JP2002504678A - 表面分析のための蛍光染料の使用 - Google Patents
表面分析のための蛍光染料の使用Info
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Abstract
(57)【要約】
アミノ−及び／又はイミノ基を有する化合物の表面吸着を定性蛍光分析測定及び場合により定量蛍光分析測定するための、求核基と反応しうる反応性基少なくとも１個を有する蛍光染料の使用。
Description
【０００１】 本発明は、アミノ及び／又はイミノ基を有する化合物の表面吸着を定性蛍光分
析測定及び所望の場合には定量蛍光分析測定するための、求核基と反応しうる反
応性基少なくとも１個を有する蛍光染料の使用に関する。
析測定及び所望の場合には定量蛍光分析測定するための、求核基と反応しうる反
応性基少なくとも１個を有する蛍光染料の使用に関する。
【０００２】 蛍光染料の最も一般的な使用は、繊維及び成形品の染色のための使用である。
しかしながら、その蛍光特性は分析でも利用される。例えば、蛍光発色団は、抗
体又は低分子量化合物をイムノアッセイ又は他の免疫学的検出方法で標識付けす
るために生化学で使用される。しかしながらこれらの方法では、蛍光染料を検出
反応前に検出試薬と結合させる。
しかしながら、その蛍光特性は分析でも利用される。例えば、蛍光発色団は、抗
体又は低分子量化合物をイムノアッセイ又は他の免疫学的検出方法で標識付けす
るために生化学で使用される。しかしながらこれらの方法では、蛍光染料を検出
反応前に検出試薬と結合させる。
【０００３】 アミン混合物を分析するための方法の１つが、Anal. Chem. 1995, 67, 1742-1
748に記載されている。この場合、アミン混合物はスクシンイミジルエステル基(
succinimidyl ester radical)を含有する蛍光染料で標識付けされ、かつ液体ク ロマトグラフィーにより分離され、かつ混合物の定性及び定量組成が、予め用意
された基準試料に対して測定される。
748に記載されている。この場合、アミン混合物はスクシンイミジルエステル基(
succinimidyl ester radical)を含有する蛍光染料で標識付けされ、かつ液体ク ロマトグラフィーにより分離され、かつ混合物の定性及び定量組成が、予め用意
された基準試料に対して測定される。
【０００４】 アミンの表面吸着の測定は別の目的を有する。これは、混合物中の特定のアミ
ンの検出に関するのではなく、特定の材料に対するオリゴ−又はポリアミンの親
和力に関する。
ンの検出に関するのではなく、特定の材料に対するオリゴ−又はポリアミンの親
和力に関する。
【０００５】 テキスタイル、皮革及び紙材用助剤を開発する際に、基材上で使用した場合の
オリゴ−又はポリアミンの吸着度を知ることは非常に重要である。基材に対する
特異的なオリゴ−及びポリアミンの親和力に関する試験は、他の種類の助剤と混
合する場合に殊に重要である。
オリゴ−又はポリアミンの吸着度を知ることは非常に重要である。基材に対する
特異的なオリゴ−及びポリアミンの親和力に関する試験は、他の種類の助剤と混
合する場合に殊に重要である。
【０００６】 従って本発明の課題は、基板上に吸着されるオリゴ−及び／又はポリアミンに
関する定性、及び所望の場合には定量情報をもたらす標識剤を提供することであ
る。
関する定性、及び所望の場合には定量情報をもたらす標識剤を提供することであ
る。
【０００７】 相応してアミノ及び／又はイミノ基を有する化合物の表面吸着の定性蛍光分析
測定及び所望の場合には定量蛍光分析測定のために、求核基と反応しうる反応性
基少なくとも１個を有する蛍光染料を使用することにより、この目的は達成され
ることを我々は発見した。
測定及び所望の場合には定量蛍光分析測定のために、求核基と反応しうる反応性
基少なくとも１個を有する蛍光染料を使用することにより、この目的は達成され
ることを我々は発見した。
【０００８】 好適な蛍光染料では、発色団の化学的性質は低い程度に過ぎない。これに対し
て重要なのは、アミノ及び／又はイミノ基を有する吸収された任意の化合物と迅
速に結合するその反応性基である。蛍光染料は当業者には公知であり、かつ例え
ばUllmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry 5th Ed., Vol. All., p.2
79に記載されている。このような染料の有用な群はナフタルイミド、クマリン、
キサンテン、チオキサンテン、ナフトラクタム、アズラクトン、メチン、スチル
ベン、オキサジン及びチアジンである。
