JP2002529421A - 血管過浸透性の阻害方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 個体における血管過浸透性は、屡々有害な多くの生理的事象への前ぶれである。これらの事象の中に、浮腫、血管外遊出、異常トランス内皮輸血、溢血、滲出、流出、基質沈着（屡々異常な増殖を伴う）及び血管血圧低下がある。血管過浸透性とこれに続く事象は、ＫＤＲチロシンキナーゼとして知られる、ＶＥＧＦチロシンキナーゼ受容体の酵素活性を阻害する化合物の投与により、阻害することができる。好ましい投与される化合物は、ＫＤＲチロシンキナーゼを選択的に阻害するが、他のＶＥＧＦチロシンキナーゼ受容体であるＦｌｔ−１チロシンキナーゼの活性を遮断することはない。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 浮腫は、間質液（組織液）容量の増加としての説明することができる。通常、
これは原則的に緩衝を必要とする異常な条件である。この条件は、体液が、内皮
の浸透性の増加のために血管系を離れることから、屡々発生する。この内皮の浸
透性の増加は、巨大分子の血管外遊出に屡々関連しており、その間質（組織間）
空間に新たな滞留が見られる。

【０００２】 浮腫及び個体における浮腫状態の形成の基礎となる、生理学及び生化学的機構
には、種々のものがある。１種以上のこれらの機構の重要な仲介物質（メディエ
イタ）は、血管の内皮細胞の成長（増殖）である。この因子は、血管内皮細胞の
輸送を上方に調節し、そして膨大な内皮床、例えば皮膚、皮下組織、腹膜壁、腸
間膜、横隔膜、気管、気管支、十二指腸及び子宮においてその浸透性を増加させ
る。これらの部位での、著しい血管外遊出、内皮全域の輸血における変化、溢血
及び巨大分子の付着、及び長期の低血圧は、これらの増加した浸透効果を伴うで
あろう。これらの過程は、新血管新生を促進する前兆と考えられる。ＶＥＧＦは
、炎症部位における、潰瘍性Ｔ細胞、マクロファージ、好中球及び好酸球等によ
り発現する。この因子は、低酸素症、特定の昇圧ホルモン、成長因子、再生ホル
モン及び多数の炎症（潰瘍）性細胞***により上方に調節される。ＶＥＧＦ−仲
介血管浸透性は、腫瘍腹水、子宮内膜症、成人呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）、心
筋バイパス後の低血圧及び過浸透性ふくれ、火傷及び外傷による浮腫反応、糖尿
病における内皮機能不全、卵巣過刺激症候群及び眼の浮腫、等の疾患に関係して
いる。

【０００３】 従って、ＶＥＧＦ生成又は活性の阻害は、有益、特に上記列挙した疾患の発現
に対して有益であろうことは明らかである。特に、ＶＥＧＦ仲介過浸透性及び浮
腫並びに関連する症候群を阻害することができる試薬は、これらの疾患を緩和す
るために有用であろう。

【０００４】 プロテインチロシンキナーゼ：プロテインチロシンキナーゼ（ＰＴＫｓ）は、
酵素活性を有する蛋白の内、大きく、多様な種類のものである。ＰＴＫｓは、細
胞の成長及び分化に重要な役割を示す（検討のため、Schlessinger & Ullrich,
1992, Neuron 9:383-391参照）。

【０００５】 ＰＴＫｓにおける異常刺激、発現及び変異は、制御できない細胞増殖（例、悪
性腫瘍の増殖）、或いは根本的なな発生、調節又は修復過程における欠陥をもた
らすことが示された。結果として、生物医学団体が、夥しい労力を消費して、Ｐ
ＴＫ科（ファミリー）に属するものの特定の生物学的役割、分化過程のそれらの
機能、腫瘍形成そして他の病気におけるそれらの関わり合い、リガンド刺激及び
新規薬剤の発現で活性化されたシグナル形質導入経路の基礎となる生化学機構を
発見した。

【０００６】 チロシンキナーゼは、受容体タイプ（細胞外の、膜内外の及び細胞内の領域を
有する）又は非受容体タイプ（全体的に細胞内にある）であり得る。

【０００７】 受容体（レセプター）チロシンキナーゼ（ＲＴＫｓ）：多様な生物学活性を有
する大きな科（ファミリー）の膜内外の受容体を含んでいる。現在、少なくとも
１９種の異なるＲＴＫ亜科（サブファミリー）が同定されている。受容体チロシ
ンキナーゼ（ＲＴＫ）科は、種々の細胞タイプの増殖及び分化に重要な受容体を
含んでいる（Yarden & Ullrich, Ann. Rev. Biochem. 57:433-478, 1988; Ullri
ch & Schlessinger, Cell 61:243-245, 1990)。ＲＴＫｓの固有の機能は、リガ
ンド結合時に活性化され、受容体及び多数の細胞基質のリン酸化をもたらし、次
いで種々の細胞レスポンスをもたらす（Ullrich & Schlessinger, 1990, Cell 6
1:203-212)。従って、受容体チロシンキナーゼ仲介シグナル形質導入が、特定の
成長因子（リガンド）との細胞外接触により開始され、次いで、典型的には、受
容体２量体化、固有のタンパク質キナーゼ活性の刺激及び受容体トランスリン酸
化が行われる。これにより、結合部位が、分子内シグナル導入分子のために創成
され、そして適当な細胞レスポンス（例えば、細胞分割、分化、代謝効果、細胞
外ミクロ環境における変化）を容易にする細胞質シグナル分子を有する錯体の形
成がもたらされる。Schlessinger & Ullrich, 1992, Neuron 9:1-20参照。

【０００８】 ＳＨ２（ｓｒｃ相同(src-homology)−２）又はホスホチロシン結合（ＰＴＢ）
領域を有するタンパク質は、活性化チロシンキナーゼ受容体及び高親和性のそれ
らの基質と結合し、シグナルを細胞に伝搬する。これらの両方の領域には、ホス
ホチロシンが認められる。（ＳＨ２：Fantle et al., 1992, Cell 69:413-423；
Songyang et al., 1994, Mol. Cell. Biol. 14:2777-2785；Songyang et al., 1
993, Cell 72:767-787；及びKoch et al., 1991, Science 252: 668-678；Schoe
lson, Curr. Opin. Biol.(1997), 1(2), 227-234；Cowburn, Curr. Opin. Struc
t. Biol. (1997), 7(6), 835-838）。受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫｓ）に関
連する数種の細胞内基質タンパク質は、同種のものであると認められた。これら
は２種の主要グループに分けることができる：（１）触媒領域を有する基質；及
び（２）このような領域を持たないがアダプターとして機能し、触媒活性分子と
会合する基質（Songyang et al., 1993, Cell 72:767-778）。受容体又はタンパ
ク質と、これらの基質のＳＨ２又はＰＴＢ領域との間の相互作用の特異性は、リ
ン酸化チロシン残基を即座に包囲するアミノ酸残基により決定される。例えば、
ＳＨ２領域と、特定の受容体上のホスホチロシン残基を包囲するアミノ酸配列と
の間の結合親和性の相違が、基質のリン酸化の挙動において観察される相違と関
連を持っている（Songyang et al., 1993, Cell 72:767-778）。観察結果から、
各受容体チロシンキナーゼの機能は、その発現パターンとリガンドの有効性のみ
ならず、特定の受容体及びこれらの刺激の時期および持続により活性化される下
流のシグナル形質導入経路の配置によっても決定されることが、提案されている
。従って、リン酸化は、重要な調節段階を与えるものであり、この段階が、特定
の成長因子受容体、及び分化因子受容体により増加したシグナル経路の選択性を
決定する。

【０００９】 数種の受容体チロシンキナーゼ、及びこれに結合する成長因子は、そのいくつ
かは間接的に促進するのかもしれないが、血管形成において役割を担うものであ
ると示唆されている（Munsonen & Alitaro, J, Cell Biol. 129:895-899, 1995
）。このような受容体チロシンキナーゼの１種は、”胎児肝臓キナーゼ１”（Ｆ
ＬＫ−１）として知られており、ＲＴＫｓのタイプIII亜科 のメンバーである
。ヒトＦＬＫ−１の他の呼称は、”キナーゼ挿入領域含有受容体”（ＫＤＲ）で
ある（Terman et al., Oncogene 6:1677-83, 1991）。ＦＬＫ−１／ＫＤＲの、
別の代わりの呼称は、”血管の内皮細胞成長因子受容体２”（ＶＥＧＦＲ−２）
である。これは、ＦＬＫ−１／ＫＤＲが、ＶＥＧＦと高い親和性で結合するから
である。ＦＬＫ−１／ＶＥＧＦＲ−２のハツカネズミ版は、ＮＹＫとも呼ばれて
いる（Oelrichs et al., Oncogene, 8(1):11-15, 1993）。ＤＮＡｓコード化マ
ウス、ラット及びヒトＦＬＫ−１が単離され、そしてそのヌクレオチド及びコー
ド化されたアミノ酸配列が報告された（Matthews et al., Proc. Natl. Acad. S
ci. USA, 88:9026-30, 1991；Terman et. al.,1991, supra；Terman et. al., B
iochem. Biophys. Res. Comm. 187:1579-86, 1992；Sarzani et al., supra.；
及びMillauer et al., Cell 72:835-846, 1993）。膨大な研究、例えばMillauer
et al., supra.で報告されたものにより、ＶＥＧＦ及びＦＬＫ−１／ＫＤＲ／
ＶＥＧＦＲ−２は、血管内皮細胞の増殖、血管の形成及び新芽形成（それぞれ血
管形成(vasculogenesis)及び脈管形成(angiogenesis)と呼ばれ）において重要な
役割を示すことが示唆されている。

【００１０】 ”ｆｍｓ様チロシンキナーゼ−１”（Ｆｌｔ−１）と呼ばれる別のタイプIII
亜綱ＲＴＫは、ＦＬＫ−１／ＫＤＲに関係している（DeVries et al., Science
255;989-991, 1992；Shibuya et al., Oncogene 5:519-524, 1990）。ｆｌｔ−
１の別の名称は、”血管内皮細胞成長因子受容体１”（ＶＥＧＦＲ−１）である
。今日まで、ＦＬＫ−１／ＫＤＲ／ＶＥＧＦＲ−２及びｆｌｔ−１／ＶＥＧＦＲ
−１亜科は、内皮細胞上で最初に発現して発見されている。これらの亜綱のメン
バーは、リガンドの血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）科のメンバーにより特異
的に刺激される（Klagsburn and D'Amor, Cytokine & Growth Factor Reviews 7
: 259-270, 1996）。血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）は、ＦＬＫ−１／ＫＤ
Ｒに対するより高い親和性を有するＦｌｔ−１と結合し、血管内皮細胞に対して
***促進的である（Terman et al., 1992, supra；Mustonen et al., supra；De
Vries et al., supra）。Ｆｌｔ−１は、血管発生中の内皮組織化に欠くことの
できないものであると信じられている。Ｆｌｔ−１発現は、マウス胎児中の初期
の血管発生と関連しており、そして傷の治療中の新血管新生と関連している（Mu
stonen and Alitalo, supra）。腎臓糸球体等の成人器官におけるｆｌｔ−１の
発現は、細胞成長に関係しないこの受容体のための付加的機能を示唆している（
Mustonen and Alitalo, supra）。

【００１１】 前述したように、最近の証拠は、ＶＥＧＦが正常な脈管形成及び病気による脈
管形成の両方を刺激する役割を担うことを示唆している（Lakeman et al., Endo
crinology 133:848-859, 1993；Koloch et al., Breast Cancer Research and T
reatment 36: 139-155, 1995；Ferrara et al., Endocrine Reviews 18(1):4-25
, 1997；Ferrara et al., Regulation of Angiogenesis (ed. L.D. Goldberg an
d E.M. Rosen), 209-232, 1997）。さらに、ＶＥＧＦは、血管浸透性の制御及び
上昇に関係している（Connolly, et al., J. Biol. Chem. 264:20017-20024, 19
89；Brown et al., Regulation of Angiogenesis (ed. L.D. Goldberg and E.M.
Rosen), 233-239, 1997）。

【００１２】 ｍＲＮＡの代替えの接合から発生するＶＥＧＦの異なる形態が、報告されてお
り、Ferrara et al., (J. Cell. Biochem. 47:211-218, 1991）に記載の４種類
を含んでいる。ＶＥＧＦの分泌種及び優先的に細胞会合する種の両方が、Ferrar
a et al., supraにより同定され、そのタンパク質はジスルフィド結合２量体の
形で存在することが知られている。

【００１３】 ＶＥＧＦのいくつかの関連する同族体が、最近同定された。しかしながら、正
常な生理的過程及び病気過程におけるこれらの役割は、まだ解明されていない。
さらに、ＶＥＧＦ科のメンバー（構成員）は、多くの組織のＶＥＧＦと共に発現
し、そして一般にＶＥＧＦとヘテロ２量体を形成することができる。この性質は
、ヘテロ２量体の受容体の特異性及び生理的効果を変更する傾向があり、さらに
下記に説明するようにその特異機能の解明を複雑にしている（Korpelainen and
Altitalo, Curr. Opin. Cell Biol., 159-164, 1998 及びこの中の引例）。

