HU217615B - Kecskéből származó fehérjeszármazékok, előállításuk, és ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények - Google Patents
Kecskéből származó fehérjeszármazékok, előállításuk, és ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények Download PDFInfo
- Publication number
- HU217615B HU217615B HU9301677A HU167793A HU217615B HU 217615 B HU217615 B HU 217615B HU 9301677 A HU9301677 A HU 9301677A HU 167793 A HU167793 A HU 167793A HU 217615 B HU217615 B HU 217615B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- lge
- patients
- molecular weight
- treatment
- cancer
- Prior art date
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 17
- 241000283707 Capra Species 0.000 title claims abstract description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 9
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims abstract description 4
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 claims abstract 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 44
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 9
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 7
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 4
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 4
- 238000011034 membrane dialysis Methods 0.000 claims description 3
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 206010069747 Burkholderia mallei infection Diseases 0.000 claims description 2
- 201000003641 Glanders Diseases 0.000 claims description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims 6
- 210000004317 gizzard Anatomy 0.000 claims 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 abstract 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 26
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 15
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 13
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 13
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 12
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 12
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 9
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 9
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 description 8
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 7
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 7
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 6
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 6
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 5
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 5
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 4
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 4
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 4
- 208000008385 Urogenital Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 229940005483 opioid analgesics Drugs 0.000 description 4
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 4
- 208000037964 urogenital cancer Diseases 0.000 description 4
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 4
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 206010023825 Laryngeal cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 238000003365 immunocytochemistry Methods 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 239000000367 immunologic factor Substances 0.000 description 3
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 3
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 3
- 206010023841 laryngeal neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 3
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 3
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 3
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 description 2
- 201000003741 Gastrointestinal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000002151 Pleural effusion Diseases 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 201000002313 intestinal cancer Diseases 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 1
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 1
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 description 1
- 206010012373 Depressed level of consciousness Diseases 0.000 description 1
- 101150064205 ESR1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241001539473 Euphoria Species 0.000 description 1
- 206010015535 Euphoric mood Diseases 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010018690 Granulocytosis Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 235000019687 Lamb Nutrition 0.000 description 1
- 102000001621 Mucoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010093825 Mucoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 231100000229 OECD 452 Chronic Toxicity Study Toxicity 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010045171 Tumour pain Diseases 0.000 description 1
- 102000005918 Ubiquitin Thiolesterase Human genes 0.000 description 1
- 108010005656 Ubiquitin Thiolesterase Proteins 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 1
- 238000011861 anti-inflammatory therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000010256 biochemical assay Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 231100000160 chronic toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007665 chronic toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 201000010897 colon adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N cytokinin Natural products C1=NC=2C(NCC=C(CO)C)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(CO)O1 UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004062 cytokinin Substances 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 210000000222 eosinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- QWPPOHNGKGFGJK-UHFFFAOYSA-N hypochlorous acid Chemical compound ClO QWPPOHNGKGFGJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002637 immunotoxin Effects 0.000 description 1
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 description 1
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000608 immunotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 230000003871 intestinal function Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 229940040511 liver extract Drugs 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 238000012335 pathological evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 229940096055 prax Drugs 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
- C07K14/4703—Inhibitors; Suppressors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2/00—Peptides of undefined number of amino acids; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
A találmány tárgyát új fehérjeszármazékok képezik, amelyek úgyállíthatók elő, hogy i) kecskemájat vagy -zsigereket szokásos módonhomogenizálnak; ii) a homogenizátumot perklórsavval 10 °C-nálalacsonyabb hőmérsékleten kezelik; iii) a kapott anyagotcentrifugálják és vízzel szemben dializálják; majd iv) hipertóniássóoldattal kezelik, centrifugálják vagy membránszűrik, és vízzel, majdsópufferrel szemben dializálják; majd v) 10 000 d molekulatömegűanyagokat fenntartó membránon 1 mg/ml fehérjekoncentrációigultraszűrik; vi) kívánt esetben gélkromatográfiásan tovább tisztítják,és így olyan vegyületeket állítanak elő, amelyek poliakrilamid gélen50 000, 20 000, 14 800, 12 000 d elekt- roforetikus sávot mutatnak. Avegyületek az onkológia területén alkalmazhatók. ŕ
Description
A találmány tárgya olyan, kecskemájból vagy -zsigerekből extrakcióval kinyerhető új fehérjeszármazékokra és előállításukra vonatkozik, amelyek a gyógykezelésben és a diagnosztikában hasznos anyagok. Részletesebben a találmány olyan anyagokra vonatkozik, amelyek meglepő biológiai tulajdonságaik révén hasznossá válhatnak az onkológiai gyógykezelésben (vagy legalábbis a daganatos betegségek kiegészítő kezelésében), és ugyancsak jól alkalmazhatók az immunológiai és immunszerológiai diagnosztikában.
A szintetikus és félszintetikus, valamint a fermentálással vagy extrakcióval kinyerhető exogén eredetű hatóanyagok jelenleg folyó kutatása mellett, egyre több figyelmet irányítanak az olyan fiziológiás, a testben természetszerűen előforduló vegyületek vizsgálatára, amelyek közvetlen citotoxikus hatásokon keresztül, vagy a celluláris, illetve humorális immunrendszer komplex kölcsönhatásai révén képesek a daganatsejtek növekedését gátolni.
Ezen a területen figyelemre méltó kutatási erőfeszítések történtek; például ilyen anyagok: az interferon; a tumor nekrózis faktor (TNF); a citokininek és limfokininek, így az interleukinek; és a különböző citotoxikus anyagok monoklonális ellenanyagokkal alkotott konjugátumai - az úgynevezett immunotoxinok stb.
A mai napig kevés figyelmet szenteltek olyan vegyületeknek, amelyek xenogén szövetekből nyerhetők. A juh- vagy bárányembriókból nyerhető AF2 nevű faktort 1940 óta tanulmányozták, láthatólag anélkül, hogy a gyakorlati eredményeket érdemes lett volna tovább vizsgálni [Schweiz-Rundsch-Med. Prax., 79, (16); 498-592.(1990)].
A daganatos betegek szérumában lévő szokatlan immunológiai tulajdonságokkal rendelkező anyagokon végzett vizsgálatainkból [Biomed. Pharmacther. 41, 2-5. (1987)] kiindulva azt tapasztaltuk, hogy kecske májából vagy zsigereiből kivonhatok polipeptid természetű anyagok, amelyek a következő meglepő tulajdonságokkal rendelkeznek, ha ezeket az anyagokat különböző rosszindulatú daganatban szenvedő pácienseknek adjuk be:
- az emberi tumorantigének felismerésére képes ellenanyagok kialakulását indukálják;
- ezenkívül képesek a daganatos fájdalmat csökkenteni vagy gátolni, a sejtlízist indukálni, és a tumomövekedést gátolni vagy lelassítani.
Találmányunk értelmében a „fehérjevegyületek” polipeptidvegyületek, így fehérje, glikoprotein, mukoprotein vagy egyéb lehetnek.
A találmány szerinti anyagokat extrakcióval kecskemájból vagy -zsigerekből - ezek savas homogenizátumából - lehet előállítani.
A májjal és a zsigerekkel folytatott extrakciós vizsgálatok megerősítették azt, hogy ezekben a szervekben olyan anyagok fordulnak elő, amelyek a fenti tulajdonságokkal rendelkeznek; ezért fel lehet tételezni, hogy előfordulásuk általános érvényű, és nemcsak egy szervre vagy szervekre korlátozódik.