て重要なのは、アミノ及び／又はイミノ基を有する吸収された任意の化合物と迅
速に結合するその反応性基である。蛍光染料は当業者には公知であり、かつ例え
ばUllmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry 5th Ed., Vol. All., p.2
79に記載されている。このような染料の有用な群はナフタルイミド、クマリン、
キサンテン、チオキサンテン、ナフトラクタム、アズラクトン、メチン、スチル
ベン、オキサジン及びチアジンである。
【０００９】 実際に特に良好な蛍光染料はクマリン、例えば７−ジアルキルアミノクマリン
の誘導体、キサンテン、例えばフルオレセイン及びそのハロゲン化生成物のエオ
シン、エリトロシン、フロキシン及びローズベンガル及びローダミン並びに殊に
メチン染料、例えばシアニンである。
の誘導体、キサンテン、例えばフルオレセイン及びそのハロゲン化生成物のエオ
シン、エリトロシン、フロキシン及びローズベンガル及びローダミン並びに殊に
メチン染料、例えばシアニンである。
【００１０】 他の蛍光化合物が吸着している表面を蛍光分析試験する場合、他の吸着されて
いる化合物の蛍光スペクトルに対して、その蛍光スペクトルが十分に異なってい
る染料を選択する。例えば紙で使用されるような蛍光増白剤では、赤色領域又は
近赤外スペクトル領域で蛍光を発する染料を選択する。
いる化合物の蛍光スペクトルに対して、その蛍光スペクトルが十分に異なってい
る染料を選択する。例えば紙で使用されるような蛍光増白剤では、赤色領域又は
近赤外スペクトル領域で蛍光を発する染料を選択する。
【００１１】 そのうちの少なくとも１個が発色団に結合している反応性基として、求核性ア
ミノ又はイミノ基と反応する基、例えばマイケル系、例えばビニルスルホニル又
は脱離により塩基性条件下にこれらを生じさせる硫酸半エステルが好適である。
更に、ペプチド化学から公知の反応性基、例えばアセチルアジド−、アリールハ
ロゲン化物−、ジクロロトリアジン−、イソチオシアネート−、塩化スルホニル
−及びスルホスクシンイミジルエステル基が好適である。基材が、アミノ及びイ
ミノ基と競合可能な求核性に反応する化合物複数種を吸収している場合には、ア
ミノ及びイミノ基に関して選択的な反応性基を有する染料を選択する。
ミノ又はイミノ基と反応する基、例えばマイケル系、例えばビニルスルホニル又
は脱離により塩基性条件下にこれらを生じさせる硫酸半エステルが好適である。
更に、ペプチド化学から公知の反応性基、例えばアセチルアジド−、アリールハ
ロゲン化物−、ジクロロトリアジン−、イソチオシアネート−、塩化スルホニル
−及びスルホスクシンイミジルエステル基が好適である。基材が、アミノ及びイ
ミノ基と競合可能な求核性に反応する化合物複数種を吸収している場合には、ア
ミノ及びイミノ基に関して選択的な反応性基を有する染料を選択する。
【００１２】 水溶液での高い選択性と良好な安定性において優れているスクシンイミジルエ
ステルが、この場合には特に好適である。
ステルが、この場合には特に好適である。
【００１３】 これに関連して、バイオ分子、例えばタンパク質及び抗体のための標識試薬と
して商業的に入手可能な蛍光染料を直接に染色に使用することができる。通常の
商業用標識試薬の例は、１個以上のスクシンイミジルエステル基を含有するシア
ニンである。
して商業的に入手可能な蛍光染料を直接に染色に使用することができる。通常の
商業用標識試薬の例は、１個以上のスクシンイミジルエステル基を含有するシア
ニンである。
【００１４】 更にスクシンイミジルエステルは、カルボキシル基を有する蛍光染料とＮ−ヒ
ドロキシスルホスクシンイミドとを反応させることにより簡単に製造することも
できる。
ドロキシスルホスクシンイミドとを反応させることにより簡単に製造することも
できる。
【００１５】 染料溶液で試験すべき基材試料を処理することにより表面を試験する。アミノ
又はイミノ基を有する化合物が吸着している表面領域に、染料は結合する。後続
のすすぎ行程で、未結合の染料を洗い流す。こうして蛍光顕微鏡検査法により、
表面付着量のイメージを得ることができる。
又はイミノ基を有する化合物が吸着している表面領域に、染料は結合する。後続
のすすぎ行程で、未結合の染料を洗い流す。こうして蛍光顕微鏡検査法により、
表面付着量のイメージを得ることができる。
【００１６】 蛍光染料で染色することにより有利に検出可能な、アミノ及びイミノ基を有す
る化合物は、アミノ又はイミノ基を有するオリゴ−及びポリアミンである。アミ
ノ又はイミノ基は脂肪族又は芳香族鎖に結合していて、アミノ基の他に更なる官
