JP2013534408A - ヒト抗−ミューラー管ホルモンii型レセプターを指向する新規な変異ヒト化12g4抗体及びそのフラグメント - Google Patents
ヒト抗−ミューラー管ホルモンii型レセプターを指向する新規な変異ヒト化12g4抗体及びそのフラグメント Download PDFInfo
- Publication number
- JP2013534408A JP2013534408A JP2013509591A JP2013509591A JP2013534408A JP 2013534408 A JP2013534408 A JP 2013534408A JP 2013509591 A JP2013509591 A JP 2013509591A JP 2013509591 A JP2013509591 A JP 2013509591A JP 2013534408 A JP2013534408 A JP 2013534408A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- amino acid
- antibody
- light chain
- represented
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000012634 fragment Substances 0.000 title claims abstract description 29
- 101000693801 Homo sapiens Anti-Muellerian hormone type-2 receptor Proteins 0.000 title claims description 20
- 102100025511 Anti-Muellerian hormone type-2 receptor Human genes 0.000 claims abstract description 44
- 101710089052 Anti-Muellerian hormone type-2 receptor Proteins 0.000 claims abstract description 43
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 100
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 73
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 55
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 47
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 47
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 41
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 38
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 28
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 27
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 25
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 25
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 22
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 20
- 102220584249 Cellular tumor antigen p53_A79T_mutation Human genes 0.000 claims description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 11
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 9
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 claims description 9
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims description 8
- 102220591631 7-alpha-hydroxycholest-4-en-3-one 12-alpha-hydroxylase_S88P_mutation Human genes 0.000 claims description 6
- 102220600740 Calmodulin-binding transcription activator 1_Q1E_mutation Human genes 0.000 claims description 6
- 102220584232 Cellular tumor antigen p53_A76T_mutation Human genes 0.000 claims description 6
- 102220471833 Eukaryotic translation initiation factor 4E_I70N_mutation Human genes 0.000 claims description 6
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 claims description 6
- 102220640160 Phosphomannomutase 2_V67M_mutation Human genes 0.000 claims description 6
- 102220510219 Poly(A)-specific ribonuclease PNLDC1_S31G_mutation Human genes 0.000 claims description 6
- 102220563339 Tyrosine-protein kinase BTK_K12R_mutation Human genes 0.000 claims description 6
- 102220563342 Tyrosine-protein kinase BTK_K19E_mutation Human genes 0.000 claims description 6
- VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N azanide;cyclobutane-1,1-dicarboxylic acid;platinum(2+) Chemical compound [NH2-].[NH2-].[Pt+2].OC(=O)C1(C(O)=O)CCC1 VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 102220365875 c.229T>C Human genes 0.000 claims description 6
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 claims description 6
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 claims description 6
- 230000007170 pathology Effects 0.000 claims description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 6
- 102200152572 rs1060503493 Human genes 0.000 claims description 6
- 102200077973 rs113068438 Human genes 0.000 claims description 6
- 102200012153 rs11466018 Human genes 0.000 claims description 6
- 102220323543 rs1328062930 Human genes 0.000 claims description 6
- 102220014330 rs147406419 Human genes 0.000 claims description 6
- 102200069946 rs1554200992 Human genes 0.000 claims description 6
- 102200098283 rs1770043 Human genes 0.000 claims description 6
- 102220211090 rs193922325 Human genes 0.000 claims description 6
- 102200133963 rs35927125 Human genes 0.000 claims description 6
- 102220028560 rs370169077 Human genes 0.000 claims description 6
- 102220132570 rs370430693 Human genes 0.000 claims description 6
- 102220044848 rs377730553 Human genes 0.000 claims description 6
- 102200027982 rs4934 Human genes 0.000 claims description 6
- 102220054450 rs56200894 Human genes 0.000 claims description 6
- 102220041275 rs587778692 Human genes 0.000 claims description 6
- 102200038304 rs61758405 Human genes 0.000 claims description 6
- 102200011361 rs727502767 Human genes 0.000 claims description 6
- 102220095963 rs758112386 Human genes 0.000 claims description 6
- 102200067146 rs80357017 Human genes 0.000 claims description 6
- 102220105065 rs879254066 Human genes 0.000 claims description 6
- 102220123107 rs886044847 Human genes 0.000 claims description 6
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 claims description 6
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 claims description 5
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 5
- 229960001756 oxaliplatin Drugs 0.000 claims description 5
- DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L oxaliplatin Chemical compound O1C(=O)C(=O)O[Pt]11N[C@@H]2CCCC[C@H]2N1 DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L 0.000 claims description 5
- 150000003057 platinum Chemical class 0.000 claims description 5
- 102220244906 rs1554146456 Human genes 0.000 claims description 5
- 102200075616 rs371848318 Human genes 0.000 claims description 5
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 4
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 4
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 4
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 3
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 claims description 3
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 3
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 claims description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 34
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 66
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 61
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 53
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 42
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 40
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 28
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 26
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 23
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 23
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 23
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 20
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 20
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 17
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 17
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 17
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 16
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 15
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 15
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 14
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 14
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 14
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 14
- 102100024630 Asc-type amino acid transporter 1 Human genes 0.000 description 13
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 12
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 10
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 10
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 10
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 10
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 9
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 9
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 9
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 9
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 9
- IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N (S)-colchicine Chemical compound C1([C@@H](NC(C)=O)CC2)=CC(=O)C(OC)=CC=C1C1=C2C=C(OC)C(OC)=C1OC IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N 0.000 description 8
- 108091006242 SLC7A10 Proteins 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 8
- 238000002169 hydrotherapy Methods 0.000 description 8
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 8
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 8
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 7
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 7
- 241000159846 Centrosema pascuorum Species 0.000 description 6
- SILSDTWXNBZOGF-KUZBFYBWSA-N chembl111058 Chemical compound CCSC(C)CC1CC(O)=C(\C(CC)=N\OC\C=C\Cl)C(=O)C1 SILSDTWXNBZOGF-KUZBFYBWSA-N 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 6
- 238000001325 log-rank test Methods 0.000 description 6
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 6
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 6
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 6
- 238000011806 swiss nude mouse Methods 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 5
- 101150081875 Slc7a10 gene Proteins 0.000 description 5
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 5
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 5
- BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N geneticin Natural products O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 101150058440 Asc-1 gene Proteins 0.000 description 4
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 4
- 101100110003 Danio rerio pycard gene Proteins 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 4
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 4
- 208000018142 Leiomyosarcoma Diseases 0.000 description 4
- 208000034176 Neoplasms, Germ Cell and Embryonal Diseases 0.000 description 4
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 4
- 101100247325 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) RAS2 gene Proteins 0.000 description 4
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 229960001338 colchicine Drugs 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 201000000330 endometrial stromal sarcoma Diseases 0.000 description 4
- 208000029179 endometrioid stromal sarcoma Diseases 0.000 description 4
- 201000003115 germ cell cancer Diseases 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 4
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 4
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 4
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 208000025421 tumor of uterus Diseases 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 3
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 3
- 238000012313 Kruskal-Wallis test Methods 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 3
- 102100038803 Somatotropin Human genes 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 3
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 3
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 3
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 3
- 230000035407 negative regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 3
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 3
- YUXKOWPNKJSTPQ-AXWWPMSFSA-N (2s,3r)-2-amino-3-hydroxybutanoic acid;(2s)-2-amino-3-hydroxypropanoic acid Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O.C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O YUXKOWPNKJSTPQ-AXWWPMSFSA-N 0.000 description 2
- KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 0.000 description 2
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 2
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000010451 Folate receptor alpha Human genes 0.000 description 2
- 108050001931 Folate receptor alpha Proteins 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 2
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 2
- 210000004436 artificial bacterial chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 210000001106 artificial yeast chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical class N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002503 granulosa cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 210000004197 pelvis Anatomy 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 2
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 2
- 210000000717 sertoli cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 16-Epiaffinine Natural products C1C(C2=CC=CC=C2N2)=C2C(=O)CC2C(=CC)CN(C)C1C2CO PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMUNIMVZCACZBB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyethylazanium;chloride Chemical compound Cl.NCCO PMUNIMVZCACZBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AVTRLVGCVSFGCO-UHFFFAOYSA-N 6-(diethylamino)hexyl 3,4,5-trimethoxybenzoate Chemical compound CCN(CC)CCCCCCOC(=O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 AVTRLVGCVSFGCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 108010005853 Anti-Mullerian Hormone Proteins 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102100021935 C-C motif chemokine 26 Human genes 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 102100024746 Dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101100001532 Homo sapiens AMHR2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 1
- 101000897493 Homo sapiens C-C motif chemokine 26 Proteins 0.000 description 1
- 101000899111 Homo sapiens Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 1
- 101000998953 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001011645 Homo sapiens Muellerian-inhibiting factor Proteins 0.000 description 1
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 1
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 108010025815 Kanamycin Kinase Proteins 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102100030173 Muellerian-inhibiting factor Human genes 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001045988 Neogene Species 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 208000007571 Ovarian Epithelial Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 244000126010 Pithecellobium dulce Species 0.000 description 1
- 235000002194 Pithecellobium dulce Nutrition 0.000 description 1
- 235000007891 Pithecellobium lobatum Nutrition 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 102000009516 Protein Serine-Threonine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108010009341 Protein Serine-Threonine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000043168 TGF-beta family Human genes 0.000 description 1
- 108091085018 TGF-beta family Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 229950005186 abagovomab Drugs 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 239000000868 anti-mullerian hormone Substances 0.000 description 1
- 230000001188 anti-phage Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 230000000712 assembly Effects 0.000 description 1
- 238000000429 assembly Methods 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 229940120638 avastin Drugs 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 102000006635 beta-lactamase Human genes 0.000 description 1
- 101150049515 bla gene Proteins 0.000 description 1
- 229930189065 blasticidin Natural products 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000012830 cancer therapeutic Substances 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 229960005395 cetuximab Drugs 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- KYKAJFCTULSVSH-UHFFFAOYSA-N chloro(fluoro)methane Chemical compound F[C]Cl KYKAJFCTULSVSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 102000006834 complement receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010047295 complement receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004163 cytometry Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 108020001096 dihydrofolate reductase Proteins 0.000 description 1
