JP2001510713A - 物理的な止血活性および塞栓活性、および吻合後の癒着形成についての予防活性を有している生体適合材料の製造におけるヒアルロン酸誘導体の使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明では、静脈および動脈の両者の吻合手術で用いるための、ならびに外科手術後の、周りの組織の瘢痕形成を伴う血管の癒着形成を予防するための、体液に対する吸収性および物理的な止血活性を有する、生体適合性かつ生物分解性の生体適合材料を製造するためのポリサッカライド誘導体の使用を記載する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 発明の目的 本発明では、吻合手術で用いるための、ならびに外科手術後の、周囲組織の瘢
痕形成を伴う管の癒着形成を予防するための、体液に対する吸収性および物理的
な止血活性を有する、生体適合性かつ生物分解性の生体適合材料を製造するため
のポリサッカライド誘導体の使用を記載する。

【０００２】 背景技術 吻合とは、一般に、管または器官の間に形成された開裂部位の外科的接合を意
味する。これには、血管の静脈および動脈吻合（静脈および動脈の両者）、腸吻
合（結腸の一部または全部を切除した後の腸管断片の接合を含む）、外科的なカ
テーテルの移植および内視鏡的手術手順に伴うものが含まれる。 管吻合とは、血栓症または動脈硬化症のため、ある長さの血管を除去した後の
、切断された血管の２つの端を縫合することによる外科的な接合、または血行再
開を目的とする、２つの別々の血管の接合（バイパスおよび遊離皮弁）を意味す
る。

【０００３】 縫合後、再び血管を通して血液を流れさせる場合、生じ得る問題の１つは、特
に抗血栓剤を用いていた場合に、血液が縫い目の間から漏れることである。 血液の喪失が続くと、吻合周り、あるいは血管壁に血腫が形成され、それが血
液凝固現象を引き起こす外圧を長期にわたって持続的に与え、次いで血栓形成性
物質の放出によって血管内血栓症を引き起こし得る。さらに、血腫は感染を助長
する。

【０００４】 血管吻合のための顕微手術では、以下の目的を持って「血管カフ技術（Vascul
ar Cuff Technique)」を用いる： 血管吻合を強化し、ならびに血管のねじれまたはよじれまたは圧搾を防止する
ため（T. H. Robbins, "Microvascular anastomosis: vascular cuff technique
", Plastic and Reconstructive Surgery, 87, 567-568); 止血作用を達成するため（N. B. Hart, British Journal of Plastic Surgery
, 1987, 40, 300-304); 必要な縫合の縫い目の数を減少させるため（L. K. Hung et al., "Comparativ
e study of artery cuff and fat warp in microvascular anastomosis in the
rat", British Journal of Plastic Surgery, 41, 278-283); および 吻合周りの適当な環境を創出し、周りの組織との癒着を防ぐため（T. H. Robb
ins, "Microvascular anastomosis: vascular cuff technique", Plastic and R
econstructive Surgery, 87, 567-568)。

【０００５】 外科手術は現在まで、止血剤を含有する生体適合材料を用いて出血の問題を解
決しようとしてきた（N. B. Hart, British Journal of Plastic Surgery, 1987
, 40, 300-304)。しかし、これらは実際に出血時間を減少させるが、以下の２つ
の望ましくない副作用をも有する： 吻合の開存性に乏しく； 血管周りの繊維形成および癒着の発生率を増大させる。

【０００６】 さらに、静脈は動脈より開存性が低いので、静脈レベルで強い止血剤を用いる
のは、血管内血栓症の危険性のため、非常に危険である。 生体適合材料が吻合に関与する組織の天然治癒を妨げることを理由に、それら
の使用に反対している記載が数多くある。その代わりに、血管断片からなる自己
由来の組織を使用して吻合周りを覆うのが好ましい（Plastic and Reconstructi
ve Surgery, Vol. 87, No. 3, March 1991, pages 567-568)。

【０００７】 エステル誘導体（ＥＰ０２１６４５３）および自己架橋されたヒアルロン酸誘
導体（ＥＰ０３４１７４５）によって構成される生体適合材料の使用は、外科手
術後の癒着の予防において既知である（ＷＯ９７／０７８３３）が、それらが血
管内血栓症を引き起こし得る凝固因子に対して生化学的活性を有する止血剤使用
の必要性にとって代わる物理的な止血活性を有することを観察した者はこれまで
いない。 これらの生体適合材料の、もう１つの利点は、これらが、このタイプの外科手
術に用いられる他のタイプの生体適合材料と異なり、血管が周りの組織に癒着す
るのを予防し、かつ驚くべきことに、正しい組織再生に有利な、適当な環境を創
出することができることである。

【０００８】 本発明は、予想外の物理的な止血性質のため、吻合、好ましくは血管の吻合に
おいて、ならびに外科手術後、周りの組織に対する血管の癒着を予防するのに有
益に用いられる、ヒアルロン酸、ゲランおよびアルギン酸の誘導体、好ましくは
ヒアルロン酸誘導体に基づく生体適合性かつ生物分解性の生体適合材料の使用を
記載する。以下のポリサッカライドヒアルロン酸誘導体が好ましい： カルボキシ官能基の一部またはすべてが、脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、
シクロ脂肪族、ヘテロ環式族のアルコールでエステル化されているヒアルロン酸
エステル（ＥＰ０２１６４５３）； カルボキシ官能基の一部がアリール化脂肪族（aralaphatic）のアルコールで エステル化されており、カルボキシ基の他の部分が長鎖脂肪族の基で誘導体化さ
れているヒアルロン酸エステル（ＷＯ９８／０８８７６）； カルボキシ基の一部またはすべてが同ポリサッカライド鎖または他の鎖のアル
コール官能基でエステル化されている自己架橋されたヒアルロン酸エステル（Ｅ
Ｐ０３４１７４５）； カルボキシ基の一部またはすべてが、脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、シク
ロ脂肪族、ヘテロ環式族のポリアルコールでエステル化され、スペーサー鎖によ
って架橋が生成されている、架橋されているヒアルロン酸化合物（ＥＰ０２６５
１１６Ｂ１）； ヒアルロン酸またはヒアルロンの部分エステルまたはトータルエステルの、コ
ハク酸ヘミエステルまたはコハク酸ヘミエステルの重金属塩（ＷＯ９６／３５７
２０）； 硫酸化誘導体（ＷＯ９５／２５７５１）またはＮ−硫酸化誘導体（１９９８年
４月３日提出のＰＣＴ／ＥＰ９８／０１９７３）； ヒアルロン酸のアミド誘導体； ゲランの部分エステルおよび自己架橋されたエステル誘導体（ＥＰ０５１８７
１０、ＥＰ０６５４０４６）；および アルギナートのエステル誘導体（ＥＰ２５１９０５）。

【０００９】 本発明において有用な、ヒアルロン酸のコハク酸ヘミエステル、またはヒアル
ロン酸トータルエステルまたは部分エステルのコハク酸ヘミエステルは、以下の
繰り返し単位（Ｉ）を有することによって特徴付けられる：

【化１】 ［式中、Ｒ₁、Ｒ₂およびＲ₃は互いに同じか、あるいは異なって、ＨまたはＣＯ （ＣＨ₂）₂ＣＯＯＹ（式中、Ｙは負の電荷あるいはＨである）であり、ＲはＯＨ
、Ｏ^-またはアルコール基である］。

【００１０】 特に、ヒアルロン酸のコハク酸ヘミエステルの重金属塩またはヒアルロン酸ト
ータルエステルまたは部分エステルのコハク酸ヘミエステルの重金属塩は、以下
の繰り返し単位（ＩＩ）を有することによって特徴付けられる：

【化２】 ［式中、Ｒ₁、Ｒ₂およびＲ₃は互いに同じか、あるいは異なって、ＨまたはＣＯ （ＣＨ₂）₂ＣＯＯ^-であり、ＲはＯ^-またはアルコール基であり、（Ｘ^z+）は重金
属のカチオンであり、ここにｚは１から６の数であり、ｐは０．１から５までの
整数または小数であり、ただしｐ（Ｘ^z+）は、該繰り返し単位に存在する陰イオ
ン基ＣＯＯ^-の数と等しいことを条件とする］。

【００１１】 ヒアルロン酸またはヒアルロン酸の部分エステルまたはトータルエステルの、
コハク酸ヘミエステルまたはコハク酸ヘミエステルの重金属塩は、以下の工程に
したがって製造することができる： ａ）ヒアルロン酸ナトリウム塩を、水および非プロトン溶媒の存在下で、ピリ
ジニウム塩、テトラアルキルアンモニウム塩、テトラアリールアンモニウム塩、
テトラアルキルホスホニウム塩、テトラアリールホスホニウム塩からなる群から
選択される塩に変換し、 ｂ）触媒としての有機塩基の存在下、工程（ａ）から得られた溶液を無水コハ
ク酸で処理し、ピリジニウム、テトラアルキルアンモニウム、テトラアリールア
ンモニウム、テトラアルキルホスホニウムまたはテトラアリールホスホニウムカ
チオンを透析によって除去し、これにより繰り返し単位（Ｉ）を有するコハク酸
ヘミエステル(ただし該繰り返し単位（Ｉ）の少なくとも１つがＲ＝ＯＨまたは Ｏ^-であることを条件とする）を得、場合により得られた生成物を凍結乾燥によ って回収し、 ｃ）先の工程から得られた溶液をそのまま、または先の工程から回収された固
形生成物の水溶液を、重金属の無機塩の水溶液で処理し、生成物をろ過および減
圧乾燥によって回収する。

【００１２】 ヒアルロン酸トータルエステルのコハク酸ヘミエステルの重金属塩を製造する
場合、以下の方法を用いることができる： ｂ’）水と非プロトン溶媒の混液中に溶解あるいは懸濁させたヒアルロン酸エ
ステルを、触媒としての有機塩基の存在下に、無水コハク酸で処理し、これによ
り、Ｒがアルコール基である繰り返し単位（Ｉ）を有するコハク酸ヘミエステル
を得、場合により、得られた生成物を凍結乾燥によって回収し、 ｃ’）先の工程から得られた溶液をそのまま、または先の工程から回収された
固形生成物の水溶液を、重金属の無機塩の水溶液で処理し、ろ過および減圧乾燥
によって生成物を回収する。

【００１３】 用語「重金属」とは、周期表の第４、第５または第６周期の、医薬的に活性な
任意の金属を包含する。 本発明の好ましい重金属塩は、そのカチオンが、ヒアルロン酸のコハク酸誘導
体の亜鉛塩、銀塩、銅塩、金塩、セシウム塩およびタングステン塩であるもので
ある。

【００１４】 任意の分子量のヒアルロン酸またはヒアルロン酸エステルを、そのコハク酸誘
導体の製造に用いることができる。以下の例では、３０，０００から７６０，０
００ダルトンの範囲の分子量のヒアルロン酸サンプルを用いたが、この範囲は重
要ではない。 ヒアルロン酸またはヒアルロン酸エステルの好ましいコハク酸ヘミエステルは
、Ｒ₁＝Ｒ₂＝Ｒ₃＝Ｈの繰り返し単位（Ｉ）を有するもの、および繰り返し単位 （ＩＩ）の式中、Ｘが銀、金、銅および亜鉛からなる群から選択され、ｚが１か
ら３の間であり、ｐが０．３から２の間である対応する重金属塩である。 ヒアルロン酸またはヒアルロン酸エステルのもう１つのクラスの好ましいコハ
ク酸ヘミエステルは、少なくとも１つの、Ｒ₁＝Ｒ₃＝Ｈであり、Ｒ₂＝ＣＯ（Ｃ Ｈ₂）₂ＣＯＯＹである繰り返し単位（Ｉ）および少なくとも１つの、Ｒ₂＝Ｒ₃＝
Ｈであり、Ｒ₁＝ＣＯ（ＣＨ₂）₂ＣＯＯＹである繰り返し単位（Ｉ）（上記意義 を有する）を有するもの、ならびに少なくとも１つの、Ｒ₁＝Ｒ₃＝Ｈであり、Ｒ ₂ ＝ＣＯ（ＣＨ₂）₂ＣＯＯ^-である繰り返し単位（ＩＩ）および少なくとも１つの
、Ｒ₂＝Ｒ₃＝Ｈであり、Ｒ₁＝ＣＯ（ＣＨ₂）₂ＣＯＯ^-である繰り返し単位（ＩＩ
）（ここに、Ｘは銀、金、銅および亜鉛からなる群から選択され、ｚは１から３
の間であり、ｐは０．６から３の間である）を有する対応する重金属塩である。

