JP2023153984A - 腫瘍治療薬及びその応用 - Google Patents

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Abstract

【課題】ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分、および該抗体又はその抗原結合部分を含む医薬組成物を提供する。【解決手段】ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分であって、一態様において、特定の配列の重鎖ＣＤＲ１；特定の配列の重鎖ＣＤＲ２；特定の配列の重鎖ＣＤＲ３；特定の配列の軽鎖ＣＤＲ１；特定の配列の軽鎖ＣＤＲ２；および、特定の配列の軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体又はその抗原結合部分、および、該抗体又はその抗原結合部分を含む医薬組成物を提供する。【選択図】図１

Description

本開示は、クローディンを認識する抗体、その製造方法及び応用に関する。
クローディン１８（Ｃｌａｕｄｉｎ１８）は、高度な組織特異的分布を有するクローデ
ィンファミリーメンバーであり、正常組織において、主に胃又は肺部の上皮及び内皮細胞
に分布している。細胞間の密着結合の形成に関与し、溶液及び分子の細胞間隙への浸透を
制限し、内皮細胞の外膜及び基底膜の完全性を維持するために重要な役割を果たしており
、シグナル伝達に関与する可能性がある。
クローディン１８は、複数回膜貫通タンパク質であり、分子内に４つの膜貫通領域を有
し、そのうち２つの断片が細胞外に細胞外領域（ｌｏｏｐ１及びｌｏｏｐ２）を形成し、
２つの膜貫通断片が細胞内に細胞内領域を形成する。ＲＮＡの選択的スプライシングのた
めに、クローディン１８．１（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｕ５６８５６）及びクローディン１８．
２（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｕ５６８５６－２）という２種類の異なる膜タンパク質サブタイプ
が組織に存在しており、この２種類の膜タンパク質サブタイプの相違点は、Ｎ末端にある
膜貫通領域（アミノ酸残基１～２７）と第１の細胞外領域（ｌｏｏｐ１、アミノ酸残基２
８～８０）であり、ｌｏｏｐ１領域の配列類似性は約８５％であるため、クローディン１
８．２を特異的に標的とする抗体を生成する可能性がある。クローディン１８の膜タンパ
ク質サブタイプは、正常組織において分布が異なり、クローディン１８．１は正常な肺組
織に選択的に発現するが、クローディン１８．２は高分化型胃粘膜細胞の表面のみに高度
に特異的に発現し、胃組織の粘膜下に近い幹細胞領域では検出されない。研究によると、
腫瘍組織において、クローディン１８．２は、７０％の原発性胃癌及びその転移に発現す
るだけでなく、異所性活性化が存在し、膵臓癌（５０％）、食道癌（３０％）、非小細胞
肺癌（２５％）、乳癌及び耳鼻咽喉腫瘍などの多くの他の癌に発現することが明らかにな
っている。消化管腫瘍において広く発現するため、クローディン１８は、新たな腫瘍マー
カー及び潜在的な治療標的となる可能性がある。
広範囲の詳細な研究及びマススクリーニングを通して、本発明者らは、予想外に、極め
て優れた親和性及び特異性を有する抗クローディン１８．２抗体、及び該抗体に基づいて
得られるヒト化抗体を得た。本発明の抗体は、クローディン１８．２に高度に特異的に結
合することが可能であり、親和性が高く、細胞殺傷作用を媒介することにより、胃癌、膵
臓癌などのいくつかの悪性腫瘍の診断及び治療に使用することができる。これに基づいて
、本発明を完成した。
一態様において、本開示は、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結
合部分を提供する。
一態様において、本開示は、上記態様に係る抗体又はその抗原結合部分をコードする核
酸分子を提供する。
一態様において、本開示は、上記態様に係る核酸を含む担体を提供する。
一態様において、本開示は、上記態様に係る担体を含む細胞を提供する。
上記いずれかの態様に係る抗体又はその抗原結合部分において、前記抗体又はその抗原
結合部分はヒト化される。
一態様において、本開示は、上記いずれかの態様に係る抗体又はその抗原結合部分又は
そのコード核酸及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物又はキットを提供する。
一態様に係る癌を治療する方法は、治療有効量の上記いずれかの態様に係る抗体又はそ
の抗原結合断片又は核酸分子又は担体又は細胞又は医薬組成物を前記哺乳動物に投与する
ステップを含む。
一態様に係る用途は、上記いずれかの態様に係る抗体又はその抗原結合断片又は核酸分
子又は担体又は細胞又は医薬組成物の、哺乳動物の癌を治療するための薬物又はキットの
調製における用途である。
ＲＴ－ＰＣＲは、ＨＥＫ２９３安定形質転換細胞株がそれぞれクローディン１８．１及びクローディン１８．２を発現することを示す。ＨＥＫ２９３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株及び対照ＫＡＴＯ ＩＩＩ細胞は、いずれもクローディン１８．２の特異的な７８０ｂｐの特徴的なバンドを増幅することができ、ＨＥＫ２９３－クローディン１８．１は、５０４ｂｐの共通断片のみを増幅することができる。 ＦＡＣＳ実験で高発現のＨＥＫ２９３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株をスクリーニングした結果を示す。図中、黒色点は、陰性対照であり、灰色点は、高発現のＨＥＫ２９３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株である。 ＦＡＣＳ実験で高発現のＮＩＨ３Ｔ３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株をスクリーニングした結果を示す。図中、黒色の線は、陰性対照であり、灰色の陰影は、３Ｔ３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株である。ＮＯ．３２－Ｈは、高発現の３Ｔ３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株であり、ＮＯ．１８－Ｍは、中発現の３Ｔ３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株であり、ＮＯ．６－Ｌは、低発現の３Ｔ３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株である。 モノクローナル抗体によるクローディン１８．２の特異的認識を示す。フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）によると、得られたキメラクローディン１８．２ ＩｇＧ１抗体は、クローディン１８．２をトランスフェクトしたＨＥＫ２９３－クローディン１８．２細胞のみを認識し（図４Ｂ）、ＨＥＫ２９３（図４Ａ）及びＨＥＫ２９３－クローディン１８．１（図４Ｃ）といずれも結合しないことを示す。 クローディン１８．２抗体と細胞を３７℃で異なる時間インキュベートした後、細胞内取り込み作用に伴う細胞表面の抗体数の変化を示す。 クローディン１８．２ヒト化抗体によるＫＡＴＯ ＩＩＩ細胞のＡＤＣＣ細胞殺傷活性を示す。 クローディン１８．２ヒト化抗体による腫瘍細胞のＣＤＣ細胞殺傷活性を示す。 クローディン１８．２抗体の細胞内取り込みを示す。レーザー共焦点によると、ヒト化クローディン１８．２抗体（赤色）が細胞膜に結合し、その一部が細胞内に取り込まれた後にリソソーム（緑色）と重なり、矢印で示される黄色のスポット領域を形成する（青色が細胞核である）ことを示す。
Ｉ．定義
本発明において、特に断りのない限り、本明細書で使用される科学用語及び技術用語は
、当業者が一般的に理解する意味を有する。また、本明細書において使用されるタンパク
質及び核酸化学、分子生物学、細胞及び組織培養、微生物学、免疫学の関連用語及び実験
室の操作ステップは、いずれも対応する分野で広く使用されている用語及び一般的なステ
ップである。また、本発明をよりよく理解するために、以下、関連する用語の定義及び解
釈を提供する。
一態様において、本明細書は、クローディン１８．２に特異的に結合する抗体（例えば
、モノクローナル抗体）及びその抗原結合断片を提供する。具体的な態様において、本明
細書は、ヒトクローディン１８．２に特異的に結合する抗クローディン１８．２モノクロ
ーナル抗体を提供し、上記抗クローディン１８．２抗体は、親抗体の変異体を含む。具体
的な態様において、本明細書は、クローディン１８．２（例えば、ヒトクローディン１８
．２）に特異的に結合する抗体を提供する。特定の態様において、本明細書は、１つ以上
のアミノ酸残基の修飾を含み、上記修飾のない親抗体と比べて、抗原との親和性を維持す
る抗クローディン１８．２抗体（例えば、重鎖可変領域のフレームワーク領域における５
～１３個のアミノ酸置換）を提供する。
本明細書において使用されるとき、用語「約」又は「およそ」は、特に断りのない限り
、所定の値又は範囲のプラス又はマイナス１０％以内を意味する。整数にする場合、これ
らの用語は、所定の値又は範囲のプラス又はマイナス１０％以内において、最も近い整数
に切り上げる又は切り下げることを意味する。
抗体鎖のポリペプチド配列に関して、語句「実質的に同一」は、参照ポリペプチド配列
に対して、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５
％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を示す抗体鎖として解釈され得る
。核酸配列に関して、該用語は、参照核酸配列に対して、少なくとも６０％より高く、６
５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９
９％より高い配列同一性を示すヌクレオチド配列として解釈され得る。
配列「相同性」又は「同一性」は、本分野で一致して認められている意味であり、開示
された技術を用いて、２つの核酸又はポリペプチド分子又は領域間の配列同一性のパーセ
ンテージを算出することができる。配列相同性は、ポリヌクレオチド又はポリペプチドの
全長に沿って、又は該分子の領域に沿って測定することができる。２つのポリヌクレオチ
ド又はポリペプチド間の相同性を測定するための方法は多数あるが、用語「相同性」は、
当業者に周知である（Ｃａｒｒｉｌｌｏ， Ｈ． ＆ Ｌｉｐｍａｎ， Ｄ．，ＳＩＡＭ
Ｊ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ ４８：１０７３（１９８８））。
「置換」変異体は、天然配列中の少なくとも１つのアミノ酸残基が除去され、同じ位置
に異なるアミノ酸が挿入された変異体である。上記置換は、単一とすることができ、ここ
では分子における１つのアミノ酸のみが置換されており、或いは、上記置換は、複数とす
ることができ、ここでは同じ分子における２つ以上のアミノ酸が置換されている。複数の
置換は、連続した部位に存在することができる。同様に、１つのアミノ酸は、複数の残基
で置換されてよく、その場合、このような変異体は、置換と挿入の両方を含む。「挿入」
変異体は、１つ以上のアミノ酸が天然配列中の特定の位置におけるあるアミノ酸に直接隣
接して挿入された変異体である。あるアミノ酸に直接隣接するとは、該アミノ酸のα－カ
ルボキシル官能基又はα－アミノ官能基に連結することを意味する。「欠失」変異体は、
天然アミノ酸配列中の１つ以上のアミノ酸が除去された変異体である。通常、欠失変異体
では、分子の特定の領域中の１つ又は２つのアミノ酸が欠失している。
抗体の可変ドメインの文脈における用語「可変」は、抗体間で配列が大きく異なり、そ
の特定の標的に対する特定の抗体の特異的認識及び結合において使用される、関連する分
子のいくつかの部分を指す。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメインにわたって均
等に分布していない。可変性は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインの両方における
、相補性決定領域（ＣＤＲｓ、すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）又は超可変
領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された
部分は、フレームワーク（ＦＲ）領域又はフレームワーク配列と呼ばれる。天然重鎖及び
軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、３つのＣＤＲｓによって連結し、β－シート配置を主に
取る４つのＦＲ領域を含み、ＣＤＲｓは、β－シート構造に連結するループを形成し、あ
る場合にはβ－シート構造の一部を形成する。各鎖におけるＣＤＲは、ＦＲ領域によって
接近して連結することが多く、他の鎖由来のＣＤＲと共に、抗体の標的結合部位（エピト
ープ又は決定基）の形成に寄与する。本明細書において使用されるとき、免疫グロブリン
アミノ酸残基の番号付けは、特に断りのない限り、Ｋａｂａｔらの免疫グロブリンアミノ
酸残基の番号付けシステムに従って行われる。１つのＣＤＲは、同族エピトープに特異的
に結合する能力を有することができる。
本明細書において使用されるとき、抗体の「抗体断片」又は「抗原結合断片」は、全長
未満であるが、抗原に結合する抗体の可変領域の一部（例えば、１つ以上のＣＤＲ及び／
又は１つ以上の抗体結合部位）を少なくとも含有し、したがって、結合特異性及び全長抗
体の特異的結合能の少なくとも一部を保持する全長抗体の任意の部分を指す。したがって
、抗原結合断片は、抗体断片が由来する抗体と同一の抗原に結合する抗原結合部分を含有
する抗体断片を指す。抗体断片は、全長抗体の酵素的処理によって産生された抗体誘導体
と、合成的に、例えば、組換えによって産生された誘導体とを含む。抗体は、抗体断片を
含む。抗体断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、
Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ダイアボディ、Ｆｄ、及びＦｄ’断片、並びに修飾断片を含めたその他
の断片を含むが、これらに限定されない。上記断片は、例えば、ジスルフィド結合によっ
て、及び／又はペプチドリンカーによって互いに連結している複数の鎖を含むことができ
る。抗体断片は、一般的に、少なくとも又は約５０個のアミノ酸、通常、少なくとも又は
約２００個のアミノ酸を含有する。抗原結合断片は、抗体フレームワーク中に挿入された
場合に（対応する領域を置換することなどによって）、抗原に免疫特異的に結合する（す
なわち、少なくとも又は少なくとも約１０７～１０８Ｍ－１のＫａを示す）抗体をもたら
す任意の抗体断片を含む。「機能的断片」又は「抗クローディン１８．２抗体の類似体」
は、リガンドに結合するか又はシグナル伝達を開始する上記受容体の能力を抑止するか又
は実質的に低下させることができる断片又は類似体である。本明細書において使用される
とき、機能的断片は、一般的に「抗体断片」と同義であり、そして抗体に関しては、リガ
ンドに結合するか又はシグナル伝達を開始する上記受容体の能力を抑止するか又は実質的
に低下させることができる、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２などの断片を指すことができ
る。「Ｆｖ」断片は、非共有結合において、１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変
ドメインの二量体（ＶＨ－ＶＬ二量体）からなる。該立体配置では、各可変ドメインの３
つのＣＤＲｓが相互作用して、インタクト抗体中のようにＶＨ－ＶＬ二量体の表面上で標
的結合部位を決定する。全体として、上記６つのＣＤＲｓは、インタクト抗体に標的結合
特異性を与える。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は標的に特異的な３つのＣＤＲ
ｓのみを含むＦｖの半分）でさえ、標的を認識し、結合する能力を有することができる。
本明細書において使用されるとき、「モノクローナル抗体」は、同一抗体の集団を指し
、これは、モノクローナル抗体の集団中の個々の抗体分子各々が、他の抗体分子に対して
同一であることを意味する。このような特性は、複数の異なる配列を有する抗体を含有す
る抗体のポリクローナル集団の特性とは対照的である。モノクローナル抗体は、いくつか
の周知の方法によって調製できる（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ． Ｃｌｉ
ｎ．Ｐａｔｈｏｌ． ５７， ９１２－９１７；及びＮｅｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ
Ｃｌｉｎ Ｐａｔｈｏｌ （２０００）， ５３， １１１－１１７）。例えば、モノ
クローナル抗体は、例えば、骨髄腫細胞と融合して、ハイブリドーマ細胞株を産生するこ
とによるＢ細胞の不死化によって、又はＥＢＶなどのウイルスによるＢ細胞の感染によっ
て調製できる。組換え技術は、インビトロで、抗体をコードするヌクレオチドの人工配列
を保有するプラスミドを用いて、宿主細胞を形質転換することによって、宿主細胞のクロ
ーン集団から抗体を調製することもできる。
本明細書において使用されるとき、用語「ハイブリドーマ」又は「ハイブリドーマ細胞
」は、抗体を産生するリンパ球と抗体を産生しない癌細胞を融合することにより産生され
る細胞又は細胞株（通常、骨髄腫又はリンパ腫細胞）を指す。当業者に知られているよう
に、ハイブリドーマは、特定のモノクローナル抗体を産生し、持続的に供給することがで
きる。ハイブリドーマを産生するための方法は、本分野において周知である。用語「ハイ
ブリドーマ」又は「ハイブリドーマ細胞」に言及する場合、それは、ハイブリドーマのサ
ブクローン及び子孫細胞をさらに含む。
本明細書において使用されるとき、全長抗体は、２つの全長重鎖（例えば、ＶＨ－ＣＨ
１－ＣＨ２－ＣＨ３又はＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３－ＣＨ４）と、２つの全長軽鎖（
ＶＬ－ＣＬ）と、ヒンジ領域とを有する抗体、例えば、抗体を分泌するＢ細胞によって天
然に産生される抗体と合成的に産生される同一ドメインを有する抗体である。
用語「キメラ抗体」は、可変領域配列が１つの種に由来し定常領域配列が別の種に由来
する抗体、例えば、可変領域配列がマウス抗体に由来し定常領域配列がヒト抗体に由来す
る抗体を指す。
「ヒト化」抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有する、キメラ免疫
グロブリン、免疫グロブリン鎖、又はその断片（例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａ
ｂ’）２、又は抗体の他の抗原結合サブ配列）である、非ヒト（例えばマウス）抗体の形
態を指す。好ましくは、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）の残基
が、所望の特異性、親和性及び能力を有するマウス、ラット又はウサギなどの非ヒト種（
