TW202208438A - 抗ｌｉｌｒｂ１抗體或其抗原結合片段、製備其的方法、藥物組成物、核酸分子、重組載體以及重組細胞 - Google Patents

抗ｌｉｌｒｂ１抗體或其抗原結合片段、製備其的方法、藥物組成物、核酸分子、重組載體以及重組細胞 Download PDF

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金韓䫾
姜信煐
金正娥
金熙恒
金旼淳
趙俊行
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Abstract

本揭露是有關於一種抗LILRB1抗體、製備其的方法、藥物組成物、核酸分子、重組載體以及重組細胞。更具體而言，提供了一種抗LILRB1抗體或其抗原結合片段及其用於癌症治療的應用。

Description

抗白血球免疫球蛋白類似受體亞族B構體1之抗體以及應用
[相關申請案的交叉參考]
本申請案主張於2020年7月28日在韓國智慧財產局提出申請的KR 10-2020-0094053的權益，其全部揭露內容倂入本案供參考。
本揭露是有關於一種抗LILRB1抗體以及其應用。更具體而言，提供了一種抗LILRB1抗體或其抗原結合片段及其用於癌症治療的應用。
白血球免疫球蛋白類似受體亞族B構體1（leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 1，LILRB1；也稱為ILT2、CD85j或LIR-1）是一種抑制性受體，在例如B細胞、T細胞、NK細胞、樹突細胞、巨噬細胞及其他免疫細胞等細胞中表現。LILRB1藉由結合經典及非經典MHC I類參與抑制免疫細胞活性的訊號轉導機制。
因此，需要開發一種靶向LILRB1的物質。
[技術問題]
一個實施例提供了一種結合LILRB1的抗LILRB1抗體或其抗原結合片段。抗LILRB1抗體或其抗原結合片段可具有抑制癌細胞免疫逃脫的活性。此外，抗LILRB1抗體或其抗原結合片段可具有抗癌作用。抗癌作用可係針對表面表現或過表現MHC I類的癌細胞。
另一實施例提供了一種用於治療及/或預防癌症的藥物組成物，所述組成物包括所述抗LILRB1抗體或其抗原結合片段作為活性成分。另一個實施例提供了一種治療及/或預防癌症的方法，所述方法包括向有此需要的受試者施用藥學有效量的所述抗LILRB1抗體或其抗原結合片段。另一實施例提供了所述抗LILRB1抗體或其抗原結合片段用於治療及/或預防癌症或用於製造治療及/或預防癌症的藥物組成物的應用。
另一實施例提供了一種用於抑制癌細胞的免疫逃脫的藥物組成物，所述藥物組成物包括所述抗LILRB1抗體或其抗原結合片段。另一實施例提供了一種抑制癌細胞免疫逃脫的方法，所述方法包括向需要抑制癌細胞免疫逃脫的受試者施用藥學有效量的所述抗LILRB1抗體或其抗原結合片段。另一實例提供了所述抗LILRB1抗體或其抗原結合片段用於抑制癌細胞免疫逃脫的應用，或用於製造抑制癌細胞免疫逃脫的藥物組成物的應用。 [技術解決方案]
一個實施例提供了一種結合LILRB1的抗LILRB1抗體或其抗原結合片段。抗LILRB1抗體或其抗原結合片段可具有抑制癌細胞免疫逃脫的活性。此外，抗LILRB1抗體或其抗原結合片段可具有抗癌作用。
抗LILRB1抗體或其抗原結合片段可包括以下互補決定區（complementarity determining region，CDR）： 基於根據卡巴特（Kabat）編號（卡巴特（Kabat）E.A.，吳（Wu）T.T.，佩裡（Perry）H.、戈特斯曼（Gottesman）K.及費勒（Foeller）C.（1991）免疫學相關蛋白序列（Sequences of Proteins of Immunological Interest），第5版，美國國家衛生研究院（National Institutes of Health，NIH）出版編號91-3242；http://www.abysis.org/）的CDR定義， CDR-L1，包括SEQ ID NO: 1、13、25、37、49、61、73、85、97、109、121、133、145、157、169、181、193、205或217的胺基酸序列， CDR-L2，包括SEQ ID NO: 2、14、26、38、50、62、74、86、98、110、122、134、146、158、170、182、194、206或218的胺基酸序列， CDR-L3，包括SEQ ID NO: 3、15、27、39、51、63、75、87、99、111、123、135、147、159、171、183、195、207或219的胺基酸序列， CDR-H1，包括SEQ ID NO: 4、16、28、40、52、64、76、88、100、112、124、136、148、160、172、184、196、208或220的胺基酸序列， CDR-H2，包括SEQ ID NO: 5、17、29、41、53、65、77、89、101、113、125、137、149、161、173、185、197、209或221的胺基酸序列，以及 CDR-H3，包括SEQ ID NO: 6、18、30、42、54、66、78、90、102、114、126、138、150、162、174、186、198、210或222的胺基酸序列。
在特定實施例中，本揭露中提供的抗LILRB1抗體或其抗原結合片段中可包括的6種CDR（CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3）的組合在表1中示出： [表1]
殖株 CDR 胺基酸序列（N→C）（卡巴特） SEQ ID NO
5 CDR-L1 RASQSIANYLN 1
CDR-L2 ATSTLQS 2
CDR-L3 QQSYSFPWT 3
CDR-H1 AYGIH 4
CDR-H2 WIIPLSGGAHYAQKFQG 5
CDR-H3 LYGWAEYFDV 6
6 CDR-L1 RASQSISNYLN 13
CDR-L2 AASTLQS 14
CDR-L3 QQSYSFPWT 15
CDR-H1 SYTIS 16
CDR-H2 WISPELGTSNYAQKFQG 17
CDR-H3 LRYGQTLYGFDI 18
7 CDR-L1 RASQSISNWLN 25
CDR-L2 GTSSLQS 26
CDR-L3 QQSYSFPFT 27
CDR-H1 SYGMH 28
CDR-H2 WIIPVSGGATYAQKFQG 29
CDR-H3 GSWAYYAEFDY 30
8 CDR-L1 RASQSISSYLN 37
CDR-L2 AASTLQS 38
CDR-L3 QQSYSFPYT 39
CDR-H1 SYGIH 40
CDR-H2 WIIPISGTTNYAQKFQG 41
CDR-H3 VGGVGLYVFDV 42
9 CDR-L1 RASQSISNYLN 49
CDR-L2 AASSLQS 50
CDR-L3 QQSYSFPWT 51
CDR-H1 SYAIH 52
CDR-H2 WIVPGLGVTNYAQKFQG 53
CDR-H3 QATLYQTEYMDV 54
10 CDR-L1 RASQSISNYLN 61
CDR-L2 AASNLQS 62
CDR-L3 QQSYSFPFT 63
CDR-H1 SHYMH 64
CDR-H2 WISPYLGSTNYAQKFQG 65
CDR-H3 DETGSTYGAFDY 66
11 CDR-L1 RASQSISNYLN 73
CDR-L2 DASTLQS 74
CDR-L3 QQSYSFPWT 75
CDR-H1 SYYVH 76
CDR-H2 WISPYSGGTNYAQKFQG 77
CDR-H3 DYYVSAYGAFDY 78
12 CDR-L1 RASQDISNYLN 85
CDR-L2 ATSSLQS 86
CDR-L3 QQSYSFPWT 87
CDR-H1 SYDIH 88
CDR-H2 RIVPYLGVTNYAQKFQG 89
CDR-H3 RQSQSSVYAFDI 90
13 CDR-L1 RASQSISNYLN 97
CDR-L2 AASRLQS 98
CDR-L3 QQSYSFPFT 99
CDR-H1 GYYIH 100
CDR-H2 WISPSSGGTIYAQKFQG 101
CDR-H3 DISVRVVQAFDY 102
14 CDR-L1 RASQSISNYLN 109
CDR-L2 ATSNLQS 110
CDR-L3 QQSYSFPWT 111
CDR-H1 SYYMH 112
CDR-H2 WISPYLGITNYAQKFQG 113
CDR-H3 AGYQQAQYWFDY 114
15 CDR-L1 RASQSISNYLN 121
CDR-L2 ATSSLQS 122
CDR-L3 QQSYSFPYT 123
CDR-H1 SYAMS 124
CDR-H2 WIIPISGTTNYAQKFQG 125
CDR-H3 QHSVGSVFDY 126
16 CDR-L1 RASQDISSWLN 133
CDR-L2 AASSLQS 134
CDR-L3 QQSYSFPWT 135
CDR-H1 SYYMT 136
CDR-H2 GISPILGVTNYAQKFQG 137
CDR-H3 LLVGVSETYFDY 138
17 CDR-L1 RASQSISNYLN 145
CDR-L2 AASNMHS 146
CDR-L3 QQSHSFPWT 147
CDR-H1 TYAMS 148
CDR-H2 GISPTLGIANYAQKFQG 149
CDR-H3 VRYAGWTGYFDL 150
18 CDR-L1 RASQSISRWLN 157
CDR-L2 AASRLQS 158
CDR-L3 QQSESFPWT 159
CDR-H1 SYDIN 160
CDR-H2 WIIPTSGSTNYAQKFQG 161
CDR-H3 DSQSSYIGYFDV 162
19 CDR-L1 RASQSISNYLN 169
CDR-L2 DTSSLQS 170
CDR-L3 QQSYSTPYT 171
CDR-H1 AYGIS 172
CDR-H2 RIIPYLGTANYAQKFQG 173
CDR-H3 LSYGIGYESFDV 174
20 CDR-L1 RASQSISSYLN 181
CDR-L2 DTSTLQS 182
CDR-L3 QQSYSFPWT 183
CDR-H1 SYAMS 184
CDR-H2 SISSSGGSTYYADSVKG 185
CDR-H3 ELGGYGFSYFDY 186
21 CDR-L1 RASQSIRNYLN 193
CDR-L2 ATSSLQS 194
CDR-L3 QQSYSFPWT 195
CDR-H1 DYAMS 196
CDR-H2 GISGSDIYYADSVKG 197
CDR-H3 AVSYWSYTFDY 198
22 CDR-L1 RASQSIGSYLN 205
CDR-L2 DASTLQS 206
CDR-L3 QQSYSFPWT 207
CDR-H1 SYAMH 208
CDR-H2 GISSSGGTTYYADSVKG 209
CDR-H3 ALGVVGGTWFDY 210
23 CDR-L1 RASQSISNYLN 217
CDR-L2 DTSTLQS 218
CDR-L3 QQSYSFPWT 219
CDR-H1 DYAMH 220
CDR-H2 AISGSGGYTHYADSVKG 221
CDR-H3 SATFGVWETFDV 222
在一個實施例中，抗LILRB1抗體或其抗原結合片段可包括： 包括CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3的輕鏈可變區，以及 包括CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3的重鏈可變區，其中所述CDR係如上所述。
在一個實施例中，抗LILRB1抗體或其抗原結合片段可包括： 輕鏈可變區，包括SEQ ID NO: 7、19、31、43、55、67、79、91、103、115、127、139、151、163、175、187、199、211或223的胺基酸序列，以及 重鏈可變區，包括SEQ ID NO: 9、21、33、45、57、69、81、93、105、117、129、141、153、165、177、189、201、213或225的胺基酸序列。
在特定實施例中，本揭露中提供的抗LILRB1抗體或其抗原結合片段中可包括的輕鏈可變區及重鏈可變區的組合在表2中示出： [表2]
殖株 可變區 胺基酸序列（N→C） SEQ ID NO
5 輕鏈可變區 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIANYLNWYQQKPGKAPKLLIYATSTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIK 7
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20 輕鏈可變區 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYDTSTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIK 187
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21 輕鏈可變區 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIRNYLNWYQQKPGKAPKLLIYATSSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIK 199
重鏈可變區 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSDYAMSWVRQAPGQGLEWMGGISGSDIYYADSVKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARAVSYWSYTFDYWGQGTLVTVSS 201
22 輕鏈可變區 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIGSYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIK 211
重鏈可變區 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAMHWVRQAPGQGLEWMGGISSSGGTTYYADSVKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARALGVVGGTWFDYWGQGTLVTVSS 213
23 輕鏈可變區 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDTSTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIK 223
重鏈可變區 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSDYAMHWVRQAPGQGLEWMGAISGSGGYTHYADSVKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSATFGVWETFDVWGQGTLVTVSS 225
在本揭露中，「包括特定胺基酸序列或由特定胺基酸序列組成」的抗體（例如，CDR、可變區或重鏈/輕鏈）係指所述胺基酸序列實質上被包括在內，及/或不影響抗體活性的不顯著的突變（例如，胺基酸殘基的取代、缺失及/或添加）被引入所述胺基酸序列的所有情況。
