HU226866B1 - Fracture healing using pthrp analogs - Google Patents

Fracture healing using pthrp analogs Download PDF

Info

Publication number
HU226866B1
HU226866B1 HU0004560A HUP0004560A HU226866B1 HU 226866 B1 HU226866 B1 HU 226866B1 HU 0004560 A HU0004560 A HU 0004560A HU P0004560 A HUP0004560 A HU P0004560A HU 226866 B1 HU226866 B1 HU 226866B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
leu
glu
pthrp
asp
arg arg
Prior art date
Application number
HU0004560A
Other languages
English (en)
Inventor
Brian Henry Vickery
Original Assignee
Hoffmann La Roche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoffmann La Roche filed Critical Hoffmann La Roche
Publication of HUP0004560A2 publication Critical patent/HUP0004560A2/hu
Publication of HUP0004560A3 publication Critical patent/HUP0004560A3/hu
Publication of HU226866B1 publication Critical patent/HU226866B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/635—Parathyroid hormone, i.e. parathormone; Parathyroid hormone-related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/29—Parathyroid hormone, i.e. parathormone; Parathyroid hormone-related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

Az Amerikai Egyesült Államokban évente hozzávetőlegesen 8-10 millió csonttörést jelentenek, és ezek közül több mint 1 millió kórházi ápolást igényel. A csonttörések kezelésének éves becsült költsége több mint 20 milliárd dollár. Ez az összeg már önmagában jelentős, és a lakosság életkorának általános emelkedésével várhatóan növekedni fog. Bár az öregedéssel összefüggő csontveszteségek megelőzésére számos gyógykezelés ismert, a már bekövetkezett csonttörések kezelésére kevesebb eljárás áll rendelkezésre. Ezek többsége helyi gyógykezelést igényel, amely a szállítási nehézségek miatt és a gyenge beteg-együttműködés következtében hátrányos. A csontgyógyulás és törés-helyreállítás megkönnyítésére további módszerekre van szükség.
Az irodalomban nemrégen arról számoltak be, hogy parathyroid hormonnal (PTH) végzett időszakos kezelés ovariectomizált patkányon a töréses gyógyulást javítja, és ez azt jelzi, hogy a PTH-kezelés klimax utáni osteoporotikus törések kezelésénél potenciálisan hasznos lehet [H. W. Kim et al.; Transactions of the, 43rd Annual Meeting of the Orthopaedic Research Society, 22. kötet, 1. szekció, 18-31. Abstract, február 9-13 (1997); H. W. Kim et al.; Journal of Boné and Mineral Research, 11. kötet, 1. kiegészítés, 152. oldal, 248. oldal, augusztus (1996)]. Más kutatók arról számolnak be, hogy a morfo-
Alá 1 Val Ser Glu His 5 Gin Leu Leu His
Gin Asp Leu Arg Arg 20 Arg Phe Phe Leu
Ile His Thr Alá (SEQ IDNO:1).
genetikus fehérje-4-et és/vagy a PTH egyik fragmensét (1-34 aminosav) kifejező génaktivált mátrixnak szegmentált csonttöréshiányos patkánymodellbe történő beültetése új csontképződést idéz elő, amely a csonthiányt a kezeletlen kontrolihoz viszonyítva gyorsabban hidalja át [Jianming Fang et al.; Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), Vol. 93; 5753-5758, június (1996)]. Az irodalom szerint különböző PTH-analógok osteoporosis kezelésére alkalmazhatók (5 556 940 és 5 559 792 sz. USA szabadalmi leírás). A törésgyógyítás további módszerei közé tartozik a humán vérlemezkefaktor 4 (5 622 935 sz. USA szabadalom), benzo-tiofének (5 502 074 sz. USA szabadalom) és 24,25-dihidroxi-D3-vitamin (5 069 905 sz. USA szabadalom) alkalmazása.
A korábban rosszindulatú humorális hiperkalcémiáért felelős faktorként ismert PTH-rokon-peptid (PTHrP) egy, a PTH/PTHrP receptorhoz kötődő, 138-174 aminosavból álló peptid (alternatív hasítástól függően). A PTHrP N-terminális 34 aminosavszekvenciája a PTH-hoz korlátozott szekvenciahomológiát mutat, bizonyos esetekben azonban a PTH-hoz hasonló aktivitással rendelkezik. A PTHrP azonban a PTH-hoz viszonyítva általában kevésbé hatékony, gyengébb csontanabolizáló hatást fejt ki és a törésgyógyítással nem hozták összefüggésbe.
A hPTHrP (1-34) szekvenciája a következő:
Lys Gly Lys Ser Lle 15
His Leu Ile Alá Glu 30
A PTHrP számos rövidített homológját és analógját leírták. Az irodalom szerint osteoporosis kezelésére alkalmazhatók az olyan analógok, amelyekben a PTHrP (1-34) 22-31 aminosavmaradékának helyén amfipatikus alfa-hélix van jelen (5 589 452 sz. USA szabadalmi leírás és WO 97/07815 sz. nemzetközi közrebocsátási irat) és rokon származékai [Β. H. Vickery et al., J. Boné & Mineral Research, 11(12): 1943-1951 (1996); D. Leaffer et al. Endocrinology, 136(8):3624-3631 (1995)]. Osteoporosis kezelésére használható további PTHrP analógokat ismertet a WO 95/02610, WO 94/01460, WO 96/40775 és WO 98/30590 sz. nemzetközi közzétételi irat. A PTHrP (1-34) és PTHrP (7-34) monociklikus és biciklikus analógjai a PTH receptorhoz erősen kötődnek és osteoblastszerű sejtekben a PTH által serkentett adenil-cikláz-aktivitást serkentik (vagy antagonizálják) [Michael Chorev et al. Biochemistry, 36:3293-3299 (1997), és WO 96/40193 sz. nemzetközi közrebocsátási irat].
A találmány tárgyát képezi a paratiroid hormonnal rokon peptid (PTHrP) olyan polipeptidanalógjainak és ezek sóinak felhasználása csontgyógyításra és töréshelyreállításra szolgáló gyógyászati készítmények előállítására, ahol az analóg egy 30-50 aminosavmaradékot tartalmazó N-terminális rövidített szekvencia, amelyben a PTHrP analóg 22-31 aminosavmaradéka amfipatikus alfa-hélixet képez, és az amfipatikus alfahélix a
Glu Leu Leu Glu Xaa Leu Leu Glu Lys Leu képletnek felel meg - a képletben Xaa pozitív töltést hordozó aminosavmaradékot jelent.
A fenti amfipatikus hélix előnyös kiviteli alakjainak a PTHrP szekvenciába - különösen a humán PTHrP N-terminális rövidített szekvenciájába (1-38 aminosavból az 1-32 maradék) - történő beillesztésekor kapott polipeptidek csontgyógyulásnál és törés-helyreállításnál hatékonyak. A gyógyászati készítményt előnyösen szisztémásán adagoljuk.
Az ábrák rövid ismertetése
Az 1. ábrán patkány csonttörés modellben a szegmentált csonthiány hetenkénti radiográfiai sűrűségét mutatjuk be. A kezelést a PTHrP B vagy C analógjával 5 héten át végezzük és az eredményeket a szintén 5 hétig kezelt kontrollal hasonlítjuk össze. Az eredményekből látható, hogy 4 hét után a PTHrP analógokkal kezelt állatok csontnövekedése a
HU 226 866 Β1 kontrolinál nagyobb. PTHrP B és C analóg=(MAP1_10)22-31Ala19hPTHrP(1-34)NH2, illetve (MAP1_10)22_31His26-hPTHrP(1-34)NH2.
A 2. ábrán a szegmentált csont és az ellenoldali combcsont (kontroll) radiográfiai sűrűségarányát mutatjuk be szegmentált csonttöréshiány patkánymodellben. Az eredményeket a kontrollal vagy PTHrP B vagy C analóggal végzett 6 hetes kezelés után tüntetjük fel. A PTHrP B és C analóggal kezelt patkányok a kontrollállatokhoz viszonyítva nagyobb csontsűrűséget mutatnak.
A 3. ábrán csonthiány nagy feloldású radiográfját tüntetjük fel, szegmentált patkány csonttöréshiány modellben, a kontrollal (3A) vagy PTHrP C analóggal (3B) végzett 6 hetes kezelés után. A radiográfokból látható, hogy míg a kontrollcsonthiány nem forrt össze, addig a PTHrP C analóggal kezelt csonthiány meggyógyult.
A 4A. és 4B. ábrán nyúl membránon belüli csonthiányának gyógyulását mutatjuk be, a PTHrP D analóg (MAP1_10)22-31hPTHrP(1-34)NH2 két különböző dózisával végzett kezelés után.
Az 5. ábrán kortikoszteroid által késleltetett csonttörésmodellben a gyógyulás mértékét tüntetjük fel, PTHrP D analóggal, (MAP1_10)22_31hPTHrP(1-34)NH2 történő kezelés után.
Találmányunk további részleteit az alábbiakban ismertetjük.
A különböző szokásos nukleotidbázisok és aminosavak egybetűs és hárombetűs rövidítéseit az alábbi irodalmi helyen közölt ajánlás szerint alkalmazzuk: [Pure Appl. Chem. 37:639-645 (1972) és 40:277-290 (1974)]. A rövidítések L-aminosavakra vonatkoznak, feltéve, hogy mást nem közlünk (D- vagy D,L-aminosavak). Bizonyos, a természetben előforduló vagy elő nem forduló savak akirálisak (pl. glicin). Valamennyi peptidszekvenciát oly módon ábrázolunk, hogy az N-terminális aminosav a bal oldalon és a C-terminális aminosav a jobb oldalon helyezkedik el.
A találmány szerint felhasznált PTHrP analógokban a természetben előforduló és a természetben elő nem forduló aminosavak egyaránt szerepelhetnek. A természetben elő nem forduló aminosavak közül pl. az alábbiakat említjük meg (rövidítéseikkel együtt): homoszerin (hSer), homoszerin-lakton (hSerlac), homocisztein (Hcy), homoarginin (hArg), homocitrullin (Hci), penicillamin (Pen), Na-metil-arginin (N-MeArg), norleucin (Nle), norvalin (Nval), norizoleucin (Nile), N-metilizoleucin (N-Melle), fenil-glicin (PhG), t-butil-glicin (Tle), hidroxi-prolin (Hyp), 3,4-dehidroprolin (Δ-Pro), piroglutaminn (Pyr.Glp), ornitin (Orn), 1-amino-izovajsav (1-Aib), 2-amino-izovajsav (2-Aib), 2-amino-vajsav (2-Abu), 4-amino-vajsav (4-Abu), 2,4-diamino-vajsav (A2bu), α-amino-szuberénsav (Asu), albizzin (Abz), β-ciklohexil-alanin (Cha), 3-(1-naftil)-alanin (1-Nal), 3-(2-naftil)-alanin (2-Nal), citrullin (Cit), pipekolinsav (Pip), 4-klór-fenil-alanin (4-CIPhe), 4-fluor-fenil-alanin (4-Fphe), szarkozin (Sár) és 1-amino-propánkarbonsav (1-NCPC). A természetben előforduló és elő nem forduló aminosavak a kereskedelemben egyaránt beszerezhetők. Néhány forgalmazó: NovaBiochem (San Diego, CA, USA) és Bachem (Torrance, CA, USA).
A PTHrP polipeptidanalógokat a hPTHrP natív szekvenciájától való eltérésekre hivatkozva írjuk le. A (MAPi_i0) jelölés az alábbi amfipatikus spirális szekvenciára vonatkozik:
Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu (SEQ ID NO:2) (azaz a MAP-szekvencia 10 aminosavmaradékból áll).
Ennek megfelelően a (MAP1_10)22-31hPTHrP(1-34) jelölésű szekvencia a hPTHrP olyan 1-34 N-terminális maradékára vonatkozik, amelyben a 22-31 maradék közötti szegmenst a MAP-szekvencia helyettesíti. A MAP-szekvencián belül további változatok lehetségesek. így az (MAP1_10)22_31His26hPTHrP(1-34) jelölés a hPTHrP olyan 1-34 N-terminális maradékára vonatkozik, amelyben a 22-31 maradék közötti szegmenst egy olyan MAP-szekvencia helyettesíti, amelynek a 26-helyzetében hisztidin van jelen (a standard MAP-szekvenciában lizin szerepel).
Hasonlóképpen jelöljük a természetben előforduló szekvencia további variánsait. Az (MAP1_10)22_31Pro32hPTHrP(1-32) a hPTHrP
1-32 N-terminális maradékára vonatkozik, amely a 22-31-helyzetben MAP-szekvenciát és a 32-helyzetben prolint tartalmaz (a természetben előforduló hisztidin helyén). Az (MAP1_10)22_31D-Orn34laktámhPTHrP(1-34) jelölés a hPTHrP olyan 1-34 N-terminális maradékára vonatkozik, amely a 22-31-helyzetben MAP-szekvenciát és a 34-helyzetben ornitint tartalmaz, mimellett az ornitinoldallánc aminocsoportja és a karboxilvégcsoport között laktám alakul ki. Az (MAP1_10)22-31hSer34hPTHrP-(1-34)Thr His Ile Gin NH2 jelölés a hPTHrP olyan 1-34 N-terminális maradékára vonatkozik, amely a 22-31-helyzetben MAP-szekvenciát, a 34-helyzetben homoszerint, a 35—38-helyzetben további Thr His Ile Gin szekvenciát tartalmaz, és a karboxivégcsoport egy primer amid.
Az aminosavmaradékok között ciklizált kötéseket tartalmazó polipeptideket oly módon jelöljük, hogy a kapcsolódó maradékokat zárójelbe tesszük és eléjük „c” betűt írunk. A két maradék közötti kötések általában az oldalláncok funkciós csoportjai között alakulnak ki és tipikusan amid- vagy észterkötések. így az (MAP1_10)22-31c[Lys13, Asp17]hPTHrP(1-34)hSer34 lakton a hPTHrP olyan 1-34 N-terminális maradékára vonatkozik, amelyben a 22-31 maradék közötti szegmenst a MAP-szekvencia helyettesíti, a 13-helyzetű lizin aminooldallánca a 17-helyzetű aszpartát karboxiloldalláncával zár gyűrűt, és a 34-helyzetben további homoszerin van jelen, amelyben a homoszerin hidroxiloldallánca és a karboxilvégcsoport között lakton képződik. Hasonlóképpen az (MAP1_10)22-31c[Lys13,Asp17]hPTHrP (1-34) jelölés a hPTHrP olyan 1-34 N-terminális maradékára vonatkozik, amelyben a 22-31 maradék közötti szegmenst a
HU 226 866 Β1
MAP-szekvencia helyettesíti, és a 13-helyzetű lízin aminooldallánca a 17-helyzetű aszpartát karboxiloldalláncával gyűrűt zár.
A „hidrofil aminosav (Haa)” kifejezés olyan aminosavakra vonatkozik, amelyek a peptidkötés kialakításához szükségeseken kívül legalább egy hidrofil funkcionális csoportot tartalmaznak (pl. arginin, aszparagin, aszparaginsav, glutaminsav, glutamin, hisztidin, lízin, szerin, treonin és homológjaik).
A „lipofil aminosav (Laa)” kifejezés töltés nélküli, alifás vagy aromás aminosavakra vonatkozik (pl. izoleucin, leucin, metionin, fenil-alanin, triptofán, tirozin, valin és homológjaik).
A jelen találmány értelmében az alanin „amfifil” vegyületnek minősül, azaz hidrofil és lipofil vegyületnek egyaránt tekinthető.
A „PTHrP-vel analóg polipeptid” kifejezésen a PTHrP-hez viszonyítva a szakirodalomban elfogadott helyettesítéseket, törléseket vagy beillesztéseket tartalmazó polipeptidek, vagy a PTHrP-vel lényegében homológ polipeptidek értendők, amelyek a PTHrP-hez hasonló fiziológiai aktivitással rendelkeznek.
A „PTHrP gyógyászatilag aktív rövidített analógjai” kifejezés a PTHrP teljes szekvenciájánál kevesebb aminosavat tartalmazó, azonban hasonló gyógyászati hatással rendelkező polipeptidekre vonatkozik. Hasonló gyógyászati hatás kifejtéséhez a rövidített PTHrP analógnak a PTHrP-vel nem kell teljesen homológnak lennie. A rövidített analógok általában a C-terminuson vannak lerövidítve és 30-40 maradékot tartalmaznak, előnyösen PTHrP(1—32), PTHrP(1-34) és PTHrP(1-38).
Ezek a rövidített analógok előnyös képviselői, e vegyületcsoport azonban nincs ezekre a származékokra korlátozva. Az analógok általában az aminosavak szokásos helyettesítőit tartalmazzák.
A polipeptidekkel kapcsolatban használt „lényegében homológ” kifejezés azt jelenti, hogy a szóban forgó polipeptid a hivatkozott polipeptiddel legalább kb. 80%ban, általában legalább 90%-ban és előnyösen 95%ban homológ. A peptidek homológiáját általában szekvenciaanalízis-szoftware felhasználásával mérjük (Sequence Analysis Software Package of the Genetics Computer Group, University of Wisconsin Biotechnology Center, 1710 University Avenue, Madison, Wisconsin 53705 USA).
Az „amfipatikus alfa-hélix” kifejezés bizonyos polipeptidek által kialakított olyan szekunder szerkezetre vonatkozik, amelyekben az aminosavak alfa-spirális konfigurációjúak és a csavarvonal hossztengelye mentén szembenálló poláros és nem poláros részeket tartalmaznak. Az amfipatikus spirális szekvenciák megtervezése a szakember tudásához tartozik. A találmány szerinti eljárásnál felhasználható előnyös amfipatikus spirális szekvenciák pl. az 5 589 452 sz. amerikai szabadalmi leírásban vagy a WO 97/07815 sz. nemzetközi közrebocsátási iratban kerültek ismertetésre.
Találmányunk alapja az a felismerés, hogy a 22-31helyzetben amfipatikus alfa-hélixet tartalmazó bizonyos PTHrP analógok csontgyógyításnál és törés-helyreállításnál hatékonyak. Az amfipatikus alfa-hélix hidrofil aminosavakat (Haa) és lipofil aminosavakat (Laa) tartalmaz a Haa (Laa Laa Haa Laa)2 Laa szekvenciában elrendezve; közelebbről az amfipatikus alfa-hélix a
Glu Leu Leu Glu Xaa Leu Leu Glu Lys Leu képletnek felel meg - a képletben Xaa pozitív töltést hordozó aminosavmaradékot jelent.
A fenti amfipatikus hélixnek a PTHrP-szekvenciába - különösen a humán PTHrP N-terminális rövidített szekvenciájába (az 1-38 maradékból az 1-32 maradék) - történő beillesztésekor nyert polipeptidek csontgyógyításnál és törés-helyreállításnál hatékonyak. A PTH-val, valamint a fenti amfipatikus spirális szegmenst nem tartalmazó PTHrP-vel vagy analógjaival (mint amilyeneket például a WO 95/1 1697, WO 97/02834, WO 94/02510 és WO 96/40193 sz. nemzetközi közzétételi irat ismertet) ellentétben a találmány szerint felhasznált analógok hiperkalcémiát nem okoznak. Ezenkívül a találmány szerinti analógok a csontgyarapodást jobban segítik elő, mint a PTH vagy a PTHrP.
Megjegyezzük, hogy a 22-31-helyzetű amfipatikus hélix beiktatása mellett a PTHrP szekvenciájában az említett tartományon kívül a helyettesítések, törlések és beillesztések széles skálája elvégezhető, a polipeptid háromdimenziós szerkezetének megőrzése mellett. A PTH és PTHrP szekvenciájának a kapott analógok fiziológiai aktivitását megőrző különböző változtatásai pl. az alábbi irodalmi helyeken kerültek ismertetésre: 5 599 792, 5 556 940, 5 607 915 és 5 589 452 sz. amerikai szabadalmi leírás és WO 91/06564, WO 94/02510, WO 95/1 1697, WO 96/40193 és WO 97/07815 sz. nemzetközi közrebocsátási irat. A szakember számára várható, hogy az irodalomban elfogadott fehérjeszerkezet modellező módszerek segítségével a fiziológiai aktivitást megtartó további variánsok állíthatók elő. A variánsok előállítására felhasználható módszerek közül többek között az alábbi irodalmi helyeken leírtakat említjük meg: I. Ladunga és R. F. Smith, Protein Eng., 3.Ί87-196 (1997) és M. J. Thompson és R. A. Goldstein, Proteins, 1:28-37 (1996).
Találmányunk értelmében olyan helyettesítéses variánsokat alkalmazhatunk, amelyeknél a natív szekvencia legalább egy aminosavát eltávolítjuk és helyette ugyanerre a helyre egy másik aminosavat helyezünk. A helyettesítés egyszeres vagy többszörös lehet, amikor is ugyanabban a molekulában csak egy aminosavat, illetve két vagy több aminosavat helyettesítünk és általában a szokásos helyettesítések végezhetők el. így egy hidrofil aminosavnak egy másik hidrofil aminosavra, vagy egy hidrofób aminosavnak egy másik hidrofób aminosavra történő lecserélése esetén képezett variáns várhatóan a prekurzor törésgyógyító tulajdonságaihoz hasonló hatással rendelkezik. A helyettesítések közé tartoznak az olyan PTHrP analógok, amelyekben a C-terminális maradék amid formájában van jelen. További helyettesítések töltéssel rendelkező vagy töltést nem tartalmazó aminosavakon egyaránt elvégezhetők. A fenti csoportok a helyettesítések megkönnyítése céljából alcsoportokba sorolhatók.
HU 226 866 Β1
Töltéssel rendelkező aminosavak:
savas maradékok: aszparaginsav, glutaminsav,
2-amino-szuberénsav;
bázikus maradékok: lizin, arginin, hisztidin, ornitin.
Töltéssel nem rendelkező aminosavak:
hidrofil maradékok: szerin, treonin, aszparagin, glutamin, metionin; alifás maradékok: glicin, alanin, valin, leucin, norleucin, izoleucin; nem poláros maradékok: cisztein, homocisztein, metionin, prolin;
aromás maradékok: fenil-alanin, tirozin, triptofán, hisztidin.
Alternatív módon az aminosavhelyettesítések a bioizosztéria elvén alapulhatnak. A bioizoszter helyettesítések általában minimumra csökkentik a véletlenszerű helyettesítések károsító komformációs hatásait. Az „alanin scanning” módszert használhatjuk azon helyzetek azonosítására, amelyeken az izoszter helyettesítés a fiziológiai aktivitást megtartó variánsok keletkezése mellett elvégezhető, lásd pl. [K. H. Pearce Jr., Μ. H. Ultsch, R. F. Kelley, A. M. de Vos és J. A. Wells, Biochemistry, 35(32): 10 300-10 307 (1996); és B. Li, J. Y. Tóm, D. Oare, R. Yen, w. J. Fairbrother, J. A. Wells és B. C. Cunningham, Science, 270, 1657-1660 (1995)].