A találmány szerinti anyagok kivonása a következő lépésekből áll :
i) kecskemáj vagy -zsigerek homogenizálása ismert eljárásokkal;
ii) a homogenizátumok HC104-tal 10 °C-nál alacsonyabb hőmérsékleten történő kezelése, vagy más, ennek megfelelő kivonási eljárás (detergensek, karbamid stb.) alkalmazása;
iii) centrifugálás, vízzel szembeni dialízis;
iv) kezelés hipertóniás sóoldattal, centrifugálás vagy membránszűrés, és vízzel vagy sót tartalmazó pufferrel szembeni dializálás;
v) 10 000 daltonos membránnal ultraszűrés addig, ameddig a fehérjék koncentrációja 1 mg/ml lesz;
vi) kívánt esetben további tisztítás gélkromatográfiával.
Az ii) lépésben előnyösen 2 n perklórsavoldatot használunk körülbelül 4 °C hőmérsékleten.
Az iv) lépésben előnyösen 3 m KCl-oldatot használunk, és a kezelést 24 órán át végezzük 4 °C hőmérsékleten. A dialízist, a szűrést és centrifugálást ismert módon végezzük.
A találmány szerint előállított anyagot közvetlenül használhatjuk fel.
A betegek és az állatok kezeléséhez az anyagot a Remington’s Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co., N. Y., Amerikai Egyesült Államok) kézikönyvben leírtaknak megfelelően sterilizáljuk, pirogénmentesítjük és a megfelelő gyógyszerkészítménnyé alakítjuk.
A készítmény lehet például liofilizált hatóanyagokat tartalmazó ampulla, amelynek tartalmát használat előtt steril sóoldatban, vizes vagy olajos oldószerekben készített oldatokban vagy szuszpenziókban oldjuk. Lehetnek továbbá a készítmények egyéb in vivő kezelésre alkalmas készítmények.
A későbbiekben összefoglalt klinikai vizsgálatok alapján a találmány szerinti anyagok adagolási mennyisége például 0,1-100 mg/nap naponta, vagy különböző intervallumokban (például hetente, havonta vagy hoszszabb időszakonként). A részleteket illetően megállapítottuk, hogy a kecskemájból kivont anyagok - továbbiakban LGE-vel jelöljük - adagolási mennyisége 1-3 mg szárazanyag (1-3 ml oldatban), ez elegendő lehet ahhoz, hogy a tumorbetegségben szenvedő betegeknél meglepő gyors eredményeket kapjunk.
Az első után 30 nappal megismételt kezelés hatása néha előnyös lehet. A készítmények adagolási mennyisége és intervalluma a betegség súlyosságát és a beteg állapotát figyelembe véve változtatható.
A következő példa a találmány további bemutatására szolgál.
Példa
Késes homogenizátorral 100 g hímkecske-májat homogenizáltunk, a homogenizátumot desztillált vízben újraszuszpendáltuk 400 ml végtérfogatban.
400 ml 2 n HClO4-oldatot csepegtettünk a fenti szuszpenzióhoz körülbelül 20 perc alatt, 4 °C hőmérsékleten, és további 30 percig kevertük. Centrifugálás után (20 perc, 10 000 g) az üledéket eldobtuk, és a felülúszót először csapvízzel, majd desztillált vízzel szemben dializáltuk.
HU 217 615 Β
Dialízis után porított KCl-ot adtunk a kapott oldathoz 3 m koncentráció eléréséig, és az elegyet kevertük 24 órán át 4 °C hőmérsékleten. Centrifugálás után (1 óra, 10 000 g) a felülúszót desztillált vízzel, majd foszfátpufferrel (PBS) (pH = 7,2; Na2HPO4/NaH2PO4, 10 mmol) szemben dializáltuk.
A kapott oldat (800 ml) átlagos fehéijekoncentrációja, Lowry-féle módszerrel mérve, 200 pg/ml.
Az oldatot ultraszűréssel (Amicon PM10) bepároltuk 1 mg/ml végkoncentráció eléréséig, ezt az anyagot LGE-nek neveztük, és közvetlenül felhasználtuk a klinikai vizsgálatokban (az eredményeket a következőkben összegezzük).
A terméket PAGE 4/30-cal (Pharmacia cég gyártmánya) vizsgáltuk, 4 fő sáv jelenléte nyilvánvaló volt (1. ábra): a standardokkal készített kalibrációs görbe alapján ezek molekulatömege a következő volt:
1. sáv=körülbelül 50 000 d, nagy molekulatömeg,
2. sáv=körülbelül 20 000 d, kis molekulatömeg,
3. sáv=körülbelül 14 800 d, LGE Lót. 1,
4. sáv=körülbelül 12 000 d. LGE Lót. 1/B.
Az LGE-kivonás egyik rá következő tisztítási lépésében ioncserélő kromatográfiát végeztünk az alábbi módszer szerint. Körülbelül 20 ml LGE-oldatot foszfátpufferrel szemben (Na2HPO4-NaH2PO4 0,01 m, pH 6,5) dializáltunk. Dialízis után a mintákat 0,45 pm-es szűrőn szűrtük, és ioncseréltük TSK DEAE SPW 7,5x75 mm-es oszlopon, amelyet az előző dialízispufferrel hoztunk egyensúlyba, 30 ml/óra áramlási sebességnél. Az oszlop eluálását is az előző pufferrel és áramlási sebesség mellett 100 percig végeztük.
A pH 6,5-es lineáris foszfátpuffer gradiens 0,01 intól 0,1 m végkoncentrációig nőtt, a fenti grádienssel 100 percig 30 ml/óra áramlási sebesség mellett eluáltunk.
Az eluátumból 0,5 ml-es frakciókat gyűjtöttünk, és a különböző zónákat, amelyek a különböző csúcsokhoz tartoztak, egyesítettük.
A kromatogram (2. ábra) alapján különböző frakciókat kaptunk, amelyeknek összetételét egyenként PAGE PAA 4/30-on (azonos PAGE 4/30 anyaggal) határoztuk meg. Kezdetben a kiindulási puffemek megfelelő A zónát és a legnagyobb fehérjetartalmú - gradiens frakcionálásnál eluálódott - B zónát tartottuk a legérdekesebbnek, mivel az alacsony molekulatömegű fehéijék az A zónában, míg a nagy molekulatömegűek (50 000 d-os) a B zónában fordultak elő nagyobb koncentrációban.
Az A zóna és B zóna mintákat ezután I25I-izotóppal jelöltük (3. ábra - LGE A zóna, 4. ábra - LGE B zóna, 5 pl mennyiség) és radioimmun-vizsgálattal vizsgáltuk. Ahhoz, hogy a klinikai kísérletekhez kellő mennyiségű A és B zónát külön-külön tudjunk adagolni, nagyobb mennyiségű LGE tisztítása vált szükségessé.
Preparatív DEAE-Sephadex gél oszlopot használtunk nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás eljárásban, amelyet azonos körülmények között eluáltunk, mint a DEAE SPW oszlopot.
800 mg LGE-t tisztítottunk ezen az oszlopon, és így 42 mg A zónát és 15 mg B zónát tartalmazó anyagot kaptunk.
A 2/90-es jelű LGE-preparátum egy részét ezután fordított fázisú Aquapore Butyl (30x4,6 mm 7U; Applied Biosystem) oszlopon analizáltuk, amelyhez eluensként 0,05% TFA-t tartalmazó víz és acetonitril elegyét használtuk; lineáris gradienssel az acetonitril koncentrációját 25%-ról 55%-ra növeltük 15 perc alatt. Az 5. ábra bemutatja a 220 nm-en felvett kromatogramot.
