HU214457B - Gombaellenes hatás kimutatására alkalmas szűrési eljárás, az ezzel az eljárással azonosított gombaellenes mikroorganizmusokat tartalmazó készítmények, és eljárás növények gombafertőzésének gátlására - Google Patents
Gombaellenes hatás kimutatására alkalmas szűrési eljárás, az ezzel az eljárással azonosított gombaellenes mikroorganizmusokat tartalmazó készítmények, és eljárás növények gombafertőzésének gátlására Download PDFInfo
- Publication number
- HU214457B HU214457B HU9201282A HU128292A HU214457B HU 214457 B HU214457 B HU 214457B HU 9201282 A HU9201282 A HU 9201282A HU 128292 A HU128292 A HU 128292A HU 214457 B HU214457 B HU 214457B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- soil
- plants
- microorganism
- effect
- antifungal
- Prior art date
Links
- 238000012216 screening Methods 0.000 title claims abstract description 37
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims abstract description 8
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims description 71
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 32
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 27
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 title claims description 17
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 title claims description 12
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 title claims description 9
- 239000002689 soil Substances 0.000 claims abstract description 65
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 51
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 31
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 22
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 17
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims abstract description 7
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims abstract description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 44
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 21
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 claims description 15
- 235000021536 Sugar beet Nutrition 0.000 claims description 15
- 241000233639 Pythium Species 0.000 claims description 13
- 241000918584 Pythium ultimum Species 0.000 claims description 13
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 13
- 239000004576 sand Substances 0.000 claims description 13
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 claims description 12
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 241000209140 Triticum Species 0.000 claims description 10
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 claims description 9
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 claims description 9
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims description 9
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 8
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 claims description 8
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 7
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 claims description 7
- 241000813090 Rhizoctonia solani Species 0.000 claims description 7
- 238000009331 sowing Methods 0.000 claims description 7
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 6
- 241000223194 Fusarium culmorum Species 0.000 claims description 5
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 claims description 5
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 4
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 claims description 3
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 claims description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 3
- 241000233732 Fusarium verticillioides Species 0.000 claims description 3
- 241000172143 Aphanomyces cochlioides Species 0.000 claims description 2
- 241001503951 Phoma Species 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 2
- 241000233614 Phytophthora Species 0.000 claims 1
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 claims 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 claims 1
- 238000000151 deposition Methods 0.000 claims 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 abstract description 12
- 230000001355 anti-mycobacterial effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 abstract 1
- 239000003926 antimycobacterial agent Substances 0.000 abstract 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 26
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 26
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 11
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 10
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 9
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 9
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 7
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 7
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 7
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 7
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 description 7
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 description 7
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 7
- 239000005807 Metalaxyl Substances 0.000 description 6
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 6
- ZQEIXNIJLIKNTD-UHFFFAOYSA-N methyl N-(2,6-dimethylphenyl)-N-(methoxyacetyl)alaninate Chemical compound COCC(=O)N(C(C)C(=O)OC)C1=C(C)C=CC=C1C ZQEIXNIJLIKNTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000001965 potato dextrose agar Substances 0.000 description 6
- 238000011045 prefiltration Methods 0.000 description 6
- 241000233624 Phytophthora megasperma Species 0.000 description 5
- 241000219843 Pisum Species 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 241001646398 Pseudomonas chlororaphis Species 0.000 description 4
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 4
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 4
- 239000002361 compost Substances 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 3
- 239000012871 anti-fungal composition Substances 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 230000012447 hatching Effects 0.000 description 3
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 3
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 3
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 3
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 3
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 3
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001149475 Gaeumannomyces graminis Species 0.000 description 2
- 241000975369 Phoma betae Species 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- RIOXQFHNBCKOKP-UHFFFAOYSA-N benomyl Chemical compound C1=CC=C2N(C(=O)NCCCC)C(NC(=O)OC)=NC2=C1 RIOXQFHNBCKOKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MITFXPHMIHQXPI-UHFFFAOYSA-N benzoxaprofen Natural products N=1C2=CC(C(C(O)=O)C)=CC=C2OC=1C1=CC=C(Cl)C=C1 MITFXPHMIHQXPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- KGVPNLBXJKTABS-UHFFFAOYSA-N hymexazol Chemical compound CC1=CC(O)=NO1 KGVPNLBXJKTABS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 2
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 2
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 2
- 239000003415 peat Substances 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- KUAZQDVKQLNFPE-UHFFFAOYSA-N thiram Chemical compound CN(C)C(=S)SSC(=S)N(C)C KUAZQDVKQLNFPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- LDVVMCZRFWMZSG-OLQVQODUSA-N (3ar,7as)-2-(trichloromethylsulfanyl)-3a,4,7,7a-tetrahydroisoindole-1,3-dione Chemical compound C1C=CC[C@H]2C(=O)N(SC(Cl)(Cl)Cl)C(=O)[C@H]21 LDVVMCZRFWMZSG-OLQVQODUSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 description 1
- 241000512259 Ascophyllum nodosum Species 0.000 description 1
- 235000021537 Beetroot Nutrition 0.000 description 1
- 239000005745 Captan Substances 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 description 1
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 1
- 241001175904 Labeo bata Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010029333 Neurosis Diseases 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 239000005814 Pencycuron Substances 0.000 description 1
- 241001361634 Rhizoctonia Species 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940117949 captan Drugs 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 208000015238 neurotic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- OGYFATSSENRIKG-UHFFFAOYSA-N pencycuron Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1CN(C(=O)NC=1C=CC=CC=1)C1CCCC1 OGYFATSSENRIKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 description 1
- 230000003334 potential effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000002834 transmittance Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 description 1
- 235000021419 vinegar Nutrition 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/18—Testing for antimicrobial activity of a material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
- A01N63/27—Pseudomonas
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/38—Pseudomonas
- C12R2001/39—Pseudomonas fluorescens
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/874—Pseudomonas
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/874—Pseudomonas
- Y10S435/876—Pseudomonas fluorescens
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
- Y10S435/929—Fusarium
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
- Y10S435/939—Rhizopus
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
A találmány tárgya gőmbaellenes hatású anyagők kiműtatására alkalmasszűrési eljárás, amelynek sőrán a vélt gőmbaellenes anyaggőmbafertőzésekre gyakőrőlt gátló hatását két vizsgálattal érté elikúgy, hőgy az első vizsgálatban táptalajrétegen Pythiűm kórőkőzó-fajtamicéliűmait alakítják ki, a táptalajrétegre steril talajt rétegeznek,a talajréteghez hőzzáadják a vélt gőmbaellenes hatóanyag alikvőt részt, a kapőtt vizsgálati rendszert inkűbálják, és meghatárőzzák ahatóanyagnak a kórőkőzó növekedésére gyakőrőlt hatását, míg a másődikvizsgálatban talajmintát a növények kirőthadását előidézőgőmbakártevővel fertőznek meg, a gőmbakártevővel megfertőzött talajbaa gőmbafertőzésre érzékeny növény magvait vetik, a talajra fe viszik avélt gőmbaellenes hatóanyag alikvőt részét, a magvakat csírázni és anövényeket növekedni hagyják, majd megfertőzetlen kőntrőllőkkalösszehasőnlítva értékelik a vizsgált anyag hatásősságát. ŕ
Description
A találmány gombaellenes hatás kimutatására alkalmas szűrési eljárásra vonatkozik. A találmány továbbá a szűrési eljárás alapján gombaellenes hatásúnak bizonyult új Pseudomonas fluorescens mikroorganizmus-törzseket tartalmazó készítményekre vonatkozik. Végül a találmány tárgya eljárás növények gombafertőzés elleni védelmére az új Pseudomonas fluorescens mikroorganizmus-törzseket tartalmazó készítmények felhasználásával.
A mikrobiológiai gyakorlatban általánosan alkalmazzák a kívánt értékes tulajdonságokkal rendelkező mikroorganizmusok felkutatására azt a megoldást, hogy talajból elkülönített nagyszámú-jellemzően többezer-mikroorganizmust vetnek alá az adott tulajdonság kimutatására vagy azonosítására alkalmas szűrővizsgálatnak. Ilyen szűrővizsgálatokkal biológiai kontrollanyagok (BKA) is elkülöníthetők, amelyek egyes növényi kártevőkkel szemben hatásosak. A biológiai kontrolianyagok az adott kártevő elleni védekezésben helyettesíthetik vagy kiegészíthetik a kémiai növényvédőszereket.
Az általános gyakorlat szerint olyan földterületekről gyűjtenek be talajmintákat, ahol az adott kártevő jelenléte, illetve kártételei visszaszorulóban lévőnek tűnnek, mert ez a jelenség arra utalhat, hogy a talajban lévő mikroorganizmusok a kártevőre gátló hatást fejtenek ki. Ezután a talajmintákból laboratóriumi körülmények között, a gyökerekről való lemosással és agaron növesztéssel mikroorganizmusokat különítenek el. A mikroorganizmusok agaron tenyésztését egy vagy két olyan hőmérsékleten végzik, amelyek jellemző képviselői a mikrobiológiai növekedés optimális hőmérsékletének; a tenyésztés hőmérséklete rendszerint 25-30 °C. Ezután az izolátumokat első lépésben Petri-csészék sorozatában, agaron, kettős tenyésztési módszerrel szűrővizsgálatnak vetik alá különféle kártevőkkel szemben. Ebben az első szűrővizsgálatban ígéretesnek tűnő mikroorganizmusizolátumokat ezután másodlagos szűrővizsgálatok sorozatában részletesebben vizsgálják; a másodlagos szűrővizsgálatokban talajt használnak fel.
