FR2949115A1 - OLIGOSACCHARIDES N-SULFATES ACTIVATEURS DES RECEPTEURS DES FGFs, LEUR PREPARATION ET LEUR APPLICATION EN THERAPEUTIQUE - Google Patents

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Abstract

Oligosaccharides N-sulfates activateurs des récepteurs des FGFs, répondant à la formule (I) : dans laquelle : - R , R , R et R représentent des groupes -OSO ou hydroxyle, - R représente un groupe -O-alkyle ou un monosaccharide de formule (II), - R représente un disaccharide de formule (III), - R représente un disaccharide de formule (IV), - R représente un groupe hydroxyle ou un disaccharide de formule (VI) : - R représente un groupe hydroxyle ou -O-alkyle ou un disaccharide de formule (VII), où R représente un groupe -O-alkyle : Leur préparation et leur application en thérapeutique.

Description

OLIGOSACCHARIDES N-SULFATES ACTIVATEURS DES RECEPTEURS DES FGFs, LEUR PRÉPARATION ET LEUR APPLICATION EN THÉRAPEUTIQUE
La présente invention se rapporte à des oligosaccharides N-sulfatés agonistes du système FGFs/FGFRs, à leur préparation et à leur application en thérapeutique.
L'angiogenèse est un processus de génération de nouveaux vaisseaux capillaires. Lors de l'obstruction d'un vaisseau sanguin, l'angiogenèse, associée à l'artériogenèse (dilatation des capillaires), améliore la revascularisation de la zone obstruée. Il a été montré in vitro et in vivo que plusieurs facteurs de croissance, tels que les Fibroblast Growth Factors (FGFs), stimulent le processus de néovascularisation.
Les FGFs sont une famille de 23 membres. Le FGF2 (ou FGF basique) est une protéine de 18 kDa. Le FGF2 induit au niveau des cellules endotheliales en culture leur prolifération, leur migration et la production de protéases. ln vivo, le FGF2 favorise les phénomènes de néovascularisation. Le FGF2 interagit avec les cellules endothéliales par l'intermédiaire de deux classes de récepteurs, les récepteurs de haute affinité à activité tyrosine kinase (FGFRs) et les récepteurs de basse affinité de type héparane sulfate protéoglycane (HSPG).
II est connu que les récepteurs de la surface cellulaire à activité tyrosine kinase s'associent sous forme de dimère à un complexe formé de deux molécules de ligand et à une molécule d'héparane sulfate. La formation de ce complexe permet de déclencher une cascade de signaux intracellulaires aboutissant à l'activation de la prolifération et de la migration cellulaire, deux processus clé impliqués dans l'angiogenèse.
Ainsi, le FGF2 et ses récepteurs représentent des cibles très pertinentes pour les thérapies visant à activer ou à inhiber les processus d'angiogenèse.
Des oligosaccharides de synthèse ont également fait l'objet d'études d'interactions avec les récepteurs des FGFs (C. Tabeur et al., Bioorg. & Med. Chem., 1999, 7, 2003-2012 ; C. Noti et al., Chem. Eur. J., 2006, 12, 8664-8686).
Nous avons maintenant trouvé de nouveaux composés oligosaccharidiques de synthèse capables de s'associer au complexe FGF/FGFRs et de favoriser ainsi la prolifération et la migration de cellules endotheliales in vitro et d'augmenter la formation de néo-vaisseaux in vitro et in vivo.
La présente invention a pour objet de nouveaux composés oligosaccharidiques 5 répondant à la formule (I) : (1) dans laquelle : 10 - RI représente un groupe -OSO3 ou groupe hydroxyle, - R2 représente soit un groupe -0-alkyle, soit un monosaccharide de formule (Il), où R représente un groupe alkyle : os(); - R3 représente un disaccharide de formule (III) : oso3 dans laquelle : 20 - R4 représente un groupe -OSO3 ou un groupe hydroxyle, - R5 représente un disaccharide de formule (IV) : 15 (1v) osa; dans laquelle : - R6 représente un groupe -OSO3 ou un groupe hydroxyle, - R7 représente soit un groupe hydroxyle, soit un disaccharide de formule (VI) : oso3 dans laquelle : - R8 représente un groupe -OSO3 ou un groupe hydroxyle, 10 - R9 représente soit un groupe hydroxyle, soit un groupe -0-alkyle, soit un disaccharide de formule (VII) : oso3 15 dans laquelle Rio représente un groupe -0-alkyle, à la condition que : R9 représente un groupe hydroxyle ou un groupe -0-alkyle lorsque R2 représente un monosaccharide de formule (II) telle que définie ci-dessus ; R7 représente un disaccharide de formule (VI) telle que définie ci-dessus lorsque R2 représente un groupe -0-alkyle ; et RI, R4, R6 et R8 ne représentent pas simultanément 20 des groupes hydroxyles.
Dans le cadre de la présente invention, et sauf mention différente dans le texte, on entend par groupe alkyle un groupe aliphatique saturé linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 4 atomes de carbone. A titre d'exemples, on peut citer les groupes 25 méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle et tert-butyle. Dans les composés selon l'invention, y compris dans chacun des sous-groupes de composés qui seront définis dans ce qui suit, les groupes alkyles représentent avantageusement des groupes méthyles, sauf pour les substituants R9 et Rio, dans lesquels les radicaux alkyles des groupes -0-alkyles représentent avantageusement des groupes propyles.5 Les composés selon l'invention sont des oligosaccharides de synthèse, c'est-à-dire qu'il s'agit de composés obtenus par synthèse totale à partir de synthons intermédiaires, comme cela sera décrit en détail dans ce qui suit. A ce titre ils diffèrent d'oligosaccharides obtenus par dépolymérisation ou isolement à partir de mélanges complexes de polysaccharides, de type héparines ou héparines de bas poids moléculaires. Notamment, les composés selon l'invention présentent une structure bien déterminée résultant de leur synthèse chimique et se présentent sous forme d'oligosaccharides purs, c'est-à-dire exempts d'autres espèces oligosaccharidiques.
L'invention englobe les composés de formule (I) sous forme acide ou sous la forme de l'un quelconque de leurs sels pharmaceutiquement acceptables. Dans la forme acide, les fonctions -COO- et -SO3 sont respectivement sous forme -COOH et -SO3H.
On entend par sel pharmaceutiquement acceptable des composés de l'invention, un composé dans lequel une ou plusieurs des fonctions -COO- ou/et -SO3 sont liées de façon ionique à un cation pharmaceutiquement acceptable. Les sels préférés selon l'invention sont ceux dont le cation est choisi parmi les cations des métaux alcalins, notamment le cation Na+.
Les composés de la formule (I) selon l'invention comprennent également ceux dans lesquels un ou plusieurs atomes d'hydrogène ou de carbone ont été remplacés par leur isotope radioactif, par exemple le tritium ou le carbone 14C. De tels composés marqués sont utiles dans les travaux de recherche, de métabolisme ou de pharmacocinétique, en tant que ligands dans les essais biochimiques. Dans la formule (I) des composés selon la présente invention, il est entendu que : - le monosaccharide de formule (II) est lié à l'unité disaccharidique représentée dans la formule (I) par l'atome d'oxygène situé en position 4 de son unité acide uronique, - le disaccharide de formule (III) est lié à l'unité disaccharidique représentée dans la formule (I) par l'atome d'oxygène situé en position 1 de son unité glucosamine, - de même, le disaccharide de formule (IV) est lié au disaccharide de formule (III) par l'atome d'oxygène situé en position 1 de son unité glucosamine, - de même, le disaccharide de formule (VI) est lié au disaccharide de formule (IV) par l'atome d'oxygène situé en position 1 de son unité glucosamine, - de même, le disaccharide de formule (VII) est lié au disaccharide de formule (VI) par l'atome d'oxygène situé en position 1 de son unité glucosamine. On entend par unité glucosamine l'unité monosaccharidique de formule suivante : 10 L'autre type d'unité saccharidique présente dans les composés selon l'invention est un acide uronique, plus précisément un acide iduronique, répondant à la formule suivante : os(); 15 Ainsi, les composés de formule (I) selon l'invention peuvent également être représentés selon la formule (l') comme suit, dans laquelle se succèdent les unités iduroniques et les unités glucosamines et dans laquelle R,, R2, R4, R6 et R, sont tels que définis précédemment : En fonction des significations de R2 et R7, les oligosaccharides selon l'invention peuvent donc comporter de 7 à 10 unités saccharidiques.
Parmi les composé de formule (I) objets de l'invention, on peut citer ceux dans 25 lesquels : - R,, R3, R4, R5 et R6 sont tels que définis précédemment, 20 - R2 représente un monosaccharide de formule (Il) telle que définie précédemment, et - R, représente un groupe hydroxyle.
De tels composés sont des heptasaccharides. Ils répondent à la formule (I-1) ci-dessous, dans laquelle R, représente un groupe hydroxyle et R, R,, R4 et R6 sont tels que définis précédemment : oso, sous forme acide ou sous la forme de l'un quelconque de leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
Parmi les composé de formule (I) objets de l'invention, on peut citer un sous-groupe de composés dans lequel R2 représente un groupe -0-alkyle.
De tels composés sont des octasaccharides ou des décasaccharides. Ils répondent à la formule (1-2) ci-dessous, dans laquelle R,, R4, R6, R8 et R9 sont tels que définis précédemment et R2 représente un groupe -0-alkyle : R2 oso; sous forme acide ou sous la forme de l'un quelconque de leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
Parmi les composé de formule (I) objets de l'invention, on peut citer un sous-25 groupe de composés dans lequel : - R2 représente un groupe -0-alkyle, et 20 - R, représente un disaccharide de formule (VI) telle que définie ci-dessus, dans laquelle R9 représente un disaccharide de formule (VII) telle que définie ci-dessus.
De tels composés sont des décasaccharides. Ils répondent à la formule (I-3) 5 ci-dessous, dans laquelle RI, R4, R6, R8 et Rio sont tels que définis précédemment : R2 sous forme acide ou sous la forme de l'un quelconque de leurs sels pharmaceutiquement acceptables. 10 Parmi les composé de formule (I) objets de l'invention, on peut citer un sous-groupe de composés dans lequel : - R2 représente un groupe -O-alkyle, et - R, représente un disaccharide de formule (VI) telle que définie ci-dessus, dans 15 laquelle R9 représente soit un groupe hydroxyle, soit un groupe -0-alkyle.
De tels composés sont des octasaccharides et répondent à la formule (I-2) ci-dessus, dans laquelle R,, R4, R6 et R8 sont tels que définis précédemment, R2 représente un groupe -0-alkyle et R9 représente soit un groupe hydroxyle, soit un 20 groupe -0-alkyle.
De façon avantageuse, les octasaccharides selon l'invention sont tels que R9 représente un groupe -0-alkyle.