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N dihydromaleimide Natural products O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 230000006334 disulfide bridging Effects 0.000 description 1
- 208000037828 epithelial carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 229950009929 farletuzumab Drugs 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical class N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 238000011577 humanized mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 238000011221 initial treatment Methods 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-YPZZEJLDSA-N iodane Chemical compound [125IH] XMBWDFGMSWQBCA-YPZZEJLDSA-N 0.000 description 1
- 229940044173 iodine-125 Drugs 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 210000002332 leydig cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000243 mutagenic effect Toxicity 0.000 description 1
- 101150091879 neo gene Proteins 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 238000000424 optical density measurement Methods 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 150000002895 organic esters Chemical class 0.000 description 1
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 210000004994 reproductive system Anatomy 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 239000012146 running buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000013391 scatchard analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 1
- -1 succinimide ester Chemical class 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
- A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
- A61K33/243—Platinum; Compounds thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/28—Compounds containing heavy metals
- A61K31/282—Platinum compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2869—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against hormone receptors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57449—Specifically defined cancers of ovaries
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/567—Framework region [FR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/72—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants for hormones
Abstract
【選択図】なし
Description
■ 表面上皮(種々のサブタイプを有する上皮腫瘍)(これは卵巣ガンの85〜90%を占める)
■ 性索/間質(顆粒膜腫瘍(卵巣ガン全体の3%))(卵巣腫瘍の約10%を占める)
■ 生殖細胞(卵巣ガンの5%を占める)。
これは、第1ステージの間は一般に無症候性であり、よってそのあだ名は「サイレントキラー」である(La Marca A., Volpe A. 抗-Mullerian hormone and ovarian cancer. Human Reproduction Update, Vol.13, No.3 pp. 265?273, 2007)。
ステージI:卵巣に限定した腫瘍(5年生存率:90〜70%)、
ステージII:1又は2の卵巣に腫瘍、骨盤に拡大(5年生存率:70〜40%)、
ステージIII:1又は2の卵巣に腫瘍、骨盤外に拡大(5年生存率:20%)、
ステージIV:腹膜転移を除く遠位転移(5年生存率:<10%)、
(Fauci, Braunwaldら,Principles of internal medicine. Harrison's 17th edition / National Cancer Institute cancer.gov / CNGOF (French National Colleges of Gynaecologists and Obstetricians)。
最近、セテュキマブ(cetuximab)(これは表皮成長因子レセプター(EGFR)を指向する)のようなモノクローナル抗体もまた開発された(Ozols R. F.ら,Focus on epithelial ovarian cancer, Cancer Cell. 2004, Jan; 5(1): 19-24)。
CA-125を指向するアバゴボマブ(abagovomab)、血管内皮増殖因子(VEGF-A)を指向するアバスチン(Avastin)、又は葉酸レセプターα(FRA)を指向するファーレテュツマブ(farletuzumab)のような他のモノクローナル抗体が現在、第III相である。
これは、成人では、セルトリ細胞及びライディッヒ細胞(精巣)並びに顆粒膜細胞(卵巣)で発現される。
これは、濾胞形成の調節における成人卵巣の活性において役割を演じる。
これは、ヒト生殖系の発生と関係するミューラー管の退化に関与する。ミューラー管は、男性では萎縮し、前立腺小胞(prostatic vesicle)及び精巣垂を形成するに過ぎないが、女性では存続し、ファローピウス管、子宮及び膣のほとんどを生じる。
このレセプターは、しばしば、ヒト卵巣の腫瘍性上皮細胞に発現する。
この国際出願は、該抗体がキメラ又はヒト化であり得るとも述べているが、それ自体を記載してはいない。
しかし、キメラ抗体もまた免疫反応を誘引する。ヒト化抗体は、僅かに免疫原性であるが、その抗原結合親和性は減少することがあり、結果として活性が弱くなるという欠点を有する。
本発明の別の1つの目的はまた、AMHR-IIレセプターの前記特異的抗体を作製する手段を提供することである。
本発明は更に、これら抗体の卵巣ガン治療薬としての使用に関する。
a)− アミノ酸配列が配列番号2(リーダー無し)若しくは配列番号4(リーダー有り)で表される可変領域と、
− アミノ酸配列が配列番号6若しくは配列番号6と少なくとも80%の相同性を有する配列で表される定常領域と
を含んでなるか又は該両領域からなる軽鎖
b)− アミノ酸配列が配列番号8(リーダー無し)若しくは配列番号10(リーダー有り)で表される可変領域と、
− アミノ酸配列が配列番号12若しくは配列番号12と少なくとも80%の相同性を有する配列で表される定常領域と
を含んでなるか又は該両領域からなる重鎖
を含んでなるか又は該両鎖からなり、該ヒト化12G4モノクローナル抗体は変異しており、軽鎖及び/又は重鎖に少なくとも1つの変異を含み、かつヒト抗-ミューラー管ホルモンII型レセプター(AMHRII)に対して、
− アミノ酸配列が配列番号14(リーダー無し)で表される可変領域と、
− アミノ酸配列が配列番号6で表される定常領域
b) − アミノ酸配列が配列番号18(リーダー無し)又は配列番号10(リーダー有り)で表される可変領域と、
− アミノ酸配列が配列番号12で表される定常領域と
からなる重鎖
を含んでなるか又は該両鎖からなるキメラ12G4モノクローナル抗体の該レセプターに対するものと少なくとも等しいKD、好ましくは10-7Mを下回る、特に10-8Mを下回る、特には10-9M〜10-11Mの範囲のKDを有する。
本説明を通して、配列番号の後の括弧中の表現「リーダー有り」は、当該配列がシグナルペプチド(すなわち、当該タンパク質が分泌されることを規定するペプチド)又は該シグナルペプチドをコードする配列を含んでなることを示す。
反対に、括弧中の表現「リーダー無し」は、当該配列がシグナルペプチドも該シグナルペプチドをコードする配列も含まないことを示す。
− 対応するキメラ12G4抗体のものと少なくとも類似するか又はそれより小さくさえあるAMHR-IIレセプターに対するKD(実施例1に従って決定)を有し、したがって対応するキメラ12G4抗体のものと、又は従来技術の抗体若しくは抗体フラグメントに関して等しいか又はそれより大きい親和性を有する
− AMHR-IIレセプターに対する特異性を有する
− 免疫応答を誘引しないか、又はマウス抗体より小さな反応を誘引する
という本発明者らの知見に基づく。
本説明を通して、用語「12G4」及び用語「LFB112」(この用語も使用する)は、同じものを指称し、同一抗体を表す。
前記抗体の親和性は、当業者に周知のBIAcoreアッセイにより決定することができる。
本発明において、用語「抗体」とは、免疫グロブリン(獲得免疫応答に関与する四本鎖からなる多量体タンパク質)をいう。
免疫グロブリンは当業者に周知であり、各々が重鎖及び軽鎖からなる2つの二量体のアセンブリからなる。この多量体の複合体は、2つのシステイン間のジスルフィド橋架けによる軽鎖及び重鎖の結合によって組み立てられ、2つの重鎖自体もまた2つのジスルフィド橋架けにより互いに結合している。
− Yの基部は、補体及びFcレセプターにより認識される定常領域Fcに相当し、
− Yの腕の端部は、それぞれ、軽鎖可変領域と重鎖可変領域とのアセンブリに相当する。
より正確には、各軽鎖は、可変領域(VL)及び定常領域(CL)からなる。各重鎖は可変領域(VH)と、3つの定常ドメインCH1、CH2及びCH3からなる定常領域とからなる。ドメインCH2及びCH3はドメインFcを形成する。
抗体の構造を図1に模式的に示す。
抗体の軽鎖又は重鎖可変領域の数珠構造を図2に示す。
これらはモノクローナル抗体である。すなわち、これらは、抗体の混合物に相当し、したがって同一タンパク質中の幾つかの抗原決定基を認識することができるポリクローナル抗体とは対照的に、AMHR-IIレセプター中の1つの抗原決定基を唯一認識する。
「キメラモノクローナル抗体」は、本発明においては、構成する各軽鎖及び/又は各重鎖の配列が、少なくとも2つの異なる動物(又はヒト)に由来するハイブリッド配列を含んでなるか又は該配列からなる、単離された抗体を意味する。
特に、キメラ12G4抗体はマウス/ヒトハイブリッドであり、これは、軽鎖及び重鎖の配列の或る領域がマウス12G4免疫グロブリンの配列に由来し、前記重鎖及び軽鎖の残りの配列が1つ(場合によっては幾つか)のヒト免疫グロブリンの配列に由来することを示す。
図18は、キメラ12G4抗体産生用発現ベクターのマップを示す。
図19は、ヒト化12G4抗体産生用発現ベクターのマップを示す。
以下では、表現「キメラ12G4抗体」及び「非変異キメラ12G4抗体」は同じ抗体を指称する。
「変異ヒト化12G4モノクローナル抗体」は、本発明においては、軽鎖可変領域及び/又は軽鎖定常領域及び/又は重鎖可変領域又は重鎖定常領域に少なくとも1つの変異がなされているヒト化12G4モノクローナル抗体を意味する。
− 上記のような変異ヒト化抗体、特にヒト/マウス抗体の前駆体、及び
− 上記のような変異ヒト化抗体、特にヒト/マウス。
1つの有利な実施形態において、本発明は、軽鎖可変領域の少なくとも1つのCDR中に少なくとも1つの変異を含んでなり、前記レセプターに対して前記キメラ12G4モノクローナル抗体のものと少なくとも等しい親和性を有する、上記のような変異ヒト化12G4モノクローナル抗体に関する。
この実施形態においては、単一の変異が存在する場合、それはCDR1又はCDR2又はCDR3に位置する。
1より多い変異が存在する場合、第2及びその他の変異は、抗体のCDR1及び/又はCDR2及び/又はCDR3及び/又は他の任意の領域に位置することができる。
本発明において、本発明者らは、少なくとも1つの変異がヒト化12G4抗体のCDR1又はCDR2又はCDR3中及び軽鎖可変領域(特にFR)中になされたとき、該少なくとも1つの変異は、アミノ酸のヒドロパシー指標が必ずしも適合しないにもかかわらず、該ヒト化抗体の活性の保持を可能にするだけでなく、非変異キメラ抗体のものと少なくとも等しい親和性を有するが免疫応答を引き起こさないか又は起こしても重大でない変異ヒト化抗体の取得をも可能にすることを見出した。
本発明において、本発明者らは、少なくとも1つの変異がヒト化12G4抗体のCDR1中及び軽鎖可変領域(特にFR)中になされたとき、該少なくとも1つの変異はアミノ酸のヒドロパシー指標が必ずしも適合しないにもかかわらず、該ヒト化抗体の活性の保持を可能にするだけでなく、非変異キメラ抗体のものと少なくとも等しい親和性を有するが免疫応答を引き起こさない変異ヒト化抗体の取得をも可能にすることを見出した。
本発明において、本発明者らは、少なくとも1つの変異がヒト化12G4抗体のCDR2中及び軽鎖可変領域(特にFR)中になされたとき、該少なくとも1つの変異は、アミノ酸のヒドロパシー指標が必ずしも適合しないにもかかわらず、該ヒト化抗体の活性の保持を可能にするだけでなく、非変異キメラ抗体のものと少なくとも等しい親和性を有するが免疫応答を引き起こさない変異ヒト化抗体の取得をも可能にすることを見出した。
本発明において、本発明者らは、少なくとも1つの変異がヒト化12G4抗体のCDR3中及び軽鎖可変領域(特にFR)中になされたとき、該少なくとも1つの変異は、アミノ酸のヒドロパシー指標が必ずしも適合しないにもかかわらず、該ヒト化抗体の活性の保持を可能にするだけでなく、非変異キメラ抗体のものと少なくとも等しい親和性を有するが免疫応答を引き起こさない変異ヒト化抗体の取得をも可能にすることを見出した。
ADCC(抗体-依存細胞性細胞毒性)は、抗体が抗原を認識すると、抗体のFc部分が、キラー細胞のレセプターFcγに認識される(キラー細胞は、結合後、該抗原を有する細胞を殺傷し得る)機構である。
本発明において、本発明者らは、少なくとも1つの変異がヒト化12G4抗体(この抗体の親和性は、対応するキメラ又はマウス抗体に比して格段に減少している(実施例2))の1以上のCDR中でなされたとき、該少なくとも1つの変異は、CDRが抗原認識に特に重要な領域に相当するにもかかわらず、該ヒト化抗体の活性の保持を可能にするだけでなく、非変異キメラ抗体のものと少なくとも等しい親和性を有し、免疫応答を引き起こさないか又はより小さな反応を引き起こす変異ヒト化抗体の取得をも可能にすることを見出した。
2つの鎖は、アミノ酸116〜130を含んでなるリンカーによって結合している。
1つの有利な実施形態において、本発明は、軽鎖可変領域の少なくとも1つのCDR中の前記少なくとも1つの変異が、アミノ酸配列が配列番号2で表される軽鎖可変領域のアミノ酸179〜アミノ酸184を含有するCDRに含まれる領域に位置する、上記のような変異ヒト化12G4モノクローナル抗体に関する。
アミノ酸179〜アミノ酸184を含有する領域は、完全なCDRに相当しない。
この抗体は、当然のことながら、他のCDR中に他の変異を有することができる。
本発明において、本発明者らは、少なくとも1つの変異がヒト化12G4抗体のCDRのアミノ酸179〜184を含む領域中でなされたとき、該少なくとも1つの変異が、該ヒト化抗体の活性の保持を可能にするだけでなく、非変異キメラ抗体のものと少なくとも等しい親和性を有し、免疫応答を引き起こさない変異ヒト化抗体の取得をも可能にすることを見出した。
本発明で使用する表記法は、当業者に知られた一文字表記に相当する。
例えば、表記S179Pは、179位のアミノ酸セリンがプロリンで置換されていることを意味する。
例として、図17は、本発明による変異ヒト化抗体の、AMHR-IIレセプターに対する結合親和性を示す。6B_78抗体は、軽鎖可変領域のCDR中に位置する唯一の変異、グルタミン酸がリジンで置換された変異(E184K)(すなわち、酸性アミノ酸の塩基性アミノ酸での置換)を有し、結果として(反対電荷であるので)全く異なる電荷を有するが、依然として活性を示し、特に、非変異ヒト化12G4抗体よりかなり良好で、非変異キメラ12G4抗体のものと等しい親和性を示し、免疫応答を引き起こさない。
