JP2005519961A

JP2005519961A - 継続的スルファターゼ阻害プロゲストゲンホルモン補充療法

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Publication number: JP2005519961A
Application number: JP2003575977A
Authority: JP
Inventors: コーベル，パトリク・ミシエル; フリードマン，アンドリユー・ジヨセフ
Original assignee: Janssen Pharmaceutica NV
Current assignee: Janssen Pharmaceutica NV
Priority date: 2002-03-11
Filing date: 2003-03-11
Publication date: 2005-07-07
Also published as: ES2269999T3; DE60307602D1; EP1482948B1; CA2478194A1; CY1105646T1; WO2003077924A1; ATE336252T1; CN1652798A; PT1482948E; AU2003220171A1; EP1482948A1; HK1070003A1; DE60307602T2; DK1482948T3; US20030229057A1

Abstract

有効なホルモン補充量のエストロゲン、ならびに有効な子宮内膜保護量および有効な***保護量の双方である量の強力なスルファターゼ阻害プロゲストゲンであるプロゲストゲンの組合せ剤を、こうした治療の必要な閉経後もしくはエストロゲン欠乏の女性に継続投与する段階を含んでなる、ホルモン補充療法の方法を開示する。

Description

本発明は閉経後もしくは月経のない女性の処置のためのホルモン補充療法（ＨＲＴ）に関する。より具体的には、本発明は、ノルゲスチメート（ＮＧＭ）もしくはノルエルゲストロミン（ＮＧＭＮ）のような強力なスルファターゼ阻害プロゲストゲンおよび適するエストロゲンを含有する継続的ホルモン補充療法に関する。

かなりの割合のヒト乳癌がホルモン依存性である。動物研究および臨床試験は、エストロゲンとりわけエストラジオールがホルモン依存性乳癌の増殖の支援に関与する最も重要なホルモンであることを確認した（参考文献、非特許文献１の４９３、非特許文献２の９６７、非特許文献３の１５８９、非特許文献４の５２５、非特許文献５の１３５、非特許文献６の２２５、非特許文献７の６２５および非特許文献８の１４９７を参照されたい）。

閉経後女性のエストロンおよびエストラジオールの血漿濃度は非常に低い。（参考文献、非特許文献１の４９３および非特許文献７の６２６を参照されたい）にもかかわらず、エストロンおよびエストラジオールの乳癌組織濃度は血漿濃度より一桁より高い。（参考文献、非特許文献１の４９３、非特許文献２の９６７および非特許文献９の６４１を参照されたい）図１はエストロゲンがヒト乳癌細胞中で局所的に形成されかつそれにより増殖を支援するのに利用可能にされる酵素的過程を示す。（参考文献、非特許文献６の２２９を参照されたい）。図１を参照して、研究は、スルファターゼ酵素がエストロゲンの形成においてアロマターゼ酵素よりも少なくとも１０倍より重要であると思われることを示している。（参考文献、非特許文献１の４９３、非特許文献２の９６７、非特許文献１０の１７、非特許文献１１の９３１、非特許文献３の１５８９、非特許文献４の５２５、非特許文献５の１３５、非特許文献６の２２８、非特許文献７の６２６および６２８、ならびに非特許文献９の６４１を参照されたい）従って、ヒト乳癌細胞中でのエストロゲンの局所形成を促進する主経路はスルファターゼ経路である。

エストラジオールはホルモン依存性乳癌の増殖の支援に関与する主因子の１つでありかつスルファターゼ経路は***でのエストラジオールの形成のための主経路であるため、従って、スルファターゼ経路の抑制によるエストラジオール形成の減少は乳癌の管理における潜在的治療的活性を有するとみられる。（参考文献、非特許文献１の４９３、非特許文献１２の５５、非特許文献１０の１７、非特許文献１１の９３１、非特許文献１３の１２３および非特許文献７の６３１を参照されたい）スルファターゼ経路の抑制は***保護効果を有することができる。