【００１５】 上記工程（ａ）では、ヒアルロン酸を対応するピリジニウム塩に変換するのが
好ましい。特にこの変換には、ヒアルロン酸ナトリウム塩を水およびジメチルホ
ルムアミドの混液中に前もって溶解させ、カチオン交換樹脂で処理して、対応す
る遊離のヒアルロン酸を得ることが含まれる。樹脂を除去した後、この溶液をピ
リジンで中和し、これによりピリジニウム塩を得る。

【００１６】 両方法の工程（ｂ）または（ｂ’）では、ヒアルロン酸と比べて大過剰の無水
コハク酸を加えるのが好ましいが、この無水コハク酸の量は重要ではない。実際
、無水コハク酸／出発ヒアルロン酸またはヒアルロン酸部分エステルの繰り返し
単位（ＩＩＩ）：

【化３】 ［式中、Ｒは上記意義を有する］ に存在する遊離のＯＨ基のモル比が１５から９０の範囲のときに最良の結果が得
られる。温度は重要ではないが、両方法の工程（ｂ）または（ｂ’）を７０℃で
行った場合に最良の結果が得られる。両方法の工程（ｂ）または（ｂ’）で触媒
として用いる好ましい有機塩基は、４−ジメチルアミノピリジン、ピリジンまた
はそれらの混合物からなる群から選択される。大量の４−ジメチルアミノピリジ
ンを用いることによって、高度にスクシニル化されたヒアルロン酸またはヒアル
ロン酸エステルのコハク酸ヘミエステルが得られる。ピリジンを単独で、あるい
は少量の４−ジメチルアミノピリジンとの混合物中で用いることによって、低度
にスクシニル化されたヒアルロン酸のコハク酸ヘミエステルが得られる。温度、
反応時間などの反応条件を強くすればするほど、より高度にエステル化された誘
導体が形成される。

【００１７】 ヒアルロン酸またはヒアルロン酸エステルのコハク酸ヘミエステルのＡｇ塩を
製造するため、工程（ｃ）または（ｃ’）では、ヒアルロン酸のコハク酸ヘミエ
ステルまたはヒアルロン酸エステルのコハク酸ヘミエステルを、硝酸銀水溶液で
処理して、ヒアルロン酸またはヒアルロン酸エステルのコハク酸ヘミエステルの
銀塩を形成させるのが好ましい。このＡｇ塩は溶液から沈殿し、ろ過または遠心
によって回収される。次いでこの沈殿をエタノールで洗浄し、４０℃で減圧乾燥
する。このコハク酸誘導体の銀化合物は完全暗所で製造する。硝酸銀溶液を製造
し、スクシニル銀ヒアルロナートを製造するすべての操作は暗所で行い、得られ
た生成物は光源のないところに保存した。

【００１８】 ヒアルロン酸またはヒアルロン酸エステルのコハク酸ヘミエステルのＣｕ塩を
製造するため、両方法の工程（ｃ）または（ｃ’）では、ヒアルロン酸のコハク
酸ヘミエステルまたはヒアルロン酸エステルのコハク酸ヘミエステルをＣｕＣｌ ₂ の水溶液で処理し、ヒアルロン酸またはヒアルロン酸エステルのコハク酸ヘミ エステルのＣｕ塩を形成させるのが好ましい。

【００１９】 ヒアルロン酸またはヒアルロン酸エステルのコハク酸ヘミエステルのＺｎ塩を
製造するため、両方法の工程（ｃ）または（ｃ’）では、ヒアルロン酸のコハク
酸ヘミエステルまたはヒアルロン酸エステルのコハク酸ヘミエステルをＺｎＣｌ ₂ の水溶液で処理し、ヒアルロン酸またはヒアルロン酸エステルのコハク酸ヘミ エステルのＺｎ塩を形成させるのが好ましい。

【００２０】 ヒアルロン酸またはヒアルロン酸エステルのコハク酸ヘミエステルのＡｕ塩を
製造するため、両方法の工程（ｃ）または（ｃ’）では、ヒアルロン酸のコハク
酸ヘミエステルまたはヒアルロン酸エステルのコハク酸ヘミエステルをＨＡｕＣ
ｌ₄の水溶液で処理し、ヒアルロン酸またはヒアルロン酸エステルのコハク酸ヘ ミエステルのＡｕ塩を形成させるのが好ましい。

【００２１】 ヒアルロン酸およびヒアルロン酸エステルのヘミエステルコハク酸誘導体の具
体例には、以下のものが含まれる： ａ）繰り返し単位（Ｉ）を有するヒアルロン酸のコハク酸ヘミエステルの製造例
実施例１： 蒸留水（３５ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、１００ｍ
Ｌ）中のヒアルロン酸ナトリウム（ＨＡ-Ｎａ、１ｇ、ＭＷ １６０，０００）の
溶液をイオン交換樹脂（３Ｇ．ＩＲ １２０ Ｈ＋）の存在下で１０分間攪拌した
後、ＤＭＦ（１００ｍＬ）でさらに希釈し、ろ過して樹脂を除去した。次いでこ
の溶液を過剰のピリジン（１０ｍＬ）で中和し、ヒアルロン酸のピリジン塩（Ｈ
Ａ−Ｐｙ）を得た。次いでこの粘性の溶液を減圧下で注意深く蒸発させ、溶液の
総容量が約１００ｍＬ以下にならないように気をつけて、存在する水を除去した
。この手法を毎回ＤＭＦ（２０ｍＬ）を加えて、３回繰り返した。次いでこの溶
液を室温で２４時間攪拌しながら、無水コハク酸（３ｇ）およびピリジン（１０
ｍＬ）で処理した。次いでこの反応混合物を濃縮し、蒸留水（２０ｍＬ）と混合
し、蒸留水（３回、７５０ｍＬ）に対して透析し、凍結乾燥して、ヒアルロン酸
スクシニレート（コハク酸エステル）（９３０ｍｇ）を得た。

【００２２】 表１は、サンプル１の¹³Ｃ.ｎ.ｍ.ｒ.（５０．３ＭＨｚ）スペクトルの化学シ
フト値の割り当てを示す。

【表１】 表１ Ｎ.Ｍ.Ｒ.分析は、Ｎ−アセチルグルコサミンの炭素６（Ｎ−６）のスクシニ ル化度、０．２（コハク酸（モル）／ポリマーの繰り返し単位（モル））を示し
ている。

【００２３】 実施例２： 蒸留水（３５ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、１００ｍ
Ｌ）中のヒアルロン酸ナトリウム（ＨＡ−Ｎａ、１ｇ、３０，０００）の溶液を
、イオン交換樹脂（３ｇ、ＩＲ １２０ Ｈ＋）の存在下で１０分間攪拌した後、
ＤＭＦ（１００ｍＬ）でさらに希釈し、ろ過して樹脂を除去した。次いでこの溶
液を過剰のピリジン（１０ｍＬ）で中和し、ヒアルロン酸のピリジン塩（ＨＡ−
Ｐｙ）を得た。次いでこの粘性の溶液を減圧下で注意深く蒸発させ、溶液の総容
量が約１００ｍＬ以下にならないようにして、存在する水を除去した。この水を
除去する手順を、毎回ＤＭＦ（２０ｍＬ）を加えて、３回繰り返した。次いでこ
の溶液を７０℃で２４時間攪拌しながら、無水コハク酸（３ｇ）およびピリジン
（１０ｍＬ）で処理した。次いでこの反応混合物を濃縮し、蒸留水（２０ｍＬ）
と混合し、蒸留水（３回、７５０ｍＬ）に対して透析し、凍結乾燥して、ヒアル
ロン酸スクシニレート（９００ｍｇ）を得た。

【００２４】 表２は、サンプル２）の¹³Ｃ：ｎ.ｍ.ｒ.スペクトル（５０．３ＭＨｚ）の化 学シフト値の割り当てを示す。

【表２】 表２ Ｎ.Ｍ.Ｒ.分析は、Ｎ−アセチルグルコサミンの炭素６（Ｎ−６）のスクシニ ル化度、約０．４５（コハク酸（モル）／繰り返し単位（モル））を示す。

【００２５】 実施例３： 蒸留水（３５ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ １００ｍ Ｌ）中のヒアルロン酸ナトリウム（ＨＡ-Ｎａ、０．５ｇ、ＭＷ １６０，０００
）の溶液を、イオン交換樹脂（３Ｇ、ＩＲ １２０ Ｈ＋）の存在下で１０分間攪
拌した後、ＤＭＦ（７５ｍＬ）でさらに希釈し、ろ過して樹脂を除去した。次い
でこの溶液を過剰のピリジン（６ｍＬ）で中和し、ヒアルロン酸のピリジン塩（
Ｈａ−Ｐｙ）を得、次いでこの粘性の溶液を減圧下で注意深く蒸発させ、溶液の
総容量が約５０ｍＬ以下にならないようにして、存在する水を除去した。この水
を除去する手順を、毎回ＤＭＦ（１０ｍＬ）を加えて、３回繰り返した。次いで
この溶液を７０℃で４８時間攪拌しながら、無水コハク酸（２ｇ）、４−ジメチ
ルアミノピリジン（１０ｍｇ）、およびピリジン（１０ｍＬ）で処理した。さら
なる量の無水コハク酸（１ｇ）およびピリジン（２．５ｍＬ）を加え、混合物を
もう２４時間攪拌した。次いでこの反応混合物を濃縮し、蒸留水（２０ｍＬ）と
混合し、３日間、蒸留水（３回、７５０ｍＬ）に対して透析し、凍結乾燥して、
ヒアルロン酸スクシニレート（４５０ｍｇ）を得た。この生成物は水に溶解させ
ると、高い粘性を特徴的に示した。このｎ.ｍ.ｒ.スペクトルは特に、サンプル の高い粘性のせいで、広いピークを特徴的に示した。修飾の度合を電位差アッセ
イによって評価し、１．８（コハク酸（モル）／繰り返し単位（モル））である
ことがわかった。

【００２６】 実施例４： 蒸留水（６０ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、６０ｍＬ
）中のヒアルロン酸ナトリウム（ＨＡ-Ｎａ、０．５Ｇ、ＭＷ ２４０，０００）
の溶液を、イオン交換樹脂（１Ｇ、ＩＲ １２０ Ｈ＋）の存在下で１０分間攪拌
した後、ＤＭＦ（５０ｍＬ）でさらに希釈し、ろ過して樹脂を除去した。次いで
この溶液を過剰のピリジン（６Ｌ）で中和し、ヒアルロン酸のピリジン塩（ＨＡ
−Ｐｙ）を得た。次いでこの粘性の溶液を減圧下で注意深く蒸発させ、溶液の総
容量が約１００ｍＬ以下にならないようにして、存在する水を除去した。この水
を除去する手順を、毎回ＤＭＦ（２０ｍＬ）を加えながら、３回繰り返した。次
いでこのゼラチン様の溶液を７０℃で１８時間攪拌しながら、無水コハク酸（２
ｇ）およびピリジン（５ｍＬ）で処理した。さらなる量の無水コハク酸（２．５
ｇ）および４−ジメチルアミノピリジン（２００ｍｇ）を加え、混合物をもう２
４時間攪拌した。次いでこの反応混合物を濃縮し、蒸留水（２０ｍＬ）と混合し
、凍結乾燥して、ヒアルロン酸スクシニレート（４５０ｍｇ）を得た。この生成
物は水に溶解させると、高い粘性を特徴的に示した。このｎ.ｍ.ｒ.スペクトル は特に、サンプルの高い粘性のせいで、非常に広いピークを特徴的に示した。修
飾の度合を電位差アッセイによって評価し、その結果は２．５（コハク酸（モル
）／繰り返し単位（モル））であった。

