JP2009109218A - 微小粒子の光学的測定方法及び光学的測定装置 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】流路2内を一列になって通流する微小粒子3に、光照射部4からパルスレーザ光5を、パルス強度を変調しながら照射することにより、1つの微小粒子に対して、同一波長のレーザ光を複数回照射する。そして、レーザ光5によって微小粒子3から発せられた蛍光及び/又は散乱光10を、検出部11で検出する。このとき、検出部9に設けられた光検出器11の感度は固定しておく。
【選択図】図1
Description
2 流路
3 微小粒子
4 光照射部
5 レーザ光
6 レーザ装置
7、12 ミラー
8、13 レンズ
9 検出部
10 蛍光及び/又は散乱光
11 光検出装置
14 分光素子
21 サンプル液
22 シース液
23 層流部分
24 レーザスポット
101 フローサイトメーター
102 流体(フロー)系
103 光学系
104 信号処理装置
105 細胞
106a,106b,106c 光源
107 導光部材
Claims (18)
- 流路内を通流する微小粒子にレーザ光を照射し、前記微小粒子から発せられた蛍光及び/又は散乱光を検出する光学的測定方法であって、
前記レーザ光をパルス状とし、そのパルス強度を変調させることにより、1つの微小粒子に1又は波長が異なる2以上のレーザ光を、強度を変えて複数回照射する微小粒子の光学的測定方法。 - 検出された蛍光及び/又は散乱光を、前記レーザ光の強度に基づき規格化することを特徴とする請求項1又は2に記載の微小粒子の光学的測定方法。
- 前記規格化された値から、前記微小粒子の種類又は状態を識別することを特徴とする請求項3に記載の微小粒子の光学的測定方法。
- 前記微小粒子に波長が異なる2以上のレーザ光を、パルス強度を変調させつつ位相時間をずらして照射し、
前記微小粒子から発せられた蛍光及び/又は散乱光を前記レーザ光の波長毎に検出することを特徴とする請求項1乃至4のいずれか1項に記載の微小粒子の光学的測定方法。 - 前記微小粒子が2以上の蛍光色素で修飾されており、一のレーザ光を照射したときに検出された蛍光又は散乱光を、この一のレーザ光で励起されない蛍光色素の参照スペクトルを零として、逆行列解析することを特徴とする請求項5に記載の微小粒子の光学的測定方法。
- 前記レーザ光を櫛形状の超短パルスレーザ光とすることを特徴とする請求項1乃至6のいずれか1項に記載の微小粒子の光学的測定方法。
- 予め、測定対象の微小粒子が破壊される温度及び/又は光強度を測定しておき、その結果に応じて、前記パルスレーザ光の照射強度、照射時間、照射波形、パルス比率、位相、パルス幅及びパルス形状のうちの少なくとも1種の条件を調整することを特徴とする請求項7に記載の微小粒子の光学的測定方法。
- 前記微小粒子が細胞又はマイクロビーズであることを特徴とする請求項1乃至8のいずれか1項に記載の微小粒子の光学的測定方法。
- 流路内を通流する微小粒子にレーザ光を照射する光照射部と、
前記レーザ光が照射された微小粒子から発せられる蛍光及び/又は散乱光を検出する光検出部と、を有し、
前記光照射部からパルス強度を変調させながらパルスレーザを照射し、1つの微小粒子に1又は波長が異なる2以上のレーザ光を、強度を変えて複数回照射する微小粒子の光学的測定装置。 - 更に、前記光検出部で検出された蛍光及び/又は散乱光を、前記レーザ光の強度に基づき規格化するデータ処理部を有することを特徴とする請求項10又は11に記載の微小粒子の光学的測定装置。
- 前記規格化された値から、前記微小粒子の種類又は状態を識別することを特徴とする請求項12に記載の微小粒子の光学的測定装置。
- 前記光照射部から前記微小粒子に波長が異なる2以上のレーザ光を、パルス強度を変調させつつ位相時間をずらして照射し、
前記光検出部において前記微小粒子から発せられた蛍光及び/又は散乱光を前記レーザ光の波長毎に検出することを特徴とする請求項10乃至13のいずれか1項に記載の微小粒子の光学的測定装置。 - 前記微小粒子が2以上の蛍光色素で修飾されている場合、一のレーザ光を照射したときに検出された蛍光又は散乱光を、前記一のレーザ光で励起されない蛍光色素の参照スペクトルを零として、逆行列解析することを特徴とする請求項14に記載の微小粒子の光学的測定装置。
- 前記レーザ光が、櫛形状の超短パルスレーザ光であることを特徴とする請求項10乃至15のいずれか1項に記載の微小粒子の光学的測定装置。
- 更に、予め測定された測定対象の微小粒子が破壊される温度及び/又は光強度のデータに基づき、前記パルスレーザ光の照射強度、照射時間、照射波形、パルス比率、位相、パルス幅及びパルス形状のうちの少なくとも1種の条件を調整するレーザ光制御部を有することを特徴とする請求項16に記載の微小粒子の光学的測定装置。
- 前記微小粒子が、細胞又はマイクロビーズであることを特徴とする請求項10乃至17のいずれか1項に記載の微小粒子の光学的測定装置。
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