25 D'autres sous-groupes de composés selon l'invention peuvent présenter plusieurs des caractéristiques énoncées ci-dessus pour chacun des sous-groupes définis précédemment.
L'invention concerne notamment les oligosaccharides suivants : - Méthyl (4-O-propyl-2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-*4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D- 30 glucopyranosyl)-(1-a4)-[(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1 ->4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl-(1--X4)]2-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1->4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-o-glucopyranoside (n° 1) ; - Méthyl (4-O-propyl-2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -*4)-(2-désoxy -6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1- 4)-[(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1 -4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl- (1->4)]3-(2-0-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1->4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranoside (n° 2) ;
-[Méthyl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-*4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1-*4)- [(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1- *4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1 >4)]2-2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranoside]-uronate de sodium (n° 3) ;
- Méthyl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1->4)-(2- désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1 -*g)-(2-O-sodium sulfonatoa-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-*4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1-*4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -*4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1-*4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1 -*4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-g lucopyranoside (n° 4);
- Méthyl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-*4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-a-o-glucopyranosyl)-(1--*4)-(2-O-sodium sulfonato- a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-*4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-o-glucopyranosyl)-(1 >4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1 -*4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1-*4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-*4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranoside (n° 5) ;
- Méthyl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -*4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1-f4)- (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 ù>4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1ù>4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -*4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1 ù>4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranoside (n° 6) ;
- Méthyl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)- (1ù>4)-(2-0-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-*4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1 >4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1ù>4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-34)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranoside (n° 7) ; - Méthyl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 ù>4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium(sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-[(1-*4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -*4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)]2-(1 -4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-*4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-(sulfonato)amino-a-o-glucopyranoside (n° 8) ;
- Méthyl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -*4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonato)amino-a-D-glucopyranosyl)-[(1-*4)- (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-*4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-o-glucopyranosyl)]2-(1-*4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-*4)-2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranoside (n° 9). 9 Dans son principe, le procédé de préparation des composés selon l'invention utilise des synthons de base di- ou oligosaccharidiques préparés comme précédemment rapporté dans la littérature. On se référera notamment aux brevets ou demandes de brevet EP 0 300 099, EP 0 529 715, EP 0 621 282 et EP 0 649 854, ainsi qu'à la publication de C. Van Boeckel et M. Petitou parue dans Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1993, 32, 1671-1690. Ces synthons sont ensuite couplés les uns aux autres de façon à fournir un équivalent entièrement protégé d'un composé selon l'invention. Cet équivalent protégé est ensuite transformé en un composé selon l'invention. Dans les réactions de couplage évoquées ci-dessus, un di- ou oligosaccharide "donneur", activé sur son carbone anomère, réagit avec un di- ou oligosaccharide "accepteur", possédant un hydroxyle libre.
La présente invention concerne donc un procédé pour la préparation des composés de formule (I) caractérisé en ce que : - dans une première phase, un équivalent complètement protégé du composé (I) désiré est synthétisé, - dans une seconde phase, les groupes groupes -COO" et -OSO3 sont introduits et/ou démasqués, - dans une troisième phase, on déprotège l'ensemble du composé, et - dans une quatrième phase, les groupements N-sulfates sont introduits.
La synthèse de l'équivalent complètement protégé du composé (I) désiré est réalisée selon des réactions bien connues de l'Homme de l'art, en utilisant les méthodes pour la synthèse d'oligosaccharides (par exemple G.J. Boons, Tetrahedron (1996), 52, 1095-1121 et demandes de brevets WO 98/03554 et WO 99/36443), dans lesquelles un oligosaccharide donneur de liaison glycosidique est couplé avec un oligosaccharide accepteur de liaison glycosidique pour conduire à un autre oligosaccharide dont la taille est égale à la somme des tailles des deux espèces réactives. Cette séquence est répétée jusqu'à l'obtention du composé de formule (I), éventuellement sous forme protégée. La nature et le profil de la charge du composé final désiré déterminent la nature des entités chimiques utilisées dans les différentes étapes de la synthèse, selon les règles bien connues de l'Homme de l'art. On pourra se référer par exemple à C. Van Boeckel et M. Petitou, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. (1993), 32, 1671-1690 ou encore à H. Paulsen, Advances in selective chemical syntheses of complex oligosaccharides , Angew. Chem. Int. Ed. Engl. (1982), 21, 155-173.
Les composés de l'invention peuvent naturellement être préparés en utilisant différentes stratégies connues par l'Homme de l'art de la synthèse des oligosaccharides. Le procédé décrit ci-dessus est le procédé préféré de l'invention. Toutefois, les composés de formule (I) peuvent être préparés par d'autres méthodes bien connues de la chimie des sucres, décrites par exemple dans Monosaccharides, Their chemistry and their roles in natural products , P.M. Collins et R.J. Ferrier, J. Wiley & Sons (1995) et par G.J. Boons dans Tetrahedron (1996), 52, 1095-1121.
Les groupes protecteurs utilisés dans le procédé de préparation des composés de formule (I) sont ceux qui permettent, d'une part, de protéger une fonction réactive telle qu'un hydroxy ou une amine pendant une synthèse et, d'autre part, de régénérer la fonction réactive intacte en fin de synthèse. On utilise, pour la mise en oeuvre du procédé selon l'invention, les groupes protecteurs couramment utilisés dans la chimie des sucres, tels que décrits par exemple dans Protective Groups in Organic Synthesis , Green et al., 3rd Edition (John Wiley & Sons, Inc., New York). Les groupes protecteurs sont choisis par exemple parmi les groupes acétyle, halogénométhyle, benzoyle, lévulinyle, benzyle, allyle, tert-butyldiphénylsilyle (tBDPS).
Des groupes activateurs peuvent également être utilisés ; il s'agit de ceux classiquement utilisés en chimie des sucres, par exemple selon G.J. Boons, Tetrahedron (1996), 52, 1095-1121. Ces groupes activateurs sont choisis par exemple parmi les imidates et les thioglycosides. Le procédé décrit ci-dessus permet d'obtenir les composés de l'invention sous forme de sels, avantageusement sous forme de sel de sodium. Pour obtenir les acides correspondants, les composés de l'invention sous forme de sels peuvent mis en contact avec une résine échangeuse de cations sous forme acide. Les composés de l'invention sous forme d'acides peuvent être ensuite neutralisés par une base pour obtenir le sel souhaité. Pour la préparation des sels des composés de formule (I), on peut utiliser toute base minérale ou organique donnant, avec les composés de formule I, des sels pharmaceutiquement acceptables.
Les exemples qui suivent décrivent la préparation de certains composés conformes à l'invention. Ces exemples ne sont pas limitatifs et ne font qu'illustrer la présente invention. Les composés de départ et les réactifs, quand leur mode de préparation n'est pas expressément décrit, sont disponibles dans le commerce ou décrits dans la littérature, ou bien peuvent être préparés selon des méthodes qui y sont décrites ou qui sont connues de l'Homme du métier.
Les abréviations suivantes sont utilisées : [ab: pouvoir rotatoire Ac : acétyle AII : allyle Bn : benzyle Bz : benzoyle CCM : Chromatographie sur Couche Mince CrO3 : trioxide de chromeDDQ : 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone ESI : Electron Spray Ionisation h: heure H2SO4 : acide sulfurique Lev : lévulinyle Me : méthyle min : minute Rf : Retardation factor (temps de rétention mesuré sur la CCM par rapport au front du solvant de migration) tBDPS : tert-butyldiphénylsilyle Z : benzyloxy-carbonyle 20 Préparation des intermédiaires de synthèse : SCHEMA 1 : Préparation du disaccharide donneur 15 AcO OAc AcO 11 AcO 12 13 AcO AcO OH 14 15 25 (Benzyl 2-O-acétvl-3-O-benzol-4-O-lévulinoyl-a-L-idopvranosvluronate)-(1-p4)-1, 6-anhvdro-2-azido-3-O-benzol-2-désoxy-13-D-glucopyranose (12) A une solution du composé 11 (11,6 g, 16,2 mmol) (décrit dans la préparation du composé n° 8 de la demande de brevet WO 2006/021653) dans le dioxane anhydre (340 mL), on ajoute successivement la 4-diméthylaminopyridine (2,12 g, 17,3 mmol), le chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide (6 ,5 g, 34,3 mmol) et l'acide lévulinique (3,6 mL ; 34,3 mmol). Après 4h30 d'agitation, on dilue avec le dichlorométhane (1800 mL). La phase organique est lavée successivement avec une solution aqueuse d'hydrogénosulfate de potassium à 10%, avec une solution saturée de chlorure de sodium, avec une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium puis avec de l'eau, séchée sur sulfate de sodium, filtrée puis évaporée à sec. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétone 5/1 v/v) pour donner 12,7 g du composé 12. CCM : Rf = 0,42, gel de silice, toluène/acétone 3/1 v/v (Benzol 2-O-acétyl-3-O-benzol-4-O-lévulinovl-a-L-idopyranosyluronate)-(1û 4)-1, 6-di-O-acétvl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxv-a,(3-D-glucopyranose (13) A une solution du composé 12 (12,76 g, 16,2 mmol) dans l'anhydride acétique (160 mL) est ajouté, à 0°C, l'acide trifluoroacétique (14,1 mL, 183 mmol). Le milieu réactionnel est agité pendant 16 heures à température en ambiante. Après concentration, le mélange est co-évaporé avec du toluène. La purification de résidu par chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétone 4/1 v/v) donne 10,5 g du composé 13. CCM : Rf = 0,49, gel de silice, (toluène/acétone 4/1 v/v) (Benzyl 2-O-acétvl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-a-L-idopvranosvluronate)-(1 -54)-6-0-acétvl-2-azido-3-O-benzvl-2-désoxv-a,13-D-glucopyranose (14) Une solution du composé 13 (10,5 g, 12,0 mmol) et de benzylamine (50 mL, 457 mmol) dans l'ether diéthylique (360 mL) est agitée à température ambiante pendant 2 heures. Le mélange réactionnel est dilué avec de l'éther diéthylique (2000 mL). La phase organique est lavée avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 1 M froid puis à l'eau, séchée sur sulfate de sodium, filtrée puis concentrée à sec. Le résidu est chromatographié sur colonne de gel de silice (toluène/acétone 3/1 v/v) et donne 7,14 g du composé 14.
CCM : Rf = 0,40, gel de silice, toluène/acétone 3/1 v/v (Benzyl 2-O-acétvl-3-O-benzyl-4-O-lévulinovl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 ->4)-6-O-acétvl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a,(3-D-glucopyranose trichloroacétimidate (15) Du trichloroacétonitrile (4,3 mL, 42,8 mmol) et du carbonate de césium (1,89 g, 13,7 mmol) sont ajoutés à une solution du composé 14 (7,14 g, 8,56 mmol) dans le dichlorométhane (160 mL). Après agitation pendant 30 minutes, le milieu réactionnel est filtré puis concentré. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétone 2/1 v/v + 0,1% de triéhylamine) pour donner 7,0 g du composé 15.