A 106 504 sz. európai szabadalmi leírás szűrési eljárást ismertet specifikusan Gaeumannomyces graminis gombafajtával szemben hatásos mikroorganizmusok kiválasztására. Az ott ismertetett eljárás szerint növényeket üvegházi körülmények között, a vizsgálandó mikroorganizmusok jelenlétében (kezelt növények) és távollétében (kontroll növények) Gaeumannomyces graminis-szal fertőzött talajon termesztenek, a kezelt és a kontroll növények növekedésének összehasonlításával kiválasztják a hatásosnak tűnő mikroorganizmusokat, majd ezeket ugyanilyen módon, de szabadföldi körülmények között tovább vizsgálják. Ezzel analóg, de kórokozóként Pythium spp.-t alkalmazó szűrési eljárást ismertet a 4 647 533 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás specifikusan Pythium spp.-val szemben hatásos mikroorganizmusok kiválasztására. Az utóbbi szabadalmi leírásban azt is közlik, hogy az üvegházi vizsgálatok számának csökkentésére célszerű a mikroorganizmusokat előzetesen táptalajon vizsgálni a kórokozóval szemben, és csak azokat a mikroorganizmusokat továbbvinni üvegházi vizsgálatra, amelyek ebben az elsődleges szűrővizsgálatban hatásosaknak mutatkoztak.
A felsorolt ismert szűrési módszerek közös jellemzője, hogy lépcsőzetes elhagyást alkalmaznak, azaz csak azokat a mikroorganizmusokat viszik további vizsgálatra, amelyek egy megelőző szűrésben már hatásosaknak mutatkoztak.
Gyakorlati tapasztalataink azt mutatták, hogy a hagyományos elsődleges szűrővizsgálat sem az eredmény helyessége, sem a szűrés szelektivitása szempontjából nem kielégítő. A hagyományos elsődleges szűrővizsgálatban az izolátumok nagy része (jellemzően körülbelül 20%-a) ígéretesnek bizonyul; ezek túlnyomó többsége azonban a későbbi vizsgálatok alapján nem hasznosítható. Azon túlmenően, hogy az elsődleges szűrővizsgálat igen sok olyan izolátumot bocsát át, ami a későbbi vizsgálatok alapján nem rendelkezik a kívánt hasznos aktivitással, az is ismert, hogy egyes olyan izolátumok, amelyek a további vizsgálatokban megfelelően hasznosíthatóaknak bizonyulnak, fennakadnak az első szűrésen. A hagyományos elsődleges szűrővizsgálatok tehát sok olyan izolátumot bocsátanak át, amelyek az adott kártevő patogenicitását csak gyengén gátolják, és nem bocsátanak át olyan izolátumokat, amelyek erős gátló hatással rendelkeznek.
Szükség van tehát olyan új, talajizolátumok szűrésére alkalmas vizsgálati módszerre, amellyel a potenciálisan jó hatású izolátumok lehető legnagyobb hányada kimutatható, ugyanakkor azonban a kevéssé hatásos anyagok lehető legnagyobb hányada fennakad a szűrésen.
A találmány tárgya gombaellenes hatású anyagok kimutatására alkalmas szűrési eljárás, amelynek során a vizsgálandó anyag gombafertőzésekre gyakorolt gátló hatását két vizsgálattal értékeljük. A találmány értelmében a következőképpen járunk el:
az első vizsgálatban táptalaj-rétegen Pythium kórokozó-fajta micéliumait alakítjuk ki, a táptalaj-rétegre steril talajt rétegezünk, a talajréteghez a vélt gombaellenes hatóanyag alikvot részét adjuk, a kapott vizsgálati rendszert inkubáljuk, és meghatározzuk a hatóanyagnak a kórokozó növekedésére gyakorolt gátló hatását; és a második vizsgálatban talajmintát a növények kirothadását előidéző gombakártevővel fertőzünk meg, a gombakártevővel megfertőzött talajba a gombafertőzésre érzékeny növény magvait vetjük, a talajra a vélt gombaellenes hatóanyag alikvot részét visszük fel, a magvakat csírázni és a növényeket növekedni hagyjuk, majd megfertőzetlen kontrollokkal összehasonlítva értékeljük a vizsgált gombaellenes hatóanyagnak a növény egészségi állapotára gyakorolt hatását.
A találmány szerinti eljárás különösen előnyösen alkalmazható talajból elkülönített mikroorganizmusok BKA tulajdonságainak kimutatására; ez az eljárás azonban vegyszerek gombaellenes aktivitásának kimutatására is felhasználható.
Miként már közöltük, a hagyományos megoldás szerint a mikroorganizmusok izolálására alkalmazott eljárás önmagában nem szelektív. A találmány szerint előszűrési módszert dolgoztunk ki mikroorganizmusok elkülönítésére talajmintákból. Ezt az előszűrést a következőképpen végezzük: zárható tartályba nedves steril homokréteget helyezünk, a homokrétegre nedves állapotban ráte2
HU 214 457 Β rítjük a talajmintát, a talajmintába a visszaszorítandó kórra érzékeny növény magvait vetjük, a tartályt lezárt állapotban a betegség kialakulásának kedvező környezeti körülmények közé helyezzük, a magvakat csírázni hagyjuk, majd amikor a magvakból kifejlődött gyökerek a talajrétegből már átnyúlnak a homokrétegre, mindkét rétegen keresztül hosszanti irányban kettévágjuk a csövet, a homokrétegből (és csak a homokrétegből) kiemeljük a gyökereket, és a kiemelt gyökerekről izoláljuk a mikroorganizmusokat.
A találmány szerinti két vizsgálatban megfelelőnek bizonyult mikrobiológiai vagy kémiai gombaellenes hatóanyagokat a gombafertőzést gátló hatás további vizsgálatára egy vagy több, az alábbiakban felsorolt szűrővizsgálatnak vethetjük alá:
(a) cukorrépa Aphanomyces cochlioides-fertőzésére kifejtett hatás vizsgálata 12-15 °C-on;
(b) borsó Pythium ultimum-fertőzésére kifejtett hatás vizsgálata 12-15 °C-on;
(c) borsó Pythium ultimum-fertőzésére kifejtett hatás vizsgálata 24-27 °C-on;
(d) borsó Rhizoctonia solani-fertőzésére kifejtett hatás vizsgálata 24-27 °C-on;
(e) búza Fusarium culmorum-fertőzésére kifejtett hatás vizsgálata 18-21 °C-on;
(f) szójabab Phytophthora megasperma-fertőzésére kifejtett hatás vizsgálata 20-24 °C-on;
(g) burgonyaszeletek Fusarium moniliforme-fertőzésére kifejtett hatás vizsgálata 20-24 °C-on;
(h) burgonyaszeletek Fusarium sambusinum-fertőzésére kifejtett hatás vizsgálata 20-24 °C-on; és/vagy (i) cukorrépa Phoma-fertőzéseire kifejtett hatás vizsgálata 15-19 °C-on.
A fentieket összegezve a találmány lehetőséget nyújt potenciális biológiai kontrollanyagok elkülönítésére oly módon, hogy csak a gyökereken lévő aktív mikroorganizmusokat különítjük el, ezeket két előszűrési vizsgálatnak alávetve nagy potenciális aktivitású mikroorganizmusokat választunk ki, majd az előszűrési vizsgálatokban megfelelőeknek bizonyult mikroorganizmusokat további szigorú vizsgálatok sorozatának vetjük alá, és így olyan mikroorganizmusokat azonosítunk, amelyek a szabadföldi körülmények széles választékában vizsgálva igen erős aktivitást fejtenek ki. Ez a megoldás lényegesen előnyösebb a hagyományos szűrővizsgálati módszereknél. Miként már közöltük, a hagyományos szűrővizsgálatok előszűrési lépésén fennakadhatnak olyan mikroorganizmusok, amelyek a találmány szerinti vizsgálati eljárást alkalmazva hatásosaknak bizonyultak, továbbá a hagyományos szűrővizsgálati eljárások előszűrési lépése igen sok olyan mikroorganizmust bocsát át, amelyek a későbbi vizsgálatok szerint hatástalanok, vagy a kontrolioknál kevésbé hatásosak.
A találmány szerinti szűrővizsgálati eljárással egyszerűen azonosíthatunk olyan gombaellenes hatóanyagokat, amelyek egy adott összehasonlító gombaellenes vegyszerével azonos vagy annál nagyobb mértékű gátló hatást fejtenek ki gombafertőzésekkel szemben.
A találmány szerinti eljárással négy olyan mikroorganizmust különítettünk el és azonosítottunk, amelyek a gombafertőzések - elsősorban a kirothadással járó gombafertőzések - viszonylag széles választékával szemben fejtenek ki igen erős gátló hatást. A találmány szerinti eljárással elkülönített, a Pseudomonas fluorescens fajtába tartozó mikroorganizmusok tenyészeteit a Budapesti Szerződés előírásainak megfelelően 1989. szeptember 1 -én helyeztük letétbe a National Collection of Industrial and Maríné Bacteria Limited (Aberdeen, Nagy-Britannia) törzsgyűjteményben 40186,40187,40188 és 40190 számon. Oltalmi igényünk ezekre a mikroorganizmusokra is kiteljed.