本発明において、本発明者らは、少なくとも1つの変異がヒト化12G4抗体のCDRのアミノ酸179〜184を含む領域中及び軽鎖可変領域中、特にFR中になされたとき、該少なくとも1つの変異は、アミノ酸のヒドロパシー指標が必ずしも適合しないにもかかわらず、該ヒト化抗体の活性の保持を可能にするだけでなく、非変異キメラ抗体のものと少なくとも等しい親和性を有し、免疫応答を引き起こさない変異ヒト化抗体の取得をも可能にすることを見出した。
本発明において、本発明者らは、少なくとも1つの変異がヒト化12G4抗体のCDRのアミノ酸179〜184を含む領域中、軽鎖可変領域中、特にFR中及び重鎖中になされたとき、該少なくとも1つの変異は、アミノ酸のヒドロパシー指標が必ずしも適合しないにもかかわらず、該ヒト化抗体の活性の保持を可能にするだけでなく、非変異キメラ抗体のものと少なくとも等しい親和性を有し、免疫応答を引き起こさない変異ヒト化抗体の取得をも可能にすることを見出した。
例として、図17並びに表I及びVII(ELISAにより決定した標的AMHRII-Fcへの固定)は、本発明による変異ヒト化抗体のAMHR-IIレセプターへの結合親和性を提示する。
− 軽鎖可変領域のCDR中の、セリンがプロリンで置換された変異(S179P)(すなわち、親水性アミノ酸の疎水性アミノ酸での置換)
− 軽鎖の可変領域中、特にFR中の、変異(I177T)(すなわち、親水性で、更には国際出願WO 2008/053330によればヒドロパシー指標が全く異なった値(イソロイシンについては+4.5、スレオニンについては-0.7)であるアミノ酸での疎水性アミノ酸の置換)、及び
− 重鎖中の変異(Q3R)(すなわち、グルタミンのアルギニンでの置換;ヒドロパシー指標の値は、国際出願WO 2008/053330によれば、グルタミンの-3.5からアルギニンの-4.5に変化する)
を有し、更に、非変異ヒト化12G4抗体のものよりかなり良好で、非変異キメラ12G4抗体のものより大きな親和性を有する。
1つの有利な実施形態において、本発明は、重鎖中の前記少なくとも1つの変異が、以下のアミノ酸置換:Q1E、Q3E、Q3R、Q6E、A9T、V11A、K12R、K13R、K19E、V20A、A24G、A24V、A24T、Q39E、A40V、S31G、L45P、D56N、A76T、A79T、R87G、T58A、Q62R、V67M、I70N、T74A、S77P、A79T、S88P、E89D、F102S、A103T、L110P、S114Tの少なくとも1つに相当する、上記のような変異ヒト化12G4モノクローナル抗体に関する。
a)1つのCDR中に位置する以下のアミノ酸置換:S179P、E184K、E184G、E184D、S182Fの少なくとも1つがなされている、アミノ酸配列が配列番号2で表される可変領域、又は
1つのCDR中に位置する以下のアミノ酸置換:S179P、E184K、E184G、E184D、S182Fの少なくとも1つ、及び領域FR中に位置する以下のアミノ酸置換:I132T、A143T、T150A、S158P、L175Q、Y178H、V187A、S192T、G197D、F212Sの少なくとも1つがなされている、アミノ酸配列が配列番号2で表される可変領域
と、アミノ酸配列が配列番号6で表される定常領域とを含んでなるか若しくは該両領域からなる軽鎖
b)以下のアミノ酸置換:Q1E、Q3E、Q3R、Q6E、A9T、V11A、K12R、K13R、K19E、V20A、A24G、A24V、A24T、Q39E、A40V、S31G、L45P、D56N、A76T、A79T、R87G、T58A、Q62R、V67M、I70N、T74A、S77P、A79T、S88P、E89D、F102S、A103T、L110P、S114Tの少なくとも1つがなされている、アミノ酸配列が配列番号58で表される重鎖
から選択される軽鎖及び重鎖を有する、上記のような変異ヒト化12G4モノクローナル抗体に関する。
この実施形態において、事前に得られた2つの抗体の組合せに由来し、非変異キメラ12G4抗体に比してAMHR-IIレセプターに関する親和性及び活性が更に増大した抗体を構成することが可能である。
a)アミノ酸配列が
− 配列番号22(リーダー無し)若しくは配列番号24(リーダー有り)、又は
− 配列番号30(リーダー無し)若しくは配列番号32(リーダー有り)、又は
− 配列番号34(リーダー無し)若しくは配列番号36(リーダー有り)、又は
− 配列番号46(リーダー無し)若しくは配列番号48(リーダー有り)
で表される可変領域と、アミノ酸配列が配列番号6で表される定常領域とを含んでなるか又は該両領域からなる軽鎖
b)アミノ酸配列が
− 配列番号38(リーダー無し),若しくは配列番号40(リーダー有り)、
− 配列番号26(リーダー無し),若しくは配列番号28(リーダー有り)、
− 配列番号8(リーダー無し),若しくは配列番号10(リーダー有り)、
− 配列番号42(リーダー無し),若しくは配列番号44(リーダー有り)、
− 配列番号50(リーダー無し),若しくは配列番号52(リーダー有り)
で表される可変領域と、アミノ酸配列が配列番号12で表される定常領域とを含んでなるか又は該両領域からなる重鎖
から選択される軽鎖及び重鎖を有する、上記のような変異ヒト化12G4モノクローナル抗体に関する。
a)− 配列番号70(リーダー無し)若しくは配列番号72(リーダー有り)で表されるアミノ酸配列からなる軽鎖と、
b)− 配列番号74(リーダー無し)若しくは配列番号76(リーダー有り)で表されるアミノ酸配列からなる重鎖と
を有する、上記のような変異ヒト化12G4モノクローナル抗体(3C_23抗体)
又は
a)− 配列番号78(リーダー無し)若しくは配列番号80(リーダー有り)で表されるアミノ酸配列からなる軽鎖と、
b)− 配列番号58(リーダー無し)若しくは配列番号60(リーダー有り)で表されるアミノ酸配列からなる重鎖と
を有する、上記のような変異ヒト化12G4モノクローナル抗体(6B_78抗体)
又は
a)− 配列番号82(リーダー無し)若しくは配列番号84(リーダー有り)で表されるアミノ酸配列からなる軽鎖と、
b)− 配列番号86(リーダー無し)若しくは配列番号88(リーダー有り)で表されるアミノ酸配列からなる重鎖と
を有する、上記のような変異ヒト化12G4モノクローナル抗体(3C_23K抗体)
又は
a)− 配列番号78(リーダー無し)若しくは配列番号80(リーダー有り)で表されるアミノ酸配列からなる軽鎖と、
b)− 配列番号90(リーダー無し)若しくは配列番号92(リーダー有り)で表されるアミノ酸配列からなる重鎖と
を有する、上記のような変異ヒト化12G4モノクローナル抗体(4C_35抗体)
又は
a)− 配列番号94(リーダー無し)若しくは配列番号96(リーダー有り)で表されるアミノ酸配列からなる軽鎖と、
b)− 配列番号98(リーダー無し)若しくは配列番号100(リーダー有り)で表されるアミノ酸配列からなる重鎖と
を有する、上記のような変異ヒト化12G4モノクローナル抗体(5B_42抗体)
に関する。
別の1つの観点によれば、本発明は、上記のモノクローナル抗体の軽鎖をコードする配列、及び/又は上記のモノクローナル抗体の重鎖をコードする配列を含んでなるか若しくは該配列からなる核酸に関する。
a)1つのCDR中で以下のアミノ酸置換:S179P、E184K、E184G、E184D、S182Fの1以上を可能にする少なくとも1つのコドン置換がなされている、配列番号53で表される軽鎖可変領域をコードする配列、又は
b)− 1つのCDR中で以下のアミノ酸置換:S179P、E184K、E184G、E184D、S182Fの1以上を可能にする少なくとも1つのコドン置換、及び
− 1つのFR中で以下のアミノ酸置換:I132T、A143T、T150A、S158P、L175Q、Y178H、V187A、S192T、G197D、F212Sの1以上を可能にする少なくとも1つのコドンの少なくとも1つの置換
がなされている、配列番号53で表される軽鎖可変領域をコードする配列
と、配列番号5で表される定常領域をコードする配列とを含んでなるか又は該両配列からなる上記核酸に関する。
a)以下のアミノ酸置換:Q1E、Q3E、Q3R、Q6E、A9T、V11A、K12R、K13R、K19E、V20A、A24G、A24V、A24T、Q39E、A40V、S31G、L45P、D56N、A76T、A79T、R87G、T58A、Q62R、V67M、I70N、T74A、S77P、A79T、S88P、E89D、F102S、A103T、L110P、S114Tの1以上を可能にする少なくとも1つのコドン置換がなされている、配列番号57を含んでなるか又は該配列からなる、上記核酸に関する。
1つの有利な実施形態において、本発明は、上記の軽鎖及び重鎖を含んでなる上記核酸に関する。
a)可変領域:
− 配列番号21(リーダー無し)若しくは配列番号23(リーダー有り)、又は
− 配列番号29(リーダー無し)若しくは配列番号31(リーダー有り)、又は
− 配列番号33(リーダー無し)若しくは配列番号35(リーダー有り)、又は
− 配列番号45(リーダー無し)若しくは配列番号47(リーダー有り)、又は
b)定常領域
− 配列番号5
から選択される 可変領域をコードする配列及び定常領域をコードする配列を含んでなるか又は該両配列からなる、上記の核酸に関する。
1つの有利な実施形態において、本発明は、重鎖をコードする配列が、以下:
a)可変領域:
− 配列番号25(リーダー無し)若しくは配列番号27(リーダー有り)、又は
− 配列番号7(リーダー無し)若しくは配列番号9(リーダー有り)、又は
− 配列番号37(リーダー無し)若しくは配列番号39(リーダー有り)、又は
− 配列番号41(リーダー無し)若しくは配列番号43(リーダー有り)、又は
− 配列番号49(リーダー無し)若しくは配列番号51(リーダー有り)、
b)定常領域
− 配列番号11
から選択される 可変領域をコードする配列及び定常領域をコードする配列を含んでなるか又は該両配列からなる、上記の核酸に関する。
− 配列番号69(リーダー無し)若しくは配列番号71(リーダー有り)、又は
− 配列番号77(リーダー無し)若しくは配列番号79(リーダー有り)、又は
− 配列番号81(リーダー無し)若しくは配列番号83(リーダー有り)、又は
− 配列番号93(リーダー無し)若しくは配列番号95(リーダー有り)、
から選択され、重鎖をコードする配列が以下の配列:
− 配列番号73(リーダー無し)若しくは配列番号75(リーダー有り)、又は
− 配列番号57(リーダー無し)若しくは配列番号59(リーダー有り)、又は
− 配列番号85(リーダー無し)若しくは配列番号87(リーダー有り)、又は
− 配列番号89(リーダー無し)若しくは配列番号91(リーダー有り)、又は
− 配列番号97(リーダー無し)若しくは配列番号99(リーダー有り)、
から選択される、上記核酸に関する。
a)軽鎖をコードする配列 配列番号69(リーダー無し)若しくは配列番号71(リーダー有り)及び
b)重鎖をコードする配列 配列番号73(リーダー無し)若しくは配列番号75(リーダー有り)である上記核酸(3C_23抗体)、又は、
a)軽鎖をコードする配列 配列番号77(リーダー無し)若しくは配列番号79(リーダー有り)及び
b)重鎖をコードする配列 配列番号57(リーダー無し)若しくは配列番号59(リーダー有り)である上記核酸(6B_78抗体)、又は、
a)軽鎖をコードする配列 配列番号81(リーダー無し)若しくは配列番号83(リーダー有り)及び
b)重鎖をコードする配列 配列番号85(リーダー無し)若しくは配列番号87(リーダー有り)である上記核酸(3C_23K抗体)、又は、
a)軽鎖をコードする配列 配列番号77(リーダー無し)若しくは配列番号79(リーダー有り)及び
b)重鎖をコードする配列 配列番号89(リーダー無し)若しくは配列番号91(リーダー有り)
である上記核酸(4C_35抗体)、又は、
a)軽鎖をコードする配列 配列番号93(リーダー無し)若しくは配列番号95(リーダー有り)、及び
b)重鎖をコードする配列 配列番号97(リーダー無し)若しくは配列番号99(リーダー有り)である上記核酸(5B_42抗体)
に関する。
「発現ベクター」は、本発明においては、少なくとも1つの生物における複製(重複化)を可能にするエレメントを有するDNA分子を規定する。複製を可能にするこれらエレメントは、特に、酵母若しくは細菌における複製起点、又はウイルスの複製を制御するエレメントである。
本発明によるベクターは、特には、プラスミド、ファージ、酵母人工染色体(YAC)、細菌人工染色体(BAC)、複製可能ウイルス又は組込み型ウイルスの改変ゲノムなどである。
これらベクターは、制御するヌクレオチド配列の発現(すなわち、RNAへの転写)を可能にするヌクレオチド配列を有することから、「発現ベクター」と呼ばれる。
ベクター中に含有されるヌクレオチド配列の発現に不可欠であるこれら配列には、前記配列の発現を調節又は改変するための他の配列を付加し得る。非限定的なリストには以下が含まれる:哺乳動物、特にヒトの遺伝子のイントロン、エンハンサータイプの転写調節配列、又は哺乳動物、特にヒトの遺伝子の、転写されているが翻訳されていない配列。
別の1つの有利な実施形態において、本発明は、
・ 以下の配列: 配列番号71、79、83又は95を有する核酸から選択され、その発現を可能にするエレメントの制御下にある第1の核酸、及び
・ 以下の配列:配列番号59、75、87、91又は99を有する核酸から選択され、その発現を可能にするエレメントの制御下にある第2の核酸
を含んでなる、上記の発現ベクターに関する。
好ましくは、発現ベクターは、上記モノクローナル抗体の軽鎖をコードする核酸配列の発現を可能にする第1のエレメント及び上記モノクローナル抗体の重鎖をコードする核酸配列の発現を可能にする第2のエレメントを含有し、前記核酸配列の発現を可能にする第1のエレメント及び第2のエレメントは、同一であっても異なってもよいが、好ましくは同一である。これら制御エレメントは、特に、ウイルスRSVの長末端反復(LTR)配列である。
「少なくとも1つの耐性遺伝子」は、本発明においては、発現ベクターが1つ又は2つ又は3つ又は4つ又は5つ又は6つの抗生物質耐性遺伝子を含有することができることを意味する。
「抗生物質耐性遺伝子」は、本発明においては、その発現産物が細胞に対して細胞***停止効果(増殖の阻害)又は細胞溶解効果(細胞死)を発揮する遺伝子を規定する。本発明に係る抗生物質は、特には原核細胞に対して効果を有するが、酵母、植物、昆虫、両生類又は哺乳動物にかかわらず、真核細胞に対して効果を有することもある。
原核細胞に特異的な抗生物質としては:アンピシリン、テトラサイクリン及びその誘導体、ハイグロマイシン、カナマイシンなどが挙げられる。真核細胞に特異的な抗生物質として:G418、ジェネテシン(G418の塩)、ピューロマイシン、メトトレキサート、ブラスチシジンなどが挙げられる。
オルタナティブスプライシングに最適化され、5'側のヒトβ-グロビンから単離されたドナー配列及び3'側の免疫グロブリンの重鎖可変領域の遺伝子に由来するアクセプター配列から構成された人工イントロンが、プロモーターの直ぐ3'側にクローニングされる。興味対象のTUは、重鎖についてはヒト起源(hGH)の成長ホルモン(GH)遺伝子に、軽鎖についてはウシ起源の成長ホルモン(bGH)遺伝子に由来するポリアデニル化配列で終止する。ポリAの選択におけるこの起源の相違は、興味対象の遺伝子間の組換えを制限する目的を有する。LTRRSVプロモーター、キメライントロン、cDNA及びポリA配列のこの組合せは、YB2/0細胞株における高い転写及び翻訳活性を付与するので、選択した。
Bla遺伝子:この遺伝子(ベクターの制限マップ中でAmpと呼ばれる)は、細菌中の酵素β-ラクタマーゼを発現し(原核生物プロモーター)、アンピシリンに対する抵抗性を付与する。
Neo遺伝子:この遺伝子は、プロモーターSV40の制御下に酵素npt II(ネオマイシン-ホスホトランスフェラーゼII)をコードし、この遺伝子を発現するトランスフェクト哺乳動物細胞に、種々の抗生物質、例えばネオマイシン、カナマイシン又はG418に対する抵抗性を付与する。
Dhfr遺伝子:この遺伝子は、プロモーターSV40の制御下に酵素DHFR(ジヒドロ葉酸還元酵素)をコードし、メトトレキサート(MTX)に対する抵抗性を付与する。この方法は、MTXの濃度を増大させることによる遺伝子増幅に使用することができ、したがってトランスフェクト細胞による抗体産生の増加を生じ得る。
具体的には、前記細胞又は細胞株は、
・ 25%未満のアポトーシスを示し、
・ 細胞***の間に安定であり、
・ 少なくとも14μg/mlの上記モノクローナル抗体を分泌する
点で特徴付けられる。
細胞安定性の概念は、本発明によるモノクローナル抗体の発現を可能にする少なくとも1つのベクターを含有する細胞に由来するクローン化細胞のクローニングから生じる細胞が、種々の***の間、抗生物質耐性を保存し、モノクローナル抗体を産生することができることである。
・ 上記モノクローナル抗体、又は
・ 上記核酸、又は
・ 上記ベクター、又は
・ 上記モノクローナル抗体のフラグメント
を、医薬的に許容可能なビヒクルと共に含んでなる医薬組成物、特にワクチン組成物に関する。
有利には、本発明は、少なくとも1つの上記モノクローナル抗体を医薬的に許容可能なビヒクルと共に含んでなる医薬組成物、特にワクチン組成物に関する。
「医薬的に許容可能なビヒクル」とは、細胞、細胞培養物、組織又は生物のような生物学的系と共存可能な非毒性の材料をいう。
治療有効量(単位用量)は、週1回以上の投与で数週間又は数ヶ月間の、0.01mg/kgから500mg/kgまで、好ましくは0.1mg/kgから500mg/kgまで、好ましくは0.1mg/kgから100mg/kgまで、好ましくは0.1mg/kgから20mg/kgまで、好ましくは0.1mg/kgから10mg/kg、より好ましくは1mg/kgから10mg/kgまで変化し得る。
