JP2002527061A - ｓｓＤＮＡの酵素的合成 - Google Patents
ｓｓＤＮＡの酵素的合成Info
- Publication number
- JP2002527061A JP2002527061A JP2000576004A JP2000576004A JP2002527061A JP 2002527061 A JP2002527061 A JP 2002527061A JP 2000576004 A JP2000576004 A JP 2000576004A JP 2000576004 A JP2000576004 A JP 2000576004A JP 2002527061 A JP2002527061 A JP 2002527061A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- sequence
- vector
- reverse transcriptase
- genetic elements
- interest
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
- A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/11—Antisense
- C12N2310/111—Antisense spanning the whole gene, or a large part of it
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/12—Type of nucleic acid catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/15—Nucleic acids forming more than 2 strands, e.g. TFOs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/50—Physical structure
- C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Psychology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Rheumatology (AREA)
Abstract
(57)【要約】
真核細胞中のベクターに基づく系を持つ単鎖ｃＤＮＡ（ｓｓ−ｃＤＮＡ）を産生するための方法および組成物。このベクターは宿主細胞が所望の核酸配列（「目的とする配列」）をコードするｓｓＤＮＡを産生することを可能にする、全ての必要なシグナル発生指令および酵素的機能を含む。本明細書には生体内でｓｓＤＮＡを合成するためのベクターに含まれる各成分を記載する。これらには（１）逆転写酵素遺伝子；（２）目的とする所望のｓｓＤＮＡ配列のための鋳型を供給する遺伝子的要素；および（３）逆転写酵素分子による逆転写のためのプライマー部位を提供する目的とする配列をコードする遺伝子的要素に隣接して位置する第二の遺伝子的要素；を含む。このベクターはまた適切なプロモーター／エンハンサーも含む。また、本明細書にはこれらの成分を含むベクターを構築する方法も記載する。
Description
【０００１】 （技術分野） 本発明は酵母、原核細胞および真核細胞中に遺伝子的要素のセット（set of g
enetic elements）からベクター系によって細胞に送達される単鎖ｃＤＮＡ（ss-
cDNA）を産生する方法に関する。このｓｓＤＮＡは細胞中にあるｓｓＤＮＡの所
望の機能を阻害できる最少のベクター配列を用いて細胞中で産生される。
enetic elements）からベクター系によって細胞に送達される単鎖ｃＤＮＡ（ss-
cDNA）を産生する方法に関する。このｓｓＤＮＡは細胞中にあるｓｓＤＮＡの所
望の機能を阻害できる最少のベクター配列を用いて細胞中で産生される。
【０００２】 （背景技術） 知られている限り、介在するおよび／または隣接するベクター配列を含まない
真核細胞中で単鎖デオキシリボ核酸（ｓｓＤＮＡ）種を産生するための方法は存
在しない。確かに科学文献および特許文献にはｃＤＮＡを産生するベクターの開
示があるが（A. Ohshima, et al., 89, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 1016-10
20 (1992); S. Inouye, et al., 3, Current Opin. Genet. Develop., 713-718
(1993); O. Mirochnitchenko et al., 269, J. Biol. Chem., 2380-2383 (1994)
; J.-R. Mao et al., 270, J. Biol. Chem., 19684-19687 (1995); およびU. S.
Patent No. 5,436,141 参照）、真核細胞中でベクター配列に介在しないｓｓＤ
ＮＡ産物の意図する機能を阻害できるｓｓＤＮＡを産生する性能がこの系で証明
されているとは思われない。
真核細胞中で単鎖デオキシリボ核酸（ｓｓＤＮＡ）種を産生するための方法は存
在しない。確かに科学文献および特許文献にはｃＤＮＡを産生するベクターの開
示があるが（A. Ohshima, et al., 89, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 1016-10
20 (1992); S. Inouye, et al., 3, Current Opin. Genet. Develop., 713-718
(1993); O. Mirochnitchenko et al., 269, J. Biol. Chem., 2380-2383 (1994)
; J.-R. Mao et al., 270, J. Biol. Chem., 19684-19687 (1995); およびU. S.
Patent No. 5,436,141 参照）、真核細胞中でベクター配列に介在しないｓｓＤ
ＮＡ産物の意図する機能を阻害できるｓｓＤＮＡを産生する性能がこの系で証明
されているとは思われない。
【０００３】 （発明が解決しようとする技術的課題） それ故、本発明の一目的は隣接および／または介在ヌクレオチドベクター配列
が削減または除去された、ｓｓＤＮＡの合成を試験管内または生体内で指令する
ＤＮＡ構築物を提供することにある。
が削減または除去された、ｓｓＤＮＡの合成を試験管内または生体内で指令する
ＤＮＡ構築物を提供することにある。
【０００４】 （その解決方法） 本発明の一目的はまた生きている生物中で治療的効果を現すために蛋白質が結
合するアプタマー（aptamer）として使用するため、生体内でｓｓＤＮＡおよび
／またはｄｓＤＮＡを産生する方法を提供することにもある。
合するアプタマー（aptamer）として使用するため、生体内でｓｓＤＮＡおよび
／またはｄｓＤＮＡを産生する方法を提供することにもある。
【０００５】 本発明の一目的はまた核酸配列を提供し、また細胞、組織または生物中におい
て所望の効果を現すために、生きている細胞にそのような配列を導入する方法を
提供することにもある。
て所望の効果を現すために、生きている細胞にそのような配列を導入する方法を
提供することにもある。
【０００６】 本発明に従えば、細胞に送達されるべき遺伝子的要素のセットが提供される。
このセットは目的とする配列（sequence of interest）および目的とする配列に
関して３'位に位置する逆転写酵素のためのプライマー結合部位を含む核酸構築
物を含む。
このセットは目的とする配列（sequence of interest）および目的とする配列に
関して３'位に位置する逆転写酵素のためのプライマー結合部位を含む核酸構築
物を含む。
【０００７】 （従来技術より有効な効果） 本発明の遺伝子的要素のセットは生体内および試験管内の両方で安定な単鎖核
酸配列の合成を指向する効率的なシステムを提供する。この単鎖核酸配列は細胞
、組織または生体内で所望の効果を提供するために使用することもある。目的と
する単鎖核酸配列の産生は細胞内で起きるので、単鎖核酸配列を細胞に送達する
ために先行技術が遭遇する問題が克服されるか、少なくとも緩和される。
酸配列の合成を指向する効率的なシステムを提供する。この単鎖核酸配列は細胞
、組織または生体内で所望の効果を提供するために使用することもある。目的と
する単鎖核酸配列の産生は細胞内で起きるので、単鎖核酸配列を細胞に送達する
ために先行技術が遭遇する問題が克服されるか、少なくとも緩和される。
【０００８】 目的とする配列の３'にあるプライマー結合部位を持つ核酸構築物の配置の故
に、本発明の核酸構築物を用いて産生されうる目的とする配列のサイズまたは型
には制限はなく、またこの構築物は標的細胞への所望の経路による容易な送達の
ためのベクターに挿入されうる。
に、本発明の核酸構築物を用いて産生されうる目的とする配列のサイズまたは型
には制限はなく、またこの構築物は標的細胞への所望の経路による容易な送達の
ためのベクターに挿入されうる。
【０００９】 その細胞にとって内在性である逆転写酵素（たとえば、ヒト免疫不全ウイルス
またはサル免疫不全ウイルスによる感染の場合）によって逆転写を実行しうる。
または好ましくは遺伝子的要素のセットに、さらに逆転写酵素遺伝子を含めうる
。
またはサル免疫不全ウイルスによる感染の場合）によって逆転写を実行しうる。
または好ましくは遺伝子的要素のセットに、さらに逆転写酵素遺伝子を含めうる
。
【００１０】 遺伝子的要素のセットが逆転写酵素遺伝子を含む場合には、この逆転写酵素遺
伝子は、好ましくは目的とする配列およびプライマー結合部位についてポリシス
トロン性に転写可能である。
伝子は、好ましくは目的とする配列およびプライマー結合部位についてポリシス
トロン性に転写可能である。
【００１１】 好ましくはこの逆転写酵素遺伝子は目的とする配列およびプライマー結合部位
と同じ核酸構築物に位置し、該逆転写酵素遺伝子は目的とする配列および３'プ
ライマー結合部位に関して５'位に位置するのがより好ましい。
と同じ核酸構築物に位置し、該逆転写酵素遺伝子は目的とする配列および３'プ
ライマー結合部位に関して５'位に位置するのがより好ましい。
【００１２】 逆転写酵素遺伝子は逆転写酵素または逆転写酵素／ＲＮＡｓｅ・Ｈポリプロテ
インをコードしてもよい。
インをコードしてもよい。
【００１３】 逆転写酵素／ＲＮＡｓｅ・Ｈポリプロテインをコードする遺伝子はモロニーマ
ウス白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイルスまたはサル免疫不全ウイルスに由来
するものが適切であろう。
ウス白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイルスまたはサル免疫不全ウイルスに由来
するものが適切であろう。
【００１４】 この遺伝子的要素のセットが逆転写酵素遺伝子を含む場合には、プライマー結
合部位は本逆転写酵素遺伝子がコードする逆転写酵素に特異的なものが好ましい
。あるいは、このプライマー結合部位は内在性逆転写酵素に対して特異的なもの
が好ましい。
合部位は本逆転写酵素遺伝子がコードする逆転写酵素に特異的なものが好ましい
。あるいは、このプライマー結合部位は内在性逆転写酵素に対して特異的なもの
が好ましい。
【００１５】 好ましくは、このプライマー結合部位は転移ＲＮＡ（ｔ−ＲＮＡ）に相補的で
ある。
ある。
【００１６】 好ましくは、本発明の遺伝子的要素のセットはまた該目的とする配列および／
または該逆転写酵素遺伝子の各々のためのプロモーターおよび、要すればエンハ
ンサーも包含する。より好ましくは、プロモーターおよび／またはエンハンサー
は真核細胞のプロモーターおよび／またはエンハンサーである。
または該逆転写酵素遺伝子の各々のためのプロモーターおよび、要すればエンハ
ンサーも包含する。より好ましくは、プロモーターおよび／またはエンハンサー
は真核細胞のプロモーターおよび／またはエンハンサーである。
【００１７】 このプロモーターは構成的、誘導可能、広範囲スペクトル、または組織特異的
プロモーターであってもよい。
プロモーターであってもよい。
【００１８】 好ましくは、この発明の遺伝子的要素のセットはさらに目的とする配列および
３'プライマー結合部位に関して３'位に位置するポリアデニル化テイル配列を有
する。このポリＡテイルはｍＲＮＡ転写物に安定性を提供する。
３'プライマー結合部位に関して３'位に位置するポリアデニル化テイル配列を有
する。このポリＡテイルはｍＲＮＡ転写物に安定性を提供する。
【００１９】 好ましくは目的とする配列はアンチセンス配列である。そこで本発明はアンチ
センス療法の分野、特に遺伝子機能の制御による病理学的条件の処置における広
範囲な使用が可能である。
センス療法の分野、特に遺伝子機能の制御による病理学的条件の処置における広
範囲な使用が可能である。
【００２０】 目的とする配列はまたアプタマー（すなわち、たとえば蛋白質などの非オリゴ
ヌクレオチド標的に結合するオリゴヌクレオチド）でありうる。そこで、また、
本発明が治療的使用への広範囲な使用が可能であることが判明する。
ヌクレオチド標的に結合するオリゴヌクレオチド）でありうる。そこで、また、
本発明が治療的使用への広範囲な使用が可能であることが判明する。
【００２１】 好ましくはこの核酸構築物はＤＮＡである。
【００２２】 好ましくは前記請求項のいずれかによるこの遺伝子的要素のセットは少なくと
も１個のベクターに挿入される。
も１個のベクターに挿入される。
【００２３】 例えば、目的とする配列および３'プライマー結合部位を第一のベクターに導
入し、逆転写酵素遺伝子を第二のベクターに挿入してもよい。
入し、逆転写酵素遺伝子を第二のベクターに挿入してもよい。
【００２４】 あるいは、逆転写酵素遺伝子、目的とする配列、およびプライマー結合部位を
一個のベクターに導入してもよい。後者の場合、逆転写酵素遺伝子は目的とする
配列および３'プライマー結合部位に関して５'位に位置するのが好ましい。
一個のベクターに導入してもよい。後者の場合、逆転写酵素遺伝子は目的とする
配列および３'プライマー結合部位に関して５'位に位置するのが好ましい。
【００２５】 本発明の好適な態様に従えば、 （ａ）目的とする配列および３'プライマー結合部位；および （ｂ）逆転写酵素遺伝子 を含み、細胞への送達に適合された遺伝子的要素のセットが提供される。該目的
とする配列および３'プライマー結合部位およびこの逆転写酵素遺伝子は細胞へ
の送達のためのベクター少なくとも１種に挿入される。
とする配列および３'プライマー結合部位およびこの逆転写酵素遺伝子は細胞へ
の送達のためのベクター少なくとも１種に挿入される。
【００２６】 本発明の核酸構築物は哺乳類およびヒトの治療的な目的のために商業的に入手
可能な送達ベクターに挿入しうるようなものである。また標的とする細胞に依存
して可能ないずれかの経路で投与してもよいものである。
可能な送達ベクターに挿入しうるようなものである。また標的とする細胞に依存
して可能ないずれかの経路で投与してもよいものである。
【００２７】 本発明に従えば、 （ａ）プライマー結合部位および目的とする配列の挿入部位、このプライマー結
合部位は挿入部位に関して３'位に位置する；および （ｂ）逆転写酵素遺伝子； を包含するベクターも提供される。 好ましくは、この逆転写酵素遺伝子は挿入部位および３'プライマー結合部位に
関して５'位に位置する。
合部位は挿入部位に関して３'位に位置する；および （ｂ）逆転写酵素遺伝子； を包含するベクターも提供される。 好ましくは、この逆転写酵素遺伝子は挿入部位および３'プライマー結合部位に
関して５'位に位置する。
【００２８】 本発明の別の一側面に従えば、目的とする配列についての挿入部位および３'
プライマー結合部位を含む第一のベクターおよび逆転写酵素遺伝子を含む第二の
ベクターを包含するベクター系が提供される。
プライマー結合部位を含む第一のベクターおよび逆転写酵素遺伝子を含む第二の
ベクターを包含するベクター系が提供される。
【００２９】 好ましくは本発明のベクターまたはベクター系はプラスミドであるか、または
修正されたウイルス構築物である。
修正されたウイルス構築物である。
【００３０】 好ましくはこの逆転写酵素遺伝子は発現制御配列に作動可能に結合している。
【００３１】 本発明のベクターまたはベクター系は、有利には目的とするアンチセンス、セ
ンス、三重鎖またはその他の単鎖ヌクレオチド配列を、目的とする配列をベクタ
ーにスプライスするための知られている消化技術および連結技術を用いて細胞に
送達するために採用しうる。本明細書に記載するベクターまたはベクター系は宿
主細胞が所望の配列を有する単鎖核酸分子を産生するために必要なシグナル発生
指令および酵素的機能の全てを提供する。
ンス、三重鎖またはその他の単鎖ヌクレオチド配列を、目的とする配列をベクタ
ーにスプライスするための知られている消化技術および連結技術を用いて細胞に
送達するために採用しうる。本明細書に記載するベクターまたはベクター系は宿
主細胞が所望の配列を有する単鎖核酸分子を産生するために必要なシグナル発生
指令および酵素的機能の全てを提供する。
【００３２】 本発明のベクターまたはベクター系はまた、使用者の要望および使用する逆転
写酵素の特異性に応じて種々のプライマー結合部位を使用することができるよう
に、プライマー結合部位の除去および交換ができるように設計してもよい。
写酵素の特異性に応じて種々のプライマー結合部位を使用することができるよう
に、プライマー結合部位の除去および交換ができるように設計してもよい。
【００３３】 また本発明は、本発明のベクターまたはベクター系が安定に変換または遺伝子
移入された宿主細胞、殊に、本発明のベクターまたはベクター系が安定に変換ま
たは遺伝子移入された真核細胞も提供する。真核細胞には酵母または植物細胞ま
たは哺乳類細胞が含まれる。
移入された宿主細胞、殊に、本発明のベクターまたはベクター系が安定に変換ま
たは遺伝子移入された真核細胞も提供する。真核細胞には酵母または植物細胞ま
たは哺乳類細胞が含まれる。
【００３４】 本発明に従えば、さらに単鎖核酸配列を産生するためのキットが提供される。
このキットには本発明のベクターまたはベクター系および挿入部位のための制限
エンドヌクレアーゼを含む。
このキットには本発明のベクターまたはベクター系および挿入部位のための制限
エンドヌクレアーゼを含む。
【００３５】 本発明の別の一側面に従えば、単鎖核酸配列を産生するためのキットが提供さ
れる。このキットには本発明のベクターまたはベクター系、このベクターまたは
ベクター系のための容器、およびこのベクターまたはベクター系の使用について
の指令を含む。
れる。このキットには本発明のベクターまたはベクター系、このベクターまたは
ベクター系のための容器、およびこのベクターまたはベクター系の使用について
の指令を含む。
【００３６】 本発明に従えば、生体内および試験管内において目的とする単鎖核酸配列を産
生する方法が提供される。この方法は標的細胞に核酸構築物（この核酸構築物は
目的とする配列および目的とする配列に関して３'位に位置するプライマー結合
部位を包含する）を導入する段階；この核酸構築物をｍＲＮＡに転写する段階；
およびこのｍＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写する段階；を包含する。
生する方法が提供される。この方法は標的細胞に核酸構築物（この核酸構築物は
目的とする配列および目的とする配列に関して３'位に位置するプライマー結合
部位を包含する）を導入する段階；この核酸構築物をｍＲＮＡに転写する段階；
およびこのｍＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写する段階；を包含する。
【００３７】 好ましくはこの方法はさらにｍＲＮＡの逆転写によって形成されたｍＲＮＡ／
ｃＤＮＡヘテロ二重鎖からｍＲＮＡを除去する段階を含む。
ｃＤＮＡヘテロ二重鎖からｍＲＮＡを除去する段階を含む。
【００３８】 逆転写は標的細胞に導入された逆転写酵素遺伝子によって発現された逆転写酵
素によって実行してもよく、または標的細胞にとって内在性である逆転写酵素（
たとえば、標的細胞がヒト免疫不全ウイルスまたはサル免疫不全ウイルスで感染
している場合）によって実行してもよい。
素によって実行してもよく、または標的細胞にとって内在性である逆転写酵素（
たとえば、標的細胞がヒト免疫不全ウイルスまたはサル免疫不全ウイルスで感染
している場合）によって実行してもよい。
【００３９】 ｍＲＮＡ転写物はＲＮＡｓｅ・ＨによってｍＲＮＡ／ｃＤＮＡヘテロ二重鎖か
ら取り出してもよい。好ましくは、このＲＮＡｓｅ・Ｈは標的細胞に導入された
逆転写酵素／ＲＮＡｓｅ・Ｈポリプロテインをコードする遺伝子から発現される
。
ら取り出してもよい。好ましくは、このＲＮＡｓｅ・Ｈは標的細胞に導入された
逆転写酵素／ＲＮＡｓｅ・Ｈポリプロテインをコードする遺伝子から発現される
。
【００４０】 単鎖核酸配列が本発明の試験管内法によって製造される場合には、この方法は
さらにｍＲＮＡ転写物、ｍＲＮＡ／ｃＤＮＡヘテロ二重鎖および／または単鎖ｃ
ＤＮＡを標的細胞から分離する段階を含んでいてもよい。
さらにｍＲＮＡ転写物、ｍＲＮＡ／ｃＤＮＡヘテロ二重鎖および／または単鎖ｃ
ＤＮＡを標的細胞から分離する段階を含んでいてもよい。
【００４１】 また、本発明は本発明の生体内法または試験管内法によって産生される単鎖ｃ
ＤＮＡ転写物、阻害性核酸分子（inhibitory nucleic acid molecule）（たとえ
ばアンチセンス配列またはアプタマー）、ｍＲＮＡ転写物および／またはヘテロ
二重鎖分子を提供する。
ＤＮＡ転写物、阻害性核酸分子（inhibitory nucleic acid molecule）（たとえ
ばアンチセンス配列またはアプタマー）、ｍＲＮＡ転写物および／またはヘテロ
二重鎖分子を提供する。
【００４２】 阻害性核酸分子は相補的核酸配列に特異的に結合できる、ｍＲＮＡ転写物から
合成された単鎖ＤＮＡまたはｍＲＮＡ転写物自体であってもよい。このような阻
害性核酸分子は特に遺伝子機能を調節するために有用である。阻害性核酸分子は
またＲＮＡまたはＤＮＡ−結合性蛋白質に特異的に結合するオリゴヌクレオチド
であってもよく、または正常にはＲＮＡまたはＤＮＡには結合しない、たとえば
トロンビン、ブラジキニンまたはＰＧＦ２αなどの、生体分子に結合するオリゴ
ヌクレオチドであってもよい。
合成された単鎖ＤＮＡまたはｍＲＮＡ転写物自体であってもよい。このような阻
害性核酸分子は特に遺伝子機能を調節するために有用である。阻害性核酸分子は
またＲＮＡまたはＤＮＡ−結合性蛋白質に特異的に結合するオリゴヌクレオチド
であってもよく、または正常にはＲＮＡまたはＤＮＡには結合しない、たとえば
トロンビン、ブラジキニンまたはＰＧＦ２αなどの、生体分子に結合するオリゴ
ヌクレオチドであってもよい。
【００４３】 本発明に従えばさらに、本発明の遺伝子的要素のセット、ベクターまたはベク
ター系、または宿主細胞を薬理学的に許容しうるアジュバント、希釈剤または担
体とともに含む医薬的組成物が提供される。
ター系、または宿主細胞を薬理学的に許容しうるアジュバント、希釈剤または担
体とともに含む医薬的組成物が提供される。
【００４４】 本発明に従えばまた、治療、特に標的細胞への阻害性核酸分子の送達に使用す
る治療で使用するための本発明の遺伝子的要素のセット、ベクターまたはベクタ
ー系、または宿主細胞が提供される。この本発明の遺伝子的要素のセット、ベク
ターまたはベクター系、または本発明の宿主細胞は遺伝子発現を調節することに
よって病理学的状況を緩和するために特に有用である。
る治療で使用するための本発明の遺伝子的要素のセット、ベクターまたはベクタ
ー系、または宿主細胞が提供される。この本発明の遺伝子的要素のセット、ベク
ターまたはベクター系、または本発明の宿主細胞は遺伝子発現を調節することに
よって病理学的状況を緩和するために特に有用である。
【００４５】 本発明の別の一側面に従えば、遺伝子発現を制御することによって病理学的状
況を緩和するための薬剤、特に標的細胞に阻害性核酸分子を送達することによっ
て病理学的病状を緩和するための、薬剤を製造するために本発明の遺伝子的要素
のセット、ベクターまたはベクター系、または宿主細胞の使用が提供される。そ
の他の使用も開示する。
況を緩和するための薬剤、特に標的細胞に阻害性核酸分子を送達することによっ
て病理学的病状を緩和するための、薬剤を製造するために本発明の遺伝子的要素
のセット、ベクターまたはベクター系、または宿主細胞の使用が提供される。そ
の他の使用も開示する。
【００４６】 本発明の遺伝子的要素のセット、ベクターまたはベクター系、または宿主細胞
は広範囲な病状または疾病、殊に異常なまたは変化された遺伝子発現によって起
きる広範囲な病状または疾病、または遺伝子発現を調節することによって緩和さ
れる広範囲な病状または疾病の予防または治療的処置のために使用してもよい。
は広範囲な病状または疾病、殊に異常なまたは変化された遺伝子発現によって起
きる広範囲な病状または疾病、または遺伝子発現を調節することによって緩和さ
れる広範囲な病状または疾病の予防または治療的処置のために使用してもよい。
【００４７】 本発明の遺伝子的要素のセット、ベクター、宿主細胞,キットおよび方法は単
鎖核酸分子または、実際上いかなる予定するかまたは所望するヌクレオチド塩基
組成物を宿主細胞中で産生するために使用してもよく、またいかなる生体内また
は試験管内系にも適応でき、適用できる。
鎖核酸分子または、実際上いかなる予定するかまたは所望するヌクレオチド塩基
組成物を宿主細胞中で産生するために使用してもよく、またいかなる生体内また
は試験管内系にも適応でき、適用できる。
【００４８】 好適な態様に従えば、本発明の核酸構築物は人工的に合成された産物、組換え
産物、キメラ産物および／または異種産物であって、また目的とする配列はそれ
が導入される宿主細胞にとって外来性であってもよい。
産物、キメラ産物および／または異種産物であって、また目的とする配列はそれ
が導入される宿主細胞にとって外来性であってもよい。
【００４９】 （図面の簡単な説明） 以下の記載で参照する図１Ａは目的とする配列および逆転写酵素のプライマー
結合部位をコードする遺伝子的要素を含むプラスミドの図式である。 図１Ｂは逆転写酵素の遺伝子を含むプラスミドの図式である。 図１Ｃは目的とする配列、プライマー結合部位、および逆転写酵素をコードす
る遺伝子的要素を含むプラスミドの図式である。 図２は本発明方法の一態様を示す図式である。
結合部位をコードする遺伝子的要素を含むプラスミドの図式である。 図１Ｂは逆転写酵素の遺伝子を含むプラスミドの図式である。 図１Ｃは目的とする配列、プライマー結合部位、および逆転写酵素をコードす
る遺伝子的要素を含むプラスミドの図式である。 図２は本発明方法の一態様を示す図式である。
【００５０】 ベクターは（本明細書で使用する用語「ベクター」は、目的とする核酸配列を
送達および／または操作するために使用するプラスミドまたは修正ウイルス構築
物、またはその他の適当な伝達体を示す）生体内でｓｓＤＮＡを産生するように
設計された。このベクターは必要なシグナル発生指令および宿主細胞が所望配列
（「目的とする配列」）のｓｓＤＮＡを産生するための酵素的機能を全て含む。
試験管内または生体内でｓｓＤＮＡを合成するためのベクターへの挿入によって
細胞への送達するように適応された遺伝子的要素のセットが記載される。これに
は次のものが含まれる：（１）逆転写酵素遺伝子；（２）所望の目的とするｓｓ
ＤＮＡ配列のための鋳型を提供する遺伝子的要素；および（３）目的とする配列
をコードする遺伝子的要素に隣接して位置し、逆転写酵素分子による逆転写のた
めのプライマー部位を提供する第二の遺伝子的要素。このベクターはまた適切な
プロモーター／エンハンサーも含む。本明細書ではこれらの遺伝子的要素が挿入
されたベクターを構築する方法も記載する。
送達および／または操作するために使用するプラスミドまたは修正ウイルス構築
物、またはその他の適当な伝達体を示す）生体内でｓｓＤＮＡを産生するように
設計された。このベクターは必要なシグナル発生指令および宿主細胞が所望配列
（「目的とする配列」）のｓｓＤＮＡを産生するための酵素的機能を全て含む。
試験管内または生体内でｓｓＤＮＡを合成するためのベクターへの挿入によって
細胞への送達するように適応された遺伝子的要素のセットが記載される。これに
は次のものが含まれる：（１）逆転写酵素遺伝子；（２）所望の目的とするｓｓ
ＤＮＡ配列のための鋳型を提供する遺伝子的要素；および（３）目的とする配列
をコードする遺伝子的要素に隣接して位置し、逆転写酵素分子による逆転写のた
めのプライマー部位を提供する第二の遺伝子的要素。このベクターはまた適切な
プロモーター／エンハンサーも含む。本明細書ではこれらの遺伝子的要素が挿入
されたベクターを構築する方法も記載する。
【００５１】 カセットの第一成分である逆転写酵素遺伝子に関しては、記載する実施例では
モロニーマウス白血病ウイルス（MoMuLV）から得られた逆転写酵素遺伝子を有利
に使用した。本発明のカセットにはその他のレトロウイルス逆転写酵素遺伝子の
多数を有利に用いてもよく、この逆転写酵素遺伝子が真核細胞における発現のた
めに、たとえばサイトメガロウイルス（CMV）またはラウスザルコマウイルス（R
SV）プロモーターのような適切な上流プロモーター／エンハンサーによって調節
されることは好適である。
モロニーマウス白血病ウイルス（MoMuLV）から得られた逆転写酵素遺伝子を有利
に使用した。本発明のカセットにはその他のレトロウイルス逆転写酵素遺伝子の
多数を有利に用いてもよく、この逆転写酵素遺伝子が真核細胞における発現のた
めに、たとえばサイトメガロウイルス（CMV）またはラウスザルコマウイルス（R
SV）プロモーターのような適切な上流プロモーター／エンハンサーによって調節
されることは好適である。
【００５２】 この逆転写酵素遺伝子はまた好ましくはｍＲＮＡが、ｍＲＮＡの安定化のため
に３'ポリ（Ａ）テイルを含む逆転写酵素遺伝子から産生されるために、下流に
ポリアデニル化シグナル配列を含む。当技術分野の熟練者に知られているように
ポリ（Ａ）テイルは入手可能であり、発現される真核細胞遺伝子の産生のために
日常的に使用されている。細胞中で産生されるこの逆転写酵素は相補的ＤＮＡ（
ｃＤＮＡ）を下記の目的とする配列を含む遺伝子的要素をコードする鋳型から転
写されたプライマリーｍＲＮＡ転写物から合成する。この逆転写酵素のＲＮＡｓ
ｅ・Ｈ活性は細胞内の内在性ＲＮＡｓｅ・Ｈ活性とともにヘテロ二重鎖ＲＮＡ／
ｃＤＮＡハイブリッドのｍＲＮＡ成分を分解し、生体内においてｓｓＤＮＡを産
生する。
に３'ポリ（Ａ）テイルを含む逆転写酵素遺伝子から産生されるために、下流に
ポリアデニル化シグナル配列を含む。当技術分野の熟練者に知られているように
ポリ（Ａ）テイルは入手可能であり、発現される真核細胞遺伝子の産生のために
日常的に使用されている。細胞中で産生されるこの逆転写酵素は相補的ＤＮＡ（
ｃＤＮＡ）を下記の目的とする配列を含む遺伝子的要素をコードする鋳型から転
写されたプライマリーｍＲＮＡ転写物から合成する。この逆転写酵素のＲＮＡｓ
ｅ・Ｈ活性は細胞内の内在性ＲＮＡｓｅ・Ｈ活性とともにヘテロ二重鎖ＲＮＡ／
ｃＤＮＡハイブリッドのｍＲＮＡ成分を分解し、生体内においてｓｓＤＮＡを産
生する。
【００５３】 カセットに含まれる第二の成分は標的細胞内でｓｓＤＮＡを合成するための鋳
型を提供する核酸配列をコードする。目的とする配列を含む要素はこれである。
前記の逆転写酵素遺伝子の場合と同様に、この遺伝子的要素は好ましくはこの遺
伝子的要素の上流に位置する適切な広範囲スペクトルまたは、たとえばＳＶ−４
０プロモーターのような組織特異的なプロモーター／エンハンサー、またはプロ
モーター／エンハンサーの組合せによって調節される。この開示の利益を受ける
当技術分野の熟練者はまた多数の組織特異的または広範囲スペクトルのプロモー
ター／エンハンサーまたはプロモーター／エンハンサーの組合せを逆転写酵素遺
伝子および目的とする配列を調節することで利益を享受するために使用してもよ
いことも認識することになる。この発明を例示するために入手可能なプロモータ
ー／エンハンサー全部のリストは必要ではないが、このプロモーター／エンハン
サーは構成性であっても誘導性のものであってもよく、またここに記載するＣＭ
ＶまたはＲＳＶ（細胞型に非特異的）またはＧＦＡＰ（組織特異的）プロモータ
ー／エンハンサー、およびその他のウイルス性または哺乳類性のプロモーターを
含んでいてもよい。本発明に関連して使用するために適切な代表的プロモーター
／エンハンサーは、これに限定するものではないが、ＨＳＶtk（McKnight et al
., 217, Science, 316, 1982）、ヒトβ−グロブリン（Breathnach et al., 50,
Ann. Rev. of Biochem., 349, 1981）、β−アクチン （Kawamoto et al., 8,
Mol. Cell Biol.,267, 1988）、ラット成長ホルモン（Larsen et al., 83, Proc
. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 8283, 1986）、ＭＭＴＶ（Huang et al., 27, Cel
l, 245, 1981）、アデノウイルス５Ｅ２（Imperiale et al., 4, Mol. Cell. Bi
ol., 875, 1984）、ＳＶ４０（Angel et al., 49, Cell, 729, 1987）、ａ−２
−マクログロブリン（Kunz et al., 17, Nucl. Acids Res., 1121, 1989）、Ｍ
ＨＣクラスＩ遺伝子Ｈ−２ｋｂ（Blanar et al., 8, EMBO J., 1139, 1989）、
および甲状腺刺激ホルモン（Chatterjee et al., 86, Proc. Natl. Acad. Sci.,
U.S.A., 9114, 1989）を含むであろう。
型を提供する核酸配列をコードする。目的とする配列を含む要素はこれである。
前記の逆転写酵素遺伝子の場合と同様に、この遺伝子的要素は好ましくはこの遺
伝子的要素の上流に位置する適切な広範囲スペクトルまたは、たとえばＳＶ−４
０プロモーターのような組織特異的なプロモーター／エンハンサー、またはプロ
モーター／エンハンサーの組合せによって調節される。この開示の利益を受ける
当技術分野の熟練者はまた多数の組織特異的または広範囲スペクトルのプロモー
ター／エンハンサーまたはプロモーター／エンハンサーの組合せを逆転写酵素遺
伝子および目的とする配列を調節することで利益を享受するために使用してもよ
いことも認識することになる。この発明を例示するために入手可能なプロモータ
ー／エンハンサー全部のリストは必要ではないが、このプロモーター／エンハン
サーは構成性であっても誘導性のものであってもよく、またここに記載するＣＭ
ＶまたはＲＳＶ（細胞型に非特異的）またはＧＦＡＰ（組織特異的）プロモータ
ー／エンハンサー、およびその他のウイルス性または哺乳類性のプロモーターを
含んでいてもよい。本発明に関連して使用するために適切な代表的プロモーター
／エンハンサーは、これに限定するものではないが、ＨＳＶtk（McKnight et al
., 217, Science, 316, 1982）、ヒトβ−グロブリン（Breathnach et al., 50,
Ann. Rev. of Biochem., 349, 1981）、β−アクチン （Kawamoto et al., 8,
Mol. Cell Biol.,267, 1988）、ラット成長ホルモン（Larsen et al., 83, Proc
. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 8283, 1986）、ＭＭＴＶ（Huang et al., 27, Cel
l, 245, 1981）、アデノウイルス５Ｅ２（Imperiale et al., 4, Mol. Cell. Bi
ol., 875, 1984）、ＳＶ４０（Angel et al., 49, Cell, 729, 1987）、ａ−２
−マクログロブリン（Kunz et al., 17, Nucl. Acids Res., 1121, 1989）、Ｍ
ＨＣクラスＩ遺伝子Ｈ−２ｋｂ（Blanar et al., 8, EMBO J., 1139, 1989）、
および甲状腺刺激ホルモン（Chatterjee et al., 86, Proc. Natl. Acad. Sci.,
U.S.A., 9114, 1989）を含むであろう。
【００５４】 真核細胞中での発現については目的とする配列に続いて逆転写によるｃＤＮＡ
合成の開始のためのプライマー結合部位（ＰＢＳ）をコードする下流の遺伝子的
要素が続く。このＰＢＳは標的真核細胞内に存在する転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）に
相補的な配列である。本明細書に記載する本発明に好適な遺伝子的要素のセット
に含まれるこのＰＢＳは実際にＭｏＭｕＬＶの１８ヌクレオチドの配列領域から
取った。しかしながらこの目的のためには、遺伝子的要素のセットに含まれる逆
転写酵素に合致するいかなるＰＢＳを利用してもよい。目的とする配列の多重コ
ピーは、各々対応するＰＢＳとともに所望ならば、例えば標的細胞内の遺伝子の
種々の領域にアンチセンス配列を送達するために使用される本発明の方法による
細胞への送達のためのベクターに導入できる。
合成の開始のためのプライマー結合部位（ＰＢＳ）をコードする下流の遺伝子的
要素が続く。このＰＢＳは標的真核細胞内に存在する転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）に
相補的な配列である。本明細書に記載する本発明に好適な遺伝子的要素のセット
に含まれるこのＰＢＳは実際にＭｏＭｕＬＶの１８ヌクレオチドの配列領域から
取った。しかしながらこの目的のためには、遺伝子的要素のセットに含まれる逆
転写酵素に合致するいかなるＰＢＳを利用してもよい。目的とする配列の多重コ
ピーは、各々対応するＰＢＳとともに所望ならば、例えば標的細胞内の遺伝子の
種々の領域にアンチセンス配列を送達するために使用される本発明の方法による
細胞への送達のためのベクターに導入できる。
【００５５】 遺伝子的要素から転写されたｍＲＮＡプライマリー転写物は前記の通りに所望
のｓｓＤＮＡであることができる目的とする配列を合成し、プロセッシングする
ために前記逆転写酵素によって使用される鋳型として作用する。このｍＲＮＡプ
ライマリー転写物は目的とする配列の下流にプライマー結合部位（ＰＢＳ）を含
む。このＰＢＳは「プライマーｔＲＮＡ」によって排他的に認識される。当技術
分野の熟練者にとってｔＲＮＡは細胞にとって内在性である。各ｔＲＮＡはアミ
ノ酸をコードするｍＲＮＡ転写体にある独特な配列（すなわちコドン）を認識す
る性能を有し、また特定のアミノ酸に共有結合的に結合する（すなわちそのｔＲ
ＮＡは特定のアミノ酸に結合したときに「荷電」する）性能を有する。しかしな
がら、アミノ酸と「プライマーｔＲＮＡ」はｍＲＮＡ転写ＰＢＳに結合するが、
共有結合的（すなわち「非荷電」）に結合するのではない時に逆転写酵素による
ｓｓＤＮＡ合成を開始するために使用してもよい。例えば本明細書に記載する実
施例に使用されるＭｏＭｕＬＶ逆転写酵素は非荷電のリジンｔＲＮＡを認識し、
使用するが、それによってＰＢＳにある独特な配列を認識し、結合する。そこで
、該ベクターに導入される各ＰＢＳはプライマーｔＲＮＡが認識する独特な配列
を含んでいなければならず、またプライマーｔＲＮＡは使用する特定の逆転写酵
素によって認識されるものでなければならない。
のｓｓＤＮＡであることができる目的とする配列を合成し、プロセッシングする
ために前記逆転写酵素によって使用される鋳型として作用する。このｍＲＮＡプ
ライマリー転写物は目的とする配列の下流にプライマー結合部位（ＰＢＳ）を含
む。このＰＢＳは「プライマーｔＲＮＡ」によって排他的に認識される。当技術
分野の熟練者にとってｔＲＮＡは細胞にとって内在性である。各ｔＲＮＡはアミ
ノ酸をコードするｍＲＮＡ転写体にある独特な配列（すなわちコドン）を認識す
る性能を有し、また特定のアミノ酸に共有結合的に結合する（すなわちそのｔＲ
ＮＡは特定のアミノ酸に結合したときに「荷電」する）性能を有する。しかしな
がら、アミノ酸と「プライマーｔＲＮＡ」はｍＲＮＡ転写ＰＢＳに結合するが、
共有結合的（すなわち「非荷電」）に結合するのではない時に逆転写酵素による
ｓｓＤＮＡ合成を開始するために使用してもよい。例えば本明細書に記載する実
施例に使用されるＭｏＭｕＬＶ逆転写酵素は非荷電のリジンｔＲＮＡを認識し、
使用するが、それによってＰＢＳにある独特な配列を認識し、結合する。そこで
、該ベクターに導入される各ＰＢＳはプライマーｔＲＮＡが認識する独特な配列
を含んでいなければならず、またプライマーｔＲＮＡは使用する特定の逆転写酵
素によって認識されるものでなければならない。
【００５６】 ベクターが本発明の遺伝子的要素のセットを有する細胞の認識を促進するため
に、および／または目的とする配列の発現の水準を増大するために、他の特有な
遺伝子的要素を含むことは好適である。特定の遺伝子的要素には原核細胞系内で
そのベクターが変換され、増幅されることができるような選択マーカー遺伝子が
含まれる。例えば、最も通常に使用される選択マーカーは細菌（たとえば大腸菌
）に、たとえばアンピシリン、クロラムフェニコール、カナマイシン（ネオマイ
シン）またはテトラサイクリンのような抗生物質に対する耐性を与える遺伝子で
ある。そのベクターが後続する遺伝子移入、確認および真核細胞系内での発現の
ための特定の遺伝子的要素を含むことも好適である。真核細胞内での発現のため
には、細胞に抗生物質またはその他の薬剤に対する耐性を与えるか、またはたと
えば細胞に形態学的変化、接触阻害の喪失、または増殖速度の増加のような細胞
の表現型の変化などを与える多重選択方策（たとえばチャイニーズハムスター卵
巣：ＣＨＯ）を使用してもよい。真核細胞系で使用される選択マーカーには、こ
れに限定するものではないが、ゼオシン（Zeocin）に対する耐性マーカー、Ｇ４
１８に対する耐性、アミノグリコシド抗生物質に対する耐性、またはたとえばβ
−ｇａｌまたは緑色螢光蛋白質のような表現型選択マーカーを含む。
に、および／または目的とする配列の発現の水準を増大するために、他の特有な
遺伝子的要素を含むことは好適である。特定の遺伝子的要素には原核細胞系内で
そのベクターが変換され、増幅されることができるような選択マーカー遺伝子が
含まれる。例えば、最も通常に使用される選択マーカーは細菌（たとえば大腸菌
）に、たとえばアンピシリン、クロラムフェニコール、カナマイシン（ネオマイ
シン）またはテトラサイクリンのような抗生物質に対する耐性を与える遺伝子で
ある。そのベクターが後続する遺伝子移入、確認および真核細胞系内での発現の
ための特定の遺伝子的要素を含むことも好適である。真核細胞内での発現のため
には、細胞に抗生物質またはその他の薬剤に対する耐性を与えるか、またはたと
えば細胞に形態学的変化、接触阻害の喪失、または増殖速度の増加のような細胞
の表現型の変化などを与える多重選択方策（たとえばチャイニーズハムスター卵
巣：ＣＨＯ）を使用してもよい。真核細胞系で使用される選択マーカーには、こ
れに限定するものではないが、ゼオシン（Zeocin）に対する耐性マーカー、Ｇ４
１８に対する耐性、アミノグリコシド抗生物質に対する耐性、またはたとえばβ
−ｇａｌまたは緑色螢光蛋白質のような表現型選択マーカーを含む。
【００５７】 この記載から、二重鎖を形成した後に「ステム」部分を形成する目的とする配
列を隣接させて反転タンデムリピートを添加することによって線状ｓｓＤＮＡを
無処置のステム−ループｓｓＤＮＡ構造に成形できることは当技術分野における
熟練者には明らかとなる。このステム−ループ構造は多くの使用において線状の
ｓｓＤＮＡ型と同様に機能できる。このようなｓｓＤＮＡ構造は二重鎖型でｓｓ
ＤＮＡの「末端」を保存することによって細胞内ヌクレアーゼに耐性が大きくな
ると思われる。
列を隣接させて反転タンデムリピートを添加することによって線状ｓｓＤＮＡを
無処置のステム−ループｓｓＤＮＡ構造に成形できることは当技術分野における
熟練者には明らかとなる。このステム−ループ構造は多くの使用において線状の
ｓｓＤＮＡ型と同様に機能できる。このようなｓｓＤＮＡ構造は二重鎖型でｓｓ
ＤＮＡの「末端」を保存することによって細胞内ヌクレアーゼに耐性が大きくな
ると思われる。
【００５８】 また、特定のＤＮＡ結合蛋白質が認識し、結合する、予定した配列（すなわち
「アプタマー」）が包含されるようにステム（二重鎖ＤＮＡ）を設計できること
は当技術分野における熟練者には明らかとなる。他の使用の中には、特定の遺伝
子発現を調節する選択した蛋白質をタイターアウト（titer out）するための競
合体として細胞中でこのステム構造を使用するものがある。例えば、この「ステ
ム」は細胞中で本発明のｓｓＤＮＡステム−ループは、たとえばアデノウイルス
Ｅ１ａのような選択した転写因子のための結合部位を含む。アデノウイルスＥ１
ａは、他の発癌遺伝子と同様に細胞がコードする正常な細胞から変換された細胞
への変化を起こす転写因子の活性に影響を与えることによって数種のアデノウイ
ルス性および細胞性遺伝子の遺伝子発現を変調する。（Jones et al., Genes De
v., 2, 267-281 (1988)）。こうして、ステムの二重鎖構造はプロモーターへの
結合から蛋白質を予防し、特に有害遺伝子の発現を阻害してその因子を「拘束（
bind up）」するように機能する。当技術分野における熟練者にとって二重鎖ス
テム構造が要すれば、例えば特定の遺伝子の発現を活発に調節する種々の転写因
子によって認識される多重な結合部位を含んでもよいことは明らかになる。例え
ば、アデノウイルスＥ１ａが１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール・１３−ア
セテート（ＴＰＡ）による、他の有糸***促進剤多数による、およびｒａｓ、ｍ
ｏｓ、ｓｒｃおよびｔｒｋ発癌遺伝子による転写の誘導を招くプロモーター要素
であるフォルボールエステルに応答する要素を経てコラーゲナーゼ遺伝子の転写
を抑制することが見出されている。この反応機構にはＡＰ−１ファミリー転写因
子の機能阻害を含む。Offringa et al., 62, Cell, 527-538 (1990)。
「アプタマー」）が包含されるようにステム（二重鎖ＤＮＡ）を設計できること
は当技術分野における熟練者には明らかとなる。他の使用の中には、特定の遺伝