能基又は４級アンモニウムイオンを含有する。このような化合物は様々な用途で
助剤として使用される。
る化合物は、アミノ又はイミノ基を有するオリゴ−及びポリアミンである。アミ
ノ又はイミノ基は脂肪族又は芳香族鎖に結合していて、アミノ基の他に更なる官
能基又は４級アンモニウムイオンを含有する。このような化合物は様々な用途で
助剤として使用される。
【００１７】 例は、例えばＵＳ−Ａ４２１７２１４、ＥＰ−Ａ０７１０５０及びＥＰ−Ａ０
２１６３８７に記載されているようなポリビニルアミンである。このような化合
物は、Ｎ−ビニルカルボキサミドのポリマー又は、重合の後にカルボン酸基の脱
離によりポリビニルアミンに変わるエチレン系不飽和モノマーとのそのコポリマ
ーである。このようなポリビニルアミンは例えば、水溶性及び水不溶性異物を固
定するための紙材用助剤として使用され、かつ平均分子量Ｍｗ２００〜１０００
００００を有する。
２１６３８７に記載されているようなポリビニルアミンである。このような化合
物は、Ｎ−ビニルカルボキサミドのポリマー又は、重合の後にカルボン酸基の脱
離によりポリビニルアミンに変わるエチレン系不飽和モノマーとのそのコポリマ
ーである。このようなポリビニルアミンは例えば、水溶性及び水不溶性異物を固
定するための紙材用助剤として使用され、かつ平均分子量Ｍｗ２００〜１０００
００００を有する。
【００１８】 同様に良好に染色可能なオリゴ−及びポリアミンはＵＳ−Ａ２１８２３０６又
はＵＳ−Ａ３２０３９１０に記載されているようなポリエチレンイミンであり、
これらは様々な用途で助剤として使用される場合、平均分子量Ｍｗ２５０〜２０
０００００、通常５００〜１００００を有する。例は、紙製造での歩留まり向上
剤としてのポリエチレンイミンの使用である。
はＵＳ−Ａ３２０３９１０に記載されているようなポリエチレンイミンであり、
これらは様々な用途で助剤として使用される場合、平均分子量Ｍｗ２５０〜２０
０００００、通常５００〜１００００を有する。例は、紙製造での歩留まり向上
剤としてのポリエチレンイミンの使用である。
【００１９】 全ての遊離アミノ基が誘導体化されていなければ、ポリビニルアミン及びポリ
エチレンイミンの誘導体も勿論、良好に染色可能である。誘導体化反応は例えば
、カルボキシメチル化、更にＷＯ−Ａ９７／４００８７及びＷＯ−Ａ−９７／４
２２２９に記載されている様なアルキルエポキシドとの反応が含まれる。
エチレンイミンの誘導体も勿論、良好に染色可能である。誘導体化反応は例えば
、カルボキシメチル化、更にＷＯ−Ａ９７／４００８７及びＷＯ−Ａ−９７／４
２２２９に記載されている様なアルキルエポキシドとの反応が含まれる。
【００２０】 例えば１級モノ−又はジアミン又は２級ジアミンとエピクロロヒドリンとの縮
合反応により得られるオリゴアミンもアミンとして良好に検出可能である。同様
に、これらのアミンとアクリルニトリルとの付加生成物及び後続の水素添加も挙
げられる。第一に挙げたオリゴアミンのタイプの例は特に、エピクロロヒドリン
で部分的に４級化されたピペラジン縮合物であり、これは平均分子量２００〜７
００００を有する。これらのアミンは綿繊維の染色でテキスタイル助剤として使
用される。
合反応により得られるオリゴアミンもアミンとして良好に検出可能である。同様
に、これらのアミンとアクリルニトリルとの付加生成物及び後続の水素添加も挙
げられる。第一に挙げたオリゴアミンのタイプの例は特に、エピクロロヒドリン
で部分的に４級化されたピペラジン縮合物であり、これは平均分子量２００〜７
００００を有する。これらのアミンは綿繊維の染色でテキスタイル助剤として使
用される。
【００２１】 蛍光染料の使用により、任意の基材表面に吸着されている、アミノ及び／又は
イミノ基を有する化合物の検出が可能である。
イミノ基を有する化合物の検出が可能である。
【００２２】 例は、紙材、木材、皮革、人造もしくは天然繊維からなる織物、髪、毛皮、層
状ケイ酸塩、硬い表面、例えばガラス、金属、セラミック又は他に触媒表面であ
る。
状ケイ酸塩、硬い表面、例えばガラス、金属、セラミック又は他に触媒表面であ
る。
【００２３】 例えば汚染除去又は洗浄処方での処理により、オリゴ−又はポリアミンでの表
面被覆が行われていてもよい。しかしながら、これは、繊維及び織物の最終工程
で、又は例えば製紙の間に被覆されてもよい。
面被覆が行われていてもよい。しかしながら、これは、繊維及び織物の最終工程
で、又は例えば製紙の間に被覆されてもよい。
【００２４】 このようなオリゴ−及びポリアミンは用途の要求に応じて様々な分子量を有す