Az izoszter aminosavak előnyös képviselőit az alábbi táblázatban tüntetjük fel.
Aminosav Izoszter aminosav
Alá Ser, Gly
Glu Gin, Asp
Gin Asn, Glu
Asp Asn, Glu
Asn Alá, Asp
Leu Met, lle
Gly Pro, Alá
Lys Met, Arg
Ser Thr, Alá
Val lle, Thr
Arg Lys, Met, Asn
Thr Ser, Val
Pro Gly
lle Met, Leu, Val
Met lle, Leu
Phe Tyr
Tyr Phe
Cys Ser, Alá
Trp Phe
His Asn, Gin
A törléses variánsokat oly módon állítjuk elő, hogy a natív aminosavszekvencia egy vagy több aminosavát eltávolítjuk. Ennek során a molekula bizonyos tartományában általában egy vagy két aminosavat törlünk. A törléseket általában a szekvencia egyik végén - különösen a karboxilvégcsoporton - végezzük el. Előnyösek a PTHrP (1-34) fragmensek, azonban a karboxilvégcsoporton tovább rövidített szekvenciák is előnyös csontgyógyító hatással rendelkeznek.
A beillesztéses vagy addíciós variánsokat oly módon képezzük, hogy a natív szekvencia meghatározott helyzetében az egyik aminosav közvetlen szomszédságába valamely aminosavat illesztünk be. Az „egyik aminosav közvetlen szomszédságába” kifejezés azt jelenti, hogy az aminosav alfa-karboxil- vagy alfa-amino-csoportjához kapcsolódik. Az addíciós vagy beillesztéses variánsokat általában szintén a szekvencia valamelyik végén képezzük, előnyösen a karboxilvégcsoporton.
A natív szekvencia fent említett módosításai közül a helyettesítések és a karboxilvégcsoporton végrehajtott addíciók és törlések előnyösek.
A jelen találmány értelmében törésgyógyításra szolgáló gyógyszerkészítmények gyártására felhasználható polipeptid PTHrP analógok egy részét általánosságban ismerteti az 5 589 452 sz. USA szabadalom és a WO 97/07815 sz. nemzetközi közrebocsátási irat. További analógként az N-terminális hPTHrP( 1 —32), hPTHrP(1-34) és hPTHrP(1-38) gyűrűs analógjai említhetők meg, amelyek a 22-31-helyzet között MAPszekvenciát tartalmaznak és adott esetben a 13- és 17és/vagy 26- és 30-helyzetben oldallánc funkciós csoportjaikon keresztül kapcsolódó maradékokat tartalmaznak. A szakember által belátható, hogy a 13- és 17-helyzetben többfajta helyettesítés eszközölhető, amely az említett két helyzet közötti gyűrűzárást lehetővé teszi.
Találmányunk szerint bármely emlősfaj (pl. ember, szarvasmarha, sertés vagy nyúl) PTHrP analógja felhasználható, előnyösen humán PTHrP alkalmazható. A fent említett előnyös kiviteli alakoknak az irodalomban elfogadott elvek szerint készített helyettesítéses, törléses és beillesztéses variánsai szintén találmányunk tárgyát képezik.
Miként már közöltük, a találmány szerint felhasznált PTHrP analógokban a 22-31 aminosavmaradék által alkotott amfipatikus alfa-hélix a
Glu Leu Leu Glu Xaa Leu Leu Glu Lys Leu képletnek felel meg - a képletben Xaa pozitív töltést hordozó aminosavmaradékot jelent. Ez az amfipatikus alfa-hélix megfelelhet a korábban ismertetett MAPszekvenciának, ahol a 26-helyzetben pozitív töltést hordozó aminosavmaradékként lizin van jelen, de a 26-helyzetben más pozitív töltésű aminosav (például hisztidin) maradékát is tartalmazhatja.
Találmányunk előnyös kiviteli alakját képezi az alábbi osztályokba tartozó vegyületek felhasználása:
(MAPV1 o)22-31 h PTHrP-( 1 -34) N H2
Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lle Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Alá NH2 (SEQ ID NO:3) és
HU 226 866 Β1 (MAP1_10)22_31His26hPTHrP(1-34)NH2
Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu His Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Alá NH2 (SEQ ID N0:4).
Találmányunk másik előnyös kiviteli alakja szerint olyan hPTHrP(1-34) analógokat alkalmazunk, amelyek a 22-31-helyzetben MAP-szekvenciát, és ezenkívül az aminosavmaradékok (különösen a 13- és 17-, vagy 26és 30-helyzetű maradékok) oldalláncában levő funkcionális csoportok között lejátszódó gyűrűzárás által képezett mono- vagy biciklikus alszerkezeteket tartalmaznak. Az oldallánc funkcionális csoportjai általában amino-, hidroxil- vagy karboxilcsoportok és a gyűrűzárás amid- vagy észterkötés képződésén keresztül játszódik le. Az oldalláncban funkcionális aminocsoportot tartalmazó maradékok közül a lizint és az ornitint, míg az oldalláncban funkcionális karboxilcsoportot tartalmazó maradékok közül az aszparaginsavat és glutaminsavat említjük meg.
Az említett vegyületosztály előnyös képviselői az alábbi származékok:
(MAP1_10)22_31c[Lys13,Asp17]hPTHrP(1-34) hSer34 lakton
Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly
Lys Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr hSerlac (SEQ ID NO: 5) és (MAP1_10)22_31c[Lys13,Asp17]hPTHrP(1-34)NH2,
Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly
Lys Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Alá NH2 (SEQ ID NO: 6).
Találmányunk szerint előnyösen használható további hPTHrP analógok a 30-50 maradék közötti, előnyösen az 1-32, 1-33, 1-34, 1-35, 1-36, 1-37, és 1-38 N-terminális szekvenciák, amelyek a 22-31 maradékon MAP-szekvenciát tartalmaznak és adott esetben az 5-, 13-, 17-, 19-, 26-, 30-, 32- vagy 34-helyzetben egy vagy több helyettesítést hordoznak.
E vegyületosztály előnyös képviselői az alábbi származékok:
(MAP1_10)22_31lle5hPTHrP(1-34)NH2
Alá Val Ser Glu Ile Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Alá NH2 (SEQ ID NO: 7), (MAP.|_10)22-31Ala19hPTHrP(1-34)NH2
Alá Val Ser Glu Ile Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gin Asp Leu Alá Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Alá NH2 (SEQ ID NO: 8), (MAP1_10)22_31Pro32hPTHrP(1-34)NH2
Alá Val Ser Glu Ile Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gin Asp Leu Alá Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu Pro NH2 (SEQ ID NO: 9), (MAP1_10)22-31D-Orn34laktám hPTHrP (1-34)
Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr D-Orn laktám (SEQ ID NO: 10), (MAP1_10)22_31hPTHrP (1-34) A2bu34laktám Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr A2bu laktám (SEQ ID NO: 11) és (MAP1_10)22_31hSer34PTHrP(1-34)THIQ NH2 Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr hSer Thr His Ile Gin NH2 (SEQ ID NO 12).
A találmány szerinti célra általában minden olyan polipeptid felhasználható, amely a korábbiakban ismertetett specifikus kiviteli alakokkal lényegében homológ. A találmány szerint felhasznált polipeptidek a leírt specifikus kiviteli alakokkal általában legalább kb. 50%ban, előnyösen több mint kb. 80%-ban, különösen előnyösen több mint kb. 90%-ban és legelőnyösebben legalább kb. 95%-ban homológok. A homológia szempontjából összehasonlított polipeptidszekvencia hossza általában legalább kb. 20 aminosav, előnyösen legalább kb. 24 maradék, különösen legalább kb. 30 maradék és különösen előnyösen 32-40 maradék.
A találmány szerinti célra felhasznált vegyületeket az 5 589 452 sz. USA szabadalmi leírásban, valamint a WO 96/40193 és WO 97/07815 sz. nemzetközi közrebocsátási iratban leírt módszerekkel állíthatjuk elő. A vegyületeket általában szilárd fázisú szintézissel, oldatban végzett szintézissel vagy rekombináns módszerekkel állíthatjuk elő, amelynek során a kívánt polipeptidet kódoló gént kifejezzük és klónozzuk. Valamennyi fenti módszer a szakember által ismert. A szilárd fázisú szintéziseket előnyösen 40 vagy kevesebb aminosavat tartalmazó rövidített PTHrP analógok előállítására alkalmazhatjuk. A gyűrűs oldalláncokat tartalmazó analógokat előnyösen oly módon állítjuk elő, hogy a teljes védett polipeptidet a gyantán kialakítjuk, a védőcsoportokat eltávolítjuk és közvetlenül a polipeptidnek a gyantától való elválasztása előtt megfelelő kapcsolószerrel gyűrűzárást végzünk.
Kapcsolószerként pl. benzo-triazol-1-il-oxi-trisz(pirrolidino)-foszfonium-hexafluoro-foszfát (PyBOP) alkalmazható.
A korábban meghatározott paratiroid hormonnal rokon peptid (PTHrP) polipeptidanalógok találmány szerinti felhasználásával készített gyógyszerek csonttörések és osteotómia gyógyítására alkalmazhatók, éspedig összeforrt és nem összeforrt törések esetében egyaránt. A gyógyszerekkel traumatikus és osteoporotikus törések egyaránt kezelhetők, például a csípő, combnyak, csukló, csigolyák, gerincoszlop, bordák, szegycsont, gége, légcső, orsócsont/singcsont, sípcsont, térdkalács, kulcscsont, medence, felkarcsont, alsó láb, ujjak és lábujjak, arccsont és boka törései. A gyógysze6
HU 226 866 Β1 rek az ízületek csatlakozásának (például a gerincoszlop, boka és láb, könyök, csípő csatlakozásának) is szolgálhatnak, és csípő, térd és váll arthredózisában is használhatók. A PTHrP analógok találmány szerinti felhasználásával készített gyógyszerek továbbá a csípő, térd, váll/könyök stb. arthroplasztikus eljárásaival (beleértve a revíziós arthroplasztikát) kapcsolatban is alkalmazható. A csontgyógyulás egyéb sebészeti beavatkozásokkal kapcsolatban is gyorsítható, pl. koponya- és felső állcsont! sebészet, fogsebészet és bütyökeltávolítás esetében. A PTHrP analógok a porcszerű hegképződésen keresztül lejátszódó endochondrális csontgyógyulást (1. és 2. példa), valamint a közbenső hegképződést nem igénylő membránon belüli csontgyógyulást (3. példa) egyaránt gyorsítják. A membránon belüli csontgyógyulás különösen olyan esetekben hasznos, amikor a törés gyógyulását különböző tényezők késleltetik, pl. diabéteszes betegek, dohányosok, idős betegek, anémiás betegek, valamint kortikoszteroid (különösen krónikus glükokortikoid), krónikus NSAID vagy immunoszuppresszív gyógykezelésnek alávetett betegek esetében.
