JP2011529186A - 体液中の細菌の分類および計数方法 - Google Patents
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Abstract
Description
(a)マルチアングル光散乱および蛍光発光の測定が可能な、三重トリガシステムを有する自動血液分析器を提供するステップと、
(b)赤血球を溶解することが可能な白血球の形態を保存することも可能な試薬を提供するステップと、
(c)体液の試料を提供するステップと、
(d)試薬および体液の試料を混合するステップと、
(e)体液中に赤血球および赤芽球が存在する場合、赤血球および赤芽球の膜を同時に溶解するステップと、
(f)体液中に赤芽球が存在する場合、赤芽球核を核染色剤で染色するステップと、
(g)マルチアングル光散乱によって白血球を分画するステップと、
(h)体液中に赤芽球が存在する場合、マルチアングル光散乱および蛍光発光のうちの少なくとも1つによって、赤芽球核を検出するステップと、
(i)蛍光発光およびマルチアングル光散乱を測定する検出器を含む回路によって、細菌を分画および計数するステップと、を含む。
102 ALL電圧比較器
104 ALL信号
106 ALL閾値電圧(Vth1)
108 ALL電圧比較器出力
112 FL3電圧比較器
114 FL3信号
116 FL3閾値電圧(Vth2)
118 FL3電圧比較器出力
122 IAS電圧比較器
124 IAS信号
126 IAS閾値電圧(Vth3)
128 IAS電圧比較器出力
130 ORゲート
132 ORゲート出力
134 ANDゲート
136 有効トリガ出力
比較例A、B、およびCは、米国特許第5,631,165号明細書、第5,656,499号、および第5,939,326号明細書に記載されている自動血液分析器において、本明細書に記載される方法の結果として得られたサイトグラムがどのように白血球を特徴付けるかを示す。実施例1、2、3、4、および5は、米国特許第5,631,165号明細書、第5,656,499号、および第5,939,326号明細書に記載されている自動血液分析器において、本明細書に記載される方法の結果として得られたサイトグラムが、どのように細菌と白血球を分画して細菌細胞を計数するかを示す。
ここで図3A、図3B、図3C、および図3Dを参照すると、いずれも先に参照により本明細書に組み込まれた、米国特許第5,516,695号明細書および5,559,037号明細書に記載されている試薬システムで、正常な血液の試料が処理された。この試薬システムは、比較例BおよびC、ならびに実施例1、2、3、4、および5においても使用された。試薬システムは、赤血球溶解成分、白血球保存成分、および核染色剤を含む。図1および図2の装置は、患者の血液試料のサイトグラムを用意するためにも使用されることが可能である。試料は、6.08×103/μLの濃度の白血球、リンパ球(35.1%)、好中球(54.5%)、単球(6.95%)、好酸球(3.34%)、および好塩基球(0.07%)を含有していた。
比較例Bを実行するために、比較例Aで使用されたのと同じ方法および装置が使用された。
比較例Cを実行するために、比較例Aで使用されたのと同じ方法および装置が使用された。
実施例1を実行するために、比較例Aで使用されたのと同じ方法および装置が使用された。
実施例2を実行するために、比較例Aで使用されたのと同じ方法および装置が使用された。
実施例3を実行するために、比較例Aで使用されたのと同じ方法および装置が使用された。
実施例4を実行するために、比較例Aで使用されたのと同じ方法および装置が使用された。
実施例5を実行するために、比較例Aで使用されたのと同じ方法および装置が使用された。
Claims (18)
- 体液中の細菌を分画および正確に計数する方法において、
(a)マルチアングル光散乱および蛍光発光の測定が可能な、三重トリガシステムを有する自動血液分析器を提供するステップと、
(b)赤血球を溶解することが可能な、白血球の形態を保存することも可能である試薬を提供するステップと、
(e)体液の試料を提供するステップと、
(f)試薬および体液の試料を混合するステップと、
(e)体液中に赤血球および赤芽球が存在する場合、赤血球および赤芽球の膜を同時に溶解するステップと、
(f)体液中に赤芽球が存在する場合、赤芽球核を核染色剤で染色するステップと、
(g)マルチアングル光散乱によって白血球を分画するステップと、
(h)体液中に赤芽球が存在する場合、マルチアングル光散乱および蛍光発光のうちの少なくとも1つによって、赤芽球核を検出するステップと、
(i)蛍光発光およびマルチアングル光散乱を測定する検出器を含む回路によって、細菌を分画および計数するステップと、を含む方法。 - 体液の試料を希釈剤で希釈するステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 赤血球を検出および計数するステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 溶解された体液の試料をフローセルを通じて搬送するステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 体液の試料の分析用データを保存するステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 体液の試料の分析の結果を報告するステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 白血球、赤血球、および細菌を分画するために、少なくとも1つのアルゴリズムによって体液の試料を分析するステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 赤芽球および細菌が、マルチアングル散乱測定および蛍光発光測定によって計数される、請求項1に記載の方法。
- 少なくとも1つのマルチアングル光散乱測定が、約0°から約1°の角度で取得される、請求項1に記載の方法。
- 少なくとも1つのマルチアングル光散乱パラメータ閾値が、白血球からの全ての信号を承認してその他の全ての信号を識別するように設定されている、請求項1に記載の方法。
- 少なくとも1つのマルチアングル光散乱測定が、約3°から約10°の角度で取得される、請求項1に記載の方法。
- 少なくとも1つのマルチアングル光散乱パラメータ閾値および少なくとも1つの蛍光発光閾値が、前記少なくとも1つの蛍光発光閾値からスプリアス正ノイズ信号をおよび少なくとも1つの蛍光発光閾値からスプリアス負ノイズ信号を除去し、白血球、赤芽球、および細菌集団からの信号を取得された信号に含ませるように設定されている、請求項1に記載の方法。
- 前記少なくとも1つの蛍光発光閾値、ならびに信号を取得および承認するための少なくとも1つのマルチアングル光散乱パラメータ閾値からの散乱光の強度信号の三次元グラフを作成するステップを含む、請求項1に記載の方法。
- 作成された三次元グラフおよび承認された信号から、白血球、赤芽球、および細菌を分画し、前記白血球、赤芽球、および細菌の細胞数を判断するステップを含む、請求項1に記載の方法。
- 細菌の集団が、散乱および蛍光発光の両方のパルスの振幅、ならびに各細胞集団の信号の位置およびパターンに基づく少なくとも1つのアルゴリズムによって、赤芽球の信号から分画される、請求項1に記載の方法。
- 光学血小板経路の2つの浮遊閾値の内側および外側の両方の信号の密度を確認することにより、前記少なくとも1つのアルゴリズムによって細菌信号の存在が裏付けられる、請求項1に記載の方法。
- 前記体液が、血液、脳脊髄液、胸膜液、腹膜液、心膜液、滑液、腹水、排出液、および透析液からなる群から選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記体液の粘度を低下させるために粘度低下剤を使用するステップを含む、請求項17に記載の方法。
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