A találmány továbbá mezőgazdasági célokra felhasználható gombaellenes készítményekre vonatkozik, amelyek hatóanyagként egy vagy több, a fentiekben felsorolt mikroorganizmust tartalmaznak legfeljebb 95 tömeg% mennyiségben, szokásos mezőgazdasági hígító-, hordozó és/vagy egyéb segédanyagokkal együtt.
A találmány szerinti gombaellenes készítmények például magvak bevonására alkalmas kompozíciók, gyökerek vagy magvak elárasztására alkalmas folyékony kompozíciók, továbbá granulátumok és porkészítmények lehetnek. Ezeket a készítményeket a növényvédőszertechnológiában jól ismert módszerekkel, ismert adalékés segédanyagok felhasználásával állítjuk elő.
A találmány szerinti eljárás szűrési szelektivitásának és szűrési hatékonyságának vizsgálata céljából körülbelül 7000 mikroorganizmus-izolátumot vizsgáltunk a hagyományos és a találmány szerinti szűrővizsgálati módszerekkel. A hagyományos szűrővizsgálat in vitro körülmények között végzett előszűrési lépésében a vizsgált mikroorganizmusok mintegy 20%-a bizonyult megfelelőnek, míg a találmány szerinti, két vizsgálatból álló előszűrés csak az izolátumok 4-5%-át mutatta hatékonynak. Rendkívül fontos, hogy a találmány szerinti előszűrés mindkét vizsgálatában egymáshoz nagymértékben hasonló mikroorganizmusok bizonyultak hatékonyaknak, míg a hagyományos, agarlemezen végzett előszűrés igen heterogén és nagymértékben eltérő mikroorganizmus-kört mutatott ki hatásosnak. A hagyományos előszűrésen fennakadt (tehát a hagyományos szűrési eljárásban további vizsgálatra már nem kerülő) mikroorganizmusok egyes képviselői a későbbi szűrővizsgálatokban és a szabadföldi kísérletekben nagy aktivitásúaknak bizonyultak. A találmány szerinti megoldás alapvető előnye tehát az, hogy az előszűrés csökkenti a további szűrővizsgálatokba kerülhető mikroorganizmusok számát, ugyanakkor azonban a további szűrővizsgálatokba került mikroorganizmusok nagy hányada szabadföldi körülmények között valóban a kívánt aktivitással rendelkezik. Ennek oka feltevéseink szerint a következő:
A hagyományos vizsgálatban az előszűrési lépésben a mikroorganizmus agaron való növekedése szempontjából optimális körülményeket (például hőmérsékletet és tápanyag-összetételt) alkalmaznak; ezek a körülmények azonban igen távol vannak a mikroorganizmus kívánt végső felhasználásának tényleges körülményeitől. Következésképpen az előszűrést túlélő mikroorganizmusok általában gyengék, csak az agar-tenyésztéskor alkalmazotthoz igen közel álló körülmények között képesek növekedésre, és a tényleges szabadföldi körülményeket
HU 214 457 Β megközelítő további vizsgálatok körülményei között már életképtelenek. Más oldalról azonban - miként ezt vizsgálataink kimutatták - a kiindulási nagyszámú izolált mikroorganizmus között olyan törzsek is lehetnek, amelyek a szabadföldi körülményeket (például az alacsonyabb hőmérsékletet vagy a szűkösebb vagy más összetételű tápanyag-ellátottságot) részesítik előnyben a hagyományos előszűrést vizsgálat körülményeihez képest. Ezek a mikroorganizmusok az agaron végzett vizsgálat körülményei között csak gyengén növekednek, ezért rendszerint fennakadnak a szűrésen, és nem kerülnek további vizsgálatra. A találmány szerint alkalmazott két vizsgálatot azoban a tényleges szabadföldi körülményekhez közelebb álló körülményekek között végezzük, és így reálisabb eredményt kapunk a mikroorganizmusnak a tényleges felhasználás körülményei között várható életképességéről és aktivitásáról.
A találmány tárgya továbbá eljárás növények gombafertőzéseinek meggátlására oly módon, hogy a növényekre, a növények magvaira vagy a növények termesztőközegére a találmány szerinti gombaellenes készítményt visszük fel. Magvak kezelésére 103-1010 sejt/mag mennyiséget használunk. Növény vagy termesztőközeg kezelésére ezzel ekvivalens dózist használhatunk, amit a fenti dózisból számíthatunk ki az egységnyi területre kijuttatott magvak száma alapján, vagy tapasztalati úton (szakember számára ismert tényezők, például a kezelendő növény fajtája, fejlettségi állapota, a kezelés és az esetleges ismételt kezelések időpontja, éghajlati tényezők stb. figyelembevételével) vagy rutin elókísérletekkel határozhatunk meg.
Az NCIB 40187 törzset szabadföldi termesztésű búzanövények gyökereiről különítettük el, búzanövényeket termelő gazdaság címe: Badbury 2, Draycott Farm, Chiseldon, Swinton, Wiltshire, Nagy-Britannia. Az NCIB 40186 és 40188 törzset Jodoigne-ből (Belgium) származó talajmintából különítettük el, a talajmintát a Stockoy Field nevű helyről vettük. Az NCIB 40190 törzset a Lower Garston Field, Rushall Farm, Newbury, Nagy-Britannia gazdaságból származó fiatal búzanövények gyökereiből különítettük el.
A következőkben a mikroorganizmusok elkülönítését, jellemzését, és az izolátumok növényi gombakártevőkkel szembeni aktivitásának meghatározására alkalmazott szűrővizsgálatokat ismertetjük. A következőkben ismertetendő módszerrel igen nagy számú mikroorganizmust különítettünk el, azonosítottunk és vizsgáltunk, a fent említett négy törzset a szűrővizsgálatokban mutatott kiemelkedő aktivitásuk alapján választottuk ki.
A mikroorganizmusok elkülönítése:
cm mélységű, 5,5 cm átmérőjű dialízis-csöveket, amelyeken az egyik csővégtől 5-7 cm távolságban bütyök van, 12 cm mélységig mosott és szárított finom homokkal töltöttünk meg, és a homokot 20 ml desztillált vízzel megnedvesítettük. A csöveket hordozóként szolgáló 7 cm átmérőjű, 30 cm mély üvegcsövekbe helyeztük, majd a csövek egyik végét (az alját) alumíniumfóliával borított gumidugóval, a csövek tetejét pedig vattadugóval zártuk le, és a csöveket alumíniumfóliába göngyöltük. Az így előkészített csöveket két alkalommal 121 °C-on 60 percig autoklávban kezeltük.
A kiválasztott helyről talajmintát vettünk, és a mintát felhasználásig 40%-os nedvességtartalmú állapotban 4 °C-on tároltuk. A mintát a mintavételtől számított 2 napon belül felhasználtuk. A talajmintát 4 mm széltávolságú szitán átszitáltuk, majd 3 cm magasságban a csövekbe töltött homokra rétegeztük. A talajba borsó-, búza-, cukorrépa-, napraforgó-, kukorica- vagy szójababmagvakat vetettünk, és a magvakra talajt rétegeztünk (a talajréteg teljes magassága 6 cm volt). A csöveket álló helyzetben drótkosárba helyeztük, és a drótkosarat a párolgási veszteség minimumra csökkentése érdekében műanyag tartóba tettük. A műanyag tartót a légcsere biztosítására kilyuggattuk. A műanyag tartóban lévő drótkosarakat termesztőtérbe helyeztük, és 4 héten át 10-24 °C hőmérsékleten, 70% relatív páratartalom fenntartása és napi 16 órás nappali - 8 órás éjszakai ciklus beállítása mellett inkubáltuk.
A 4 hetes inkubálás leteltével a műanyagból készült dialízis-csöveket elősterilezett szikével felnyitottuk. A növények gyökereit kikeféléssel megtisztítottuk a talajtól és a homoktól, és a növényeket fehér műanyag tálcára helyeztük. A növények korona- és csúcsrészeit levágtuk, és steril vízben külön mostuk.
A levágott növényi részeket üveggyöngy-réteget és 20 ml ionmentes vizet tartalmazó steril Erlenmeyer lombikokba helyeztük. A lombikokat forgó inkubátoron 30 percig 120 fordulat/perc sebességgel rázattuk. A gyökerek oldatát és a lombikokból elkülönített gyökér- és korona-mosófolyadékokat felhasználva 1:9 arányú hígítást készítettünk steril Ringer oldattal 10_3-szoros hígításig. Az így kapott oldatok 100-100 pl térfogatú alikvot részeit három agar-táplemez felületén futtattuk szét. A felhasznált agar-táplemezek összetétele a következő volt:
1. 1/10 arányú tripton/szója agar:
Tripton-szója táptalaj 3,0 g
Bakteriológiai agar 17,5 g
Ionmentes víz 1000 ml
A táptalajt 15 percig 121 °C-on autoklávban sterilizáltuk.
2. Gyökérkivonat agar:
Friss búzagyökerek 10 g
3. sz. agar 17,5 g
Ionmentes víz 1000 ml
A friss gyökereket lemértük, és háztartási keverőgépben kevés ionmentes vízzel összekevertük. A kapott sűrű szuszpenziót négy kis száltávolságú muszlinháló-rétegből készített zsákba töltöttük, a zsákot 2 literes edény fölé függesztettük, a 2 literes edénybe betöltöttük az ionmentes víz maradékát, és a zsák tartalmát 4 napig 20 °C-on tartottuk. Ezután a muszlinzsákot kiemeltük, és a gyökérkivonathoz hozzáadtuk az agart. A táptalajt 15 pecig autoklávban 121 “C-on sterilizáltuk.
