JP2011051946A - 硫化水素産生酵素阻害剤 - Google Patents
硫化水素産生酵素阻害剤 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2011051946A JP2011051946A JP2009203689A JP2009203689A JP2011051946A JP 2011051946 A JP2011051946 A JP 2011051946A JP 2009203689 A JP2009203689 A JP 2009203689A JP 2009203689 A JP2009203689 A JP 2009203689A JP 2011051946 A JP2011051946 A JP 2011051946A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hydrogen sulfide
- producing enzyme
- solution
- gallate
- catechins
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 88
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 88
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims abstract description 52
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims abstract description 52
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title abstract description 11
- ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N catechin Natural products OC1Cc2cc(O)cc(O)c2OC1c3ccc(O)c(O)c3 ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 29
- 235000005487 catechin Nutrition 0.000 claims abstract description 29
- 150000001765 catechin Chemical class 0.000 claims abstract description 22
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 11
- WMBWREPUVVBILR-UHFFFAOYSA-N GCG Natural products C=1C(O)=C(O)C(O)=CC=1C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2CC1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 WMBWREPUVVBILR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 229940125532 enzyme inhibitor Drugs 0.000 claims description 15
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 claims description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 15
- LSHVYAFMTMFKBA-UHFFFAOYSA-N ECG Natural products C=1C=C(O)C(O)=CC=1C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2CC1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LSHVYAFMTMFKBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- LSHVYAFMTMFKBA-CTNGQTDRSA-N (-)-catechin-3-O-gallate Chemical compound O([C@@H]1CC2=C(O)C=C(C=C2O[C@H]1C=1C=C(O)C(O)=CC=1)O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LSHVYAFMTMFKBA-CTNGQTDRSA-N 0.000 claims description 7
- LSHVYAFMTMFKBA-TZIWHRDSSA-N (-)-epicatechin-3-O-gallate Chemical compound O([C@@H]1CC2=C(O)C=C(C=C2O[C@@H]1C=1C=C(O)C(O)=CC=1)O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LSHVYAFMTMFKBA-TZIWHRDSSA-N 0.000 claims description 7
- 229930014124 (-)-epigallocatechin gallate Natural products 0.000 claims description 7
- 235000004911 (-)-epigallocatechin gallate Nutrition 0.000 claims description 7
- 241000605862 Porphyromonas gingivalis Species 0.000 claims description 7
- VFSWRBJYBQXUTE-UHFFFAOYSA-N epi-Gallocatechin 3-O-gallate Natural products Oc1ccc2C(=O)C(OC(=O)c3cc(O)c(O)c(O)c3)C(Oc2c1)c4cc(O)c(O)c(O)c4 VFSWRBJYBQXUTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- WMBWREPUVVBILR-NQIIRXRSSA-N (-)-gallocatechin gallate Chemical compound O([C@@H]1CC2=C(O)C=C(C=C2O[C@H]1C=1C=C(O)C(O)=C(O)C=1)O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 WMBWREPUVVBILR-NQIIRXRSSA-N 0.000 claims description 6
- 241000589892 Treponema denticola Species 0.000 claims description 6
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 claims description 4
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 241000605909 Fusobacterium Species 0.000 claims 2
- 238000005987 sulfurization reaction Methods 0.000 claims 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract description 33
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 24
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 23
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 15
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 abstract description 8
- 235000009569 green tea Nutrition 0.000 abstract description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 4
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 abstract description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 35
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 28
- 108010043135 L-methionine gamma-lyase Proteins 0.000 description 26
- WMBWREPUVVBILR-WIYYLYMNSA-N (-)-Epigallocatechin-3-o-gallate Chemical compound O([C@@H]1CC2=C(O)C=C(C=C2O[C@@H]1C=1C=C(O)C(O)=C(O)C=1)O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 WMBWREPUVVBILR-WIYYLYMNSA-N 0.000 description 23
- LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N Methanethiol Chemical compound SC LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 14
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 14
- PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N (+)-catechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N 0.000 description 13
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 12
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 description 11
- 102000020018 Cystathionine gamma-Lyase Human genes 0.000 description 10
- 108010045283 Cystathionine gamma-lyase Proteins 0.000 description 10
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 10
- LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N gallic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- PHOLIFLKGONSGY-CSKARUKUSA-N (e)-(3-methyl-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazine Chemical compound C1=CC=C2S\C(=N\N)N(C)C2=C1 PHOLIFLKGONSGY-CSKARUKUSA-N 0.000 description 9
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 9
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 9
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 9
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- XMOCLSLCDHWDHP-IUODEOHRSA-N epi-Gallocatechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@H]2O)=CC(O)=C(O)C(O)=C1 XMOCLSLCDHWDHP-IUODEOHRSA-N 0.000 description 8
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 8
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 8
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 229950001002 cianidanol Drugs 0.000 description 7
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 7
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 7
- 230000019086 sulfide ion homeostasis Effects 0.000 description 7
- 239000000606 toothpaste Substances 0.000 description 7
- 239000001974 tryptic soy broth Substances 0.000 description 7
- 108010050327 trypticase-soy broth Proteins 0.000 description 7
- TYEYBOSBBBHJIV-UHFFFAOYSA-N 2-oxobutanoic acid Chemical compound CCC(=O)C(O)=O TYEYBOSBBBHJIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 6
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000605986 Fusobacterium nucleatum Species 0.000 description 5
- 229940074391 gallic acid Drugs 0.000 description 5
- 235000004515 gallic acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 5
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 229940034610 toothpaste Drugs 0.000 description 5
- 206010006326 Breath odour Diseases 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 229930013915 (+)-catechin Natural products 0.000 description 3
- 235000007219 (+)-catechin Nutrition 0.000 description 3
- PFTAWBLQPZVEMU-UKRRQHHQSA-N (-)-epicatechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-UKRRQHHQSA-N 0.000 description 3
- 229930013783 (-)-epicatechin Natural products 0.000 description 3
- 235000007355 (-)-epicatechin Nutrition 0.000 description 3
- QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N Dimethyl sulfide Chemical compound CSC QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 235000015218 chewing gum Nutrition 0.000 description 3
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000002324 mouth wash Substances 0.000 description 3
- 229940051866 mouthwash Drugs 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 3
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 description 3
- XMOCLSLCDHWDHP-DOMZBBRYSA-N (-)-gallocatechin Chemical compound C1([C@@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@H]2O)=CC(O)=C(O)C(O)=C1 XMOCLSLCDHWDHP-DOMZBBRYSA-N 0.000 description 2
- BXRLWGXPSRYJDZ-UHFFFAOYSA-N 3-cyanoalanine Chemical compound OC(=O)C(N)CC#N BXRLWGXPSRYJDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102000000634 Cytochrome c oxidase subunit IV Human genes 0.000 description 2
- 108090000365 Cytochrome-c oxidases Proteins 0.000 description 2
- 239000004278 EU approved seasoning Substances 0.000 description 2
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- MJVAVZPDRWSRRC-UHFFFAOYSA-N Menadione Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(C)=CC(=O)C2=C1 MJVAVZPDRWSRRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 150000004716 alpha keto acids Chemical class 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 229940112822 chewing gum Drugs 0.000 description 2
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 2
- 239000000306 component Substances 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000011194 food seasoning agent Nutrition 0.000 description 2
- 239000010794 food waste Substances 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 2
- KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N isobutyric acid Chemical compound CC(C)C(O)=O KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 2
- 239000008274 jelly Substances 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 2
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 229940076788 pyruvate Drugs 0.000 description 2
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 150000003464 sulfur compounds Chemical class 0.000 description 2
- 235000008170 thiamine pyrophosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000011678 thiamine pyrophosphate Substances 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 241001148471 unidentified anaerobic bacterium Species 0.000 description 2
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N valeric acid Chemical compound CCCCC(O)=O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- XYHKNCXZYYTLRG-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazole-2-carbaldehyde Chemical compound O=CC1=NC=CN1 XYHKNCXZYYTLRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGYHPLMPMRKMPD-UHFFFAOYSA-N 2-azaniumylpent-4-ynoate Chemical compound OC(=O)C(N)CC#C DGYHPLMPMRKMPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PANBRUWVURLWGY-UHFFFAOYSA-N 2-undecenal Chemical compound CCCCCCCCC=CC=O PANBRUWVURLWGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-M 3-Methylbutanoic acid Natural products CC(C)CC([O-])=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- XGRSAFKZAGGXJV-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-3-cyclohexylpropanoate Chemical compound OC(=O)CC(N)C1CCCCC1 XGRSAFKZAGGXJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N Chlorhexidine Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1NC(N)=NC(N)=NCCCCCCN=C(N)N=C(N)NC1=CC=C(Cl)C=C1 GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010073644 Cystathionine beta-synthase Proteins 0.000 description 1
- 102100034976 Cystathionine beta-synthase Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- XMOCLSLCDHWDHP-UHFFFAOYSA-N L-Epigallocatechin Natural products OC1CC2=C(O)C=C(O)C=C2OC1C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 XMOCLSLCDHWDHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 1
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 description 1
- IFQSXNOEEPCSLW-DKWTVANSSA-N L-cysteine hydrochloride Chemical compound Cl.SC[C@H](N)C(O)=O IFQSXNOEEPCSLW-DKWTVANSSA-N 0.000 description 1
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102000004868 N-Methyl-D-Aspartate Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090001041 N-Methyl-D-Aspartate Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241001470257 Nagara Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 229920000294 Resistant starch Polymers 0.000 description 1
- 208000010476 Respiratory Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N Sulphide Chemical compound [S-2] UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 235000013334 alcoholic beverage Nutrition 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- -1 alicyclic ketone Chemical class 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N beta-methyl-butyric acid Natural products CC(C)CC(O)=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 150000001766 catechin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 229960003260 chlorhexidine Drugs 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 1
- 229940025294 hemin Drugs 0.000 description 1
- BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K hemin Chemical compound CC1=C(CCC(O)=O)C(C=C2C(CCC(O)=O)=C(C)\C(N2[Fe](Cl)N23)=C\4)=N\C1=C/C2=C(C)C(C=C)=C3\C=C/1C(C)=C(C=C)C/4=N\1 BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000012533 medium component Substances 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 235000015205 orange juice Nutrition 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 208000028169 periodontal disease Diseases 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N pyridoxal 5'-phosphate Chemical compound CC1=NC=C(COP(O)(O)=O)C(C=O)=C1O NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000007682 pyridoxal 5'-phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011589 pyridoxal 5'-phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 235000021067 refined food Nutrition 0.000 description 1
- 235000021254 resistant starch Nutrition 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940081974 saccharin Drugs 0.000 description 1
- 235000019204 saccharin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000901 saccharin and its Na,K and Ca salt Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229960004711 sodium monofluorophosphate Drugs 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 235000014214 soft drink Nutrition 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 229960002363 thiamine pyrophosphate Drugs 0.000 description 1
- AYEKOFBPNLCAJY-UHFFFAOYSA-O thiamine pyrophosphate Chemical compound CC1=C(CCOP(O)(=O)OP(O)(O)=O)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N AYEKOFBPNLCAJY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- YXVCLPJQTZXJLH-UHFFFAOYSA-N thiamine(1+) diphosphate chloride Chemical compound [Cl-].CC1=C(CCOP(O)(=O)OP(O)(O)=O)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N YXVCLPJQTZXJLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 1
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 1
- 235000012711 vitamin K3 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011652 vitamin K3 Substances 0.000 description 1
- 229940041603 vitamin k 3 Drugs 0.000 description 1
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/99—Enzyme inactivation by chemical treatment
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
- A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline
- A61K31/353—3,4-Dihydrobenzopyrans, e.g. chroman, catechin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
- A61K8/4973—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with oxygen as the only hetero atom
- A61K8/498—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with oxygen as the only hetero atom having 6-membered rings or their condensed derivatives, e.g. coumarin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q11/00—Preparations for care of the teeth, of the oral cavity or of dentures; Dentifrices, e.g. toothpastes; Mouth rinses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/74—Biological properties of particular ingredients
- A61K2800/78—Enzyme modulators, e.g. Enzyme agonists
- A61K2800/782—Enzyme inhibitors; Enzyme antagonists
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Botany (AREA)
- Birds (AREA)
- Mycology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Non-Alcoholic Beverages (AREA)
Abstract
【課題】硫化水素発生の抑制を目的とし、特に、硫化水素産生酵素阻害剤を提供する。
【解決手段】副作用がなく安全性が高く古来より利用される緑茶由来成分に注目し、細菌の硫化水素産生に対する阻害試験を実施した結果、カテキン類が硫化水素産生酵素阻害活性を有することを見出した。カテキン類は、緑茶由来の成分であり、安全性が高く、イメージがよい。すなわち、カテキン類を有効成分とする硫化水素産生酵素阻害剤。
【選択図】図２
【解決手段】副作用がなく安全性が高く古来より利用される緑茶由来成分に注目し、細菌の硫化水素産生に対する阻害試験を実施した結果、カテキン類が硫化水素産生酵素阻害活性を有することを見出した。カテキン類は、緑茶由来の成分であり、安全性が高く、イメージがよい。すなわち、カテキン類を有効成分とする硫化水素産生酵素阻害剤。
【選択図】図２
Description
本発明はカテキン類を有効成分とする硫化水素産生酵素阻害剤に関する。
硫化水素は刺激臭を有する気体であり、皮膚粘膜を刺激し、また、呼吸麻痺を起こすなどの毒性が知られる。その毒性は、社会的にも問題視されており、硫化水素の除去が望まれる。硫化水素は自然界では、火山ガスや温泉などに含まれ、人為的には、石油化学工業などにより発生する。また、嫌気性細菌等によって硫黄化合物が還元され硫化水素が発生することがあり、例えば、汚物や排水等に嫌気性細菌が繁殖し、硫化水素が発生することがある。また、硫化水素を発生する細菌の中には、口腔内細菌や、腸内細菌として、生体内に生息するものもある。これらの細菌は、食物残渣や生体内のタンパク質を原料として硫化水素を発する。さらには、生体内では内因性の硫化水素が産生されることも知られる。
硫化水素の毒性の機構は、硫化水素の反応性の高さによる皮膚粘膜への刺激、及び、シトクロムcオキシダーゼの阻害が知られる。シトクロムcオキシダーゼ阻害作用は、急速に発生するため、高濃度の硫化水素に暴露した場合、急速に肺の酸素分圧が低下し、昏倒に至る。また、硫化水素は脳内でＮＭＤＡ受容体の活性を増強するといわれる（非特許文献１）。
上述のとおり、硫化水素は、口腔内細菌や腸内細菌によっても発生する。口腔内細菌や腸内細菌によって発生する硫化水素は、自然界や、工業レベルで発生する硫化水素と比較すれば小規模ではある。しかしながら、生体内で硫化水素が発生すれば、その個体は非常に閉鎖された状態で硫化水素に暴露されることとなり、その影響は直接的である。また、発生した硫化水素は、口臭や、腸内ガス臭といった、忌み嫌われる不快臭をもたらす。従って、口腔内細菌や腸内細菌によって発生する硫化水素は、その阻害あるいは抑制が切望されている。なお、呼気中の揮発性硫化物（ＶＳＣ）のうち、約90％は硫化水素、メチルメルカプタンおよび硫化ジメチルが占め、硫化水素は口臭の主な原因のひとつと言える。口腔内においては、口腔内の脱落上皮細胞や白血球、食物残渣などが細菌由来のプロテアーゼによってシステインやメチオニンなどの含硫アミノ酸に分解され、その後硫化水素産生酵素やメチオニナーゼによって硫化水素が産生するのである。口腔内の硫化水素産生酵素においてはシステインデスルフヒドラーゼやシスタチオニンβ-シンターゼ等が報告されている。
特許文献１は、シュードモナス属細菌や、大腸菌が精製する揮発性硫黄化合物生成抑制剤を開示する。しかしながら、その阻害剤は、特定のアルデヒド、ウンデセナール、脂環式ケトン等の香料を有効成分とするハウスホールド製品に用いることが目的とされる阻害剤であり、人体等に安全に使用できるものではない。
特許文献２は水溶性難消化性糖質を有効成分として含有する腸内硫化水素低減組成物を開示する。しかしながら、特許文献２の腸内硫化水素低減効果は腸内に限定されたものであり、その低減の機構についても不明である。
特許文献３は生体内での硫化水素の産生を阻害、抑制する鎮痛用組成物を開示する。しかし、特許文献３のDL-プロパルギルグリシンおよびβ-シアノアラニンを含む鎮痛用組成物は、シスタチオニンγ−リアーゼを阻害し、生体内の内因性の硫化水素の産生を抑制するものである。
非特許文献４はカテキン誘導体がポルフィロモナス・ジンジバリス由来のプロテアーゼを阻害することを示すものである。しかし、硫化水素産生酵素の阻害については、開示も示唆もない。
非特許文献５は緑茶カテキンがメタロプロテアーゼを阻害することを示すものである。しかし、硫化水素産生酵素の阻害については、開示も示唆もない。
非特許文献４はカテキン誘導体がポルフィロモナス・ジンジバリス由来のプロテアーゼを阻害することを示すものである。しかし、硫化水素産生酵素の阻害については、開示も示唆もない。
非特許文献５は緑茶カテキンがメタロプロテアーゼを阻害することを示すものである。しかし、硫化水素産生酵素の阻害については、開示も示唆もない。
Abe, K, Kimura H, J. Neurosci. 16, 1066-71, 1996
Persson S, Edlund M−B, Claesson R, Carlsson J: Oral Microbiol Immunol.1990;5:195-201、
Tanaka M, Yamamoto Y, Kuboniwa M, Nonaka A, Nishida N, Maeda K, Kataoka K, Nagata H, Shizukuishi S: Microbes and Infection 2007; 6: 1078-1083
Okamoto M, Sugimoto A, Leung K-P, Nakayama K, Kamaguchi A, Maeda N: Oral Microbiol. Immunol. 2004; 19: 118-120
Demeule M, Brossard M, Page M, Gingras D, Beliveau R: Biochim Biophys Acta. 2000;1478:51-60.
硫化水素発生の抑制を目的とし、特に、硫化水素産生酵素阻害剤を提供することを課題とする。
本発明者らは、上記課題を解決するために、副作用がなく安全性が高く古来より利用される緑茶由来成分に注目し、細菌の硫化水素産生に対する阻害試験を実施した結果、カテキン類が硫化水素産生酵素阻害活性を有することを見出し、本発明を完成させた。
本発明によれば、カテキン類を有効成分として用いることにより、硫化水素産生酵素を効果的に阻害し、硫化水素の産生を阻害、抑制することができる。
また、カテキン類は、緑茶由来の成分であり、安全性が高く、イメージがよい。従って、カテキン類を有効成分とする硫化水素産生酵素阻害剤は消費者に受け入れられやすい。
また、カテキン類は、緑茶由来の成分であり、安全性が高く、イメージがよい。従って、カテキン類を有効成分とする硫化水素産生酵素阻害剤は消費者に受け入れられやすい。
本発明はカテキン類を有効成分とする硫化水素産生酵素阻害剤を提供する。
カテキン（catechin）は、狭義にはC15H14O6、分子量２９０．２７の木本植物の木芯に多く含まれる水溶性多価フェノールを指し、広義にはその誘導体となるポリフェノールを含む。本明細書では、定義を明確にするため、カテキンとは狭義のカテキンを指し、カテキン類という場合に、カテキン及びその誘導体となる一連のポリフェノールを指すものとする。カテキン類は特に茶に含まれる茶カテキンが知られる。カテキン類として（＋）−カテキン，（−）−エピカテキン、（−）−エピガロカテキン、（−）−エピカテキンガレート、（−）−エピガロカテキンガレート、（−）−ガロカテキンガレート、（−）−カテキンガレートなどが知られる。
カテキン（catechin）は、狭義にはC15H14O6、分子量２９０．２７の木本植物の木芯に多く含まれる水溶性多価フェノールを指し、広義にはその誘導体となるポリフェノールを含む。本明細書では、定義を明確にするため、カテキンとは狭義のカテキンを指し、カテキン類という場合に、カテキン及びその誘導体となる一連のポリフェノールを指すものとする。カテキン類は特に茶に含まれる茶カテキンが知られる。カテキン類として（＋）−カテキン，（−）−エピカテキン、（−）−エピガロカテキン、（−）−エピカテキンガレート、（−）−エピガロカテキンガレート、（−）−ガロカテキンガレート、（−）−カテキンガレートなどが知られる。
本発明の第二は、カテキン類が（−）−エピカテキンガレート、（−）−エピガロカテキンガレート、（−）−ガロカテキンガレート、（−）−カテキンガレートあるいはこれらの混合物を有効成分とする硫化水素阻害剤を提供する。
本発明の第三は、（−）−エピカテキンガレート、（−）−エピガロカテキンガレート、（−）−ガロカテキンガレート、（−）−カテキンガレートのいずれか、あるいはこれらの混合物を有効成分とする、フゾバクテリウム・ヌクレイタム（Fusobacterium nucleatum ）、ポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas gingivalis ）、またはトレポネーマ・デンティコラ（Treponema denticola ）由来の硫化水素産生酵素を阻害する硫化水素産生酵素阻害剤を提供する。
フゾバクテリウム・ヌクレイタム、ポルフィロモナス・ジンジバリス、トレポネーマ・デンティコラはいずれも、口腔内細菌として知られ、硫化水素やメチルメルカプタンの産生能力が高いこと、また歯周病菌としても知られる（非特許文献２、非特許文献３）
フゾバクテリウム・ヌクレイタム、ポルフィロモナス・ジンジバリス、トレポネーマ・デンティコラはいずれも、口腔内細菌として知られ、硫化水素やメチルメルカプタンの産生能力が高いこと、また歯周病菌としても知られる（非特許文献２、非特許文献３）
また、本発明は、前記硫化水素産生酵素阻害剤を含有する飲食品を提供する。飲食品とは、生鮮食品、肉、魚などの動物性食品、穀物、野菜などの植物性食品、乳製品、パン、インスタント食品などの加工食品、菓子類などの嗜好食品、甘味料、調味料等の調理調味用材料、健康食品、特別用途食品、水、清涼飲料水、アルコール飲料、茶などの飲料、食品加工材料、食品添加物などを含む。
さらには、本発明は、前記硫化水素産生酵素阻害剤を含有する口腔用組成物を提供する。口腔用組成物として、練歯磨、液体歯磨、液状歯磨、潤製歯磨等の歯磨類、洗口剤、マウスウォッシュ、トローチ剤、チューイングガム等の形態をとることができる。
さらには、本発明は、前記硫化水素産生酵素阻害剤を含有する口腔用組成物を提供する。口腔用組成物として、練歯磨、液体歯磨、液状歯磨、潤製歯磨等の歯磨類、洗口剤、マウスウォッシュ、トローチ剤、チューイングガム等の形態をとることができる。
以下に本発明の例を挙げて説明するが、本発明の範囲は以下の例のみに限定されるものではない。
硫化水素産生酵素及びメチオニナーゼに対するカテキン類の酵素阻害活性に関する試験を行った。すなわち、基質として、システインおよびメチオニンを用い、フゾバクテリウム・ヌクレイタム、ポルフィロモナス・ジンジバリス、トレポネーマ・デンティコラ由来の粗酵素液を加え、各試薬を混合し、メチオニナーゼの生成物であるα-ケト酪酸、及びメチルメルカプタン、または硫化水素産生酵素の生成物であるピルビン酸、及び硫化水素を定量することで、メチオニナーゼ及び硫化水素産生酵素に対する阻害活性を測定した。
材料および方法
１−１材料
１−１−１硫化水素産生酵素阻害剤候補
以下の試薬を硫化水素産生酵素阻害剤候補として用いた。すなわち、カテキン類として、 (+)-カテキン、(-)-エピカテキン、(-)-エピガロカテキン、(-)-エピカテキンガレート、(-)-エピガロカテキンガレート、(-)-ガロカテキンガレート、(-)-カテキンガレート（カテキン類は長良サイエンスより購入した）、及び、没食子酸、塩化亜鉛を用いた。これらの阻害剤候補は本明細書において、(+)-カテキン：C、(-)-エピカテキン：EC、(-)-エピガロカテキン：EGC、(-)-エピカテキンガレート：ECg、(-)-エピガロカテキンガレート：EGCg、(-)-ガロカテキンガレート：GCg 、(-)-カテキンガレート：Cg、没食子酸：G、塩化亜鉛：ZnCl2と略すことがある。没食子酸は殺菌活性が知られ、その誘導体が口腔用組成物として用いられる。塩化亜鉛は口臭予防活性が知られ、洗口剤に用いられる。
１−１材料
１−１−１硫化水素産生酵素阻害剤候補
以下の試薬を硫化水素産生酵素阻害剤候補として用いた。すなわち、カテキン類として、 (+)-カテキン、(-)-エピカテキン、(-)-エピガロカテキン、(-)-エピカテキンガレート、(-)-エピガロカテキンガレート、(-)-ガロカテキンガレート、(-)-カテキンガレート（カテキン類は長良サイエンスより購入した）、及び、没食子酸、塩化亜鉛を用いた。これらの阻害剤候補は本明細書において、(+)-カテキン：C、(-)-エピカテキン：EC、(-)-エピガロカテキン：EGC、(-)-エピカテキンガレート：ECg、(-)-エピガロカテキンガレート：EGCg、(-)-ガロカテキンガレート：GCg 、(-)-カテキンガレート：Cg、没食子酸：G、塩化亜鉛：ZnCl2と略すことがある。没食子酸は殺菌活性が知られ、その誘導体が口腔用組成物として用いられる。塩化亜鉛は口臭予防活性が知られ、洗口剤に用いられる。
１−１−２使用菌株
硫化水素産生細菌として、フゾバクテリウム・ヌクレイタム (本明細書中F.nと略すことがある)、ポルフィロモナス・ジンジバリス(本明細書中P.gと略すことがある)、トレポネーマ・デンティコラ (本明細書中T.dと略すことがある)を用いた。菌株はフゾバクテリウム・ヌクレイタム はJCM8532を、ポルフィロモナス・ジンジバリスは W83、トレポネーマ・デンティコラ はATCCの寄託番号35405の菌株を用いた。
硫化水素産生細菌として、フゾバクテリウム・ヌクレイタム (本明細書中F.nと略すことがある)、ポルフィロモナス・ジンジバリス(本明細書中P.gと略すことがある)、トレポネーマ・デンティコラ (本明細書中T.dと略すことがある)を用いた。菌株はフゾバクテリウム・ヌクレイタム はJCM8532を、ポルフィロモナス・ジンジバリスは W83、トレポネーマ・デンティコラ はATCCの寄託番号35405の菌株を用いた。
１−２試験方法
１−２−１ 各菌による粗酵素液の調製
F.nをTrypticase Soy Broth(TSB)15mlに植菌し、生育が定常期に達するまで嫌気培養した。なお、Trypticase Soy Broth(TSB)は、Trypticase Soy Broth(DIFCO)3ｇとYeast Extract(DIFCO) 0.3gを水100mlに溶解後、hemin(5mg/ml in 0.1N NaOH)0.1mlとmenadione(0.5mg/ml in 50％EtOH)0.1mlを加えて調製された。
上記の培養を前培養として、さらに、TSB 200mlに植菌し、生育が定常期に達してから24時間後まで(培養期間 2days)、37℃で嫌気培養した。
次に培養液を3,000×g、10min、4℃で遠心分離して培地成分を除去し、菌体を回収した。その後50mM Tris-HCl緩衝液(pH7.5)（トリスヒドロキシメチルアミノメタン(分子量121)6.05gを水に溶解し、HClでpH7.5に調整後、1lにメスアップして調製した）を加え、さらに遠心し、菌体を洗浄後、緩衝液を除去して菌体を-80℃に凍結した。さらに、菌体をTris-HCl緩衝液20-25ml中に懸濁し、細胞膜を超音波破砕した(20W,30sec×15times、0℃)。これを20,000×g、30min、4℃で遠心し、上清を粗酵素液とした。粗酵素液はDC Protein Assay kit(Pierce)を用いてタンパク定量し、試験系においては終濃度0.3mg protein/mlになるように希釈して用いた。
P.gはF.nと同様にTSB培地で培養した。またT.dはTYGVS培地で培養した。培養期間は7日間であった。粗酵素液の調製はP.g 及びT.dについても、F.nと同様に行った。
１−２−１ 各菌による粗酵素液の調製
F.nをTrypticase Soy Broth(TSB)15mlに植菌し、生育が定常期に達するまで嫌気培養した。なお、Trypticase Soy Broth(TSB)は、Trypticase Soy Broth(DIFCO)3ｇとYeast Extract(DIFCO) 0.3gを水100mlに溶解後、hemin(5mg/ml in 0.1N NaOH)0.1mlとmenadione(0.5mg/ml in 50％EtOH)0.1mlを加えて調製された。
上記の培養を前培養として、さらに、TSB 200mlに植菌し、生育が定常期に達してから24時間後まで(培養期間 2days)、37℃で嫌気培養した。
次に培養液を3,000×g、10min、4℃で遠心分離して培地成分を除去し、菌体を回収した。その後50mM Tris-HCl緩衝液(pH7.5)（トリスヒドロキシメチルアミノメタン(分子量121)6.05gを水に溶解し、HClでpH7.5に調整後、1lにメスアップして調製した）を加え、さらに遠心し、菌体を洗浄後、緩衝液を除去して菌体を-80℃に凍結した。さらに、菌体をTris-HCl緩衝液20-25ml中に懸濁し、細胞膜を超音波破砕した(20W,30sec×15times、0℃)。これを20,000×g、30min、4℃で遠心し、上清を粗酵素液とした。粗酵素液はDC Protein Assay kit(Pierce)を用いてタンパク定量し、試験系においては終濃度0.3mg protein/mlになるように希釈して用いた。
P.gはF.nと同様にTSB培地で培養した。またT.dはTYGVS培地で培養した。培養期間は7日間であった。粗酵素液の調製はP.g 及びT.dについても、F.nと同様に行った。
なお、TYGVS培地の調製は、以下の通りである。すなわち、
heart infusion broth 5g、tryptone 10g、yeast extract 10g、ゼラチン10g、硫酸アンモニウム0.5g、K2HPO4 0.5g、MgSO4 0.1gを750mlの水溶液としｐH7.0に調整後、121℃で15分間オートクレーブしたＩ液、
Ｌ-システインHCl 1g、
グルコース1g、
ピルビン酸ナトリウム0.25g、
VFA液（酢酸1.7ml、プロピオン酸0.6ml、n-酪酸0.4ml、n-吉草酸0.1ml、イソ吉草酸0.1ml、イソ酪酸0.1ml、DL-metylbutyric acid0.1mlおよび蒸留水27.9mlを混合）5ml、
TPP液（チアミンピロリン酸0.25gに蒸留水100mlを加え混合）5ml、
1-N KOH 16ml
を混合し、さらに水を加えて50mlの水溶液としpH7.2に調整後、ろ過滅菌したＩＩ液、
ペクチン1gを蒸留水に100ml溶解し、121℃で15分オートクレーブしたＩＩＩ液、
のＩ液からＩＩＩ液と、さらに、不活化したウサギ血清100mlを混合して調製した。
heart infusion broth 5g、tryptone 10g、yeast extract 10g、ゼラチン10g、硫酸アンモニウム0.5g、K2HPO4 0.5g、MgSO4 0.1gを750mlの水溶液としｐH7.0に調整後、121℃で15分間オートクレーブしたＩ液、
Ｌ-システインHCl 1g、
グルコース1g、
ピルビン酸ナトリウム0.25g、
VFA液（酢酸1.7ml、プロピオン酸0.6ml、n-酪酸0.4ml、n-吉草酸0.1ml、イソ吉草酸0.1ml、イソ酪酸0.1ml、DL-metylbutyric acid0.1mlおよび蒸留水27.9mlを混合）5ml、
TPP液（チアミンピロリン酸0.25gに蒸留水100mlを加え混合）5ml、
1-N KOH 16ml
を混合し、さらに水を加えて50mlの水溶液としpH7.2に調整後、ろ過滅菌したＩＩ液、
ペクチン1gを蒸留水に100ml溶解し、121℃で15分オートクレーブしたＩＩＩ液、
のＩ液からＩＩＩ液と、さらに、不活化したウサギ血清100mlを混合して調製した。
１−２−２ 比色定量における硫化水素産生酵素（システインデスルフヒドラーゼ）阻害試験
硫化水素産生酵素の一種であるシステインデスルフヒドラーゼはシステインからピルビン酸、アンモニア及び硫化水素を生成する。比色定量における硫化水素産生酵素阻害試験では、システインを基質とし、システインデスルフヒドラーゼにより生成するピルビン酸の量を指標として、各試薬の硫化水素産生酵素に対する阻害活性を比較した。
硫化水素産生酵素の一種であるシステインデスルフヒドラーゼはシステインからピルビン酸、アンモニア及び硫化水素を生成する。比色定量における硫化水素産生酵素阻害試験では、システインを基質とし、システインデスルフヒドラーゼにより生成するピルビン酸の量を指標として、各試薬の硫化水素産生酵素に対する阻害活性を比較した。
溶液の調製
以下のとおり、300mMシステイン溶液、酵素・補酵素混合溶液、試料溶液、3-メチル-2-ベンゾチアゾリノンヒドラゾン(MBTH)反応溶液を調製した。
300mMシステイン溶液：300mMになるようシステインをTris-HCl緩衝液で希釈した。
酵素・補酵素混合溶液：反応系で粗酵素液のタンパク量が0.3mg/ml、ピリドキサール-5'-リン酸が0.05mMになるようにTris-HCl緩衝液で試験直前に調製した。
試料溶液：塩化亜鉛またはカテキン類を様々な濃度にTris-HCl緩衝液で希釈した。
3-メチル-2-ベンゾチアゾリノンヒドラゾン(MBTH)反応溶液：MBTH30mgを50mlの蒸留水に溶解した。その後、100mlの1M 酢酸ナトリウム緩衝液(pH5.0)（酢酸ナトリウム82.03gを水に溶解し、酢酸でpH5.0に調整後、1lにメスアップして調製した）を添加した。
以下のとおり、300mMシステイン溶液、酵素・補酵素混合溶液、試料溶液、3-メチル-2-ベンゾチアゾリノンヒドラゾン(MBTH)反応溶液を調製した。
300mMシステイン溶液：300mMになるようシステインをTris-HCl緩衝液で希釈した。
酵素・補酵素混合溶液：反応系で粗酵素液のタンパク量が0.3mg/ml、ピリドキサール-5'-リン酸が0.05mMになるようにTris-HCl緩衝液で試験直前に調製した。
試料溶液：塩化亜鉛またはカテキン類を様々な濃度にTris-HCl緩衝液で希釈した。
3-メチル-2-ベンゾチアゾリノンヒドラゾン(MBTH)反応溶液：MBTH30mgを50mlの蒸留水に溶解した。その後、100mlの1M 酢酸ナトリウム緩衝液(pH5.0)（酢酸ナトリウム82.03gを水に溶解し、酢酸でpH5.0に調整後、1lにメスアップして調製した）を添加した。
ピルビン酸の定量
300mMシステイン溶液0.1mlおよび試料溶液0.2mlに酵素・補酵素混合溶液0.7mlを加え、37℃で振とうした。1時間後、6%過塩素酸0.5mlを加え反応を停止し、遠心分離(3,000×g、10分間、4℃)後、上清を回収した。
上清0.4mlに、MBTH反応溶液1.2mlを添加し、50℃で30分間反応させた。反応液は酢酸ナトリウム緩衝液で3倍希釈し335nmにて吸光度を測定した。すべての試験は2回行い、その平均値を求めた。またピルビン酸の検量線の作成も行った。
300mMシステイン溶液0.1mlおよび試料溶液0.2mlに酵素・補酵素混合溶液0.7mlを加え、37℃で振とうした。1時間後、6%過塩素酸0.5mlを加え反応を停止し、遠心分離(3,000×g、10分間、4℃)後、上清を回収した。
上清0.4mlに、MBTH反応溶液1.2mlを添加し、50℃で30分間反応させた。反応液は酢酸ナトリウム緩衝液で3倍希釈し335nmにて吸光度を測定した。すべての試験は2回行い、その平均値を求めた。またピルビン酸の検量線の作成も行った。
阻害率
阻害率は、試料溶液を入れた際のピルビン酸量をPi、阻害剤溶液の代わりにTris-HCl緩衝液を加えた際のピルビン酸量をP0とし以下のように求めた。
阻害率(%)＝(P0- Pi)／P0×100
阻害率は、試料溶液を入れた際のピルビン酸量をPi、阻害剤溶液の代わりにTris-HCl緩衝液を加えた際のピルビン酸量をP0とし以下のように求めた。
阻害率(%)＝(P0- Pi)／P0×100
１−２−３ 比色定量によるメチオニナーゼ阻害試験
システインデスルフヒドラーゼの対照として、メチオニナーゼに対する酵素阻害活性を測定した。メチオニナーゼはメチオニンを基質として、メチルメルカプタン、アンモニア及びα−ケト酪酸を生成する。比色定量によるメチオニナーゼ阻害試験では、メチオニナーゼにより生成するα-ケト酪酸の量を指標として、各試薬のメチオニナーゼに対する阻害活性を比較した。
システインデスルフヒドラーゼの対照として、メチオニナーゼに対する酵素阻害活性を測定した。メチオニナーゼはメチオニンを基質として、メチルメルカプタン、アンモニア及びα−ケト酪酸を生成する。比色定量によるメチオニナーゼ阻害試験では、メチオニナーゼにより生成するα-ケト酪酸の量を指標として、各試薬のメチオニナーゼに対する阻害活性を比較した。
試薬の調製
以下のとおり、300mMメチオニン溶液を調製した。酵素・補酵素混合溶液、試料溶液、3-メチル-2-ベンゾチアゾリノンヒドラゾン(MBTH)反応溶液の調製については、上記と同様に行った。
300mMメチオニン溶液：300mMになるようメチオニンをTris-HCl緩衝液で希釈した。
以下のとおり、300mMメチオニン溶液を調製した。酵素・補酵素混合溶液、試料溶液、3-メチル-2-ベンゾチアゾリノンヒドラゾン(MBTH)反応溶液の調製については、上記と同様に行った。
300mMメチオニン溶液：300mMになるようメチオニンをTris-HCl緩衝液で希釈した。
α-ケト酪酸の定量
300mMメチオニン溶液0.1mlおよび試料溶液0.2mlに酵素・補酵素混合溶液0.7mlを加え、37℃で振とうした。1時間後、6%過塩素酸0.5mlを加え反応を停止し、遠心分離(3,000×g、10分間、4℃)後、上清を回収した。
上清0.4mlに、MBTH反応溶液1.2mlを添加し、50℃で30分間反応させた。反応液は酢酸ナトリウム緩衝液で3倍希釈し335nmにて吸光度を測定した。すべての試験は2回行い、その平均値を求めた。またα-ケト酪酸の検量線の作成も行った。
300mMメチオニン溶液0.1mlおよび試料溶液0.2mlに酵素・補酵素混合溶液0.7mlを加え、37℃で振とうした。1時間後、6%過塩素酸0.5mlを加え反応を停止し、遠心分離(3,000×g、10分間、4℃)後、上清を回収した。
上清0.4mlに、MBTH反応溶液1.2mlを添加し、50℃で30分間反応させた。反応液は酢酸ナトリウム緩衝液で3倍希釈し335nmにて吸光度を測定した。すべての試験は2回行い、その平均値を求めた。またα-ケト酪酸の検量線の作成も行った。
阻害率
メチオニナーゼの阻害率は、試料溶液を入れた際のα-ケト酪酸量をKi、阻害剤溶液の代わりにTris-HCl緩衝液を加えた際のα-ケト酪酸量をK0とし以下のように求めた。
阻害率(%)＝(K0- Ki)／K0×100
メチオニナーゼの阻害率は、試料溶液を入れた際のα-ケト酪酸量をKi、阻害剤溶液の代わりにTris-HCl緩衝液を加えた際のα-ケト酪酸量をK0とし以下のように求めた。
阻害率(%)＝(K0- Ki)／K0×100
１−２−４ ガスクロマトグラフィーによる硫化水素産生酵素阻害試験
硫化水素産生酵素はシステインから硫化水素を生成する。ガスクロマトグラフィーによる硫化水素産生酵素阻害試験では、システインを基質とし硫化水素産生酵素により生成する硫化水素の量を指標として、各試薬の硫化水素産生酵素に対する阻害活性を比較した。
硫化水素産生酵素はシステインから硫化水素を生成する。ガスクロマトグラフィーによる硫化水素産生酵素阻害試験では、システインを基質とし硫化水素産生酵素により生成する硫化水素の量を指標として、各試薬の硫化水素産生酵素に対する阻害活性を比較した。
硫化水素の定量
試験管にL-システイン溶液0.1ml、試料（阻害剤候補）溶液0.2ml、酵素-補酵素混合溶液0.7mlを入れ、ゴム栓で密封、37℃の水浴で攪拌しながら保温した。60分後、3Mリン酸水溶液を加え反応を停止後、さらに10分間37℃で攪拌し保温した。ヘッドスペースガスをF.nでは15μl、P.gでは100μl、T.dは50μlを抜き取りガスクロマトグラフィーで硫化水素量を測定した。なお、分析条件は以下の通りであった。
カ ラ ム：HP-PLOT/Q(φ0.53mm×30m)
温 度：70℃(2.5min）→30℃/minで190℃まで→190℃(3.5min)
検 出 器：FPD
スプリット比：48:1
注 入 量：15,50および100μl
試験管にL-システイン溶液0.1ml、試料（阻害剤候補）溶液0.2ml、酵素-補酵素混合溶液0.7mlを入れ、ゴム栓で密封、37℃の水浴で攪拌しながら保温した。60分後、3Mリン酸水溶液を加え反応を停止後、さらに10分間37℃で攪拌し保温した。ヘッドスペースガスをF.nでは15μl、P.gでは100μl、T.dは50μlを抜き取りガスクロマトグラフィーで硫化水素量を測定した。なお、分析条件は以下の通りであった。
カ ラ ム：HP-PLOT/Q(φ0.53mm×30m)
温 度：70℃(2.5min）→30℃/minで190℃まで→190℃(3.5min)
検 出 器：FPD
スプリット比：48:1
注 入 量：15,50および100μl
１−２−５ ガスクロマトグラフィーによるメチオニナーゼ阻害試験
硫化水素産生酵素の対照として、メチオニナーゼに対する酵素阻害活性を測定した。メチオニナーゼはメチオニンを基質として、メチルメルカプタン、アンモニア及びα−ケト酪酸を生成する。ガスクロマトグラフィーによるメチオニナーゼ阻害試験では、メチオニナーゼにより生成するメチルメルカプタンの量を指標として、各試薬のメチオニナーゼに対する阻害活性を比較した。
硫化水素産生酵素の対照として、メチオニナーゼに対する酵素阻害活性を測定した。メチオニナーゼはメチオニンを基質として、メチルメルカプタン、アンモニア及びα−ケト酪酸を生成する。ガスクロマトグラフィーによるメチオニナーゼ阻害試験では、メチオニナーゼにより生成するメチルメルカプタンの量を指標として、各試薬のメチオニナーゼに対する阻害活性を比較した。
メチルメルカプタンの定量
試験管にL-メチオニン溶液0.1ml、試料溶液0.2ml、酵素-補酵素混合溶液0.7mlを入れ、ゴム栓で密封、37℃の水浴で攪拌しながら保温した。60分後、3Mリン酸水溶液を加え反応を停止後、さらに10分間37℃で攪拌し保温した。ヘッドスペースガスをF.nでは40μl、P.gおよびT.dでは200μlを抜き取りガスクロマトグラフィーでメチルメルカプタン量を測定した。なお分析条件は上述の通りである。
試験管にL-メチオニン溶液0.1ml、試料溶液0.2ml、酵素-補酵素混合溶液0.7mlを入れ、ゴム栓で密封、37℃の水浴で攪拌しながら保温した。60分後、3Mリン酸水溶液を加え反応を停止後、さらに10分間37℃で攪拌し保温した。ヘッドスペースガスをF.nでは40μl、P.gおよびT.dでは200μlを抜き取りガスクロマトグラフィーでメチルメルカプタン量を測定した。なお分析条件は上述の通りである。
２−３結果
２−３−１ 比色定量によるカテキン類によるF.nの硫化水素産生酵素（システインデスルフヒドラーゼ）及びメチオニナーゼ阻害試験の結果
１−２−２の結果を表１、２に、１−２−３の結果を表３に示す。カテキン類のF.nの硫化水素産生酵素（システインデスルフヒドラーゼ）に対する阻害活性は、Cg＞GCg＞EGCg＞ECg＞没食子酸、（＋）−Cの順に高く、特にCg、GCg、EGCgおよびECgにおいて高い阻害活性を有していた。カテキン類のF.nのメチオニナーゼに対する阻害活性は、EGCg＞ECg＞EGC＞EC、没食子酸、Cの順に高く、特にEGCgおよびECgにおいて高い阻害活性を有していた。その際のIC50は、EGCgにおいては0.4mM、ECgにおいては0.8mMであった。
２−３−１ 比色定量によるカテキン類によるF.nの硫化水素産生酵素（システインデスルフヒドラーゼ）及びメチオニナーゼ阻害試験の結果
１−２−２の結果を表１、２に、１−２−３の結果を表３に示す。カテキン類のF.nの硫化水素産生酵素（システインデスルフヒドラーゼ）に対する阻害活性は、Cg＞GCg＞EGCg＞ECg＞没食子酸、（＋）−Cの順に高く、特にCg、GCg、EGCgおよびECgにおいて高い阻害活性を有していた。カテキン類のF.nのメチオニナーゼに対する阻害活性は、EGCg＞ECg＞EGC＞EC、没食子酸、Cの順に高く、特にEGCgおよびECgにおいて高い阻害活性を有していた。その際のIC50は、EGCgにおいては0.4mM、ECgにおいては0.8mMであった。
２−３−２ 比色によるEGCgのF.n、P.gおよびT.dの酵素阻害試験
１−２−２の硫化水素産生酵素阻害試験結果および１−２−３のメチオニナーゼ阻害試験のうち、EGCgと塩化亜鉛の阻害活性を比較したものを図１に示す。またIC50を表４に示す。図１中、白丸はEGCgを黒丸は塩化亜鉛の結果を指す。なお、塩化亜鉛は口臭予防活性が知られ、硫化水素産生酵素及びメチオニナーゼの抑制が期待される物質である。図１の結果より、メチオニナーゼ阻害については、F.n.、P.g.及びT.d.由来のいずれの場合も塩化亜鉛による阻害活性がEGCgによる阻害活性を上回っていた。一方、硫化水素産生については、F.n.、P.g.及びT.d.由来のいずれの場合もEGCgによる阻害活性が塩化亜鉛による阻害活性を上回っていた。表４からも同様のことが言える。
１−２−２の硫化水素産生酵素阻害試験結果および１−２−３のメチオニナーゼ阻害試験のうち、EGCgと塩化亜鉛の阻害活性を比較したものを図１に示す。またIC50を表４に示す。図１中、白丸はEGCgを黒丸は塩化亜鉛の結果を指す。なお、塩化亜鉛は口臭予防活性が知られ、硫化水素産生酵素及びメチオニナーゼの抑制が期待される物質である。図１の結果より、メチオニナーゼ阻害については、F.n.、P.g.及びT.d.由来のいずれの場合も塩化亜鉛による阻害活性がEGCgによる阻害活性を上回っていた。一方、硫化水素産生については、F.n.、P.g.及びT.d.由来のいずれの場合もEGCgによる阻害活性が塩化亜鉛による阻害活性を上回っていた。表４からも同様のことが言える。
２−３−３ ガスクロマトグラフィーによるEGCgのF.n、P.gおよびT.dの酵素阻害試験
１−２−４の硫化水素産生酵素阻害試験および１−２−５のメチオニナーゼ阻害試験結果を図２に示す。またIC50に関しては表５に示す。図２の結果より、メチオニナーゼ阻害については、F.n.、P.g.及びT.d.由来のいずれの場合も塩化亜鉛による阻害活性がEGCgによる阻害活性を上回っていた。一方、硫化水素産生については、F.n.、P.g.及びT.d.由来のいずれの場合もEGCgによる阻害活性が塩化亜鉛による阻害活性を上回っていた。表５からも同様のことが言える。
１−２−４の硫化水素産生酵素阻害試験および１−２−５のメチオニナーゼ阻害試験結果を図２に示す。またIC50に関しては表５に示す。図２の結果より、メチオニナーゼ阻害については、F.n.、P.g.及びT.d.由来のいずれの場合も塩化亜鉛による阻害活性がEGCgによる阻害活性を上回っていた。一方、硫化水素産生については、F.n.、P.g.及びT.d.由来のいずれの場合もEGCgによる阻害活性が塩化亜鉛による阻害活性を上回っていた。表５からも同様のことが言える。
２−４ 実施例１のまとめ
以上より、カテキン類、中でも、GCg、Cg、ECg及びEGCgは硫化水素産生酵素阻害活性を有することが分かった。特に、硫化水素産生酵素の一種である、システインデスルフヒドラーゼに対する阻害活性を顕著に有することが分かった。さらに、EGCgの活性は塩化亜鉛の活性を大きく上回ることが分かった。EGCgの硫化水素産生酵素阻害活性はP.g及びT.d由来の粗酵素液で特に活性が高く、ついで、F.n由来の粗酵素液において活性が見られることが分かった。
以上より、カテキン類、中でも、GCg、Cg、ECg及びEGCgは硫化水素産生酵素阻害活性を有することが分かった。特に、硫化水素産生酵素の一種である、システインデスルフヒドラーゼに対する阻害活性を顕著に有することが分かった。さらに、EGCgの活性は塩化亜鉛の活性を大きく上回ることが分かった。EGCgの硫化水素産生酵素阻害活性はP.g及びT.d由来の粗酵素液で特に活性が高く、ついで、F.n由来の粗酵素液において活性が見られることが分かった。
本発明のカテキン類からなる硫化水素産生酵素阻害活剤を含有する練り歯磨き、マウススプレー、トローチ、チューインガム、キャンディ、グミゼリー、飲料を常法にて製造した。以下にそれらの処方を示した。なお、これらによって本発明品の範囲を制限するものではない。
練り歯磨きの処方
炭酸カルシウム ５０．０重量％
グリセリン ２０．０
カルボオキシメチルセルロース ２．０
ラウリル硫酸ナトリウム ２．０
香料 １．０
サッカリン ０．１
EGCg １．０
クロルヘキシジン ０．０１
水 残
１００．０
炭酸カルシウム ５０．０重量％
グリセリン ２０．０
カルボオキシメチルセルロース ２．０
ラウリル硫酸ナトリウム ２．０
香料 １．０
サッカリン ０．１
EGCg １．０
クロルヘキシジン ０．０１
水 残
１００．０
マウススプレーの処方
エタノール １０．０重量％
グリセリン ５．０
香料 ０．０５
着色料 ０．００１
ECg １．０
水 残
１００．０
エタノール １０．０重量％
グリセリン ５．０
香料 ０．０５
着色料 ０．００１
ECg １．０
水 残
１００．０
トローチの処方
ブドウ糖 ７３．３重量％
乳糖 １６．０
アラビアガム ６．０
香料 １．０
モノフルオロリン酸ナトリウム ０．７
GCg １．０
乳糖 ２．０
１００．０
ブドウ糖 ７３．３重量％
乳糖 １６．０
アラビアガム ６．０
香料 １．０
モノフルオロリン酸ナトリウム ０．７
GCg １．０
乳糖 ２．０
１００．０
チューインガムの処方
ガムベース ２０．０重量％
砂糖 ５４．７
グルコース １５．３
水飴 ９．３
EGCg ０．２
香料 ０．５
１００．０
ガムベース ２０．０重量％
砂糖 ５４．７
グルコース １５．３
水飴 ９．３
EGCg ０．２
香料 ０．５
１００．０
キャンディの処方
砂糖 ５０．０重量％
水あめ ３４．０
クエン酸 ２．０
EGCg ０．６
香料 ０．２
水 残
１００．０
砂糖 ５０．０重量％
水あめ ３４．０
クエン酸 ２．０
EGCg ０．６
香料 ０．２
水 残
１００．０
グミゼリーの処方
ゼラチン ６０．０重量％
水あめ ２０．５
砂糖 ８．５
植物油脂 ４．５
マンニトール ３．０
リンゴ酸 ２．０
Cg １．０
香料 ０．５
１００．０
ゼラチン ６０．０重量％
水あめ ２０．５
砂糖 ８．５
植物油脂 ４．５
マンニトール ３．０
リンゴ酸 ２．０
Cg １．０
香料 ０．５
１００．０
飲料の処方
オレンジ果汁 ３０．０重量％
異性化糖 １５．２４
クエン酸 ０．１０
ビタミンＣ ０．０４
香料 ０．１０
ECg ０．１０
水 残
１００．０
オレンジ果汁 ３０．０重量％
異性化糖 １５．２４
クエン酸 ０．１０
ビタミンＣ ０．０４
香料 ０．１０
ECg ０．１０
水 残
１００．０
Claims (5)
- カテキン類を有効成分とする硫化水素産生酵素阻害剤。
- カテキン類が（−）−エピカテキンガレート、（−）−エピガロカテキンガレート、（−）−ガロカテキンガレート、（−）−カテキンガレートのいずれか、あるいはこれらの混合物である、請求項１の硫化水素産生酵素阻害剤。
- （−）−エピカテキンガレート、（−）−エピガロカテキンガレート、（−）−ガロカテキンガレート、（−）−カテキンガレートのいずれか、あるいはこれらの混合物を有効成分とする、フゾバクテリウム・ヌクレイタム（Fusobacterium nucleatum ）、ポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas gingivalis ）、またはトレポネーマ・デンティコラ（Treponema denticola ）由来の硫化水素産生酵素を阻害する硫化水素産生酵素阻害剤。
- 請求項１から３のいずれかに記載の硫化水素産生酵素阻害剤を含有する飲食品。
- 請求項１から３のいずれかに記載の硫化水素産生酵素阻害剤を含有する口腔用組成物。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2009203689A JP2011051946A (ja) | 2009-09-03 | 2009-09-03 | 硫化水素産生酵素阻害剤 |
| CN2010800397020A CN102482662A (zh) | 2009-09-03 | 2010-09-01 | 硫化氢生成酶抑制剂 |
| PCT/JP2010/005384 WO2011027551A1 (ja) | 2009-09-03 | 2010-09-01 | 硫化水素産生酵素阻害剤 |
| KR1020127008514A KR20120073265A (ko) | 2009-09-03 | 2010-09-01 | 황화수소 산생 효소 저해제 |
| TW099129908A TW201124135A (en) | 2009-09-03 | 2010-09-03 | Hydrogen sulfide-producing enzyme inhibitor |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2009203689A JP2011051946A (ja) | 2009-09-03 | 2009-09-03 | 硫化水素産生酵素阻害剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2011051946A true JP2011051946A (ja) | 2011-03-17 |
| JP2011051946A5 JP2011051946A5 (ja) | 2012-10-18 |
Family
ID=43649106
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2009203689A Pending JP2011051946A (ja) | 2009-09-03 | 2009-09-03 | 硫化水素産生酵素阻害剤 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2011051946A (ja) |
| KR (1) | KR20120073265A (ja) |
| CN (1) | CN102482662A (ja) |
| TW (1) | TW201124135A (ja) |
| WO (1) | WO2011027551A1 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013249263A (ja) * | 2012-05-30 | 2013-12-12 | Ajinomoto Co Inc | ガロタンニン含有組成物 |
| JP2014513543A (ja) * | 2011-05-13 | 2014-06-05 | バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド | トリスルフィド結合を防止および除去する方法 |
| JP2015149904A (ja) * | 2014-02-10 | 2015-08-24 | 森永乳業株式会社 | 含硫アミノ酸リアーゼ阻害剤 |
| US10308706B2 (en) | 2009-10-02 | 2019-06-04 | Biogen Ma Inc. | Methods of preventing and removing trisulfide bonds |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2497619B (en) | 2011-12-15 | 2016-04-06 | Lg Display Co Ltd | Polarization glasses type stereoscopic image display |
| CN108567773B (zh) * | 2018-04-23 | 2020-04-17 | 山东大学 | 一种用于清除口臭的口腔喷剂及其制备方法 |
| CN108635378B (zh) * | 2018-04-23 | 2020-01-24 | 山东大学 | 一种用于日常口腔健康维护的口腔喷剂及其制备方法 |
| CN109043383A (zh) * | 2018-09-05 | 2018-12-21 | 旌德县板桥现代渔业家庭农场 | 一种醋化乌龟蛋及其制备方法 |
| KR20200051452A (ko) * | 2018-11-05 | 2020-05-13 | (주)아모레퍼시픽 | 성분 함량이 변화된 녹차 추출물 |
| CN116041100B (zh) * | 2023-02-24 | 2023-10-20 | 东北农业大学 | 一种降低堆肥中硫化氢释放量的方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004105157A (ja) * | 2002-09-20 | 2004-04-08 | Pharmafoods Kenkyusho:Kk | 糖類分解酵素阻害飲食組成物 |
| JP2005082495A (ja) * | 2003-09-04 | 2005-03-31 | Pharma Foods International Co Ltd | 脳細胞保護のための組成物 |
| JP2005162697A (ja) * | 2003-12-04 | 2005-06-23 | Lotte Co Ltd | メチオニナーゼ阻害剤及びそれを含有する口腔用組成物並びに飲食品 |
| JP2006129757A (ja) * | 2004-11-04 | 2006-05-25 | Pharma Foods International Co Ltd | 苦味やえぐ味を低減した緑茶抽出物、及び該抽出物を含有する飲食品 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005533864A (ja) * | 2002-07-26 | 2005-11-10 | ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． | ラクトフェリンを含む組成物 |
-
2009
- 2009-09-03 JP JP2009203689A patent/JP2011051946A/ja active Pending
-
2010
- 2010-09-01 CN CN2010800397020A patent/CN102482662A/zh active Pending
- 2010-09-01 WO PCT/JP2010/005384 patent/WO2011027551A1/ja active Application Filing
- 2010-09-01 KR KR1020127008514A patent/KR20120073265A/ko not_active Application Discontinuation
- 2010-09-03 TW TW099129908A patent/TW201124135A/zh unknown
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004105157A (ja) * | 2002-09-20 | 2004-04-08 | Pharmafoods Kenkyusho:Kk | 糖類分解酵素阻害飲食組成物 |
| JP2005082495A (ja) * | 2003-09-04 | 2005-03-31 | Pharma Foods International Co Ltd | 脳細胞保護のための組成物 |
| JP2005162697A (ja) * | 2003-12-04 | 2005-06-23 | Lotte Co Ltd | メチオニナーゼ阻害剤及びそれを含有する口腔用組成物並びに飲食品 |
| JP2006129757A (ja) * | 2004-11-04 | 2006-05-25 | Pharma Foods International Co Ltd | 苦味やえぐ味を低減した緑茶抽出物、及び該抽出物を含有する飲食品 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| JPN6010057622; 菊池紗奈恵他: '口臭に関与する口腔内細菌由来粗酵素に対する緑茶カテキン類の阻害効果' 口腔衛生会誌 Ｖｏｌ．５９， Ｎｏ．４, 20090830, ｐ．３９１ * |
| JPN6010057623; ＺＨＵ Ｍ． ｅｔ ａｌ．: 'Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｔｅａ Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ ｏｎ Ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ Ｈ２Ｓ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｈａｌｉｔｏｓｉｓ Ｃａｕｓｉｎｇ Ｂａｃｔｅｒｉａ' Ａｂｓｔｒａｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．１０３, 2003, ｐ．２２６， ＃Ｄ-１３３ * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10308706B2 (en) | 2009-10-02 | 2019-06-04 | Biogen Ma Inc. | Methods of preventing and removing trisulfide bonds |
| JP2014513543A (ja) * | 2011-05-13 | 2014-06-05 | バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド | トリスルフィド結合を防止および除去する方法 |
| US9562252B2 (en) | 2011-05-13 | 2017-02-07 | Biogen Ma Inc. | Methods of preventing and removing trisulfide bonds |
| US9790533B2 (en) | 2011-05-13 | 2017-10-17 | Biogen Ma Inc. | Methods of preventing and removing trisulfide bonds |
| US10590454B2 (en) | 2011-05-13 | 2020-03-17 | Biogen Ma Inc. | Methods of preventing and removing trisulfide bonds |
| JP2013249263A (ja) * | 2012-05-30 | 2013-12-12 | Ajinomoto Co Inc | ガロタンニン含有組成物 |
| JP2015149904A (ja) * | 2014-02-10 | 2015-08-24 | 森永乳業株式会社 | 含硫アミノ酸リアーゼ阻害剤 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20120073265A (ko) | 2012-07-04 |
| CN102482662A (zh) | 2012-05-30 |
| WO2011027551A1 (ja) | 2011-03-10 |
| TW201124135A (en) | 2011-07-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| WO2011027551A1 (ja) | 硫化水素産生酵素阻害剤 | |
| JPH08502970A (ja) | 抗菌性口腔洗浄液 | |
| Shin et al. | Effects of a composition containing lactoferrin and lactoperoxidase on oral malodor and salivary bacteria: a randomized, double-blind, crossover, placebo-controlled clinical trial | |
| EP1605909A1 (en) | Flavoured mouth wash composition | |
| EP3164107A2 (en) | Lactone-containing compositions for malodor elimination | |
| Liu et al. | Cetylpyridinium chloride suppresses gene expression associated with halitosis | |
| WO2008013062A1 (en) | Methioninase inhibitor and composition and food or drink containing the same | |
| JP2013067585A (ja) | 消臭組成物 | |
| Tian et al. | Chewing gum containing allyl isothiocyanate from mustard seed extract is effective in reducing volatile sulfur compounds responsible for oral malodor | |
| JP2007308378A (ja) | 抗歯周病剤、および当該抗歯周病剤を含有する飲食物又は口腔衛生剤 | |
| JPH07316064A (ja) | 歯周病原因菌又はう蝕原因菌抑制剤及びこれらを含有する口腔用組成物及び食品 | |
| JP5774000B2 (ja) | 口腔内アセトアルデヒド低減剤 | |
| WO2012001347A1 (en) | Products with oral health benefits | |
| TWI551300B (zh) | 口腔保健組成物 | |
| JP5447392B2 (ja) | チューインガム組成物 | |
| WO2004073672A1 (en) | Improvements in or relating to flavour compositions | |
| JP2001247469A (ja) | 坑う蝕、歯周病剤、並びに該薬剤を含む口腔用組成物及び飲食品 | |
| WO2011007552A1 (ja) | 口臭除去剤 | |
| JPWO2004096165A1 (ja) | エナメル質脱灰抑制素材 | |
| JP2004244385A (ja) | 防齲蝕性を有する乳幼児用の口腔内洗浄液 | |
| Tian et al. | Allyl isothiocyanate from mustard seed is effective in reducing the levels of volatile sulfur compounds responsible for intrinsic oral malodor | |
| JP2014094968A (ja) | 口臭除去剤 | |
| Raj Mohamed et al. | Awareness of Therapeutic Benefits of Green Tea among Dental Fraternity | |
| JP7335081B2 (ja) | 口臭抑制剤 | |
| JP2016094378A (ja) | タイミンタチバナ抽出物を配合した口臭抑制組成物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20120710 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120830 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20120830 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140304 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140425 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20141104 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20150310 |