【００１４】 胎盤成長因子（ＰＩＧＦ）は、ＶＥＧＦ配列と重要な同族関係を示すアミノ酸
配列を有する（Park et al., J. Biol. Chem. 269:25646-54, 1994；Maglione e
t al., Oncogene 8:925-31, 1993）。ＶＥＧＦとの場合のように、異なる種類の
ＰＩＧＦは、ｍＲＮＡの代替え（２者の一方の）接合に由来し、タンパク質は２
量体の形で存在する（Park et al., supra）。ＰＩＧＦ−１及びＰＩＧＦ−２は
高い親和性でＦｌｔ−１に結合し、ＰＩＧＦ−２はまた神経ピリン−１(neuropo
lin-1)に懸命に結合するが（Migdal et al., Biol, Chem. 273 (35): 22272-222
78）、ＦＬＫ−１／ＫＤＲに結合しない。ＶＥＧＦが低濃度で存在する（ヘテロ
２量体の形成のためと言われている）場合、ＰＩＧＦは、内皮細胞上のＶＥＧＦ
の血管過浸透性及び***促進効果の両方を増強すると報告されている（Park et
al., supra）。

【００１５】 ＶＥＧＦ−Ｂは、Ｆｌｔ−１／ＶＥＧＦＲ−１とも結合すると思われる２種の
イソ体（１６７及び１８５残基）として生成する。これは、ウロキナーゼタイプ
プラスミノーゲン活性化剤及びプラスミノーゲン活性化剤阻害剤１の、発現及び
活性度の変調することにより、細胞外基質（マトリックス）分解、細胞接着及び
移動を調節する役割を担い得る（Pepper et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.
A. (1998), 95(20): 11709-11724)。

【００１６】 ＶＥＧＦ−Ｃは、元々、リンパ性内皮細胞により初期に発現するＶＥＧＦＲ−
３／Ｆｌｔ−４のリガンドとしてクローン化された。この十分に処理された形に
おいては、ＶＥＧＦ−Ｃもまた、ＫＤＲ／ＶＥＧＦＲ−２と結合し、生体内で内
皮細胞の増殖及び移動を刺激、及び生体内モデルにおいて脈管形成を刺激するこ
とができる（Lymboussaki et al., Am. J. Pathol. (1998), 153(2): 395-403；
Witzenbichler et al., Am. J. Pathol. (1998), 153(2), 391-394）。ＶＥＧＦ
−Ｃの過剰発現により、リンパ管のみの増殖及び拡大が起こり、一方血管は影響
されない。ＶＥＧＦとは異なり、ＶＥＧＦ−Ｃの発現が低酸素によって引き起こ
されない（Ristimalki et al, J. Bio;. Chem. (1998), 273(14), 8413-8418）
。

【００１７】 最近発見されたＶＥＧＦ−Ｄは、構造的にＶＥＧＦ−Ｃに極めて近い。ＶＥＧ
Ｆ−Ｄは、少なくとも２種のＶＥＧＦＲｓ、ＶＥＧＦＲ−３／Ｆｌｔ−４及びＫ
ＤＲ／ＶＥＧＦＲ−２に結合し活性化させると報告されている。これは、元々、
繊維芽細胞のｃ−ｆｏｓ誘導性の***促進物質としてクローン化されたもので、
肺及び皮膚の間充織細胞において最も顕著に発現する（Achen et al., Proc. Na
tl. Acad. U.S.A. (1998), 95(2), 548-553；及びこの中の引例）。

【００１８】 ＶＥＧＦ−Ｃ及びＶＥＧＦ−Ｄは、皮膚注入された時に、Milesアッセイにお
いて生体内で血管浸透性の増加を誘発することが求められている（ＰＣＴ／ＵＳ
９７／１４６９６；ＷＯ９８／０７８３２、Witzenbichler et al., supra.）。
組織中における、血管過浸透性及び内皮レスポンスを調節する際のこれらのリガ
ンドの生理的役割及び重要性は、はっきりしない状態にある。

【００１９】 ＶＥＧＦ及びＶＥＧＦＲｓの他の同族体の新生の発見、及びリガンド及び受容
体のヘテロ２量体の先例に基づき、このようなＶＥＧＦ同族体の作用は、ＶＥＧ
Ｆリガンドヘテロ２量体の形成、及び／又は受容体のヘテロ２量体化、或いはま
だ発見されていないＶＥＧＦＲとの結合を包含しているかもしれない（Witzenbi
chler et al.supra）。また、最近の報告では、神経ピリン−１（Migdal et al.
, supra）又はＶＥＧＦＲ−３／Ｆｌｔ−４（Witzenbichler et al.supra）を巻
き込む可能性、及びＫＤＲ／ＶＥＧＦＲ−２以外の受容体は血管浸透性の誘発の
原因であることが示唆されている（Stacker, S.A., Vitali, A., Domagala, T.,
Nice, E., and Wilks, A.F., "Angiogenesis and Cancer" Conference, Amer.
Assoc. Cancer Res., Jan. 1998, Orlando, FL；Williams, Diabetelogia 40: S
118-120 (1997)）。

【００２０】 上記ＰＴＫｓを調節する化合物の発生。細胞増殖の制御、規制及び調節、さら
には異常な細胞増殖に関連する病気及び疾患に対するＰＴＫｓの推測される重要
性に関し、受容体及び非受容体のチロシンキナーゼ”阻害剤”を、変異体リガン
ド（ＵＳ出願Ｎｏ．４９６６８４９）、可溶性受容体及び抗体（出願番号ＷＯ９
４／１０２０２；Kendall & Thomas, 1944, Proc. Natl. Acad. Sci 90: 10705-
09；Kim et al., 1993, Nature 362:841-844）、ＲＮＡリガンド（Jellinek, et
al., Biochemistry 33: 10450-56；Takano, et al., 1993, Mol. Bio. Cell 4:
358A；Kinsella, et al., 1992, Exp. Cell Res. 199:56-62；Wright, et al.,
1992, J. Cellular Phys. 152:448-57）及びチロシンキナーゼ阻害剤（ＷＯ９４
／０３４２７；ＷＯ９２／２１６６０；ＷＯ９１／１５４９５；ＷＯ９４／１４
８０８；ＵＳ特許Ｎｏ．５３３０９９２；Mariani, et al., 1994, Proc. Am. A
ssoc. Cancer Res. 35:2268）の使用を含む研究方法を用いて同定するため多く
の試みが成されてきた。

【００２１】 さらに最近では、チロシンキナーゼ阻害剤として機能する低分子を同定する試
みが成されてきている。例えば、ビス単環式、二環式又は複素環アリールの化合
物（ＰＣＴ−ＷＯ９２／２０６４２）及びビニレン−アザインドール誘導体（Ｐ
ＣＴ−ＷＯ９４／１４８０８）は、一般にチロシンキナーゼ阻害剤として記載さ
れている。スチリル化合物（ＵＳ特許Ｎｏ．５２１７９９９）、スチリル置換ピ
リジル化合物（ＵＳ特許Ｎｏ．５３０２６０６）、特定のキナゾリン誘導体（Ｅ
Ｐ出願Ｎｏ．０５６６２６６Ａ１）；Expert Opin. Ther. Pat. (1998), 8(4):4
75-478）、セレオインドール及びセレニド（ＰＣＴ−ＷＯ９４／０３４２７）、
三環式ポリヒドロキシル化合物（ＰＣＴ−ＷＯ９２／２１６６０）及びベンジル
ホスホン酸化合物（ＰＣＴ−ＷＯ９１／１５４９５）を、癌の治療に使用するチ
ロシンキナーゼ阻害剤用化合物として記載されている。アニリノシノリン(anili
nocinnoline)（ＰＣＴ−ＷＯ９７／３４８７６）及びキナゾリン誘導体化合物（
ＰＣＴ−ＷＯ９７／２２５９６；ＰＣＴ−ＷＯ９７／４２１８７）は、脈管形成
を阻害及び血管浸透性を阻害するものとして記載されている。

【００２２】 さらに、セリン／セレオニンキナーゼ阻害剤として働く低分子を同定する試み
が成されている。特に、機能不全がＶＥＧＦ性疾患における変化した血管浸透性
に関連する特定のＰＫＣセリン／スレオニンキナーゼ異形体を阻害するものとし
て、ビス（インドリルマレイミド）化合物が記載されている（ＰＣＴ−ＷＯ９７
／４０８３０；ＰＣＴ−ＷＯ９７／４０８３１）。

【００２３】 このため、受容体及び非受容体チロシンキナーゼの活性を調節して、異常又は
不適当な細胞機能を規制及び調節することによりチロシンシグナル（形質）導入
を特異的に阻害する有効な巨大分子及び低分子有機化合物の同定が、望ましい。
特に、浮腫、滲出、及び巨大分子管外遊出及び沈着、さらに関連疾患の形成に必
須であるチロシンキナーゼの機能を特異的に阻害する方法及び化合物を同定でき
ることは、有益であろう。

【００２４】 ［発明の要旨］ 本発明は、ＫＤＲチロシンキナーゼの細胞シグナル機能を阻害することにより
、血管過浸透性を阻害することにある。本発明はまた、ＫＤＲ／ＶＥＧＦＲ−２
の触媒キナーゼレスポンスを、Ｆｌｔ−１／ＶＥＧＦＲ１又は他のチロシンキナ
ーゼの活性度に顕著な影響を与えること無しに選択的に分断することにより、血
管過浸透性を阻害する方法を提供する。この方法に従って機能する試薬は、莫大
な副作用を示し易いステロイド等の材料を使用する現在の治療方法に対して薬理
学的優位性を有する。本発明のこれらの方法は、複数のＶＥＧＦ受容体を阻害す
るものを含み、ほとんど特異的でないキナーゼ阻害剤の使用に対しても好ましい
。なぜなら、これらの方法は、他のキナーゼの重要な正常生理機能を直接混乱さ
せないであろうからである。血管内皮の過浸透性を阻害する結果として、続いて
起こる浮腫の形成、関連する血管外遊出（漏出）、経内皮(trans-endothelial)
分子交換における変化、溢血、血管又はリンパ管からの滲出及び組織又は毛細血
管からの滲出がまた、ＫＤＲのチロシンキナーゼ活性度の抑制により阻害される
。これらの後者の事柄は、屡々、過剰基質沈着、異常型基質増殖及び器官機能不
全をもたらすことから、ＫＤＲチロシンキナーゼの阻害が、これらの病因の特徴
を持ち合わせている莫大な非癌性疾患の治療にも有用である。さらに、ＫＤＲチ
ロシンキナーゼ受容体に結合するＶＥＧＦ性活性リガンドより引き起こされ得る
血圧低下も、ＫＤＲチロシンキナーゼの活性度を阻害することにより極小化され
る。

【００２５】 本発明はまた、ＫＤＲチロシンキナーゼの活性度を特異的に阻害する化合物を
投与することにより、個体における血管過浸透性の阻害及び浮腫形成の阻害の治
療手段を提供する。

【００２６】 ［発明の詳細な記述］ 本発明は、ＫＤＲチロシンキナーゼの細胞シグナル機能を阻害することにより
、血管過浸透性を阻害する方法を開示する。本発明はまた、ＫＤＲの細胞シグナ
ル機能を選択的に阻害する試薬の利用により、血管過浸透性を阻害する方法を開
示する。本発明に従い、ＫＤＲ細胞シグナル、次いで血管過浸透性を有効に遮断
する、高選択性ＫＤＲ阻害を同定及び利用することによって、ＶＥＧＦの血管浸
透性レスポンスを仲介する場合のＫＤＲの本質的役割を確立した。このような高
選択性ＫＤＲ阻害剤は、高親和性受容体、ＶＥＧＦＲ−１／Ｆｌｔ−１の機能を
阻害することなく、血管浸透性を調節する際における効力を表した。この性質は
、他の非ＫＤＲキナーゼの機能をほとんど選択的に遮断しない試薬を用いる現在
の療法又は治療に比べて、治療に対するより優れた許容度を与えるはずである。

【００２７】 ＫＤＲチロシンキナーゼは、血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）又は他の活性
リガンド（例えば、ＨＩＶ Ｔａｔ タンパク質、ＶＥＧＦ−Ｃ又はＶＥＧＦ−
Ｄ）が血管内皮細胞の表面に存在するＫＤＲチロシンキナーゼ受容体と結合する
際に活性化される。自然発生キナーゼ活性化変異は、まだＫＤＲについては同定
されていないが、それらはＥＧＦＲ及びＴｉ−２受容体キナーゼについて報告さ
れている。従って、ＫＤＲの構成活性化の例も先取りされている。ＫＤＲチロシ
ンキナーゼは、ＦＬＫ−１チロシンキナーゼ、ＮＹＫチロシンキナーゼ又はＶＥ
ＧＦＲ−２チロシンキナーゼとも呼ばれる。