子発現を調節する選択した蛋白質をタイターアウト（titer out）するための競
合体として細胞中でこのステム構造を使用するものがある。例えば、この「ステ
ム」は細胞中で本発明のｓｓＤＮＡステム−ループは、たとえばアデノウイルス
Ｅ１ａのような選択した転写因子のための結合部位を含む。アデノウイルスＥ１
ａは、他の発癌遺伝子と同様に細胞がコードする正常な細胞から変換された細胞
への変化を起こす転写因子の活性に影響を与えることによって数種のアデノウイ
ルス性および細胞性遺伝子の遺伝子発現を変調する。（Jones et al., Genes De
v., 2, 267-281 (1988)）。こうして、ステムの二重鎖構造はプロモーターへの
結合から蛋白質を予防し、特に有害遺伝子の発現を阻害してその因子を「拘束（
bind up）」するように機能する。当技術分野における熟練者にとって二重鎖ス
テム構造が要すれば、例えば特定の遺伝子の発現を活発に調節する種々の転写因
子によって認識される多重な結合部位を含んでもよいことは明らかになる。例え
ば、アデノウイルスＥ１ａが１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール・１３−ア
セテート（ＴＰＡ）による、他の有糸***促進剤多数による、およびｒａｓ、ｍ
ｏｓ、ｓｒｃおよびｔｒｋ発癌遺伝子による転写の誘導を招くプロモーター要素
であるフォルボールエステルに応答する要素を経てコラーゲナーゼ遺伝子の転写
を抑制することが見出されている。この反応機構にはＡＰ−１ファミリー転写因
子の機能阻害を含む。Offringa et al., 62, Cell, 527-538 (1990)。
【００５９】 当技術分野の熟練者が認識することになる別の一側面では本発明は本発明に従
って製造されるＤＮＡ転写物のループ部分における複合二次的ｓｓＤＮＡ構造を
構築するために使用される。このような二次的構造は数種の機能のいずれかに適
するように設計される。例えば、目的とする配列は要すれば（これに限定するも
のではないが）単鎖ｃＤＮＡ転写物のループ部分に挿入されてたとえばアデノ関
連ウイルスの長い末端反復構造にまたはレトロトランスポゾンに見られるような
いわゆる「クローバー葉」または「クルーシブル」状構造を形成するような配列
を包含する。正常な環境下では、そのような構造は宿主ゲノムに部位特異的方法
で結合される。
って製造されるＤＮＡ転写物のループ部分における複合二次的ｓｓＤＮＡ構造を
構築するために使用される。このような二次的構造は数種の機能のいずれかに適
するように設計される。例えば、目的とする配列は要すれば（これに限定するも
のではないが）単鎖ｃＤＮＡ転写物のループ部分に挿入されてたとえばアデノ関
連ウイルスの長い末端反復構造にまたはレトロトランスポゾンに見られるような
いわゆる「クローバー葉」または「クルーシブル」状構造を形成するような配列
を包含する。正常な環境下では、そのような構造は宿主ゲノムに部位特異的方法
で結合される。
【００６０】 本発明の遺伝子的要素のセットを取込まれたベクターは哺乳類およびヒトを治
療する目的のために、多重な商業的に入手可能な送達ベクターに取込まれるよう
に適応可能であるために、特定の標的細胞のために選択したベクターに依存して
多重な送達経路が可能である。例えば、ウイルスのベクターは今では患者の細胞
を変換して、ゲノムにＤＮＡに導入するために最も頻繁に使用される方法である
。間接的な方法では、新遺伝子情報を有するウイルスベクターを使用して体内か
ら分離した標的細胞を感染させ、そしてこれらの細胞を次に再移植（すなわち生
体外）する。新生児動物への直接的生体内遺伝子転移はリポソームに封入された
ＤＮＡの製剤についておよびウイルスのエンベロープ受容体蛋白質を含むプロテ
オリポソームに捕捉されたＤＮＡについて報告されている（Nicolau et al., Pr
oc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 80: 1068-1072 (1983); Kaneda et al., Scienc
e, 243: 375-378 (1989); Mannino et al., Biotechniques, 6: 682-690 (1988)
）。燐酸カルシウム共沈殿ＤＮＡについて陽性の結果が報告されている（Benven
isty and Reshef, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 83: 9551-9555 (1986)）。
このような系には脈管内注射、筋肉内注射および皮下注射、ならびに直接的な腫
瘍内注射および体腔内注射が含まれる。選択したベクターに取込まれた時に遺伝
子的要素のセットはまた経粘膜投与、直腸内投与、経口投与、または吸入型投与
などの送達方法によって投与できる。
療する目的のために、多重な商業的に入手可能な送達ベクターに取込まれるよう
に適応可能であるために、特定の標的細胞のために選択したベクターに依存して
多重な送達経路が可能である。例えば、ウイルスのベクターは今では患者の細胞
を変換して、ゲノムにＤＮＡに導入するために最も頻繁に使用される方法である
。間接的な方法では、新遺伝子情報を有するウイルスベクターを使用して体内か
ら分離した標的細胞を感染させ、そしてこれらの細胞を次に再移植（すなわち生
体外）する。新生児動物への直接的生体内遺伝子転移はリポソームに封入された
ＤＮＡの製剤についておよびウイルスのエンベロープ受容体蛋白質を含むプロテ
オリポソームに捕捉されたＤＮＡについて報告されている（Nicolau et al., Pr
oc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 80: 1068-1072 (1983); Kaneda et al., Scienc
e, 243: 375-378 (1989); Mannino et al., Biotechniques, 6: 682-690 (1988)
）。燐酸カルシウム共沈殿ＤＮＡについて陽性の結果が報告されている（Benven
isty and Reshef, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 83: 9551-9555 (1986)）。
このような系には脈管内注射、筋肉内注射および皮下注射、ならびに直接的な腫
瘍内注射および体腔内注射が含まれる。選択したベクターに取込まれた時に遺伝
子的要素のセットはまた経粘膜投与、直腸内投与、経口投与、または吸入型投与
などの送達方法によって投与できる。
【００６１】 本発明の遺伝子的要素のセットを取込んだベクターは有利には目的とするアン
チセンス配列、センス配列、三重鎖配列、または他のいずれかの単鎖ヌクレオチ
ド配列を目的とする特定の配列を反転タンデムリピートの存在または不在下にベ
クターにスプライスするための知られている消化技術および連結技術を用いて送
達するために採用される。この開示によって利益を受ける当技術分野の熟練者は
真核細胞内で発現されるために用いられる前記シグナルが目的とする特定の配列
に依存して当技術分野で知られている方法によって修正されうることをまた認識
することになる。最も可能性のある変化は目的とする配列の発現を所望する系内
で目的とする配列について有利な発現特性を与えるようにプロモーターを変化す
ることである。多数の可能なプロモーターおよびその他のシグナルが存在するが
、それらは選択された目的とする配列と特定の標的細胞によく依存するので、特
定の標的細胞および目的とする配列に対して好適でありうる可能性のあるエンハ
ンサー、誘導可能なおよび構成的プロモーター系、および／またはポリ（Ａ）テ
イル系を全て列挙することは不可能である。
チセンス配列、センス配列、三重鎖配列、または他のいずれかの単鎖ヌクレオチ
ド配列を目的とする特定の配列を反転タンデムリピートの存在または不在下にベ
クターにスプライスするための知られている消化技術および連結技術を用いて送
達するために採用される。この開示によって利益を受ける当技術分野の熟練者は
真核細胞内で発現されるために用いられる前記シグナルが目的とする特定の配列
に依存して当技術分野で知られている方法によって修正されうることをまた認識
することになる。最も可能性のある変化は目的とする配列の発現を所望する系内
で目的とする配列について有利な発現特性を与えるようにプロモーターを変化す
ることである。多数の可能なプロモーターおよびその他のシグナルが存在するが
、それらは選択された目的とする配列と特定の標的細胞によく依存するので、特
定の標的細胞および目的とする配列に対して好適でありうる可能性のあるエンハ
ンサー、誘導可能なおよび構成的プロモーター系、および／またはポリ（Ａ）テ
イル系を全て列挙することは不可能である。
【００６２】 本発明はまた生体内または試験管内での治療で使用する阻害性核酸を産生する
ために利用される。阻害性核酸はｍＲＮＡ鋳型から合成されたｓｓＤＮＡまたは
相補的核酸配列に特異的に結合するｍＲＮＡ鋳型それ自体でありうる。適当な標
的配列を結合することによって、ＲＮＡ−ＲＮＡ、ＤＮＡ−ＤＮＡまたはＲＮＡ
−ＤＮＡ二重鎖または三重鎖が形成される。より通常には、これらは通常遺伝子
のセンスまたはコード鎖に相補的であるので、これらの核酸はしばしば「アンチ
センス」と名付けられる。しかし「センス」配列もまた治療的目的のために細胞
内で利用される。例えば正常にはＲＮＡまたはＤＮＡとは結合しない生体分子に
特異的に結合するオリゴヌクレオチドの確認は、今やサイズ、構造および組成に
おいて広範に変化する多数の生体分子について証明されている。これらの分子に
は（１）凝血形成過程でフィブリノーゲンをフィブリンに変換する多機能性調節
蛋白質の１種であるトロンビン；（２）血圧調節および低血圧に関連するノナペ
プチドのキニンであるブラジキニン；（３）ホルモン作用を示すプロスタグラン
ジンまたは脂肪酸誘導体であるＰＧＦ２α；が包含される。これに加えてオリゴ
ヌクレオチドと天然の生物学的機能が一次的に細胞外である生体分子との間の相
互作用が証明されている。U.S. Pat. No. 5,840,867。それ故、本明細書で使用
する用語「阻害性核酸」は「センス」核酸および「アンチセンス」核酸の双方を
示す。
ために利用される。阻害性核酸はｍＲＮＡ鋳型から合成されたｓｓＤＮＡまたは
相補的核酸配列に特異的に結合するｍＲＮＡ鋳型それ自体でありうる。適当な標
的配列を結合することによって、ＲＮＡ−ＲＮＡ、ＤＮＡ−ＤＮＡまたはＲＮＡ
−ＤＮＡ二重鎖または三重鎖が形成される。より通常には、これらは通常遺伝子
のセンスまたはコード鎖に相補的であるので、これらの核酸はしばしば「アンチ
センス」と名付けられる。しかし「センス」配列もまた治療的目的のために細胞
内で利用される。例えば正常にはＲＮＡまたはＤＮＡとは結合しない生体分子に
特異的に結合するオリゴヌクレオチドの確認は、今やサイズ、構造および組成に
おいて広範に変化する多数の生体分子について証明されている。これらの分子に
は（１）凝血形成過程でフィブリノーゲンをフィブリンに変換する多機能性調節
蛋白質の１種であるトロンビン；（２）血圧調節および低血圧に関連するノナペ
プチドのキニンであるブラジキニン；（３）ホルモン作用を示すプロスタグラン
ジンまたは脂肪酸誘導体であるＰＧＦ２α；が包含される。これに加えてオリゴ
ヌクレオチドと天然の生物学的機能が一次的に細胞外である生体分子との間の相
互作用が証明されている。U.S. Pat. No. 5,840,867。それ故、本明細書で使用
する用語「阻害性核酸」は「センス」核酸および「アンチセンス」核酸の双方を
示す。
【００６３】 標的核酸に結合することによって、阻害性核酸は標的核酸の機能を阻害する。
この阻害性効果は、例えばＤＮＡ転写、プロセッシングまたはｍＲＮＡへのポリ
（Ａ）付加、ＤＮＡ複製、翻訳、またはたとえばＲＮＡ分解を促進するような細
胞の阻害性機構を促進の遮断に由来する。それ故、阻害性核酸法は遺伝子の発現
を変化するための多種の手法を包含する。アンチヘルペスウイルス阻害性核酸の
一例はＩＳＩＳ２９２２（ISIS Pharmaceuticals, Carlsbad, CA）であって、こ
れはＣＭＶ（Biotechnology News 14: 5参照）。阻害性核酸の技術の様々な型は
Helene, C. & Toulme, J. (1990) Biochim. Biophys. Acta, 1049: 99-125に記
載されており、以下では「Helene & Toulme」と記載する。
この阻害性効果は、例えばＤＮＡ転写、プロセッシングまたはｍＲＮＡへのポリ
（Ａ）付加、ＤＮＡ複製、翻訳、またはたとえばＲＮＡ分解を促進するような細
胞の阻害性機構を促進の遮断に由来する。それ故、阻害性核酸法は遺伝子の発現
を変化するための多種の手法を包含する。アンチヘルペスウイルス阻害性核酸の
一例はＩＳＩＳ２９２２（ISIS Pharmaceuticals, Carlsbad, CA）であって、こ
れはＣＭＶ（Biotechnology News 14: 5参照）。阻害性核酸の技術の様々な型は
Helene, C. & Toulme, J. (1990) Biochim. Biophys. Acta, 1049: 99-125に記
載されており、以下では「Helene & Toulme」と記載する。
【００６４】 要約すれば、阻害性核酸療法の手法は（１）ＤＮＡ配列を標的とするのもの；
（２）ＲＮＡ配列を標的とするのもの（プレ−ｍＲＮＡおよびｍＲＮＡを含む）
；（３）蛋白質を標的とするのもの（センス鎖手法）；および（４）標的核酸の
切断または化学的修飾を起こすもの；に分類することができる。第一の手法には
数種の類型が意図されている。二重鎖ＤＮＡの主たる溝部に結合して三重ラセン
または「三重鎖」構造を形成するように核酸を設計する。あるいは、複製または
転写の間に起きる二重鎖ＤＮＡの開口部に由来する単鎖ＤＮＡの領域に結合する
ように阻害性核酸を設計する。より通常にはｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ前駆体に結
合するように阻害性核酸を設計する。阻害性核酸はプレ−ｍＲＮＡの成熟を防ぐ
ために使用される。阻害性核酸はＲＮＡのプロセッシング、スプライシングまた
は翻訳を妨害するように設計されてもよい。第二の手法では阻害性核酸はｍＲＮ
Ａを標的とする。この手法では阻害性核酸はコードする蛋白質の翻訳を特異的に
遮断するように設計される。この第二の手法を使用して、阻害性核酸は決定的な
蛋白質をコードするｍＲＮＡの翻訳を阻止することによってある種の細胞性機能
を選択的に抑制するために使用できる。例えばｃ−ｍｙｃ−ｍＲＮＡの領域に相
補的な阻害性核酸はｃ−ｍｙｃプロトオンコジーンを過剰発現するヒトの前骨髄
細胞性白血病細胞系統ＨＬ６０においてｃ−ｍｙｃ蛋白質の発現を阻害する。Wi
ckstrom E. L. et al. (1988), PNAS, 85: 1028-1032; Harel-Bellan, A. et al
. (1988) Exp. Med., 168: 2309-2318 参照。Helene & Toulmeに記載されている
ように、ｍＲＮＡを標的とする阻害性核酸はコードされている蛋白質の翻訳を阻
止するための数種の異なる機構によって作用することが証明されている。
（２）ＲＮＡ配列を標的とするのもの（プレ−ｍＲＮＡおよびｍＲＮＡを含む）
；（３）蛋白質を標的とするのもの（センス鎖手法）；および（４）標的核酸の
切断または化学的修飾を起こすもの；に分類することができる。第一の手法には
数種の類型が意図されている。二重鎖ＤＮＡの主たる溝部に結合して三重ラセン
または「三重鎖」構造を形成するように核酸を設計する。あるいは、複製または
転写の間に起きる二重鎖ＤＮＡの開口部に由来する単鎖ＤＮＡの領域に結合する
ように阻害性核酸を設計する。より通常にはｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ前駆体に結
合するように阻害性核酸を設計する。阻害性核酸はプレ−ｍＲＮＡの成熟を防ぐ
ために使用される。阻害性核酸はＲＮＡのプロセッシング、スプライシングまた
は翻訳を妨害するように設計されてもよい。第二の手法では阻害性核酸はｍＲＮ
Ａを標的とする。この手法では阻害性核酸はコードする蛋白質の翻訳を特異的に
遮断するように設計される。この第二の手法を使用して、阻害性核酸は決定的な
蛋白質をコードするｍＲＮＡの翻訳を阻止することによってある種の細胞性機能
を選択的に抑制するために使用できる。例えばｃ−ｍｙｃ−ｍＲＮＡの領域に相
補的な阻害性核酸はｃ−ｍｙｃプロトオンコジーンを過剰発現するヒトの前骨髄
細胞性白血病細胞系統ＨＬ６０においてｃ−ｍｙｃ蛋白質の発現を阻害する。Wi
ckstrom E. L. et al. (1988), PNAS, 85: 1028-1032; Harel-Bellan, A. et al
. (1988) Exp. Med., 168: 2309-2318 参照。Helene & Toulmeに記載されている
ように、ｍＲＮＡを標的とする阻害性核酸はコードされている蛋白質の翻訳を阻
止するための数種の異なる機構によって作用することが証明されている。
【００６５】 細胞に導入される阻害性核酸にはまた Helene と Toulme に記載されているよ
うにｍＲＮＡ翻訳に関与する酵素または結合蛋白質を捕捉または競合するように
遺伝子またはｍＲＮＡの「センス」鎖を設計するための第三の手法を利用できる
。最後に阻害性核酸は化学的不活化または標的とする遺伝子またはｍＲＮＡの切
断を誘導するために使用できる。化学的不活化は阻害性核酸と細胞内標的核酸と
の間に架橋を誘導することによって起きる。
うにｍＲＮＡ翻訳に関与する酵素または結合蛋白質を捕捉または競合するように
遺伝子またはｍＲＮＡの「センス」鎖を設計するための第三の手法を利用できる
。最後に阻害性核酸は化学的不活化または標的とする遺伝子またはｍＲＮＡの切
断を誘導するために使用できる。化学的不活化は阻害性核酸と細胞内標的核酸と
の間に架橋を誘導することによって起きる。
【００６６】 別の一態様では、本発明はクローニングされた前記の逆転写酵素遺伝子を有す
るプラスミドならびにこのキットの使用者が目的とする特定の配列を挿入する多
重クローニング部位（ＭＣＳ）を含むキットの形を取り、この目的とする配列は
使用者の意図に従って前記反転タンデムリピートを含有しても含有していなくて
もよい。このＭＣＳはプライマー結合部位をコードする遺伝子的要素の上流に存
在する。次に得られるプラスミドを保持されている細胞培養物から精製し、凍結
乾燥するか、または包装および使用者への出荷のために保存する。このキットは
好ましくはまた目的とする配列をクローニングするＭＣＳのための制限エンドヌ
クレアーゼ、目的とする配列をプラスミドに挿入するためのリガーゼおよびその
他の酵素、およびプラスミドのマップを適当な反応緩衝液とともに含む。
るプラスミドならびにこのキットの使用者が目的とする特定の配列を挿入する多
重クローニング部位（ＭＣＳ）を含むキットの形を取り、この目的とする配列は
使用者の意図に従って前記反転タンデムリピートを含有しても含有していなくて
もよい。このＭＣＳはプライマー結合部位をコードする遺伝子的要素の上流に存
在する。次に得られるプラスミドを保持されている細胞培養物から精製し、凍結
乾燥するか、または包装および使用者への出荷のために保存する。このキットは
好ましくはまた目的とする配列をクローニングするＭＣＳのための制限エンドヌ
クレアーゼ、目的とする配列をプラスミドに挿入するためのリガーゼおよびその
他の酵素、およびプラスミドのマップを適当な反応緩衝液とともに含む。
【００６７】 （発明を実施するための最良の形態） 特段の記載がない限り、Seabrook et al. (1989) (J. Seabrook et al., Mole
cular Cloning: A Laboratory Manual (2nd Ed.), Cold Spring Harbor Press (
1989), 以後「"Maniatis, et al. (1989)」と記載する)が記載する標準的技術を
以下の実施例に利用する。生体内でｓｓＤＮＡを製造する方法を例示するために
数種の実験的設計を提供する。
cular Cloning: A Laboratory Manual (2nd Ed.), Cold Spring Harbor Press (
1989), 以後「"Maniatis, et al. (1989)」と記載する)が記載する標準的技術を
以下の実施例に利用する。生体内でｓｓＤＮＡを製造する方法を例示するために
数種の実験的設計を提供する。
【００６８】実施例 以下に例示目的のためにのみ実施例を提供するが、これで本発明の範囲を限定
することは意図されていない。材料 ：プラスミドｐｃＤＮＡ３.Ｉ／Ｚｅｏ＋はInvitrogen Corp. (San Diego,
CA)から購入し、プラスミドＰＢＫ−ＲＳＶはStratagene（La Jolla, CA）から
購入した。オリゴデオキシリボヌクレオチド（ODN）はMidland Certified Reage
nt Co.（Midland, TX）が合成した。ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）はBoehringer
Mannheim Corp.（Indianapolis, IN）から購入したTaq DNAポリメラーゼを用い
てRobo-gradient型サーマルサイクラー（Stratagene（La Jolla, CA））で行っ
た。制限エンドヌクレアーゼおよびT4 DNAリガーゼはBoehringer Mannheim Corp
. （Indianapolis, IN）から入手した。使用したODNは添付の配列表に列挙する
。
することは意図されていない。材料 ：プラスミドｐｃＤＮＡ３.Ｉ／Ｚｅｏ＋はInvitrogen Corp. (San Diego,
CA)から購入し、プラスミドＰＢＫ−ＲＳＶはStratagene（La Jolla, CA）から
購入した。オリゴデオキシリボヌクレオチド（ODN）はMidland Certified Reage
nt Co.（Midland, TX）が合成した。ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）はBoehringer
Mannheim Corp.（Indianapolis, IN）から購入したTaq DNAポリメラーゼを用い
てRobo-gradient型サーマルサイクラー（Stratagene（La Jolla, CA））で行っ
た。制限エンドヌクレアーゼおよびT4 DNAリガーゼはBoehringer Mannheim Corp
. （Indianapolis, IN）から入手した。使用したODNは添付の配列表に列挙する
。
【００６９】実施例１ 真核細胞中でのｓｓＤＮＡの生体内合成 以下の生体内実験はｓｓＤＮＡが無処置細胞中で産生できるかどうかを決定す
るように設計された。これらの宿主細胞中のプラスミドにクローニングされた遺
伝子的要素の発現を制御するために、使用するプラスミドにはＲＳＶプロモータ
ーを加えた。しかしながら、当技術分野の熟練者でこの開示による利益を享受す
る者は前記した表の真核細胞プロモーターはこの目的のために使用できることを
認識することになる。
るように設計された。これらの宿主細胞中のプラスミドにクローニングされた遺
伝子的要素の発現を制御するために、使用するプラスミドにはＲＳＶプロモータ
ーを加えた。しかしながら、当技術分野の熟練者でこの開示による利益を享受す
る者は前記した表の真核細胞プロモーターはこの目的のために使用できることを
認識することになる。
【００７０】 プラスミド構築物：クローニングベクターｐｓｓＸＢおよび単鎖ＤＮＡとして
発現すべき配列を含むプラスミドは共通の中間体構築物から構築した。この操作
の宿主株にはＸＬ−１−ブルーＭＲＦ'（Stratagene（La Jolla, CA））を用い
た。 共通の中間体構築物を得るためのクローニングの第一段階ではベクターｐｃＤ
ＮＡ３.Ｉ／Ｚｅｏ＋（Invitrogen, San Diego, CA）を制限酵素ＮｈｅＩおよび
ＡｐａＩで消化した。合成的に製造した単鎖オリゴデオキシヌクレオチドＯＤＮ
−ＰＭＭＶ（＋）およびＯＤＮ−ＰＭＭＶ（−）（表Ｉ参照）をアニーリングす
ることによって形成した、適合するＮｈｅＩ末端およびＡｐａＩ末端を有する二
重鎖オリゴデオキシリボヌクレオチドを、消化したｐｃＤＮＡ３.Ｉ／Ｚｅｏ＋
に連結してｐｃＰＭＭＶを得た。この挿入物にはモロニーマウス白血病ウイルス
（MoMuLV）の逆転写酵素プロモーター領域を含む。これにはまたｐｃＰＭＭＶに
独特なＮｏｔＩ部位２個を含む。この構築物およびこの構築物から誘導されるプ
ラスミドにおいては、（＋）の記号を付した鎖はｐｃＤＮＡ３.Ｉ／Ｚｅｏ（＋
）のサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターからＲＮＡに転写されるよう
に位置している。
発現すべき配列を含むプラスミドは共通の中間体構築物から構築した。この操作
の宿主株にはＸＬ−１−ブルーＭＲＦ'（Stratagene（La Jolla, CA））を用い
た。 共通の中間体構築物を得るためのクローニングの第一段階ではベクターｐｃＤ
ＮＡ３.Ｉ／Ｚｅｏ＋（Invitrogen, San Diego, CA）を制限酵素ＮｈｅＩおよび
ＡｐａＩで消化した。合成的に製造した単鎖オリゴデオキシヌクレオチドＯＤＮ
−ＰＭＭＶ（＋）およびＯＤＮ−ＰＭＭＶ（−）（表Ｉ参照）をアニーリングす
ることによって形成した、適合するＮｈｅＩ末端およびＡｐａＩ末端を有する二
重鎖オリゴデオキシリボヌクレオチドを、消化したｐｃＤＮＡ３.Ｉ／Ｚｅｏ＋
に連結してｐｃＰＭＭＶを得た。この挿入物にはモロニーマウス白血病ウイルス
（MoMuLV）の逆転写酵素プロモーター領域を含む。これにはまたｐｃＰＭＭＶに
独特なＮｏｔＩ部位２個を含む。この構築物およびこの構築物から誘導されるプ
ラスミドにおいては、（＋）の記号を付した鎖はｐｃＤＮＡ３.Ｉ／Ｚｅｏ（＋
）のサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターからＲＮＡに転写されるよう
に位置している。
【００７１】 ＭｏＭｕＬＶ逆転写酵素のための遺伝子を含むプラスミドｐｓｓＤＮＡ−Ｅｘ
ｐｒｅｓｓ−Ａ（ｐｓｓＸＡ）は再度ＸＬ−１−ブルーＭＲＦ'を宿主株に使用
してベクターｐＢＫ−ＲＳＶ（Stratagene, La Jolla, CA））から構築された。
ＭｏＭｕＬＶを発現するマウスの細胞系統（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−１８５８）はア
メリカンタイプカルチャーコレクションから入手した。ウイルスＲＮＡを分離し
、ＯＤＮ−ＲＴ（−）（表Ｉ）から逆転写した。この逆転写物を次に製造社の指
示に従ってPromega社（Madison, WI）のキット、プライマーＯＤＮ−ＲＴ（＋）
およびプライマーＯＤＮ−ＲＴ（−）を用いてＰＣＲ増幅し、ＳａｃＩおよびＨ
ｉｎｄＩＩＩ（これらの制限エンドヌクレアーゼ部位は５'プライマーおよび３'
プライマー中に存在する）で消化した。得られた２.４ｋｂ産物はＭｏＭｕＬＶ
ゲノムの配列を２５４６位と４９０８位の間に含む。成熟ウイルス逆転写酵素ペ
プチドは２３３７位と４３４９位の間の配列によってコードされている（Petrop
oulos, C. J. Retroviral taxonomy, protein structure, sequences and genet
ic maps. In: Retroviruses, 757, Appendix 2, Coffin, J. M. (Ed.) Cold Sp
ring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, USA 1977）が
、アミノ末端で切り取ったペプチドは活性を完全に保存している（Sun et al.,
(1998)）。
ｐｒｅｓｓ−Ａ（ｐｓｓＸＡ）は再度ＸＬ−１−ブルーＭＲＦ'を宿主株に使用
してベクターｐＢＫ−ＲＳＶ（Stratagene, La Jolla, CA））から構築された。
ＭｏＭｕＬＶを発現するマウスの細胞系統（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−１８５８）はア
メリカンタイプカルチャーコレクションから入手した。ウイルスＲＮＡを分離し
、ＯＤＮ−ＲＴ（−）（表Ｉ）から逆転写した。この逆転写物を次に製造社の指
示に従ってPromega社（Madison, WI）のキット、プライマーＯＤＮ−ＲＴ（＋）
およびプライマーＯＤＮ−ＲＴ（−）を用いてＰＣＲ増幅し、ＳａｃＩおよびＨ
ｉｎｄＩＩＩ（これらの制限エンドヌクレアーゼ部位は５'プライマーおよび３'
プライマー中に存在する）で消化した。得られた２.４ｋｂ産物はＭｏＭｕＬＶ
ゲノムの配列を２５４６位と４９０８位の間に含む。成熟ウイルス逆転写酵素ペ
プチドは２３３７位と４３４９位の間の配列によってコードされている（Petrop
oulos, C. J. Retroviral taxonomy, protein structure, sequences and genet
ic maps. In: Retroviruses, 757, Appendix 2, Coffin, J. M. (Ed.) Cold Sp
ring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, USA 1977）が
、アミノ末端で切り取ったペプチドは活性を完全に保存している（Sun et al.,
(1998)）。
【００７２】 ｐＢＫ−ＲＳＶベクターをＸｂａＩおよびＮｈｅＩで消化してｌａｃプロモー
ター領域を取った。アニール化したオリゴデオキシヌクレオチドＯＤＮ−Ｎ＞Ｓ
（＋）およびＯＤＮ−Ｎ＞Ｓ（−）によって形成したリンカーを使用してＮｈｅ
Ｉ末端をＳａｃＩ末端に変換した。逆転写酵素のアンプリマーをＨｉｎｄＩＩＩ
部位に連結し、この構築物を次にｐＢＫ−ＲＳＶのＳａｃＩ部位とＸｂａＩ部位
との間に連結してｐＢＫ−ＲＳＶ−ＲＴを得た。
ター領域を取った。アニール化したオリゴデオキシヌクレオチドＯＤＮ−Ｎ＞Ｓ
（＋）およびＯＤＮ−Ｎ＞Ｓ（−）によって形成したリンカーを使用してＮｈｅ
Ｉ末端をＳａｃＩ末端に変換した。逆転写酵素のアンプリマーをＨｉｎｄＩＩＩ
部位に連結し、この構築物を次にｐＢＫ−ＲＳＶのＳａｃＩ部位とＸｂａＩ部位
との間に連結してｐＢＫ−ＲＳＶ−ＲＴを得た。
【００７３】 本発明を含む遺伝子的要素のセットはまた例えばｐｃ３.１ＤＮＡ／Ｚｅｏ−
誘導プラスミドとｐＢＫ−ＲＳＶ誘導プラスミドとを、融合したプラスミドがｓ
ｓＤＮＡをコードする遺伝子的要素、ＭｏＭｕＬＶ−ＲＴ遺伝子、およびＰＢＳ
をコードするように融合することによって製造された単一のプラスミドからも発
現されることを当技術分野の熟練者は認識することになる。ｐＢＫ−ＲＳＶ−Ｒ
Ｔ／ＭｂｏＬをＮｓｉＩで消化してｈｉｓ−ｐｒｏ介在リンカーおよび関連する
調節要素を持つＭｏ−ＭｕＬＶ−ＲＴ遺伝子を含む５.３ｋｂ断片を得る。この
５.３ｋｂＤＮＡ断片を内部ＥｃｏＲＩ部位を含むリンカーに連結し、ＥｃｏＲ
Ｉで消化する。ｐｃ３.１／Ｚｅｏ／Ｎ−Ｍおよびテスト配列を含む誘導プラス
ミドをＢｇｌＩＩで消化する。これはサイトメガロウイルスのエンハンサー／プ
ロモーター（ＰＣＭＶ）にあるｐｃ３.１ＤＮＡ／Ｚｅｏの独特な部位を認識す
る。ＢｇｌＩＩ末端を配列番号１５および配列番号１６に連結する。これらは内
部ＥｃｏＲＩ部位を含む。ＥｃｏＲＩ消化の後、５.３ｋｂ断片をｐｃ３.１／Ｚ
ｅｏ／Ｎ−Ｍおよび誘導体に連結してプラスミドを作製する。
誘導プラスミドとｐＢＫ−ＲＳＶ誘導プラスミドとを、融合したプラスミドがｓ
ｓＤＮＡをコードする遺伝子的要素、ＭｏＭｕＬＶ−ＲＴ遺伝子、およびＰＢＳ
をコードするように融合することによって製造された単一のプラスミドからも発
現されることを当技術分野の熟練者は認識することになる。ｐＢＫ−ＲＳＶ−Ｒ
Ｔ／ＭｂｏＬをＮｓｉＩで消化してｈｉｓ−ｐｒｏ介在リンカーおよび関連する
調節要素を持つＭｏ−ＭｕＬＶ−ＲＴ遺伝子を含む５.３ｋｂ断片を得る。この
５.３ｋｂＤＮＡ断片を内部ＥｃｏＲＩ部位を含むリンカーに連結し、ＥｃｏＲ
Ｉで消化する。ｐｃ３.１／Ｚｅｏ／Ｎ−Ｍおよびテスト配列を含む誘導プラス
ミドをＢｇｌＩＩで消化する。これはサイトメガロウイルスのエンハンサー／プ
ロモーター（ＰＣＭＶ）にあるｐｃ３.１ＤＮＡ／Ｚｅｏの独特な部位を認識す
る。ＢｇｌＩＩ末端を配列番号１５および配列番号１６に連結する。これらは内
部ＥｃｏＲＩ部位を含む。ＥｃｏＲＩ消化の後、５.３ｋｂ断片をｐｃ３.１／Ｚ
ｅｏ／Ｎ−Ｍおよび誘導体に連結してプラスミドを作製する。
【００７４】 組織培養の研究：リポフェクタント（Boehringer Mannheim Corp.）を製造社
の指示に従って使用して、安定性および一過性の遺伝子移入を行う。プラスミド
構築物を全てＣｏｓ−７、Ｕ２５１、およびＨｅＬａ細胞系統に遺伝子移入する
。ｓｓＤＮＡに付いての検定は遺伝子移入の２４時間〜４８時間後にＰＣＲおよ
びドットブロット分析によって行った。逆転写酵素活性はＳｉｌｖｅｒら（Silv
er J. et al., 21, Nucleic Acids Res., 3593-4 (1993)）が開発したＲＴ−Ｐ
ＣＲ検定法を使用して検定した。４８〜７２時間前に遺伝子移入した細胞からト
リアゾール試薬（Gibco Life Technologies, Gaithersburg, MD）を使用してこ
のｓｓＤＮＡを分離する。特異的なｓｓＤＮＡ種についての検定は内部断片に対
するＰＣＲに基づく検定法および変性単鎖ゲル電気泳動法とそれに続くナイロン
ブッティングおよび内部ビオチン標識プローブによる検定法の双方によって行っ
た。
の指示に従って使用して、安定性および一過性の遺伝子移入を行う。プラスミド
構築物を全てＣｏｓ−７、Ｕ２５１、およびＨｅＬａ細胞系統に遺伝子移入する
。ｓｓＤＮＡに付いての検定は遺伝子移入の２４時間〜４８時間後にＰＣＲおよ
びドットブロット分析によって行った。逆転写酵素活性はＳｉｌｖｅｒら（Silv
er J. et al., 21, Nucleic Acids Res., 3593-4 (1993)）が開発したＲＴ−Ｐ
ＣＲ検定法を使用して検定した。４８〜７２時間前に遺伝子移入した細胞からト
リアゾール試薬（Gibco Life Technologies, Gaithersburg, MD）を使用してこ
のｓｓＤＮＡを分離する。特異的なｓｓＤＮＡ種についての検定は内部断片に対
するＰＣＲに基づく検定法および変性単鎖ゲル電気泳動法とそれに続くナイロン
ブッティングおよび内部ビオチン標識プローブによる検定法の双方によって行っ
た。
【００７５】 前記実験は真核細胞逆転写酵素反応および種々なｃＤＮＡプライミング反応を
用いる多段階反応法による生体内でのｓｓＤＮＡの産生方法を示す。目的とする
ヌクレオチド配列はいずれも原核細胞または真核細胞中でこの方法によって製造
される。細胞に実際にプラスミド２種を共遺伝子移入した。一方のプラスミドは
目的とする配列をコードする遺伝子的要素および図１Ａに示す逆転写酵素のプラ
イマー結合部位を有し、他方のプラスミドは図１Ｂに示す逆転写酵素の遺伝子を
有していた。しかしながら、当技術分野の熟練者は目的とする配列をコードする
遺伝子的要素と逆転写酵素のＰＢＳ、および逆転写酵素の遺伝子を有する単一な
プラスミドもまたこの目的のために使用できる（図１Ｃ）ことを認識することに
なる。
用いる多段階反応法による生体内でのｓｓＤＮＡの産生方法を示す。目的とする
ヌクレオチド配列はいずれも原核細胞または真核細胞中でこの方法によって製造
される。細胞に実際にプラスミド２種を共遺伝子移入した。一方のプラスミドは
目的とする配列をコードする遺伝子的要素および図１Ａに示す逆転写酵素のプラ
イマー結合部位を有し、他方のプラスミドは図１Ｂに示す逆転写酵素の遺伝子を
有していた。しかしながら、当技術分野の熟練者は目的とする配列をコードする
遺伝子的要素と逆転写酵素のＰＢＳ、および逆転写酵素の遺伝子を有する単一な
プラスミドもまたこの目的のために使用できる（図１Ｃ）ことを認識することに
なる。
【００７６】実施例２ 変換細胞中における逆転写酵素活性 ｐＢＫ−ＲＳＶ−ＲＴ構築物を含む細胞の抽出物中の逆転写酵素活性の存在を
決定するために次の検定法を使用する。この検定は変換された細胞の蛋白質抽出
物中でＢｒｏｍｅモザイクウイルスＲＮＡゲノムのＤＮＡコピーを与える逆転写
酵素活性に依存する（Silver et al., 1993）。このウイルスの複製サイクルに
はＤＮＡ中間体を含まないので、増幅産物が事前の転写なしに産生される可能性
が排除される。
決定するために次の検定法を使用する。この検定は変換された細胞の蛋白質抽出
物中でＢｒｏｍｅモザイクウイルスＲＮＡゲノムのＤＮＡコピーを与える逆転写
酵素活性に依存する（Silver et al., 1993）。このウイルスの複製サイクルに
はＤＮＡ中間体を含まないので、増幅産物が事前の転写なしに産生される可能性
が排除される。
【００７７】実施例３ 変換哺乳類細胞中における単鎖ＤＮＡの存在の証明 ＰＣＲ方策を用いて変換細胞中の単鎖ＤＮＡを検出する。予期される単鎖ＤＮ
Ａ分子に特異的であるがその細胞には存在しない筈のプライマー複数を使用し、
単鎖ＤＮＡを含むと予想されるＲＮＡ抽出操作から得られた産物をＰＣＲ増幅の
鋳型に使用する。予期されるサイズのバンドを未処置のＲＮＡ／ｓｓＤＮＡ製品
から、およびこの製品であってＲＮＡｓｅＡで処理したものから製造する。高度
に特異的な、単鎖ＤＮＡエンドヌクレアーゼであるＳ１ヌクレアーゼで処理した
製品の使用は増幅産物を与えない。
Ａ分子に特異的であるがその細胞には存在しない筈のプライマー複数を使用し、
単鎖ＤＮＡを含むと予想されるＲＮＡ抽出操作から得られた産物をＰＣＲ増幅の
鋳型に使用する。予期されるサイズのバンドを未処置のＲＮＡ／ｓｓＤＮＡ製品
から、およびこの製品であってＲＮＡｓｅＡで処理したものから製造する。高度
に特異的な、単鎖ＤＮＡエンドヌクレアーゼであるＳ１ヌクレアーゼで処理した
製品の使用は増幅産物を与えない。
【００７８】実施例４ ドパミン受容体異常に関連する病理学的状況を診断し、処置する方法
および医薬製品 ドパミン作動性神経系の異常活性はパーキンソン病、ハンチントン病、遅発性
ジスキネジー、ある種の精神***症およびその他のジストニア、ジスキネジーを
含む多数の運動性および行動性障害の病因とされる。ドパミン作動系の機能不全
はドパミン作動系の活性が低下または上昇することによって、またはこの系が外
部的または内部的環境の変化による変調を受けなくなることによって起きること
がある。
および医薬製品 ドパミン作動性神経系の異常活性はパーキンソン病、ハンチントン病、遅発性
ジスキネジー、ある種の精神***症およびその他のジストニア、ジスキネジーを
含む多数の運動性および行動性障害の病因とされる。ドパミン作動系の機能不全
はドパミン作動系の活性が低下または上昇することによって、またはこの系が外
部的または内部的環境の変化による変調を受けなくなることによって起きること
がある。
【００７９】 前記の疾患１種に罹患している患者に対してドパミン受容体をコードする核酸
の発現制御配列に特異的に結合できるアンチセンスオリゴヌクレオチドを作製で
きる目的とする配列を含むようにプラスミドを構築する。ドパミン受容体を発現
している細胞にプラスミドが入って、阻害性ヌクレオチドを作製する条件でこの
プラスミドを投与する。阻害性ヌクレオチドはそのようなＲＮＡ分子の発現制御
配列に特異的に結合し、ドパミン受容体サブタイプの１種またはそれ以上の発現
を選択的に制御してその発現に関連する病状を緩和する。効果はU.S. Patent No
. 5,840,708に記載されている方法に従って試験する。
の発現制御配列に特異的に結合できるアンチセンスオリゴヌクレオチドを作製で
きる目的とする配列を含むようにプラスミドを構築する。ドパミン受容体を発現
している細胞にプラスミドが入って、阻害性ヌクレオチドを作製する条件でこの
プラスミドを投与する。阻害性ヌクレオチドはそのようなＲＮＡ分子の発現制御
配列に特異的に結合し、ドパミン受容体サブタイプの１種またはそれ以上の発現
を選択的に制御してその発現に関連する病状を緩和する。効果はU.S. Patent No
. 5,840,708に記載されている方法に従って試験する。
【００８０】実施例５ カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）のビリオンプロテイン
２６（ＶＰ２６）に対する阻害性ヌクレオチド カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）は新しいヒトヘルペスウイルス
（ＨＨＶ８）であってカポジ肉腫（ＫＳ）を起こすと思われている。カポジ肉腫
は後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）患者に最も普通に発症する新生物である。
ＡＩＤＳ患者の約１５〜２０％がこの新生物症を発症し、これは免疫応答能のあ
る個体に起きるのは稀である。疫学的証拠はＡＩＤＳに関連するＫＳ（ＡＩＤＳ
−ＫＳ）には感染原因があることを示唆する。ゲイおよびバイセクシャルのＡＩ
ＤＳ患者は血友病ＡＩＤＳ患者よりも約２０倍ものＫＳを発症するのだが、ＫＳ
はＡＩＤＳに罹患したゲイの間の特別な性的行動に関連があるかも知れない。Ｋ
Ｓは異性間または腸管外でのＨＩＶ伝染によって感染した成人ＡＩＤＳ患者の間
または垂直ＨＩＶ伝染で感染した小児科ＡＩＤＳ患者の間では普遍的ではない。
以前にＫＳを起こすと疑われた病因にはサイトメガロウイルス、Ｂ型肝炎ウイル
ス、ヒトパピロマウイルス、エプシュタイン−バールウイルス（ＥＢＶ）、ヒト
ヘルペスウイルス６、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）およびマイコプラスマペ
ネトランが含まれる。非感染性環境試薬たとえば亜硝酸塩吸入もＫＳ腫瘍の発生
に一定の役割を演じると提唱された。しかしながら、徹底的な研究でこれらの因
子のいずれかとＡＩＤＳ−ＫＳとの間の病因学的関連は証明されなかった。
２６（ＶＰ２６）に対する阻害性ヌクレオチド カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）は新しいヒトヘルペスウイルス
（ＨＨＶ８）であってカポジ肉腫（ＫＳ）を起こすと思われている。カポジ肉腫
は後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）患者に最も普通に発症する新生物である。
ＡＩＤＳ患者の約１５〜２０％がこの新生物症を発症し、これは免疫応答能のあ
る個体に起きるのは稀である。疫学的証拠はＡＩＤＳに関連するＫＳ（ＡＩＤＳ
−ＫＳ）には感染原因があることを示唆する。ゲイおよびバイセクシャルのＡＩ
ＤＳ患者は血友病ＡＩＤＳ患者よりも約２０倍ものＫＳを発症するのだが、ＫＳ
はＡＩＤＳに罹患したゲイの間の特別な性的行動に関連があるかも知れない。Ｋ
Ｓは異性間または腸管外でのＨＩＶ伝染によって感染した成人ＡＩＤＳ患者の間
または垂直ＨＩＶ伝染で感染した小児科ＡＩＤＳ患者の間では普遍的ではない。
以前にＫＳを起こすと疑われた病因にはサイトメガロウイルス、Ｂ型肝炎ウイル
ス、ヒトパピロマウイルス、エプシュタイン−バールウイルス（ＥＢＶ）、ヒト
ヘルペスウイルス６、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）およびマイコプラスマペ
ネトランが含まれる。非感染性環境試薬たとえば亜硝酸塩吸入もＫＳ腫瘍の発生
に一定の役割を演じると提唱された。しかしながら、徹底的な研究でこれらの因
子のいずれかとＡＩＤＳ−ＫＳとの間の病因学的関連は証明されなかった。
【００８１】 ビリオンプロテイン２６（ＶＰ２６）は殆どのヘルペスウイルスにあるヌクレ
オカプシド構造の一成分である。この構造は感染細胞から別の細胞に拡散すると
きにウイルスゲノムの送達機構に役立つ。もとの感染性ウイルスの一部として、
免疫系により主要抗原として認識され、それ故患者血清中のヘルペスウイルスに
対する抗体を検索するために、およびワクチンとして使用することができる。
オカプシド構造の一成分である。この構造は感染細胞から別の細胞に拡散すると
きにウイルスゲノムの送達機構に役立つ。もとの感染性ウイルスの一部として、
免疫系により主要抗原として認識され、それ故患者血清中のヘルペスウイルスに
対する抗体を検索するために、およびワクチンとして使用することができる。
【００８２】 感染した患者について、目的とする配列を含めるために前記の方法を使用して
プラスミドを構築する。目的とする配列はＫＳＨＶビリオンプロテイン２６をコ
ードする分離された核酸分子であるか、またはU.S. Patent No. 5,840,708に記
載されているアンチセンスまたは三重鎖オリゴヌクレオチド分子である。感染細
胞にこのプラスミドが入り、阻害性ヌクレオチドを作製する条件下にこのプラス
ミドを投与する。阻害性ヌクレオチドはそのようなＲＮＡ分子またはコード配列
の発現制御配列に特異的に結合し、そうしてＫＳＨＶビリオンプロテイン２６の
発現を選択的に制御し、その発現に関連する病状を緩和する。
プラスミドを構築する。目的とする配列はＫＳＨＶビリオンプロテイン２６をコ
ードする分離された核酸分子であるか、またはU.S. Patent No. 5,840,708に記
載されているアンチセンスまたは三重鎖オリゴヌクレオチド分子である。感染細
胞にこのプラスミドが入り、阻害性ヌクレオチドを作製する条件下にこのプラス
ミドを投与する。阻害性ヌクレオチドはそのようなＲＮＡ分子またはコード配列
の発現制御配列に特異的に結合し、そうしてＫＳＨＶビリオンプロテイン２６の
発現を選択的に制御し、その発現に関連する病状を緩和する。
【００８３】実施例６ 腫瘍の増殖、転移および／または脈管形成を制御するためにＩＬ−８
および／またはＩＬ−８受容体の発現を変調するための阻害性ヌクレオチド インターロイキン−８（ＩＬ−８、好中球活性化プロテイン−１またはＮＡＰ
−１）は、炎症性反応、組織損傷、増殖調節および細胞付着に広範な関連を有す
るサイトカインの中のＣ−Ｘ−Ｃケモカインファミリーの一員である。Cerretti
, D. P. et al., Molecular Characterization of Receptors for Human Interl
eukin-8, GRO/Melanoma Growth-Stimulatory Activity and Neutrophil Activat
ing Peptide- 2, Molecular Immunology, 30(4), 359-367 (1993); Koch, A. E.
et al., In situ expression of cytokines and cellular adhesion molecules
in the skin of patients with systemic sclerosis, Pathobiology, 61(5-6):
239-46 (1993)。ＩＬ−８は脈管形成に対する強力な刺激効果を持つこともまた
証明されている。たとえばKoch, A. E. et al., Interleukin-8 as a Macrophag
e- Derived Mediator of Angiogenesis, Science, 258, 1798-1800 (1992)参照
。
および／またはＩＬ−８受容体の発現を変調するための阻害性ヌクレオチド インターロイキン−８（ＩＬ−８、好中球活性化プロテイン−１またはＮＡＰ
−１）は、炎症性反応、組織損傷、増殖調節および細胞付着に広範な関連を有す
るサイトカインの中のＣ−Ｘ−Ｃケモカインファミリーの一員である。Cerretti
, D. P. et al., Molecular Characterization of Receptors for Human Interl
eukin-8, GRO/Melanoma Growth-Stimulatory Activity and Neutrophil Activat
ing Peptide- 2, Molecular Immunology, 30(4), 359-367 (1993); Koch, A. E.
et al., In situ expression of cytokines and cellular adhesion molecules
in the skin of patients with systemic sclerosis, Pathobiology, 61(5-6):
239-46 (1993)。ＩＬ−８は脈管形成に対する強力な刺激効果を持つこともまた
証明されている。たとえばKoch, A. E. et al., Interleukin-8 as a Macrophag
e- Derived Mediator of Angiogenesis, Science, 258, 1798-1800 (1992)参照
。
【００８４】 ＩＬ−８が単球／マクロファージ、皮膚繊維芽細胞、脈管上皮細胞、ケラチノ
サイトおよび糸球体間質細胞を含む様々なヒトの正常体細胞によって産生される
ことは知られている。Yasumoto, K. et al., Tumor Necrosis Factor Alpha and
Interferon Gamma Synergistically Induce Interleukin 8 Production in a H
uman Gastric Cancer Cell Line Through Acting Concurrently on AP-1 and NF
-kB-like Binding Sites of the Interleukin 8 Gene, J. Biological Chemistr
y, 267(31), 22506-11 (1992)。明らかにこのような細胞はストレスを受けた時
にのみＩＬ−８を産生するが、正常な増殖および恒常的条件下には産生しない。
ＩＬ−８の産生を誘導する因子には炎症、ＩＬ−１、ＴＮＦ、ＬＰＳおよびトロ
ンビンが含まれる。またＩＬ−８は各腫瘍細胞によって共通に分泌されることも
知られている。増殖に及ぼすその効果のために、ＩＬ−８がメラノーマおよびそ
の他の癌腫の転移的拡散に有意な役割を演じることが疑われている。
サイトおよび糸球体間質細胞を含む様々なヒトの正常体細胞によって産生される
ことは知られている。Yasumoto, K. et al., Tumor Necrosis Factor Alpha and
Interferon Gamma Synergistically Induce Interleukin 8 Production in a H
uman Gastric Cancer Cell Line Through Acting Concurrently on AP-1 and NF
-kB-like Binding Sites of the Interleukin 8 Gene, J. Biological Chemistr
y, 267(31), 22506-11 (1992)。明らかにこのような細胞はストレスを受けた時
にのみＩＬ−８を産生するが、正常な増殖および恒常的条件下には産生しない。
ＩＬ−８の産生を誘導する因子には炎症、ＩＬ−１、ＴＮＦ、ＬＰＳおよびトロ
ンビンが含まれる。またＩＬ−８は各腫瘍細胞によって共通に分泌されることも
知られている。増殖に及ぼすその効果のために、ＩＬ−８がメラノーマおよびそ
の他の癌腫の転移的拡散に有意な役割を演じることが疑われている。
【００８５】 ＩＬ−８は細胞膜ＩＬ−８受容体のリガンドであって、ＩＬ−８作用のために
は、ＩＬ−８とＩＬ−８受容体との間の相互作用が必要であると思われている。
今までにＩＬ−８受容体遺伝子にはＩＬ−８受容体Ａ型およびＢ型の２種が確認
されている。両遺伝子はいわゆる７回膜貫通ドメインＧのプロテイン結合受容体
ファミリーに属する。受容体ＡはＩＬ−８によって活性化されることが証明され
ており、受容体ＢはＩＬ−８ならびに、メラノーマ増殖刺激作用（ＭＧＳＡ）を
含むＣ−Ｘ−Ｃファミリーに属するその他のサイトカインによって活性化される
ことが証明されている。
は、ＩＬ−８とＩＬ−８受容体との間の相互作用が必要であると思われている。
今までにＩＬ−８受容体遺伝子にはＩＬ−８受容体Ａ型およびＢ型の２種が確認
されている。両遺伝子はいわゆる７回膜貫通ドメインＧのプロテイン結合受容体
ファミリーに属する。受容体ＡはＩＬ−８によって活性化されることが証明され
ており、受容体ＢはＩＬ−８ならびに、メラノーマ増殖刺激作用（ＭＧＳＡ）を
含むＣ−Ｘ−Ｃファミリーに属するその他のサイトカインによって活性化される
ことが証明されている。
【００８６】 癌腫およびその他の腫瘍細胞中でのＩＬ−８受容体Ｂの役割と機能は完全には
結論付けられていない。しかしながらＩＬ−８Ｒ・Ｂの活性化が（１）メラノー
マおよび腫瘍化繊維芽細胞の増殖調節機構に関与すること；（２）石綿による肺
細胞の変換に関与すること；および（３）メラノーマの転移能に関連すること；
については証拠がある。
結論付けられていない。しかしながらＩＬ−８Ｒ・Ｂの活性化が（１）メラノー
マおよび腫瘍化繊維芽細胞の増殖調節機構に関与すること；（２）石綿による肺
細胞の変換に関与すること；および（３）メラノーマの転移能に関連すること；
については証拠がある。
【００８７】 種々の腫瘍増殖因子に応答するＩＬ−８の細胞増殖刺激効果があるので生体内
で癌腫内のＩＬ−８またはＩＬ−８受容体の発現を変調するアンチセンスオリゴ
ヌクレオチドを提供することは有益であろう。肺癌およびメラノーマに対して有
効なオリゴヌクレオチドを提供することは、これらの癌がそれ自体の増殖因子を
産生していることから殊に有益であろうと思われる。
で癌腫内のＩＬ−８またはＩＬ−８受容体の発現を変調するアンチセンスオリゴ
ヌクレオチドを提供することは有益であろう。肺癌およびメラノーマに対して有
効なオリゴヌクレオチドを提供することは、これらの癌がそれ自体の増殖因子を
産生していることから殊に有益であろうと思われる。
【００８８】 肺癌には少なくとも２種の主要な型、すなわち小胞肺癌（ＳＣＬＣ）および非
小胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）が存在する。ＳＣＬＣは症例の約１／４を占め、神経内
分泌マーカーを発現し、一般に早期にリンパ節、脳、骨、肺臓および肝臓に転移
する。ＮＳＣＬＣは残りの肺癌の大部分を占め、腺癌、扁平上皮癌および大細胞
癌を含む。ＮＳＣＬＣは上皮様増殖因子および受容体によって特徴付けられ、局
所的に侵襲性である。
小胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）が存在する。ＳＣＬＣは症例の約１／４を占め、神経内
分泌マーカーを発現し、一般に早期にリンパ節、脳、骨、肺臓および肝臓に転移
する。ＮＳＣＬＣは残りの肺癌の大部分を占め、腺癌、扁平上皮癌および大細胞
癌を含む。ＮＳＣＬＣは上皮様増殖因子および受容体によって特徴付けられ、局
所的に侵襲性である。
【００８９】 メラノーマ細胞は正常なメラノサイトとは異なって外因性増殖因子の不在下に
増殖できる。この独立性は明らかに増殖因子およびＴＧＦ−、ＡＮＧ.、ＴＧＦ
−、血小板由来増殖因子ＡおよびＢ鎖、塩基性繊維芽細胞増殖因子、ＩＬ−８、
ＩＬ−６、ＩＬ−１、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子およびＭＧＳＡを
含む自己分泌増殖因子のためのサイトカインの産生を反映する。Guo Y. et al.,
Inhibition of Human Melanoma Growth and Metastasis in Vivo by Anti-CD44
Monoclonal Antibody, Cancer Res., 54, 1561-1565 (1994)。
増殖できる。この独立性は明らかに増殖因子およびＴＧＦ−、ＡＮＧ.、ＴＧＦ
−、血小板由来増殖因子ＡおよびＢ鎖、塩基性繊維芽細胞増殖因子、ＩＬ−８、
ＩＬ−６、ＩＬ−１、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子およびＭＧＳＡを
含む自己分泌増殖因子のためのサイトカインの産生を反映する。Guo Y. et al.,
Inhibition of Human Melanoma Growth and Metastasis in Vivo by Anti-CD44
Monoclonal Antibody, Cancer Res., 54, 1561-1565 (1994)。
【００９０】 前記疾患のいずれかを患う患者のために、前記方法を用いて目的とする配列を
含むプラスミドを構築する。目的とする配列はU.S. Patent No. 5,849,903 に記
載されている分離された核酸分子である。増殖、転移および／または脈管形成を
制御するために、このプラスミドが細胞に入って阻害性ヌクレオチドを作製する
ような条件下にこのプラスミドを投与（たとえば吸入または固形腫瘍中への直接
的注射など）する。この阻害性ヌクレオチドはＲＮＡ分子の発現制御配列または
コード配列に特異的に結合してＩＬ−８受容体の発現を制御し、発現に関連する
病状を緩和する。
含むプラスミドを構築する。目的とする配列はU.S. Patent No. 5,849,903 に記
載されている分離された核酸分子である。増殖、転移および／または脈管形成を
制御するために、このプラスミドが細胞に入って阻害性ヌクレオチドを作製する
ような条件下にこのプラスミドを投与（たとえば吸入または固形腫瘍中への直接
的注射など）する。この阻害性ヌクレオチドはＲＮＡ分子の発現制御配列または
コード配列に特異的に結合してＩＬ−８受容体の発現を制御し、発現に関連する
病状を緩和する。
【００９１】実施例７ アンチセンスオリゴヌクレオチドによるサイトメガロウイルス感染の
阻止 サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）は遍在性であって子宮内感染症の最も普通な
病因である。感染母体からの新生児では先天的感染が通常である。ある種の集団
では子供の１０％位までが周産期感染を示す。低率な新生児においてはこの感染
症は悪性であって多数の器官に関与する。網内皮系および中枢神経系の明白な関
与が典型的であり；この感染症は精神的遅滞の主因である。注意深い試験では重
症な、出生前感染成人の５０％近くは神経精神障害または難聴を示した。神経外
器官は通常慢性的罹病をするが、腎臓にはウイルスが何年間も検出できる。
阻止 サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）は遍在性であって子宮内感染症の最も普通な
病因である。感染母体からの新生児では先天的感染が通常である。ある種の集団
では子供の１０％位までが周産期感染を示す。低率な新生児においてはこの感染
症は悪性であって多数の器官に関与する。網内皮系および中枢神経系の明白な関
与が典型的であり；この感染症は精神的遅滞の主因である。注意深い試験では重
症な、出生前感染成人の５０％近くは神経精神障害または難聴を示した。神経外
器官は通常慢性的罹病をするが、腎臓にはウイルスが何年間も検出できる。
【００９２】 前記方法を用いて阻害性ヌクレオチドをコードする目的とする配列を含むプラ
スミドを構築する。サイトメガロウイルスＤＮＡまたはＲＮＡの選択した配列と
特異的にハイブリッドを形成するヌクレオチド塩基の配列を持つオリゴヌクレオ
チドはU.S. Patent No. 5,442,049に記載されている。このプラスミドが細胞に
入って阻害性ヌクレオチドを作製するような条件下にこのプラスミドを患者に投
与する。この阻害性ヌクレオチドはＲＮＡ分子の発現制御配列またはコード配列
に特異的に結合してＣＭＶの複製を制御し、ＣＭＶ感染に関連する病状を緩和す
る。このプラスミドはＣＭＶに起因する疾患の重症度を低下させるために予防的
または治療的に使用される。
スミドを構築する。サイトメガロウイルスＤＮＡまたはＲＮＡの選択した配列と
特異的にハイブリッドを形成するヌクレオチド塩基の配列を持つオリゴヌクレオ
チドはU.S. Patent No. 5,442,049に記載されている。このプラスミドが細胞に
入って阻害性ヌクレオチドを作製するような条件下にこのプラスミドを患者に投
与する。この阻害性ヌクレオチドはＲＮＡ分子の発現制御配列またはコード配列
に特異的に結合してＣＭＶの複製を制御し、ＣＭＶ感染に関連する病状を緩和す
る。このプラスミドはＣＭＶに起因する疾患の重症度を低下させるために予防的
または治療的に使用される。
【００９３】実施例８ Ｉ型ヘルペスシンプレックスウイルスの読取り枠ＵＬ５、ＵＬ８、Ｕ
Ｌ９、ＵＬ２０、ＵＬ２７、ＵＬ２９、ＵＬ３０、ＵＬ４２、ＵＬ５２およびＩ
Ｅ１７５の１個に対応する遺伝子から誘導されるＲＮＡまたはＤＮＡと特異的に
ハイブリッドを形成するオリゴヌクレオチド １型ヘルペスシンプレックスウイルス（ＨＳＶ−１）、２型ヘルペスシンプレ
ックスウイルス（ＨＳＶ−２）、サイトメガロウイルス、ヒトヘルペスウイルス
６、エプスタインバールウイルス（ＥＢＶ）または水痘−帯状疱疹ウイルス（Ｖ
ＺＶ）各種からのＤＮＡまたはさらに好ましくはＲＮＡと特異的にハイブリッド
を形成するようにオリゴヌクレオチドを設計する。このようなオリゴヌクレオチ
ドは便利に、また好ましくはU.S. Patent No. 5,514,557に記載されているよう
な医薬的に許容される担体中での医薬的組成物として提供される。
Ｌ９、ＵＬ２０、ＵＬ２７、ＵＬ２９、ＵＬ３０、ＵＬ４２、ＵＬ５２およびＩ
Ｅ１７５の１個に対応する遺伝子から誘導されるＲＮＡまたはＤＮＡと特異的に
ハイブリッドを形成するオリゴヌクレオチド １型ヘルペスシンプレックスウイルス（ＨＳＶ−１）、２型ヘルペスシンプレ
ックスウイルス（ＨＳＶ−２）、サイトメガロウイルス、ヒトヘルペスウイルス
６、エプスタインバールウイルス（ＥＢＶ）または水痘−帯状疱疹ウイルス（Ｖ
ＺＶ）各種からのＤＮＡまたはさらに好ましくはＲＮＡと特異的にハイブリッド
を形成するようにオリゴヌクレオチドを設計する。このようなオリゴヌクレオチ
ドは便利に、また好ましくはU.S. Patent No. 5,514,557に記載されているよう
な医薬的に許容される担体中での医薬的組成物として提供される。
【００９４】 前記感染症のいずれかを患う患者のために、前記方法を用いて目的とする配列
を含むプラスミドを構築する。目的とする配列はU.S. Patent No. 5,514,557に
記載されている分離された核酸分子である。このプラスミドが細胞に入って阻害
性ヌクレオチドを作製するような条件下にこのプラスミドを投与（たとえば吸入
または固形腫瘍中への直接的注射など）する。この阻害性ヌクレオチドは１型ヘ
ルペスシンプレックスウイルス（ＨＳＶ−１）、２型ヘルペスシンプレックスウ
イルス（ＨＳＶ−２）、サイトメガロウイルス、ヒトヘルペスウイルス６、エプ
スタインバールウイルス（ＥＢＶ）または水痘−帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）各
種からのＲＮＡ分子の発現制御配列またはコード配列に特異的に結合してウイル
ス感染症を選択的に制御し、感染に関連する病状を緩和する。
を含むプラスミドを構築する。目的とする配列はU.S. Patent No. 5,514,557に
記載されている分離された核酸分子である。このプラスミドが細胞に入って阻害
性ヌクレオチドを作製するような条件下にこのプラスミドを投与（たとえば吸入
または固形腫瘍中への直接的注射など）する。この阻害性ヌクレオチドは１型ヘ
ルペスシンプレックスウイルス（ＨＳＶ−１）、２型ヘルペスシンプレックスウ
イルス（ＨＳＶ−２）、サイトメガロウイルス、ヒトヘルペスウイルス６、エプ
スタインバールウイルス（ＥＢＶ）または水痘−帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）各
種からのＲＮＡ分子の発現制御配列またはコード配列に特異的に結合してウイル
ス感染症を選択的に制御し、感染に関連する病状を緩和する。
【００９５】実施例９ プロトオンコジーン、特にｃ−ｍｙｂ遺伝子、に対するアンチセンス
オリゴヌクレオチドおよび抗新生物および免疫抑制剤としてのこのオリゴヌクレ
オチドの使用 プロトオンコジーンｃ−ｍｙｂはトリ骨髄芽球症ウイルス変換遺伝子ｖ−ｍｙ
ｂの正常細胞同族体である。このｃ−ｍｙｂ遺伝子は主として造血細胞中で発現
される核プロテインをコードする。これはプロトオンコジーンであり、すなわち
正常な非癌細胞の生存に必要なプロテインをコードする。適当な様式でこの遺伝
子が変化するとオンコジーンになる可能性を生じる。オンコジーンは細胞内での
その発現が正常細胞から腫瘍細胞への変換においてある種の機能を提供する遺伝
子である。一例はヒトのｃ−ｍｙｂ遺伝子であって、これは単離され、クローニ
ングされ、配列決定されている。Majello et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.
A., 83, 9636-9640 (1986)。
オリゴヌクレオチドおよび抗新生物および免疫抑制剤としてのこのオリゴヌクレ
オチドの使用 プロトオンコジーンｃ−ｍｙｂはトリ骨髄芽球症ウイルス変換遺伝子ｖ−ｍｙ
ｂの正常細胞同族体である。このｃ−ｍｙｂ遺伝子は主として造血細胞中で発現
される核プロテインをコードする。これはプロトオンコジーンであり、すなわち
正常な非癌細胞の生存に必要なプロテインをコードする。適当な様式でこの遺伝
子が変化するとオンコジーンになる可能性を生じる。オンコジーンは細胞内での
その発現が正常細胞から腫瘍細胞への変換においてある種の機能を提供する遺伝
子である。一例はヒトのｃ−ｍｙｂ遺伝子であって、これは単離され、クローニ
ングされ、配列決定されている。Majello et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.
A., 83, 9636-9640 (1986)。
【００９６】 前記の方法を使用して阻害性ヌクレオチドをコードする目的とする配列を含む
プラスミドを構築する。ＤＮＡまたはＲＮＡの選択した配列と特異的にハイブリ
ッドを形成できるヌクレオチド塩基の配列を持つオリゴヌクレオチドはU.S. Pat
ent No. 5,098,890に記載されている。このプラスミドが細胞に入って阻害性ヌ
クレオチドを作製し、抗新生物または免疫抑制剤として作用する条件下に病状を
示す患者にこのプラスミドを投与する。
プラスミドを構築する。ＤＮＡまたはＲＮＡの選択した配列と特異的にハイブリ
ッドを形成できるヌクレオチド塩基の配列を持つオリゴヌクレオチドはU.S. Pat
ent No. 5,098,890に記載されている。このプラスミドが細胞に入って阻害性ヌ
クレオチドを作製し、抗新生物または免疫抑制剤として作用する条件下に病状を
示す患者にこのプラスミドを投与する。
【００９７】実施例１０ インターロイキン−１β刺激細胞におけるＩＣＡＭ−１遺伝子発現
に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１、ＥＬＡＭ−１の発現阻害剤が、たとえば喘息、
リューマチ性関節炎、同種異系移植拒絶反応、炎症性腸疾患、種々の皮膚科疾患
および乾癬のような炎症性の側面を持つ多種の炎症性疾病に対する活性を有する
新規な一群の抗炎症剤を提供すると期待されている。これに加えてＩＣＡＭ−１
、ＶＣＡＭ−１、ＥＬＡＭ−１の阻害剤はライノウイルス感染による風邪、ＡＩ
ＤＳ、カポジ肉腫およびある種の癌とその転移の処置に有用であるかも知れない
。今日までに細胞の接着分子であるＥＬＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ
−１の発現を効果的に阻止する治療剤は知られていない。ＩＣＡＭ−１に対する
中和モノクローナル抗体の使用が動物モデルでのそのような阻害剤が確認できれ
ば喘息: Wegner et al., Science, 1990, 247, 456-459、腎臓移植: Cosimi et
al., J. Immunol., 1990, 144, 4604-4612、および心臓移植: Isobe et al., Sc
ience, 1992, 255, 1125-1127.の処置に有益であろうという証拠が提供されてい
る。可溶型ＩＣＡＭ−１分子の使用も培養細胞のライノウイルス感染予防に有効
であった。Marlin et al., 344, Nature, 70-72 (1990)。
に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１、ＥＬＡＭ−１の発現阻害剤が、たとえば喘息、
リューマチ性関節炎、同種異系移植拒絶反応、炎症性腸疾患、種々の皮膚科疾患
および乾癬のような炎症性の側面を持つ多種の炎症性疾病に対する活性を有する
新規な一群の抗炎症剤を提供すると期待されている。これに加えてＩＣＡＭ−１
、ＶＣＡＭ−１、ＥＬＡＭ−１の阻害剤はライノウイルス感染による風邪、ＡＩ
ＤＳ、カポジ肉腫およびある種の癌とその転移の処置に有用であるかも知れない
。今日までに細胞の接着分子であるＥＬＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ
−１の発現を効果的に阻止する治療剤は知られていない。ＩＣＡＭ−１に対する
中和モノクローナル抗体の使用が動物モデルでのそのような阻害剤が確認できれ
ば喘息: Wegner et al., Science, 1990, 247, 456-459、腎臓移植: Cosimi et
al., J. Immunol., 1990, 144, 4604-4612、および心臓移植: Isobe et al., Sc
ience, 1992, 255, 1125-1127.の処置に有益であろうという証拠が提供されてい
る。可溶型ＩＣＡＭ−１分子の使用も培養細胞のライノウイルス感染予防に有効
であった。Marlin et al., 344, Nature, 70-72 (1990)。
【００９８】 細胞間接着分子に影響を与える最近の試薬には合成ペプチド、モノクローナル
抗体および接着分子の可溶型が含まれる。今までにＶＣＡＭ−１またはＥＬＡＭ
−１の相互作用を遮断する合成ペプチドは確認されていない。モノクローナル抗
体がＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１およびＥＬＡＭ−１の発現に起因する急性炎症
性反応の処置に有用であることは証明されるかもしれない。しかしながら、長期
的な処置には宿主動物がこのモノクローナル抗体に対する抗体を作るので有用性
は限定される。これに加えて、モノクローナル抗体は大きなプロテインであって
炎症を起こしている部位に到達するのが困難かもしれない。細胞接着分子の可溶
型はモノクローナル抗体と同様な多くの限定を受ける他に、製造費用と結合親和
性の低さに問題がある。そこで、分子内接着分子を有効に阻害する分子に対する
必要性は以前から感じられていた。アンチセンスオリゴヌクレオチドはＩＣＡＭ
−１、ＶＣＡＭ−１およびＥＬＡＭ−１の効果を遮断するために使用される現行
薬剤の欠陥の多くを回避する。
抗体および接着分子の可溶型が含まれる。今までにＶＣＡＭ−１またはＥＬＡＭ
−１の相互作用を遮断する合成ペプチドは確認されていない。モノクローナル抗
体がＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１およびＥＬＡＭ−１の発現に起因する急性炎症
性反応の処置に有用であることは証明されるかもしれない。しかしながら、長期
的な処置には宿主動物がこのモノクローナル抗体に対する抗体を作るので有用性
は限定される。これに加えて、モノクローナル抗体は大きなプロテインであって
炎症を起こしている部位に到達するのが困難かもしれない。細胞接着分子の可溶
型はモノクローナル抗体と同様な多くの限定を受ける他に、製造費用と結合親和
性の低さに問題がある。そこで、分子内接着分子を有効に阻害する分子に対する
必要性は以前から感じられていた。アンチセンスオリゴヌクレオチドはＩＣＡＭ
−１、ＶＣＡＭ−１およびＥＬＡＭ−１の効果を遮断するために使用される現行
薬剤の欠陥の多くを回避する。
【００９９】 PCT／US90／02357（Hession et al.）はＥＬＡＭ−１およびＶＣＡＭ−１およ
びＶＣＡＭ−１ｂを含む内皮接着分子（ＥＬＡＭ）をコードするＤＮＡ配列を開
示している。これらのＤＮＡ配列の使用が多数提供されているが、これには（１
）これらの分子に対して反応性のあるモノクローナル抗体製品の製造であってこ
れは内皮細胞への白血球結合を阻害する薬剤として使用しうる；（２）ＥＬＡＭ
ペプチドを製造し、これが白血球上のＥＬＡＭリガンドに結合し、内皮細胞上の
ＥＬＡＭに結合して内皮細胞への白血球結合を阻害しうる；（３）ＥＬＡＭに結
合する分子（たとえば抗ＲＬＡＭ抗体、またはたとえばそのリガンドまたは断片
のようなマーカー）の炎症を検出するための使用；（４）ｍＲＮＡをアンチセン
ス核酸でマスクするかまたはリボチームで切断することによって特定のｍＲＮＡ
の翻訳を遮断するために、翻訳のレベルでアンチセンス核酸およびリボチームを
使用するＥＬＡＭまたはＥＬＡＭリガンド発現に介在する核酸を製造するための
ＥＬＡＭおよびＥＬＡＭリガンドＤＮＡ配列の使用；が含まれる。
びＶＣＡＭ−１ｂを含む内皮接着分子（ＥＬＡＭ）をコードするＤＮＡ配列を開
示している。これらのＤＮＡ配列の使用が多数提供されているが、これには（１
）これらの分子に対して反応性のあるモノクローナル抗体製品の製造であってこ
れは内皮細胞への白血球結合を阻害する薬剤として使用しうる；（２）ＥＬＡＭ
ペプチドを製造し、これが白血球上のＥＬＡＭリガンドに結合し、内皮細胞上の
ＥＬＡＭに結合して内皮細胞への白血球結合を阻害しうる；（３）ＥＬＡＭに結
合する分子（たとえば抗ＲＬＡＭ抗体、またはたとえばそのリガンドまたは断片
のようなマーカー）の炎症を検出するための使用；（４）ｍＲＮＡをアンチセン
ス核酸でマスクするかまたはリボチームで切断することによって特定のｍＲＮＡ
の翻訳を遮断するために、翻訳のレベルでアンチセンス核酸およびリボチームを
使用するＥＬＡＭまたはＥＬＡＭリガンド発現に介在する核酸を製造するための
ＥＬＡＭおよびＥＬＡＭリガンドＤＮＡ配列の使用；が含まれる。
【０１００】 前記の方法を用いてＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１またはＥＬＡＭ−１に対する
阻害性ヌクレオチドをコードする目的とする配列を含むプラスミドを構築する。
ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１またはＥＬＡＭ−１のＤＮＡまたはＲＮＡにある選
択された配列と特異的にハイブリッドを形成できるヌクレオチド塩基配列を持つ
オリゴヌクレオチドはU.S. Patent No. 5,843,738に記載されている。このプラ
スミドが細胞に入って阻害性ヌクレオチドを作製する条件下に病状を示す患者に
このプラスミドを投与する。この阻害性ヌクレオチドはそのようなＲＮＡ分子の
発現制御配列またはコード配列に特異的に結合してＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１
またはＥＬＡＭ−１の発現を選択的に制御して、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１ま
たはＥＬＡＭ−１の発現に関連する病状を緩和する。このプラスミドはＩＣＡＭ
−１、ＶＣＡＭ−１またはＥＬＡＭ−１に起因する炎症の重症度を低下させるた
めに予防的または治療的に使用される。
阻害性ヌクレオチドをコードする目的とする配列を含むプラスミドを構築する。
ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１またはＥＬＡＭ−１のＤＮＡまたはＲＮＡにある選
択された配列と特異的にハイブリッドを形成できるヌクレオチド塩基配列を持つ
オリゴヌクレオチドはU.S. Patent No. 5,843,738に記載されている。このプラ
スミドが細胞に入って阻害性ヌクレオチドを作製する条件下に病状を示す患者に
このプラスミドを投与する。この阻害性ヌクレオチドはそのようなＲＮＡ分子の
発現制御配列またはコード配列に特異的に結合してＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１
またはＥＬＡＭ−１の発現を選択的に制御して、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１ま
たはＥＬＡＭ−１の発現に関連する病状を緩和する。このプラスミドはＩＣＡＭ
−１、ＶＣＡＭ−１またはＥＬＡＭ−１に起因する炎症の重症度を低下させるた
めに予防的または治療的に使用される。
【０１０１】実施例１１ 標的分子に特異的に結合するプロテイン結合オリゴヌクレオチド（
アプタマー） 生体分子標的およびアプタマー発生を用いる合理的薬剤設計の分野は特定のプ
ロテインに結合して、それらの機能を妨害するオリゴヌクレオチドを利用する。
U.S. Patent No. 5,840,867にはたとえばプロテイン一般、特定的にはトロンビ
ンのような生体分子標的に対するアプタマーが記載されている。開示された新規
化合物および方法は生物科学的診断および治療に広範に適用されうる。
アプタマー） 生体分子標的およびアプタマー発生を用いる合理的薬剤設計の分野は特定のプ
ロテインに結合して、それらの機能を妨害するオリゴヌクレオチドを利用する。
U.S. Patent No. 5,840,867にはたとえばプロテイン一般、特定的にはトロンビ
ンのような生体分子標的に対するアプタマーが記載されている。開示された新規
化合物および方法は生物科学的診断および治療に広範に適用されうる。
【０１０２】 蛋白質、その他の分子に関する普通の検出法および分離法では抗体その他を適
用してそのような物質に特異的に結合させる。しかしながら、最近一般には核酸
に結合する非オリゴヌクレオチド標的に対して特異的に結合するオリゴヌクレオ
チドの新たな設計が開示された。たとえばBlackwell, T. K. et al., Science,
(1990), 250: 1104-1110; Blackwell, T. K. et al., Science, (1990), 250: 1
149-1152; Tuerk, C. & Gold, L., Science, (1990), 249: 505-510; Joyce, G.
F., Gene, (1989), 82: 83-87参照。このようなオリゴヌクレオチドは本明細書
では「アプタマー」と記載しておく。TuerkとGoldは「指数関数的豊富化による
リガンドの系統的進化」と命名した操作の使用を記載している。この方法では特
異的な位置で完全に無作為化されたＲＮＡのプールを、ニトロセルロースフィル
ターに固定した所望の核酸結合蛋白質による結合について選択に付す。この結合
したＲＮＡを次に回収して二重鎖ＤＮＡとして増幅するが、これは後続する試験
管内転写に適している。新たに転写したＲＮＡを次にこの操作に戻して同類蛋白
質との結合に対する共通配列を持つオリゴヌクレオチドを豊富化する。こうして
得られるオリゴヌクレオチドは次にさらに研究して配列決定してもよい。Tuerk
& Goldはこの操作を応用してＴ４ＤＮＡポリメラーゼのＲＮＡ結合領域が結合す
るＲＮＡオリゴヌクレオチドを確認した。
用してそのような物質に特異的に結合させる。しかしながら、最近一般には核酸
に結合する非オリゴヌクレオチド標的に対して特異的に結合するオリゴヌクレオ
チドの新たな設計が開示された。たとえばBlackwell, T. K. et al., Science,
(1990), 250: 1104-1110; Blackwell, T. K. et al., Science, (1990), 250: 1
149-1152; Tuerk, C. & Gold, L., Science, (1990), 249: 505-510; Joyce, G.
F., Gene, (1989), 82: 83-87参照。このようなオリゴヌクレオチドは本明細書
では「アプタマー」と記載しておく。TuerkとGoldは「指数関数的豊富化による
リガンドの系統的進化」と命名した操作の使用を記載している。この方法では特
異的な位置で完全に無作為化されたＲＮＡのプールを、ニトロセルロースフィル
ターに固定した所望の核酸結合蛋白質による結合について選択に付す。この結合
したＲＮＡを次に回収して二重鎖ＤＮＡとして増幅するが、これは後続する試験
管内転写に適している。新たに転写したＲＮＡを次にこの操作に戻して同類蛋白
質との結合に対する共通配列を持つオリゴヌクレオチドを豊富化する。こうして
得られるオリゴヌクレオチドは次にさらに研究して配列決定してもよい。Tuerk
& Goldはこの操作を応用してＴ４ＤＮＡポリメラーゼのＲＮＡ結合領域が結合す
るＲＮＡオリゴヌクレオチドを確認した。
【０１０３】 正常にはＲＮＡまたはＤＮＡとは結合しない生体分子に特異的に結合するオリ
ゴヌクレオチドの確認はサイズ、構造および組成が広範に相違する多数の生体分
子について証明されている。このような分子には（１）凝血形成過程でフィブリ
ノーゲンをフィブリンに変換する多機能的調節蛋白質トロンビン；（２）血圧調
節に関与し、低血圧の病因と思われるノナペプチドキニンであるブラジキニン；
（３）ホルモン作用を示すプロスタグランジンまたは脂肪酸誘導体であるＰＧＦ
２α；を含む。これに加えてオリゴヌクレオチドと天然の生物学的機能が一次的
には細胞外のものである生体分子との間の相互作用が証明されている。
ゴヌクレオチドの確認はサイズ、構造および組成が広範に相違する多数の生体分
子について証明されている。このような分子には（１）凝血形成過程でフィブリ
ノーゲンをフィブリンに変換する多機能的調節蛋白質トロンビン；（２）血圧調
節に関与し、低血圧の病因と思われるノナペプチドキニンであるブラジキニン；
（３）ホルモン作用を示すプロスタグランジンまたは脂肪酸誘導体であるＰＧＦ
２α；を含む。これに加えてオリゴヌクレオチドと天然の生物学的機能が一次的
には細胞外のものである生体分子との間の相互作用が証明されている。
【０１０４】 トロンビンのアプタマーをコードしている目的とする配列を含む前記の方法を
用いてプラスミドを構築する。トロンビンに特異的に結合するヌクレオチド塩基
の配列を持つアプタマーはU.S. Patent No. 5,840,867に記載されている。この
プラスミドが細胞内に入ってアプタマーを作製する条件下に病状を示す患者にこ
のプラスミドを投与する。あるいは患者から細胞を採取し、プラスミドをこの細
胞に遺伝子移入し、細胞を患者に戻す生体外投与を行う。アプタマーは特異的に
トロンビンと結合し、そこで選択的にトロンビンの生物学的活性を制御し、トロ
ンビンの存在に関連する病状を緩和する。このプラスミドは予防的または治療的
に使用される。
用いてプラスミドを構築する。トロンビンに特異的に結合するヌクレオチド塩基
の配列を持つアプタマーはU.S. Patent No. 5,840,867に記載されている。この
プラスミドが細胞内に入ってアプタマーを作製する条件下に病状を示す患者にこ
のプラスミドを投与する。あるいは患者から細胞を採取し、プラスミドをこの細
胞に遺伝子移入し、細胞を患者に戻す生体外投与を行う。アプタマーは特異的に
トロンビンと結合し、そこで選択的にトロンビンの生物学的活性を制御し、トロ
ンビンの存在に関連する病状を緩和する。このプラスミドは予防的または治療的
に使用される。
【０１０５】 本明細書に記載する図面と実施例を参照しながら記載したが、当技術分野の熟
練者は本明細書に記載された特定的要素に対して、各要素が機能する様式を変更
されることなしに意図された各々の結果を達成するように各種の変化が可能であ
ることを認識することになる。例えば、本明細書に記載するカセットは基本的な
三成分、すなわち目的とする配列を含む遺伝子的要素、プライマー結合部位を含
む遺伝子的要素、および逆転写酵素遺伝子、からなると記載される。これらの成
分はいずれも本明細書に記載した適当なプロモーターとともに提供される。当技
術分野の熟練者は、例えばカセットの逆転写酵素遺伝子として使用するように記
載したＭｏＭｕＬＶ逆転写酵素遺伝子が他の逆転写酵素遺伝子と置換できること
およびＣＭＶプロモーター以外のプロモーターも有利に使用しうることを認識す
ることになる。このような変化および修正は本発明の精神と別個でなければ以下
に記載する非限定的請求項の範囲内にあるものと意図されている。
練者は本明細書に記載された特定的要素に対して、各要素が機能する様式を変更
されることなしに意図された各々の結果を達成するように各種の変化が可能であ
ることを認識することになる。例えば、本明細書に記載するカセットは基本的な
三成分、すなわち目的とする配列を含む遺伝子的要素、プライマー結合部位を含
む遺伝子的要素、および逆転写酵素遺伝子、からなると記載される。これらの成
分はいずれも本明細書に記載した適当なプロモーターとともに提供される。当技
術分野の熟練者は、例えばカセットの逆転写酵素遺伝子として使用するように記
載したＭｏＭｕＬＶ逆転写酵素遺伝子が他の逆転写酵素遺伝子と置換できること
およびＣＭＶプロモーター以外のプロモーターも有利に使用しうることを認識す
ることになる。このような変化および修正は本発明の精神と別個でなければ以下
に記載する非限定的請求項の範囲内にあるものと意図されている。
【０１０６】
【表１】
【図面の簡単な説明】
【図１Ａ】 目的とする配列および逆転写酵素のプライマー結合部位をコー
ドする遺伝子的要素を含むプラスミドの図式である。
ドする遺伝子的要素を含むプラスミドの図式である。
【図１Ｂ】 逆転写酵素の遺伝子を含むプラスミドの図式である。
【図１Ｃ】 目的とする配列、プライマー結合部位、および逆転写酵素をコ
ードする遺伝子的要素を含むプラスミドの図式である。
ードする遺伝子的要素を含むプラスミドの図式である。
【図２】 本発明方法の一態様を示す図式である。
【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書
【提出日】平成１２年１１月２８日（２０００．１１．２８）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正内容】
【特許請求の範囲】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 13/12 Ａ６１Ｐ 25/00 ４Ｃ０８７ 25/00 25/14 25/14 25/16 25/16 29/00 29/00 31/12 31/12 31/18 31/18 31/22 31/22 35/00 35/00 37/06 37/06 43/00 １１１ 43/00 １１１ Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/19 1/19 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ 5/10 33/50 Ｚ Ｇ０１Ｎ 33/15 Ａ６１Ｋ 35/74 Ｄ 33/50 35/76 // Ａ６１Ｋ 35/74 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 35/76 5/00 Ａ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 マイケル・ジェイ・スキラーン アメリカ合衆国77057テキサス州ヒュース トン、ピーエムビー466、エイ−１ウエス タイマー5868番 (72)発明者 チャールズ・エイ・コンラッド アメリカ合衆国66210カンザス州オーバ ー・ランド・パーク、ウエスト・ワンハン ドレッドシックスティーンス・ストリート 8496番 (72)発明者 ジョナサン・エフ・エリストン アメリカ合衆国77025テキサス州ヒュース トン、タータン・レイン3626番 Ｆターム(参考） 2G045 AA40 CB01 DA12 DA13 DA77 FB01 4B024 AA01 AA20 BA07 BA80 CA04 CA12 DA01 DA02 DA11 HA08 HA17 4B065 AA90X AA97Y AB01 BA02 CA27 CA44 4C084 AA02 AA06 AA13 CA53 ZB331 ZC781 4C086 AA01 AA04 EA16 MA06 NA14 ZA01 ZA02 ZA36 ZA59 ZA81 ZB08 ZB11 ZB26 ZB33 ZC20 ZC55 4C087 AA01 AA03 AA04 BB65 ZB33 ZC78
Claims (52)
- 【請求項１】 目的とする配列を含む核酸構築物；および 目的とする配列に関して３'位に位置する逆転写酵素のためのプライマー結合部
位； を含む、細胞中に送達するための遺伝子的要素のセット。 - 【請求項２】 さらに逆転写酵素遺伝子を含む請求項１による遺伝子的要素
のセット。 - 【請求項３】 逆転写酵素遺伝子が目的とする配列およびプライマー結合部
位に関してポリシストロン性に転写可能な請求項２による遺伝子的要素のセット
。 - 【請求項４】 逆転写酵素遺伝子が目的とする配列およびプライマー結合部
位と同じ核酸構築物に位置する請求項２または３による遺伝子的要素のセット。 - 【請求項５】 逆転写酵素遺伝子が目的とする配列およびプライマー結合部
位に関して５'位に位置する請求項２から４までのいずれか一つによる遺伝子的
要素のセット。 - 【請求項６】 逆転写酵素遺伝子が逆転写酵素／ＲＮＡｓｅ・Ｈポリプロテ
インをコードする請求項２から４までのいずれか一つによる遺伝子的要素のセッ
ト。 - 【請求項７】 逆転写酵素／ＲＮＡｓｅ・Ｈポリプロテインをコードする遺
伝子がモロニーマウス白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、またはサル免疫
不全ウイルスから得たものである請求項６による遺伝子的要素のセット。 - 【請求項８】 プライマー結合部位が逆転写酵素遺伝子がコードする逆転写
酵素に特異的である請求項２から７までによる遺伝子的要素のセット。 - 【請求項９】 プライマー結合部位が内在性逆転写酵素に特異的である請求
項１による遺伝子的要素のセット。 - 【請求項１０】 プライマー結合部位が転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）に相補的で
ある前記請求項のいずれかによる遺伝子的要素のセット。 - 【請求項１１】 該目的とする配列および／または該逆転写酵素遺伝子に対
するプロモーターおよび要すればエンハンサーをさらに含む前記請求項のいずれ
かによる遺伝子的要素のセット。 - 【請求項１２】 プロモーターおよび／またはエンハンサーが真核細胞のプ
ロモーターおよび／またはエンハンサーである請求項１１による遺伝子的要素の
セット。 - 【請求項１３】 プロモーターが構成的、誘導性、広範スペクトル性または
組織特異的プロモーターである請求項１１または１２による遺伝子的要素のセッ
ト。 - 【請求項１４】 該目的とする配列および３'プライマー結合部位に関して
３'位に位置するポリアデニル化テイル配列をさらに含む前記請求項のいずれか
一つによる遺伝子的要素のセット。 - 【請求項１５】 該目的とする配列がアンチセンス配列である前記請求項の
いずれか一つによる遺伝子的要素のセット。 - 【請求項１６】 該目的とする配列がアプタマーである請求項１から１４ま
でのいずれか一つによる遺伝子的要素のセット。 - 【請求項１７】 該核酸構築物がＤＮＡである前記請求項のいずれか一つに
よる遺伝子的要素のセット。 - 【請求項１８】 少なくとも１個のベクターに挿入された前記請求項のいず
れか一つによる遺伝子的要素のセット。 - 【請求項１９】 該目的とする配列および３'プライマー結合部位が第一の
ベクターに挿入され、該逆転写酵素遺伝子が第二のベクターに挿入されている請
求項２から１７までのいずれか一つによる遺伝子的要素のセット。 - 【請求項２０】 該逆転写酵素遺伝子、目的とする配列、およびプライマー
結合部位が単一のベクターに挿入された請求項２から１７までのいずれか一つに
よる遺伝子的要素のセット。 - 【請求項２１】 該逆転写酵素遺伝子が目的とする配列および３'プライマ
ー結合部位に関して５'位に位置する請求項２０による遺伝子的要素のセット。 - 【請求項２２】 （ａ）目的とする配列および３'プライマー結合部位； および（ｂ）逆転写酵素遺伝子； を含む細胞に送達するために適合された遺伝子的要素のセットであって、該目的
とする配列および３'プライマー結合部位および該逆転写酵素遺伝子が細胞に送
達するためのベクター少なくとも１個に挿入されているもの。 - 【請求項２３】 （ａ）プライマー結合部位および目的とする配列の挿入部
位であって、プライマー結合部位が挿入部位に関して３'位に位置するもの； および（ｂ）逆転写酵素遺伝子； を含むベクター。 - 【請求項２４】 該逆転写酵素遺伝子が挿入部位および３'プライマー結合
部位に関して５'位に位置している請求項２３によるベクター。 - 【請求項２５】 目的とする配列および３'プライマーのための挿入部位を
含む第一のベクター；および逆転写酵素遺伝子を含む第二のベクター；を含むベ
クター系。 - 【請求項２６】 該ベクターがプラスミドまたは修正ウイルス構築物である
請求項２３から２５までのいずれか一つによるベクターまたはベクター系。 - 【請求項２７】 該逆転写酵素遺伝子が発現制御配列に作動可能に連結して
いる請求項２３から２６までのいずれか一つによるベクターまたはベクター系。 - 【請求項２８】 請求項２３から２７までのいずれか一つによるベクターま
たはベクター系を安定に変換または遺伝子移入された宿主細胞。 - 【請求項２９】 真核細胞である請求項２８による宿主細胞。
- 【請求項３０】 請求項２３から２７までのいずれか一つによるベクターま
たはベクター系および該挿入部位のための制限エンドヌクレアーゼを含む単鎖核
酸配列を製造するためのキット。 - 【請求項３１】 請求項２３から２７までのいずれか一つによるベクターま
たはベクター系、ベクター／ベクター系のための容器、およびベクター／ベクタ
ー系を使用するための指示を含む単鎖核酸配列を製造するためのキット。 - 【請求項３２】 生体内または試験管内で目的とする単鎖核酸配列を製造す
る方法であって、その方法が； 標的細胞に核酸構築物を挿入する諸段階、但し、この核酸構築物は目的とする配
列および目的とする配列に関して３'位に位置するプライマー結合部位を含むも
のとする； ｍＲＮＡに核酸構築物を転写する段階；および 該ｍＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写する段階； の各段階を含むもの。 - 【請求項３３】 ｍＲＮＡの逆転写によって形成されたｍＲＮＡ／ｃＤＮＡ
ヘテロ二重鎖からｍＲＮＡを分離する段階をさらに含む請求項３２による方法。 - 【請求項３４】 標的細胞に導入された逆転写遺伝子によって発現された逆
転写酵素によって逆転写が行われる請求項３２または３３による方法。 - 【請求項３５】 標的細胞に内在性である逆転写遺伝子によって逆転写が行
われる請求項３２または３３による方法。 - 【請求項３６】 ＲＮＡｓｅ・ＨによってｍＲＮＡ転写物をｍＲＮＡ／ｃＤ
ＮＡヘテロ二重鎖から取り出す請求項３２から３５までのいずれか一つによる方
法。 - 【請求項３７】 標的細胞に導入された逆転写酵素／ＲＮＡｓｅ・Ｈポリプ
ロテインをコードするする遺伝子からＲＮＡｓｅ・Ｈが発現される請求項３６に
よる方法。 - 【請求項３８】 ｍＲＮＡ転写物、ｍＲＮＡ／ｃＤＮＡヘテロ二重鎖および
／または単鎖ｃＤＮＡを標的細胞から分離する段階をさらに含む請求項３２から
３７までのいずれか一つによる方法。 - 【請求項３９】 請求項３２から３８までのいずれか一つによる方法によっ
て製造された単鎖ｃＤＮＡ転写物。 - 【請求項４０】 請求項３２から３８までのいずれか一つによる方法によっ
て製造された阻害性核酸分子。 - 【請求項４１】 アンチセンス配列またはアプタマーである請求項４０によ
る阻害性核酸分子。 - 【請求項４２】 請求項３２から３８までのいずれか一つによる方法によっ
て製造されたｍＲＮＡ転写物。 - 【請求項４３】 請求項３２から３８までのいずれか一つによる方法によっ
て製造されたヘテロ二重鎖分子。 - 【請求項４４】 請求項１から２２までのいずれか一つによる遺伝子的要素
のセットを、医薬的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体とともに含む
医薬的組成物。 - 【請求項４５】 請求項２３から２７までのいずれか一つによるベクターま
たはベクター系を、医薬的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体ととも
に含む医薬的組成物。 - 【請求項４６】 請求項２８または２９による宿主細胞を、医薬的に許容さ
れるアジュバント、希釈剤または担体とともに含む医薬的組成物。 - 【請求項４７】 治療に使用するための請求項１から２２までのいずれか一
つによる遺伝子的要素のセット、特に標的細胞に阻害性核酸分子を送達するため
の使用のための該遺伝子的要素のセット。 - 【請求項４８】 治療に使用するための請求項２３から２７までのいずれか
一つによるベクターまたはベクター系、特に標的細胞に阻害性核酸分子を送達す
るための使用のための該ベクターまたはベクター系。 - 【請求項４９】 治療に使用するための請求項２８または２９による宿主細
胞、特に標的細胞に阻害性核酸分子を送達するための使用のための該宿主細胞。 - 【請求項５０】 遺伝子発現を調節することによって病理学的状況を緩和す
るための医薬、特に標的細胞に阻害性核酸分子を送達することによって病理学的
状況を緩和するための医薬、を製造するための請求項１から２２までのいずれか
一つによる遺伝子的要素のセットの使用。 - 【請求項５１】 遺伝子発現を調節することによって病理学的状況を緩和す
るための医薬、特に標的細胞に阻害性核酸分子を送達することによって病理学的
状況を緩和するための医薬、を製造するための請求項２３から２７までのいずれ
か一つによるベクターまたはベクター系の使用。 - 【請求項５２】 遺伝子発現を調節することによって病理学的状況を緩和す
るための医薬、特に標的細胞に阻害性核酸分子を送達することによって病理学的
状況を緩和するための医薬、を製造するための請求項２８または２９による宿主
細胞の使用。
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US16979398A | 1998-10-09 | 1998-10-09 | |
| US39778399A | 1999-09-16 | 1999-09-16 | |
| US09/169,793 | 1999-09-16 | ||
| US09/397,783 | 1999-09-16 | ||
| PCT/US1999/023933 WO2000022113A1 (en) | 1998-10-09 | 1999-10-12 | ENZYMATIC SYNTHESIS OF ssDNA |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002527061A true JP2002527061A (ja) | 2002-08-27 |
Family
ID=26865381
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000576004A Pending JP2002527061A (ja) | 1998-10-09 | 1999-10-12 | ｓｓＤＮＡの酵素的合成 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1117776A1 (ja) |
| JP (1) | JP2002527061A (ja) |
| KR (1) | KR20010099682A (ja) |
| AU (1) | AU6430599A (ja) |
| BR (1) | BR9914772A (ja) |
| CA (1) | CA2346155A1 (ja) |
| IL (1) | IL142490A0 (ja) |
| MX (1) | MXPA01003642A (ja) |
| WO (1) | WO2000022113A1 (ja) |
Families Citing this family (176)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19956568A1 (de) | 1999-01-30 | 2000-08-17 | Roland Kreutzer | Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens |
| US7419964B2 (en) | 1999-09-16 | 2008-09-02 | Cytogenix, Inc. | Treatment of HSV-related pathologies using ssDNA |
| AU7855300A (en) * | 1999-10-04 | 2001-05-10 | Cytogenix, Inc. | Altering gene expression with ssDNA produced in vivo |
| DE10100586C1 (de) | 2001-01-09 | 2002-04-11 | Ribopharma Ag | Verfahren zur Hemmung der Expression eines Ziegens |
| US7767802B2 (en) | 2001-01-09 | 2010-08-03 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes |
| US7423142B2 (en) | 2001-01-09 | 2008-09-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes |
| US7745418B2 (en) | 2001-10-12 | 2010-06-29 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting viral replication |
| MXPA04005747A (es) * | 2001-12-14 | 2005-07-05 | Univ Yale | Generacion intra-celular de adn de un solo filamento. |
| EP2899278A1 (en) | 2004-03-12 | 2015-07-29 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | iRNA agents targeting VEGF |
| CA2582814A1 (en) * | 2004-09-28 | 2006-04-06 | Cytogenix, Inc. | Single-stranded antimicrobial oligonucleotides and uses thereof |
| EP2363134B1 (en) | 2005-11-09 | 2014-01-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of factor V Leiden mutant gene |
| US8658608B2 (en) | 2005-11-23 | 2014-02-25 | Yale University | Modified triple-helix forming oligonucleotides for targeted mutagenesis |
| NZ571568A (en) | 2006-03-31 | 2010-11-26 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Double-stranded RNA molecule compositions and methods for inhibiting expression of Eg5 gene |
| WO2007127919A2 (en) | 2006-04-28 | 2007-11-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of a gene from the jc virus |
| CN101484588B (zh) | 2006-05-11 | 2013-11-06 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 抑制pcsk9基因表达的组合物和方法 |
| EP2392583A1 (en) | 2006-05-19 | 2011-12-07 | Alnylam Europe AG. | RNAi modulation of Aha and therapeutic uses thereof |
| CA2653451C (en) | 2006-05-22 | 2015-12-29 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of ikk-b gene |
| WO2008036638A2 (en) | 2006-09-18 | 2008-03-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Rnai modulation of scap and therapeutic uses thereof |
| CA2663581C (en) | 2006-09-21 | 2016-03-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of the hamp gene |
| PE20090064A1 (es) | 2007-03-26 | 2009-03-02 | Novartis Ag | Acido ribonucleico de doble cadena para inhibir la expresion del gen e6ap humano y composicion farmaceutica que lo comprende |
| CA2692503C (en) | 2007-07-05 | 2013-09-24 | Novartis Ag | Dsrna for treating viral infection |
| JP5530933B2 (ja) | 2007-12-10 | 2014-06-25 | アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド | 第ｖｉｉ因子遺伝子発現阻害のための組成物及び方法 |
| AU2009221775B2 (en) | 2008-03-05 | 2015-05-07 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of Eg5 and VEGF genes |
| WO2010028054A1 (en) | 2008-09-02 | 2010-03-11 | Alnylam Europe Ag. | Compositions and methods for inhibiting expression of mutant egfr gene |
| CA2739170A1 (en) | 2008-09-25 | 2010-04-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of serum amyloid a gene |
| ES2656516T3 (es) | 2008-10-20 | 2018-02-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Composiciones y métodos para inhibir la expresión de transtiretina |
| AU2009324534B2 (en) | 2008-12-10 | 2015-07-30 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | GNAQ targeted dsRNA compositions and methods for inhibiting expression |
| KR20110100316A (ko) | 2009-02-03 | 2011-09-09 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | Ｐｔｐ1ｂ 유전자의 발현을 억제하기 위한 조성물 및 방법 |
| WO2010099341A1 (en) | 2009-02-26 | 2010-09-02 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of mig-12 gene |
| CN102421900B (zh) | 2009-03-12 | 2015-07-22 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 用于抑制Eg5和VEGF基因表达的脂质配制的组合物以及方法 |
| WO2010147992A1 (en) | 2009-06-15 | 2010-12-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods for increasing efficacy of lipid formulated sirna |
| WO2010148013A2 (en) | 2009-06-15 | 2010-12-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Lipid formulated dsrna targeting the pcsk9 gene |
| AR078921A1 (es) | 2009-11-09 | 2011-12-14 | Hoffmann La Roche | Composiciones y metodos para inhibir la expresion de genes de la superfamilia de quinesinas, kif10 |
| US20110152349A1 (en) | 2009-12-18 | 2011-06-23 | Anke Geick | Compositions and methods for inhibiting expression of il-18 genes |
| US20110196016A1 (en) | 2010-02-05 | 2011-08-11 | Anke Geick | Compositions and Methods for Inhibiting Expression of IKK2 Genes |
| CA2792291A1 (en) | 2010-03-29 | 2011-10-06 | Kumamoto University | Sirna therapy for transthyretin (ttr) related ocular amyloidosis |
| JP2013523162A (ja) | 2010-04-06 | 2013-06-17 | アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド | Ｃｄ２７４／ｐｄ−ｌ１遺伝子の発現を阻害するための組成物および方法 |
| WO2011153323A2 (en) | 2010-06-02 | 2011-12-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods directed to treating liver fibrosis |
| EP2630240A1 (en) | 2010-10-18 | 2013-08-28 | Arrowhead Research Corporation | Compositions and methods for inhibiting expression of rrm2 genes |
| EP2649182A4 (en) | 2010-12-10 | 2015-05-06 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | COMPOSITIONS AND METHOD FOR INCREASING AN ERYTHROPOIETIN (EPO) PREPARATION |
| EP2648763A4 (en) | 2010-12-10 | 2014-05-14 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | COMPOSITIONS AND METHODS FOR EXPRESSION INHIBITION OF GENES KLF-1 AND BCL11A |
| MX343008B (es) | 2011-03-29 | 2016-10-21 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones y metodos para inhibir la expresion del gen de proteasa transmembrana, serina 6 (tmprss6). |
| EP4092120A1 (en) | 2011-06-21 | 2022-11-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Angiopoietin-like 3 (anglptl3) irna compositions and methods of use thereof |
| WO2012177906A1 (en) | 2011-06-21 | 2012-12-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Assays and methods for determining activity of a therapeutic agent in a subject |
| WO2012177949A2 (en) | 2011-06-21 | 2012-12-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibition of expression of protein c (proc) genes |
| EP2723861A4 (en) | 2011-06-21 | 2014-12-10 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING HEPCIDINE ANTIMICROBIAL PEPTIDE (HAMP) OR THE ASSOCIATED GENE EXPRESSION |
| CA3191066A1 (en) | 2011-06-21 | 2012-12-27 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Compositions and methods for inhibition of expression of apolipoprotein c-iii (apoc3) genes |
| EP3597750B1 (en) | 2011-06-23 | 2022-05-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Serpina1 sirnas: compositions of matter and methods of treatment |
| TWI695066B (zh) | 2011-06-30 | 2020-06-01 | 美商艾羅海德製藥公司 | 用於抑制b型肝炎病毒基因表現之組合物及方法 |
| WO2013019857A2 (en) | 2011-08-01 | 2013-02-07 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Method for improving the success rate of hematopoietic stem cell transplants |
| US9133461B2 (en) | 2012-04-10 | 2015-09-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of the ALAS1 gene |
| US9127274B2 (en) | 2012-04-26 | 2015-09-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Serpinc1 iRNA compositions and methods of use thereof |
| SI2929031T1 (en) | 2012-12-05 | 2018-02-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | PCSK9 IRNA assemblies and procedures for their use |
| WO2014130922A1 (en) | 2013-02-25 | 2014-08-28 | Trustees Of Boston University | Compositions and methods for treating fungal infections |
| EP3699592A1 (en) | 2013-03-13 | 2020-08-26 | Geneweave Biosciences Inc. | Non-replicative transduction particles and transduction particle-based reporter systems |
| MX366660B (es) | 2013-03-14 | 2019-07-18 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones de arni contra el componente c5 del complemento y métodos para su uso. |
| WO2014160871A2 (en) | 2013-03-27 | 2014-10-02 | The General Hospital Corporation | Methods and agents for treating alzheimer's disease |
| TW201515650A (zh) | 2013-05-06 | 2015-05-01 | 艾爾妮蘭製藥公司 | 遞送經脂質調配之核酸分子之劑量及方法 |
| IL293657A (en) | 2013-05-22 | 2022-08-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Preparations of tmprss6 irna and methods of using them |
| EP2999785B1 (en) | 2013-05-22 | 2018-04-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Serpina1 irna compositions and methods of use thereof |
| MX2016004230A (es) | 2013-10-02 | 2016-10-21 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones y metodos para inhibir la expresion del gen lect2. |
| US9988627B2 (en) | 2013-10-04 | 2018-06-05 | Novartis Ag | Formats for organic compounds for use in RNA interference |
| SG10201910929QA (en) | 2013-10-04 | 2020-01-30 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Compositions and methods for inhibiting expression of the alas1 gene |
| JP6546161B2 (ja) | 2013-10-04 | 2019-07-17 | ノバルティス アーゲー | Ｂ型肝炎ウイルスを治療するための有機化合物 |
| JP6694811B2 (ja) | 2013-10-04 | 2020-05-20 | ノバルティス アーゲー | ＲＮＡ干渉に使用するためのＲＮＡｉ剤用の３’末端キャップ |
| KR102344559B1 (ko) | 2013-12-12 | 2021-12-31 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 보체 성분 ｉＲＮＡ 조성물 및 이의 이용 방법 |
| EP3960860A3 (en) | 2014-02-11 | 2022-06-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Ketohexokinase (khk) irna compositions and methods of use thereof |
| TW201607559A (zh) | 2014-05-12 | 2016-03-01 | 阿尼拉製藥公司 | 治療ｓｅｒｐｉｎｃ１相關疾患之方法和組成物 |
| JP6811094B2 (ja) | 2014-05-22 | 2021-01-13 | アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＡｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． | アンジオテンシノーゲン（ＡＧＴ）ｉＲＮＡ組成物およびその使用 |
| JOP20200115A1 (ar) | 2014-10-10 | 2017-06-16 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | تركيبات وطرق لتثبيط التعبير الجيني عن hao1 (حمض أوكسيداز هيدروكسيلي 1 (أوكسيداز جليكولات)) |
| JOP20200092A1 (ar) | 2014-11-10 | 2017-06-16 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | تركيبات iRNA لفيروس الكبد B (HBV) وطرق لاستخدامها |
| WO2016081444A1 (en) | 2014-11-17 | 2016-05-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Apolipoprotein c3 (apoc3) irna compositions and methods of use thereof |
| WO2016130806A2 (en) | 2015-02-13 | 2016-08-18 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Patatin-like phospholipase domain containing 3 (pnpla3) irna compositions and methods of use thereof |
| IL295159A (en) | 2015-04-13 | 2022-09-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Preparations of angiopoietin-like 3 irna and methods of using them |
| TWI806034B (zh) | 2015-05-06 | 2023-06-21 | 美商阿尼拉製藥公司 | 第十二因子（哈格曼因子）（Ｆ１２）、激肽釋放素Ｂ、血漿（夫列契因子）１（ＫＬＫＢ１）及激肽原１（ＫＮＧ１）ｉＲＮＡ組成物及其使用方法 |
| EP3307316A1 (en) | 2015-06-12 | 2018-04-18 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Complement component c5 irna compositions and methods of use thereof |
| WO2016209862A1 (en) | 2015-06-23 | 2016-12-29 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Glucokinase (gck) irna compositions and methods of use thereof |
| US10494632B2 (en) | 2015-07-10 | 2019-12-03 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Insulin-like growth factor binding protein, acid labile subunit (IGFALS) compositions and methods of use thereof |
| EP3332007A4 (en) | 2015-08-07 | 2019-07-17 | Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. | RNA INTERFERENCE THERAPY FOR HEPATITIS B VIRUS INFECTION |
| PE20181131A1 (es) | 2015-09-02 | 2018-07-17 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | COMPOSICIONES DE ARNi PARA LIGANDO 1 DE MUERTE CELULAR PROGRAMADA 1 (PD-L1) Y METODOS DE USO DE LAS MISMAS |
| TW201718857A (zh) | 2015-09-14 | 2017-06-01 | 艾爾妮蘭製藥公司 | 用於抑制alas1基因表現之組合物及方法 |
| KR20230119027A (ko) | 2015-12-07 | 2023-08-14 | 젠자임 코포레이션 | Serpinc1-연관 장애의 치료를 위한 방법 및 조성물 |
| JP2018536689A (ja) | 2015-12-10 | 2018-12-13 | アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＡｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． | ステロール調節エレメント結合タンパク質（ＳＲＥＢＰ）シャペロン（ＳＣＡＰ）ｉＲＮＡ組成物およびその使用方法 |
| WO2017143042A2 (en) | 2016-02-16 | 2017-08-24 | Yale University | Compositions for enhancing targeted gene editing and methods of use thereof |
| MA45295A (fr) | 2016-04-19 | 2019-02-27 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composition d'arni de protéine de liaison de lipoprotéines haute densité (hdlbp/vigiline) et procédés pour les utiliser |
| WO2017214518A1 (en) | 2016-06-10 | 2017-12-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | COMPLETMENT COMPONENT C5 iRNA COMPOSTIONS AND METHODS OF USE THEREOF FOR TREATING PAROXYSMAL NOCTURNAL HEMOGLOBINURIA (PNH) |
| JOP20170161A1 (ar) | 2016-08-04 | 2019-01-30 | Arrowhead Pharmaceuticals Inc | عوامل RNAi للعدوى بفيروس التهاب الكبد ب |
| TW202313978A (zh) | 2016-11-23 | 2023-04-01 | 美商阿尼拉製藥公司 | 絲胺酸蛋白酶抑制因子Ａ１ ｉＲＮＡ組成物及其使用方法 |
| TWI790217B (zh) | 2016-12-16 | 2023-01-21 | 美商阿尼拉製藥公司 | 使用甲狀腺素運載蛋白（ＴＴＲ）ｉＲＮＡ組成物於治療或預防ＴＴＲ相關疾病之方法 |
| CN110913898B (zh) | 2017-04-18 | 2024-04-05 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 具有乙肝病毒(hbv)感染的受试者的治疗方法 |
| CA3069868A1 (en) | 2017-07-13 | 2019-01-17 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Lactate dehydrogenase a (ldha) irna compositions and methods of use thereof |
| WO2019089922A1 (en) | 2017-11-01 | 2019-05-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Complement component c3 irna compositions and methods of use thereof |
| WO2019099610A1 (en) | 2017-11-16 | 2019-05-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Kisspeptin 1 (kiss1) irna compositions and methods of use thereof |
| EP3714054A1 (en) | 2017-11-20 | 2020-09-30 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Serum amyloid p component (apcs) irna compositions and methods of use thereof |
| CA3086343A1 (en) | 2017-12-18 | 2019-06-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | High mobility group box-1 (hmgb1) irna compositions and methods of use thereof |
| US11008602B2 (en) | 2017-12-20 | 2021-05-18 | Roche Molecular Systems, Inc. | Non-replicative transduction particles and transduction particle-based reporter systems |
| TW202016304A (zh) | 2018-05-14 | 2020-05-01 | 美商阿尼拉製藥公司 | 血管收縮素原（ＡＧＴ）ｉＲＮＡ組成物及其使用方法 |
| WO2020037125A1 (en) | 2018-08-16 | 2020-02-20 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of the lect2 gene |
| WO2020060986A1 (en) | 2018-09-18 | 2020-03-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Ketohexokinase (khk) irna compositions and methods of use thereof |
| WO2020104649A2 (en) | 2018-11-23 | 2020-05-28 | Sanofi | Novel rna compositions and methods for inhibiting angptl8 |
| EP3902930A1 (en) | 2018-12-27 | 2021-11-03 | F. Hoffmann-La Roche AG | Non-replicative transduction particles and transduction particle-based reporter systems for detection of acinetobacter baumannii |
| US11572595B2 (en) | 2018-12-31 | 2023-02-07 | Roche Molecular Systems, Inc. | Non-replicative transduction particles with one or more non-native tail fibers and transduction particle-based reporter systems |
| WO2021022109A1 (en) | 2019-08-01 | 2021-02-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | SERPIN FAMILY F MEMBER 2 (SERPINF2) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
| WO2021022108A2 (en) | 2019-08-01 | 2021-02-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | CARBOXYPEPTIDASE B2 (CPB2) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
| WO2021030522A1 (en) | 2019-08-13 | 2021-02-18 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | SMALL RIBOSOMAL PROTEIN SUBUNIT 25 (RPS25) iRNA AGENT COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
| WO2021037972A1 (en) | 2019-08-27 | 2021-03-04 | Sanofi | Compositions and methods for inhibiting pcsk9 |
| JP2022546570A (ja) | 2019-09-03 | 2022-11-04 | アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド | Ｌｅｃｔ２遺伝子の発現を阻害するための組成物および方法 |
| AU2020352552A1 (en) | 2019-09-23 | 2022-03-17 | Omega Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for modulating hepatocyte nuclear factor 4-alpha (HNF4α) gene expression |
| WO2021061707A1 (en) | 2019-09-23 | 2021-04-01 | Omega Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for modulating apolipoprotein b (apob) gene expression |
| WO2021067747A1 (en) | 2019-10-04 | 2021-04-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for silencing ugt1a1 gene expression |
| CA3153932A1 (en) | 2019-10-07 | 2021-04-15 | Jonathan Kipnis | Modulating lymphatic vessels in neurological disease |
| WO2021076828A1 (en) | 2019-10-18 | 2021-04-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Solute carrier family member irna compositions and methods of use thereof |
| MX2022004726A (es) | 2019-10-22 | 2022-05-13 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones de acido ribonucleico de interferencia (arni) de componente c3 de complemento y metodos de uso de las mismas. |
| AU2020376840A1 (en) | 2019-11-01 | 2022-04-07 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Huntingtin (HTT) iRNA agent compositions and methods of use thereof |
| WO2021087325A1 (en) | 2019-11-01 | 2021-05-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for silencing dnajb1-prkaca fusion gene expression |
| EP4058577A1 (en) | 2019-11-13 | 2022-09-21 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating an angiotensinogen- (agt-) associated disorder |
| EP4061945A1 (en) | 2019-11-22 | 2022-09-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Ataxin3 (atxn3) rnai agent compositions and methods of use thereof |
| CN115151641A (zh) | 2019-12-13 | 2022-10-04 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 人类染色体9开放阅读框72(C9ORF72)iRNA剂组合物及其使用方法 |
| TW202138559A (zh) | 2019-12-16 | 2021-10-16 | 美商阿尼拉製藥公司 | 含類ＰＡＴＡＴＩＮ磷脂酶結構域３（ＰＮＰＬＡ３）ｉＲＮＡ組成物及其使用方法 |
| US20220356537A1 (en) | 2019-12-31 | 2022-11-10 | Roche Molecular Systems, Inc. | Quantitative pcr screening of inducible prophage from bacterial isolates |
| EP4093426A1 (en) | 2020-01-24 | 2022-11-30 | University of Virginia Patent Foundation | Modulating lymphatic vessels in neurological disease |
| WO2021154941A1 (en) | 2020-01-31 | 2021-08-05 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Complement component c5 irna compositions for use in the treatment of amyotrophic lateral sclerosis (als) |
| TW202140786A (zh) | 2020-02-10 | 2021-11-01 | 美商艾爾妮蘭製藥公司 | 用於靜默ｖｅｇｆ－ａ表現之組合物及方法 |
| KR20220143106A (ko) | 2020-02-18 | 2022-10-24 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 아포지질단백질 C3 (APOC3) iRNA 조성물 및 이의 사용 방법 |
| WO2021178736A1 (en) | 2020-03-06 | 2021-09-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | KETOHEXOKINASE (KHK) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
| EP4118207A1 (en) | 2020-03-11 | 2023-01-18 | Omega Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for modulating forkhead box p3 (foxp3) gene expression |
| EP4121534A1 (en) | 2020-03-18 | 2023-01-25 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treating subjects having a heterozygous alanine-glyoxylate aminotransferase gene (agxt) variant |
| JP2023519274A (ja) | 2020-03-26 | 2023-05-10 | アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド | コロナウイルスｉＲＮＡ組成物およびその使用方法 |
| US20230190785A1 (en) | 2020-03-30 | 2023-06-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for silencing dnajc15 gene expression |
| US20230295622A1 (en) | 2020-04-06 | 2023-09-21 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for silencing myoc expression |
| WO2021206917A1 (en) | 2020-04-07 | 2021-10-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | ANGIOTENSIN-CONVERTING ENZYME 2 (ACE2) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
| EP4133079A1 (en) | 2020-04-07 | 2023-02-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for silencing scn9a expression |
| EP4133077A1 (en) | 2020-04-07 | 2023-02-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Transmembrane serine protease 2 (tmprss2) irna compositions and methods of use thereof |
| CN115955972A (zh) | 2020-04-27 | 2023-04-11 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 载脂蛋白E(APOE)iRNA剂组合物及其使用方法 |
| BR112022021136A2 (pt) | 2020-04-30 | 2022-11-29 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composições de irna de fator b de complemento (cfb) e métodos de uso das mesmas |
| US20230183707A1 (en) | 2020-05-21 | 2023-06-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting marc1 gene expression |
| EP4168546A1 (en) | 2020-06-18 | 2023-04-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Xanthine dehydrogenase (xdh) irna compositions and methods of use thereof |
| WO2022066847A1 (en) | 2020-09-24 | 2022-03-31 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Dipeptidyl peptidase 4 (dpp4) irna compositions and methods of use thereof |
| JP2023544413A (ja) | 2020-10-05 | 2023-10-23 | アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド | Ｇタンパク質共役受容体７５（ＧＰＲ７５）ｉＲＮＡ組成物およびその使用方法 |
| CN116490195A (zh) | 2020-10-16 | 2023-07-25 | 赛诺菲 | 用于抑制脂蛋白(a)的RNA组合物和方法 |
| EP4229200A1 (en) | 2020-10-16 | 2023-08-23 | Sanofi | Novel rna compositions and methods for inhibiting angptl3 |
| CA3198823A1 (en) | 2020-10-21 | 2022-04-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating primary hyperoxaluria |
| WO2022087329A1 (en) | 2020-10-23 | 2022-04-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Mucin 5b (muc5b) irna compositions and methods of use thereof |
| WO2022103999A1 (en) | 2020-11-13 | 2022-05-19 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | COAGULATION FACTOR V (F5) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
| WO2022119873A1 (en) | 2020-12-01 | 2022-06-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for inhibition of hao1 (hydroxyacid oxidase 1 (glycolate oxidase)) gene expression |
| EP4259795A1 (en) | 2020-12-08 | 2023-10-18 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Coagulation factor x (f10) irna compositions and methods of use thereof |
| WO2022150260A1 (en) | 2021-01-05 | 2022-07-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | COMPLEMENT COMPONENT 9 (C9) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
| IL304880A (en) | 2021-02-12 | 2023-10-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Superoxide dismutase 1 (SOD1) IRNA compositions and methods of using them to treat or prevent superoxide dismutase 1- (SOD1-) associated neurodegenerative diseases |
| CN117222739A (zh) | 2021-02-25 | 2023-12-12 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 朊病毒蛋白(prnp)irna组合物和其使用方法 |
| EP4298218A1 (en) | 2021-02-26 | 2024-01-03 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Ketohexokinase (khk) irna compositions and methods of use thereof |
| IL305414A (en) | 2021-03-04 | 2023-10-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Angiopoietin-like 3 (ANGPTL3) IRNA compositions and methods of using them |
| EP4305169A1 (en) | 2021-03-12 | 2024-01-17 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Glycogen synthase kinase 3 alpha (gsk3a) irna compositions and methods of use thereof |
| JP2024512635A (ja) | 2021-03-29 | 2024-03-19 | アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド | ハンチンチン（ＨＴＴ）ｉＲＮＡ剤組成物およびその使用方法 |
| WO2022212153A1 (en) | 2021-04-01 | 2022-10-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Proline dehydrogenase 2 (prodh2) irna compositions and methods of use thereof |
| EP4330392A1 (en) | 2021-04-26 | 2024-03-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Transmembrane protease, serine 6 (tmprss6) irna compositions and methods of use thereof |
| EP4330396A1 (en) | 2021-04-29 | 2024-03-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Signal transducer and activator of transcription factor 6 (stat6) irna compositions and methods of use thereof |
| WO2022245583A1 (en) | 2021-05-18 | 2022-11-24 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Sodium-glucose cotransporter-2 (sglt2) irna compositions and methods of use thereof |
| EP4347823A1 (en) | 2021-06-02 | 2024-04-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Patatin-like phospholipase domain containing 3 (pnpla3) irna compositions and methods of use thereof |
| JP2024521907A (ja) | 2021-06-04 | 2024-06-04 | アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド | ヒト９番染色体オープンリーディングフレーム７２（Ｃ９ＯＲＦ７２）ｉＲＮＡ剤組成物及びその使用方法 |
| AR126070A1 (es) | 2021-06-08 | 2023-09-06 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones y métodos para tratar o prevenir la enfermedad de stargardt y/o trastornos asociados con la proteína transportadora de retinol 4 (rbp4) |
| EP4363580A1 (en) | 2021-06-30 | 2024-05-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating an angiotensinogen- (agt-) associated disorder |
| WO2023283359A2 (en) | 2021-07-07 | 2023-01-12 | Omega Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for modulating secreted frizzled receptor protein 1 (sfrp1) gene expression |
| WO2023003805A1 (en) | 2021-07-19 | 2023-01-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating subjects having or at risk of developing a non-primary hyperoxaluria disease or disorder |
| CA3226887A1 (en) | 2021-07-21 | 2023-01-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Metabolic disorder-associated target gene irna compositions and methods of use thereof |
| IL309905A (en) | 2021-07-23 | 2024-03-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | IRNA compositions in β-catenin (CTNNB1) and methods of using them |
| WO2023009687A1 (en) | 2021-07-29 | 2023-02-02 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coa reductase (hmgcr) irna compositions and methods of use thereof |
| CN117795074A (zh) | 2021-08-03 | 2024-03-29 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 转甲状腺素蛋白（TTR）iRNA组合物和其使用方法 |
| CA3228255A1 (en) | 2021-08-04 | 2023-02-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Irna compositions and methods for silencing angiotensinogen (agt) |
| EP4384617A1 (en) | 2021-08-13 | 2024-06-19 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Factor xii (f12) irna compositions and methods of use thereof |
| WO2023044370A2 (en) | 2021-09-17 | 2023-03-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Irna compositions and methods for silencing complement component 3 (c3) |
| AU2022345881A1 (en) | 2021-09-20 | 2024-03-21 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Inhibin subunit beta e (inhbe) modulator compositions and methods of use thereof |
| CA3234887A1 (en) | 2021-10-15 | 2023-04-20 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Extra-hepatic delivery irna compositions and methods of use thereof |
| AR127477A1 (es) | 2021-10-29 | 2024-01-31 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | COMPOSICIONES DE ARNi CONTRA EL FACTOR B DEL COMPLEMENTO (CFB) Y MÉTODOS DE USO DE LAS MISMAS |
| WO2023076450A2 (en) | 2021-10-29 | 2023-05-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | HUNTINGTIN (HTT) iRNA AGENT COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
| WO2023141314A2 (en) | 2022-01-24 | 2023-07-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Heparin sulfate biosynthesis pathway enzyme irna agent compositions and methods of use thereof |
| WO2024059165A1 (en) | 2022-09-15 | 2024-03-21 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | 17b-hydroxysteroid dehydrogenase type 13 (hsd17b13) irna compositions and methods of use thereof |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5436141A (en) * | 1989-02-24 | 1995-07-25 | University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey | Method for synthesizing stable single-stranded CDNA in eukaryotes by means of a bacterial retron and products |
| US5434070A (en) * | 1989-02-24 | 1995-07-18 | The University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey | Reverse transcriptases from Escherichia coli and Myxococcus xanthus |
| CA2118518C (en) * | 1991-08-30 | 2005-05-10 | Atushi Ohshima | Over expression of single-stranded molecules |
| CA2073630C (en) * | 1991-08-30 | 2007-12-11 | Atsushi Ohshima | Method for synthesizing single-stranded stem-loop dnas, the products and uses therefor |
| EP0649467B1 (en) * | 1992-07-02 | 1998-09-16 | HYBRIDON, Inc. | Self-stabilized oligonucleotides as therapeutic agents |
| JPH08506011A (ja) * | 1992-12-09 | 1996-07-02 | イー． ミラー，ジェフリー | ｃＤＮＡ合成のための方法及び組成物 |
| FR2703053B1 (fr) * | 1993-03-26 | 1995-06-16 | Genset Sa | Oligonucleotides agrafes et semi-agrafes, procede de preparation et applications . |
| CA2193487A1 (en) * | 1994-06-22 | 1995-12-28 | Jeffrey E. Miller | Methods and compositions for cdna synthesis |
-
1999
- 1999-10-12 JP JP2000576004A patent/JP2002527061A/ja active Pending
- 1999-10-12 IL IL14249099A patent/IL142490A0/xx unknown
- 1999-10-12 BR BR9914772-6A patent/BR9914772A/pt not_active IP Right Cessation
- 1999-10-12 WO PCT/US1999/023933 patent/WO2000022113A1/en not_active Application Discontinuation
- 1999-10-12 CA CA002346155A patent/CA2346155A1/en not_active Abandoned
- 1999-10-12 EP EP99951989A patent/EP1117776A1/en not_active Withdrawn
- 1999-10-12 AU AU64305/99A patent/AU6430599A/en not_active Abandoned
- 1999-10-12 MX MXPA01003642A patent/MXPA01003642A/es unknown
- 1999-10-12 KR KR1020017004474A patent/KR20010099682A/ko not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MXPA01003642A (es) | 2003-07-21 |
| WO2000022113A9 (en) | 2000-08-24 |
| KR20010099682A (ko) | 2001-11-09 |
| WO2000022113A1 (en) | 2000-04-20 |
| EP1117776A1 (en) | 2001-07-25 |
| CA2346155A1 (en) | 2000-04-20 |
| IL142490A0 (en) | 2002-03-10 |
| BR9914772A (pt) | 2001-12-11 |
| AU6430599A (en) | 2000-05-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2002527061A (ja) | ｓｓＤＮＡの酵素的合成 | |
| KR20110128345A (ko) | 생물학적 활성 ｒｎａ의 전달을 위한 조성물 및 방법 | |
| US8802645B2 (en) | Molecule for treating an inflammatory disorder | |
| KR20020097241A (ko) | 스플라이스-영역 안티센스 조성물 및 방법 | |
| AU6298899A (en) | Production of ssdna (in vivo) | |
| JP4698837B2 (ja) | 結合組織成長因子（ｃｔｇｆ）および使用方法 | |
| JP6371486B2 (ja) | インターロイキン６、インターロイキン１３、ｔｎｆ、ｇ−ｃｓｆ、ｃｘｃｌ１、ｃｘｃｌ２、又はｃｘｃｌ５に起因する疾病の予防又は治療剤をスクリーニングする方法、及びインターロイキン６、インターロイキン１３、ｔｎｆ、ｇ−ｃｓｆ、ｃｘｃｌ１、ｃｘｃｌ２、又はｃｘｃｌ５に起因する疾病の予防又は治療剤 | |
| JPH10507061A (ja) | アデノウイルス中にパッケージされたプラスミドｄｎａを用いる遺伝子送達ベクターおよびパッケージング細胞株 | |
| JP2002503459A (ja) | 繊維置換タンパク質を含有する修飾されたアデノウィルス | |
| KR20140123054A (ko) | 생물학적 활성 ｒｎａ의 전달을 위한 조성물 및 방법 | |
| CN116113697A (zh) | 用于治疗癫痫的方法和组合物 | |
| WO2015000181A1 (zh) | 新型重组融合蛋白及其制法和用途 | |
| JP2003511025A (ja) | インビボで製造されたｓｓＤＮＡによる遺伝子発現の改変 | |
| Howard | Vectors for introducing genes into cells of higher eukaryotes | |
| JPH08508878A (ja) | 真核生物における遺伝子転移のためのトランスポジション・アセンブリー | |
| WO2023212687A1 (en) | Systems for enhancing mrna expression and uses thereof | |
| CN111433360A (zh) | 靶向ckip-1的双链rna分子及其用途 | |
| KR100710112B1 (ko) | 세포내에서의 단일 가닥 ｄｎａ의 제조 | |
| AU764629B2 (en) | Inhibition of cytokine production | |
| WO2006089455A1 (fr) | Protéine de fusion antitumorale de ciblage comprenant la protéine adénovirale e4orf4 | |
| WO2004046356A1 (ja) | ＰＤＧＦ受容体α遺伝子のエキソン１β及びその利用 | |
| AU2004205192B2 (en) | Production of ssDNA in vivo | |
| JP4035348B2 (ja) | 大環状標的選択的アンチセンス核酸化合物 | |
| EP1111057A1 (en) | Prodrug ribozyme | |
| AU2007249158A1 (en) | Production of ssDNA in vivo |