載の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を細胞に投与することを含む、ヒト葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）を発現する細胞を死滅させる方法。
  57. 細胞ががん細胞である、請求項５６に記載の方法。
  58. がん細胞が、卵巣がん細胞、肺がん細胞、子宮がん細胞、精巣絨毛癌細胞、上衣腫細胞、中皮腫細胞、乳がん細胞、結腸がん細胞、又は腎細胞癌細胞である、請求項５７に記載の方法。
  59. 個体においてがんを治療する方法であって、該個体に請求項１から５４の何れか一項に記載の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体の有効量を投与することを含む方法。
  60. がんが、卵巣がん、肺がん、子宮がん、精巣絨毛癌、上衣腫、中皮腫、乳がん、結腸がん、又は腎細胞癌である、請求項５９に記載の方法。
  61. 請求項１から５４の何れか一項に記載の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を含むキット。
  62. がんの治療における使用説明書を更に含む、請求項６１に記載のキット。
  63. 式（ＩＩ）：
    Figure 2017528418
    ［式中、
    Ｄは薬物部分であり；
    Ｔはヒト葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）に特異的に結合する抗体である標的化部分であり；
    Ｒ１は水素、無置換若しくは置換Ｃ１−３アルキル、又は無置換若しくは置換ヘテロシクリルであり；
    Ｌ１は結合、第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーであり；
    Ｌ２は結合又は第二の自壊性リンカーであって；
    ここで、Ｌ１が第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーである場合に、Ｌ２は結合であり；
    ここで、Ｌ２が第二の自壊性リンカーである場合に、Ｌ１は結合であり；
    Ｌ３はペプチドリンカーであり；
    Ｌ４は結合又はスペーサーであり；且つ
    Ａはアシル単位である］
    の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を調製するための方法であって、
    抗体を化合物Ｚ
    Figure 2017528418
    又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体と反応させること
    を含む方法。
  64. 式（ＩＩａ）：
    Figure 2017528418
    ［式中、
    ｐは、１から２０であり；
    Ｄは薬物部分であり；
    Ｔはヒト葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）に特異的に結合する抗体である標的化部分であり；
    Ｒ１は水素、無置換若しくは置換Ｃ１−３アルキル、又は無置換若しくは置換ヘテロシクリルであり；
    Ｌ１は結合、第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーであり；
    Ｌ２は結合又は第二の自壊性リンカーであって；
    ここで、Ｌ１が第二の自壊性リンカー又は環化自己脱離リンカーである場合に、Ｌ２は結合であり；
    ここで、Ｌ２が第二の自壊性リンカーである場合に、Ｌ１は結合であり；
    Ｌ３はペプチドリンカーであり；
    Ｌ４は結合又はスペーサーであり；且つ
    Ａはアシル単位である］
    の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を調製するための方法であって、
    抗体を化合物Ｚ
    Figure 2017528418
    又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体と反応させること
    を含む方法。
  65. 抗体が一又は複数のスルフヒドリル基を含む、請求項６３又は６４に記載の方法。
  66. 抗体の重鎖の一又は複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられている、請求項６３から６５の何れか一項に記載の方法。
  67. 抗体が重鎖定常領域を含み、重鎖定常領域における一又は複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられている、請求項６６に記載の方法。
  68. 抗体が重鎖定常領域を含み、重鎖定常領域における１５５、１５７、１６５、１６９、１９７、１９９、及び４４２位の一又は複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられており、番号付けがカバットのＥＵインデックスに従う、請求項６７に記載の方法。
  69. 抗体の軽鎖の一又は複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられている、請求項６３から６８の何れか一項に記載の方法。
  70. 抗体が軽鎖定常領域を含み、抗体の軽鎖定常領域における一又は複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられている、請求項６９に記載の方法。
  71. 抗体が軽鎖定常領域を含み、軽鎖定常領域における２０１及び２０６位の一又は複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられており、番号付けがカバットのＥＵインデックスに従う、請求項７０に記載の方法。