【００２７】 実施例５： 蒸留水（６０ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、６０ｍＬ
）中のヒアルロン酸ナトリウム（ＨＡ-Ｎａ、１ｇ、ＭＷ ４０，０００）の溶液
を、イオン交換樹脂（１ｇ、ＩＲ １２０ Ｈ＋）の存在下で１０分間攪拌した後
、ＤＭＦ（５０ｍＬ）でさらに希釈し、ろ過して樹脂を除去した。次いでこの溶
液を過剰のピリジン（１０ｍＬ）で中和し、ヒアルロン酸のピリジン塩（ＨＡ−
Ｐｙ）を得た。次いでこの粘性の溶液を減圧下で注意深く蒸発させ、溶液の総容
量が約５０ｍＬ以下にならないようにして、存在する水を除去した。この水を除
去する手順を、毎回ＤＭＦ（２０ｍＬ）を加えながら、３回繰り返した。次いで
この溶液を７０℃で１８時間攪拌しながら、無水コハク酸（３ｇ）およびピリジ
ン（１０ｍＬ）で処理した。さらなる量の無水コハク酸（２．５ｇ）および４−
ジメチルアミノピリジン（２００ｍｇ）を加え、混合物をもう２４時間攪拌した
。次いでこの茶色の反応混合物を濃縮し、蒸留水（２０ｍＬ）と混合し、蒸留水
（３回、７５０ｍＬ）に対して透析し、凍結乾燥して、ヒアルロン酸スクシニレ
ート（８５０ｍｇ）を得た。スクシニル化の度合を電位差アッセイによって評価
したところ、３．５（コハク酸（モル）／繰り返し単位（モル））であった。

【００２８】 実施例６： 蒸留水（６０ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、６０ｍＬ
）中のヒアルロン酸ナトリウム（ＨＡ-Ｎａ、０．５ｇ、ＭＷ ７６０，０００）
の溶液を、イオン交換樹脂（１ｇ、ＩＲ １２０ Ｈ＋）の存在下で１０分間攪拌
した後、ＤＭＦ（５０ｍＬ）でさらに希釈し、ろ過して樹脂を除去した。次いで
この溶液を過剰のピリジン（６ｍＬ）で中和し、ヒアルロン酸のピリジン塩（Ｈ
Ａ−Ｐｙ）を得た。次いでこの粘性の溶液を注意深く蒸発させ、溶液の総容量が
約５０ｍＬ以下にならないようにして、存在する水を除去した。この手順を、毎
回ＤＭＦ（２０ｍＬ）を加えながら、３回繰り返した。次いでこのゼラチン様の
溶液を無水コハク酸（２ｇ）および４−ジメチルアミノピリジン（２００ｍｇ）
で処理し、混合物をもう２４時間攪拌した。次いでこの反応混合物を濃縮し、蒸
留水（２０ｍＬ）と混合し、蒸留水（３回、７５０ｍＬ）に透析し、凍結乾燥し
て、ヒアルロン酸スクシニレート（４３０ｍｇ）を得た。この生成物は、水に溶
解させると、高い粘性を特徴的に示した。このｎ.ｍ.ｒ.スペクトルは特に、サ ンプルの高い粘性のせいで、非常に広いピークを特徴的に示した。修飾の度合を
電位差アッセイによって評価したところ、２．５（コハク酸（モル）／繰り返し
単位（モル））であった。

【００２９】 ｂ）Ｏ−スクシニルヒアルロナートの銀塩の製造例 実施例７： 実施例１に記載のように製造したＯ−スクシニルヒアルロナート１００ｍｇを
蒸留水１０ｍＬに溶解させた。次いでこのポリマー溶液にＡｇＮＯ₃の１Ｎ溶液 １０ｍＬを加えた。このようにして形成された白色沈殿を２時間攪拌し続けて懸
濁状態に維持した後、Buchner 漏斗を通すろ過によって集め、エタノールで数回
洗浄し、４０℃にセットした減圧オーブンで乾燥した。これらの操作はすべて暗
所で行い、酸化銀の形成を回避した。原子吸収分析は、銀含量が２３．５重量％
であり、理論的化学量論値の８７％と等しいことを示した。

【００３０】 実施例８： 実施例３に記載のように製造したヒアルロン酸スクシニレート７０ｍｇを蒸留
水１４ｍＬに溶解させた。この高い粘性のポリマー溶液にＡｇＮＯ₃の１Ｎ溶液 １４ｍＬを加えた。すぐに灰色沈殿が形成され、２時間攪拌を継続してこれを懸
濁状態に維持した後、Buchner 漏斗を通すろ過によって集めた。これをエタノー
ルで数回洗浄し、４０℃にセットした減圧オーブンで乾燥した。これらの操作は
すべて暗所で行い、酸化銀の形成を回避した。原子吸収分析は、銀含量が２７重
量％であり、理論的化学量論値の７１％と等しいことを示した。

【００３１】 実施例９： 実施例４に記載のように製造したヒアルロン酸スクシニレート１００ｍｇを蒸
留水２０ｍＬに溶解させた。この高い粘性のポリマー溶液にＡｇＮＯ₃の２Ｎ溶 液２０ｍＬを加えた。すぐに白色沈殿が形成され、２時間攪拌を継続してこれを
懸濁状態に維持した。次いでこれを Buchner 漏斗を通すろ過によって回収し、 エタノールで数回洗浄し、４０℃にセットした減圧オーブンで乾燥した。これら
の操作はすべて暗所で行い、酸化銀の形成を回避した。原子吸収分析は、銀含量
が２８．８重量％であり、理論的化学量論値の７０．５％と等しいことを示した
。

【００３２】 実施例１０： 実施例５に記載のように製造したヒアルロン酸スクシニレート１００ｍｇを蒸
留水１０ｍＬに溶解させた。この高い粘性のポリマー溶液にＡｇＮＯ₃の１Ｎ溶 液１０ｍＬを加えた。すぐに茶色がかった沈殿が形成され、２時間攪拌を継続し
てこれを懸濁状態に維持した後、Buchner 漏斗を通すろ過によって回収し、エタ
ノールで数回洗浄し、減圧オーブン中、４０℃で乾燥した。これらの操作はすべ
て暗所で行い、酸化銀の形成を回避した。原子吸収分析は、銀含量が３１％であ
り、理論的化学量論値の７０．２％と等しいことを示した。

【００３３】 実施例１１： 実施例６に記載のように製造したヒアルロン酸スクシニレート１００ｍｇを蒸
留水１０ｍＬに溶解させた。この高い粘性のポリマー溶液にＡｇＮＯ₃の１Ｎ溶 液１０ｍＬを加えた。すぐに茶色がかった沈殿が形成され、２時間攪拌を継続し
てこれを懸濁状態に維持した後、Buchner 漏斗を通すろ過によって回収し、エタ
ノールで数回洗浄し、４０℃にセットした減圧オーブンで乾燥した。これらの操
作はすべて暗所で行い、酸化銀の形成を回避した。原子吸収分析は、銀含量が２
７重量％であり、理論的化学量論値の７１％と等しいことを示した。

【００３４】 ｃ）ヒアルロン酸スクシニレートの亜鉛塩の製造例 実施例１２： 実施例１に記載のように製造したヒアルロン酸スクシニレート１００ｍｇを蒸
留水１０ｍＬに溶解させた。次いでこのポリマー溶液に、ＺｎＣｌ₂の０．２Ｎ 溶液１０ｍＬを加えた。この溶液を２時間継続して攪拌した後、３容量のエタノ
ールを加え、可溶性の亜鉛塩を沈殿させた。３，０００ｒｐｍで１５分間遠心し
て、この沈殿を回収し、エタノールで数回洗浄し、４０℃にセットした減圧オー
ブンで乾燥した。原子吸収分析は、亜鉛含量が１０％であり、理論的化学量論値
の１０１％と等しいことを示した。

【００３５】 実施例１３： 実施例３に記載のように製造したヒアルロン酸スクシニレート１００ｍｇを蒸
留水２０ｍＬに溶解させた。この高い粘性のポリマー溶液に、ＺｎＣｌ₂の２Ｎ 溶液２０ｍＬを加えた。亜鉛塩を加えた後、粉末状の沈殿が形成され、これを３
，０００ｒｐｍで１５分間遠心して回収し、エタノールで数回洗浄し、４０℃に
セットした減圧オーブンで乾燥した。原子吸収分析は、サンプル中の亜鉛含量が
１５．３％であり、理論的化学量論値の１０５％と等しいことを示した。

【００３６】 実施例１４： 実施例４に記載のように製造したヒアルロン酸スクシニレート１００ｍｇを蒸
留水２０ｍＬに溶解させた。この高い粘性のポリマー溶液に、ＺｎＣｌ₂の２Ｎ 溶液２０ｍＬを加えた。亜鉛塩を加えた後、粉末状の沈殿が形成され、これを３
，０００ｒｐｍで１５分間遠心して回収し、エタノールで数回洗浄し、４０℃に
セットした減圧オーブンで乾燥した。原子吸収分析は、サンプル中の亜鉛含量が
１７．７重量％であり、理論的化学量論値の１０５％と等しいことを示した。

【００３７】 ｄ）ヒアルロン酸スクシニレートの銅塩の製造例 実施例１５： 実施例５に記載のように製造したヒアルロン酸スクシニレート１００ｍｇを蒸
留水１０ｍＬに溶解させた。次いでこのポリマー溶液に、ＣｕＣｌ₂の２Ｎ溶液 １０ｍＬを加えた。銅塩を加えると、青色沈殿が形成され、これを３，０００ｒ
ｐｍで１５分間遠心して回収し、エタノールで数回洗浄し、４０℃にセットした
減圧オーブンで乾燥した。原子吸収分析は、サンプル中の銅含量が２１．４重量
％であり、理論的化学量論値の１１０％と等しいことを示した。したがって、お
そらく、誘導体の沈殿時に、少量の銅塩がポリマーに取り込まれている。

【００３８】 ｅ）ヒアルロン酸スクシニレートの金塩の製造例 実施例１６： 実施例３に記載のように製造したヒアルロン酸スクシニレート１００ｍｇを蒸
留水２０ｍＬに溶解させた。次いでこの高い粘性のポリマー溶液にＨａｕＣｌ₄ の０．５Ｎ溶液２０ｍＬを加えた。金塩を添加した後、沈殿が形成され、これを
３，０００ｒｐｍで１５分間遠心して回収し、エタノールで数回洗浄し、減圧オ
ーブン中、４０℃で乾燥した。サンプル中の金含量は１３重量％であり、理論的
化学量論値の４４％と等しいことがわかった。

【００３９】 適当な硫酸化剤を用いて、ヒアルロン酸またはヒアルロン酸の半合成誘導体の
ポリマー鎖に存在するアルコール性のヒドロキシルを硫酸化することにより、ほ
とんどすべての生物学的特徴を除いて、出発物質のものとは異なる化学−物理的
特徴を有する新規誘導体を形成させることができる。 特に重要なヒアルロン酸の半合成誘導体には、米国特許第４，８５１，５２１
号、第４，９６５，３５３号および第５，２０２，４３１号およびＥＰ ０ ２１
６ ４５３に記載の”ＨＹＡＦＦ”と示される脂肪族、アリール化脂肪族、ヘテ ロ環式族およびシクロ脂肪族のアルコールとのエステルであるものもある。この
場合、硫酸化反応はもはや均一相では生じないが、不均一相の生体適合材料の表
面では、反応溶媒に暴露されているヒドロキシ基を活性化し、反応が生じる。

【００４０】 直接、生体適合材料上で達成することができる硫酸化の程度は重要な特徴であ
り、注意深い動力学的制御が必要とされる。基質を構成するポリマーの親水性が
増加することによって誘導される生体適合材料の可溶化を避けるため、二量体ユ
ニット当たりの−ＳＯ₃基の数はあるレベルを超えてはならず、出発生体適合材 料の親水性の程度に応じて、一般には１．５−２以下である。例えば、すべての
カルボキシルがベンジル基とのエステル結合に関与しているＨＹＡＦＦ１１フィ
ルムの場合、硫酸化の最大程度は１．５を超えるべきでない。

【００４１】 硫酸化に一般に用いられる試薬には、三酸化硫黄とピリジンの複合体（ＳＯ₃ −ピリジン）が含まれる。この反応は、非プロトン溶媒、例えばジメチルスルホ
キシド、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミドおよびＮ−メチルピロリドン中、約０
℃から約６０℃の温度範囲で、ヒアルロン酸のテトラブチルアンモニウム塩の溶
液、または部分エステルの場合には、テトラブチルアンモニウム塩形態である残
りのカルボキシ官能基を含むヒアルロン酸エステルの溶液に硫酸化試薬を加える
ことによって行う。 ジサッカライド（二糖類）単位当たりの硫酸基の数によって測定される種々の
程度の硫酸化は、ＳＯ₃−ピリジンの量を変化させることによって達成できる。 水酸基のモルと硫酸化試薬のモルの比は１：１から１：１２までの間で変化させ
ることができる。