A DEAE-Sephadex oszlopról származó A és B zóna egy részét fordított fázison kromatografáltuk azonos körülmények között,, mint a nyers LGE esetén (6. és 7. ábra).
A nyers LGE kromatogramját és az A és B zónákat megvizsgálva azt figyeltük meg, hogy a nyerstermékben talált legtöbb, szignifikánsan előforduló fehérjekomponens ugyanolyan, mint az A és B zónából származó két mintában, bár eltérő koncentrációban.
Izoelektromos pont
Az LKB 3,5-9,5 PAGE lemezeket a gyártó utasításai szerint használtuk.
A frakcionálatlan LGE pH 8,3-nál egy gyenge sávot; pH 6,7-től 7-ig egy erőteljes sávot, és pH 6 és pH 4,5 között több egymáshoz közel eső sávot adott az izoantigének jellegzetességeit mutatva.
Az LGE A zónája pH 8,2-en egy erőteljes sávot, pH 6,7-en ugyancsak egy erőteljes sávot, míg savas tartományban pH 5,6-en, pH 5-ön és pH 4,9-en egy-egy túlsúlyban lévő és több kisebb intenzitású sávot adott.
Az LGE B zónája a savas tartományban (pH kisebb, mint 6), az izoantigénekre jellemző, figyelemre méltó festési intenzitást mutatott.
Biokémiai, immunkémiai és radioimmunológiai eredmények
A bepárlási lépés előtt kapott oldatból 5 ml-es adagokat (megfelel 1 mg száraz kivonatnak) készítettünk, és ezeket komplett Freund-adjuvánssal emulgeáltuk.
Ezekkel az anyagokkal 15 naponként két nyulat immunizáltunk.
A kiindulási két nyúlból az egyik az első immunizálás után elpusztult. A második állatból RF4-gyel jelölt szérumot vettünk, amelyet a biokémiai, immunkémiai, radioimmunológiai és immuncitokémiai vizsgálatokhoz használtunk. Az RF4 ellenanyagot Westem-féle lenyomatkészítési eljárással LGE-vel szemben vizsgáltuk. Az antigént PAGE SDS PAA 4/30 lemezekre (Pharmacia) vittük, és átnyomatoltuk nitro-cellulóz-membránra. Ezután a nitro-cellulóz-membránt RF4 szérummal inkubáltuk, és a reakciót anti-nyúl peroxidáz (PIERCE) segítségével előhívtuk. Mint ahogyan az a 8. ábrán látható, az ellenanyag a körülbelül 50 000 d molekulatömegű fehérjéket ismeri fel. Az ábrán alkalmazott jelölések jelentése: ST 1 =kis molekulatömegű előfestett =LGE ösztr. 1 = LGE lót. 1/90
3=LGE lót. 2/90
4=LGE lót. 3/91
5=LGE lót. 4/91
6=LGE lót. 5/91
7=Normál emberi máj
8=LGE lót. 6/91
ST 2=kis molekulatömegű, előfestett.
A nyulak második csoportját LGE-vel a fenti módszer szerint immunizáltuk (az 5 ml oldatot 2,5 ml komplett Freund-adjuvánssal emulgeáltuk).
Ezekből a nyulakból 14 antiszérumot nyertünk, amelyeket anti-LGE 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 és 14-gyel jelöltünk, és ugyanúgy vizsgáltuk őket, mint az RF4-et.
A biokémiai vizsgálatokból származó eredmények (különösen a Westem-féle lenyomatkészítési eljárás) arra utalnak, hogy ezek az antiszérumok az RF4 antiszérummal ellentétben az LGE fehérje komponenseit mind felismerik (9. ábra). A vizsgálatban SDS PAGE PAA 8/18 oszlopot használtunk, az 1 jelű sáv A zóna nem kötött/conA-Sepharose, a 2 jelű sáv A zóna kötött/conA-Sepharose, a 3 jelű sáv Lót. 4/91 anyagra jellemző.
A fentieken túlmenően 10 hetes BALB/c nőstény egereket immunizáltunk monoklonális ellenanyag képzésének érdekében.
Két egeret LGE-vel (1 mg/ml), és két egeret a DEAE SPW-ról származó LGE A zónával (1 mg/ml) immunizáltunk úgy, hogy 100 pl antigént+100 pl Freud-adjuvánst bőr alá fecskendeztünk.
Az immunizálási séma a következő volt:
1. adagolás: 100 pl antigén +100 pl komplett Freundadjuváns;
2. adagolás: 100 pl antigén+100 pl komplett Freundadjuváns, az első adagolás után 7 nappal;
3. adagolás: mint a második adagolás, csak 7 nappal később;
4. adagolás: mint a harmadik adagolás, a harmadik adagolás után 7 nappal.
Az immunizálás végén egyenlő mennyiségű vért gyűjtöttünk minden egérből, és a kinyert szérumokat LGE elleni kötési tesztben (10. ábra), valamint immuncitokémiai eljárásokkal vizsgáltuk.
A kapott eredmények alapján elhatároztuk, hogy az LGE A zónával immunizált 2. számú egeret leöljük, a monoklonális ellenanyagképzés érdekében.
A Milstein szerint végrehajtott fúzió 250 kiónt adott.
Az első átvizsgálás azt mutatta, hogy sok klón az LGE kis molekulatömegű komponensei felé irányult, míg a kiónok kisebb része az 50 000 d-os fehérjét ismerte fel. A klónnövelés után végrehajtott második átvizsgálásban minden klón negatív eredményt adott, ezért elhatároztuk, hogy más immunizált állatból származó lépet fuzionálunk.
Fúzió után 400 kiónt kaptunk (100%). Körülbelül 10 nappal ezután az első tesztben 64 klón LGE-pozitív volt.
Az így nyert 64 klón felülúszóit ezután LGE-re, LGE A zónára és LGE B zónára teszteltük. Az átvizsgálással 4 klón erős kötődést mutatott a három antigénnel, különösen az LGE A zónával. Ezt a 4 kiónt tovább klónoztuk, és az előző módszerhez hasonlóan a fenti három antigénnel újrateszteltük.
Ezzel egy időben a kiónokat Westem-blottal LGEre szintén levizsgáltuk.
A fenti két vizsgálat eredményei alapján 9 klón ascitesét állítottuk elő. A kapott asciteseket kötési tesztben LGE, LGE A zóna és LGE B zóna ellen titráltuk. Mindegyik ascites jó hatékonysággal kötődött a fenti három antigénhez; kissé előnyben részesítve az LGE A zónát.
Ezzel szemben a Westem-blot vizsgálat azt mutatta, hogy csak egy monoklonális ellenanyag kötődött az 50 000 d-os sávhoz, míg a többi felismerhető sáv kissé meghaladta az 50 000 d-t. Szemben a kötési teszttel ezek a monoklonális ellenanyagok nem kapcsolódnak kis molekulatömegű komponenssel. A tumorbeültetési vizsgálatokat csupasz („nude”) egereken hajtottuk végre a HT29-es nevű emberi vastagbél-adenocarcinoma sejtvonallal.
Mindegyik állatba 0,5 ml 10 millió sejtet tartalmazó közeget oltottunk. Az oltás után 7 nappal az állatokat előzőleg ioncseréléssel tisztított RF4 antiszérummal kezeltünk azért, hogy az immunglobulin frakciót izoláljuk, amit ezután ,25I-izotóppal jelöltünk.
Mindegyik állat peritoneálisan 1% BSA-t tartalmazó 0,5 ml PBS-ben 10 000 000 cpm-et kapott.
