JP2015074647A - ステロール調節因子結合タンパク質1c遺伝子発現抑制剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】本発明に係るステロール調節因子結合タンパク質1c遺伝子発現抑制剤は、サラシア・レティキュラータ、サラシア・オブロンガ、およびサラシア・プリノイデスから選択されるサラシア属植物の抽出物を有効成分として含むことを特徴とする。
【選択図】なし
Description
インド最南部東側のタミールナダで自生しているサラシア・オブロンガの根部を平成22年に採取し、自然乾燥させておいた。当該乾燥根部を粗切りした後、7質量倍の50v/v%エタノール水溶液に時々振り混ぜつつ常温で5時間浸した。その後、濾過により固形分を除去した。得られた固形分に対して、同様の抽出操作をさらに2回繰り返した。各抽出液を混ぜ合わせ、45℃以下で減圧濃縮し、サラシア・オブロンガの根部抽出物を得た。使用したサラシア・オブロンガ乾燥根部に対する抽出収率は20質量%であった。抽出物中のマンギフェリン含有量をHPLC定量法(Huang et al.,Diabetes obesity & Metabolism,2008,10,pp.574-585)に準じて測定すると、2.1質量%であった。
(1) 血漿中脂質などの測定
体重210〜230gの雄性Sprague−Dawleyラットを、室温21±1℃、湿度55±5%、12時間毎に明暗を切り替えた飼育室で、固形飼料と水を自由に摂取させつつ1週間予備飼育した。次いで、24匹のラットを任意に6匹ずつ4グループに分けた。第1群(水対照群)には水のみを与えた。第2群(果糖対照群)には、水の代わりに10%果糖水を与えた。第3群(果糖+本発明抽出物5mg/kg投与群)には、果糖水に加えて上記実施例1の本発明抽出物5mg/kgを経口投与した。第4群(果糖+本発明抽出物20mg/kg投与群)には、果糖水に加えて上記実施例1の本発明抽出物20mg/kgを経口投与した。本発明抽出物は、5質量%アラビアゴム水溶液に懸濁し、10週間にわたり1日1回強制的に経口投与した。第1群と第2群には、5質量%アラビアゴム水溶液のみ経口投与した。ストレスを避け、より精密に果糖の摂取を監視するため、1つのゲージで飼育するラットは2匹ずつとした。固形飼料と水または果糖水は、自由に摂取させた。飼育中、水または果糖水と飼料の摂取量を毎日測定した。果糖の摂取量がほぼ一定になるように、前3日間における果糖対照群の果糖摂取量データをもとに、3日間に一度、第3群と第4群に与える果糖水の濃度を微調整した。70日目に絶食させたが、水(第1群)と果糖水(第2〜4群)は一晩自由に摂取させた。
総コレステロール濃度 − Kexin Institute of Biotechnology,Shanghai,China製キット
中性脂肪濃度 − Wako,Osaka,Japan製「Triglycerid-E kit」
遊離脂肪酸(NEFA)濃度 − Wako,Osaka,Japan製「NEFA-C kit」
グルコース濃度 − Kexin Institute of Biotechnology,Shanghai,China製キット
インスリン濃度 − Morinaga Biochemical Industries,Tokyo,Japan製キット
上記で得られた肝切片を10%ホルマリン液で固定し、パラフィンに包埋し、3μm片にカットした。ヘマトキシリン・エオジン染色し、正立型研究用システム顕微鏡(オリンパス社製,BX−51)を用いて肝臓組織の形状を観察した。肝組織の拡大写真を図4に示す。
RNA抽出用試薬(Takara社製,TRIzol(登録商標))を使い、肝臓から総RNAを抽出した。得られた総RNAから、M−MLV RTase cDNAシステムキットを用いてcDNAを合成した。得られたcDNA、CFX96リアルタイムPCR検出システム(Bio−rad Laboratories社製,Hercules,CA,USA)およびリアルタイムPCR専用試薬(タカラバイオ社製,SYBR(登録商標)PremixEX TaqTMII)を用い、リアルタイムPCRを行った。使用したプライマーの配列を表1に示す。なお、各サンプルの遺伝子発現は2回行い、対照のβ−actinに対して標準化した。結果を図6と図7に示す。図6の(A)はSREBP−1c、(B)はFAS、(C)はACC−1、(D)はSCD−1の結果を示す。また、図7の(A)はChREBP、(B)はLPK、(C)はPPAR−γ、PPAR−α、CPT−1a、ACOおよびCD36の結果を示す。
本発明抽出物によるSREBP−1遺伝子の発現抑制作用を確認するために、ウェスタンブロットでタンパク質の発現を検討した。核タンパク質を、NE-PER nuclear and cytoplasmic extraction reagent kit(Pierce Biotechnology,Roskford,IL,USA)を用いて肝臓からそれぞれ抽出した。タンパク質濃度を、ウシ血清アルブミンを標準として用いて、Bradford法(Bio-rad Laboratories社製,Hercules,CA,USA)で求めた。また、核タンパク質(30μg)につき、10%ゲル上でSDS−PAGE分析を行った。得られたゲル上のタンパク質をポリフッ化ビニリデン膜(Amersham,Buckinghamshire,UK)に電子移動させた。SREBP−1c(dilution 1:200,Santa Cruz Biotechnology,Santa Cruz,CA,USA)、ChREBP(dilution 1:1000,Novus Biologicals,Littleton,CO,USA)、SCD−1(dilution 1:200,Santa Cruz Biotechnology,Santa Cruz,CA,USA)は、ヤギポリクローナル抗体とウサギポリクローナル抗体を用いてそれぞれ検出した。
Claims (5)
- サラシア・レティキュラータ、サラシア・オブロンガ、およびサラシア・プリノイデスから選択されるサラシア属植物の抽出物を有効成分として含むことを特徴とするステロール調節因子結合タンパク質1c遺伝子発現抑制剤。
- サラシア属植物の根部および/または幹部の抽出物を有効成分として含む請求項1に記載のステロール調節因子結合タンパク質1c遺伝子発現抑制剤。
- サラシア属植物の根部の抽出物を有効成分として含む請求項1に記載のステロール調節因子結合タンパク質1c遺伝子発現抑制剤。
- 水系溶媒による抽出物を有効成分として含む請求項1〜3のいずれかに記載のステロール調節因子結合タンパク質1c遺伝子発現抑制剤。
- 水系溶媒が、水、C1-4アルコール、またはこれらの混合溶媒である請求項4に記載のステロール調節因子結合タンパク質1c遺伝子発現抑制剤。
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2013
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