JP2015140325A - コラゲナーゼ阻害剤、並びにコラゲナーゼ阻害剤を配合した化粧料組成物及び機能性食品 - Google Patents
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Abstract
Description
真皮線維芽細胞より産生されるコラゲナーゼはコラーゲンの分解する酵素であり、コラゲナーゼの活性を抑制し、皮膚の弾力や張りを維持するコラーゲンの変性を防止することが皮膚老化の防止に効果的である。
また、皮膚組織など美容系のみならず,癌転移においてもコラゲナーゼが活性化することが知られており、コラゲナーゼ阻害による癌転移抑制効果が期待されている。
かかる状況下、本発明の目的は、従来知られていなかった、新規のコラゲナーゼ阻害剤、及びその応用品を提供することである。
<1> 白麹菌(Aspergillus kawachii)及び黒麹菌(Aspergillus awamori)から選択される少なくとも1種を繁殖させた米麹の溶媒抽出物を含有するコラゲナーゼ阻害剤。
<2> 前記米麹が、白麹菌(Aspergillus kawachii)を繁殖させた米麹である前記<1>に記載のコラゲナーゼ活性阻害剤。
<3> 前記溶媒抽出物が、前記米麹と、水、エタノール及び1,3−ブチレングリコールから選択される1種以上を主溶媒として含有する抽出溶媒とを接触させ、前記米麹に含有される成分を抽出して得られる抽出物である前記<1>または<2>に記載のコラゲナーゼ阻害剤。
<4> 前記抽出溶媒が、水及び1,3−ブチレングリコールから選択される1種以上である前記<3>に記載のコラゲナーゼ阻害剤。
<5> 前記<1>から<4>のいずれかに記載のコラゲナーゼ阻害剤を配合してなることを特徴とする化粧料組成物。
<6> 前記<1>から<4>のいずれかに記載のコラゲナーゼ阻害剤を配合してなることを特徴とする機能性食品。
本発明は、白麹菌(Aspergillus kawachii) 及び黒麹菌(Aspergillus awamori)から選択される少なくとも1種を繁殖させた米麹の溶媒抽出物を含有するコラゲナーゼ阻害剤(以下、「本発明の阻害剤」と記載する場合がある。)である。
以下、本発明の阻害剤について詳細に説明する。
本発明の阻害剤に含有される米麹は、麹菌として白麹菌(Aspergillus kawachii)を繁殖させた米麹(以下、「米麹(白麹菌)」と記載する場合がある。)または、黒麹菌(Aspergillus awamori)を繁殖させた米麹(以下、「米麹(黒麹菌)」と記載する場合がある。)、また、白麹菌と黒麹菌の両方を繁殖させた米麹である。なお、以下、これらを総称して「本発明の米麹」と記載する場合がある。本発明の米麹のうち、色素の観点からより好ましくは米麹(白麹菌)である。
米麹(白麹菌)や米麹(黒麹菌)の溶媒抽出物が優れたコラゲナーゼ阻害作用を発現することについての作用機序の詳細は現段階では詳細は完全に明らかではないが、米麹(白麹菌)や米麹(黒麹菌)の抽出物を加熱して、含まれる酵素を失活させても、あるいはろ過によって抽出物から白麹菌を除去してもコラゲナーゼ阻害活性が認められるため、麹の白麹菌や黒麹菌による低分子産生物が実質的な有効成分である可能性がある。
米類は、固めに炊く、あるいは蒸したのちに、白麹菌や黒麹菌を繁殖させて本発明に係る米麹とする。
好適な一例を挙げると、精白米を水で精米した後、冷水に浸漬する。その後、余計な水切りを行い、精白米を蒸しあげる。蒸しあがった精白米の水分を飛ばし、麹菌(白麹菌、黒麹菌)を混ぜ込んでいく。次に麹菌を混ぜた精白米を35〜40℃で18時間保温し、その後、麹菌が付着した精白米を均一に広げ34℃で6時間保温する。これを2回繰り返し、麹を製造する。
これらの抽出溶媒は単独又はこれら2種以上の混合物として使用することができ、2種以上の溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。
抽出溶媒としては、水、エタノール及び1,3−ブチレングリコールから選択される1種以上を主溶媒として含有する抽出溶媒であることが好ましい。ここで、「主溶媒」とは溶媒全量の50体積%以上(100体積%含む)を占める溶媒を意味する。
このような抽出溶媒であれば、得られる抽出物は、他の溶媒で抽出した場合と比較して、より優れたコラゲナーゼに対する活性阻害作用を有する。