ドナー抗体）のＣＤＲの残基によって置換されている、ヒト免疫グロブリン（レシピエン
ト抗体）である。
また、ヒト化において、ＶＨ及び／又はＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３
内のアミノ酸残基を突然変異させることにより、抗体の１つ以上の結合特性（例えば親和
性）を改善することも可能である。突然変異は、例えば、ＰＣＲによって媒介される突然
変異を行うことにより導入することができ、抗体の結合又は他の機能特性への影響は、本
明細書に記載のインビトロ又はインビボ試験により評価することができる。一般的には、
保存的突然変異が導入される。このような突然変異は、アミノ酸置換、添加又は欠失であ
ってよい。また、ＣＤＲ内の突然変異は、通常、１つ又は２つを超えない。したがって、
本発明に係るヒト化抗体は、ＣＤＲ内に１又は２個のアミノ酸変異を含有する抗体をさら
にカバーする。
本明細書において使用されるとき、用語「エピトープ」は、抗体のパラトープが結合す
る、抗原上の任意の抗原決定基を指す。エピトープ決定基は、通常、アミノ酸又は糖側鎖
などの分子の化学的に活性な表面群を含有し、通常、特定の三次元構造的特徴及び特定の
荷電特徴を有する。
本明細書において使用されるとき、抗体又はその抗原結合断片に関して、用語「特異的
に結合する」又は用語「免疫特異的に結合する」は、本明細書において交換可能に使用さ
れ、抗体又は抗原結合断片の、抗体と抗原の抗体結合部位との間の非共有結合相互作用に
よって、同族抗原と１つ以上の非共有結合を形成する能力を指す。上記抗原は、単離され
た抗原であってもよく、腫瘍細胞中に存在してもよい。通常、抗原に免疫特異的に結合す
る（又は特異的に結合する）抗体は、約１×１０７Ｍ－１若しくは１×１０８Ｍ－１若し
くはそれ以上の親和性定数Ｋａ（又は１×１０－７Ｍ若しくは１×１０－８Ｍ若しくはそ
れ以下の解離定数（Ｋｄ））で上記抗原に結合する。親和性定数は、抗体反応の標準的動
力学的方法、例えば、免疫測定、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）（Ｒｉｃｈ ａｎｄ Ｍ
ｙｓｚｋａ （２０００） Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １１：５
４；Ｅｎｇｌｅｂｉｅｎｎｅ （１９９８）Ａｎａｌｙｓｔ．１２３：１５９９）、等温
滴定熱量測定法（ＩＴＣ）又は本分野で周知のその他の動力学的相互作用測定によって測
定することができる（さらに、抗体の結合親和性を算出するための例示的ＳＰＲ及びＩＴ
Ｃ法の説明については、米国特許第７，２２９，６１９号を参照）。結合速度のリアルタ
イム検出及びモニタリングのための装置及び方法は周知であり、市販されている。
本明細書において使用されるとき、抗体に関する用語「競合」は、第１の抗体又はその
抗原結合断片が、第２の抗体又はその抗原結合断片の結合と十分に類似した方式でエピト
ープに結合し、それによって、第１の抗体とその同族エピトープの結合の結果が、第２の
抗体の非存在下よりも、第２の抗体の存在下で、検出可能に低下することを意味する。或
いは、第２の抗体とそのエピトープの結合も第１の抗体の存在下で検出可能に低下する場
合もありうるが、そうである必要はない。すなわち、第１の抗体によって第２の抗体とそ
のエピトープとの結合を抑制することができ、第２の抗体によって第１の抗体とその各自
のエピトープとの結合を抑制する必要はない。しかしながら、それぞれの抗体が、同レベ
ルか、より高いレベルか、より低いレベルかにかかわらず、他の抗体とその同族エピトー
プ又はリガンドとの結合を検出可能に抑制する場合、上記抗体は、その各自のエピトープ
の結合について互いに「交差競合する」と言われる。競合及び交差競合抗体はどちらも本
発明に含まれる。このような競合又は交差競合がどのようなメカニズムで発生するかにか
かわらず（例えば、立体障害、立体配位変化、又は共通エピトープ若しくはその断片との
結合）、当業者であれば、本発明の教示に基づいて、このような競合及び／又は交差競合
抗体が本発明に含まれ、本発明に開示された方法に適用可能であることを認識することが
できる。
本明細書において使用されるとき、用語「ポリヌクレオチド」及び「核酸分子」は、少
なくとも２つの連結しているヌクレオチド又はヌクレオチド誘導体を含有するオリゴマー
又はポリマーであり、通常、リン酸ジエステル結合を介して連結するデオキシリボ核酸（
ＤＮＡ）及びリボ核酸を含む（ＲＮＡ）。本明細書において使用されるとき、用語「核酸
分子」は、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子を含むことを意図する。核酸分子は、一本鎖又は二
本鎖であってもよく、かつｃＤＮＡであってもよい。
本明細書において使用されるとき、単離された核酸分子は、核酸分子の天然供給源中に
存在するその他の核酸分子から分離される核酸分子である。ｃＤＮＡ分子などの「単離さ
れた」核酸分子は、組換え技術によって調製される場合に、その他の細胞性物質若しくは
培地を実質的に含まないもの、又は化学的に合成される場合に、化学前駆体若しくはその
他の化学物質を実質的に含まないものであってよい。本明細書に係る例示的な単離された
核酸分子は、提供される抗体又は抗原結合断片をコードする単離された核酸分子を含む。
本明細書において使用されるとき、核酸配列、領域、エレメント又はドメインに関して
、用語「作動可能に連結する」は、核酸領域が互いに機能的に関連していることを示す。
例えば、プロモーターは、ポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結することがで
き、それによって、上記プロモーターは、上記核酸の転写を調節又は媒介する。
本明細書に記載の配列表における上記配列の「保存的配列修飾」、すなわち、ヌクレオ
チド配列によりコードされるか又はアミノ酸配列を含む抗体と抗原との結合を排除しない
ヌクレオチド及びアミノ酸配列修飾も提供される。これらの保存的配列修飾は、保存的ヌ
クレオチド、アミノ酸置換、及び、ヌクレオチド及びアミノ酸の付加及び欠失を含む。例
えば、本分野で周知の標準技術（例えば、部位特異的変異及びＰＣＲ媒介性変異誘発）に
より修飾を本明細書に記載の配列表に導入することができる。保存的配列修飾は、保存的
アミノ酸置換を含み、アミノ酸残基は、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換される。
類似の側鎖を有するアミノ酸残基ファミリーは、本分野において定義されている。これら
のファミリーは、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン及びヒスチ
ジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非帯電
極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、ト
レオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例
えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチ
オニン）、β分岐側鎖を有するアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）
及び芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファ
ン、ヒスチジン）を含む。したがって、抗クローディン１８．２抗体における予測される
非必須アミノ酸残基は、好ましくは、同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基で置換
される。抗原結合を排除しないヌクレオチド及びアミノ酸の保存的置換を同定する方法は
、本分野において周知である（例えば、Ｂｌｏｍｍｅｌｌら，Ｂｉｏｃｈｅｍ． ３２：
１１８０－１１８７（１９９３）；Ｋｏｂａｙａｓｈｉら，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１
２（１０）：８７９－８８４（１９９９）；及びＢｕｒｋｓら，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９４：４１２－４１７（１９９７）を参照）。
他の選択肢として、別の実施形態において、例えば飽和変異誘発により、抗クローディ
ン１８．２抗体をコードする配列の全部又は一部に沿ってランダムに変異を導入すること
ができ、得られた修飾された抗クローディン１８．２抗体を、改善された結合活性につい
てスクリーニングすることができる。
本明細書において使用されるとき、「発現」は、ポリヌクレオチドの転写及び翻訳によ
ってポリペプチドを産生するプロセスを指す。ポリペプチドの発現レベルは、例えば、宿
主細胞から産生されたポリペプチドの量を測定する方法を含む、本分野で周知の任意の方
法を使用して評価することができる。このような方法は、ＥＬＩＳＡによる細胞溶解物中
のポリペプチドの定量、ゲル電気泳動法後のクーマシーブルー染色、Ｌｏｗｒｙタンパク
質アッセイ及びＢｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイを含むことができるが、これらに限
定されない。
本明細書において使用されるとき、「宿主細胞」は、担体を受け取り、維持し、複製し
、増幅するための細胞である。宿主細胞は、さらに、担体によってコードされるポリペプ
チドを発現するために使用することができる。宿主細胞が***するとき、担体に含有され
る核酸が複製されて、核酸を増幅する。宿主細胞は、真核細胞であってもよく、原核細胞
であってもよい。好適な宿主細胞は、ＣＨＯ細胞、様々なＣＯＳ細胞、ＨｅＬａ細胞、Ｈ
ＥＫ細胞、例えば、ＨＥＫ２９３細胞を含むが、これらに限定されない。
本明細書において使用されるとき、「担体」は、複製可能な核酸であり、担体を適切な
宿主細胞に形質転換するとき、該担体から１つ以上の異種のタンパク質を発現させること
ができる。担体についての言及は、一般的に制限消化及び連結によって、ポリペプチド又
はその断片をコードする核酸を導入できる担体を含む。担体についての言及は、ポリペプ
チドをコードする核酸を含有する担体をさらに含む。担体は、核酸の増幅のために、又は
核酸によってコードされるポリペプチドの発現／提示のために、ポリペプチドをコードす
る核酸を宿主細胞に導入するために使用される。担体は、一般的にエピソームのままであ
るが、遺伝子又はその部分をゲノム染色体に組み込むことを引き起こすように設計されて
もよい。また、酵母人工染色体及び哺乳動物人工染色体などの人工染色体である担体も考
慮される。このような媒体の選択及び用途は、当業者に周知である。
本明細書において使用されるとき、担体は、「ウイルス担体」又は「ウイルスの担体」
をさらに含む。ウイルスの担体は、外因性遺伝子を（媒体又はシャトル（ｓｈｕｔｔｌｅ
）として）細胞に移行するように、外因性遺伝子に作動可能に連結した、操作されたウイ
ルスである。
本明細書において使用されるとき、「発現担体」は、ＤＮＡを発現することができる担
体を含み、上記ＤＮＡは、例えば、プロモーター領域の、ＤＮＡ断片の発現に影響を与え
る調節配列に作動可能に連結する。このような追加の断片は、プロモーター及びターミネ
ーター配列を含むことがあり、任意選択で、１つ以上の複製起点、１つ以上の選択可能マ
ーカー、エンハンサー、ポリアデニル化シグナル等を含むことができる。発現担体は、一
般的に、プラスミド又はウイルスＤＮＡに由来するか、又は両方のエレメントを含有する
ことができる。したがって、発現担体は、組換えＤＮＡ又はＲＮＡ構築物、例えば、プラ
スミド、ファージ、組換えウイルス、又は適切な宿主細胞への導入に際してクローニング
されたＤＮＡの発現をもたらす他の担体を指す。適切な発現担体は、当業者に周知であり
、真核細胞及び／又は原核細胞において複製可能な発現担体、及びエピソームのままであ
る発現担体又は宿主細胞ゲノムに組み込まれる発現担体を含む。
本明細書において使用されるとき、疾患を有する又は疾患状態にある個体を「治療する
」とは、上記個体の症状が、部分的又は全体的に寛解するか、又は治療後そのまま変化し
ないことを意味する。したがって、治療は、予防、治療及び／又は治癒を含む。予防は、
潜在的な疾患の防止及び／又は症状の悪化若しくは疾患の進行の防止を指す。治療は、提
供される任意の抗体若しくはその抗原結合断片、及び本明細書において提供される組成物
の任意の薬学的用途をさらに含む。
本明細書において使用されるとき、「治療効果」は、個体の治療によって得られる効果
を意味し、疾患若しくは疾患状態の症状の変化、通常は改良若しくは改善、又は疾患若し
くは疾患状態の治癒である。
本明細書において使用されるとき、「治療有効量」又は「治療有効用量」は、対象への
投与後に治療効果を達成するのに少なくとも十分な、薬剤、化合物、物質又は化合物を含
有する組成物の量を指す。したがって、それは、疾患又は病症の症状を防止、治癒、改善
、抑制又は部分的に抑制するために必要な量である。
本明細書において使用されるとき、「予防有効量」又は「予防有効用量」は、対象への
投与時に、例えば疾患又は症状の発生又は再発の防止又は遅延、疾患又は症状の発生又は
再発の可能性の低減など、意図される予防効果を有する薬剤、化合物、物質又は化合物を
含有する組成物の量を指す。完全な予防有効用量は、１用量の投与で達成する必要はなく
、一連の用量が投与されたときのみ達成されてもよい。したがって、予防有効量は、１回
又は複数回の投与において投与し得る。
本明細書において使用されるとき、用語「患者」は、哺乳動物、例えばヒトを指す。
ＩＩ．発明を実施するための形態
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２－４、１２－１４、２２－２４
、３２－３４、４２－４４、５２－５４、６２－６４、７２－７４、８２－８４、９２－
９４、１０２－１０４、１１２－１１４、１２２－１２４、１３２－１３４、１４２－１
４４、１５２－１５４、１５７－１５９、１６２－１６４、１６７－１６９、１７２－１
７４、１７７－１７９、１８２－１８４、１８７－１８９、１９２－１９４、１９７－１
９９、２０２－２０４、２０７－２０９、２１２－２１４、２１７－２１９、２２２－２
２４、２２７－２２９、２３２－２３４又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖Ｃ
ＤＲ、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号７－９、１７－１９、２７－２９、３７－３
９、４７－４９、５７－５９、６７－６９、７７－７９、８７－８９、９７－９９、１０
７－１０９、１１７－１１９、１２７－１２９、１３７－１３９、１４７－１４９、２３
７－２３９、２４２－２４４、２４７－２４９、２５２－２５４、２５７－２５９、２６
２－２６４、２６７－２６９又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖ＣＤＲを含む
、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分を提供する。
前の態様に係る抗体又はその抗原結合部分は、アミノ酸配列の配列番号２、１２、２２
、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４
２、１５２、１５７、１６２、１６７、１７２、１７７、１８２、１８７、１９２、１９
７、２０２、２０７、２１２、２１７、２２２、２２７、２３２又はそれらの任意の変異
体から選択された重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列の配列番号３、１３、２３、３３、４３、
５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１３、１２３、１３３、１４３、１５３、１
５８、１６３、１６８、１７３、１７８、１８３、１８８、１９３、１９８、２０３、２
０８、２１３、２１８、２２３、２２８、２３３又はそれらの任意の変異体から選択され
た重鎖ＣＤＲ２、アミノ酸配列の配列番号４、１４、２４、３４、４４、５４、６４、７
４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、１５９、１６４、
１６９、１７４、１７９、１８４、１８９、１９４、１９９、２０４、２０９、２１４、
２１９、２２４、２２９、２３４又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ３
、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号７、１７、２７、３７、４７、５７、６７、７７
、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３７、１４７、２３７、２４２、２４７、２
５２、２５７、２６２、２６７又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖ＣＤＲ１、
アミノ酸配列の配列番号８、１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、９８、
１０８、１１８、１２８、１３８、１４８、２３８、２４３、２４８、２５３、２５８、
２６３、２６８又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖ＣＤＲ２、アミノ酸配列の
配列番号９、１９、２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１０９、１１９
、１２９、１３９、１４９、２３９、２４４、２４９、２５４、２５９、２６４、２６９
又はそれらの任意の変形体から選択された軽鎖ＣＤＲ３を含む。
上記いずれかの態様に係る抗体又はその抗原結合部分は、アミノ酸配列の配列番号１、
１１、２１、３１、４１、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１１１、１２１、１
３１、１４１、１５１、１５６、１６１、１６６、１７１、１７６、１８１、１８６、１
９１、１９６、２０１、２０６、２１１、２１６、２２１、２２６、２３１又はそれらの
任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号６、１
６、２６、３６、４６、５６、６６、７６、８６、９６、１０６、１１６、１２６、１３
６、１４６、２３６、２４１、２４６、２５１、２５６、２６１、２６６又はそれらの任
意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む。
上記いずれかの態様に係る抗体又はその抗原結合部分をコードする核酸分子は、配列番
号５、１５、２５、３５、４５、５５、６５、７５、８５、９５、１０５、１１５、１２
５、１３５、１４５、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９
０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５又はそ
れらの任意の変異体から選択された抗体重鎖核酸配列、及び／又は、配列番号１０、２０
、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４
