JP2002529373A - コンホメーション特異的抗ｖｏｎＷｉｌｌｅｂｒａｎｄ因子抗体 - Google Patents

コンホメーション特異的抗ｖｏｎＷｉｌｌｅｂｒａｎｄ因子抗体

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JP2002529373A
JP2002529373A JP2000578350A JP2000578350A JP2002529373A JP 2002529373 A JP2002529373 A JP 2002529373A JP 2000578350 A JP2000578350 A JP 2000578350A JP 2000578350 A JP2000578350 A JP 2000578350A JP 2002529373 A JP2002529373 A JP 2002529373A
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ロバート・アイ・ハンディン
フアビン・ユアン
アン・マクレオド
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ザ ブリガム アンド ウィメンズ ホスピタル，インコーポレイテッド
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    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)

Abstract

(57)【要約】 本発明はヒトvon Willebrand因子の活性コンホメーションに特異的に結合する抗体及び抗体のフラグメントに関する。最も好ましいのは、組換えにより産生された一本鎖可変イムノグロブリンフラグメントである。該抗体及び抗体のフラグメントは血栓形成部位にのみ作用し、循環している血小板の通常の活性を妨害しないので、広範な適用において抗血栓剤としての使用に特に適する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （本発明の分野） 本発明は、ヒトvon Willebrandの活性コンホメーションを認識し、この因子と
血小板との間の相互作用を阻害する単剤あるいは多剤を含んでいる組成物に関す
る。その組成物は患者の血栓形成を阻止するため、治療的にあるいは予防的に使
用され得る。組成物はまた血栓ができる可能性のある部位を検出するために診断
的に使用されてもよい。
【０００２】 （本発明の背景技術） アテローム性動脈硬化型プラークから発生する血栓症は、アメリカ合衆国にお
ける罹患率と死亡率の主な原因である。血栓形成における初期現象は、損傷した
、あるいは病変した動脈壁への血小板の接着である。接着は血管壁の組成物と血
小板表面上の受容体との間の架橋である、糖蛋白Ｉｂ／ＩＸ／Ｖ複合体を一次的
に形成する血漿蛋白、von Willebrand因子により亢進され、安定化される。他の
細胞や血漿蛋白が関与している接着現象とは別とされるこの相互作用には２つの
独特な特性がある。第１に血小板とのｖＷＦの相互作用は、動脈、細動脈、及び
毛細血管中に存在する高いずり(shear)／高い血流条件下で血小板を血管壁に接
着させたままできる唯一の反応である。第２にｖＷＦは、コンホメーション変化
をしなければ血小板受容体に結合できない唯一の血漿接着蛋白である。
【０００３】 血小板受容体に結合する抗体（例えば、EP 747,060；WO 96/17078；及びUS 5,
336,618参照）、あるいはペプチド（例えば、US 5,688,912；US 5,493,007；US
5,114,842；WO 93/16712；及びEP 319,315参照）を導入することにより血栓形成
を阻止する試みがなされてきた。そのような薬剤の使用に伴う問題の１つは、そ
れらの抗体及びペプチドが循環しているすべての血小板の機能を非選択的に阻害
することである。血栓部位に特異的に作用して血小板接着を阻害する薬剤の開発
は、脳卒中、心筋梗塞、及び関連した様態の治療や防止において明白な前進とな
るだろう。そのような薬剤が、血管が閉塞していく危険性のある部位を同定する
ため診断的に使用されることもあるがそれは同じぐらい重要なことであろう。
【０００４】 （本発明の概要） 組換えＤＮＡやファージディスプレイの技術を用いて、活性ｖＷＦを特異的に
認識し、その血小板接着の促進能を妨害するマウスの抗ヒトｖＷＦ抗体が作成さ
れた。該抗体は血栓形成部位においては作用するが、循環中の、不活性な形態で
あるｖＷＦには結合しない。このことが、より安全でより有効な抗血栓剤を実現