また、抽出物に含まれる残渣を取り除くため、濾過や遠心分離を行ってもよい。また、得られた抽出液はそのまま利用してもよいが、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
なお、この抽出操作は品質劣化を避けるために常温で行うのが好ましいが、抽出効率を上げるために加温状態にして行うことも可能である。加温により米麹のデンプンやタンパク質などが分解され豊富な栄養成分(アミノ酸・糖など)を抽出液中に含有させることができる。また、必要に応じて抽出物の割合を高めるため、減圧濃縮や凍結乾燥により溶媒除去してもよい。
本発明の阻害剤は、特にコラゲナーゼ阻害作用が高いため、比較的低濃度(例えば、2〜10重量%)でもコラーゲンの分解抑制効果が期待できる。
本発明の化粧料組成物は、上記本発明のコラゲナーゼ阻害剤を配合してなることを特徴とする。上述の通り、本発明のコラゲナーゼ阻害剤に含まれる米麹(白麹菌)や米麹(黒麹菌)の抽出物は、コラゲナーゼ阻害作用を有し、かつ、各種化粧料基材及び化粧料添加物に対する安定性も高いため、化粧料組成物に好適に使用することができる。
また、本発明の化粧料組成物には、本発明の効果を損なわない範囲で通常化粧料や皮膚外用医薬で使用される任意の成分を添加することができる。かかる任意成分の具体例としては、増粘・ゲル化剤、酸化防止剤、紫外線吸収剤、色素剤、金属封鎖剤、防腐剤、pH調整剤、香料、ミツロウ等が挙げられる。これら任意成分の配合割合は、その目的に応じて適宜選択して決定することができる。また、本発明の効果を損なわない範囲で、他の薬効植物抽出物を添加してもよい。
一方、日常的に飲食することで、本発明のコラゲナーゼ阻害剤を摂取したい場合には、該食品、飲料に含有させて機能性食品としてもよい。
ここでいう「機能性食品」とは、一般食品に加えて、健康食品、栄養補助食品、栄養機能食品等、健康の維持の目的で摂取する食品および/又は飲料を意味している。なお、機能性食品として製品化する場合には、食品に用いられる様々な添加剤、具体的には、着色料、保存料、増粘安定剤、酸化防止剤漂白剤、防菌防黴剤、酸味料、調味料、乳化剤、強化剤、製造用剤、香料等を添加していてもよい。
本発明のコラゲナーゼ阻害剤は、このような食品、飲料に添加することにより、簡易に経口摂取することができる。
白麹菌(Aspergillus kawachii)を繁殖させた米麹は、株式会社ビオックから入手した白麹K型菌を用いて製造した。
<米麹(黒麹菌)>
黒麹菌(Aspergillus awamori)を繁殖させた米麹は、株式会社ビオックから入手した泡盛用黒麹種菌を用いて製造した。
〔試薬の調製〕
基質溶液:
Pzペプチド(BACHEM社製)3.9mgを、0.1Mトリス塩酸緩衝液(pH7.1、含20mM塩化カルシウム)10mLに溶解して使用した(0.5mMに相当)。
酵素溶液:コラゲナーゼ(TYPE IV、SIGMA-ALDRICH社製)5mgを緩衝液1mLに溶解させ20μLずつ分注し、−80℃で保管する。使用時に緩衝液で50倍に希釈して反応に用いた。
これらの試料溶液50μL、コラゲナーゼ溶液50μL及び基質溶液400μLを混合し、37℃で30分間反応させた。次いで、25mMクエン酸溶液1mLで反応を停止し、酢酸エチル5mLで抽出した。遠心分離(1600g、10分間)後、酢酸エチルを対照として、酢酸エチル層の波長320nmにおける吸光度を測定した。対照には、試料溶液の代わりに各抽出溶媒を用い、また、それぞれのブランクとして、酵素溶液の代わりに超純水を加えて同様の操作を行った。これらの値からコラゲナーゼ阻害率を次式により算出した。
コラゲナーゼ阻害率(%)=〔1−(A−B)/(C−D)〕×100
但し、A:試料溶液の320nmにおける吸光度、
B:試料溶液ブランクの320nmにおける吸光度、
C:対照溶液の320nmにおける吸光度、
D:対照溶液ブランクの320nmにおける吸光度である。
(実験例1)
抽出溶媒としての水(50mL)に、米麹(白麹菌)(5g)を浸漬し、室温で3時間静置した。遠心分離後、上澄みを濾過して、実験例1の抽出物を得た。
抽出溶媒としての水(30mL)に、麹(白麹菌)(10g)を浸漬し、55℃で5時間静置した。遠心分離後、上澄みを濾過して、実験例2の抽出物を得た。