A PTHrP analógok törésgyógyítás megkönnyítésre felhasznált dózisa a kezelt állapot súlyosságától, az adagolás módjától és számos más ezekkel kapcsolatos tényezőtől függ. Az adott dózist fentiek alapján a kezelőorvos állapítja meg. A napi dózis általában kb. 0,01-10 pg/kg, előnyösen kb. 0,1-0,5 pg/kg testtömeg. Egy 50 kg-os beteg kezelésére felhasználandó napi hatóanyagdózis kb. 0,5-100 pg, előnyösen kb. 5-10 pg. A fenti hatóanyagdózist szokásos gyógyászati készítmények formájában napi egy vagy több részletben, vagy szabályozott hatóanyag-leadású gyógyszerkészítmény felhasználásával adagolhatjuk, mindenkor az adott eset követelményeinek figyelembevételével. Az adagolást a gyógyászati szükségleteknek megfelelő időtartamon át végezzük, amely a sérülés súlyosságától függően néhány hét és néhány hónap között változik.
A PTHrP analógokat - a törések kezelésére jelenleg használatos legtöbb eljárással ellentétben - szisztémásán adagolhatjuk. A gyógyászati készítmény adagolása orálisan, parenterálisan (pl. szubkutáns, intramuszkuláris vagy intravénás úton), rektálisan, bukkálisan (pl. szublingválisan) transzdermálisan, pulmonárisan és intranazálisan történhet. A tüdőn keresztül és belélegeztetéssel elvégezhető adagolást biztosító rendszerek pl. az 5 607 915 sz. USA szabadalmi leírásban kerültek ismertetésre. A PTHrP analógok nazális adagolását a WO 97/07815 sz. nemzetközi közrebocsátási iratban írták le.
A PTHrP analógok találmány szerinti felhasználásával készített gyógyszerek olyan szisztémásán adagolandó készítmények is lehetnek, amelyeket egy második csontgyógyító szer helyi alkalmazásával kombinálva kell a szervezetbe juttatni.
A helyi úton alkalmazható csontgyógyító hatóanyagok előnyösen csont-morfogenikus fehérjék (BMP-2 és BMP-7), oszteogén fehérjék (OP—1), növekedési faktorok (pl. TGF-béta 1) és citokinek (pl.
IFN-béta) lehetnek. Az említett hatóanyagokat helyi úton különböző hordozóanyagokban (pl. hidroxiapatit és/vagy kalcium-karbonát és aminopektin) alkalmazhatjuk. A PTHrP analógok szisztémás adagolása továbbá a törésgyógyítás alternatív módszereivel (pl. mechanikus vagy biofizikai serkentés, pl. elektromos árammal vagy ultrahanggal történő kezelés) kombinálható.
A PTHrP analógokat gyógyászatilag alkalmas nem toxikus hordozóanyagokat tartalmazó gyógyászati készítmények alakjában alkalmazhatjuk. A parenterális (szubkutáns, intramuszkuláris vagy intravénás) készítmények általában folyékony oldatok vagy szuszpenziók. Orális vagy bukkális adagoláshoz előnyösen tablettákat vagy kapszulákat, intranazális adagoláshoz előnyösen porokat, orrcseppeket vagy aeroszolokat alkalmazhatunk. A készítmények továbbá rektálisan vagy transzdermálisan adagolhatók.
A parenterális adagolásra szolgáló folyékony készítmények excipiensként steril vizet vagy konyhasóoldatot, alkilénglikolokat (pl. propilénglikol) polialkilénglikolokat (pl. polietilénglikol), növényi eredetű olajokat, hidrogénezett naftalinokat stb. tartalmazhatnak. A készítményekhez enyhén savas (pH kb. 4-6) puffereket adhatunk. Pufferként előnyösen kb. 5-50 mM koncentrációjú acetát-, aszkorbinát- és citrátpufferek alkalmazhatók. Az orális adagolásra szolgáló készítmények epesókat vagy akrilkamitineket is tartalmazhatnak. Nazális adagolásra excipienseket (pl. laktóz vagy dextrán) tartalmazó szilárd készítmények, vagy vizes vagy olajos oldatok (pl. orrcseppek vagy beosztással ellátott spray-k) alkalmazhatók. A nazális készítmények előnyösen szokásos szárazpor-inhalerekben (DPI) felhasználható száraz porok, ködképzésre felhasználható folyékony oldatok vagy szuszpenziók, valamint beosztással ellátott inhalerekben (MDI) felhasználható spraykészítmények lehetnek. A bukkális készítmények excipiensként cukrot, kalcium-sztearátot, magnézium-sztearátot, előzselatinált keményítőt stb. tartalmazhatnak.
A nazális adagolásra szolgáló készítményeknek az orr nyálkamembránján keresztül történő abszorpcióját felületaktív savakkal segíthetjük elő. E célra pl. glikokólsavat, kólsavat, taurokólsavat, ethokólsavat, deoxikólsavat, kenodeoxikólsavat, dehidrokólsavat, glikodeoxikólsavat és ciklodextrineket alkalmazhatunk, általában kb. 0,2-15 tömeg%, előnyösen kb. 0,5-4 tömeg%, különösen előnyösen kb. 2 tömeg% mennyiségben.
A találmány szerinti vegyületeknek a kezelendő beteg számára hosszabb időn át (pl. egy hét és egy év közötti időtartam) történő adagolását késleltetett hatóanyag-leadású rendszer segítségével egyetlen beadással is elvégezhetjük. A retardrendszer a kívánt időn át történő elnyújtott adagoláshoz elegendő mennyiségű hatóanyagot tartalmaz. E célra különböző szabályozott hatóanyag-leadású rendszerek alkalmazhatók, pl. monolitikus vagy tartány típusú mikrokapszulák, depotimplantátumok, ozmotikus szivattyúk, vezikulumok, micéliumok, liposzomák, transzdermális tapa7
HU 226 866 Β1 szók, iontofer készülékek és alternatív befecskendezhető adagolási formák. Bizonyos rendellenességek kezelése esetén a szabályozott hatóanyag-leadású készítményekkel szemben azt a további követelményt támasztjuk, hogy a hatóanyag leadása a hatás helyén lo- 5 kalizálva történjen.
Találmányunk további részleteit az alábbi példákban ismertetjük, anélkül, hogy a találmányt a példákra korlátoznánk.
1C
Példák
Referenciapeldak
Tabletták készítése
Az alábbi komponenseket bensőségesen összeke- 15 verjük és egyosztásos tablettákká préseljük.
Komponens Mennyiség, mg/tabletta
Találmány szerinti vegyület Kukoricakeményítő Kroszkarmellóz-nátrium Laktóz
Magnézium-sztearát
400
20
120
Kapszulák készítése
Az alábbi komponenseket bensőségesen összekeverjük és keményzselatin-kapszulákba töltjük.
Komponens
Találmány szerinti vegyület Laktóz, porlasztva szárított Magnézium-sztearát
Mennyiség, mg/kapszula 200 148
Szuszpenzió készítése
Az alábbi komponensek összekeverésével orális
adagolásra alkalmas szuszpenziót készítünk. az állatok 48 órán át pellet formájában kapnak tápiáié-
Komponens Mennyiség 35 kot. Az állatokat naponta legalább egyszer megfigyel-
Találmány szerinti vegyület 1,0 g jük, a betegség jeleit mutató állatokat megvizsgáljuk és
Fumársav 0,5 g szükség esetén gyógykezelésnek vetjük alá.
Nátrium-klorid 2,0 g A patkányokat az 1. táblázatban leírt csoportokba
Metil-parabén 0,15 g osztjuk. A kontrollcsoport állatai hordozót (konyhasóol-
Propil-parabén 0,05 g 40 dat), míg a kezelt csoport állatai PTHrP analógot kap-
Cukor, granulált 25,5 g nak. A konyhasóoldatot, illetve a tesztvegyületet az
Szorbit (70%-os oldat) 12,85 g operáció utáni első nappal kezdődően naponta szub-
Veegum K (Vanderbilt Co.) 1,0 g kutáns módon adagoljuk. Hetenként radiográfiai analí-
Ízesítőanyag 0,035 ml zist végzünk. Az állatokat 6 hét után leöljük és a radio-
Színezőanyag 0,5 mg 45 gráfiai eredményeket összehasonlítjuk.
Desztillált víz q.s. 100 ml Szedált patkányokat hasra fektetünk és a hátsó
Injekciós készítmény
Az alábbi komponensek összekeverésével ciós készítményt állítunk elő.
Komponens
Találmány szerinti vegyület Nátrium-acetát-pufferoldat, 0,4 M 1 n sósav vagy 1 n injeknátrium-hidroxid Víz (steril desztillált víz)
Mennyiség 0,2 g 2,0 ml
q.s. megfelelő pH-értékig
q.s. 20 ml
Orrcsepp
Az alábbi komponensek összekeverésével az orrba becsepegtethető szuszpenziót készítünk.
Komponens Mennyiség
PTHrP analóg 20 mg/ml
Citromsav 0,2 mg/ml
Nátrium-citrát 2,6 mg/ml
Benzalkónium-klorid 0,2 mg/ml
Szorbit 35 mg/ml
Nátrium-taurokolát vagy glikokolát 10 mg/ml
1. példa
Szegmentált töréshiány gyógyítása PTHrP analógokkal
A PTHrP analógok csontgyógyulást és törés-helyreállítást megkönnyítő hatásának igazolására a szegmentált femorális hiány patkánymodell módosított változatát alkalmazzuk [T. A. Einhorn et al. J. Boné Joint, 66:274-279(1984)].
Kb. 300 g testtömegű felnőtt hím Sprague-Dawleypatkányokat laboratóriumi 5001 sz. patkánytápon tartunk (PMI Feeds, St. Louis, MO, USA) és az állatok vizet ad libitum kapnak. Minden patkány a műtét előtt 12 óráig csak vizet kap. Az állatokat a műtét előtt ketamin (80 mg/kg) és xilazin (5 mg/kg) intraperitoneális befecskendezésével érzéstelenítjük. Fertőzés megelőzése céljából egyetlen dózisban intramuszkulárisan prokain penicillint fecskendezünk be.
A combcsontot laterálisán tárjuk fel és a combcsont elülső kérge mentén előre kifúrt nagy sűrűségű polietilénlemezt rögzítünk. A lemez elhelyezése alatt a combcsontról a csonthártyát extenzíven lehántjuk. A combcsont tengelyének középső részében 1 mm-es nem kritikus méretű szegmentális hiányt alakítunk ki. A sebet nejlon- és króm varrattal lezárjuk.
A patkányokat műtét után ketrecekbe helyezzük és végtagokat forgatjuk. Az operáció utáni első héttel kezdődően mindegyik combcsontról (a kezelt combcsontról és a szemben levő combcsontról egyaránt) hetente radiográfsorozatot készítünk. Kalibráció céljából minden radiográfba ismert sűrűségértékű alumínium „fantom”-lemezt helyezünk. Az egyes radiográfokat átvilágított lemezre helyezzük és a felvételt DCS 420 digitális Kodak kamera segítségével készítjük el. A képeket ezután Gateway 2000 IBM kompatibilis komputerre visszük át és képanalízis-szoftware (Sigma Scan®) felhasználásával digitalizáljuk. A csonthiány alakulását nyomon követjük, és az osteotómia területének átlagos sűrűségét a kezelt csoport állatainál mérjük és a kont60 rollpatkányokkal kapott eredményekkel összehasonlít8