【００４２】 本方法は、ポリマーの特徴、特にその分子量の喪失を引き起こすことなしに、
ヒアルロン酸およびその半合成誘導体のポリサッカライド鎖を特異的かつ均質に
硫酸化するのに用いることができる。 この方法によって、種々の硫酸化レベルであるが同じ分子量の新規ポリマーを
得ることができる。カルボキシ基がテトラブチルアンモニウム塩で塩化されてい
る生体ポリマーを出発物質として用いることによって、新規生物学的特徴を有す
るポリマーを得ることができる。このような生体ポリマーは溶血性ではない。

【００４３】 これらの硫酸化されたポリサッカライド（多糖類）の注目すべき特徴は、その
血液凝固時間を増加させる能力である。例えば、２．５より大きな硫酸化の程度
を有するヒアルロン酸誘導体は良好な抗凝固活性を示す。さらに出発ポリマーの
分子量はまた、本発明の硫酸化されている新規生体ポリマーの性質に重大に影響
し得る。

【００４４】 特に少なくとも４個の硫酸化されているヒアルロン酸誘導体が、その分子量お
よび硫酸化の程度のため、注目に値する。これらは： １．約１０，０００から約５０，０００ダルトンの範囲の分子量を有し、硫酸
化の程度２．５、３．０または３．５を有するヒアルロン酸； ２．約５０，０００から約２５０，０００ダルトンの範囲の分子量を有し、硫
酸化の程度２．５、３．０または３．５を有するヒアルロン酸； ３．約２５０，０００から約７５０，０００ダルトンの範囲の分子量を有し、
硫酸化の程度２．５、３．０または３．５を有するヒアルロン酸；および ４．約７５０，０００から約１，２５０，０００ダルトンの範囲の分子量を有
し、硫酸化の程度２．５、３．０または３．５を有するヒアルロン酸である。 上記記載の分子量を有するヒアルロン酸画分は、当分野に既知の特定の分子量
カットオフポイントを有する膜を使用することによって得ることができる。

【００４５】 ヒアルロン酸の半合成エステル誘導体の中でも、１．０および１．５の程度ま
で硫酸化されているＨＹＡＦＦ１１（ヒアルロン酸の１００％ベンジルエステル
）、および０．５および１．０の程度まで硫酸化されているＨＹＡＦＦ１１ｐ７
５（ヒアルロン酸の７５％ベンジルエステル）のポリマー化基質が特に特に興味
深い。

【００４６】 具体的なヒアルロン酸の硫酸化誘導体は以下のように製造することができる。 ａ）ヒアルロン酸ナトリウムの硫酸化、硫酸化の程度３ ヒアルロン酸のテトラブチルアンモニウム塩０．２５０ｇをジメチルホルムア
ミド（ＤＭＦ）１０ｍＬ中に溶解させる。窒素気流下、ＤＭＦ１０ｍＬ中に溶解
させたＳＯ₃−ピリジン１．３０５ｇをこの溶液に加える。この溶液を４℃から ０℃の間の温度で１時間振盪する。次いで、０℃にまで冷却した精製水約２００
ｍＬを加える。１Ｍ水酸化ナトリウムを加えて、この混合物のｐＨを８．５から
９．５の範囲の値にする。次いでこの誘導体をエチルアルコール１２０ｍＬで沈
殿させる。酢酸ナトリウムを飽和するまで加え、沈殿を０℃から４℃の範囲の温
度で１から２４時間沈積させておく。例えば１，５００ｒｐｍで１５分間遠心し
てこの沈殿を分離し、精製水に溶解させた後、すべての残留試薬および反応生成
物が完全に除去されるまで透析する。硫酸化の程度は核磁気共鳴（ＮＭＲ）によ
って測定する。

【００４７】 ｂ）ヒアルロン酸ナトリウムの硫酸化、硫酸化の程度３．５ ヒアルロン酸のテトラブチルアンモニウム塩０．２５０ｇをジメチルホルムア
ミド（ＤＭＦ）１０ｍＬ中に溶解させる。窒素流下、ＤＭＦ１０ｍＬ中に溶解さ
せたＳＯ₃−ピリジン２．０８８ｇをこの溶液に加える。この溶液を４℃から０ ℃の範囲の温度で少なくとも１時間振盪する。次いで、０℃にまで冷却した水約
２００ｍＬを加える。１Ｍ水酸化ナトリウムを加えて、この混合物のｐＨを８．
５から９．５の範囲の値にする。次いでこの誘導体をエチルアルコール１２０ｍ
Ｌで沈殿させる。無水酢酸ナトリウムを飽和するまで加え、沈殿を４℃から０℃
の範囲の温度で１から２４時間沈積させておく。例えば１，５００ｒｐｍで１５
分間遠心してこの沈殿を分離し、精製水に溶解させた後、すべての残留試薬およ
び反応生成物が完全に除去されるまで透析する。硫酸化の程度は核磁気共鳴（Ｎ
ＭＲ）によって測定する。

【００４８】 ｃ）ヒアルロン酸の部分エチルエステル（カルボキシ基の７５％がエチルエステ
ル形態である）の硫酸化、硫酸化の程度３ ヒアルロン酸の７５％部分エチルエステル（ＨＹＡＦＦ−７ｐ７５）のテトラ
ブチルアンモニウム塩０．２５０ｇをジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）１０ｍＬ
中に溶解させる。窒素流下、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１０ｍＬ中に溶
解させたＳＯ₃−ピリジン１．３０５ｇをこの溶液に加える。この溶液を４℃か ら０℃の範囲の温度で少なくとも１時間振盪する。次いで、０℃にまで冷却した
水約２００ｍＬを加える。１Ｍ水酸化ナトリウムを加えて、この混合物のｐＨを
８．５から９．５の範囲の値にする。次いでこの誘導体をエチルアルコール１２
０ｍＬで沈殿させる。無水酢酸ナトリウムを飽和するまで加え、沈殿を４℃から
０℃の範囲の温度で１から２４時間沈積させておく。例えば１，５００ｒｐｍで
１５分間遠心して沈殿を分離し、精製水に溶解させた後、すべての残留試薬およ
び反応生成物が完全に除去されるまで透析する。硫酸化の程度はＮＭＲによって
測定する。

【００４９】 ｄ）ヒアルロン酸の部分エチルエステル（カルボキシ基の５０％がエチルエステ
ル形態である）の硫酸化、硫酸化の程度２．５ ヒアルロン酸の５０％部分エチルエステル（ＨＹＡＦＦ−７ｐ５０、カルボキ
シ基の５０％がエタノールでエステル化されている）のテトラブチルアンモニウ
ム塩０．２５０ｇをジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）１０ｍＬ中に溶解させる。
窒素流下、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１０ｍＬ中に溶解させたＳＯ₃− ピリジン１．０４４ｇをこの溶液に加える。この溶液を４℃から０℃の範囲の温
度で少なくとも１時間振盪する。次いで、０℃にまで冷却した水約２００ｍＬを
加える。１Ｍ水酸化ナトリウムを加えて、この混合物のｐＨを８．５から９．５
の範囲の値にする。次いでこの誘導体をエチルアルコール１２０ｍＬで沈殿させ
る。無水酢酸ナトリウムを飽和するまで加え、沈殿を４℃から０℃の範囲の温度
で１から２４時間沈積させておく。例えば１，５００ｒｐｍで１５分間遠心して
沈殿を分離し、精製水に溶解させた後、すべての残留試薬および反応生成物が完
全に除去されるまで透析する。硫酸化の程度はＮＭＲによって測定する。

【００５０】 ｅ）ヒアルロン酸の部分エチルエステル（カルボキシ基の２５％がエチルエステ
ル形態である）の硫酸化、硫酸化の程度２ ヒアルロン酸の部分エチルエステル（ＨＹＡＦＦ−７ｐ２５、カルボキシ基の
２５％がエタノールでエステル化されている）のＴＢＡ塩０．２５０ｇをジメチ
ルホルムアミド（ＤＭＦ）１０ｍＬ中に溶解させる。窒素流下、ジメチルスルホ
キシド（ＤＭＳＯ）１０ｍＬ中に溶解させたＳＯ₃−ピリジン０．７８３ｇをこ の溶液に加える。この溶液を４℃から０℃の範囲の温度で少なくとも１時間シェ
イクする。次いで、０℃にまで冷却した水約２００ｍＬを加える。１Ｍ水酸化ナ
トリウムを加えて、この混合物のｐＨを８．５から９．５の範囲の値にする。次
いでこの誘導体をエチルアルコール１２０ｍＬで沈殿させる。無水酢酸ナトリウ
ムを飽和するまで加え、沈殿を４℃から０℃の範囲の温度で１から２４時間沈積
させておく。例えば１，５００ｒｐｍで１５分間遠心して沈殿を分離し、精製水
に溶解させた後、すべての残留試薬および反応生成物が完全に除去されるまで透
析する。硫酸化の程度はＮＭＲによって測定する。

【００５１】 ｆ）ヒアルロン酸の部分ベンジルエステル（カルボキシ基の７５％がベンジルエ
ステル形態である）の硫酸化、硫酸化の程度３．５ ヒアルロン酸の部分エチルエステル（ＨＹＡＦＦ−１１ｐ７５、カルボキシ基
の７５％がベンジルアルコールでエステル化されている）のテトラブチルアンモ
ニウム塩０．２５０ｇをジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）１０ｍＬ中に溶解させ
る。窒素流下、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１０ｍＬ中に溶解させたＳＯ ₃ −ピリジン２．０８８ｇをこの溶液に加える。この溶液を４℃から０℃の範囲 の温度で少なくとも１時間シェイクする。次いで、０℃にまで冷却した水約２０
０ｍＬを加える。１Ｍ水酸化ナトリウムを加えて、この混合物のｐＨを８．５か
ら９．５の範囲の値にする。次いでこの誘導体をエチルアルコール１２０ｍＬで
沈殿させる。無水酢酸ナトリウムを飽和するまで加え、沈殿を４℃から０℃の範
囲の温度で１から２４時間沈積させておく。例えば１，５００ｒｐｍで１５分間
遠心して沈殿を分離し、精製水に溶解させた後、すべての残留試薬および反応生
成物が完全に除去されるまで透析する。硫酸化の程度はＮＭＲによって測定する
。

【００５２】 ｇ）ヒアルロン酸の部分ベンジルエステル（カルボキシ基の５０％がベンジルエ
ステル形態である）の硫酸化、硫酸化の程度３ ヒアルロン酸の部分エチルエステル（ＨＹＡＦＦ−１１ｐ５０、カルボキシ基
の５０％がベンジルアルコールでエステル化されている）のテトラブチルアンモ
ニウム塩０．２５０ｇをジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）１０ｍＬ中に溶解させ
る。窒素流下、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１０ｍＬ中に溶解させたＳＯ ₃ −ピリジン１．３０５ｇをこの溶液に加える。この溶液を４℃から０℃の範囲 の温度で少なくとも１時間振盪する。次いで、０℃にまで冷却した水約２００ｍ
Ｌを加える。１Ｍ水酸化ナトリウムを加えて、この混合物のｐＨを８．５から９
．５の範囲の値にする。次いでこの誘導体をエチルアルコール１２０ｍＬで沈殿
させる。無水酢酸ナトリウムを飽和するまで加え、沈殿を４℃から０℃の範囲の
温度で１から２４時間沈積させておく。例えば１，５００ｒｐｍで１５分間遠心
して沈殿を分離し、精製水に溶解させた後、すべての残留試薬および反応生成物
が完全に除去されるまで透析する。硫酸化の程度はＮＭＲによって測定する。

【００５３】 ｈ）ヒアルロン酸の部分ベンジルエステル（カルボキシ基の２５％がベンジルエ
ステル形態である）の硫酸化、硫酸化の程度２ ヒアルロン酸の部分エチルエステル（ＨＹＡＦＦ−１１ｐ２５、カルボキシ基
の２５％がベンジルアルコールでエステル化されている）のテトラブチルアンモ
ニウム塩０．２５０ｇをジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）１０ｍＬ中に溶解させ
る。窒素流下、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１０ｍＬ中に溶解させたＳＯ ₃ −ピリジン０．５２２ｇをこの溶液に加える。この溶液を４℃から０℃の範囲 の温度で少なくとも１時間振盪する。次いで、０℃にまで冷却した水約２００ｍ
Ｌを加える。１Ｍ水酸化ナトリウムを加えて、この混合物のｐＨを８．５から９
．５の範囲の値にする。次いでこの誘導体をエチルアルコール１２０ｍＬで沈殿
させる。無水酢酸ナトリウムを飽和するまで加え、沈殿を４℃から０℃の範囲の
温度で１から２４時間沈積させておく。例えば１，５００ｒｐｍで１５分間遠心
して沈殿を分離し、精製水に溶解させた後、すべての残留試薬および反応生成物
が完全に除去されるまで透析する。硫酸化の程度はＮＭＲによって測定する。