る。しかしながら、このことは、これらが表面に吸着されているので、基板上の
オリゴ−及びポリアミンの染色には重要ではない。調べるべきアミンが短時間の
染色及びすすぎ行程の間に容易に表面から分離して初めて、検出限界に達する。
る。しかしながら、このことは、これらが表面に吸着されているので、基板上の
オリゴ−及びポリアミンの染色には重要ではない。調べるべきアミンが短時間の
染色及びすすぎ行程の間に容易に表面から分離して初めて、検出限界に達する。
【００２５】 染色工程のために通常、蛍光染料の水性溶液を製造する。ここで使用される水
溶液とは、水の他に水と混合可能な有機溶剤、例えばＣ1〜Ｃ4−アルカノール、
ことにメタノール、エタノール、イソプロパノール又は環式エーテル、例えばテ
トラヒドロフランを２０質量％まで含有する溶液のことである。しかし有利には
、水を唯一の溶剤として使用する。溶液のｐＨは５〜１４、有利には６〜１０の
範囲であるべきである。更に酸性の条件はアミノ基のプロトン化をもたらすので
、反応の減速が生じる。ｐＨは無機塩基、例えばアルカリ金属及びアルカリ土類
金属の水酸化物、酸化物及び塩基塩、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム
、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム又は炭酸カルシウム又は緩衝系の使用によって
調節することができる。
溶液とは、水の他に水と混合可能な有機溶剤、例えばＣ1〜Ｃ4−アルカノール、
ことにメタノール、エタノール、イソプロパノール又は環式エーテル、例えばテ
トラヒドロフランを２０質量％まで含有する溶液のことである。しかし有利には
、水を唯一の溶剤として使用する。溶液のｐＨは５〜１４、有利には６〜１０の
範囲であるべきである。更に酸性の条件はアミノ基のプロトン化をもたらすので
、反応の減速が生じる。ｐＨは無機塩基、例えばアルカリ金属及びアルカリ土類
金属の水酸化物、酸化物及び塩基塩、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム
、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム又は炭酸カルシウム又は緩衝系の使用によって
調節することができる。
【００２６】 蛍光分光分析は非常に高感度であるので、アミノ又はイミノ基の等モル変換を
達成する必要はない。これに対して、遊離アミノ基１当量当たり、０．１〜１０ -5 当量の蛍光染料を使用するだけで十分である。
達成する必要はない。これに対して、遊離アミノ基１当量当たり、０．１〜１０ -5 当量の蛍光染料を使用するだけで十分である。
【００２７】 染料の濃度は１０-3〜１０-6モル／溶剤ｌであってよい。市場で入手可能なバ
イオポリマー用の標識染料を使用する場合にはこれらを、標識反応に関して前記
したと同じ濃度で使用することができる。
イオポリマー用の標識染料を使用する場合にはこれらを、標識反応に関して前記
したと同じ濃度で使用することができる。
【００２８】 染色工程は通常、数分間で完了し、かつこれを有利には室温で実施する。
【００２９】 染色は、噴霧によってだけではなく、基材試料を染料溶液中に浸漬することに
よっても行うことができる。
よっても行うことができる。
【００３０】 染色工程に続いて乾燥の後に未結合の染料を、水又は水性溶剤混合物でのすす
ぎにより除去する。
ぎにより除去する。
【００３１】 蛍光分析による検出を通常、蛍光顕微鏡試験として有利には反射光顕微鏡を選
択して実施する。例えば１プロトン励起又は２プロトン励起、レーザー走査装置
及び共集点設置を使用することができる。異なる染料での二重標識を観察するこ
とができるように、スペクトルによる、又は時間的な蛍光検出も同様に可能であ
る。
択して実施する。例えば１プロトン励起又は２プロトン励起、レーザー走査装置
及び共集点設置を使用することができる。異なる染料での二重標識を観察するこ
とができるように、スペクトルによる、又は時間的な蛍光検出も同様に可能であ
る。
【００３２】 未被覆表面でのあり得る染色性及びそれに起因する蛍光性、更に基材での可能
な自己蛍光性は、簡単な空試験により確かめることができ、かつ容易にバックグ
ラウンド信号として考慮することができる。
な自己蛍光性は、簡単な空試験により確かめることができ、かつ容易にバックグ
ラウンド信号として考慮することができる。
【００３３】 観察者は、オリゴ−又はポリアミンがドットとして表れている表面を見て、例
えば繊維上の高密度位置を確認することができる。従ってこれは、どの部分で、