ヒト乳癌細胞中のスルファターゼ活性を継続的に抑制するためのＨＲＴレジメンを提供することが本発明の一目的である。

ヒト乳癌細胞中のスルファターゼ活性の例外的抑制を伴うＨＲＴレジメンを提供することもまた本発明の一目的である。

ヒト乳癌細胞中のエストロゲン形成を継続的に抑制するためのＨＲＴレジメンを提供することもまた本発明の一目的である。

ヒト乳癌細胞中のエストロゲン形成の例外的抑制を伴うＨＲＴレジメンを提供することが本発明のなお別の目的である。

局所的に形成されたエストロゲンへの***の曝露を最小限にするＨＲＴレジメンを提供することが本発明のさらに別の目的である。

同等なエストロゲン用量の他のＨＲＴレジメンに比較してエストロゲンへの***の曝露を低下させるＨＲＴレジメンを提供することが本発明の別の目的である。

同等なエストロゲン用量の他のＨＲＴレジメンに比較して最低レベルの***のエストロゲン曝露を伴うＨＲＴレジメンを提供することが本発明の別の目的である。

該レジメンで投与されるエストロゲンのレベルへの***の曝露を制限する傾向があるＨＲＴレジメンを提供することが本発明の別の目的である。

例外的かつ継続的***保護効果を提供するＨＲＴレジメンを提供することが本発明のさらに別の目的である。

乳癌に関連する危険因子を最小限にするＨＲＴレジメンを提供することが本発明の別の目的である。
ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＥｓｔｒｏｎｅＳｕｌｆａｔａｓｅＥｎｚｙｍｅｉｎＨｕｍａｎＰｌａｃｅｎｔａａｎｄＨｕｍａｎＢｒｅａｓｔＣａｒｃｉｎｏｍａ；Ｔ．Ｒ．ＪＥＦＦＲＹＥＶＡＮＳら、Ｊ．ＳｔｅｒｏｉｄＢｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｖｏｌ．３９、Ｎｏ．４Ａ１９９１、ｐｐ．４９３−４９９ＩｎＶｉｔｒｏＥｆｆｅｃｔｏｆＳｙｎｔｈｅｔｉｃＰｒｏｇｅｓｔｏｇｅｎｓｏｎＥｓｔｒｏｎｅＳｕｌｆａｔａｓｅＡｃｔｉｖｉｔｙｉｎＨｕｍａｎＢｒｅａｓｔＣａｒｃｉｎｏｍａ；ＯＤＩＬＥＰＲＯＳＴ−ＡＶＡＬＬＥＴら、Ｊ．ＳｔｅｒｏｉｄＢｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．、Ｖｏｌ．３９、Ｎｏ．６、１９９１、ｐｐ．９６７−９７３ＥｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅＰｒｏｇｅｓｔａｇｅｎＰｒｏｍｅｇｅｓｔｏｎｅ（Ｒ−５０２０）ｏｎｍＲＮＡｏｆｔｈｅＯｅｓｔｒｏｎｅＳｕｌｆａｔａｓｅｉｎｔｈｅＭＣＦ−７ＨｕｍａｎＭａｍｍａｒｙＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓ；ＪＯＲＧＥＲ．ＰＡＳＱＵＡＬＩＮＩら、ＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ１４：１５８９−１５９４（１９９４）ＥｆｆｅｃｔｏｆＮｏｍｅｇｅｓｔｒｏｌＡｃｅｔａｔｅｏｎＥｓｔｒｏｎｅ−ｓｕｌｆａｔａｓｅａｎｄ１７β−ＨｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄＤｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅＡｃｔｉｖｉｔｉｅｓｉｎＨｕｍａｎＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓ；Ｇ．ＣＨＥＴＲＩＴＥら、Ｊ．ＳｔｅｒｏｉｄＢｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｖｏｌ．５８、Ｎｏ．５／６、ｐｐ．５２５−５３１、１９９６ＥｆｆｅｃｔｏｆＴｉｂｏｌｏｎｅ（ＯｒｇＯＤ１４）ａｎｄｉｔｓＭｅｔａｂｏｌｉｔｅｓｏｎＥｓｔｒｏｎｅＳｕｌｆａｔａｓｅＡｃｔｉｖｉｔｙｉｎＭＣＦ−７ａｎｄＴ−４７ＤＭａｍｍａｒｙＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓ；Ｇ．ＣＨＥＴＲＩＴＥら、ＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ１７：１３５−１４０（１９９７）ＰｒｏｇｅｓｔｉｎｓａｎｄＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒ；Ｊ．Ｒ．ＰＡＳＱＵＡＬＩＮＩら、Ｊ．ＳｔｅｒｏｉｄＢｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｖｏｌ．６５、Ｎｏ．１−６、ｐｐ．２２５−２３５、１９９８ＣｏｎｔｒｏｌｏｆＥｓｔｒａｄｉｏｌＩｎＨｕｍａｎＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒ．ＥｆｆｅｃｔＯｆＭｅｄｒｏｇｅｓｔｏｎｅｏｎＳｕｌｆａｔａｓｅ，１７β−ＨｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄＤｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅＡｎｄＳｕｌｆｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅＡｃｔｉｖｉｔｉｅｓｉｎＨｕｍａｎＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓ；ＪＯＲＧＥＲＡＵＬＰＡＳＱＵＡＬＩＮＩら、Ｅｕｒｏ．Ｃｏｎｇｒ．ＯｎＭｅｎｏｐａｕｓｅ（１９９８）、ｐｐ．６２５−６３３ＣｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅＳｔｅｒｏｉｄＳｕｌｆａｔａｓｅＧｅｎｅＳｕｐｐｏｒｔｓｔｈｅＧｒｏｗｔｈｏｆＭＣＦ−７ＨｕｍａｎＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓｉｎＶｉｔｒｏａｎｄｉｎＶｉｔｒｏ；ＭＡＴＴＩＥＲ．ＪＡＭＥＳら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．１４２、Ｎｏ．４、ｐｐ１４９７−１５０５ＣｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆＥｓｔｒｏｎｅ，ＥｓｔｒａｄｉｏｌａｎｄＴｈｅｉｒＳｕｌｆａｔｅｓ，ＡｎｄＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＳｕｌｆａｔａｓｅａｎｄＡｒｏｍａｔａｓｅＡｃｔｉｖｉｔｉｅｓｉｎＰａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＢｒｅａｓｔＦｉｂｒｏａｄｅｎｏｍａ；Ｊ．Ｒ．ＰＡＳＱＵＡＬＩＮＩら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、７０、ｐｐ．６３９−６４３（１９９７）ＡｃｔｉｏｎｏｆＤａｎａｚｏｌＯｎＴｈｅＣｏｎｖｅｒｓｉｏｎＯｆＥｓｔｒｏｎｅＳｕｌｆａｔｅＴｏＥｓｔｒａｄｉｏｌＡｎｄＯｎＴｈｅＳｕｌｆａｔａｓｅＡｃｔｉｖｉｔｙＩｎＴｈｅＭＣＦ−７，Ｔ−４７ＤａｎｄＭＤＡ−ＭＢ−２３１ＨｕｍａｎＭａｍｍａｒｙＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓ；Ｂ−ＬＮＧＵＹＥＮら、Ｊ．ＳｔｅｒｏｉｄＢｉｏｃｈｅｍ，Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｖｏｌ．４６、Ｎｏ．１、１９９３、ｐｐ．１７−２３ＥｆｆｅｃｔｏｆＰｒｏｍｅｇｓｔｏｎｅ，Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ，４−ＨｙｄｒｏｘｙｔａｍｏｘｉｆｅｎａｎｄＩＣＩ１６４，３８４ｏｎｔｈｅＯｅｓｔｒｏｎｅＳｕｌｐｈａｔａｓｅＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＨｕｍａｎＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓ；ＧＥＲＡＲＤＣＨＥＴＲＩＴＥら、ＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ１３：９３１−９３４（１９９３）ＥｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｐｒｏｇｅｓｔａｇｅｎＲ５０２０（ｐｒｏｍｅｇｅｓｔｏｎｅ）ａｎｄｏｆｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅｏｎｔｈｅｕｐｔａｋｅａｎｄｏｎｔｈｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｅｓｔｒｏｎｅｓｕｌｆａｔｅｉｎＭＣＦ−７ａｎｄＴ−４７ｄｈｕｍａｎｍａｍｍａｒｙｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ：ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗｉｔｈｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒｌｅｖｅｌｓ；ＪＯＲＧＥＲ．ＰＡＳＱＵＡＬＩＮＩら、ＣａｎｃｅｒＬｅｔｔｅｒｓ、６６（１９９２）５５−６０、ＥｌｚｅｖｉｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓＩｒｅｌａｎｄＬｔｄＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎＯｆＳｔｅｒｏｉｄＳｕｌｆａｔａｓｅＡｃｔｉｖｉｔｙＢｙＤａｎａｚｏｌ；ＫＪＥＬＬＣＡＲＬＳＴＲＯＭら、ＡｃｔａＯｂｓｔｅｔＧｙｎｅｃｏｌＳｃａｎｄＳｕｐｐｌ．１０７−１１１