した。
【０００５】 その第１の態様において、本発明は、ヒトｖＷＦの活性コンホメーションに選
択的に結合し、それにより血小板との相互作用能を阻害する抗体からなる組成物
に関する。ここで用いられる「選択的結合」という語は、ｖＷＦが不活性である
ときと比較して活性コンホメーションであるときに、抗体が少なくとも１０倍、
好ましくは少なくとも１００倍ｖＷＦに対する高いアフィニティを有することを
意味する。相対的なアフィニティは、ｖＷＦがリストセチンのような活性化剤の
存在下及び非存在下の双方で検討される標準的なバインディングアッセイを用い
て測定可能である。特に示されない限り「抗体」という語は、インタクトな抗体
のみならず抗原への結合能を保持しているフラグメント、特には組換えで改変さ
れたフラグメントのこともいう。抗体の存在下ｖＷＦ誘発性の血小板凝集量にお
いて統計的に有意な減少がみられれば、血小板結合の阻害が起こっていることに
なる。最も好ましい実施の形態において組換えで産成されたイムノグロブリンの
一本鎖可変領域（ＳｃＦｖ)フラグメントはｖＷＦ−Ａ１のエピトープに対して
配向する。典型的には、ＳｃＦｖフラグメントはマウス由来であり、治療的投与
のためにデザインされた組成物は、薬学的に許容されるキャリアを含んでいる。
【０００６】 第２の態様において、本発明はヒトｖＷＦの活性コンホメーションに選択的に
結合するＳｃＦｖフラグメントを同定する方法に関する。該方法はヒトｖＷＦの
Ａ１領域由来の免疫原（ペプチドあるいはペプチドをコード化している核酸）を
用いて動物、好ましくはマウスを免疫することを含む。免疫処置後、ｍＲＮＡは
該動物から単離され、そのフラグメントをディスプレイできるバクテリオファー
ジ中でＳｃＦｖ ｃＤＮＡライブラリーを産生するのに利用される。該ライブラ
リーは、その後スクリーニングされてｖＷＦの活性コンホメーションに選択的に
結合するフラグメントを発現しているファージが同定される。活性コンホメーシ
ョンを呈示するｖＷＦを誘発する薬剤の存在及び非存在中下、あるいはｖＷＦ誘
発性の血小板凝集の阻害を検討することにより、結合は直接的に検定され得る。
適切なファージが同定されるとすぐに、ＳｃＦｖフラグメントをコード化してい
るＤＮＡは回収され、発現ベクター中でサブクローニングされる。最後に、組換
えＳｃＦｖが該ベクターで形質転換された宿主細胞中で産生され精製される。こ
のような方法で得られたＳｃＦｖフラグメントは本発明の一部である。
【０００７】 本発明はまた上述のタイプの抗体、すなわちヒトｖＷＦの活性コンホメーショ
ンに選択的に結合する抗体を含む医薬組成物を投与することにより、患者におけ
る血栓形成を阻止する方法に関する。該医薬組成物は、活性化ｖＷＦの血小板へ
の結合を阻止するのに十分な用量で投与されるべきであり、治療的に投与されて
もあるいは予防的に投与されてもよい。治療的には、該組成物は、血管が閉塞し
た患者に単独で投与されても、あるいは組織プラスミノゲンアクチベーターある
いはストレプトキナーゼのような血栓溶解剤投与と組み合わせて投与されてもよ
い。予防的には、該組成物は、アテローム性動脈硬化症のために血栓症の危険性
のある、あるいは、例えば血管形成術、ステント設置、あるいは移植片挿入とい
った血管閉塞の危険性をもたらす処置中の患者に投与されてもよい。
【０００８】 抗体は、検出可能に標識されていても、また血栓がおこる可能性のある、例え
ばプラーク破綻や血管損傷のある脈管構造中の部位を確定する画像技術と組み合
わせて利用されてもよい。ＳｃＦｖフラグメントはしばしば非特異性結合の原因
となる抗体の領域が欠けているため、in vivo診断的処置に関する限りこれらの
フラグメントは好ましい。
【０００９】 （本発明の詳細な説明） 本発明は、ｖＷＦの活性化されたコンホメーションを特異的に認識し、ｖＷＦ
の血小板との相互作用を阻止する抗体に関する。それはＳｃＦｖコンホメーショ
ン特異的なフラグメントを作成する方法、及びそれら抗体を診断的、治療的、そ
して予防的に使用する方法を含む。
【００１０】 （発明の実施の形態） Ａ．ｖＷＦの活性コンホメーションに選択的に結合する抗体 抗体を作成する方法及び検出する方法は、Harlow 他、Antibodies：A Laborat ory Manual 、Cold Spring Harbor Laboratory、N.Y.（1988）；Klein、Immunolo gy：The Science of Self-Nonself Discrimination （1982）；Kennett他、Monoc lonal Antibodies and Hybridomas：A New Dimension in Biological Analyses
（1980）；及び、Campbell、Laboratory Techniques in Biochemistry and Mole cular Biology （1984）の中の「Monoclonal Antibody Technology」といった多
数の標準的な文献の中で示されている。コンホメーション特異的な抗体を産生す
るプロセスは、インタクトなｖＷＦ蛋白を適切な動物に注射する、あるいは好ま
しくは、血小板と相互作用すると思われるｖＷＦの領域に相当するように作成さ
れた短いペプチド、すなわちＡ１ドメイン由来のペプチドを注射することを含ん
でいてもよい。別法として、ｖＷＦあるいはｖＷＦの一部分をコード化している
核酸が動物に投与されてもよい（U.S. 5,589,466；U.S. 5,580,859；及びU.S. 5
,703,055参照）。免疫化に好ましい動物はマウスである。
【００１１】 「抗体」という語は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、及び抗原へ
の結合は維持しているこれら抗体のフラグメントをいう。ポリクローナル抗体は
、抗原で免疫された動物の血清由来である。モノクローナル抗体はハイブリドー
マ技術を用いて調製され得る（Kohler他、Nature 256：495（1975）；Hammerlin
g他、Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas中、Elsevier、N.Y. pp 56
3-681(1981)）。一般にこの技術は抗原を用いて動物（通常、マウス）を免疫し
、該免疫された動物から脾細胞を抽出し、該脾細胞をミエローマ細胞、例えばＳ
Ｐ２Ｏ細胞と融合することを含む。融合後、形成されるハイブリドーマ細胞は選
択的にＨＡＴ培地で維持され、その後限界希釈（Wands他、Gastroenterology 80
：224-232（1981））によりクローニングされる。そのような選択により得られ
た細胞は、その後アッセイされてｖＷＦの活性コンホメーションに特異的に結合
することができる抗体を分泌するクローンが同定される。抗原と結合するフラグ
メントは、パパイン（Ｆａｂフラグメントの産生用）あるいはペプシン（Ｆ（ａ
ｂ’）２フラグメントの産生用）のような酵素を用いてインタクトな抗体を蛋白
分解して切断することにより産生されてもよい。
【００１２】 抗体のｖＷＦへの結合を測定するのに適切なアッセイは、本技術分野において
よく知られている。例えば、「２部位」あるいは「サンドイッチ」アッセイとし
ても知られるラジオイムノアッセイあるいはイムノアッセイが利用されてもよい
（Chard、Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology中の
「An Introduction to Radioimmune Assay and Related Techniques」North Hol
land Publishing Co.、N.Y.（1978）参照）。そのようなアッセイの１つの変形
として、テストされるべき抗体が１つの固体の担体で固定化され、その後リスト
セチンのような活性化剤の存在下、及び非存在下において検出可能に標識された
ｖＷＦを含む溶液と一緒にインキュベートされる。非特異的結合は、過剰量の非
標識ｖＷＦと活性化剤の存在下、平行してインキュベーションを行うことにより
測定され得る。この非特異的結合を、総結合量、すなわち非標識ｖＷＦのない場
合の結合から差し引けば、テストされたそれぞれのサンプルの特異的結合となる
。洗浄、攪拌、振盪、濾過等のような他の段階が必要に応じて本アッセイに含ま
れ得る。典型的には、洗浄のステップは、溶液中に残っているリガンドから結合
したリガンドを分離した後と、例えば放射性アイソトープをカウントすることに
よる結合量の測定前が含められる。別法として、活性化されたｖＷＦの存在下、
抗体の血小板凝集への阻害能を検定するアッセイが用いられてもよい。
【００１３】 ｖＷＦの活性コンホメーションへ結合するとして同定された抗体は、その結果
に関してスキャッチャード分析をするのに十分な濃度範囲で再検討されるのが特
に望ましい。このタイプの分析は本技術分野においてよく知られているもので、
抗原に対する抗体のアフィニティを測定するのに利用されることが可能である（
例えば、Ausubel他、Current Protocols in Molecular Biology、pp 11.2.1-11.
2.19（1993）；Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biolog y 、Work他、N.Y.（1978）参照）。コンピュータープログラムが結果の分析の助
けに利用されてもよい（例えば、P. Munson他、Methods Enzymol.92:543-577（1
983）；McPheson、「Kinetic, EBDA Ligand, Lowry-A Collection of Radioliga
nd Binding Analysis Programs」、Elsevier-Biosoft、U.K.（1985）参照）。
【００１４】 Ｂ．ＳｃＦｖフラグメント ＳｃＦｖフラグメントはＶＨのアミノ末端にペプチド結合によりＶＬのカルボ
キシ末端に結合された一本鎖として合成されたＶＬとＶＨの抗体ポリペプチド鎖
からなる蛋白である。これらペプチドをE.coli中で組換えにより産成する方法は
本技術分野においてよく知られている（Bird他、Science 242：423-426（1988）
；Huston他、Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 85：5879-5883（1998）；及び de Kr
uif他、J. Mol. Biol. 248：97-105（1995）参照）。これらフラグメントを産生
する如何なる方法も本発明で使用可能であるが、好ましい方法はｖＷＦのＡ１領
域由来のペプチドを用いてマウスを免疫することからなる方法である。免疫後、
脾臓のｍＲＮＡが、マウスから採取され、そしてＳｃＦｖフラグメントをディス
プレイするバクテリオファージ中のｃＤＮＡライブラリーを作成するのに利用さ
れる。ファージは、その後スクリーニングされてｖＷＦの活性化された形態と特
異的に相互作用するｃＤＮＡが決定される。ＳｃＦｖセグメントはこれらファー
ジから回収され、発現ベクターに組み込まれ、そしてE.coli中でクローニングさ
れる。バクテリアによって産生された組換えＳｃＦｖフラグメントは精製され更
に活性化された及び不活性のｖＷＦの双方に対する結合アフィニティがテストさ
れる。
【００１５】 この手順を用いて、組換え抗体のフラグメントが得られ、３つの重要な特性：
１）本フラグメントは、先の免疫によりあるいはリストセチンのような活性化剤
への暴露により活性化されているｖＷＦにのみ結合する；２）本フラグメントは
、リストセチン誘導性の血小板凝集アッセイを用いて測定されるような血小板へ
のｖＷＦの結合を阻害する；及び３）本フラグメントは、固定化されたｖＷＦに
対する血流中での血小板接着を阻害する、という特性を有する。これらフラグメ
ントの選択性により、本フラグメントは抗血栓剤として患者へ投与するようデザ
インされた医薬組成物としての使用に適したものとなる。
【００１６】 Ｃ．抗体の治療的診断的使用 ｖＷＦの活性コンホメーションに特異的な抗体を含む医薬組成物は、不安定性
狭心症や急性心筋梗塞を含む冠動脈虚血性症候群を治療あるいは阻止するのみな
らず、脳血管及び末梢血管の虚血を治療するのにも使用されてもよい。その組成
物はまた、ステント設置、バルーン血管形成術、あるいは移植片挿入のような治
療的処置と組み合わせて使用されてもよい。
【００１７】 如何なる投与経路及び剤形も本発明に適合し、そしてコンホメーション特異的
抗体は単独の活性化剤として投与されても、あるいは血栓溶解剤のような他の治
療的に活性の薬物と組合せて投与されてもよい。一般に、静脈内、動脈内、筋肉
内、腹腔内、皮内、あるいは皮下の経路による非経腸的な送達が好ましい。
【００１８】 剤形については本技術分野において標準となっている方法を用いて調製されて
もよい（例えば、Remington's Pharmaceutical Science、16th ed.、A. Oslo ed
.、Easton、PA（1980）参照）。活性成分は、製剤上一般に使用されるあらゆる
担体や賦形剤、例えばタルク、アラビアゴム、ラクトース、デンプン、ステアリ
ン酸マグネシウム、ココアバター、水系あるいは非水系の溶媒、オイル、パラフ
ィン誘導体、グリコール等と組み合わせて使用されてもよい。液剤は、水や物理
的に適合する緩衝液、あるいはエタノール１,２-プロピレングリコール、ポリグ
リコール、ジメチルスルホキシド、脂肪族アルコール、トリグリセライド、グリ
セリンの部分エステル等のような有機溶媒を用いて調製することができる。好ま
しい非経腸の組成物は、通常の技術を用いて調製され得るもので、滅菌等張生理
食塩水、水、１,３-ブタンジオール、エタノール、１,２-プロピレングリコール
、水と混合されたポリグリコール、リンゲル液等が含まれる。
【００１９】 患者に投与されるべき活性成分の量は、本技術分野においてよく知られた方法
を用いて決定され、多種多様の臨床的因子に依存する。一例として、典型的な注
射用の医薬組成物は、１ｍLの滅菌緩衝水と１０ｍｇの抗体からなるものであっ
てもよい。静脈内点滴用の典型的な組成は、２５０ｍLの滅菌リンゲル溶液と１
０ｍｇの蛋白からなるものであってもよい。前記組成物は、予防的にあるいは治
療的に投与されてもよい。治療上の適用として組成物は、疾病または症状を有す
る患者に有効な治療効果を得るのに十分な量で投与される。例えばアンギナの場
合、用量は痛みが緩和される用量に一致させるべきである。血管閉塞に対しては
、抗体は１つあるいはそれ以上の血栓溶解剤と組み合わせて使用され、用量は少
なくとも部分的に再灌流させるのに十分であることが期待される。
【００２０】 予防的には、好ましくない疾病や症状の発現を阻止するため、コンホメーショ
ン特異的な抗体を含んでいる医薬組成物が患者に投与される。したがって組成物
は、アテローム硬化型プラークを有する患者に対して血栓症を阻止するため、あ
るいは血管形成術のような治療的処置を受けている患者に対して血管閉塞の確率
を減らすため、投与されてもよい。
【００２１】 抗体はまた潜在的な血栓形成の部位を同定するため診断的に使用されてもよい
。この同定は、ＮＭＲ、ＭＲＩ、あるいはＣＡＴスキャンのような画像技術によ
り検出可能である薬剤を用いて標識している抗体により可能となる。本来非特異
的なin vivo結合の原因である抗体の部分が分子中に存在しないという点で、Ｓ
ｃＦｖフラグメントは特に有益なものとなる。
【００２２】 ここに引用されたすべての参考文献は、全て引用により本明細書に取り込まれ
ている。本発明を全てここに示したことで、本発明の精神や目的あるいはその実
施の形態に影響を与えずに、パラメーターおよびその類の広く等価な条件の範囲
内で本発明が行われ得るということが本技術分野に熟練した者に理解される。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 15/02 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｇ０１Ｎ 33/563 Ｇ０１Ｎ 33/563 (Ｃ１２Ｐ 21/08 //(Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:92） Ｃ１２Ｒ 1:92） (Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ (Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｒ 1:92） Ｃ１２Ｒ 1:92） Ｃ１２Ｎ 15/00 Ｃ (72)発明者 アン・マクレオド アメリカ合衆国02146マサチューセッツ州 ブルックライン、セント・ポール・ストリ ート・ナンバー５、84番 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 BA44 CA04 DA02 EA03 GA11 HA12 4B063 QA01 QA20 QQ10 QQ46 QR08 QR36 QR42 QR56 QS25 QS34 QX02 4B064 AG26 CA12 CA19 CC24 DA01 DA13 4C085 AA13 AA14 BB14 BB41 CC05 CC21 CC29 DD62 DD88 EE01 4H045 AA11 AA20 AA30 CA42 DA65 DA75 EA24 EA50 FA74

Claims (17)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ヒトvon Willebrand因子（ｖＷＦ）の活性コンホメーション
    に選択的に結合する抗体を包含し、該抗体がｖＷＦの血小板への結合を阻害する
    ものである、組成物。
  2. 【請求項２】 該抗体が、一本鎖可変領域イムノグロブリン（ＳｃＦｖ）フ
    ラグメントである、請求項１に記載の組成物。
  3. 【請求項３】 該ＳｃＦｖフラグメントが、マウス由来である、請求項２に
    記載の組成物。
  4. 【請求項４】 薬学的に許容できるキャリアを更に含んでいる、請求項１−
    ３のいずれかに記載の組成物。
  5. 【請求項５】 ｖＷＦの活性コンホメーションに選択的に結合する一本鎖可
    変領域イムノグロブリン（ＳｃＦｖ）フラグメントを同定する方法であって： ａ） ヒトｖＷＦのＡ１領域由来のイムノグロブリンを用いて動物を免疫し； ｂ） ステップａ）の免疫された動物からｍＲＮＡを単離し； ｃ） クローニングされたｃＤＮＡによりコード化されたＳｃＦｖフラグメン
    トをディスプレイすることができるバクテリオファージ中で、ステップｂ）の単
    離されたｍＲＮＡからｃＤＮＡライブラリーを産生し；そして、 ｄ） ステップｃ）のライブラリーをスクリーニングしてｖＷＦの活性コンホ
    メーションに選択的に結合するＳｃＦｖフラグメントをディスプレイするバクテ
    リオファージを同定すること、 を包含する方法。
  6. 【請求項６】 ｖＷＦの活性コンホメーションに選択的に結合するＳｃＦ
    ｖフラグメントを作成する： ａ） ヒトｖＷＦのＡ１領域由来のイムノグロブリンを用いて動物を免疫し； ｂ） ステップａ）の免疫された動物からｍＲＮＡを単離し； ｃ） クローニングされたｃＤＮＡによりコード化されたＳｃＦｖフラグメン
    トをディスプレイすることができるバクテリオファージ中で、ステップｂ）の単
    離されたｍＲＮＡからｃＤＮＡライブラリーを産生し； ｄ） ステップｃ）のライブラリーをスクリーニングしてｖＷＦの活性コンホ
    メーションに選択的に結合するＳｃＦｖフラグメントをディスプレイするバクテ
    リオファージを同定し； ｅ） ステップｄ）で同定されたＳｃＦｖフラグメントをコード化している組
    換えＤＮＡを発現ベクター中でサブクローニングし、 ｆ） 組換えＳｃＦｖを発現することができる宿主細胞をステップｅ）の発現
    ベクターで形質転換し；そして、 ｆ） ステップｆ）の宿主細胞により産生された組換えＳｃＦｖを精製するこ
    と、 を包含する方法。
  7. 【請求項７】 該ステップａ）の動物が、マウスである、請求項５または６
    に記載の方法。
  8. 【請求項８】 該ステップｄ）のスクリーニングが、活性コンホメーション
    を想定するためｖＷＦを誘発する薬剤の存在あるいは非存在下、ｖＷＦの血小板
    への結合を阻害する前記ＳｃＦｖフラグメント決定することを含む、請求項５ま
    たは６に記載の方法。
  9. 【請求項９】 該薬剤が、リストセチンである、請求項８に記載の方法。
  10. 【請求項１０】 該ステップｄ）のスクリーニングが、該ＳｃＦｖフラグメ
    ントがｖＷＦの血小板への結合を阻害するかどうかを決定することを含む、請求
    項５または６に記載の方法。
  11. 【請求項１１】 請求項５または６に記載の方法により産生される、ＳｃＦ
    ｖフラグメント。
  12. 【請求項１２】 ヒトｖＷＦの血小板への結合を阻害する方法であって、該
    ヒトｖＷＦをｖＷＦの活性コンホメーションに選択的に結合する抗体と接触させ
    ることを含む、方法。
  13. 【請求項１３】 該抗体が、ＳｃＦｖフラグメントである、請求項１２に記
    載の方法。
  14. 【請求項１４】 該ＳｃＦｖが、マウス由来である、請求項１３に記載の方
    法。
  15. 【請求項１５】 患者の血栓形成を阻止する方法であって、ヒトｖＷＦの活
    性コンホメーションに選択的に結合し、それによりｖＷＦの血小板への結合を阻
    害する抗体からなる医薬組成物を投与することを含み、該医薬組成物が血栓形成
    を阻止するのに十分な用量で投与される、方法。
  16. 【請求項１６】 該抗体が、ＳｃＦｖフラグメントである、請求項１５に記
    載の方法。
  17. 【請求項１７】 該ＳｃＦｖが、マウス由来である、請求項１６に記載の方
    法。
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