かつどの程度、表面がアミンで覆われているかに関する定性的情報をもたらす。
断面図を調べることにより、アミンが浸透している深さを確認することも同様に
可能である。
えば繊維上の高密度位置を確認することができる。従ってこれは、どの部分で、
かつどの程度、表面がアミンで覆われているかに関する定性的情報をもたらす。
断面図を調べることにより、アミンが浸透している深さを確認することも同様に
可能である。
【００３４】 更にこの染色法は、予め用意された校正線から、吸収されたアミンの量に関す
る定量的情報を得る可能性も示している。これは、アミンの製品開発及びこのよ
うなアミンを用いての新しい処方物の製造での、慣用の方法よりも簡単で、迅速
な試験法である。
る定量的情報を得る可能性も示している。これは、アミンの製品開発及びこのよ
うなアミンを用いての新しい処方物の製造での、慣用の方法よりも簡単で、迅速
な試験法である。
【００３５】 蛍光染料の本発明の使用は、試験すべき表面での、アミノ及び／又はイミノ基
を有する化合物群の吸着の並行測定を可能にし、かつ良好な吸着特性を有するア
ミンを選択するために使用することができる。
を有する化合物群の吸着の並行測定を可能にし、かつ良好な吸着特性を有するア
ミンを選択するために使用することができる。
【００３６】 様々なオリゴ−及びポリアミンを規定量で試料表面の様々な領域に施与し、次
いでその表面を蛍光染料で着色することにより、様々なオリゴ−及びポリアミン
を同時に試験することが簡単に可能である。未結合の線量を除去した後の後続の
蛍光顕微鏡検査法による個々のスポットの定量的評価により、試験したアミンの
吸着特性の比較が可能である。蛍光顕微鏡検査法の高い感度により、小型化され
た試料及びそれに伴い、吸着特性に関する多数の化合物の並行試験も許容される
。
いでその表面を蛍光染料で着色することにより、様々なオリゴ−及びポリアミン
を同時に試験することが簡単に可能である。未結合の線量を除去した後の後続の
蛍光顕微鏡検査法による個々のスポットの定量的評価により、試験したアミンの
吸着特性の比較が可能である。蛍光顕微鏡検査法の高い感度により、小型化され
た試料及びそれに伴い、吸着特性に関する多数の化合物の並行試験も許容される
。
【００３７】 蛍光染料でのこの標識は更に、層状ケイ酸塩上でのアミンの吸着特性を調べる
ことも可能にし、このことは、環境分析でアミンの除去可能性を評価するために
非常に重要である。
ことも可能にし、このことは、環境分析でアミンの除去可能性を評価するために
非常に重要である。
【００３８】 蛍光染料の使用の重要な利点は、これが、吸着されたオリゴ−及びポリアミン
に関する定性的及び定量的情報をもたらし、その際、吸着プロセスは、吸着前に
受けた変性による影響を受けないということにある。
に関する定性的及び定量的情報をもたらし、その際、吸着プロセスは、吸着前に
受けた変性による影響を受けないということにある。
【００３９】 次の例により、本発明を詳述する。
【００４０】 例１ 皮革上のアミン検出： 式：
【００４１】
【化１】
【００４２】 の蛍光染料であるCy５（登録商標）のアンプル（約０．１２７ｍｇ；Amersham社
）１本を、蒸留水２００ｍｌ中に溶かした（溶液１）。
）１本を、蒸留水２００ｍｌ中に溶かした（溶液１）。
【００４３】 染色処方： 蛍光染料溶液１ｍｌを皮革に施与した。１分後、基材をすすぎ装置に入れ、そ
こで、蒸留水の層流ですすいだ。皮革を５分間すすぎ、次いで取り出した。
こで、蒸留水の層流ですすいだ。皮革を５分間すすぎ、次いで取り出した。
【００４４】 試料調製： ａ）ポリエチレンイミン（分子量約１００００ｇ／モル）を１０ｇ／ｌの濃度
で蒸留水に溶解させ、約０．０２ｍｇ／ｇの濃度で銀面皮の一片に施与し、かつ
流水ですすいだ（試料１）。
で蒸留水に溶解させ、約０．０２ｍｇ／ｇの濃度で銀面皮の一片に施与し、かつ
流水ですすいだ（試料１）。
【００４５】 ｂ）銀面皮の第２の一片を染色処方により蛍光染料で着色したが、ポリエチレ
ンイミンでの処理を行わなかった（試料２）。
ンイミンでの処理を行わなかった（試料２）。
【００４６】 ｃ）銀面皮の第３の一片をａ）に記載のようにポリエチレンイミンで処理し、
続いて染色処方により着色した（試料３）。
続いて染色処方により着色した（試料３）。
【００４７】 測定及び分析： ３つの試料全てで、蛍光の強度を測定した。測定は、６２０ｎｍでの励起の後
に蛍光分光器（SPEX Fluorolog（登録商標）ＩＩ）中で行った。試料１の蛍光信
号（ポリエチレンイミンの自己蛍光）及び試料２の蛍光信号（皮革の自己染色性
）を、試料３の信号から引いて、表面被覆を測定した。
に蛍光分光器（SPEX Fluorolog（登録商標）ＩＩ）中で行った。試料１の蛍光信
号（ポリエチレンイミンの自己蛍光）及び試料２の蛍光信号（皮革の自己染色性
）を、試料３の信号から引いて、表面被覆を測定した。
【００４８】 例２ ポリエステル織物上でのアミン検出 試料調製： ａ）部分的に４級化されたポリピペラジン縮合物（分子量約３００００ｇ／モ
ル）を濃度１０ｇ／ｌで蒸留水に溶解させ、ポリピペラジン０．０１〜０．０５
ｍｇ／織物ｇの様々な濃度でポリエステル織物に施与し、かつ流水ですすいだ。
この後、例１の染色処方により着色した（試料４）。
ル）を濃度１０ｇ／ｌで蒸留水に溶解させ、ポリピペラジン０．０１〜０．０５
ｍｇ／織物ｇの様々な濃度でポリエステル織物に施与し、かつ流水ですすいだ。
この後、例１の染色処方により着色した（試料４）。
【００４９】 ｂ）ポリエステル織物１片を、ポリピペラジン縮合物での処理を行わずに直接
、例１の記載により着色した（試料５）。
、例１の記載により着色した（試料５）。
【００５０】 ｃ）ポリエステル織物の１片をポリピペラジン０．０５ｍｇ／織物ｇで処理し
た（試料６）。この試料は蛍光の増加は示さなかった。
た（試料６）。この試料は蛍光の増加は示さなかった。
【００５１】 試料４、５及び６の蛍光の強度を測定した。測定は、６２０ｎｍでの励起の後
に、蛍光分光器（SPEX Fluorolog（登録商標）ＩＩ）中で行った。試料５を使用
して織物の自己蛍光を測定し、未着色のピペラジン縮合物により変化のない基準
線を測定した（試料６）。前記の方法による、様々な濃度のポリイミンで被覆さ
れたポリエステル織物の１片を次いで、同様に蛍光光学的に調べた。ピペラジン
縮合物の吸着を試料５及び６の信号の減算の後に、残る蛍光信号により検出する
ことができた。蛍光の強度を、吸着等温線に従って４級化ピペラジン縮合物の提
示量と相関させた。
に、蛍光分光器（SPEX Fluorolog（登録商標）ＩＩ）中で行った。試料５を使用
して織物の自己蛍光を測定し、未着色のピペラジン縮合物により変化のない基準
線を測定した（試料６）。前記の方法による、様々な濃度のポリイミンで被覆さ
れたポリエステル織物の１片を次いで、同様に蛍光光学的に調べた。ピペラジン
縮合物の吸着を試料５及び６の信号の減算の後に、残る蛍光信号により検出する
ことができた。蛍光の強度を、吸着等温線に従って４級化ピペラジン縮合物の提
示量と相関させた。
【００５２】 例３ ベントナイト（層状ケイ酸塩）上でのアミン検出 ａ）染色処方： ベントナイト（平均粒度２００ｎｍ）約６ｇを含有する懸濁液５０ｍｌを吸着
の後に、１５０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。遠心分離物を蒸留水５０ｍ
ｌ中でスラリーにし、かつ再び１５０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。遠心
分離物を再び蒸留水中に入れ、かつ例１に記載の染料溶液２ｍｌを添加した。こ
の試料を遠心分離し、蒸留水５０ｍｌでスラリーにし、遠心分離し、かつマイク
ロウェルプレートに施与した。
の後に、１５０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。遠心分離物を蒸留水５０ｍ
ｌ中でスラリーにし、かつ再び１５０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。遠心
分離物を再び蒸留水中に入れ、かつ例１に記載の染料溶液２ｍｌを添加した。こ
の試料を遠心分離し、蒸留水５０ｍｌでスラリーにし、遠心分離し、かつマイク
ロウェルプレートに施与した。
【００５３】 ｂ）ポリエチレンイミンでの処理： 懸濁液１５０ｍｌ（固体含有率２質量％）にポリエチレンイミン溶液２０ｍｌ
（平均分子量１００００ｇ／モル）（１０ｇ／ｌ）を添加した。２０分後に懸濁
液５０ｍｌを１５０００ｒｐｍで遠心分離し、かつその後、水中でスラリーにし
た。遠心分離及び蒸留水への添加を、着色を行う前に繰り返した。
（平均分子量１００００ｇ／モル）（１０ｇ／ｌ）を添加した。２０分後に懸濁
液５０ｍｌを１５０００ｒｐｍで遠心分離し、かつその後、水中でスラリーにし
た。遠心分離及び蒸留水への添加を、着色を行う前に繰り返した。
【００５４】 試料製造及び測定： ベントナイト懸濁液をｂ）に記載のようにポリエチレンイミンで処理し、かつ
ａ）に記載のように着色した。蛍光の強度を測定した（試料７）。蛍光を６２０
ｎｍでの励起の後に蛍光分光計（SPEX Fluorolog II）で測定した。