當由表面電漿共振（surface plasmon resonance，SPR）量測時，本揭露中提供的抗LILRB1抗體或其抗原結合片段對LILRB1（例如人LILRB1）的結合親和力（KD ）可為10 mM或小於10 mM、5 mM或小於5 mM、1 mM或小於1 mM、0.5 mM或小於0.5 mM、0.2 mM、或0.15 mM或小於0.15 mM，例如0.001 nM至10 mM、0.005 nM至10 mM、0.01 nM至10 mM、0.05 nM至10 mM、0.1 nM至10 mM、0.5 nM至10 mM、1 nM至10 mM、0.001 nM至5 mM、0.005 nM至5 mM、0.01 nM至5 mM、0.05 nM至5 mM、0.1 nM至5 mM、0.5 nM至5 mM、1 nM至5 mM、0.001 nM至1 mM、0.005 nM至1 mM、0.01 nM至1 mM、0.05 nM至1 mM、0.1 nM至1 mM、0.5 nM至1 mM、1 nM至1 mM、0.001 nM至0.5 mM、0.005 nM至0.5 mM、0.01 nM至0.5 mM、0.05 nM至0.5 mM、0.1 nM至0.5 mM、0.5 nM至0.5 mM、1 nM至0.5 mM、0.001 nM至0.2 mM、0.005 nM至0.2 mM、0.01 nM至0.2 mM、0.05 nM至0.2 mM、0.1 nM至0.2 mM、0.5 nM至0.2 mM、1 nM至0.2 mM、0.001 nM至0.15 mM、0.005 nM至0.15 mM、0.01 nM至0.15 mM、0.05 nM至0.15 mM、0.1 nM至0.15 mM、0.5 nM至0.15 mM、或1 nM至0.15 mM。
另一實施例提供了一種藥物組成物，所述藥物組成物包括所述抗LILRB1抗體或其抗原結合片段作為活性成分。舉例而言，所述藥物組成物可為用於治療及/或預防癌症的藥物組成物。在實施例中，所述藥物組成物可具有抑制癌細胞免疫逃脫的活性。癌細胞可為在細胞表面上表現或過表現MHC I類的細胞。
另一實施例提供了一種治療及/或預防癌症的方法，所述方法包括向需要治療及/或預防癌症的受試者（例如，包括人的哺乳動物）施用（口服或胃腸外）藥學有效量的抗LILRB1抗體或其抗原結合片段。
本揭露中提供的方法可更包括在施用步驟之前識別需要治療及/或預防癌症，及/或抑制癌細胞的免疫逃脫的受試者的步驟。
另一實施例提供了抗LILRB1抗體或其抗原結合片段在治療及/或預防癌症中的應用或在製造用於治療及/或預防癌症的藥物組成物中的應用。另一實例提供了抗LILRB1抗體或其抗原結合片段用於抑制癌細胞免疫逃脫的應用或在製備用於抑制癌細胞免疫逃脫的藥物組成物中的應用。
另一實施例提供了對至少一種多肽進行編碼的核酸分子，所述至少一種多肽選自下列組成的群組：上述抗LILRB1抗體的CDR（CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3，CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3的組合，或CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3的組合），包括CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3的輕鏈可變區，包括CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3的重鏈可變區；包括所述輕鏈可變區的輕鏈，以及包括所述重鏈可變區的重鏈。
另一實施例提供了一種包括所述核酸分子的重組載體。在實施例中，重組載體可分別（例如，在兩個單獨的載體中）或同時（例如，在一個載體中）包括所述輕鏈可變區或輕鏈以及所述重鏈可變區或重鏈。重組載體可為用於在合適的細胞中表現所述輕鏈可變區或輕鏈及所述重鏈可變區或重鏈的表現載體。
另一實施例提供了一種包括所述核酸分子或所述重組載體的重組細胞。
另一實施例提供了一種生產抗LILRB1抗體或其抗原結合片段的方法，所述方法包括在所述重組細胞中表現所述抗體。
如本文所述，抗LILRB1抗體的抗原結合片段可指衍生自抗LILRB1抗體並保留抗體的抗原（LILRB1）結合親和力的片段。在實施例中，抗原結合片段可為包括如上所述的抗LILRB1抗體的6個CDR的多肽，並且舉例而言可為scFv、scFv-Fc、scFv-Ck（κ恆定區）、scFv-Cλ（λ恆定區）、(scFv)2 、Fab、Fab’或F(ab’)2 ，但並非僅限於此。
抗LILRB1抗體或其抗原結合片段可對LILRB1蛋白具有調節活性，例如拮抗或激動活性。此外，抗LILRB1抗體或其抗原結合片段可具有抑制癌細胞免疫逃脫的活性。此外，抗LILRB1抗體或其抗原結合片段可具有抗癌作用。
作為本揭露中提供的抗LILRB1抗體或其抗原結合片段的抗原的蛋白質LILRB1可係衍生自哺乳動物。舉例而言，作為抗原的LILRB1可為人LILRB1（例如，基因庫（GenBank）登錄號NP_001265328.2、NP_001265327.2、NP_001075108.2、NP_001075107.2、NP_001075106.2、NP_006660.4、NM_001081637.2、NM_001081638.3、NM_001081639.3、NM_001278398.2、NM_001278399.2等），但並非僅限於此。
MHC I類可為各類主要組織相容性複合體（major histocompatibility complex，MHC）分子中的一類。在實施例中，MHC I類可為人MHC I類，並且可為選自HLA（人白血球抗原）-A、HLA-B、HLA-C、HLA-E、HLA-F及HLA-G組成的群組的至少一種，但並非僅限於此。
如本文所述，術語「抗體」可係指專一性地結合特定抗原的蛋白質，並且可為藉由刺激免疫系統中的抗原產生的蛋白質，或藉由化學合成或重組生產產生的蛋白質，無特定限制。抗體可為非天然發生的，例如，藉由重組或合成生產產生。抗體可為動物抗體（例如，小鼠抗體等）、嵌合抗體、人源化抗體或人抗體。抗體可為單株抗體或多株抗體。
在本文提供的抗LILRB1抗體或其抗原結合片段中，除了如上定義的重鏈CDR部分及輕鏈CDR部分或重鏈可變區及輕鏈可變區之外的部分可係衍生自免疫球蛋白的任何亞型（例如IgA、IgD、IgE、IgG（IgG1、IgG2、IgG3、IgG4）、IgM等），並且例如衍生自框架部分、及/或輕鏈恆定區及/或重鏈恆定區。在實施例中，本揭露中提供的抗LILRB1抗體可為人IgG形式的抗體，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4，但並非僅限於此。
完整抗體（例如IgG型）具有兩個全長輕鏈及兩個全長重鏈的結構，其中每一輕鏈經由二硫鍵連接至對應的重鏈。抗體的恆定區分為重鏈恆定區及輕鏈恆定區。重鏈恆定區屬γ（gamma）、μ（mu）、α（alpha）、δ（delta）或ε（epsilon）型，其子類為γ1（gamma1）、γ2（gamma2）、γ3（gamma3）、γ4（gamma4）、α1（alpha1）或α2（alpha2）。輕鏈恆定區屬κ（kappa）或λ（lambda）型。
如本文所用，術語「重鏈」可旨在涵蓋全長重鏈及其片段，其中全長重鏈可包括可變區VH、三個恆定區CH1、CH2及CH3、以及鉸鏈，所述可變區VH包括足以提供對抗原的專一性的胺基酸序列。術語「輕鏈」可旨在涵蓋全長輕鏈及其片段，其中全長輕鏈可包括可變區VL及恆定區CL，所述可變區VL包括足以提供對抗原的專一性的胺基酸序列。
術語「互補決定區（CDR）」可指在抗體的可變區中賦予抗原結合專一性的部分，並且可指在免疫球蛋白的重鏈或輕鏈的高可變區中發現的胺基酸序列。重鏈及輕鏈可分別包括三個CDR（CDRH1、CDRH2及CDRH3；以及CDRL1、CDRL2及CDRL3）。CDR可提供接觸殘基，所述殘基在抗體與其抗原或抗原表位的結合中起重要作用。如本文所用，術語「專一性地結合」及「專一性地識別」可具有與所屬技術中具有通常知識者已知的相同的一般含義，並且表示抗體及抗原專一性地相互作用而導致免疫反應。
在本揭露中，除非另有說明，否則術語「抗體」可涵蓋或可理解為包括具有抗原結合能力的抗體的抗原結合片段。
本文使用的術語「抗原結合片段」可指任何類型的多肽，其包括能夠結合抗原的部分（例如，本文所述的6個CDR），並且例如可為scFv、(scFv)2 、scFv-Fc、Fab、Fab’或F(ab′’)2 ，但並非僅限於此。此外，如上所述，抗原結合片段可為scFv、其中scFv與免疫球蛋白（例如IgA、IgD、IgE、IgG（IgG1、IgG2、IgG3、IgG4）、IgM等）的Fc區或恆定區（例如，κ或λ）融合的融合多肽。
在抗原結合片段中，Fab的結構具有輕鏈及重鏈的可變區、輕鏈的恆定區及重鏈的第一恆定區（CH1），並且具有一個抗原結合位點。
Fab’與Fab的不同之處在於，Fab’包括在CH1的C-端處具有至少一個半胱胺酸殘基的鉸鏈區。
F(ab’)2 抗體是藉由Fab’鉸鏈區半胱胺酸殘基的二硫鍵橋聯形成的。
Fv是僅由重鏈可變區及輕鏈可變區組成的最小抗體片段。產生Fv片段的重組技術是此項技術中眾所周知的。
雙鏈Fv包括藉由非共價鍵相互連接的重鏈可變區及輕鏈可變區。單鏈Fv一般而言包括重鏈可變區及輕鏈可變區，重鏈可變區及輕鏈可變區經由肽接頭（linker）藉由共價鍵相互連接，或者在C-端處直接連接，從而具有類似雙鏈Fv的二聚體結構。
抗原結合片段可使用蛋白酶獲得（例如，Fab可藉由用木瓜蛋白酶限制性切割整個抗體獲得，而F(ab’)2 片段可藉由用胃蛋白酶切割獲得），或者可藉由使用遺傳重組技術製備。
術語「鉸鏈區」可指抗體重鏈內CH1結構域與CH2結構域之間的區，其功能是為抗體中的抗原結合位點提供靈活性。
抗LILRB1抗體可為單株抗體或多株抗體，例如，單株抗體。單株抗體可使用此項技術中眾所周知的方法製備，例如使用噬菌體顯示技術。作為另一選擇，抗LILRB1抗體可藉由常規方法以小鼠來源的單株抗體的形式構建。
同時，可使用典型的酶聯免疫吸附試驗（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA）形式，基於針對LILRB1的結合潛力篩選個別單株抗體。可藉由例如用於驗證結合組裝的分子相互作用的競爭性ELISA等功能分析或例如基於細胞的試驗等功能分析來驗證抑制活性。然後，對於基於其強抑制活性選擇的單株抗體構體，可分別驗證其對LILRB1的親和力（Kd值）。
最終選擇的抗體可被製備成並用作人源化抗體以及人免疫球蛋白抗體，其中除抗原結合部分以外的其餘部分是人源化的。生產人源化抗體的方法是此項技術中熟知的。
除了活性成分（抗LILRB1抗體或其抗原結合片段）之外，藥物組成物可更包括藥學上可接受的載劑。藥學上可接受的載劑可為選自通常用於配製抗體的彼等載體的任何載體。舉例而言，藥學上可接受的載劑可為選自乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、澱粉、***膠、磷酸鈣、藻酸鹽、明膠、矽酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、水、糖漿、甲基纖維素、甲基羥基苯甲酸酯、丙基羥基苯甲酸酯、滑石、硬脂酸鎂、礦物油等組成的群組中的一種或多種，但並非僅限於此。所述藥物組成物可更包括選自可常用於製造藥物組成物的稀釋劑、賦形劑、潤滑劑、潤濕劑、甜味劑、風味增強劑、乳化劑、懸浮劑、防腐劑等組成的群組中的一種或多種。
所述藥物組成物或所述抗體或其抗原結合片段可係以藥學有效量口服或胃腸外給藥。胃腸外給藥可為靜脈注射、皮下注射、肌肉注射、腹膜內注射、內皮給藥、鼻內給藥、肺內給藥、直腸給藥或病灶內局部給藥。由於蛋白質或肽在口服給藥時會被消化，因此用於口服給藥的組成物中的活性成分可被包衣或配製以防止在胃中消化。此外，抗體或組成物可使用任選的能夠將活性成分遞送至靶細胞（例如癌細胞）的裝置給藥。
藥物組成物中抗LILRB1抗體或其抗原結合片段的含量或抗LILRB1抗體或其抗原結合片段的劑量可根據各種因素，如配製方法、給藥方法、患者的年齡、體重、性別、病理、食物、給藥時間、給藥間隔、給藥途徑、***率、應答敏感性等，以多種方式規定。舉例而言，抗LILRB1抗體或其抗原結合片段可係以下列量給藥：每日0.005微克/千克至1000毫克/千克、0.005微克/千克至500毫克/千克、0.005微克/千克至250毫克/千克、0.005微克/千克至100毫克/千克、0.005微克/千克至75毫克/千克、0.005微克/千克至50毫克/千克、0.01微克/千克至1000毫克/千克、0.01微克/千克至500毫克/千克、0.01微克/千克至250毫克/千克、0.01微克/千克至100毫克/千克、0.01微克/千克至75毫克/千克、0.01微克/千克至50毫克/千克、0.05微克/千克至1000毫克/千克、0.05微克/千克至500毫克/千克、0.05微克/千克至250毫克/千克、0.05微克/千克至100毫克/千克、0.05微克/千克至75毫克/千克、或0.05微克/千克至50毫克/千克，但並非僅限於此。日劑量可配製成單位劑型的單一製劑，或配製成適當分開的劑型，或可製造成包括在多劑量容器中。
所述藥物組成物可配製成在油或水介質中的溶液、懸浮液、糖漿、乳化溶液、提取物、粉末、顆粒、片劑或膠囊的形式，並且可更包括用於所述製劑的分散劑或穩定劑。
應用本揭露中提供的抗體、藥物組成物或方法的受試者可選自哺乳動物，包括靈長類動物如人及猴、齧齒類動物如大鼠及小鼠等在內的哺乳動物。
癌症可為實體癌，也可為血癌。癌症可為但不限於選自以下組成的群組中的一種或多種：肺癌（例如，肺鱗狀細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌）、腹膜癌、皮膚癌、鱗狀細胞癌、皮膚或眼球中的黑色素瘤、直腸癌、肛門附近癌、食道癌、小腸腫瘤、內分泌腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、白血病（例如，慢性白血病或急性白血病）、淋巴細胞性淋巴瘤、肝癌、胃癌、胰腺癌、成膠質細胞瘤、宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞腺瘤、乳腺癌、結腸癌、大腸癌、子宮內膜癌或子宮癌、唾液腺瘤、腎細胞癌、腎癌、***癌、外陰癌、甲狀腺癌、頭頸癌、腦癌、膽道癌、膽囊癌、骨骨肉瘤等。癌症可能是原發性癌症，也可能是轉移性癌症。癌症可為以MHC I類在癌細胞表面表現或過表現為特徵的癌症，例如，可為結腸腺癌、小細胞肺癌、乳腺癌、胰腺癌、惡性黑色素瘤、骨骨肉瘤、腎細胞癌或胃癌。MHC I類的過表現可指相較於正常細胞，在抗體所應用的癌細胞中的過表現。在一個實施例中，所述癌症可為對T細胞介導的免疫療法不顯示抗癌作用（抗性）的癌症。
如本文所用，術語「癌症治療」可指預防、減輕或改善癌症症狀，或部分或完全去除癌症的所有抗癌作用，例如癌細胞死亡、抑制癌細胞增殖、抑制癌症轉移等。
本揭露中提供的抗LILRB1抗體或其抗原結合片段可與另一種藥物聯合給藥，例如，選自免疫療法的常規使用的試劑、抗癌試劑、細胞毒性試劑等組成的群組中的至少一種。因此，實施例提供了一種用於治療及/或預防癌症的聯合給藥的藥物組成物，所述藥物組成物包括(1)抗LILRB1抗體或其抗原結合片段，及(2)至少一種選自免疫治療劑、抗癌劑、細胞毒性劑等組成的群組的試劑。另一實施例提供了一種治療及/或預防癌症的方法，所述方法包括向需要治療及/或預防癌症的受試者施用(1)抗LILRB1抗體或其抗原結合片段，及(2)至少一種選自免疫治療劑、抗癌劑、細胞毒性劑等組成的群組的試劑。免疫治療劑、抗癌劑及細胞毒性劑可包括常規用於癌症治療的及/或具有細胞毒性活性的任何藥物，且舉例而言，它們可為選自蛋白質如細胞治療劑、抗體、核酸分子如siRNA，及/或小分子化學品如紫杉醇、多西他賽等組成的群組中的至少一種，但並非僅限於此。
另一實施例提供了一種多肽分子，所述多肽分子包括如上所述的抗LILRB1抗體的重鏈互補決定區（CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3或其組合）、輕鏈互補決定區（CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3或其組合）、其組合；或重鏈可變區、輕鏈可變區或其組合。所述多肽分子可作為抗體前體用於製備抗體，或包括在具有抗體類似結構（例如肽體（peptibody））、雙專一性抗體或多專一性抗體的蛋白質支架中作為其組分。在另一個實施例中，包括如上所述抗LILRB1抗體的重鏈互補決定區（CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3或其組合）、輕鏈互補決定區（CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3或其組合）、其組合；或重鏈可變區、輕鏈可變區、或其組合的多肽分子可在用於靶治療（例如CAR-T）的細胞治療劑中用作靶（抗原）識別結構域或分泌抗體。在另一實施例中，多肽分子可用於構建作為細胞治療劑的抗LILRB1抗體分泌細胞。