参考文献：
１．ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＥｓｔｒｏｎｅＳｕｌｆａｔａｓｅＥｎｚｙｍｅｉｎＨｕｍａｎＰｌａｃｅｎｔａａｎｄＨｕｍａｎＢｒｅａｓｔＣａｒｃｉｎｏｍａ；Ｔ．Ｒ．ＪＥＦＦＲＹＥＶＡＮＳら、Ｊ．ＳｔｅｒｏｉｄＢｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｖｏｌ．３９、Ｎｏ．４Ａ１９９１、ｐｐ．４９３−４９９
２．ＩｎＶｉｔｒｏＥｆｆｅｃｔｏｆＳｙｎｔｈｅｔｉｃＰｒｏｇｅｓｔｏｇｅｎｓｏｎＥｓｔｒｏｎｅＳｕｌｆａｔａｓｅＡｃｔｉｖｉｔｙｉｎＨｕｍａｎＢｒｅａｓｔＣａｒｃｉｎｏｍａ；ＯＤＩＬＥＰＲＯＳＴ−ＡＶＡＬＬＥＴら、Ｊ．ＳｔｅｒｏｉｄＢｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．、Ｖｏｌ．３９、Ｎｏ．６、１９９１、ｐｐ．９６７−９７３
３．ＥｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｐｒｏｇｅｓｔａｇｅｎＲ５０２０（ｐｒｏｍｅｇｅｓｔｏｎｅ）ａｎｄｏｆｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅｏｎｔｈｅｕｐｔａｋｅａｎｄｏｎｔｈｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｅｓｔｒｏｎｅｓｕｌｆａｔｅｉｎＭＣＦ−７ａｎｄＴ−４７ｄｈｕｍａｎｍａｍｍａｒｙｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ：ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗｉｔｈｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒｌｅｖｅｌｓ；ＪＯＲＧＥＲ．ＰＡＳＱＵＡＬＩＮＩら、ＣａｎｃｅｒＬｅｔｔｅｒｓ、６６（１９９２）５５−６０、ＥｌｚｅｖｉｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓＩｒｅｌａｎｄＬｔｄ
４．ＡｃｔｉｏｎｏｆＤａｎａｚｏｌＯｎＴｈｅＣｏｎｖｅｒｓｉｏｎＯｆＥｓｔｒｏｎｅＳｕｌｆａｔｅＴｏＥｓｔｒａｄｉｏｌＡｎｄＯｎＴｈｅＳｕｌｆａｔａｓｅＡｃｔｉｖｉｔｙＩｎＴｈｅＭＣＦ−７，Ｔ−４７ＤａｎｄＭＤＡ−ＭＢ−２３１ＨｕｍａｎＭａｍｍａｒｙＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓ；Ｂ−ＬＮＧＵＹＥＮら、Ｊ．ＳｔｅｒｏｉｄＢｉｏｃｈｅｍ，Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｖｏｌ．４６、Ｎｏ．１、１９９３、ｐｐ．１７−２３
５．ＥｆｆｅｃｔｏｆＰｒｏｍｅｇｓｔｏｎｅ，Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ，４−ＨｙｄｒｏｘｙｔａｍｏｘｉｆｅｎａｎｄＩＣＩ１６４，３８４ｏｎｔｈｅＯｅｓｔｒｏｎｅＳｕｌｐｈａｔａｓｅＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＨｕｍａｎＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓ；ＧＥＲＡＲＤＣＨＥＴＲＩＴＥら、ＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ１３：９３１−９３４（１９９３）
６．ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎＯｆＳｔｅｒｏｉｄＳｕｌｆａｔａｓｅＡｃｔｉｖｉｔｙＢｙＤａｎａｚｏｌ；ＫＪＥＬＬＣＡＲＬＳＴＲＯＭら、ＡｃｔａＯｂｓｔｅｔＧｙｎｅｃｏｌＳｃａｎｄＳｕｐｐｌ．１０７−１１１
７．ＥｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅＰｒｏｇｅｓｔａｇｅｎＰｒｏｍｅｇｅｓｔｏｎｅ（Ｒ−５０２０）ｏｎｍＲＮＡｏｆｔｈｅＯｅｓｔｒｏｎｅＳｕｌｆａｔａｓｅｉｎｔｈｅＭＣＦ−７ＨｕｍａｎＭａｍｍａｒｙＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓ；ＪＯＲＧＥＲ．ＰＡＳＱＵＡＬＩＮＩら、ＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ１４：１５８９−１５９４（１９９４）
８．ＥｆｆｅｃｔｏｆＮｏｍｅｇｅｓｔｒｏｌＡｃｅｔａｔｅｏｎＥｓｔｒｏｎｅ−ｓｕｌｆａｔａｓｅａｎｄ１７β−ＨｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄＤｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅＡｃｔｉｖｉｔｉｅｓｉｎＨｕｍａｎＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓ；Ｇ．ＣＨＥＴＲＩＴＥら、Ｊ．ＳｔｅｒｏｉｄＢｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｖｏｌ．５８、Ｎｏ．５／６、ｐｐ．５２５−５３１、１９９６
９．ＥｆｆｅｃｔｏｆＴｉｂｏｌｏｎｅ（ＯｒｇＯＤ１４）ａｎｄｉｔｓＭｅｔａｂｏｌｉｔｅｓｏｎＥｓｔｒｏｎｅＳｕｌｆａｔａｓｅＡｃｔｉｖｉｔｙｉｎＭＣＦ−７ａｎｄＴ−４７ＤＭａｍｍａｒｙＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓ；Ｇ．ＣＨＥＴＲＩＴＥら、ＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ１７：１３５−１４０（１９９７）
１０．ＰｒｏｇｅｓｔｉｎｓａｎｄＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒ；Ｊ．Ｒ．ＰＡＳＱＵＡＬＩＮＩら、Ｊ．ＳｔｅｒｏｉｄＢｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｖｏｌ．６５、Ｎｏ．１−６、ｐｐ．２２５−２３５、１９９８
１１．ＣｏｎｔｒｏｌｏｆＥｓｔｒａｄｉｏｌＩｎＨｕｍａｎＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒ．ＥｆｆｅｃｔＯｆＭｅｄｒｏｇｅｓｔｏｎｅｏｎＳｕｌｆａｔａｓｅ，１７β−ＨｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄＤｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅＡｎｄＳｕｌｆｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅＡｃｔｉｖｉｔｉｅｓｉｎＨｕｍａｎＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓ；ＪＯＲＧＥＲＡＵＬＰＡＳＱＵＡＬＩＮＩら、Ｅｕｒｏ．Ｃｏｎｇｒ．ＯｎＭｅｎｏｐａｕｓｅ（１９９８）、ｐｐ．６２５−６３３
１２．ＣｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅＳｔｅｒｏｉｄＳｕｌｆａｔａｓｅＧｅｎｅＳｕｐｐｏｒｔｓｔｈｅＧｒｏｗｔｈｏｆＭＣＦ−７ＨｕｍａｎＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓｉｎＶｉｔｒｏａｎｄｉｎＶｉｔｒｏ；ＭＡＴＴＩＥＲ．ＪＡＭＥＳら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．１４２、Ｎｏ．４、ｐｐ１４９７−１５０５
１３．ＣｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆＥｓｔｒｏｎｅ，ＥｓｔｒａｄｉｏｌａｎｄＴｈｅｉｒＳｕｌｆａｔｅｓ，ＡｎｄＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＳｕｌｆａｔａｓｅａｎｄＡｒｏｍａｔａｓｅＡｃｔｉｖｉｔｉｅｓｉｎＰａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＢｒｅａｓｔＦｉｂｒｏａｄｅｎｏｍａ；Ｊ．Ｒ．ＰＡＳＱＵＡＬＩＮＩら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、７０、ｐｐ．６３９−６４３（１９９７）