ａ）に記載のように着色した。蛍光の強度を測定した（試料７）。蛍光を６２０
ｎｍでの励起の後に蛍光分光計（SPEX Fluorolog II）で測定した。
【００５５】 基準試料を同一の条件下に、しかし行程ｂ）でポリエチレンイミンを用いずに
製造した（試料８）。この試料の蛍光の強度を同様に測定した。
製造した（試料８）。この試料の蛍光の強度を同様に測定した。
【００５６】 評価のために、基準試料８の信号を、試料７の信号から引いた。ベントナイト
上でのポリエチレンイミンの吸着を、蛍光の残りの信号により検出することがで
きた。
上でのポリエチレンイミンの吸着を、蛍光の残りの信号により検出することがで
きた。
【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書
【提出日】平成１２年３月２１日（２０００．３．２１）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項１
【補正方法】変更
【補正内容】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ノルベルト マール ドイツ連邦共和国 リンブルガーホーフ ツェッペリンヴェーク ２ Ｆターム(参考） 2G054 AA04 AB10 BA10 BB05 BB06 CA21 CA23 CA30 CD01 CE02 EA03 EB01 GA04 GA05 GB02 GB10 JA02 JA06 4H056 CA01 CC02 CC08 CE03 CE06 DD03
Claims (9)
- 【請求項１】 アミノ及び／又はイミノ基を有する化合物の表面吸着の定性
蛍光分析測定及び所望の場合には定量蛍光分析測定のための、求核基と反応しう
る反応性基少なくとも１個を有する蛍光染料の使用。 - 【請求項２】 反応性基が選択的にアミノ基と反応しうる、請求項１に記載
の蛍光染料の使用。 - 【請求項３】 反応性基がスクシンイミジルエステルである、請求項１又は
２に記載の蛍光染料の使用。 - 【請求項４】 オリゴアミン及び／又はポリアミンの表面吸着を測定するた
めの、請求項１から３までのいずれか１項に記載の蛍光染料の使用。 - 【請求項５】 アミノ及び／又はイミノ基を有する化合物の織物表面への吸
着を測定するための、請求項１から４までのいずれか１項に記載の蛍光染料の使
用。 - 【請求項６】 アミノ及び／又はイミノ基を有する化合物の皮革表面への吸
着を測定するための、請求項１から４までのいずれか１項に記載の蛍光染料の使
用。 - 【請求項７】 アミノ及び／又はイミノ基を有する化合物の触媒表面への吸
着を測定するための、請求項１から４までのいずれか１項に記載の蛍光染料の使
用。 - 【請求項８】 アミノ及び／又はイミノ基を有する化合物の木材又は紙材表
面への吸着を測定するための、請求項１から４までのいずれか１項に記載の蛍光
染料の使用。 - 【請求項９】 良好な吸着特性を有するアミンを選択するために、アミノ及
び／又はイミノ基を有する化合物の表面吸着を並行測定するための、請求項１か
ら４までのいずれか１項に記載の蛍光染料の使用。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19807405.0 | 1998-02-21 | ||
| DE19807405 | 1998-02-21 | ||
| PCT/EP1999/000953 WO1999042812A1 (de) | 1998-02-21 | 1999-02-13 | Verwendung von fluoreszenzfarbstoffen zur oberflächenuntersuchung |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002504678A true JP2002504678A (ja) | 2002-02-12 |
Family
ID=7858551
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000532703A Withdrawn JP2002504678A (ja) | 1998-02-21 | 1999-02-13 | 表面分析のための蛍光染料の使用 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6627455B1 (ja) |
| EP (1) | EP1058832A1 (ja) |
| JP (1) | JP2002504678A (ja) |
| DE (1) | DE19906214A1 (ja) |