実験例1,2の抽出物について、上述の方法でコラゲナーゼの阻害率を評価した。結果を図1に示す。
(実験例3)
米麹(白麹菌)5gを、50重量%BG/水50mLに浸漬し、3時間攪拌した。遠心分離後、上澄みをろ過して得られた抽出液を実験例3の抽出物とした。
抽出溶媒としての50重量%BG/水(30mL)に、麹(白麹菌)(10g)を浸漬し、55℃で5時間静置した。遠心分離後、上澄みを濾過して、実験例4の抽出物を得た。
実験例3,4の抽出物について、上述の方法でコラゲナーゼの阻害率を評価した。結果を図2に示す。
(実験例5)
抽出溶媒としての水(50mL)に、米麹(黒麹菌)(5g)を浸漬し、室温で3時間静置した。遠心分離後、上澄みを濾過して、実験例5の抽出物を得た。
米麹(黒麹菌)5gを、50重量%BG/水50mLに浸漬し、3時間攪拌した。遠心分離後、上澄みをろ過して得られた抽出液を実験例6の抽出物とした。
抽出溶媒としての50重量%BG/水(30mL)に、麹(黒麹菌)(10g)を浸漬し、55℃で5時間静置した。遠心分離後、上澄みを濾過して、実験例7の抽出物を得た。
実験例5〜7の抽出物について、上述の方法でコラゲナーゼの阻害率を評価した。結果を図3に示す。
上記実験例1,2の抽出物を、沸騰水中で、1分加熱して、加熱前後の実験例1,2の抽出物によるコラゲナーゼ阻害率を比較した。結果を図4に示す。
本実験は、米麹(白麹菌)の抽出物にみられるコラゲナーゼ阻害活性に、米麹抽出物中に存在する菌体あるいは白麹菌が生産した酵素群が関与するかを調べるために行ったものである。加熱により菌体および酵素を失活させた抽出物においてもコラゲナーゼ阻害活性が認められたため、菌体および酵素は関与しないことが分かった。
参考例として、上記実験例4の米麹(白麹菌)抽出物を使用して、エラスターゼ阻害作用の評価を行った。
エラスターゼ活性阻害作用は、ブタ膵臓由来エラスターゼ(SIGMA-ALDRICH社製)および合成基質スクシニル-L-アラニル-L-アラニル-L-アラニン-p-ニトロアニリド)(SIGMA-ALDRICH社製)を用いて評価した。基質をジメチルスルホキシドで0.05Mに調整し、使用時に、0.2M Tris-HCl緩衝液(pH8.0)で10倍希釈した5mM溶液を使用した。酵素は0.2M Tris-HCl緩衝液(pH8.0)で10μg/mLに調製した。基質50μLを酵素100μLおよび試料50μLとともに37℃で8分間反応させ、その後、吸光度405nmで測定した(A)。さらに酵素を添加せずに緩衝液を加えて同様の操作と測定を行った(B)。同様の測定を、試料を添加せずに抽出溶媒を加えて実施した(C、D)。上記方法で吸光度を求め、次式により、阻害率を算出した。
エラスターゼ活性阻害率(%)=[1−(A−B)/(C−D)] × 100
但し、A:試料溶液の405nmにおける吸光度、
B:試料溶液ブランクの405nmにおける吸光度、
C:対照溶液の405nmにおける吸光度、
D:対照溶液ブランクの405nmにおける吸光度である。
実験例4の抽出物について、上述の方法でエラスターゼ阻害率を評価したところ、エラスターゼ阻害率は14.5%であった。
Claims (6)
- 白麹菌(Aspergillus kawachii)及び黒麹菌(Aspergillus awamori)から選択される少なくとも1種を繁殖させた米麹の溶媒抽出物を含有することを特徴とするコラゲナーゼ阻害剤。
- 前記米麹が、白麹菌(Aspergillus kawachii)を繁殖させた米麹である請求項1に記載のコラゲナーゼ阻害剤。
- 前記溶媒抽出物が、前記米麹と、水、エタノール及び1,3−ブチレングリコールから選択される1種以上を主溶媒として含有する抽出溶媒とを接触させ、前記米麹に含有される成分を抽出して得られる抽出物である請求項1または2に記載のコラゲナーゼ阻害剤。
- 前記抽出溶媒が、水及び1,3−ブチレングリコールから選択される1種以上である請求項3に記載のコラゲナーゼ阻害剤。
- 請求項1から4のいずれかに記載のコラゲナーゼ阻害剤を配合してなることを特徴とする化粧料組成物。
- 請求項1から4のいずれかに記載のコラゲナーゼ阻害剤を配合してなることを特徴とする機能性食品。
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