【００５４】 ｉ）ＨＹＡＦＦ１１のフィルムの製造、硫酸化の程度１．５ ＨＹＡＦＦ１１のフィルム０．２５０ｇを、クロロホルム：ジメチル−ホルム
アミドの１：１混合物２５０ｍＬ浴に浸す。次いで、ピリジン−ＳＯ₃の複合体 ３．４ｇをジメチルホルムアミドに溶解させて得られた溶液５０ｍＬを加える。 この反応を室温で２時間進行させた後、フィルムを取り出し、次いで蒸留水（
１００ｍＬ）浴に浸し、最後に水：エタノールの５０：５０溶液に浸す。次いで
このフィルムを５５℃のオーブンで４８時間乾燥する。

【００５５】 ｊ）ＨＹＡＦＦ１１ｐ７５のフィルムの製造、硫酸化の程度１ ＨＹＡＦＦ１１ｐ７５のフィルム０．２５０ｇを、クロロホルム：ジメチルホ
ルムアミドの１：１混合物２５０ｍＬ浴に浸す。次いで、ピリジン−ＳＯ₃の複 合体２．３ｇをジメチルホルムアミドに溶解させて得られた溶液５０ｍＬを加え
る。 この反応を室温で２時間進行させた後、フィルムを取り出し、次いで蒸留水（
約１００ｍＬ）浴に浸し、最後に水：エタノールの５０：５０溶液に浸す。この
フィルムを５５℃のオーブンで４８時間乾燥する。 場合により、抗凝固剤または抗血栓活性を有する化合物で塩化されている、ヒ
アルロン酸およびその誘導体のＮ−硫酸化誘導体（ここにグルコサミンは部分的
にＮ−硫酸化されているか、あるいは部分的にＮ−硫酸化され、かつ第６位が部
分的もしくはトータルにＯ−硫酸化されている）は以下のように製造することが
できる。

【００５６】 以下の化学的方法は、グルコサミンのアミノ基または第６位のヒドロキシ基を
選択的に硫酸化し、変化しない範囲内の分子量を有するヒアルロン酸の新規硫酸
化誘導体を得るために十分に特徴付けされている出発生成物、例えばヒアルロン
酸を用いる方法を提供する。

【００５７】 用語、ヒアルロン酸の「部分的に２−Ｎ−硫酸化されている誘導体」とは、P.
Shaklee (1984) Biochem. J. 217, 187-197 に記載されている手法にしたがい 、前もってＮ−脱アセチル化されたヒアルロン酸のグルコサミンのアミノ基を、
制御して硫酸化反応させることによって得られる生成物を意味する。この反応は
以下に示すように進行する：

【化４】

【００５８】 用語「部分的に２−Ｎ−硫酸化され、かつ６−Ｏ−硫酸化されている誘導体」
とは、以下の図に示すように、グルコサミンのアミノ基に加えて、同基の第一級
ヒドロキシ官能基もまた、トータルあるいは部分的に硫酸化反応に関与している
図１に例示される化学反応の生成物を意味する。

【化５】

【００５９】 図１および２にしたがって製造された誘導体は、欧州特許第０２１６４５３ Ｂ１号に記載の手法にしたがう化合物の製造の中間体反応物として用いることが
でき、ここでは部分的に２−Ｎ−硫酸化され、あるいは部分的に２−Ｎ−硫酸化
され、かつ部分的またはトータルに６−Ｏ−硫酸化されているヒアルロン酸のグ
ルクロン基のカルボキシ官能基が脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、シクロ脂肪
族、ヘテロ環式族のアルコールと部分的または完全に反応し、それぞれ部分的ま
たはトータルエステルを生じる：

【化６】

【００６０】 さらに、欧州特許第０３４１７４５ Ｂ１号および第２６５１１６ Ｂ１号にそ
れぞれ記載の手法にしたがう架橋された化合物の合成に、図１および図２に記載
の合成誘導体を中間体として用い、ここではＤ−グルクロン基に属するカルボキ
シ基の一部または全部を、ｉ）同じサッカライド鎖または他の鎖のアルコール官
能基と、縮合剤を用いて反応させ、内部（またはラクトン）エステルおよび分子
間エステルを製造し；ｉｉ）脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、シクロ脂肪族、
ヘテロ環式族のポリアルコールと反応させ、スペーサー鎖による架橋を生成させ
ることができる。

【００６１】 上記の、本発明の方法にしたがって得られる硫酸化された化合物を、場合によ
り、重金属で塩化することができる。この重金属は周期表の第４、第５および第
６周期の金属元素、例えば銀、鉄、コバルト、銅、亜鉛、ヒ素、ストロンチウム
、ジルコニウム、アンチモニウム、金、セシウム、タングステン、セレン、白金
、ルテニウム、ビスマス、すず、チタンおよび水銀の群から選択される。 また、この硫酸化された誘導体を、場合により、薬理的に活性な物質、例えば
抗生物質、抗感染剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、細胞成長抑止剤、抗腫瘍剤、抗炎
症剤および傷害治癒物質、麻酔剤、コリン作動性またはアドレナリン作動性アゴ
ニストまたはアンタゴニスト、抗血栓剤、抗凝固剤、止血剤、繊維素溶解剤、お
よび血栓溶解剤、タンパク質およびその断片、ペプチドおよびポリヌクレオチド
を用いて塩化することもできる。

【００６２】 本発明の化合物の製造方法は主に２つの工程から構成され、第一の工程には天
然ポリサッカライドの制御されたＮ−脱アセチル化が含まれ、第二の工程にはグ
ルコサミンの第一級ヒドロキシまたは遊離アミノ官能基の特異的硫酸化反応が含
まれる。

【００６３】 生物学的ソースおよび発酵ソース由来の、分子量５，０００から５，０００，
０００Ｄａの範囲、好ましくは５０，０００Ｄａから３００，０００Ｄａの範囲
のヒアルロン酸のフラクションを、９８％以上の純度、１から５０ｍｇ／ｍＬの
範囲、好ましくは５から２５ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度でヒドラジン水和物に溶解
させる。次いでこの溶液に、０．１から３％の範囲、好ましくは１％の重量／容
量濃度で硫酸ヒドラジンを加える。 この反応は４０から９０℃の範囲内の温度、好ましくは６０℃で、攪拌しなが
ら、Ｎ−脱アセチル化が所望の程度に達するまで行う。

【００６４】 以下の表１は、反応時間に関し、遊離のアミノ基のパーセンテージで表した収
率を示す：

【表３】 表１ ^★ Ｎ−脱アセチル化のパーセンテージは、J. Riesenfeld (Analy. Bioch. 199
0, vol. 188, pages 383-389) の方法にしたがって測定する^★★ ”ＤＡｃ”＝Ｎ−脱アセチル化

【００６５】 次いで極性溶媒、好ましくはエタノールで沈殿させることにより、この反応を
停止させる。この沈殿を一部減圧乾燥し、０．１から１Ｍの範囲のモル濃度、好
ましくは０．５Ｍのヨウ素酸溶液で処理し、最後に５７％（ｗ／ｖ）の濃度のヨ
ウ化水素酸（iodohydric acid）で処理する。酢酸ナトリウム溶液（１０％ ｗ／
ｖ）を加えてこの溶液のｐＨを５から７の範囲で維持する。 修飾されたポリサッカライドを含む水相をジエチルエーテルで繰り返し処理し
て抽出し、黄色が完全に消えたら、エタノールでこの溶液を再処理する。 さらに４０℃で乾燥した後に形成された沈殿を、１０ｎｇ／ｍＬから４０ｎｇ
／ｍＬの範囲の濃度、好ましくは２５ｎｇ／ｍＬの濃度で水に溶解させ、この溶
液を、テトラアルキルアンモニウムヒドロキシドで活性化させたイオン交換樹脂
を含むカラムに通してろ過する（ここに第４アンモニウムのアルキル基は１から
４個の炭素原子を有する鎖によって構成されている）。テトラブチルアンモニウ
ムヒドロキシドを用いるのが好ましい。 次いで、修飾されたポリサッカライドの第４アンモニウム塩によって代表され
る、ろ過された生成物を凍結乾燥する。

【００６６】 部分的２−Ｎ−硫酸化誘導体の製造： 方法Ａ 部分的にＮ−脱アセチル化されたポリサッカライドの第４アンモニウム塩、好
ましくはテトラブチルアンモニウム塩を、非極性溶媒、例えばジメチルスルホキ
シド、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン、
好ましくはジメチルホルムアミド（ＤＭＦＡ）中に、５から５０ｍｇ／ｍＬの範
囲の濃度（好ましくは２５ｍｇ／ｍＬ）で溶解させる。 この有機溶液に、ジメチルホルムアミドスルホトリオキシド（ＤＭＦＡ−ＳＯ ₃ ）からなる硫酸化複合体を、５０から２００ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度、好まし くは１００ｍｇ／ｍＬの濃度でＤＭＦＡ中に溶解させることによって得られるも
う１つの溶液を加える。驚くべきことに、ＳＯ₃のモル数で表される、用いるべ き複合体の量は、Ｎ−脱アセチル化反応によって放出されるアミノ基のモル数と
等量であることがわかった。

【００６７】 硫酸化反応は０℃から２０℃の範囲の温度、好ましくは４℃で４時間以内の間
進行させ、次いで冷蒸留水を加えて停止させる。 部分的に２−Ｎ−硫酸化されたヒアルロン酸をエタノールで沈殿させ、再溶解
した生成物を蒸留水で透析することによって、この反応溶媒をまず精製する。 最後にこの溶液を凍結乾燥し、これにより得られた固形生成物を化学分析によ
る特徴付けに付し、Ｎ−硫酸化の程度および平均分子量を測定する（表２）。

【表４】 表２ ＨＡ＝ヒアルロン酸 ＨＡ−Ｎ−Ｓ＝Ｎ−硫酸化ヒアルロン酸

【００６８】 部分的に２−Ｎ−硫酸化され、６−Ｏ−硫酸化されている誘導体の製造 方法Ｂ 部分的にＮ−脱アセチル化されたポリサッカライドの第４アンモニウム塩、好
ましくはテトラブチルアンモニウム塩を、非極性溶媒、例えばジメチルスルホキ
シド、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン、
好ましくはジメチルホルムアミド（ＤＭＦＡ）中に、５から５０ｍｇ／ｍＬの範
囲の濃度、好ましくは３０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解させる。 この有機溶液に、ジメチルホルムアミドスルホトリオキシド（ＤＭＦＡ−ＳＯ ₃ ）からなる硫酸化複合体を、５０から２００ｍｇ／ｍＬの範囲で変化する濃度 、好ましくは１００ｍｇ／ｍＬの濃度でＤＭＦＡ中に溶解させることによって得
られるもう１つの溶液を加える。驚くべきことに、ＳＯ₃のモル数で表される、 用いるべき複合体の量は、Ｎ−脱アセチル化反応によって放出されるアミノ基の
モル数と等量であることがわかった。

【００６９】 この硫酸化反応は、０℃から２０℃の範囲の温度、好ましくは４℃で４時間進
行させる。硫酸化剤のＳＯ₃のモル数と−ＣＨ₂ＯＨのモル数の比が１．１から１
．３の範囲になるような量のピリジン−スルホトリオキシド複合体をジメチルス
ルホキシド中に溶解させ、溶液を製造する。より大量の試薬を用いると、ポリサ
ッカライド鎖の他のアルコール基（二次的）での任意の置換反応に有利になり得
る。 次いでこの反応を少なくともさらに１６時間進行させた後、冷蒸留水を加えて
停止させる。 修飾されたポリサッカライドの精製に関するそれ以後のすべての工程は「方法
Ａ」に記載のものである。 得られた誘導体に対して行った分析による特徴付けにより、この硫酸化法は、
驚くべきことに、部分的Ｎ−脱アセチル化によって得られたすべてのアミノ基を
置換するだけでなく、結果的にヒアルロン酸のグルコサミン基の第一級アルコー
ル基を完全に置換することがわかった(表３）。