Az ellenanyag-lokalizációs index meghatározása érdekében az állatokat a 24., 48. és 72. óra elteltével leöltük.
Az antigénfelismerési képességet az LGE-vel immunizált nyulak szérumával humán szöveten vizsgáltuk.
Az antiszérumokat emberi szövetmetszeteken ABC immunperoxidázzal és immunogalaktozidáz módszerrel, míg az emberi szövetek kivonatait RIA-val vizsgáltuk.
Formaiinnal rögzített és paraffinba beágyazott gyomor-, vastagbél-, emlő-, tüdő-, dülmirigy- és petefészektumorokat, valamint a HT29-es sejtek (bélrákból) tumorális explantátumait, továbbá MCF7 és GTL16 mellráksejteket tartalmazó metszeteket használtunk. Kontrollként különböző emberi szöveteket használtunk.
A kapott eredményekből a következő megállapításokat lehet tenni:
a) A nyúl anti-LGE szérumok, barnán festődők, a titer és a specificitás fokától függően a daganatos sejteken felszíni és citoplazmatikus antigén struktúrákat ismerte fel a gyomor-, vastagbél- és a HT29, valamint GTL16 emlőráksejteknél.
b) A nyúl anti-LGE szérumok és az egészséges májsejtek között nem történt reakció sem immuncitokémiai, sem karcinoembrionális antigénnel CEA-val végzett immuncitokémiai, valamint radioimmun-vizsgálatokban.
c) Nem minden vizsgált tumor volt pozitív.
Az LGE, a 125I-vei jelölt LGE, a nyúl anti-LGE és a nyúl 125I jelölt anti-LGE rendszereket csupasz egereken és a HT29 sejteknek csupasz egerekbe xenográf implantációval történő bevitele után vizsgáltuk in vivő.
A következő eredményeket kaptuk:
1. Mindegyik csoportban a 125I-LGE in vivő nagyon gyors reakciójú; bőr alá fecskendezés után 24-48 órával minden radioaktivitás a vizeletkiválasztó rendszerben lokalizálódon.
2. Az LGE és az anti-LGE immunglobulinok nem csökkentették a csupasz egerekben lévő tumort még akkor sem, amikor a tumorok intenzív vérbősége volt megfigyelhető.
3. 3-5 nappal a csupasz egerek HT29-es sejtekkel történő implantálása után a 125I-jelzett anti-LGE immunglobulinok az LGE-t szignifikánsan a tumoros sejtekben lokalizálták. A fenti eredménnyel összhangban voltak az in vivő immuncitokémiai vizsgálatok eredményei.
A kivonatot (LGE) és az anti-LGE szérumokat in vitro a következőképpen vizsgáltuk:
1. Emberi neoplasztikus mellhártyaizzadmány primer tenyészetein.
2. Tumoros sejtvonalakon: emberi HMF7 és HT29, valamint patkány R323OAc sejtvonalakon.
4. Bazofil degranulációs vizsgálattal.
A következő eredményeket kaptuk:
1. Az LGE és az anti-LGE szérumok közvetlenül nem fejtettek ki toxikus hatást a daganatos sejtekre.
2. Az LGE és az anti-LGE szérumok in vitro nem mutattak tumor nekrózis faktor (TNF) hatást a célsejtekre.
3. A valószínűleg limfociták és/vagy makrofágok által közvetített citotoxikus hatás nyilvánvaló volt az emlőrák daganatos sejtjeinek burjánzásából származó primer tenyészeteken.
4. A K562 és HL60 sejtvonalakat célsejtként használva az LGE erős LAK (limfokininnel aktivált pusztító sejtek) indukáló hatású az emberi limfocitákra.
Az IL-2 válasszal összehasonlítva ezek az eredmények változók. A különböző donorokból származó limfociták különböző citotoxikus hatást mutattak LGEvel történő kezelés esetén.
Ezzel szemben az LGE és az IL-2 együtt erősen megnöveli ezt az aktivitást (+27,2%).
A CTLL (IL-2 szenzitív) sejtekkel végzett kísérletek kizárnak mindenféle azonosságot az LGE és az IL-2 között.
Nem lehet összehasonlítani az LGE-t bármely BRM-mel (biológiai választ módosítók), különösen a második csoportba tartozókkal. Valójában, az LGE in vitro tumorsejteken és in vivő csupasz egerek tumoros sejtjeiben inaktív volt. Az áttétképző emberi mellhártyaizzadmányon LGE-vel kapott válasz arra utal, hogy az immunitást közvetítő sejtek jelenléte szükségszerű. Másrészről, a nagyon savas közegben extrahált LGE kizárja annak lehetőségét, hogy azonos legyen a BRMmel vagy az interferonokkal.
5. Az LGE „in vitro' gátolja a PBL proliferációt. Ez kapcsolatban lehet a limfocitákra gyakorolt közvetlen gátlóhatásával vagy különböző gátlófaktorok közvetítése révén megvalósuló indukcióval. A gátlóhatás mind dózis-, mind időfüggő.
Az LGE-t vizsgáltuk bazofil degranulációs tesztben is. Ezt a vizsgálatot azért végeztük, hogy felismerjünk egy olyan specifikus antigént, amely a bazofilek ellen van, és/vagy olyan ellenanyagokhoz kapcsolódik, amelyeknek szerepe van az immunmemóriában. A vizsgálatot akkor tekintettük pozitívnak, ha az értékek 30% felett voltak. A tüdőrákos betegek vérmintáin az LGE igen kis koncentrációban (1 pg-0,1 pg/ml), dózisfüggően szignifikáns bazofil degranulációt okozott (80% felett). A további 5 vizsgálat azt mutatta, hogy a daganatos betegségben szenvedő betegek 50%-a pozitív ebben a tesztben. A mosatlan (azaz nemcsak a bazofilekhez kapcsolódó faktorokkal, hanem a vérpályában jelen lévő ellenanyagok és antigének jelenlétében, valamint a kalciummentes kontrollmintákon bazofil degranuláció nem fordult elő (1. táblázat). Egészséges donorok vérét használva a bazofilek degranulációja nem fordult elő.
1. táblázat
| LGE (pg/ml) | Bazofilek/granulociták (%) | Bazofil degranuláció (%) | ||
| Teljes vér | ||||
| Kontroll | 25 | 6 050 | 0,41 | |
| 100 | 21 | 6 000 | 0,35 | 15 |
| 10 | 28 | 6 900 | 0,4 | 2 |
| 1 | 34 | 7 830 | 0,43 | 0 |
| 0,1 | 25 | 7 500 | 0,34 | 15 |
| 100 Ca++ nélkül | 31 | 8 300 | 0,37 | 7 |
| Mosott vér | ||||
| Kontroll | 46 | 8 550 | 0,54 | |
| 100 | 21 | 10 000 | 0,21 | 61 |
| 10 | 12 | 10 000 | 0,12 | 78 |
| 1 | 9 | 10 000 | 0,09 | 83 |
| 0,1 | 25 | 11 000 | 0,22 | 59 |
| 100 Ca++ nélkül | 43 | 6 300 | 0,69 | 0 |
| 10 Ca++ nélkül | 44 | 6 500 | 0,67 | 0 |
| 1 Ca++ nélkül | 43 | 6 300 | 0,69 | 0 |
HU217615 Β
Toxikológia
Az akut és krónikus toxicitást egereken és nyulakon vizsgáltuk.
Az akut toxicitás vizsgálatához az egereket és a nyulakat naponta (10 napig) 7,1 mg/kg dózisnak megfelelő LGE-oldattal szubkután injektáltuk.
A krónikus toxicitási vizsgálatot nyulakon végeztük 6 hónapig, minden héten 1,2 mg/kg dózisban.
Sem toxikus hatás, sem elváltozások nem voltak megfigyelhetők.
A 125I jelölt LGE-vel folytatott előzetes tanulmányok 24/28 órán belül az anyag vizeleten keresztüli teljes kiürülését mutatják.
Nem figyeltünk meg toxikus hatást, ha különböző koncentrációjú LGE-t fecskendeztünk az állatokba. A letális dózist nem lehet meghatározni.
Klinikai vizsgálatok
Első fázis
A betegség végső állapotában lévő 29 beteget beleegyezésükkel és a különleges körülményeket figyelembe véve kezeltünk. A lehetséges kezelési módokat (műtét, radioterápia, kemoterápia) mindegyikük megkapta ugyanúgy, ahogyan a kiegészítő kezeléseket, így a gyulladás elleni terápiát (nem szteroid gyulladásgátló hatóanyagok és szteroidok), opioidokat vagy más fontos fájdalomcsillapítót.
A legtöbb beteg leromlott - sőt kóma előtti - állapot10 bán volt; várható élettartamuk kevesebb mint 7 nap volt. Ennek ellenére pozitív választ figyeltünk meg a betegek 70%-ánál; a legáltalánosabb hatás a fájdalom eltűnése és a betegek szubjektív , jólét” érzése volt; a betegek 48%-ánál a várható élettartam nőtt (több mint
2 hónap), és a fájdalom nem tért vissza.
A tumoros sejttömeg csökkenését figyeltük meg annál az 5 betegnél, akik a több mint 2 hónapos túlélést mutató 14 beteg közé tartoztak (2. táblázat).
2. táblázat
A szubkután injektált LGE-re adott válasz (1,5 mg) (A zárójelben megadott szám az esetek %-át adja)
| Az áttétes daganatok és számuk | Pozitív 30 nap | Pozitív 15 nap | Negatív | |
| Gasztroenterális rák | 8 | 3 (37,5%) | 1(12,5%) | 3 (37,5%) |
| Tüdőrák | 6 | 4 (66,6%) | 1(16,6%) | 1 (16,6%) |
| Mellrák | 4 | 2 (50,0%) | 1(25,0%) | 1 (25,0%) |
| Hasnyálmirigy rák | 4 | 1 (25%) | 2(50%) | 1 (25%) |
| Húgy-ivar rák | 3 | 3 (100%) | - | - |
| Szarkómák | 2 | - | 1(50%) | 1 (50%) |
| Különböző rákok | 2 | 1 (50%) | - | 1 (50%) |
| Összes | 29 | 14+ (48,2%) | 5(20,6%) | 9(31,4%) |
+: 5 esetben a daganatos sejttömeg eltűnt (klinikai műszeres vizsgálat)
A betegek első csoportjában a kezelés igen kedvező szubaktív hatású volt, de további analízist nem végeztünk, mivel a betegek kórképe és klinikai állapota kü- 40 lönböző volt, ezért a betegeket műszeres és laboratóriumi eljárásokkal nem vizsgáltuk.
Ezenkívül az LGE-kezelés gyakorisága a naponkéntitől a hetes kezelésig (0,025 mg/kg) változott. A kísérletekben anafilaxiás reakciót nem lehetett megfigyelni.
A vizsgálatok első részéből a következő következtetéseket lehetett levonni:
1. Az LGE nem toxikus emberben még naponta ismételt kezeléskor sem.
2. A különböző preparátumok ugyanazt a klinikai hatást mutatják.
3. Az LGE erőteljesen csökkenti a fájdalmat javuló cenestézissel; valamint növeli az étvágyat és a bélfunkciót.
A klinikusok véleménye szerint a nagyon beteg emberekben megmagyarázhatatlan „eufóriát” okoz.
Második fázis
Ebben a szakaszban 141 újabb terminális állapotban lévő rákos beteget kezeltünk. A klinikusok hozzáállása már más volt, mivel megbizonyosodtak az LGE ártalmatlanságáról, és annak szükségességéről, hogy a pozitív hatásokat dokumentálni kell. Ennek ellenére a hatóanyagot csak a betegség előrehaladott állapotában lévő betegeknek adtuk pusztán emberbaráti meggondolásból, abban az esetben, ha más kezelés már nem segített. Majdnem minden beteg egyszeri 1,5 mg LGE-t tar45 talmazó szubkután injekciót (körülbelül 0,025 mg/kg) kapott. Néhány esetben (az utolsó három hónapban) egy hónappal később egy második dózist is adtunk.
A következő ábrákon a betegeket „N” és „LJ” csoportba osztottuk.
Az „N” betegek 108 esetet képviselnek.
Az „U” kísérlet 33 beteget érintett. Csak a szubjektív megítélés és az objektív állapot, így teljesítőképesség alapján tekintettük a betegeket kezelésre érzékenynek - válaszadónak -, mivel a betegek várható 55 élettartama nagyon alacsony volt.
,, U” csoport (3. táblázat)
Az LGE-vel kezelt, 33 terminális állapotú beteget 4 hónap után kiértékeltük; közülük 11 már nem volt kiértékelhető, és a további 22 beteg közül 13-an voltak 60 válaszadásra képesek (3 kevesebb mint egy hónapig).
HU 217 615 Β
A 10 reagáló beteg közül (30 napnál hosszabb ideig) 5 még élt, és várható élettartamuk 6 hónap volt.
Ebben a csoportban 5 beteg közül kettőben a tumoros sejttömeg csökkenését (25%-nál nagyobb mértékben) és/vagy eltűnését tudtuk kimutatni. A 9 kezelésre 5 érzéketlen beteg mind meghalt.
Az „U” csoportban 21 betegen kontrollt hajtottunk végre az LGE-kezeléstől eltérő időben.
A granulociták számának növekedése - a limfocitapopuláció növekedése nélkül - 13 betegnél statisztikusan szignifikáns volt.
3. táblázat
A második fázis „U” csoportjának eredményei
| Klinikai helyzet | Esetek száma | Élő | Halott | Regresszió vagy eltűnés (>25%) |
| Kezelésre érzéketlenek | 9 | - | 9 | - |
| Válaszadók, 30 nap | 10 | 5 | 5 | 2 |
| Válaszadók, 30 nap | 3 | - | 3 | - |
| Kiértékelés alatt | 11 | 11 | - | - |
| Összesen | 33 | 16 | 17 | 2 |
A fenti adatok kiértékelésénél vissza kell emlékeznünk arra, hogy a páciensek betegségük végső szakaszában cachexiás és immunszupresszált állapotban voltak, ezért a vér kémiájában bekövetkező LGE indukálta módosulások rejtettek lehetnek, vagy az előzőleg végrehajtott immunszupressziós kezelések (kémiai, radiológiai stb.) hatására módosulhatnak.
„N” csoport (4., 5. és 6. táblázat)
108 leromlott állapotú, terminális stádiumú beteget kezeltünk. Minden más tumorális kezelést (kémiai, radiológiai, kemoterápiái) felfüggesztettünk, mivel hatástalannak bizonyultak. A betegek csak fájdalomcsillapító kezelést kaptak (gyakran opioidokat és FAN-t), amelyet az LGE-kipróbálás kezdetekor megszakítottunk.
Minden beteg szubkután egyszeri dózisban kapta az LGE-t (1,5 mg). Néhány esetben a kezelést 30 nap után megismételtük.
A 108 kezelt beteg közül csak 82-t értékeltünk ki (4. táblázat), és ezek közül az LGE-kezelés után 5 nappal 27 (32,9%) nem volt érzékeny a kezelésre, míg 52 (63,4%) a válaszadók közé tartozott.
A 11 kezelésre érzéketlen (13,4%) és a 37 válaszadó (45,1%) az egyszeri dózisú LGE-kezelés után még 30 napig élt (4. táblázat).
4. táblázat
A második fázis „N” csoportjának kiértékelése
| A daganatok áttétei | Esetek száma | Kiértékelhető esetek | 5 nap | 30 nap | 30 nap | Tömeg+ |
| Gasztroenterikus rák | 27 | 17 | 7- 9+ | 1- 5+ | 1- 5+ | 4 |
| Tüdőrák | 22 | 17 | 5- 10+ | 2- 7+ | 0 5+ | 4 |
| Mellrák | 20 | 16 | 4- 12+ | 2- 8+ | 1- 8+ | 4 |
| Húgy-ivar rák | 12 | 10 | 37 + | 25 + | 1- 4+ | 4 |
| Gégerák | 3 | 2 | 2- 0 | Ι- Ο | 0 0 | 0 |
| Pajzsmirigyrák | 6 | 4 | 2- 2 + | 1- 1 + | 0 0 | 1 |
| Lágyszöveti szarkómák | 4 | 3 | 2- 1 + | 1- 1 + | 0 1 + | 1 |
| Csontszarkómák | 14 | 13 | 2- 11 + | 1- 9+ | 1- 7+ | 6 |
| Összes | 108 | 82 | 27- 52 + | 11- 37+ | 4- 30+ | 24 |
-: kezelésre érzéketlen betegek +: válaszadó betegek tömeg+: a tumoros szövetek mennyisége több mint 25%-kal csökkent vagy eltűnt
Az első hónap után és az elkövetkező 4 hónapban 4 (4,8%) kezelésre érzéketlen és 30 válaszadó (36,5%) volt túlélő. A 30 reagáló beteg közül 24-nél (80%) több mint egy hónapos túléléssel a daganatos szövetek csökkenését (25%-nál nagyobb mértékben) vagy eltűnését lehetett kimutatni (5. táblázat; 11. ábra, az ábrán a sávos jelölésű oszlopok a válaszadók számát, az üres oszlopok a nem válaszadók számát jelölik.)
5. táblázat
Az LGE-terápia hatása a második fázis „N” csoportjában A válaszadók és a daganatos sejttömeg közötti viszony bemutatása
| A daganatok áttétei | Esetek száma | Kezelésre érzéketlenek | Válaszadók > 1 hónap | A daganatos sejttömeg csökkenése’ |
| Gasztroenterális rák | 17 | 1 | 5 | 4 |
| Tüdőrák | 17 | 0 | 5 | 4 |
| Emlőrák | 16 | 1 | 8 | 4 |
| Húgy-ivar rák | 10 | 1 | 4 | 4 |
| Gégerák | 2 | 0 | 0 | 0 |
| Pajzsmirigyrák | 4 | 0 | 1 | 1 |
| Lágyszöveti szarkómák | 3 | 0 | 1 | 1 |
| Csontszarkómák | 13 | 1 | 7 | 6 |
| Összes | 82 | 4 | 30 | 24 |
+: a csökkenés 25%-nál nagyobb vagy teljes eltűnés
Ezeknél a betegeknél a „neoplasztikus fájdalmat” minden más szimptómától függetlenül nyilvántartottuk azért, hogy a beteget válaszadóként tekinthessük.
A 6. táblázat ennek a vizsgálatnak az eredményeit mutatja 82 olyan betegen, aki az előző megfigyeléseket megerősíti: az esetek figyelemre méltó százalékában, közül 37-ben (45,1%) azoknál a betegeknél, akik a legfontosabb opioidokra és a jelenleg használt fájdalomcsillapítási kezelésre gyakran rezisztensek, a keze- 35 lés után 12/24 órával, de mindenképpen az első napon, a fájdalom megszűnt.
A betegek másik kisebb csoportjában (82 közül 24) a neoplasztikus fájdalom mindig teljesen eltűnt, de csak később (30 napon belül).
6. táblázat
Az LGE-kezelés hatása a második fázis „N” csoportjában a neoplasztikus fájdalom eltűnésére
| Daganatok | Kiértékelhető esetek | 5 napig | 30 napig |
| Gasztroenterális rák | 17 | 9 | 6 |
| Tüdőrák | 17 | 9 | 5 |
| Mellrák | 16 | 9 | 2 |
| Húgy-ivar rák | 10 | 5 | 3 |
| Gégerák | 2 | 0 | 0 |
| Pajzsmirigyrák | 4 | 2 | 1 |
| Lágyszöveti szarkómák | 3 | 1 | 1 |
| Csontszarkómák | 13 | 2 | 6 |
| Összesen | 82 | 37 | 24 |
Harmadik fázis
Bár a betegeket ugyanolyan kritériumok alapján kontrolláltuk, mint ahogy azt felsoroltuk, a kezelések 30 anatómiai és patológiai kiértékelését vezettük be. Hat különböző rákban szenvedő betegnél, akik egyszeri LGE-injekciót kaptak, 4-51 nap elteltével műtéttel eltávolitottuk a tumoros sejttömeget.
betegből összesen 8 mintát vizsgáltunk meg.
mintát (mindkettő beteg vékonybélrákos volt) kezelés előtt vettünk.
Ugyanazoktól a betegektől, valamint 2 gyomorrákos, 1 bélrákos és 1 hasnyálmirigyrákos betegből vett szöveteket LGE-kezelés után vizsgáltunk (az injekciót 40 4-51 nappal előbb adtuk).
A szöveteket paraffinba ágyaztuk, és szövettanilag vizsgáltuk. Emellett a limfociták elleni (általános leukocita antigén: CLA) monoklonális ellenanyaggal, PAN P markerrel (L26 monoklonális) és PAN T markerrel (UCLH1 monoklonális) immunfestettük a szöveteket.
Az eredmények arra utalnak, hogy
- az LGE-kezelés előtt nyert daganatos szövet csak mérsékelt gyulladásos beszűrődést mutatott.
Ugyanezen betegeket LGE-vel kezeltük.
Az LGE-kezelés után 15 nappal a vizsgált szövetnél kiterjedt nekrózisos területeket és erőteljes granulocitabeszűrődést figyeltünk meg.
Ugyanilyen eredményeket kaptunk különböző rá55 kos betegeknél az LGE-kezelés után 51 nappal.
Minden esetben, függetlenül attól, hogy az LGEkezelés után mikor történik a vizsgálat, a granulocitabeszűrődés - elsősorban eozinofil granulocita - teljesen nyilvánvaló volt. A különböző típusú limfociták festése a CLA pozitív sejtek jelenlétét, főleg a B-limfo8 citákét mutatták. Ezzel szemben az UCHL1 sejtek (Tlimfociták) ritkán fordultak elő.
A T-limfociták alacsony száma, valamint a granulociták és az eozinofilek jelenléte különösen érdekes, ha figyelembe vesszük a kezelésben részt vevő bete- 5 gek hisztokémiai vizsgálatának eredményeit (az LGEkezelés utáni első napon a granulociták száma nő), az LGE jelenlétében a plazma B-limfocita tenyészetekkel végzett vizsgálatok eredményeit - ahol PBL proliferációs gátlás figyelhető meg -, valamint a bazofíl degra- 10 nulációs teszt eredményeit.
Klinikai következtetések
A három különböző központú vizsgálat eredménye teljesen azonos.
Egy hónap megfigyelés után a válaszadók száma 15 48,2%, 45,4% és 45,1% volt az egyes kísérletekben annak ellenére, hogy az időzítés, a folyamat és a kezelést végző személyzet más volt.
A megfigyelési periódusok után az átlagos válaszadás, beleértve a 7 napnál kevesebb ideig élőket is, az 20 esetek 68,9%-ában, 59%-ában és 63,4%-ában volt megfigyelhető.
Az átlagos válaszadási ráta az összes reagáló beteg 46%-a (egy hónapos megfigyelés) és 63,4%-a. Az adatokat a 12. ábra mutatja. A bal oldali körszeletben a sávos jelölés a válaszadókat, a sima rész a nem válaszadókat jelöli. A jobb oldali oszlopban a kedvező hatást jelentő válaszok megjelenésének időtartamát jelöltük.
Érdekes visszaemlékezni arra, hogy az „N” csoportban (4. és 5. táblázat) a válaszadók 80%-a, akik több mint egy hónapot éltek, a tumoros sejttömeg csökkenését (25%-nál nagyobb mértékben) vagy eltűnését mutatta.
Ugyanebben a megfigyelési szakaszban a kezelésre érzéketlenek közül a túlélés csak 4,8%-os volt.
Egy szokatlan és meglepő megfigyelés a neoplasztikus fájdalom drámai gyorsaságú eltűnése azoknál a betegeknél is, akik az opioidokra már nem reagálnak (7. táblázat).
Ez a hatás a tumoros sejttömeg csökkenése előtt kezdődik, azoknál a betegeknél is, akiknél objektív hatás nem észlelhető.
7. táblázat
Az LGE-kezelés hatása (egyszeri szubkután injektálás (1,5 mg); 134 beteg klinikai vizsgálata)
| A daganatos sejttömeg csökkenése vagy eltűnése | ||||
| Válaszadók | 85 | 7 napnál kevesebb ideig | 19 | - |
| 30 napig | 12 | - | ||
| 30 napon túl | 54 | 3L | ||
| Kezelésre nem reagálók | 49 |
Érdemes mélyebben tanulmányozni ezt a klinikai megfigyelést.
A harmadik vizsgálat eredményei azt mutatják, hogy egyszeri LGE-kezelés után a daganatos szövetben erőteljes granulocitózis és perivascularis nekrózis megy végbe, és hisztológiai szempontból megerősítik az eredmények azt, hogy az emberben az anyag a neoplasztikus sejtek - tumorspecifikus mechanizmussal történő - lízisét és a gazda immunogenikus mintázatának indukálását okozza.
Claims (7)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Fehérjevegyületek, melyeki) kecskemájnak vagy -zsigereknek szokásos módon történő homogenizálásával;ii) a homogenizátumnak perklórsawal 10 °C-nál alacsonyabb hőmérsékleten történő kezelésével;iii) a kapott anyag centrifugálásával és vízzel szembeni dializálásával; majd iv) hipertóniás sóoldattal történő kezeléssel, centrifugálással vagy membránszűréssel és vízzel, majd sópufferrel szembeni dializálással; majdv) 10 000 d molekulatömegű anyagokat fenntartó membránon 1 mg/ml fehérjekoncentrációig történő ultraszűréssel; majd vi) kívánt esetben gélkromatográfiásan tovább történő tisztítással nyerhetők ki, és poliakrilamid gélen 50 000, 20 000, 14 800, 12 000 d elektroforetikus sávot mutatnak.
- 2. Az 1. igénypont szerinti vegyület, melynek molekulatömege poliakrilamid gélen 50 000 d.
- 3. Az 1. igénypont szerinti vegyület, melynek poliakrilamid gélen molekulatömege 20 000 d.
- 4. Az 1. igénypont szerinti vegyület, melynek poliakrilamid gélen molekulatömege 14 800 d.
- 5. Az 1. igénypont szerinti vegyület, melynek poliakrilamid gélen molekulatömege 12 000 d.
- 6. Gyógyászati készítmények, amelyek hatóanyagként az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti fehérjevegyületet tartalmazzák.
- 7. Eljárás fehérjevegyületek - amelyek poliakrilamid gélen 50 000, 20 000, 14 800, 12 000 d elektroforetikus sávot mutatnak - előállítására, azzal jellemezve, hogyi) kecskemájat vagy -zsigereket szokásos módon homogenizálunk;ii) a homogenizátumot perklórsawal 10 °C-nál alacsonyabb hőmérsékleten kezeljük;iii) a kapott anyagot centrifugáljuk és vízzel szemben dializáljuk; majd iv) hipertóniás sóoldattal kezeljük, centrifugáljuk vagy membránszűrjük, és vízzel, majd sópufferrel szemben dializáljuk; majdv) 10 000 d molekulatömegű anyagokat fenntartó membránon 1 mg/ml fehérjekoncentrációig ultraszűrjük; majd vi) kívánt esetben gélkromatográfiásan tovább tisz5 títjuk.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT02234190A IT1244879B (it) | 1990-12-11 | 1990-12-11 | Estratti da tessuti animali, utili in terapia e in diagnostica. |
| PCT/EP1991/002354 WO1992010197A1 (en) | 1990-12-11 | 1991-12-09 | Substances of polypeptide nature useful in human therapy |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9301677D0 HU9301677D0 (en) | 1993-09-28 |
| HUT64569A HUT64569A (en) | 1994-01-28 |
| HU217615B true HU217615B (hu) | 2000-03-28 |
Family
ID=11194931
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9301677A HU217615B (hu) | 1990-12-11 | 1991-12-09 | Kecskéből származó fehérjeszármazékok, előállításuk, és ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5824640A (hu) |
| EP (1) | EP0574394B1 (hu) |
| JP (1) | JP3213942B2 (hu) |
| KR (1) | KR100196028B1 (hu) |
| AT (1) | ATE122890T1 (hu) |
| AU (1) | AU661287B2 (hu) |
| CA (1) | CA2098113C (hu) |
| CZ (1) | CZ283037B6 (hu) |
| DE (1) | DE69110060T2 (hu) |
| DK (1) | DK0574394T3 (hu) |
| ES (1) | ES2073277T3 (hu) |
| HU (1) | HU217615B (hu) |
| IT (1) | IT1244879B (hu) |
| NO (1) | NO308396B1 (hu) |
| RU (1) | RU2113224C1 (hu) |
| WO (1) | WO1992010197A1 (hu) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| UA27048C2 (uk) * | 1993-10-18 | 2000-02-28 | Центр Ембріональних Тканин "Емселл" | Лікарський препарат імуhокоригуючої дії hа осhові клітиhhої суспеhзії, спосіб лікуваhhя цукрового діабету з використаhhям цього препарату |
| IT1270618B (it) * | 1994-07-14 | 1997-05-07 | Zetesis Spa | Proteine ad attivita' antitumorale |
| IT1276860B1 (it) * | 1994-11-04 | 1997-11-03 | Zetesis Spa | Anticorpi naturali contro proteine allogeniche e xenogeniche e metodi per la loro determinazione |
| IT1276707B1 (it) * | 1995-06-13 | 1997-11-03 | Zetesis Spa | Composizioni farmaceutiche ad attivita' analgesica |
| IT1282608B1 (it) * | 1996-02-13 | 1998-03-31 | Zetesis Spa | Sequenza oligonocleotidica da fegato di capra |
| IT1284524B1 (it) * | 1996-09-13 | 1998-05-21 | Zetesis Spa | Uso di proteine come agenti anti-retrovirali |
| KR20000036207A (ko) | 1996-09-18 | 2000-06-26 | 스피니엘로 살바토르 | 자가면역 질환 치료제로서의 단백질의 용도 |
| IT1298442B1 (it) * | 1998-02-24 | 2000-01-10 | Zetesis Spa | Composizioni orali a basso dosaggio di proteine citotossiche |
| US20030165492A1 (en) * | 2000-06-08 | 2003-09-04 | Alberto Panerai | Method of treatment of alzheimer's disease with a protein extractable from mammalian organs |
| JP2003535139A (ja) | 2000-06-08 | 2003-11-25 | レイクポール ホールディング ビー．ブイ． | 哺乳動物の器官から抽出可能なタンパク質を用いる筋萎縮性側索硬化症の治療方法 |
| US20030153511A1 (en) * | 2000-06-08 | 2003-08-14 | Alberto Panerai | Method of treatment of huntington's chorea with a protein extractable from mammalian organs |
| MXPA02012092A (es) * | 2000-06-08 | 2004-08-19 | Rakepoll Holding B V | Metodo de tratamiento de la enfermedad de parkinson con una proteina extraible de organos. |
| ITMI20010762A1 (it) * | 2001-04-10 | 2002-10-10 | Zetesis Spa | Uso della proteina uk114 o di suoi frammenti per il trattamento e la prevenzione dello shock endotossico |
| ITMI20022307A1 (it) * | 2002-10-30 | 2004-04-30 | Zetesis Spa | Associazioni anti-tumorali comprendenti proteine e chemioterapici. |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1598811A (en) * | 1977-01-12 | 1981-09-23 | Hoffmann La Roche | Carcinoma-associated antigens |
| DE3580283D1 (de) * | 1984-01-12 | 1990-12-06 | Symbiotec Gmbh | Biologisch wirksame substanz mit hormonellen eigenschaften, verfahren zu ihrer herstellung und verwendung von histonen fuer medizinische zwecke. |
| JPH064675B2 (ja) * | 1985-07-29 | 1994-01-19 | 伝一 水野 | 抗腫瘍性ポリペプチド |
-
1990
- 1990-12-11 IT IT02234190A patent/IT1244879B/it active IP Right Grant
-
1991
- 1991-12-09 AU AU90357/91A patent/AU661287B2/en not_active Ceased
- 1991-12-09 AT AT92900285T patent/ATE122890T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-12-09 CA CA002098113A patent/CA2098113C/en not_active Expired - Fee Related
- 1991-12-09 KR KR1019930701728A patent/KR100196028B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1991-12-09 CZ CS931116A patent/CZ283037B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1991-12-09 DE DE69110060T patent/DE69110060T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1991-12-09 RU RU93042874A patent/RU2113224C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1991-12-09 JP JP50037392A patent/JP3213942B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1991-12-09 WO PCT/EP1991/002354 patent/WO1992010197A1/en active IP Right Grant
- 1991-12-09 ES ES92900285T patent/ES2073277T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-12-09 HU HU9301677A patent/HU217615B/hu not_active IP Right Cessation
- 1991-12-09 DK DK92900285.5T patent/DK0574394T3/da active
- 1991-12-09 EP EP92900285A patent/EP0574394B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-06-09 NO NO932101A patent/NO308396B1/no not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-03-13 US US08/403,121 patent/US5824640A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE69110060T2 (de) | 1995-09-28 |
| DK0574394T3 (da) | 1995-10-16 |
| ES2073277T3 (es) | 1995-08-01 |
| CZ111693A3 (en) | 1994-04-13 |
| JPH06504039A (ja) | 1994-05-12 |
| ATE122890T1 (de) | 1995-06-15 |
| IT9022341A1 (it) | 1992-06-11 |
| RU2113224C1 (ru) | 1998-06-20 |
| CA2098113C (en) | 2002-02-05 |
| DE69110060D1 (de) | 1995-06-29 |
| IT1244879B (it) | 1994-09-12 |
| IT9022341A0 (it) | 1990-12-11 |
| HUT64569A (en) | 1994-01-28 |
| CZ283037B6 (cs) | 1997-12-17 |
| HU9301677D0 (en) | 1993-09-28 |
| AU661287B2 (en) | 1995-07-20 |
| AU9035791A (en) | 1992-07-08 |
| US5824640A (en) | 1998-10-20 |
| WO1992010197A1 (en) | 1992-06-25 |
| EP0574394B1 (en) | 1995-05-24 |
| CA2098113A1 (en) | 1992-06-11 |
| EP0574394A1 (en) | 1993-12-22 |
| NO932101D0 (no) | 1993-06-09 |
| KR100196028B1 (ko) | 1999-06-15 |
| NO932101L (no) | 1993-08-10 |
| NO308396B1 (no) | 2000-09-11 |
| JP3213942B2 (ja) | 2001-10-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Oldham¹ | Biologicals and biological response modifiers: fourth modality of cancer treatment | |
| US4925662A (en) | Anti-tumor substance and process for producing the same | |
| DE69518919T2 (de) | Autoantikörper enthaltende zusammensetzung für tumorbehandlung und -vorbeugung | |
| Jurin et al. | Antitumorous and immunomodulatory effects of the Viscum album L. preparation Isorel | |
| HU217615B (hu) | Kecskéből származó fehérjeszármazékok, előállításuk, és ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények | |
| DE69033295T2 (de) | Nachweismethode für Harnkarzinom-assoziierte Antigene | |
| DE4244715C2 (de) | Verfahren zur Herstellung individuum-spezifischer, gegen Tumorantigene gerichtete monoklonale Antikörper | |
| Lance | The mechanism of action of anti-lymphocyte serum: studies of antibody eluate | |
| DE69431167T2 (de) | Verfahren zum selektiven methioninentzug für maligne säugetierzellen | |
| KR100425627B1 (ko) | 포유동물의간으로부터추출된단백질및종양치료와관련한그이용방법 | |
| JPH05503098A (ja) | セプシスの処理のためのサイトカイン抗体 | |
| Sunkara | Novel approaches to cancer chemotherapy | |
| KR930004596B1 (ko) | 신규 림포킨(lymphokine) 및 이에 대해 특이성을 갖는 모노클로날(monoclonal) 항체의 제조 방법 | |
| Loos et al. | Detection of endotoxin in commercial L-asparaginase preparations by complement fixation and separation by chromatography | |
| Roe et al. | Thalidomide and neoplasia | |
| WO2003097092A1 (de) | Verwendung eines impfstoffes zur aktiven immunisierung gegen krebs | |
| JP2562014B2 (ja) | 抗腫瘍性リンホカインの１種であるロイコレギユリン及びその治療用途 | |
| Bonavida et al. | Multistage model of natural killer cell-mediated cytotoxicity involving NKCF as soluble cytotoxic mediators | |
| Jooste | Immunological effects of heterologous antilymphocytic sera | |
| Hashimoto et al. | Selective elimination of a B cell subset having acceptor site (s) for T cell-replacing factor (TRF) with biotinylated antibody to the acceptor site (s) and avidin-ricin A-chain conjugate. | |
| Rolland et al. | Anti-lymphocyte serum: a review of its immunological effects and therapeutic value | |
| JP2542562B2 (ja) | 抗体およびモノクロ−ナル抗体の製造方法 | |
| Ozzello et al. | Potentiation of Anti-Tumor Efficacy Resulting from the Combined Administration of Interferon α and of an Anti-Breast Epithelial Monoclonal Antibody in the Treatment of Breasl Cancer Xenografts | |
| JPH07507570A (ja) | 治療剤の卵巣への送達のための抗透明帯抗体 | |
| JPS58201717A (ja) | 腫瘍免疫製剤およびその製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |