JP2002510304A

JP2002510304A - 移植体拒絶反応を防ぐためのビタミンｄ化合物の使用

Info

Publication number: JP2002510304A
Application number: JP50287299A
Authority: JP
Inventors: エフ．デルーカ，ヘクター; テイー．カントーナ，マルゲリータ; エー．ヒユーレット，デブラ; ダブリユー．ソリンジヤー，ハンス; ハンパル−ウインター，ジーン; イー．ハイエス，コリーン
Original assignee: Wisconsin Alumni Research Foundation
Current assignee: Wisconsin Alumni Research Foundation
Priority date: 1997-06-06
Filing date: 1998-06-04
Publication date: 2002-04-02
Also published as: CA2292734A1; US6071897A; WO1998055127A1; EP0998290B1; EP0998290A1; DE69826285T2; DK0998290T3; DE69826285D1; AU7817298A; ES2229502T3

Abstract

(57)【要約】移植体拒絶反応を防ぐために有効なビタミンＤ化合物の所定用量を投与することを含む、移植レシピエントにおける移植体拒絶反応を緩和する方法が開示されている。好ましくは、レシピエントの日和見感染症に対する感受性は危うくされない。また好ましくは、レシピエントに骨の脱ミネラル化が生じない。

Description

【発明の詳細な説明】移植体拒絶反応を防ぐためのビタミンＤ化合物の使用関連出願の相互参照該当せず。連邦政府により援助された研究又は開発に関する陳述該当せず。発明の背景１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃と類似体ビタミンＤの１α‐ヒドロキシル化代謝産物―最も重要なものとして１α，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₃および１α，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₂―は、動物およびヒトにおけるカルシウムホメオスタシスの極めて強力な調節因子として知られている。最近になって、細胞分化におけるそれらの作用も確認された。その結果として、これらの代謝産物の数多くの構造的類似体、すなわち異なる側鎖構造、異なるヒドロキシル化パターン、あるいは異なる立体化学を持った化合物などが調製され、検討されてきた。そのような類似体の重要な例は、１α‐ ヒドロキシビタミンＤ₃、１α‐ヒドロキシビタミンＤ₂、１α，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₃の種々の側鎖フッ素化誘導体、ならびに側鎖相同類似体である。これらの既知の化合物のいくつかは、インビボ（ｉｎｖｉｖｏ）あるいはインビトロ（ｉｎｖｉｔｒｏ）で極めて強力な活性を示し、有益な活性プロフィールを有していて、そのため、腎性骨形成異常、ビタミンＤ抵抗性くる病、骨粗しょう症、乾癬、多発性硬化症、およびある種の悪性疾患のような様々な疾患の治療において使用されているかもしくは使用が試みられてきた。免疫調節因子としての１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃ ビタミンＤが免疫を変調させると考えられることについての最初の指摘は、末梢血単核細胞および活性化Ｔリンパ球が１，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₃受容体を持つという発見であった(マノラガス、Ｓ．Ｃ．ら、Ｍｏｌ．ａｎｄＣｅｌｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎ．４３：１１３‐１２２，１９８５における検討)。多くの研究にもかかわらず、１，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₃の免疫調節作用は大部分がはっきりしないままであり、しばしば論議の対象となっている(マノラガス、Ｓ．Ｃ．ら、前出、１９８５；リグビー、Ｗ．Ｆ．Ｃ.，Ｔｏｄａｙ９：５４‐５７，１９８８；およびレミール、Ｊ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｎｕｔｒ．１２４：１７０４Ｓ‐１７０８Ｓ，１９９５)。ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）への１，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₃の作用はインビトロで広汎に検討されてきた。これらのインビトロ実験は、このホルモンが、遺伝子転写のレベルで（アルロイ、Ｉ.，ら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１５：５７８９‐５７９９，１９９５）ＩＬ‐２産生を減ずることによって（レミール、Ｊ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３４：３０３２，１９８５；アイホ、Ｓ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔ．１１：３３１‐３３６，１９８５；マノラガス、Ｓ．Ｃ.，ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔ．６３：３９４，１９８６）ＰＢＭＣのマイトジェン刺激性増殖を阻害する（レミール、Ｊ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７４：６５７‐６６１，１９８４；リグビー、Ｗ．Ｆ．Ｃ.，ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７４：１４５１‐１４５５，１９８４）ことを示した。これに対し、バーラら（バーラ、Ａ．Ｋ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：１７４８‐５４，１９８４）は、当該ホルモンは抗原刺激性のマウス脾および胸腺細胞増殖は阻害するが、これらの細胞のマイトジェン刺激性増殖は阻害しないと報告した。ラセーら（ラセー、Ｄ．Ｌ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３８：１６８０‐１６８６，１９８７）は、このホルモンが実際にクローン化したマウスＴ細胞のマイトジェン誘導性増殖を刺激したと報告した。インビボでのＴリンパ球分化へのこのホルモンの作用および機能を直接取り上げた試験というのはない。インビトロでのＴリンパ球ＩＦＮ‐γ合成に関しても一致しない結果が報告されている。リグビーら（リグビー、Ｗ．Ｆ．Ｃ．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７９：１６５９‐１６６４，１９８７）およびレイチェルら（レイチェル、Ｈ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８４：３３８７‐３３８９，１９８７）は、１，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₃がマイトジェン刺激性ＰＢＭＣにおけるＩＦＮ‐γの合成を低下させることを示した。しかし、ミュラーら（ミュラー、Ｋ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔ．３５：１７７‐１８２，１９９３）は、このホルモンがヒトＴ細胞系におけるＩＦＮ‐γの合成には効果を有さないと報告した。当該ホルモンは、細胞毒性Ｔリンパ球の発生発育を阻害したが、細胞毒性機能は阻害しなかった(メリノ、Ｆ．ら、Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１８：３２８‐３３６，１９８９)。インビトロでの１，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₃の単球／マクロファージ細胞への作用については論争がある。１，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₃は、骨髄性白血病細胞のマクロファージ表現型への分化を促進した(マノラガス、Ｓ．Ｃ．ら、前出、１９８５)。またＭ‐ＣＳＦ、ＴＮＦ‐αおよびプロスタグランジンＥ２の単球／マクロファージ産生も増大させたが、ＩＬ‐１２合成は低下させた(レミール、Ｊ．Ｍ．ら、ＦＡＳＥＢＪ．８：Ａ７４５(抄録)、１９９４)。このホルモンはＴ細胞増殖についてのマクロファージ共同刺激機能を低下させた(リクビー、Ｗ．Ｆ．Ｃ．とＭ．Ｇ．ワーフ、ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｈｅｕｍ．３５：１１０‐１１９，１９９２)。インビトロでの１，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₃のＩＬ‐１合成への効果に関しても一致しない結果が報告されている。このホルモンはいくつかの報告ではＩＬ‐１合成を低下させ(アイホ、Ｓ．ら、前出、１９８５；ツォウカス、Ｃ．Ｓ．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．６９：１２７‐１３３，１９８９)、また別のいくつかの報告ではＩＬ‐１合成を上昇させた(アメント、Ｅ．Ｐ.，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７３：７３１‐７３９，１９８７；バーラ、Ａ．Ｋ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．７２：６１‐６４，１９９１；フェイガン、Ｄ．Ｌ．ら、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．５：１７９‐１８６，１９９１)。同様に、一部の研究者は１，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₃がインビトロでクラスＩＩタンパク質の発現を増強すると報告した（モレル、Ｐ．Ａ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３６：２１８１‐２１８６，１９８６）が、別の研究者はクラスＩＩタンパク質の発現を低下させると報告している(アメント、Ｅ．Ｐ．前出、１９８７；キャリントン、Ｍ．Ｎ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：４０１３‐４０１８，１９８８；リグビー、Ｗ．Ｆ．Ｃ．ら、Ｂｌｏｏｄ７６：１８９‐１９７，１９９０)。これらの所見を考え合わせても、１，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₃がどのようにしてマクロファージ機能を変化させるのかについて明瞭な一貫した見解は得られない。インビボでの単球／マクロファージ分化への当該ホルモンの作用および機能を直接取り上げた研究はない。Ｂリンパ球への１，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₃の作用についても論争がある(リグビー、Ｗ．Ｆ．Ｃ.、前出、１９８８における検討)。レミールら（レミール、Ｊ．Ｍ．ら、前出、１９８４）は、当該ホルモンがヒト末梢血単核細胞によるマイトジェン刺激性のＩｇＧおよびＩｇＭ合成を阻害することを報告した。インビトロでのマイトジェン刺激性Ｂ細胞増殖および抗体合成への１，２５‐ ジヒドロキシビタミンＤ₃の抑制作用と増強作用が示されている。インビホでは、いくつかの研究において１，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₃が抗体合成を増強することが報告されており(アベ、Ｊ．ら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ１２４：２６４５‐２６４７，１９８９；ロス、Ｔ．Ｋ．ら、ＶｉｔａｍｉｎｓＨｏｒｍｏｎｅｓ４９：２８１‐３２６，１９９４；デインズ、Ｒ．Ａ．ら、Ｉｎｆｅｃ．Ｉｍｍｕｎ．６４：１１００‐１１０９，１９９６)、また他の研究では抗体合成を阻害することが報告されている(レミール、Ｊ．Ｍ．ら、前出、１９９５)。レミールら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ５４：７６２‐７６３，１９９２は、ビタミンＤ₃類似体、１，２５‐ジヒドロキシ‐δ１６‐コレカルシフェロールによってマウスの心臓同種異系移植片の生存期間が７日間から１６日間に延長したと述べている。この類似体の有効用量は重篤な過カルシウム血症を引き起こした。他の類似体もある程度の延長を示したが、やはり過カルシウム血症を生じさせた。ジョンソンら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．Ｐｒｏｃ．２８：８８８‐８９１，１９９６は、ウィスター／キョートラット心臓同種異系移植片においてビタミンＤ類似体、ＭＣ１２８８の投与により生存期間が３日間から１４日間に延長したと述べた。これらの研究者たちは、この類似体はサイクロスポリンと組み合わせると最も良好に機能すると結論した。この類似体は生存期間を８‐１１日間延長させたが、やはり過カルシウム血症を誘発した。他の研究者により、１，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₃（１，２５（ＯＨ）₂ Ｄ₃）による処置が、実験的に移植した心臓移植片の生存期間を延長させる能力が試験されている。レミールら、前出、１９９２はマウス心臓移植片モデルを使用して、１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃が移植片の生存期間を延長しないことを示した。総説の中で、ブイヨン（ブイヨンら、ＥｎｄｏｃｒｉｎｅＲｅｖｉｅｗ１６［２］２００‐２５７，１９９５）は、心臓移植片が１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃処置によって短期間延長された、ラットでの１つの実験を引用している(対照６日間に対して処置１０日間)。この最小限の移植片生存延長のために必要な１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃の用量は、腹腔内投与で５００ｎｇ／ｋｇ／日であった。これらの実験からの全体的結論は、修飾されていない１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃単独では移植片の生存期間を延長しないというものであった。発明の簡単な要約本発明は、異種移植片の受容を誘導するために有効な所定量のビタミンＤ化合物、好ましくは１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃あるいはその類似体を投与することにより、移植レシピエントにおける移植体拒絶反応を緩和する方法である。かかる方法は、患者を選択し、移植した器官（臓器）の拒絶反応を緩和するように十分な量のビタミンＤ類似体を患者に投与することを含む。本発明の特に有利な態様では、日和見感染への感受性（罹病性）が上昇せず、骨の脱ミネラル化（無機質脱落）が予防される。本方法の特に有利な態様では、投与される化合物は１α，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₃(１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃)、１９‐ノル‐１，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₂(１９‐ノル‐１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃)、２４‐ホモ‐２２‐デヒドロ‐２２Ｅ‐１α，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₃(２４‐ホモ‐２２‐デヒドロ‐２２Ｅ‐１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃)、１，２５‐ジヒドロキシ‐２４（Ｅ）‐デヒドロ‐２４‐ホモビタミンＤ₃(１，２５‐（ＯＨ）２‐２４‐ホモＤ₃) 、あるいは１９‐ノル‐１，２５‐ジヒドロキシ‐２１‐エピ‐ビタミンＤ₃（１９‐ノル‐１，２５‐（ＯＨ）２‐２１‐エピ‐Ｄ₃）のいずれかである。本発明の最も好ましい態様では、当該化合物は１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃である。本発明のためのビタミンＤ化合物の好ましい用量は、患者が認容し、重篤な過カルシウム血症を発現しない最大量である。ビタミンＤ化合物が１α‐ヒドロキシ化合物でない場合には、ビタミンＤ化合物の特に有利な一日用量は１６０ポンドの患者について１０．０‐１００μｇ／日である。ビタミンＤ化合物が１α‐ヒドロキシ化合物である場合には、好ましい用量は１６０ポンドの患者について０．２５‐５０ μｇ／日である。患者のカルシウム摂取量が８００ｍｇ／日を上回る場合には、１６０ポンドの患者について０．７５μｇ／日を越える１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃の用量は好ましくない。患者が低カルシウム食に付されている場合および／あるいは投与量を夜遅くに服用する場合には、１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃のより高い用量が可能であり、好ましいであろう。本発明のこの実施態様では、投与される１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃の量は１６０ボンドの患者について１．５μｇ／日までが可能であろう。好ましい用量は、１６０ポンドの患者について０．５‐１．０μｇ／日であろう。当該方法が移植体の拒絶反応を緩和するというのが本発明の利点の１つである。当該方法が移植体の生存率を上昇させることが本発明の別の利点である。当該方法が、日和見感染症の危険を増さずに移植した移植片の生存率を適度にすることが本発明の別の利点である。当該方法が、日和見感染症の危険を増さず、また患者の骨の脱ミネラル化を伴わずに移植体の生存率を上昇させることが本発明の別の利点である。当該方法が、患者の骨の脱ミネラル化を生じさせずに移植体の拒絶反応を緩和することが本発明の別の利点である。本発明の他の利点および特徴は、本明細書、請求の範囲および図面の検討後明らかになるであろう。図面のいくつかの図の簡単な説明図１は、１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃で処置したレシピエントにおける同種同系移植片、同種異系移植片対照、および同種異系移植片についての手術成功率を図示したものである。図２は、移植レシピエントの１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃およびサイクロスポリン処置後の移植成功率を図示したものである。図３は、１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃で処置したレシピエントにおけるルイスからルイスの同種同系クラフ、ＡＣＩからルイスの同種異系移植片、およびＡＣＩからルイスの同種異系移植片についての成功率を図示したものである。図４は、全身性カンジダアルビカンス（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ）感染後の死亡率を図示したものである。図５は、ＨＳＶ眼感染後の死亡率を図示したものである。発明の詳細な説明本発明は、拒絶症状を軽減するために有効な所定量のビタミンＤ化合物、好ましくは１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃あるいはその類似体を投与することにより、ヒト移植患者を治療する方法である。かかる方法は、移植患者を選択し、拒絶症状を減じるあるいは緩和するために十分な量のビタミンＤ類似体を当該患者に投与することを含む。「緩和する」とは、移植体生存率が投与した化合物によって有意に上昇することを意味する。我々の結果は、１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃による治療によって、未処置のレシピエントの場合と比較して移植体生存率を上昇できることを示している。しかし、免疫抑制剤は、通常、単独療法としては投与されない。これに対して、ほとんどの移植施設は三重あるいは四重の維持療法を使用する。従って、１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃（あるいは類似体）は代表的には、成分の１つを低減するあるいは削除する（おそらくプレドニゾン）維持療法の一部として投与されるであろう。効果を調べるためには、最初の６カ月間に生検で明らかにされた急性拒絶エピソードの数ならびに毒性の減少するあるいは増加しないことについて、１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃治療を標準療法と比較する。好ましくは、日和見感染症の低下または全くないことおよび骨損失の軽減を伴った急性拒絶反応の減少に関して患者をモニターする。生存率の「有意の上昇」とは、器官の生存率が少なくとも１０％、好ましくは２０％、最も好ましくは３０％高くなることが比較で示されることを意味する。我々は、１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃が単なる免疫抑制剤として働くのではなく、組織適合性の異なる移植体の耐性のための手段を提供しながら、感染に対して適切な抵抗性を与える免疫反応の選択的調節因子として作用することを発見した。さらに、移植体の生存を可能にするために使用される他の薬剤と異なって、１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃の類似体は骨の脱ミネラル化を生じさせず、その代わりに移植レシピエントの骨を改善することを発見した。本発明の特に有利な態様では、投与される化合物は１α，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₃(１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃)、１９‐ノル‐１，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₂(１９‐ノル‐１，２５ ‐（ＯＨ）₂Ｄ₃)、２４‐ホモ‐２２‐デヒドロ‐２２Ｅ‐１α，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₃(２４‐ホモ‐２２‐デヒドロ‐２２Ｅ‐１，２５‐（ＯＨ）₂ Ｄ₃)、１，２５‐ジヒドロキシ‐２４（Ｅ）‐デヒドロ‐２４‐ホモビタミンＤ₃(１，２５‐（ＯＨ）₂‐２４‐ホモＤ₃)、あるいは１９‐ノル‐１，２５‐ ジヒドロキシ‐２１‐エピ‐ビタミンＤ₃（１９‐ノル‐１，２５‐（ＯＨ）₂‐ ２１‐エピ‐Ｄ₃）のいずれかである。本発明の別の態様では、ビタミンＤ化合物は次の式を持つ。｛式中、Ｘ¹とＸ²は各々水素およびアシルから成る群から選択される；Ｙ¹とＹ² はＨであってもよく、また１つがＯ＝アリールまたはＯ＝アルキルでありかつβ もしくはα立体配置を持ってもよい；Ｚ¹＝Ｚ²＝Ｈ、またはＺ¹とＺ²は一緒にＣＨ₂である；Ｒはアルキル、ヒドロキシアルキルまたはフルオロアルキル基であるか、またはＲは次の側鎖を表わしてもよい： (式中、（ａ）はＳまたはＲ立体配置を持ってよく、Ｒ¹は水素、ヒドロキシまたはＯ‐アシルである、Ｒ²とＲ³は各々アルキル、ヒドロキシアルキルおよびフルオロアルキルから成る詳から選択されるか、または一緒になって（ＣＨ₂）_m基を表し、ｍは２‐５の値を持つ整数である、Ｒ⁴は水素、ヒドロキシ、フッ素、Ｏ ‐アシル、アルキル、ヒドロキシアルキルおよびフルオロアルキルから成る群から選択されるか、Ｒ⁵がヒドロキシルまたはフルオロである場合にはＲ⁴は水素またはアルキルでなければならない、Ｒ⁵は水素、ヒドロキシ、フッ素、アルキル、ヒドロキシアルキルおよびフルオロアルキルから成る群から選択される、またはＲ⁴とＲ⁵が一緒になって二重結合酸素を表す、Ｒ⁶とＲ⁷は一緒になって炭素‐ 炭素二重結合を形成する、Ｒ⁸はＨまたはＣＨ₃であってよく、そしてｎは１‐５の値を持つ整数であり、側鎖の２０、２２または２３位のいずれか１つの炭素がＯ、ＳまたはＮ原子で置換されていてもよい。)。｝当該化合物の特に好ましい態様では、Ｒ²とＲ³はアルキル、ヒドロキシアルキルおよびフルオロアルキルから成る群から選択される。候補ビタミンＤ化合物を本発明のための適合性に関して評価することができる。好ましくは、まず最初に候補化合物を以下の例の中で１，２５‐ （ＯＨ）₂Ｄ₃に関して述べるような初期マウスモデルスクリーニング手順に供する。合格した化合物は、好ましくは１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃に関して例の中で示す程度に、マウスにおいて移植体拒絶症状を軽減するであろう。しかし、合格化合物は通常、移植体の生存率を少なくとも１０％、好ましくは２０％上昇させる化合物と表される。好ましくは、当該化合物はまた、サイクロスポリンＡで治療した移植レシピエントと比較して、日和見感染症と骨の脱ミネラル化のとちらにおいても有意の低下を示すはずである。以下の例は、日和見感染症と骨脱ミネラル化の測定についての実験モデルを述べるものである。これより、これらの化合物はヒト患者において成功を収めることが予想される。以下の例は、ビタミンＤ化合物で処置した動物が、対照動物とは異なり、もはや日和見感染症に対して感受性でないことを実証している。以下の例はまた、ビタミンＤ類似体で処置した動物が骨灰分の総量およびパーセンテージの低下を示さないことを実証している。実際に、好ましくは、ビタミンＤ類似体による処置は骨灰分の総量およびパーセンテージを上昇させる。本発明のためのビタミンＤ化合物の好ましい用量は、患者が認容し、重篤な過カルシウム血症を発現しない最大量である。ビタミンＤ化合物が１α‐ヒドロキシ化合物でない場合には、ビタミンＤ化合物の特に有利な一日用量は、１６０ポンドの患者について１０．０‐１００μｇ／日である。ビタミンＤ化合物が１α‐ヒドロキシ化合物である場合には、好ましい用量は１６０ポンドの患者について０．５‐５０μｇ／日である。患者が通常のカルシウム摂取を行っている場合には、１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃のような１α‐ヒドロキシ化合物の用量が１６０ポンドの患者について０．７５μｇ／日を越えることは好ましくない。患者が低カルシウム食に付されている場合および／あるいは投与量を夜遅くに服用する場合には、１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃のより高い用量が可能であり、好ましいであろう。本発明のこの実施態様では、投与する１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃の量は１６０ボンドの患者について１．５μｇ／日までが可能であろう。好ましい用量は、１６０ポンドの患者について０．５‐１．５μｇ／日であろう。１，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₃（１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃）は現在、骨粗しょう症あるいは腎性骨形成異常の治療のために、通常朝と晩に２クォーターマイクログラムカプセルとして、１６０ポンドの患者について０．５μｇ／日のレベルで投与されている。食事性カルシウムが約８００ｍｇ／日あるいはさらに１，０００ｍｇ／日にのぼる国では、より高用量の１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃は使用できない。かかる用量は、高カルシウム血症とその結果生じる腎臓の悪化や、心臓、肺、大動脈その他の軟組織の石灰化の危険性を伴う尿中カルシウムの上昇および血漿カルシウム上昇を生じさせるからである。それ故、１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃の好ましい最大用量は０．５μｇ／日であると思われる。しかし、食事性カルシウムが約６００ｍｇ／日である環境下では、より高い用量が使用できる。他のより活性の低い１α‐ヒドロキシビタミンＤ化合物は、より高用量で安全に投与することができる。たとえば、日本では１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃による骨粗しょう症の治療は０．５‐０．７５μｇ／日である。イタリアのようなカルシウム摂取量の低い他の国でも同様であり、イタリアではカニッギア博士により１ｍｇ／日までの１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃が成功裡に使用されている(カニッギア、Ａ．ら、Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ３９：４３‐４９，１９９０)。我々は、移植の成功率を高めるためにはより高用量の１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃ が最も有用であろうと考えられる。カルシウム摂取量は、単に食事から乳製品とカルシウム補助食品を除外することによって約４００‐５００ｍｇ／日に抑えることができる。さらに、１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃は夜就寝前、すなわち午後１０時に投与することかでき、この化合物が循環中に現われるタイムラグのためにカルシウム吸収は最低となり、より高い用量の１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃が可能となる。好ましい治療方式は次の通りである：移植処置の前に、５００ｍｇの食事性カルシウムの摂取を維持しながら、すべてのカルシウム補助食品を除外し、乳製品の消費を抑えることによって患者のカルシウム摂取量を約５００ｍｇ／日まで低減する。少なくとも移植処置の５日前にビタミンＤ治療を開始しなければならない。これらの条件下で１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃を午後１０時に投与すれば、１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃の用量を１μｇあるいはおそらく２．０μｇ／日まで安全に増やすことができる。１α‐ヒドロキシ化合物についての好ましい治療方式は、規則正しい食事環境下での０．５‐０．７５μｇ／日の前記化合物の投与である。好ましい方法としては、午後１０時あるいは就寝前に０．７５‐１μｇ／日を投与する。最も好ましい方法は、食事性カルシウム摂取量を４００‐５００μｇ／日に抑え、且つ０．７５‐１．５μｇ／日を午後１０時に投与するというものである。非１α‐ヒドロキシ化合物についての好ましい治療方式は、やはり規則正しい食事環境下での投与であろう。この場合、治療用量は１６０ポンドの患者について１００μｇ／日まで増やすことができる。「移植体拒絶反応」とは、器官の機能喪失を特徴とする疾病症状を意味する。そこで、腎臓の拒絶反応は血中クレアチニンレベルの上昇と生検によって示されるであろう。心臓の拒絶反応は心内膜心筋の生検によって示され、一方、膵臓拒絶反応は生検と血糖上昇によって判定される。肝臓の拒絶反応は、肝由来のトランスアミナーゼの測定、血中ビリルビンレベルおよび生検によって示される。腸の拒絶反応は生検によって判定され、肺拒絶反応は血液酸素付加の測定によって判断される。本発明は、すべての臓器移植、好ましくは心臓、肝臓、腎臓、膵臓、肺および腸の移植に適する。皮膚移植は、その独特の免疫学的問題のために、本発明によって規定される臓器移植には相当しない。例Ａ．移植後の日和見感染症の低減１．概要我々は、１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃とサイクロスポリンＡによる治療を、心臓移植拒絶反応を防ぐ能力に関して比較した。サイクロスポリンＡは現在使用されている主要な抗拒絶反応薬であることから、新規な移植薬剤の評価のための比較標準として選択される(ジュバク、Ｂ．Ｍ．とＣ．Ｄ．コルト「腎移植ハンドブック」、『腎移植の感染合併症とその管理』、ダノヴィッチ、Ｇ．Ｍ．編集、ｐ．１８７‐２１３)。さらに我々は、同用量の１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃とサイクロスボリンＡがカンジダアルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ）と単純疱疹ウイルス（ＨＳＶ）感染に抵抗する宿主の能力を低下させるかどうかを調べた。広汎な免疫抑制剤（サイクロスポリンＡなど）の投与下にある移植患者はしばしば菌類やウイルスによる感染症を発現するので、Ｃ．アルビカンスとＨＳＶを宿主の抵抗性を測定するための病原体として使用した。Ｃ．アルビカンス感染は免疫が抑制された個体における、より一般的な感染症の１つである(ジュパク、Ｂ．Ｍ．とＣ．Ｄ．コルト、前出)。同様に、ヘルペスウイルス（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｊｄａｅ）科のウイルスのメンバーは、免疫抑制下にある個体の罹病率および死亡率の大きな部分を占める(ジュバク、Ｂ．Ｍ．とＣ．Ｄ．コルト、前出)。この科のウイルスのメンバーは、ＨＳＶ、サイトメカロウイルス（ＣＭＶ）およびエプスタイン‐バー（ＥＢ）ウイルスを含む。すべてのヒトへルペスウイルスが、しばしば臓器移植のための免疫抑制療法後に再活性化される(ホワイト、Ｄ．Ｏ．とＦ．Ｊ．フェナー、医学ウイルス学第３版、第１６章：４０１)。２．材料および方法動物。Ｂ１０．Ａ（４Ｒ）マウスの繁殖つがいをジャクソン・ラボラトリーズ (ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅs)(ＢａｒＨａｒｂｏｒ，ＭＥ)から購入し、バイオケミストリー・アニマル・ファシリティ(ＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙＡｎｉｍａｌＦａｃｉｌｉｔｙ)において飼育した。去勢／卵巣を切除した生後１２‐２４時間の新生児Ｂ１０．Ａ（４Ｒ）マウスを移植心臓ドナーとして使用した。オスのＣ５７ＢＬ／１０（同種異系移植片）マウス（スプラグ・ドーリー(ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅy)、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）およびオスのＢ１０．Ａ(４Ｒ)(同種同系移植片)マウスをレシピエントとして使用した。ドナーの系統は、１つのクラスＩ遺伝子座と２つのクラスＩＩ遺伝子座（Ｂ１０Ａ．(４Ｒ)‐Ｈ‐２Ｋ^kＡ_β ^kＡ_α ^k、Ｃ５７ＢＬ１０‐Ｈ‐２Ｋ^bＡ_β ^bＡ_α ^b）においてレシピエントと不適合である。処置。ビタミンＤを含まない実験食餌（ヤング、Ｓ．ら、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．３０３：９８‐１０６，１９９３）を作り、記述されているように（ヤング、Ｓ．ら、前出、１９９３）実験期間中２‐３日毎に取り換えた。９‐１０匹のレシピエントがら成る群を、実験食餌だけ、実験食餌とサイクロスポリンＡの腹腔内注入（２５ｍｇ／ｋｇ／日）あるいは５０ｎｇ／マウス／日の１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃を含む実験食餌で飼育した。給餌は移植あるいは感染の１週間前に開始した。サイクロスポリンＡの用量は他の研究者の報告に基づいた(ババニー、Ｇ．ら、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒａｐ．２４４：２５９，１９８７)。２．５ｍｇ／ｋｇ／日の用量は、我々の実験において移植片の生存を延長させるには低すぎた。２５ｍｇ／ｋｇ／日の用量は有効性を証明した。実験食餌は通常量のカルシウム（０．４７％）を含んだ。移植。ババニーらの方法を使用した(ババニー、Ｇ．ら、前出、１９８７)。レシピエントのマウスをエトミテート（２８ｍｇ／ｋｇ腹腔内）で麻酔した。ドナーの心臓を慎重に切除し、心房を取り除かずに２つに分けた。レシピエントの耳を７０％アルコールで洗浄し、２ｍｍのスリットを入れて窩をつくった。この窩にドナーの心臓を挿入し、その後過剰の液体と空気を注意深く取り除いた。１６ケージのプラスチック製血管カテーテルを使用して心臓の半分を耳窩に挿入した。移植体生存率の評価。拡大（３倍）顕微手術鏡を用いて、処置を知らされていない技術者が心臓移植片を毎日観察した。これらの観察に際してはマウスを麻酔しなかった。移植片を誤ってスコアリングするのを避けるため、収縮活動の開始と停止を採点する際には特に注意を払った。連続４日間収縮が認められなければ、その後動物を犠牲剖検し、計量して、血消カルシウム分析のために採血した。データの解析。各詳のマウスの成功率を、群の総数に対する心臓移植片の収縮を生じたレシピエント総数の比率として表した。カンジダアルビカンス感染。５‐６匹のＣ５７ＢＬ１０オスマウスのグループに５×１０⁶のＣ．アルビカンスＢ３１１（Ａ型、エドワード・バリッシュ博士、ウィスコンシン大学、Ｍａｄｉｓｏｎ）を静脈内注射した。免疫抑制患者では、消化管からのＣ．アルビカンス播種後には全身性カンジダ症が起こる(クラウス、Ｗ．ら、Ｌａｎｃｅｔ１：５９８，１９８１)。全身性カンジダ症による死亡は、腎不全を導く圧倒的な腎感染症の結果である(カントルナ、Ｍ．Ｔ．とＥ．バリッシュ、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１６４：９３６、１９９１)。単純疱疹ウイルス（ＨＳＶ‐１）感染。メスのＢａｌｂ／ｃマウスを３％‐５％ハロタンの吸入によって麻酔した；角膜を２７ゲージの針で垂直に３回と水平に３回ひっかき、１×１０⁶プラーク形成単位／マウスを含むＨＳＶ‐１系統ＤＲＧ４Ａ１（カーティス・ブランディ博士、ウィスコンシン大学、Ｍａｄｉｓｏｎ）ウイルス懸濁液３．５μｌを眼に滴下した(キントナー、Ｒ．Ｌ．とＣ．Ｒ．ブラント、Ｃｕｒｒ．ＥｙｅＲｅｓ．１４：１４５，１９９４ )。滴を３０秒間放置して、眼を閉じた；過剰の媒質は綿棒で取り除いた。ウイルスは局所感染を生じさせ、免疫系によって食い止められなけれは、拡大してウイルス性脳炎を引き起こし死をまねく。３．結果図１は同種同系移植片と同種異系移植片についての成功率を表している。すべての移植片が手術から８日以内に収縮を開始した。すべての対照異系移植片が移植後１５日目までに拒絶反応を生じたのに対し、同系移植片は拒絶反応を引き起こさなかった。図１を参照すると、１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃処置は移植片の生存期間を有意に延長した。１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃で処置したマウスは移植後１８日目まで移植片を拒絶しなかった。１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃で処置したマウスの４０％が移植後３４日目まで、また２０％が移植後５０日目までまたはそれ以上移植片を生存させた。血清カルシウム値は両群とも正常範囲内であった(対照‐ ８．５±０．６ｍｇ％；１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃処置‐９．３±０．６ｍｇ％) 。図２は１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃あるいはサイクロスポリン処置後の移植体生存延長を示している。未処置対照レシピエント（●）は平均９．８日間移値片を保持し、生理食塩水対照は１１．６日間 (データは示していない)、２．５ｍｇ／ｋｇサイクロスポリン（データは示していない）は１１．３日間、そして５０ｎｇの１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃（○）は５２．２日間移植片を保持した。２５ｍｇ／ｋｇの高用量サイクロスポリン（■）は３４．０日間、２００ｎｇ用量の１９‐ノル‐１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₂（▽）は５８．６日間であった。重要な点として、１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃処置マウスの１２％と１９‐ノル‐１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₂処置マウスの２２％が移植後１００日以上移植片を保持したのに対し、すべてのサイクロスポリン処置マウスが５０日目までに拒絶反応を生じた。我々は、１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃および類似体は移植体拒絶反応を防ぎ、移植体を保持する上でサイクロスポリンよりも良好であると結論する。図４は全身性Ｃ．アルビカンス感染後の死亡率を図示している。Ｃ５７ＢＬ１０オスマウスは全身的にＣ.アルビカンスに感染した。これらは、上記の実験において移植レシピエントとして使用したのと同じマウスである。サイクロスポリン処置は、対照および１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃処置動物と比較して、これらのマウスのＣ．アルビカンス感染に対する感受性を上昇させた。サイクロスポリン処置動物の４０％が感染の９日後に死亡したのに対し、対照あるいは１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃処置マウスで死亡したものはなかった。感染の３週間後には、サイクロスポリン処置動物の２０％だけが生存していたのに対し、対照動物の８０％と１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃処置マウスの１００％が生存していた。我々は、１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃処置はＣ．アルビカンス感染に対するマウスの感受性に影響を及ぼさないと結論した。図５はＨＳＶ眼感染の播種後の死亡率を図示している。我々は、我々の協力者 (キントナー、Ｒ．Ｌ．とＣ．Ｒ．ブラント、前出、１９９４)が述べた通り厳密にＢａｌｂ／ｃメスマウスを使用した。サイクロスポリンＡ処置は、対照および１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃処置動物と比較して、これらのマウスのＨＳＶ感染に対する感受性を上昇させた。サイクロスポリン処置マウスの１００％が感染後１０日目までに死亡した。これに対し、このウイルス感染は、対照の３０％と１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃処置マウスの３６％だけに播種し、致死的であった。我々は、１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃処置はＨＳＶ感染に対するマウスの感受性に影響を及ぼさないと結論した。Ｂ．成熟ラットにおける移植体拒絶反応１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃が移植体生存期間を延長する能力をさらに調べるために、１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃が成熟ルイスラットに移植した成熟ＡＣＩ心臓の生存を延長させる能力を検討した。モデルは直接血管新生化モデルであり、これはさらにストリンジェントであると考えられる。ＡＣＩ→ルイスの組合せは高応答動物とみなされ、移植が最も難しいと考えられる。これら２系統のラットは遺伝的に無関係であり、それ故移植体は速やかに拒絶されるはずである。このモデルにおける移植体の生存には強力な「免疫抑制」薬剤が必要とされる。動物：近交系オスＡＣＩおよびルイスラットをドナーとレシピエントとして使用した。動物はすべてハーラン・スプラグ‐ドーリー社（ＨａｒｌａｎＳｐｒａｇｕｅ‐Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｃ.）(Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ)から購入した。ＮＴＨのガイドラインに従って動物を保持し、プロトコールはすべてウィスコンシン大学研究動物資源委員会の承認を受けた。操作方法：ドナーとレシピエントを抱水クロラール（０．５ｍｌ／１００ｇｍの７．５％溶液、ｉｐ）の単回注射で麻酔した。ヘパリン添加後、ドナーの心臓を低温ヘパリン化ＵＷ溶液で潅流し、切除した。以前に記述されているように（フジナ、Ｙ．ら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ５７：４１，１９９４）オノとリンゼイの方法に従ってドナーの心臓を移植した。処置：エタノールに溶かした１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃を、前述したようなビタミンＤを含まない実験食餌に加えた。レシピエントには移植の１週間前から１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃（５００ｎｇ／ラット／日）を含む実験食餌を与え、拒絶反応の時点までこの食餌を保持した。さらに術後最初の４日間、ラットに１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃（５００ｎｇ／ラット）を腹腔内注射した。レシピエントは拒絶反応の時点まで食餌で保持した。結果：図３は、移植手術についての成功率がルイスからルイスへの同系移植片（◆）では示した通り１００％であったことを示している。対照処置ルイスラット（○）は平均６．６日間移植片を保持した。１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃処置（●）は、移植片の生存期間を平均２２．６日間まで延長させた。我々は、１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃が遺伝的に無関係なレシピエントにおける成熟移植片生存期間を延長させると結論した。Ｃ．移植レシピエントにおける骨損失の評価１．概要我々の処置が骨損失を生じさせたかどうかを調べるため、すべての移植マウスから大腿骨を採集した。移植患者に施される多くの免疫抑制療法の深刻な副作用は、骨損失、骨形成不全および骨減少である(プルナー、Ｖ．Ａ．ら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ５９：１３９３，１９９５；ジュリアン、Ｂ．Ａ．ら、ＮｅｗＥｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２５：５４４，１９９１)。２．材料および方法動物。Ｂ１０．Ａ（４Ｒ）マウス繁殖つがいをジャクソン・ラボラトリーズ（ＢａｒＨａｒｂｏｒ，ＭＥ）から購入し、バイオケミストリー・アニマル・ファシリティにおいて飼育した。去勢／卵巣を切除した生後１２‐２４時間の新生児Ｂ１０．Ａ（４Ｒ）マウスを心臓移植片ドナーとして使用した。オスＣ５７ＢＬ／１０（同種異系移植片）マウス（スプラグ・ドーリー、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）およびオスＢ１０．Ａ（４Ｒ）(同種同系移植片)マウスをレシピエントとして使用した。ドナーの系統は、１つのクラスＩ遺伝子座と１つのクラスＩＩ遺伝子座（Ｂ１０Ａ．(４Ｒ)‐Ｈ‐２Ｋ^kＡ^k、Ｃ５７ＢＬ１０‐Ｈ‐２Ｋ^bＡ^b）においてレシピエントと不適合である。処置。ビタミンＤを含まない実験食餌（ヤング、Ｓ．ら、前出、１９９３）を作り、実験期間中２‐３日毎に取り換えた。９‐１０匹のレシピエントから成る群を、実験食餌だけで、実験食餌プラスサイクロスポリンＡの腹腔内注入（２５ｍｇ／ｋｇ／日）であるいは５０ｎｇ／マウス／日の１，２５‐（ＯＨ）₂Ｄ₃を与えられた実験食餌で飼育した。給餌は移植あるいは感染の１週間前に開始した。選択したサイクロスポリンＡの用量は他の研究者の報告に基づいた(ババニー、Ｇ．ら、前出、１９８７)。２．５ｍｇ／ｋｇ／日の用量は、我々の実験において移植片の生存を延長させるには低すぎた。実験食餌は通常量のカルシウム（０．６％）を含んだ。移植。ババニーらの方法を使用した(ババニー、Ｇ．ら、前出、１９８７)。レシピエントのマウスをエトミデート（２８ｍｇ／ｋｇ腹腔内）で麻酔した。ドナーの心臓を慎重に切除し、心房を取り除かずに２つに分けた。レシピエントの耳をアルコールで清浄にし、２ｍｍのスリットを入れて窩をつくった。この窩にドナーの心臓を挿入し、その後過剰の液体と空気を注意深く取り除いた。１６ケージのプラスチック製血管カテーテルを使用して心臓の半分を耳窩に挿入した。移植体生存率の評価。拡大（３倍）顕微手術鏡を用いて心臓移植片を毎日観察した(ブラインドで)。これらの観察に際してはマウスを麻酔しなかった。移植片を誤ってスコアリングするのを避けるため、収縮活動の開始と停止を採点する際には特に注意を払った。連続４日間収縮が認められなければ、その後動物を犠牲剖検し、計量して、血清カルシウム分析のために採血した。データの解析。各群のマウスの成功率を、群中の総数に対する心臓移植片収縮を生じたレシピエントの総数の比率として表した。骨灰分測定。すべてのマウスがドナーの心職に拒絶反応を示した後、ＣＯ₂窒息によって死亡させ、移植マウスから大腿骨を切除した。マウスは４‐８週間サイクロスポリンあるいは１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃によって処置された。大腿骨を切除し、付着組織を取り除いて、同定のためのタグを付け、１００％エタノールに２４時間沈浸した。サンプルが完全に沈液するように液体のレベルを定期的に調整した。その後大腿骨を取り出し、さらに２４時間クロロホルムに沈浸した。次に大腿骨をあらかじめ計量したるつぼに入れ、１００℃で１２時間またはそれ以上乾燥した。その後るつぼと大腿骨を乾燥器内で冷却し、計量して、マッフルファーネス中で２４時間、６００℃で灰化した。オーブンとサンプルを冷却した後、再び１００ ℃のオーブンに１２時間入れ、その後乾燥した。その後灰化した大腿骨を計量した。表１は我々の所見を記録したものである。低用量（２．５ｍｇ）のサイクロスポリンは総骨灰分のわずかな減少を生じさせた。移植片の生存延長に必要とされる高用量（２５ｍｇ）のサイクロスポリンは総骨灰分値を有意に低下させた。一方で、１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃処置は骨灰分を減少させなかっただけでなく、実際上骨灰分の総量とパーセンテージの両方を上昇させた。我々は、移植体拒絶反応を遅延させるサイクロスポリン処置（２５ｍｇ／ｋｇ）は骨損失を生じさせるが、移植体生存率を高める１，２５（ＯＨ）２Ｄ３処置（５０ｎｇ／日）は、実際、骨灰分の総量とパーセンテージを上昇させると結論する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者カントーナ，マルゲリータテイー. アメリカ合衆国 53706 ウイスコンシンミドルトンレイクビユーアベニユー 2013 (72)発明者ヒユーレット，デブラエー. アメリカ合衆国 53711 ウイスコンシンマデイソンオーチヤードドライヴ 546 (72)発明者ソリンジヤー，ハンスダブリユー. アメリカ合衆国 53703 ウイスコンシンマデイソンシヤーマンアベニユー 1202 (72)発明者ハンパル−ウインター，ジーンアメリカ合衆国 53719 ウイスコンシンマデイソン＃204 アントンドライブ 5158 (72)発明者ハイエス，コリーンイー. アメリカ合衆国 53705 ウイスコンシンマデイソンオイゲニアアベニユー 606

Claims

【特許請求の範囲】１．移植体拒絶反応を緩和するために有効なビタミンＤ化合物の所定用量を投与することを含む、移植レシピエントにおける移植体生存率を高める方法。２．移植体生存率が未処置レシピエントと比べて少なくとも１０％上昇する、請求項１に記載の方法。３．移植体生存率が未処置レシピエントと比べて少なくとも２０％上昇する、請求項２に記載の方法。４．移植体生存率が未処置レシピエントと比べて少なくとも３０％上昇する、請求項３に記載の方法。５．移植レシピエントが心臓の移植を受ける、請求項１に記載の方法。６．移植レシピエントが、心臓、肝臓、腎臓、膵臓、肺および腸から成る群から選択される器官の移植を受ける、請求項１に記載の方法。７．ビタミンＤ化合物が１α‐ヒドロキシ化合物である、請求項１に記載の方法。８．化合物が１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃である、請求項７に記載の方法。９．投与されるビタミンＤ類似体の量が１６０ポンドの患者について１日当り０．５‐１００μｇである、請求項７に記載の方法。１０．投与されるビタミンＤ類似体の量が１６０ポンドの患者について１日当り０．５‐０．７５μｇである、請求項７に記載の方法。１１．投与されるビタミンＤ類似体の量が１６０ポンドの個人について１日当り０．５‐１．５μｇである、請求項７に記載の方法。１２．移植体拒絶反応を緩和するために有効なビタミンＤ化合物の所定用量を投与することを含み、レシピエントの日和見感染に対する感受性が危うくされない、移植レシピエントにおける移植体拒絶反応を緩和する方法。１３．感染がＣ．アルビカンスおよびＨＳＶから成る群から選択される、請求項１２に記載の方法。１４．ビタミンＤ化合物が１α‐ヒドロキシ化合物である、請求項１２に記載の方法。１５．化合物が１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃である、請求項１４に記載の方法。１６．投与されるビタミンＤ類似体の量が１６０ポンドの患者について１日当り１０‐１００μｇである、請求項１４に記載の方法。１７．投与されるビタミンＤ類似体の量が１６０ポンドの患者について１日当り０．５‐０．７５μｇである、請求項１４に記載の方法。１８．投与されるビタミンＤ類似体の量が１６０ボンドの個人について１日当り０．５‐１．５μｇである、請求項１４に記載の方法。１９．移植体拒絶反応を減ずるために有効な次の化合物：｛式中、Ｘ¹とＸ²は各々水素およびアシルから成る群から選択される；Ｙ¹とＹ²はＨであってもよく、または１つがＯ＝アリールもしくはＯ＝アルキルでありかつβもしくはα立体配置を持ってもよい；Ｚ¹＝Ｚ²＝Ｈ、またはＺ¹ とＺ²は一緒にＣＨ₂である；及びＲはアルキル、ヒドロキシアルキルもしくはフルオロアルキル基であるが、またはＲは次の側鎖を表わしてもよい： (式中、（ａ）はＳまたはＲ立体配置を持つ、Ｒ¹は水素、ヒドロキシまたはＯ‐ アシルである、Ｒ²とＲ³は各々アルキル、ヒドロキシアルキルおよびフルオロアルキルから成る群から選択されるか、または一緒になって‐（ＣＨ₂）_m‐基を表し、ｍは２‐５の値を持つ整数である、Ｒ⁴は水素、ヒドロキシ、フッ素、Ｏ‐アシル、アルキル、ヒドロキシアルキルおよびフルオロアルキルから成る群から選択されるが、Ｒ⁵がヒドロキシルまたはフルオロである場合にはＲ⁴は水素またはアルキルでなければならない、Ｒ⁵ は水素、ヒドロキシ、フッ素、アルキル、ヒドロキシアルキルおよびフルオロアルキルから成る群から選択されるが、またはＲ⁴とＲ⁵が一緒になって二重結合酸素を表す、Ｒ⁶とＲ⁷は一緒になって炭素‐炭素二重結合を形成する、Ｒ⁸はＨまたはＣＨ₃であってもよい、そしてｎは１‐５の値を持つ整数であり、側鎖の２０、２２または２３位のいずれか１つの炭素がＯ、ＳまたはＮ原子で置換されていてもよい。)。｝の所定量を移植レシピエントに投与する段階を含み、ここで、レシピエントの日和見感染に対する感受性が危うくされない、レシピエントの日和見感染に対する感受性が危うくされない、移植レシピエントの移植体拒絶反応を緩和する方法。２０．感染がＣ．アルビカンスとＨＳＶである、請求項１９に記載の方法。２１．化合物が、１，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₃、１９‐ノル‐１，２５ ‐ジヒドロキシビタミンＤ₂、１９‐ノル‐２１‐エピ‐１，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₃、１，２５‐ジヒドロキシ‐２４‐ホモ‐２２‐デヒドロ‐２２Ｅ‐ビタミンＤ₃、および１９‐ノル‐１，２５‐ジヒドロキシ‐２４‐ホモ‐ ２２‐デヒドロ‐２２Ｅ‐ビタミンＤ₃の群から選択される、請求項１９に記載の方法。２２．投与される化合物の量が１６０ポンドの患者について１日当り０．５‐５０μｇである、請求項１９に記載の方法。２３．投与される化合物の量が１６０ポンドの患者について１日当り０．５‐０．７５μｇである、請求項１９に記載の方法。２４．投与される化合物の量が１６０ポンドの患者について１日当り０．５‐１．５μｇである、請求項１９に記載の方法。２５．当該用量を経口で投与する、請求項１９に記載の方法。２６．患者が低カルシウム食に付されている、請求項１９に記載の方法。２７．投与を夜に行う、請求項１９に記載の方法。２８．当該用量を経口で投与し、患者が低カルシウム食に付されていて、当該用量が０．５‐３．０μｇの１，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₃／日もしくはその類似体の当量である、請求項１９に記載の方法。２９．移植体拒絶反応を緩和するのに有効なビタミンＤ化合物の所定用量を投与することを含み、レシピエントに骨の脱ミネラル化が生じない、移植レシピエントにおける移植体拒絶反応を緩和する方法。３０．ビタミンＤ化合物による処置後にレシピエントの総骨質量が増加する、請求項２９に記載の方法。３１．ビタミンＤ化合物が１α‐ヒドロキシ化合物である、請求項２９に記載の方法。３２．化合物が１，２５（ＯＨ）₂Ｄ₃である、請求項３１に記載の方法。３３．投与されるビタミンＤ類似体の量が１６０ポンドの患者について１日当り０．５‐５０μｇである、請求項３２に記載の方法。３４．投与されるビタミンＤ類似体の量が１６０ポンドの患者について１日当り０．５‐０．７５μｇである、請求項３２に記載の方法。３５．投与されるビタミンＤ類似体の量が１６０ポンドの個人について１日当り０．５‐１．５μｇである、請求項３２に記載の方法。３６．移植体拒絶反応を減ずるために有効な次の化合物：｛式中、Ｘ¹とＸ²は各々水素およびアシルから成る群から選択される；Ｙ¹とＹ²はＨであってもよく、または１つがＯ＝アリールもしくはＯ＝アルキルでありかつβもしくはα立体配置を持ってもよい；Ｚ¹＝Ｚ²＝Ｈ、またはＺ¹ とＺ²は一緒にＣＨ₂である；及びＲはアルキル、ヒドロキシアルキルもしくはフルオロアルキル基であるが、またはＲは次の側鎖を表わしてもよい：（式中、（ａ）はＳまたはＲ立体配置を持つ、Ｒ¹は水素、ヒドロキシまたはＯ ‐アシルである、Ｒ²とＲ³は各々アルキル、ヒドロキシアルキルおよびフルオロアルキルから成る群から選択されるが、または一緒になって‐（ＣＨ₂）_m‐基を表し、ｍは２‐５の値を持つ整数である、Ｒ⁴は水素、ヒドロキシ、フッ素、Ｏ ‐アシル、アルキル、ヒドロキシアルキルおよびフルオロアルキルから成る群から選択されるが、Ｒ⁵がヒドロキシルまたはフルオロである場合にはＲ⁴は水素またはアルキルでなければならない、Ｒ⁵は水素、ヒドロキシ、フッ素、アルキル、ヒドロキシアルキルおよびフルオロアルキルから成る群から選択されるが、またはＲ⁴とＲ⁵が一緒になって二重結合酸素を表す、Ｒ⁶とＲ⁷は一緒になって炭素 ‐炭素二重結合を形成する、Ｒ⁸はＨまたはＣＨ₃であってもよい、そしてｎは１ ‐５の値を持つ整数であり、側鎖の２０、２２または２３位のいずれか１つの炭素がＯ、ＳまたはＮ原子で置換されていてもよい。)。｝の所定量を移植レシピエントに投与する段階を含み、ここで、移植後もレシピエントの総骨質量は減少しない、移植レシピエントの移植体拒絶反応を緩和する方法。３７．レシピエントの骨質量が増加する、請求項３６に記載の方法。３８．化合物が、１，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₃、１９‐ノル‐１，２５ ‐ジヒドロキシビタミンＤ₂、１９‐ノル‐２１‐エピ‐１，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₃、１，２５‐ジヒドロキシ‐２４‐ホモ‐２２‐デヒドロ‐２２Ｅ‐ビタミンＤ₃、および１９‐ノル‐１，２５‐ジヒドロキシ‐２４‐ホモ‐ ２２‐デヒドロ‐２２Ｅ‐ビタミンＤ₃の群から選択される、請求項３６に記載の方法。３９．投与される化合物の量が１６０ポンドの患者について１日当り０．５‐１０μｇである、請求項３６に記載の方法。４０．投与される化合物の量が１６０ポンドの患者について１日当り０．５‐０．７５μｇである、請求項３６に記載の方法。４１．投与される化合物の量が１６０ポンドの患者について１日当り０．５‐１．５μｇである、請求項３６に記載の方法。４２．当該用量を経口で投与する、請求項３６に記載の方法。４３．患者が低カルシウム食に付されている、請求項３６に記載の方法。４４．投与を夜に行う、請求項３６に記載の方法。４５．当該用量を経口で投与し、患者が低カルシウム食に付されていって、当該用量が０．５‐３．０μｇの１，２５‐ジヒドロキシビタミンＤ₃／日もしくはその類似体の当量である、請求項３６に記載の方法。