本発明により、有効なホルモン補充量のエストロゲン、ならびに有効な子宮内膜保護量および有効な***保護量の双方である量の強力なスルファターゼ阻害プロゲストゲンであるプロゲストゲンの組合せ剤を、こうした治療の必要な閉経後もしくはエストロゲン欠乏の女性に継続投与する段階を含んでなる、ホルモン補充療法の方法が提供される。

本発明により、一周期の期間の間の連続的な連日経口投与に適合された一周期の個別の投薬ユニットを含んでなり、前記投薬ユニットが、製薬学的に許容できる担体との混合状態で、有効なホルモン補充量のエストロゲン、ならびに有効な子宮内膜保護量および有効な***保護量の双方である量の強力なスルファターゼ阻害プロゲストゲンであるプロゲストゲンの組合せ剤を含有する、こうした治療の必要な閉経後もしくはエストロゲン欠乏の女性への投与のための継続的ホルモン補充治療ユニットもまた提供される。

本発明により、一周期の期間の間の連続的投与に適合された１個もしくはそれ以上の経皮貼付剤を含んでなり、治療ユニットの前記経皮貼付剤が、一周期の継続投与のための、有効なホルモン補充量のエストロゲンならびに有効な子宮内膜保護量および有効な***保護量の双方である量の強力なスルファターゼ阻害プロゲストゲンであるプロゲストゲンの組合せ剤を集合的に含有する、こうした治療の必要な閉経後もしくはエストロゲン欠乏の女性への投与のための継続的ホルモン補充治療ユニットもまた提供される。

本発明により、一周期の期間の間の連続的投与に適合された１個もしくはそれ以上の膣リングを含んでなり、投薬ユニットの前記膣リングが、一周期の継続投与のための、有効なホルモン補充量のエストロゲンならびに有効な子宮内膜保護量および有効な***保護量の双方である量の強力なスルファターゼ阻害プロゲストゲンであるプロゲストゲンの組合せ剤を集合的に含有する、こうした治療の必要な閉経後もしくはエストロゲン欠乏の女性への投与のための継続的ホルモン補充治療ユニットもまた提供される。

発明者は、驚くべきことに、こうしたレジメンが、同等の用量のエストロゲンを有する他のホルモン補充療法に比較して***中のテストロゲンの低下されたレベルを有することが期待されることを発見した。
［発明の詳細な説明］
本発明のＨＲＴレジメンは、こうした治療の必要な閉経後もしくはエストロゲン欠乏の女性に、エストロゲンもしくはプロゲストゲンいずれかの投与の中断を伴わずに継続的に毎周期毎周期投与される。エストロゲン欠乏の女性は、天然のまたは化学的去勢、子宮および／もしくは卵巣の除去などのような人工的手段により早期にエストロゲン欠乏である女性を指すことを意図している。投与方法は経皮、膣もしくは経口であってよい。投与が経皮である場合、適する貼付剤を必要とされるように置換を伴い継続的に装用する。投与が膣である場合、リングのような適する膣装置を必要とされるように置換を伴い継続的に挿入する。投与が経口である場合、連日経口投薬ユニットを投与する。

投与の周期は通常２８日もしくはそれ以上持続するが、しかしそれは６０およびなお９０日までより長く、もしくは２１日までより短くてもよい。ＨＲＴレジメンの場合、周期は、設定されたパターンに従って投与される有効成分の用量の日ごともしくは週ごとの変動が存在するレジメンを包含してよい。こうした場合には、用量の変動を包含するレジメンは周期に続く周期で反復される。周期はまた、投与される有効成分の用量の変動が存在しないレジメンであってもよい。こうした場合は、周期は投与もしくは販売の慣習的単位を表す慣例にすぎない。いずれの場合も、問題のＨＲＴレジメンを利用するＨＲＴ製品は周期の単位で処方、販売かつ投与される。周期に基づくＨＲＴ製品は、挿入されそしてその後それらの設計に従って７、１４もしくは２１日ごとに交換される１ないし１０個の膣リングであってよい。周期に基づくＨＲＴ製品は、貼付されそしてその後それらの設計に従って７、１０もしくは１４日ごとに交換される２ないし１０個の経皮貼付剤であってよい。周期に基づくＨＲＴ製品は、経口で毎日投与される２１、２８、５６もしくはそれ以上の錠剤であってよい。

本明細書の「エストロゲン」はエストロゲン受容体に対する作動もしくは拮抗いずれかの効果、しかし好ましくは作動効果を有するエストロゲン受容体調節物質を指す。いかなる慣習的エストロゲンも、本発明のＨＲＴレジメン中の適する一成分として使用してよい。普遍的に使用される１７β−エストラジオールに加え、１７α−エチニルエストラジオール、例えば１７α−エチニルエストラジオール３−ジメチルアミノプロピオネート、１７α−エチニルエストラジオール３−シクロペンチルエーテル（キエネストロール）および１７α−エチニルエストラジオール３−メチルエーテル（メストラノール）のような１７α−エチニルエストラジオールのエステルおよびエーテルもまたエストロゲン成分として使用し得る。エストロン、エストロンスルフェート、エストロンスルフェートピペラジン塩、エストラジオールおよびエストリオールならびにそれらのエステルのような天然のエストロゲンもまた使用してもよい。結合型ウマエストロゲン（ＣＥＥ）もしくは結合型エストロゲン（ＣＥ）がこの使用について公知である。本明細書の使用に適する合成エストロゲンもしくは合成エストロゲン調節物質は、タモキシフェン、トレミフェン、オルメロキシフェン、モドレフェン、フルベストラント、ラソフォキシフェン、バゼドキシフェン（ＴＳＥ−４２４）、アルゾキシフェン、テスミリフェン、ミプロキシフェン、ＥＭ−６５２（Ｓｃｈ−５７０６８）、３３３９（Ａｖｅｎｔｉｓ）、オスペミフェン（Ｏｓｐｅｍｉｆｅｎｅ）（Ｆｃ１２７１Ａ）、ＥＲＡ−９２３、ＧＴｘ−００６、ＨＭ−１０１、ＤＰＣ−９７４、Ａ−００７、ＳＰ−８４９０、ＷＡＹ−１４０４２４、チボロン、レボドキシフェン、ラロキシフェンを包含する。好ましいエストロゲンは、ホルモン補充療法の技術分野で公知でありかつ現在商業的に入手可能なＨＲＴ製品で使用されている１７β−エストラジオールである。

いずれのＨＲＴレジメンの目的も、十分なエストロゲンの投与により閉経もしくは誘発された閉経様状態のいくつかの症状の１種もしくはそれ以上を緩和することである。エストロゲンはのぼせおよび寝汗を緩和して睡眠パターンおよび満足すべき生活状態の患者の全般的感情を改善するのに十分な量で投与してよい。エストロゲンは、骨格、とりわけ椎体からのカルシウムの喪失に対し保護して圧挫骨折および身長の低下を予防するのに十分な量で投与してよい。エストロゲンは、虚血性心疾患からの死亡の危険を低下させるのに十分な量で投与してよい。エストロゲンは、膣粘膜および尿路の血管分布および健康を保護するのに十分な量で投与してよい。本明細書で、こうした治療の必要な閉経後もしくはエストロゲン欠乏の女性へのホルモン補充量のエストロゲンの投与は、これらの目的の１種もしくはそれ以上に関して部分的もしくは完全な緩和を提供するとみられる。

エストロゲンのホルモン補充量の１特徴付けにおいて、それが事実上約０．２５ｍｇないし約２．５ｍｇの経口で投与された１７β−エストラジオールに同等であるような十分なエストロゲンをいずれかの適する経路により投与する。好ましくは、こうしたエストロゲンは、事実上約０．５ｍｇないし約１．５ｍｇの経口で投与された１７β−エストラジオールに同等である量で投与すべきである。エストロゲンのホルモン補充量の別の特徴付けにおいて、それが事実上約１０ｍｃｇないし約２００ｍｃｇの経口で投与された１７α−エチニルエストラジオールに同等であるような十分なエストロゲンをいずれかの適する経路により投与する。好ましくは、こうしたエストロゲンは、事実上約２５ｍｃｇないし約１００ｍｃｇの経口で投与された１７α−エチニルエストラジオールに同等である量で投与されるべきである。連日経口錠剤の場合、約０．２５ｍｇないし約２．５ｍｇの間、およびより好ましくは約０．５ｍｇないし約１．５ｍｇの間の好ましい用量の１７β−エストラジオール（もしくは適するエストロゲンのＨＲＴの同等の量）が投与されることになる。特定の連日経口錠剤は０．５、０．７５、１．０もしくは１．５ｍｇの１７β−エストラジオールを含有してよい。膣リングの場合、好ましいリングは、約０．１５ｍｇないし約１．５ｍｇの間、およびより好ましくは約０．３ｍｇと約０．９ｍｇとの間の１７β−エストラジオールの１日用量（もしくは適するエストロゲンのＨＲＴの同等の量）を全身循環に送達する。特定の膣リングは１週間挿入することができ、そしてその期間に０．３、０．４５、０．６もしくは０．９ｍｇの１７β−エストラジオールの平均１日用量を全身循環に送達しうる。経皮貼付剤の場合、好ましい貼付剤は、約０．１５ｍｇないし約１．５ｍｇの間、およびより好ましくは約０．３ｍｇと約０．９ｍｇとの間の１７β−エストラジオールの１日用量（もしくは適するエストロゲンのＨＲＴの同等の量）を全身循環に送達する。特定の貼付剤は１週間装用することができ、そしてその期間に０．３、０．４５、０．６もしくは０．９ｍｇの１７β−エストラジオールの平均１日用量を皮膚の表面に送達しうる。前述にかかわらず、慣習的量のエストロゲンを使用することを本明細書で意図している。本発明に決定的に重要であるのはエストロゲン成分でないためである。当業者は、ＨＲＴレジメン中の継続的エストロゲンの必要とされる用量を十分に理解している。

本明細書の「プロゲストゲン」はプロゲストゲン性の効果を有するプロゲスチン受容体調節物質を指すことを意図している。強力なスルファターゼ阻害プロゲストゲンは、好ましくは、本明細書で、ＭＣＦ−７もしくはＴ−４７Ｄいずれかの乳癌細胞株中でのＥ_１ＳのＥ_２への転化においてノルエルゲストロミンのほぼ対応するＩＣ_５０もしくはそれ未満のＩＣ_５０を有するプロゲストゲン（もしくはそれを有するその実質的な代謝物を伴うプロゲストゲン）と定義する。強力なスルファターゼ阻害プロゲストゲンはまた、ＭＣＦ−７もしくはＴ−４７Ｄいずれかの乳癌細胞株中でのＥ_１ＳのＥ_２への転化においてメドロキシプロゲステロンアセテートの対応するＩＣ_５０より実質的により小さい、例えばメドロキシプロゲステロンアセテートのＩＣ_５０の１／３、１／２もしくは１／５の次数のＩＣ_５０を有するプロゲストゲン（もしくはそれを有するその実質的な代謝物を伴うプロゲストゲン）であってもよい。強力なスルファターゼ阻害プロゲストゲンはまた、ＭＣＦ−７もしくはＴ−４７Ｄいずれかの乳癌細胞株中でのＥ_１ＳのＥ_２への転化においてメドロキシプロゲステロンアセテート（ＭＰＡ）の対応するＩＣ_５０のせいぜい約１／１０、もしくはほぼ好ましくは１／１００のＩＣ_５０を有する（もしくはそれを有するその実質的な代謝物を伴うプロゲストゲン）とも定義し得る。強力なスルファターゼ阻害プロゲストゲンはまた、５０×１０^−６ｍｏｌ／ｌの濃度で試験で使用される場合にＭＣＦ−７もしくはＴ−４７Ｄいずれかの乳癌細胞株中でのＥ_１ＳのＥ_２への転化の最低約７０％、および好ましくは最低約９０％を阻害するプロゲストゲン（もしくは阻害するその実質的な代謝物を伴うプロゲストゲン）とも定義し得る。

ノルゲスチメート（ＮＧＭ）もしくはノルエルゲストロミン（ＮＧＭＮ）は本明細書で利用される好ましいプロゲストゲンであり、かつ、それぞれホルモン補充療法の技術分野で既知である。事実、ノルゲスチメートは現在、少なくとも１種の商業的に入手可能なＨＲＴ製品で使用されている。最も好ましいプロゲストゲンはノルエルゲストロミン（１７−ｄ−ノルゲスチメート）である。ノルエルゲストロミンはヒトにおけるノルゲスチメートの主代謝物であり、ノルゲスチメートの８０％およびそれ以上がｉｎｖｉｖｏでノルエルゲストロミンに転化される。この理由から、ノルエルゲストロミンについて示されているスルファターゼ酵素活性の阻害がノルゲスチメートに推論される。もちろん、スルファターゼ酵素活性の同等の阻害を得るためには、いかなる用量のノルエルゲストロミンに比較してもより多用量のノルゲスチメートを投与することが必要であるかもしれない。

いずれＨＲＴレジメンの目的も、基本的にはエストロゲン（実務において通常は１７β−エストラジオールである）の投与により達成される。プロゲストゲンは、問題の状態を治療ししかし部分的に子宮内膜に対するエストロゲンの作用に抗するため、それほど多量でないエストロゲンとともに投与される。プロゲストゲンの投与により妨害されないエストロゲンの長期投与が子宮内膜癌の発生の実質的な増大に至ることが観察されている。従って、プロゲストゲンが有効な子宮内膜保護量である量で投与されることが、本明細書のＨＲＴレジメンの第一の要件である。

本発明により、プロゲストゲンが有効な***保護量である量でホルモン補充療法の必要な閉経後もしくはエストロゲン欠乏の女性に投与されることが、今や付加的な一要件である。より具体的には、プロゲストゲンの***保護的なかつ別の方法で適する量の第一の特徴付けにおいて、それが約０．０３０ｍｇないし約０．５００ｍｇの経口で投与されるノルゲスチメートに子宮内膜保護および***保護効果において少なくとも同等であるような十分なスルファターゼ阻害プロゲストゲンが投与される。好ましくは、それが約０．０５０ｍｇないし約０．３００ｍｇの経口で投与されるノルゲスチメートに子宮内膜保護および***保護効果において少なくとも同等であるような十分なスルファターゼ阻害プロゲストゲンが投与される。プロゲストゲンの***保護量の別の特徴付けにおいてかつ子宮内膜保護量を想定して、各日の実質的部分の間に例えば５０％もしくはそれ以上、および好ましくは６７％もしくはそれ以上、ならびに最も好ましくは７５％もしくはそれ以上のスルファターゼ活性の実質的抑制を提供するのに十分な有効成分が投与される。１日の実質的な一部分は最低４時間を意味することを意図しているが、しかし、本発明内では最低８時間もしくは１２時間または２４時間さえ意味してもよい。

連日経口錠剤の場合は、約３０ｍｃｇないし約５００ｍｃｇの間、およびより好ましくは約４５ｍｃｇないし約３００ｍｃｇの間の好ましい用量のノルゲスチメートもしくはノルエルゲストロミン（または同等な***保護量の適するプロゲストゲン）が投与される。特定の連日経口錠剤は、４５、６０、９０、１２０、１８０もしくは２５０ｍｃｇのノルゲスチメートもしくはノルエルゲストロミンを含有してよい。膣リングの場合、好ましいリングは、約２０ｍｃｇないし約３００ｍｃｇの間、およびより好ましくは約３０ｍｃｇないし約１８０ｍｃｇの間のノルゲスチメートもしくはノルエルゲストロミン（または同等な***保護量の適するプロゲストゲン）の１日用量を全身循環に送達する。特定の膣リングは１週間挿入してよく、そして、２５、３５、５０、７０、１００もしくは１４０ｍｃｇのノルゲスチメートもしくはノルエルゲストロミンの平均１日用量をその期間に全身循環に送達する。経皮貼付剤の場合、好ましい貼付剤は、約２０ｍｃｇないし約３００ｍｃｇの間、およびより好ましくは約３０ｍｃｇないし約１８０ｍｃｇの間のノルゲスチメートもしくはノルエルゲストロミン（または同等な***保護量の適するプロゲストゲン）の１日用量を全身循環に送達する。特定の貼付剤は１週間装用してよく、そして、２５、３５、５０、７０、１００もしくは１４０ｍｃｇのノルゲスチメートもしくはノルエルゲストロミンの平均１日用量をその期間に全身循環に送達する。

表１に、ノルゲスチメート（ＮＧＭ）もしくはノルエルゲストロミン（ＮＧＭＮ）を含有する本発明の好ましい経口連日ＨＲＴレジメンを開示する。

表２に、ノルゲスチメート（ＮＧＭ）もしくはノルエルゲストロミン（ＮＧＭＮ）を含有する週ごとの貼付剤もしくはリングを使用する好ましい経皮ＨＲＴレジメンもしくは膣リングレジメンを開示する。週ごとの貼付剤もしくはリングは、ＮＧＭもしくはＮＧＭＮの報告された平均１日用量を全身循環中に送達する。

エストロゲンおよびプロゲストゲン成分は、好ましくは製薬学的に許容できる非毒性の担体もまた含有する錠剤中で一緒に経口で投与するが、しかし、それらはまた別個にも投与し得る。適する担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、乳糖、糖、ペプチン、デキストリン、デンプン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどを包含する。錠剤はまた、希釈剤、香味剤、可溶化剤、滑沢剤、懸濁化剤、結合剤もしくは錠剤崩壊剤として作用する１種もしくはそれ以上の物質ならびに被包化物質も含有してよい。一般に、有効成分は、一般に許容される製薬学的実務に従って、ガレノスの薬学で通常使用される通常の添加物、ベヒクルおよび／もしくは香味を改善する作用物質と一緒に加工される。ホルモン含有錠剤はまた、例えばイオン補助剤（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）、葉酸、カルシウム、ビタミンＢ_６、ビタミンＢ_１２などのような栄養補助剤も含有してよい。典型的な錠剤の製造において、有効成分を、噴霧乾燥した乳糖、滑沢剤および着色料とともに顆粒化しかつ圧縮する。

同一錠剤中に一緒にエストロゲンおよびプロゲストゲン成分を有することが好ましいとは言え、特定の患者の必要性を考えると特定のエステロゲンが望ましいであろうことが、ときにＨＲＴにおいて真実である。こうした場合は、エストロゲンを１供給源からの錠剤で購入することができ、そしてプロゲストゲンは第二の供給源から錠剤の形態で購入することができ、そして一緒に投与することができる。上で述べられたとおり、エストロゲンの選択は本発明にとって決定的に重要でなく、従って、本発明のプロゲストゲン成分を錠剤の形態で市場で個別に入手可能にすることが許容できかつ便宜的であるかもしれない。従って、連続的な連日経口投与に適合された一周期の個別の投薬ユニットを含んでなり、前記投薬ユニットが、製薬学的に許容できる担体との混合状態で、有効なホルモン補充量のエストロゲンと組合せで使用される場合に有効な子宮内膜保護量および有効な***保護量の双方である量の強力なスルファターゼ阻害プロゲストゲンであるプロゲストゲンを含有する、こうした治療の必要な閉経後もしくはエストロゲン欠乏の女性への投与のための継続的ホルモン補充治療ユニットもまた本発明により提供される。

経口錠剤は好ましくは、適正な連続投与のために１日投薬量が配置されている製薬学的キットもしくは包装の形態で包装される。本発明は従って同時性をもたされた固定された順序でレジメンの錠剤を含有する製薬学的単位にもまた関し、ここで、投薬ユニットの順序もしくは配置は連日投与のレジメンに対応する。

エストロゲンおよびプロゲストゲン成分は、貼付剤の使用により好ましくは一緒に経皮的に投与してよい。大まかに、貼付剤は、少なくとも、薬物を保持しかつ皮膚への薬物の付着もしくは送達を計量するための薬物溜めマトリックス、裏打ち、および該装置を患者に付着させるための接着剤層を含有する装置である。該装置は送達速度を調節するための薬物放出速度制御層などのような他の層を含有してもよい。該装置は皮膚を横断する薬物の浸透の速度を増大させるための浸透増強剤を含有してもよい。貼付剤は公知でありかつ当業者により理解される。貼付剤は今や、ある種のプロゲストゲンの投与およびとりわけ１７β−エストラジオールの投与のための市販される製品で使用されている。特定の貼付剤およびなお本明細書に記述される型のステロイドへのそれらの応用は、米国特許第５４７４７８３号；同第５６５６２８６号；同第５９５８４４６号；同第６０２４９７６号；同第５２５２３３４号；同第５００６３４２号；および同第４９０６４６３号明細書に記述されている。

エストロゲンおよびプロゲストゲン成分はリングの使用により好ましくは一緒に膣内に投与してよい。大まかに、リングは、有効なステロイドが分注されておりかつ膣の内層への有効成分の拡散のための液溜めおよびメーターとして作用する弾性の部分もしくは本体を有する装置である。該リングは、米国特許第３５４５３９７号明細書に記述されるところの全体に均一に分散されたステロイドを含むエラストマーから完全に構成されてよい。該リングは、米国特許第４０１２４９６号明細書に記述されるところの有効成分を含有する弾性層により取り囲まれた不活性の内側核を有してもよい。該リングは、当初は有効成分を含有しない薄い弾性層により取り囲まれた弾性の有効成分を含有する内側核を有してもよい。該リングは、米国特許第４２９２９６５号明細書に記述されるところの、有効成分を含有する弾性層により取り囲まれかつ当初は有効成分を含有しない変動する厚さの弾性の外側層により取り囲まれる不活性の核を有してもよい。エラストマー、リングの層状設計、その表面積、有効成分の濃度、有効成分の性質などが全部組み合わさって有効成分の放出速度を決定する。リングは公知でありかつ当業者により理解される。リングは今や、ある種のステロイドの投与のための市販される製品で使用されている。さらなる特定のリングおよび本明細書に記述される型のステロイドへのそれらの応用は、米国特許第４８７１５４３号および同第５１８８８３５号明細書に記述されている。

生物学的試験方法
化学物質
［６，７−^３Ｈ（Ｎ）］−エストロンスルフェート（^３Ｈ−Ｅ_１Ｓ）、アンモニウム塩（比活性５３Ｃｉ／ｍｍｏｌ）および［４−^１４Ｃ］−エストラジオール（^１４Ｃ−Ｅ_２）（比活性５７ｍＣｉ／ｍｍｏｌ）はニューイングランドニュークリアディビジョン（ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＮｕｃｌｅａｒＤｉｖｉｓｉｏｎ）（ＤｕＰｏｎｔｄｅＮｅｍｏｕｒｓ、ＬｅｓＵｌｌｓ、フランス）から購入した。放射性同位体の純度は使用前に適切な系での薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により評価した。Ｅ_１Ｓ、アンモニウム塩、未標識のＥ_１およびＥ_２（分析等級）はＳｉｇｍａ−ＡｌｄｒｉｃｈＣｈｉｍｌｅ（ＳｔＱｕｅｎｔｉｎＦａｌｌａｖｉｅｒ、フランス）から得た。１７−デアセチルノルゲスチメート（ＮＧＭＮ；１３−エチル−１７−ヒドロキシ−１８，１９−ジノル−１７α−プレグン−４−エン−２０−イン−３−オンオキシム）はＲ．Ｗ．ＪｏｈｎｓｏｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ、ＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ、（米国ニュージャージー州ラリタン）からの贈品であり；メドロキシプロゲステロンアセテート（ＭＰＡ、１７α−アセトキシ−６α−メチルプロゲステロン）はＳｉｇｍａ−ＡｌｄｒｉｃｈＣｈｉｍｉｅから得た。全部の他の化学物質は商業的に入手可能な最高等級のものであった。
細胞培養
ホルモン依存性のＭＣＦ−７およびＴ−４７Ｄヒト乳癌細胞株は、２ｍｍｏｌ／ｌＬ−グルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリン−ストレプトマイシンおよびＴ−４７Ｄについて５％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）（Ａ．Ｔ．Ｇ．Ｃ．、Ｍａｒｎｅ−ｌａ−Ｖａｌｌｅｅ、フランス）、もしくはＭＣＦ−７細胞について１０％ＦＣＳを補充しかつ５％ＣＯ_２の加湿雰囲気中３７℃でインキュベートした、１０ｍｍｏｌ／ｌＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．６）で緩衝したイーグル最小必須培地（ＭＥＭ）中で増殖させた。培地は週２回交換した。細胞は１０〜１２日ごとに継代し、そして３×１０^６細胞／フラスコで７５ｃｍ^２フラスコ（Ａ．Ｔ．Ｇ．Ｃ．）に再プレーティングした。実験の４日前に細胞を５％ステロイド枯渇処理したＦＣＳを含有するＭＥＭに移した。該ＦＣＳはデキストラン被覆炭（ＤＣＣ）で４℃で一夜処理しておいた（０．１〜１％ｗ／ｖ、ＤＣＣ−ＦＣＳ）。本明細書で使用したＭＣＦ−７およびＴ−４７Ｄ細胞株は、ブダペスト条約に従って、参照ＭＣＦ７＿ＪＪＰＲＤおよびＴ４７Ｄ＿ＪＪＰＲＤで２００２年５月１７日にＴｈｅＢｅｌｇｉａｎＣｏ−ｏｒｄｉｎａｔｅｄＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓｏｆＭｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ（ＢＣＣＭ）、ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｕｍｖｏｏｒＭｏｌｅｃｕｌａｉｒｅＢｉｏｌｏｇｉｅ、ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｅｉｔＧｅｎｔ、Ｋ．Ｌ．Ｌｅｄｅｇａｎｃｋｓｔｒａａｔ３５、Ｂ−９０００、Ｇｅｎｔ、ベルギーに寄託され、そして、それぞれ受託番号ＬＭＢＰ５８６２ＣＢおよびＬＭＢＰ５８６３ＣＢで公的に入手可能である。
［^３Ｈ］−Ｅ_１Ｓとともにインキュベートしたヒト乳癌細胞からの［^３Ｈ］−エストラジオールの単離および定量
コンフルエント前の細胞を、単独で（対照細胞）または多様な化合物すなわち５×１０^−５〜５×１０^−９ｍｏｌ／ｌの濃度の範囲でエタノールに溶解した（最終濃度＜０．２％）ＮＧＭＮもしくはＭＰＡとともに、５×１０^−９ｍｏｌ／ｌの［^３Ｈ］−Ｅ_１Ｓの添加を伴いＭＥＭ−ＤＣＣ−ＦＣＳ中３７℃で４時間インキュベートした。対照細胞はエタノールベヒクルのみを受領した。２４時間後に培地を除去し、細胞を氷冷ハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ、カルシウム・マグネシウムを含まない）（Ａ．Ｔ．Ｇ．Ｃ．）で２回洗浄し、そして掻き取りにより収集した。遠心分離後のペレットを８０％エタノールで処理し、そして放射活性を−２０℃で最低２４時間抽出した。細胞の放射活性の取り込みをエタノール性上清中で測定し、また、残存するペレット中のＤＮＡ含量をＢｕｒｔｏｎ．ＢｉｏｃｈｅｍＪｏｕｒｎａｌ６２：３１５−３２３、１９５６に従って評価した。［^１４Ｃ］−Ｅ_２（５，０００ｄｐｍ）を添加して分析による喪失をモニターし、また、未標識のＥ_１およびＥ_２（５０μｇ）を担体および参照指標として使用した。全エタノール抽出物中で、クロロホルム−酢酸エチル（４：１、ｖ／ｖ）系で展開するシリカゲル６０Ｆ_２５４（Ｍｅｒｃｋ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、ドイツ）上での薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によりＥ_２を単離した。２５４ｎｍのＵ．Ｖ．下でのエストロゲンの可視化後に適切な領域を小片に切断し、エタノール（０．５ｍｌ）を含む液体シンチレーションバイアルに入れ、そして３０分間抽出させた。３ｍｌのＯｐｔｉ−ｆｌｕｏｒ（Ｐａｃｋａｒｄ、Ｒｕｎｇｉｓ、フランス）を添加し、そしてバイアルを外的標準化によるクエンチ補正を用いて^３Ｈおよび^１４Ｃ含量について分析した。Ｅ_２の量的評価は細胞に関連した全放射活性のパーセントとして計算し、そしてその後Ｅ_１Ｓからの形成されたＥ_２／ｍｇＤＮＡのｆｍｏｌとして表した。
統計学的解析
データは平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）値として表す。スチューデントのｔ検定を使用して平均間の差違の有意性を評価し；≦０．０５のｐ値を有意とみなした。
結果
表３はホルモン依存性ヒト乳癌細胞株Ｔ−４７ＤにおけるＥ_１ＳのＥ_２への転化に対するＮＧＭＮおよびメドロキシプロゲステロンアセテート（ＭＰＡ）濃度の影響を示す。データは３回の独立した実験の二重の測定値の平均±ＳＥＭである。＊対照値（未処理細胞）に対しｐ≦０．０５；＊＊対照値（未処理細胞）に対しｐ≦０．００５

表４はホルモン依存性ヒト乳癌細胞株ＭＣＦ−７におけるＥ_１ＳのＥ_２への転化に対するＮＧＭＮおよびメドロキシプロゲステロンアセテート（ＭＰＡ）濃度の影響を示す。データは３回の独立した実験の二重の測定値の平均±ＳＥＭである。＊対照値（未処理細胞）に対しｐ≦０．０５；＊＊対照値（未処理細胞）に対しｐ≦０．００５

表５は、ホルモン依存性ヒト乳癌細胞株ＭＣＦ−７およびＴ−４７ＤにおけるＥ_１ＳのＥ_２への転化におけるＮＧＭＮおよびメドロキシプロゲステロンアセテート（ＭＰＡ）のＩＣ_５０値を示す。ＩＣ_５０値はＥ_１ＳのＥ_２への転化の５０％阻害に対応し、そして非直線回帰分析を使用して決定した。

本発明をとりわけ詳細に記述しかつそれが実行に移されうる様式で例示したため、その技術思想もしくは範囲から離れることなく、関与する基礎原理の無数の変形、応用、改変および拡大を行いうることが当業者に明らかであろう。前述は単に例示でありかつ本発明は記述されかつ示される本明細書の部分の特定の形態もしくは配置に制限されるべきでないことが理解されるべきである。

ヒト乳癌におけるエストロゲンの形成および変換に関与する酵素的過程を示す。

Claims

有効なホルモン補充量のエストロゲン、ならびに有効な子宮内膜保護量および有効な***保護量の双方である量の強力なスルファターゼ阻害プロゲストゲンであるプロゲストゲンの組合せを、ホルモン補充療法の必要な閉経後もしくはエストロゲン欠乏の女性に継続投与する段階を含んでなる、ホルモン補充療法の方法。
一周期の期間の間の連続的な連日経口投与に適合された一周期の個別の投薬ユニットを含んでなり、前記投薬ユニットが、製薬学的に許容できる担体との混合状態で、有効なホルモン補充量のエストロゲン、ならびに有効な子宮内膜保護量および有効な***保護量の双方である量の強力なスルファターゼ阻害プロゲストゲンであるプロゲストゲンの組合せを含有する、ホルモン補充療法の必要な閉経後もしくはエストロゲン欠乏の女性への投与のための継続的ホルモン補充治療ユニット。
一周期の期間の間の連続的投与に適合された１個もしくはそれ以上の経皮貼付剤を含んでなり、治療ユニットの前記経皮貼付剤が、一周期の継続投与のための、有効なホルモン補充量のエストロゲンならびに有効な子宮内膜保護量および有効な***保護量の双方である量の強力なスルファターゼ阻害プロゲストゲンであるプロゲストゲンの組合せを集合的に含有する、ホルモン補充療法の必要な閉経後もしくはエストロゲン欠乏の女性への投与のための継続的ホルモン補充治療ユニット。
一周期の期間の間の連続的投与に適合された１個もしくはそれ以上の膣リングを含んでなり、治療ユニットの前記膣リングが、一周期の継続投与のための、有効なホルモン補充量のエストロゲンならびに有効な子宮内膜保護量および有効な***保護量の双方である量の強力なスルファターゼ阻害プロゲストゲンであるプロゲストゲンの組合せを集合的に含有する、ホルモン補充療法の必要な閉経後もしくはエストロゲン欠乏の女性への投与のための継続的ホルモン補充治療ユニット。
一周期の期間の間の連続的な連日経口投与に適合された一周期の個別の投薬ユニットを含んでなり、前記投薬ユニットが、製薬学的に許容できる担体との混合状態で、有効なホルモン補充量のエストロゲンと組合せで使用された場合に有効な子宮内膜保護量および有効な***保護量の双方である量の強力なスルファターゼ阻害プロゲストゲンとなるプロゲストゲンを含有する、ホルモン補充療法の必要な閉経後もしくはエストロゲン欠乏の女性への投与のための継続的ホルモン補充治療ユニット。