3. Talaj kivonat agar:
Talajminta 10 g
3. sz. agar 17,5 g
Ionmentes víz 1000 ml literes edénybe betöltöttük az ionmentes vizet, majd hozzáadtuk a talajt. A talajszuszpenziót lefedtük, 4 napig
HU 214 457 Β °C-on tartottuk, majd négyrétegű kis száltávolságú muszlinhálón átszűrtük. A szűrlethez hozzáadtuk az agart, és a táptalajt 15 percig autoklávban 121 °C-on sterilizáltuk.
Minden egyes hígítással háromszor ismételtük meg a vizsgálatot. Az agarlemezeket legföljebb 5 napig 12 °Con inkubáltuk, ezután megszámláltuk az egyes lemezeken kifejlődött telepeket, és a telepszámot feljegyeztük. Lehetséges esetben olyan agarlemezeket választottunk ki a további vizsgálatokhoz, ahol az egyes agar-növény kombinációkban 50 vagy annál kevesebb telep növekedett a lemezen. Ha ez nem volt lehetséges, a lemezre ötven rácspontot tartalmazó rácsot helyeztünk, és azokat a telepeket emeltük le a lemezről, amelyek a legközelebb estek az egyes rácspontokhoz. így a telepeket teljesen véletlenszerűen választottuk ki.
Az egyes telepeket steril kaccsal emeltük le a lemezekről, és 1/10 arányú tripton/szója agart (1/10 TSA) tartalmazó, 5 cm átmérőjű Petri-csészékbe töltött lemezeken tovább tenyésztettük. A lemezeket 5 napig 12 °Con inkubáltuk. Ezután megvizsgáltuk az izolátumok tisztaságát. Ha a vizsgálat szerint vegyes tenyészet képződött, az izolátumot ferde 1/10 TSA lemezen terítettük szét úgy, hogy egyedi telepek képződjenek. Ezután kivá5 lasztottunk egy telepet, és azt 1/10 TSA-n tovább tenyésztettük. A tenyészeteket 4 °C-on tároltuk.
A mikroorganizmusok jellemzése:
A mikroorganizmusok morfológiai jellemzői a következők:
A sejtek morfológiája: Gram-negatív rudak A telepek morfológiája:
NCIB 40186: Törtfehér, kerek, szabályos alakú, teljes, kissé konvex, sima, fényes, félig áttetsző, 1,5-2 mm átmérőjű telepek.
NCIB 40187: Törtfehér, kerek, szabályos alakú, teljes, kiemelkedő, sima, fényes, félig áttetsző, 1 mm átmérőjű telepek.
NCIB 40188: Törtfehér, kerek, szabályos alakú, teljes, kissé konvex, sima, fényes, félig áttetsző, 1,5-2 mm átmérőjű telepek.
1. táblázat
Vizsgált jellemzi | NCIB 40186 | HCIB 40187 | NCIB 40186 | NCIB 40190 |
Ultrát xedukoló | - | — | ||
ledől termelése | - | - | - | |
^avtozmelás glükózból | mm | mm | zm | - |
Alglnin debidroláz | ♦ | ♦ | + | + |
Ureáz | - | mm | - | |
Aaaoulln hidrolízise | - | - | mm | - |
Zselatin hldroliaiaa | 4 | 4 | + | |
3-óalaktozidú» | - | mm | - | - |
GlUkóz aaazimlláláa | 4 | + | + | 4 |
Azablnóz aaazimlláláa | 4 | 4 | ♦ | |
Lannóz aaazimlláláa | + | 4 | 4 | 4 |
Uannit aaazimlláláa | + | + | ♦ | + |
U-aoetll-glükóz-emin aaazimlláláa | + | 4 | - | 4 |
Maltóz aaazimlláláa | - | mm | - | - |
Glükonát aaazimlláláa | 4 | 4 | 4 | + |
Kaprát aaazimlláláa | 4 | 4 | + | ♦ |
Adipát aaazimlláláa | - | - | • | + |
Malát aaazimlláláa | ♦ | ♦ | + | |
Gittát aaazimlláláa | + | 4 | + | 4 |
Penll-ecetát aaazimlláláa | - | - | - | 4 |
Cltokróm oxidáa | ♦ | 4 | 4 | 4 |
HU 214 457 Β
NCIB 40190: Törtfehér, kerek, szabályos alakú, teljes, sík, sima, fényes, félig áttetsző, 1 mm átmérőjű telepek.
Növekedési hőmérséklet:
°C: az összes törzs pozitív (+) °C: valamennyi törzs negatív (-) °C: valamennyi törzs negatív (-)
Fluoreszcencia: Valamennyi törzs pozitív (+)
Kataláz: Valamennyi törzs pozitív (+)
Oxidáz: Valamennyi törzs pozitív (+)
Glükóz-fermentálás: Valamennyi törzs negatív (-)
A mikroorganizmusok élettani jellemzőit az 1. táblázatban foglaljuk össze.
PRIMER SZŰRŐ VIZSGÁLA TOK
Petri-csészébe töltött talajon végzett vizsgálatok:
cm átmérőjű Petri-csészébe 10 10 ml burgonya-dextróz agart töltöttünk. A burgonya-dextróz agarlemezek közepére 7 napos agaros Pythium ultimum-tenyészetből (a tenyésztés hőmérséklete 20 °C) kivágott 5 mm átmérőjű korongokat helyeztünk. Az agarlemezeket 5 napig 20 °C-on inkubáltuk; ezalatt a Pythium ultimum a lemezen telepeket képezett.
Minster Mendip agyagát 60 percig 120 °C-on autoklávban kezeltünk. Az agyaghoz 1 tömeg% búzacsírát adtunk, és alaposan összekevertük. Az egyes Petri-csészékben növekedett Pythium telepeket körülbelül 8-8 g agyaggal fedtük be.
A vizsgálandó mikroorganizmusokat 1/10 TSB vagy 1/10 TSA lemezeken 48 órán át 12 °C-on tényesztettük.
Minden egyes Petri-csészéhez 2-2 ml vizsgálandó anyagot adtunk. Az egyes vizsgálatokat kétszer ismételtük meg. A következő vizsgálandó anyagokat használtuk:
csak 1/10 TSB metalaxil (100 ppm = 0,01 tömeg%) a vizsgálandó mikroorganizmus tenyészete
1/10 TSB Pythiummal meg nem fertőzött burgonya-dextróz agarlemezre rétegezett talajhoz adva.
A tenyészeteket 4 napig 10 °C-on tartottuk. Ezután a talajban észlelhető gombanövekedés vizsgálatával meghatároztuk az aktivitást. Az aktivitást 0 és 3 közötti számskálával jellemeztük, ahol a 3-as érték a teljes növekedésgátlásnak felelt meg.
Fusariummal megfertőzött burgonyán végzett vizsgálatok: 9 cm átmérőjű steril szűrőpapír-korongot vízzel alaposan megnedvesítettünk, és steril Petri-csésze aljába helyeztük. Minden egyes vizsgálathoz 2-2 Petri-csészét készítettünk elő.
Fusarium törzseket (Fusarium sambusinum, Fusarium culmorum és Fusarium moniliforme) megvilágítás közben 14 napig 20 “C-on tenyésztettünk burgonya-dextróz agaron. A képződött konídiumokat 0,85 tömeg %-os steril vizes nátrium-klorid oldatban szuszpendáltuk, és az oldat transzmittanciáját spektrofotométeren 420 nm-nél mérve 20%-ra állítottuk be.
A vizsgálandó mikroorganizmusokat Oxoid tápagaron 24 órán át 20 °C-on tenyésztettük. A tenyészet fél platinakacsnyi mennyiségét 2,5 ml steril vizes nátrium-klorid oldatban szuszpendáltuk. A kontrollvizsgálathoz 2,0 g/1 koncentrációjú Captan oldatot (kémiai gombairtószer) készítettünk. Kezeletlen kontrollként vizes nátrium-klorid oldatot használtunk.
Steril mikrocentrifuga-csövekbe 50-50 pl Fusarium szuszpenziót töltöttünk. Minden egyes vizsgálathoz egy centrifügacsövet használtunk.
Az egyes Petri-csészékbe egy-egy 10 mm-nél kisebb vastagságú burgonyaszeletet helyeztünk, a burgonyaszeletekbe 10 mm átmérőjű dugófuróval 4-4 lyukat fúrtunk. A burgonyaszeletek felületét etanollal sterilizáltuk, és steril szűrőpapírral szárítottuk. A burgonyaszeleteket a levágástól számított 30 percen belül (vagy ha a szeleteket 4 °C-on tároltuk, a levágástól számított 60 percen belül) felhasználtuk.
A burgonyaszeletekbe fürt 4-4 lyuk közül háromba 50 pl Fusarium spóraszuszpenziót (106 konídium/ml) töltöttünk. Az egyik lyukba töltött Fusarium spóraszuszpenziót 50 pl vizsgálandó baktériumszuszpenzióval (körülbelül 108 sejt/ml), a másik lyukba töltött Fusarium spóraszuszpenziót 100 ppm benomillal kevertük össze; a harmadik lyuk kezeletlen kontrollként szolgált.
