JP2003342173A - Ｎｏラジカル消去剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【解決課題】新規なＮＯラジカル消去剤を提供する。 【解決手段】下記の式 【化１】 （式中、各記号は明細書中で定義したものと同義であ
る。）で示されるピラゾロン誘導体その水和物、又はそ
の薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する。 【効果】本発明の化合物は、ＮＯラジカルに起因する疾
患の予防や治療に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、一酸化窒素ラジカ
ルの消去剤として有用な医薬に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】一酸化窒素ラジカル（以下、ＮＯラジカ
ルという。）は血管系をはじめ、神経系、免疫系など、
およそ体内のあらゆるところで多彩な作用を発揮してい
る。しかし通常の生体内メッセンジャーと比べて化学反
応性が高く、非常に不安定な分子であり、その強い生理
活性のゆえに、様々な病態との因果関係も指摘されてい
る。従ってＮＯを消去する薬剤は血管系、神経系、免疫
系の薬剤として有用であると考えられる。

【０００３】本発明者らはＣＯＸ−２選択的阻害薬であ
るエトドラク（etodolac）にＮＯラジカル消去活性があ
ることを見出し、既に報告している（医学のあゆみ、１
９９、４７１−４７２（２００１））。

【０００４】一方、以下に示す式（Ｉ）

【０００５】

【化２】

【０００６】（式中、Ｒ₁は水素原子、アリール、炭素
数１〜５のアルキル又は総炭素数３〜６のアルコキシカ
ルボニルアルキルを表し、Ｒ₂は、水素原子、アリール
オキシ、アリールメルカプト、炭素数１〜５のアルキル
又は１〜３のヒドロキシアルキルを表し、あるいは、Ｒ
₁及びＲ₂は、共同して炭素数３〜５のアルキレンを表
し、Ｒ₃は水素原子、炭素数１〜５のアルキル、炭素数
５〜７のシクロアルキル、炭素数１〜３のヒドロキシア
ルキル、ベンジル、ナフチル又はフェニル、又は炭素数
１〜５のアルコキシ、炭素数１〜３のヒドロキシアルキ
ル、総炭素数２〜５のアルコキシカルボニル、炭素数１
〜３のアルキルメルカプト、炭素数１〜４のアルキルア
ミノ、総炭素数２〜８のジアルキルアミノ、ハロゲン原
子、トリフルオロメチル、カルボキシル、シアノ、水酸
基、ニトロ、アミノ、及びアセトアミドからなる群から
選ばれる同一若しくは異なる１〜３個の置換基で置換さ
れたフェニルを表す。）で表されるピラゾロン誘導体に
ついては、医薬の用途として、脳機能正常化作用（特公
平５−３１５２３号公報）、過酸化脂質生成抑制作用
（特公平５−３５１２８号公報、例１の化合物）、抗潰
瘍作用（特開平３−２１５４２５号公報）、及び血糖上
昇抑制作用（特開平３−２１５４２６号公報）等が知ら
れている。しかしながら、これらの各刊行物には、この
化合物がＮＯラジカル消去活性を有することを示唆ない
し教示する記載はない。

【０００７】また、上記式（Ｉ）の化合物は、２００１
年６月以来、脳保護剤（一般名「エダラボン」、商品名
「ラジカット」：三菱ウェルファーマ株式会社製造・販
売）として上市されているが、この化合物がＮＯラジカ
ルの消去活性を有するという報告は未だかってなされて
いない。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、ＮＯ
ラジカルの消去剤として有用な医薬を提供することにあ
る。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明者は上記の課題を
解決すべく鋭意努力した結果、従来、脳保護作用を有す
ることが知られていたピラゾロン誘導体、その水和物、
又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含む
医薬組成物がＮＯラジカルの消去活性を有することを見
出し、本発明を完成するに至った。

【００１０】すなわち本発明は、以下のＮＯラジカル消
去剤に関する。 （１）下記の式（Ｉ）

【００１１】

【化３】

【００１２】（式中、各記号は前記と同義である。）で
示されるピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容さ
れる塩、又はそれらの水和物もしくは溶媒和物を有効成
分として含有するＮＯラジカル消去剤。

【００１３】（２）３−メチル−１−フェニル−２−ピ
ラゾリン−５−オン若しくはその生理的に許容される
塩、又はそれらの水和物もしくは溶媒和物を有効成分と
して含有するＮＯラジカル消去剤。本発明のＮＯラジカ
ル消去剤に含有される前記式（Ｉ）のピラゾロン誘導体
は、合目的な任意の方法により合成することができ、好
ましい合成方法の例としては特開昭６２−１０８８１４
号公報に記載されている方法が挙げられる。

【００１４】本発明のＮＯラジカル消去剤の有効成分と
しては、遊離形態の前記式（Ｉ）のピラゾロン誘導体を
用いてもよいが、その任意の水和物や溶媒和物、あるい
は、前記式（Ｉ）のピラゾロン誘導体又はその任意の水
和物や溶媒和物の生理的に許容される塩を用いることも
できる。また、該ピラゾロン誘導体には特公平５−３１
５２３号公報第５欄上段の化学構造式に示されるような
互変異性体（下式（Ｉ’）又は（Ｉ’’））が存在する
が、本発明の医薬の有効成分には、これらの異性体のす
べてが包含されることはいうまでもない。

【００１５】

【化４】

【００１６】前記式（Ｉ）において、Ｒ¹の定義におけ
るアリール基としては、フェニル基並びにメチル基、ブ
チル基、メトキシ基、ブトキシ基、塩素原子及び水酸基
等の置換基で置換されたフェニル基等が挙げられる。

【００１７】Ｒ¹、Ｒ²及びＲ³の定義における炭素数1〜
5のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピ
ル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、sec
−ブチル基、tert−ブチル基、ペンチル基等が挙げられ
る。

【００１８】Ｒ¹の定義における総炭素数3〜6のアルコ
キシカルボニルアルキル基としては、メトキシカルボニ
ルメチル基、エトキシカルボニルメチル基、プロポキシ
カルボニルメチル基、メトキシカルボニルエチル基、メ
トキシカルボニルプロピル基等が挙げられる。

【００１９】Ｒ²の定義におけるアリールオキシ基とし
ては、フエノキシ基、ｐ−メチルフエノキシ基、ｐ−メ
トキシフエノキシ基、ｐ−クロロフエノキシ基、ｐ−ヒ
ドロキシフエノキシ基等が挙げられ、アリールメルカプ
ト基としては、フェニルメルカプト基、ｐ−メチルフェ
ニルメルカプト基、ｐ−メトキシフェニルメルカプト
基、ｐ−クロロフェニルメルカプト基、ｐ−ヒドロキシ
フェニルメルカプト基等が挙げられる。

【００２０】Ｒ²及びＲ³の定義における炭素数1〜3のヒ
ドロキシアルキル基としては、ヒドロキシメチル基、2
−ヒドロキシエチル基、3−ヒドロキシプロピル基等が
挙げられる。Ｒ³の定義における炭素数5〜7のシクロア
ルキル基としては、シクロペンチル基、シクロヘキシル
基、シクロヘプチル基等が挙げられる。

【００２１】Ｒ³の定義において、フェニル基の置換基
における炭素数1〜5のアルコキシ基としては、メトキシ
基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブ
トキシ基、ペンチルオキシ基等が挙げられ、総炭素数2
〜5のアルコキシカルボニル基としては、メトキシカル
ボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニ
ル基、ブトキシカルボニル基等が挙げられ、炭素数1〜3
のアルキルメルカプト基としては、メチルメルカプト
基、エチルメルカプト基、プロピルメルカプト基等が挙
げられ、炭素数1〜4のアルキルアミノ基としては、メチ
ルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルアミノ基、ブチ
ルアミノ基等が挙げられ、総炭素数2〜8のジアルキルア
ミノ基としては、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ
基、ジプロピルアミノ基、ジブチルアミノ基等が挙げら
れる。

【００２２】本発明で用いる式（Ｉ）の化合物の具体例
としては、例えば、以下に示す化合物が挙げられる。

【００２３】３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリ
ン−５−オン、３−メチル−１−（２−メチルフェニ
ル）−２−ピラゾリン−５−オン、３−メチル−１−
（３−メチルフェニル）−２−ピラゾリン−５−オン、
３−メチル−１−（４−メチルフェニル）−２−ピラゾ
リン−５−オン、３−メチル−１−（３，４−ジメチル
フェニル）−２−ピラゾリン−５−オン、１−（４−エ
チルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オ
ン、３−メチル−１−（４−プロピルフェニル）−２−
ピラゾリン−５−オン、１−（４−ブチルフェニル）−
３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン、１−（３−ト
リフルオロメチルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾ
リン−５−オン、１−（４−トリフルオロメチルフェニ
ル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン、１−
（２−メトキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリ
ン−５−オン、１−（３−メトキシフェニル）−３−メ
チル−２−ピラゾリン−５−オン、１−（４−メトキシ
フェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン、
１−（３，４−ジメトキシフェニル）−３−メチル−２
−ピラゾリン−５−オン、１−（４−エトキシフェニ
ル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン、３−メ
チル−１−（４−プロポキシフェニル）−２−ピラゾリ
ン−５−オン、１−（４−ブトキシフェニル）−３−メ
チル−２−ピラゾリン−５−オン、１−（２−クロロフ
ェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン、１
−（３−クロロフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリ
ン−５−オン、１−（４−クロロフェニル）−３−メチ
ル−２−ピラゾリン−５−オン、１−（３，４−ジクロ
ロフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オ
ン、１−（４−ブロモフェニル）−３−メチル−２−ピ
ラゾリン−５−オン、１−（４−フルオロフェニル）−
３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン、１−（３−ク
ロロ−４−メチルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾ
リン−５−オン、１−（３−メチルメルカプトフェニ
ル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン、１−
（４−メチルメルカプトフェニル）−３−メチル−２−
ピラゾリン−５−オン、４−（３−メチル−５−オキソ
−２−ピラゾリン−１−イル）安息香酸、１−（４−エ
トキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾ
リン−５−オン、１−（４−ニトロフェニル）−３−メ
チル−２−ピラゾリン−５−オン、３−エチル−１−フ
ェニル−２−ピラゾリン−５−オン、１−フェニル−３
−プロピル−２−ピラゾリン−５−オン、１，３−ジフ
ェニル−２−ピラゾリン−５−オン、３−フェニル−１
−（ｐ−トリル）−２−ピラゾリン−５−オン、１−
（４−メトキシフェニル）−３−フェニル−２−ピラゾ
リン−５−オン、１−（４−クロロフェニル）−３−フ
ェニル−２−ピラゾリン−５−オン、３，４−ジメチル
−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン、４−イソ
ブチル−３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−
５−オン、４−（２−ヒドロキシエチル）−３−メチル
−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン、３−メチ
ル−４−フェノキシ−１−フェニル−２−ピラゾリン−
５−オン、３−メチル−４−フェニルメルカプト−１−
フェニル−２−ピラゾリン−５−オン、２，３ａ，４，
５，６，７−ヘキサヒドロ−２−フェニルインダゾール
−３−オン、３−（エトキシカルボニルメチル）−１−
フェニル−２−ピラゾリン−５−オン、１−フェニル−
２−ピラゾリン−５−オン、３−メチル−２−ピラゾリ
ン−５−オン、１，３−ジメチル−２−ピラゾリン−５
−オン、１−エチル−３−メチル−２−ピラゾリン−５
−オン、１−ブチル−３−メチル−２−ピラゾリン−５
−オン、１−（２−ヒドロキエチル）−３−メチル−２
−ピラゾリン−５−オン、１−シクロヘキシル−３−メ
チル−２−ピラゾリン−５−オン、１−ベンジル−３−
メチル−２−ピラゾリン−５−オン、１−（α−ナフチ
ル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン、１−メ
チル−３−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン、３−
メチル−１−（４−メチルフェニル）−２−ピラゾリン
−５−オン、１−（４−ブチルフェニル）−３−メチル
−２−ピラゾリン−５−オン、１−（４−メトキシフェ
ニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン、１−
（４−ブトキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリ
ン−５−オン、１−（４−クロロフェニル）−３−メチ
ル−２−ピラゾリン−５−オン、１−（４−ヒドロキシ
フェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン、
１−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−３−メチル−
２−ピラゾリン−５−オン、１−（２−ヒドロキシフェ
ニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン、１−
（３−ヒドロキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾ
リン−５−オン、１−（４−ヒドロキシフェニル）−３
−メチル−２−ピラゾリン−５−オン、１−（３，４−
ヒドロキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−
５−オン、１−（４−ヒドロキシフェニル）−３−フェ
ニル−２−ピラゾリン−５−オン、１−（４−ヒドロキ
シメチルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５
−オン、１−（４−アミノフェニル）−３−メチル−２
−ピラゾリン−５−オン、１−（４−メチルアミノフェ
ニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン、１−
（４−エチルアミノフェニル）−３−メチル−２−ピラ
ゾリン−５−オン、１−（４−ブチルアミノフェニル）
−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン、１−（４−
ジメチルアミノフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリ
ン−５−オン、１−（アセトアミドフェニル）−３−メ
チル−２−ピラゾリン−５−オン、１−（４−シアノフ
ェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン

【００２４】前記式（Ｉ）のピラゾロン誘導体の塩とし
ては、酸付加塩又は塩基付加塩を用いることができる。
例えば、塩酸塩、硫酸塩、臭化水素酸塩、若しくはリン
酸塩などの鉱酸塩；メタンスルホン酸塩、パラトルエン
スルホン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、クエン酸塩、リン
ゴ酸塩、若しくはフマル酸塩などの有機酸塩；ナトリウ
ム塩、カリウム塩、若しくはマグネシウム塩などの金属
塩；アンモニウム塩；又は、エタノールアミン若しくは
２−アミノ−２−メチル−１−プロパノールなどの有機
アミン塩などを用いることができるが、生理的に許容さ
れるものであれば塩の種類は特に限定されることはな
い。

【００２５】本発明のＮＯラジカル消去剤の投与形態は
特に制限されず、経口的・非経口的に投与することがで
きる。好ましくは、非経口的に、注射あるいは点滴によ
り静脈内に投与すればよい。本発明のＮＯラジカル消去
剤としての有効成分である前記式（Ｉ）の化合物又はそ
の塩の１種又は２種以上をそのまま患者に投与してもよ
いが、好ましくは、有効成分と薬理学的及び製剤学的に
許容しうる添加物を加え、当業者に周知な形態の製剤と
して提供されるべきである。

【００２６】薬理学的及び製剤学的に許容しうる添加物
としては、例えば、賦形剤、崩壊剤ないし崩壊補助剤、
結合剤、滑沢剤、コーティング剤、色素、希釈剤、基
剤、溶解剤ないし溶解補助剤、等張化剤、ｐＨ調節剤、
安定化剤、噴射剤、及び粘着剤等を用いることができ
る。経口投与に適する製剤の例としては、例えば、錠
剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、液剤、又はシ
ロップ剤等を挙げることができ、非経口投与に適する製
剤としては、例えば、注射剤、点滴剤、又は坐剤などを
挙げることができる。

【００２７】経口投与に適する製剤には、添加物とし
て、例えば、ブドウ糖、乳糖、Ｄ−マンニトール、デン
プン、又は結晶セルロース等の賦形剤；カルボキシメチ
ルセルロース、デンプン、又はカルボキシメチルセルロ
ースカルシウム等の崩壊剤又は崩壊補助剤；ヒドロキシ
プロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロ
ース、ポリビニルピロリドン、又はゼラチン等の結合
剤；ステアリン酸マグネシウム又はタルク等の滑沢剤；
ヒドロキシプロピルメチルセルロース、白糖、ポリエチ
レングリコール又は酸化チタン等のコーティング剤；ワ
セリン、流動パラフィン、ポリエチレングリコール、ゼ
ラチン、カオリン、グリセリン、精製水、又はハードフ
ァット等の基剤を用いることができる。注射あるいは点
滴用に適する製剤には、注射用蒸留水、生理食塩水、プ
ロピレングリコール等の水性あるいは用時溶解型注射剤
を構成しうる溶解剤又は溶解補助剤；ブドウ糖、塩化ナ
トリウム、Ｄ−マンニトール、グリセリン等の等張化
剤；無機酸、有機酸、無機塩基又は有機塩基等のｐＨ調
節剤等の製剤用添加物を用いることができる。

【００２８】非経口投与に適する製剤のうち注射または
点滴用に適する製剤には、注射用蒸留水、生理食塩水、
プロピレングリコール等の水性あるいは用時溶解型注射
剤を構成しうる溶解剤又は溶解補助剤；ブドウ糖、塩化
ナトリウム、Ｄ−マンニトール、グリセリン等の等張化
剤；無機酸、有機酸、無機塩基又は有機塩基等のｐＨ調
節剤等の製剤用添加物を添加してもよい。なお、上記の
式（Ｉ）の化合物を有効成分とする脳保護剤（点滴剤）
が、すでに臨床において使用されているので（一般名
「エダラボン」、商品名「ラジカット」：三菱ウェルフ
ァーマ株式会社製造・販売）、本発明のＮＯラジカル消
去剤として、上記市販製剤をそのまま用いることができ
る。

【００２９】本発明の医薬は、生体内に存在する過剰な
ＮＯラジカルを消去し、正常なＮＯラジカル濃度にする
作用およびＮＯラジカルが過剰に発生することが予測さ
れる場合にあらかじめ投与し生体内に過剰なＮＯラジカ
ルが発生することを防止する作用を有している。すなわ
ち、本明細書においてＮＯラジカル消去剤とは、生体内
に存在するすべてのＮＯラジカルを完全に消去するもの
をいうのではなく、生体内にある過剰なＮＯラジカルを
消去し生体の維持に適切な量になるように調節するもの
をいう。

【００３０】本発明の医薬の投与経路は特に限定され
ず、経口的または非経口的に投与することができる。例
えば、ＮＯラジカルが急激に過剰発生している状態にあ
る患者には、本発明の医薬を静脈内、動脈内、又は心臓
内に注射により投与することが好ましい。また、ＮＯラ
ジカルが常に過剰発生している状態にある患者には、予
防的に本発明の医薬を経口投与しておくか、注射若しく
は点滴などの非経口的投与によって予防的に投与するこ
とが好適である。

【００３１】本発明の医薬の投与量は、予防又は治療の
目的、患者の年齢や状態などの条件に応じて適宜選択可
能であるが、一般的には、成人に対して０．１〜１００
ｍｇ／ｋｇ程度を注射または点滴により投与するか、
０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ程度を経口的に投与すること
が好ましい。注射により投与する場合には、例えば、特
開昭６３−１３２８３３号公報に記載された注射剤など
を用いることが好適である。なお、本発明の医薬の有効
成分である上記化合物は安全性が高く (マウス腹腔内投
与ＬＤ₅₀ ２０１２ ｍｇ／ｋｇ；ラット経口投与ＬＤ
₅₀ ３，５００ｍｇ／ｋｇ： Ｒｅｇｉｓｔｒｙ ｏｆ
Ｔｏｘｉｃ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａ
ｌ Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ, １９８１−１９８２) 、発
癌性もないことが証明されている（Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ｃａｎｃｅｒ ＩｎｓｔｉｔｕｔｅＲｅｐｏｒｔ，８
９，１９７８）。

【００３２】

【実施例】以下、本発明を実施例によりさらに具体的に
説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定される
ことはない。

【００３３】合成例：１−フェニル−３−メチル−２−
ピラゾリン−５−オンの合成 エタノール５０ｍｌ中にアセト酢酸エチル１３．０ｇ及
びフェニルヒドラジン１０．８ｇを加え、３時間還流攪
拌した。反応液を放冷後、析出した結晶をろ取し、エタ
ノールより再結晶して、表題の化合物１１．３ｇを無色
結晶として得た。 収率 ６７％ 融点 １２７．５〜１２８．５℃

【００３４】実験例１ １−フェニル−３−メチル−２
−ピラゾリン−５−オンのＮＯラジカル消去活性の測定 カルボキシ−ＰＴＩＯ（２−（４−カルボキシフェニ
ル）−４，４，５，５−テトラメチルイミダゾリン−１
−オキシ−３−オキサイドのナトリウム塩）と名付けら
れた、安定な有機ラジカルであるナイトロニルナイトロ
オキサイド誘導体は ex vivo および in vivo において
ＮＯラジカルを特異的に消去する活性を持っていること
が既に報告されている（Biochemistry, 32, 827-832(19
93)、Biochem. Biophys. Res. Commun., 202, 923-930
(1994)、Life sci., 54, PL 185-190(1994)）。ＥＳＲ
でＮＯラジカルを検出する際、スピントラップ剤として
のカルボキシ−ＰＴＩＯの有用性について報告している
いくつかの文献がある（J. Neurochem., 67, 2208-2211
(1996)、Res. Commun. Molecular. Patholo. Pharmacol
o., 96, 113-122(1997)、J. Neurochem., 76,1895-1904
(2001)、Methods of Enzymology. 268, 211-222(199
6)）。

【００３５】今回は２０μＭのカルボキシ−ＰＴＩＯと
５０μＭのＮＯＣ−７（１−ヒドロキシ−２−オキソ−
３−（Ｎ−メチル−３−アミノプロピル）−３−メチル
−１−トリアゼン）（同仁化学社製）の反応混液から発
生したＮＯラジカルを３０％ＤＭＳＯ存在下の０．１Ｍ
リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中で測定した。ＮＯラジカ
ル供与体として開発されたＮＯＣ−７はアルカリ溶液中
では安定だが、中性および酸性条件下ではＮＯラジカル
を生成する不安定な化合物（３７度、ｐＨ７．４条件下
で半減期５分）である。カルボキシ−ＰＴＩＯのＥＳＲ
シグナルは強度比＝１：２：３：２：１の５つのピーク
で構成されていた。ＮＯＣ−７から発生したＮＯラジカ
ルは以下の反応式に示すように、カルボキシ−ＰＴＩＯ
をカルボキシ−ＰＴＩ（１−オキソ−２−（４−カルボ
キシフェニル）−４，４，５，５−テトラメチルイミダ
ゾリンのナトリウム塩）へと変換させ、カルボキシ−Ｐ
ＴＩのＥＳＲシグナルは７つのピークとなって現れた。

【００３６】

【化５】

【００３７】カルボキシ−ＰＴＩのラジカル強度はカル
ボキシ−ＰＴＩＯとＮＯＣ−７の反応時間と共に増強
し、２０分で最高値に達し、その後変化はなかった（図
１）。カルボキシ−ＰＴＩＯのＥＳＲシグナルか、カル
ボキシ−ＰＴＩのＥＳＲシグナルかはシグナルの数やシ
グナル強度比により簡単に見分けることが出来る（図
２）。また、ＮＯラジカルの強度はカルボキシ−ＰＴＩ
の最初のピーク（図２中、矢印で示した。）と酸化マン
ガンのピークとの比から求めた。

【００３８】ところで、カルボキシ−ＰＴＩＯはアスコ
ルビン酸やチオール化合物等の様々な還元剤により非特
異的に還元されやすいことが知られている。従って、本
発明化合物の還元活性をＮＯラジカル消去活性として測
定してしまうことが危惧された。そこで、本発明化合物
の還元活性をＮＯラジカル消去活性として測定すること
がないことを確認するため、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７．４）中でカルボキシ−ＰＴＩＯ（２０μＭ）と１
−フェニル−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン
（０．１〜１０００μＭ）を混合した。しかしいずれの
濃度においても混合後５分間、１−フェニル−３−メチ
ル−２−ピラゾリン−５−オンはカルボキシ−ＰＴＩＯ
を還元しなかった。以上のことから、１−フェニル−３
−メチル−２−ピラゾリン−５−オンのＮＯラジカル消
去活性は混合後３分の時点で測定することとした。

【００３９】次に、カルボキシ−ＰＴＩＯとＮＯＣ−７
から生成されるカルボキシ−ＰＴＩと１−フェニル−３
−メチル−２−ピラゾリン−５−オンの相互作用につい
て次に示す方法で試験を行った。リン酸緩衝液（ｐＨ
７．４）中、ＮＯＣ−７（５０μＭ）とカルボキシ−Ｐ
ＴＩＯ（２０μＭ）を２０分間攪拌しカルボキシ−ＰＴ
Ｉを生成させた。その後、１−フェニル−３−メチル−
２−ピラゾリン−５−オンを加え、３分後にカルボキシ
−ＰＴＩのシグナルを測定した。１−フェニル−３−メ
チル−２−ピラゾリン−５−オンが低濃度（１０μ）で
あるとカルボキシ−ＰＴＩのシグナルは消失しなかった
が、高濃度にすると（５００μＭ、１０００μＭ）にす
ると顕著にカルボキシ−ＰＴＩのシグナルが消失（それ
ぞれ２０％、４０％）した（図３および図４）。これら
の結果から１−フェニル−３−メチル−２−ピラゾリン
−５−オンのＥＣ₅₀値は９．３μＭと算出された。

【００４０】最後に今回使用した機器および機器の条件
設定を以下に示す。 機器：ＪＥＯＬ ＪＥＳ ＲＥ１Ｘ、Ｘ−ｂａｎｄ Ｅ
ＳＲ装置（１００ＫＨｚ、日本電子社製） 機器の条件設定： センターフィールド（center field）：３３５．０±
５．０ｍＴ マイクロウェーブパワー（microwave power）：５ｍＷ モジュレーションアンプリチュード（modulation ampli
tude）：０．１ｍＴ ゲイン（gain）：２００ タイムコンスタント（time constant）：０．１秒 スキャンニングタイム（scanning time）：２分

【００４１】以上の結果から、本発明の医薬がＮＯラジ
カルを消去することが明らかになり、血管系、神経系、
免疫系の薬剤として有用であると考えられる。

【００４２】

【発明の効果】本発明の医薬はＮＯラジカル消去剤とし
て有用である。

【００４３】

【図面の簡単な説明】

【図１】カルボキシ−ＰＴＩのラジカル強度の経時変化
を示す図である。

【図２】カルボキシ−ＰＴＩＯとカルボキシ−ＰＴＩの
ＥＳＲシグナルを示す図である。

【図３】１−フェニル−３−メチル−２−ピラゾリン−
５−オン濃度とＮＯラジカル強度の関係を示す図であ
る。

【図４】１−フェニル−３−メチル−２−ピラゾリン−
５−オン濃度変化によるカルボキシ−ＰＴＩのＥＳＲシ
グナルの変化を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｄ 231/26 Ｃ０７Ｄ 231/26

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】下式（Ｉ） 【化１】 （式中、Ｒ₁は水素原子、アリール、炭素数１〜５のア
   ルキル又は総炭素数３〜６のアルコキシカルボニルアル
   キルを表し、Ｒ₂は、水素原子、アリールオキシ、アリ
   ールメルカプト、炭素数１〜５のアルキル又は１〜３の
   ヒドロキシアルキルを表し、あるいは、Ｒ₁及びＲ₂は、
   共同して炭素数３〜５のアルキレンを表し、Ｒ₃は水素
   原子、炭素数１〜５のアルキル、炭素数５〜７のシクロ
   アルキル、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、ベンジ
   ル、ナフチル又はフェニル、又は炭素数１〜５のアルコ
   キシ、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、総炭素数２
   〜５のアルコキシカルボニル、炭素数１〜３のアルキル
   メルカプト、炭素数１〜４のアルキルアミノ、総炭素数
   ２〜８のジアルキルアミノ、ハロゲン原子、トリフルオ
   ロメチル、カルボキシル、シアノ、水酸基、ニトロ、ア
   ミノ、及びアセトアミドからなる群から選ばれる同一若
   しくは異なる１〜３個の置換基で置換されたフェニルを
   表す。）で表されるピラゾロン誘導体若しくはその生理
   的に許容される塩、又はそれらの水和物もしくは溶媒和
   物を有効成分として含有する一酸化窒素ラジカル消去
   剤。
2. 【請求項２】３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリ
   ン−５−オン若しくはその生理的に許容される塩、又は
   それらの水和物もしくは溶媒和物を有効成分として含有
   する一酸化窒素ラジカル消去剤。