HU 226 866 Β1 juk. Az 1. ábrán az osteotómiának a kezelt állatokon mért csontsűrűségét a kontrollpatkányoknál kapott megfelelő értékekhez viszonyítjuk hetenként, a kezelés első 5 hetében. Az osteotómia átlagos sűrűségét továbbá hetenként a kontralaterális combcsont átlagos sűrűségével is összehasonlítjuk. A 2. ábrán a 6 hét után mért radiográfiai sűrűségarányt tüntetjük fel. A csontsűrűségek összehasonlítása azt mutatja, hogy a PTHrP analógok csontgyógyító hatással rendelkeznek. Az állatok leölése után (6 hét) a combcsontokat (kezelt és kontralaterális combcsontok) a lágyszövetektől megszabadítjuk. A combcsontokról oldalsíkban finom szemcsés radiográfokat készítünk. Az osteotómiát összeforrtnak tekintjük, ha a hiány keresztmetsze5 tének több mint 20%-ában csontfolytonosság tapasztalható. A kezelt és kontrollállatok combcsontjának összehasonlítása azt mutatja, hogy a PTHrP analógok a csontgyógyulást és törés-helyreállítást gyorsítják. A 3. ábrán a kontroll- (1A. ábra) és kezelt (1B. ábra) ál10 latok jellegzetes radiográfjait tüntetjük fel.
1. táblázat
Csoport Tesztvegyület Adagolás módja Állatok száma Leölés időpontja
1. kontroll szubkutáns 10 6 hét
2. PTHrP B analóg szubkutáns 10 6 hét
3. PTHrP C analóg szubkutáns 10 6 hét
2. példa
Csontgyógyulás vizsgálata PTHrP analógokkal, zárttöréses csonthiány modellben Zárttöréses csonthiány modellként a Bonnarens/Einhorn modellt alkalmazzuk [F. Bonnarens and 25 T. A. Einhorn, J. Orthopaedic Research, 2:97-101 (1984)]. A patkányokat az 1. példánál leírt módon használjuk fel. Ennél a modellnél a disztális combcsontba belső parapatelláris feltárással velőűri szeget helyezünk. Az ízületi metszést ezután nem felszívódó 30 varratokkal lezárjuk és a velőűri szeget a helyén hagyjuk. Hárompontos ütőeszközzel zárt keresztirányú törést idézünk elő. Az állatok megfigyelését és a radiográfiai elemzést az 1. példában leírt módon végezzük el. A modellnél kapott eredmények szerint a 35 PTHrP analógok a csontgyógyulást és törés-helyreállítást a kezelt állatokon a kontrolihoz viszonyítva gyorsítják.
3. példa 40
Membránon belüli csontgyógyítás PTHrP analógokkal
Nyulakat általános érzéstelenítésnek vetünk alá és sebészeti beavatkozással négy felülethiányt hozunk létre, éspedig egyet-egyet a disztális combcson- 45 tokon és egyet-egyet a proximális sípcsontokon.
A disztális laterális combcsont condyus feltárásához utólag kb. 3 cm-es laterális sebészeti bemetszést ejtünk. A térdízülethez közeli csontot a csonthártya alatt feltárjuk és 5 mm-es lyukat fúrunk, miközben a fúrót 50 állandó öblítéssel hűtjük. A sebet normál konyhasóoldattal öblítjük. A mélyszövetet folyamatos 3-0 varrattal lezárjuk, majd a subticuláris réteget folyamatos
3-4 nejlonvarrattal és három-négy megszakított rozsdamentes acél varrattal bevarrjuk. A mediális proxi- 55 mális sípcsonton egy második 3 cm-es vágást ejtünk és a proximális mediális sípcsonton 5 mm-es lyukat fúrunk. A sebet az előzőekben leírt módon lezárjuk.
A fenti teljes eljárást az ellenoldali (kontralaterális) végtagon is elvégezzük. 60
A PTHrP C analógból, (MAP1_10)22_31His26hPTHrP(1-34)NH2 és PTHrP D analógból, (MAP1_10)22 31hPTHrP(1-34)NH2 800 pg/ml koncentrációjú törzsoldatokat készítünk, amelyeket 0,22 mikronos steril szűrőn átszűrünk és hordozóanyaggal közvetlenül a felhasználás előtt 20 pg/ml vagy 100 pg/ml értékre hígítunk. Hordozóanyagként 30 mg/ml mannitot, 30 mg/ml szacharózt, 0,12 mg/ml Tween® 80-at 0,17 mg/ml ecetsavat és 2,33 mg/ml nátrium-acetát-trihidrátot alkalmazunk. A sebészetileg kezelt állatokba 2 pg/kg/nap vagy 10 pg/kg/nap dózisban szubkutáns úton naponta PTHrP analógot fecskendezünk.
Az állatokat a vizsgálat során hetenként röntgenvizsgálatnak vetjük alá. Átvilágított szkenner és MetaMorph® (Universal Imaging, West Chester, PA) software felhasználásával denzitometriai méréseket végzünk. Az alsó végtagok radiográfját belső és külső forgásban a műtét utáni 10. és 21. napon készítjük el. Az állatokat a műtét után 30 nappal leöljük. A vizsgálat végén az állatokat túladagolt pentobarbitállal eutalizáljuk, majd a bal és jobb combcsontról és sípcsontról gyűjtött szöveteket röntgenvizsgálatnak és hisztológiai elemzésnek vetjük alá.
A PTHrP C és D analóggal kezelt állatok a hordozóval kezelt nyulakhoz viszonyítva gyorsított membránon belüli csontképződést mutatnak. A PTHrP D analógnak a combcsonton és sípcsonton kifejtett hatását a 4A. és 4B. ábrán tüntetjük fel. A 21. napon a kontrollcsoport állatainál egyetlen combcsonthiány vagy sípcsonthiány sem gyógyult be teljesen, míg az alacsony dózissal kezelt csoportban az állatok 40%-ának combcsonthiánya és sípcsonthiánya meggyógyult. Ebben az időpontban a magasabb dózissal kezelt csoport állatainál a sípcsonthiányok 75%-a és a combcsonthiányok 50%-a meggyógyult. Az állatok leölésekor elvégzett radiográfiai elemzés a PTHrP analóggal kezelt állatoknál a gyógyulás előrehaladását igazolta; a magas dózissal kezelt csoport állatainál a sípcsonthiányok több mint 85%-a mineralizált szövettel megtelt, míg a kontrollcsoport állatainál ugyanez az érték 10% alatt van (p<0,01). Hasonlóképpen a PTHrP-vel kezelt csoportban a
HU 226 866 Β1 combcsonthiány feltöltődése szignifikáns mértékben nagyobb, minta kontrollcsoport állatainál (p<0,01).
4. példa
Fokozott csontgyógyulás az singcsonti osteotómiamodellben
A kísérlet célja annak igazolása, hogy PTHrP analógok patkány osteotómiamodellben szisztémás kortikoszteroid gyógykezelés esetében növelik a biomechanikai szilárdságot (I. rész) és a gyógyulás kinetikáját (II. rész) javítják.
A kísérlethez felnőtt hím új-zélandi fehér nyulakat használunk. Az I. részben 10 nyulat, míg a II. részben 20 nyulat két egyforma csoportra osztunk. Minden nyúlon bilaterálisán nem kritikus nagyságú csonthiányt (1 mm) idézünk elő. A sebészeti beavatkozás előtt 2 hónappal kezdődően a műtét után 6 hétig minden nyúl naponta szubkutáns injekció formájában steril vízben prednizolonoldatot (0,15 mg/kg; kísérleti csoport) vagy steril konyhasóoldatot (kontrollcsoport) kap. Az operáció utáni első nappal kezdődően a kísérleti csoport állataiba naponta szubkutáns injekció formájában PTHrP D analógot (0,01 mg/kg) fecskendezünk, míg a kontrollcsoport állatai normál konyhasóoldat-injekciót kapnak. A I. rész szerint az állatokat az osteotómia elvégzése után 6 héttel leöljük. A II. rész szerinti kísérletnél az állatokat a bilaterális radiográfiai összeforrás után vagy - ha a sérülés nem forrt össze - 10 héttel a műtét után leöljük.
Mindkét kísérletsorozatnál a radiológiai intenzitást és a gyógyult területet a műtét után két héttel (I. rész) vagy 4 héttel (II. rész) kezdődően minden második héten elemezzük. Az elülső végtagokról radiográf sorozatot készítünk és digitalizálunk, ill. a csontok területét image analízis szoftware felhasználásával mennyiségileg meghatározzuk (Sigma Scan Pro). Az osteotómia és a hegképződés helyén újonnan keletkezett csontok ásványianyag-tartalmát fotodenzitometria segítségével meghatározzuk. Az állatok leölése után mindkét végtagról az elölről hátra irányuló és oldalirányú síkban nagy feloldású faxitron radiográfokat készítünk, majd a törési csonthegek méretét és nagyságát elemezzük.
Eredmények (1. rész)
A PTHrP D analóggal kezelt 10 végtag közül 9 hat hét alatt összeforrt, míg a hordozóval kezelt kontrollcsoportnál 10 végtagból csak 2 forrt össze. Az eredményeket az 5. ábrán tüntetjük fel. Hat hét után az elölről hátra irányuló és oldalirányú faxitronok a PTHrP analóggal kezelt csoportban az csontmetszések helyeken szignifikáns mértékben nagyobb intenzitást mutatnak, mint a hordozóval kezelt kontrollvégtagok esetében. Hasonlóképpen a proximális és disztális singcsont diafizisek intenzitása a kezelt végtagokon szintén szignifikáns mértékben nagyobb. A kezelt állatokon az externális csontheg intenzitása laterálisán is nagyobb. Biomechanikai szempontból a PTHrP analóggal kezelt végtagok torziós szilárdsága szignifikáns mértékben nagyobb, mint a hordozóval kezelt kontrollvégtagok esetében; ez mind a keménységre, mind a maximális csavarási nyomatékra vonatkozik.
Eredmények (II. rész)
Négy hét után a kezelt végtagok az osteotómia helyén nagyobb radiográfiai intenzitást mutatnak, mint a kontrollvégtagok (p<0,01); ez a külső csonthegekre, és a singcsonti diafizisekre egyaránt vonatkozik. A kezelt végtagok kombinált csonthegterülete nagyobb (p<0,05), ami azt jelzi, hogy az osteotómia helye méreteiben csökken. A hat hét után készített in vivő radiográfia azt mutatja, hogy az osteotómia helyén a kezelt végtagok csontintenzitása nagyobb, mint a kontrollcsoport esetében, bár a csonthegintenzitás vagy -nagyság terén különbségeket nem tapasztaltunk. Radiográfiailag valamennyi PTHrP analóggal kezelt végtag összeforrtnak tekinthető és az állatokat 6 hét után leöltük. A 8. héten négy további végtag (2 állat) radiográfiai vizsgálat szerint összeforrt és ezeket az állatokat is leöltük. A 10. héten a megmaradt állatokat leöltük, mert végtagjaik az előző 4 hetes időszakhoz viszonyítva a gyógyulás terén radiográfiai javulást nem mutattak, és így megállapítottuk, hogy a csontok nem forrtak össze. A PTHrP analóggal kezelt végtagok az osteotómia helyén nagyobb radiográfiai intenzitást (p<0,05), valamint nagyobb singcsontdiafizist és csonthegterületet mutattak. Az osteotómia területe a PTHrP analóggal kezelt végtagok esetében szignifikáns mértékben kisebb, mint a hordozóval kezelt kontrollcsoportban. A kortikoszteroiddal előidézett késleltetett gyógyulás modelljében a PTHrP analóggal kezelt csoportban 6 hét után teljes összeforrást tapasztaltunk, míg a kezeletlen végtagok 75%-a 10 hét után sem mutatta az összeforrás jeleit.

