JP2006208401A - 赤芽球の分類計数方法 - Google Patents
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Abstract
【課題】 採血後時間の経過した検体、あるいはダメージを受けやすい白血球が存在する場合でも、高精度で赤芽球を正確に分類計数する方法を提供する
【解決手段】 この赤芽球分類計数方法は、蛍光強度及び散乱光強度に基づいて白血球と赤芽球を弁別し、弁別された赤芽球を計数する方法である。使用する試薬は、特定の溶血剤と特定の蛍光色素の組み合わせである。特定の溶血剤は、分子内に少なくとも1つの芳香環を有する有機酸又はその塩を含有する。そして、浸透圧100mOsm/kg以下でpH2.0〜5.0の水溶液に調整されている。特定の蛍光色素としては、日本感光色素研究所(株)から提供されているNKシリーズの特定のものが採用される。また、Exciton社から提供されているLDS730やLD700等が採用される。この溶血剤と蛍光色素の組み合わせにより、蛍光強度と散乱光強度で赤芽球を分類計数しうる。
【選択図】 なし
Description
2)1)で調製した試料と特定の蛍光色素を混合することにより、白血球と赤芽球を染色する工程、
3)2)で調製した測定用試料をフローサイトメータで測定し、少なくとも1つの散乱光と、少なくとも1つの蛍光を測定する工程、及び
4)3)で測定した散乱光と蛍光の強度差を用いて赤芽球を分類計数する工程。
以下の組成の試薬を調製した。
サリチル酸 10mM 市販品
NK−2825 0.3mg/L 日本感光色素研究所(株)
BC−20TX 3g/L 日光ケミカルズ(株)
精製水 1L
なお、この水溶液試薬は、NaOHでpHを3.0に調整(浸透圧30mOsm/kg)した。また、上記BC−20TXとは、ポリオキシエチレン(20)セチルエーテルのである。
以下の組成の試薬を調製した。
サリチル酸 10mM 市販品
NK−321 0.3mg/L 日本感光色素研究所(株)
BO−16 3g/L 日光ケミカルズ(株)
精製水 1L
なお、この水溶液試薬は、NaOHでpHを3.0に調整(浸透圧32mOsm/kg)した。また、上記NK−321とは、日本感光色素研究所(株)から提供されている請求項1記載の化2の化学式を持つ色素であり、上記BO−16とは、ポリオキシエチレン(16)オレイルエーテルである。
以下の組成の試薬を調製した。
サリチル酸 10mM 市販品
NK−1836 3mg/L 日本感光色素研究所(株)
精製水 1L
なお、この水溶液試薬は、NaOHでpHを3.0に調整(浸透圧25mOsm/kg)した。
以下の組成の試薬を調製した。
サリチル酸 10mM 市販品
DiIC1(5) 3mg/L 日本感光色素研究所(株)
精製水 1L
なお、この水溶液試薬は、NaOHでpHを3.0に調整(浸透圧25mOsm/kg)した。また、上記DiIC1(5)とは、日本感光色素研究所(株)から提供されている請求項1記載の化1の化学式を持つ色素である。
以下の組成の試薬を調整した。
サリチル酸 10mM 市販品
クエン酸 10mM 市販品
NK−1836 0.3mg/L 日本感光色素研究所(株)
精製水 1L
なお、この水溶液試薬は、NaOHでpHを3.0に調整(浸透圧40mOsm/kg)した。
Claims (4)
- 蛍光強度及び散乱光強度に基づいて白血球と赤芽球を弁別し、弁別された赤芽球を計数するための方法であって、
分子内に少なくとも1つの芳香環を有する有機酸又はその塩を含有し、浸透圧100mOsm/kg以下でpH2.0〜5.0の水溶液である溶血剤、及び
少なくとも白血球と赤芽球を上記弁別可能に染色する以下の群から選ばれる少なくとも1つの蛍光色素を含む試薬を用いることを特徴とする赤芽球分類計数方法。
- 以下の工程からなる請求項1記載の赤芽球分類計数方法:
1)試料を、前記溶血剤と混合する工程、
2)1)で調製した試料と前記蛍光色素を混合することにより、白血球と赤芽球を染色する工程、
3)2)で調製した測定用試料をフローサイトメータで測定し、少なくとも1つの散乱光と、少なくとも1つの蛍光を測定する工程、及び
4)3)で測定した散乱光と蛍光の強度差を用いて赤芽球を分類計数する工程。 - 分子内に少なくとも1つの芳香環を有する有機酸又はその塩が、サリチル酸又はその塩である請求項1記載の赤芽球分類計数方法。
- 散乱光の受光角度が、前方低角散乱光、前方高角散乱光、から選ばれる少なくとも一つである請求項1記載の赤芽球分類計数方法。
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