JP2012528587A - 膵臓癌細胞または組織に特異的に結合できる核酸アプタマー及びその用途 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明の第二の目的は、前記核酸アプタマーを含有する膵臓癌の検出方法を提供することである。
本発明の第三の目的は、前記核酸アプタマーを利用した膵臓癌の診断または治療用組成物を提供することである。
本発明はまた、前記核酸アプタマーまたはその化学的変形を含む核酸アプタマーを含有する、膵臓癌の診断または治療用組成物を提供する。
本発明はまた、前記核酸アプタマーまたはその化学的変形を含む核酸アプタマーを投与することを特徴とする、膵臓癌の診断または治療方法を提供する。
本発明はまた、前記核酸アプタマーまたはその化学的変形を含む核酸アプタマーの膵臓癌の診断または治療用用途を提供する。
本発明はまた、前記核酸アプタマーまたはその化学的変形を含む核酸アプタマーが固定されている、膵臓癌診断用センサーを提供する。
本発明はまた、前記核酸アプタマーまたはその化学的変形を含む核酸アプタマーを含有する、膵臓癌診断用キットを提供する。
本発明はまた、前記膵臓癌診断用センサーまたは膵臓癌診断用キットを利用することを特徴とする、膵臓癌の検出方法を提供する。
本発明はまた、前記核酸アプタマーまたはその化学的変形を含む核酸アプタマーを含有する、膵臓癌特異的薬品伝達組成物を提供する。
本発明はまた、前記核酸アプタマーまたはその化学的変形を含む核酸アプタマーを利用した、膵臓癌細胞特異的表面バイオマーカーの検出方法を提供する。
本発明の詳細な説明などにおいて使用される主な用語の定義は、下記の通りである。
本願において「試料」とは、膵臓癌マーカーを含有していると推定されて分析が行われる組成物を意味し、すい臓組織、すい臓細胞、血液、血清、血漿、唾液、喀痰及び尿などが該当する。
本願において「90%以上100%未満の相同性を持つ核酸配列」とは、一個乃至数個のヌクレオチドが追加、欠失または置き換えられて90%以上100%未満のホモロジーを有する配列であって、類似の膵臓癌細胞株結合能を示す核酸配列を意味する。
SQ1:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU GCCUGAUUAG CGGUAUCACG AUUACUUACC UUCGUUGCUG AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3’(配列番号1)
SQ2:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU GCCUGAAAAG CUAUCGCCCA AUUCGCAGUG AUAUCCUUUA AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3’(配列番号2)
SQ3:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU GCCUGAAAAC CUGGUCUCUC UGUCAGCAAA AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3’(配列番号3)
SQ4:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU GCCUGAGUAG CUGGGUCCGU CCCCACACAU UACCAUUUGU AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3’(配列番号4)
SQ5:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU GCCUGAAAAC UGGUGUACCU CUUUGCCCUA UCUUAUCUGG AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3’(配列番号5)
SQ6:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU GCCUGAAGAC UGGAUAUACU CUUAAGCAUU UCUAUAAUCG AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3'(配列番号6)
SQ7:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU GCCUGAAACU GCUGCAUCGU CUCCCACGUA UUACACAUGA AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3’(配列番号7)
SQ8:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU GCCUGAAAAG UUGAACUCCA AAUACGCGCU G AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3’(配列番号8)
S49:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU GCCUGAAAAG UGGCCUCCCU ACAAAGAACU UAUAUCAUCC AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3’(配列番号9)
S20:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU GCCUGAAAAG UUUAUCCCCC UUUUAGCGUU UACCAUAAUG AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3’(配列番号10)
S59:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU ACCUGAAAAC UGGUUUCCGG CAUCCCGUAU UGCGGCUUUA C AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3’(配列番号11)
S11:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU GCCUGAAGAG CGAAGUAAAU CUCUCACUGC GUCACUACA AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3’(配列番号12)
S52:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU ACCUGAGUAG CGUUUCCCGG CAUUAUACUA UAAACUU AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3'(配列番号13)
S68:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU CCUGAAAGUU UGGAUAUCUU GGCGCUUGAC UAGAAAACUU GAAAUUUGU AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3’(配列番号14)
S3:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU CUUAUGUUCA UGCCAGCGCA AUUGCC AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3’(配列番号15)
本発明に係る医薬組成物は、各々通常の方法により剤形化できるが、例えば、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、シロップ、エアゾール等の剤形、外用剤、座薬及び滅菌注射溶液の形態で剤形化して用いられる。組成物に含まれる担体、賦形剤及び希釈剤としてはラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルギン酸塩、ゼラチン、カルシウムホスフェート、カルシウムシリケート、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニールピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、マグネシウムステアレート及び鉱物油が挙げられる。
1−1:ssRNAライブラリー及びPCR増幅とcDNA合成のためのプライマーの準備
次の配列を持つランダムなssDNAライブラリーを化学的に合成して、PAGE(Genotech Inc.,Korea)で分離した。
5’−ATA CCA GCT TAT TCA ATT NNN NNN NNN NNN NNN NNN NNN NNN NNN NNN NNN NNN NNN NAG ATA GTA AGT GCA ATC T−3’(配列番号16)
アップストリームプライマー:5’−GGTAATACGACTCACTATAGGGAGATACCAGCTTATTCAATT−3’(配列番号17)
ダウンストリームプライマー:5’−AGATTGCACTTACTATCT−3’(配列番号18)
図1に示したように、ヒト膵臓癌細胞株であるPanc−1(American Tissue Culture Collection)とCaPan−1(American Tissue Culture Collection)に対し、陽性選別を行うが、各選別ラウンド毎に細胞株を変更して行った。
SQ1:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU GCCUGAUUAG CGGUAUCACG AUUACUUACC UUCGUUGCUG AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3’(配列番号1)
SQ2:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU GCCUGAAAAG CUAUCGCCCA AUUCGCAGUG AUAUCCUUUA AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3’(配列番号2)
SQ3:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU GCCUGAAAAC CUGGUCUCUC UGUCAGCAAA AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3’(配列番号3)
SQ4:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU GCCUGAGUAG CUGGGUCCGU CCCCACACAU UACCAUUUGU AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3’(配列番号4)
SQ5:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU GCCUGAAAAC UGGUGUACCU CUUUGCCCUA UCUUAUCUGG AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3’(配列番号5)
SQ6:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU GCCUGAAGAC UGGAUAUACU CUUAAGCAUU UCUAUAAUCG AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3'(配列番号6)
SQ7:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU GCCUGAAACU GCUGCAUCGU CUCCCACGUA UUACACAUGA AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3’(配列番号7)
SQ8:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU GCCUGAAAAG UUGAACUCCA AAUACGCGCU G AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3’(配列番号8)
S49:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU GCCUGAAAAG UGGCCUCCCU ACAAAGAACU UAUAUCAUCC AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3’(配列番号9)
S20:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU GCCUGAAAAG UUUAUCCCCC UUUUAGCGUU UACCAUAAUG AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3’(配列番号10)
S59:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU ACCUGAAAAC UGGUUUCCGG CAUCCCGUAU UGCGGCUUUA C AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3’(配列番号11)
S11:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU GCCUGAAGAG CGAAGUAAAU CUCUCACUGC GUCACUACA AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3'(配列番号12)
S52:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU ACCUGAGUAG CGUUUCCCGG CAUUAUACUA UAAACUU AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3’(配列番号13)
S68:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU CCUGAAAGUU UGGAUAUCUU GGCGCUUGAC UAGAAAACUU GAAAUUUGU AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3’(配列番号14)
S3:5’−AUACCAGCUUAUUCAAUU CUUAUGUUCA UGCCAGCGCA AUUGCC AGAUAGUAAGUGCAAUCU−3'(配列番号15)
2−1:リアルタイムPCR法を利用した膵臓癌細胞株に対する結合親和度測定
定量的なRT−PCR法を利用して、SELEX法を行う前の初期ssRNAプール(pool)、各5番目、10番目及び14番目選別ラウンドから分離して取得した溶出物に対し結合親和度を測定した。
蛍光検出を介して結合親和度を測定するため、5'TMARA標識されたダウンストリームプライマーを利用した。TMARA−標識された3'プライマーでは、5’−TAMRA−AGATTGCACTTACTATCT−3’(配列番号19)を利用した。
本発明で最終的に得た14番目ラウンドを行ったアプタマープールの他のヒト癌細胞株に対する結合親和度を確認するため、膵臓癌細胞株であるCaPan−1と共にHela(子宮頸部癌、American Tissue Culture Collection)、T98G(膠芽腫、American Tissue Culture Collection)、MDAMB−231(乳癌、American Tissue Culture Collection)及びHuh7(肝癌、American Tissue Culture Collection)に対し、前記実施例2−1と同様の方法で定量的なRT−PCRを行った。
3−1:リアルタイムPCR法を利用した膵臓癌細胞株に対する結合親和度測定
実施例1で取得したアプタマーの膵臓癌細胞株に対する検出活性を測定するため、CaPan−1細胞株及びPanc−1細胞株に対し前記実施例3−1と同じ方法で定量的なRT−PCRを行った。
前記SQ2、SQ4、SQ6及びSQ8アプタマー及び高いコピー数を示したSQ1アプタマーに対し、結合アッセイを平衡ろ過法によって行った。即ち、1nM乃至1μM濃度範囲で各アプタマーを0.5×106のPan1細胞株及びCaPan−1細胞株と培養した後、結合反応を前記実施例1同様に行い、結合された個体数を前記実施例2−1の定量的なRT−PCRを利用し定量した。
y=(Bmax・ssRNA)/(Kd+ssRNA)
この時、yは飽和度(saturation)の程度であり、Bmaxは最大結合ポイントの数であり、Kdは解離(dissociation)常数である。
それと共に、前記SQ2及びSQ6アプタマー及び高いコピー数を示したSQ1アプタマーの膵臓癌細胞株に対する結合親和度を確認するため、前記実施例2−2と同じ方法で5’TMARA標識されたダウンストリームプライマーを利用した蛍光検出を行った。
前記SQ2、SQ4及びSQ8アプタマーが、Panc−1及びCaPan−1の膵臓癌細胞株以外に他の膵臓癌細胞株も特異的に検出できるか否かを確認するため、さらにBxpc−3、Aspc−1、Miacapa−1及びHapaf−2の膵臓癌細胞株に対し前記実施例2−2と同じ方法で5'TMARA標識されたダウンストリームプライマーを利用した蛍光検出を行った。
5−1:蛍光検出を利用した膵臓癌細胞株に対する結合親和度測定
蛍光検出を介して結合親和度を測定するため、前記配列番号19の5'TMARA標識されたダウンストリームプライマーを利用した。
それと共に、SQ1乃至SQ8アプタマーの膵臓癌細胞株に対する結合親和度を測定するため、実施例3−2と同じ方法で結合アッセイを平衡ろ過法によって行って解離常数を算出した。
蛍光検出時に、最も親和度が高いことが明らかになったSQ2アプタマーの長さを下記のように変化させた後、膵臓癌細胞株であるCaPan−1に対する結合親和度を測定した。
SQ2 full length(配列番号2):
5'−AUACCAGCUUAUUCAAUUGCCUGAAAAGCUAUCGCCCAAUUCGCAGUGAUAUCCUUUAAGAUAGUAAGUGCAAUCU−3'(76nts)
SQ2 down truncated(配列番号36):
5'−AUACCAGCUUAUUCAAUUGCCUGAAAAGCUAUCGCCCAAUUCGCAGUGAUAUCCUUUA−3'(58nts)
SQ2 up truncated(配列番号37):
5'−GCCUGAAAAGCUAUCGCCCAAUUCGCAGUGAUAUCCUUUAAGAUAGUAAGUGCAAUCU−3'(58nts)
SQ2 6−58(配列番号38):
5'−AGCUUAUUCAAUUGCCUGAAAAGCUAUCGCCCAAUUCGCAGUGAUAUCCUUUA−3'(53nts)
SQ2 6−50(配列番号39):
5'−AGCUUAUUCAAUUGCCUGAAAAGCUAUCGCCCAAUUCGCAGUGAU−3'(45nts)
SQ2 1−50(配列番号40):
5'−AUACCAGCUUAUUCAAUUGCCUGAAAAGCUAUCGCCCAAUUCGCAGUGAU−3'(50nts)
SQ2 6−30(配列番号41):
5'−AGCUUAUUCAAUUGCCUGAAAAGCU−3'(25nts)
7−1:蛍光検出を利用した膵臓癌細胞株に対する蛍光活性測定
追加的に、前記25ntsの長さに過ぎないが、膵臓癌細胞株に対する結合親和度が優れていることが示されたSQ2 6−30(配列番号41)の膵臓癌細胞株CaPan−1、Panc−1及びHPAF−II(ATCC)に対する結合親和度を確認するため、前記実施例2−2と同じ方法で5'TMARA標識されたダウンストリームプライマーを利用した蛍光検出を行った。
さらに、本発明に係るアプタマーが膵臓癌のみを特異的に検出できるのか確認するため、他の癌細胞株であるSK−BR−3(Human Breast cancer、ATCC)、LnCap(Human Prostrate cancer、ATCC)、Hep G2(Human Liver carcinoma、ATCC)、Hela(ATCC)、A549(Human Lung Adenocarcinoma、ATCC)、SK−N−SH(Human Neuroblastoma、ATCC)、T98G(ATCC)及びBend−3(Mouse Endothelial cells、ATCC)細胞株に対し、前記実施例2−2と同じ方法で5'TMARA標識されたダウンストリームプライマーを利用した蛍光検出を行った。
Claims (23)
- 配列番号14、配列番号15及び配列番号35で表される核酸配列からなる群から選択されたいずれか一つの核酸配列またはその断片を含み、膵臓癌細胞または組織に特異的に結合できる20〜100ntsの核酸アプタマーであって
前記核酸アプタマーがDNAである場合には、前記核酸配列においてUはTであることを特徴とする核酸アプタマー。 - 前記核酸アプタマーの長さが、25〜85ntsであることを特徴とする請求項1に記載の核酸アプタマー。
- 配列番号35で表される核酸配列は、配列番号41で表される核酸配列であることを特徴とする請求項1に記載の核酸アプタマー。
- 配列番号1〜13で表される核酸配列からなる群から選択されたいずれか一つの核酸配列を含むことを特徴とする請求項1に記載の核酸アプタマー。
- 配列番号1で表される核酸配列(SQ1)であることを特徴とする請求項1に記載の核酸アプタマー。
- 配列番号2で表される核酸配列(SQ2)であることを特徴とする請求項1に記載の核酸アプタマー。
- 配列番号4で表される核酸配列(SQ4)であることを特徴とする請求項1に記載の核酸アプタマー。
- 配列番号36で表される核酸配列であることを特徴とする請求項1に記載の核酸アプタマー。
- 配列番号38で表される核酸配列であることを特徴とする請求項1に記載の核酸アプタマー。
- 配列番号39で表される核酸配列であることを特徴とする請求項1に記載の核酸アプタマー。
- 配列番号40で表される核酸配列であることを特徴とする請求項1に記載の核酸アプタマー。
- 化学的変形を含むことを特徴とする請求項1〜11のいずれか一項に記載の核酸アプタマー。
- 前記化学的変形は前記核酸アプタマーに含まれる少なくとも1種のヌクレオチドのリボースの2'の位置において、ヒドロキシル基が水素原子、フッ素原子、−O−アルキル基、−O−アシル基及びアミノ基のいずれか一つで置換されたものであることを特徴とする請求項12に記載の核酸アプタマー。
- 請求項1〜11のいずれか一項に記載の核酸アプタマーまたはその化学的変形を含む核酸アプタマーを利用することを特徴とする、膵臓癌の検出方法。
- 前記核酸アプタマーはすい臓組織、すい臓細胞、血液、血清、血漿、唾液、喀痰及び尿の中から選ばれる試料と接触させる工程を含む請求項14に記載の検出方法。
- 請求項1〜11のいずれか一項に記載の核酸アプタマーまたはその化学的変形を含む核酸アプタマーを含有する、膵臓癌の診断用組成物。
- 請求項1〜11のいずれか一項に記載の核酸アプタマーまたはその化学的変形を含む核酸アプタマーが固定されている膵臓癌診断用センサー。
- 請求項17に記載の膵臓癌診断用センサーを利用することを特徴とする、膵臓癌の検出方法。
- 請求項1〜11のいずれか一項に記載の核酸アプタマーまたはその化学的変形を含む核酸アプタマーを含有する、膵臓癌診断用キット。
- 請求項19に記載の膵臓癌診断用キットを利用することを特徴とする、膵臓癌の検出方法。
- 請求項1〜11のいずれか一項に記載の核酸アプタマーまたはその化学的変形を含む核酸アプタマーを含有する、膵臓癌の治療用組成物。
- 請求項1〜11のいずれか一項に記載の核酸アプタマーまたはその化学的変形を含む核酸アプタマーを含有する、膵臓癌特異的薬品伝達組成物。
- 請求項1〜11のいずれか一項に記載の核酸アプタマーまたはその化学的変形を含む核酸アプタマーを利用した膵臓癌細胞特異的表面バイオマーカーの検出方法。
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Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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CN113646442A (zh) * | 2018-12-21 | 2021-11-12 | 国立癌中心 | 新型dna适配体及其用途 |
JP2022546916A (ja) * | 2019-07-18 | 2022-11-10 | ナショナル キャンサー センター | 新規のdnaアプタマー及びこれの用途 |
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---|---|---|---|---|
KR101250557B1 (ko) * | 2011-05-18 | 2013-04-03 | 국립암센터 | Pauf 특이적 앱타머 및 이를 포함하는 췌장암 치료용 조성물 |
KR101699105B1 (ko) * | 2012-04-02 | 2017-01-23 | 성균관대학교산학협력단 | Alppl2 단백질을 이용한 췌장암 진단 방법 |
CA2870288A1 (en) * | 2012-04-10 | 2013-10-17 | John J. Rossi | Rna aptamers for therapeutic and diagnostic delivery to pancreatic cancer cells |
WO2014025234A2 (ko) * | 2012-08-09 | 2014-02-13 | 연세대학교 산학협력단 | 암 줄기세포에 특이적으로 결합하는 핵산 앱타머 및 이의 용도 |
KR101432897B1 (ko) * | 2012-11-01 | 2014-08-21 | 충북대학교 산학협력단 | 제초제 저항성 pat 단백질에 특이적으로 결합하는 dna 앱타머 및 이의 용도 |
KR101541221B1 (ko) * | 2013-09-26 | 2015-08-03 | 충북대학교 산학협력단 | 리스테리아의 병원성 조절인자 PrfA 단백질과 특이적으로 결합하는 DNA 앱타머 및 이의 용도 |
WO2016053015A1 (ko) * | 2014-09-29 | 2016-04-07 | 동국대학교 산학협력단 | 신규 세포 타겟 압타머 제조방법 |
KR102023839B1 (ko) | 2018-03-28 | 2019-09-20 | 포항공과대학교 산학협력단 | 분지된 dna, 압타머를 포함하는 고효율 압타머 복합체 및 이의 용도 |
KR102536314B1 (ko) * | 2018-05-23 | 2023-05-25 | 주식회사 휴벳바이오 | 질환의 진단용 조성물 |
CN110408620B (zh) * | 2019-08-16 | 2023-03-21 | 中山大学附属第三医院 | 一种核酸适配子、其获得方法、其衍生物及其应用 |
CN111004805B (zh) * | 2019-12-30 | 2023-08-01 | 广西医科大学 | T细胞免疫检查点pd-l1的适配体筛选、鉴定方法及抗肿瘤应用 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004503214A (ja) * | 2000-04-18 | 2004-02-05 | エーバーハルト−カルルス−ウニヴェルズィテート テュービンゲン ウニヴェルズィテートクリーニクム | 細胞結合核酸分子(アプタマー) |
JP2007523631A (ja) * | 2003-11-26 | 2007-08-23 | デイナ−ファーバー キャンサー インスティチュート,インコーポレイテッド | 膵臓腺癌の動物モデルおよびその使用 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050106624A1 (en) | 2001-09-25 | 2005-05-19 | Kazuki Sasaki | Search for cancer markers by a novel screening method |
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GB2437727B (en) | 2006-05-04 | 2011-04-20 | Univ Open | Aptamers directed to MUC1 |
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004503214A (ja) * | 2000-04-18 | 2004-02-05 | エーバーハルト−カルルス−ウニヴェルズィテート テュービンゲン ウニヴェルズィテートクリーニクム | 細胞結合核酸分子(アプタマー) |
JP2007523631A (ja) * | 2003-11-26 | 2007-08-23 | デイナ−ファーバー キャンサー インスティチュート,インコーポレイテッド | 膵臓腺癌の動物モデルおよびその使用 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
JPN6013046902; International Journal of Molecular Sciences vol.9, 2008, p.668-678 * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113646442A (zh) * | 2018-12-21 | 2021-11-12 | 国立癌中心 | 新型dna适配体及其用途 |
JP2022516054A (ja) * | 2018-12-21 | 2022-02-24 | ナショナル キャンサー センター | 新規のdnaアプタマー及びこれの用途 |
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