更に、治療有効量(単位用量)は、週1回以上の投与で数週間又は数ヶ月間の、0.2mg/m2から10g/m2まで、好ましくは0.2mg/m2から1mg/m2まで、好ましくは2mg/m2から1g/m2まで、好ましくは20mg/m2から1g/m2、より好ましくは20mg/m2から0.5g/m2まで変化し得る。
非経口投与用の調製物は、滅菌の水性又は非水性溶液、懸濁液又はエマルジョンを含むことができる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油(例えばオリーブ油)、又は注射可能な有機エステル(例えばオレイン酸エチル)である。水性ビヒクルは、水、アルコール/水溶液、エマルジョン又は懸濁液を含む。
・ 上記モノクローナル抗体、又は
・ 上記核酸、又は
・ 上記発現ベクター、又は
・ 前記モノクローナル抗体の上記フラグメント
を賦形剤と共に、噴霧剤の存在下又は非存在下に含む。
液体形態のエアロゾルはまた、液体微小粒子及び賦形剤からなることもできる。この場合、賦形剤は、合成ジパルミトイルホスファチジルコリン(DPPC)、ラクトース又はヒドロキシエチルデンプン(HES)から選択することができる。微小粒子は、その後、注入器(insufflator)を用いて投与される。
エアロゾルは、液体形態か又は固体形態かに依存して、空気式、超音波式若しくは篩型であり得るネブライザーを用いるか、又は液体製剤については(加圧液体型、機械式、電気流体力学的、加熱型の)計量エアロゾルを用いるか、又は固体製剤については吸入器を用いて投与される(Reychler G., Dessanges JF及びVecellio L, Rev. Mal. Respir, 2007; 24: 1013-1023)。
卵巣ガン、特に転移卵巣ガン、漿液性ガン、副腎腫、類内膜、膠状上皮、
前立腺ガン、
生殖細胞ガン、
子宮内膜ガン、
子宮の悪性混合ミュラー腫瘍、
平滑筋肉腫、
子宮内膜間質性肉腫
の患者の治療において、同時、別々又は逐次に使用するための組合せ調製物として、上記モノクローナル抗体を含む第1の医薬調製物と、従来の抗ガン剤化合物、特にパクリタキセル又は白金塩、特にはオキサリプラチン、シスプラチン若しくはカルボプラチンを含む第2の医薬調製物とを含んでなる生成物に関する。
・ 上記モノクローナル抗体、又は
・ 前記モノクローナル抗体の上記フラグメント、又は
・ 上記核酸、又は
・ 上記ベクター、又は
・ 上記細胞
の、ヒト抗-ミューラー管ホルモンII型レセプターに関係する疾患、特に:
卵巣ガン、特には転移卵巣ガン、漿液性ガン、副腎腫、類内膜、膠状上皮、
前立腺ガン、
生殖細胞ガン、
子宮内膜ガン、
子宮の悪性混合ミュラー腫瘍、
平滑筋肉腫、
子宮内膜間質性肉腫
の治療又は予防を意図する医薬を製造するための使用に関する。
1つの有利な実施形態において、本発明は、上記抗体又はその上記フラグメントの、卵巣ガンを診断し、及び/又はモニターするための使用に関する。
1つの有利な実施形態において、本発明は、従来の抗ガン剤薬、特にはパクリタキセル、又は白金塩、特にはオキサリプラチン、シスプラチン若しくはカルボプラチンを追加的に含んでなる上記抗体又はその上記フラグメントの使用に関する。
ヒト抗-ミューラー管ホルモンII型レセプターに関係する病状、特に:
卵巣ガン、特には転移卵巣ガン、漿液性ガン、副腎腫、類内膜、膠状上皮、
前立腺ガン、
生殖細胞ガン、
子宮内膜ガン、
子宮の悪性混合ミュラー腫瘍、
平滑筋肉腫、
子宮内膜間質性肉腫
の治療又は予防に使用するための、
・ 上記モノクローナル抗体、又は
・ 前記モノクローナル抗体の上記フラグメント、又は
・ 上記核酸、又は
・ 上記ベクター、又は
・ 上記細胞,
に関する。
卵巣ガン、特には転移卵巣ガン、漿液性ガン、副腎腫、類内膜、膠状上皮、
前立腺ガン、
生殖細胞ガン、
子宮内膜ガン、
子宮の悪性混合ミュラー腫瘍、
平滑筋肉腫、
子宮内膜間質性肉腫
を診断し、及び/又はモニターするために使用する。
1つの有利な実施形態において、上記モノクローナル抗体若しくはその上記フラグメント、又は上記核酸又は上記ベクター又は上記細胞は、従来の抗ガン剤薬、特にはパクリタキセル、又は白金塩、特にはオキサリプラチン、シスプラチン若しくはカルボプラチンを追加的に含んでなる。
・ 上記モノクローナル抗体、又は
・ 前記モノクローナル抗体の上記フラグメント、又は
・ 上記核酸、又は
・ 上記ベクター、又は
・ 上記細胞,
を含んでなる、ヒト抗-ミューラー管ホルモンII型レセプターに関係する病状、特には卵巣ガンの診断に使用するキットに関する。
a.患者から事前に取得した生検を標識する工程、
b.ヒト抗-ミューラー管ホルモンII型レセプターの存在を決定する工程
を含んでなる、ヒト生物学的サンプルについて、ヒト抗-ミューラー管ホルモンII型レセプターに関係する病状、特には卵巣ガンを診断する方法に関する。
a.患者から生検を取得する工程、
b.生検を標識する工程、
c.ヒト抗-ミューラー管ホルモンII型レセプターの存在を決定する工程
を含んでなる、ヒト生物学的サンプルについて、ヒト抗-ミューラー管ホルモンII型レセプターに関係する病状、特には卵巣ガンを診断する方法に関する。
生検の標識は当業者に周知の技法に従って行う。
レセプターの存在は、当業者に周知の技法、例えばイムノアッセイ、結合などにより決定することができる。
a.患者から生検を取得する工程、
b.生検を標識する工程、
c.ヒト抗-ミューラー管ホルモンII型レセプターの存在を決定する工程、
d.ヒト抗-ミューラー管ホルモンII型レセプターの存在が決定された場合、
i. 上記モノクローナル抗体、又は
ii. 前記モノクローナル抗体の上記フラグメント、又は
iii. 上記核酸、又は
iv. 上記ベクター、又は
v. 上記細胞
で患者を治療する工程
を含んでなる、ヒト生物学的サンプルについて、ヒト抗-ミューラー管ホルモンII型レセプターに関係する病状、特には卵巣ガンを治療する方法に関する。
実施例1:抗-AMHR-II抗体の親和性の測定
抗体のその抗原AMHR-IIについての親和性は、BIACore X100(BIACore,GE Healthcare)でのSPR(表面プラズモン共鳴)技法により測定する。領域Fcとの融合タンパク質の形態で発現させたAMHR-II組換えレセプターを、そのアミン官能基と、タイプCM5センサチップの表面に存在するスクシンイミドエステル中で活性化されたデキストランのカルボキシル基との間を共有結合することにより固定化する。センサチップのCOOH基は、EDC/NHS混合物(0.1MのN-ヒドロキシスクシンイミド及び0.1Mの3-(N,N-ジメチルアミノ)プロピル-N-エチルカルボジイミド)で10μl/分の流量にて7分間活性化し、次いで10mM酢酸ナトリウム緩衝液(pH4.0)中5μg/mlに希釈したAMHR-II/Fc融合タンパク質を、300RUに達するように、センサチップのトラック2に5μl/分にて注入する。融合タンパク質のアミンと反応しなかったエステル基は、エタノールアミン-HCl(1M, pH8.5)の溶液の10μl:分のフローにて7分間の注入により不活化させる。(ネガティブコントロールとして用いる)トラック1を、トラック2と同様に活性化し、不活化した。
BIAevaluation 3.1ソフトウェアの1:2動力学モデルを用いて、得られたセンサグラム(sensorgram)を分析する。
抗体をCHO又はYB 2/0細胞中で産生した(表I)。
2つの抗体6B_78及び3C_23の変異は相乗効果を有し;6B_78抗体の変異の3C_23抗体への導入は、親和性に10倍の増大を引き起こす。
(配列:GGGGNLTQDRAQVEMQGSR(配列番号101)及びGGGGNLTQARGQVEMQGSR(配列番号102)(ネガティブコントロールペプチド用)のエピトープペプチド)
マウス抗体はキメラ抗体と実質的に等価であり、強い親和性を示す。
ヒト化12G4抗体(huLFB112)は、マウス12G4抗体(mLFB112)の超可変CDRループを、ヒト性フレームワークタンパク質にグラフトすること(「CDRグラフティング」)によって取得した。
ヒト化抗体は、マウス抗体と比較して親和性をかなり喪失している。
したがって、最終目的は、マウス抗体の当初の結合特性を回復するように、ヒト化抗体の親和性を増大させることである。この最適化は、Millegen社が保有するMutaGen技術による分子進化のサイクルを用いることによって実施する。
3.1.1.scFvフラグメントの構築
マウス及びヒト化抗体の軽鎖及び重鎖可変領域(それぞれ、VL及びVH)をコードするヌクレオチド配列を、適切なプライマーを用いるPCRにより増幅した。scFvタイプの組換え抗体フラグメントを作製するために、増幅配列を組み合わせた。この方法で幾つかの構築を行った:VH-VL又はVL-VH方向及び2つの異なるペプチド結合(15又は18アミノ酸のペプチド結合)の使用。マウス抗体について4つ、ヒト化抗体について4つの、合計8つの構築を行った。scFvフラグメントの構築の原理を、下記で説明する(スキームI)。次いで、これらscFvをコードする配列を、MilleGenファージミド発現ベクター(pMG58)中にサブクローニングした。このベクターにより、scFvタイプの抗体フラグメントの発現が可能になり、それらフラグメントの、タイプM13バクテリオファージの表面への提示が可能になる(ファージ-scFv)。
マウス及びヒト化抗体のVH及びVLドメインのヌクレオチド配列は、DNA配列決定によって検証した。
プロトコルを図23にまとめる。
供給した標的の量(80μg)では、なされた8つ全ての構築を試験することはできなかった。以下では、scFvの形態で発現したマウス抗体mLFB112をmVH-VLと呼び、ヒト化抗体huLFB112はhuVH-VLと呼ぶ。
一方ではscFv mVH-VLをコードするDNAを含有するpMG58ベクターにより、他方ではscFv huVH-VLをコードするDNAを含有するpMG58ベクターにより形質転換したXL1-Blue細菌を、30℃にて0.5〜0.6のOD600nmまで培養する。IPTGの添加及び細菌の補助ファージ(M13KO7, New England Biolabs)での感染後、培養物を26℃にて一晩培養する。翌日、ファージ粒子(ファージ-scFv)を培養上清から回収し、PEG/NaCl溶液を用いて沈降させ、濃縮し(100×)、定量する。
この場合、2つのscFvについて、8×1011ファージ/mlのオーダーの濃縮が得られる。
ファージ表面に産生されたscFv mVH-VL及びhuVH-VLの機能性を、直接ELISAアッセイにより検証した。
プロトコル:
1)標的の固定:PBS1×中5μg/mlに希釈した100μl/ウェル(すなわち、500ng/ウェル)の組換え標的を、4°にて一晩。Nunc-Immuno Plate Maxisorpマイクロタイタープレートの使用。
2)飽和:200μl/ウェルのPBS1×-スキムミルク4%、37℃にて2時間のインキュベーション。
3)結合:100μl/ウェルの、PBS1×-ミルク2%-Tween20 0.05%中に希釈したファージ-マウス及びヒト化scFv溶液(2倍希釈系列)、37℃にて2時間のインキュベーション。
4)検出:100μl/ウェルの、ペルオキシダーゼにカップリングした抗-ファージM13抗体(希釈率1/10000、GE Healthcare)、37℃にて2時間のインキュベーション。
5)検出:100μl/ウェルのTMB
6)中和:100μl/ウェルの H2SO4
7)450nmでのOD測定
抗体mLFB112及びhuLFB112の軽鎖VL-CL及び重鎖VH-CH1のヌクレオチド配列を、pMG62-Fab発現ベクター中にサブクローニングした(図24A及び24B)。
pMG62-Fab発現ベクター
A)2つの鎖VL-CL及びVH-CH1は、軽鎖上流のpLacプロモーターから始まるように発現させ、重鎖VH-CH1は、検出用タグ(ペプチドV5)及びIMACでの精製用タグ(6×His)に融合させる。
B)軽鎖及び重鎖の各々はプロモーターに依存性である。RBS:リボソーム結合部位。
MutaGenTMによるライブラリの構築
この工程のための目的は、scFvあたり1〜2アミノ酸変異を有する5×106変形体のデータベースを取得することであった。
変異を、MutaGenTM技術によりヒト化抗体huLFB112のドメインVL及びVHに導入した。最終的に、scFvあたり1〜5アミノ酸変異を有する約5×107の変異クローンから構成される大きなデータベースが得られた。すなわち、当初に想定したものの10倍の多様性が得られた。
このため、異なる実験条件に従って幾つかのサブデータベースを構築した:異なるヌクレオチドプライマー、使用するムターゼ酵素、及び複製数により規定される条件U、M、US及びUE。これらサブデータベースは数が4であり、R20U、45M、R20US及びR20UEと名付けられた。これら全てのサブデータベースで合計295配列について、異なる変異誘発特性を正確に規定した。下記の表IIIは、配列決定操作の分析から得られた基本データの概念を示す。
異なる選択ストラテジーを評価するために、ファージ-マウスscFvとファージ-ヒト化scFvとの人工的混合物を調製した(1/200混合物、mLFB112/huLFB112)。この目的はデータベースのスクリーニングをシミュレートすることである。このスクリーニングシミュレーションにより、この人工混合物内の最近縁クローン(most affine clone)(すなわち、この場合にはマウスクローンmLFB112)を迅速に増幅するという目的を有する種々の選択条件の検証が可能にならなければならない。
i)選択サイクルの経過中における一定量の固定標的の使用(Cond 1)
ii)選択サイクルの経過中における固定標的の量の減少(Cond 2)
ii)「koff」条件についての試験:ファージ-scFvと標的との長いインキュベーション時間(Cond 3)
これら種々の条件を3回の選択サイクルで行った。各選択サイクル後に保持されたクローンについて。配列決定を行った。結果を下記の表IVに示す。
したがって、スクリーニング条件の樹立後、2つのスクリーニング条件の使用を決定した:
Cond A:1μg/ウェルの標的で4回の選択サイクル、次いで0.5μg/ウェルで3回の選択サイクル
Cond B:0.5μg/ウェルで6回の選択サイクル
得られた結果を下記表Vに示す。
二次スクリーニングは、一次スクリーニングの終時に選択したクローンを個々に解析することからなる。このために、113の独特な変異クローンを培養プレートに移した(96ウェル-1.2ml)。
ファージ粒子の産生後、ファージ-scFvを含有する培養上清を、ELISA結合アッセイを実施するために使用した。変異クローンの結合を2つの希釈物で評価した(scFv-ファージを含有する上清の1/2及び1/4)。scFv-ファージ形式で構築したマウスクローン(mLFB112)及びヒト化クローン(huLFB112)を、アッセイプレートの各々で参照として使用した。変異クローンの各々を少なくとも2回試験した。
結果を、変異クローンと参照huLFB112及びmLFB112との間の結合比、すなわち差(OD405nm)として表す。
− ヒト化scFv huLFB112に対する比(比/huLFB112)
− マウスscFv mLFB112に対する比(比/mLFB112)
下記の表VIIは、得られた種々のクローン、及び軽鎖及び/又は重鎖に存在する変異(アミノ酸の位置及び置換)、並びにELISAにより決定したクローンの結合親和性を示す。
置換の後に示した値は、種々の置換に応じたヒドロパシー指標の値の変化に相当する。
結合親和性の値は、AMHRR-IIレセプターについての、非変異ヒト化12G4抗体の結合親和性又は非変異キメラ12G4抗体の結合親和性に対する本発明の抗体の結合親和性の比に相当する。
示された結合親和性の値は、少なくとも4つの値の平均値であり、括弧内の数字は標準偏差に相当する。
表VIIは、行った置換と共に、置換が、ヒドロパシー指標の大きな変化を導くにもかかわらず、該レセプターに対する抗体の結合親和性は、非変異ヒト化12G4抗体のものより遥かに大きく、非変異キメラ12G4抗体のものと少なくとも等しい:1に等しいか又は1より大きい比 本発明のAB/キメラ12G4。
変異ヒト化抗体は、キメラ若しくはマウス抗体のものに回復している親和性、又はキメラ若しくはマウス抗体のものより大きくさえある親和性を示す。
本発明による可溶性変異抗体(Fab)で得られた従来のELISAアッセイにおけるAMHR-IIレセプターに対する抗体の結合親和性を決定することによって、ポジティブクローン3C_23K、3C_23及び6B_78を互いに比較した。
得られた結果を図17に示す。
顆粒膜腫瘍株cov434(van den Berg-Bakker, C.ら,1993. Establishment and characterization of 7 ovarian carcinoma cell lines and one granulosa tumour cell line: Growth features and cytogenetics. International Journal of Cancer 53: 613;Zhang, H.ら,2000. Characterization of an immortalized human granulosa cell line (COV434). Molecular Human Reproduction 6: 146)のAMHRIIをコードするcDNAを発現するがAMHRIIを発現しないプラスミドのトランスフェクションにより、cov434-AMHRII株を作製した。
簡潔には、AMHRIIのcDNAを市販のプラスミドpIRES-neo(Clontech - Takara Bio Europe, France;references 6060-1)中にクローニングした。IRES配列に起因して、AMHRII及びneoは、同じ1つのプロモーターCMVの制御下に発現する(図26)。