另一實施例提供了一種核酸分子，所述核酸分子對抗LILRB1抗體的重鏈互補決定區（CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3或其組合）、重鏈可變區或重鏈進行編碼。
另一實施例提供了一種核酸分子，所述核酸分子對抗LILRB1抗體的輕鏈互補決定區（CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3或其組合）、輕鏈可變區或輕鏈進行編碼。
另一實施例提供了一種重組載體，所述重組載體包括對分別在兩個單獨的載體中或全部一起在一個載體中的抗LILRB1抗體的重鏈可變區或重鏈以及抗LILRB1抗體的輕鏈可變區或輕鏈進行編碼的核酸分子。
另一實施例提供了一種包括所述重組載體的重組細胞。
術語「載體」是指用於在宿主細胞中表現靶基因的工具，例如質粒載體、黏接質體載體及病毒載體如噬菌體載體、慢病毒載體、腺病毒載體、逆轉錄病毒載體及腺相關病毒載體。重組載體可由下列構建或藉由操縱下列構建：在此項技術中常用的質粒（例如，pSC101、pGV1106、pACYC177、ColE1、pKT230、pME290、pBR322、pUC8/9、pUC6、pBD9、pHC79、pIJ61、pLAFR1、pHV14、pGEX系列、pET系列、pUC19等）、噬菌體（例如，λgt4λB、λ-Charon、λδZ1、M13等）或病毒載體（例如，SV40等）。
在所述重組載體中，所述核酸分子可與啟動子可操作地連接。術語「可操作地連接（operatively linked）」是指目的核苷酸序列與表現調節序列（例如啟動子序列）之間的功能性連接。當被「可操作地連接」時，調節元件可控制目的多核苷酸的轉錄及/或翻譯。
重組載體可典型地構建為選殖載體或表現載體。對於重組表現載體，可使用相關技術中通常可獲得的用於在植物細胞、動物細胞或微生物細胞中表現外源蛋白的載體。此項技術中熟知的各種方法可用於構建重組載體。
為了在宿主（例如，原核細胞或真核細胞）中使用，可相應地構建重組載體。舉例而言，當構建載體作為在原核宿主中使用的表現載體時，載體通常包括用於轉錄的強啟動子（例如，pLλ 啟動子、trp 啟動子、lac 啟動子、tac 啟動子、T7啟動子等）、用於啟動翻譯的核糖體結合位點、及轉錄/翻譯終止序列。另一方面，用於真核宿主的表現載體包括可在真核細胞中操作的複製起點，例如f1複製起點、SV40複製起點、pMB1複製起點、腺複製起點、AAV複製起點及BBV複製起點，但並非僅限於此。此外，表現載體通常包括來源於哺乳動物細胞基因組的啟動子（例如，金屬硫蛋白啟動子）或來源於哺乳動物病毒的啟動子（例如，腺病毒晚期啟動子、痘苗病毒7.5K啟動子、SV40啟動子、巨細胞病毒啟動子、HSV的tk 啟動子等）及作為轉錄終止序列的聚腺苷酸化序列。
另一實施例提供了一種包括所述重組載體的重組細胞。
所述重組細胞可藉由將所述重組載體導入合適的宿主細胞來製備。只要其允許以穩定的方式依序選殖及表現重組載體即可，此項技術中已知的任何宿主細胞都可用於本揭露。可用於本揭露的原核宿主細胞的實例可選自大腸桿菌如大腸桿菌JM109、大腸桿菌BL21、大腸桿菌RR1、大腸桿菌LE392、大腸桿菌B、大腸桿菌X 1776、大腸桿菌W3110，芽孢桿菌如枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis ）及蘇雲金芽孢桿菌（Bacillus thuringiensis ），以及腸桿菌菌株如鼠傷寒沙門氏菌（Salmonella typhimurium ），黏質沙雷氏菌（Serratia marcescens ）及各種假單胞菌。可用於轉化的真核宿主細胞可選自但不限於釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae ）、昆蟲細胞及動物細胞，例如Sp2/0、CHO（中國倉鼠卵巢）K1、CHO DG44、CHO S、CHO DXB11、CHO GS-KO、PER.C6、W138、BHK、COS-7、293、HepG2、Huh7、3T3、RIN、MDCK等。
可使用相關技術中熟知的方法將所述核酸分子或攜帶所述核酸分子的重組載體導入（轉染）到宿主細胞中。舉例而言，當宿主細胞是原核細胞時，可使用CaCl2 或電穿孔方法進行此種轉染。對於真核宿主細胞，遺傳導入可使用但不限於顯微注射、磷酸鈣沉澱、電穿孔、脂質體介導的轉染或粒子轟擊來實現。
為了選擇轉化的宿主細胞，可根據此項技術中熟知的方法利用與選擇標記相關的表型。舉例而言，當選擇標記為賦予對某種抗生素的抗性的基因時，宿主細胞可在培養基中所述抗生素之存在下生長以選擇目的轉化體。
另一實施例提供了一種製備抗LILRB1抗體或其抗原結合片段的方法，所述方法包括在宿主細胞中表現所述核酸分子或重組載體。表現步驟可藉由在允許所述核酸分子表現的條件下培養包括所述核酸分子（例如，在重組載體中）的重組細胞來進行。所述方法可更包括在表現或培養步驟之後，從細胞培養物中分離及/或純化抗體或其片段。 [有利效果]
本揭露提供的抗LILRB1抗體或其抗原結合片段藉由抑制癌細胞的免疫逃脫機制，使免疫細胞能夠發揮其抗癌作用，從而具有較高的抗癌作用。
在下文中，將藉由實例詳細闡述本發明。
以下實例僅用於例示本發明，而不應被理解為限制本發明。實例 1 ：製備抗 LILRB1 的人抗體 1.1. 應用噬菌體顯示選擇抗 LILRB1 的人抗體
為了選擇專一性地識別人LILRB1的抗體，使用由人Fab抗體組成的文庫進行噬菌體顯示篩選。使用人LILRB1-Fc（目錄號2017-T2）（RnD系統）作為抗原進行高達4輪的噬菌體淘選。此外，由於抗原為Fc融合形式，因此還進行了Fc對照淘選，以在淘選步驟中去除Fc結合物。藉由多株噬菌體ELISA證實了所選產物與抗原的結合。1.2. 單株噬菌體 ELISA
進行單株噬菌體ELISA以自實例1.1中藉由淘選獲得的噬菌體中選擇專一性地結合抗原的殖株。對於實例1.1的抗原，確定0.4或更大的吸光度（A450 奈米 ）截止值以確認陽性殖株，並分析對應基因的序列。為了確認抗原的專一性，對針對抗原的獨特Fab殖株進行純化噬菌體ELISA，以獲得EC50 （pfu）值。1.3. 單株可溶性 Fab 分析
實例1.2中藉由淘選獲得的與抗原結合的47個獨特殖株中，藉由PCR擴增對基於噬菌體專一性ELISA中EC50 的前19個殖株的Fab進行編碼的基因，以產生表現載體。使用TB培養基表現抗體後，藉由周質提取得到可溶性蛋白。親和層析純化後，進行ELISA，確認與抗原結合。實例 2 ：所選抗體向 IgG 的轉化
對於實例1.3中自Fab型噬菌體顯示文庫中選擇的基因，藉由PCR擴增對應於每個重鏈可變區（VH）及輕鏈可變區（VL）的基因。在一些表現水平低的殖株的情況下，藉由PCR以相同的方式擴增輕鏈可變區（VL）的基因，並且藉由將CDR移接到表現水平高的殖株的框架區（framework region，FR）的對應序列中，產生對應於重鏈可變區（VH）的基因序列。將構建的重鏈可變區（VH）及輕鏈可變區（VL）基因序列***設計用於編碼IgG4形式的人抗體（IgG4 Fc：SEQ ID NO: 229，κ恆定區：SEQ ID NO: 230）的表現載體（pCB-LIR-mAB，除此之外，可使用包括CMV啟動子、或CMV/CHO β-肌動蛋白融合啟動子（KR10-1038126B1）以及對人IgG4重鏈恆定區及κ輕鏈恆定區進行編碼的基因的載體）中。製備的表現載體DNA序列經測序確認。
所選19種抗體的CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、輕鏈可變區、重鏈可變區、輕鏈及重鏈的胺基酸序列，以及輕鏈可變區基因及重鏈可變區基因的核酸序列見下表3至21。為每個殖株分配了一個殖株號。在下文中，僅指出了簡單的殖株編號。 [表3]
殖株 區 胺基酸序列（N→C）或核酸序列（5’→3’） SEQ ID NO
5 CDR-L1 RASQSIANYLN 1
CDR-L2 ATSTLQS 2
CDR-L3 QQSYSFPWT 3
CDR-H1 AYGIH 4
CDR-H2 WIIPLSGGAHYAQKFQG 5
CDR-H3 LYGWAEYFDV 6
輕鏈可變區 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIANYLNWYQQKPGKAPKLLIYATSTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIK 7
輕鏈可變區編碼基因 GACATTCAAATGACGCAGAGTCCCTCCTCACTGAGTGCTAGCGTGGGCGATCGTGTGACAATTACTTGTCGCGCTAGCCAGTCTATCGCAAATTACCTGAACTGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAGGCGCCAAAATTGCTGATTTACGCAACTTCCACTCTGCAGTCTGGTGTACCGTCCCGTTTCTCTGGCAGCGGTTCTGGTACGGATTTTACCCTGACCATCTCAAGCCTCCAGCCTGAAGATTTTGCCACCTATTATTGTCAGCAATCTTACTCTTTTCCGTGGACGTTCGGGCAGGGAACTAAAGTGGAAATTAAA 8
重鏈可變區 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSAYGIHWVRQAPGQGLEWMGWIIPLSGGAHYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLYGWAEYFDVWGQGTLVTVSS 9
重鏈可變區編碼基因 CAAGTTCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCAGAGGTGAAGAAGCCCGGCAGTTCTGTTAAGGTTTCCTGCAAAGCCTCAGGCGGGACTTTTAGTGCATACGGTATCCATTGGGTGCGGCAGGCGCCCGGCCAGGGTCTCGAATGGATGGGGTGGATTATCCCACTGTCTGGTGGTGCACATTATGCACAAAAATTCCAAGGCCGCGTAACTATTACCGCCGACGAATCAACCTCCACCGCCTACATGGAACTCAGCTCTCTGAGGTCAGAAGACACGGCCGTCTATTATTGCGCCAGACTGTACGGTTGGGCAGAATACTTCGATGTTTGGGGTCAGGGTACTCTGGTTACCGTCTCATCG 10
輕鏈（κ） DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIANYLNWYQQKPGKAPKLLIYATSTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 11
重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSAYGIHWVRQAPGQGLEWMGWIIPLSGGAHYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLYGWAEYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 12
[表4]
殖株 區 胺基酸序列（N→C）或核酸序列（5’→3’） SEQ ID NO
6 CDR-L1 RASQSISNYLN 13
CDR-L2 AASTLQS 14
CDR-L3 QQSYSFPWT 15
CDR-H1 SYTIS 16
CDR-H2 WISPELGTSNYAQKFQG 17
CDR-H3 LRYGQTLYGFDI 18
輕鏈可變區 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIK 19
輕鏈可變區編碼基因 GACATTCAAATGACGCAGAGTCCCTCCTCACTGAGTGCTAGCGTGGGCGATCGTGTGACAATTACTTGTCGCGCTAGCCAGTCTATCTCTAATTACCTGAACTGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAGGCGCCAAAATTGCTGATTTACGCAGCATCCACTCTGCAGTCTGGTGTACCGTCCCGTTTCTCTGGCAGCGGTTCTGGTACGGATTTTACCCTGACCATCTCAAGCCTCCAGCCTGAAGATTTTGCCACCTATTATTGTCAGCAATCTTACTCTTTTCCGTGGACGTTCGGGCAGGGAACTAAAGTGGAAATTAAA 20
重鏈可變區 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYTISWVRQAPGQGLEWMGWISPELGTSNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLRYGQTLYGFDIWGQGTLVTVSS 21
重鏈可變區編碼基因 CAAGTTCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCAGAGGTGAAGAAGCCCGGCAGTTCTGTTAAGGTTTCCTGCAAAGCCTCAGGCGGGACTTTTAGTTCTTACACCATTTCTTGGGTGCGGCAGGCGCCCGGCCAGGGTCTCGAATGGATGGGGTGGATTTCTCCAGAACTGGGTACCTCTAACTATGCACAAAAATTCCAAGGCCGCGTAACTATTACCGCCGACGAATCAACCTCCACCGCCTACATGGAACTCAGCTCTCTGAGGTCAGAAGACACGGCCGTCTATTATTGCGCCAGACTGCGTTACGGTCAGACTCTGTACGGTTTCGATATCTGGGGTCAGGGTACTCTGGTTACCGTCTCATCG 22
輕鏈（κ） DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 23
重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYTISWVRQAPGQGLEWMGWISPELGTSNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLRYGQTLYGFDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 24
[表5]
殖株 區 胺基酸序列（N→C）或核酸序列（5’→3’） SEQ ID NO
7 CDR-L1 RASQSISNWLN 25
CDR-L2 GTSSLQS 26
CDR-L3 QQSYSFPFT 27
CDR-H1 SYGMH 28
CDR-H2 WIIPVSGGATYAQKFQG 29
CDR-H3 GSWAYYAEFDY 30
輕鏈可變區 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNWLNWYQQKPGKAPKLLIYGTSSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPFTFGQGTKVEIK 31
輕鏈可變區編碼基因 GACATTCAAATGACGCAGAGTCCCTCCTCACTGAGTGCTAGCGTGGGCGATCGTGTGACAATTACTTGTCGCGCTAGCCAGTCTATCTCTAATTGGCTGAACTGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAGGCGCCAAAATTGCTGATTTACGGTACTTCCTCTCTGCAGTCTGGTGTACCGTCCCGTTTCTCTGGCAGCGGTTCTGGTACGGATTTTACCCTGACCATCTCAAGCCTCCAGCCTGAAGATTTTGCCACCTATTATTGTCAGCAATCTTACTCTTTTCCGTTTACGTTCGGGCAGGGAACTAAAGTGGAAATTAAA 32
重鏈可變區 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYGMHWVRQAPGQGLEWMGWIIPVSGGATYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGSWAYYAEFDYWGQGTLVTVSS 33
重鏈可變區編碼基因 CAAGTTCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCAGAGGTGAAGAAGCCCGGCAGTTCTGTTAAGGTTTCCTGCAAAGCCTCAGGCGGGACTTTTAGTTCTTACGGTATGCATTGGGTGCGGCAGGCGCCCGGCCAGGGTCTCGAATGGATGGGGTGGATTATCCCAGTTTCTGGTGGTGCAACCTATGCACAAAAATTCCAAGGCCGCGTAACTATTACCGCCGACGAATCAACCTCCACCGCCTACATGGAACTCAGCTCTCTGAGGTCAGAAGACACGGCCGTCTATTATTGCGCCAGAGGTTCTTGGGCATACTACGCTGAATTCGATTACTGGGGTCAGGGCACTTTAGTGACCGTCTCATCG 34
輕鏈（κ） DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNWLNWYQQKPGKAPKLLIYGTSSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPFTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 35
重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYGMHWVRQAPGQGLEWMGWIIPVSGGATYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGSWAYYAEFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 36
[表6]
殖株 區 胺基酸序列（N→C）或核酸序列（5’→3’） SEQ ID NO
8 CDR-L1 RASQSISSYLN 37
CDR-L2 AASTLQS 38
CDR-L3 QQSYSFPYT 39
CDR-H1 SYGIH 40
CDR-H2 WIIPISGTTNYAQKFQG 41
CDR-H3 VGGVGLYVFDV 42
輕鏈可變區 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPYTFGQGTKVEIK 43
輕鏈可變區編碼基因 GACATTCAAATGACGCAGAGTCCCTCCTCACTGAGTGCTAGCGTGGGCGATCGTGTGACAATTACTTGTCGCGCTAGCCAGTCTATCTCTTCTTACCTGAACTGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAGGCGCCAAAATTGCTGATTTACGCAGCATCCACTCTGCAGTCTGGTGTACCGTCCCGTTTCTCTGGCAGCGGTTCTGGTACGGATTTTACCCTGACCATCTCAAGCCTCCAGCCTGAAGATTTTGCCACCTATTATTGTCAGCAATCTTACTCTTTTCCGTACACGTTCGGGCAGGGAACTAAAGTGGAAATTAAA 44
重鏈可變區 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYGIHWVRQAPGQGLEWMGWIIPISGTTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVGGVGLYVFDVWGQGTLVTVSS 45
重鏈可變區編碼基因 CAAGTTCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCAGAGGTGAAGAAGCCCGGCAGTTCTGTTAAGGTTTCCTGCAAAGCCTCAGGCGGGACTTTTAGTTCTTACGGTATCCATTGGGTGCGGCAGGCGCCCGGCCAGGGTCTCGAATGGATGGGGTGGATTATCCCAATCTCTGGTACCACCAACTATGCACAAAAATTCCAAGGCCGCGTAACTATTACCGCCGACGAATCAACCTCCACCGCCTACATGGAACTCAGCTCTCTGAGGTCAGAAGACACGGCCGTCTATTATTGCGCCAGAGTTGGTGGTGTTGGTCTGTACGTTTTCGATGTTTGGGGTCAGGGTACTCTGGTTACCGTCTCATCG 46
輕鏈（κ） DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 47
重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYGIHWVRQAPGQGLEWMGWIIPISGTTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVGGVGLYVFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 48
[表7]
殖株 區 胺基酸序列（N→C）或核酸序列（5’→3’） SEQ ID NO
9 CDR-L1 RASQSISNYLN 49
CDR-L2 AASSLQS 50
CDR-L3 QQSYSFPWT 51
CDR-H1 SYAIH 52
CDR-H2 WIVPGLGVTNYAQKFQG 53
CDR-H3 QATLYQTEYMDV 54
輕鏈可變區 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIK 55
輕鏈可變區編碼基因 GACATTCAAATGACGCAGAGTCCCTCCTCACTGAGTGCTAGCGTGGGCGATCGTGTGACAATTACTTGTCGCGCTAGCCAGTCTATCTCTAATTACCTGAACTGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAGGCGCCAAAATTGCTGATTTACGCAGCATCCTCTCTGCAGTCTGGTGTACCGTCCCGTTTCTCTGGCAGCGGTTCTGGTACGGATTTTACCCTGACCATCTCAAGCCTCCAGCCTGAAGATTTTGCCACCTATTATTGTCAGCAATCTTACTCTTTTCCGTGGACGTTCGGGCAGGGAACTAAAGTGGAAATTAAA 56
重鏈可變區 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAIHWVRQAPGQGLEWMGWIVPGLGVTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARQATLYQTEYMDVWGQGTLVTVSS 57
重鏈可變區編碼基因 CAAGTTCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCAGAGGTGAAGAAGCCCGGCAGTTCTGTTAAGGTTTCCTGCAAAGCCTCAGGCGGGACTTTTAGTTCTTACGCAATCCATTGGGTGCGGCAGGCGCCCGGCCAGGGTCTCGAATGGATGGGGTGGATTGTTCCAGGTCTGGGTGTTACCAACTATGCACAAAAATTCCAAGGCCGCGTAACTATTACCGCCGACGAATCAACCTCCACCGCCTACATGGAACTCAGCTCTCTGAGGTCAGAAGACACGGCCGTCTATTATTGCGCCAGACAGGCAACTCTGTACCAGACTGAATACATGGATGTTTGGGGTCAGGGTACTCTGGTTACCGTCTCATCG 58
輕鏈（κ） DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 59
重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAIHWVRQAPGQGLEWMGWIVPGLGVTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARQATLYQTEYMDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 60
[表8]
殖株 區 胺基酸序列（N→C）或核酸序列（5’→3’） SEQ ID NO
10 CDR-L1 RASQSISNYLN 61
CDR-L2 AASNLQS 62
CDR-L3 QQSYSFPFT 63
CDR-H1 SHYMH 64
CDR-H2 WISPYLGSTNYAQKFQG 65
CDR-H3 DETGSTYGAFDY 66
輕鏈可變區 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPFTFGQGTKVEIK 67
輕鏈可變區編碼基因 GACATTCAAATGACGCAGAGTCCCTCCTCACTGAGTGCTAGCGTGGGCGATCGTGTGACAATTACTTGTCGCGCTAGCCAGTCTATCTCTAATTACCTGAACTGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAGGCGCCAAAATTGCTGATTTACGCAGCATCCAATCTGCAGTCTGGTGTACCGTCCCGTTTCTCTGGCAGCGGTTCTGGTACGGATTTTACCCTGACCATCTCAAGCCTCCAGCCTGAAGATTTTGCCACCTATTATTGTCAGCAATCTTACTCTTTTCCGTTTACGTTCGGGCAGGGAACTAAAGTGGAAATTAAA 68
重鏈可變區 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSHYMHWVRQAPGQGLEWMGWISPYLGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDETGSTYGAFDYWGQGTLVTVSS 69
重鏈可變區編碼基因 CAAGTTCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCAGAGGTGAAGAAGCCCGGCAGTTCTGTTAAGGTTTCCTGCAAAGCCTCAGGCGGGACTTTTAGTTCTCATTACATGCATTGGGTGCGGCAGGCGCCCGGCCAGGGTCTCGAATGGATGGGGTGGATTTCTCCATACCTGGGTTCTACCAACTATGCACAAAAATTCCAAGGCCGCGTAACTATTACCGCCGACGAATCAACCTCCACCGCCTACATGGAACTCAGCTCTCTGAGGTCAGAAGACACGGCCGTCTATTATTGCGCCAGAGATGAAACTGGTTCTACTTACGGTGCATTCGATTACTGGGGTCAGGGTACTCTGGTTACCGTCTCATCG 70
輕鏈（κ） DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPFTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 71
重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSHYMHWVRQAPGQGLEWMGWISPYLGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDETGSTYGAFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 72
[表9]
殖株 區 胺基酸序列（N→C）或核酸序列（5’→3’） SEQ ID NO
11 CDR-L1 RASQSISNYLN 73
CDR-L2 DASTLQS 74
CDR-L3 QQSYSFPWT 75
CDR-H1 SYYVH 76
CDR-H2 WISPYSGGTNYAQKFQG 77
CDR-H3 DYYVSAYGAFDY 78
輕鏈可變區 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIK 79
輕鏈可變區編碼基因 GACATTCAAATGACGCAGAGTCCCTCCTCACTGAGTGCTAGCGTGGGCGATCGTGTGACAATTACTTGTCGCGCTAGCCAGTCTATCTCTAATTACCTGAACTGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAGGCGCCAAAATTGCTGATTTACGATGCATCCACTCTGCAGTCTGGTGTACCGTCCCGTTTCTCTGGCAGCGGTTCTGGTACGGATTTTACCCTGACCATCTCAAGCCTCCAGCCTGAAGATTTTGCCACCTATTATTGTCAGCAATCTTACTCTTTTCCGTGGACGTTCGGGCAGGGAACTAAAGTGGAAATTAAA 80
重鏈可變區 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYYVHWVRQAPGQGLEWMGWISPYSGGTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDYYVSAYGAFDYWGQGTLVTVSS 81
重鏈可變區編碼基因 CAAGTTCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCAGAGGTGAAGAAGCCCGGCAGTTCTGTTAAGGTTTCCTGCAAAGCCTCAGGCGGGACTTTTAGTTCTTACTACGTTCATTGGGTGCGGCAGGCGCCCGGCCAGGGTCTCGAATGGATGGGGTGGATTTCTCCATACTCTGGTGGTACCAACTATGCACAAAAATTCCAAGGCCGCGTAACTATTACCGCCGACGAATCAACCTCCACCGCCTACATGGAACTCAGCTCTCTGAGGTCAGAAGACACGGCCGTCTATTATTGCGCCAGAGATTACTACGTTTCTGCATACGGTGCATTCGATTACTGGGGTCAGGGTACTCTGGTTACCGTCTCATCG 82
輕鏈（κ） DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 83
重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYYVHWVRQAPGQGLEWMGWISPYSGGTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDYYVSAYGAFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 84
[表10]
殖株 區 胺基酸序列（N→C）或核酸序列（5’→3’） SEQ ID NO
12 CDR-L1 RASQDISNYLN 85
CDR-L2 ATSSLQS 86
CDR-L3 QQSYSFPWT 87
CDR-H1 SYDIH 88
CDR-H2 RIVPYLGVTNYAQKFQG 89
CDR-H3 RQSQSSVYAFDI 90
輕鏈可變區 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYATSSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIK 91
輕鏈可變區編碼基因 GACATTCAAATGACGCAGAGTCCCTCCTCACTGAGTGCTAGCGTGGGCGATCGTGTGACAATTACTTGTCGCGCTAGCCAGGATATCTCTAATTACCTGAACTGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAGGCGCCAAAATTGCTGATTTACGCAACTTCCTCTCTGCAGTCTGGTGTACCGTCCCGTTTCTCTGGCAGCGGTTCTGGTACGGATTTTACCCTGACCATCTCAAGCCTCCAGCCTGAAGATTTTGCCACCTATTATTGTCAGCAATCTTACTCTTTTCCGTGGACGTTCGGGCAGGGAACTAAAGTGGAAATTAAA 92
重鏈可變區 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYDIHWVRQAPGQGLEWMGRIVPYLGVTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRQSQSSVYAFDIWGQGTLVTVSS 93
重鏈可變區編碼基因 CAAGTTCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCAGAGGTGAAGAAGCCCGGCAGTTCTGTTAAGGTTTCCTGCAAAGCCTCAGGCGGGACTTTTAGTTCTTACGATATCCATTGGGTGCGGCAGGCGCCCGGCCAGGGTCTCGAATGGATGGGGCGTATTGTTCCATACCTGGGTGTTACCAACTATGCACAAAAATTCCAAGGCCGCGTAACTATTACCGCCGACGAATCAACCTCCACCGCCTACATGGAACTCAGCTCTCTGAGGTCAGAAGACACGGCCGTCTATTATTGCGCCAGACGTCAGTCTCAGTCTTCTGTTTACGCATTCGATATCTGGGGTCAGGGCACTTTAGTGACCGTCTCATCG 94
輕鏈（κ） DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYATSSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 95
重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYDIHWVRQAPGQGLEWMGRIVPYLGVTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRQSQSSVYAFDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 96
[表11]
殖株 區 胺基酸序列（N→C）或核酸序列（5’→3’） SEQ ID NO
13 CDR-L1 RASQSISNYLN 97
CDR-L2 AASRLQS 98
CDR-L3 QQSYSFPFT 99
CDR-H1 GYYIH 100
CDR-H2 WISPSSGGTIYAQKFQG 101
CDR-H3 DISVRVVQAFDY 102
輕鏈可變區 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPFTFGQGTKVEIK 103
輕鏈可變區編碼基因 GACATTCAAATGACGCAGAGTCCCTCCTCACTGAGTGCTAGCGTGGGCGATCGTGTGACAATTACTTGTCGCGCTAGCCAGTCTATCTCTAATTACCTGAACTGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAGGCGCCAAAATTGCTGATTTACGCAGCATCCCGTCTGCAGTCTGGTGTACCGTCCCGTTTCTCTGGCAGCGGTTCTGGTACGGATTTTACCCTGACCATCTCAAGCCTCCAGCCTGAAGATTTTGCCACCTATTATTGTCAGCAATCTTACTCTTTTCCGTTTACGTTCGGGCAGGGAACTAAAGTGGAAATTAAA 104
重鏈可變區 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSGYYIHWVRQAPGQGLEWMGWISPSSGGTIYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDISVRVVQAFDYWGQGTLVTVSS 105
重鏈可變區編碼基因 CAAGTTCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCAGAGGTGAAGAAGCCCGGCAGTTCTGTTAAGGTTTCCTGCAAAGCCTCAGGCGGGACTTTTAGTGGTTACTACATCCATTGGGTGCGGCAGGCGCCCGGCCAGGGTCTCGAATGGATGGGGTGGATTTCTCCATCTTCTGGTGGTACCATCTATGCACAAAAATTCCAAGGCCGCGTAACTATTACCGCCGACGAATCAACCTCCACCGCCTACATGGAACTCAGCTCTCTGAGGTCAGAAGACACGGCCGTCTATTATTGCGCCAGAGATATCTCTGTTCGTGTTGTTCAGGCATTCGATTACTGGGGTCAGGGTACTCTGGTTACCGTCTCATCG 106
輕鏈（κ） DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPFTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 107
重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSGYYIHWVRQAPGQGLEWMGWISPSSGGTIYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDISVRVVQAFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 108
[表12]
殖株 區 胺基酸序列（N→C）或核酸序列（5’→3’） SEQ ID NO
14 CDR-L1 RASQSISNYLN 109
CDR-L2 ATSNLQS 110
CDR-L3 QQSYSFPWT 111
CDR-H1 SYYMH 112
CDR-H2 WISPYLGITNYAQKFQG 113
CDR-H3 AGYQQAQYWFDY 114
輕鏈可變區 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYATSNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIK 115
輕鏈可變區編碼基因 GACATTCAAATGACGCAGAGTCCCTCCTCACTGAGTGCTAGCGTGGGCGATCGTGTGACAATTACTTGTCGCGCTAGCCAGTCTATCTCTAATTACCTGAACTGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAGGCGCCAAAATTGCTGATTTACGCAACTTCCAATCTGCAGTCTGGTGTACCGTCCCGTTTCTCTGGCAGCGGTTCTGGTACGGATTTTACCCTGACCATCTCAAGCCTCCAGCCTGAAGATTTTGCCACCTATTATTGTCAGCAATCTTACTCTTTTCCGTGGACGTTCGGGCAGGGAACTAAAGTGGAAATTAAA 116
重鏈可變區 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYYMHWVRQAPGQGLEWMGWISPYLGITNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARAGYQQAQYWFDYWGQGTLVTVSS 117
重鏈可變區編碼基因 CAAGTTCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCAGAGGTGAAGAAGCCCGGCAGTTCTGTTAAGGTTTCCTGCAAAGCCTCAGGCGGGACTTTTAGTTCTTACTACATGCATTGGGTGCGGCAGGCGCCCGGCCAGGGTCTCGAATGGATGGGGTGGATTTCTCCATACCTGGGTATCACCAACTATGCACAAAAATTCCAAGGCCGCGTAACTATTACCGCCGACGAATCAACCTCCACCGCCTACATGGAACTCAGCTCTCTGAGGTCAGAAGACACGGCCGTCTATTATTGCGCCAGAGCAGGTTACCAGCAGGCACAGTACTGGTTCGATTACTGGGGTCAGGGCACTTTAGTGACCGTCTCATCG 118
輕鏈（κ） DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYATSNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 119
重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYYMHWVRQAPGQGLEWMGWISPYLGITNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARAGYQQAQYWFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 120
[表13]
殖株 區 胺基酸序列（N→C）或核酸序列（5’→3’） SEQ ID NO
15 CDR-L1 RASQSISNYLN 121
CDR-L2 ATSSLQS 122
CDR-L3 QQSYSFPYT 123
CDR-H1 SYAMS 124
CDR-H2 WIIPISGTTNYAQKFQG 125
CDR-H3 QHSVGSVFDY 126
輕鏈可變區 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYATSSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPYTFGQGTKVEIK 127
輕鏈可變區編碼基因 GACATTCAAATGACGCAGAGTCCCTCCTCACTGAGTGCTAGCGTGGGCGATCGTGTGACAATTACTTGTCGCGCTAGCCAGTCTATCTCTAATTACCTGAACTGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAGGCGCCAAAATTGCTGATTTACGCAACTTCCTCTCTGCAGTCTGGTGTACCGTCCCGTTTCTCTGGCAGCGGTTCTGGTACGGATTTTACCCTGACCATCTCAAGCCTCCAGCCTGAAGATTTTGCCACCTATTATTGTCAGCAATCTTACTCTTTTCCGTACACGTTCGGGCAGGGAACTAAAGTGGAAATTAAA 128
重鏈可變區 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAMSWVRQAPGQGLEWMGWIIPISGTTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARQHSVGSVFDYWGQGTLVTVSS 129
重鏈可變區編碼基因 CAAGTTCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCAGAGGTGAAGAAGCCCGGCAGTTCTGTTAAGGTTTCCTGCAAAGCCTCAGGCGGGACTTTTAGTTCTTACGCAATGTCTTGGGTGCGGCAGGCGCCCGGCCAGGGTCTCGAATGGATGGGGTGGATTATCCCAATCTCTGGTACCACCAACTATGCACAAAAATTCCAAGGCCGCGTAACTATTACCGCCGACGAATCAACCTCCACCGCCTACATGGAACTCAGCTCTCTGAGGTCAGAAGACACGGCCGTCTATTATTGCGCCAGACAGCATTCTGTTGGTTCTGTTTTCGATTACTGGGGTCAGGGTACTCTGGTTACCGTCTCATCG 130
輕鏈（κ） DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYATSSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 131
重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAMSWVRQAPGQGLEWMGWIIPISGTTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARQHSVGSVFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 132
[表14]
殖株 區 胺基酸序列（N→C）或核酸序列（5’→3’） SEQ ID NO
16 CDR-L1 RASQDISSWLN 133
CDR-L2 AASSLQS 134
CDR-L3 QQSYSFPWT 135
CDR-H1 SYYMT 136
CDR-H2 GISPILGVTNYAQKFQG 137
CDR-H3 LLVGVSETYFDY 138
輕鏈可變區 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISSWLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIK 139
輕鏈可變區編碼基因 GACATTCAAATGACGCAGAGTCCCTCCTCACTGAGTGCTAGCGTGGGCGATCGTGTGACAATTACTTGTCGCGCTAGCCAGGATATCTCTTCTTGGCTGAACTGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAGGCGCCAAAATTGCTGATTTACGCAGCATCCTCTCTGCAGTCTGGTGTACCGTCCCGTTTCTCTGGCAGCGGTTCTGGTACGGATTTTACCCTGACCATCTCAAGCCTCCAGCCTGAAGATTTTGCCACCTATTATTGTCAGCAATCTTACTCTTTTCCGTGGACGTTCGGGCAGGGAACTAAAGTGGAAATTAAA 140
重鏈可變區 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYYMTWVRQAPGQGLEWMGGISPILGVTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLLVGVSETYFDYWGQGTLVTVSS 141
重鏈可變區編碼基因 CAAGTTCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCAGAGGTGAAGAAGCCCGGCAGTTCTGTTAAGGTTTCCTGCAAAGCCTCAGGCGGGACTTTTAGTTCTTACTACATGACCTGGGTGCGGCAGGCGCCCGGCCAGGGTCTCGAATGGATGGGGGGTATTTCTCCAATCCTGGGTGTTACCAACTATGCACAAAAATTCCAAGGCCGCGTAACTATTACCGCCGACGAATCAACCTCCACCGCCTACATGGAACTCAGCTCTCTGAGGTCAGAAGACACGGCCGTCTATTATTGCGCCAGACTGCTGGTTGGTGTTTCTGAAACTTACTTCGATTACTGGGGTCAGGGTACTCTGGTTACCGTCTCATCG 142
輕鏈（κ） DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISSWLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 143
重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYYMTWVRQAPGQGLEWMGGISPILGVTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLLVGVSETYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 144
[表15]
殖株 區 胺基酸序列（N→C）或核酸序列（5’→3’） SEQ ID NO
17 CDR-L1 RASQSISNYLN 145
CDR-L2 AASNMHS 146
CDR-L3 QQSHSFPWT 147
CDR-H1 TYAMS 148
CDR-H2 GISPTLGIANYAQKFQG 149
CDR-H3 VRYAGWTGYFDL 150
輕鏈可變區 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASNMHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSHSFPWTFGQGTKVEIK 151
輕鏈可變區編碼基因 GACATTCAAATGACGCAGAGTCCCTCCTCACTGAGTGCTAGCGTGGGCGATCGTGTGACAATTACTTGTCGCGCTAGCCAGTCTATCTCTAATTACCTGAACTGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAGGCGCCAAAATTGCTGATTTACGCAGCATCCAATATGCACTCTGGTGTACCGTCCCGTTTCTCTGGCAGCGGTTCTGGTACGGATTTTACCCTGACCATCTCAAGCCTCCAGCCTGAAGATTTTGCCACCTATTATTGTCAGCAATCTCACTCTTTTCCGTGGACGTTCGGGCAGGGAACTAAAGTGGAAATTAAA 152
重鏈可變區 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSTYAMSWVRQAPGQGLEWMGGISPTLGIANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVRYAGWTGYFDLWGQGTLVTVSS 153
重鏈可變區編碼基因 CAAGTTCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCAGAGGTGAAGAAGCCCGGCAGTTCTGTTAAGGTTTCCTGCAAAGCCTCAGGCGGGACTTTTAGTACCTACGCAATGTCTTGGGTGCGGCAGGCGCCCGGCCAGGGTCTCGAATGGATGGGGGGTATTTCTCCAACCCTGGGTATCGCAAACTATGCACAAAAATTCCAAGGCCGCGTAACTATTACCGCCGACGAATCAACCTCCACCGCCTACATGGAACTCAGCTCTCTGAGGTCAGAAGACACGGCCGTCTATTATTGCGCCAGAGTTCGTTACGCAGGTTGGACTGGTTACTTCGATCTGTGGGGTCAGGGTACTCTGGTTACCGTCTCATCG 154
輕鏈（κ） DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASNMHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSHSFPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 155
重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSTYAMSWVRQAPGQGLEWMGGISPTLGIANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVRYAGWTGYFDLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 156
[表16]
殖株 區 胺基酸序列（N→C）或核酸序列（5’→3’） SEQ ID NO
18 CDR-L1 RASQSISRWLN 157
CDR-L2 AASRLQS 158
CDR-L3 QQSESFPWT 159
CDR-H1 SYDIN 160
CDR-H2 WIIPTSGSTNYAQKFQG 161
CDR-H3 DSQSSYIGYFDV 162
輕鏈可變區 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISRWLNWYQQKPGKAPKLLIYAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSESFPWTFGQGTKVEIK 163
輕鏈可變區編碼基因 GACATTCAAATGACGCAGAGTCCCTCCTCACTGAGTGCTAGCGTGGGCGATCGTGTGACAATTACTTGTCGCGCTAGCCAGTCTATCTCTCGTTGGCTGAACTGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAGGCGCCAAAATTGCTGATTTACGCAGCATCCCGTCTGCAGTCTGGTGTACCGTCCCGTTTCTCTGGCAGCGGTTCTGGTACGGATTTTACCCTGACCATCTCAAGCCTCCAGCCTGAAGATTTTGCCACCTATTATTGTCAGCAATCTGAATCTTTTCCGTGGACGTTCGGGCAGGGAACTAAAGTGGAAATTAAA 164
重鏈可變區 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYDINWVRQAPGQGLEWMGWIIPTSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDSQSSYIGYFDVWGQGTLVTVSS 165
重鏈可變區編碼基因 CAAGTTCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCAGAGGTGAAGAAGCCCGGCAGTTCTGTTAAGGTTTCCTGCAAAGCCTCAGGCGGGACTTTTAGTTCTTACGATATCAACTGGGTGCGGCAGGCGCCCGGCCAGGGTCTCGAATGGATGGGGTGGATTATCCCAACCTCTGGTTCTACCAACTATGCACAAAAATTCCAAGGCCGCGTAACTATTACCGCCGACGAATCAACCTCCACCGCCTACATGGAACTCAGCTCTCTGAGGTCAGAAGACACGGCCGTCTATTATTGCGCCAGAGATTCTCAGTCTTCTTACATCGGTTACTTCGATGTTTGGGGTCAGGGTACTCTGGTTACCGTCTCATCG 166
輕鏈（κ） DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISRWLNWYQQKPGKAPKLLIYAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSESFPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 167
重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYDINWVRQAPGQGLEWMGWIIPTSGSTNYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDSQSSYIGYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 168
[表17]
殖株 區 胺基酸序列（N→C）或核酸序列（5’→3’） SEQ ID NO
19 CDR-L1 RASQSISNYLN 169
CDR-L2 DTSSLQS 170
CDR-L3 QQSYSTPYT 171
CDR-H1 AYGIS 172
CDR-H2 RIIPYLGTANYAQKFQG 173
CDR-H3 LSYGIGYESFDV 174
輕鏈可變區 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDTSSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPYTFGQGTKVEIK 175
輕鏈可變區編碼基因 GACATTCAAATGACGCAGAGTCCCTCCTCACTGAGTGCTAGCGTGGGCGATCGTGTGACAATTACTTGTCGCGCTAGCCAGTCTATCTCTAATTACCTGAACTGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAGGCGCCAAAATTGCTGATTTACGATACTTCCTCTCTGCAGTCTGGTGTACCGTCCCGTTTCTCTGGCAGCGGTTCTGGTACGGATTTTACCCTGACCATCTCAAGCCTCCAGCCTGAAGATTTTGCCACCTATTATTGTCAGCAATCTTACTCTACTCCGTACACGTTCGGGCAGGGAACTAAAGTGGAAATTAAA 176
重鏈可變區 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSAYGISWVRQAPGQGLEWMGRIIPYLGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLSYGIGYESFDVWGQGTLVTVSS 177
重鏈可變區編碼基因 CAAGTTCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCAGAGGTGAAGAAGCCCGGCAGTTCTGTTAAGGTTTCCTGCAAAGCCTCAGGCGGGACTTTTAGTGCATACGGTATCTCTTGGGTGCGGCAGGCGCCCGGCCAGGGTCTCGAATGGATGGGGCGTATTATCCCATACCTGGGTACCGCAAACTATGCACAAAAATTCCAAGGCCGCGTAACTATTACCGCCGACGAATCAACCTCCACCGCCTACATGGAACTCAGCTCTCTGAGGTCAGAAGACACGGCCGTCTATTATTGCGCCAGACTGTCTTACGGTATCGGTTACGAATCTTTCGATGTTTGGGGTCAGGGCACTTTAGTGACCGTCTCATCG 178
輕鏈（κ） DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDTSSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 179
重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSAYGISWVRQAPGQGLEWMGRIIPYLGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLSYGIGYESFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 180
[表18]
殖株 區 胺基酸序列（N→C）或核酸序列（5’→3’） SEQ ID NO
20 CDR-L1 RASQSISSYLN 181
CDR-L2 DTSTLQS 182
CDR-L3 QQSYSFPWT 183
CDR-H1 SYAMS 184
CDR-H2 SISSSGGSTYYADSVKG 185
CDR-H3 ELGGYGFSYFDY 186
輕鏈可變區 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYDTSTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIK 187
輕鏈可變區編碼基因 GACATTCAAATGACGCAGAGTCCCTCCTCACTGAGTGCTAGCGTGGGCGATCGTGTGACAATTACTTGTCGCGCTAGCCAGTCTATCTCTTCTTACCTGAACTGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAGGCGCCAAAATTGCTGATTTACGATACTTCCACTCTGCAGTCTGGTGTACCGTCCCGTTTCTCTGGCAGCGGTTCTGGTACGGATTTTACCCTGACCATCTCAAGCCTCCAGCCTGAAGATTTTGCCACCTATTATTGTCAGCAATCTTACTCTTTTCCGTGGACGTTCGGGCAGGGAACTAAAGTGGAAATTAAA 188
重鏈可變區 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAMSWVRQAPGQGLEWMGSISSSGGSTYYADSVKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARELGGYGFSYFDYWGQGTLVTVSS 189
重鏈可變區編碼基因 CAAGTTCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCAGAGGTGAAGAAGCCCGGCAGTTCTGTTAAGGTTTCCTGCAAAGCCTCAGGCGGGACTTTTAGTTCTTATGCAATGTCTTGGGTGCGGCAGGCGCCCGGCCAGGGTCTCGAATGGATGGGGTCTATCTCTTCTTCTGGTGGTTCTACTTACTATGCCGATTCAGTGAAGGGTCGCGTAACTATTACCGCCGACGAATCAACCTCCACCGCCTACATGGAACTCAGCTCTCTGAGGTCAGAAGACACGGCCGTCTATTATTGCGCCAGAGAACTGGGTGGTTACGGTTTCTCTTACTTCGATTACTGGGGTCAGGGCACTTTAGTGACCGTCTCATCG 190
輕鏈（κ） DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYDTSTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 191
重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAMSWVRQAPGQGLEWMGSISSSGGSTYYADSVKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARELGGYGFSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 192
[表19]
殖株 區 胺基酸序列（N→C）或核酸序列（5’→3’） SEQ ID NO
21 CDR-L1 RASQSIRNYLN 193
CDR-L2 ATSSLQS 194
CDR-L3 QQSYSFPWT 195
CDR-H1 DYAMS 196
CDR-H2 GISGSDIYYADSVKG 197
CDR-H3 AVSYWSYTFDY 198
輕鏈可變區 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIRNYLNWYQQKPGKAPKLLIYATSSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIK 199
輕鏈可變區編碼基因 GACATTCAAATGACGCAGAGTCCCTCCTCACTGAGTGCTAGCGTGGGCGATCGTGTGACAATTACTTGTCGCGCTAGCCAGTCTATCCGTAATTACCTGAACTGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAGGCGCCAAAATTGCTGATTTACGCAACTTCCTCTCTGCAGTCTGGTGTACCGTCCCGTTTCTCTGGCAGCGGTTCTGGTACGGATTTTACCCTGACCATCTCAAGCCTCCAGCCTGAAGATTTTGCCACCTATTATTGTCAGCAATCTTACTCTTTTCCGTGGACGTTCGGGCAGGGAACTAAAGTGGAAATTAAA 200
重鏈可變區 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSDYAMSWVRQAPGQGLEWMGGISGSDIYYADSVKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARAVSYWSYTFDYWGQGTLVTVSS 201
重鏈可變區編碼基因 CAAGTTCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCAGAGGTGAAGAAGCCCGGCAGTTCTGTTAAGGTTTCCTGCAAAGCCTCAGGCGGGACTTTTAGTGATTATGCAATGTCTTGGGTGCGGCAGGCGCCCGGCCAGGGTCTCGAATGGATGGGGGGTATCTCTGGTTCTGATATCTACTATGCCGATTCAGTGAAGGGTCGCGTAACTATTACCGCCGACGAATCAACCTCCACCGCCTACATGGAACTCAGCTCTCTGAGGTCAGAAGACACGGCCGTCTATTATTGCGCCAGAGCAGTTTCTTACTGGTCTTACACTTTTGATTACTGGGGTCAGGGCACTTTAGTGACCGTCTCATCG 202
輕鏈（κ） DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIRNYLNWYQQKPGKAPKLLIYATSSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 203
重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSDYAMSWVRQAPGQGLEWMGGISGSDIYYADSVKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARAVSYWSYTFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 204
[表20]
殖株 區 胺基酸序列（N→C）或核酸序列（5’→3’） SEQ ID NO
22 CDR-L1 RASQSIGSYLN 205
CDR-L2 DASTLQS 206
CDR-L3 QQSYSFPWT 207
CDR-H1 SYAMH 208
CDR-H2 GISSSGGTTYYADSVKG 209
CDR-H3 ALGVVGGTWFDY 210
輕鏈可變區 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIGSYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIK 211
輕鏈可變區編碼基因 GACATTCAAATGACGCAGAGTCCCTCCTCACTGAGTGCTAGCGTGGGCGATCGTGTGACAATTACTTGTCGCGCTAGCCAGTCTATCGGTTCTTACCTGAACTGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAGGCGCCAAAATTGCTGATTTACGATGCATCCACTCTGCAGTCTGGTGTACCGTCCCGTTTCTCTGGCAGCGGTTCTGGTACGGATTTTACCCTGACCATCTCAAGCCTCCAGCCTGAAGATTTTGCCACCTATTATTGTCAGCAATCTTACTCTTTTCCGTGGACGTTCGGGCAGGGAACTAAAGTGGAAATTAAA 212
重鏈可變區 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAMHWVRQAPGQGLEWMGGISSSGGTTYYADSVKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARALGVVGGTWFDYWGQGTLVTVSS 213
重鏈可變區編碼基因 CAAGTTCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCAGAGGTGAAGAAGCCCGGCAGTTCTGTTAAGGTTTCCTGCAAAGCCTCAGGCGGGACTTTTAGTTCTTATGCAATGCACTGGGTGCGGCAGGCGCCCGGCCAGGGTCTCGAATGGATGGGGGGTATCTCTTCTTCTGGTGGTACTACTTACTATGCCGATTCAGTGAAGGGTCGCGTAACTATTACCGCCGACGAATCAACCTCCACCGCCTACATGGAACTCAGCTCTCTGAGGTCAGAAGACACGGCCGTCTATTATTGCGCCAGAGCACTGGGTGTTGTTGGTGGTACTTGGTTCGATTACTGGGGTCAGGGCACTTTAGTGACCGTCTCATCG 214
輕鏈（κ） DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIGSYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 215
重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAMHWVRQAPGQGLEWMGGISSSGGTTYYADSVKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARALGVVGGTWFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 216
[表21]
殖株 區 胺基酸序列（N→C）或核酸序列（5’→3’） SEQ ID NO
23 CDR-L1 RASQSISNYLN 217
CDR-L2 DTSTLQS 218
CDR-L3 QQSYSFPWT 219
CDR-H1 DYAMH 220
CDR-H2 AISGSGGYTHYADSVKG 221
CDR-H3 SATFGVWETFDV 222
輕鏈可變區 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDTSTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIK 223
輕鏈可變區編碼基因 GACATTCAAATGACGCAGAGTCCCTCCTCACTGAGTGCTAGCGTGGGCGATCGTGTGACAATTACTTGTCGCGCTAGCCAGTCTATCTCTAATTACCTGAACTGGTATCAGCAGAAACCGGGCAAGGCGCCAAAATTGCTGATTTACGATACTTCCACTCTGCAGTCTGGTGTACCGTCCCGTTTCTCTGGCAGCGGTTCTGGTACGGATTTTACCCTGACCATCTCAAGCCTCCAGCCTGAAGATTTTGCCACCTATTATTGTCAGCAATCTTACTCTTTTCCGTGGACGTTCGGGCAGGGAACTAAAGTGGAAATTAAA 224
重鏈可變區 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSDYAMHWVRQAPGQGLEWMGAISGSGGYTHYADSVKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSATFGVWETFDVWGQGTLVTVSS 225
重鏈可變區編碼基因 CAAGTTCAGCTGGTCCAGAGCGGCGCAGAGGTGAAGAAGCCCGGCAGTTCTGTTAAGGTTTCCTGCAAAGCCTCAGGCGGGACTTTTAGTGATTATGCAATGCACTGGGTGCGGCAGGCGCCCGGCCAGGGTCTCGAATGGATGGGGGCAATCTCTGGTTCTGGTGGTTACACTCACTATGCCGATTCAGTGAAGGGTCGCGTAACTATTACCGCCGACGAATCAACCTCCACCGCCTACATGGAACTCAGCTCTCTGAGGTCAGAAGACACGGCCGTCTATTATTGCGCCAGATCTGCAACTTTCGGTGTTTGGGAAACTTTCGATGTTTGGGGTCAGGGCACTTTAGTGACCGTCTCATCG 226
輕鏈（κ） DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDTSTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSFPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 227
重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSDYAMHWVRQAPGQGLEWMGAISGSGGYTHYADSVKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSATFGVWETFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 228
實例 3. 選定抗體的製備
使用Plasmid Plus Maxi試劑盒（凱傑（Qiagen））製備實例2中構建的載體。該些載體用於在ExpiCHO-STM 細胞中表現抗體。藉由添加640微升ExpiFectamineTM CHO試劑（賽默飛世爾（Thermo Fisher）），將載體轉染到ExpiCHO-STM 細胞（基博科（Gibco））（1.2 x 109 個細胞/200毫升培養體積）中。轉染後1天，將細胞置於ExpiCHOTM 表現培養基（賽默飛世爾）中，在32°C及5% CO2 條件下共培養7至11天。第1天，向培養物中加入1200微升ExpiCHOTM 增強劑（賽默飛世爾）及48毫升ExpiCHOTM 培養液（賽默飛世爾）。
在4°C下以3500 rpm的速度對培養細胞離心20分鐘，且然後使用0.22微米瓶頂過濾系統（康寧（Corning））進行過濾。收穫培養物上清液，並使用AKTA Pure L （通用電氣醫療集團（GE healthcare））進行純化。將培養上清液加載到配備Hitrap MabSelectSure 5毫升柱（通用電氣醫療集團）的AKTA Pure L中，流速為5毫升/分鐘，並用10個柱體積（CV）的1X PBS洗滌柱。然後，向柱中加入洗脫緩衝液（0.1 M檸檬酸鈉pH 3.4緩衝液），以洗脫目的蛋白。使用Amicon Ultra過濾器裝置（MWCO 10K，默克（Merck））濃縮洗脫液，離心，並用1X PBS緩衝液進行緩衝液交換。
純化後的抗體樣本用1X PBS稀釋，以使最終濃度約為1毫克/毫升。將十（10）微升還原加樣緩衝液（3X）或非還原加樣緩衝液（3X）與20微升的純化抗體樣本混合，在95°C加熱浴中放置2分鐘，且然後取出並冷卻。將樣本注入配備在電泳裝置上的SDS-PAGE梯度凝膠儀（4%至12%）中，每孔進樣量為10微克，並在凝膠上顯影。為了分析樣本的分子量，將Precision Plus ProteinTM 雙色標準液（伯樂（BIO-RAD））注入另一個單獨的孔中。凝膠用考馬斯氏染色溶液染色並脫色以獲得凝膠影像（圖1）。實例 4. 所選抗體的結合親和力分析
使用Biacore T200（通用電氣醫療集團）量測了實例3中選擇的19種抗體對抗原LILRB1的結合親和力。抗人IgG (Fc)抗體（通用電氣醫療集團，目錄號BR-1008-39，最終濃度為25微克/毫升）以5微升/分鐘的流速流動360秒，以5000-7000 RU使用胺偶聯試劑盒（Amine Coupling Kit）（通用電氣醫療集團，目錄號BR-1000-50）固定在S系列感測晶片CM5（Series S Sensor Chip CM5）（通用電氣醫療集團，目錄號BR-1005-30）上。抗原人LILRB1蛋白（LILRB1-His，RnD系統，目錄號8989-T2）以30微升/分鐘的流速以25 nM至400 nM的5種不同濃度注射至其中，以確定如表3所示的ka 及kd 值並由此計算KD 值。10號抗體對LILRB1抗原的結合親和力（KD ）約為24.13 nM，且13號抗體對LILRB1抗原的結合親和力（KD ）約為30.27 nM（表22）。圖2中顯示了13號抗體的感測圖結果。 [表22] LILRB1抗體的抗原結合親和力（K D ）
殖株號 k a (x 105 ) (1/Ms) k d (x 10-4 ) (1/s) K D (nM)
8 0.6166 46.37 75.2
10 0.1233 2.977 24.13
11 0.08662 1.061 12.25
13 0.9729 2.945 30.27
14 1.621 663.1 409.1
16 1.157 96.35 83.3
18 1.439 6.221 4.32
22 0.6826 340.8 499.3
實例 5. 所選抗體的體外生物活性試驗 5.1. 細胞表面結合試驗
為了檢測實例4中選擇的抗體是否結合在細胞表面表現的LILRB1，進行細胞表面結合試驗。將過表現LILRB1的CHO細胞培養在限定化學成分培養基（Chemical Defined Medium）中，並加入到U形底96孔組織培養板（BD法爾康（BD Falcon））中至2×105 個細胞/孔。將每種選定的抗體加入孔中，使最終濃度達到每孔10微克/毫升，並在4℃孵育30分鐘。為了觀察所選抗體的LILRB1專一性結合水平，以相同方式處理了人IgG4同型對照抗體（生物傳奇（Biolegend））。用FACS緩衝液洗滌後，用抗人Fc-生物素抗體（生命技術公司（life technologies））處理細胞，並在4℃孵育1小時。用FACS緩衝液洗滌後，向每個孔中加入鏈黴親和素PE（BD法明根（BD Pharmigen）），並在4°C下靜置30分鐘。用FACS緩衝液洗滌後，將其懸浮並通過iQue screener流式細胞儀（賽多利斯（Sartorius））分析。如圖3所示，8號、10號、11號、13號及18號抗體顯示出較人IgG4同種型對照抗體更高的結合水平。5.2. 自然殺傷（ natural killer ， NK ）細胞殺傷癌細胞能力增強的分析
為了確定實例4中選擇的抗體是否增加NK細胞對癌細胞的溶解程度，分析了NK細胞KHYG-1導致的HLA-G-過表現HEK293細胞的細胞死亡率。將KHYG-1細胞（JCRB）以4x105 個細胞/孔（2x104 個細胞/毫升）的量加入96孔組織培養板（BD法爾康）中。將所選抗體加入孔中，使最終濃度達到10微克/毫升，並在37℃孵育1小時。作為陰性對照，以相同方式處理人IgG4同種型對照抗體（生物傳奇）。按照製造商的方案，在單獨的試管中用IncuCyte CytoLight快速紅試劑（Rapid Red Reagent）（賽多利斯）對HLA-G-過表現HEK293細胞進行染色。1小時後，將HLA-G-過表現HEK293細胞以4x105 個細胞/孔（2x104 個細胞/毫升）的量加入平板。將平板在37°C及5% CO2 條件下置於設置在培養箱中的IncuCyte S3（賽多利斯）中，並對其進行72小時的影像採集。
為了比較每種抗體的效力，將同種型對照的歸一化紅色區域匯合值轉換為1，以獲得相對細胞生存力（同種型 = 1），如下式1所示。 [式1] 相對細胞生存力 = [抗體的歸一化紅細胞面積匯合值]/[同種型的歸一化紅細胞面積匯合值]
所得結果見圖4。在圖4中，可解釋為相對細胞生存力愈低，抗LILRB1 mAb介導的NK細胞的細胞毒性愈高。如圖4所示，相較於人IgG4同種型對照，所有測試的抗體（10號、11號及13號抗體）皆增加了HLA-G-過表現HEK293細胞的細胞死亡。該些結果表明，本發明提供的抗體對癌細胞表現出高細胞毒性。實例 6 ：測試抗體的體內生物活性的測定
對實例3中確認了與抗原的結合能力的3種抗體（10號、11號及13號抗體）的體內抗癌效力進行了試驗。為此，檢測了給予三種類型的抗體是否會縮小腫瘤大小，所述腫瘤係藉由將人結直腸癌細胞（Bioware Brite細胞系HCT116 Red-Fluc結直腸癌細胞（珀金埃爾默（PerkinElmer））及THP-1衍生巨噬細胞植入小鼠而產生的。作為陰性對照，用人IgG1同種型對照抗體（BioXcell，目錄號BP0297）處理如上製備的人結腸癌異種移植小鼠。6.1. THP-1 衍生巨噬細胞的製備
藉由用150 nM佛波醇12-肉豆蔻酸13-乙酸酯（phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA，西格瑪（Sigma））、20奈克/毫升干擾素γ（派普泰克（Peprotech））及10皮克/毫升脂多糖（lipopolysaccharide，LPS，西格瑪）分化THP-1細胞（ATCC）製備上述使用的THP-1衍生巨噬細胞。6.2. 小鼠模型中抗癌效力的量測
向五（5）周齡雌性CIEA NOG小鼠（NOG免疫缺陷小鼠，日本中央實驗動物研究所（Central Institute of Experimental Animals, Japan））皮下注射3 x 106 個細胞的HCT116 Red-Fluc結腸直腸癌細胞、3 x 106 個細胞的THP-1衍生巨噬細胞及三種抗體中的每一種（每只小鼠20微克）的混合物。從細胞移植後第4天開始，每種抗體按5毫克/千克的劑量每週二次腹膜內注射給藥。
測量根據抗體給藥的腫瘤體積變化，並顯示於圖5中。如圖5所示，在移植有HCT116結腸直腸癌細胞及THP-1衍生巨噬細胞的小鼠模型中，所有測試的抗體（10號、11號及13號抗體）皆顯示出具有統計學意義的抑制腫瘤生長的作用。
無
圖1為示出實例中純化的抗LILRB1抗體的SDS-PAGE凝膠分析結果的電泳影像。 圖2為示出根據實例的對13號抗LILRB1抗體進行的表面電漿共振（SPR）試驗結果的感測圖。 圖3為示出根據實施例的8號、10號、11號、13號及18號抗LILRB1抗體與LILRB1過表現CHO細胞的結合能力的圖。 圖4為示出根據實施例的使用HLA-G過表現HEK293細胞及自然殺傷細胞KHYG-1的細胞殺傷活性的IncuCyte S3分析結果的圖，其中該些細胞用抗LILRB1抗體（10號、11號及13號抗體）或人IgG4同種型對照抗體（陰性對照）處理。 圖5為示出根據實例的10號、11號、13號抗LILRB1抗體的體內抗腫瘤效果的圖。
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
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Figure 12_A0101_SEQ_0133
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Figure 12_A0101_SEQ_0135
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Claims (13)

  1. 一種抗LILRB1抗體或其抗原結合片段，包括如下互補決定區（complementarity determining region，CDR）： CDR-L1，包括SEQ ID NO: 1、13、25、37、49、61、73、85、97、109、121、133、145、157、169、181、193、205或217的胺基酸序列； CDR-L2，包括SEQ ID NO: 2、14、26、38、50、62、74、86、98、110、122、134、146、158、170、182、194、206或218的胺基酸序列； CDR-L3，包括SEQ ID NO: 3、15、27、39、51、63、75、87、99、111、123、135、147、159、171、183、195、207或219的胺基酸序列； CDR-H1，包括SEQ ID NO: 4、16、28、40、52、64、76、88、100、112、124、136、148、160、172、184、196、208或220的胺基酸序列； CDR-H2，包括SEQ ID NO: 5、17、29、41、53、65、77、89、101、113、125、137、149、161、173、185、197、209或221的胺基酸序列；以及 CDR-H3，包括SEQ ID NO: 6、18、30、42、54、66、78、90、102、114、126、138、150、162、174、186、198、210或222的胺基酸序列， 其中所述互補決定區是基於卡巴特（Kabat）編號定義的。
  2. 如請求項1所述的抗LILRB1抗體或其抗原結合片段，包括： (1)包括SEQ ID NO: 1的胺基酸序列的CDR-L1、包括SEQ ID NO: 2的胺基酸序列的CDR-L2、包括SEQ ID NO: 3的胺基酸序列的CDR-L3、包括SEQ ID NO: 4的胺基酸序列的CDR-H1、包括SEQ ID NO: 5的胺基酸序列的CDR-H2、以及包括SEQ ID NO: 6的胺基酸序列的CDR-H3； (2)包括SEQ ID NO: 13的胺基酸序列的CDR-L1、包括SEQ ID NO: 14的胺基酸序列的CDR-L2、包括SEQ ID NO: 15的胺基酸序列的CDR-L3、包括SEQ ID NO: 16的胺基酸序列的CDR-H1、包括SEQ ID NO: 17的胺基酸序列的CDR-H2、以及包括SEQ ID NO: 18的胺基酸序列的CDR-H3； (3)包括SEQ ID NO: 25的胺基酸序列的CDR-L1、包括SEQ ID NO: 26的胺基酸序列的CDR-L2、包括SEQ ID NO: 27的胺基酸序列的CDR-L3、包括SEQ ID NO: 28的胺基酸序列的CDR-H1、包括SEQ ID NO: 29的胺基酸序列的CDR-H2、以及包括SEQ ID NO: 30的胺基酸序列的CDR-H3； (4)包括SEQ ID NO: 37的胺基酸序列的CDR-L1、包括SEQ ID NO: 38的胺基酸序列的CDR-L2、包括SEQ ID NO: 39的胺基酸序列的CDR-L3、包括SEQ ID NO: 40的胺基酸序列的CDR-H1、包括SEQ ID NO: 41的胺基酸序列的CDR-H2、以及包括SEQ ID NO: 42的胺基酸序列的CDR-H3； (5)包括SEQ ID NO: 49的胺基酸序列的CDR-L1、包括SEQ ID NO: 50的胺基酸序列的CDR-L2、包括SEQ ID NO: 51的胺基酸序列的CDR-L3、包括SEQ ID NO: 52的胺基酸序列的CDR-H1、包括SEQ ID NO: 53的胺基酸序列的CDR-H2、以及包括SEQ ID NO: 54的胺基酸序列的CDR-H3； (6)包括SEQ ID NO: 61的胺基酸序列的CDR-L1、包括SEQ ID NO: 62的胺基酸序列的CDR-L2、包括SEQ ID NO: 63的胺基酸序列的CDR-L3、包括SEQ ID NO: 64的胺基酸序列的CDR-H1、包括SEQ ID NO: 65的胺基酸序列的CDR-H2、以及包括SEQ ID NO: 66的胺基酸序列的CDR-H3； (7)包括SEQ ID NO: 73的胺基酸序列的CDR-L1、包括SEQ ID NO: 74的胺基酸序列的CDR-L2、包括SEQ ID NO: 75的胺基酸序列的CDR-L3、包括SEQ ID NO: 76的胺基酸序列的CDR-H1、包括SEQ ID NO: 77的胺基酸序列的CDR-H2、以及包括SEQ ID NO: 78的胺基酸序列的CDR-H3； (8)包括SEQ ID NO: 85的胺基酸序列的CDR-L1、包括SEQ ID NO: 86的胺基酸序列的CDR-L2、包括SEQ ID NO: 87的胺基酸序列的CDR-L3、包括SEQ ID NO: 88的胺基酸序列的CDR-H1、包括SEQ ID NO: 89的胺基酸序列的CDR-H2、以及包括SEQ ID NO: 90的胺基酸序列的CDR-H3； (9)包括SEQ ID NO: 97的胺基酸序列的CDR-L1、包括SEQ ID NO: 98的胺基酸序列的CDR-L2、包括SEQ ID NO: 99的胺基酸序列的CDR-L3、包括SEQ ID NO: 100的胺基酸序列的CDR-H1、包括SEQ ID NO: 101的胺基酸序列的CDR-H2、以及包括SEQ ID NO: 102的胺基酸序列的CDR-H3； (10)包括SEQ ID NO: 109的胺基酸序列的CDR-L1、包括SEQ ID NO: 110的胺基酸序列的CDR-L2、包括SEQ ID NO: 111的胺基酸序列的CDR-L3、包括SEQ ID NO: 112的胺基酸序列的CDR-H1、包括SEQ ID NO: 113的胺基酸序列的CDR-H2、以及包括SEQ ID NO: 114的胺基酸序列的CDR-H3； (11)包括SEQ ID NO: 121的胺基酸序列的CDR-L1、包括SEQ ID NO: 122的胺基酸序列的CDR-L2、包括SEQ ID NO: 123的胺基酸序列的CDR-L3、包括SEQ ID NO: 124的胺基酸序列的CDR-H1、包括SEQ ID NO: 125的胺基酸序列的CDR-H2、以及包括SEQ ID NO: 126的胺基酸序列的CDR-H3； (12)包括SEQ ID NO: 133的胺基酸序列的CDR-L1、包括SEQ ID NO: 134的胺基酸序列的CDR-L2、包括SEQ ID NO: 135的胺基酸序列的CDR-L3、包括SEQ ID NO: 136的胺基酸序列的CDR-H1、包括SEQ ID NO: 137的胺基酸序列的CDR-H2、以及包括SEQ ID NO: 138的胺基酸序列的CDR-H3； (13)包括SEQ ID NO: 145的胺基酸序列的CDR-L1、包括SEQ ID NO: 146的胺基酸序列的CDR-L2、包括SEQ ID NO: 147的胺基酸序列的CDR-L3、包括SEQ ID NO: 148的胺基酸序列的CDR-H1、包括SEQ ID NO: 149的胺基酸序列的CDR-H2、以及包括SEQ ID NO: 150的胺基酸序列的CDR-H3； (14)包括SEQ ID NO: 157的胺基酸序列的CDR-L1、包括SEQ ID NO: 158的胺基酸序列的CDR-L2、包括SEQ ID NO: 159的胺基酸序列的CDR-L3、包括SEQ ID NO: 160的胺基酸序列的CDR-H1、包括SEQ ID NO: 161的胺基酸序列的CDR-H2、以及包括SEQ ID NO: 162的胺基酸序列的CDR-H3； (15)包括SEQ ID NO: 169的胺基酸序列的CDR-L1、包括SEQ ID NO: 170的胺基酸序列的CDR-L2、包括SEQ ID NO: 171的胺基酸序列的CDR-L3、包括SEQ ID NO: 172的胺基酸序列的CDR-H1、包括SEQ ID NO: 173的胺基酸序列的CDR-H2、以及包括SEQ ID NO: 174的胺基酸序列的CDR-H3； (16)包括SEQ ID NO: 181的胺基酸序列的CDR-L1、包括SEQ ID NO: 182的胺基酸序列的CDR-L2、包括SEQ ID NO: 183的胺基酸序列的CDR-L3、包括SEQ ID NO: 184的胺基酸序列的CDR-H1、包括SEQ ID NO: 185的胺基酸序列的CDR-H2、以及包括SEQ ID NO: 186的胺基酸序列的CDR-H3； (17)包括SEQ ID NO: 193的胺基酸序列的CDR-L1、包括SEQ ID NO: 194的胺基酸序列的CDR-L2、包括SEQ ID NO: 195的胺基酸序列的CDR-L3、包括SEQ ID NO: 196的胺基酸序列的CDR-H1、包括SEQ ID NO: 197的胺基酸序列的CDR-H2、以及包括SEQ ID NO: 198的胺基酸序列的CDR-H3； (18)包括SEQ ID NO: 205的胺基酸序列的CDR-L1、包括SEQ ID NO: 206的胺基酸序列的CDR-L2、包括SEQ ID NO: 207的胺基酸序列的CDR-L3、包括SEQ ID NO: 208的胺基酸序列的CDR-H1、包括SEQ ID NO: 209的胺基酸序列的CDR-H2、以及包括SEQ ID NO: 210的胺基酸序列的CDR-H3；或者 (19)包括SEQ ID NO: 217的胺基酸序列的CDR-L1、包括SEQ ID NO: 218的胺基酸序列的CDR-L2、包括SEQ ID NO: 219的胺基酸序列的CDR-L3、包括SEQ ID NO: 220的胺基酸序列的CDR-H1、包括SEQ ID NO: 221的胺基酸序列的CDR-H2、以及包括SEQ ID NO: 222的胺基酸序列的CDR-H3。
  3. 如請求項1所述的抗LILRB1抗體或其抗原結合片段，包括： 輕鏈可變區，包括SEQ ID NO: 7、19、31、43、55、67、79、91、103、115、127、139、151、163、175、187、199、211或223的胺基酸序列，以及 重鏈可變區，包括SEQ ID NO: 9、21、33、45、57、69、81、93、105、117、129、141、153、165、177、189、201、213或225的胺基酸序列。
  4. 如請求項1所述的抗LILRB1抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體為人IgG1或IgG4抗體。
  5. 如請求項1所述的抗LILRB1抗體或其抗原結合片段，其中所述抗原結合片段為所述抗LILRB1抗體的scFv、(scFv)2 、Fab、Fab’、F(ab’)2 、包括融合有免疫球蛋白Fc的scFv的融合多肽、或包括融合有輕鏈恆定區的scFv的融合多肽。
  6. 一種藥物組成物，用於治療或預防癌症，所述藥物組成物包括如請求項1至5中任一項所述的抗LILRB1抗體或其抗原結合片段。
  7. 如請求項6所述的藥物組成物，其中所述癌症的特徵在於MHC I類的過表現。
  8. 如請求項6所述的藥物組成物，其中所述藥物組成物具有抑制癌細胞的免疫逃脫的活性。
  9. 一種核酸分子，對如請求項1至5中任一項所述的抗體或其抗原結合片段進行編碼。
  10. 一種重組載體，包括如請求項9所述的核酸分子。
  11. 一種重組細胞，包括如請求項9所述的核酸分子或包括所述核酸分子的重組載體。
  12. 一種製備抗LILRB1抗體或其抗原結合片段的方法，包括培養如請求項11所述的重組細胞。
  13. 一種免疫逃脫藥物組成物，用於抑制癌細胞免疫逃脫，所述藥物組成物包括如請求項1至5中任一項所述的抗LILRB1抗體或其抗原結合片段。
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