JP2009209099A - 動脈硬化の予防・治療剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】トマチジンを有効成分として含む、動脈硬化の予防・治療剤。
【選択図】なし
Description
(1) トマチジンを有効成分として含む、動脈硬化の予防・治療剤。
(2) トマチジンを有効成分として含む、血中コレステロール低下剤。
(3) トマチジンを有効成分として含む、マクロファージの泡沫化阻害剤。
(4) トマチジンを有効成分として含む、動脈硬化の予防・治療、血中コレステロール低下、又はマクロファージの泡沫化阻害のための飲食品。
(5) エスクレオサイドAと併用される、(1)から(4)の何れかに記載の薬剤又は飲食品。
本発明の動脈硬化の予防・治療剤、血中コレステロール低下剤、及びマクロファージの泡沫化阻害剤(以下、これらを総称して本発明の薬剤とも言う)において有効成分として用いるトマチジンは、図1に示す構造を有する(22S,25S)−5α−スピロソラン−3β−オールである。
トマト (Lycopersicon esculentum) の新鮮地上部 (5.0 kg) を容積20Lのプラスチック容器に入れ、その容器にトマト地上部が浸る程度のメタノールを入れ、その後、80〜100℃の水浴で5時間熱をかけ、トマト地上部に含まれる成分をメタノールに溶出させる。そのメタノール溶出液をナス型フラスコに入れ、フラスコをエバポレーターに装着し、メタノールを留去していき液量が約3 Lになるまで濃縮する。このメタノール濃縮液を分液漏斗に移し、ヘキサン1 Lを加えて分配操作を行った。下層(メタノール層)をさらにヘキサン1 Lと分配操作を行った後、メタノール層をエバポレーターで減圧乾固しメタノール抽出エキス(104 g)を得た。このメタノール抽出エキスをDiaion HP-20カラムクロマトグラフィー(70 mm×600 mmガラスオープンカラム)にかけ、水(8 L)、メタノール(6 L)で連続的に溶出した。次に、減圧乾固したメタノール溶出画分(25 g)をシリカゲルクロマトグラフィー(70 mm×500 mmガラスオープンカラム)にかけ、溶媒システム(クロロホルム:メタノール:水=7:3:0.5, 5 L)で溶出することでa-tomatine(2.35 g)をトマトの湿重量から計算して0.047%の収率で得た。
(1)LDLの調製と化学修飾法
ヒトのLDL(d=1.019-1.063 g/ml)は健常者のヒト血漿から連続超遠心(36,000 rpm、20時間、4℃)により分離し、直ちにエチレンジアミン四酢酸(ethylenediaminetetracetic acid, EDTA)を含む生理食塩水(EDTA-saline; 0.15 M NaCl and 1 mM EDTA (pH 7.4))にて透析したものを用いた。acetyl-LDLの調製は、20 mgのヒトLDLに5 mlの飽和酢酸(LDLと等量の飽和酢酸を加えた)を加え、その後、氷上にて穏やかに撹拌しながら無水酢酸を20 ml以下ずつ滴下した。撹拌しながら氷上で1時間反応させながら、5 N NaOHを滴下しpHを6.5〜7.0に保ち、その後直ちにEDTA-salineにて透析し、限外濾過法により濃縮した。得られたacetyl-LDLは、定性的に修飾の程度を確認するためにアガロース電気泳動を行い、十分に修飾されていることを確認した。
ヒト末梢血由来の単核球は、Ficoll密度勾配遠心分離法(Ficoll-Paque: Amersham bioscience)によって分離した。単球は、balanced salt solutionで洗浄後、4℃下での低温単球凝集法によって凝集した単球とその他の単核球を分離し、単球のみを単離した。単離した単球は、2×106 cells/mlでRPMI 1640に再懸濁され、24 well plateに4×106 cells/well(Falcon-PRIMARIA plate: Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, USA)の濃度で播種した。37℃で1時間付着させた後、RPMI 1640に10%不活化ヒト血清及びストレプトマイシン硫酸塩(0.1 mg/ml)とペニシリンG(100 units/ml)を加えた培養液に交換した。その後、培養液は3日ごとに交換し、マクロファージに分化するまで7日間培養(CO2濃度5%、温度37℃、湿度100%)で培養した。
上記のように調製したヒト単球由来マクロファージを24 well platesに播種し、分化させた後、3% BSA-RPMI中に各濃度のTomatidineを添加し、acetyl-LDL及び0.1 mM [3H]oleate-BSA(5×103 dpm/nmol)存在下で16時間培養した。その後の細胞をPBSで3回洗浄し、脂質抽出液(Hexane : Isopropanol = 3 : 2)で30分間、細胞中の脂質を抽出した。脂質抽出液は窒素ガスで乾固し、これを展開溶媒(Hexane : Dietylether : Acetic acid = 90 : 10 : 1)(100 ml)で再懸濁した。この一部(20 ml)を、あらかじめスタンダードとしてcholesteryl oleate、triolein及びcholesterolをスポットしておいたTCL板にスポットし、展開溶媒にて展開後ヨードで発色させ、cholesteryl[3H]oleate、[3H]trioleinを回収した。同時に、展開しない20 mlの脂質抽出液の放射活性も測定し、total [3H]oleate-BSAの細胞内取り込み量とした。各々の放射活性は液体シンチレーターを加え測定した。脂質抽出後の細胞は0.1 N NaOHで可溶化し、各々の細胞タンパク量をBCA法にて測定した。
(1)リポソームの調製
ACAT酵素活性の測定に当たり、遊離コレステロール/ホスファチジルコリンからなるリポソーム(Taurocholate 9.3mM:PC 11.2mM:Cholesterol 1.6mM)の調製を行った。150 μlのコレステロール (20 mg/ml in benzene)と200μlのホスファチジルコリン(100 mg/ml in CHCl3)を十分に混合させ窒素ガスで乾固した。これに100μlの10%タウロコール酸、100 μlのバッファー(500 mM Tris-HCl (pH 7.8)、10 mM EDTA)、800μlの超純水(D2W)を加え混和し、透明になるまで遮光しながら室温で超音波をかけた。最後に1 mlの超純水を加えて、4℃で保存した。
測定に用いる細胞のホモジネートは氷冷したバッファーA(50 mM Tris、1 mM EDTA (pH 7.4)、プロテアーゼ阻害剤 (PMSF, pepstatin A, luepeptin, aprotinin))で細胞を回収し、テフロン(登録商標)ホモジナイザーを用いて破砕した。ホモジネートした細胞に、KClとCHAPS(1 M KCl: 2% CHAPS)を添加し可溶化した。可溶化した細胞抽出物はBCA法によるタンパク定量後、バッファーAで濃度を4 mg/mlに調整した。可溶化した細胞抽出物20μl(80μg)に調製したリポソーム140μlを加え軽く混和しACATタンパクを再構成し、30μMTomatidineを添加し10分間氷令した後、[14 C]オレオイルCoA(25 mM [14C]oleoyl CoA: 12.5 mg/ml fatty acid-free BSA: 0.02 M Tris-HCl (pH 7.8)、40 dpm/pmol)を添加し、15分間37℃で保温した。3 mlの反応停止液(CHCl3 : CH3OH = 2 : 1)を添加することにより酵素反応は停止させた。室温で低速遠心(2,000 rpm、10分間)により水層と油層を分離し、水層を廃棄し残った油層を窒素ガスで乾固させ、120μlの展開溶媒(Hexane: Diethylether: Acetic acid = 90 : 10 : 1)で再懸濁し、TLCにスポットし展開させコレステロール[3H]オレイン酸の放射活性を測定してACAT活性とした。
実験手順は、熊本大学動物実験倫理学調査委員会によって承認されている。
6週齢のapoprotein E(apoE)欠損マウス(C57BL/6.KOR-Apoeshl)はSLCより購入した。これらのマウスは、12時間毎に点灯/消灯で、温度と湿度が一定に保たれた部屋(22±2℃、55±2%)で飼育し、購入後1週間は普通食(CLEA)を与えた。その後、Tomatidine(50 mg/kg of body weight)を60日間経口投与した。20匹のapoprotein E(apoE)欠損マウスを2群(10匹:controls、10 匹:50 mg/kg Tomatidine)にわけ実験を行った。血液サンプルは経口投与終了後に腹大動脈より採血した。血清中の総コレステロール、LDLコレステロール、トリグリセリド濃度は酵素法を用いてOlympus AU5200 自動分析装置により測定した。測定結果を図3に示す。Tomatidine投与により、血中総コレステロールおよびLDLコレステロールが低下した。
Claims (5)
- トマチジンを有効成分として含む、動脈硬化の予防・治療剤。
- トマチジンを有効成分として含む、血中コレステロール低下剤。
- トマチジンを有効成分として含む、マクロファージの泡沫化阻害剤。
- トマチジンを有効成分として含む、動脈硬化の予防・治療、血中コレステロール低下、又はマクロファージの泡沫化阻害のための飲食品。
- エスクレオサイドAと併用される、請求項1から4の何れかに記載の薬剤又は飲食品。
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Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013510140A (ja) * | 2009-11-11 | 2013-03-21 | ジョン ヒュン ナム | 脂肪肝改善剤組成物 |
JP2014517008A (ja) * | 2011-06-06 | 2014-07-17 | ユニバーシティ オブ アイオワ リサーチ ファウンデーション | 筋萎縮を阻害するための方法 |
JP2018184394A (ja) * | 2017-04-25 | 2018-11-22 | 東海物産株式会社 | トマチジンの製造法 |
CN109212054A (zh) * | 2018-07-24 | 2019-01-15 | 山东农业大学 | 一种高效液相色谱-质谱法测定番茄碱和番茄皂苷的方法 |
JP2019210236A (ja) * | 2018-06-01 | 2019-12-12 | 株式会社ディーエイチシー | トマチジン又はエスクレオゲニンの製造方法、並びにトマチジン又はエスクレオゲニンの利用物品 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002511415A (ja) * | 1998-04-09 | 2002-04-16 | ジョンズ ホプキンズ ユニヴァーシティー スクール オブ メディシン | ヘッジホッグシグナリング経路の阻害剤としてのステロイドアルカロイド誘導体の使用 |
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Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002511415A (ja) * | 1998-04-09 | 2002-04-16 | ジョンズ ホプキンズ ユニヴァーシティー スクール オブ メディシン | ヘッジホッグシグナリング経路の阻害剤としてのステロイドアルカロイド誘導体の使用 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
JPN6013042255; M. Friedman et al.: Food and Chemical Toxicology Vol.38, 2000, p.549-553 * |
JPN6013042258; V. Simons et al.: Antimicrobial Agents and Chemotherapy Vol.50, No.8, 2006, p.2732-2740 * |
JPN6013042260; 和漢医薬学雑誌: 小林恭一 Vol.15, 1998, p.1-13 * |
JPN7013000722; Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology Vol.27, 2007, p.2400-2406 * |
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013510140A (ja) * | 2009-11-11 | 2013-03-21 | ジョン ヒュン ナム | 脂肪肝改善剤組成物 |
JP2014517008A (ja) * | 2011-06-06 | 2014-07-17 | ユニバーシティ オブ アイオワ リサーチ ファウンデーション | 筋萎縮を阻害するための方法 |
JP2017019834A (ja) * | 2011-06-06 | 2017-01-26 | ユニバーシティ オブ アイオワ リサーチ ファウンデーション | 筋萎縮を阻害するための方法 |
JP2018184394A (ja) * | 2017-04-25 | 2018-11-22 | 東海物産株式会社 | トマチジンの製造法 |
JP7085262B2 (ja) | 2017-04-25 | 2022-06-16 | 東海物産株式会社 | トマチジンの製造法 |
JP2019210236A (ja) * | 2018-06-01 | 2019-12-12 | 株式会社ディーエイチシー | トマチジン又はエスクレオゲニンの製造方法、並びにトマチジン又はエスクレオゲニンの利用物品 |
CN109212054A (zh) * | 2018-07-24 | 2019-01-15 | 山东农业大学 | 一种高效液相色谱-质谱法测定番茄碱和番茄皂苷的方法 |
CN109212054B (zh) * | 2018-07-24 | 2020-11-06 | 山东农业大学 | 一种高效液相色谱-质谱法测定番茄碱的方法 |
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