| WO (1) | WO1999042812A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018180408A1 (en) * | 2017-03-28 | 2018-10-04 | Kurita Water Industries Ltd. | Method for the determination of film forming amines |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2004319385A1 (en) * | 2004-04-05 | 2005-11-17 | Lanxess Deutschland Gmbh | Method for marking terrain |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5227487A (en) * | 1990-04-16 | 1993-07-13 | Molecular Probes, Inc. | Certain tricyclic and pentacyclic-hetero nitrogen rhodol dyes |
| DK0455905T3 (da) | 1990-05-11 | 1998-12-07 | Microprobe Corp | Dipsticks til nukleinsyrehybridiseringsassays og fremgangsmåde til kovalent immobilisering af oligonukleotider |
-
1999
- 1999-02-13 EP EP99908892A patent/EP1058832A1/de not_active Withdrawn
- 1999-02-13 JP JP2000532703A patent/JP2002504678A/ja not_active Withdrawn
- 1999-02-13 US US09/622,585 patent/US6627455B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-02-13 WO PCT/EP1999/000953 patent/WO1999042812A1/de not_active Application Discontinuation
- 1999-02-15 DE DE19906214A patent/DE19906214A1/de not_active Withdrawn
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018180408A1 (en) * | 2017-03-28 | 2018-10-04 | Kurita Water Industries Ltd. | Method for the determination of film forming amines |
| JP2020512548A (ja) * | 2017-03-28 | 2020-04-23 | 栗田工業株式会社 | 皮膜形成アミンの判定方法 |
| US11320383B2 (en) | 2017-03-28 | 2022-05-03 | Kurita Water Industries Ltd. | Method for the determination of film forming amines |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1999042812A1 (de) | 1999-08-26 |
| DE19906214A1 (de) | 1999-08-26 |
| EP1058832A1 (de) | 2000-12-13 |
| US6627455B1 (en) | 2003-09-30 |
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|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20060213 |
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| A761 | Written withdrawal of application |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A761 Effective date: 20060809 |