【００２８】 脈管形成、及び内皮細胞移動及び増殖を刺激することに加えて、ＶＥＧＦは血
管の過浸透性を誘発する。結果として、体液は、血流から血管壁を通過して、
間質腔に移動し、これにより浮腫領域を形成する。血管（脈管）外遊出もこのレ
スポンスに付随する。同様に、過剰の血管過浸透性は、臨界的組織及び器官（例
、肺及び腎臓）全域における正常な分子交換を妨害し、これにより器官機能不全
、巨大分子溢出、及び促進された基質増殖を屡々伴う基質沈着を起こさせる。浮
腫（例、脳浮腫）は、閉じこめられた区画で発生する場合、器官機能の障害及び
損傷をもたらすであろう。

【００２９】 ＫＤＲ細胞シグナル機能は、多くのアプローチによって阻害することができる
：即ち、活性化リガンドの生成の遮断、活性化リガンドのＫＤＲチロシンキナー
ゼ受容体と結合することを遮断すること、受容体の二量化及びリン酸転移反応の
防止、ＫＤＲチロシンキナーゼの酵素活性化の阻害（酵素のリン酸化能力の阻害
）、又は下流へのシグナルを阻害するいくつかの他の機構（D. Mukhopedhyay et
al., Cancer Res. 58:1278-1284 (1998)及びこの中の引例）により行われる。
ここに記載の方法によれば、ＫＤＲ細胞シグナル機能を阻害するために選択され
るアプローチは、血管過浸透、さらに関連する溢血又は血管外遊出、続く浮腫形
成及び基質沈着を低減するであろう。

【００３０】 必須のＫＤＲチロシンキナーゼ阻害特性を有する種々の化合物がある。これら
の化合物の中では、細胞外ＫＤＲ受容体領域又は細胞キナーゼ酵素部分と結合す
る抗体（以後、単一鎖抗体構成を含むものとする）であるか、或いはＶＥＧＦ自
身と結合する抗体である。これらの抗体は、ＫＤＲチロシンキナーゼ受容体に結
合するＶＥＧＦ及び／又は、重要なことには、ＫＤＲチロシンキナーゼ細胞シグ
ナル機能を干渉する。ＫＤＲチロシンキナーゼに結合する抗体は、ＶＥＧＦ抗体
として、さらに一般的にはＶＥＧＦ活性化剤拮抗薬として働くであろう。或いは
、これらの抗体は、機能性受容体の２量化を遮断するか、或いはＫＤＲチロシン
キナーゼ阻害剤であろう。ＶＥＧＦ又は活性化リガンドと結合する抗体は、ＶＥ
ＧＦ又は活性化リガンドの中和抗体である。このようなＶＥＧＦ中和抗体は、Ｋ
ＤＲ及びＦｌｔ−１受容体の両方を介してＶＥＧＦレスポンスを遮断し、典型的
には単一の活性化リガンドに特異的であろうことは注目すべきことである。ほと
んどの例において、ＦＬｔ−１を介するＶＥＧＦレスポンスの遮断は、必要でも
、望ましいことでもない。これらのＶＥＧＦＲｓは、ＶＥＧＦに対する異なるエ
ピトープを認識すると報告されているので、ＫＤＲ活性化の望ましい特異的阻害
は、ＶＥＧＦ又は他の活性化リガンドのＫＤＲ−結合エピトープと特異的に結合
し、「マスク」する抗体の使用により成し遂げることができる。

【００３１】 ＫＤＲチロシンキナーゼ活性度を阻害することができ、これにより血管過浸透
性及び浮腫の形成を最小にすることができる他の化合物としては、ペプチド及び
有機分子がある。ペプチドの中では、ＫＤＲ及びＫＤＲ結合片の可溶性細胞外領
域である。他の有用なペプチドとしては、ＶＥＧＦ及びＶＥＧＦ関連成長因子（
例、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ又はＨＩＶ−Ｔａｔタンパク質及びその溶融タ
ンパク質）の変異体であり、これらは、この受容体に結合する別のリガンドと結
合しそして遮断するが、２量化、活性化又はＫＤＲチロシンキナーゼリン酸転移
反応を刺激することはない。このような変異体は、モノマー或いは非官能ヘテロ
ダイマーとして働き、これにより生来の２量体ＶＥＧＦ又は活性化リガンドの結
合を遮断する。同様に、受容体２量化及び／又は活性化を遮断する他のペプチド
又は小分子をうまく使用することができる。これらの化合物はまた、活性化リガ
ンドの拮抗薬（アンタゴニスト）として働くか、或いはＫＤＲチロシンキナーゼ
活性の阻害剤であろう。小有機分子が好ましい化合物である。

【００３２】 さらに、ＫＤＲ−特異リボザイム、アンチセンスのポリヌクレオチド（例えば
アンチセンスｍＲＮＡ）、又は活性な機能性ＫＤＲチロシンキナーゼの生合成又
は適当な発現を阻害する細胞間単一鎖抗体（Ｓ_ｃＦ_ｖ）等の分子が、ＶＥＧＦの
ＫＤＲ−仲介レスポンスを有効に遮断する。これらの分子は、予備形成細胞に挿
入されるか、或いはそれらの製造が細胞内で誘導され得る（例、適当なアデノウ
イルス、レトロウイルス又はバキュウロウイルスベクターの使用により）。

【００３３】 本発明の好ましい化合物は、細胞シグナル機能Ｆｌｔ−１をそれほど阻害する
ことなく、ＫＤＲの細胞シグナル機能を阻害する性質を有している（Ｆｌｔ−１
チロシンキナーゼはＶＥＧＦＲ−１チロシンキナーゼとも呼ばれる）。ＫＤＲチ
ロシンキナーゼ及びＦｌｔ−１チロシンキナーゼは両方とも、ＫＤＲチロシンキ
ナーゼ受容体及びＦｌｔ−１チロシンキナーゼ受容体と結合するＶＥＧＦにより
それぞれ活性化される。Ｆｌｔ−１チロシンキナーゼ活性度は、内皮維持及び血
管機能における重要事象を仲介するので、この酵素活性度又は関連する導入シグ
ナルは、有毒或いは悪影響をもたらすであろう。極めて少ない場合であっても、
このような阻害は、血管過浸透性及び浮腫の形成の誘導を遮断するために必要で
はなく、そのためこれは個体にとって無駄で価値のないものである。本発明の好
まし化合物は、１種のＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ（ＫＤＲ）の活性を阻害
するので特徴的である。このＫＤＲは、活性化リガンドにより活性化されるが、
しかし他の受容体チロシンキナーゼ（例、Ｆｌｔ−１）を活性化しない。この他
のチロシンキナーゼは特定の活性化リガンドによっても活性化される。このため
、本発明の最も好ましい化合物は、これらのチロシンキナーゼ阻害剤活性におい
て特異的であるものである。

【００３４】 ＶＥＧＦは、血管過浸透性及び浮腫の形成に寄与することで知られている。Ｖ
ＥＧＦは、炎症部位において、炎症性Ｔ細胞、マクロファージ、好中球及びエオ
シン好性球（好酸球）等により発現する。この因子の生成は、低酸素、特定の血
圧上昇ホルモン、成長因子、再生ホルモン及び莫大な炎症サイトカインにより即
座に上方調節される。実際、血管過浸透性と、多くの他の成長因子の発生又は投
与に関連する浮腫とは、ＶＥＧＦの生成により仲介されると思われる。血管過浸
透性、関連する浮腫、変化した経内皮（transendothelial）交換及びたびたび血
管外遊出を伴う巨大分子漏出が、過剰の基質沈着、異常な基質（ストロマ）増殖
、繊維症等をもたらし得る。従って、ＶＥＧＦ仲介過浸透性は、これらの病因の
特徴を有する疾患に深く寄与することができる。例えば： （１）ＶＥＧＦは、病変の乾癬皮膚の表皮で顕著に増加する。この因子は、皮
膚の内皮細胞の増殖及び乾癬に関連するミクロ血管過浸透性を、強く刺激する。

【００３５】 （２）火傷及び酷い熱傷に続いて、主な器官が度々損傷される。これは、虚血
再潅流損傷、内臓器官の膨張及び浮腫、即ち内皮細胞損傷からもたらされる制御
不能の「仲介物(mediator)疾患」により顕著となると思われる。火傷犠牲者にと
って、吸入創傷は、大量死の第１の原因の１つである。気管気管支上皮は、腐肉
化し、タンパク質リッチ浸出液と結合し、気道の閉塞に導き得る気道の鋳型を形
成する。吸入火傷及び低酸素の合併に続く高濃度酸素に暴露（個体を救助する場
合において）が、肺に累進的変化（例えば、広範な滲出形成、気管への出血及び
血管壁の浮腫変化）を起こすことにより、その状況を悪化させ得る。火傷及び複
数の外傷に負った被害者において、循環血漿ＶＥＧＦレベルが、劇的に増加し（
２０倍まで）、そしてこのレベルは、これらの合併症の主な仲介物かもしれない
（Grad et al., Clin. Chem. Lab. Med. 36:379-383, 1998）。

【００３６】 （３）日焼けも浮腫の形成に関連する。ＶＥＧＦの生成はＵＶ光暴露後の上方
調節されることも知られている。浮腫が生成する他の皮膚疾患としては、水ぶく
れ症状の赤い浮腫（先端[肢端]疼痛）、持続性先端皮膚炎（acrodema）、及び水
疱性疾患、例えば紅斑多形、水疱性類天疱瘡及びヘルペス状皮膚炎（即ち、急性
又は慢性の炎症）がある。浮腫の斑点及び薔薇科（roseacea）、例えば毛細管拡
張症に関連するものは、浮腫が顕著化した別の疾患である。

【００３７】 （４）向上したミクロ血管浸透性及び浮腫は、炎症及び腫瘍性疾患の共通の特
徴である。神経膠腫等の脳腫瘍（この場合、腫瘍性及び腫瘍周囲の脳浮腫、及び
体液で満たされた嚢（胞）が形成される。）、及び塊状脳浮腫を伴う髄膜種が、
このような疾患の例である。部分的高レベルのＶＥＧＦは、これらの疾患に関連
している。悪性の腹水体液の誘発及び腫瘍滲出（特に悪性胸膜及び心膜の滲出）
が、このような浮腫形成疾患の他の例であり、ＶＥＧＦ生成を伴うことが知られ
ている。さらに、頭外傷からもたらされる浮腫は、震盪を与え、脳機能を損なわ
せる。同様に、関連する水頭症は、ＶＥＧＦ生成を調節する公知のＩＧＦ−１及
びＴＧＦ−β１等のサイトカインを伴うことが分かっている。

【００３８】 （５）浮腫は、鼻ポリープ、子宮頸部ポリープ及び胃の過形成性ポリープの形
成等の慢性炎症のいくつかのタイプにおいて発生する。このような場合、炎症細
胞が、これらの浮腫状態の発生において、少なくとも部分的にＶＥＧＦの生成を
介して、重要な役割を担うことが分かっている。

【００３９】 （６）サイトカイン活性化好酸球は、ＶＥＧＦの重要な供給源となることがで
き、これによりアレルギー性炎症部位での組織浮腫形成に寄与する。浮腫及び滲
出は、アレルギー性及び遅延型の過敏性反応中に起こる共通の合併症であり、屡
々過敏症も伴っている。ＶＥＧＦは、特に、抗ヒスタミン又はアスピリンに応え
ないこれらの反応に関連しており、その上方調節が、毒性キヅタ及び接触皮膚炎
の場合に観察される。さらに、結核、特定のウイルス感染、血管浮腫、蕁麻疹（
発疹）及び運動誘発性過敏症が、ＶＥＧＦを伴い得るこのようなアレルギー性及
び遅延型の過敏性反応の例である。浮腫はまた、薬剤感受性又は過敏性反応の結
果として、或いはＶＥＧＦ上方調節成長因子又はサイトカイン（例、ＩＧＦ−１
、ＦＧＦ−２又はＩＬ−２）の投与に応えて、屡々形成される。放射線過敏性及
び放射線皮膚炎は、血管過浸透性に関連する。

【００４０】 （７）ＶＥＧＦは、糖尿病性の網膜症及びミクロ血管障害をもたらす眼の血管
新生、加齢関係斑変質による盲目及び酸素過剰暴露よりもたらされる新生児盲目
に関わっている。多くの例において、これらの状態より、斑又は他の眼の浮腫が
先に起こる。ＶＥＧＦは、眼虚血及び血管浮腫の場合に、虹彩、角膜及び網膜の
血管新生として同定されている。ＶＥＧＦ誘導血管過浸透性は、血管（脈管）形
成の基礎を築く溢血（血管外遊出）及び基質沈着を伴う種々の眼疾患における血
管網膜関門損傷の一因となっている。角膜血管新生は、化学火傷、角膜炎症及び
浮腫に続く主要な転帰である。最近の証拠は、このような眼外傷に続く過程にお
いてＶＥＧＦを巻き込むものとしている。鉄キレート剤デフェロキサミンは、癌
患者の臨界的治療に使用されてきた。しかしながら、この治療は屡々斑浮腫を引
き起こす。患者において到達する鉄キレートの濃度は、浮腫形成の適当な仲介物
としてＶＥＧＦを包含する、研究された全ての正常な及び腫瘍細胞系のＶＥＧＦ
−ｍＲＮＡ発現において、３〜５倍の増加となる。ＶＥＧＦの過剰生成及び浮腫
により引き起こされる眼球内圧力増加により、不適当な皮膚沈着、眼のゆがみ、
視神経円板（視神経乳頭）、視野の欠陥がもたらされ、緑内障となり得る。血管
過浸透性はまた、屡々結膜炎と関連している。

【００４１】 （８）新生児及び成人の慢性の肺疾患は、肺損傷及び不適当な回復過程により
もたらされる。ＶＥＧＦの生成は、肺損傷した数種の動物モデルにおいて報告さ
れている。肺疾患の内皮細胞の破壊は、高酸素肺損傷の特徴でもある。高酸素症
からの回復の間、ＶＥＧＦは、肺胞タイプII細胞によって上方調節され、次いで
肺の内皮細胞の増殖及び再生を起こさせる。しかしながら、この結果により、肺
疾患内皮及び肺疾患浮腫の全域で交換が妨害される。喘息及び気管支炎は、屡々
気管支血管拡張、血管充血、気管支壁の浮腫及び滲出を含んでおり、これらは気
道粘膜を厚くし、気管支管腔を狭くする。タンパク質滲出及び異常基質成長を伴
う浮腫は、典型的にはこれらの現象と絡み合っている。関連する過程により、肺
疾患浮腫が、成人呼吸困難症候群の中で形成される。成人呼吸困難症候群の原因
としては、典型的には肺炎、有害物質の吸入、肺挫傷、胃の内容物の近くの浸漬
及び吸入等である。

【００４２】 （９）コルチコステロイド、例えばコルチゾン、ヒドロコルチゾン、デキサメ
タゾン又はプレドニソロンは、浮腫状態のための最も広く使用される治療薬の中
の１種である。これらはＶＥＧＦ発現に対して強い阻害剤である。この性質は、
このようなステロイドの周知の抗浮腫有効性に大きく寄与していると信じられて
いる。しかしながら、これらの多能性の生物活性もまた、望ましからぬ副作用の
原因である。ステロイドホルモン及びその作用薬並びに拮抗薬は、ＶＥＧＦの生
成、特に再生組織におけるＶＥＧＦ生成に影響を与えている。子宮内膜炎及び子
宮内膜症は、妊娠中、月経周期中又は性ホルモン療法中に起こり得る。月経の膨
潤及び痙攣は、血管過浸透性に関連している。乳癌の危険性を減少させる薬剤で
あるタモキシフェンはまた、子宮細胞増殖及び腫瘍発生率を増加させる。エスト
ラジオールと同様、このステロイド類似体は、ＶＥＧＦ生成において部分的に増
加することが分かっている子宮浮腫及び細胞増殖を起こす。卵巣過剰刺激症候群
は、***誘発に影響を与える重い合併症である。これらの症候群の最も重篤な発
現は、塊状の卵巣の拡大及び複嚢、腹水、体液の血液濃縮及び第３空間蓄積、の
形をとる。ヒト絨毛膜性腺刺激ホルモンで刺激後の卵巣の黄体形成した顆粒膜細
胞等により分泌されたＶＥＧＦの放出によって引き起こされた毛細血管浸透性の
増加が、これらの症候群部において主要な役割を担うと信じられている。スタイ
ン-レベンタール症候群における多嚢胞卵巣の過胞膜(hyperthecotic)卵巣基質（
ストロマ）において、ＶＥＧＦが過剰発現することが示された。

【００４３】 （１０）一過性中大脳動脈閉塞後の、ニューロン及び軟膜の両方におけるＶＥ
ＧＦ遺伝子発現の急速な特異的誘導は、脳卒中の動物モデルで示された。ＶＥＧ
Ｆは、血管新形成を強化することにより、脳卒中、頭外傷又は脳梗塞等の虚血傷
害（発作）からの脳細胞の回復に寄与するであろうが、脳損傷が脳浮腫の付随形
成により悪化することもあり得る。マラリアも、ＶＥＧＦ誘導脳低酸素症の結果
として浮腫を誘導し得る。腫瘍毛細管が正常血液脳関門機能を欠如しているため
、脳腫瘍関連脳浮腫及び体液充満嚢が発生する。生体内で神経膠腫により放出さ
れたＶＥＧＦが、増加した脳浮腫を含む患者におけるグリア芽種腫瘍の特徴的組
織変化及び臨床上の特徴を殺してしまうとの強い傾向がある。手根骨トンネル症
候群は、神経水分補給の向上が伴い、そして、度々、続く細胞外基質沈着の増加
を伴う（エントラップメント神経障害）。神経を取り囲む組織内の増加したＶＥ
ＧＦのレベルは、血管浸透性、体液の外向き流束及び基質沈着を神経周囲組織に
誘発することにより、神経エントラップメントを起こし得る。

【００４４】 （１１）組織のＶＥＧＦ生成は、低酸素に応じて劇的に上方調節される。従っ
て、壊死、虚血、梗塞、閉塞、貧血、循環機能障害又は他の酸素欠乏において、
ＶＥＧＦレベルは増加し、そして血管過浸透性、浮腫及び血管外遊出は共通して
いる。「高山病」の原因である低酸素圧はまた、急速なＶＥＧＦ生成を引き起こ
し、それは屡々、ヒトが順応しない場合に起こり得る、生命を脅かす脳浮腫及び
肺浮腫（ＨＡＣＥ及びＨＡＰＥ）の原因となりがちである。

【００４５】 （１２）ＶＥＧＦの過剰生成は、血管過浸透性によりもたらされる心膜の及び
胸膜の滲出において、同様に関係している。この血管過浸透性は、放射線傷害、
リウマチ疾患、狼瘡、心筋梗塞、外傷又は薬物反応によりもたらされる。驚くべ
きことではないが、心膜及び胸膜の滲出に関連するＶＥＧＦ過剰生成は、肺癌又
は乳癌、リンパ腫及び白血病の患者を解剖したときに共通に観察される。ＶＥＧ
Ｆ量は、リウマチ性関節炎の個体における膨化関節の関節液においても、顕著に
上昇する。血管形成及び治癒の促進に有益である、特定の膨潤及び血管浸透性に
関連するけれども、捻挫及び骨折は、痛みがあり、過度の望ましくない浮腫が付
随し得る。同様に、ＶＥＧＦの関わり合いは、滑膜炎又は滲出（例、膝の上の水
）を伴う半月損傷等の状態において、予想される。

【００４６】 （１３）循環制限（例、臥床姿勢（床ずれ）、沈下性潰瘍及び静脈瘤性潰瘍）
に関連する潰瘍形成も、浮腫及びタンパク質滲出物を度々伴う。糖尿病合併症は
、循環グルコースレベルの上昇（過血糖）及び進行したグリカチオン最終生成物
（ＡＧＥ）の形成の結果で発生し、屡々欠陥的循環を伴う。これらの状態は、単
独であっても、組み合わされていても、ＶＥＧＦ生成を刺激し、このため多くの
糖尿病合併症をもたらし得うる結果、過浸透性を刺激することが知られている。

【００４７】 （１４）腎臓有足細胞による内因性ＶＥＧＦのかなりの量の構成成分生成及び
上昇したＶＥＧＦレベルの公知の血管過浸透性のために、腎臓欠陥、例えばミク
ロアルブミン尿症、タンパク尿症、尿量過小症、電解質平衡異常（屡々糖尿病合
併症として遭遇する）及びネフローゼ症候群（特に火傷、ショック又は外傷に続
き引き起こされる低酸素症の場合）を、本発明に従い処理することができる。

【００４８】 （１５）タンパク質の溢血及び血管外遊出は、共通して浮腫、そして過剰の基
質沈着及び基質（ストロマ）増殖に導くものであり、他の疾患の進行の原因とな
る。これらの疾患には、過粘性症候群、肝硬変、繊維症、ケロイド及び望ましく
ない傷跡組織が含まれる。ＶＥＧＦ仲介過浸透性の阻害剤は、これらの疾患の進
行を妨害する。

【００４９】 （１６）ＶＥＧＦ異形体（isoform)のかなりの量は、血小板、肥満細胞等及び
細胞外基質に蓄えられることが知られている。特定の状況では、これらのＶＥＧ
Ｆ／ＶＰＦの貯蔵は、急速に解放され、これにより急性の血管過浸透性の原因と
なる。

【００５０】 これらの様々の例から、浮腫は種々の生理的条件下に発生し、そしてＶＥＧＦ
／ＶＰＦ又は関連類似体が、浮腫形成及び溢血に強く関係している。本発明の化
合物は、以下と関連する浮腫状態を最小にする。即ち、黄斑浮腫、無水晶体症の
／膜性白内障の胞状斑点浮腫、網膜芽種、眼虚血、眼炎症性病又は眼炎症性感染
、脈絡膜黒色腫、鉄キレート治療により引き起こされる浮腫副作用、肺浮腫、胸
膜滲出、心膜滲出、心筋梗塞、リウマチ性疾患、外傷部位及びアレルギー性炎症
部位における組織浮腫、慢性炎症部位におけるポリープ浮腫、脳性浮腫、脳腫瘍
の液体充満胞、交通性水頭、火傷からもたらされる器官損傷に関連する浮腫及び
吸入火傷損傷からもたらされる浮腫である。本発明の化合物はまた、以下と関連
する浮腫状態を最小にする。即ち、皮膚火傷、水疱、多形性紅斑、水腫斑及び他
の皮膚疾患、頭部外傷、癌に関連する腹水及び種々の滲出、手根管症候群、高山
病、アレルギー及び過敏性反応、放射線過敏症、放射線皮膚炎、緑内障、結膜炎
、成人呼吸困難症候群、喘息、気管支炎、卵巣過敏性症候群、多嚢胞卵巣症候群
、月経性膨化及び月経性麻痺（腹痛）、卒中、頭外傷、脳梗塞又は閉塞、潰瘍、
捻挫、骨折、滑膜炎性滲出、糖尿病性合併症、過粘度症候群、肝硬変及び成長因
子の投与である。本発明の化合物はまた、ミクロアルブミン尿症、蛋白尿症、尿
量過少症、電解質平衡障害、ネフローゼ症候群、過粘度症候群、滲出液（症）、
繊維症、ケロイド、及び望ましくない傷跡組織の形成を治療するために使用され
得る。

【００５１】 本発明の化合物は、ＶＥＧＦの生成を阻害又は防止するか、ＶＥＧＦへの細胞
内レスポンスを弱めるか、血管過浸透性を阻害するか、炎症を低下させるか、或
いは浮腫の形成を阻害又は防止するような、１種以上の追加の薬剤と組合わせて
投与することができる。本発明の化合物は、薬剤付与の前に続いて又は同時に投
与することができ、いずれの経路も適当である。追加の薬剤としては、限定され
ないが、抗−固有ステロイド、ＮＳＡＩＤＳ、ｒａｓ阻害剤、抗−ＴＮＦ剤、抗
−ＩＬ１剤、抗ヒスタミン剤、ＰＡＦ−拮抗薬、ＣＯＸ−１阻害剤、ＣＯＸ−２
阻害剤、ＮＯシンターゼ阻害剤、ＰＫＣ阻害剤及びＰＩ_３キナーゼ阻害剤を挙げ
ることができる。本発明の化合物及び追加の薬剤は、加成的或いは相乗的に作用
する。従って、血管浸透性及び／又は浮腫の形成を阻害するこのような物質の組
合わせの投与は、これらの物質の単独投与に比べて、血管浸透性又は浮腫の有害
作用のより大きな軽減がもたされ得る。

【００５２】 浮腫の形成は、血流からの流体の溢出に由来するものであるので、溢血が起こ
るように低血圧も屡々発生する。低血圧もまた、ＶＥＧＦ又はＶＥＧＦ活性化剤
が血管内皮細胞のＶＥＧＦ受容体に結合する結果として起こり得る。本発明の化
合物は、ＶＥＧＦ（又は他の活性リガンド）が受容体と結合した結果であるＫＤ
Ｒの細胞シグナル機能を阻害することにより、低血圧の発生を最小にすると思わ
れる。本発明の化合物は、それらを個体に投与した際に、個体における低血圧を
阻害する。

【００５３】 ［医薬処方］ 本発明の化合物は、血管過浸透性、浮腫およびそれに関連する障害を処置また
は改善する用量で単独でまたは適当な担体または（複数の）賦形剤と共に混合し
た医薬用組成物にてヒト患者に投与できる。これらの化合物の混合物を簡単な混
合物としてまたは適当に処方した医薬用組成物として患者に投与することもでき
る。さらに治療上有効な用量とは、化合物の用量、すなわち浮腫、ＶＥＧＦ関与
の過浸透性および／またはＶＥＧＦ関連の低血圧の進行を防御するのに充分な化
合物の用量を意味する。本出願の化合物の処方および投与の技術は「Ｒｅｍｉｎ
ｇｔｏｎ‘ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」マック・パ
ブリッシング・コーポレーション、イーストン、ペンシルバニア州、最新版に見
出すことができる。

【００５４】 ［投与経路］ 適当な投与経路は例えば経口、点眼、直腸、経粘膜、局所または腸管投与；筋
肉内、皮下、骨髄内注射、およびクモ膜下、直接心室内、静脈内、腹膜腔内、鼻
腔内または眼内注射などの非経口的投与などでよい。

【００５５】 別法として、例えば浮腫部位に直接的に化合物を、しばしばデポー剤または徐
放処方で注射することにより化合物を全身ではなく部分的に投与することができ
る。

【００５６】 さらに標的薬物投与系で、例えば内皮細胞特異的抗体でコーティングしたリポ
ソームで薬物を投与できる。

【００５７】 ［組成物／処方］ 本発明の医薬用組成物をそれ自体周知の方法で、例えば慣用的な混合、溶解、
顆粒化、糖衣錠製造、研和、乳化、カプセル化、エントラッピングまたは凍結乾
燥工程により製造できる。

【００５８】 このように本発明に従って使用するための医薬用組成物を、活性化合物を医薬
用に使用できる調製物に加工するのを容易にする１種以上の生理学的に許容され
る、賦形剤および補助剤などの担体を用いて慣用的な方法で処方できる。適当な
処方は選択する投与経路により異なる。

【００５９】 注射用には本発明の物質を水溶液、好ましくは生理学的に適合するバッファー
例えばハンクス溶液、リンガー溶液、または生理的食塩水バッファーに処方する
ことができる。経粘膜投与用にはバリヤを浸透するのに適当な浸透剤を処方に用
いる。かかる浸透剤は当業者において一般的に知られている。

【００６０】 経口投与用には、活性化合物を当業者に周知の医薬的に許容される担体と組合
わせることにより化合物を容易に処方できる。このような担体により、処置され
る患者が経口摂取するための錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル、液剤、ゲル、シロ
ップ、スラリー、懸濁液等として本発明の化合物を処方するのが可能になる。経
口使用のための医薬用調製物は活性化合物を固体賦形剤と組合わせ、所望により
適当な補助剤を錠剤または糖衣錠の核に添加した後、得られた混合物を粉砕して
顆粒の混合物を加工して得ることができる。適当な賦形剤はとりわけ充填剤例え
ばラクトース、スクロース、マンニトールまたはソルビトールなどの糖；セルロ
ース調製物例えばトウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイ
モデンプン、ゼラチン、トラガントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピ
ルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび／またはポ
リビニルピロリドン（ＰＶＰ）などである。望む場合、崩壊剤例えば架橋ポリビ
ニルピロリドン、寒天またはアルギン酸もしくはその塩例えばアルギン酸ナトリ
ウムなどを加えてよい。

【００６１】 糖衣錠核は適当なコーティングが施される。この目的では、濃縮糖溶液を用い
ることができ、所望によりアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カル
ボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタニウム、ラ
ッカー溶液および適当な有機溶媒または溶媒混合物を含有することができる。活
性化合物の用量の異なる組み合わせを同定するまたはこれを特徴づけるために、
染料または色素を錠剤または糖衣錠コーティングに加えてよい。

【００６２】 経口的に使用できる医薬用調製物にはゼラチン製のプッシュ・フィット・カプ
セル、およびゼラチン製の密閉軟カプセルおよび可塑剤、例えばグリセロールま
たはソルビトールなどがある。プッシュ・フィット・カプセルは充填剤、例えば
ラクトース、結合剤、例えばデンプン、および／または潤滑剤、例えばタルクま
たはステアリン酸マグネシウム、並びに所望により安定剤と混合した活性成分を
含有できる。軟カプセルでは活性化合物を適当な液体、例えば脂肪油、液体パラ
フィンまたは液体ポリエチレングリコール類に溶解または懸濁できる。さらに安
定剤を添加してよい。経口投与用の全ての処方は、上記投与に好適な投与量にす
べきである。

【００６３】 口腔内投与用には、組成物は慣用的な方法で処方される錠剤または糖衣錠の形
態をとることができる。

【００６４】 吸入により投与する場合、本発明に従って使用するための化合物をエアロゾル
スプレイの形態で適当なプロペラント、例えばジクロロジフルオロメタン、トリ
クロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素またはその
他の適当なガスと共に使用する加圧パックまたはネブライザーから便宜的に投与
する。加圧エアロゾルの場合、測定した量を投与するためのバルブを備えること
により投与量単位を決定する。吸入器または注入器で使用するために、例えばゼ
ラチンのカプセルおよびカートリッジを化合物の粉末混合物および適当な粉末基
材、例えばラクトースまたはデンプンを含有するように処方することができる。

【００６５】 化合物を、注射、例えばボーラス注射または連続注入により非経口的に投与す
るために処方することができる。注射用の処方は、これに保存剤を添加して単位
投与剤形、例えばアンプルまたは複数投与用の容器で提供することができる。組
成物は油性または水性ベヒクル中懸濁液、溶液または乳液のごとき形態をとるこ
とができ、懸濁剤、安定剤および／または分散剤のごとき処方化物質を含有でき
る。

【００６６】 非経口投与用の医薬用処方には水可溶性形態の活性化合物の水溶性溶液が含ま
れる。さらに、適当な油状注射用懸濁液として活性化合物の懸濁液を調製するこ
とができる。適当な親油性溶媒またはベヒクルには脂肪油例えばゴマ油、または
合成脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチルもしくはトリグリセリド類、また
はリポゾームなどがある。水性注射用懸濁液は懸濁液の粘度を上げるための物質
、例えばカルボキシメチルセルロース、ソルビトール、またはデキストランを含
有することができる。任意に、懸濁液はまた適当な安定剤または化合物の溶解性
を向上させて高濃度の溶液の調製を可能にする物質を含有することができる。

【００６７】 別法として、活性成分を使用前に適当なベヒクル、例えば滅菌パイロジェン不
含水と構成するための粉末の形態にすることができる。

【００６８】 化合物を、例えば慣用される坐薬基材、例えばココアバターまたはその他のグ
リセリド類を含有する坐薬または保持浣腸のごとき直腸用組成物にも処方するこ
とができる。

【００６９】 前記の処方に加えて、化合物をデポー調製物にも処方することができる。かか
る長時間作用処方を埋め込みにより（例えば皮下または筋肉内に、または筋肉内
注射により）投与できる。このように例えば化合物を適当な重合物質または疎水
性物質（例えば許容される油の乳液として）またはイオン交換樹脂と、またはや
や溶けにくい誘導体として、例えばやや溶けにくい塩として処方することができ
る。

【００７０】 本発明の疎水性化合物のための医薬用担体の例としては、ベンジルアルコール
、非極性界面活性剤、水混和性有機重合体および水相を含む共溶系がある。共溶
系はＶＰＤ共溶剤系でよい。ＶＰＤは、３質量／容量％のベンジルアルコール、
８質量／容量％の非極性界面活性剤ポリソルベート８０および６５質量／容量％
のポリエチレングリコール３００の溶液であり、無水エタノールで容量を補う。
ＶＰＤ共容系（ＶＰＤ：５Ｗ）は、ＶＰＤを５％デキストロース水溶液と１：１
で希釈したものから成る。この共容系は疎水性化合物をよく溶解し、それ自体が
全身投与で毒性が低い。もちろんその溶解性および毒性特性を壊さずに共容系の
比率をかなり変化させることができる。さらに、共容系の構成成分自体を変化さ
せることができる：例えばポリソルベート８０の代わりに毒性の低い非極性界面
活性剤を用いることができる；ポリエチレングリコールの分画の大きさを変える
ことができる；その他の生物適合性の重合体をポリエチレングリコール、例えば
ポリビニルピロリドンと置き換えることができる；およびその他の糖または多糖
類をデキストロースの代用にすることができる。

【００７１】 別法として、疎水性医薬用化合物のためのその他の分配系を用いることができ
る。疎水性薬物の分配ベヒクルまたは担体の例としてリポゾームおよび乳液が周
知である。特定の有機溶媒、例えばジメチルスルフォキシドを用いることもでき
るが、通常毒性が大きくなるという代償がある。さらに、徐放系、例えば治療用
物質を含有する固体疎水性重合体の半透性マトリックスを用いて化合物を分配で
きる。種々の徐放性物質が確立されており、当業者には周知である。徐放性カプ
セルはその化学的特性に応じて数週間から１００日以上まで化合物を放出できる
。治療用物質の化学的特性および生物学的安定性に応じて、タンパク質安定化の
ためのさらなるストラテジーを用いることができる。

【００７２】 医薬用組成物はまた安定な固体またはゲル相担体または賦形剤を含んでもよい
。このような担体または賦形剤の例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウ
ム、種々の糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチンおよびポリエチレングリ
コール類のごとき重合体などがあるが、これらに限定されるものではない。

【００７３】 本発明の有機分子化合物の多くは、医薬的に適合する対イオンと共に塩として
提供することができる。医薬的に適合する塩を多くの酸、例えば塩酸、硫酸、酢
酸、乳酸、酒石酸、マレイン酸、コハク酸等で形成できるが、これらに限定され
るものではない。塩は対応する遊離塩基形態であるよりも水またはその他のプロ
トン性溶媒によく溶解する傾向がある。

【００７４】 ［有効量］ 本発明に使用するのに適した医薬用組成物には、活性成分が意図した目的を達
成するのに有効な量で含まれる組成物などがある。より具体的には治療上有効な
量とは処置する対象の既存の症状の進行を防ぐまたはそれを改善するのに有効な
量を意味する。有効量の決定は充分に当業者の能力範囲内で行い得る。

【００７５】 化合物の有効量はＫＤＲの細胞シグナル機能を阻害して、Ｆｌｔ−１またはそ
の他のチロシンキナーゼ機能を阻害することにより有意な逆反応を引き起こさず
に血管過浸透性を充分に抑制する。かかる活性を有する特定の化合物を、ＫＤＲ
チロシンキナーゼの用量依存的阻害を決定するインビトロ(in vitro)アッセイに
より同定することができる。ＫＤＲに対するＩＣ_５０が、［ＡＴＰ］／Ｋ_ｍ（Ａ
ＴＰ）および基質の類似の条件下で決定したＦｌｔ−１またはその他のＰＴＫに
対するＩＣ_５０よりも有意に低い化合物が好ましい（理想的には〜１００倍ＫＤ
Ｒチロシンキナーゼに対して選択的）。

【００７６】 本発明の方法で用いるいずれかの化合物では治療上有効量を最初に細胞アッセ
イから推測できる。例えば細胞および動物モデルにおいて細胞アッセイで決定さ
れるＩＣ_５０を含む循環濃度範囲（すなわち通常ＶＥＧＦまたはその他の活性化
刺激に応答する細胞シグナル機能ＫＤＲの最大阻害の５０％を達成する試験化合
物の濃度）を達成するように用量を処方することができる。３〜５％血清アルブ
ミンの存在下での細胞ＩＣ_５０の決定は、化合物に及ぼす血漿タンパク質の結合
効果に近いであろう。このような情報を用いてヒトにおける有益な用量をより正
確に決定できる。さらに、全身投与用に最も好ましい化合物は、血漿中で安全に
達し得るレベルで、無傷細胞における細胞シグナル機能ＫＤＲを効果的に阻害す
る。

【００７７】 治療上有効な量とは患者における症状の改善に至る化合物の量を意味する。こ
のような化合物の毒性および治療効果は、細胞培養または実験動物における標準
的な医薬的方法、例えば最大耐量（ＭＴＤ）およびＥＤ_５０（最大応答の５０％
を引き起こす有効量）により決定できる。毒性および治療上の有効性との間の用
量比は治療指標であり、ＭＴＤおよびＥＤ_５０間の比として表すことができる。
高い治療指標を呈する化合物が好ましい。これらの細胞培養アッセイおよび動物
実験から得られたデータをヒトにおける用量範囲の処方に用いることができる。
このような化合物の用量は、毒性がないかまたはわずかしかないＥＤ_５０を包含
する循環濃度の範囲内にあることが好ましい。用いる投与形態および利用する投
与経路に依存してこの範囲内で用量を変化させることができる。患者の症状に鑑
み、個々の医師が正確な処方、投与経路および用量を選択できる（例えばＦｉｎ
ｇｌら、「Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈ
ｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」１章１頁（１９７５）、参照）。緊急の処置では、急速
な応答を得るためにＭＴＤに近い急速なボーラスまたは注入投与が必要かもしれ
ない。

【００７８】 用量および間隔を別個に調整して、ＫＤＲ変調効果または最低有効濃度（ＭＥ
Ｃ）を維持するのに充分な活性部の血漿レベル芽得られる。ＭＥＣは各化合物に
ついて変わるが、インビトロ(in vitro)データ、例えば本明細書に記載するアッ
セイを用いるＫＤＲチロシンキナーゼの５０〜９０％阻害を達成するのに必要な
濃度から推定できる。ＭＥＣを達成するのに必要な用量は個々の特性および投与
経路に依存して変わる。しかしながら、ＨＰＬＣアッセイまたはバイオアッセイ
を用いて血漿濃度を決定することができる。

【００７９】 投与間隔もまたＭＥＣ値を用いて決定することができる。望ましい症状の改善
が達成されるまでの１０〜９０％、好ましくは３０〜９０％および最も好ましく
は５０〜９０％の時間においてＭＥＣを越える血漿濃度を維持する投与計画を用
いて化合物を投与すべきである。局所投与または選択的摂取の場合、有効な薬物
の局所濃度は血漿濃度と相関しないかもしれない。

【００８０】 投与する組成物の量は、もちろん処置する対象、対象の体重、苦痛の重篤度、
投与方法および指示する医師の判断に依存する。

【００８１】 ［包装］ 所望により、活性成分を含有する１種以上の単位投与剤形を含んでもよいパッ
クまたはディスペンサー装置で組成物を得ることができる。パックは、例えば金
属またはプラスティクホイルを含むことができ、例えばブリスター・パックにす
ることができる。パックまたはディスペンサー装置は、投与のための指示書を添
付され得る。適合する医薬用担体に処方した本発明の化合物を含む組成物を調製
し、適当な容器に入れ、指示された症状の処置に関するラベルを付けることがで
きる。ラベルに指示された適当な症状には、浮腫の処置、血管過浸透性の阻害お
よび血管外遊出、基質沈着、ＶＥＧＦ関連の低血圧の最小化等がある。

【００８２】 ［実施例］ Ｉ．インビトロＰＴＫアッセイ 以下のインビトロアッセイを用いて１種以上のＰＴＫにおける本発明の種々化
合物の活性レベルおよび影響を決定することができる。当業者に周知の技術を用
いてその他のチロシンキナーゼのために同一の手順に沿って類似のアッセイを設
計することができる。

【００８３】 Ａ．バキュロウイルス系を用いるＫＤＲチロシンキナーゼ生成 ＨＵＶＥＣ細胞から単離したｃＤＮＡを用いてＰＣＲによりヒトＫＤＲ細胞内
ドメインのコーディング配列（アミノ酸７８９〜１３５４）を作製した。同様に
このタンパク質のＮ末端でポリＨｉｓ_６配列を導入した。このフラグメントをＸ
ｂａ １およびＮｏｔ １部位でトランスフェクションベクターｐＶＬ１３９３
にクローン化した。バキュロゴールド・トランスフェクション試薬（ファルミン
ゲン(PharMingen)）を用いて同時トランスフェクションにより組換えバキュロウ
イルス（ＢＶ）を作製した。組換えＢＶをプラーク精製し、ウェスターン分析に
より確認した。タンパク質生成に関しては、ＳＦ−９００−ＩＩ培地中２×１０ ^６ ／ｍｌでＳＦ−９細胞を成長させ、細胞あたり０．５プラーク形成単位（ＭＯ
Ｉ）で感染させた。感染後４８時間で細胞を収穫した。

【００８４】 Ｂ．ＫＤＲ精製 トリトンＸ−１００溶解バッファー（２０ｍＭトリス(Tris)、ｐＨ８．０、１
３７ｍＭのＮａＣｌ、１０％グリセロール、１％トリトンＸ−１００，１ｍＭの
ＰＭＳＦ、１０μｇ／ｍｌのアプロチニン、１μｇ／ｍｌのロイペプチン）５０
ｍｌを、細胞培養物１Ｌから得た細胞ペレットに加えて、（Ｈｉｓ）_６ＫＤＲ（
アミノ酸７８９〜１３５４）を発現するＳＦ−９細胞を溶解した。ソルバールＳ
Ｓ−３４ローターでライゼートを１９０００ｒｐｍ、４℃で３０分間で遠心分離
した。５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、０．３ＭのＮａＣｌで平衡にした５
ｍｌのＮｉＣｌ_２キレートセファロースカラムに細胞ライゼートを供した。０．
２５Ｍのイミダゾールを含有する同一バッファーを用いてＫＤＲを溶出した。Ｓ
ＤＳ−ＰＡＧＥおよびキナーゼ活性を測定するＥＬＩＳＡアッセイ（以下の）を
用いてカラム分画分析した。精製したＫＤＲを、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７
．５、２５ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＤＴＴバッファーに換え、−８０℃で保存
した。

【００８５】 Ｃ．ヒトＴｉｅ−２キナーゼ生成および精製 鋳型としてヒト胎盤から単離したｃＤＮＡを用いてＰＣＲによりヒトＴｉｅ−
２細胞内ドメインのコーディング配列（アミノ酸７７５〜１１２４）を作製した
。Ｎ末端でポリＨｉｓ_６配列を導入し、この構築物をＸｂａ １およびＮｏｔ
１部位でトランスフェクションベクターｐＶＬ１９３９にクローン化した。バキ
ュロゴールド・トランスフェクション試薬（ファルミンゲン）を用いて同時トラ
ンスフェクションにより組換えバキュロウイルス（ＢＶ）を作製した。組換えＢ
Ｖをプラーク精製し、ウェスターン分析により確認した。タンパク質生成に関し
ては、ＳＦ−９００−ＩＩ培地中２×１０^６／ｍｌでＳＦ−９昆虫細胞を成長さ
せ、０．５のＭＯＩで感染させた。スクリーニングで用いるＨｉｓタグ化キナー
ゼの精製はＫＤＲに関して記載したものと同様に行った。

【００８６】 Ｄ．ヒトＦｌｔ−１チロシンキナーゼ生成および精製 バキュロウイルス発現ベクターｐＶＬ１３９３（ファルミンゲン、ロサンジェ
ルス，カリフォルニア州）を用いた。ポリＨｉｓ_６をコードするヌクレオチド配
列をヒトＦｌｔ−１の細胞内キナーゼドメイン全体をコードするヌクレオチド配
列（アミノ酸７８６〜１３３８）の５’に配置した。ＨＵＶＥＣ細胞から単離し
たｃＤＮＡライブラリーを用いてＰＣＲによりキナーゼドメインをコードするヌ
クレオチド配列を作製した。ＫＤＲ（パートＢ）およびＺＡＰ７０（パートＦ）
と類似の方法でヒスチジン残基によるタンパク質のアフィニティー精製が可能に
なる。ＳＦ−９昆虫細胞を０．５の多重度で感染し、感染後４８時間で収穫した
。

【００８７】 Ｅ．ＬｃｋおよびＥＧＦＲチロシンキナーゼ供給源 ＬｃｋまたはＬｃｋのトランケートした形態のものを、市販品により入手し（
例えばアップステート・バイオテクノロジー・インコーポレーティッド、サラナ
ック・レーク、ニューヨーク州、またはサンタ・クルーズ・バイオテクノロジー
・インコーポレーティッド、サンタ・クルーズ、カリフォルニア州）、慣用的な
方法を用いて周知の天然または組換え供給源から精製した。シグマからＥＧＦＲ
を購入し（Ｃａｔ＃Ｅ−３６４１；〜５００単位／５０μｌ）、オンコジーン・
リサーチ・プロダクツ／カルバイオケムからＥＧＦリガンドを入手した（Ｃａｔ
＃ＰＦ０１１−１００）。

【００８８】 Ｆ．ＺＡＰ７０チロシンキナーゼ生成 バキュロウイルス発現ベクターｐＶＬ１３９３（ファル・ミンゲン、ロサンジ
ェルス，カリフォルニア州）を用いた。ポリＨｉｓ_６をコードするヌクレオチド
配列をＺＡＰ７０（アミノ酸１から６１９）全体をコードするヌクレオチド領域
の５’に配置した。ジャーカット不死化Ｔセルから単離したｃＤＮＡライブラリ
ーを用いてＰＣＲによりＺＡＰ７０コーディング領域をコードするヌクレオチド
配列を作製した。ヒスチジン残基によるタンパク質のアフィニティー精製が可能
になる（パートＢを参照）。ＬＶＰＲＧＳブリッジがトロンビンによるタンパク
質溶解性切断のための認識配列を構成し、それにより酵素からアフィニティタグ
を除去できる。ＳＦ−９昆虫細胞を０．５の多重度で感染し、感染後４８時間で
収穫した。

【００８９】 Ｇ．ＺＡＰ７０の精製 ２０ｍＭのトリス、ｐＨ８．０、１３７ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロー
ル、１％のトリトンＸ−１００，１ｍＭ ＰＭＳＦ、１μｇ／ｍｌのロイペプチ
ン、１０μｇ／ｍｌのアプロチニンおよび１ｍＭのオルトバナジウム酸ナトリウ
ムを含有するバッファーでＳＦ−９細胞を溶解した。５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐ
Ｈ７．５、０．３ＭのＮａＣｌで平衡にしたキレートセファロース・ハイ・トラ
ップカラム（ファルマシア）に可溶性ライゼートを供した。２５０ｍＭのイミダ
ゾールで融合タンパク質を溶出した。回収した酵素を５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐ
Ｈ７．５、５０ｍＭ ＮａＣｌおよび５ｍＭ ＤＴＴを含有するバッファー中で
保存した。

【００９０】 Ｈ．ＲＴＫのための酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ） 酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いてチロシンキナーゼ
活性の存在を検出および測定した。例えばＲｏｓｅおよびＦｒｉｅｍａｎ編、Ｍ
ａｎｕａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第２版、アム・
ソック・オブ・マイクロバイオロジー、ワシントン・ディー・シー、３５９−３
７１頁（１９８０）、Ｖｏｌｌｅｒら、「酵素結合イムノソルベントアッセイ」
に記載されている周知のプロトコルに従ってＥＬＩＳＡを行った。

【００９１】 開示したプロトコルを、特異的ＲＴＫについての活性を決定するために適合化
した。例えばＫＤＲに関するＥＬＩＳＡ実験を行うための好ましいプロトコルを
以下に示す。ＲＴＫファミリーの別の物質および非受容体性チロシンキナーゼに
対する化合物の活性を決定するためのこのプロトコルの適合化は充分に当業者に
おける能力の範囲内である。インヒビターの選択性を決定する目的で全てのＰＴ
Ｋ基質（例えばポリ（Ｇｌｕ_４ Ｔｙｒ）のランダム共重合体、分子量２０００
０〜５００００）をアッセイの見かけのＫｍがほぼ２倍になる濃度のＡＴＰ（典
型的には５μＭ）と一緒に用いた。

【００９２】 インビトロＥＬＩＳＡにおけるＫＤＲ 以下の方法を用いて本発明の化合物のＫＤＲチロシンキナーゼ活性に及ぼす阻
害効果を検定した。

【００９３】 バファーおよび溶液 ＰＧＴ：ポリ（Ｇｌｕ、 Ｔｙｒ）４：１ 粉末を−２０℃で保存する。粉末をリン酸緩衝セイライン（ＰＢＳ）に溶解し
て５０ｍｇ／ｍｌ溶液にする。１ｍｌアリコートを−２０℃で保存する。プレー
トを作製する際にギブコＰＢＳで２５０μｇ／ｍｌに希釈する。

【００９４】 反応バッファー： １００ｍＭ ヘペス、２０ｍＭのＭｇＣｌ_２、４ｍＭのＭｎＣｌ_２、５ｍＭの
ＤＴＴ、０．０２％のＢＳＡ、２００μＭのＮａＶＯ_４、ｐＨ７．１０ ＡＴＰ： １００ｍＭアリコートを−２０℃で保存する。水で２０μＭに希釈する。

【００９５】 洗浄バッファー： ０．１％のトウィーン２０を含むＰＢＳ。

【００９６】 抗体希釈バッファー： ＰＢＳ中０．１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）。

【００９７】 ＴＭＢ基質： ＴＭＢ基質および過酸化物溶液９：１を使用直前に混合するかまたはネオゲン
のケイ・ブルー基質を用いる。

【００９８】 停止溶液： １Ｍ リン酸。

【００９９】 手順 １．プレート調製 ＰＧＴストック（５０ｍｇ／ｍｌ、凍結）をＰＢＳで２５０μｇ／ｍｌに希釈
する。コーニング修飾平底高アフィニティーＥＬＩＳＡプレート（コーニング＃
２５８０５−９６）のウェルあたり１２５μｌを加える。ＰＢＳ１２５μｌをブ
ランクのウェルに加える。シールテープでカバーし、３７℃で一晩インキュベー
トする。洗浄バッファー２５０μｌで１回洗浄し、３７℃の乾燥インキュベータ
ーで約２時間乾燥する。使用時までシールバッグ中被覆したプレートを４℃で保
存する。

【０１００】 ２．チロシンキナーゼ反応： − 水中２０％のＤＭＳＯで４ｘ濃度のインヒビター溶液を調製する。 − 反応バッファーを調製する。 − 酵素溶液を調製し、５０μｌ中望ましい単位になるよう、例えばＫＤＲに関
しては反応溶液中１ｎｇ／μｌでウェルあたり全量５０ｎｇにする。氷上で保存
する。 − ４×ＡＴＰ溶液を水中１００ｍＭ保存溶液から２０μＭにする。氷上で保存
する。 − 酵素溶液をウェルあたり５０μｌ加える（典型的にはキナーゼの特異的活性
に応じて５〜５０ｎｇ酵素／ウェル）。 − ４×インヒビター２５μｌを加える。 − インヒビターアッセイ用に４×ＡＴＰ２５μｌを加える。 − 室温で１０分間インキュベートする。 − ０．０５ＮのＨＣｌをウェルあたり５０μｌ加えて反応を停止させる。 − プレートを洗浄する。 ＊＊反応用の最終濃度 ＡＴＰ：５μＭ ５％ ＤＭＳＯ

【０１０１】 ３．抗体結合 − ２工程希釈（１００倍、次いで２００倍）によりＰＹ２０−ＨＲＰ（ピアー
ス）抗体（ホスホチロシン抗体）の１ｍｇ／ｍｌアリコートをＰＢＳ中０．１％ ＢＳＡで５０ｎｇ／ｍｌに希釈する。 − ウェルあたり１００μｌの抗体を加える。室温で１時間インキュベートする
。４℃で１時間インキュベートする。 − プレートを４回洗浄する。

【０１０２】 ４．色反応 − ＴＭＢ基質を調製し、ウェルあたり１００μｌ加える。 − ６５０ｎｍにおけるＯＤを０．６になるまでモニター観察する。 − １Ｍ リン酸で停止する。プレートリーダー上で振盪する。 − 即座に４５０ｎｍにおけるＯＤを読む。

【０１０３】 最適なインキュベーション時間および酵素反応条件は酵素調製物で若干変化す
るが、各ロットで経験的に決定する。

【０１０４】 Ｆｌｔ−１、Ｔｉｅ−２、ＥＧＦＲおよびＺＡＰ７０について類似のアッセイ
条件を用いる。Ｌｃｋに関しては、使用した反応バッファーは同様のアッセイ条
件下で１００ｍＭのＭＯＰＳＯ、ｐＨ６．５、４ｍＭのＭｎＣｌ_２、２０ｍＭの
ＭｇＣｌ_２、５ｍＭのＤＴＴ、０．２％ ＢＳＡ、２００ｍＭのＮａＶＯ_４であ
った。

【０１０５】 ＰＫＣキナーゼ供給源 ＰＫＣの触媒サブユニットを市販品により入手した（カルバイオケム）。

【０１０６】 ＰＫＣキナーゼアッセイ 確立された方法に従って（Ｙａｓｕｄａ，Ｉ．、Ｋｉｒｓｈｉｍｏｔｏ，Ａ．
、Ｔａｎａｋａ，Ｓ．、Ｔｏｍｉｎａｇａ，Ｍ．、Ｓａｋｕｒａｉ，Ａ．、Ｎｉ
ｓｈｉｚｕｋａ，Ｙ．、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃ
ａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ，３（１６６）：１２２
０−１２２７（１９９０））放射活性キナーゼアッセイを使用した。簡単に、全
ての反応を５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１０ｍＭのＭｇＣｌ_２、２
ｍＭのＤＴＴ、１ｍＭ ＥＧＴＡ、１００μＭ ＡＴＰ、８μＭのペプチド、５
％のＤＭＳＯおよび^３３Ｐ ＡＴＰ（８Ｃｉ／ｍＭ）からなるキナーゼバッファ
ーで実施した。反応容器中化合物および酵素を混合し、ＡＴＰおよび基質混合物
を添加して反応を開始した。続いて停止バッファー（７５ｍＭ リン酸中５ｍＭ ＡＴＰ）１０μｌを添加して反応を終止させて、混合物の一部をホスホセルロ
ースフィルターにスポットした。スポットしたサンプルを５から１５分間、室温
で７５ｍＭのリン酸中３回洗浄した。液体シンチレーションカウンティングによ
り放射性標識の取り込みを定量した。

【０１０７】 エストロゲン受容体結合アッセイ ＭＣＦ−７哺乳動物癌細胞のサイトゾルのヒトエストロゲン受容体に対する１
ｎＭの放射性標識１７β−エストラジオールの結合をＳｈｅｉｎら、Ｃａｎｃｅ
ｒ Ｒｅｓ．，４５：４１９２（１９８５）（出展明示により本明細書に取り込
み）の反応条件を用いて４℃で２０時間インキュベートした後決定した。インキ
ュベーションの後、サイトゾル分画をデキストランでコーティングした木炭の懸
濁液と共に４℃で１０分間混合し、遠心分離し、上澄を収集した。炭上澄に残存
する結合放射活性を液体シンチレーションカクテル（フォーミュラ９８９パッカ
ード）を用いてシンチレーションカウンター（ＬＳ６０００、ベックマン）で測
定した。化合物を２検体ずつ８濃度を同時に試験し、競合曲線を得、阻害活性を
定量した。エストロゲン受容体に対する特異的放射性リガンド結合を全結合およ
び過剰の標識していない１７β−エストラジオール（６μＭ）の存在下決定した
非特異的結合の差として定義した。

【０１０８】 結果 下記の構造式を有する代表的な化合物の阻害濃度が得られた：

【０１０９】

【化１】

【表１】

【０１１０】 これらの結果は、本発明のおよび本明細書において実施例で示した化合物が顕
著なＫＤＲチロシンキナーゼ阻害活性を有し、ＫＤＲチロシンキナーゼインヒビ
ターとしてとりわけ選択的であることを示している。

【０１１１】 ＩＩ．細胞ＲＴＫアッセイ 以下の細胞アッセイを用いて本発明の種々化合物のＫＤＲにおける活性レベル
および影響を決定した。適当な抗体、試薬および技術、例えば当業者に周知の免
疫沈澱およびウェスターンブロッティングを用いて別のチロシンキナーゼ用に同
一の手順に沿って類似のアッセイを設計できる。

【０１１２】 Ａ．ウェスターンブロットにより測定されるようなヒト臍帯静脈内皮細胞（Ｈ
ＵＶＥＣ）におけるＶＥＧＦ誘起ＫＤＲリン酸化 １．ＨＵＶＥＣ細胞（提供者から得て貯留）をクロンテック（サンディエゴ、
カリフォルニア州）から購入し、製造者指示書に従って培養した。初期の継代（
３から８）のみをこのアッセイに用いた。１００ｍｍ培養皿（組織培養用ファル
コン、ベクトン・ディキンソン、プリモス、英国）中完全ＥＢＭ培地（クロンテ
ック）を用いて細胞を培養した。

【０１１３】 ２．化合物の阻害活性を評価するために、細胞をトリプシン処理し、６ウェル
クラスタープ レート（コスター、ケンブリッジ、マサチューセッツ州）の各ウ
ェル中０．５〜１．０×１０^５細胞／ウェルで播種した。

【０１１４】 ３．播種３〜４日後、プレートを９０〜１００％全面成長させた。全てのウェ
ルから培地を除去し、ＰＢＳの５〜１０ｍｌで細胞をすすぎ、補助物質を添加し
ないで（すなわち血清枯渇）ＥＢＭ基本培地５ｍｌと共に１８〜２４時間インキ
ュベートした。

【０１１５】 ４．ＥＢＭ培地１ｍｌ中インヒビターの連続希釈物を細胞に加え（最終濃度２
５μＭ、５μＭまたは１μＭ）、３７℃で１時間インキュベートした。次いでヒ
ト組換えＶＥＧＦ_{（１６５）}（アール・アンド・ジー・システムズ）をＥＢＭ２
ｍｌの入った全ウェルに最終濃度５０ｎｇ／ｍｌで加え、３７℃で１０分間イン
キュベートした。未処理またはＶＥＧＦのみで処理した対照細胞を用いてリン酸
化バックグラウンドおよびＶＥＧＦによるリン酸化誘導を評価した。

【０１１６】 ５．次いで１ｍＭ オルトバナジウム酸ナトリウム（シグマ）を含有する冷Ｐ
ＢＳ５〜１０ｍｌで全ウェルをすすぎ、細胞を溶解し、プロテアーゼインヒビタ
ー（１ｍＭのＰＭＳＦ、１μｇ／ｍｌ アプロチニン、１μｇ／ｍｌのペプスタ
チン、１μｇ／ｍｌのロイペプチン、１ｍＭのバナジウム酸ナトリウム、１ｍＭ
のフッ化ナトリウム）および１μｇ／ｍｌＤＮアーゼを含有するＲＩＰＡバッフ
ァー（５０ｍＭ トリス−ＨＣｌ、ｐＨ７、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ ＮＰ
−４０、０．２５％ デオキシコール酸ナトリウム、１ｍＭ ＥＤＴＡ）中に掻
き取った（全化学物質をシグマ・ケミカル・カンパニー、セントルイス、ミズー
リー州より入手）。ライゼートを１４０００ｒｐｍで３０分間遠心分離し、核を
除去した。

【０１１７】 ６．次いで最低１時間または最大一晩冷（−２０℃）エタノール（２容量）を
添加して等量のタンパク質を沈殿させた。５％ β−メルカプトエタノール（バ
イオラッド、ヘルキュレス、カリフォルニア州）を含有するラエムリサンプルバ
ッファー中にペレットを再構成し、５分間沸騰させた。ポリアクリルアミドゲル
電気泳動（６％、１．５ｍｍノベックス、サンディエゴ、カリフォルニア州）に
よりタンパク質を分析し、ノベックスシステムを用いてニトロセルロース膜に移
した。ウシ血清アルブミン（３％）で遮断した後、抗ＫＤＲポリクローナル抗体
（Ｃ２０、サンタ・クルーズ・バイオテクノロジー、サンタクルーズ、カリフォ
ルニア州）または抗ホスホチロシンモノクローナル抗体（４Ｇ１０、アップステ
ート・バイオテクノロジー、レークプラシッド、ニューヨーク州）を用いて４℃
で一晩タンパク質をプロービングした。洗浄およびヤギ抗ウサギまたはヤギ抗マ
ウスＩｇＧのＨＲＰ抱合Ｆ（ａｂ）２と共に１時間インキュベートした後、化学
発光系（ＥＳＬ）（アメルシャム・ライフ・サイエンシズ、アーリントンハイト
、イリノイ州）を用いてバンドを可視化した。

【０１１８】 結果 下記構造式を有する代表的な化合物Ｉの阻害濃度は以下のとおりである：

【０１１９】

【化２】

【表２】

【０１２０】 この化合物はＫＤＲチロシンキナーゼ選択性をも示す（セクションＩを参照）
。

【０１２１】 これらの結果は、本発明の適当な化合物が内皮細胞においてＫＤＲチロシンキ
ナーゼのＶＥＧＦ誘起チロシンリン酸化に対して顕著な阻害活性を有することを
示している。

【０１２２】 ＩＩＩ．子宮浮腫モデル このアッセイでは化合物がエストロゲン刺激後の最初の数時間に生じるマウス
の子宮重量の急激な増加を阻止する能力を測定する。この子宮重量増加の初期の
発現は子宮の脈管系の浸透性の増大により引き起こされる浮腫によるものである
ことが解っている。Ｃｕｌｌｉｎａｎ−ＢｏｖｅおよびＫｏｓｓ（Ｅｎｄｏｃｒ
ｉｎｏｌｏｇｙ，１３３：８２９−８３７（１９９３））はエストロゲン刺激子
宮浮腫と子宮におけるＶＥＧＦ ｍＲＮＡの発現の増加に親密な一過性の関係が
あることを示している。これらの結果はエストロゲン刺激後の子宮重量の急激な
増加を有意に低減するＶＥＧＦに対して中和モノクローナル抗体を使用すること
により確認されている（ＷＯ９７／４２１８７）。従って、ＶＥＧＦ媒介過浸透
および浮腫を阻止するためのインビボモデルとしてこの系を提示できる。

【０１２３】 材料： 全てのホルモンを凍結乾燥粉末としてシグマ（セントルイス、ミズーリ州）ま
たはカル・バイオケム（ラジョーラ、カリフォルニア州）から購入し、供給者の
指示書に従って調製した。

【０１２４】 ベヒクル成分（ＤＭＳＯ、クレマフォールＥＬ）はシグマ（セントルイス、ミ
ズーリ州）から購入した。

【０１２５】 マウス（バルブ／ｃ、８〜１２週齢）をタコニック（ゲルマンタウン、ニュー
ヨーク州）から購入し、施設動物の管理および使用委員会ガイドラインに従って
無菌の動物用設備で飼育した。

【０１２６】 方法： １日：バルブ／ｃマウスに妊馬血清性性腺刺激ホルモン（ＰＭＳＧ）１２．５
単位を腹腔内注射（ｉ．ｐ．）した。

【０１２７】 ３日：マウスにヒト絨毛性性腺刺激ホルモン（ｈＣＧ）１５単位を投与した。

【０１２８】 ４日：マウスを無作為化し、５〜１０の群に分けた。投与量範囲１〜２００ｍ
ｇ／ｋｇで溶解性およびベヒクルに依存してｉ．ｐ．、ｉ．ｖ．またはｐ．ｏ．
経路で試験化合物を投与した。ベヒクル対照群ではベヒクルのみを投与し、２群
は未処置のままにした。

【０１２９】 典型的には３０分後に実験群、ベヒクル群および未処置群の一つに１７β−エ
ストラジオール（５００μｇ／ｋｇ）をｉ．ｐ．注射した。２〜３時間後、動物
をＣＯ_２吸入により屠殺した。正中線切開の後、各子宮を単離し、子宮頚の直ぐ
下および子宮と卵管の接合部で切断して取り出した。重量測定前の子宮の完全性
を損なわないように注意して脂肪および結合組織を取り除いた。処置群の平均重
量を未処置またはベヒクル処置群と比較した。スチューデント試験により有意性
を決定した。非刺激対照群を用いてエストラジオール応答性をモニター観察した
。

【０１３０】 結果 構造式を有する代表的な化合物についてエストラジオール刺激後の子宮浮腫の
阻止％を用量１００ｍｇ／ｋｇで、３投与経路に関して得た：

【０１３１】

【化３】

【表３】

【０１３２】 本明細書において化合物ＩはＫＤＲ選択的にインビトロキナーゼ活性を阻害し
、ＶＥＧＦ刺激に応答するＫＤＲの細胞自動リン酸化を有効に遮断することが示
された。

【０１３３】 これらの結果は本発明の適当な化合物例えばＫＤＲ機能を選択的に阻害する化
合物Ｉが浮腫形成を有効に遮断することを示している。結果はまた、この化合物
に関してｉ．ｖ．およびｉ．ｐ．投与がとりわけ効果的であることをも示してい
る。重要なことに、同様の抗浮腫効果の結果もまた多くの構造的に異なるＫＤＲ
機能の選択的インヒビターにより得られたものである。

【０１３４】 均等物 本発明をとりわけその好ましい態様に関して示し、記載してきたが、添付され
た請求の範囲により定義される本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく形
態および詳細においてそこに種々の変更を行うことができることは当業者に理解
されよう。当業者は常用される実験のみを用いて本明細書において具体的に記載
した本発明の具体的な態様に対する多くの均等物を認識するかまたは確認できる
。かかる均等物は請求の範囲の範囲内であると考える。

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１２年１２月２２日（２０００．１２．２２）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正内容】

【特許請求の範囲】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 1/04 Ａ６１Ｐ 1/16 1/16 3/10 3/10 7/10 7/10 9/00 9/00 9/02 9/02 9/10 9/10 11/06 11/06 11/16 11/16 13/00 13/00 13/02 13/02 15/00 15/00 17/02 17/02 19/00 19/00 27/00 27/00 27/06 27/06 27/12 27/12 29/00 29/00 １０１ １０１ 35/00 35/00 37/08 37/08 43/00 １０１ 43/00 １０１ １０５ １０５ １１１ １１１ Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 バウズクウェット，ピーター，エフ アメリカ合衆国、マサチューセッツ州、 01452、ハバードストーン、クロス ロー ド、39 Ｆターム(参考） 4C084 AA02 AA13 AA17 BA44 DC32 NA14 ZA31 ZA33 ZA36 ZA38 ZA43 ZA44 ZA59 ZA60 ZA61 ZA68 ZA75 ZA81 ZA83 ZA89 ZA96 ZB11 ZB13 ZB15 ZB26 ZC35 4C085 AA13 BB22 4C086 AA01 AA02 EA16 MA01 MA04 NA14 ZA31 ZA33 ZA36 ZA38 ZA43 ZA44 ZA59 ZA60 ZA61 ZA68 ZA75 ZA81 ZA83 ZA89 ZA96 ZB11 ZB13 ZB15 ZB26 ZC35

Claims (30)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ＫＤＲの細胞シグナル機能を阻害することを特徴とする個体
   の血管過浸透性を阻害する方法。
2. 【請求項２】 前記の、ＫＤＲの細胞シグナル機能の阻害が、ＫＤＲシグナ
   ル機能選択性である請求項１に記載の方法。
3. 【請求項３】 前記の、ＫＤＲの細胞シグナル機能が、活性化リガンドのＫ
   ＤＲの受容体部分との結合により刺激される請求項１に記載の方法。
4. 【請求項４】 前記の、ＫＤＲの細胞シグナル機能の阻害が、ＫＤＲシグナ
   ル機能選択性である請求項３に記載の方法。
5. 【請求項５】 前記の、ＫＤＲの細胞シグナル機能の阻害が、活性化リガン
   ドの生成の遮断、活性化リガンドのＫＤＲチロシンキナーゼ受容体との結合の調
   節、受容体の二量体化の妨害、ＫＤＲリン酸転移反応の遮断、ＫＤＲチロシンキ
   ナーゼの活性阻害、ＫＤＲの細胞内基質漸増の障害、およびＫＤＲチロシンキナ
   ーゼのリン酸化活性により開始される下流へのシグナルの阻害からなる群より選
   択される方法である請求項１に記載の方法。
6. 【請求項６】 前記の、ＫＤＲの細胞シグナル機能の阻害が、ＫＤＲシグナ
   ル機能に対して選択性である請求項５に記載の方法。
7. 【請求項７】 前記の阻害が、個体への化合物の投与により起こる請求項１
   に記載の方法。
8. 【請求項８】 前記化合物が、前記ＫＤＲの触媒的キナーゼ活性を阻害する
   請求項７に記載の方法。
9. 【請求項９】 前記化合物が、ＫＤＲチロシンキナーゼ活性化のアンタゴニ
   ストである請求項７に記載の方法。
10. 【請求項１０】 前記化合物が、ＫＤＲキナーゼ基質のリン酸化を選択的に
    阻害する請求項７に記載の方法。
11. 【請求項１１】 前記の化合物が、前記ＫＤＲチロシンキナーゼ選択性であ
    る請求項７に記載の方法。
12. 【請求項１２】 前記化合物が、ペプチド、抗体および有機分子から選択さ
    れ、且つこの化合物が前記ＫＤＲチロシンキナーゼと結合する請求項１１に記載
    の方法。
13. 【請求項１３】 前記の化合物の投与が、黄斑浮腫、無水晶体症の／膜性白
    内障の胞状斑点浮腫、網膜芽種、眼虚血、眼炎症性病又は眼炎症性感染、脈絡膜
    黒色腫、鉄キレート治療により引き起こされる浮腫副作用、肺浮腫、心筋梗塞、
    リウマチ性疾患、過敏症、外傷部位及びアレルギー性炎症部位における組織浮腫
    、アレルギー、過敏性反応、慢性炎症部位におけるポリープ浮腫、脳性浮腫、脳
    腫瘍の液体充満胞、交通性水頭、手根管症候群、火傷からもたらされる器官損傷
    、皮膚火傷、日焼け性、刺激性又は感染性の水疱、多形性紅斑、水腫斑紋及び他
    の皮膚疾患、脳種、腫瘍滲出、肺癌又は乳癌、腹水、胸膜滲出、心膜滲出、高山
    病、放射線過敏症、放射線皮膚炎、緑内障、結膜炎、脈絡膜黒色腫、成人呼吸困
    難症候群、喘息、気管支炎、卵巣過敏性症候群、多嚢胞卵巣症候群、月経性膨化
    、月経性麻痺、卒中、頭外傷、脳梗塞又は閉塞、低血圧症、潰瘍、捻挫、骨折、
    滑膜炎性滲出、糖尿病性合併症、過粘度症候群、肝硬変、ミクロアルブミン尿症
    、蛋白尿症、尿量過少症、電解質平衡障害、ネフローゼ症候群、滲出症、繊維症
    、ケロイド、及び成長因子の投与、から選択される病状の形成を、阻害する請求
    項１２に記載の方法。
14. 【請求項１４】 ＫＤＲ以外のチロシンキナーゼの細胞シグナル機能の変化
    に関連する悪影響を、前記化合物の投与により回避する請求項１１に記載の方法
    。
15. 【請求項１５】 前記化合物が、単一鎖抗体、ＫＤＲ−特異リボザイム及び
    アンチセンスポリヌクレオチドから選択されるものであり、且つ前記化合物が導
    入されるか又は細胞内で生成し、これにより機能性ＫＤＲチロシンキナーゼの適
    当な出現を阻害する請求項７に記載の方法。
16. 【請求項１６】 前記化合物が、抗−固有ステロイド、Ｒａｓ阻害剤、抗−
    ＴＮＦ剤、抗−ＩＬ１剤、抗ヒスタミン剤、ＰＡＦ−拮抗薬、ＣＯＸ−１阻害剤
    、ＣＯＸ−２阻害剤、ＮＯシンターゼ阻害剤、非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡ
    ＩＤ）、ＰＫＣ阻害剤及びＰＩ_３キナーゼ阻害剤から選択される薬剤と組み合わ
    せて、投与される請求項７に記載の方法。
17. 【請求項１７】 個体の生理的過程又は状態を阻害する方法であって、この
    生理的過程又は状態が、浮腫形成、血管外遊出、血液溢血、血管又はリンパ管か
    らの滲出、組織又は毛細血管からの滲出、腹水形成、基質沈着及び血管血圧低下
    から選択され、前記阻害が、ＫＤＲの細胞シグナル機能を阻害する化合物を投与
    することによりなされる方法。
18. 【請求項１８】 前記化合物が、ＫＤＲチロシンキナーゼ選択性である請求
    項１７に記載の方法。
19. 【請求項１９】 前記化合物が、ペプチド、抗体及び有機分子から選択され
    、この化合物が前記ＫＤＲチロシンキナーゼと結合している請求項１８に記載の
    方法。
20. 【請求項２０】 前記の化合物の投与が、黄斑浮腫、無水晶体症の／膜性白
    内障の胞状斑点浮腫、網膜芽種、眼虚血、眼炎症性病又は眼炎症性感染、脈絡膜
    黒色腫、鉄キレート治療により引き起こされる浮腫副作用、肺浮腫、心筋梗塞、
    リウマチ性疾患、過敏症、外傷部位及びアレルギー性炎症部位における組織浮腫
    、アレルギー、過敏性反応、慢性炎症部位におけるポリープ浮腫、脳性浮腫、脳
    腫瘍の液体充満胞、交通性水頭、手根管症候群、火傷からもたらされる器官損傷
    、皮膚火傷、日焼け性、刺激性又は感染性の水疱、多形性紅斑、水腫斑紋及び他
    の皮膚疾患、脳種、腫瘍滲出、肺癌又は乳癌、腹水、胸膜滲出、心膜滲出、高山
    病、放射線過敏症、放射線皮膚炎、緑内障、結膜炎、脈絡膜黒色腫、成人呼吸困
    難症候群、喘息、気管支炎、卵巣過敏性症候群、多嚢胞卵巣症候群、月経性膨化
    、月経性麻痺、卒中、頭外傷、脳梗塞又は閉塞、低血圧症、潰瘍、捻挫、骨折、
    滑膜炎性滲出、糖尿病性合併症、過粘度症候群、肝硬変、ミクロアルブミン尿症
    、蛋白尿症、尿量過少症、電解質平衡障害、ネフローゼ症候群、滲出症、繊維症
    、ケロイド、及び成長因子の投与、から選択される病状の形成を、阻害する請求
    項１９に記載の方法
21. 【請求項２１】 前記化合物が、前記ＫＤＲの触媒キナーゼ活性を阻害する
    請求項１７に記載の方法。
22. 【請求項２２】 前記化合物が、ＫＤＲチロシンキナーゼ活性化のアンタゴ
    ニストである請求項１７に記載の方法。
23. 【請求項２３】 前記化合物が、ＫＤＲキナーゼ基質のリン酸化を選択的に
    阻害する請求項１７に記載の方法。
24. 【請求項２４】 前記化合物が、前記ＫＤＲチロシンキナーゼ選択性である
    請求項１７に記載の方法。
25. 【請求項２５】 前記ＫＤＲの細胞シグナル機能が、その活性化リガンドを
    ＫＤＲの受容体部分に結合することにより刺激される請求項１７に記載の方法。
26. 【請求項２６】 前記化合物が、前記ＫＤＲチロシンキナーゼ選択性である
    請求項２５に記載の方法。
27. 【請求項２７】 前記化合物が、単一鎖抗体、ＫＤＲ−特異的リボザイム及
    びアンチセンスポリヌクレオチドから選択されるもであり、且つ前記化合物が細
    胞内で導入又は製造され、これにより機能性ＫＤＲチロシンキナーゼの適当な出
    現を阻害する請求項１７に記載の方法。
28. 【請求項２８】 前記ＫＤＲの細胞シグナル機能の阻害が、活性化リガンド
    の生成の遮断、活性化リガンドのＫＤＲチロシンキナーゼ受容体との結合の調節
    、受容体の二量化の破壊、ＫＤＲリン酸転移反応の遮断、ＫＤＲチロシンキナー
    ゼの活性の阻害、ＫＤＲの細胞内基質漸増の阻害、およびＫＤＲチロシンキナー
    ゼのリン酸化活性により開始される下流へのシグナルの阻害からなる群より選択
    される過程である請求項１７に記載の方法。
29. 【請求項２９】 ＫＤＲ以外のチロシンキナーゼの細胞シグナル機能の変化
    に関連する悪影響を、前記化合物の投与により回避する請求項１７に記載の方法
    。
30. 【請求項３０】 前記化合物が、抗−固有ステロイド、Ｒａｓ阻害剤、抗−
    ＴＮＦ剤、抗−ＩＬ１剤、抗ヒスタミン剤、ＰＡＦ−拮抗薬、ＣＯＸ−１阻害剤
    、ＣＯＸ−２阻害剤、ＮＯシンターゼ阻害剤、非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡ
    ＩＤ）、ＰＫＣ阻害剤及びＰＩ_３キナーゼ阻害剤から選択される薬剤と組み合わ
    せて、投与される請求項１７に記載の方法。