この構築物を顆粒膜ガン株cov434(トランスフェクション剤Fugene, Roche)中に安定的にトランスフェクトした。次いで、得られたトランスフェクタントを、サイトメトリ及びウェスタンブロッティングによりAMHRIIレセプターの発現についてスクリーニングした。サブクローニング後、pIRES-neoタイプのベクターを含有する細胞クローンcov434-AMHRII-1F3をインビトロ及びインビボ研究のために維持した。以下で、この株をcov434-AMHRIIと指称する。
腹水サンプルに由来する株(Asc 1株)の樹立における主要工程は以下のとおりである:
− D0:腹水を与え、直後にサンプル培養開始。サンプルを1000 rev/分にて5分間遠心分離し、ペレットを2mLのT25フラスコ播種用培地(RPMI 10%FCS培地)中に採取する。
− D2〜D46:定期的な顕微鏡観察を伴う培養。この間、新鮮培地を定期的に添加する。混入した赤血球及び線維芽細胞を除去するため、PBSで洗浄もまた一日おきに行う。
D13付近で、全ての混入細胞が見られなくなり、依然として不均質なコンフルーエントな細胞ローンが観察される(2つの異なるタイプ)。
− D46:トランスファー:D46に均質な腫瘍細胞ローンが観察される。その後、細胞を洗浄し、スクレーピングによりトランスファーして2つのT75フラスコに再播種する。
− D61:FACSによるAMHRII発現の評価:PBSでの洗浄後、細胞をスクレーパーから脱着させ、フローサイトメトリにより分析する(標識AcM 12G4 10μg/mL、AcII抗-マウスFITC)。この段階でデータベースを構築する。AMHRIIレセプター発現を確証するために、ポジティブAMHRII株を更に10日間培養する。
− D71:FACSによるAMHRII発現の確証
生検の場合(META 2815株)、初代腫瘍を先ずヌードマウスで維持し(肩甲骨間空間にサンプル移植、マウスで連続2継代)、次いで腫瘍を取り出し、二分した後、培養培地に採取する。その後は、腹水サンプルのものと同一のプロトコルを適用する。
本研究は、元のマウス12G4抗体並びにYB2/0で産生した候補のヒト化抗体3C23、6B78及び3C23K(それぞれ配列3C_23、6B_78及び3C_23Kのもの)について行った。これら抗体の親和性はcov434-AMHRII細胞で評価した。
簡潔には、KDは、一定数のcov434-AMHRII細胞に漸増量の放射活性標識抗体を添加することによって飽和法により決定した。細胞(50μl PBS/BSA 0.5%中1×106)を、ヨウ素125(125I)で事前に標識した漸増量の抗体の存在下で、4℃にて1時間インキュベートした(最終容量150μl)。各抗体について、標識及び未標識抗体(84.4μg/ml)の溶液からPBS/BSA 0.5%中4倍希釈を行った。細胞を100倍モル過剰の未標識抗体の存在下で印キューベーとすることにより、非特異的固定を評価した。
インキュベーション後、サンプルを液体窒素中で凍結した後、ガンマカウンターで分析した。特異的固定は、過剰の未標識抗体の存在下で得られた固定を減算することにより決定した。
PRISMソフトウェアで行ったスキャッチャード分析により、表VIIIに示した親和性定数の決定が可能になった。
1 材料及び方法
1.1 方法の原理
ADCC
患者から得られたASC1標的細胞は、接着性であり、アッセイ前日に調製する。これらをトリプシンで脱着させ、平底プレートにおいてEMS+5%FCS中、50μl/ウェルの割合にて6×105細胞/mlの濃度でインキュベートする。プレートを37℃、7%CO2にて一晩インキュベートする。
翌日、細胞はウェルの底に付着している。上清を吸引し、NK及び抗体の存在下でアッセイを行うためにウェルあたり必要な容量の緩衝液を加える。
キラー細胞(NK細胞)は、Miltenyi社により開発されたネガティブ涸渇技法(Miltenyi Biotec - NK cell isolation kit human ref 130-092-657)により、健常ドナーの末梢血から事前に精製する。ADCC技法は、NK細胞をASC1標的細胞と種々の濃度のヒト化抗-AMHRII抗体(0.005〜5000ng/ml)の存在下、10/1のE/T比でインキュベートすることからなる。4時間のインキュベーション後、抗-AMHRII抗体により誘導される細胞傷害活性は、上清中、溶解した標的細胞が放出する乳酸脱水素酵素(LDH)と呼ばれる細胞内酵素を測定することで比色法により測定する(Roche Diagnostics - Cytotoxicity Detection Kit LDH ref 11644793001)。
− 抗-AMHRII抗体:
・ 829 10 054,ヒト化YB2/0,R901 3C23K
・ 829 10 050,ヒト化YB2/0,R901 3C23
・ 829 10 051,ヒト化YB2/0,R901 6B78
・ 632 07 107,非変異ヒト化抗-AMHRII 12G4
− ASC1細胞培養物 871 10 063
結果を図25に示す。
ヒト化候補抗体3C_23K(配列3C_23Kのha12G4:変異VHQ3R(配列番号82(リーダー無し)若しくは配列番号84(リーダー有り))及びVLI177T/S179P/E184K(配列番号86(リーダー無し)若しくは配列番号88(リーダー有り))のADCC活性を評価した。
簡潔には、エフェクター細胞(NKキラー細胞;NK:ナチュラルキラー)は、健常ドナーの末梢血から、フィコールでの単核細胞精製の第1工程後に、Miltenyi社により開発されたネガティブ涸渇技法(Miltenyi Biotec - NK cell isolation kit human ref 130-092-657)で事前に精製する。ADCC活性のインビトロアッセイは、NK細胞を標的細胞(cov434-AMHRII、Asc 1及びMETA 2815株)と種々の濃度の抗-AMHRII抗体(キメラ抗体ch12G4、YB2/0で産生したヒト化3C_23K-YB2/0抗体及びCHOで産生した3C_23K-CHO)の存在下でインキュベートすることからなる。適用したエフェクター/標的比は15/1である。抗体は0.005〜5000ng/mlの濃度で培養培地中で希釈する。
パーセンテージ溶解は以下の式から算出する:
%溶解=[(ER−SR)/(100−SR)]−[(NC−SR)/(100−SR)
式中、
ER=抗体及びNK細胞の存在下でのLDHの放出
SR=標的細胞単独からのLDHの自然放出
NC=NK細胞の存在下且つ抗体の非存在下でのLDHの放出
結果は、抗体の量の関数としてのパーセンテージ溶解で表す。Emax及びEC50値は、PRISMソフトウェアで算出する。
Asc 1株について得られた結果を図28に示す。3C_23K-YB2/0抗体は、Asc 1細胞に対して用量依存性の細胞傷害活性を有し、EC50は2.24ng/mlと見積もられる。3C_23K-CHO抗体の低い活性のため、本アッセイ条件下でプラトーは得ることができない。2つの抗体の効力を比較するために、このケースでは、3C_23K-YB2/0抗体のプラトーの50%に達するに必要な3C_23K-CHO抗体の量を表す相対50%の計算を行う(3C_23K-YB2/0抗体の相対50%=1)。この評価によれば、3C_23K-YB2/0抗体の細胞傷害活性は、CHOで産生した抗体のもの(相対50%=39.4)より約40倍大きい。
まとめると、これら結果は、YB2/0で産生した3C_23K抗-AMHRII抗体が、AMHRII抗原を発現する細胞の溶解を誘導する能力を有することを示す。抗-AMHRII-YB2/0と抗-AMHRII-CHO抗体との間でのEC50の相違は、低い抗原発現条件下又は腫瘍への抗体の低い浸透条件下での抗-AMHRII-YB2/0抗体に関する或る利点を示唆している。
細胞増殖の阻害は、試験する抗-AMHRII抗体の存在下又は非存在下で経時的に細胞増殖を測定することにより証明した。
簡潔には、標的細胞(cov434-AMHRII、Asc 1、META2815)を、P6プレート中(1×105細胞/ウェル)、CHO又はYB2/0で発現させた抗-AMHRII抗体(10μg/ml)の存在下に、架橋剤(AffiniPure F(ab')2 Fragment Goat Anti-Human IgG,Fcγ Fragment Specific ref: 109-006-008, Jackson Immunoresearch, France)有り又は無しで、72時間37℃にて培養する。細胞をトリプシンで5分間処理した後、細胞の生存能(トリパンブルー)に基づく自動細胞計数器であるCEDEXで計数する。増殖阻害のポジティブコントロールを、1μg/mlのコルヒチン(Ref: C3915, Sigma-Aldrich, France)の存在下に確立する。ネガティブコントロールを、無関係の抗体(抗-P24)の存在下に確立する。全ての希釈物は培養培地(RPMI, 10% FCS)中に調製する。結果は、値100%が抗体の非存在下で観察された細胞増殖に対応する、パーセンテージ増殖として表す。
これらの観察によれば、抗体3C_23K-YB2/0及び3C_23K-CHOは、架橋剤(CK)の存在下で、cov434-AMHRII細胞の細胞増殖の約40%阻害を誘導する。この細胞増殖停止効果は、無関係の抗体(抗体p24)の存在下では観察されない一方、コルヒチンポジティブコントロール(10μg/ml)は88%阻害を誘導する。
同様に、図31に提示された結果は、抗体3C_23K-YB2/0及び3C_23K-CHOが、架橋剤(CK)の存在下で、META 2815株に対して、細胞増殖の約40%阻害を誘導することを示す。
この細胞増殖阻害は、cov434-AMHRII及びMETA 2815株に対して抗-AMHRII抗体が誘導する細胞シグナリングの結果であるのかもしれない。
3C_23K-YB2/0抗体の抗腫瘍効力を、COV434-AMHRII腫瘍細胞の皮下注射(s.c.)後の雌性スイスヌードマウスに対する遅発処理で評価した。抗体の腹腔内(i.p.)注射(inj)は、2〜3日の間隔にて10mg/kg/injの用量で計18回行った。3C_23K-YB2/0抗体で処理した群をビヒクル(PBS)で処理した群と比較した。
雌性スイスヌードマウスを使用した(Harlan)。実験の0日目に、マウスに、Matrigelと混合した7.106のCOV434-AMHRII腫瘍細胞(比1:1)の皮下注射を行った。次いで、これら動物を、16日目(腫瘍体積84〜270mm3)から始まるPBS又は3C_23K-YB2/0(10mg/kg/inj)のi.p.注射により処理した(週あたり3回の注射を6週間(計18注射))。
腫瘍体積は週あたり2〜3回測定した。腫瘍体積(TV)は以下の式を用いて算出した:
TV (mm3)=(長さ×幅×高さ)/2 式中、長さは腫瘍の最長径に相当し、幅は腫瘍の最短径に相当する。
平均腫瘍体積(MTV)を用いて腫瘍増殖曲線をプロットした。個々の腫瘍体積が2000mm3に達したときに動物を安楽死させた。各群において、群中の動物の30%を安楽死させたときに曲線を止めた。
− 42%を上回るT/C、この物は効果なしと考えられる。
− 42%〜10%のT/C、この物は抗-腫瘍効果を有する
− 10%を下回るT/C、この物は真に効果的である。
種々の群間の統計学的差を、ANOVA比較を用いるKruskal-Wallis検定で得た(Statgraphics centurion XVソフトウェア)。P<0.05であれば、差を有意と見做した。本研究の生存パラメータの比較のためのログランク検定もまたANOVAにより行った(Statgraphics centurion XVソフトウェア)。P<0.05であれば、差を有意と見做した。
COV434-AMHRIIにおいて遅延が観察された(図32A及び32B)ので、3C_23K-YB2/0抗体は抗-腫瘍活性を示す。
一旦処理が開始された後の各測定点での腫瘍体積の統計学的比較は、3C_23K-YB2/0抗体が腫瘍増殖を遅延させることを示す(Kruskal-Wallis、ANOVAによる)。3C_23K-YB2/0処理群とビヒクル処理群との間で算出したT/C比は、一旦処理が開始された後の全ての測定点で有意差を示す。ログランク検定もまた、生存に関して、3C_23K-YB2/0処理群がビヒクル処理群とは統計学的に異なることを示す。
3C_23K-YB2/0抗体の抗腫瘍効力を、Asc1A5腫瘍細胞(元のAsc 1株のクローン)の皮下注射(s.c.)後の雌性スイスヌードマウスに対する遅発処理で評価した。抗体の腹腔内(i.p.)注射(inj)は、2〜3日の間隔にて10mg/kg/injの用量で計18回行った。3C_23K-YB2/0抗体で処理した群をビヒクル(PBS)で処理した群と比較した。
雌性スイスヌードマウスを使用した(Harlan)。実験の0日目に、マウスに、Matrigelと混合した7.106のAsc1A5腫瘍細胞(比1:1)の皮下注射を行った。次いで、これら動物を、12日目(腫瘍体積40〜160mm3)から始まるPBS又は3C_23K-YB2/0(10mg/kg/inj)のi.p.注射により処理した(週あたり3回の注射を6週間(計18注射))。
腫瘍体積は週あたり2〜3回測定した。腫瘍体積(TV)は以下の式を用いて算出した:
TV (mm3)=(長さ×幅×高さ)/2 式中、長さは腫瘍の最長径に相当し、幅は腫瘍の最短径に相当する。
平均腫瘍体積(MTV)を用いて腫瘍増殖曲線をプロットした。個々の腫瘍体積が2000mm3に達したときに動物を安楽死させた。各群において、群中の動物の30%を安楽死させたときに曲線を止めた。
− 42%を上回るT/C、この物は効果なしと考えられる。
− 42%〜10%のT/C、この物は抗-腫瘍効果を有する
− 10%を下回るT/C、この物は真に効果的である。
種々の群間の統計学的差を、ANOVA比較を用いるKruskal-Wallis検定で得た(Statgraphics centurion XVソフトウェア)。P<0.05であれば、差を有意と見做した。本研究の生存パラメータの比較のためのログランク検定もまたANOVAにより行った(Statgraphics centurion XVソフトウェア)。P<0.05であれば、差を有意と見做した。
Asc1A5モデルにおいてビヒクル処理群と比較して腫瘍増殖に遅延が観察された(図33A及び33B)ので、3C_23K-YB2/0抗体は抗-腫瘍活性を示す。
一旦処理が開始された後の各測定点での腫瘍体積の統計学的比較は、3C_23K-YB2/0抗体が腫瘍増殖を遅延させることを示す(Kruskal-Wallis、ANOVAによる)。3C_23K-YB2/0処理群とビヒクル処理群との間で算出したT/C比は、一旦処理が開始された後の全ての測定点での有意差を示す。ログランク検定もまた、生存に関して、3C_23K-YB2/0処理群がビヒクル処理群とは統計学的に異なることを示す。
3C_23K-YB2/0抗体の抗腫瘍効力を、Meta 2815腫瘍細胞の皮下注射(s.c.)後の雌性スイスヌードマウスに対する遅発処理で評価した。抗体の腹腔内(i.p.)注射(inj)は、2〜3日の間隔にて10mg/kg/injの用量で計18回行った。3C_23K-YB2/0抗体で処理した群をビヒクル(PBS)で処理した群と比較した。
雌性スイスヌードマウスを使用した(Harlan)。実験の0日目に、マウスに、8.106のMeta2815腫瘍細胞の皮下注射を行った。次いで、これら動物を、33日目(腫瘍体積45〜240mm3)から始まるPBS又は3C_23K-YB2/0(10mg/kg/inj)のi.p.注射により処理した(週あたり3回の注射を6週間(計18注射))。
腫瘍体積は週あたり2〜3回測定した。腫瘍体積(TV)は以下の式を用いて算出した:
TV (mm3)=(長さ×幅×高さ)/2 式中、長さは腫瘍の最長径に相当し、幅は腫瘍の最短径に相当する。
平均腫瘍体積(MTV)を用いて腫瘍増殖曲線をプロットした。個々の腫瘍体積が2000mm3に達したときに動物を安楽死させた。各群において、群中の動物の30%を安楽死させたときに曲線を止めた。
− 42%を上回るT/C、この物は効果なしと考えられる。
− 42%〜10%のT/C、この物は抗-腫瘍効果を有する
− 10%を下回るT/C、この物は真に効果的である。
種々の群間の統計学的差を、ANOVA比較を用いるKruskal-Wallis検定で得た(Statgraphics centurion XVソフトウェア)。P<0.05であれば、差を有意と見做した。本研究の生存パラメータの比較のためのログランク検定もまたANOVAにより行った(Statgraphics centurion XVソフトウェア)。P<0.05であれば、差を有意と見做した。
Meta2815モデルにおいてビヒクル処理群と比較して腫瘍増殖に遅延が観察された(図34A及び34B)ので、3C_23K-YB2/0抗体は抗-腫瘍活性を示す。
一旦処理が開始された後の各測定点での腫瘍体積の統計学的比較は、3C_23K-YB2/0抗体が腫瘍増殖を遅延させることを示す(Kruskal-Wallis、ANOVAによる)。3C_23K-YB2/0処理群とビヒクル処理群との間で算出したT/C比は、一旦処理が開始された後の全ての測定点での有意差を示す。ログランク検定もまた、生存に関して、3C_23K-YB2/0処理群がビヒクル処理群とは統計学的に異なることを示す。
Claims (31)
- a)− アミノ酸配列が配列番号2又は配列番号4で表される可変領域、及び
− アミノ酸配列が配列番号6又は配列番号6と少なくとも80%の相同性を有する配列で表される定常領域
を含んでなるか又は該両領域からなる軽鎖と、
b)− アミノ酸配列が配列番号8又は配列番号10で表される可変領域、及び
− アミノ酸配列が配列番号12又は配列番号12と少なくとも80%の相同性を有する配列で表される定常領域
を含んでなるか又は該両領域からなる重鎖と
を含んでなるか又は該両鎖からなるヒト化12G4モノクローナル抗体であって、該抗体は変異しており、軽鎖及び/又は重鎖に少なくとも1つの変異を含み、かつヒト抗-ミューラー管ホルモンII型レセプター(AMHRII)に対して、
a)− アミノ酸配列が配列番号14で表される可変領域、及び
− アミノ酸配列が配列番号6で表される定常領域
からなる軽鎖と、