  72. Ｄが、追加されたシステイン残基を介してＴに結合している、請求項６６から７１の何れか一項に記載の方法。
  73. 抗葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）抗体が、ヒト化抗体、キメラ抗体、又はヒト抗体である、請求項６３から７２の何れか一項に記載の方法。
  74. 抗葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）抗体が重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、
    （１）重鎖可変領域が抗体ｈＬＫ２６の三の重鎖ＨＶＲを含み、及び／若しくは軽鎖可変領域が抗体ｈＬＫ２６の三の軽鎖ＨＶＲを含み；
    （２）重鎖可変領域が抗体２６Ｂ３の三の重鎖ＨＶＲを含み、及び／若しくは軽鎖可変領域が抗体２６Ｂ３の三の軽鎖ＨＶＲを含み；又は
    （３）重鎖可変領域が抗体ｈＭｏｖ１９の三の重鎖ＨＶＲを含み、及び／若しくは軽鎖可変領域が抗体ｈＭｏｖ１９の三の軽鎖ＨＶＲを含む、
    請求項６３から７２の何れか一項に記載の方法。
  75. 抗葉酸受容体アルファ（ＦＲＡ）抗体が重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、
    （１）重鎖可変領域が配列番号８のアミノ酸配列を含み、及び／若しくは軽鎖可変領域が配列番号９のアミノ酸配列を含み；
    （２）重鎖可変領域が配列番号１０のアミノ酸配列を含み、及び／若しくは軽鎖可変領域が配列番号１１のアミノ酸配列を含み；又は
    （３）重鎖可変領域が配列番号１２のアミノ酸配列を含み、及び／若しくは軽鎖可変領域が配列番号１３のアミノ酸配列を含む、
    請求項６３から７２の何れか一項に記載の方法。
  76. 抗体が、配列番号３２又は配列番号３３のアミノ酸配列を含むヒト重鎖定常領域、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むヒト軽鎖定常領域を含み、重鎖定常領域におけるＴ１５５、Ｓ１５７、Ｓ１６５、Ｔ１６９、Ｔ１９７、Ｔ１９９、及びＳ４４２位の一若しくは複数のアミノ酸残基、並びに／又は軽鎖定常領域におけるＬ２０１及びＴ２０６位の一若しくは複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置き換えられており、番号付けがカバットのＥＵインデックスに従う、請求項６３から７５の何れか一項に記載の方法。
  77. 化合物が請求項６３から７６の何れか一項に記載の方法によって調製され、抗体が一又は複数のスルフヒドリル基を含む、化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体。
  78. 請求項７７に記載の化合物又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体、及び薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2018528162A (ja) * 2015-06-29 2018-09-27 イミュノジェン・インコーポレーテッド システイン改変抗体の複合体
JP2021531825A (ja) * 2018-07-09 2021-11-25 マルチチュード インコーポレーテッドMultitude Inc. 葉酸受容体アルファに特異的な抗体
JP2022500454A (ja) * 2018-09-17 2022-01-04 ストロ バイオファーマ インコーポレーテッド 抗葉酸受容体抗体コンジュゲートによる併用療法

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9943610B2 (en) 2012-12-21 2018-04-17 Bioalliance C.V. Hydrophilic self-immolative linkers and conjugates thereof
US9950077B2 (en) 2014-06-20 2018-04-24 Bioalliance C.V. Anti-folate receptor alpha (FRA) antibody-drug conjugates and methods of using thereof
SG11201805557SA (en) 2016-01-08 2018-07-30 Bioalliance Cv Tetravalent anti-psgl-1 antibodies and uses thereof
EP3544983A2 (en) 2016-11-23 2019-10-02 Immunogen, Inc. Selective sulfonation of benzodiazepine derivatives
CN107446020B (zh) * 2017-07-28 2019-10-01 中国药科大学 叶酸受体α特异性结合肽2及其应用
MX2020002666A (es) * 2017-09-18 2020-11-06 Sutro Biopharma Inc Conjugados de anticuerpos anti-receptor de folato, composiciones que contienen conjugados de anticuerpos anti-receptor de folato y metodos de fabricación y uso de conjugados de anticuerpos anti-receptor de folato.