【表５】 表３ HA-N-O-S1＝Ｎ−硫酸化され、かつ第６位がトータルにＯ−硫酸化されているヒ アルロン酸

【００７０】 さらに、第一級ヒドロキシル基に対してピリジン−ＳＯ₃複合体のモル量を変 える（０．１から１の範囲のモル比）ことによって、「方法Ｂ」は、部分的に２
−Ｎ−硫酸化され、かつ部分的に６−Ｏ−硫酸化されている一連の誘導体を得る
ことを可能にする。

【００７１】 Ｎ−硫酸化されているヒアルロン酸誘導体の具体例は以下のように製造するこ
とができる。 ａ）部分的に２−Ｎ−硫酸化されているヒアルロン酸（Ｎ−アセチル基の約５％
が硫酸化されている基によって置換されている）の製造 平均分子量１８１，０００Ｄａの、雄鶏のとさか由来のＨＡ１．００ｇを、硫
酸ヒドラジン０．５ｇとともにヒドラジン一水和物５０ｍＬに溶解させる。 この溶液を攪拌しながら、反応を６０℃で８時間継続した後、エタノール１０
０ｍＬを加えて停止する。これによって形成されたゼラチン様の沈殿をエタノー
ルで洗浄した後、減圧下、室温で乾燥する。 中間体生成物を水５０ｍＬおよび１０％酢酸ナトリウム溶液２０ｍＬからなる
混液に溶解させ、最後に濃度０．５Ｍのヨウ素酸溶液２５ｍＬで処理する。攪拌
しながら約３０分間反応させた後、過剰のヨウ素をヨウ化水素酸の５７％溶液５
ｍＬで滴定する。この操作の間、反応容器を氷冷しておくのが好ましい。次いで
濃い茶色の溶液をジエチルエーテル３０ｍＬで少なくとも５回処理し、修飾ポリ
マーを含む水溶液から反応残留物を抽出する。最後にこれを減圧下、４０℃で濃
縮し、容量約４０ｍＬにした後、テトラブチルアンモニウムヒドロキシドの４０
％ｗ／ｖ溶液で活性化させたイオン交換スルホン酸樹脂２０ｍＬを充填したカラ
ムに通してろ過する。

【００７２】 次いで、テトラブチルアンモニウム塩形態の修飾されたポリサッカライド（Ｈ
ＡＴＢＡ）を含む水溶液を収集し、１凍結乾燥サイクルに付する。 ＴＢＡの凍結乾燥ＨＡ塩１．３０ｇをジメチルホルムアミド４５ｍＬに溶解さ
せ、このようにして得られた溶液に、濃度５０ｍｇ／ｍＬのＮ−Ｎジメチルホル
ムアミド スルホトリオキシド複合体の溶液０．６ｍＬを加える。この反応を４ ℃で５時間、穏やかに攪拌し続けながら継続させた後、冷蒸留水４５ｍＬを加え
て停止させる。ＮａＯＨの２Ｍ溶液で中和し、ｐＨを７．５から８の範囲にし、
次いで孔サイズＧ２の Gooch フィルターを通してろ過し、エタノール２５０ｍ Ｌで処理する。 これにより形成された沈殿を少なくとも１５０ｍＬのエタノールで洗浄し、少
なくとも１６時間減圧乾燥した後、蒸留水５０ｍＬに再溶解させ、次いで水５０
容量に透析する。

【００７３】 生成物を凍結乾燥し、次いで特徴付けして、Ｎ−置換アミノ基のパーセンテー
ジおよびその平均分子量を決定する。 凍結乾燥生成物の重量： ０．７２ｇ； 収率： ８５％ ＳＯ₃−（モル）／ＨＡ（単量体ユニット、モル） ０．０４５ 遊離−ＮＨ₂基（モル）／ＨＡ（モル）： ０．０５２ 脱Ｎ−アセチル化（％）： ５．２％ 再Ｎ−硫酸化（％）： ４．５％ Ｎ−硫酸化反応の収率： ８７％ 平均分子量： 174,000 Ｄａ

【００７４】 ｂ）部分的に２−Ｎ−硫酸化されているヒアルロン酸（Ｎ−アセチル基の約２５
％が硫酸化されている基で置換されている）の製造 平均分子量１８１，０００Ｄａの、雄鶏のとさか由来のＨＡ１．２ｇを、硫酸
ヒドラジン０．６ｇとともにヒドラジン一水和物６０ｍＬに溶解させる。 この溶液を攪拌しながら、反応を６０℃で２４時間進行させた後、エタノール
１２０ｍＬを加えて停止する。これによって形成されたゼラチン様の沈殿をエタ
ノールで洗浄した後、減圧下、室温で乾燥する。 中間体生成物を水６０ｍＬおよび１０％酢酸ナトリウム溶液２５ｍＬからなる
混液に溶解させ、最後に濃度０．５Ｍのヨウ素酸溶液３０ｍＬで処理する。攪拌
しながら約３０分間反応させた後、過剰のヨウ素をヨウ化水素酸の５７％溶液６
ｍＬで滴定する。この操作の間、反応容器を氷冷しておくのが好ましい。 次いで濃い茶色の溶液をジエチルエーテル４０ｍＬで少なくとも５回処理し、
修飾ポリマーを含む水溶液から反応残留物を抽出する。最後にこれを減圧下、４
０℃で濃縮し、容量約５０ｍＬにした後、テトラブチルアンモニウムヒドロキシ
ドの４０％ｗ／ｖ溶液で活性化させたスルホン酸樹脂２５ｍＬを充填したイオン
交換カラムに通してろ過する。

【００７５】 次いで、テトラブチルアンモニウム塩形態の修飾されたポリサッカライド（Ｈ
ＡＴＢＡ）を含む水溶液を収集し、１凍結乾燥サイクルに付する。 ＴＢＡの凍結乾燥ＨＡ塩１．６５ｇをジメチルホルムアミド５５ｍＬに溶解さ
せ、このようにして得られた溶液に、濃度５０ｍｇ／ｍＬのＮ−Ｎジメチルホル
ムアミド スルホトリオキシド複合体の溶液３．０ｍＬを加える。この反応を４ ℃で６時間、穏やかに攪拌し続けながら継続させた後、冷蒸留水５５ｍＬを加え
て停止させる。ＮａＯＨの２Ｍ溶液で中和し、ｐＨを７．５から８の範囲にし、
次いで孔サイズＧ２の Gooch フィルターを通してろ過し、エタノール３００ｍ Ｌで処理する。 これにより形成された沈殿を少なくとも１５０ｍＬのエタノールで洗浄し、少
なくとも１６時間減圧乾燥した後、蒸留水５０ｍＬに再溶解させ、次いで水５０
容量に透析する。

【００７６】 生成物を凍結乾燥し、次いで特徴付けして、Ｎ−置換アミノ基のパーセンテー
ジおよびその平均分子量を決定する。 凍結乾燥生成物の重量： ０．９８ｇ； 収率： ８９％ ＳＯ₃−（モル）／ＨＡ（単量体ユニット、モル） ０．２３ 遊離−ＮＨ₂基（モル）／ＨＡ（モル）： ０．２４ 脱Ｎ−アセチル化（％）： ２４％ 再Ｎ−硫酸化（％）： ２３％ Ｎ−硫酸化反応の収率： ９６％ 平均分子量： 161,000 Ｄａ

【００７７】 ｃ）部分的に２−Ｎ−硫酸化され（Ｎ−アセチル基の約２５％が硫酸化されてい
る基によって置換されている）、かつ６−Ｏ−硫酸化されているヒアルロン酸の
製造 発酵によって得られた平均分子量１９５，０００ＤａのＨＡ５．０ｇを、硫酸
ヒドラジン２．５ｇとともにヒドラジン一水和物２５０ｍＬに溶解させる。 この反応を、攪拌しながら、６０℃で２４時間維持した後、エタノール５００
ｍＬを加えて停止する。これによって形成されたゼラチン様の沈殿をエタノール
で洗浄した後、減圧下、室温で乾燥する。 中間体生成物を水２５０ｍＬおよび１０％酢酸ナトリウム溶液１０５ｍＬから
なる混液に溶解させ、最後に濃度０．５Ｍのヨウ素酸溶液１２５ｍＬで処理する
。攪拌しながら約３０分間反応させた後、過剰のヨウ素をヨウ化水素酸の５７％
溶液２５ｍＬで滴定する。この操作の間、反応容器を氷冷しておくのが好ましい
。

【００７８】 次いで濃い茶色の溶液をジエチルエーテル１５０ｍＬで少なくとも５回処理し
、修飾ポリマーを含む水溶液から反応残留物を抽出する。最後にこれを減圧下、
４０℃で濃縮し、容量を約２００ｍＬにした後、テトラブチルアンモニウムヒド
ロキシドの４０％ｗ／ｖ溶液で活性化させたイオン交換スルホン酸樹脂１００ｍ
Ｌを充填したカラムに通してろ過する。 次いで、テトラブチルアンモニウム塩形態の修飾されたポリサッカライド（Ｈ
ＡＴＢＡ）を含む水溶液を収集し、１凍結乾燥サイクルに付する。 ＴＢＡの凍結乾燥ＨＡ塩６．０ｇをジメチルホルムアミド３００ｍＬに溶解さ
せ、このようにして得られた溶液に、濃度５０ｍｇ／ｍＬのＮ−Ｎジメチルホル
ムアミド スルホトリオキシド複合体の溶液１３ｍＬを加える。この反応を４℃ で６時間、穏やかに攪拌し続けながら継続させる。

【００７９】 ジメチルスルホキシド中に濃度５０ｍｇ／ｍＬで溶解させたピリジン スルホ トリオキシドの複合体４０ｍＬから構成される第二の溶液を反応混合物に加える
。 約１６時間後、冷蒸留水２５０ｍＬを加え、２Ｍ ＮａＯＨで溶液を中和し、 ｐＨ８までにし、次いで孔サイズＧ３の Gooch フィルターを通してろ過し、エ タノール１，２５０ｍＬで処理する。 これにより形成された沈殿を少なくとも５００ｍＬのエタノールで洗浄し、少
なくとも１６時間減圧乾燥した後、蒸留水２５０ｍＬに再溶解させ、次いで水５
０容量に透析する。

【００８０】 生成物を凍結乾燥し、次いで特徴付けして、Ｎ−置換アミノ基のパーセンテー
ジ、６−Ｏ−硫酸化の程度およびその平均分子量を決定する。 凍結乾燥生成物の重量： ４．１２ｇ； 収率： ８２％ ＳＯ₃−（モル）／ＨＡ（単量体ユニット、モル） １．２４ 遊離−ＮＨ₂基（モル）／ＨＡ（モル）： ０．２６ 脱Ｎ−アセチル化（％）： ２６％ 再Ｎ−硫酸化（％）： ２４％ Ｏ−硫酸化（％）： １００％ 平均分子量： 170,000 Ｄａ

【００８１】 ｄ）部分的にＮ−硫酸化され、かつＯ−硫酸化されているヒアルロン酸のベンジ
ルエステルの製造 実施例３で得られた誘導体２．００ｇを蒸留水１００ｍＬに溶解させ、この溶
液を、テトラブチルアンモニウム ヒドロキシドで活性化されたイオン交換樹脂 （ＴＢＡ＋形態）４０ｍＬを前もって充填したガラスカラムを通してろ過する。
溶出液を凍結乾燥し、生成物３．３ｇを得た。 この生成物を、Ｎ−メチルピロリドン１３０ｍＬおよび水１．３ｍＬから構成
される混液に溶解させ、ベンジルブロミド０．２９ｍＬと４℃で反応させる。こ
の溶液を光源のないところで攪拌しながら、反応を２８℃で４８時間進行させた
後、酢酸エチル３００ｍＬを加える。

【００８２】 これにより形成された、主に修飾ポリサッカライドからなる沈殿をアセトン１
００ｍＬで洗浄し、次いで室温で減圧乾燥した後、１０％ｗ／ｖの塩化ナトリウ
ム溶液１００ｍＬで処理する。 食塩水での処理が終了した時点（約１時間で終了）で、生成物を、１５０ｍＬ
の水／アセトン２０：８０で洗浄し、最後にアセトン１００ｍＬで洗浄する。 ３０℃で４８時間乾燥した後、０．９２ｇ（収率８０％）を得た。 特徴付け： エステル化（％） ９６％