A Petri-csészékre ráhelyeztük a fedelüket, és 3 napig 20 °C-on tartottuk.
A szövetek fertőzöttségi szintjét 0 és 3 közötti számskálán értékeltük.
Szűrővizsgálat Phoma betae-val szemben:
Cukorrépa-gyökerek belsejéből 2,5 x 2,5 x 1,5 mm méretű darabokat vágtunk ki, és a darabokat műanyag tartályban körülbelül 13 ml steril vízzel megnedvesítettük.
A cukorrépa-darabok felületére Phoma betae-tenyészetet töltöttünk, adott esetben a vizsgálandó mikroorganizmus tenyészetével összekeverve, majd a cukorrépadarabkákat 3 hétig inkubáltuk. Ezután megvizsgáltuk a cukorrépa-darabkák rothadásának mértékét.
Talajba vetett cukorrépán végzett vizsgálatok:
A vizsgálatot olyan természetes talajon végeztük, amiről ismert, hogy kirothasztja a cukorrépát. A talaj nedvességtartalmát 45%-ra állítottuk be, és a talajba bevonatlan, illetve a vizsgálandó mikroorganizmussal bevont cukorrépa-magvakat vetettünk. A mintákat 10 napig 15 “C-on inkubáltuk, naponta 12 órás megvilágítást alkalmaztunk. A vizsgált mikroorganizmus hatásosságát a kikelt növénykék száma alapján értékeltük, Tachigaren (TMTD) kémiai gombairtószerrel összehasonlítva.
SZEKUNDER SZŰRŐVIZSGÁLATOK:
A szekunder szűrővizsgálatokban a mikroorganizmusok Pythium ultimum-mal és Rhizoctonia solani-val szemben kifejtett hatását vizsgáltuk.
Pythium ultimum-ot és Rhizoctonia solani-t burgonya-dextróz agarlemezeken 7 napig 20 °C-on tenyésztettünk.
200 g ezüsthomok, 5 g kukoricaőrlemény, 4 g Beemax búzacsíra és 40 ml víz keverékét 20 percig autoklávban 120 °C-on kezeltük, majd a keveréket lombikba töltöt6
HU 214 457 Β tűk, és a lombikot a Pythium-tenyészet (egy lemez) 1/4-ével beoltottuk. A Rhizoctonia-val végzett vizsgálatokhoz a fentivel egyébként azonos összetételű, de kukoricaőrleményt nem tartalmazó szubsztrátumot használtunk.
A lombikokat 7 napig 20 °C-on inkubáltuk.
Ezután a következő sorozathígításokat készítettük el:
Pythium ultimum-sorozathígítások: A Pythium ultimum-mal beoltott lombik tartalmát finom homokkal összekeverve 300 g végső tömegű keveréket készítettünk.
Egy Pythium ultimum-mal beoltott lombik és 8 liter Mendip Minster agyag keverékét tekintettük 2 normálnak (2N).
A 2N koncentrációjú keverékből tiszta Mendip agyag hozzákeverésével további, kívánt koncentrációjú hígításokat készítettünk. Az izolátumokat rendszerint N/8 és N/32 koncentrációjú Pythium-szubsztrátumokkal szemben vizsgáltuk 12-15 °C-on.
Rhizoctonia solani-sorozathígítások: 3/4 lombik Rhizoctonia solani inokulum és 6 liter Mendip Minster agyag keverékének koncentrációját tekintettük normálnak (N). A szűrővizsgálatokhoz N/4 és N/16 koncentrációjú hígításokat használtunk.
A vizsgálatok céljára 7,8 cm átmérőjű cserepeket 3/4 részben töltöttünk meg a fertőzött talajmintákkal. Minden egyes cserépbe 5-5 borsómagvat vetettünk, és a magvakat tiszta talajjal fedtük be. Az egyes cserepeket 35-35 ml vízzel vagy vizsgálandó baktériumszuszpenzióval öntöztük meg. Minden vizsgálathoz 5-5 cserepet használtunk. A biológiai kontrolianyagok szűréséhez a baktériumokat 1/10 TSB táptalajon 48 órán át 20 °C-on tenyésztettük, és a teljes tenyészetet (térfogata 35 ml) a cserepekre öntöttük. Kontrollokként rendszerint 1/10 TSB táptalajt, illetve kémiai gombairtószert használtunk. A Rhizoctonia solani-val szembeni hatás vizsgálatakor kémiai gombairtószerként Pencycuront használtunk 10, 100, illetve 200 ppm (= 0,001,0,01, illetve 0,02 tömeg%) koncentrációban, míg a Pythium ultimum-mal szembeni hatás vizsgálatakor kémiai gombairtószerként metalaxilt használtunk 100 ppm (= 0,01 tömeg%) koncentrációban.
A Rhizoctonia solani-val szembeni hatás vizsgálata során a növényeket 14 napig 20-25 °C-on, míg a Pythium ultimum-mal szembeni hatás vizsgálata során a növényeket 14 napig 12-15 °C-on termesztettük. A növénykék kifejlődését hetente vizsgáltuk. A növényeket naponta öntöztük. Különös figyelmet fordítottunk arra, hogy a talaj a teljes vizsgálati időszakban nedves legyen, mert mindkét gombakártevő a növények kirothadását okozza.
Phytophthora megasperma-val szembeni hatás vizsgálata:
cm átmérőjű V-8 agar táplemezre a Phytophthora megasperma lemeztenyészetből kivágott 5 mm átmérőjű korongot helyeztünk, és a táplemezt 13 napig 25 °C-on tartottuk. A V-8 agar táplemez összetétele a következő volt:
V-8 Campbell tápfolyadék 180 ml
Kalcium-karbonát 2,7 g
Desztillált víz 720 ml
Difcoagar 13,5 g
A táplemez elkészítése során a komponenseket az agar kivételével összekevertük, és gőzzel 30 percig hevítettük. A keveréket szűrtük, a szűrlet pH-ját 7,2-re állítottuk be, ezután hozzáadtuk az agart, és a keveréket 20 percig 120 °C-on sterilizáltuk.
g köles és 20 ml desztillált víz keverékét 45 percig 110 °C-on kétszer sterilizáltuk. A köles tetejére egy Phytophthora megasperma-lemez 1/4-ét helyeztük felső oldalával lefelé, és sötétben 28 napig 25 °C-on inkubáltuk.
22,5 g, Phytophthora megasperma-val megfertőzött kölest keverőberendezésben 1477,5 g sterilizált talajjal és 112,5 g vízzel alaposan összekevertünk. Talajként ezüsthomok, szántóföldi talaj (pH 7) és moszattőzeg 1:1:1 térfogatarányú keverékét használtuk; a talajt 1 órán át 100 °C-on sterilizáltuk.
500 g így kapott fertőzött köles/talaj keveréket Leonard-kancsóba töltöttünk, és a kancsót műanyag lemezzel lezártuk. A Leonard-kancsó alsó víztartályát 100 ml desztillált vízzel töltöttük fel.
A köles/talaj keverék felszínébe négy lyukat fürtünk, a lyukakba egy-egy Azzurra fajtájú szójabab-magvat helyeztünk, és a magvakat a környező köles/talaj keverékkel fedtük be.
A vizsgálandó mikroorganizmusokat tápagar-lemezeken 24 órán át 28 °C-on tenyésztettük, majd 250 ml űrtartalmú lombikokban (a lombik 150 ml táptalajt tartalmaz) tovább tenyésztettük. 75 ml tenyészet-mintát 5 percig 20 °C-on, 8000 fordulat/perc sebességgel centrifugáltunk. A felülúszót elöntöttük, a centrifugacsőbe újabb 75 ml tenyészetet töltöttünk, a centrifugálást megismételtük, és a felülúszót ismét elöntöttük. A centrifugacsövekben maradt pelleteket 5 ml-es részletekben adagolt, 9,2 g/1 koncentrációjú nátrium-klorid oldattal többször mostuk, végül a pelletet 150 ml vizes nátrium-klorid oldatban szuszpendáltuk.
Minden egyes Leonard-kancsóba 60 ml űrtartalmú fecskendővel 30-30 ml így készített szuszpenziót fecskendeztünk.
Pozitív (kémiai anyagot alkalmazó) kontrollként metalaxilt használtunk. 285,5 g Aprón védjegynevű készítményt (35 tömeg% metalaxilt tartalmaz) 500 ml desztillált vízben oldottunk, és a Leonard-kancsókba 30-30 ml így készített oldatot fecskendeztünk.
Megfertőzetlen kontroliokon is végeztünk vizsgálatokat meg nem fertőzött köles és talaj keverékének felhasználásával.
A magvakat 20±2°C-ra felffitött termesztőtérben, 15 000-17 000 lux fényerővel megvilágítva termesztettük. A mikroorganizmusok hatásosságát a kikelés %-a alapján értékeltük a kémiai gombairtószerrel összehasonlítva.
Fusarium culmorum-mal szemben végzett szűrővizsgálatok:
Burgonya-dextróz agaron 10 napig 20 °C-on Fusarium culmorum-ot tenyésztettünk. A kifejlődött konídiumokat elkülönítettük, és 104—108 konídium/ml koncentrációjú törzsszuszpenziókat készítettünk. Palackokba töltött 100-100 g búzamaghoz 5-5 ml törzsszuszpenziót adtunk, és a palackokat éjszakán át 10 °C-on forgattuk.
A megfertőzött magvak mintáját 60 percre a vizsgálandó baktérium és ezüsthomok keverékébe helyeztük, és így a magvakon körülbelül 106 sejt/mag mennyiségű
HU 214 457 Β bevonatot alakítottunk ki. Egy párhuzamos kísérletben összehasonlító kémiai gombairtószerként 100 ppm benomilt használtunk.
Termesztőtálcán tőzeg-alapú komposztot terítettünk szét, és a komposztba 2 cm mélységben 100 magvat vetettünk. A komposztot a kísérlet kezdetén megöntöztük, majd 2 hére 20 °C-os térbe helyeztük. A komposztot a vetés utáni ötödik napon ismét megöntöztük. A két kezdeti öntözés után - ami a magvak csírázásának elősegítésére szolgált - a komposztot kiszáradni hagytuk a fertőzés kifejlődésének elősegítése céljából.
A növénykéket fejlettségükre és károsodásukra vizsgáltuk. A károsodást 0 (károsodás nem észlelhető) és 4 (súlyosan károsodott) közötti számskálával jellemeztük.
EREDMÉNYEK:
A fent ismertetett módszerekkel mintegy 7000, talajból elkülönített baktériumot vizsgáltunk. A vizsgálatok eredményeit a 2. táblázatban ismertetjük. A táblázatban megadott számértékek 0 (gombaellenes hatás nem észlelhető) és 3 (fertőzöttségre utaló tünetek nem észlelhetők) közötti számskálával jellemzett hatás-adatok. A 2. táblázatban összehasonlításként egy jellemző hatástalan baktériumtörzs (53/87 jelű törzs) adatait is feltüntettük.
SZABADFÖLDI VIZSGÁLATOK ÉS AZOK EREDMÉNYEI:
1989-ben végzett szabadföldi vizsgálatok:
A primer és szekunder szűrővizsgálatokban legígéretesebbnek mutatkozott mikroorganizmus-törzseket szabadföldi körülmények között borsó és cukorrépa kirothadását okozó gombakártevőkkel szembeni biológiai kontroli-anyagokként vizsgáltuk.
Az NCIB 40186 törzzsel borsó kirothadását okozó Pythium ultimum-mal szemben végzett vizsgálat eredményeit az 1. ábrán mutatjuk be. A kísérleteket NagyBritanniában végeztük. A vizsgált törzs védőhatása körülbelül 80%-a volt az Apron-nal (metalaxilt tartal10 mazó kémiai növényvédőszer; védjegy) végzett kezeléssel elérhető védőhatásnak. Ebben a vizsgálatban az NCIB 40187 törzs nagymértékben hatástalannak bizonyult.
A 2. és 3. ábrán cukorrépán NCIB 40186 és NCIB
40190 törzsekkel végzett kísérletek eredményeit szemléltetjük. A kísérleteket Belgiumban végeztük, hat parcellán. Három parcellába (1., 3. és 6. parcella) márciusban, míg a fennmaradt három további parcellába (2., 4. és 5. parcella) májusban vetettünk cukorrépát. A 2. ábrán a vetéstől számított 3 hét elteltével, míg a 3. ábrán a vetéstől számított 6-8 hét elteltével megmaradt növények számát tüntettük fel.
Az 1-3. ábráról a következő eredmények olvashatók le: Az NCIB 40186 törzs a metalaxillal végzett kezeléssel összehasonlítható mértékben védi a borsót Pythium ultimum okozta kirotbadással szemben. A cukorrépán végzett vizsgálatokból megállapítható, hogy mind a hat parcellán az NCIB 40186, illetve 40190 törzzsel végzett kezelés hatására nőtt a megmaradt növények száma a kezeletlen kontrolihoz képest. Három parcellán a vizsgált törzsek hatása összemérhető volt a kémiai kezelés hatásával.
2. táblázat
Vizsgált £OGbakáxtevŐ | ECIB T/CIB TCIB KCIB 4W86 4CI87 4C188 4019C | 53/87 | |||
PrlMZ aatliővizerálatok» | |||||
PuaarluB ouIboxub | 1 | 2 | 0 | 2 | 1 |
Puszilum nenlllfora· | 1 | 1 | 0 | 1 | 1 |
Fuser1un ssBbuainua | 0 | 1 | 0 | 0 | 1 |
Pythium ultlaua | 2 | 3 | 2 | 2 | 0 |
Apbeaomyeee | 3 | 1 | 0 | 2 | 1 |
PtaoBa bataa | 2 | 0 | 3 | 1 | 0 |
CukorȎpa/talaj | 3 | 2 | 2 | 3 | 0 |
Szekunder neurózisáválatok» | |||||
Rhlaootonie aolani | 0 | 3 | 3 | 0 | 0 |
Pythiua ulttana 15°C | 3 | 3 | 3 | 0 | 0 |
Phytophthore megaspexma | 2 | 1 | 1 | 1 | 0 |
PythluB ultlaua 24°C | 3 | 2 | 2 | 2 | 0 |
Fuserlum oulaorua | 2 | 2 | 2 | 2 | 0 |
HU 214 457 Β
3.táblázat
kísérlet eor- 3ZÚma | 200 magból kifcjlűdStt növények szúrna | |||
kezeletlen kontroll | i'.enini kezelés | LCIE 40186 | ;cil 40190 | |
1. | 93 | 125 | 130* | 114 |
2« | 118 | 141* | 124 | 127 |
3. | 118 | 157* | 146* | 138* |
4. | 107 | 139* | 131* | 122* |
5. | 120 | 150* | 128 | 130 |
6. | 84 | 116« | 111* | 114* |
7. | 135 | 153* | 143 | 138 |
8. | 119 | 148* | 141 | 135 |
9. | 134 | 155* | 144 | 144 |
* LSD 5%-os valószínűségi szinten
1990-ben végzett szabadföldi vizsgálatok:
1990-ben az NCIB 40186 és 40190 törzset Pythium gombafajtákkal szemben kifejtett védőhatásukra vizsgáltuk szabadföldi körülmények között. A vizsgálatokat az Amerikai Egyesült Államokban, Franciaországban és Belgiumban végeztük; a vizsgálatok eredményeit a 30 későbbiekben közöljük. Az Európában végzett vizsgálatokhoz a mikroorganizmusokat bemerítéssel, majd homokban végzett szárítással vittük fel a magvakra, míg az Amerikai Egyesült Államokban végzett vizsgálatokhoz a magvakat a vizsgálandó mikroorganizmust tartalmazó 35 mézga/tőzeg kompozícióval kezeltük. Világszerte folytatunk további vizsgálatokat olyan helyen, ahol a növények kirothadását okozó gombafertőzések jellegzetes helyi sajátosságnak minősülnek (például Malaysiában főzeléknövényeken). Noha a világ különböző tájain végzett kísérleteink eredményeit most még nem tudjuk közölni, mert a vizsgálatokat még nem zártuk le, és azok - miként szakember számára nyilvánvaló - a mezőgazdasági eljárások szezonális jellege miatt nem is siettethetők, ezekkel a vizsgálatokkal kapcsolatban jelenlegi szakaszaikban ked- 45 vező jelzéseket kaptunk, így legalábbis ígéreteseknek minősíthetőek ezek a mikroorganizmusok kereskedelmi biológiai kontrolianyagokként. Az említett további mikroorganizmusok további vizsgálata jelenleg laboratóriumi és üvegházi szinten folyik a humán- és környezetvédelmi és 50 biztonsági előírásoknak megfelelően. A laboratóriumi és üvegházi vizsgálatok eredményei azonban azt jelzik, hogy a vizsgált mikroorganizmusok ígéretes aktivitást mutatnak.
Az NCIB 40186 és 40190 törzset Belgiumban és 55 Franciaországban kilenc parcellán vizsgáltuk cukorrépa kirothadását okozó gombakártevőkkel szemben. A kora tavaszi vetés során igen meleg és száraz idő volt, ami késleltette a fertőzés kialakulását. Jelenleg kilenc vizsgálat eredményei állnak rendelkezésünkre.
Belgiumban és Franciaországban 1990-ben végzett szabadföldi kísérletek:
Vizsgált növény: cukorrépa Kémiai kontroll: Tachigaren/TMTD Az eredményeket a 3. táblázatban közöljük.
Franciaországban 1990-ben végzett szabadföldi kísérletek:
A kísérleteket borsón végeztük. Kémiai kontrollokként a 4. táblázatban felsorolt vegyszereket használtuk. A „kikelt növények száma” megjelölésen a kezelést követő 22. napon egy 5 m hosszúságú sávon növekedő növények átlagos számát értjük. A 4. táblázat második oszlopában a vetés után 22 nappal 200 magból kifejlődött növények átlagos számát tüntetjük fel. A számok 40 után megadott betűjelzések a statisztikai szignifikanciát jelzik. Az azonos betűjelzésekkel jelölt adatok között az 5%-os valószínűségi szinten nincs szignifikáns eltérés.
A kontroli-vizsgálatokat normál szabadföldi talajon végeztük, kórokozó felvitele nélkül. A fertőzött talajon végzett vizsgálatok során a barázdákba 200 g/m kórokozót (Pythium) juttattunk.
