JP2011522885A - ラクトバシラス・ロイテリのロイテリン産生機構の制御活性化 - Google Patents
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Abstract
Description
発酵ステップの間に活性化させたロイテリンを含有する充填微小区画を有する凍結乾燥L.ロイテリ粉剤の製造
発酵培地組成物
一水和デキストロース 60g/L
酵母抽出物KAV 20g/L
ペプトン型PS(ブタ由来) 20g/L
クエン酸水素二アンモニウム 5g/L
酢酸ナトリウム(×3 H2O)4.7g/L
リン酸水素二カリウム 2g/L
Tween80 0.5g/L
Silibione(消泡剤) 0.14g/L
硫酸マグネシウム 0.10g/L
硫酸マンガン 0.03g/L
硫酸亜鉛七水和物 0.01g/L
水 十分量
遠心分離培地
ペプトンO−24 Orthana(ブタ由来)
凍結保護剤
ラクトース(ウシ由来) 33%
ゼラチン加水分解物(ウシ由来) 22%
グルタミン酸ナトリウム 22%
マルトデキストリン 11%
アスコルビン酸 11%
ワーキングセルバンクバイアルからの0.6mLの凍結乾燥ラクトバシラス・ロイテリ粉剤を20mLの培地に接種する。撹拌やpH調節を行わず、即ち静的に、37℃でビンの中で18〜20時間発酵を行う。
発酵ステップの間に初回刺激及び活性化されたロイテリンを含有する充填微小区画を有する凍結乾燥L.ロイテリ粉剤の製造
増殖培地において更なる200mMの1,2−PDとビタミンC(4g/L)とビタミンB12(1ug/mL)とにより初回刺激される以外は実施例1と同様の製造プロセス。
発酵ステップの間に初回刺激され、凍結乾燥ステップの前のロイテリン形成のために活性化されるロイテリンを含有する充填微小区画を有する凍結乾燥L.ロイテリ粉剤の製造。
増殖培地に更なる200mMの1,2−PDとビタミンC(4g/L)とビタミンB12(1ug/mL)とにより初回刺激される以外は実施例1と同様の製造プロセス。しかし、100mMのグリセロールを発酵期において添加しないが、その代わりに細胞スラリーに添加した後、凍結乾燥設備に輸送する。
活性化ロイテリン産生機構によるL.ロイテリを有する軟膏剤の調製
以下の成分から軟膏剤を調製する:
例えば上記の製造法の内のいずれかを用いた活性化ロイテリン産生機構によるL.ロイテリの凍結乾燥粉剤。
生成物(固形脂肪又は蝋により安定する水分を含まない油)のための賦形剤、油、好ましくは植物油、例えばナタネ油やパーム油
固形脂肪、例えば蜜蝋
保存剤及び安定剤、軟膏剤の技術分野で公知のいずれか
ヒト被験者における酒さの治療
酒さの長期の既往歴を有する女性被験者に、本明細書における本発明により製造された凍結乾燥L.ロイテリ培養物を投与する。被験者には、1日2回、朝及び夜に投与する。その度毎に軟膏剤の薄層を皮膚に塗り込む。
経鼻スプレー製剤
ロイテリン産生のために用いる準備が整っている微小区画構造を充填したL.ロイテリを含む経鼻製剤は、必要に応じて調合器又は他の装置を用いて、投与のための様々な形態、例えばスプレー、滴剤、ゲル剤、軟膏剤、クリーム剤、粉剤又は懸濁液の形態をとることができる。種々の調合器及び送達ビヒクルは本技術分野で公知であり、それらとしては、単回投与アンプル、アトマイザ、ネブライザ、ポンプ、経鼻パッド、経鼻スポンジ、経鼻カプセル等が挙げられる。
Claims (24)
- ラクトバシラス・ロイテリ細胞培養物のロイテリン産生機構の制御活性化方法であって、
ラクトバシラス・ロイテリ細胞培養物を製造するステップ;
製造の間にラクトバシラス・ロイテリ細胞培養物にグリセロールを添加し、それによりロイテリンを産生するステップ;及び
ラクトバシラス・ロイテリの保存及び貯蔵の間にラクトバシラス・ロイテリ細胞培養物の内部で産生ロイテリンを保持するステップを含む上記方法。 - ラクトバシラス・ロイテリを製造するステップが、ラクトバシラス・ロイテリ細胞培養物を発酵させるステップを含む、請求項1に記載の方法。
- 発酵させるステップが、発酵プロセスの終了後に約1〜約500mMのグリセロールを添加するステップを含む、請求項2に記載の方法。
- 発酵後に、細胞培養物を洗浄するステップと、細胞培養物を凍結乾燥するステップとを更に含む、請求項2又は請求項3のいずれか一項に記載の方法。
- 発酵プロセスの後に細胞培養物を洗浄するステップが、発酵プロセス及び洗浄プロセスの後、凍結乾燥の前にグリセロールと共に少なくとも1種の凍結保護剤を添加するステップを更に含む、請求項4に記載の方法。
- 凍結乾燥を、ロイテリン産生が開始した後約30〜45分間行う、請求項4又は請求項5に記載の方法。
- 細胞培養物に少なくとも1種の凍結保護剤を添加するステップを更に含む、請求項1から6までのいずれか一項に記載の方法。
- ラクトバシラス・ロイテリ細胞培養物を発酵させるステップが、発酵ステップの開始時に1,2−プロパンジオール、コバルト、ビタミンB−12、ビタミンC、グリセロール又はそれらの組み合わせの内の少なくとも1つにより細胞培養物を初回刺激するステップを含む、請求項2から7までのいずれか一項に記載の方法。
- 発酵ステップの開始時にビタミンB−12と1,2−プロパンジオールとを細胞培養物に添加する請求項8に記載の方法。
- 発酵ステップが、発酵ステップの開始時にコバルト又はビタミンB−12の内の少なくとも1つを細胞培養物に添加するステップを含む、請求項2から9までのいずれか一項に記載の方法。
- 製造プロセスにおいて、発酵ステップの後、凍結乾燥の前に約1〜約500mMのグリセロールを添加する、請求項1から10までのいずれか一項に記載の方法。
- 発酵ステップが、発酵ステップの初めに1,2−プロパンジオール又はグリセロールの内の少なくとも1つを添加するステップを含む、請求項5に記載の方法。
- ラクトバシラス・ロイテリ細胞培養物のロイテリン産生機構の制御活性化方法であって、ラクトバシラス・ロイテリ細胞培養物を製造するステップであって、細胞培養物を製造する前記ステップが:
細胞培養物を発酵させるステップ;
細胞培養物を洗浄するステップ;及び
細胞培養物を凍結乾燥するステップを含む上記ステップと;
ラクトバシラス・ロイテリ細胞培養物に約1〜約500mMのグリセロールを添加し、その後細胞培養物を凍結乾燥し、それによりロイテリンを産生し、それによりラクトバシラス・ロイテリの保存及び貯蔵の間にラクトバシラス・ロイテリ細胞培養物の内部で産生ロイテリンを保持するステップとを含む上記方法。 - 発酵ステップの開始時に、1,2−プロパンジオール、コバルト、ビタミンB−12、ビタミンC、グリセロール又はそれらの組み合わせの内の少なくとも1つを細胞培養に添加するステップを更に含む、請求項13に記載の方法。
- 発酵ステップの開始時に、ビタミンB−12と1,2−プロパンジオールとを細胞培養物に添加する、請求項13又は請求項14に記載の方法。
- 請求項1から15までのいずれか一項に記載の方法により産生された産物。
- 請求項16に記載の産物の投与を含む、皮膚系の病原菌により誘導された障害の予防又は治療方法。
- 前記投与が経鼻投与である、請求項17に記載の方法。
- MRSAの予防又は治療のためである、請求項17又は請求項18に記載の方法。
- 皮膚系の病原菌により誘導された障害の治療用医薬組成物の製造のための請求項16に記載の産物の使用。
- MRSAの予防又は治療用医薬組成物の製造のための請求項16に記載の産物の使用。
- 皮膚系の病原菌により誘導された障害の治療に用いるための請求項16に記載の産物。
- MRSAの予防又は治療に用いるための請求項16に記載の産物。
- 請求項16に記載の産物を含む医薬組成物。
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JPN6013039849; Doleyres Y et al.: 'Production of 3-hydroxypropionaldehyde using a two-step process with Lactobacillus reuteri.' Appl Microbiol Biotechnol. Vol.68 No.4, 20051026, pp.467-474 * |
JPN6013039853; Schwab C et al.: 'Influence of oligosaccharides on the viability and membrane properties of Lactobacillus reuteri TMW1' Cryobiology. Vol.55 No.2, 20070621, pp.108-114 * |
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