JP2008530225A

JP2008530225A - インダゾール−カルボキサミド化合物の結晶型

Info

Publication number: JP2008530225A
Application number: JP2007556275A
Authority: JP
Inventors: ポールアール．ファザリー，; ディレックエス．ターナー，; ロバートチャオ，; チャンウェイリュー，; ハオチャン，; ダニエルジェノブ，; チュンニンリー，
Original assignee: セラヴァンス，インコーポレーテッド
Priority date: 2005-02-17
Filing date: 2006-02-16
Publication date: 2008-08-07
Also published as: US20060183901A1; TW200640921A; EP1848716A1; WO2006088988A1

Abstract

本発明は、１イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドの結晶ハロゲン化物塩およびその溶媒和物を提供する。本発明はまた、前記塩を含む医薬組成物、前記結晶塩を使用して５ＨＴ４レセプター活性に関係する病気を治療する方法、および前記結晶塩を調製するのに有用な方法を提供する。

Description

（発明の分野）
本発明は、５−ＨＴ_４レセプターアゴニストとして役立つインダゾール−カルボキサミドの結晶塩型を対象とする。また、本発明は、そのような結晶化合物を含む医薬組成物、５−ＨＴ_４レセプター活性が介在する病状を治療するために前記化合物を使用する方法、および前記化合物を調製する上で有用な方法も対象とする。

（発明の背景）
（現在の技術水準）
同一出願人による２００４年２月１８日付出願の米国仮出願第６０／５４５，７０２号、および２００５年２月１７日付出願の米国特許出願第１１／０６０，１９５号は、胃腸管運動が低下する疾患を治療するのに有用であると期待される新規のインダゾール−カルボキサミド化合物を開示している。特に、これらの出願では、１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミド化合物が、５−ＨＴ_４アゴニスト活性を示すものとして開示されている。

１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドの化学構造は、以下の化学式Ｉで表される：

この化合物を治療剤として有効に利用するには、簡単に製造することができ、かつ許容できる化学的および物理的な安定性を有する固体塩の形状になっていることが非常に望ましい。例えば、熱に、例えば約１５０℃までの温度にも安定的であるが、特に吸湿性でも融解性でもないため、その材料の加工および保存が容易である塩の形状になっていることが非常に望ましい。結晶性固体の方が、製造された製品の純度および安定性を高めるため、通常、非晶形よりも好適である。

化学式Ｉの化合物の結晶塩型は、これまでに報告されたことがない。そのため、許容できるレベルの吸湿性、融解性、および熱安定性をもつ、化学式Ｉの化合物の安定した結晶塩型に対する需要が存在する。

（発明の要旨）
本発明は、１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドの結晶ハロゲン化物塩またはその溶媒和物を提供する。一つの態様において、本発明の結晶ハロゲン化物塩は、化学式Ｉの化合物のジヒドロクロリド塩である。別の態様では、結晶ハロゲン化物塩は、化学式Ｉの化合物のジヒドロブロミド塩である。さらに別の態様では、本発明の結晶塩は、化学式Ｉの化合物のジヒドロクロリド塩の結晶性水和物である。

意外にも、本発明の結晶ハロゲン化物塩は、約１５０℃よりも高い温度で熱安定性があり、かつ、室温で約４０％から約６０％の範囲の相対湿度に曝露された場合、約１％未満の重量変化を示すことが分かっている。さらに、本発明の結晶ハロゲン化物塩は、室温で最高６０％の相対湿度に曝露された場合、融解性がない。

その他の用途のうち、化学式Ｉの化合物の結晶ハロゲン化物塩は、胃腸管運動が低下する疾患を治療する医薬組成物を調製するのに役立つことが期待されている。したがって、その組成物の別の態様において、本発明は、医薬上許容される担体および１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドの結晶ハロゲン化物塩またはその溶媒和物を含む医薬組成物を提供する。

本発明は、５−ＨＴ_４レセプター活性が関係する病気または症状、例えば、胃腸管運動が低下する疾患を治療する方法であって、哺乳動物に対し、治療上有効な量の１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドの結晶ハロゲン化物塩またはその溶媒和物を投与することを含む方法も提供する。

別の方法態様において、本発明は、本発明の結晶ハロゲン化物塩を調製する方法であって、１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドをハロゲン化物酸に接触させることを含む方法を提供する。

本発明は、また、治療または薬剤で使用するための本明細書に記載されている通りの本発明の結晶ハロゲン化物塩、および、本発明の結晶ハロゲン化物塩を薬剤の製造、特に、哺乳動物において胃腸管運動が低下する疾患を治療するための薬剤の製造に使用することを提供する。

本発明のさまざまな態様を、添付の図面を参照して説明する。

（発明の詳細な説明）
本発明は、１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドの結晶ハロゲン化物塩およびその溶媒和物を提供する。

定義
本発明に係る化合物、組成物および方法を説明する際、別段の記載がない限り、以下の用語は以下の意味である。

「治療上有効な量」という用語は、治療を必要とする患者に投与したときに治療効果を生じさせるのに十分な量を意味する。

本明細書において「治療」という用語は、哺乳動物（特にヒト）などの患者における病気、疾患、または病状を治療することを意味し、以下を含む：
（ａ）病気、疾患、または病状が発生するのを防止すること。すなわち、患者の予防的治療；
（ｂ）病気、疾患、または病状を改善すること。すなわち、患者の病気、疾患、または病状の除去または退縮をもたらすこと；
（ｃ）病気、疾患、または病状を抑制すること、すなわち、患者の病気、疾患、または病状の進行を遅らせるか停止させること；または
（ｄ）患者の病気、疾患、または病状の症状を緩和すること。

「溶媒和物」という用語は、溶質、すなわち、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩の一つ以上の分子、および溶媒の一つ以上の分子によって形成される複合体または集合体を意味する。このような溶媒和物は、典型的には、溶質と溶媒のモル比が実質的に一定である結晶性固体である。代表的な溶媒は、例を挙げると、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、酢酸などである。溶媒が水の場合、溶媒和物は水和物である。

本明細書において「結晶ハロゲン化物塩」という用語は、結晶格子の中に溶媒分子を含まない結晶性固体、すなわち、溶媒和物ではないものを意味する。本発明の溶媒和物、または具体的には水和物ははっきりと同定されている。

本明細書および添付の請求の範囲において、「一つの」や「その」などの単数形は、記載内容から明らかでない限り、複数形への言及を含むことに留意すべきである。

「アミノ保護基」という用語は、アミノ窒素で望ましくない反応が起きることを防止するのに適した保護基を意味する。代表的なアミノ保護基は、ホルミル基；アシル基、例えば、アセチル基などのアルカノイル基；ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）などのアルコキシカルボニル基；ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）および９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）などのアリールメトキシカルボニル基；ベンジル基（Ｂｎ）、トリチル基（Ｔｒ）、および１，１−ジ−（４’−メトキシフェニル）メチル基などのアリールメチル基；トリメチルシリル基（ＴＭＳ）およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基（ＴＢＤＭＳ）などのシリル基などであるが、これらに限定されない。

活性薬剤
本発明の塩類における活性薬剤、すなわち化学式Ｉの化合物は、市販のＡｕｔｏＮｏｍソフトウエア（ＭＤＬＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍｓ，ＧｍｂＨ，Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドと名付けられている。（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）という表示は、二重環系に関係する結合の相対配向を表したものである。あるいは、この化合物は、Ｎ−［（３−エンド）−８−［２−（４−アセチル−ピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル］−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−インダゾール−３−カルボキサミドと表示される。

本発明のハロゲン化物塩
一つの態様において、本発明は、結晶性１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチル−ピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドジヒドロクロリド塩を提供する。

本発明のジヒドロクロリド塩は、化学式Ｉの化合物の１モル当量あたり約１．９から約２．１モル当量の塩酸など、典型的には、化学式Ｉの化合物の１モル当量あたり約１．７５から約２．２モル当量の塩酸を含む。

ハロゲン化物酸のモル比は、当業者が利用できる方法によって簡単に決定することができる。例えば、前記モル比は、元素分析によって簡単に決定することができる。あるいは、^１ＨＮＭＲおよびイオンクロマトグラフィー法を用いてモル比を決めることもできる。

一つの態様において、本発明の結晶性ジヒドロクロリド塩は、以下から選択される２θ値で２つ以上の回折ピークをもつ粉末ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンを特徴とする：４．１７±０．２０、８．２３±０．２０、１２．３０±０．２０、１２．７７±０．２０、１３．９４±０．２０、１６．０４±０．２０、１７．０６±０．２０、１８．５６±０．２０、１９．９３±０．２０、２０．４９±０．２０、２１．７２±０．２０、２２．５８±０．２０、２６．２７±０．２０、および２６．５９±０．２０。特に、本態様において、結晶型は、４．１７±０．２０、８．２３±０．２０、１２．３０±０．２０、１３．９４±０．２０、および１８．５６±０．２０から選択される２θ値で２つ以上の回折ピークをもつ粉末ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンを特徴とする。

粉末ｘ線回折の分野ではよく知られているように、ＰＸＲＤスペクトルのピークの位置は、試料調製および機器の配置などの実験についての詳細な項目に対して、相対的なピークの高さほどには敏感ではない。そのため、一つの態様において、化学式Ｉの化合物の結晶性ジヒドロクロリド塩は、ピーク位置が図１に示したものと実質的に一致している粉末ｘ線回折パターンによって特徴づけられる。

また、図２に示されているように、本発明の結晶性ジヒドロクロリド塩は、約２３０℃から約２７５℃の範囲内で吸熱性熱流のピークを示す示差走査熱量測定（ＤＳＣ）の波形（ｔｒａｃｅ）からも明らかなように高温での熱安定性も特徴とする。さらに、熱重量分析（ＴＧＡ）の波形は、約１８０℃よりも低い温度では有意な熱イベントを示さない。

さらに別の態様において、結晶性ジヒドロクロリド塩は、約７５３、９８６、１０８６、１１９７、１２６７、１２８１、１４３７、１４８８、１５２２、１６３８、１６６４、および２４１６ｃｍ^−１で有意な吸収バンドを示す赤外線吸収スペクトルを特徴とする。

化学式Ｉの化合物の結晶性ジヒドロクロリド塩は、許容できる適度なレベルの（すなわち、４０％相対湿度から６０％相対湿度という湿度範囲において重量増加が約１％よりも小さい）吸湿性をもつ可逆的な吸着／脱着プロフィールをもつことが示されている。

さらに、化学式Ｉの化合物の結晶性ジヒドロクロリド塩は、長時間高い湿度に曝されても安定していることが分かっている。例えば、２５℃および６０％相対湿度で６ヶ月間保存した後でも、ＨＰＬＣによる解析によれば、化学分解は示されず、湿度の増加は２％未満であった。

別の態様において、本発明は、結晶性１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチル−ピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドジヒドロブロミド塩を提供する。

本発明のジヒドロブロミド塩は、化学式Ｉの化合物の１モル当量あたり約１．７５から約２．２モル当量の臭化水素酸を含む。

一つの態様において、本発明の結晶性ジヒドロブロミド塩は、以下から選択される２θ値で２つ以上の回折ピークをもつ粉末ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンを特徴とする：４．４１±０．２０、７．６３±０．２０、８．７５±０．２０、１３．１１±０．２０、１４．５２±０．２０、１５．２８±０．２０、２１．８９±０．２０、２２．７５±０．２０、２３．３５±０．２０、２５．４０±０．２０、２６．３４±０．２０、２８．５３±０．２０、および２８．８６±０．２０。特に、本態様において、結晶型は、４．４１±０．２０、８．７５±０．２０、１３．１１±０．２０、および２１．８９±０．２０から選択される２θ値で２つ以上の回折ピークをもつ粉末ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンを特徴とする。

別の態様において、化学式Ｉの化合物の結晶性ジヒドロブロミド塩は、ピーク位置が図３に示したものに実質的に一致している粉末ｘ線回折パターンによって特徴づけられる。

さらに別の態様において、図４に示されているように、本発明の結晶性ジヒドロブロミド塩は、それぞれ約２３０℃と約２５０℃までの温度でも熱イベントを示さないＤＳＣとＴＧＡの波形から明らかなとおり、並はずれた熱安定性を特徴とする。

化学式Ｉの化合物の結晶性ジヒドロブロミド塩は、低レベルの（すなわち、４０％相対湿度から６０％相対湿度という湿度範囲において重量増加が約１％よりも小さい）吸湿性をもつ可逆的な吸着／脱着プロフィールをもつことが示されている。

さらに別の態様において、本発明は、化学式Ｉの化合物のジヒドロクロリド塩の結晶性水和物を提供する。

一つの態様において、本発明のジヒドロクロリド塩の結晶性水和物は、以下から選択される２θ値で２つ以上の回折ピークをもつ粉末ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンを特徴とする：４．８５±０．２０、８．１４±０．２０、９．０２±０．２０、１２．５８±０．２０、１４．２０±０．２０、１６．８５±０．２０、１７．３１±０．２０、１７．６６±０．２０、１９．２８±０．２０、１９．９２±０．２０、２１．３６±０．２０、２１．７２±０．２０、２２．３８±０．２０、２２．７５±０．２０、２６．３４±０．２０、２８．８５±０．２０、および２９．４７±０．２０。特に、本態様において、結晶型は、１２．５８±０．２０、１４．２０±０．２０、１６．８５±０．２０、１７．３１±０．２０、および１７．６６±０．２０から選択される２θ値で２つ以上の回折ピークをもつ粉末ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンを特徴とする。

別の態様において、化学式Ｉの化合物のジヒドロクロリド塩の結晶性水和物は、ピーク位置が図７に示したものに実質的に一致している粉末ｘ線回折パターンによって特徴づけられる。

本発明の塩類のこれらの性質は、後述する実施例においてさらに具体的に説明する。

合成手順
本発明の結晶塩を調製するには、１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチル−ピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドを、一般的には、約１．８から約２．３モル当量のハロゲン化物酸、例えば塩酸または臭化水素酸と接触させる。通常、この反応は、不活性希釈剤の中で、約３５℃から約６０℃を含む、約２０℃から約７０℃の温度範囲内で行われる。この反応に適した不活性希釈剤は、エタノール、メタノール、イソプロパノール、酢酸エチル、アセトニトリル、トルエン、ジクロロエタン、テトラヒドロフラン、およびこれらの混合物、および任意で水を含むものなどであるが、これらに限定されない。具体的な態様において、含水ＨＣｌまたは含水ＨＢｒを、活性薬剤のエタノール溶液に加える。

反応が完了したところで、沈殿法、濃縮法、遠心分離法など任意の常法によって、本発明の結晶塩を反応混合液から単離する。

活性薬剤である１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチル−ピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドは、簡単に利用することができる出発物質から、下記の実施例に記載された処理手順を用いるか、本出願の発明の背景の項で列挙した同一出願人による米国出願に記載されている処理手順を用いて調製することができる。

例えば、実施例１Ｂに記載されているように、スキームＡに図示された通りに活性薬剤を調製することができる。

スキームＡでは、まず、（１Ｒ，５Ｓ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−オン（２）を触媒存在下でギ酸アンモニウムと反応させて、１−｛４−［２−（３−エンド−アミノ−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−８−イル）エチル］ピペラジン−１−イル｝エタノン（３）を生じさせる。典型的には、中間体（２）を大過剰の、例えば約１５当量以上のギ酸アンモニウムと、メタノールなどの不活性希釈剤の中、遷移金属触媒、例えばパラジウムの存在下で反応させて、高い立体特異性を有するエンド（ｅｎｄｏ）型構造の中間体（３）を生じさせる。この反応は、典型的には、常温で約１２時間から７２時間、または反応が実質的に完了するまで行われる。そして、抽出など常法によって生成物を精製することができる。

第二の工程では、アミノトロパン（３）を、１Ｈ−インダゾールカルボン酸（４）と、カップリング剤および塩基が存在する中で反応させて、化学式（Ｉ）の化合物を生じさせる。典型的には、アセトニトリルなどの不活性希釈剤で希釈したアミノトロパン（３）を、アセトニトリルなどの不活性希釈剤で希釈したカルボン酸（４）と、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンなどの塩基、およびベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェイト（ＰｙＢｏｐ）、または１，３−ジシクロへキシル−カルボジイミド（ＤＣＣ）、１−（３−ジメチルアミノ−プロピル）−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ）などのカップリング剤が存在する中で混合する。この反応は、典型的には、約０℃から約１０℃の温度で約３０分から約１時間行った後、室温で約１〜３時間、または反応が実質的に完了するまで行う。生成物は、常法による処理手順で単離することができる。

本明細書の実施例１Ｂに記載したように、中間体（２）は、一般に入手可能な出発物質から調製することができる。

化学式（Ｉ）の化合物およびその中間体を調製するための具体的な反応条件およびその他の処理手順に関する更なる詳細は、後述する実施例に記載されている。

このように、別の態様において、本発明は、以下の工程を含む、化学式（Ｉ）の化合物を調製する方法を提供する：
（ａ）遷移金属触媒存在下で、中間体（２）を過剰量のギ酸アンモニウムと反応させて、中間体（３）を生じさせる工程；および
（ｂ）カップリング剤および塩基の存在下で、中間体（３）を中間体（４）と反応させて、化学式（Ｉ）の化合物、またはその医薬上許容される塩または溶媒和物または立体異性体を生じさせる工程。

さらに、本発明は、新規の中間体（２）および（３）を提供する。

医薬組成物
化学式Ｉの化合物の結晶ハロゲン化物塩は、一般的には医薬組成物の形で患者に投与される。このような医薬組成物は、経口、直腸内、膣内、鼻腔内、吸入、局所（経皮など）、および非経口などがあるが、これらに限定されない投与方式など、任意の許容される投与経路によって投与することができる。

したがって、組成物の態様の一つにおいて、本発明は、医薬上許容される担体または賦形剤、および治療上有効な量の化学式Ｉの化合物のハロゲン化物塩を含む医薬組成物を対象としている。任意では、前記医薬組成物は、所望であれば、他の治療薬および／または処方剤を含むことも可能である。

本発明の医薬組成物は、典型的には、治療上有効な量の本発明に係る結晶塩を含む。典型的には、このような医薬組成物は、重量で約１％から約７０％、例えば、重量で約５％から約６０％の活性薬剤など、重量で約０．１から約９５％の活性薬剤を含む。

従来からある担体または賦形剤を、本発明の医薬組成物で使用することができる。具体的な担体もしくは賦形剤、または担体もしくは賦形剤の組み合わせの選択は、具体的な患者または病状もしくは症状のタイプを治療するために使用されている投与方式に応じて決まる。ここで、具体的な投与方式に適した医薬組成物の調製は、医薬技術分野における当業者が適宜なしうることである。さらに、そのような組成物の成分は、例えば、Ｓｉｇｍａ，Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ１４５０８，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ６３１７８から購入できる。さらなる具体例として、通常の製剤技術については、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，ＬｉｐｐｉｎｃｏｔｔＷｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｈｉｔｅ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（２０００）；ａｎｄＨ．Ｃ．Ａｎｓｅｌｅｔａｌ．，ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＤｏｓａｇｅＦｏｒｍｓａｎｄＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＳｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，ＬｉｐｐｉｎｃｏｔｔＷｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｈｉｔｅ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９９９）に記載されている。

医薬上許容される担体として使用することができる材料の代表例は、（１）ラクトース、グルコース、およびスクロースなどの糖類；（２）コーンスターチおよびジャガイモデンプンなどのデンプン類；（３）微結晶性セルロースおよびその誘導体、例えば、カルボキシルメチル・セルロース・ナトリウム、エチルセルロース、および酢酸セルロースなどのセルロース；（４）トラガカント粉末；（５）モルト；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）ココアバターおよび坐薬用ワックスなどの賦形剤；（９）ピーナッツオイル、綿実油、紅花油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、およびダイズ油などの油類；（１０）プロピレングリコールなどのグリコール類；（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコールなどのポリオール類；（１２）オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル類；（１３）寒天；（１４）水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；（１５）アルギン酸；（１６）発熱物質を含まない水；（１７）等張食塩水；（１８）リンゲル液；（１９）エチルアルコール；（２０）リン酸緩衝液；および（２１）その他医薬組成物で使用する非毒性の適合物質などであるが、これらに限定されない。

本発明の医薬組成物は、典型的には、本発明の化合物を、医薬上許容される担体および一種類以上の随意的な成分と十分によく混合または混和して調製する。必要に応じて、または所望であれば、得られた均一に混和された混合物を、通常の手順および装置を用いて、さらに錠剤、カプセル剤、丸薬などに形成または充填することができる。

本発明の医薬組成物は、好ましくは、単位用量形態に包装されている。「単位用量形態」という用語は、患者に服用させるのに適した物理的に分離されている単位、すなわち、各単位が、単独、または一種類以上の別の単位と組み合わせて所望の治療効果を生じさせるように計算された所定量の活性薬剤を含むことを意味する。例えば、このような単位用量形態は、カプセル剤、錠剤、丸薬などである。

好適な実施態様において、本発明の医薬組成物は経口投与に適している。経口投与に適した医薬組成物は、カプセル剤、錠剤、丸薬、トローチ剤、カシェ剤、糖衣錠、粉末剤、顆粒剤などの形態；または、水性液体中もしくは非水性液体中の溶液もしくは懸濁液として；または、水中油型もしくは油中水型の乳剤として；または、エリキシル剤もしくはシロップ剤として；などであろうが、いずれも、所定量の本願発明化合物を活性成分として含む。

固形の剤形で（すなわち、カプセル剤、錠剤、丸薬などとして）経口投与しようとする場合、本願発明の医薬組成物は、一般的には、活性成分として本発明化合物を、かつ、クエン酸ナトリウムまたは第二リン酸カルシウムなど、一つ以上の医薬上許容される担体を含む。随意または代替的には、前記固形剤形は、下記のものを含むことも可能である：（１）充填剤または増量剤、例えば、デンプン、微結晶性セルロース、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、および／またはケイ酸；（２）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、および／またはアラビアゴム；（３）保湿剤、例えば、グリセロール；（４）崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカのデンプン、アルギン酸、一定のケイ酸、および／または炭酸ナトリウム；（５）溶液遅延剤（ｓｏｌｕｔｉｏｎｒｅｔａｒｄｉｎｇａｇｅｎｔ）、例えば、パラフィン；（６）吸収促進剤、例えば、第四級アンモニウム化合物；（７）湿潤剤、例えば、セチルアルコールおよび／またはグリセロールモノステアレート；（８）吸収剤、例えば、カオリンおよび／またはベントナイト粘土；（９）潤滑剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、および／またはこれらの混合物；（１０）着色剤；および（１１）緩衝剤。

離型剤、湿潤剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤、芳香剤、保存剤、および抗酸化剤も、本発明の医薬組成物の中に存在していてもよい。医薬上許容される抗酸化剤の例には、（１）水溶性抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど；（２）油溶性抗酸化剤、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ−トコフェロールなど；および（３）金属キレート剤、例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などが含まれる。カプセル剤、錠剤、丸薬などのコーティング剤には、腸溶コーティングに使用されるもの、例えば、酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）、酢酸フタル酸ポリビニル（ＰＶＡＰ）、ヒドロキシプロピル・メチルセルロース・フタレート、メタクリル酸−メタクリル酸エステル共重合体、セルロースアセテートトリメリテート（ＣＡＴ）、カルボキシメチルエチルセルロース（ＣＭＥＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート（ＨＰＭＣＡＳ）などがある。

所望であれば、本発明の医薬組成物は、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースをさまざまな比率で用いたり、または他のポリマー基質、リポソーム、および／またはミクロスフェアを用いたりして、活性成分が持続放出または制御放出されるように調剤することもできる。

また、本発明の医薬組成物は、随意で乳白剤を含むことができ、また、専らまたは優先的に胃腸管の一定の位置で、活性成分を随意には遅延して放出するよう処方することもできる。使用可能な包埋組成物の例は、ポリマー物質およびワックスである。活性成分は、適当であれば、上記賦形剤の一つ以上のものとともにマイクロカプセル化形態にすることもできる。

経口投与に適した液体剤形には、例えば、医薬上許容される乳剤、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ、エリキシルなどがある。このような液体剤形は、一般的に、活性成分および不活性希釈剤、例えば、水またはその他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油類（特に綿実油、ラッカセイ油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル、およびこれらの混合物を含む。懸濁液は、活性成分の他、懸濁化剤、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天、およびトラガカント、ならびにそれらの混合物などを含むことが可能である。

あるいは、本発明の医薬組成物は、吸入によって投与できるよう処方される。吸入によって投与するのに適した医薬組成物は、典型的には、エアロゾルまたは粉末の形になっていよう。このような組成物は、通常、周知の送達装置、例えば、定量吸入器、乾燥粉末吸入器、噴霧器、または同様の送達装置などを用いて投与される。

加圧容器を用いて吸入によって投与されるとき、本発明の医薬組成物は、典型的には、活性成分と適当な推進剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロメタン、二酸化炭素、またはその他適当なガスを含む。

さらに、この医薬組成物は、本発明の化合物、および粉末吸入器で使用するのに適した粉末を含む（例えば、ゼラチンで作られた）カプセルまたはカートリッジの形態にすることもできる。適当な粉末基剤は、例えば、ラクトースまたはデンプンなどである。

本発明の化合物は、既知の経皮送達系および賦形剤を用いて経皮投与することもできる。例えば、本発明の化合物を、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールモノラウレート、アザシクロアルカン−２−オンなどの透過促進剤と混和して、パッチまたは同様の送達系に取り込ませることができる。ゲル化剤、乳化剤、および緩衝剤など、さらに別の賦形剤を、所望であれば、前記経皮組成物で使用することができる。以下の処方は、本発明の代表的な医薬組成物を例示するものである。

処方例Ａ
経口投与用のハードゼラチンカプセル剤を以下の通りに処方する：
成分量
本発明の塩５０ｍｇ
ラクトース（噴霧乾燥物）２００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム１０ｍｇ。

手順例：成分を十分に混合してから、ハードゼラチンカプセルに充填する（カプセル１個当り２６０ｍｇ）。

処方例Ｂ
経口投与用のハードゼラチンカプセル剤を以下の通りに処方する：
成分量
本発明の塩２０ｍｇ
デンプン８９ｍｇ
微結晶性セルロース８９ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム２ｍｇ。

手順例：成分を十分に混合してから、４５番メッシュのＵ．Ｓ．シーブ（Ｕ．Ｓ．ｓｉｅｖｅ）で篩いハードゼラチンカプセルに充填する（カプセル１個当り２００ｍｇ）。

処方例Ｃ
経口投与用のカプセル剤を以下の通りに処方する：
成分量
本発明の塩１０ｍｇ
ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート５０ｍｇ
デンプン粉末２５０ｍｇ。

手順例：成分を十分に混合してから、ゼラチンカプセルに充填する（カプセル１個当り３１０ｍｇ）。

処方例Ｄ
経口投与用の錠剤を以下の通りに処方する：
成分量
本発明の塩５ｍｇ
デンプン５０ｍｇ
微結晶性セルロース３５ｍｇ
ポリビニルピロリドン（水中１０重量％）４ｍｇ
デンプングリコール酸ナトリウム４．５ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム０．５ｍｇ
タルク１ｍｇ。

手順例：活性成分、デンプンおよびセルロースを４５番メッシュのＵ．Ｓ．シーブで篩い、十分に混合する。ポリビニルピロリドンの溶液を得られた粉末と混合し、次に、この混合物を１４番メッシュのＵ．Ｓ．シーブで篩う。こうしてできた顆粒を５０〜６０℃で乾燥させて、１８番メッシュのＵ．Ｓ．シーブで篩う。次に、デンプングリコール酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウムおよびタルク（事前に６０番メッシュのＵ．Ｓ．シーブで篩っておいたもの）を顆粒に加える。混合した後、混合物を錠剤機で圧縮して１００ｍｇの重さの錠剤とする。

処方例Ｅ
経口投与用の錠剤を以下の通りに処方する：
成分量
本発明の塩２５ｍｇ
微結晶性セルロース４００ｍｇ
二酸化ケイ素（ヒュームド）１０ｍｇ
ステアリン酸５ｍｇ。

手順例：成分を十分に混合してから圧縮して錠剤とする（１錠当り４４０ｍｇの組成物）。

処方例Ｆ
経口投与用の一割線入り錠剤を以下の通りに処方する。

成分量
本発明の塩１５ｍｇ
コーンスターチ５０ｍｇ
クロスカルメロースナトリウム２５ｍｇ
ラクトース１２０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム５ｍｇ。

手順例：成分を十分に混合してから圧縮して一割線入り錠剤とする（１錠当り２１５ｍｇの組成物）。

処方例Ｇ
経口投与用の懸濁液を以下の通りに処方する。

成分量
本発明の塩０．１ｇ
フマル酸０．５ｇ
塩化ナトリウム２．０ｇ
メチルパラベン０．１５ｇ
プロピルパラベン０．０５ｇ
グラニュー糖２５．５ｇ
ソルビトール（７０％溶液）１２．８５ｇ
Ｖｅｅｇｕｍｋ（ＶａｎｄｅｒｂｉｌｔＣｏ．）１．０ｇ
香料０．０３５ｍＬ
着色料０．５ｍｇ
蒸留水適量で１００ｍＬに。

手順例：成分を十分に混合して、懸濁液１０ｍＬ当り１０ｍｇの活性成分を含む懸濁液とする。

処方例Ｈ
吸入により投与するための乾燥粉末剤を以下の通りに処方する。

成分量
本発明の塩１．０ｍｇ
ラクトース２５ｍｇ。

手順例：活性成分を微粉末化した後、ラクトースと混合する。次に、この混合物をゼラチン製吸入カートリッジに充填する。カートリッジの内容物は、粉末吸入器を用いて投与される。

処方例Ｉ
吸入により投与するための定量吸入器入り乾燥粉末剤は以下の通りに処方する。

手順例：平均サイズが１０μｍよりも小さい微粉末化された１０ｇの活性化合物を、０．２ｇのレシチンを２００ｍＬの脱塩水に溶解させて作製した溶液中に分散させて、５重量％の本発明に係る塩と０．１重量％のレシチンを含む懸濁液を調製する。この懸濁液を噴霧乾燥させ、得られた物質を１．５μｍよりも小さい平均直径をもつ粒子に微粉末化させる。この粒子を、加圧１，１，１，２−テトラフルオロエタンを含むカートリッジの中に充填する。

処方例Ｊ
注射用製剤を以下の通りに処方する。

成分量
本発明の塩０．２ｇ
酢酸ナトリウム緩衝溶液（０．４Ｍ）４０ｍＬ
ＨＣｌ（０．５Ｎ）またはＮａＯＨ（０．５Ｎ）適量でｐＨ４に
水（蒸留、滅菌）適量で２０ｍＬに。

手順例：上記成分を混合し、０．５ＮＨＣｌまたは０．５ＮＮａＯＨを用いてｐＨを４±０．５に調整する。

処方例Ｋ
経口投与用のカプセル剤を以下の通りに処方する。

成分量
本発明の塩４．０５ｍｇ
微結晶性セルロース（ＡｖｉｃｅｌＰＨ１０３）２５９．２ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム０．７５ｍｇ。

手順例：成分を十分に混合してから、ゼラチンカプセル（サイズ番号：１、白色、不透明）に充填する（１カプセル当り２６４ｍｇ）。

処方例Ｌ
経口投与用のカプセル剤を以下の通りに処方する。

成分量
本発明の塩８．２ｍｇ
微結晶性セルロース（ＡｖｉｃｅｌＰＨ１０３）１３９．０５ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム０．７５ｍｇ。

手順例：成分を十分に混合してから、ゼラチンカプセル（サイズ番号：１、白色、不透明）に充填する（１カプセル当り１４８ｍｇ）。

有用性
化学式Ｉの化合物、すなわち１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチル−ピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドは５−ＨＴ_４レセプターアゴニストであるため、化学式Ｉの化合物の本結晶ハロゲン化物塩の形態で、５−ＨＴ_４レセプター活性が介在するか、５−ＨＴ_４レセプター活性が関係する病状、すなわち、５−ＨＴ_４レセプターアゴニストで治療することによって改善される病状を治療するのに有用であると期待されている。前記症状には、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、慢性の便秘、機能性消化不良、胃内容排出遅延、胃食道逆流性疾患（ＧＥＲＤ）、胃不全麻痺、糖尿病性胃不全麻痺および特発性胃不全麻痺、術後イレウス、腸偽閉塞、および薬剤誘発性通過遅延（ｄｒｕｇ−ｉｎｄｕｃｅｄｄｅｌａｙｅｄｔｒａｎｓｉｔ）があるが、これらに限定されない。また、５−ＨＴ_４レセプターアゴニスト化合物には、認知障害、行動障害、気分障害、および自律機能の調節障害などの中枢神経系障害の治療に使用できるものもあることが示唆されてきた。

特に、本発明の塩類は、胃腸（ＧＩ）管の運動を増加させるため、ヒトを含む哺乳動物の運動低下によるＧＩ管の障害を治療するのに有用であると期待されている。このようなＧＩ運動障害を例示すれば、慢性便秘、便秘を主症状とする過敏性腸症候群（Ｃ−ＩＢＳ）、糖尿病性胃不全麻痺および特発性胃不全麻痺、および機能性消化不良などがある。

したがって、一つの態様において、本発明は、哺乳動物の胃腸管の運動を増加させる方法であって、医薬上許容される担体および本発明の結晶塩を含む、治療上有効な量の医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。

ＧＩ管の運動低下障害、または５−ＨＴ_４レセプターによってもたらされるその他の症状を治療するために使用する場合、典型的には、本発明の塩類を一日に一回、または一日に複数回経口で投与するが、他の投与形態を用いることもできる。一用量当りの活性薬剤の量または一日に投与される全量は、典型的には、治療すべき症状、選択された投与経路、実際に投与される化合物およびその相対活量、各患者の年齢、体重、および反応、ならびに患者の症状の重篤度などを見て医師が決定すべきである。

ＧＩ管の運動低下障害、または５−ＨＴ_４レセプターによってもたらされるその他の症状を治療するのに適した用量は、活性薬剤が約０．０００７から約１ｍｇ／ｋｇ／日など、約０．０００７から約２０ｍｇ／ｋｇ／日という範囲にあると思われる。平均７０ｋｇのヒトでは、この量は、一日当りの活性薬剤が約０．０５から約７０ｍｇということになろう。

本発明の一つの態様において、本発明の塩類を用いて慢性の便秘を治療する。慢性の便秘を治療するために使用する場合、典型的には、本発明の塩類を一日に一回、または一日に複数回経口で投与する。慢性の便秘を治療するための用量は、一日当り約０．０５から約７０ｍｇの範囲であると思われる。

本発明の別の態様において、本発明の塩類を用いて過敏性腸症候群を治療する。便秘を主症状とする過敏性腸症候群を治療するために使用する場合、典型的には、本発明の塩類を一日に一回、または一日に複数回経口で投与する。便秘を主症状とする過敏性腸症候群を治療するための用量は、一日当り約０．０５から約７０ｍｇの範囲であると思われる。

本発明の別の態様において、本発明の塩類を用いて糖尿病性胃不全麻痺および特発性胃不全麻痺を治療する。糖尿病性胃不全麻痺および特発性胃不全麻痺を治療するために使用する場合、典型的には、本発明の塩類を一日に一回、または一日に複数回経口で投与する。糖尿病性胃不全麻痺を治療するための用量は、一日当り約０．０５から約７０ｍｇの範囲であると思われる。

さらに本発明の別の態様において、本発明の塩類を用いて機能性消化不良を治療する。機能性消化不良を治療するために使用する場合、典型的には、本発明の化合物類を一日に一回、または一日に複数回経口で投与する。機能性消化不良を治療するための用量は、一日当り約０．０５から約７０ｍｇの範囲であると思われる。

また、本発明は、５−ＨＴ_４レセプター活性に関連する病気または症状を有する哺乳動物を治療する方法であって、治療上有効な量の本発明の塩または本発明の塩を含む医薬組成物を哺乳動物に投与することを含む方法も提供する。

上記したように、本発明の塩類は５−ＨＴ_４レセプターアゴニストである。したがって、本発明はさらに、哺乳動物において５−ＨＴ_４レセプターを刺激する方法を提供する。

当業者に周知されているさまざまなインビトロおよびインビボのアッセイ法を用いて、本発明のハロゲン化物塩の特性および有用性を実証することができる。アッセイ法の代表例を以下の実施例でさらに詳しく説明する。

以下の合成例および生物学的実施例は、本発明を例証するために提示するものであって、いかなる意味においても、本発明の範囲を制限するものと解すべきではない。以下の実施例では、別段の記載がない限り、以下の略語は以下の通りの意味をもつ。以下で定義されていない略語は、通常に認知されている意味を有する：
Ｂｏｃ＝ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
（ＢＯＣ）_２Ｏ＝ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネート
ＤＣＭ＝ジクロロメタン
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
ｍＣＰＢＡ＝ｍ−クロロ安息香酸
ＭｅＣＮ＝アセトニトリル
ＭＴＢＥ＝ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル
ＰｙＢｏｐ＝ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
Ｒ_ｆ＝保持因子
ＲＴ＝室温
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン。

試薬（第２級アミンを含む）および溶媒は、商業的供給業者から購入し（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｆｌｕｋａ，Ｓｉｇｍａなど）、それ以上精製を行うことなく使用した。反応は、別段の記載がない限り窒素雰囲気下で行った。反応混合液の進行を薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、解析用高速液体クロマトグラフィー（ａｎａｌ．ＨＰＬＣ）、および質量分析によって測定したが、その詳細を下記に記載するとともに、反応の具体的な実施例において個別に説明する。反応混合液は、各反応で具体的に説明するようにして行った。すなわち、一般的には、抽出によって、また、温度依存的および溶媒依存的な結晶化法、ならびに沈殿法などの他の精製法によって精製した。さらに、反応混合液は分取用ＨＰＬＣによって常に精製した。一般的なプロトコールを以下に記載する。反応生成物の特性解析を、常に質量分析と^１Ｈ−ＮＭＲ分析によって行った。ＮＭＲ測定では、試料を重水素化溶媒（ＣＤ_３ＯＤ、ＣＤＣｌ_３、またはＤＭＳＯ−ｄ_６）に溶解し、標準的な観察条件の下でＶａｒｉａｎＧｅｍｉｎｉ２０００機器（３００ＭＨｚ）によって^１Ｈ−ＮＭＲのスペクトルを得た。質量分析による化合物の同定は、ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社（ＦｏｓｔｅｒＣｉｔｙ，ＣＡ）のモデルＡＰＩ１５０ＥＸ機器またはＡｇｉｌｅｎｔ社（ＰａｌｏＡｌｔｏ，ＣＡ）のモデル１１００ＬＣ／ＭＳＤ機器を用いて、エレクトロスプレーイオン化法（ＥＳＭＳ）によって行った。

分析用ＨＰＬＣのための一般的プロトコール
粗化合物を５０％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ（含０．１％ＴＦＡ）に溶かして、０．５〜１．０ｍｇ／ｍＬの濃度にした上で、以下の条件を用いて分析した。

カラム：ＺｏｒｂａｘＢｏｎｕｓ−ＲＰ（粒子サイズ３．５μｍ、２．１×５０ｍｍ）
流速：０．５ｍＬ／分
検出装置の波長：２１４ｎｍ、２５４ｎｍ、および２８０ｎｍ。

分取用ＨＰＬＣ精製のための一般的プロトコール
粗化合物を水中５０％の酢酸に溶かして、５０〜１００ｍｇ／ｍＬの濃度にし、濾過した上で、以下の条件を用いて分画した。

カラム：ＹＭＣＰａｃｋ−ＰｒｏＣｌ８（５０ａ×２０ｍｍ；ＩＤ＝５μｍ）
流速：４０ｍＬ／分
移動相：Ａ＝９０％ＭｅＣＮ／１０％Ｈ_２Ｏ／０．１％ＴＦＡ
Ｂ＝９８％Ｈ_２Ｏ／２％ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ
勾配：３０分間で１０％Ａ／９０％Ｂから５０％Ａ／５０％Ｂ（線形）
検出装置の波長：２１４ｎｍ。

調製１：（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−３−アミノ−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
ａ．８−ベンジル−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−オンの調製法
濃塩酸（３０ｍＬ）を、２，５−ジメトキシテトラヒドロフラン（８２．２ｇ、０．６２２ｍｏｌ）の不均一水溶液（１７０ｍＬ）に撹拌しながら加えた。
０℃（アイスバス）に冷却した別のフラスコの中で、濃塩酸（９２ｍＬ）をベンジルアミン（１００ｇ、０．９３３ｍｏｌ）の水溶液（３５０ｍＬ）にゆっくりと加えた。２，５−ジメトキシテトラヒドロフラン溶液を約２０分間撹拌し、水（２５０ｍＬ）で希釈した後、ベンジルアミン溶液を加えて、１，３−アセトンジカルボン酸（１００ｇ、０．６８４ｍｏｌ）の水溶液（４００ｍＬ）を加えた後、リン酸水素ナトリウム（４４ｇ、０．３１ｍｏｌ）の水溶液（２００ｍＬ）を加えた。４０％ＮａＯＨを用いて、ｐＨをｐＨ１からｐＨ約４．５に調整した。得られた濁った淡黄色の溶液を一晩撹拌した。つぎに、この溶液を、５０％塩酸を用いて、ｐＨ７．５からｐＨ３に酸性化してから、８５℃まで加熱して２時間撹拌した。この溶液を室温まで冷却して、４０％ＮａＯＨを用いてｐＨ１２まで塩基性化し、ジクロロメタンで抽出した（３×５００ｍＬ）。結合した有機層を塩水で洗浄し、減圧下で乾燥（ＭｇＳＯ_４）、濾過、および濃縮して、標題の粗中間体を粘性のある茶色の油脂として生成させた。

この粗中間体のメタノール溶液（１０００ｍＬ）にジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネート（７４．６ｇ、０．３４２ｍｏｌ）を０℃で加えた。この溶液を室温まで温めて、一晩撹拌した。減圧下でメタノールを除去し、得られた油脂をジクロロメタン（１０００ｍＬ）に溶かした。中間体を１ＭＨ_３ＰＯ_４（１０００ｍＬ）の中に抽出して、ジクロロメタンで洗浄した（３×２５０ｍＬ）。水層をＮａＯＨ水溶液でｐＨ１２まで塩基性化し、ジクロロメタンで抽出した（３×５００ｍＬ）。結合した有機層を、減圧下で乾燥（ＭｇＳＯ_４）、濾過、および濃縮して、標題の粗中間体を粘性のある薄茶色の油脂として生成させた。^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）７．５〜７．２（ｍ、５Ｈ、Ｃ_６Ｈ_５）、３．７（ｓ、２Ｈ、ＣＨ_２Ｐｈ）、３．４５（ｂｒｏａｄｓ、２Ｈ、ＣＨ−ＮＢｎ）、２．７〜２．６（ｄｄ、２Ｈ、ＣＨ_２ＣＯ）、２．２〜２．１（ｄｄ、２Ｈ、ＣＨ_２ＣＯ）、２．１〜２．０（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ＣＨ_２）、１．６（ｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ＣＨ_２）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］^＋計算値Ｃ_１４Ｈ_１７ＮＯ２１６．１４；測定値２１６．０。

ｂ．３−オキソ−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの調製法
８−ベンジル−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−オン（７５ｇ、０．３４８ｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ溶液（３００ｍＬ）に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネート（８３．６ｇ、０．３８３ｍｏｌ、１．１ｅｑ）を加えた。得られた溶液および洗浄液（１００ｍＬＥｔＯＡｃ）を、２３ｇの水酸化パラジウム（２０重量％Ｐｄ、無水ベース、炭素上、水で約５０％に湿ったもの；例えば、パールマン触媒）が入った１Ｌのパール水素添加容器に窒素気流下で加えた。この反応容器を脱ガスし（真空とＮ_２を５回交代させ）、Ｈ_２ガスで６０ｐｓｉに加圧する。この反応溶液を、シリカ薄層クロマトグラフィーで測定して反応が完了するまで、２日間振とうし、Ｈ_２圧を６０ｐｓｉに保つために必要であればＨ_２を再充填した。そして、黒色の溶液を、登録商標セライト（Ｃｅｌｉｔｅ）のパッドで濾過し、減圧下で濃縮して、標題の中間体を、粘性で黄色ないしオレンジ色の油脂として定量的に得た。これを、それ以上処理することなく、次の工程で使用した。^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）４．５（ｂｒｏａｄ、２Ｈ、ＣＨ−ＮＢｏｃ）、２．７（ｂｒｏａｄ、２Ｈ、ＣＨ_２ＣＯ）、２．４〜２．３（ｄｄ、２Ｈ、ＣＨ_２ＣＨ_２）、２．１（ｂｒｏａｄｍ、２Ｈ、ＣＨ_２ＣＯ）、１．７〜１．６（ｄｄ、２Ｈ、ＣＨ_２ＣＨ_２）、１．５（ｓ、９Ｈ、（ＣＨ_３）_３ＣＯＣＯＮ））。

ｃ．（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−３−アミノ−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの調製法
前工程の生成物（７５．４ｇ、０．３３５ｍｏｌ）のメタノール溶液（１Ｌ）に、ギ酸アンモニウム（４２２．５ｇ、６．７ｍｏｌ）、水（１１５ｍＬ）、および活性炭上６５ｇのパラジウム（無水ベースで１０％、水で約５０％に湿ったもの；デグサ（Ｄｅｇｕｓｓａ）型Ｅ１０１ＮＥ／Ｗ）を、Ｎ_２気流下で機械的に撹拌しながら加えた。２４時間後と４８時間後に、それぞれギ酸アンモニウム（１３２ｇ、２．１ｍｏｌ）をさらに加えた。分析用ＨＰＬＣで測定して、反応の進行が止まったところで、登録商標セライト（＞５００ｇ）を加え、得られた濃厚な懸濁液を濾過した後、回収した固体をメタノール（約５００ｍＬ）で洗浄した。濾液を混合し、メタノールがすべて除去されるまで減圧下で濃縮した。次に、得られた濁った二相溶液を、１Ｍリン酸で、最終容量がｐＨ２．０で約１．５〜２．０Ｌになるように希釈して、ジクロロメタンで洗浄した（３×７００ｍＬ）。水層を４０％ＮａＯＨ水溶液でｐＨ１２に塩基性化して、ジクロロメタンで抽出した（３×７００ｍＬ）。結合した有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、回転蒸発、その後高真空によって濃縮したところ、５２ｇ（７０％）の標題の中間体、すなわち一般的にはＮ−Ｂｏｃ−エンド−３−アミノトロパンが白色から淡黄色の固体として残留した。この生成物のエキソアミンに対するエンドアミンの異性体の割合は、^１Ｈ−ＮＭＲ解析によれば９９よりも大きかった（分析用ＨＰＬＣによれば＞９６％純度）。^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）４．２〜４．０（ｂｒｏａｄｄ、２Ｈ、ＣＨＮＢｏｃ）、３．２５（ｔ、ＩＨ、ＣＨＮＨ_２）、２．１〜２．０５（ｍ、４Ｈ）、１．９（ｍ、２Ｈ）、１．４（ｓ、９Ｈ、（ＣＨ_３）_３ＯＣＯＮ）、１．２〜１．１（ｂｒｏａｄ、２Ｈ）．（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］^＋計算値Ｃ_１２Ｈ_２２Ｎ_２Ｏ_２２２７．１８；測定値２２７．２。分析用ＨＰＬＣ（無勾配法；５分間で２：９８（Ａ：Ｂ）から９０：１０（Ａ：Ｂ））：保持時間＝２．１４分。

調製２：１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸
メタノール（７００ｍＬ）に懸濁したインダゾール−３−カルボン酸（４０ｇ、２４７ｍｍｏｌ）に、混合液をゆっくりと撹拌しながら濃硫酸（１０ｍＬ）を加えた。混合液を撹拌して、８０℃で２４時間還流した。この混合液を冷却し、濾過し、減圧下で濃縮して、淡黄色の固体を生じさせた。この固体を水（７００ｍＬ）に懸濁し、細かい粉末になるまで破砕し、濾過して回収し、水（約４００ｍＬ）で洗浄した。生成物をトルエンに懸濁して、減圧下で乾燥するまで蒸発させて、インダゾール−３−カルボン酸メチルエステルを淡黄色の固体として生じさせた（４５ｇ、＞９５％純度）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］^＋計算値Ｃ_９Ｈ_８Ｎ_２Ｏ_２１７７．０７；測定値１７７．０． ^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、３００ＭＨｚ）： δ （ｐｐｍ）８．０（ＩＨ、ｄ）、７．５（ＩＨ、ｄ）、７．４（ＩＨ、ｔ）、７．２（ＩＨ、ｔ）、３．９（３Ｈ、ｓ）。

アイスバスで冷却したインダゾール−３−カルボン酸メチルエステル溶液（４０．７ｇ、２３１ｍｍｏｌ）の無水テトラヒドロフラン（７００ｍＬ）に、固体のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（２８．３ｇ、２５２ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。この混合液を同じ温度で１時間撹拌してから、２−ヨードドプロパン（ｉｏｄｏｄｏｐｒｏｐａｎｅ）（３４．４ｍＬ、３６７ｍｍｏｌ）を加えた。最終混合液を室温で１２時間撹拌し、１２時間還流した。室温まで冷却した後、混合液を濾過し、回収した固体をテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）で洗浄した。濾液を合わせ、減圧下で乾燥するまで濃縮して粗１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸メチルエステル（４９．７ｇ）を淡黄色の油脂として生じさせた。この粗製物質をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、ヘキサン／酢酸エチル（９／１から３／１）で溶出して１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸メチルエステル（４３ｇ、１９７ｍｍｏｌ、＞９９％純度）を得た。^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、３００ＭＨｚ）：δ（ｐｐｍ）８．１〜８．０（ＩＨ、ｄ）、７．６（ＩＨ、ｄ）、７．４（ＩＨ、ｔ）、７．２（ＩＨ、ｔ）、５．０（１Ｈ、ｑｕｉｎ）、３．９（ｓ、３Ｈ）、１．５（６Ｈ、ｄ）。

テトラヒドロフラン（４００ｍＬ）に溶かしたメチルエステルの溶液に、１ＭＮａＯＨ（４００ｍＬ）を加えた。この混合液を室温で２４時間撹拌した。酢酸エチルで洗浄して（２×４００ｍＬ）反応を終結させ、水層を保存した。アイスバス中で濃塩酸（約４０ｍＬ）をゆっくりと加えて、この水層を酸性化して、淡黄色の油性生成物を分離した。この生成物を酢酸エチル（１０００ｍＬ）で抽出し、有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で蒸発させて、標題の中間体を淡黄色から白色の固体として回収し（３４ｇ、＞９８％純度）、さらに酢酸エチルから結晶化して精製し、標題の中間体を無色の針状結晶として生じさせた。
（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｎａ］^＋計算値Ｃ_１１Ｈ_１２Ｎ_２Ｏ_２２２６．０７；測定値２２６．６。^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、３００ＭＨｚ）：）：δ（ｐｐｍ）８．１〜８．０（１Ｈ、ｄ）、７．６（１Ｈ、ｄ）、７．４（１Ｈ、ｔ）、７．２（１Ｈ、ｔ）、５．０（１Ｈ、ｑｕｉｎ）、１．５（６Ｈ、ｄ）。

実施例１Ａ：１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドジヒドロクロリドの合成法
ａ．（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−３−［１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボニル］アミノ］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの調製法
磁気撹拌子、還流冷却器、付加用漏斗、窒素の入り口、および温度計を備え付けた５Ｌの三首丸底フラスコに１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸（２５０ｇ、１．２２４ｍｏｌ、１．１ｅｑ）と２．５Ｌのトルエンを入れた。得られた懸濁液を撹拌し、７０〜８０℃で加熱した。この懸濁液に、４０分間かけて塩化チオニル（２１８．４ｇ、１．８３６ｍｏｌ、１．６５ｅｑ）を加えた。混合液を１時間９０〜１００℃で加熱し、２５℃まで冷却した。

機械的撹拌子、付加用漏斗、窒素の取り入れ口、および温度計を備え付けた別の１２Ｌの三首丸底フラスコに２．５Ｌのトルエンおよび３ＮのＮａＯＨ（３５６ｇの５０％ＮａＯＨを水で１．４８Ｌに希釈して調製したもの）、ならびに（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−３−アミノ−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２５１．９ｇ、１．１１３モル、１ｅｑ）を入れた。得られた懸濁液を２３℃で１０分間撹拌して、５℃に冷却した。この懸濁液に、内部温度を添加している間約５℃に保ちつつ９０分間かけて酸塩化物のトルエン溶液を加えた。この混合液を３０分間撹拌した。反応液を２５℃に温めて、水層を捨てた（１．５８Ｌ、ｐＨ＞１３）。有機層を１Ｌの２０重量％塩水で洗浄してから、水層を捨てた（１．００５Ｌ、約ｐＨ８）。有機層を集め（５．３Ｌ）、容量を半分（約２．６Ｌ）になるまで濃縮して、精製せずに次の工程で使用した。

ｂ．１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドの調製法
機械的撹拌子、付加用漏斗、窒素の取り入れ口、および温度計を備え付けた１２Ｌの三首丸底フラスコに前記工程の生成物を入れた。この溶液に、トリフルオロ酢酸（０．６５Ｌ）を１０分間かけて加えた。得られた混合物を室温で１時間撹拌した。

この反応混合液に水（３．３Ｌ）を加えた。得られた懸濁液を２３℃で１０分間撹拌してから静置し、３層の混合物を形成させた。上の２層を捨て、最下層（８２０ｍＬ）を集めて、ＭＴＢＥ（６５６０ｍＬ）を９０分かけて加えた。得られた懸濁液を５℃に冷却して１時間撹拌した。この懸濁液を濾過し、濡れた濾塊をＭＴＢＥ（５００ｍＬ）で洗浄し、減圧（８０ｍｍＨｇ）下で６０分間乾燥させて標題の中間体（３８６ｇ、８１％收率、ＨＰＬＣによると９９．２％純度）をオフホワイトの砂状の固体として得た。

ｃ．１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−（２，２−ジメトキシエチル）−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドの調製法
磁気撹拌子、窒素の取り入れ口、および温度計を備え付けた３Ｌの三首丸底フラスコに前記工程の生成物（８４ｇ、０．１９７ｍｏｌ）、ジクロロメタン（８４０ｍＬ）、およびナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（６２．６ｇ，０．２９５ｍｏｌ）を入れた。得られた懸濁液を１０分間撹拌し、１０℃に冷却して、６０重量％の含水ジメトキシアセトアルデヒド（５１．３ｇ、０．２９５ｍｏｌ）を加えた。この溶液を３０分間撹拌して、２５℃に温めて１時間撹拌した。この混合液をセライトで濾過し、ジクロロメタン（１５０ｍＬ）で、次いで５重量％の塩溶液（４００ｇ）で洗浄した。水層および有機層を分離させて、有機層を黒い油脂（約１５０ｍＬ）になるまで濃縮し、精製することなく次の工程で使用した。

ｄ．１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−（２，２−ジヒドロキシエチル）−８−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドの調製法
磁気撹拌子、窒素の取り入れ口、および温度計を備え付けた１Ｌの三首丸底フラスコに前記工程の生成物および水（２５０ｍＬ）を入れ、５０〜５５℃に加熱した。この溶液に、３ＮＨＣｌ（８２ｍＬ、０．９８５ｍｏｌ）を加えた。得られた混合液を７５℃で１時間撹拌した。この反応混合液を２５℃に冷却して、２５重量％ＮａＯＨ（１５９ｇ、０．９９ｍｏｌ）でｐＨ３．５１まで中和した。約２０分後、低層を回収して（１２０ｍＬ）、標題の中間体を生じさせ、精製することなく次の工程で使用した。

ｅ．１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドジヒドロクロリドの合成法
磁気撹拌子、窒素の取り入れ口、および温度計を備え付けた３Ｌの三首丸底フラスコに前ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（８４ｇ，０．３４９ｍｏｌ）およびジクロロメタン（８００ｍＬ）を入れた。得られた混合液を７５℃で撹拌して、１−アセチルピペラジン（５１ｇ、０．３９４ｍｏｌ）を入れた。この付加集合体をジクロロメタン（３０ｍＬ）で洗浄した。混合液を５分間撹拌して、内部温度を２５℃よりも低く保ちつつ、前記工程の生成物（約１２０ｍＬ）１５分間で充填した。この混合液を１５分間撹拌し、セライトで濾過し、ジクロロメタンで洗浄した（２×１００ｍＬ）。この濾液を１ＮＮａＯＨ（５００ｍＬ）で洗浄した。各層を分離させて、低層の有機層を回収して約１５０ｍＬになるまで濃縮した。

無水エタノール（２５０ｍＬ）を加えて、混合液を約２００ｍＬまで濃縮した。この混合液に無水エタノール（８００ｍＬ）を加えて、混合液を４０℃に加熱した。この混合液に３ＮＨＣｌ（３３ｍＬ、０．３９５ｍｏｌ）を３分間で加えた。この混合液を１０分間撹拌したところ、結晶化が開始した。得られた懸濁液を５５℃で２時間撹拌し、２５℃に冷却した。この混合液をＷｈａｔｍａｎの＃２フィルターで濾過し、濡れた濾塊を無水エタノールで洗浄した（２×１００ｍＬ）。生成物を窒素下で３０分間乾燥させ、次いで真空下、４０〜５０℃で２４時間乾燥させて標題の化合物を生じさせた（８２ｇ）。

実施例１Ｂ：１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチル−ピペラジン−１−イル）−エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドジヒドロクロリドの代替的合成法
ａ．（１Ｒ，５Ｓ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）−エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−オンの調製法
濃塩酸（５０ｍＬ）を２，５−ジメトキシテトラヒドロフラン（４９０．２ｍＬ、３．７８ｍｏｌ）の水溶液（１２００ｍＬ）に加えた。得られた黄色の溶液を約７０〜７２℃で２時間撹拌した。

１−（２−アミノエチル）ピペラジン（５４６．４ｍＬ、４．１６ｍｏｌ、１．１ｅｑｕｉｖ．）を、１５℃で水（３７００ｍｌ）に溶かした酢酸ナトリウム（１２２５．５ｇ）の溶液に加えた。濃塩酸（３５０ｍＬ）を、内部温度を２５℃よりも低い状態に維持しながらゆっくりと加えた。この混合液を１５℃に冷却した後、３−オキソペンタン二酸（６０７．８ｇ、４．１６ｍｏｌ）を加えて、この溶液の温度を再び１５℃に冷却した。上で調製した黄色の水溶液を約１０分間かけてゆっくりと加え、得られた黄色の混合液を、二酸化炭素の発生が緩慢になるまで、約２０℃で約３０分間撹拌した。この混合液を４０〜４５℃で２時間撹拌すると、反応混合液の色が暗褐色に変化した。

この混合液を約１５℃に冷却した。含水水酸化ナトリウム（５０％、約４７０ｍＬ）を、温度を２５℃よりも低く維持しつつ、ｐＨ１３になるまで何回かに分けて加えた。塩化ナトリウム（６００ｇ）を加えて、完全に溶解するまで混合液を撹拌した。生成物をジクロロメタン（１×２０００ｍＬ、２×１５００ｍＬ）で抽出した。結合した有機相を乾燥させ、濾過して、溶液を２５００ｍＬまで濃縮した。

濃縮した溶液を１５℃に冷却し、温度を２５℃よりも低く維持しつつ、無水酢酸（５００ｍＬ）をゆっくりと加えた。この溶液を３０分間撹拌して、１５℃で水（１５００ｍＬ）を加えた。この混合液を１０分間撹拌してから、１Ｍ塩酸を用いてｐＨ１まで酸性化した。

ＤＣＭ相と水相を分離させた。ガスクロマトグラフィー分析によって、ＤＣＭ相には生成物が残っていないことが明らかになった。内部温度を２５℃よりも低い状態に維持しながら、水相水酸化ナトリウム（水中５０％、約５００ｍＬ）を少しずつ加えて、水相をｐＨ１４に塩基性化させた。生成物をＤＣＭで抽出し（３×１５００ｍＬ）、回収した有機相（暗褐色）をまとめ、乾燥させ、セライトで濾過し、蒸留して標題の粗製中間体を粘性のある茶色の油脂として生じさせた（６５０ｇ、９４％純度）。^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、３００ＭＨｚ）δｐｐｍ：３．６５（ｔ、２Ｈ）、３．５６（ｍ、２Ｈ）、３．４８（ｔ、２Ｈ）、２．７８〜２．４７（ｍ、１０Ｈ）、２．２３〜２．０２（ｍ、４Ｈ）、２．１０（ｍ、３Ｈ）、１．６１（ｍ、２Ｈ）；^１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、７５ＭＨｚ）δｐｐｍ：２０９．８１、１６８．９０、５９．１０、５７．８３、５３．８３、５３．２２、４８．０１、４７．４０、４６．１９、４１．３０、２７．８０、２１．２８。

ｂ．（１Ｒ，５Ｓ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−オン１，５−ナフタレン−ジスルホン酸塩の調製法
前記工程の粗生成物（３１．０ｇ、０．１１１ｍｏｌ）を室温でイソプロピルアルコール（１００ｍＬ）に溶かした。この溶液を約６０℃に加熱して、イソプロピルアルコール（７０ｍＬ）に溶かした１，５−ナフタレン−ジスルホン酸四水和物を、撹拌しながら１時間かけてゆっくりと加えた。酸の添加を完了した後、添加用漏斗をイソプロピルアルコール（５０ｍＬ）で洗浄した。この混合液を約６０℃で１時間撹拌してから、室温まで冷却し、また１５時間撹拌した。混合液を濾過し、得られた濾塊をイソプロピルアルコール（２×５０ｍＬ）で洗浄し、濾紙の上に３０分間置いた。そして、この生成物をフラスコに移して、高真空下で２４時間乾燥させて、標題の塩をベージュ色の結晶性無含水物質（５１．７ｇ）として生じさせた。^１ＨＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ、３００ＭＨｚ）δ ｐｐｍ：８．８４（ｄ、２Ｈ）、８．２０（ｄ、２Ｈ）、７．７３（ｔ、２Ｈ）、４．２３（ｂｒｓ、２Ｈ）、３．７４（ｍ、４Ｈ）、３．６２（ｓ、４Ｈ）、３．３２（ｍ、４Ｈ）、３．３２〜２．９８（ｍ、２Ｈ）、２．５８（ｄ、２Ｈ）、２．２７（ｍ、２Ｈ）、２．０７（ｓ、３Ｈ）、１．９７（ｄ、２Ｈ）。

ｃ．（１Ｒ，５Ｓ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−オン（遊離塩基）の調製法
５℃に冷却した（１Ｒ，５Ｓ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−オン１，５−ナフタレン−ジスルホン酸塩（５１．６ｇ）の水溶液（５００ｍＬ）を撹拌して、含水水酸化ナトリウム（５０％）を、温度を１５℃よりも低く維持しつつ、ｐＨ１４になるまで塩基化した。ＤＣＭ（３００ｍＬ）を加え、形成されたエマルジョンをセライトで濾過した。層を分離して、水層をＤＣＭで洗浄した（３×１００ｍＬ）。まとめた有機相を２４時間乾燥させて、標題の中間体（２３．３ｇ、塩に基づくと９３％の收率）を生じさせた。

ｄ．１−｛４−［２−（（１Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３−アミノ−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−８−イル）エチル］ピペラジン−１−イル｝エタノンの調製法
前記工程に記載した通りに調製された（１Ｒ，５Ｓ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−オン（５８．２ｇ、０．２０９ｍｏｌ）を室温でメタノール（３００ｍＬ）に溶かした。この溶液に、ギ酸アンモニウム（６３．１ｇ、４．１７ｍｏｌ、２０ｅｑｕｉｖ．）を加え、その後、メタノール（１００ｍＬ）および水（８５ｍＬ）を加えた。パラジウム（活性炭上で湿潤１０％パラジウム、５８ｇ）をこの混合液に加え、その後メタノール（１５０ｍＬ）を加えた。ガスクロマトグラフィー分析によってケトンが完全に変換したことが示すまで、この反応混合液を室温で２０時間撹拌した。この反応混合液をセライトで濾過し、得られた濾塊をメタノール（約７００ｍＬ）で洗浄して溶媒を除去した。残留物を水（３００ｍＬ）に溶かし、この溶液を５℃まで冷却し、５０％水酸化ナトリウムを用いてｐＨ１４まで塩基性化した。この溶液を塩化ナトリウムで飽和させ、生成物をＤＣＭ（４００ｍＬ）で抽出した。水相をＤＣＭ（３×１５０ｍＬ）で洗浄した。まとめた有機物画分を高真空下で２４時間乾燥させて、粘性のあるうす茶色の油脂として標題の中間体を生じさせた（４３ｇ、９１％純度）。^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、３００ＭＨｚ）δｐｐｍ：３．６１（ｔ、２Ｈ）、３．４６（ｔ、２Ｈ）、３．２３（ｔ、１Ｈ）、３．１８（ｍ、２Ｈ）、２．４７（ｍ、８Ｈ）、２．１４〜１．９３（ｍ、６Ｈ）、２．０８（ｓ、３Ｈ）、１．４１（ｄ、２Ｈ）、１．４０（ｂｒｓ、２Ｈ）；^１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、７５ＭＨｚ）δｐｐｍ：１６８．７９、５８．８７、５７．３６、５３．６９、５３．３５、５３．１２、４９．４１、４６．１３、４２．６５、４１．２２、３８．４７、２６．３９、２１．２２。

ｅ．１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチル−ピペラジン−１−イル）−エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミド（遊離塩基）の調製法
１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸（２１．１６ｇ、０．１０４ｍｏｌ）を室温でアセトニトリル（１５０ｍＬ）に懸濁した。この混合液を５℃に冷却して、トリエチレンアミン（１７．４ｍＬ、０．１２４ｍｏｌ、１．２ｅｑｕｉｖ．）を加えて、清澄な黄色い溶液を生じさせた。この混合液を１０分間撹拌し、温度を１０℃よりも低く維持しつつ、１−｛４−［２−（（１Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３−アミノ−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル）エチル］ピペラジン−１−イル｝エタノンのアセトニトリル（１５０ｍＬ）中の溶液を何回かに分けて加えた。１０分間撹拌した後、アセトニトリル（１５０ｍＬ）に溶かしたＰｙＢＯＰ（５４．９７ｇ、０．１０６ｍｏｌ、１．０２ｅｑｕｉｖ．）を、内部温度を１５℃よりも低く維持しつつ、何回かに分けて加えた。清澄な薄茶色の溶液を５℃で３０分間撹拌し、ゆっくりと温度を上げながら、室温で約２時間撹拌したところ、その時点でガスクロマトグラフィー分析によって完全な変換が示された。反応混合液を酢酸イソプロピル（３５０ｍＬ）で希釈し、生成物を１Ｍ塩酸（４００ｍＬ）で抽出した。２層を分離した後、有機層を１Ｍ塩酸で洗浄した（３×１００ｍＬ）。生成物が完全に抽出されたことを確認するために分析を行った（残留は２％未満であった）。水相をまとめたものをアイスバスで５℃に冷却し、５０％含水水酸化ナトリウムを用いてｐＨ１３まで塩基性化した。塩化ナトリウムで飽和させた後、生成物をＤＣＭ（５００ｍＬ）で抽出した。水相をＤＣＭ（２×１００ｍＬ）で洗浄した。まとめた有機相を高真空下で２４時間乾燥させて、標題の化合物を生じさせた（４１．５ｇ、９２％純度）。

ｆ．１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドジヒドロクロリドの合成法
１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチル−ピペラジン−１−イル）−エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドの遊離塩基を３５℃でエタノール（２４０ｍＬ）に溶かした。この混合液を３５〜４０℃（内部）に温めて、内部の温度を３５℃から４５℃に維持できる速度で濃塩酸（１４．３ｍＬ、２ｅｑｕｉｖ．）を一滴ずつ加えた。濃塩酸の添加が終ったところで、実施例１Ａに記載した通りに調製された以前の小規模合成物に由来する種結晶を添加したところ沈殿が生じた。この混合液を３５〜４０℃で１時間撹拌し、ゆっくりと冷却してから、室温でさらに１時間撹拌して、Ｎ_２加圧濾過によって塩を単離した。得られた濾塊をエタノールで洗浄し（３×２０ｍＬ）、高真空下で２４時間乾燥させて、標題の化合物を白色の固体として生じさせた（３１．０ｇ、７０％收率）。ＨＰＬＣ分析では９９．２％の純度であり、エキソ異性体は０．１％未満であった。^１ＨＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ、３００ＭＨｚ）δｐｐｍ：７．８６（ｄ、１Ｈ）、７．４６（ｄ、１Ｈ）、７．３０（ｔ、１Ｈ）、７．１５（ｔ、１Ｈ）、４．８０（ｓｅｐ、１Ｈ）、４．１３（ｍ、３Ｈ）、３．８６（ｍ、４Ｈ）、３．７０（ｍ、２Ｈ）、３．５７〜３．４０（ｍ、６Ｈ）、２．５５〜２．４９（ｍ、２Ｈ）、２．４２〜２．２８（ｍ、６Ｈ）、２．１２（ｓ、３Ｈ）、１．４２（ｄ、６Ｈ）。

実施例２：１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドジヒドロブロミドの合成法
磁気撹拌子、窒素の取り入れ口、および温度計を備え付けた５００ｍＬの三首丸底フラスコに水（１２０ｍＬ）と、実施例１Ａのとおりに調製した１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドジヒドロクロリド（１２ｇ、２２．２ｍｍｏｌ）を入れた。得られた混合液を撹拌して淡黄色の清澄な溶液を生じさせた。この溶液に、２５重量％のＮａＯＨ（７．８３ｇ、２４．４ｍｍｏｌ）を２分間で加えて、白色のミルク状懸濁液を生じさせた。ジクロロメタン（１２０ｍＬ）を加え、この混合液を３０分間撹拌して清澄な２層溶液を生じさせた。これらの層を分離して、水層（１１３ｍＬ）と有機層（１２５ｍＬ）とし、１０％含水ＮａＢｒ（１２０ｍＬ）で洗浄した。これらの層を分離して、約４分の１の量に濃縮された有機層（１２０ｍＬ）を得た。無水エタノール（２５０ｍＬ）を加え、混合液を蒸留して全部で約２００ｍＬの容量にした。この溶液を５８℃で撹拌して、４８重量％の含水ＨＢｒ（８．２ｇ、４９ｍｍｏｌ）を２分間で加えた。半分以上のＨＢｒを加えたところで沈殿が観察された。この混合液を５５℃から６２℃で１時間撹拌し、その後室温まで冷却して濾過した。濾液を無水エタノール（４０ｍＬ）で洗浄し、窒素下で２０分間乾燥させ、真空下４５℃で４８時間乾燥させて、白色の固体として標題の化合物（１３．４２ｇ）を得た。

実施例３〜８：本発明の塩類の特性
実施例１のごとく調製した１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドの結晶ジヒドロクロリド塩の試料、および実施例２のごとく調製した１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドの結晶ジヒドロブロミド塩の試料を粉末ｘ線回折法（ＰＸＲＤ）、示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）、熱重量分析法（ＴＧＡ）、赤外分光法（ＩＲ）、および元素分析によって解析した。

実施例３：粉末ｘ線回折法
テルモＡＲＬＸ線回折計モデルＸ‘ＴＲＡ（ＴｈｅｒｍｏＡＲＬＳＡ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）により、Ｓｉ（Ｌｉ）固体検出器による１．５４２Å（４５ｋＶ、４０ｍＡ）でのＣｕＫα照射を用いて粉末ｘ線回折のパターンを得た。この解析は、典型的には、２θ角度において２から３０°の範囲にわたって１点あたり０．０３°のステップサイズを用い、２°／分のスキャン速度で行われた。試料は、受け取った時のままであっても、微粉末に破砕したものであっても、解析のために機器に上乗せする試料カップに合うよう設計された小容量の挿入物の中にそっと袋詰めした。シリコン金属標準（ｓｉｌｉｃｏｎｍｅｔａｌｓｔａｎｄａｒｄ）と比較することにより、±０．０２°２θ角度の範囲内での機器較正を毎週確認した。結晶ジヒドロクロリドの試料、結晶ジヒドロブロミドの試料、および本発明のジヒドロクロリド塩の水和物の試料についての代表的なＰＸＲＤパターンをそれぞれ図１、３、および７に示す。

実施例４：熱分析法
ＴＡ機器モデルＱ−１００モジュールを用いて示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を行った。Ｑシリーズ（商標）のソフトウエアにはＴＡ機器ＴｈｅｒｍａｌＡｄｖａｎｔａｇｅを用いてデータを収集し解析した。約１〜２ｍｇの試料を正確に計量してアルミニウム製の蓋付き鍋に入れた。この試料を、室温から２２５℃以上まで５℃／分の直線的な加熱勾配を用いて評価した。ＤＳＣのセルは、使用中、乾燥窒素でパージした。本発明の結晶ジヒドロクロリド塩および結晶ジヒドロブロミド塩の試料の代表的なＤＳＣ波形を、それぞれ図２および４に示す。

熱重量分析（ＴＧＡ）は、ＴＡ機器モデルＱ−５００モジュールを用いて行った。Ｑシリーズ（商標）のソフトウエアにはＴＡ機器ＴｈｅｒｍａｌＡｄｖａｎｔａｇｅを用いてデータを収集し解析した。約１〜２ｍｇの試料を計量して、プラチナ製クレードルに載せたアルミニウム製の鍋に入れて、２℃／分または５℃／分の直線的な加熱速度で室温から２７５℃までを走査した。天秤室と炉室は、使用中、乾燥窒素でパージした。本発明の結晶ジヒドロクロリド塩および結晶ジヒドロブロミド塩の試料の代表的なＴＧＡ波形も、それぞれ図２および４に示す。

図２のＤＳＣ波形は、本発明のジヒドロクロリド塩が、約２３０℃から約２７５℃の範囲で吸熱性熱流が最大となり、非常に熱安定的であり、約２００℃未満では顕著な熱イベントは起こらないことを実証している。ＤＳＣとＴＧＡの波形を比較すると、本発明のジヒドロクロリド塩は、約１８０〜２００℃を超えた温度で融解と分解を同時に受けることを示している。

実施例５：動的水分吸着アセスメント法
動的水分吸着（ＤＭＳ）アセスメントを、大気圧下で行うＶＴＩ微量天秤であるＳＧＡ−１００装置（ＶＴＩＣｏｒｐ．，Ｈｉａｌｅａｈ，ＦＬ３３０１６）を用いて２５℃で行った。約５〜１０ｍｇという試料サイズを用い、湿度は、分析開始時に大気の値に設定した。典型的なＤＭＳ分析は、３種類の走査から成り立っている。すなわち、５％ＲＨ／ステップの走査速度で、大気から２％相対湿度（ＲＨ）、２％ＲＨから９０％ＲＨ、９０％ＲＨから５％ＲＨ。２分おきに質量を測定し、試料の質量が５連続点で０．０１％以内に安定しているとき、ＲＨを次の値（±５％ＲＨ）に変更した。本発明の結晶ジヒドロクロリド塩および結晶ジヒドロブロミド塩の試料の代表的なＤＭＳ波形を、それぞれ図５および６に示す。

実施例６：赤外分光法
Ｎｉｃｏｌｅｔ減衰全反射（ＡＴＲ）試料保持器を備えたＡｖａｔａｒ３６０ＦＴ−ＩＲ分光計を用いて、４０００から６７５ｃｍ^−１の周波数帯域にわたる赤外線（ＩＲ）吸収スペクトルを測定した。本発明の結晶ジヒドロクロリド塩試料の代表的なＩＲ吸収スペクトルは、７５３±ｌ、９８６±１、１０８６±ｌ、１１９７±１、１２６７±１、１２８１±１、１４３７±１、１４８８±１、１５２２±１、１６３８±１、１６６４±１、および２４１６±１ｃｍ^−１のところに顕著な吸収バンドがあった。

実施例７：固体安定性アセスメント法
本発明の結晶ジヒドロクロリド塩の試料を、それぞれ約１００ｍｇずつ、テフロン（登録商標）を内張した蓋をもつ複数の４ｍＬガラス製バイアルの中に入れ、開放した容器および閉鎖した容器の中、２５℃で６０％相対湿度（ＲＨ）および４０℃で７５％ＲＨにて保存した。特定の間隔で、見本となるバイアルを取り出して、カール・フィッシャー法により水分含量を分析し、また以下のＨＰＬＣ法によって分析を行った：
カラム：ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＢｏｎｕｓＲＰ、４．６×２５０ｍｍ、５μｍ（ＡｇｉｌｅｎｔＰａｒｔＮｏ．８８０６６８−９０１）；
移動相Ａ：８８％水、２％アセトニトリル、１０％の１００ｍＭリン酸カリウム；
移動相Ｂ：２０％水、７０％アセトニトリル；１０％の１００ｍＭリン酸カリウム；
流量：１．５ｍＬ／分；
注入容量：１０ μＬ
検出器：２１４ｎｍ；
勾配−時間（分）（％移動相Ｂ）：０．０（２）；１．０（２）；９．０（２２）；１９．０（２８）；３３．０（６３）；３６．３（１００）；３７．０（２）；および４２．０（２）。

ＨＰＬＣに注入するため、試料を、５％アセトニトリル、８５％水、１０％の１００ｍＭリン酸カリウム中で０．２５から０．７５ｍｇ／ｍＬ溶液として調製した。化学式Ｉのフリーベース化合物と比較した試料の初期効力（ｉｎｉｔｉａｌｐｏｔｅｎｃｙ）は、ＨＰＬＣ面積百分率で測定すると８２．４％であった。６ヶ月間保存した後、全ての条件で保存した試料について、効力に検出可能な変化はなかった。カール・フィッシャー滴定法により、ＢｒｉｎｋｍａｎＭｅｔｒｏｈｍ（Ｗｅｓｔｂｕｒｙ，ＮＹ）ＫａｒｌＦｉｓｃｈｅｒＭｏｄｅｌ８３１クーロメーターを用いて測定したところによると、初期含水量は１．２％であった。６ヶ月後、開放容器の中、２５℃／６０％ＲＨおよび４０℃／７５％ＲＨで保存されていた試料の含水量はそれぞれ２．９％および５．３％で、それぞれ１．７％および４．１％の増加であった。

実施例８：対イオンモル比の測定
１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミド（化学式Ｉの化合物）に対するハロゲン化物酸（ＨＸ）の対イオンモル比を以下の式に従って計算した：
対イオン比＝（Ｗ_ＨＸ／ＭＷ_ＨＸ）／（Ｗ_Ｉ／ＭＷ_Ｉ）
式中、Ｗ_ＨＸは、試料中のＨＸの重量割合であり、ＭＷ_ＨＸは、ＨＸの分子量であり、ＭＷ_Ｉは、化学式Ｉの化合物の分子量（４６６．６ａｍｕ）であり、また、Ｗ_Ｉは、以下の式に従って計算された、試料中における化学式Ｉの化合物の重量割合である：
Ｗ_Ｉ＝１００−Ｗ_ＨＸ−Ｗ_Ｈ２Ｏ−Ｗ_ＲＳ
式中、Ｗ_Ｈ２Ｏは、含水量の重量パーセントであり、Ｗ_ＲＳは、残留溶媒の重量パーセントであって、化学式Ｉの化合物が不純物を含まないことを仮定している。

本発明に係る結晶塩の１つの試料について、化合物Ｉに対する塩酸のモル比、および本発明に係る結晶塩の２つの試料について、化合物Ｉに対する臭化水素酸のモル比を下記の表Ｉに示す。ＨＣｌまたはＨＢｒの重量パーセント（Ｗ_ＨＸ）は滴定によって測定し、含水量Ｗ_Ｈ２Ｏは、電量分析カール・フィッシャー滴定法によって測定し、また、残留溶媒含有量Ｗ_ＲＳは、ガスクロマトグラフィーによって測定した。

実施例９：１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドジヒドロクロリドの結晶性水和物
本発明のジヒドロクロリド塩の試料約５０ｍｇを、２０ｍＬのガラス製バイアルに入れ、４０℃かつ７５％相対湿度で保存した。特定の間隔で、試料の等量液を分注し、ＰＸＲＤによって、また、ＤＳＣおよびＴＧＡによって分析した。８週間保存した試料の分析結果を図７および８にそれぞれ示す。ＤＳＣおよびＴＧＡの波形における低温（すなわち、１５０℃未満）での特徴は、水和物に特徴的なものである。４０℃かつ７５％ＲＨで保存する場合には、水和物型に安定性が見られた。４０℃／７５％ＲＨで８週間保存した試料のＰＸＲＤのスペクトラムと、４０℃／７５％ＲＨで１２週間保存した試料のＰＸＲＤのスペクトラムとを比較しても、ＰＸＲＤのピーク位置に顕著な変化は見られなかった。

比較例１：１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドのフマル酸塩の合成法
１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミド（０．１ｇ、０．２１ｍｍｏｌ）の５０％アセトニトリル／水（１ｍＬ）溶液に、１Ｍフマル酸のエタノール溶液（０．４４ｍＬ、０．４２ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を一晩凍結乾燥してから、エチル酢酸（１ｍＬ）と混合した。この混合液に、熱したエタノールを温めながら加え、均一な溶液を得た（０．４ｍＬ）。そして、得られた清澄な溶液を室温で結晶させた。得られた固体を濾過し、エタノールで洗浄し、真空下で乾燥させて、標題の化合物を結晶性固体として得た（０．１３ｇ）。

比較例２：１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドのリン酸塩の合成法
１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミド（０．２ｇ、０．４３ｍｍｏｌ）のメタノール（３ｍＬ）溶液に、１Ｍリン酸のエタノール溶液（０．４３ｍＬ、０．４３ｍｍｏｌ）を加えた。そして、得られた不均一な溶液を熱して可溶化し、濾過し、一晩冷却した。得られた固体を濾過し、メタノールで洗浄し、真空下で乾燥させて、標題の化合物を結晶性固体として得た（０．０８ｇ）。

比較例３：１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドのｐ−トルエンスルホン酸塩の合成法
１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミド（３８．７ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）のイソプロパノール（２ｍＬ）溶液を、７５℃の温水槽の中で加熱し、固体のｐ−トルエンスルホン酸一水和物（３２．３ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を、固体が溶解するまで熱してから、室温まで冷却した。一晩かけて標題の化合物の結晶を形成させた。

比較例４：１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドの酸性塩の合成法
比較例１〜３の処理手順と同様の手順を用いて、１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドの下記の酸性塩を、以下の括弧内に示す酸の当量数を用いて固体に調製した：酢酸（２）；安息香酸（２）；硝酸（２）；プロピオン酸（１）；酒石酸（２）；リン酸（０．５）。

比較例５：比較例１〜４の化合物の性質
比較例１〜４の化学式Ｉの化合物の結晶性酸性塩を、ＰＸＲＤ、ＤＳＣ、およびＴＧＡにより分析した。ＤＳＣによって吸熱性熱流が見られた温度と、ＴＧＡで重量減少が見られた温度を、ＰＸＲＤによる結晶性の確認結果とともに表ＩＩにまとめたが、ここでは、酸性塩を調製するために用いられた酸のモル当量数が化学量論的関係を示している。

アッセイ法１：５−ＨＴ_４（ｃ）ヒトレセプターについての放射性リガンド結合測定法
ａ．膜調製５−ＨＴ_４（ｃ）
ヒト５−ＨＴ_４（ｃ）レセプターｃＤＮＡによって安定して形質転換されたＨＥＫ−２９３（ヒト胚腎臓）細胞（［^３Ｈ］−ＧＲ１１３８０８膜放射性リガンド結合測定法を用いて測定した場合Ｂｍａｘ＝〜６．０ｐｍｏｌ／ｍｇタンパク質）を、Ｔ−２２５フラスコの中、４，５００ｍｇ／ＬのＤ−グルコースおよび塩酸ピリドキシン（ＧＩＢＣＯ−ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＣｏｒｐ．，ＣａｒｌｓｂａｄＣＡ：Ｃａｔ＃１１９６５）を含み、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（ＧＩＢＣＯ−ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＣｏｒｐ．：Ｃａｔ＃１０４３７）、２ｍＭのＬ−グルタミン、および（１００ユニット）ペニシリン−（１００μｇ）ストレプトマイシン／ｍｌ（ＧＩＢＣＯ−ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＣｏｒｐ．：Ｃａｔ＃１５１４０）を添加したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）の中で、５％ＣＯ_２下、加湿されたインキュベーター内にて３７℃で増殖させた。８００μｇ／ｍＬのジェネティシン（ＧＩＢＣＯ−ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＣｏｒｐ．：Ｃａｔ＃１０１３１）を培地に加えることによる継続的な淘汰圧の下で細胞を増殖させた。

細胞は、ほぼ６０〜８０％の集密度（＜３５継代培養回数）になるまで増殖させた。回収する２０〜２２時間前に、細胞を２回洗浄し、無血清培地で培養した。この膜調製のすべての工程を氷上で行った。ゆっくりと撹拌して、この細胞単層を浮き上がらせ、２５ｍＬピペットで分散させた。１０００ｒｐｍで遠心分離して（５分）細胞を回収した。

膜調製のために、細胞沈殿物を、氷冷した５０ｍＭの４−（２−ヒドロキシエチル）−ｌ−ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、ｐＨ７．４（膜調製用バッファー）（４０ｍＬ／３０〜４０個のＴ２２５フラスコからの全細胞回収物）に再懸濁し、ポリトロン細胞破砕装置（設定１９，２×１０ｓ）を用いて氷上でホモジナイズした。得られたホモジネートを、４℃にて１２００ｇで５分間遠心分離した。この沈殿物を捨て、上清を４０，０００ｇ（２０分間）で遠心分離した。沈殿物を膜調製用バッファーに再懸濁して一度洗浄し、４０，０００ｇ（２０分間）で遠心分離した。最終沈殿物を５０ｍＭＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４（測定用バッファー）（Ｔ２２５フラスコ１個に相当する量／１ｍＬ）に再懸濁した。膜懸濁液のタンパク質濃度をブラッドフォード法（Ｂｒａｄｆｏｒｄ，１９７６）により決定した。膜は、等量液にして−８０℃で凍結保存した。

ｂ．放射性リガンド結合測定法
放射性リガンド結合測定法は、１．１ｍＬ９６−深穴ポリプロピレン製アッセイプレート（Ａｘｙｇｅｎ）の中で、全測定容量を、０．０２５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む５０ｍＭＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４の中に２μｇの膜タンパク質を含む４００μＬにして行った。放射性リガンドのＫ_ｄ値を決定するための飽和結合実験を、０．００１ｎＭから５．０ｎＭまでの８〜１２の異なった濃度の［^３Ｈ］−ＧＲ１１３８０８（ＡｍｅｒｓｈａｍＩｎｃ．，Ｂｕｃｋｓ，ＵＫ：Ｃａｔ＃ＴＲＫ９４４；比放射能、約８２Ｃｉ／ｍｍｏｌ）を用いて行った。化合物のｐＫ_ｉ値を決定するための置換測定法を、０．１５ｎＭの［^３Ｈ］−ＧＲ１１３８０８と、１０ｐＭから１００μＭまでの１１の異なった濃度の化合物を用いて行った。

試験化合物は、ＤＭＳＯ中１０ｍＭ保存溶液として受け取り、０．１％ＢＳＡを含む５０ｍＭＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４で２５℃にて４００μＭに希釈し、次に、同じバッファーで連続希釈液（１：５）を作成した。１μＭの非標識ＧＲ１１３８０８の存在下で非特異的結合は測定されなかった。測定物は、室温で６０分間インキュベートし、その後、予め０．３％ポリエチレンイミンに浸しておいた９６穴ＧＦ／Ｂグラスファイバー製フィルタープレート（ＰａｃｋａｒｄＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅＣｏ．，Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ）で迅速に濾過することによって結合反応を停止させた。フィルタープレートを濾過用バッファー（氷冷５ＯｍＭＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）で３回洗浄して、非結合の放射能を除去した。プレートを乾燥させ、３５μＬのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ−２０液体シンチレーション液（ＰａｃｋａｒｄＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅＣｏ．，Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ）を各ウエルに加えて、ＰａｃｋａｒｄＴｏｐｃｏｕｎｔ液体シンチレーションカウンター（ＰａｃｋａｒｄＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅＣｏ．，Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ）でプレートを測定した。

結合データを、一部位競合に対する３−パラメータモデルを用いたＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍソフトウエアパッケージ（ＧｒａｐｈＰａｄＳｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ）による非線形回帰分析によって解析した。ＢＯＴＴＯＭ（最小の曲線）を、１μＭの非標識ＧＲ１１３８０８の存在下で測定した非特異的結合の値に固定した。試験化合物に対するＫ_ｉ値を、Ｐｒｉｓｍで、最適なＩＣ_５０値から計算し、放射性リガンドのＫ_ｄ値を、以下のチェン−プルソフ（Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ）式（ＣｈｅｎｇａｎｄＰｒｕｓｏｆｆ，ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１９７３，２２，３０９９−１０８）を用いて計算した：Ｋ_ｉ＝ＩＣ_５０／（１＋［Ｌ］／Ｋ_ｄ）、ただし、［Ｌ］＝［^３Ｈ］−ＧＲ１１３８０８の濃度。結果を、Ｋ_ｉ値の常用対数に負号を付けたもの、すなわち、ｐＫ_ｉと表す。

本測定法でより高いｐＫ_ｉ値をもつ試験化合物が、５−ＨＴ_４レセプターに対してより高い結合アフィニティーを有する。化学式Ｉの化合物は、本測定法において、約７よりも高いｐＫ_ｉ値を持っていた。

アッセイ法２：５−ＨＴ_３Ａヒトレセプターについての放射性リガンド結合測定法：レセプターサブタイプ選択性の測定
ａ．膜調製５−ＨＴ_３Ａ
ヒト５−ＨＴ_３ＡレセプターｃＤＮＡによって安定して形質転換されたＨＥＫ−２９３（ヒト胚腎臓）細胞をＤｒ．ＭｉｃｈａｅｌＢｒｕｅｓｓ（ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＢｏｎｎ，ＧＤＲ）から入手した（［^３Ｈ］−ＧＲ６５６３０膜放射性リガンド結合測定法を用いて測定した場合Ｂｍａｘ＝〜９．０ｐｍｏｌ／ｍｇタンパク質）。細胞を、Ｔ−２２５フラスコまたはセルファクトリー（ｃｅｌｌｆａｃｔｏｒｉｅｓ）中、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（Ｈｙｃｌｏｎｅ，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ：Ｃａｔ＃ＳＨ３００７０．０３）、および（５０ユニット）ペニシリン−（５０μｇ）ストレプトマイシン／ｍｌ（ＧＩＢＣＯ−ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＣｏｒｐ．：Ｃａｔ＃１５１４０）を添加した５０％ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）（ＧＩＢＣＯ−ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＣｏｒｐ．，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ：Ｃａｔ＃１１９６５）および５０％Ｈａｍ’ｓＦ１２（ＧＩＢＣＯ−ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＣｏｒｐ．：Ｃａｔ＃１１７６５）の中で、５％ＣＯ_２下、加湿されたインキュベーター内にて３７℃で増殖させた。

細胞を、ほぼ７０〜８０％の集密度（＜３５継代培養回数）になるまで増殖させた。この膜調製のすべての工程を氷上で行った。細胞を回収するために、培地を吸引し、細胞をＣａ^２＋、Ｍｇ^２＋を含まないダルベッコのリン酸緩衝食塩水（ｄＰＢＳ）で濯いだ。ゆっくりと機械的に撹拌して細胞単層を浮き上がらせた。１０００ｒｐｍ（５分）で遠心分離して細胞を回収した。膜調製の次の工程は、５−ＨＴ_４（ｃ）レセプターを発現する膜について上記したプロトコールに従った。

ｂ．放射性リガンド結合測定法
放射性リガンド結合測定法は、９６−穴ポリプロピレン製アッセイプレートの中で、全測定容量を、０．０２５％ＢＳＡ測定用バッファーを含む５０ｍＭＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４の中に１．５〜２μｇの膜タンパク質を含む２００μＬにして行った。放射性リガンドのＫ_ｄ値を決定するための飽和結合実験を、０．００５ｎＭから２０ｎＭまでの１２の異なった濃度の［^３Ｈ］−ＧＲ６５６３０（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓＩｎｃ．，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ：Ｃａｔ＃ＮＥＴ１０１１，比放射能、約８５Ｃｉ／ｍｍｏｌ）を用いて行った。化合物のｐＫ_ｉ値を決定するための置換測定法を、０．５０ｎＭの［^３Ｈ］−ＧＲ６５６３０と、１０ｐＭから１００μＭまでの１１の異なった濃度の化合物を用いて行った。化合物は、ＤＭＳＯ中１０ｍＭの保存溶液として受け取り（３．１節参照）、０．１％ＢＳＡを含む５０ｍＭＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４で２５℃にて４００μＭに希釈し、次に、同じバッファーで連続希釈液（１：５）を作成した。１０μＭの非標識ＭＤＬ７２２２２の存在下で非特異的結合は測定されなかった。測定物は、室温で６０分間インキュベートし、その後、予め０．３％ポリエチレンイミンに浸しておいた９６穴ＧＦ／Ｂグラスファイバー製フィルタープレート（ＰａｃｋａｒｄＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅＣｏ．，Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ）で迅速に濾過することによって結合反応を停止させた。フィルタープレートを濾過用バッファー（氷冷５ＯｍＭＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）で３回洗浄して、非結合の放射能を除去した。プレートを乾燥させ、３５μＬのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ−２０液体シンチレーション液（ＰａｃｋａｒｄＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅＣｏ．，Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ）を各ウエルに加えて、ＰａｃｋａｒｄＴｏｐｃｏｕｎｔ液体シンチレーションカウンター（ＰａｃｋａｒｄＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅＣｏ．，Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ）でプレートを測定した。

結合データを、Ｋ_ｉ値を決定するために上記した非線形回帰分析によって解析した。ＢＯＴＴＯＭ（最小の曲線）を、１０μＭの非標識ＭＤＬ７２２２２の存在下で測定した非特異的結合の値に固定した。チェン−プルソフ式における量［Ｌ］を、［^３Ｈ］−ＧＲ６５６３０の濃度と定義した。

５−ＨＴ_３レセプターサブタイプに対する５−ＨＴ_４レセプターサブタイプの選択性を、Ｋ_ｉ（５−ＨＴ_３）／Ｋ_ｉ（５−ＨＴ_４（ｃ））という比率として計算した。化学式Ｉの化合物は、本測定法において、約５００よりも高い値５−ＨＴ_４／５−ＨＴ_３レセプターサブタイプ選択性を持っていた。

アッセイ法３：ヒト５−ＨＴ_４（ｃ）レセプターを発現するＨＥＫ−２９３細胞を用いた全細胞ｃＡＭＰ蓄積フラッシュプレート測定法
この測定法では、５−ＨＴ_４レセプターを発現するＨＥＫ−２９３細胞が、さまざまな濃度の試験化合物と接触したときに産生されるサイクリックＡＭＰの量を測定することにより、試験化合物の機能的能力を決定した。

ａ．細胞培養
ヒト５−ＨＴ_４（ｃ）レセプターｃＤＮＡによって安定して形質転換されたＨＥＫ−２９３（ヒト胚腎臓）細胞を、次の２種類の密度でレセプターを発現するように調製した：（１）［^３Ｈ］−ＧＲ１１３８０８膜放射性リガンド結合測定法を用いて測定すると密度約０．５〜０．６ｐｍｏｌ／ｍｇタンパク質、および（２）密度約６．０ｐｍｏｌ／ｍｇタンパク質。細胞を、Ｔ−２２５フラスコの中、４，５００ｍｇ／ＬのＤ−グルコース（ＧＩＢＣＯ−ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＣｏｒｐ．，：Ｃａｔ＃１１９６５）を含み、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（ＧＩＢＣＯ−ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＣｏｒｐ．：Ｃａｔ＃１０４３７）、および（１００ユニット）ペニシリン−（１００μｇ）ストレプトマイシン／ｍｌ（ＧＩＢＣＯ−ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＣｏｒｐ．：Ｃａｔ＃１５１４０）を添加したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）の中で、５％ＣＯ_２下、加湿されたインキュベーター内にて３７℃で増殖させた。ジェネティシン（８００μｇ／ｍＬ：ＧＩＢＣＯ−ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＣｏｒｐ．：Ｃａｔ＃１０１３１）を培地に加えることによる継続的な淘汰圧の下で細胞を増殖させた。

ｂ．細胞調製
細胞は、ほぼ６０〜８０％の集密度になるまで増殖させた。測定を行う２０〜２２時間前に、細胞を２回洗浄し、４，５００ｍｇ／ＬのＤ−グルコース（ＧＩＢＣＯ−ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＣｏｒｐ．，：Ｃａｔ＃１１９６５）を含む無血清ＤＭＥＭ培地で培養した。細胞を回収するために培地を吸引し、１０ｍＬのＶｅｒｓｅｎｅ（ＧＩＢＣＯ−ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＣｏｒｐ．，：Ｃａｔ＃１５０４０）を各Ｔ−２２５フラスコの中に加えた。細胞を室温で５分間インキュベートした後、機械的な撹拌によってフラスコから遊離させた。細胞懸濁液を、同量の（３７℃に）予熱したｄＰＢＳを含む遠心管に移し入れて、１０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。この上清を捨てて、沈殿物を、（３７℃に）予熱した刺激用バッファー（Ｔ−２２５フラスコ２〜３個あたり１０ｍＬ等量）に再懸濁した。この時点を０時間として注記した。Ｃｏｕｌｔｅｒカウンター（８μｍを超えるものを計り、フラスコ当りの収量は１〜２×１０^７細胞／フラスコ）で細胞数を数えた。細胞を、（３７℃に）予熱した刺激用バッファー（フラッシュプレートキットで提供されているもの）で５×１０^５細胞／ｍｌの濃度に再懸濁して、３７℃で１０分間プレインキュベートした。

ｃＡＭＰ測定法は、^１２５Ｉ−ｃＡＭＰによるＦｌａｓｈｐｌａｔｅアデニルシクラーゼ活性化測定法（ＳＭＰ００４Ｂ，ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓＩｎｃ．，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）を用いた放射免疫測定方式で、製造業者の指示に従って行った。

細胞を上記したように増殖させて調製した。この測定法における最終細胞濃度は２５×１０^３細胞／ウエルであり、最終測定容量は１００μＬであった。試験化合物は、ＤＭＳＯ中１０ｍＭの保存溶液として受け取り、０．１％ＢＳＡを含む５０ｍＭＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４で２５℃にて４００μＭに希釈し、次に、同じバッファーで連続希釈液（１：５）を作成した。サイクリックＡＭＰの蓄積測定は、１０ｐＭから１００μＭまでの１１の異なった濃度（最終濃度）の化合物を用いて行った。５−ＨＴ濃度−応答曲線（１０ｐＭから１００μＭ）がすべてのプレート上に含まれていた。細胞を振とうしながら３７℃で１５分間インキュベートし、１００μｌの氷冷検出用バッファー（フラッシュプレートキットで提供されているもの）を各ウエルに加えて反応を停止させた。プレートを密封して、４℃で一晩インキュベートした。Ｔｏｐｃｏｕｎｔ（ＰａｃｋａｒｄＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅＣｏ．，Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ）を用いたシンチレーション近接分光法によって結合放射活性を定量した。

製造業者のユーザー用マニュアルに記載された指示に従って、ｃＡＭＰ標準曲線から、反応液１ｍＬ当り産生されたｃＡＭＰの量を推定した。データを、３−パラメータシグモイド型用量応答モデル（勾配が１（ｕｎｉｔｙ）に制約される）を用いたＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍソフトウエアパッケージによる非線形回帰分析によって解析した。能力データは、ＥＣ_５０値の常用対数に負号を付けたｐＥＣ_５０値で報告される。ただし、ＥＣ_５０は５０％最大反応に対する有効濃度である。

この測定法では、より高いｐＥＣ_５０値を示す試験化合物の方が、５−ＨＴ_４レセプターに作用する能力が高い。この測定法において、約０．５〜０．６ｐｍｏｌ／ｍｇタンパク質の密度を有する細胞株（１）で試験された化学式Ｉの化合物は、約７．５よりも大きなｐＥＣ_５０値を有していた。

アッセイ法４：ｈＥＲＧ心臓カリウムチャンネルを発現する全細胞におけるカリウムイオン電流阻害のインビトロ電位固定測定法
ｈＥＲＧｃＤＮＡによって安定して形質転換されたＣＨＯ−Ｋ１細胞をウィスコンシン大学のＧａｉｌＲｏｂｅｒｔｓｏｎから入手した。細胞は必要になるまで、極低温で保存した。細胞は、１０％ウシ胎仔血清および２００μｇ／ｍＬジェネティシンを添加したダルベッコ変法イーグル培地／Ｆ１２の中で展開および継代した。細胞を、（２ｍＬの培地を含む）３５ｍｍ^２培養皿の中で、ポリ−Ｄ−リジン（１００μｇ／ｍＬ）でコートしたカバーガラスの上に、単離された細胞を全細胞電位固定実験用に選択することが可能な密度で播種した。この培養皿は、加湿された５％ＣＯ_２環境下３７℃で維持した。

少なくとも７日おきに細胞外溶液を調製し、使用しないときには４℃で保存した。この細胞外溶液は、ＮａＣｌ（１３７）、ＫＣｌ（４）、ＣａＣｌ_２（１．８）、ＭｇＣｌ_２（１）、グルコース（１０）、ＮａＯＨを含む４−（２−ヒドロキシエチル）−ｌ−ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）（１０）、ｐＨ７．４を含んでいた（括弧内ｍＭ）。この細胞外溶液を、試験化合物の有無に関わらず、リザーバの中に入れて、そこから約０．５ｍＬ／分で記録用チャンバーの中に流れ込むようにした。細胞内溶液を調製し、等量液にして、使用する日まで−２０℃で保存した。この細胞内溶液は、ＫＣｌ（１３０）、ＭｇＣｌ_２（１）、エチレングリコール−ビス（β−アミノエチルエーテル）Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸塩（ＥＧＴＡ）（５）、ＭｇＡＴＰ（５）、ＫＯＨを含む４−（２−ヒドロキシエチル）−ｌ−ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）（１０）、ｐＨ７．２を含んでいた（括弧内ｍＭ）。すべての実験を室温（２０〜２２℃）で行った。

細胞を播種したカバーガラスを記録用チャンバーに移して連続的に灌流した。細胞とパッチ電極との間にギガオームシールが形成された。安定したパッチに達したところで、初期保持電位を−８０ｍＶとして、電位固定モードで記録が開始された。安定した全細胞電流に達した後、細胞を被験化合物に曝露した。標準的な電位プロトコールは以下の通りである。保持電位を−８０ｍＶから＋２０ｍＶまでの段階が４．８秒間、−５０ｍＶまで再分極化するのに５秒間、そして、最初の保持電位（−８０ｍＶ）に戻る。この電位プロトコールを１５秒毎に１回行った（０．０６７Ｈｚ）。ｐＣｌａｍｐソフトウエアを用いて、再分極化相の間におけるピーク電流振幅を決定した。３μＭの濃度の被験化合物を細胞の上に５分間灌流させ、その後、化合物なしで５分間洗い流した。最後に、この潅流液に陽性対照（シサプリド、２０ｎＭ）を加えて、細胞の機能をテストした。−８０ｍＶから＋２０ｍＶまでの段階で、ｈＥＲＧチャンネルが活性化され、外向き電流が生じた。−５０ｍＶまで戻る段階では、チャンネルが不活性化から回復して失活するにつれて外向きテール電流が生じる。

ｐＣＬＡＭＰソフトウエアを用いて、再分極化相の間におけるピーク電流振幅を決定した。対照物質および被験物質のデータを登録商標Ｏｒｉｇｉｎ（ＯｒｉｇｉｎＬａｂＣｏｒｐ．，ＮｏｒｔｈａｍｐｔｏｎＭＡ）にエクスポートし、そこで、化合物非存在下における初期電流振幅に対して各電流振幅を標準化した。各条件について、標準化した電流の平均と標準誤差を計算して、実験の時間経過に対してプロットした。

被験物質または賦形剤対照（通常０．３％ＤＭＳＯ）に５分間曝露した後に測定されたＫ^＋電流阻害を比較した。２集団独立ｔ検定法（ＭｉｃｒｏｃａｌＯｒｉｇｉｎｖ．６．０）を用いて、実験グループの間での統計学的な比較を行った。差異は、ｐ＜０．０５で有意であると見なした。

この測定法では、カリウムイオン電流の阻害率が小さくなるにつれて、被験化合物が、治療薬として使用されたときに心臓の再分極のパターンを変える可能性が低くなった。化学式Ｉの化合物を、本測定法において３μＭの濃度で試験したところ、約１５％未満のカリウムイオン電流阻害を示した。

アッセイ法５：経口バイオアベイラビリティのインビトロモデル：Ｃａｃｏ−２透過測定法
経口投与後、被験化合物が腸を通過して血流の中に入ることができるというモデルを作るためにＣａｃｏ−２透過測定法を行った。溶液に入った被験化合物が、ヒト小腸の単層の堅い結合を模倣するよう設計された細胞単層を透過する速度を測定した。

Ｃａｃｏ−２（結腸、腺癌、ヒト）細胞をＡＴＣＣ（ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ；Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から入手した。透過実験のために、細胞を予め湿らせたトランスウエルズポリカーボネートフィルター（Ｃｏｓｔａｒ；Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）の上に６３，０００細胞／ｃｍ^２の密度で播種した。培養してから２１日後に細胞単層が形成された。トランスウエルプレートの中で細胞培養した後、細胞単層を含む膜をトランスウエルプレートから剥がして、拡散チャンバー（Ｃｏｓｔａｒ；Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）の中に入れた。拡散チャンバーを、温度制御のために外部を循環する、３７℃にサーモスタット制御された水を装備したヒートブロックの中に入れた。空気分流板によって、９５％Ｏ_２／５％ＣＯ_２が拡散チャンバーの各半室に送達されて、細胞単層を横切る層流パターンを作出するが、これは、不撹拌の境界層を減少させるのに有効であった。

被験化合物の濃度を１００μＭで、また、単層の完全性をモニターするために^１４Ｃ−マンニトールを用いて透過実験を行った。全ての実験を３７℃で６０分間行った。０、３０、および６０分のところで、チャンバーの供与側と受容側の両方から試料を採取した。試料を、被験化合物の濃度とマンニトールの濃度について、ＨＰＬＣまたは液体シンチレーション測定で分析した。ｃｍ／秒における透過係数（Ｋ_ｐ）が計算された。

この測定法では、約１０×１０^−６ｃｍ／秒よりも大きなＫ_Ｐ値を好適なバイオアベイラビリティを示すものと見なす。この測定法で試験した化学式Ｉの化合物は、約２０×１０^−６ｃｍ／秒よりも大きなＫ_Ｐ値を示した。

アッセイ法６：ラットにおける薬物動態試験
被験化合物の水溶液処方剤を、ｐＨが約５から約６である０．１％乳酸の中に調製した。オスのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（ＣＤ系統、ＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）に、２．５ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内（ＩＶ）投与によって、または５ｍｇ／ｋｇの用量で経口経管（ＰＯ）によって被験化合物を投与した。投与用量は、ＩＶでは１ｍＬ／ｋｇ、ＰＯ投与では２ｍＬ／ｋｇであった。連続血液試料を、投与前、投与後２（ＩＶのみ）分、５分、１５分、３０分、および１時間、２時間、４時間、８時間および２４時間たった動物から採集した。血漿中の被験化合物の濃度を、液体クロマトグラフィー−質量分析法（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）（ＭＤＳＳＣＩＥＸ，ＡＰＩ４０００，ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，ＦｏｓｔｅｒＣｉｔｙ，ＣＡ）によって、定量の下限値を１ｎｇ／ｍｌとして測定した。

標準的な薬物動態パラメーターを、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（Ｖｅｒｓｉｏｎ４．０．１，Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ，ＭｏｕｎｔａｉｎＶｉｅｗ，ＣＡ）を用いて非区画分析（ＩＶにはＭｏｄｅｌ２０１、ＰＯにはＭｏｄｅｌ２００）により評価した。時間に対する血漿中の被験化合物濃度曲線の最大値をＣ_ｍａｘと表す。投与した時間から最後の測定可能な濃度までの時間曲線に対して、この濃度よりも低いところの面積（ＡＵＣ（Ｏ−ｔ））を直線台形規則（ｌｉｎｅａｒｔｒａｐｅｚｏｉｄａｌｒｕｌｅ）によって計算した。経口バイオアベイラビリティ（Ｆ（％））、すなわち、ＩＶ投与についての（ＡＵＣ（Ｏ−ｔ））に対するＰＯ投与のＡＵＣ（Ｏ−ｔ）の用量で標準化した割合を以下の通りに計算した。

Ｆ（％）＝ＡＵＣ_ＰＯ／ＡＵＣ_ＩＶ用量_ＩＶ／用量_ＰＯ ×１００％。

本測定法で、パラメーターＣ_ｍａｘ、ＡＵＣ（Ｏ−ｔ）、およびＦ（％）の値が大きい被験化合物は、経口投与されたときにより大きなバイオアベイラビリティを示すことが期待される。化学式Ｉの化合物のＣ_ｍａｘ値は０．２５μｇ／ｍＬ、ＡＵＣ（Ｏ−ｔ）値は０．７３μｇ・ｈｒ／ｍＬ、およびラットモデルにおける経口バイオアベイラビリティ（Ｆ（％））は約１００％である。

本発明をその具体的な実施態様を参照しながら説明してきたが、当然ながら、当業者には、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、さまざまな変更を行い、同等物で置き換えることができることが理解できるはずである。また、多くの変更を行って、具体的な状況、材料、物質の組成、方法、処理工程を本発明の目的、精神、および範囲に適合することができる。そのような変更はすべて、本明細書に添付された請求の範囲に含まれるものである。さらに、上記で引用されているすべての刊行物、特許、および特許文献は、個別に参照して組み入れられるのと同じように、その全体が参照されて本明細書に組み入れられる。

本発明の結晶性１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドジヒドロクロリド塩の粉末ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンを示す。本発明の結晶性１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドジヒドロクロリド塩の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）による波形（図の左側で下にある波形、縦軸左）および熱重量分析（ＴＧＡ）による波形（上側波形、縦軸右）を示す。本発明の結晶性１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドジヒドロブロミド塩の粉末ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンを示す。本発明の結晶性１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドジヒドロブロミド塩の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）による波形（図の左側で下にある波形、縦軸左）および熱重量分析（ＴＧＡ）による波形（上側波形、縦軸右）を示す。本発明の結晶性１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドジヒドロクロリド塩の動的吸湿（Ｄｙｎａｍｉｃｍｏｉｓｔｕｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎ）波形を示す。本発明の結晶性１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドジヒドロブロミド塩の動的吸湿波形（ＤＭＳ）を示す。本発明の１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドジヒドロクロリド塩の結晶性水和物の粉末ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンを示す。本発明の１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドジヒドロクロリド塩の結晶性水和物の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）による波形（図の左側で上にある波形、縦軸左）および熱重量分析（ＴＧＡ）による波形（下側波形、縦軸右）を示す。

Claims

１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドの結晶ハロゲン化物塩またはその溶媒和物。
前記ハロゲン化物塩がジヒドロクロリド塩である、請求項１記載の化合物。
前記化合物が、４．１７±０．２０、８．２３±０．２０、１２．３０±０．２０、１２．７７±０．２０、１３．９４±０．２０、１６．０４±０．２０、１７．０６±０．２０、１８．５６±０．２０、１９．９３±０．２０、２０．４９±０．２０、２１．７２±０．２０、２２．５８±０．２０、２６．２７±０．２０、および２６．５９±０．２０から選択される２θ値において２つ以上の回折ピークがある粉末ｘ線回折パターンを特徴とする、請求項２記載の化合物。
前記粉末ｘ線回折パターンが、４．１７±０．２０、８．２３±０．２０、１２．３０±０．２０、１３．９４±０．２０、および１８．５６±０．２０から選択される２θ値において２つ以上の回折ピークを含む、請求項３記載の化合物。
前記化合物が、ピーク位置が図１に示したパターンのピーク位置と実質的に一致する粉末ｘ線回折パターンを特徴とする、請求項２記載の化合物。
前記化合物が、約２３０℃よりも高い温度で吸熱性熱流の最大値を示す示差走査熱量測定波形を特徴とする、請求項２記載の化合物。
前記化合物が、図２に示されている波形と実質的に一致する示差走査熱量測定波形を特徴とする、請求項２記載の化合物。
前記ハロゲン化物塩がジヒドロブロミド塩である、請求項１記載の化合物。
前記化合物が、４．４１±０．２０、７．６３±０．２０、８．７５±０．２０、１３．１１±０．２０、１４．５２±０．２０、１５．２８±０．２０、２１．８９±０．２０、２２．７５±０．２０、２３．３５±０．２０、２５．４０±０．２０、２６．３４±０．２０、２８．５３±０．２０、および２８．８６±０．２０から選択される２θ値において２つ以上の回折ピークがある粉末ｘ線回折パターンを特徴とする、請求項８記載の化合物。
前記粉末ｘ線回折パターンが、４．４１±０．２０、８．７５±０．２０、１３．１１±０．２０、および２１．８９±０．２０から選択される２θ値において２つ以上の回折ピークを含む、請求項９記載の化合物。
前記化合物が、ピーク位置が図３に示したパターンのピーク位置と実質的に一致する粉末ｘ線回折パターンを特徴とする、請求項８記載の化合物。
前記化合物が、ジヒドロクロリド塩の水和物である、請求項１記載の化合物。
前記化合物が、４．８５±０．２０、８．１４±０．２０、９．０２±０．２０、１２．５８±０．２０、１４．２０±０．２０、１６．８５±０．２０、１７．３１±０．２０、１７．６６±０．２０、１９．２８±０．２０、１９．９２±０．２０、２１．３６±０．２０、２１．７２±０．２０、２２．３８±０．２０、２２．７５±０．２０、２６．３４±０．２０、２８．８５±０．２０、および２９．４７±０．２０から選択される２θ値において２つ以上の回折ピークがある粉末ｘ線回折パターンを特徴とする、請求項１２記載の化合物。
前記粉末ｘ線回折パターンが、１２．５８±０．２０、１４．２０±０．２０、１６．８５±０．２０、１７．３１±０．２０、および１７．６６±０．２０から選択される２θ値において２つ以上の回折ピークを含む、請求項１３記載の化合物。
前記化合物が、ピーク位置が図７に示したパターンのピーク位置と実質的に一致する粉末ｘ線回折パターンを特徴とする、請求項１２記載の化合物。
医薬上許容される担体および請求項１〜１５のいずれか一項記載の化合物を含む医薬組成物。
５−ＨＴ_４レセプター活性に関連する病状を有する哺乳動物を治療する方法であって、医薬上許容される担体および請求項１〜１５のいずれか一項記載の化合物を含む、治療上有効な量の医薬組成物を該哺乳動物に投与することを含む方法。
前記病状が、過敏性腸症候群、慢性の便秘、機能性消化不良、胃内容排出遅延、胃食道逆流性疾患、糖尿病性胃不全麻痺、術後イレウス、腸偽閉塞、および薬剤誘発性通過遅延（ｄｒｕｇ−ｉｎｄｕｃｅｄｄｅｌａｙｅｄｔｒａｎｓｉｔ）からなる群より選択される、請求項１７記載の方法。
哺乳動物における胃腸管の運動低下障害を治療する方法であって、医薬上許容される担体および請求項１〜１５のいずれか一項記載の化合物を含む、治療上有効な量の医薬組成物を該哺乳動物に投与することを含む方法。
前記運動低下障害が、慢性の便秘、便秘を主症状とする過敏性腸症候群、糖尿病性胃不全麻痺および特発性胃不全麻痺、および機能性消化不良からなる群より選択される、請求項１９記載の方法。
治療で使用する、請求項１〜１５のいずれか一項記載の化合物。
薬剤を製造するための、請求項１〜１５のいずれか一項記載の化合物の使用。
前記薬剤が、哺乳動物における５−ＨＴ_４レセプター活性に関連する病状を治療するためのものである、請求項２２記載の使用。
前記病気または症状が胃腸管の運動低下障害である、請求項２３記載の使用。
１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドをハロゲン化物酸に接触させる工程を含む、請求項１記載の化合物を調製する方法。
１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチル−ピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミドを調製する方法であって、
（ａ）（１Ｒ，５Ｓ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−オンを遷移金属触媒存在下で過剰量のギ酸アンモニウムと反応させて、１−｛４−［２−（（１Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３−アミノ−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−８−イル）エチル］ピペラジン−１−イル｝エタノンを提供する工程；
（ｂ）１−｛４−［２−（（１Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３−アミノ−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−８−イル）エチル］ピペラジン−１−イル｝エタノンを、カップリング剤および塩基が存在する中で１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸と反応させて、１−イソプロピル−１Ｈ−インダゾール−３−カルボン酸｛（１Ｓ，３Ｒ，５Ｒ）−８−［２−（４−アセチルピペラジン−１−イル）エチル］−８−アザビシクロ［３．２．１］オクト−３−イル｝アミド、またはその医薬上許容される塩または溶媒和物または立体異性体を提供する工程
を含む方法。