Az Amerikai Egyesült Államokban 1990-ben végzett szabadföldi kísérletek:
Kaliforniában végzett kísérletek:
A kísérleteket borsón végeztük, kórokozóként Pythiumot használtunk barázdánként 30 g/m mennyiségben. A kezeléseket és az eredményeket az 5. táblázatban közöljük.
Mississippiben végzett vizsgálatok:
A vizsgálatokat kukoricán végeztük. A talajt Fusariummal fertőztük meg (i) 10 g/m barázda, illetve (ii) 30 g/méter barázda mennyiségben. A kikelési %-ot a vetés után 15 nappal határoztuk meg. Az eredményeket 60 a 6. táblázatban közöljük.
HU 214 457 Β
4.táblázat
Kezelés | Kikelt növények szína |
fcafiSifiiÍ=ii5afiálaíaíi» | |
Kezeletlen magvak NCIB 40166 10? sejt/mag | 172,38 AC 184,75 A |
A PH ÜK, 30 g hatóanjag/100 kg mag | 171,50 aC |
IsíűCKIli 2n, a barázda öntözéee metalaxiUal | 181,00 A |
Kezeletlen magvak 100 sej t/mag | 176,00 AC |
Fertőzött talajon végzett vizsgálata^» | |
Kezeletlen magvak NCIB 40186 107 sejt/mag | 111,25 1 144,75 00 |
APbűN, 30 £ hatóanjag/100 -kg mag | 157,23 OvaF |
KlűOíilh 2n, a barázda öntözése netalaxillel | 164,25 aO |
Kezeletlen magvak 10O sejt/mag | 113,36 ül |
5. táblázat
λ e z e 1 ε b | r.ikelésl % |
Fertőzetlen talaj, kezeletlen mag Fertőzött talaj, NCIB 4018β 107 sejt/meg | 93,13 AB 75,31 BCD |
Fertőzött talaj, kezeletlen meg 100 eejt/aag | 51,56 EF |
Fertőzött talaj, APRÓK 30 g hatóanyag/100 kg mag 92,81 AB
6. táblázat
Kezelés | Kikelést % |
Fertőzetlen telaj, kezeletlen mag Fertőzetlen talaj, KCIB 40186 107 sejt/mag | 65,833 C 67,917 C |
Fertőzetlen talaj, magkezelés CAFlAN-nal | 69,583 BC |
(1) módon fertőzött talaj, kezeletlen mag (1) módon fertőzött talaj, KC1B 40186 107 eejt/mag | 51,250 0 80,000 AB |
(11) módon fertőzött talaj, kezeletlen mag (11) módon fertőzött talaj, NCIB 40186 107 sej t/mag | 69,375 BC 82,706 A |
(11) módon fertőzött talaj, CAFfuL-nal kezelt meg | 63,958 C |
Claims (11)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Szűrési eljárás gombaellenes hatású anyagok kimutatására, amelynek során a vélt gombaellenes anyag gombafertőzésekre gyakorolt gátló hatását két vizsgálattal értékeljük, azzal jellemezve, hogy az első vizsgálatban táptalajrétegen Pythium kórokozó-fajta micéliumait alakítjuk ki, a táptalajrétegre steril talajt rétegezünk, a talajréteghez hozzáadjuk a vélt gombaellenes hatóanyag alikvot részét, a kapott vizsgálati rendszert inkubáljuk, és meghatározzuk a hatóanyagnak a kórokozó növekedésére gyakorolt hatását, és a második vizsgálatban talajmintát a növények kirothadását előidéző gombakártevővel fertőzünk meg, a gombakártevővel megfertőzött talajba a gombafertőzésre érzékeny növény magvait vetjük, a talajra felvisszük a vélt gombaellenes hatóanyag alikvot részét, a magvakat csírázni és a növényeket növekedni hagyjuk, majd megfertőzetlen kontrollokkal összehasonlítva értékeljük a vizsgált anyag hatását.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kirothadást előidéző gombakártevőre érzékeny növényként cukorrépát használunk.
- 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy vélt gombaellenes hatóanyagként mikroorganizmust használunk.
- 4. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy mikroorganizmusként gyökereken telepet képező mikroorganizmust használunk.
- 5. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a gyökereken telepet képező mikroorganizmusként talajmintából elkülönített mikroorganizmust használunk, amelynek elkülönítése során zárható tartályba nedves steril homokréteget helyezünk, a homokrétegre nedves állapotban ráterítjük a talajmintát, a talajmintába a visszaszorítandó kórra érzékeny növény magvait vetjük, a tartályt lezárt állapotban a betegség kialakulásának kedvező körülmények közé helyezzük, a magvakat csírázni hagyjuk, majd amikor a magvakból kifejlődött gyökerek a talajrétegből már átnyúlnak a homokrétegre, mindkét rétegen keresztül hosszanti irányban átvágjuk a csövet, kizárólag a homokrétegből elkülönítjük a gyökereket, és a kiemelt gyökerekről izoláljuk a mikroorganizmust.
- 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a mindkét vizsgálatban fertőzésgátló hatást mutató anyagokat egy vagy több, az alábbiakban felsorolt vizsgálatban gombafertőzést gátló hatásra tovább vizsgáljuk:(a) cukorrépa Aphanomyces cochlioides-fertőzésére kifejtett hatás vizsgálata 12-15 °C-on, (b) borsó Pythium ultimum-fertőzésére kifejtett hatás vizsgálata 24-27 °C-on, (c) borsó Pythium ultimum-fertőzésére kifejtett hatás vizsgálata 12-15 °C-on, (d) borsó Rhizoctonia solani-fertőzésére kifejtett hatás vizsgálata 24-27 °C-on, (e) búza Fusarium culmorum-fertőzésére kifejtett hatás vizsgálata 18-21 °C-on, (f) szójabab Phytophthora megasperma-fertőzésére kifejtett hatás vizsgálata 20-24 °C-on, (g) burgonyaszeletek Fusarium moniliforme-fertőzésére kifejtett hatás vizsgálata 20-24 °C-on, (h) burgonyaszeletek Fusarium sambusinum-fertőzésére kifejtett hatás vizsgálata 20-24 °C-on, és/vagy (i) cukorrépa Phoma-fertőzéseire kifejtett hatás vizsgálata 15-19 °C-on.
- 7. Gombaellenes készítmény mezőgazdasági célokra, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként a Budapesti Szerződés értelmében a National Collection of Industrial and Maríné Bacteria Limited (Aberdeen, Nagy-Britannia) törzsgyűjteményben 1989. szeptember 1-jén NCIB40186 számon letétbe helyezett Pseudomonas íluorescens mikroorganizmus-törzset tartalmaz legfeljebb 95 tömeg % mennyiségben, szokásos mezőgazdasági hígító-, hordozó- és/vagy egyéb segédanyagokkal együtt.
- 8. Gombaellenes készítmény mezőgazdasági célokra, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként a Budapesti Szerződés értelmében a National Collection of Industrial and Maríné Bacteria Limited (Aberdeen, Nagy-Britannia) törzsgyűjteményben 1989. szeptember 1-jén NCIB40187 számon letétbe helyezett Pseudomonas fluorescens mikroorganizmus-törzset tartalmaz legfeljebb 95 tömeg % mennyiségben, szokásos mezőgazdasági hígító-, hordozó- és/vagy egyéb segédanyagokkal együtt.
- 9. Gombaellenes készítmény mezőgazdasági célokra, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként a Budapesti Szerződés értelmében a National Collection of Industrial and Maríné Bacteria Limited (Aberdeen, Nagy-Britannia) törzsgyűjteményben 1989. szeptember 1-jén NCIB40188 számon letétbe helyezett Pseudomonas fluorescens mikroorganizmus-törzset tartalmaz legfeljebb 95 tömeg % mennyiségben, szokásos mezőgazdasági hígító-, hordozó- és/vagy egyéb segédanyagokkal együtt.
- 10. Gombaellenes készítmény mezőgazdasági célokra, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként a Budapeti Szerződés értelmében a National Collection of Industrial and Maríné Bacteria Limited (Aberdeen, Nagy-Britannia) törzsgyűjteményben 1989. szeptember 1-jén NCIB 40190 számon letétbe helyezett Pseudomonas fluorescens mikroorganizmus-törzset tartalmaz legfeljebb 95 tömeg % mennyiségben, szokásos mezőgazdasági hígító-, hordozó- és/vagy egyéb segédanyagokkal együtt.
- 11. Eljárás növények védelmére gombafertőzésekkel szemben, azzal jellemezve, hogy a növényekre, vetés előtt a növények magvaira, vagy a növények termesztőközegeire a 7-10. igénypontok bármelyike szerinti készítményt visszük fel 103—1010 sejt/mag vagy növény vagy termesztőközeg kezelése esetén ezzel egyenértékű dózisban.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB898923407A GB8923407D0 (en) | 1989-10-17 | 1989-10-17 | Antifungal microorganism |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HU9201282D0 HU9201282D0 (en) | 1992-06-29 |
HUT60423A HUT60423A (en) | 1992-09-28 |
HU214457B true HU214457B (hu) | 1998-03-30 |
Family
ID=10664731
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU9201282A HU214457B (hu) | 1989-10-17 | 1990-10-16 | Gombaellenes hatás kimutatására alkalmas szűrési eljárás, az ezzel az eljárással azonosított gombaellenes mikroorganizmusokat tartalmazó készítmények, és eljárás növények gombafertőzésének gátlására |
Country Status (23)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5260302A (hu) |
EP (1) | EP0496791B1 (hu) |
JP (1) | JPH05501407A (hu) |
AT (1) | ATE147580T1 (hu) |
AU (1) | AU652132B2 (hu) |
BG (1) | BG61671B1 (hu) |
CZ (2) | CZ284829B6 (hu) |
DE (1) | DE69029739T2 (hu) |
DK (1) | DK0496791T3 (hu) |
ES (1) | ES2095879T3 (hu) |
FI (1) | FI102615B1 (hu) |
GB (1) | GB8923407D0 (hu) |
GR (1) | GR3022295T3 (hu) |
HU (1) | HU214457B (hu) |
MY (1) | MY107283A (hu) |
NO (1) | NO302955B1 (hu) |
NZ (1) | NZ235711A (hu) |
PL (2) | PL166131B1 (hu) |
RU (1) | RU2108038C1 (hu) |
SK (1) | SK503590A3 (hu) |
WO (1) | WO1991005475A1 (hu) |
YU (1) | YU195990A (hu) |
ZA (1) | ZA908268B (hu) |
Families Citing this family (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0472494A3 (en) * | 1990-08-20 | 1992-10-21 | Ciba Geigy Ag | Anti-pathogenic biocontrol agents, genes encoding antibiotics synthesis and the use of said antibiotics |
US5662898A (en) * | 1990-08-20 | 1997-09-02 | Ciba-Geigy Corporation | Genes for the synthesis of antipathogenic substances |
US5670350A (en) * | 1990-08-20 | 1997-09-23 | Novartis Finance Corporation | Genomic DNA encoding a pseudomonas global transcriptional activation element and its use in activating gene expression |
US5639949A (en) * | 1990-08-20 | 1997-06-17 | Ciba-Geigy Corporation | Genes for the synthesis of antipathogenic substances |
KR0145740B1 (ko) * | 1991-05-23 | 1998-08-01 | 채영복 | 고정화 미생물 농약과 그의 제조방법 |
US5348742A (en) * | 1991-05-24 | 1994-09-20 | Ciba-Geigy Corporation | Anti-pathogenic bacterial strains of Pseudomonas fluorescens |
IT1248095B (it) * | 1991-06-20 | 1995-01-05 | Ministero Dell Uni E Della | Ceppi batterici di pseudomonas (ncimb 40403, ncimb 40376, ncimb 40375,ncimb 40377, ncimb 40402, ncimb 40379) in grado di controllare le infezioni fungine. |
FI92790C (fi) * | 1991-11-19 | 1995-01-10 | Kemira Oy | Mikrobintorjuntamenetelmä |
IT1254507B (it) * | 1992-03-06 | 1995-09-25 | Composizione per la confettatura di semi, semi confettati con tale composizione e relativo procedimento di confettatura | |
GB9207352D0 (en) * | 1992-04-03 | 1992-05-13 | Ici Plc | Method to control fungal disease |
US5614188A (en) * | 1993-10-06 | 1997-03-25 | Murakashi Lime Industry Co., Ltd. | Anti-fusarium composition containing strains of bacillus Sp., a chitin-containing material, and a powdery material |
FI95598C (fi) * | 1994-01-31 | 1996-02-26 | Kemira Agro Oy | Mikro-organismi kasvitautien biologiseen torjuntaan |
US6117670A (en) * | 1994-06-08 | 2000-09-12 | Novartis Finance Corporation | Pyrrolnitrin biosynthesis genes and uses thereof |
IN186436B (hu) * | 1996-09-03 | 2001-09-01 | Council Scient Ind Res | |
EP1021954B1 (de) * | 1998-12-24 | 2002-10-02 | Gabriele Dr. Berg | Rhizobakterienisolate zur Anwendung gegen phytopatogene Bodenpilze und Verfahren zur Anwendung der Rhizobakterienisolate |
AU1964900A (en) * | 2000-01-04 | 2001-07-16 | Friedrich Felsenstein | Method for detecting and characterising active agents against plant pathogens |
WO2011154959A1 (en) * | 2010-06-09 | 2011-12-15 | Patel, Babubhai C. | Advance method of preparation of bacterial formulation using pseudomonas fluorescens for controlling various diseases of crop plant |
RU2618873C2 (ru) * | 2010-10-25 | 2017-05-11 | Синтетик Дженомикс, Инк. | Способ высокоэффективного отбора микробных антагонистов против патогенов |
MX361278B (es) | 2013-03-14 | 2018-12-03 | Univ Georgia State Res Found | Inhibición o reducción del crecimiento de hongos. |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4456684A (en) * | 1982-09-08 | 1984-06-26 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Method for screening bacteria and application thereof for field control of diseases caused by Gaeumannomyces graminis |
US4588584A (en) * | 1983-06-01 | 1986-05-13 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Medium for the isolation of Pseudomonas cepacia biotype from soil and the isolated biotype |
US4647533A (en) * | 1984-09-14 | 1987-03-03 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Method for screening bacteria and application thereof for field control of Pythium spp. on small grain crops |
US4798723A (en) * | 1986-07-28 | 1989-01-17 | Lubrizol Genetics, Inc. | Agricultural products from Pseudomonas cepacia strains and methods of preparation |
US4996049A (en) * | 1988-12-19 | 1991-02-26 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Biological control of corn seed rot and seedling blight |
-
1989
- 1989-10-17 GB GB898923407A patent/GB8923407D0/en active Pending
-
1990
- 1990-10-16 RU SU5011724A patent/RU2108038C1/ru active
- 1990-10-16 DK DK90915786.9T patent/DK0496791T3/da active
- 1990-10-16 HU HU9201282A patent/HU214457B/hu not_active IP Right Cessation
- 1990-10-16 ES ES90915786T patent/ES2095879T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-10-16 DE DE69029739T patent/DE69029739T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-10-16 WO PCT/GB1990/001598 patent/WO1991005475A1/en active IP Right Grant
- 1990-10-16 MY MYPI90001811A patent/MY107283A/en unknown
- 1990-10-16 EP EP90915786A patent/EP0496791B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-10-16 JP JP2514815A patent/JPH05501407A/ja active Pending
- 1990-10-16 AU AU66141/90A patent/AU652132B2/en not_active Ceased
- 1990-10-16 NZ NZ235711A patent/NZ235711A/en unknown
- 1990-10-16 ZA ZA908268A patent/ZA908268B/xx unknown
- 1990-10-16 AT AT90915786T patent/ATE147580T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-10-17 PL PL90302121A patent/PL166131B1/pl unknown
- 1990-10-17 CZ CZ941524A patent/CZ284829B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1990-10-17 US US07/597,665 patent/US5260302A/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-10-17 YU YU195990A patent/YU195990A/sh unknown
- 1990-10-17 SK SK5035-90A patent/SK503590A3/sk unknown
- 1990-10-17 CZ CS905035A patent/CZ284515B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1990-10-17 PL PL90287369A patent/PL166864B1/pl unknown
-
1992
- 1992-04-15 NO NO921519A patent/NO302955B1/no not_active IP Right Cessation
- 1992-04-16 FI FI921722A patent/FI102615B1/fi active
- 1992-04-17 BG BG96249A patent/BG61671B1/bg unknown
-
1997
- 1997-01-16 GR GR960403583T patent/GR3022295T3/el unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
HU214457B (hu) | Gombaellenes hatás kimutatására alkalmas szűrési eljárás, az ezzel az eljárással azonosított gombaellenes mikroorganizmusokat tartalmazó készítmények, és eljárás növények gombafertőzésének gátlására | |
CN112899205B (zh) | 一株绿针假单胞菌mn225969及其应用 | |
JPH09500268A (ja) | 植物病原体を制御するためのStreptomycesWYEC108の使用 | |
FI95598B (fi) | Mikro-organismi kasvitautien biologiseen torjuntaan | |
CN110129242B (zh) | 一种抗重茬的复合微生物制剂及其制备方法 | |
CN110317735A (zh) | 生防寡雄腐霉菌及应用 | |
Gunner | Microbiological control of Eurasian watermilfoil | |
Booth et al. | Fusarium diseases of cereals: XI. Growth and saprophytic activity of Fusarium nivale in soil | |
JP4189224B2 (ja) | バチルス属に属する微生物及びそれを用いる防除剤 | |
US5968504A (en) | Fungus Gliocladium catenulatum for biological control of plant diseases | |
JP2827094B2 (ja) | 青枯病防除方法 | |
JP2827093B2 (ja) | 青枯病防除資材 | |
Shobha et al. | Management Of Phytophthora Capsici, Causative Fungi Of Foot Rot Of Pepper By Endophytes Isolated From Azadirachta Indica As Promising Biocontrol Agent | |
CA2066309A1 (en) | Antifungal microorganism | |
CZ189892A3 (en) | Pseudomonas strain, and a preparation for agricultural purposes in which said strain is comprised | |
CN115251087A (zh) | 麦根内生真菌g11在小麦纹枯病防治方面的应用 | |
Charudattan et al. | C1W CI | |
Dhanya | Etiology and management of bacterial of anthurium | |
KR20000066896A (ko) | 접합균류인 자이고린쿠스 모엘레리 pf-425 균주와 이를 이용한식물 생장 촉진제 및 병 발생 억제제로의 이용방법 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
DGB9 | Succession in title of applicant |
Owner name: ZENECA LTD., GB |
|
HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |