CN105851063B - 一种罗伊氏素手机抑菌喷雾的生产方法 - Google Patents

一种罗伊氏素手机抑菌喷雾的生产方法 Download PDF

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Abstract

一种罗伊氏素手机抑菌喷雾的生产方法，属于天然抑菌剂加工技术领域。其包括：1）菌种选择；2）L. reuteri 乳酸菌活化；3）L. reuteri 乳酸菌培养；4）L. reuteri 乳酸菌的离心清洗；5)辅酶B12反应液的制备；6）reuterin的生产；7）reuterin的提取；8）微乳液制备；9）产品复配；10）产品包装。本发明得到的罗伊氏素手机抑菌喷雾不仅具有很高的抑菌效率，而且生产成本低。

Description

一种罗伊氏素手机抑菌喷雾的生产方法
技术领域
本发明属于天然抑菌剂加工技术领域，具体涉及一种罗伊氏素手机抑菌喷雾的生产方法。
背景技术
随着智能手机和手机App的开发和普及，人们用手机的时间越来越多。尤其是大学生，调查显示，我国平均每位大学生一天用手机的时间为4.5小时，可见手机对大学生非常有吸引力。前段时间在广州地铁上扶手检测出有超级细菌的存在，可见人的手上可能沾染危害极大的细菌，因此急需一种新产品给手机抑菌，从而保护自己的健康。
在考察市面上已有的杀菌抑菌产品后发现，目前市场上大多数抑菌喷雾都是化学材料，不环保，对人体健康有着潜在的危害，可能造成二次污染。
ε-多聚赖氨酸是目前天然防腐剂中具有优良防腐性能的微生物类食品防腐剂。它是由25～30赖氨酸残基聚合而成，具有强烈的抑菌能力，可以作为防腐剂用于食品的保鲜。ε-多聚赖氨酸抑菌谱广，在酸性和微酸性环境中对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、酵母菌、霉菌均有一定的抑菌效果，ε-多聚赖氨酸对其他天然防腐剂不易抑制的革兰氏阴性的大肠杆菌、沙门氏菌抑菌效果非常好，而且其对耐热性芽孢杆菌和一些病毒也有抑制作用。
本发明结合reuterin与ε-多聚赖氨酸天然、健康、高效的抑菌特点，采用酶原再激活的方式促进reuterin发酵生产，使用食品级ε-多聚赖氨酸微乳液作为载运体系的方式，将他们二者复配得到的手机抑菌喷雾具有高效的抑菌能力，针对手机上的微生物种类进行抑菌成分的调配后得到最佳抑菌效果的手机抑菌喷雾。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种罗伊氏素手机抑菌喷雾的生产方法的技术方案。
所述的一种罗伊氏素手机抑菌喷雾的生产方法，其特征在于包括以下步骤：
1）取罗伊氏乳杆菌（L. reuteri）菌株解冻后，培养于固体MRS平板上进行活化；
2）取活化后的单一菌落置于灭过菌的液体MRS培养基中静置培养，通入氮气，保持在厌氧的环境下进行培养；
3）取培养所得上清液进行离心，将离心所得上层清液倒去，洗菌后进行培养；
4）制备辅酶B12反应液，每1mL辅酶B12反应液中含有0.01～0.1 mol/L KCl,0.05～0.5 mol/L 1,2-PD,10～20umol/L 辅酶B12，0.01～0.05mol/L磷酸钾缓冲溶液，pH3～4；
5）取步骤3）得到的菌体，加入甘油和葡萄糖，在厌氧条件下发酵；
6）取步骤5）得到的发酵液，离心，取上清发酵液，得到罗伊氏乳杆菌菌体；
7）取步骤6）得到的罗伊氏乳杆菌菌体加入步骤4）得到的辅酶B12反应液中，按照步骤5）的条件厌氧发酵后，取上清发酵液即为罗伊氏素提取液，48h后更换重新活化的罗伊氏乳杆菌（L.reuteri）；
8）取ε-多聚赖氨酸作为溶质，甘油作为溶剂，配置成10～12mg/L 浓度的ε-多聚赖氨酸微乳液；
9）在ε-多聚赖氨酸微乳液中加入步骤7）得到的罗伊氏素提取液，充分混匀；
10）将复配后的溶液加入到喷雾瓶中，得到手机抑菌喷雾产品。
所述的一种罗伊氏素手机抑菌喷雾的生产方法，其特征在于所述的步骤1）中罗伊氏乳杆菌（L. reuteri）活化条件：37℃培养10～12h。
所述的一种罗伊氏素手机抑菌喷雾的生产方法，其特征在于所述的步骤2）中罗伊氏乳杆菌（L. reuteri）厌氧培养条件：37℃培养15～16h。
所述的一种罗伊氏素手机抑菌喷雾的生产方法，其特征在于所述的步骤3）中离心条件：转速3000 rpm，离心温度20～25℃，离心时间10～15min；洗菌条件：0.85%氯化钠溶液洗菌两次；培养条件：温度37℃下于0.85%氯化钠溶液中培养0.5～1h。
所述的一种罗伊氏素手机抑菌喷雾的生产方法，其特征在于所述的步骤5）中发酵条件：37℃发酵2～2.5h。
所述的一种罗伊氏素手机抑菌喷雾的生产方法，其特征在于所述的步骤5）中甘油和葡萄糖的重量比为3:1,加入量为菌体重量的10倍。
所述的一种罗伊氏素手机抑菌喷雾的生产方法，其特征在于所述的步骤6）中离心条件为：转速10000 rpm，离心温度4℃，离心时间10～12min。
所述的一种罗伊氏素手机抑菌喷雾的生产方法，其特征在于所述的步骤9）中罗伊氏素提取液的浓度为：7～10mL/L。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
1.其主要抑菌成分——reuterin为天然抑菌剂，具有较广的抑菌谱。
2.reuterin作为食品级的抑菌剂，不会对人体健康造成伤害。
3.以ε-多聚赖氨酸甘油溶液食reuterin运载体系，提高了抑菌喷雾的稳定性，且不会对手机屏幕造成损伤。
4.ε-多聚赖氨酸与reuterin复配使用，不仅具有很高的抑菌效率，而且生产成本低。
附图说明
图1为加手机抑菌喷雾与不加手机抑菌喷雾两种条件下对沙门氏菌菌落总数的影响图；
图2为加手机抑菌喷雾与不加手机抑菌喷雾两种条件下对沙门氏菌OD值的影响图。
具体实施方式
以下结合实施例来进一步说明本发明。
实施例1
1）菌种选择
选择使用的L. reuteri菌株。L. reuteri所使用的培养基为MRS broth medium。而L. reuteri的保存是以在培养基中加入12.5%的甘油溶液，做为抗冻剂并保存在-80oC的冰箱中。
2）L. reuteri乳酸菌活化
将L. reuteri从-80oC冰箱中取出,在4oC下解冻后，吸取100微升涂布培养于固体MRS平板上使其活化，37oC培养12h。
3）L. reuteri 乳酸菌培养
选取单一菌落（colony）置于灭过菌的液体MRS培养基中静置培养，通入氮气5分钟使其保持在厌氧的环境下，37oC培养16h。
4）L. reuteri 乳酸菌的离心清洗
取培养所得上清液5mL，于低温高速离心机中进行离心，转速3000 rpm，离心温度20℃，离心时间10min。接着将离心所得上层清夜倒去，用0.85%氯化钠溶液洗菌两次，并在37℃下于0.85%氯化钠溶液中培养菌体，时间为0.5h。
5）辅酶B12反应液的制备
1mL反应液中含有0.05 mol/L KCl,0.2 mol/L 1,2-PD,15 umol/L 辅酶B12,0.035mol/L磷酸钾缓冲液（Ph3.6）。
6）reuterin的生产
在离心清洗后的菌体中加入5mL的甘油：葡萄糖（3:1）溶液（甘油和葡萄糖溶液加入量为菌体重量的10倍），在厌氧条件下37oC发酵2h。
7）reuterin的提取
将菌悬液进行离心操作，转速10000 rpm，离心温度4℃，离心时间10min，提取上清reuterin发酵液。
8）酶原再激活
将步骤7）分离的得到的L. reuteri中加入1mL辅酶B12反应液，按照步骤6）条件发酵后，取上清发酵液生产罗伊氏素提取液，48h后更换重新活化的罗伊氏乳杆菌（L.reuteri）。
9）微乳液制备
选用ε-多聚赖氨酸作为溶质，甘油作为溶剂，配置成12 mg/L 浓度的ε-多聚赖氨酸溶液100mL。
10）产品配比
在ε-多聚赖氨酸微乳液中加入0.5mLreuterin提取液，充分混匀。
11）产品包装
将复配后的溶液加入到喷雾瓶中，得到手机抑菌喷雾产品。喷雾包装采用25mLpet瓶装。
将该实施例得到的手机抑菌喷雾进行抑菌试验，抑菌效果如下表以及附图1、2。
从表和附图中可知，本发明得到的手机抑菌喷雾具有广谱抑菌作用，并且具有很高的抑菌效率。
实施例2
1）菌种选择
选择使用的L. reuteri菌株。L. reuteri所使用的培养基为MRS broth medium。而L. reuteri的保存是以在培养基中加入12.5%的甘油溶液，做为抗冻剂并保存在-80oC的冰箱中。
2）L. reuteri乳酸菌活化
将L. reuteri从-80oC冰箱中取出,在4oC下解冻后，吸取100微升涂布培养于固体MRS平板上使其活化，37oC培养10h。
3）L. reuteri 乳酸菌培养
选取单一菌落（colony）置于灭过菌的液体mrs培养基中静置培养，通入氮气5分钟使其保持在厌氧的环境下，37oC培养15h。
4）L. reuteri 乳酸菌的离心清洗
取培养所得上清液3mL，于低温高速离心机中进行离心，转速3000 rpm，离心温度25℃，离心时间15min。接着将离心所得上层清夜倒去，用0.85%氯化钠溶液洗菌两次，并在37℃下于0.85%氯化钠溶液中培养菌体，时间为1h。
5）辅酶B12反应液的制备
1mL反应液中含有0.01 mol/L KCl,0.05 mol/L 1,2-PD,10 umol/L 辅酶B12,0.01mol/L磷酸钾缓冲液（Ph3）。
6）reuterin的生产
在离心清洗后的菌体中加入5mL的甘油：葡萄糖（3:1）溶液（甘油和葡萄糖溶液加入量为菌体重量的10倍），在厌氧条件下37℃发酵2.5h。
7）reuterin的提取
将菌悬液进行离心操作，转速10000 rpm，离心温度4℃，离心时间12min，提取上清reuterin发酵液。
8）酶原再激活
将步骤7）分离的得到的L. reuteri中加入1mL辅酶B12反应液，按照步骤6）技术条件发酵后，取上清发酵液生产罗伊氏素提取液，48h后更换重新活化的罗伊氏乳杆菌（L. reuteri）。
9）微乳液制备
选用ε-多聚赖氨酸作为溶质，甘油作为溶剂，配置成12 mg/L 浓度的ε-多聚赖氨酸溶液50mL。
10）产品配比
在ε-多聚赖氨酸微乳液中加入0.5mLreuterin提取液，充分混匀。
11）产品包装
将复配后的溶液加入到喷雾瓶中，得到手机抑菌喷雾产品。喷雾包装采用25mLpet瓶装。
该实施例得到的手机抑菌喷雾进行如实施例1相同的试验，最终也能达到如实施例1相同的技术效果。

Claims (8)

1.一种罗伊氏素手机抑菌喷雾的生产方法，其特征在于包括以下步骤：
1）取罗伊氏乳杆菌（L. reuteri）菌株解冻后，培养于固体MRS平板上进行活化；
2）取活化后的单一菌落置于灭过菌的液体MRS培养基中静置培养，通入氮气，保持在厌氧的环境下进行培养；
3）取培养所得上清液进行离心，将离心所得上层清液倒去，洗菌后进行培养；
4）制备辅酶B12反应液，每1mL辅酶B12反应液中含有0.01～0.1 mol/L KCl,0.05～0.5mol/L 1,2-PD,10～20umol/L 辅酶B12，0.01～0.05mol/L磷酸钾缓冲溶液，pH3～4；
5）取步骤3）得到的菌体，加入甘油和葡萄糖，在厌氧条件下发酵；
6）取步骤5）得到的发酵液，离心，取上清发酵液，得到罗伊氏乳杆菌菌体；
7）取步骤6）得到的罗伊氏乳杆菌菌体加入步骤4）得到的辅酶B12反应液中，按照步骤5）的条件厌氧发酵后，取上清发酵液即为罗伊氏素提取液，48h后更换重新活化的罗伊氏乳杆菌（L.reuteri）；
8）取ε-多聚赖氨酸作为溶质，甘油作为溶剂，配置成10～12mg/L 浓度的ε-多聚赖氨酸微乳液；
9）在ε-多聚赖氨酸微乳液中加入步骤7）得到的罗伊氏素提取液，充分混匀；
10）将复配后的溶液加入到喷雾瓶中，得到手机抑菌喷雾产品。
2.如权利要求1所述的一种罗伊氏素手机抑菌喷雾的生产方法，其特征在于所述的步骤1）中罗伊氏乳杆菌（L. reuteri）活化条件：37℃培养10～12h。
3.如权利要求1所述的一种罗伊氏素手机抑菌喷雾的生产方法，其特征在于所述的步骤2）中罗伊氏乳杆菌（L. reuteri）厌氧培养条件：37℃培养15～16h。
4.如权利要求1所述的一种罗伊氏素手机抑菌喷雾的生产方法，其特征在于所述的步骤3）中离心条件：转速3000 rpm，离心温度20～25℃，离心时间10～15min；洗菌条件：0.85%氯化钠溶液洗菌两次；培养条件：温度37℃下于0.85%氯化钠溶液中培养0.5～1h。
5.如权利要求1所述的一种罗伊氏素手机抑菌喷雾的生产方法，其特征在于所述的步骤5）中发酵条件：37℃发酵2～2.5h。
6.如权利要求1所述的一种罗伊氏素手机抑菌喷雾的生产方法，其特征在于所述的步骤5）中甘油和葡萄糖的重量比为3:1，加入量为菌体重量的10倍。
7.如权利要求1所述的一种罗伊氏素手机抑菌喷雾的生产方法，其特征在于所述的步骤6）中离心条件为：转速10000 rpm，离心温度4℃，离心时间10～12min。
8.如权利要求1所述的一种罗伊氏素手机抑菌喷雾的生产方法，其特征在于所述的步骤9）中罗伊氏素提取液的浓度为：7～10mL/L。
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