【００８３】 ｅ）部分的にＮ−硫酸化され、かつＯ−硫酸化されている１０％自己架橋ヒアル
ロン酸の製造 実施例３で得られた誘導体２．００ｇを蒸留水１００ｍＬに溶解させ、この溶
液を、テトラブチルアンモニウム ヒドロキシドで活性化されたイオン交換樹脂 （ＴＢＡ＋形態）４０ｍＬを充填したガラスカラムに通してろ過する。溶出液を
凍結乾燥し、生成物３．３ｇを得た。 この生成物を、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）１６５ｍＬおよび水０．８ｍ
Ｌで構成される混液に溶解させ、次いで、２−クロロ−１−メチルピリジンヨー
ダイド２０５ｍｇをＮＭＰ８．２ｍＬ中に溶解させることによって得られた溶液
と反応させる。反応を−２０℃で１８時間進行させた後、３％酢酸アンモニウム
水溶液１６５ｍＬを加える。

【００８４】 この混合物を約４時間継続して攪拌した後、エタノール６５０ｍＬで処理する
。これにより形成された沈殿をろ過によって分離し、エタノールで洗浄し、次い
で２４時間減圧乾燥する。 次いで生成物を、イオン交換に有利なように、３％塩化ナトリウム溶液６０ｍ
Ｌで処理し、最後にエタノール１８０ｍＬをこの溶液に加えて再び沈殿させる。
上清を除去した後、この生成物を、エタノール５０ｍＬで少なくとも３回洗浄し
、次いでアセトン１００ｍＬで処理した後、最後に３０℃で４８時間乾燥する。 これにより、硫酸化され、かつ部分的に自己架橋された誘導体０．９７ｇを得
た。

【００８５】 ｆ）部分的にＮ−硫酸化され、かつＯ−硫酸化されているヒアルロン酸のベンジ
ルエステルのフィルムの製造 濃度１８０ｍｇ／ｍＬの、部分的にＮ−硫酸化され、かつＯ−硫酸化されてい
るヒアルロン酸のベンジルエステルのジメチルスルホキシド溶液を調製する。 薄層の溶液をガラスプレートに広げる：溶液層の厚さは最終フィルムより１０
倍厚くなければならない。エステルを溶解させることなしに、このジメチルスル
ホキシドを吸収したガラスプレートをエタノールに浸し、これを固化する。この
フィルムをガラスプレートから分離し、エタノール、水、次いで再びエタノール
で繰り返し洗浄する。 得られたフィルムを３０℃で４８時間加圧下で乾燥する。

【００８６】 ｇ）部分的に２−Ｎ−硫酸化され（２５％）、かつ６−Ｏ−硫酸化されているヒ
アルロン酸誘導体の銀塩の製造 実施例２にしたがって得られた化合物０．５０ｇを蒸留水２５ｍＬに溶解させ
、得られた溶液を、Ｈ⁺形態の強いイオン交換樹脂１６ｃｍ³を充填したカラムに
通してろ過する。溶出液を回収し、凍結乾燥する。凍結乾燥によって得られた酸
形態の中間体生成物を、光源のないところで攪拌しながら、ＡｇＮＯ₃の０．５ Ｍ溶液２０ｍＬで６０分間処理する。 液相をろ過によって除去し、生成物を蒸留水１５０ｍＬ、次いで無水エタノー
ル５０ｍＬで十分に洗浄する。硫酸化されたヒアルロン酸誘導体、銀塩を４０℃
で減圧乾燥した後、０．６４９ｇを得た（収率９５％）。

【００８７】 該ヒアルロン酸誘導体は、単独で、互いに組み合わせて、あるいは天然、半合
成または合成ポリマーと組み合わせて用いることができる。用いることができる
天然ポリマーには、例えばコラーゲン、コラーゲンおよびグリコサミノグリカン
の共沈殿、セルロース、およびキチン、キトサン、ペクチンまたはペクチン酸、
寒天、アガロース、キサン、ゲランゴム、アルギン酸またはアルギナート、ポリ
マンナンまたはポリグリカン、デンプン、天然ゴムのようなゲル形態のポリサッ
カライドなどがある。半合成ポリマーは、例えばアルデヒドまたはその前駆体、
ジカルボン酸またはそのハロゲン化物、ジアミンのような物質と架橋されたコラ
ーゲン、セルロース、キチンまたはキトサン、ゲランゴム、キサン、ペクチンま
たはペクチン酸、ポリグリカン、ポリマンナン、寒天、アガロース、天然ゴム、
グリコサミノグリカンの誘導体からなる群から選択され得る。最後に、用いるこ
とができる合成ポリマーの例には以下のものがある：ポリ乳酸、ポリグリコール
酸または同物質の共重合体またはそれらの誘導体、ポリジオキサン、ポリホスフ
ァゼン（polyphosphazene)、ポリスルホン樹脂、ポリウレタン樹脂、ＰＴＦＥ。

【００８８】 本特許出願において用いられるヒアルロン酸エステルのうち、カルボキシ基の
５０−１００％、好ましくは６０−１００％；より好ましくは７５−１００％が
エステル化されているベンジルエステル、エチルエステルまたはプロピルエステ
ルを用いるのが好ましい。７５％から１００％の範囲のカルボキシ基がエステル
化され、残りのパーセンテージがアルカリ金属およびアルカリ土類金属、好まし
くはナトリウムによって塩化されているベンジルエステルが特に好ましい。また
、カルボキシ基の一部がアリール化脂肪族のアルコールでエステル化されており
、カルボキシ基の他の部分が１０から２２個の炭素原子の直鎖脂肪族アルコール
で誘導体化されているヒアルロン酸のエステル誘導体も好ましい。このようなエ
ステル誘導体のうち以下の化合物が特に好ましい： ベンジルアルコール（７５％）およびドデシルアルコール（２５％）でエステ
ル化されているヒアルロン酸 ベンジルアルコール（７５％）およびヘキサデシルアルコール（２５％）でエ
ステル化されているヒアルロン酸 ベンジルアルコール（７５％）およびオクタデシルアルコール（２５％）でエ
ステル化されているヒアルロン酸 ベンジルアルコール（７５％）、エイコサニルアルコール（eicosanyl alcoho
l)（２０％）でエステル化され、ナトリウム（５％）で塩化されているヒアルロ
ン酸；および ベンジルアルコール（７５％）、ドコサニルアルコール（docosanyl alcohol)
（１５％）でエステル化され、ナトリウム（１０％）で塩化されているヒアルロ
ン酸。

【００８９】 本発明の好ましい架橋誘導体は０．５％から５０％まで；好ましくは０．５％
から２０％まで、さらに好ましくは３％から１０％まで架橋されているものであ
る。 特許第ＥＰ ０２１６４５３号、第ＥＰ ０３４１７４５号、第ＵＳ ５，５２ ０，９１６号、第ＥＰ ０５１７５６５号、第ＥＰ ０５７１４１５号、第ＷＯ ９４／０３２１２号に報告されている手法にしたがい、この生体適合材料をフィ
ルム、ゲル、スポンジ、ガーゼ、不織物、膜、ミクロスフェア、マイクロカプセ
ル、およびガイドチャンネルの形態に調製することができる。

【００９０】 本発明の１つの好ましい態様では、ポリサッカライド誘導体を糸形態で製造す
る。特に興味深いものの中には、カルボキシ官能基の一部がアリール化脂肪族の
アルコール、例えばベンジルアルコールでエステル化されており、カルボキシ官
能基の別の部分が、例えば国際特許出願第ＷＯ ９８／０８８７６号に開示され ているもののような、１０から２２個の範囲の炭素原子を有する、長鎖の直線状
脂肪族アルコールで誘導体化されているヒアルロン酸のエステル誘導体から作ら
れた糸がある。 また糸には、場合により、他の生体適合ポリマー、例えばポリカプロラクトン
、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、ＰＴＦＥおよびポリヒドロキシ酪酸などを含ま
せることもできる。ヒアルロン酸誘導体からなる糸は、吻合、特に心臓血管分野
における縫合糸として用いることができ、あるいは吻合される血管または他の器
官の周りに用いられるべきメッシュ、編物、不織物、チューブまたは他の材料の
製造に用いることができる。

【００９１】 さらにこれらの生体適合材料を、種々の他の形態のヒアルロン酸、ゲランまた
はアルギナートの誘導体の組み合わせによって構成することができ、これらには
薬理学的に活性な物質、例えば止血剤および抗炎症剤、抗生物質、抗血栓剤、プ
ラスミノーゲンを活性化することができる因子および／または成長因子を含ませ
ることができる。 特に興味深いのは、生体適合材料が止血剤を包含することである。包含させる
ことができる止血剤の例には、アドレナロン、アドレノクロム、アミノクロム、
バトロキソビン（batroxobin）、サリチル酸カルバゾクローム、硫酸ナトリウム
カルバゾクローム（carbazochrome sodium sulfonate）、ケファリン、コタルニ
ン、エタムシレート、因子ＶＩＩＩ、ＩＸ、ＸＩＩＩ、フィブリノーゲン、１，
２−ナフトキノン、１−ナフチルアミン−４−スルホン酸、オキサマリン（oxam
arin）、酸化セルロース止血コロジオン、サルマリン（sulmarin）、トロンビン
、トロンボプラスチン、塩化トロニウム、トラネキサム酸、バソプレシンおよび
ビタミンＫ２、Ｋ５およびＫ−Ｓ（ＩＩ）がある。

【００９２】 本発明に記載の生体適合材料を、単独で、あるいは上記誘導体であってもよい
もう１つの材料と組み合わせ、心臓血管および腹膜手術のような手術において用
い、その体液吸収能を利用して、外科手術にかかわる部位におけるその蓄積を減
少させるのは特に興味深い。 この体液を吸収する作用を用い、そのような蓄積が回避されるべき吻合手術に
おいて利益を得ることができる。

【００９３】 発明の例示的態様 試験例１ フィルム形態の８０％エステル化されているヒアルロン酸のベンジルエステル
およびゲル形態の５％自己架橋されているヒアルロン酸誘導体を含む生体適合材
料に対する、ラットの血管および血管周囲組織の応答の評価

【００９４】 材料および方法 ８匹のラットの予備分析により、静脈吻合後の処置用の、好ましい生体適合材
料の形態はゲル形態であるが、動脈吻合後の処置の場合では、好ましい処置はフ
ィルムであり、あるいは出血が穏やかな場合にはゲルであることが確認された。 フィルムを静脈に適用すると、過度の血管収縮を引き起こし得るため、静脈吻
合後の処置ではゲルが好ましい。ゲルはこのような収縮を全く引き起こさず、ゲ
ルの付着性は接合箇所に封をし、縫い目を通した出血を防止する。 動脈内の血圧は非常に高いので、フィルムを用いるのがより適当であり、ある
いは穏やかな出血だけである場合には、ゲルが適当であり得る。 平均重量３７０ｇ（２９５ｇから４８０ｇの範囲）の、成体の雄性 Sprague D
awley ラット４８匹を用いた。 ラットをまずエーテルで麻酔し、次いで腹膜内経路で４０ｍｇ／ｋｇのペント
サルを投与し、大腿血管を切開した。 血管の直径をグラフ用紙で測定した後、クランプで循環を遮断し、血管を切断
した。 被検動物をラット２４匹を含む２つの群に細別した。

【００９５】 第一群−ラット２４匹 各ラットは両後肢の静脈吻合手術を受けた。 この群では、まず両後肢の静脈が８から１０針の範囲の縫い目の吻合手術を受
け、次いでその一方は自己架橋された化合物のゲルを縫い線の周りに広げて処置
された後、血流を回復させたが、反対の後肢の静脈は生体適合材料で処置せず、
すなわち対照標準とした。

【００９６】 第二群−ラット２４匹 各ラットは、一方の後肢に静脈吻合を、他方の後肢に動脈吻合を受けた。 静脈を自己架橋された化合物のゲルで覆い、動脈をヒアルロン酸ベンジルエス
テルのフィルムで覆った。 各群を、それぞれラット６匹の４群に細別し、生体適合材料の適用後、その吻
合をそれぞれ１０、１５、２５および４５日後に観察し、標本を組織学的に試験
した。 血管の開存性の臨床評価を、O'Brien, B. McC. (1997,"Microvascular Recons
tructive Surgery", Edinburgh: Churchill Livingstone）に記載の開存性試験 によって行った。 血管周囲の組織のサンプルを観察し、繊維形成および癒着の発生を評価した。