Claims (13)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Paratiroid hormonnal rokon peptid (PTHrP) olyan polipeptidanalógjainak és ezek sóinak felhasználása csontgyógyításra és törés-helyreállításra szolgáló gyógyászati készítmények előállítására, ahol az analóg egy 30-50 aminosavmaradékot tartalmazó N-terminális rövidített szekvencia, amelyben a PTHrP analóg 22-31 aminosavmaradéka amfipatikus alfa-hélixet képez, és az amfipatikus alfa-hélix a
    Glu Leu Leu Glu Xaa Leu Leu Glu Lys Leu képletnek felel meg - a képletben Xaa pozitív töltést hordozó aminosavmaradékot jelent.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti felhasználás nazálisán adagolandó gyógyászati készítmény előállítására.
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti felhasználás a törés helyére egy második csontgyógyító szer helyi alkalmazásával párhuzamosan adagolandó gyógyászati készítményelőállítására.
  4. 4. Az 1. igénypont szerinti felhasználás membránon belüli csonttörés kezelésére szolgáló gyógyászati készítmény előállítására.
  5. 5. Az 1. igénypont szerinti felhasználás szisztémásán adagolandó gyógyászati készítmény előállítására.
  6. 6. Az 1. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy Xaa jelentése Iizin vagy hisztidin.
  7. 7. A 6. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy
    HU 226 866 Β1
    Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Alá NH2 (SEQ ID NO: 3); vagy
    Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu His Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Alá NH2 (SEQ ID NO: 4) képletű PTHrP analógot alkalmazunk.
  8. 8. Az 1. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy olyan PTHrP analógot alkalmazunk, amelyben legalább két aminosavmaradék oldalláncán keresztül kapcsolódik egymáshoz.
  9. 9. A 8. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy olyan PTHrP analógot alkalmazunk, amelyben a kapcsolódó aminosavmaradékok a 13- és 17-, vagy 26- és 30-helyzetben helyezkednek el.
  10. 10. A 9. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy olyan PTHrP analógot alkalmazunk, amely a 17-helyzetben levő aminosavmaradékként aszparaginsavat tartalmaz.
  11. 11. A 10. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy
    Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly
    Lys Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr hSerlac (SEQ ID NO: 5); vagy
    Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly
    Lys Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Alá NH2 (SEQ ID NO: 6) képletű PTHrP analógot alkalmazunk.
  12. 12. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy PTHrP analógként az 5-, 13-, 17-, 19-, 26-, 30-, 32- és/vagy 34-helyzetben adott esetben helyettesített 30-50 aminosavmaradékot tartalmazó N-végállású rövidített szekvenciát alkalmazunk.
  13. 13. A 12. igénypont szerinti felhasználás, azzal jellemezve, hogy alábbi képletű PTHrP analógot alkalmazunk:
    Alá Val Ser Glu Ile Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Alá NH2 (SEQ ID NO: 7),
    Alá Val Ser Glu Ile Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gin Asp Leu Alá Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Alá NH2 (SEQ ID NO: 8),
    Alá Val Ser Glu Ile Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys
    Ser Ile Gin Asp Leu Alá Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys
    Leu Leu Glu Lys Leu Pro NH2 (SEQ ID NO: 9),
    Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys
    Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys
    Leu Leu Glu Lys Leu His Thr D-Orn laktám (SEQ ID NO: 10),
    Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr hSer laktám (SEQ ID NO: 11) vagy
    Alá Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr hSer Thr His Ile Gin NH2 (SEQ ID NO 12).
HU0004560A 1997-09-09 1998-09-02 Fracture healing using pthrp analogs HU226866B1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US5832497P 1997-09-09 1997-09-09
PCT/EP1998/005550 WO1999012561A2 (en) 1997-09-09 1998-09-02 FRACTURE HEALING USING PTHrP ANALOGS

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HUP0004560A2 HUP0004560A2 (hu) 2001-04-28
HUP0004560A3 HUP0004560A3 (en) 2005-11-28
HU226866B1 true HU226866B1 (en) 2009-12-28

Family

ID=22016113

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0004560A HU226866B1 (en) 1997-09-09 1998-09-02 Fracture healing using pthrp analogs

Country Status (32)

Country Link
US (1) US6583114B2 (hu)
EP (1) EP1005359B1 (hu)
JP (1) JP2002509854A (hu)
KR (1) KR100679778B1 (hu)
CN (1) CN1210059C (hu)
AR (1) AR015435A1 (hu)
AT (1) ATE297754T1 (hu)
AU (1) AU752925B2 (hu)
BR (1) BR9812068A (hu)
CA (1) CA2302255C (hu)
CO (1) CO4890856A1 (hu)
CZ (1) CZ298701B6 (hu)
DE (1) DE69830591T2 (hu)
ES (1) ES2244090T3 (hu)
HK (1) HK1030753A1 (hu)
HR (1) HRP20000109A2 (hu)
HU (1) HU226866B1 (hu)
IL (2) IL134719A0 (hu)
MA (1) MA26545A1 (hu)
MY (1) MY121291A (hu)
NO (1) NO323740B1 (hu)
NZ (1) NZ502970A (hu)
PE (1) PE117399A1 (hu)
PL (1) PL195703B1 (hu)
RS (1) RS49707B (hu)
RU (1) RU2224539C2 (hu)
SA (1) SA98190565B1 (hu)
TR (1) TR200000649T2 (hu)
TW (1) TW552139B (hu)
UY (1) UY25172A1 (hu)
WO (1) WO1999012561A2 (hu)
ZA (1) ZA988030B (hu)

Families Citing this family (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SI1059933T1 (en) * 1998-08-19 2003-04-30 Eli Lilly & Company Use of parathyroide hormone consisting of aminoacid sequence 1-34 of human parathyroid hormone for reducing the risk of both vertebral and non vertebral bone fracture
AR033639A1 (es) * 1998-08-19 2004-01-07 Lilly Co Eli Uso de hormonas paratiroideas para preparar medicamentos para reducir el riesgo de fracturas oseas vertebrales o no vertebrales en seres humanos con riesgo de padecer o que padecen osteoporosis
US20040033950A1 (en) 2000-09-26 2004-02-19 Hock Janet M. Method of increasing bone toughness and stiffness and reducing fractures
EP1769804B1 (en) * 1998-08-19 2012-09-19 Eli Lilly And Company hPTH(1-34) for use in preventing or reducing the incidence or severity of vertebral and / or non vertebral fracture in a male human
CA2245903A1 (en) * 1998-09-28 2000-03-28 Mcgill University Use of pex in the treatment of metabolic bone diseases
HUP0200258A2 (hu) 1999-03-05 2002-05-29 The Procter & Gamble Co. C16-telítetlen FP-szelektív prosztaglandin analógok, ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk
US20020172693A1 (en) 2000-03-31 2002-11-21 Delong Michell Anthony Compositions and methods for treating hair loss using non-naturally occurring prostaglandins
US20020013294A1 (en) 2000-03-31 2002-01-31 Delong Mitchell Anthony Cosmetic and pharmaceutical compositions and methods using 2-decarboxy-2-phosphinico derivatives
US6560487B1 (en) 2000-05-08 2003-05-06 International Rehabilitative Sciences, Inc. Electro-medical device for use with biologics
US6393328B1 (en) * 2000-05-08 2002-05-21 International Rehabilitative Sciences, Inc. Multi-functional portable electro-medical device
US6675048B2 (en) * 2000-05-08 2004-01-06 International Rehabilitative Sciences, Inc. Electro-medical device for use with biologics
EP1531855A4 (en) * 2002-01-10 2009-07-22 Osteotrophin Llc TREATMENT OF BONE DISEASES WITH SKELETTAL ANABOLIKA
WO2005041998A1 (en) 2003-10-02 2005-05-12 Ali Sadat M Peptide for promoting healing of fractures
AU2005294125A1 (en) * 2004-10-08 2006-04-20 Transition Therapeutics Inc. Vasoactive intestinal polypeptide pharmaceuticals
JP2009515535A (ja) * 2005-11-10 2009-04-16 ボード オブ コントロール オブ ミシガン テクノロジカル ユニヴァーシティー クロクマの副甲状腺ホルモン及びクロクマの副甲状腺ホルモンを使用する方法
WO2007133580A2 (en) * 2006-05-09 2007-11-22 Zelos Therapeutics, Inc. Use of pth (1-31) and optionally g-csf for hematopoietic stimulation
USRE49444E1 (en) 2006-10-03 2023-03-07 Radius Health, Inc. Method of treating osteoporosis comprising administration of PTHrP analog
US7803770B2 (en) 2006-10-03 2010-09-28 Radius Health, Inc. Method of treating osteoporosis comprising administration of PTHrP analog
UA98776C2 (ru) 2006-10-03 2012-06-25 Радиус Хелс, Инк. СПОСОБ ДОСТАВКИ лекарственного ПРЕПАРАТА ДЛЯ УСИЛЕНИЯ СИНТЕЗА БЕЛКА В КОСТЯХ
EP1961765A1 (en) * 2006-12-08 2008-08-27 Zealand Pharma A/S Truncated PTH peptides with a cyclic conformation
JP5564167B2 (ja) * 2008-05-22 2014-07-30 日本たばこ産業株式会社 苦味マスキング剤及び苦味低減方法
US8870876B2 (en) 2009-02-13 2014-10-28 Tarsus Medical Inc. Methods and devices for treating hallux valgus
CN102448482A (zh) 2009-03-27 2012-05-09 范安德尔研究所 甲状旁腺素肽和甲状旁腺素相关蛋白肽及使用方法
US8277459B2 (en) 2009-09-25 2012-10-02 Tarsus Medical Inc. Methods and devices for treating a structural bone and joint deformity
EP2509996A1 (en) 2009-12-07 2012-10-17 Michigan Technological University Black bear parathyroid hormone and methods of using black bear parathyroid hormone
US8652141B2 (en) 2010-01-21 2014-02-18 Tarsus Medical Inc. Methods and devices for treating hallux valgus
US8696719B2 (en) 2010-06-03 2014-04-15 Tarsus Medical Inc. Methods and devices for treating hallux valgus
CN104146961B (zh) * 2014-07-04 2018-02-27 深圳职业技术学院 一种薄膜蒸发法制备载细胞因子和骨蛋白微球的方法
MX2017013802A (es) 2015-04-29 2018-08-15 Radius Pharmaceuticals Inc Métodos para tratar el cáncer.
WO2017007777A2 (en) * 2015-07-06 2017-01-12 Zhengxin Dong NOVEL FORMULATIONS OF PTHrP ANALOGUE
CA3020333A1 (en) 2016-04-18 2017-10-26 Radius Health, Inc. Formulations of abaloparatide, transdermal patches thereof, and uses thereof
MX2019007748A (es) 2017-01-05 2019-09-09 Radius Pharmaceuticals Inc Formas polimorficas de rad1901-2hcl.
US10996208B2 (en) 2017-04-28 2021-05-04 Radius Health, Inc. Abaloparatide formulations and methods of testing, storing, modifying, and using same
SG11202013177WA (en) 2018-07-04 2021-01-28 Radius Pharmaceuticals Inc Polymorphic forms of rad 1901-2hcl
EP4027899A4 (en) * 2019-09-12 2023-08-16 Radius Health, Inc. METHODS OF ENHANCING SPINE FUSION USING ABALOPARATIDE
CN112646042A (zh) * 2019-10-10 2021-04-13 陕西麦科奥特科技有限公司 活性多肽化合物
AU2022205801A1 (en) * 2021-01-05 2023-07-13 Radius Health, Inc. Treatment of long bone fractures with abaloparatide

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3935738A1 (de) * 1989-10-27 1991-05-08 Forssmann Wolf Georg Arzneimittel, enthaltend das humane parathormon-fragment (1-37) als aktiven wirkstoff
US5977070A (en) * 1992-07-14 1999-11-02 Piazza; Christin Teresa Pharmaceutical compositions for the nasal delivery of compounds useful for the treatment of osteoporosis
US5821225A (en) * 1992-07-14 1998-10-13 Syntex (U.S.A.) Inc. Method for the treatment of corticosteroid induced osteopenia comprising administration of modified PTH or PTHrp
US5589452A (en) * 1992-07-14 1996-12-31 Syntex (U.S.A.) Inc. Analogs of parathyroid hormone and parathyroid hormone related peptide: synthesis and use for the treatment of osteoporosis
AU672790B2 (en) * 1992-07-15 1996-10-17 Novartis Ag Variants of parathyroid hormone and its fragments
WO1995002610A1 (en) * 1993-07-13 1995-01-26 Syntex (U.S.A.) Inc. Analogs of parathyroid hormone and parathyroid hormone related peptide: synthesis and use for the treatment of osteoporosis
WO1995011697A1 (fr) * 1993-10-27 1995-05-04 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Accelerateur de guerison utilise en chondroplastie
JPH08310965A (ja) * 1995-05-16 1996-11-26 Chugai Pharmaceut Co Ltd 骨癒合促進剤
US5717062A (en) * 1995-06-07 1998-02-10 Beth Israel Hospital Association Cyclic analogs of PTH and PTHrP
US5723577A (en) * 1995-07-13 1998-03-03 Biomeasure Inc. Analogs of parathyroid hormone
US5955574A (en) * 1995-07-13 1999-09-21 Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques, S.A. Analogs of parathyroid hormone

Also Published As

Publication number Publication date
AU752925B2 (en) 2002-10-03
KR100679778B1 (ko) 2007-02-07
NO323740B1 (no) 2007-07-02
PE117399A1 (es) 1999-11-20
MY121291A (en) 2006-01-28
EP1005359B1 (en) 2005-06-15
CO4890856A1 (es) 2000-02-28
AR015435A1 (es) 2001-05-02
HRP20000109A2 (en) 2001-02-28
BR9812068A (pt) 2000-09-26
MA26545A1 (fr) 2004-12-20
ATE297754T1 (de) 2005-07-15
HUP0004560A2 (hu) 2001-04-28
WO1999012561A3 (en) 1999-05-14
US6583114B2 (en) 2003-06-24
NO20001195L (no) 2000-03-08
IL134719A (en) 2010-04-29
CZ298701B6 (cs) 2007-12-27
PL339449A1 (en) 2000-12-18
WO1999012561A9 (en) 2000-03-16
SA98190565B1 (ar) 2006-07-30
US20020077281A1 (en) 2002-06-20
AU9740698A (en) 1999-03-29
RS49707B (sr) 2007-12-31
WO1999012561A2 (en) 1999-03-18
CN1269726A (zh) 2000-10-11
CZ2000862A3 (cs) 2000-09-13
EP1005359A2 (en) 2000-06-07
PL195703B1 (pl) 2007-10-31
HK1030753A1 (en) 2001-05-18
ZA988030B (en) 1999-03-09
NO20001195D0 (no) 2000-03-08
ES2244090T3 (es) 2005-12-01
HUP0004560A3 (en) 2005-11-28
DE69830591T2 (de) 2006-05-04
TR200000649T2 (tr) 2000-09-21
RU2224539C2 (ru) 2004-02-27
IL134719A0 (en) 2001-04-30
JP2002509854A (ja) 2002-04-02
TW552139B (en) 2003-09-11
UY25172A1 (es) 2001-01-31
CA2302255A1 (en) 1999-03-18
CA2302255C (en) 2011-11-08
CN1210059C (zh) 2005-07-13
DE69830591D1 (de) 2005-07-21
KR20010023795A (ko) 2001-03-26
YU12700A (sh) 2004-09-03
NZ502970A (en) 2002-03-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU226866B1 (en) Fracture healing using pthrp analogs
US20070099831A1 (en) Parathyroid hormone analogues and methods of use
JPH04235135A (ja) 医薬組成物
US20070270341A1 (en) Parathyroid hormone analogues and methods of use
JP2017114909A (ja) 骨修復促進剤
US20080176787A1 (en) Parathyroid hormone analogues and methods of use
US20090010940A1 (en) Parathyroid Hormone Analogues and Methods of Use
JP2010501476A (ja) 副甲状腺ホルモン類似体およびその使用方法
EP3294339A1 (en) Methods and compositions for the treatment of arthritis
MXPA00002295A (en) FRACTURE HEALING USING PTHrP ANALOGS
JPH07258110A (ja) 骨疾患治療剤
US20090042774A1 (en) Parathyroid hormone analogues and methods of use
WO2022249108A1 (en) Treatment and prevention of osteoporosis in high body mass index individuals
Stevenson Calcitonin in the prevention and treatment of osteoporosis