b)− アミノ酸配列が配列番号18又は配列番号10で表される可変領域、及び
− アミノ酸配列が配列番号12で表される定常領域と
からなる重鎖
を含んでなるか又は該両鎖からなるキメラ12G4モノクローナル抗体の該レセプターに対するものと少なくとも等しいKD、好ましくは10-7Mを下回る、特に10-8Mを下回る、特には10-9M〜10-11Mの範囲のKDを有するヒト化12G4モノクローナル抗体。 - 軽鎖可変領域の少なくとも1つのCDR中に少なくとも1つの変異を含み、前記キメラ12G4モノクローナル抗体のものと少なくとも等しい、前記レセプターに対する親和性を有する、請求項1に記載の変異ヒト化12G4モノクローナル抗体。
- 軽鎖可変領域の少なくとも1つのCDR中の前記変異の少なくとも1つが、アミノ酸配列が配列番号2で表される軽鎖可変領域のアミノ酸179〜アミノ酸184を含有する領域中に含まれるCDRに位置する、請求項1又は2に記載の変異ヒト化12G4モノクローナル抗体。
- アミノ酸179〜アミノ酸184を含有する領域中に含まれるCDR中に位置する前記変異の少なくとも1つが、以下のアミノ酸置換:S179P、E184K、E184G、E184D、S182Fの少なくとも1つに相当する、請求項1〜3のいずれか1項に記載の変異ヒト化12G4モノクローナル抗体。
- 軽鎖(VL)のFR領域中に少なくとも1つの変異を更に含んでなる、請求項1〜4のいずれか1項に記載の変異ヒト化12G4モノクローナル抗体。
- 重鎖中に少なくとも1つの変異を更に含んでなる、請求項1〜5のいずれか1項に記載の変異ヒト化12G4モノクローナル抗体。
- 軽鎖(VL)のFR領域中の前記変異の少なくとも1つがアミノ酸179〜アミノ酸184を含有する領域に隣接するFR領域中に位置する、請求項1〜6のいずれか1項に記載の変異ヒト化12G4モノクローナル抗体。
- 軽鎖(VL)のFR領域中の前記変異の少なくとも1つが、以下のアミノ酸置換:I132T、A143T、T150A、S158P、L175Q、Y178H、V187A、S192T、G197D、F212Sの少なくとも1つに相当する、請求項1〜6のいずれか1項に記載の変異ヒト化12G4モノクローナル抗体。
- 重鎖中の前記変異の少なくとも1つが、以下のアミノ酸置換:Q1E、Q3E、Q3R、Q6E、A9T、V11A、K12R、K13R、K19E、V20A、A24G、A24V、A24T、Q39E、A40V、S31G、L45P、D56N、A76T、A79T、R87G、T58A、Q62R、V67M、I70N、T74A、S77P、A79T、S88P、E89D、F102S、A103T、L110P、S114Tの少なくとも1つに相当する、請求項1〜8のいずれか1項に記載の変異ヒト化12G4モノクローナル抗体。
- 下記:
a)1つのCDR中に位置するアミノ酸の以下の置換:S179P、E184K、E184G、E184D、S182Fの少なくとも1つがなされている、アミノ酸配列が配列番号2で表される可変領域、又は
1つのCDR中に位置するアミノ酸の以下の置換:S179P、E184K、E184G、E184D、S182Fの少なくとも1つ、及びFR領域中に位置するアミノ酸の以下の置換:I132T、A143T、T150A、S158P、L175Q、Y178H、V187A、S192T、G197D、F212Sの少なくとも1つがなされている、アミノ酸配列が配列番号2で表される可変領域
と、アミノ酸配列が配列番号6で表される定常領域とを含んでなるか若しくは該両領域からなる軽鎖、及び
b)以下のアミノ酸置換:Q1E、Q3E、Q3R、Q6E、A9T、V11A、K12R、K13R、K19E、V20A、A24G、A24V、A24T、Q39E、A40V、S31G、L45P、D56N、A76T、A79T、R87G、T58A、Q62R、V67M、I70N、T74A、S77P、A79T、S88P、E89D、F102S、A103T、L110P、S114Tの少なくとも1つがなされている、アミノ酸配列が配列番号58で表される重鎖
から選択される軽鎖及び重鎖を有する、請求項1〜9のいずれか1項に記載の変異ヒト化12G4モノクローナル抗体。 - a)アミノ酸配列が:
− 配列番号22若しくは配列番号24、又は
− 配列番号30若しくは配列番号32、又は
− 配列番号34若しくは配列番号36、又は
− 配列番号46若しくは配列番号48
で表される可変領域と、アミノ酸配列が配列番号6で表される定常領域とを含んでなるか又は該両領域からなる軽鎖
b)アミノ酸配列が:
− 配列番号38若しくは配列番号40、
− 配列番号26若しくは配列番号28、
− 配列番号8若しくは配列番号10、
− 配列番号42若しくは配列番号44、
− 配列番号50若しくは配列番号52
で表される可変領域と、アミノ酸配列が配列番号12で表される定常領域とを含んでなるか又は該両領域からなる重鎖
から選択される軽鎖及び重鎖を有する、請求項1〜10のいずれか1項に記載の変異ヒト化12G4モノクローナル抗体。 - a)− 配列番号70若しくは配列番号72で表されるアミノ酸配列からなる軽鎖、及び
b)− 配列番号74若しくは配列番号76で表されるアミノ酸配列からなる重鎖
又は
a)− 配列番号78若しくは配列番号80で表されるアミノ酸配列からなる軽鎖、及び
b)− 配列番号58若しくは配列番号60で表されるアミノ酸配列からなる重鎖
又は
a)− 配列番号82若しくは配列番号84で表されるアミノ酸配列からなる軽鎖、及び
b)− 配列番号86若しくは配列番号88で表されるアミノ酸配列からなる重鎖
又は
a)− 配列番号78若しくは配列番号80で表されるアミノ酸配列からなる軽鎖、及び
b)− 配列番号90若しくは配列番号92で表されるアミノ酸配列からなる重鎖
又は
a)− 配列番号94若しくは配列番号96で表されるアミノ酸配列からなる軽鎖、及び
b)− 配列番号98若しくは配列番号100で表されるアミノ酸配列からなる重鎖
を有する、請求項10に記載の変異ヒト化12G4モノクローナル抗体。 - Fv、Fab、F(ab')2、Fab'、dsFv、scFv、Sc(Fv)2、「ダイアボディ」からなるフラグメント群より選択される、請求項1〜12のいずれか1項に記載の変異ヒト化12G4モノクローナル抗体のフラグメント。
- 請求項1〜12のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体の軽鎖をコードする配列及び/又は請求項1〜12のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体の重鎖をコードする配列を含んでなるか又は該配列の両方若しくは一方からなる核酸。
- 軽鎖をコードする配列が、以下の配列:
a)1つのCDR中で以下のアミノ酸置換:S179P、E184K、E184G、E184D、S182Fの1以上を可能にする少なくとも1つのコドン置換がなされている、配列番号53で表される軽鎖可変領域をコードする配列、又は
b)− 1つのCDR中で以下のアミノ酸置換:S179P、E184K、E184G、E184D、S182Fの1以上を可能にする少なくとも1つのコドン置換がなされ、かつ
− 1つのFR中で以下のアミノ酸置換:I132T、A143T、T150A、S158P、L175Q、Y178H、V187A、S192T、G197D、F212Sの1以上を可能にする少なくとも1つのコドンの少なくとも1つの置換がなされている、配列番号53で表される軽鎖可変領域をコードする配列
と、配列番号5で表される定常領域をコードする配列とを含んでなるか又は該両配列からなる請求項14に記載の核酸。 - 重鎖をコードする配列が、以下の配列:
a)以下のアミノ酸置換:Q1E、Q3E、Q3R、Q6E、A9T、V11A、K12R、K13R、K19E、V20A、A24G、A24V、A24T、Q39E、A40V、S31G、L45P、D56N、A76T、A79T、R87G、T58A、Q62R、V67M、I70N、T74A、S77P、A79T、S88P、E89D、F102S、A103T、L110P、S114Tの1以上を可能にする少なくとも1つのコドン置換がなされている、配列番号57
を含んでなるか又は該配列からなる請求項14に記載の核酸。 - 請求項15に記載の軽鎖及び請求項16に記載の重鎖を含んでなる請求項14に記載の核酸。
- 軽鎖をコードする配列が、以下:
a)可変領域:
− 配列番号21若しくは配列番号23、又は
− 配列番号29若しくは配列番号31、又は
− 配列番号33若しくは配列番号35、又は
− 配列番号45若しくは配列番号47、又は
b)定常領域
− 配列番号5
から選択される可変領域をコードする配列及び定常領域をコードする配列を含んでなるか又は該両配列からなる、請求項14〜17のいずれか1項に記載の核酸。 - 重鎖をコードする配列が、以下:
a)可変領域:
− 配列番号25若しくは配列番号27、又は
− 配列番号7若しくは配列番号9、又は
− 配列番号37若しくは配列番号39、又は
− 配列番号41若しくは配列番号43、又は
− 配列番号49若しくは配列番号51、
b)定常領域
− 配列番号11
から選択される 可変領域をコードする配列及び定常領域をコードする配列を含んでなるか又は該両配列からなる、請求項14〜17のいずれか1項に記載の核酸。 - 軽鎖をコードする配列が以下の配列:
− 配列番号69若しくは配列番号71、又は
− 配列番号77若しくは配列番号79、又は
− 配列番号81若しくは配列番号83、又は
− 配列番号93若しくは配列番号95
から選択され、重鎖をコードする配列が以下の配列:
− 配列番号73若しくは配列番号75、又は
− 配列番号57若しくは配列番号59、又は
− 配列番号85若しくは配列番号87、又は
− 配列番号89若しくは配列番号91、又は
− 配列番号97若しくは配列番号99
から選択される、請求項14〜19のいずれか1項に記載の核酸。 - 軽鎖をコードする配列及び重鎖をコードする配列が以下のとおり:
a)軽鎖をコードする配列 配列番号69若しくは配列番号71、及び
b)重鎖をコードする配列 配列番号73若しくは配列番号75
又は、
a)軽鎖をコードする配列 配列番号77若しくは配列番号79、及び
b)重鎖をコードする配列 配列番号57若しくは配列番号59
又は、
a)軽鎖をコードする配列 配列番号81若しくは配列番号83、及び
b)重鎖をコードする配列 配列番号85若しくは配列番号87
又は、
a)軽鎖をコードする配列 配列番号77若しくは配列番号79、及び
b)重鎖をコードする配列 配列番号89若しくは配列番号91
又は、
a)軽鎖をコードする配列 配列番号93若しくは配列番号95、及び
b)重鎖をコードする配列 配列番号97若しくは配列番号99
である請求項14〜20のいずれか1項に記載の核酸。 - 請求項14〜21のいずれか1項に記載の少なくとも1つの核酸を含んでなり、該核酸がその発現を可能にするエレメントの制御下にある発現ベクター。
- ・ 以下の配列:配列番号71、79、83又は95を有する核酸から選択され、その発現を可能にするエレメントの制御下にある第1の核酸、及び
・ 以下の配列:配列番号59、75、87、91又は99を有する核酸から選択され、その発現を可能にするエレメントの制御下にある第2の核酸
を含んでなる請求項22に記載の発現ベクター。 - 請求項14〜21のいずれか1項に記載の核酸及び/又は請求項22に記載の発現ベクターにより形質転換された宿主細胞又は宿主細胞株。
- 少なくとも、
・ 請求項1〜12のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体、又は
・ 請求項14〜21のいずれか1項に記載の核酸、又は
・ 請求項22若しくは23に記載のベクター、又は
・ 前記モノクローナル抗体の請求項13に記載のフラグメント
を、医薬的に許容可能なビヒクルと共に含んでなる医薬組成物、特にワクチン組成物。 - 卵巣ガン患者の治療において、同時、別途又は逐次に使用するための組合せ製剤としての、請求項1〜12のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体を含んでなる第1の医薬製剤と、従来の抗ガン化合物、特にパクリタキセル又は白金塩、特にオキサリプラチン、シスプラチン又はカルボプラチンを含んでなる第2の医薬製剤とを含んでなる製品。
- ヒト抗-ミューラー管ホルモンII型レセプターと関係する病状、特に卵巣ガンの治療又は予防に使用するための、請求項1〜12のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体、又は前記モノクローナル抗体の請求項13に記載のフラグメント、又は請求項14〜21のいずれか1項に記載の核酸、又は請求項22若しくは23に記載のベクター、又は請求項24に記載の細胞。
- ヒト抗-ミューラー管ホルモンII型レセプターと関係する病状、特に卵巣ガンの診断及び/又はモニタリングのための、請求項1〜12のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体、又は前記モノクローナル抗体の請求項13に記載のフラグメント。
- 従来の抗ガン薬、特にパクリタキセル又は白金塩、特にオキサリプラチン、シスプラチン又はカルボプラチンを更に含んでなる、請求項27に記載のモノクローナル抗体、又はそのフラグメント、又は核酸、又はベクター、又は細胞。
- ・ 請求項1〜12のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体、又は
・ 前記モノクローナル抗体の請求項13に記載のフラグメント、又は
・ 請求項14〜21のいずれか1項に記載の核酸、又は
・ 請求項22若しくは23に記載のベクター、又は
・ 請求項24に記載の細胞
を少なくとも含んでなる、ヒト抗-ミューラー管ホルモンII型レセプターと関係する病状、特に卵巣ガンの診断に使用するキット。 - 以下の工程:
a.患者から事前に得た生検を標識する工程
b.ヒト抗-ミューラー管ホルモンII型レセプターの存在を決定する工程
を含んでなる、ヒトの生物学的サンプルで、ヒト抗-ミューラー管ホルモンII型レセプターと関係する病状、特に卵巣ガンを診断する方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR1053712A FR2959994B1 (fr) | 2010-05-12 | 2010-05-12 | Nouveaux anticorps humanises 12g4 mutes et leurs fragments diriges contre le recepteur humain de l'hormone anti-mullerienne de type ii |
FR1053712 | 2010-05-12 | ||
PCT/FR2011/050745 WO2011141653A1 (fr) | 2010-05-12 | 2011-04-01 | Nouveaux anticorps humanises 12g4 mutes et leurs fragments diriges contre le recepteur humain de l'hormone anti-mullerienne de type ii |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016146495A Division JP6435295B2 (ja) | 2010-05-12 | 2016-07-26 | ヒト抗−ミューラー管ホルモンii型レセプターを指向する新規な変異ヒト化12g4抗体及びそのフラグメント |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2013534408A true JP2013534408A (ja) | 2013-09-05 |
JP2013534408A5 JP2013534408A5 (ja) | 2014-05-15 |
JP6043998B2 JP6043998B2 (ja) | 2016-12-14 |
Family
ID=43413855
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013509591A Active JP6043998B2 (ja) | 2010-05-12 | 2011-04-01 | ヒト抗−ミューラー管ホルモンii型レセプターを指向する新規な変異ヒト化12g4抗体及びそのフラグメント |
JP2016146495A Active JP6435295B2 (ja) | 2010-05-12 | 2016-07-26 | ヒト抗−ミューラー管ホルモンii型レセプターを指向する新規な変異ヒト化12g4抗体及びそのフラグメント |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016146495A Active JP6435295B2 (ja) | 2010-05-12 | 2016-07-26 | ヒト抗−ミューラー管ホルモンii型レセプターを指向する新規な変異ヒト化12g4抗体及びそのフラグメント |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US9012607B2 (ja) |
EP (1) | EP2569333B1 (ja) |
JP (2) | JP6043998B2 (ja) |
CN (1) | CN103119059B (ja) |
AR (1) | AR081159A1 (ja) |
BR (1) | BR112012028859B1 (ja) |
CA (1) | CA2798336C (ja) |
DK (1) | DK2569333T3 (ja) |
ES (1) | ES2661080T3 (ja) |
FR (1) | FR2959994B1 (ja) |
WO (1) | WO2011141653A1 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2020516668A (ja) * | 2017-04-14 | 2020-06-11 | ガママブス ファルマ | 癌を予防又は処置する為のamhrii結合性化合物 |
JP2020516655A (ja) * | 2017-04-14 | 2020-06-11 | ガママブス ファルマ | 肺癌を予防又は処置する為のamhrii結合性化合物 |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2737457B1 (en) | 2011-07-26 | 2019-11-20 | United Parcel Service Of America, Inc. | Systems and methods for managing fault codes |
FR2984750B1 (fr) | 2011-12-23 | 2014-01-10 | Lfb Biotechnologies | Nouvelles compositions pharmaceutiques comprenant un anticorps liant le recepteur humain de l'hormone anti-mullerienne de type ii |
EP3331569A1 (en) * | 2015-08-07 | 2018-06-13 | Gamamabs Pharma | Antibodies, antibody drug conjugates and methods of use |
WO2017079303A1 (en) * | 2015-11-02 | 2017-05-11 | The Cleveland Clinic Foundation | Sequentially orchestrated immune checkpoint therapy for the treatment and prevention of cancer |
FR3060394B1 (fr) | 2016-12-16 | 2019-05-24 | Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies | Combinaison d'anticorps anti-cd303 et anti-amhrii |
CA3064333A1 (en) * | 2017-05-29 | 2018-12-06 | Gamamabs Pharma | Cancer-associated immunosuppression inhibitor |
EP3789401A1 (en) | 2019-09-03 | 2021-03-10 | Gamamabs Pharma | Amhrii-binding antibody drug conjugates and their use thereof in the treatment of cancers |
EP3812008A1 (en) | 2019-10-23 | 2021-04-28 | Gamamabs Pharma | Amh-competitive antagonist antibody |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20060188440A1 (en) * | 2003-07-08 | 2006-08-24 | Adams Gregory P | Anti-mullerian inhibiting substance type II receptor (MISIIR) immunoconjugates to detect and treat cancer |
JP2009518011A (ja) * | 2005-12-02 | 2009-05-07 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | 結合ポリペプチド及びその使用 |
JP2009533024A (ja) * | 2006-04-07 | 2009-09-17 | ザ リサーチ ファウンデーション オブ ステイト ユニバーシティー オブ ニューヨーク | トランスコバラミン受容体ポリペプチド、核酸およびその調節因子、ならびに細胞の増殖の調節ならびにガンおよびコバラミン欠損症の処置に使用する関連方法 |
JP2010508810A (ja) * | 2006-11-02 | 2010-03-25 | アンスティテュ ナシオナル ドゥ ラ サントゥ エ ドゥ ラ ルシェルシェ メディカル(イーエヌエスエーエールエム) | ヒト抗ミュラーホルモンii型レセプタ(amhr−ii)に対するモノクローナル抗体とそのフラグメント |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1343531A2 (en) * | 2000-12-21 | 2003-09-17 | McGILL UNIVERSITY | Conjugates of antibodies and anticancer drugs |
AR039067A1 (es) * | 2001-11-09 | 2005-02-09 | Pfizer Prod Inc | Anticuerpos para cd40 |
US7217797B2 (en) * | 2002-10-15 | 2007-05-15 | Pdl Biopharma, Inc. | Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis |
AU2007249488B2 (en) * | 2006-05-15 | 2011-11-10 | Immunonomedics, Inc. | Methods and compositions for treatment of human immunodeficiency virus infection with conjugated antibodies or antibody fragments |
-
2010
- 2010-05-12 FR FR1053712A patent/FR2959994B1/fr active Active
-
2011
- 2011-04-01 US US13/697,575 patent/US9012607B2/en active Active
- 2011-04-01 CN CN201180032211.8A patent/CN103119059B/zh active Active
- 2011-04-01 WO PCT/FR2011/050745 patent/WO2011141653A1/fr active Application Filing
- 2011-04-01 ES ES11718450.7T patent/ES2661080T3/es active Active
- 2011-04-01 AR ARP110101115A patent/AR081159A1/es active IP Right Grant
- 2011-04-01 EP EP11718450.7A patent/EP2569333B1/fr active Active
- 2011-04-01 DK DK11718450.7T patent/DK2569333T3/en active
- 2011-04-01 CA CA2798336A patent/CA2798336C/fr active Active
- 2011-04-01 JP JP2013509591A patent/JP6043998B2/ja active Active
- 2011-04-01 BR BR112012028859-8A patent/BR112012028859B1/pt active IP Right Grant
-
2015
- 2015-03-16 US US14/658,785 patent/US9637544B2/en active Active
-
2016
- 2016-07-26 JP JP2016146495A patent/JP6435295B2/ja active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20060188440A1 (en) * | 2003-07-08 | 2006-08-24 | Adams Gregory P | Anti-mullerian inhibiting substance type II receptor (MISIIR) immunoconjugates to detect and treat cancer |
JP2009518011A (ja) * | 2005-12-02 | 2009-05-07 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | 結合ポリペプチド及びその使用 |
JP2009533024A (ja) * | 2006-04-07 | 2009-09-17 | ザ リサーチ ファウンデーション オブ ステイト ユニバーシティー オブ ニューヨーク | トランスコバラミン受容体ポリペプチド、核酸およびその調節因子、ならびに細胞の増殖の調節ならびにガンおよびコバラミン欠損症の処置に使用する関連方法 |
JP2010508810A (ja) * | 2006-11-02 | 2010-03-25 | アンスティテュ ナシオナル ドゥ ラ サントゥ エ ドゥ ラ ルシェルシェ メディカル(イーエヌエスエーエールエム) | ヒト抗ミュラーホルモンii型レセプタ(amhr−ii)に対するモノクローナル抗体とそのフラグメント |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
JPN5013006582; QING-AN YUAN: 'ISOLATION OF ANTI-MISIIR SCFV MOLECULES FROM A PHAGE DISPLAY LIBRARY BY CELL SORTER BIOPANNING' CANCER IMMUNOLOGY, IMMUNOTHERAPY V57 N3, 20070804, P367-378, SPRINGER * |
JPN6012062784; Biochem. J. Vol.379, 2004, pp.785-793 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2020516668A (ja) * | 2017-04-14 | 2020-06-11 | ガママブス ファルマ | 癌を予防又は処置する為のamhrii結合性化合物 |
JP2020516655A (ja) * | 2017-04-14 | 2020-06-11 | ガママブス ファルマ | 肺癌を予防又は処置する為のamhrii結合性化合物 |
JP7289420B2 (ja) | 2017-04-14 | 2023-06-12 | エクセリクシス, インク. | 肺癌を予防又は処置する為のamhrii結合性化合物 |
JP7289420B6 (ja) | 2017-04-14 | 2023-06-30 | エクセリクシス, インク. | 肺癌を予防又は処置する為のamhrii結合性化合物 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
BR112012028859A2 (ja) | 2017-08-15 |
US9012607B2 (en) | 2015-04-21 |
JP6043998B2 (ja) | 2016-12-14 |
FR2959994B1 (fr) | 2012-08-24 |
BR112012028859B1 (pt) | 2022-02-22 |
CN103119059B (zh) | 2016-06-29 |
WO2011141653A1 (fr) | 2011-11-17 |
EP2569333B1 (fr) | 2017-12-13 |
US20150232563A1 (en) | 2015-08-20 |
CN103119059A (zh) | 2013-05-22 |
JP6435295B2 (ja) | 2018-12-05 |
ES2661080T3 (es) | 2018-03-27 |
FR2959994A1 (fr) | 2011-11-18 |
CA2798336A1 (fr) | 2011-11-17 |
US9637544B2 (en) | 2017-05-02 |
JP2017029139A (ja) | 2017-02-09 |
US20130136743A1 (en) | 2013-05-30 |
EP2569333A1 (fr) | 2013-03-20 |
DK2569333T3 (en) | 2018-03-26 |
BR112012028859A8 (pt) | 2017-12-05 |
CA2798336C (fr) | 2018-08-21 |
AR081159A1 (es) | 2012-07-04 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6435295B2 (ja) | ヒト抗−ミューラー管ホルモンii型レセプターを指向する新規な変異ヒト化12g4抗体及びそのフラグメント | |
WO2020135201A1 (zh) | 一种抗体及其用途 | |
US11518803B2 (en) | Antagonist antibodies that bind to human TGFB1, TGFB2 and to TGFB3 and their use for the treatment of lung fibrosis | |
JP2021531826A (ja) | 栄養膜細胞表面抗原2(trop2)に対する特異的な抗体 | |
CN110041427B (zh) | 抗铁调素抗体及其用途 | |
KR102323960B1 (ko) | 항-pd-l1 항체 및 이의 용도 | |
WO2019042153A1 (zh) | 重组双特异性抗体 | |
US20230071422A1 (en) | ANTI-CD3 and ANTI-CD123 Bispecific Antibody and Use Thereof | |
CN113853388A (zh) | 抗-egfrviii抗体及其抗原结合片段 | |
JP2023153984A (ja) | 腫瘍治療薬及びその応用 | |
CA3208455A1 (en) | Novel anti-gremlin1 antibodies | |
JP7222614B2 (ja) | 抗jagged1抗原結合タンパク質 | |
WO2022171080A1 (zh) | 抗cd112r抗体及其用途 | |
WO2021104052A1 (zh) | 药物组合物及其制备方法和应用 | |
CN117295766A (zh) | 对唾液酸结合性ig样凝集素15具特异性的抗体及其用途 | |
TW202208438A (zh) | 抗lilrb1抗體或其抗原結合片段、製備其的方法、藥物組成物、核酸分子、重組載體以及重組細胞 | |
JP2023536629A (ja) | Cd47結合性作用剤およびその使用 | |
CN112062855A (zh) | 一种含有衔接器的药物治疗剂的开发和应用 | |
WO2021244627A1 (zh) | 分离的抗原结合蛋白及其用途 | |
WO2024002308A1 (zh) | 一种新型多特异肿瘤抑制剂的开发和应用 | |
WO2023020507A1 (zh) | 一种抗b7-h4抗体及其制备方法和应用 | |
WO2022117050A1 (zh) | 一种新型肿瘤衔接器治疗药物的开发和应用 | |
KR20230034367A (ko) | 항-종양 괴사 인자 수용체 (tnfr2) 항체 및 그 용도 | |
CA3230246A1 (en) | Bispecific antibody and use thereof | |
CN117730101A (zh) | 抗nectin4抗体和包含其的多特异性蛋白质复合物 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20140107 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20140107 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140325 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20140325 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150507 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20150806 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20151104 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20160329 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160726 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20160802 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20161004 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20161024 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6043998 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |