JP2002515118A - 付加物保護分析 - Google Patents
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Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1. 試料中の分析物のための分析方法であって、 a)分析物結合領域と標識とを含む標識された結合パートナーに上記試料を露 出する工程であって、上記標識された結合パートナーが上記分析物に結合する際 に、上記標識からのシグナル産生がシグナル変更リガンドによる変更から優先的 に保護される工程; b)上記結合パートナーに露出した上記試料を上記リガンドで処理する工程; そして c)変更されなかった標識から産生したシグナルを検出する工程 を含む上記の方法。 2. 上記結合パートナーが核酸プローブであり、上記分析物が標的核酸配列 である、請求の範囲第1項記載の方法。 3. 上記分析を、上記分析物に結合した結合パートナーを上記分析物に結合 していない結合パートナーから分離することなく実施する、請求の範囲第1項記 載の方法。 4. 上記工程(c)の前に上記分析物に結合した結合パートナーを上記分析 物に結合していない結合パートナーから分離することをさらに含む、請求の範囲 第1項記載の方法。 5. 上記工程(b)および(c)を本質的に一定な温度で実施する、請求の 範囲第1項記載の方法。 6. 上記分析をほぼ室温で実施する、請求の範囲第5項記載の方法。 7. 光吸収を上記工程(c)で検出する、請求の範囲第1項記載の方法。 8. 光放出を上記工程(c)で検出する、請求の範囲第1項記載の方法。 9. 上記リガンドが、遊離電子対を有する硫黄原子、遊離電子対を有する亜 テルル酸塩原子、または遊離電子対を有する亜ヒ酸塩原子のいずれかを含み、上 記硫黄原子、上記亜テルル酸塩原子、または上記亜ヒ酸塩原子は芳香環またはニ トリルに共役していない、請求の範囲第1項記載の方法。 10. 上記リガンドが、テトラヒドロチオペン、プロパンチオール、ベンジ ルメルカプタン、亜硫酸塩、亜硫酸グリコール、ヒドロ亜硫酸塩、メタ重亜硫酸 塩、チオ硫酸塩、チオリン酸塩、メタ亜ヒ酸塩、亜テルル酸塩、亜ヒ酸塩、およ びチオシアネートから成る群から選択される、請求の範囲第1項記載の方法。 11. 上記リガンドが、遊離電子対を有する硫黄原子、遊離電子対を有する 亜テルル酸塩原子、または遊離電子対を有する亜ヒ酸塩原子のいずれかを含み、 上記硫黄原子、上記亜テルル酸塩原子、または上記亜ヒ酸塩原子は芳香環または ニトリルに共役していない、請求の範囲第8項記載の方法。 12. 上記リガンドが、テトラヒドロチオペン、プロパンチオール、ベンジ ルメルカプタン、亜硫酸塩、亜硫酸グリコール、ヒドロ亜硫酸塩、メタ重亜硫酸 塩、チオ硫酸塩、チオリン酸塩、メタ亜ヒ酸塩、亜テルル酸塩、亜ヒ酸塩、およ びチオシアネートから成る群から選択される、請求の範囲第8項記載の方法。 13. 上記標識が以下の化学構造を有する請求の範囲第1項記載の方法: (式中、アリール環系は1〜4個の環式基を含み、上記の基の1つは結合炭素「 c」に結合しており、 R2は、S、O、およびNHから成る群から選択され; R3は、O、N、S、ハロゲン、置換したリン、置換した硫黄、置換したホウ 素、および置換したヒ素から成る群から選択され; R4は、アルキル、アルケニル、アリール、アルコキシ、アリールオキシから 成る群から選択され、R3がハロゲンの場合には存在せず; R5は、R3がNでない場合には存在せず、R3がNの場合にはR5は水素、アル キル、アルケニル、アリール、アルコキシ、およびアリールオキシから成る群か ら選択される。) 14. 上記アリール系が正に帯電している、請求の範囲第13項記載の方法 。 15. 上記アリール環系が1〜4個の環式基を有し; 上記R3がO、N、およびSから成る群から選択され; 上記R4がアリールであり;そして 上記R5が存在しない、 請求の範囲第14項記載の方法。 16. 上記標識が以下の化学構造を有する、請求の範囲第15項記載の方法 : (式中、R1は、H、アルキル、アルケニル、アルキニル、およびアリールから 成る群から選択され; nは0、1、2、3、または4であり; mは0、1、2、3、または4であり; 各々のxは独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アミノ 、置換アミノ、カルボキシ、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロ、スルホニル、ハ ロゲン、チオール、アミド、アセチル、置換アセチル、およびアリールオキシか ら成る群から選択され; 各々のyは独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アミノ 、置換アミノ、カルボキシ、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロ、スルホニル、ハ ロゲン、チオール、アミド、アセチル、置換アセチル、およびアリールオキシか ら成る群から選択される。) 17. 上記nが0、1または2であり; 上記mが0、1または2であり; 上記R3がOであり; 上記R4がアリールであり:そして 上記R5が存在しない、 請求の範囲第16項記載の方法。 18. 上記Xの各々が独立してアルキルまたアルコキシであり; 上記Yの各々が独立してアルキルまたアルコキシであり;そして 上記R4が所望により置換されたフェニルである、 請求の範囲第17項記載の方法。 19. 上記R4が、オルト−メチル−シンナメート−フェニル、オルト−ジ メチル−フェニル、オルト−ジブロモ−フェニルおよび未置換フェニルから成る 群から選択される、請求の範囲第18項記載の方法。 20. 試料中の核酸標的領域のための分析方法であって、 a)上記標的領域に結合することができる核酸配列を有するオリゴヌクレオチ ドと標識とを含む核酸プローブに上記試料を露出する工程で、上記標識が上記標 的領域に結合したプローブ上に存在する場合、上記標識からのシグナル産生がシ グナル変更リガンドによる変更から優先的に保護される工程; b)上記プローブに露出した上記試料を上記リガンドで処理する工程;そして c)変更されなかった標識から産生したシグナルを検出する工程 を含む上記の方法。 21. 上記標的がRNAである、請求の範囲第20項記載の方法。 22. 上記分析を、上記分析物に結合したプローブを上記分析物に結合して いないプローブから分離することなく実施する、請求の範囲第20項記載の方法 。 23. 上記工程(c)の前に上記分析物に結合したプローブを上記分析物に 結合していないプローブから分離することをさらに含む、請求の範囲第20項記 載の方法。 24. 上記工程(b)および(c)を本質的に一定な温度で実施する、請求 の範囲第20項記載の方法。 25. 上記分析をほぼ室温で実施する、請求の範囲第24項記載の方法。 26. 光吸収を上記工程(c)で検出する、請求の範囲第20項記載の方法 。 27. 光放出を上記工程(c)で検出する、請求の範囲第20項記載の方法 。 28. 上記標識が以下の化学構造を有する請求の範囲第27項記載の方法: (式中、上記アリール環系は1〜4個の環式基を含み、上記の基の1つは結合炭 素「c」に結合したアリールであり; R2は、S、O、およびNHから成る群から選択され; R3は、O、N、S、ハロゲン、置換したリン、置換した硫黄、置換したホウ 素、および置換したヒ素から成る群から選択され; R4は、アルキル、アルケニル、アリール、アルコキシ、アリールオキシから 成る群から選択され、R3がハロゲンの場合には存在せず;そして R5は、R3がNでない場合には存在せず、R3がNの場合にはR5は水素、 アルキル、アルケニル、アリール、アルコキシ、およびアリールオキシから成る 群から選択される。) 29. 上記アリール系が正に帯電している、請求の範囲第28項記載の方法 。 30. 上記アリール環系が1〜4個の環式基を有し; 上記R3がO、N、およびSから成る群から選択され; 上記R4がアリールであり;そして 上記R5が存在しない、 請求の範囲第29項記載の方法。 31. 上記標識が以下の化学構造を有する、請求の範囲第30項記載の方法 (式中、R1は、H、アルキル、アルケニル、アルキニル、およびアリールから 成る群から選択され; nは0、1、2、3、または4であり; mは0、1、2、3、または4であり; 各々のxは独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アミノ 、置換アミノ、カルボキシ、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロ、スルホニル、ハ ロゲン、チオール、アミド、アセチル、置換アセチル、およびアリールオキシか ら成る群から選択され;そして 各々のyは独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アミノ 、 置換アミノ、カルボキシ、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロ、スルホニル、ハロ ゲン、チオール、アミド、アセチル、置換アセチル、およびアリールオキシから 成る群から選択される。) 32. 上記nが0、1または2であり; 上記mが0、1または2であり; 上記R3が0であり; 上記R4がアリールであり;そして 上記R5が存在しない、 請求の範囲第31項記載の方法。 33. 上記Xの各々が独立してアルキルまたアルコキシであり; 上記Yの各々が独立してアルキルまたアルコキシであり;そして 上記R4が所望により置換されたフェニルである、 請求の範囲第32項記載の方法。 34. 上記R4が、オルト−メチル−シンナメート−フェニル、オルト−ジ メチル−フェニル、オルト−ジブロモ−フェニルおよび未置換フェニルから成る 群から選択される、請求の範囲第33項記載の方法。 35. 上記リガンドが、テトラヒドロチオペン、プロパンチオール、ベンジ ルメルカプタン、亜硫酸塩、亜硫酸グリコール、ヒドロ亜硫酸塩、メタ重亜硫酸 塩、チオ硫酸塩、チオリン酸塩、メタ亜ヒ酸塩、亜テルル酸塩、亜ヒ酸塩、およ びチオシアネートから成る群から選択される、請求の範囲第20項記載の方法。 36. 上記リガンドが、遊離電子対を有する硫黄原子、遊離電子対を有する 亜テルル酸塩原子、または遊離電子対を有する亜ヒ酸塩原子のいずれかを含み、 上記硫黄原子、上記亜テルル酸塩原子、または上記亜ヒ酸塩原子は芳香環または ニトリルに共役していない、請求の範囲第20項記載の方法。
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