０、１５０、２４０、２４５、２５０、２５５、２６０、２６５、２７０又はそれらの任
意の変異体から選択された抗体軽鎖核酸配列を含む。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１５１、１５６、１６１、１６６
、１７１、１７６、１８１、１８６、１９１、１９６、２０１、２０６、２１１、２１６
、２２１、２２６、２３１又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び
／又は、アミノ酸配列の配列番号２３６、２４１、２４６、２５１、２５６、２６１、２
６６又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１
８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１５１又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２３６又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１５１又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２４１又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１５１又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５６又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１５６又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２３６又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１５６又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２４１又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１５６又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５６又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１６１又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２３６又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１６１又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２４１又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１６１又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５６又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１６６又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２３６又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１６６又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２４１又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１６６又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５６又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１７１又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５１又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１７１又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５６又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１７６又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５１又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１７６又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５６又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１８１又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５１又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１８１又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５６又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１８６又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５１又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１８６又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５６又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１９１又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５１又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１９１又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５６又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１９６又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５１又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１９６又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５６又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２０１又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５１又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２０１又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２５６又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２０６又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２６１又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２０６又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２６６又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２１１又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２６１又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２１１又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２６６又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２１６又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２６１又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２１６又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２６６又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２２１又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２６１又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２２１又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２６６又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２２６又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２６１又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２２６又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２６６又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２３１又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２６１又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
一態様において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号２３１又はその任意の変異体から
選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号２６６又はその任意の変
異体から選択された軽鎖可変領域を含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又は
その抗原結合部分に関する。
１つの具体的な実施形態において、本開示は、アミノ酸配列の配列番号１５２－１５４
、１５７－１５９、１６２－１６４、１６７－１６９、１７２－１７４、１７７－１７９
、１８２－１８４、１８７－１８９、１９２－１９４、１９７－１９９、２０２－２０４
、２０７－２０９、２１２－２１４、２１７－２１９、２２２－２２４、２２７－２２９
、２３２－２３４又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ、及び／又は、ア
ミノ酸配列の配列番号２３７－２３９、２４２－２４４、２４７－２４９、２５２－２５
４、２５７－２５９、２６２－２６４、２６７－２６９又はそれらの任意の変異体から選
択された軽鎖ＣＤＲを含む、ヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合
部分を提供する。
一態様に係るヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分は、（１
）それぞれ配列番号１５２－１５４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及
び／又はそれぞれ配列番号２３７－２３９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配
列、（２）それぞれ配列番号１５２－１５４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３
配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４２－２４４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣ
ＤＲ３配列、（３）それぞれ配列番号１５２－１５４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び
ＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４７－２４９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ
２及びＣＤＲ３配列、（４）それぞれ配列番号１５７－１５９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤ
Ｒ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２３７－２３９を含む軽鎖ＣＤＲ１
、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（５）それぞれ配列番号１５７－１５９を含む重鎖ＣＤＲ
１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４２－２４４を含む軽鎖
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（６）それぞれ配列番号１５７－１５９を含む重
鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４７－２４９を
含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（７）それぞれ配列番号１６２－１６４
を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２３７－
２３９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（８）それぞれ配列番号１６２
－１６４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号
２４２－２４４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（９）それぞれ配列番
号１６２－１６４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ
配列番号２４７－２４９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１０）それ
ぞれ配列番号１６７－１６９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又
はそれぞれ配列番号２３７－２３９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（
１１）それぞれ配列番号１６７－１６９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列
、及び／又はそれぞれ配列番号２４２－２４４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ
３配列、（１２）それぞれ配列番号１６７－１６９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣ
ＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４７－２４９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２
及びＣＤＲ３配列、（１３）それぞれ配列番号１７２－１７４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤ
Ｒ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５２－２５４を含む軽鎖ＣＤＲ１
、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１４）それぞれ配列番号１７２－１７４を含む重鎖ＣＤ
Ｒ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５７－２５９を含む軽
鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１５）それぞれ配列番号１７７－１７９を含
む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５２－２５
４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１６）それぞれ配列番号１７７－
１７９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２
５７－２５９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１７）それぞれ配列番
号１８２－１８４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ
配列番号２５２－２５４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１８）それ
ぞれ配列番号１８２－１８４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又
はそれぞれ配列番号２５７－２５９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（
１９）それぞれ配列番号１８７－１８９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列
、及び／又はそれぞれ配列番号２５２－２５４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ
３配列、（２０）それぞれ配列番号１８７－１８９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣ
ＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５７－２５９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２
及びＣＤＲ３配列、（２１）それぞれ配列番号１９２－１９４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤ
Ｒ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５２－２５４を含む軽鎖ＣＤＲ１
、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２２）それぞれ配列番号１９２－１９４を含む重鎖ＣＤ
Ｒ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５７－２５９を含む軽
鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２３）それぞれ配列番号１９７－１９９を含
む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５２－２５
４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２４）それぞれ配列番号１９７－
１９９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２
５７－２５９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２５）それぞれ配列番
号２０２－２０４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ
配列番号２５２－２５４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２６）それ
ぞれ配列番号２０２－２０４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又
はそれぞれ配列番号２５７－２５９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（
２７）それぞれ配列番号２０７－２０９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列
、及び／又はそれぞれ配列番号２６２－２６４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ
３配列、（２８）それぞれ配列番号２０７－２０９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣ
ＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６７－２６９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２
及びＣＤＲ３配列、（２９）それぞれ配列番号２１２－２１４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤ
Ｒ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６２－２６４を含む軽鎖ＣＤＲ１
、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３０）それぞれ配列番号２１２－２１４を含む重鎖ＣＤ
Ｒ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６７－２６９を含む軽
鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３１）それぞれ配列番号２１７－２１９を含
む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６２－２６
４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３２）それぞれ配列番号２１７－
２１９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２
６７－２６９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３３）それぞれ配列番
号２２２－２２４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ
配列番号２６２－２６４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３４）それ
ぞれ配列番号２２２－２２４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又
はそれぞれ配列番号２６７－２６９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（
３５）それぞれ配列番号２２７－２２９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列
、及び／又はそれぞれ配列番号２６２－２６４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ
３配列、（３６）それぞれ配列番号２２７－２２９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣ
ＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６７－２６９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２
及びＣＤＲ３配列、（３７）それぞれ配列番号２３２－２３４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤ
Ｒ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６２－２６４を含む軽鎖ＣＤＲ１
、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３８）それぞれ配列番号２３２－２３４を含む重鎖ＣＤ
Ｒ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６７－２６９を含む軽
鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列という重鎖及び軽鎖のＣＤＲ組み合わせを含む。
一態様に係るヒトクローディン１８．２に結合する抗体又はその抗原結合部分は、上記
いずれかの態様に係る抗体又はその抗原結合部分に対して、少なくとも６０％より高く、
６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、
９９％より高い配列同一性を有する。
一態様に係る核酸分子は、上記いずれかの態様に係る抗体又はその抗原結合部分をコー
ドする核酸分子、又はそれに対して少なくとも６０％より高く、６５％、７０％、７５％
、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％より高い配列同一
性を有する。
一態様に係る担体は、上記いずれかの態様に係る核酸を含む。
一態様に係る細胞は、上記いずれかの態様に係る担体を含む。
一態様に係る医薬組成物は、上記いずれかの態様に係る抗体又はその抗原結合部分又は
そのコード核酸及び薬学的に許容される担体を含む。
一態様に係る癌を治療する方法は、治療有効量の上記いずれかの態様に係る抗体又はそ
の抗原結合断片又は核酸分子又は担体又は細胞又は医薬組成物を上記哺乳動物に投与する
ステップを含む。
一態様に係る用途は、上記いずれかの態様に係る抗体又はその抗原結合断片又は核酸分
子又は担体又は細胞又は医薬組成物の、哺乳動物の癌を治療するための薬物の調製におけ
る用途である。
上記いずれかの態様において、任意選択で、上記癌は胃癌であり、任意選択で、上記抗
体は、ＡＤＣＣ又はＣＤＣ効果によって癌細胞を死滅させ、任意選択で、上記抗体は、そ
の他の薬物、例えば、標識化接合体又は細胞毒性接合体と結合する。
一態様において、本開示は、抗体、その断片、相同体、その誘導体等、例えば、標識化
接合体又は細胞毒性接合体、並びに抗体、特定の細胞型を死滅させる接合体などの使用に
ついての使用説明書を含むキットをさらに含む。該説明書は、インビトロ、インビボ又は
エキソビボでの抗体、接合体などを使用するための指示を含むことができる。抗体は、液
体形態であってもよく、一般的に凍結乾燥された固体であってもよい。該キットは、適切
な他の試薬、例えば、緩衝液、再構成溶液及び所定の用途に必要な他の成分を含むことが
できる。その用途のための、例えば、治療上の用途又は診断アッセイの実施のための説明
書と共に、所定量の包装された試薬の組み合わせが検討される。抗体が標識され、例えば
酵素で標識される場合、該キットは、基質と酵素に必要な補因子（例えば、検出可能な発
色団又は発蛍光団を提供する基質前駆体）とを含むことができる。また、他の添加剤、例
えば、安定剤、緩衝液（例えば、ブロッキング用緩衝液又は溶解用緩衝液）などを含むこ
ともできる。様々な試薬の相対量を変更して、試薬溶液の濃縮物を提供してもよく、それ
によって使用者に柔軟性、空間の節約、試薬の節約等がもたらされる。これらの試薬は、
一般的に凍結乾燥された乾燥粉末として提供され、溶解時に適切な濃度を有する試薬溶液
を提供する賦形剤を含む。
一態様に係る用途は、上記いずれかの態様に係る抗体又はその機能的断片又は核酸分子
又は担体又は細胞又は医薬組成物又はキットの、細胞表面のクローディン１８．２の細胞
内取り込みを媒介する試薬の調製における用途である。
本発明は、二重特異的抗クローディン１８．２抗体を含む多価抗体をさらに含み、この
抗体は、該抗体に連結し、診断又は治療の機能を有するエフェクター分子、原子又は他の
物質を有する。例えば、抗体は、該抗体に連結し、癌をインビボで診断又は治療するため
に使用される放射性診断標識、又は放射性細胞毒性原子若しくは金属、又は細胞毒性物質
（例えば、リシン鎖）を有することができる。
また、本発明に係る抗体は、免疫測定法、精製方法、及び免疫グロブリン又はその断片
を使用する他の方法において使用されてもよい。このような用途は、本分野において周知
である。
したがって、本発明は、本発明に係る抗クローディン１８．２抗体又はその断片を含む
組成物をさらに提供し、上記抗体は、薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤と組み
合わせやすく、これは本分野において一般的な手法である。
本発明において使用される用語「医薬組成物」は、様々な調製物の製剤を指す。治療有
効量の多価抗体を含む製剤は、滅菌液体溶液、液体懸濁液又は凍結乾燥形態であり、任意
選択で安定剤又は賦形剤を含有する。
本発明において使用される用語「癌」は、哺乳動物、特にヒトの生理的状態を指すか又
は説明しており、その典型的な特徴は、細胞が無秩序に増殖することである。癌の例は、
癌腫（ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫及び白血病を含むが、これらに
限定されない。
本発明に係る抗体は、単独で投与される組成物として使用されてもよく、他の活性剤と
併用されてもよい。
なお、上記実施形態に係る治療薬は、適切な薬学的に許容される担体、賦形剤、及び製
剤中に組み込まれて移行、送達、耐性などを改善する他の試薬とともに投与されることを
理解されたい。多数の適切な製剤は、すべての医薬品化学者にとって周知の薬局方、特に
Ｂｌａｕｇ、Ｓｅｙｍｏｕｒによる第８７章に見出すことができる。これらの製剤は、例
えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー剤、ワックス、オイル、脂質、脂質（カチオン性又
はアニオン性）含有担体（例えば、ＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎＴＭ）、ＤＮＡ接合体、無水吸
収性ペースト、水中油型及び油中水型エマルション、エマルションカーボワックス（異な
る分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、及びカーボワックスを含む半固体混
合物を含む。製剤中の有効成分が製剤によって不活性化されず、製剤が投与経路において
生理学的に適合性及び忍容性を示すものである限り、上記いずれかの混合物は、いずれも
本発明に係る治療及び治療方法に適用可能である。
１つの実施形態において、上記抗体を治療薬として使用することができる。このような
試薬は、一般的に、被験体の、異常なクローディン１８．２の発現、活性及び／又はシグ
ナル伝達に関連する疾患又は病態を治療、緩和及び／又は予防するために使用される。治
療レジメンは、標準的な方法を用いて、例えば異常なクローディン１８．２の発現、活性
及び／又はシグナル伝達に関連する疾患又は障害、例えば癌又は他の腫瘍性障害に罹患し
た（又はそれらを発症するリスクを有するか又はそれらが進行している）ヒト患者などの
被験体を特定することによって、実施することができる。抗体製剤、好ましくはその標的
抗原に対して高い特異性及び高い親和性を有する抗体製剤は、被験体に投与されると、標
的との結合による作用を一般的に示す。抗体の投与によって、標的（例えばクローディン
１８．２）の発現、活性及び／又はシグナル伝達機能を除去又は抑制又は阻止することが
できる。抗体の投与によって、標的（例えばクローディン１８．２）とそれが天然に結合
する内因性リガンドとの結合を除去又は抑制又は阻止することができる。例えば、抗体は
標的に結合して、クローディン１８．２の発現、活性及び／又はシグナル伝達を調節、遮
断、抑制、減少、阻害、中和するか、又は他の形で妨げる。いくつかの実施形態において
、異常なクローディン１８．２の発現に関連する疾患又は障害を治療するために、重鎖及
び軽鎖のＣＤＲを有する抗体を被験体に投与することができる。１つの実施形態において
、異常なクローディン１８．２の発現に関連する疾患又は障害は、癌であってもよい。
非限定的な例として、異常なクローディン１８．２の発現、活性及び／又はシグナル伝
達に関連した疾患又は障害は、血液癌及び／又は固形腫瘍を含む。血液癌は、例えば、白
血病、リンパ腫及び骨髄腫を含む。非限定的な例として、いくつかの形態の白血病は、急
性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬ
Ｌ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄増殖性疾患／腫瘍（ＭＰＤＳ）、及び骨髄異形
成症候群を含む。非限定的な例として、いくつかの形態のリンパ腫は、ホジキンリンパ腫
、低悪性度及び侵襲性非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、及び濾胞性リンパ腫（
小細胞型及び大細胞型）を含む。非限定的な例として、いくつかの形態の骨髄腫は、多発
性骨髄腫（ＭＭ）、巨細胞骨髄腫、重鎖骨髄腫、及び軽鎖又はＢｅｎｃｅ－Ｊｏｎｅｓ骨
髄腫を含む。固形腫瘍は、例えば、***腫瘍、卵巣腫瘍、肺腫瘍、膵臓腫瘍、前立腺腫瘍
、黒色腫、結腸直腸腫瘍、肺腫瘍、頭頸部腫瘍、膀胱腫瘍、食道腫瘍、肝臓腫瘍、及び腎
臓腫瘍を含む。
癌及び他の腫瘍性障害に関連する症状は、例えば、炎症、熱、全身倦怠感、熱、疼痛、
しばしば局所炎症、食欲減退、体重減少、浮腫、頭痛、疲労、発疹、貧血、筋力低下、筋
疲労、及び腹痛、下痢又は便秘などの腹部症状を含む。
別の実施形態において、クローディン１８．２を標的とする抗体は、クローディン１８
．２の局在化及び／又は定量に関連した、本分野で周知の方法により使用することができ
る（例えば、適切な生理学的試料中のクローディン１８．２及び／又はクローディン１８
．２のレベルを測定するための使用、診断方法における使用、タンパク質のイメージング
における使用など）。１つの特定の実施形態において、クローディン１８．２又はその誘
導体、断片、類似体若しくは相同体に対して特異的であり、抗体由来の抗原結合ドメイン
を含む抗体は、薬理学的に活性な化合物（以下、「治療薬」と呼ばれる）として使用され
る。
別の実施形態において、免疫アフィニティー、クロマトグラフィー又は免疫沈降法など
の標準的な方法によって、クローディン１８．２に対して特異的な抗体を使用してクロー
ディン１８．２ポリペプチドを単離することができる。クローディン１８．２タンパク質
を標的とする抗体（又はその断片）を使用して、生物学的試料中のタンパク質を検出する
ことができる。いくつかの実施形態において、例えば所定の治療レジメンの効果を判定す
るという目的で、臨床試験手順の一環として生物学的試料中のクローディン１８．２を検
出することができる。抗体を検出可能な物質と結合する（すなわち物理的に連結する）こ
とによって、検出を促進することができる。検出可能な物質の例は、様々な酵素、補欠分
子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質及び放射性物質を含む。適切な酵素の例は、西
洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ又はアセチ
ルコリンエステラーゼを含み、適切な補欠分子族複合体の例は、ストレプトアビジン／ビ
オチン及びアビジン／ビオチンを含み、適切な蛍光物質の例は、ウンベリフェロン、フル
オレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルア
ミンフルオレセイン、塩化ダンシル又はフィコエリトリンを含み、発光物質の１つの例は
、ルミノールを含み、生物発光物質の例は、ルシフェラーゼ、フルオレセイン及びイクオ
リンを含み、適切な放射性物質の例は、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ又は３Ｈを含む。
別の実施形態において、本開示に係る抗体は、試料中のクローディン１８．２又はその
タンパク質断片の両方を検出するための試薬として使用することができる。いくつかの実
施形態において、抗体は、検出可能な標識を含む。抗体は、ポリクローナル抗体であるか
、又はより好ましくはモノクローナル抗体である。完全な抗体又はその断片（例えば、Ｆ
ａｂ、ｓｃＦｖ、又はＦ（ａｂ’）２）が使用される。抗体に関して用語「標識」は、検
出可能な物質を該抗体と結合する（すなわち物理的に連結する）ことによる該抗体の直接
的標識と、直接標識された別の試薬との反応による該抗体の間接的標識とを含むことを意
図している。間接的標識の例は、蛍光標識された第２の抗体を用いて第１の抗体を検出す
ることと、蛍光標識されたストレプトアビジンによって検出されるようにビオチンで抗体
を末端標識することとを含む。用語「生物学的試料」は、被験体から単離された組織、細
胞及び生物学的液体、並びに被験体の体内に存在する組織、細胞及び液体を含むことを意
図している。したがって、使用される用語「生物学的試料」は、血液、及び血清、血漿又
はリンパ液を含む血液の画分又は成分を含む。換言すれば、上記実施形態の検出方法を用
いて、生物学的試料中の分析物ｍＲＮＡ、タンパク質又はゲノムＤＮＡをインビトロ及び
インビボで検出することができる。例えば、分析物ｍＲＮＡをインビトロで検出する技術
は、Ｎｏｒｈｔｅｒｎハイブリダイゼーション及びインサイチュハイブリダイゼーション
を含む。分析物タンパク質をインビトロで検出する技術は、酵素結合免疫吸着アッセイ（
ＥＬＩＳＡ）、Ｗｅｓｔｅｒｎブロット、免疫沈降法及び免疫蛍光法を含む。分析物ゲノ
ムＤＮＡをインビトロで検出する技術は、Ｓｏｕｔｈｅｒｎハイブリダイゼーションを含
む。また、分析物タンパク質をインビボで検出する技術は、標識した抗分析物タンパク質
抗体を被験体の体内に導入することを含む。例えば、放射性マーカーで抗体を標識し、次
に標準的なイメージング法によって被験体の体内における該放射性マーカーの存在又は位
置を検出することができる。
本明細書に記載の抗体及びその誘導体、断片、類似体及び相同体を、投与に適した医薬
組成物中に添加することができる。このような組成物の調製に関連する原理及び考慮事項
、並びに成分の選択のガイダンスは、本分野において周知である。
このような組成物は、一般的に、抗体及び薬学的に許容される担体を含む。抗体断片を
使用するとき、標的タンパク質の結合ドメインに特異的に結合する最も小さい阻害性断片
が好ましい。例えば、抗体の可変領域配列に基づいて、標的タンパク質配列に結合する能
力を維持したペプチド分子を設計することができる。このようなペプチドは、化学的に合
成されるか、及び／又は組換えＤＮＡ技術によって産生される（例えば、Ｍａｒａｓｃｏ
ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：７８８９－７８９３（１９
９３）を参照）。
本明細書において使用されるとき、用語「薬学的に許容される担体」は、薬物投与に適
合する任意及びすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤及び抗真菌剤、等張剤及
び吸収遅延剤などを含むことを意図している。適切な薬学的に許容される担体について、
本分野では標準的な参考書であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ
ｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓの最新版に述べられており、該書籍は、参照によって本明細書に組
み込まれる。このような担体又は希釈剤の好ましい例は、水、生理食塩水、リンゲル液、
グルコース溶液及び５％ヒト血清アルブミンを含むが、これらに限定されない。リポソー
ム、及び固定油などの非水性担体を使用することもできる。このような媒体及び試薬を薬
学的活性物質において使用することは、本分野で周知である。任意の従来の媒体又は試薬
が抗体と不適合でない限り、組成物におけるその用途が考えられる。
上記実施形態の医薬組成物は、その意図される投与経路に適合するように配合される。
投与経路の例は、非経口投与、例えば静脈内投与、皮内投与、皮下投与、経口投与（例え
ば吸入）、経皮投与（例えば局所投与）、経粘膜投与及び直腸内投与を含む。非経口投与
、皮内投与又は皮下投与に使用される溶液又は懸濁液は、水、生理食塩水、固定油、ポリ
エチレングリコール系、グリセリン、プロピレングリコール、又は他の合成溶媒などの注
射用滅菌希釈剤と、ベンジルアルコール又はメチルパラベンなどの抗細菌剤と、アスコル
ビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムなどの酸化防止剤と、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴ
Ａ）などのキレート剤と、酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩などの緩衝剤と、塩化ナトリ
ウム又はデキストロースなどの浸透圧調節用試薬とを含むことができる。ｐＨは、塩酸又
は水酸化ナトリウムなどの酸又は塩基で調整することができる。非経口製剤は、アンプル
、使い捨て注射器、又はガラスやプラスチックで作られた多数回投与バイアルに封入する
ことができる。
注射用途に適した医薬組成物は、滅菌水溶液（本明細書において水溶性である）又は分
散液と、滅菌注射溶液又は分散液の即時調製用の滅菌粉末とを含む。静脈内投与について
、適切な薬学的に許容される担体は、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬＴ
Ｍ（ＢＡＳＦ社、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ
）を含む。すべての場合に、組成物は滅菌でなければならず、かつ容易に注射可能である
程度に流動性を有さなければならない。組成物は、製造及び保存条件下で安定でなければ
ならず、かつ細菌及び真菌などの微生物の汚染作用を防止しなければならない。担体は、
例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール及
び液体ポリエチレングリコールなど）を含有する溶媒又は分散媒、及びそれらの適切な混
合物であってよい。例えば、レシチンなどのコーティングを使用することにより、分散液
の場合に必要な粒径を維持することにより、また、界面活性剤を使用することにより、適
正な流動性を保つことができる。微生物の作用に対する防止は、様々な抗細菌剤及び抗真
菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサール
によって実現することができる。多くの場合に、組成物中に等張剤、例えば糖類、多価ア
ルコール（例えば、マンニトール、ソルビトール）、塩化ナトリウムを含むことが好まし
い。上記組成物中に、吸収を遅延させる試薬、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及
びゼラチンを含有することによって、注射用組成物の持続的吸収を実現することができる
。
必要に応じて、必要量の抗体を、上記に列挙した成分の１つ又は組み合わせ（必要に応
じて）を有する適切な溶媒に添加した後、濾過滅菌を行うことにより、滅菌注射溶液を調
製することができる。一般的に、塩基性分散媒と上記に列挙したものから選ばれた他の必
要な成分とを含む滅菌担体に抗体を添加することにより、分散液を調製する。滅菌注射溶
液の調製用の滅菌粉末の場合、調製方法は、有効成分及び任意の更なる所望の成分を含む
粉末が得られる真空乾燥及び凍結乾燥であり、それらの成分は上記成分の滅菌濾過溶液由
来である。
吸入投与について、二酸化炭素などの気体などの適切な推進剤を含む加圧容器、ディス
ペンサー又は噴霧器からエアロゾルスプレーの形で化合物を投与する。
経粘膜的又は経皮的手段によって全身投与を行うこともできる。経粘膜投与又は経皮投
与については、製剤中に、浸透すべきバリアに適した浸透剤を使用する。このような浸透
剤は、本分野において周知であり、例えば、経粘膜投与のための洗浄剤、胆汁酸塩及びフ
シジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は、鼻スプレー又は坐剤を使用することによって行う
ことができる。経皮投与については、１つ以上の上記抗体を本分野で周知の膏薬、軟膏、
ゲル又はクリームに配合することができる。
さらに、直腸投与のために、化合物を坐剤（例えばココアバター又は他のグリセリドな
ど、従来の坐剤基剤を有するもの）又は停留性浣腸剤の形で調製することができる。
１つの実施形態において、上記抗体は、インプラント及びマイクロカプセル化送達シス
テムを含む持続／制御放出製剤などの、身体からの速やかな排出を防ぐ担体を用いて調製
することができる。エチレン－酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲ
ン、ポリオルトエステル及びポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用するこ
とができる。このような製剤を調製する方法は、当業者にとって自明である。
投与を容易にし、用量を均一にするために、非経口組成物を単位剤形として調製するこ
とが特に有利である。本明細書において使用されるとき、単位剤形は、治療される被験体
に用いられ、単位用量として適した物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要な医薬担
体とともに所望の治療効果を達成するように計算された所定量の１つ以上の上記抗体を含
むものである。上記実施形態の単位剤形の仕様は、抗体の固有の特性及び達成されるべき
具体的な治療効果と、個体を治療するためのこのような抗体を配合する技術分野に固有の
制限とによって決定され、且つこれらに直接依存する。
上記医薬組成物は、投与のための説明書とともに容器、パック又はディスペンサーに入
れることができる。
本明細書に記載の製剤は、治療される具体的な疾患に応じて複数の上記抗体、好ましく
は相補的活性を有するが互いに悪影響を及ぼさないものを含んでもよい。代替的に又はそ
れに加えて、組成物は、細胞毒性剤、サイトカイン、化学治療薬又は増殖阻害剤などの、
その機能を高める試薬を含むことができる。このような分子は、意図する目的に対して有
効な量で適切に組み合わせて存在する。例えば、キット内で共存することも、使用中に共
存することもできる。
１つの実施形態において、１つ以上の上記抗体を併用療法において投与することができ
る。すなわち、治療薬（様々な形態の癌、自己免疫疾患及び炎症性疾患などの病理学的症
状又は障害を治療するために使用される）などの他の試薬と併用して投与することができ
る。用語「併用」は、本明細書において、試薬をほぼ同じ時点で、同時に又は順次投与す
ることを意味する。順次投与する場合、第２の化合物の投与を開始するとき、２つの化合
物のうち第１の化合物が治療部位において依然として有効濃度で検出可能であることが好
ましい。１つの場合において、「併用」はまた、本発明の抗体及び他の治療薬がキットに
含まれることを意味する。
例えば、併用療法は、本明細書に記載の１つ以上の抗体と、１つ以上の追加の治療薬（
例えば、下記に詳細に述べるような、１つ以上のサイトカイン及び増殖因子阻害剤、免疫
抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、及び／又は細胞毒性剤若しくは細胞増殖抑
制剤）との同時配合及び／又は同時投与を含むことができる。このような併用療法は、投
与される治療薬を低用量で有利に使用することができ、それにより単独療法に関連する様
々な潜在的な毒性又は合併症が回避される。
明確かつ簡潔な説明の目的のために、本明細書では、同じ又は別個の実施形態の一部と
して特徴を説明しているが、本発明の範囲は、説明される特徴の全部又は一部を組み合わ
せたいくつかの実施形態を含み得ることが理解されるであろう。
（実施例）
＜抗クローディン１８．２モノクローナル抗体の調製＞
Ｂａｌｂ／ｃマウスを免疫するとともにスクリーニングして、クローディン１８．２に
のみ特異的に結合し、クローディン１８の異なるスプライセオソームであるクローディン
１８．１に結合しないモノクローナル抗体を取得するために複数のポリシーが同時に適用
される。具体的には以下のとおりである。
１）クローディン１８．２安定形質転換細胞株の構築
ヒトクローディン１８．１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ５６８５６）の全長配列を含むプ
ラスミド遺伝子クローディン１８．１－ｐｕｃ５７－Ａｍｐ（蘇州鴻迅生物、Ｓｙｎｂｉ
ｏＴｅｃｈ）を合成した。該プラスミドをテンプレートとし、上流プライマー５’－ｔｔ
ｇｇｃａａａｇａａｔｔｇｃｔａｇａｔｇｔｃｃａｃｃａｃｃａｃａｔｇｃｃ－３’及び
下流プライマー５’－ｔｇｔｔｃｇｇｇｃｃｃｔｃｃｔｃｇａｔｔａｃａｃａｔａｇｔｃ
ｇｔｇｃｔｔｇｇ－３’を使用して、ヒトクローディン１８．１の全長断片（Ｍｅｔ１－
Ｖａｌ２６１）をＰＣＲで増幅した。増幅産物を、ＮＥＢｕｉｌｄｅｒ ＨｉＦｉ ＤＮ
Ａ Ａｓｓｅｍｂｌｙ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（ＮＥＢ、Ｃａｔ：Ｍ０５３０Ｌ）により
酵素に連結した後、真核発現プラスミドシステムにクローニングした。同様に、ヒトクロ
ーディン１８．２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ５６８５６－２）の全長配列を含むプラスミ
ド遺伝子クローディン１８．２－ｐｕｃ５７－Ａｍｐ（蘇州鴻迅生物、ＳｙｎｂｉｏＴｅ
ｃｈ）を合成した。該プラスミドをテンプレートとし、上流プライマー５’－ｔｔｇｇｃ
ａａａｇａａｔｔｇｃｔａｇａｔｇｇｃｃｇｔｇａｃｔｇｃｃｔｇｔｃ－３’及び下流プ
ライマー５’－ｔｇｔｔｃｇｇｇｃｃｃｔｃｃｔｃｇａｔｔａｃａｃａｔａｇｔｃｇｔｇ
ｃｔｔｇｇ－３’を使用して、ヒトクローディン１８．２の全長断片（Ｍｅｔ１－Ｖａｌ
２６１）をＰＣＲで増幅した。増幅産物を、ＮＥＢｕｉｌｄｅｒ ＨｉＦｉ ＤＮＡ Ａ
ｓｓｅｍｂｌｙ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（ＮＥＢ、Ｃａｔ：Ｍ０５３０Ｌ）により酵素に
連結した後、真核発現プラスミドシステムにクローニングした。このプラスミドをそれぞ
れＮＩＨ３Ｔ３細胞とＨＥＫ２９３細胞に電気的に形質転換し、１～１０μｇ／ｍＬのＰ
ｕｒｏｍｙｃｉｎ（Ｇｉｂｃｏ、Ｃａｔ：Ａ１１１３８０３）を使用して安定発現細胞株
を段階的に加圧してスクリーニングした。
得られたＨＥＫ２９３－クローディン１８．１及びＨＥＫ２９３－クローディン１８．
２安定形質転換細胞株について、まずＲＴ－ＰＣＲ方法で検証した。Ｔｒｉｚｏｌ ＲＮ
Ａ抽出キットを使用して陽性クローン細胞から全ＲＮＡを抽出し、逆転写キット（Ｓｕｐ
ｅｒＳｃｒｉｐｔＴＭ Ｆｉｒｓｔ－Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ
、Ｃａｔ：１８０８００５１）を使用して、Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）プライマーを使用して逆
転写を行い、ｃＤＮＡライブラリを得た。クローディンの２つのスプライス断片であるク
ローディン１８．１とクローディン１８．２は、Ｎ末端から１番目の細胞外領域（Ｌｏｏ
ｐ １）までが異なるため、プライマーＫＮＢ１４（５’－ｔｇｔｇｃｇｃｃａｃｃａｔ
ｇｇｃｃｇｔｇ－３’）、ＫＮＢ１５（５’－ｔｇｇａａｇｇａｔａａｇａｔｔｇｔａｃ
ｃ－３’）を設計することにより、クローディン１８．１とクローディン１８．２のＬｏ
ｏｐ １からＣ末端までの領域（５０４ｂｐ）を増幅することができる。プライマーＫＮ
Ｂ１６（５’－ｔｇｇｇｔｇｃｃａｔｔｇｇｃｃｔｃｃｔｇ－３’）を設計することによ
り、クローディン１８．２のＮ末端に特異的に相補的に結合し、クローディン１８．１の
Ｎ末端領域に結合せず、クローディン１８．２のＮ末端からＣ末端までの全長断片（７８
０ｂｐ）のみを増幅して、クローディン１８．２を発現するＫＡＴＯ ＩＩＩ細胞（ＡＴ
ＣＣ ＨＴＢ－１０３）を陽性対照とした。結果を図１に示す。ＲＴ－ＰＣＲにより、Ｈ
ＥＫ２９３安定形質転換細胞株がそれぞれクローディン１８．１及びクローディン１８．
２を発現することが示されている。ＨＥＫ２９３－クローディン１８．２安定形質転換細
胞株及び対照ＫＡＴＯ ＩＩＩ細胞は、いずれもクローディン１８．２の特異的な７８０
ｂｐの特徴的なバンドを増幅することができ、ＨＥＫ２９３－クローディン１８．１は、
５０４ｂｐの共通断片のみを増幅することができる。
構築された安定形質転換細胞株ＨＥＫ２９３－クローディン１８．２細胞及びＮＩＨ３
Ｔ３－クローディン１８．２細胞を消化して収集し、ＰＢＳで２回洗浄し、管あたり１：
２００で希釈された第１の抗体ウサギ抗クローディン１８．２（Ａｂｃａｍ、ＥＰＲ１９
２０２、品番：ａｂ２２２５１２）を１００μＬ加え、４℃で６０分間培養し、０．５％
ＢＳＡ／ＰＢＳで余分な第１の抗体溶液を洗浄し、さらに５０μＬの第２の抗体ヤギ抗
ウサギＩｇＧＦｃ－ＡＦ６４７（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、品番
：１１１－６０６－０４６）を加え、４℃で４５分間インキュベートし、その後に０．５
％ ＢＳＡ／ＰＢＳで余分な第２の抗体を洗浄し、最後に１００μＬのＰＢＳ溶液で細胞
を再懸濁させ、直ちにフローサイトメーターで検出した。結果を図２、図３に示す。
図２は、ＦＡＣＳ実験により、クローディン１８．２の全長遺伝子をトランスフェクト
したＨＥＫ２９３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株を検出した結果を示してい
る。図中、黒色点は、トランスフェクトされていないＨＥＫ２９３細胞であり、灰色点は
、ＨＥＫ２９３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株であり、ＨＥＫ２９３細胞は
、クローディン１８．２を発現させず、ＨＥＫ２９３－クローディン１８．２安定形質転
換細胞株は、細胞膜表面にクローディン１８．２を高度に発現させている。
図３は、ＦＡＣＳ実験により、クローディン１８．２がＮＩＨ３Ｔ３－クローディン１
８．２において高度に発現した安定形質転換細胞株を検出した結果を示している。図中、
黒色の線は、陰性対照であり、灰色の陰影は、３Ｔ３－クローディン１８．２安定形質転
換細胞株である。ＮＯ．３２－Ｈは、クローディン１８．２が高度に発現した３Ｔ３－ク
ローディン１８．２安定形質転換細胞株であり、ＮＯ．１８－Ｍは、クローディン１８．
２が中度に発現した３Ｔ３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株であり、ＮＯ．６
－Ｌは、クローディン１８．２が低度に発現した３Ｔ３－クローディン１８．２安定形質
転換細胞株である。
増殖された陽性の安定形質転換細胞株を収集して凍結保存し、ＮＩＨ３Ｔ３－クローデ
ィン１８．２安定形質転換細胞株が動物の免疫に用いられる。
２）ハイブリドーマからの抗クローディン１８．２モノクローナル抗体の調製
６～８週間の雌性Ｂａｌｂ／ｃマウスに対して、３Ｔ３－クローディン１８．２安定形
質転換細胞又はクローディン１８．２をコードするプラスミドでそれぞれ免疫を行い、又
は交互に免疫を行った。細胞で免疫を行う場合、毎回１×１０６ ３Ｔ３－クローディン
１８．２安定形質転換細胞を完全フロイントアジュバント又は不完全フロイントアジュバ
ントと混合した後、大腿部と足蹠に注射し、２週間後に異なる部位で再び免疫した。ＤＮ
Ａで免疫を行う場合、２０μｇのプラスミドを１μｇのＣｐＧと混合した後、遺伝子銃（
Ｂｉｏｒａｄ）を用いて４０ｐｓｉでマウスの腹部に直接投与し、毎週１回免疫した。融
合準備の３日前に、高発現のＨＥＫ２９３－クローディン１８．２安定形質転換細胞株を
１×１０６細胞／５０μＬ／匹とし、ショック免疫のために尾静脈注射した。３日後、マ
ウスを殺し、膝窩リンパ節、鼠径リンパ節及び腸骨リンパ節を収集し、ＤＭＥＭで研磨し
てＢ細胞に富む懸濁液を得、マウスの脾臓を取り出し、ＤＭＥＭで研磨した後に遠心分離
し、脾臓細胞懸濁液を得た。適量のリンパ節及び脾細胞の懸濁液とＳＰ２／０を混合して
、エレクトロフュージョン装置を用いて細胞融合を行った。
３）抗クローディン１８．２ファージ抗体ライブラリの構築
収集された一部のマウス脾臓と末梢リンパ節の細胞懸濁液に対して、Ｔｒｉｚｏｌ Ｒ
ＮＡ抽出キットで全ＲＮＡを抽出し、逆転写キット（ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ Ｆｉｒｓ
ｔ－Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ、品番１８０８００５１）を用い
て、軽鎖、重鎖の特異的プライマーを使用して逆転写を行い、それぞれ抗体の軽鎖、重鎖
ｃＤＮＡライブラリを得た。当該ｃＤＮＡをテンプレートとし、軽鎖、重鎖可変領域プラ
イマーＰＣＲで抗体の軽鎖、重鎖可変領域断片を増幅し、ヒト抗体軽鎖定常領域Ｃｋａｐ
ｐａ又はヒトＩｇＧ１重鎖定常領域ＣＨ１を含むファージプラスミド担体に制限酵素クロ
ーニングし、それぞれキメラ軽鎖ライブラリと重鎖ライブラリを形成した。軽鎖ライブラ
リにおける抗体断片をＢｓｐＱＩとＳｆｉＩで二重酵素切断した後、重鎖ライブラリに連
結し、糸状ファージＭ１３に基づくマウスキメラＦａｂファージ表示ライブラリを形成し
、ライブラリサイズは１．２×１０１０個であった。０．８ｍＬのファージ（力価が約１
ｘ１０１３／ｍＬである）と２００μＬの５％ＢＳＡ／ＰＢＳを混合した後、１ｘ１０７
個のＨＥＫ２９３－クローディン１８．１細胞を加え、１時間氷浴し、１０００ｒｐｍで
１０分間遠心分離し、上清を収集し、上清と１ｘ１０６個のＨＥＫ２９３－クローディン
１８．２細胞を混合し、１時間氷浴し、１０００ｒｐｍで３分間遠心分離し、上清を捨て
、１％ＢＳＡ／ＰＢＳを１ｍＬ加え、５～１０回繰り返して洗浄し、１００ｍＭのＴＥＡ
（トリエチルアミン）溶解細胞を１ｍＬ加え、室温で１０分間静置し、１ＭのＴｒｉｓ－
ＨＣｌ（ｐＨ７．５）を０．５ｍＬ加えて中和した後、対数増殖期にあるＴＧ１ Ｅ．ｃ
ｏｌｉ．細胞を１０ｍＬ感染し、３７℃で３０分間静置した。分子生物学の従来のプロセ
スに従って、ファージを回収し、力価を検出し、次のスクリーニングを行った。
＜抗クローディン１８．２特異的抗体のスクリーニング及び配列取得＞
ＨＥＫ２９３－クローディン１８．１、ＨＥＫ２９３－クローディン１８．２及びＨＥ
Ｋ２９３に対して、それぞれ５μＭ、０．５μＭ及び０μＭのＣｅｌｌ Ｔｒａｃｋｅｒ
Ｇｒｅｅｎ ＣＭＦＤＡ Ｄｙｅ（Ｔｈｅｒｍｏ、品番Ｃ２９２５）で指定されたよう
に生細胞予備染色を行い、染料を洗浄した後、１：１：１で混合し、９６ウェルプレート
（２ｘ１０５細胞／ウェル）に加え、ハイブリドーマ上清又は細菌誘導上清と結合し、氷
浴で１時間インキュベートした後、ＡｌｅｘａＦｌｕｒｏ６４７で標識された第２の抗体
抗ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ Ｆｃ又は抗ヒトＩｇＧ Ｆ（ａｂ）’２（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍ
ｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を加え、氷上で４５分間インキュベートした。洗浄した後、
ＰＢＳ再懸濁細胞をウェルあたり１００μＬ加え、フローサイトメーター（ｉＱｕｅ Ｓ
ｃｒｅｅｎｅｒ）を準備し、ＦＬ２チャンネルの蛍光強度によって、それぞれ３種類の異
なる細胞群を特定した後、ＦＬ４チャンネルの被験抗体と各細胞群の結合状況を検出した
。スクリーニングした抗体は、高い親和性でＨＥＫ２９３－クローディン１８．２安定形
質転換細胞に特異的に結合し、ＨＥＫ２９３－クローディン１８．１安定形質転換細胞及
びＨＥＫ２９３細胞には結合しなかった。ＦＡＣＳ検出により、クローディン１８．２に
結合できるがクローディン１８．１に結合しないクローンをハイブリドーマ細胞から合計
３２０個スクリーニングし、３回のｐａｎｎｉｎｇを経て、クローディン１８．２に高い
親和性で結合するがクローディン１８．１に結合しないクローンをファージＦａｂライブ
ラリから６２個スクリーニングした。
ファージライブラリからスクリーニングした陽性クローンに対して、プラスミドを抽出
して配列を決定し、全長ＩｇＧ発現のために重鎖及び軽鎖定常領域担体に可変領域配列を
クローニングした。ハイブリドーマから得られた陽性細胞において、ＴＲＮｚｏｌを１ｍ
Ｌ加えて***分解し、グアニジンイソチオシアネート法で全ＲＮＡを抽出した。これをテ
ンプレートとし、第一鎖ｃＤＮＡを合成した後、第一鎖ｃＤＮＡを後続のテンプレートと
してハイブリドーマ細胞に対応する可変領域ＤＮＡ配列を増幅した。増幅産物の配列決定
した後、候補ハイブリドーマの重鎖及び軽鎖可変領域配列を得た（以下のとおりである）
。
クローン８Ｃ１１：配列番号１－１０
重鎖ＶＨ
＜－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－
－ＦＲ２－－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＦＧＩＮＷＶＲＱ
ＲＰＥＱＧＬＥＷＩＧＷＩＦＰＧＤＧＳＩＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＴＤＫＳＳＳ
－－－－－－ＦＲ３－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－－ＦＲ４－－
－＞
ＴＡＹＭＱＩＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＦＹＹＧＮＳＦＶＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶ
ＳＡ
核酸配列
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＡＡＧ
ＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＴＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴ
ＡＣＡＣＡＴＴＣＡＣＡＡＣＴＴＴＴＧＧＴＡＴＡＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＧＧＣＡＧＡＧ
ＧＣＣＴＧＡＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＡＴＧＧＡＴＴＴＴＴＣＣＴ
ＧＧＡＧＡＴＧＧＴＡＧＴＡＴＴＡＡＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡ
ＡＧＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＴＡＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＴＡ
ＣＡＴＧＣＡＧＡＴＣＡＧＣＡＧＴＴＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＧＧＣＴＧＴＣ
ＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＧＧＴＴＣＴＡＣＴＡＴＧＧＴＡＡＣＴＣＣＴＴＴＧＴＴＴ
ＣＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＣＡ
軽鎖
＜－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１
＜－－－－－ＦＲ２－－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－－－－－
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＶＴＡＧＥＫＶＴＭＴＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬ
ＴＷＹＱＱＲＰＧＱＰＰＫＬＬＬＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦ
ＦＲ３－－－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－ＦＲ４－－－＞
ＡＬＴＩＴＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＮＤＹＴＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ
核酸配列
ＧＡＣＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＧＣＴＧＴＧ
ＡＣＴＧＣＡＧＧＡＧＡＧＡＡＧＧＴＣＡＣＴＡＴＧＡＣＣＴＧＣＡＡＧＴＣＣＡＧＴＣ
ＡＧＡＧＴＣＴＧＴＴＡＡＡＣＡＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＡＧＡＡＣＴＡＣＴＴＧＡＣ
ＣＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＧＡＧＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＴＡＡＡＣＴＴＴＴＧ
ＣＴＣＴＡＣＴＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＡＧＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣ
ＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＡＣＡＧＡＴＴＴＣＧＣＴＣＴＣＡＣ
ＣＡＴＣＡＣＣＡＧＴＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣ
ＴＧＴＣＡＧＡＡＴＧＡＴＴＡＴＡＣＴＴＡＴＣＣＡＴＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＣＴＣＧＧ
ＧＧＡＣＡＡＡＧＴＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡ
クローン９Ａ８：配列番号１１－２０
重鎖
＜－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－
－ＦＲ２－－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－
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クローン９Ｃ９：配列番号２１－３０
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クローン９Ｄ１２：配列番号３１－４０
重鎖
＜－－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－
－－ＦＲ２－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－
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重鎖
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クローン１５Ａ７：配列番号６１－７０
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クローン１５Ｄ１１：配列番号７１－８０
重鎖
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核酸配列
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クローン１５Ｆ９：配列番号８１－９０
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クローン１８Ａ９：配列番号９１－１００
重鎖
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核酸配列
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クローン１８Ｇ５：配列番号１０１－１１０
重鎖
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クローン１８Ｄ１０：配列番号１１１－１２０
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クローン１９Ｂ２：配列番号１２１－１３０
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クローン２５Ａ５：配列番号１３１－１４０
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クローン２５Ｆ５：配列番号１４１－１５０
重鎖
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ＱＶＱＬＫＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＬＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＹＧＩＮＷＶＲＱ
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ＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦ
ＦＲ３－－－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－ＦＲ４－－－＞
ＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＮＡＹＹＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫ
核酸配列
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上記重鎖及び軽鎖可変領域配列断片をＰＣＲで増幅し、ヒト重鎖定常領域を含む担体に
重鎖可変領域をクローニングすることにより、哺乳動物細胞に完全なＩｇＧ１重鎖を発現
させた。同様に、ヒト軽鎖定常領域を含む担体に軽鎖可変領域をクローニングすることに
より、哺乳動物細胞に完全なｋａｐｐａ軽鎖を発現させた。配列を正しく決定した後にＨ
ＥＫ２９３－６Ｅ哺乳動物細胞にトランスフェクトし、ＩｇＧ１を発現させ、培地中に分
泌させ、合わせて上清を収集し、濾過して精製した。Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａクロマトグラフ
ィーを用いてＩｇＧを精製し、培養上清を適切な大きさのＰｒｏｔｅｉｎ Ａカラムにロ
ーディングし、５０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．０）と２５０ｍＭのＮａＣｌで洗
浄し、結合したＩｇＧを０．１ＭのＧｌｙｃｉｎｅ－ＨＣｌ（ｐＨ３．０）で溶出した。
濃縮管（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いてタンパク質を限外濾過により濃縮し、ＯＤ２８０
を検出し、分光光度法によりＩｇＧの濃度を測定した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥを用いてＩｇＧ
の純度を分析した。
対数増殖期にあるＨＥＫ２９３－クローディン１８．１細胞、ＨＥＫ２９３－クローデ
ィン１８．２細胞及びＨＥＫ２９３細胞を消化した後に、５×１０４細胞／１００μＬで
９６ウェルＵ底プレートに加え、１１００ｒｐｍで３分間遠心分離し、上清を捨て、細胞
を軽く振動させて分散させ、段階希釈された抗体（抗体濃度を１００ｎＭから８段階に５
倍希釈した）をウェルあたり５０μＬ加え、４℃で１時間インキュベートした。インキュ
ベートが終了した後、０．５％ＢＳＡをウェルあたり１４０μＬ加えて３回洗浄し、３０
μＬ／ウェルの第２の抗体ＡｌｅｘａＦｌｕｒｏ６４７抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ
ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、品番：１０９－６０６－１７０）を加え、４℃で４０分
間インキュベートした。インキュベートが終了した後、０．５％ＢＳＡをウェルあたり１
４０μＬ加えて３回洗浄し、最後にウェルあたり５０μＬのＰＢＳに再懸濁させ、フロー
サイトメーター（ｉＱｕｅ Ｓｃｒｅｅｎｅｒ）で検出した。結果を図４及び表１に示す
。図４においては、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）によると、得られたキメラクロー
ディン１８．２ ＩｇＧ１抗体は、クローディン１８．２をトランスフェクトしたＨＥＫ
２９３－クローディン１８．２細胞のみを認識し（図４Ｂ）、ＨＥＫ２９３（図４Ａ）及
びＨＥＫ２９３－クローディン１８．１（図４Ｃ）といずれも結合しないことを示してい
る。
＜抗体の細胞内取り込み実験＞
対数増殖期にある細胞を予熱培地で１回洗浄し、１０００ｒｐｍで３分間遠心分離し、
上清を捨て、血清を含まない培地を加えて、細胞を１×１０６細胞／ｍＬに再懸濁させ、
細胞をＥＰ管に２００μＬ／管で吸引し、予冷された０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳを５００μ
Ｌ加え、１０００ｒｐｍで３分間遠心分離し、上清を捨て、１０μｇ／ｍＬの抗体を加え
、３７℃で１５分間、３０分間、６０分間、１２０分間、１８０分間、２４０分間それぞ
れインキュベートし、各時点で第１の抗体のインキュベートが終了した後、予冷された０
．５％ＢＳＡ／ＰＢＳを５００μＬ加えて２回洗浄し、次に１：３００で希釈された第２
の抗体を直接加えて４５分間インキュベートした。第２の抗体のインキュベートが終了し
た後、５００μＬの０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳで２回洗浄し、細胞を２００μＬに再懸濁さ
せてＦＡＣＳ検出を行った。結果は図５に示すとおり、１５Ｄ１１、１５Ｆ９、１８Ａ９
及び１８Ｄ１０などの抗体は、細胞内取り込みを媒介する機能を有することが分かった。
＜抗クローディン１８．２抗体のヒト化＞
選択されたモノクローナル抗体の可変領域配列をヒト胚抗体配列と比較し、相同性が高
い配列を見つけてＣＤＲ移植を行い、その後にコンピュータを利用して相同性モデリング
を行い、ＣＤＲ領域及びその周辺のフレームワークアミノ酸配列を分析し、その空間立体
結合方式を考察した。静電気力、ファンデルワールス力、親疎水性、及びエントロピーを
計算することによって、陽性モノクローナル抗体の遺伝子配列における、標的と相互作用
し空間的フレームワークを維持し得る重要な個々のアミノ酸を分析し、これに基づいて復
帰変異部位を設計した。ＨＬＡ－ＤＲの親和性を分析して考察し、免疫原性の低いヒト胚
フレームワーク配列を選択した。発酵過程において修飾され得るアミノ酸残基を分析し、
かつ突然変異を設計することにより修飾が発生する可能性を低減した。
設計して異なる重鎖誘導体及び軽鎖誘導体を得、軽鎖、重鎖誘導体をそれぞれ全配列合
成した後、抗体ｋａｐｐａ鎖定常領域Ｃｋａｐｐａ又はヒトＩｇＧ１定常領域ＣＨ１－Ｃ
Ｈ３を含む担体にクローニングし、同様な親本由来の軽鎖、重鎖誘導体プラスミドを組み
合わせてペアリングした後、ＨＥＫ２９３．６Ｅ細胞をトランスフェクトし、５～６日間
発現させ、上清を収集してＰｒｏｔｅｉｎ Ａカラムにより精製した。ヒト化抗体の可変
領域配列は以下のとおりである。
１５Ｆ９ＶＨｖ５：配列番号１５１－１５５
＜－－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－
－－ＦＲ２－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－
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１５Ｆ９ＶＨｖ５ｒ１：配列番号１５６－１６０
＜－－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－
－－ＦＲ２－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－
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１５Ｆ９ＶＨｖ５ｒ２：配列番号１６１－１６５
＜－－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－
－－ＦＲ２－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－
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－＞
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１５Ｆ９ＶＨｖ６：配列番号１６６－１７０
＜－－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－
－－ＦＲ２－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－
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－－－－－－ＦＲ３－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－－ＦＲ４－－
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核酸配列
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１８Ａ９ＶＨｖ１：配列番号１７１－１７５
＜－－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－
－－ＦＲ２－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－
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核酸配列
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１８Ａ９ＶＨｖ２：配列番号１７６－１８０
＜－－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－
－－ＦＲ２－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－
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核酸配列
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１８Ａ９ＶＨｖ３：配列番号１８１－１８５
＜－－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－
－－ＦＲ２－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－
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核酸配列
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１８Ａ９ＶＨｖ４：配列番号１８６－１９０
＜－－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－
－－ＦＲ２－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＬＩＤＷＶＲＱ
ＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＮＰＧＳＧＤＴＶＹＮＥＫＦＱＧＲＶＴＬＴＡＤＫＳＳＭ
－－－－－－ＦＲ３－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－－ＦＲ４－－
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核酸配列
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１８Ａ９ＶＨｖ５：配列番号１９１－１９５
＜－－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－
－－ＦＲ２－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＰＳＧＹＴＦＴＮＹＬＩＤＷＶＲＱ
ＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＮＰＧＳＧＤＴＶＹＮＥＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳ
－－－－－－ＦＲ３－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－－ＦＲ４－－
－＞
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核酸配列
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ＴＡＣＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＡＧＡＧＴＧＣＧＧＧＧＣＡＡＣＡＧＣＴＴＣＧＡＴＴ
ＣＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＴＴＣＴＴＣＴ
１８Ａ９ＶＨｖ６：配列番号１９６－２００
＜－－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－
－－ＦＲ２－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＰＳＧＹＡＦＴＮＹＬＩＤＷＶＲＱ
ＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＮＰＧＳＧＤＴＶＹＮＥＫＦＱＧＲＶＴＬＴＡＤＫＳＳＳ
－－－－－－ＦＲ３－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－－ＦＲ４－－
－＞
ＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＲＶＲＧＮＳＦＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶ
ＳＳ
核酸配列
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＴＣＡＧＴＣＴＧＧＣＧＣＣＧＡＡＧＴＧＡＡＧＡＡＡ
ＣＣＴＧＧＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＣＣＴＴＣＴＧＧＣＴ
ＡＣＧＣＣＴＴＣＡＣＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＡＴＣＧＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣ
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ＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＡＴＡＣＡＧＴＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣＡ
ＧＡＧＴＧＡＣＣＣＴＧＡＣＣＧＣＣＧＡＣＡＡＧＴＣＴＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡ
ＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＡＧＣＧＡＧＧＡＴＡＣＣＧＣＣＧＴＧ
ＴＡＣＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＡＧＡＧＴＧＣＧＧＧＧＣＡＡＣＡＧＣＴＴＣＧＡＴＴ
ＣＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＴＴＣＴＴＣＴ
１８Ａ９ＶＨｖ７：配列番号２０１－２０５
＜－－－－－－－－－－－ＦＲ１－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ１ ＜－－－
－－ＦＲ２－－－－＞ ＣＤＲ２ ＜－－－－－－－－－－
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１８Ｄ１０ＶＨｖ１：配列番号２０６－２１０
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１８Ｄ１０ＶＨｖ４：配列番号２２１－２２５
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１８Ｄ１０ＶＨｖ５：配列番号２２６－２３０
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１８Ｄ１０ＶＨｖ６：配列番号２３１－２３５
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ＦＲ３－－－－－－－－－－－－－＞ ＣＤＲ３ ＜－－ＦＲ４－－－＞
ＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＡＹＳＦＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
核酸配列
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ＡＴＣＴＡＣＴＧＧＧＣＣＡＧＣＡＣＣＡＧＡＧＡＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＡＧＡＴＡ
ＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＡＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣ
ＡＡＴＣＡＧＣＴＣＣＣＴＧＣＡＧＧＣＣＧＡＧＧＡＴＧＴＧＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣ
ＴＧＴＣＡＧＣＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＣＴＴＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧ
ＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧ
＜抗クローディン１８．２ヒト化抗体の生物学的活性検出＞
１）ヒト化抗体の親和性測定（ＥＣ５０）
対数増殖期にある細胞を３％ＢＳＡで３０分間密封し、５×１０４細胞／１００μＬで
９６ウェルＵ底プレートに播き、１１００ｒｐｍで３分間遠心分離し、上清を捨て、細胞
を軽く振動させて分散させ、段階希釈された抗体（抗体濃度を１００ｎＭから８段階に５
倍希釈した）をウェルあたり５０μＬ加え、４℃で１時間インキュベートした。インキュ
ベートが終了した後、０．５％ＢＳＡをウェルあたり１４０μＬ加えて３回洗浄し、３０
μＬ／ウェルでＡＦ ６４７ ＡＰＣ抗ヒト第２の抗体を加えて４℃で４０分間インキュ
ベートした。インキュベートが終了した後、０．５％ＢＳＡをウェルあたり１４０μＬ加
えて３回洗浄し、最後にウェルあたり５０μＬのＰＢＳに再懸濁させ、ｉＱｕｅ（Ｉｎｔ
ｅｌｌｉｃｙｔ、ＵＳＡ）検出を行った（表２参照）。
２）抗クローディン１８．２ヒト化抗体による腫瘍細胞のＡＤＣＣ殺傷活性
新しく抽出した血液を３０ｍＬ収集して５０ｍＬの遠心管に加え、１５ｍＬの１×ＰＢ
Ｓと均一に混合し、別の５０ｍＬの遠心管にＦｉｃｏｌｌ．Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕを２０ｍ
Ｌ加え、次に上記希釈された新鮮な血液３０ｍＬを軽く加えてＦｉｃｏｌｌ．Ｐａｑｕｅ
Ｐｌｕの表面に広げ、それを２０℃に置き、２０００ｒｐｍで３０分間遠心分離した。
遠心分離が終了した後、使い捨て吸引管を用いて遠心管中の最上層の血清を吸引し、上か
ら下まで４層の液体のうち第２層の白膜層（即ちＰＢＭＣ）を管あたり１０ｍＬで５０ｍ
Ｌの遠心管に吸引した。分離して得られたＰＢＭＣを、その体積の３倍よりも大きい１×
ＰＢＳに加えて均一に混合し、４℃で１０分間、１３００ｒｐｍで遠心分離し、上清を吸
引して除去した後、１０ｍＬの１×ＰＢＳを加えて再懸濁してカウントした。
ＰＢＭＣを３７℃の５％ＣＯ２インキュベーターに置いて２時間培養した。１３００ｒ
ｐｍで１０分間遠心分離し、上清を除去し、予熱された２．５％ＦＢＳ／ＲＰＭＩ １６
４０培地に懸濁させ、密度を８×１０６細胞／ｍＬに調整し、５０μＬ／ウェル、即ち４
×１０５細胞／ウェルで９６ウェルＵ底プレートに敷き、次に希釈された抗体（４０μｇ
／ｍＬから６段階に２倍希釈した）を２５μＬ／ウェルで加え、３７℃で５％ＣＯ２イン
キュベーターにおいて３０分間培養した。３０分間インキュベートした後、希釈されたＫ
ａｔｏ ＩＩＩ細胞を８×１０３細胞／ウェルで２５μＬ加え、３７℃でＣＯ２５％のイ
ンキュベーターに置いて４時間培養を続けた。検出の３０分前に、ウェルの最も大きい標
的細胞に溶離液（１０×）を２μＬ加え、そのまま培養を続けた。４時間後に、１０００
ｒｐｍで３分間遠心分離し、５０μＬの上清を黒色のマイクロタイタープレートに入れ、
ＬＤＨを加えて、基質を５０μＬ／ウェルで検出し、１０分後に停止溶液を２５μＬ／ウ
ェルで加えて反応を停止させ、マイクロプレートリーダー（Ｂｉｏｔｅｋ）を用いて読み
取った。
結果は以下のとおりに算出する。
結果は図６に示したとおり、ヒト化組み換えた抗体１８Ｄ１０、１８Ａ９及び１５Ｆ９
は、いずれも強いＡＤＣＣ活性を維持していることが分かった。
３）抗クローディン１８．２ヒト化抗体による腫瘍細胞のＣＤＣ細胞殺傷活性
対数増殖期にあるＫａｔｏ ＩＩＩ細胞をＰＢＳで洗浄した後に、密度１×１０７細胞
／ｍＬに再懸濁させ、一定量のＣＦＳＥ（Ｓｉｇｍａ、８７４４４－５ＭＧ－Ｆ）を加え
てその終濃度を１μＭにした。細胞を室温で置いて１０分間インキュベートした後、３倍
体積の培地を追加して終了し、４℃で５分間、１０００ｒｐｍで遠心分離し、培地を追加
して細胞の密度を２×１０６細胞／ｍＬに調整した。懸濁した細胞を５０μＬ／ウェルで
９６ウェルプレートに播き、それぞれ希釈された抗体（抗体を３０μｇ／ｍＬから０．１
２μｇ／ｍＬまで５段階に３倍希釈した）を５０μＬ／ウェルで加え、最後に培地を用い
て３０％に希釈した補体を５０μＬ／ウェルで加えた。５％ＣＯ２インキュベーター内に
置いて２時間培養した後、取り出して１０００ｒｐｍで３分間遠心分離し、上清を捨て、
１：２００で希釈されたＰＩ及び５×１０４個／ウェルのＳｕｌｆａｔｅ ｌａｔｅｘ（
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓ３７２２７）を均一に混合し、９６ウェルプレートに１００μ
Ｌ／ウェルで加え、氷上で１０分間インキュベートした後にＦＡＣＳ検出を行った。結果
は図７に示したとおり、ヒト化組み換えた抗体１８Ｄ１０及び１５Ｆ９は、いずれも強い
ＣＤＣ効果を有することが分かった。
４）ヒト化抗体の細胞内取り込み作用
ＰＢＳで１０μｇ／ｍＬのポリリジン溶液を調製し、２４ウェルプレートにウェルあた
り０．５ｍＬ加え、３７℃で静置して１５～３０分間インキュベートした。２×１０４細
胞／ウェルで細胞を接種し、予熱されたＤＭＥＭ培地で１０μｇ／ｍＬの抗体溶液を調製
し、ウェルプレート中の上清を吸引し、対応する抗体を含む培地をウェルあたり０．５ｍ
Ｌ加え、３７℃のインキュベーターで３０分間インキュベートした。上清を丁寧に吸引し
、ＰＢＳを０．５ｍＬ加え、５分間静置し、上記操作を繰り返して３回洗浄した。各ウェ
ルに１０％ホルムアルデヒドを加え、２０～４０分間固定した。ホルムアルデヒドを丁寧
に吸引・除去し、０．２％Ｔｒｉｔｏｎ－ＰＢＳを０．５ｍＬ加え、５分間静置し、上記
操作を繰り返して３回洗浄した。ＰＢＳでＡＦ５９４－Ｆ（ａｂ’）２ヤギ抗ｈＩｇＧ（
Ｈ＋Ｌ）第２の抗体溶液（１：３００）を調製し、ウェルあたり１００μＬ加え、室温で
４５分間インキュベートした。第２の抗体溶液を丁寧に吸引・除去し、０．２％Ｔｒｉｔ
ｏｎ－ＰＢＳを０．５ｍＬ加え、５分間静置し、上記操作を繰り返して３回洗浄した。８
μｇ／ｍＬのヒトＬａｍｐ－１／ＣＤ １０７ａ ＭＡｂを調製し、ウェルあたり１００
μＬ加え、室温で４５分間インキュベートした。抗体溶液を丁寧に吸引・除去し、０．２
％Ｔｒｉｔｏｎ－ＰＢＳを０．５ｍｌ加え、５分間静置し、上記操作を繰り返して３回洗
浄した。ＰＢＳでＡＦ４８８－Ｆ（ａｂ’）２ヤギ抗ｍＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）溶液（１：３０
０）を調製し、ウェルあたり１００μＬ加え、室温で４５分間インキュベートした。上清
を丁寧に吸引・除去し、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ－ＰＢＳを０．５ｍＬ加え、５分間静置し
、上記操作を繰り返して３回洗浄した。ＰＢＳで１μｇ／ｍＬのＤＡＰＩ溶液を調製し、
室温で５分間染色し、上清を丁寧に吸引・除去し、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ－ＰＢＳを０．
５ｍＬ加え、５分間静置し、上記操作を繰り返して３回洗浄した。９０％グリセリンで密
封し、写真を撮った。結果は図８に示したとおり、ヒト化Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２抗体が
主に細胞膜に結合し、一部の抗体は細胞内に取り込まれた後にリソソームに入ることがで
きる（矢印に示されたとおりである）ことが分かった。

Claims (10)

  1. アミノ酸配列の配列番号２－４、１２－１４、２２－２４、３２－３４、４２－４４、
    ５２－５４、６２－６４、７２－７４、８２－８４、９２－９４、１０２－１０４、１１
    ２－１１４、１２２－１２４、１３２－１３４、１４２－１４４、１５２－１５４、１５
    ７－１５９、１６２－１６４、１６７－１６９、１７２－１７４、１７７－１７９、１８
    ２－１８４、１８７－１８９、１９２－１９４、１９７－１９９、２０２－２０４、２０
    ７－２０９、２１２－２１４、２１７－２１９、２２２－２２４、２２７－２２９、２３
    ２－２３４又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ、及び／又は、アミノ酸
    配列の配列番号７－９、１７－１９、２７－２９、３７－３９、４７－４９、５７－５９
    、６７－６９、７７－７９、８７－８９、９７－９９、１０７－１０９、１１７－１１９
    、１２７－１２９、１３７－１３９、１４７－１４９、２３７－２３９、２４２－２４４
    、２４７－２４９、２５２－２５４、２５７－２５９、２６２－２６４、２６７－２６９
    又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖ＣＤＲを含む、ヒトクローディン１８．２
    に結合する抗体又はその抗原結合部分。
  2. アミノ酸配列の配列番号２、１２、２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２
    、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、１５７、１６２、１６７、１７２
    、１７７、１８２、１８７、１９２、１９７、２０２、２０７、２１２、２１７、２２２
    、２２７、２３２又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列
    の配列番号３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１
    ３、１２３、１３３、１４３、１５３、１５８、１６３、１６８、１７３、１７８、１８
    ３、１８８、１９３、１９８、２０３、２０８、２１３、２１８、２２３、２２８、２３
    ３又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ２、アミノ酸配列の配列番号４、
    １４、２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１
    ３４、１４４、１５４、１５９、１６４、１６９、１７４、１７９、１８４、１８９、１
    ９４、１９９、２０４、２０９、２１４、２１９、２２４、２２９、２３４又はそれらの
    任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ３、及び／又は、アミノ酸配列の配列番号７、１
    ７、２７、３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３
    ７、１４７、２３７、２４２、２４７、２５２、２５７、２６２、２６７又はそれらの任
    意の変異体から選択された軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列の配列番号８、１８、２８、３８
    、４８、５８、６８、７８、８８、９８、１０８、１１８、１２８、１３８、１４８、２
    ３８、２４３、２４８、２５３、２５８、２６３、２６８又はそれらの任意の変異体から
    選択された軽鎖ＣＤＲ２、アミノ酸配列の配列番号９、１９、２９、３９、４９、５９、
    ６９、７９、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、２３９、２４４、
    ２４９、２５４、２５９、２６４、２６９又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖
    ＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合部分。
  3. アミノ酸配列の配列番号１、１１、２１、３１、４１、５１、６１、７１、８１、９１
    、１０１、１１１、１２１、１３１、１４１、１５１、１５６、１６１、１６６、１７１
    、１７６、１８１、１８６、１９１、１９６、２０１、２０６、２１１、２１６、２２１
    、２２６、２３１又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、
    アミノ酸配列の配列番号６、１６、２６、３６、４６、５６、６６、７６、８６、９６、
    １０６、１１６、１２６、１３６、１４６、２３６、２４１、２４６、２５１、２５６、
    ２６１、２６６又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、請求項１
    又は２に記載の抗体又はその抗原結合部分。
  4. （１）それぞれ配列番号１５２－１５４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配
    列、及び／又はそれぞれ配列番号２３７－２３９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤ
    Ｒ３配列、（２）それぞれ配列番号１５２－１５４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣ
    ＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４２－２４４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２
    及びＣＤＲ３配列、（３）それぞれ配列番号１５２－１５４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ
    ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４７－２４９を含む軽鎖ＣＤＲ１、
    ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（４）それぞれ配列番号１５７－１５９を含む重鎖ＣＤＲ１
    、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２３７－２３９を含む軽鎖Ｃ
    ＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（５）それぞれ配列番号１５７－１５９を含む重鎖
    ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４２－２４４を含
    む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（６）それぞれ配列番号１５７－１５９を
    含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４７－２
    ４９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（７）それぞれ配列番号１６２－
    １６４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２
    ３７－２３９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（８）それぞれ配列番号
    １６２－１６４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配
    列番号２４２－２４４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（９）それぞれ
    配列番号１６２－１６４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそ
    れぞれ配列番号２４７－２４９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１０
    ）それぞれ配列番号１６７－１６９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及
    び／又はそれぞれ配列番号２３７－２３９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配
    列、（１１）それぞれ配列番号１６７－１６９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ
    ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４２－２４４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び
    ＣＤＲ３配列、（１２）それぞれ配列番号１６７－１６９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２
    及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２４７－２４９を含む軽鎖ＣＤＲ１、Ｃ
    ＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１３）それぞれ配列番号１７２－１７４を含む重鎖ＣＤＲ１
    、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５２－２５４を含む軽鎖Ｃ
    ＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１４）それぞれ配列番号１７２－１７４を含む重
    鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５７－２５９を
    含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１５）それぞれ配列番号１７７－１７
    ９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５２
    －２５４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１６）それぞれ配列番号１
    ７７－１７９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列
    番号２５７－２５９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１７）それぞれ
    配列番号１８２－１８４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそ
    れぞれ配列番号２５２－２５４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（１８
    ）それぞれ配列番号１８２－１８４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及
    び／又はそれぞれ配列番号２５７－２５９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配
    列、（１９）それぞれ配列番号１８７－１８９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ
    ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５２－２５４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び
    ＣＤＲ３配列、（２０）それぞれ配列番号１８７－１８９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２
    及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５７－２５９を含む軽鎖ＣＤＲ１、Ｃ
    ＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２１）それぞれ配列番号１９２－１９４を含む重鎖ＣＤＲ１
    、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５２－２５４を含む軽鎖Ｃ
    ＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２２）それぞれ配列番号１９２－１９４を含む重
    鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５７－２５９を
    含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２３）それぞれ配列番号１９７－１９
    ９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２５２
    －２５４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２４）それぞれ配列番号１
    ９７－１９９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列
    番号２５７－２５９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２５）それぞれ
    配列番号２０２－２０４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそ
    れぞれ配列番号２５２－２５４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２６
    ）それぞれ配列番号２０２－２０４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及
    び／又はそれぞれ配列番号２５７－２５９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配
    列、（２７）それぞれ配列番号２０７－２０９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ
    ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６２－２６４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び
    ＣＤＲ３配列、（２８）それぞれ配列番号２０７－２０９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２
    及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６７－２６９を含む軽鎖ＣＤＲ１、Ｃ
    ＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（２９）それぞれ配列番号２１２－２１４を含む重鎖ＣＤＲ１
    、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６２－２６４を含む軽鎖Ｃ
    ＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３０）それぞれ配列番号２１２－２１４を含む重
    鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６７－２６９を
    含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３１）それぞれ配列番号２１７－２１
    ９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６２
    －２６４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３２）それぞれ配列番号２
    １７－２１９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列
    番号２６７－２６９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３３）それぞれ
    配列番号２２２－２２４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそ
    れぞれ配列番号２６２－２６４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３４
    ）それぞれ配列番号２２２－２２４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及
    び／又はそれぞれ配列番号２６７－２６９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配
    列、（３５）それぞれ配列番号２２７－２２９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ
    ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６２－２６４を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び
    ＣＤＲ３配列、（３６）それぞれ配列番号２２７－２２９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２
    及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６７－２６９を含む軽鎖ＣＤＲ１、Ｃ
    ＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３７）それぞれ配列番号２３２－２３４を含む重鎖ＣＤＲ１
    、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６２－２６４を含む軽鎖Ｃ
    ＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、（３８）それぞれ配列番号２３２－２３４を含む重
    鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、及び／又はそれぞれ配列番号２６７－２６９を
    含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列という重鎖及び軽鎖のＣＤＲ組み合わせを
    含む、前記請求項のいずれか１項に記載の抗体又はその抗原結合部分。
  5. 前記抗体又はその抗原結合部分はヒト化される、前記請求項のいずれか１項に記載の抗
    体又はその抗原結合部分。
  6. 前記請求項のいずれか１項に記載の抗体又はその抗原結合部分をコードする核酸分子、
    又はそれに対して少なくとも６０％より高く、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％
    、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％より高い配列同一性を有する核酸分
    子。
  7. 請求項６に記載の核酸を含む、担体。
  8. 請求項７に記載の担体を含む、細胞又はキット。
  9. 前記請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体又はその抗原結合部分、又は請求項６に
    記載の核酸、請求項７に記載の担体、又は請求項８に記載の細胞又はキットを含む、医薬
    組成物。
  10. 前記請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体又はその抗原結合部分、又は請求項６に
    記載の核酸、請求項７に記載の担体、又は請求項８に記載の細胞又はキット、又は請求項
    ９に記載の医薬組成物の、哺乳動物の癌を治療するための薬物又はキットの調製における
    用途であって、任意選択で、前記癌は胃癌であり、任意選択で、前記抗体は、ＡＤＣＣ又
    はＣＤＣ作用によって癌細胞を死滅させ、任意選択で、前記抗体は、その他の細胞毒性薬
    物と結合する、用途。
JP2023129054A 2019-04-19 2023-08-08 腫瘍治療薬及びその応用 Pending JP2023153984A (ja)

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