【００９７】 結果： この試験の結果を表１および２にまとめる。 １５の大腿静脈が閉塞され、５７開存性であることがわかった（開存率７９．
１４％）。

【表６】 表１ 静脈＋ゲル 自己架橋ヒアルロン酸ゲルで処置された静脈 動脈＋フィルム ヒアルロン酸ベンジルエステルのフィルムで処置され
た動脈

【００９８】

【表７】 表２

【００９９】 この結果は、平均の出血時間の減少、特に自己架橋された化合物で構成された
ゲルで処置された静脈の場合、繊維形成の減少および処置された血管周りの瘢痕
組織形成の減少を示した。 種々の日数後の、第一および第二群から無作為に選択された約２０の血管に対
して行われた標本の組織学的分析では、静脈および動脈は、血管内膜の穏やかな
繊維質の肥厚化によってわずかに狭められていることもあるが、一般に開存性で
あることが示された。血管壁に付着した、目に見える小さい血栓がただ一例存在
しただけであった。

【０１００】 内皮は肥厚しておらず、目に見える繊維形成または癒着は存在せず、見たとこ
ろ良好かつ全く完全でさえあった。ヘマトキシリン−エオシン（Hematoxylin-eo
sin）染色によっては、外科手術の瘢痕作用に起因する、散在する繊維形成領域 を除いて、血管壁に対する他の構造的変化は全く示されなかった。 顕微鏡下で外来の非晶性、複屈折性材料として見える、手術に用いられる外科
手術材料は、リンパ球、血漿細胞および多核性組織細胞の存在によって特徴付け
られる肉芽腫反応の断片によって取り巻かれていた。 顆粒性白血球型炎症の徴候は見られなかった。

【０１０１】 このように本発明を記載してきたが、これらの方法が種々に修飾可能であるこ
とが明らかである。このような修飾は、本発明の精神および目的から逸脱してい
ると考えるべきではなく、当業者に明白であり得るいかなる修飾も上記請求の範
囲の範囲内であるものとして考えるべきである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ， ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，Ｌ Ｖ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ， ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，Ｕ Ｓ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4C081 AB13 AC03 BA01 BA11 BA17 BB01 BB04 CA132 CA152 CA172 CA192 CA212 CA282 CB041 CC05 CD011 CD012 CD022 CD032 CD041 CD042 CD052 CD081 CD092 CD112 CD132 CE01 CE02 DA01 DA02 DA04 DA05 DA12 EA05

Claims (33)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 物理的な止血性質および吻合手術後の癒着形成を防止する性
   質を有する少なくとも１つのポリサッカライド誘導体を、場合により、天然、半
   合成または合成ポリマーおよび／または医薬的に活性な物質と組み合わせて含む
   生体適合材料。
2. 【請求項２】 生物学的体液に対する吸収性を有する少なくとも１つのポリ
   サッカライド誘導体を、場合により、天然、半合成または合成ポリマーおよび／
   または医薬的に活性な物質と組み合わせて含む生体適合材料。
3. 【請求項３】 ポリサッカライド誘導体がヒアルロン酸誘導体、ゲラン誘導
   体またはアルギナート誘導体である、請求項１または２に記載の生体適合材料。
4. 【請求項４】 ヒアルロン酸誘導体が、カルボキシ官能基の一部または全部
   が脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、シクロ脂肪族、ヘテロ環式族のアルコール
   でエステル化されているヒアルロン酸エステルである、請求項３に記載の生体適
   合材料。
5. 【請求項５】 ヒアルロン酸誘導体が、カルボキシ基の一部または全部が同
   ポリサッカライド鎖または他の鎖のアルコール官能基によってエステル化されて
   いるヒアルロン酸の自己架橋されたエステルである、請求項３に記載の生体適合
   材料。
6. 【請求項６】 ヒアルロン酸誘導体が、カルボキシ基の一部または全部が脂
   肪族、芳香族、アリール脂肪族、シクロ脂肪族、ヘテロ環式族のポリアルコール
   でエステル化され、スペーサー鎖によって架橋が生成されているヒアルロン酸の
   架橋された化合物である、請求項３に記載の生体適合材料。
7. 【請求項７】 ヒアルロン酸誘導体が、一部のカルボキシ基がアリール化脂
   肪族アルコールでエステル化され、別の部分のカルボキシ基が炭素原子１０から
   ２２個の範囲の直鎖脂肪族アルコールで誘導体化されているヒアルロン酸の化合
   物である、請求項３に記載の生体適合材料。
8. 【請求項８】 ヒアルロン酸誘導体が、ヒアルロン酸またはヒアルロン酸の
   部分エステルまたはトータルエステルのコハク酸ヘミエステルまたはコハク酸ヘ
   ミエステルの重金属塩である、請求項３に記載の生体適合材料。
9. 【請求項９】 ヒアルロン酸誘導体が、ヒアルロン酸の硫酸化またはＮ−硫
   酸化誘導体である、請求項３に記載の生体適合材料。
10. 【請求項１０】 天然ポリマーが、コラーゲン、コラーゲンおよびグリコサ
    ミノグリカンの共沈殿、セルロース、およびキチン、キトサン、ペクチンまたは
    ペクチン酸、寒天、アガロース、キサン、ゲランゴム、アルギン酸またはアルギ
    ナート、ポリマンナンまたはポリグリカン、デンプン、天然ゴムのようなゲル形
    態のポリサッカライドからなる群から選択される、請求項１または２に記載の生
    体適合材料。
11. 【請求項１１】 半合成ポリマーが、アルデヒドまたはその前駆体、ジカル
    ボン酸またはそのハロゲン化物、ジアミンのような物質と架橋されたコラーゲン
    、セルロース、ヒアルロン酸、キチン、キトサン、ゲランゴム、キサン、ペクチ
    ンまたはペクチン酸、ポリグリカン、ポリマンナン、寒天、アガロース、天然ゴ
    ム、グリコサミノグリカンの誘導体からなる群から選択される、請求項１または
    ２に記載の生体適合材料。
12. 【請求項１２】 合成ポリマーがポリ乳酸、ポリグリコール酸またはその共
    重合体またはその誘導体、ポリジオキサン、ポリホスファゼン、ポリスルホン樹
    脂、ポリウレタン樹脂、ＰＴＦＥからなる群から選択される、請求項１または２
    に記載の生体適合材料。
13. 【請求項１３】 ヒアルロン酸のエステル誘導体が６０から１００％の範囲
    内でエステル化されている、請求項４に記載の生体適合材料。
14. 【請求項１４】 ヒアルロン酸の自己架橋されている誘導体が０．５から２
    ０％の範囲内、好ましくは３％から１０％の範囲内で自己架橋されている、請求
    項５に記載の生体適合材料。
15. 【請求項１５】 フィルム、ゲル、スポンジ、ガーゼ、不織物、膜、ミクロ
    スフェア、マイクロカプセル、糸、ガイドチャンネルおよびその組み合わせの形
    態である、請求項１から１４のいずれか一項に記載の生体適合材料。
16. 【請求項１６】 薬理的に活性な物質が、抗炎症剤または止血剤、抗生物質
    、抗血栓剤、プラスミノーゲン活性化因子、成長因子からなる群から選択される
    、請求項１または２に記載の生体適合材料。
17. 【請求項１７】 吻合手術において用いるための、ならびに吻合手術後の癒
    着形成を妨げるための医薬組成物の製造における、少なくとも１つのポリサッカ
    ライド誘導体と、場合により、天然、半合成または合成ポリマーおよび／または
    医薬的に活性な物質とを組み合わせて含む生体適合材料の使用。
18. 【請求項１８】 ポリサッカライド誘導体がヒアルロン酸誘導体である、請
    求項１７に記載の生体適合材料の使用。
19. 【請求項１９】 ヒアルロン酸誘導体が、カルボキシ官能基の一部または全
    部が、脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、シクロ脂肪族、ヘテロ環式族のアルコ
    ールでエステル化されているヒアルロン酸エステルである、請求項１７または１
    ８に記載の生体適合材料の使用。
20. 【請求項２０】 ヒアルロン酸誘導体が、カルボキシ基の一部または全部が
    、同じポリサッカライド鎖または他の鎖のアルコール官能基でエステル化されて
    いるヒアルロン酸の自己架橋されているエステルである、請求項１７または１８
    に記載の生体適合材料の使用。
21. 【請求項２１】 ヒアルロン酸誘導体が、カルボキシ基の一部または全部が
    脂肪族、芳香族、アリール脂肪族、シクロ脂肪族、ヘテロ環式族のポリアルコー
    ルでエステル化され、スペーサー鎖によって架橋が生成されているヒアルロン酸
    の架橋されている化合物である、請求項１７または１８に記載の生体適合材料の
    使用。
22. 【請求項２２】 ヒアルロン酸誘導体が、ヒアルロン酸またはヒアルロン酸
    の部分エステルまたはトータルエステルのコハク酸へミエステルまたはコハク酸
    ヘミエステルの重金属塩である、請求項１７または１８に記載の生体適合材料の
    使用。
23. 【請求項２３】 ヒアルロン酸誘導体が硫酸化あるいはＮ−硫酸化されてい
    るヒアルロン酸誘導体である、請求項１５または１６に記載の生体適合材料の使
    用。
24. 【請求項２４】 天然ポリマーが、コラーゲン、コラーゲンおよびグリコサ
    ミノグリカンの共沈殿、セルロース、およびキチン、キトサン、ペクチンまたは
    ペクチン酸、寒天、アガロース、キサン、ゲランゴム、アルギン酸またはアルギ
    ナート、ポリマンナンまたはポリグリカン、デンプン、天然ゴムのようなゲル形
    態のポリサッカライドからなる群から選択される、請求項１７または１８に記載
    の生体適合材料の使用。
25. 【請求項２５】 半合成ポリマーが、アルデヒドまたはその前駆体、ジカル
    ボン酸またはそのハロゲン化物、ジアミンのような物質と架橋されているコラー
    ゲン、セルロース、ヒアルロン酸、キチンまたはキトサン、ゲランゴム、キサン
    、ペクチンまたはペクチン酸、ポリグリカン、ポリマンナン、寒天、アガロース
    、天然ゴム、グリコサミノグリカンの誘導体からなる群から選択される、請求項
    １７または１８に記載の生体適合材料の使用。
26. 【請求項２６】 合成ポリマーが、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、またはそ
    の共重合体またはその誘導体、ポリジオキサン、ポリホスファゼン、ポリスルホ
    ン樹脂、ポリウレタン樹脂、ＰＴＦＥからなる群から選択される、請求項１７ま
    たは１８に記載の生体適合材料の使用。
27. 【請求項２７】 請求項１７から２６のいずれか一項に記載の生体適合材料
    の、心臓血管手術および腹膜手術における使用。
28. 【請求項２８】 ヒアルロン酸のエステル誘導体が、６０から１００％の範
    囲のエステル化パーセンテージを有している、請求項１９に記載の生体適合材料
    の使用。
29. 【請求項２９】 ヒアルロン酸の自己架橋されている誘導体が、０．５％か
    ら２０％の範囲、好ましくは３％から１０％の範囲の架橋パーセンテージを有し
    ている、請求項２０に記載の生体適合材料の使用。
30. 【請求項３０】 フィルム、ゲル、スポンジ、ガーゼ、不織物、膜、ミクロ
    スフェア、マイクロカプセル、糸、ガイドチャンネルおよびこれらの組み合わせ
    の形態の、請求項１７から２９のいずれか一項に記載の生体適合材料の使用。
31. 【請求項３１】 薬理的に活性な物質が、抗炎症剤、止血剤、抗生物質、抗
    血栓剤、プラスミノーゲン活性化因子、成長因子からなる群から選択される、請
    求項１７または１８に記載の生体適合材料の使用。
32. 【請求項３２】 薬理的に活性な物質がフィブリノーゲンおよびトロンビン
    である、請求項１または２に記載の生体適合材料。
33. 【請求項３３】 ヒアルロン酸誘導体が、カルボキシ基の一部がアリール化
    脂肪族のアルコールでエステル化され、カルボキシ基の他の部分が炭素原子１０
    から２２個の直鎖脂肪族アルコールで誘導体化されているヒアルロン酸の化合物
    である、請求項１７または１８に記載の生体適合材料の使用。