KR20200132900A (ko) 2018-03-13 2020-11-25 페인스 테라퓨틱스 인코포레이티드 항-폴레이트 수용체 1 항체 및 이의 용도
CN111393528B (zh) * 2020-01-19 2023-01-31 中国药科大学 一种靶向叶酸受体α的单链抗体及其应用
US10981996B1 (en) * 2020-06-01 2021-04-20 Abexxa Biologics, Inc. Antibodies targeting a complex comprising non-classical HLA-I and neoantigen and their methods of use
US11976120B2 (en) * 2020-06-01 2024-05-07 Boehringer Ingelheim International Gmbh Antibodies targeting a complex comprising non-classical HLA-I and neoantigen and their methods of use
CN112794911B (zh) * 2021-04-14 2021-08-03 上海偌妥生物科技有限公司 人源化抗叶酸受体1抗体及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008500025A (ja) * 2004-02-12 2008-01-10 モルフォテック、インク． 腫瘍抗原の生物活性を特異的に阻止するモノクローナル抗体
JP2009538629A (ja) * 2006-05-30 2009-11-12 ジェネンテック・インコーポレーテッド 抗体およびイムノコンジュゲートとこれらの使用方法
JP2013524773A (ja) * 2010-02-24 2013-06-20 イミュノジェン， インコーポレイテッド フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用
JP2014506892A (ja) * 2011-02-15 2014-03-20 イミュノジェン・インコーポレーテッド 複合体の調製方法

Family Cites Families (83)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5198560A (en) 1990-04-27 1993-03-30 Bristol-Myers Squibb Company Cytotoxic bicyclo[7.3.1]tridec-4-ene-2,6-diyne compounds and process for the preparation thereof
KR100272077B1 (ko) 1990-08-29 2000-11-15 젠팜인터내셔날,인코포레이티드 이종 항체를 생산할 수 있는 전이유전자를 가진 인간이외의 동물
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
ATE164395T1 (de) 1990-12-03 1998-04-15 Genentech Inc Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
EP0771208B1 (en) 1994-08-12 2005-10-19 Immunomedics, Inc. Immunoconjugates and humanized antibodies specific for b-cell lymphoma and leukemia cells
CA2233936A1 (en) 1995-10-03 1997-04-10 The Scripps Research Institute Cbi analogs of cc-1065 and the duocarmycins
AU711974B2 (en) 1996-03-08 1999-10-28 Scripps Research Institute, The MCBI analogs of CC-1065 and the duocarmycins
CA2255703A1 (en) 1996-05-31 1997-12-04 Dale L. Boger Analogs of cc-1065 and the duocarmycins
ATE271041T1 (de) 1997-05-22 2004-07-15 Scripps Research Inst Analoga von duocarmycin and cc-1065
US6262271B1 (en) 1997-10-14 2001-07-17 The Scripps Research Institute ISO-CBI and ISO-CI analogs of CC-1065 and the duocarmycins
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US20020106728A1 (en) 2000-06-20 2002-08-08 Genentech, Inc. NS4 nucleic acids and polypeptides and methods of use for the treatment of body weight disorders
US6762020B1 (en) 1999-03-15 2004-07-13 Protein Design Labs, Inc. Methods of diagnosing breast cancer
DE19926154A1 (de) 1999-06-09 2000-12-14 Ktb Tumorforschungs Gmbh Verfahren zur Herstellung einer injizierbaren Arzneimittelzubereitung
US7090843B1 (en) 2000-11-28 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof
US20070258987A1 (en) 2000-11-28 2007-11-08 Seattle Genetics, Inc. Recombinant Anti-Cd30 Antibodies and Uses Thereof
EP1243276A1 (en) 2001-03-23 2002-09-25 Franciscus Marinus Hendrikus De Groot Elongated and multiple spacers containing activatible prodrugs
US7256257B2 (en) 2001-04-30 2007-08-14 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
US20030083263A1 (en) 2001-04-30 2003-05-01 Svetlana Doronina Pentapeptide compounds and uses related thereto
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
ATE522623T1 (de) 2001-06-20 2011-09-15 Genentech Inc Zusammensetzungen und verfahren zur behandlung und diagnose von lungentumoren
US7091186B2 (en) 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
US7591994B2 (en) 2002-12-13 2009-09-22 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
US8877901B2 (en) 2002-12-13 2014-11-04 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
KR20040101502A (ko) 2002-04-16 2004-12-02 제넨테크, 인크. 종양의 진단 및 치료 방법 및 이를 위한 조성물
LT1507556T (lt) 2002-05-02 2016-10-10 Wyeth Holdings Llc Kalicheamicino darinio ir nešiklio konjugatai
US20090068178A1 (en) 2002-05-08 2009-03-12 Genentech, Inc. Compositions and Methods for the Treatment of Tumor of Hematopoietic Origin
CA2494105C (en) 2002-07-31 2013-04-02 Seattle Genetics, Inc. Drug conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
EP1560599A1 (en) 2002-11-14 2005-08-10 Syntarga B.V. Prodrugs built as multiple self-elimination-release spacers
US8420086B2 (en) 2002-12-13 2013-04-16 Immunomedics, Inc. Camptothecin conjugates of anti-CD22 antibodies for treatment of B cell diseases
US7332164B2 (en) 2003-03-21 2008-02-19 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Heterobifunctional polymeric bioconjugates
KR101520209B1 (ko) 2003-11-06 2015-05-13 시애틀 지네틱스, 인크. 리간드에 접합될 수 있는 모노메틸발린 화합물
WO2005082023A2 (en) 2004-02-23 2005-09-09 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
CA2940803A1 (en) 2004-03-23 2005-10-27 Ascendis Pharma Gmbh Prodrug linker
US7662936B2 (en) 2004-04-07 2010-02-16 Genentech, Inc. Mass spectrometry of antibody conjugates
US7691962B2 (en) 2004-05-19 2010-04-06 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
US7521541B2 (en) 2004-09-23 2009-04-21 Genetech Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
WO2008020827A2 (en) 2005-08-01 2008-02-21 Biogen Idec Ma Inc. Altered polypeptides, immunoconjugates thereof, and methods related thereto
WO2007103288A2 (en) 2006-03-02 2007-09-13 Seattle Genetics, Inc. Engineered antibody drug conjugates
JP5313886B2 (ja) 2006-06-07 2013-10-09 バイオアライアンス セー．フェー． 癌細胞で発現するｃｄ−４３およびｃｅａの炭水化物含有エピトープを認識する抗体およびそれを使用する方法
CA2663375A1 (en) 2006-09-15 2008-03-20 Onconova Therapeutics, Inc. Activated cytotoxic compounds for attachment to targeting molecules for the treatment of mammalian disease conditions
GB0619291D0 (en) 2006-09-29 2006-11-08 Ucb Sa Altered antibodies
CA2699837C (en) 2006-12-01 2017-06-13 Seattle Genetics, Inc. Variant target binding agents and uses thereof
TWI412367B (zh) 2006-12-28 2013-10-21 Medarex Llc 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物
EP2609934A1 (en) 2007-02-16 2013-07-03 KTB Tumorforschungsgesellschaft mbH Receptor And Antigen Targeted Prodrug
WO2009079649A1 (en) 2007-12-18 2009-06-25 Bioalliance C.V. Antibodies recognizing a carbohydrate containing epitope on cd-43 and cea expressed on cancer cells and methods using same
KR20100107501A (ko) 2008-01-18 2010-10-05 메디뮨 엘엘씨 부위 특이적 접합을 위한 시스테인 조작 항체
WO2009099741A1 (en) 2008-02-01 2009-08-13 Genentech, Inc. Nemorubicin metabolite and analog reagents, antibody-drug conjugates and methods
CN102448486A (zh) 2009-03-06 2012-05-09 艾更斯司股份有限公司 结合于24p4c12蛋白的抗体药物偶联物(adc)
MX2011012665A (es) 2009-06-04 2012-03-07 Novartis Ag Metodos para identificacion de sitios para conjugacion de igg.
EP2711018A1 (en) 2009-06-22 2014-03-26 MedImmune, LLC Engineered Fc regions for site-specific conjugation
GB0920127D0 (en) 2009-11-17 2009-12-30 Ucb Pharma Sa Antibodies
SI2528625T1 (sl) 2010-04-15 2013-11-29 Spirogen Sarl Pirolobenzodiazepini in njihovi konjugati
ES2660428T3 (es) 2010-04-21 2018-03-22 Syntarga B.V. Conjugados de análogos de CC-1065 y conectores bifuncionales
CN114246952A (zh) 2010-06-08 2022-03-29 基因泰克公司 半胱氨酸改造的抗体和偶联物
AU2012236219B2 (en) * 2011-04-01 2017-02-23 Immunogen, Inc. Methods for increasing efficacy of FOLR1 cancer therapy
US8852599B2 (en) 2011-05-26 2014-10-07 Bristol-Myers Squibb Company Immunoconjugates, compositions for making them, and methods of making and use
BR112013032928A2 (pt) 2011-06-21 2017-01-24 Immunogen Inc "derivados de maitansinoide com ligante de peptídeo e conjugados dos mesmos, composição farmacêutica que os compreende e uso dos mesmos"
WO2013093809A1 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Pfizer Inc. Engineered antibody constant regions for site-specific conjugation and methods and uses therefor
WO2013103800A1 (en) 2012-01-06 2013-07-11 Bioalliance C.V. Anti-transferrin receptor antibodies and methods using same
CN107982545B (zh) 2012-05-15 2021-04-09 联宁（苏州）生物制药有限公司 药物偶联物，偶联方法，及其用途
WO2013181597A2 (en) 2012-05-31 2013-12-05 Synchem, Inc. Thiol-ene click chemistry for drug conjugates
EP2869851A1 (en) 2012-07-09 2015-05-13 Genentech, Inc. Immunoconjugates comprising anti-cd22 antibodies
PL2872157T3 (pl) * 2012-07-12 2020-07-13 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd Koniugaty wiążących komórkę cząsteczek ze środkami cytotoksycznymi
CN103566377A (zh) 2012-07-18 2014-02-12 上海博笛生物科技有限公司 癌症的靶向免疫治疗
WO2014057118A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sarl Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd22 antibody conjugates
JP6366111B2 (ja) 2012-12-13 2018-08-01 イミューノメディクス、インコーポレイテッドＩｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ， Ｉｎｃ． 有効性の改善および毒性の減少のための、抗体およびｓｎ−３８からなるイムノコンジュゲートの投薬
WO2015012904A2 (en) 2012-12-13 2015-01-29 Immunomedics, Inc. Antibody-sn-38 immunoconjugates with a cl2a linker
US9943610B2 (en) 2012-12-21 2018-04-17 Bioalliance C.V. Hydrophilic self-immolative linkers and conjugates thereof
EP2927227A4 (en) 2013-01-03 2015-12-30 Celltrion Inc ANTIBODY CONCENTRATOR REMEDY CONJUGATE, METHOD OF MANUFACTURING THEREOF, AND ANTIBODY TOGETHER THEREWITH
SG10201706468RA (en) 2013-02-08 2017-09-28 Novartis Ag Specific sites for modifying antibodies to make immunoconjugates
MY183572A (en) 2013-03-15 2021-02-26 Regeneron Pharma Biologically active molecules, conjugates thereof, and therapeutic uses
WO2014197871A2 (en) 2013-06-06 2014-12-11 Igenica Biotherapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates, compositions and methods of use
ES2575508T3 (es) 2014-01-10 2016-06-29 Synthon Biopharmaceuticals B.V. CAFs de duocarmicina que presentan una mejora en la actividad antitumoral in vivo
CN106659783A (zh) 2014-06-20 2017-05-10 艾比吉诺米克斯国际股份有限公司 Her2抗体‑药物缀合物
EP3157961A4 (en) 2014-06-20 2018-01-24 BioAlliance C.V. Anti-cd22 antibody-drug conjugates and methods of using thereof
US9950077B2 (en) 2014-06-20 2018-04-24 Bioalliance C.V. Anti-folate receptor alpha (FRA) antibody-drug conjugates and methods of using thereof
SG11201805557SA (en) 2016-01-08 2018-07-30 Bioalliance Cv Tetravalent anti-psgl-1 antibodies and uses thereof

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008500025A (ja) * 2004-02-12 2008-01-10 モルフォテック、インク． 腫瘍抗原の生物活性を特異的に阻止するモノクローナル抗体
JP2009538629A (ja) * 2006-05-30 2009-11-12 ジェネンテック・インコーポレーテッド 抗体およびイムノコンジュゲートとこれらの使用方法
JP2013524773A (ja) * 2010-02-24 2013-06-20 イミュノジェン， インコーポレイテッド フォレート受容体１抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用
JP2014506892A (ja) * 2011-02-15 2014-03-20 イミュノジェン・インコーポレーテッド 複合体の調製方法

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2018528162A (ja) * 2015-06-29 2018-09-27 イミュノジェン・インコーポレーテッド システイン改変抗体の複合体
JP2021088581A (ja) * 2015-06-29 2021-06-10 イミュノジェン・インコーポレーテッド システイン改変抗体の複合体
JP2021531825A (ja) * 2018-07-09 2021-11-25 マルチチュード インコーポレーテッドMultitude Inc. 葉酸受容体アルファに特異的な抗体
JP2022500454A (ja) * 2018-09-17 2022-01-04 ストロ バイオファーマ インコーポレーテッド 抗葉酸受容体抗体コンジュゲートによる併用療法

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KR20170020868A (ko) 2017-02-24
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