CCM : Rf = 0,37 et 0,28, gel de silice, toluène/acétone 2/1 v/v
SCHEMA 2 : Préparation du donneur de glycosyle 20 AcO AcO 11 OH AcO AcO AcO 17 18 19 20 15
(Benzyl 2-O-acétvl-4-O-(allyloxy)carbonyl-3-O-benzyl -a-L-idopvranosvluronate)-(1 -4)-1,6-anhydro-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-R-D-glucopyranose (16) A une solution du composé 11 (11,7 g, 17,3 mmol) (décrit dans la préparation du 20 composé n° 8 de la demande de brevet WO 2006/021653) dans le tétrahydrofurane anhydre, on ajoute, à 0°C, successivement la pyridine (14 mL ; 173 mmol), 4-diméthylaminopyridine (2,12 g, 17,3 mmol) et le chloroformiate d'allyle (18,3 mL, 173 mmol). Après 16 h d'agitation à température ambiante, on ajoute à 0°C de l'eau (47 mL). Après 30 min d'agitation, on dilue avec de l'acétate d'éthyle (800 mL). La phase 25 organique est lavée successivement avec une solution aqueuse d'hydrogénosulfate de potassium à 10% et de l'eau puis avec une solution aqueuse d'hydrogénocarbonate de sodium saturée et de l'eau, séchée sur sulfate de sodium, filtrée puis évaporée à sec. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1 v/v) pour donner 11,4 g du composé 16. CCM : Rf = 0,37, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1 v/v.
(Benzyl 2-O-acétyl-4-O-allyl-3-O-benzyl -a-L-idopyranosyluronate)-(1 -*4)-1,6- anhydro-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-13-o-glucopyranose (17) Le composé 16 (11,44 g, 15,1 mmol) est dissous dans le tétrahydrufurane (100 mL). On ajoute de l'acétate de palladium (67,6 mg, 0,30 mmol) et de la triphényl phosphine (395 mg, 1,5 mmol). Après 2 h d'agitation à reflux, le milieu réactionnel est concentré à sec. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (cyclohexane/acétate d'éthyle 3/1 v/v) pour donner 8,0 g du composé 17. CCM : Rf = 0,33, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1 v/v.
(Benzyl 2-O-acétyl-4-O-allyl-3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -4)-1,6-di-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a,R-o-glucopyranose (18) A une solution du composé 16 (7,96 g, 11,1 mmol) dans l'anhydride acétique (105 mL) refoidie à 0°C est ajoutée de l'acide trifluoroacétique (9,4 mL). Le milieu réactionnel est agité pendant 16 heures à température ambiante. Après concentration, le mélange est coévaporé avec du toluène (5 x 200 mL). La purification de résidu par chromatographie sur colonne de gel de silice (cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1 v/v) donne 7,72 g du composé 18. CCM : Rf = 0,40, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1 v/v
(Benzyl 2-O-acétyl-4-O-allyl-3-O-benzyl -a-L-idopyranosyluronate)-(1-*4)-6-0-acétvl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a, R-D-glucopyranose (19) Une solution du composé 18 (7,72 g, 9,44 mmol) et de benzylamine (3,9 mL, 35,2 mmol) dans l'ether diéthylique (280 mL) est agitée à température ambiante, pendant 6 heures. Le mélange réactionnel est dilué avec de l'éther diéthylique (800 mL). La phase organique est lavée avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 1 M puis avec de l'eau, séchée sur sulfate de sodium, filtrée puis concentrée à sec. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétate d'éthyle 5/2 v/v) pour donner 6,14 g du composé 19. CCM : Rf = 0,45, gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 5/3 v/v
(Benzyl 2-O-acétyl-4-O-allyl-3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -*4)-6-0- acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a,1-D-glucopvranose trichloroacétimidate (20) Du trichloroacétonitrile (4 mL, 39,6 mmol) et du carbonate de césium (4,13 g, 12,7 mmol) sont ajoutés à une solution du composé 19 (6,14 g, 7,9 mmol) dans le dichlorométhane (150 mL). Après agitation pendant 30 minutes, le milieu réactionnel est filtré puis concentré. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétate d'éthyle 4 /1 v/v) pour donner 6,5 g du composé 20. CCM : Rf = 0,50, gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 3/1 v/v SCHEMA 3 : Préparation de l'octasaccharide 26 OAc OC(NH)CCI3 + AcO AcO + composé 15 AcO 25 15 OAc OAc Méthyl (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-a-L-idopvranosvluronate)-5 (1 ù>4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-o-glucopvranosyl)-(1 ù>4)-(méthyl 2- O-acétyl-3-O-benzyl-a-L-idopvranosvluronate)-(1 ù>4)-6-O-acétyl-3-O-benzyl-2- {f(benzyloxy)carbonyllamino}-2-désoxy-a-D-glucopvranoside (22) Un mélange de I'imidate 15 (541 mg, 0,553 mmol), de l'accepteur de glycosyle 21 (650 mg, 0,83 mmol) (préparé selon la méthode décrite dans Carbohydrate Research (1987), 167 67-75) et de tamis moléculaire 4 A en poudre (412 mg) dans un mélange toluène/dichlorométhane (23 mL, 20/3 v/v) est agité sous atmosphère d'argon pendant 1 heure à 25°C. Le mélange réactionnel est refroidi à -25°C et une solution 1M de triflate de tert-butyldiméthylsilyle dans le dichlorométhane (82,5 pL) est ajoutée au milieu réactionnel. Après 15 minutes, le milieu réactionnel est neutralisé par addition d'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après filtration et concentration, le résidu obtenu est purifié par chromatographie d'exclusion de taille (Sephadex LH2O, 120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) pour donner 746 mg du composé 22.
CCM : Rf = 0,37, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 5/6 v/v.
Méthyl (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -*4)-(6-0-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-(méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1->4) -6-O-acétyl-3-O-benzyl-2- {f(benzyloxy)carbonyllamino}-2-désoxy-a-D-glucopyranoside (23) A une solution du composé 22 (2,3 g, 1,44 mmol) dans un mélange toluène/éthanol 1/2 v/v (290 mL) est ajouté l'acétate d'hydrazine (662,3 mg, 7,2 mmol). Le milieu réactionnel est agité pendant 2 heures à température ambiante. Après concentration, le résidu est purifié par chromatographie flash sur colonne de gel de silice (cyclohexane/acétate d'éthyle 5/6 v/v) pour donner 1,84 g du composé 23. CCM : Rf = 0,48, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 5/6 v/v.
Méthyl (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinovl-a-L-idopvranosyluronate)-(1 -*4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-q lucopvranosvl)-(1ù>4)-(benzyl 2- O-acétyl-3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1-*4)- (6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl-(1 -*4)-(méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-a-L- idopyranosyluronate)-(1 -4)-6-O-acétyl-3-O-benzyl-2-{f (benzyloxy)carbonyllamino}-2-désoxy-a-D-glucopyranoside (24) Un mélange de l'accepteur de glycosyle 23 (1,97 g, 1,12 mmol), de l'imidate 15 (1 ,63 g, 1,66 mmol) et de tamis moléculaire 4 A en poudre (2,6 g) dans un mélange dichlorométhane/toluène 1/1 v/v (75 mL) est agité sous atmosphère d'argon pendant 1 heure à 25°C. Le mélange réactionnel est refroidi à -20°C et une solution 1M de triflate de tert-butyldiméthylsilyle dans du dichlorométhane (250 pL) est ajouté au milieu réactionnel. Après 10 minutes, le milieu réactionnel est neutralisé par addition d'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après filtration et concentration, le résidu obtenu est purifié par chromatographie d'exclusion de taille (Sephadex LH2O, 190 x 3,2 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) pour donner 1,63 g du composé 24. CCM : Rf = 0,33, gel de silice, toluène/acétone 3/1 v/v.
Méthyl (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-a-L-idopyranosvluronate)-(1 ù>4)-(6-0-acétvl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopvranosvl)-(1 -*4)-(benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzvl-a-L-idopvranosyluronate)-(1 ù>4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopvranosvl)-(1-*4)- (méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-a-L-idopyranosvluronate)-(1ù 4)-6-O-acétvl-3-O-benzyl-2-(f (benzyloxy)carbonyllamino}-2-désoxy-a-D-glucopyranoside (25) A une solution du composé 24 (1,7 g, 0,73 mmol) dans un mélange toluène/éthanol 1/2 v/v (145 mL) est ajouté de l'acétate d'hydrazine (338 mg, 3,67 mmol). Le milieu réactionnel est agité pendant 2 heures à température ambiante. Après concentration, le résidu est purifié par chromatographie flash sur colonne de gel de silice (cyclohexane/acétate d'éthyle 1/1 v/v) pour conduire au composé 25 (1,41 g). CCM : Rf = 0,47, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 1/1 v/v.
Méthyl (benzyl 2-O-acétyl-4-O-allyl-3-O-benzyl-a-L-idopvranosyluronate)-(1 ù>4)-(6-O-acétvl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopvranosyl)-(1 -4)-f (benzyl 2-0- acétvl-3-O-benzyl-a-L-idopyranosvluronate)-(1-*4)- (6-O-acétvl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopvranosvl-(1 ~4)j,-(méthyl 2-O-acétvl-3-O-benzvl-a-~-idopyranosyluronate)-(1-*4) -6-O-acétvl-3-O-benzyl-2-f f (benzyloxy)carbonyllamino}-2-désoxy-a-D-glucopyranoside (26) Un mélange de l'imidate 20 (0,681 mg, 0,74 mmol), de l'accepteur de glycosyle 25 (1,10 g, 0,5 mmol), et de tamis moléculaire 4 A en poudre (0,555 g) dans un mélange dichlorométhane/toluène 1/1 v/v (26 mL) est agité sous atmosphère d'argon pendant 1 heure à 25°C. Le mélange réactionnel est refroidi à -20°C et on ajoute une solution 1M de triflate de tert-butyldiméthylsilyle dans le dichlorométhane (111 pL). Après 20 minutes, le milieu réactionnel est neutralisé par addition d'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après filtration sur Celite et concentration, le résidu obtenu est chromatographié sur colonne d'exclusion de taille (Sephadex LH2O, 190 x 3,2 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) pour donner successivement 468 mg d'octasaccharide 26 et 842 mg d'un mélange contenant l'hexasaccharide 25 et l'octasaccharide 26.
Ce mélange (842 mg) est traité selon les conditions ci-dessus pour conduire au composé 26 (513,6 mg) après traitement et chromatographie sur colonne (Sephadex LH2O, 190 x 3,2 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v). Les deux fractions (468 mg et 513,6 mg) sont réunies et purifiées par chromatographie HPLC préparative sur colonne de gel de silice (toluène/acétate 5 d'éthyle 2/1 v/v) pour donner le composé 26 (1,03 g). CCM : Rf = 0,44, gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 2/1 v/v.
SCHEMA 4 : Préparation de l'octasaccharide 30 Méthyl (méthyl 4-O-allyl-3-O-benzyl-a-t_-idopyranosyluronate)-(1-*4)- (2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-qlucopyranosyl)-(1->4)-f (méthyl 3-O-benzyl-a-l_- 15 idopyranosyluronate)-(1 -4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl-(1 -4)j (méthyl 3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1--*4)-3-O-benzyl-2-{f(benzyloxy) carbonyllamino}-2-désoxy-a-D-qlucopyranoside (27) 01-1 OH 03s0 sel de triéthylammonium OSO3Li OS03Li 0 O LiOzC OBn OBn 0 00 BnO ZHN OMe 0 Bn0 0 LiO3SO 10 A une solution du composé 26 (819 mg, 0,27 mmol) dans un mélange dichlorométhane/méthanol 2/3 v/v (83 mL) contenant du tamis 3A (10,3 g) est ajoutée, à 0°C, sous atmosphère d'argon une solution 1 M de méthylate de sodium dans le méthanol (1,65 mL). Après 16 heures à -18°C, le milieu réactionnel est neutralisé avec de la résine Dowex 50WX4 H+. Après filtration et concentration, le résidu est purifié par chromatographie d'exclusion de taille (Sephadex LH2O, 120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) suivie d'une chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétone 4/3 v/v) pour donner 605 mg du composé 27. CCM : Rf = 0,41, gel de silice, toluène/acétone 4/3 v/v.
Méthyl (méthyl 4-O-allyl-3-O-benzyl-2-O-triéthvlammonium sulfonato-a-L-idopvranosyluronate)-(1 -*4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-a-D-glucopyranosyl)-(1 >4)-f (méthyl 3-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate)-(1-*4)- (2-azido-3-O-benzol-2-désoxv-6-O- triéthylammonium sulfonato-a-D-glucopyranosyl-(1-4)l2-(méthyl 3-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -4)-3-O-benzyl-2-ff(benzyloxy)carbonyllamino} -2-désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-a-D-glucopyranoside (28) Le composé 27 (300 mg, 0,12 mmol) est séché par co-distillation de N,N- diméthylformanide (3 x 10 mL) puis est mis en solution dans le N,N-diméthylformanide (11 mL). A cette solution on ajoute le complexe trioxyde de soufre-triéthylamine (902 mg ; 4,98 mmol). Le mélange est agité pendant 16 heures à 55°C à l'abri de la lumière puis neutralisé avec du méthanol (202 pL, 4,98 mmol). Le milieu réactionnel est déposé sur une colonne de gel Sephadex LH2O (95 x 2 cm) éluée par mélange dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v pour conduire au composé 28 (426 mg). CCM : Rf = 0,32, gel de silice, acétate d'éthyle/pyridine/acide acétique/eau 11/7/1,6/4 v/v/v/v.
Méthyl (4-O-allyl-3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopvranosvluronate de lithium)-(1ù>4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-a-D-glucopvranosvl)-(1 -4)-f(3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1 -4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-a-D-glucopyranosvl-(1 X4)12-(3-0-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1->4)-3-O-benzyl-2-ff(benzyloxy)carbonyllamino} -2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-a-D-qlucopyranoside (29) A une solution du composé 28 (459 mg, 0,12 mmol) dans un mélange tétrahydrofurane/méthanol 1/1 v/v (19 mL) est ajoutée, à 0°C, une solution 0,7 M d'hydroxyde de lithium dans l'eau (7,6 mL ; q.s.p concentration finale de 0,2 M). Après 1 heure à 0°C puis 16 heures à température ambiante, le milieu réactionnel est refroidi à 0°C, neutralisé avec de l'acide acétique (305 pL) puis déposé sur une colonne Sephadex LH2O (95 x 2 cm) éluée par mélange méthanol/eau 4/1 v/v pour conduire au composé 29 (368 mg). CCM : Rf = 0,25, gel de silice, acétate d'éthyle/pyridine/acide acétique/eau 27/19/4,2/11 v/v/v/v.
Méthyl (4-O-npropyl-2-O-sodium sulfonato-a-L-idopvranosvluronate de sodium)- (1 -*4)-(2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-a-D-glucopvranosvl)-(1 ù>4)42-0-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(2-amino-2-désoxv-6-O- sodium sulfonato-a-D-•luco• ranos I- 1-+4 2-O-sulfonato -a-L-idopvranosvluronate de sodium)-(1 -*4)-2-amino-2-désoxv-6-O-sodium sulfonato-a-D-glucopvranoside (30) Une solution du composé 29 (170 mg) dans un mélange tert-butanol/eau 2/3 v/v (27 mL) est traitée sous pression d'hydrogène (1 bar) en présence de palladium sur charbon 10% (340 mg) à 30°C pendant 24 heures. Après filtration (filtre Millipore LSWP 5 pm), on dépose le mélange réactionnel sur une colonne Sephadex G-25 fine (90 x 3 cm) éluée par une soltution aqueuse du chlorure de sodium 0,2 M. On concentre les fractions contenant le produit et on dessale en utilisant la même colonne éluée par l'eau. Après concentration à sec, on obtient le composé 30 (205 mg). Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique = 2327,55 ; masse expérimentale : 2239 u.m.a. (acides iduroniques observés sous forme COOH).
SCHEMA 5 : Préparation du décasaccharide 33 15 + 25 + composé 20 OAc Méthvl (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1-4)- (6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosvl)-(1-*4)-f (benzyl 2-O-acétvl-3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -*4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl-(1 X4)12-(méthyl 2-O-acétvl-3-O-benzyl-a-L- idopyranosyluronate)-(1ù>4)- 6-O-acétyl-3-O-benzyl-2-{f(benzyloxy)carbonyllamino} -2-désoxy-a-D-glucopyranoside (31) Un mélange de I'imidate 15 (250 mg, 0,255 mmol), de l'accepteur de glycosyle 25 (376 mg, 0,169 mmol) et de tamis moléculaire 4 A en poudre (396 mg) dans un mélange dichlorométhane/toluène 1/1 v/v (11,4 mL) est agité sous atmosphère d'argon pendant 1 heure à 25°C. Le mélange réactionnel est refroidi à -20°C et on ajoute un solution 0,1M de triflate de tert-butyldiméthylsilyle dans du dichlorométhane (381 pL). Après 12 minutes, le milieu réactionnel est neutralisé par addition d'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après filtration et concentration, le résidu 32 obtenu est chromatographié sur colonne Sephadex LH2O (120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) pour donner successivement 150 mg du composé brut 31 et 318 mg d'un mélange contenant l'hexasaccharide 25 et l'octasaccharide 31. Le mélange contenant l'hexasaccharide 25 et l'octasaccharide 33 est traité selon les conditions ci-dessus pour donner après chromatographie d'exclusion de taille (Sephadex LH2O) 151 mg du composé brut 31 et 191 mg d'un mélange contenant l'hexasaccharide 25 et l'octasaccharide 31. Cette opération est répétée deux fois jusqu'à épuisement de l'hexasaccharide 25. Les fractions contenant l'octasaccharide brut 31 sont réunies et purifiées par chromatographie flash sur colonne de gel de silice (toluène/acétate d'éthyle 7/3 v/v) pour donner le composé 31 (351 mg). CCM : Rf = 0,37, gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 7/5 v/v.
Méthyl (benzol 2-O-acétvl-3-O-benzyl-a-L-idopvranosvluronate)-(1 -*4)-(6-0- acétvl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxv-a-o-glucopyranosyl)-(1ù>4)-f (benzol 2-O-acétvl-3-O-benzol-a-L-idopyranosvluronate)-(1 -*4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzol-2-désoxy-ao-glucopvranosvl-(1ù>4)lr (méthvl 2-O-acétvl-3-O-benzol-a-L-idopyranosyluronate)-(1-*4)- 6-O-acétvl-3-O-benzvl-2-{f(benzvloxv)carbonyllamino} -2-désoxv-a-oglucopvranoside (32) A une solution du composé 31 (335 mg, 0,11 mmol) dans un mélange toluène/éthanol 1/2 v/v (22 mL) est ajouté de l'acétate d'hydrazine (51 mg, 0,55 mmol). Le milieu réactionnel est agité pendant 2 heures à température ambiante. Le mélange réactionnel est dilué avec du dichlorométhane (50 mL). La phase organique est lavée avec une solution aqueuse d'hydrogénosulfate de potassium à 2%, puis de l'eau, séchée sur sulfate de sodium, filtrée puis concentrée à sec. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétone 7/3 v/v) pour donner le composé 32 (238 mg). CCM : Rf = 0,50, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 5/6 v/v.
Méthyl (benzyl 2-O-acétvl-4-O-allyl-3-O-benzol-a-L-idopyranosyluronate)-(1ù>4)- (6-O-acétvl-2-azido-3-O-benzol-2-désoxy-a-o-g lucopvranosyl)-(1ù>4)-f (benzol 2-0-acétyl-3-O-benzol-a-L-idopyranosvluronate)-(1- >4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzol-2-désoxv-a-o-glucopvranosvl-(1 -*4)13-(méthvl 2-O-acétvl-3-O-benzyl-a-L-idopvranosvluronate)-(1ù>4)- 6-O-acétvl-3-O-benzvl-2-{f(benzvloxy)carbonyllamino}-2- désoxv-a-o-glucopvranoside (33) Un mélange de I'imidate 20 (64 mg, 0,066 mmol), de l'accepteur de glycosyle 32 (130 mg, 0,044 mmol) et de tamis moléculaire 4 A en poudre (49 mg) dans un mélange dichlorométhane/toluène 1/1 v/v (2,2 mL) est agité sous atmosphère d'argon pendant 1 heure à 25°C. Le mélange réactionnel est refroidi à -20°C et on ajoute une solution 0,1M de triflate de tert-butyldiméthylsilyle dans le dichlorométhane (100 pL). Après 10 minutes, le milieu réactionnel est neutralisé par addition d'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après filtration et concentration, le résidu obtenu est chromatographié sur colonne Sephadex LH2O (120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) pour donner successivement 61 mg du composé brut 33 et 87,7 mg d'un mélange contenant l'octasaccharide 32 et le décasaccharide 33. Le mélange ci-dessus (87,7 mg) est traité selon les conditions ci-dessus pour donner le composé brut 33 (120 mg) après chromatographie sur colonne Sephadex LH2O (120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v). Les deux fractions contenant le composé brut sont rassemblées et purifiées par chromatographie flash sur colonne de gel de silice (toluène/acétate d'éthyle 7/2 v/v) pour donner le composé 33 (120 mg). CCM : Rf = 0,52, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 1/1 v/v SCHEMA 6 : Préparation du décasaccharide 37 33 Méthyl (méthyl 4-O-allyl-3-O-benzyl-a-L-idopyranosvluronate)-(1 ù>4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopvranosvl)-(1 -*4)-f (méthyl 3-O-benzyl-a-L- idopyranosyluronate)-(1 ù>4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopvranosvl-(1ù 4)1-(méthyl 3-O-benzyl-a-L-idopvranosvluronate)-(1 -4)-3-O-benzyl-2- ff(benzyloxy)carbonyllamino}-2-désoxy-a-D-glucopvranoside (34) A une solution, refroidie à 0°C, du composé 33 (51,8 mg, 0,014 mmol) dans un mélange dichlorométhane/méthanol 2/3 v/v (982 pL) contenant du tamis 3A (125 mg) est ajoutée sous atmosphère d'argon une solution 1 M de méthylate de sodium dans le méthanol (21,0 pL). Après 5 heures à température ambiante, le milieu réactionnel est neutralisé avec de la résine Dowex 50WX4 H+. Après filtration et concentration, le résidu est purifié par chromatographie d'exclusion de taille (Sephadex LH2O, 95 x 2 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) pour donner le composé 34 (31,4 mg). CCM : Rf = 0,47, gel de silice, dichlorométhane/acétone 7/3 v/v Méthyl (méthyl 4-O-allyl-3-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-a-L- idopvranosvluronate)-(1 -*4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-a-D-glucopvranosvl)-(1 >4)-f (méthyl 3-O-benzyl-2-O-triéthyammonium sulfonato-a-L-idopvranosvluronate)-(1 -*4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-a-~-glucopvranosvl-(1 ~4)~-(méthyl 3-O-benzyl-2-O- triéthylammonium sulfonato-a-L-idopvranosvluronate)-(1 -*4)-3-O-benzyl-2-{f(benzyloxy)carbonyllamino} -2-désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-a-D-glucopyranoside (35) Le composé 34 (31,5 mg, 10,6 pmol) est traité comme dans la préparation du composé 28 pour donner le composé 35 (47,0 mg) après chromatographie d'exclusion de taille (Sephadex LH2O, 100 x 1,2 cm, dichlorométhane/méthanol 1/1 v/v). CCM : Rf = 0,55, gel de silice, acétate d'éthyle/pyridine/acide acétique/eau 16/11/2,6/7 v/v/v/v.
Méthyl (4-O-allyl-3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopyranosyluronique de lithium)-(1ù>4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-a-D-glucopyranosvl)- (1-*4)-f(3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopyranosyluronique de lithium)-(1-*4)- 2-azido-3-O-benz I-2-désox -6-O-lithium sulfonato-a-D-• luco • ranos I- 1ù>4 - 3-0- benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopyranosyluronique de lithium)-(1 -*4)-3-O-benzyl-2-{f(benzyloxy)carbonyllamino}-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-a-D-glucopyranoside (36) A une solution du composé 35 (47 mg, 12,5 pmol) dans un mélange tétrahydrofurane/méthanol 1/1 v/v (2,0 mL) est ajoutée, à 0°C, une solution 1 M d'hydroxyde de lithium dans l'eau (500 pL ; q.s.p. pour avoir une concentration finale de 0,2 M). Après 1 heure à 0°C puis 4 heures à température ambiante, le milieu réactionnel est neutralisé avec de l'acide acétique puis laissé à -20°C pendant 16 heures. Le mélange réactionnel est déposé sur une colonne de gel Sephadex LH2O éluée par un mélange méthanol/eau 4/1 v/v pour conduire au composé 36 (38,9 mg).
Méthyl (4-O-propvl-2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -*4)-(2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-a-D-q lucopyranosyl)-(1 ù>4)-[2-0- sodium sulfonato-a-L-idopvranosvluronate de sodium)-(1-*4)-(2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-a-D-glucopvranosvl-(1-*4)13-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-*4)-2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-a-D-glucopvranoside (37) Une solution du composé 36 (40 mg, 10,8 pmol) dans un mélange tert- 10 butanol/eau 6/9 v/v (1 mL) est traitée sous pression d'hydrogène (11 bars) en présence de palladium sur charbon 10% (80 mg, 2 x quantitée du composé à réduire) à 40°C pendant 4 heures. Après filtration (filtre Millipore LSWP 5 pm), la solution est déposée sur une colonne de résine Chelex 100 (1 mL) éluée avec de l'eau puis concentrée à sec. Le composé brut, ainsi obtenu (27 mg), est utilisé tel quel dans l'étape suivante. Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique= 2781,10 ; masse expérimentale : 2782,05 0,30 u.m.a.
SCHEMA 7 : Préparation de l'heptasaccharide 43 AcO 38 OC(NH)CCI3 + 1 AcO 39 OMe AcO 43 Méthyl [méthyl (méthyl 2-O-acétvl-3-O-benzyl-4-O-lévulinovl-a-L- idopvranosvluronate)-(1 ù>4)-(6-O-acétvl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-plucopyranosyl)-(1 ù>4)-2-O-acétvl-3-O-benzol-a-L-idopvranosideluronate (40) Un mélange de l'imidate 38 (1,1 g, 1,22 mmol), préparé selon la méthode décrite par C. Tabeur et al., BioOrg. Med. Chem. (1999) 7, 2003-2012, de l'accepteur de glycosyle 39 (864 mg, 2,44 mmol), préparé selon la méthode décrit par Koshida, S. et al., Tetrahedron Lett., 1999, 40, 5725-5728, et de tamis moléculaire 4 A en poudre (914 mg) dans le toluène (43 mL) est agité sous atmosphère d'argon pendant 1 heure à 25°C. Le mélange réactionnel est refroidi à -20°C et on ajoute une solution 1 M de triflate de tert-butyldiméthylsilyle dans le dichlorométhane (183 pL). Après 1 heure d'agitation, le milieu réactionnel est neutralisé par addition d'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après filtration sur Celite et concentration, le résidu obtenu est chromatographié sur colonne Sephadex LH2O (120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) suivie d'une chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétate d'éthyle 1/1 v/v) pour donner le composé 40 (936 mg). CCM : Rf = 0,38, gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 1/1 v/v
Méthyl [méthyl (méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 ù>4)-(6-O-acétvl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopvranosvl)-(1 ù>4)-2-O-acétvl-3-O- benzyl-a-L-idopyranosideluronate (41) Le composé 40 (2,56 g, 2,34 mmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 23 pour donner le composé 41 (2,17 g) après chromatographie flash sur colonne de gel de silice (toluène/acétate d'éthyle 1/1 v/v).
CCM : Rf = 0,35, gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 1/1 v/v
Méthyl [méthyl (méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzvl-4-O-lévulinovl-a-L- idopyranosyluronate)-(1 -*4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-plucopvranosvl)-(1-+4)- (méthyl 2-O-acétvl-3-O-benzyl-a-L-idopvranosvluronate)-(1 ù>4)- (6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-o-glucopvranosvl)-(1 ù>4)-2-O-acétyl-3-O-benzyl-a-L-idopyranosideluronate (42) Un mélange de l'imidate 38 (1,1 g, 1,22 mmol), de l'accepteur de glycosyle 41 (1,2 g, 1,20 mmol) et de tamis moléculaire 4 A en poudre (903 mg) dans le dichlorométhane (42 mL) est agité sous atmosphère d'argon pendant 1 heure à 25°C.
Le mélange réactionnel est refroidi à -20°C et on ajoute une solution 1 M de triflate de tert-butyldiméthylsilyle dans du dichlorométhane (181 pL). Après 15 minutes, le milieu réactionnel est neutralisé par addition d'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après filtration et concentration, le résidu obtenu est purifié par chromatographie sur colonne d'exclusion de taille (Sephadex LH2O, 190 x 3,2 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) suivie d'une chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétate d'éthyle 1/1 v/v) pour donner 1,63 g du composé 42. CCM : Rf = 0,30, gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 1/1 v/v
Méthyl jméthyl (méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-a-L-idopvranosvluronate)-(1-f4)- (6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl)-(1-*4)-(méthyl 2-0-acétyl-3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 ù>4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl)-(1 ù>4)-2-O-acétyl-3-O-benzyl-a-L-idopyranosideluronate (43) Le composé 42 (3,90 g, 2,25 mmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 23. Une chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétate d'éthyle 1/1 v/v) donne le composé 43 (3,39 g). CCM : Rf = 0,33, gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 1/1 v/v
SCHEMA 8 : Préparation du disaccharide 50 N3 AcO 49 48 47 F OH tBDO ff` 0~ù{~0 tBDMSO BnO BnO AcO OAc OC(NH)CCI3 AcO 50 (3,4-Di-O-benzyl-2-O-(4-méthoxy)benzyl-6-O-tert-butyldiméthylsilyl-a-L- idopyranosyl)-(1-*4)-1, 6-anhydro-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-R-D-glucopyranose (45) A une solution du composé 44 (32,3 g, 42,2 mmol) (décrit dans la préparation du composé n° 108 de la demande de brevet WO 2006/021653) dans du N,N-diméthylformamide (210 mL) est ajouté, à 0°C et sous argon, du bromure de benzyle (25 mL, 211 mmol) puis du NaH à 55% (3 g, 126 mmol). Après 20 minutes d'agitation magnétique, du méthanol est additionné (30 mL), le milieu réactionnel est concentré sous vide, le brut réactionnel est dilué à l'acétate d'éthyle, lavé à l'eau puis par une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium, séché (Na2SO4), filtré et concentré. Le résidu obtenu est engagé dans l'étape suivante sans purification.
LC-MS m/z 871,7 [(M + NH4)]. TR = 13,86 min
(2-O-acétyl-3, 4-di-O-benzyl-6-O-tert-butvldiméthylsilyl-a-L-idopvranosvl)-(1 ù>4)-1,6-anhydro-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-R-D-glucopyranose (46) A une solution du composé 45 brut (38,6 g) dans du dichlorométhane (1,6 L) sont ajoutés de l'eau (80 mL) puis, à 0°C, du DDQ (14,2 g). Après 4h45 d'agitation à 0°C, le milieu est dilué par du dichlorométhane et une solution aqueuse d'hydrogénocarbonate de sodium est additionnée. La phase organique est ensuite lavée à l'eau, séchée (Na2SO4), filtrée et concentrée. Le composé obtenu est engagé dans l'étape suivante sans purification.
Le résidu obtenu est dissous dans du dichlorométhane (350 mL), puis de la triéthylamine (13 mL), de la 4-diméthylaminopyridine (2 g) et de l'anhydride acétique (60 mL) sont additionnés. Après 10 minutes d'agitation magnétique à 0°C, puis 1h45 à température ambiante, le mélange réactionnel est dilué par du dichlorométhane, puis successivement lavé par une solution aqueuse à 10% d'hydrogénosulfate de potassium, d'eau, puis la phase organique est séchée (Na2SO4), filtrée et concentrée. Le résidu obtenu est purifié sur silice (acétate d'éthyle ù cyclohexane) pour fournir le composé 46 (26,8 g). LC-MS m/z 798,3 [(M + Na)+]. TR = 12,97 min (Méthyl2-O-acétyl-3,4-di-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1ù>4)-1, 6-anhydro- 2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-R-D-glucopvranose (47) A une solution du composé 46 (26,3 g, 33,9 mmol) dans l'acétone (1,4 L) est additionnée, à 0°C, une solution de CrO3 (10,5 g) dans du H2SO4 3.5M aqueux (47 mL). Après 4h d'agitation mécanique à 0°C, le milieu réactionnel est dilué avec du dichlorométhane, lavé à l'eau jusqu'à neutralité, puis la phase organique est séchée (Na2SO4), filtrée et concentrée. Le composé obtenu est engagé dans l'étape suivante sans purification. Le résidu obtenu est dissous dans du N,N-diméthylformanide (210 mL), et de l'hydrogénocarbonate de potassium (17 g) ainsi que de l'iodure de méthyle (21 mL) sont additionnés. Le mélange réactionnel est agité à température ambiante pendant 16h, puis concentré sous vide. Le résidu est dilué par de l'acétate d'éthyle puis lavé à l'eau, avec une solution aqueuse saturée de thiosulfate de sodium, avec une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium, puis séchée (Na2SO4), filtrée et concentrée. Le composé obtenu est engagé dans l'étape suivante sans purification. LC-MS m/z 707,3 [(M + NH4)]. TR = 10,37 min
(Méthyl 2-O-acétyl-3,4-di-O-benzol-a-L-idopvranosvluronate)-(1-+4)-1,6-di-O- acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a,13-D-g1ucopyranose (48) Le résidu brut obtenu à l'étape précédente est dissous dans de l'anhydride acétique (177 mL), puis est additionné de l'acide trifluoroacétique (TFA) (17,7 mL). Le mélange réactionnel est agité pendant 16h, puis est concentré, co-évaporé au toluène et purifié sur gel de silice (cyclohexane/acétate d'éthyle), pour donner le composé 48 (17,4 g). LC-MS m/z 809,3 [(M + NH4)]. TR = 10,81 min
(Méthyl 2-O-acétyl-3,4-di-O-benzyl-a-L-idopyranosvluronate)-(1 -*4)-6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a,R-D-glucopyranose (49) A une solution du composé 48 (7 g, 8,84 mmol) dans de l'éther diéthylique (303 mL) est additionnée, à 0°C et sous argon, de la benzylamine (BnNH2) (29,7 mL). Après 1 h d'agitation magnétique à 0°C puis 6h à température ambiante, le mélange réactionnel est neutralisé avec une solution aqueuse d'HCI 1 N à froid, lavé à l'eau, séché (Na2SO4), filtré et concentré, et purifié sur gel de silice (acétate d'éthyle/cyclohexane) pour conduire au composé 49 (5,95 g) LC-MS m/z 767,7 [(M + NH4)]. TR = 1,64 min
(Méthyl 2-O-acétyl-3,4-di-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 ->4)-6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a,R-D-glucopyranose trichloroacétimidate (50) A une solution du composé 49 (5,94 g, 7,9 mmol) dans le dichlorométhane (150 mL) sont additionnés, sous argon, du carbonate de césium (Cs2CO3) (4,1 g), puis du trichloroacétonitrile (CCI3CN) (3,9 mL). Après 45 minutes d'agitation à température ambiante, le mélange réactionnel est filtré, puis concentré. Le résidu est purifié sur gel de silice (acétate d'éthyle/cyclohexane + 0,1% de triéthylamine) pour donner le composé 50 (5,7 g). LC-MS m/z 912,0 [(M + NH4)]. TR = 1,81 min SCHEMA 9 : Préparation de I'heptasaccharide 55 OAc 43 o AcO sel de triéthylammonium LiO3SO 54 N3 50 NaO3SO OMe 55 Méthyl {méthyl (méthyl 2-O-acétyl-3,4-di-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)- (1 ù>4)-(6-O-acétvl-2-azido-3-0-benzyl-2-désoxy-a-o-q lucopyranosyl)-(1 -4)-f (méthyl 2-O-acétvl-3-O-benzyl-a-L-idopyranosvluronate)-(1 -*4)-(6-O-acétvl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a- -glucopyranosyl)-(1ù 4)]2-2-O-acétvl-3-O-benzol-a-~-idopvranoside}uronate (51) Un mélange de l'accepteur de glycosyle 43 (200 mg, 0,12 mmol), de l'imidate 50 (163 mg, 0,18 mmol) et de tamis moléculaire 4 A en poudre (137 mg) dans le dichlorométhane (6,5 mL) est agité sous atmosphère d'argon pendant 1 heure à 25°C. Le mélange réactionnel est refroidi à -20°C et on ajoute une solution 1 M de triflate de tert-butyldiméthylsilyle dans le dichlorométhane (27 pL). Après 1 heure, le milieu réactionnel est neutralisé par addition d'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après filtration et concentration, le résidu obtenu est purifié par chromatographie sur colonne d'exclusion de taille (Sephadex LH2O, 90 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) suivie d'une chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétate d'éthyle 2/1 v/v) pour donner le composé 51 (212 mg). CCM : Rf = 0,38, gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 1/1 v/v.
Méthyl {méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-a-L-idopyranosvluronate)-(1 -4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxv-a-o-q lucopyranosyl)-(1 ù>4)-f (méthyl 3-O-benzyl-a-L- idopyranosyluronate)-(1 X4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-o-glucopyranosvl)-(1-4) j2-3-O-benzyl-a-L-idopvranoside}uronate (52) Le composé 51 (271 mg, 0,11 mmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 27 pour donner le composé 52 (186 mg) après une chromatographie sur colonne d'exclusion de taille (Sephadex LH2O, 120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) suivie d'une chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétone 5/3 v/v). CCM : Rf = 0,65, gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 4/3 v/v
Méthyl {méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-a-L- idopyranosyluronate)-(1 ù>4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-triéthyammonium sulfonato-a-o-glucopyranosyl)-(1 ù>4)-f(méthyl 3-O-benzyl-2-O-triéthyammonium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -*4)-(2-azido-3-O-benzol-2-désoxv-6-O-triéth lammonium sulfonato-a-o-•luco• ranos I - 1-*4 2-3-O-benz 1-2-0-triéthyammonium sulfonato-a-L-idopyranoside}uronate (53) Le composé 52 (172 mg, 0,08 mmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 28 pour donner le composé 53 (196 mg) après une chromatographie d'exclusion de taille (Sephadex LH2O, 120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v). 1H RMN (D2O) 8 des principaux protons anomériques : 5,41 ; 5,38 ; 5,34 ; 5,15; 5,14 ; 5,05 ; 5,15 ; 5,02 ppm.
{Méthyl (3,4-di-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopvranosvluronate de lithium)-(1-a4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-a-D-glucopyranosyl)- (1-4)-f(3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1 -*4)-(2- azido-3-O-benzyl-2-déso)y-6-O-lithium sulfonato-a--glucopyranosyl)-(14)1,-3-0-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopyranoside}uronate de lithium (54) Le composé 53 (186 mg, 70,7 pmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 29 pour donner le composé 54 (141 mg) après chromatographie d'exclusion de taille (Sephadex LH2O, 120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol/eau 50/50/1 v/v/v). CCM : Rf = 0,24, gel de silice, acétate d'éthyle/pyridine/acide acétique/eau 27/19/4,2/11 v/vlvly
{Méthyl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosvluronate de sodium)-(1û>4)-(2- amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-a-o-glucopyranosyl)-(1-*4)-f(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronatede sodium)-(1 -*4)-(2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-a-D-glucopyranosvl)-(1 X4)1,-2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranoside}uronate de sodium (55) Une solution du composé 54 (60,0 mg, 0,022 mmol) dans un mélange tert- butanol/eau 1/1 v/v (6 mL) est traitée sous pression d'hydrogène (< 200 mbar) en présence de palladium sur charbon 10% (60 mg) à température ambiante. Après 24 heures d'agitation, le milieu réactionnel est filtré (filtre Millipore LSWP 5 pm) puis concentré à sec. Le produit brut 55 ainsi obtenu (48,7 mg) est utilisé tel quel dans l'étape suivante.30 SCHEMA 10 : Préparation de l'accepteur de glycoside 60 AcO 56 AcO 57 OH AcO 58 OTBDPS AcO 60 OTBDPS AcO 59 Méthyl (méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 ù>4) -6-O-acétyl-3-O-benzyl-2-benzyloxycarbonylamino-2-désoxy-a-D-glucopyranosi de (57) A une solution du composé 56 (23,5 g, 30 mmol ; préparé selon la méthode décrite dans Carbohydrate Research (1987), 167, 67-75) dans le dichlorométhane (600 mL) sont ajoutés, à 0°C et sous atmosphère inerte, la 4-diméthylaminopyridine (733 mg, 6 mmol), l'hydrochlorure de 1-(3-dimétylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide (11,5 g, 60 mmol) et l'acide lévulinique (6,2 mL, 60 mmol). Après 16 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est dilué avec du dichlorométhane (1,5 L). La phase organique est lavée successivement avec une solution aqueuse d'hydrogénosulfate de potassium à 10%, avec de l'eau, avec une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium puis avec de l'eau, séchée sur sulfate de sodium, filtrée puis évaporée à sec. Le résidu est purifié par flash chromatographie sur une colonne de gel de silice (cyclohexane/acétate d'éthyle 1/3) pour donner le composé 57 (22,6 g). Rf = 0,37, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 1/3 v/v Méthyl (méthyl 2-O-acétvl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -*4)-3-O-benzyl-2-benzyloxycarbonylamino-2-désoxy-a-D-glucopyranoside (58) A une solution du composé 57 (20,2 g, 23 mmol) dans un mélange tétrahydrofurane/méthanol 1/1 (140 mL) est ajouté, sous atmosphère inerte, du [tBu2SnCI(OH)]2 (226 mg, 0,79 mmol) préparé selon A. Orita et al., Chem. Eur. J. (2001) 7, 3321. Le milieu réactionnel est agité pendant 38 heures à 35°C. Après concentration, le résidu (20,8 g) est engagé sans purification dans l'étape suivante. Rf = 0,23, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 1/3 v/v Méthyl (méthyl 2-O-acétvl-3-O-benzyl-4-O-lévulinovl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 ù>4) -3-O-benzyl-2-benzyloxycarbonylamino-6-O-tert-butyldiphénylsilyl-2-désoxy- a-D-plucopyranoside (59) A une solution du composé brut 58 (23 mmol) dans le dichlorométhane (190 mL) sont ajoutés, à 0°C et sous atmosphère inerte, la triéthylamine (8 mL, 57,5 mmol), la 4-diméthylaminopyridine (1,4 g, 11,5 mmol) et le chlorure de tert-butyldiphénylsilyle (12 mL, 46,0 mmol). Le milieu réactionnel est agité pendant 16 heures à température ambiante. Le mélange réactionnel est dilué avec du dichlorométhane. La phase organique est lavée successivement avec une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium puis avec l'eau, séchée sur sulfate de sodium, filtrée puis évaporée. Le résidu est purifié par chromatographie flash sur colonne de gel de silice (cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1) pour donner le composé 59 (24,4 g). Rf = 0,42, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1 v/v Méthyl (méthyl 2-O-acétvl-3-O-benzyl-a-L-idopvranosyluronate)-(1-*4) -3-0-benzyl-2-benzyloxycarbonylamino-6-O-tert-butyldiphénylsilyl-2-désoxy- a-D-glucopvranoside (60) A une solution du composé 59 (22,6 g, 20,0 mmol) dans un mélange toluène/éthanol 1/2 (2,5 L) est ajouté l'acétate d'hydrazine (9,21 g, 100,0 mmol). Le milieu réactionnel est agité pendant 30 minutes à température ambiante. Après concentration, le résidu est purifié par chromatographie flash sur colonne de gel de silice (cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1) pour donner 17,6 g du composé 60. Rf = 0,40, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1 v/v25 SCHEMA 11 : Préparation du donneur de glycoside 65 OAc LevO LevO AcO OH AcO AcO 61 62 63 OH OC(NH)CCI3 OTBDPS AcO 65AcO 64 (Méthyl 2-O-acétvl-3-O-benzyl-4-O-lévulinovl-a-L-idopvranosyluronate)-(1 -4)-1-O-acétvl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopyranose (62) A une solution de 61 (11 g, 13,7 mmol) (préparé selon la méthode décrite par C. Tabeur et al., Carbohydr. Res., 281 (1996) 253-276) dans un mélange 1/1 méthanol/tétrahydrofurane (80 mL) est additionné du [tBu2SnCI(OH)]2 (0,55 g) préparé selon A. Orita et al., Chem. Eur. J. (2001) 7, 3321. Après agitation à 35°C pendant 5,5 h, puis à température ambiante pendant 16 h, puis à nouveau à 35°C pendant 4 h, le mélange réactionnel est concentré sous vide puis purifié par chromatographie pour conduire au composé 62 (5,97 g).
LC-MS m/z 780,2 [(M + Na)+]. TR = 9,14 min
(Méthyl 2-O-acétvl-3-O-benzyl-4-O-lévulinovl-a-L-idopvranosyluronate)-(1 -.4) -1-O-acétvl-2-azido-3-O-benzyl-6-O-tert-butyldiphénylsilvl-2-désoxy-a-D-gl ucopyranose (63) Le composé 62 (5,97 g, 7,88 mmol) est mis en solution dans du dichlorométhane (63 mL). A 0°C et sous argon, sont additionnés successivement du 4-diméthylaminopyridine (0.481 g), de la triéthylamine (2,7 mL), et du chlorure de tertbutyldiphénylsilyle (4 mL). Après 4h d'agitation magnétique, le milieu réactionnel est dilué par du dichlorométhane, lavé par une solution aqueuse d'hydrogénosulfate de potassium à 10%, à l'eau, séché (Na2SO4), filtré et concentré. Le résidu obtenu est purifié sur silice (acétate d'éthyle/heptane) pour fournir le composé 63 (7 g). LC-MS m/z 1018,3 [(M + Na)+]. TR = 12,33 min (Méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-a-L-idopyranosvluronate)-(1-a4) -2-azido-3-O-benzyl-6-O-tert-butyldiphénylsilyl-2-désoxv-a, l3-D-plucopvranose (64) A une solution du composé 63 (7 g, 7,03 mmol) dans de l'éther diéthylique (70 mL), est additionnée, à 0°C, de la benzylamine (BnNH2) (29 mL). Après 15 minutes d'agitation à 0°C, puis 6 h à température ambiante, le mélange réactionnel est dilué par de l'acétate d'éthyle, puis neutralisé avec de l'HCI 1 N à froid, lavé à l'eau, séché (Na2SO4), filtré et concentré, et purifié sur gel de silice (acétate d'éthyle/toluène) pour conduire au composé 64 (5,86 g).
LC-MS m/z 976,3 [(M + Na)+]. TR = 27,6/27,8 min
(Méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-a-L-idopyranosvluronate)-(1 ->4)-2-azido-3-O-benzyl-6-O-tert-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-a, 13-D-glucopyranose trichloroacétimidate (65) A une solution du composé 64 (6,5 g, 6,81 mmol) dans le dichlorométhane (140 mL) et en présence de tamis moléculaire 4 A en poudre (7 g), est additionné sous argon, du carbonate de césium (Cs2CO3) (3,5 g), puis à 0°C, du trichloroacétonitrile (CCI3CN) (3,4 mL). Après 15 min d'agitation à 0°C, puis 5h à température ambiante, le mélange réactionnel est filtré, puis concentré. Le résidu est purifié sur gel de silice (1/4 acétate d'éthyle/toluène + 0.1% de triéthylamine) pour donner le composé 65 (6,33 g). LC-MS m/z 1119,1 [(M + Na)+]. TR = 31,2 SCHEMA 12 : Préparation du tétrasaccharide 67 OTBDPS McO2C OC(NH)CCI+ HO AcO AcO 65 59 OTBDPS AcO 66 AcO 67
Méthyl (méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-a-L-idopyranosyluronate)- (1ù>4)- (2-azido-3-O-benzyl-6-O-tert-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosy l)-(1 -*4)-(méthyl 2-O-acétvl-3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1-*4) -3-O-benzyl-2-benzyloxycarbonylamino-6-O-tert-butyldiphénylsilyl-2-désoxy- a-D-glucopyranoside (66) Un mélange de l'accepteur de glycosyle 59 (8,80 g, 9,00 mmol), de l'imidate 65 (6,58 g, 6,00 mmol) et de tamis moléculaire 4 A en poudre (4,50 g) dans le dichlorométhane (210 mL) est agité sous atmosphère d'argon pendant 1 heure à 25°C. Le mélange réactionnel est refroidi à -20°C et on ajoute une solution 1M de triflate de tert-butyldiméthylsilyle dans le dichlorométhane (900 pL). Après 1h20, le milieu réactionnel est neutralisé par addition d'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après filtration sur Celite et concentration, le résidu obtenu est chromatographié sur colonne Sephadex LH2O (190 x 3,2 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1) pour donner 8,26 g du composé 66. Rf = 0,30, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1
Méthyl (méthyl 2-O-acétvl-3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 X4)-(2-azido- 3-O-benzyl-6-O-tert-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-a-D-glucopvranosvl)-(1 ù>4)-(méthyl 2-0- acétyl-3-O-benzyl-a-L-idopyranosvluronate)-(1 -*4) -3-O-benzyl-2-benzyloxycarbonylamino-6-O-tert-butyldiphénylsilyl-2-désoxy- a-D-glucopyranoside (67) Le composé 66 (8,26 g, 4,31 mmol) est transformé en composé 67 (6,41 g) selon le même mode opératoire que celui décrit pour la synthèse du composé 23.
Rf = 0,34, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1
SCHEMA 13 : Préparation de l'hexasaccharide 69 OTBDPS AcO OTBDPS 67 OC(NH)CCI3 AcO 65 Y OTBDPS AcO 69
Méthyl (méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 X4)- (2-azido-3-O-benzyl-6-O-tert-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosy l)-(1 -*4)-(méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-a-L-idopyranosvluronate)-(1 -4)-(2-azido-3-O-benzyl-6-O-tert-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-a-D-q lucopvranosvl)-(1-*4)-(méthyl 2-0-acétyl-3-O-benzyl-a-L-idopyranosvluronate)-(1 -4)-3-O-benzyl-2- benzyloxycarbonylamino-6-O-tert-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-a-D-glucopyran oside (68) Un mélange de l'accepteur de glycosyle 67 (7,42 g, 4,09 mmol), de l'imidate 65 (6,73 g, 6,1 mmol), et de tamis moléculaire 4 A en poudre (4,60 g) dans le dichlorométhane (215 mL) est agité sous atmosphère d'argon pendant 1 heure à 25°C.
Le mélange réactionnel est refroidi à -20°C et on ajoute une solution 1M de triflate de tert-butyldiméthylsilyle dans le dichlorométhane (920 pL). Après 1h30, le milieu réactionnel est neutralisé par addition d'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après filtration sur Celite , le milieu réactionnel est dilué avec du dichlorométhane (800 mL).
La phase organique est lavée successivement avec une solution aqueuse d'hydrogénocarbonate de sodium à 2%, avec de l'eau puis séchée sur sulfate de sodium, filtrée puis évaporée à sec. le résidu obtenu est purifié par chromatographie sur colonne Sephadex LH2O (190 x 3,2 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1) suivie d'une chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétate d'éthyle 6/1) pour donner 6,13 g du composé 68. Rf = 0,46, gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 4/1 v/v
Méthyl (méthyl 2-O-acétvl-3-O-benzyl-a-L-idopyranosvluronate)-(1 -34)-(2-azido-3-O-benzol-6-O-tert-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-a-D-q lucopyranosyl)- (1->4)-(méthyl 2- O-acétyl-3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 X4)- (2-azido-3-O-benzyl-6-O-tertbutyldiphénylsilyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosvl )-(1-*4)-(méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyla-L-idopyranosyluronate)-(1 -*4) -3-O-benzyl-2-benzyloxycarbonylamino-6-O-tertbutvldiphénylsilyl-2-désoxv-a -D-glucopyranoside (69) Le composé 68 (7,14 g, 2,59 mmol) est transformé en composé 69 (6,07 g) selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 23. Rf = 0,37, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1 v/v
SCHEMA 14 : Préparation du disaccharide 73 N3 N3 tBDMSO tBDMSO~`n~ - ,. tBDMSO HO BnO v ~( O BnO
PMBO 44 70 AcO OAc 73 72 (3,4-Di-O-benzyl-2-O-(4-méthoxy) benzyl-6-O-tert-butyldiméthylsilyl-a-L-idopyranosyl)-(1 ->4)-1,6-anhydro-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-R-D-glucopvranose (70) A une solution du composé 44 (32,3 g, 42,2 mmol) (décrit dans la péparation du composé n° 108 de la demande de brevet WO 2006/021653) dans du N,N- diméthylformamide (210 mL) est ajouté, à 0°C et sous argon, du bromure de benzyle (25 mL) puis du NaH à 55% (3 g). Après 20 min d'agitation magnétique, du méthanol est additionné (30 mL), le milieu réactionnel est concentré sous vide, le brut réactionnel est dilué à l'acétate d'éthyle, lavé à l'eau puis par une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium, séché (Na2SO4), filtré et concentré. Le résidu obtenu (38.6 g) est engagé dans l'étape suivante sans purification. LC-MS m/z 871,7 [(M + NH4)]. TR = 13,86 min
(2-O-Acétyl-3, 4-di-O-benzyl-6-O-tert-butvldiméthylsilyl-a-L-idopvranosyl)-(1 ->4)-1,6-anhydro-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-R-D-glucopvranose (71) A une solution du composé 70 brut (38,6 g) dans du dichlorométhane (1,6 L) sont ajoutés de l'eau (80 mL) puis, à 0°C, du DDQ (14,2 g). Après 4h45 d'agitation à 0°C, le milieu est dilué par du dichlorométhane et une solution aqueuse d'hydrogénocarbonate de sodium est additionnée. La phase organique est ensuite lavée à l'eau, séchée (Na2SO4), filtrée et concentrée. Le composé obtenu est engagé dans l'étape suivante sans purification. Le résidu obtenu est dissous dans du dichlorométhane (350 mL), puis de la triéthylamine (13 mL), de la 4-diméthylaminopyridine (2 g), et de l'anhydride acétique (60 mL) sont additionnés. Après 10 min d'agitation magnétique à 0°C, puis 1h45 à température ambiante, le mélange réactionnel est dilué par du dichlorométhane, puis successivement lavé par une solution aqueuse à 10% d'hydrogénosulfate de potassium, d'eau, puis la phase organique est séchée (Na2SO4), filtrée et concentrée. Le résidu obtenu est purifié sur silice (acétate d'éthyle/cyclohexane) pour fournir le composé 71 (26,8 g). LC-MS m/z 798,3 [(M + Na)+]. TR = 12,97 min (Méthyl 2-O-acétvl-3,4-di-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 ->4)-1,6-anhydro-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-R-D-glucopvranose (72) A une solution du composé 71 (26,3 g, 33,9 mmol) dans l'acétone (1.4 L) est additionnée, à 0°C, une solution de CrO3 (10,5 g) dans du H2SO4 3.5M aqueux (47 mL).
Après 4h d'agitation mécanique à 0°C, le milieu réactionnel est dilué avec du dichlorométhane, lavé à l'eau jusqu'à neutralité, puis la phase organique est séchée (Na2SO4), filtrée et concentrée. Le composé obtenu est engagé dans l'étape suivante sans purification. Le résidu obtenu est dissous dans du N,N-diméthylformanide (210 mL), et de l'hydrogénocarbonate de potassium (17 g) ainsi que de l'iodure de méthyle (21 mL) sont additionnés. Le mélange réactionnel est agité à température ambiante pendant 16h, puis concentré sous vide. Le résidu est dilué par de l'acétate d'éthyle puis lavé à l'eau, avec une solution aqueuse saturée de thiosulfate de sodium, avec une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium, puis séchée (Na2SO4), filtrée et concentrée. Le composé obtenu est engagé dans l'étape suivante sans purification. LC-MS m/z 707,3 [(M + NH4)]. TR = 10,37 min
(Méthyl 2-O-acétyl-3,4-di-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1-a4)-1, 6-di-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a,13-D-glucopyranose (73) Le résidu brut obtenu à l'étape précédente est dissous dans de l'anhydride acétique (177 mL), puis est additionné de l'acide trifluoroacétique (TFA) (17,7 mL). Le mélange réactionnel est agité pendant 16h, puis est concentré, co-évaporé au toluène, et purifié sur gel de silice (cyclohexane - acétate d'éthyle), pour donner le composé 73 (17,4g).
LC-MS m/z 809,3 [(M + NH4)]. TR = 10,81 min
SCHEMA 15 : Préparation du donneur de glycosyle 77 OH OAc AcO AcO AcO 73 74 BnO BnO AcO AcO OC(NH)CCI3 OH 77 76 (Méthyl 2-O-acétyl-3,4-di-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -4)-1-O-acétvl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxv-a-D-glucopvranose (74) A une solution du composé 73 (5,05 g, 6,3 mmol) dans un mélange 1/1 méthanol/tétrahydrofurane (76 mL) est additionné du [tBu2SnCl(OH)]2 (0,25 g, 0,88 mmol), préparé selon A. Orita et al., Chem. Eur. J. (2001) 7, 3321. Après agitation à température ambiante pendant 72h, le mélange réactionnel est concentré sous vide puis purifié par chromatographie pour conduire au composé 74 (2,89 g). LC-MS m/z 772,4 [(M + Na)+]. TR = 10,23 min
(Méthyl 2-O-acétvl-3,4-di-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -f4) -1-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-6-O-tert-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-a-D-gl ucopvranose (75) Le composé 74 (2,89 g, 3,86 mmol) est mis en solution dans du dichlorométhane (31 mL). A 0°C et sous argon, sont additionnés successivement de la triéthylamine (1,3 mL), de la 4-diméthylaminopyridine (0,235 g), et du chlorure de tertbutyldiphénylsilyle (2 mL). Après 3h d'agitation magnétique, le milieu réactionnel est dilué par du dichlorométhane, lavé par une solution aqueuse d'hydrogénosulfate de potassium à 10%, à l'eau, séché (Na2SO4), filtré et concentré. Le résidu obtenu est purifié sur silice (acétate d'éthyle/cyclohexane) pour fournir le composé 75 (3,4 g). LC-MS m/z 1010,6 [(M + Na)+]. TR = 13,10 min
(Méthyl 2-O-acétvl-3,4-di-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 ù>4)-2-azido-3-O- benzyl-6-O-tert-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-a,(3-D-glucopvranose (76) A une solution du composé 75 (3,44 g, 3,48 mmol) dans de l'éther diéthylique (35 mL), est additionnée, à 0°C, de la benzylamine (BnNH2) (14,5 mL). Après 8h d'agitation à température ambiante, le mélange réactionnel est placé à -18°C pendant 16h, puis à nouveau 2,5h à température ambiante. Le milieu est alors dilué par de l'acétate d'éthyle, puis neutralisé avec de l'HCI 1 N à froid, lavé à l'eau, séché (Na2SO4), filtré et concentré, et purifié sur gel de silice (acétate d'éthyle/cyclohexane 15/85) pour conduire à 76 (3,83 g). LC-MS m/z 963.6 [(M + NH4)]. TR = 12,37, 12,47 min (Méthyl2-O-acétvl-3,4-di-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1ù>4) -2-azido-3-O-benzyl-6-O-tert-butvldiphénvlsilyl-2-désoxy-a, 13-0-glucopvranose trichloroacétimidate (77) A une solution du composé 76 (2,99 g, 3,16 mmol) dans le dichlorométhane (60 mL) et en présence de tamis moléculaire 4 A en poudre (3 g), sont additionnés, à 0°C sous argon, du carbonate de césium (Cs2CO3) (1,6 g), puis du trichloroacétonitrile (CCI3CN) (1,6 mL). Après 20 min d'agitation à 0°C, 7h à température ambiante, stockage à -18°C pendant 16h, puis agitation magnétique 8h à température ambiante, stockage à -18°C pendant 16h, et enfin agitation magnétique 1 h à température ambiante, le mélange réactionnel est filtré, puis concentré. Le résidu est purifié sur gel de silice (acétate d'éthyle/cyclohexane 15/85 + 0,1% de triéthylamine) pour donner le composé 77 (2,69 g). LC-MS m/z 1113,4 [(M + Na)+]. TR = 14,58 min
SCHEMA 16 : Préparation de l'octasaccharide 79 OTBDPS AcO l OTBDPS OTBDPS O McO2C OBn OBn O~ BnO BnO HO 79 Méthvl (méthvl 2-O-acétvl-3,4-di-O-benzol-a-L-idopvranosyluronate)-(1->4)- (2-azido-3-O-benzol-6-O-tert-butvldiphénylsilvl-2-désoxv-a-D-q lucopvranosvl)-(1-+4)- 15 J(méthvl 2-O-acétvl-3-O-benzyl-a-L-idopyranosvluronate)-(1 -*4)- (2-azido-3-O-benzyl-6-O-tert-butvldiphénvlsilyl-2-désoxv-a-o-glucopyranosy l)-(1 -*4)12-(méthvl 2-O-acétyl-3-O-benzvl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -*4) -3-O-benzol-2-benzyloxvcarbonvlamino-6-O-tertbutyldiphénvlsilyl-2-désoxv-a -D-glucopyranoside (78) Un mélange de l'accepteur de glycosyle 69 (3,50 g, 1,32 mmol), de l'imidate 77 (2,16 g, 1,98 mmol) et de tamis moléculaire 4 A en poudre (1,48 g) dans le dichlorométhane (69 mL) est agité sous atmosphère d'argon pendant 1 heure à température ambiante. Le mélange réactionnel est refroidi à -20°C et on ajoute une solution 1M de triflate de tert-butyldiméthylsilyle dans le dichlorométhane (297 pL).
Après 2h30, le milieu réactionnel est neutralisé par addition d'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après filtration sur Celite , le milieu réactionnel est dilué avec du dichlorométhane (400 mL). La phase organique est lavée successivement avec une solution aqueuse d'hydrogénocarbonate de sodium à 2%, avec de l'eau puis séchée sur sulfate de sodium, filtrée puis évaporée à sec. Le résidu obtenu est purifié par chromatographie sur colonne Sephadex LH2O (190 x 3,2 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1) suivie d'une chromatographie sur colonne de gel de silice (cyclohexane/acétate d'éthyle 4/1) pour donner 3,04 g du composé 78. Rf = 0, 30, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 3/1 Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -*4)- (2-azido-3-O-benzyl-6-O-tert-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-a-o-glucopyranosy l)-(1 -*4)-f (méthyl 3-0-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -*4)- (2-azido-3-O-benzyl-6-O-tert-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-a-o-glucopvranosv l)-(1 -*4)12-(méthyl 3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1-*4) -3-O-benzyl-2-benzyloxycarbonylamino-6-O-tert-butyldiphénylsi lyl-2-désoxy-a-D- glucopyranoside (79) A une solution du composé 78 (2,23 g, 0,623 mmol) dans un mélange dichlorométhane/méthanol 2/3 (187 mL) contenant du tamis 3A (78 mg) est ajoutée sous atmosphère d'argon et à 0°C une solution 1 M de méthylate de sodium dans le méthanol (99,7 pL). Après 24 heures à température ambiante, le milieu réactionnel est neutralisé avec de la résine Dowex AG 50 WX4 H+. Après filtration et concentration, le résidu est chromatographié sur colonne Sephadex LH2O (120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1) suivie d'une chromatographie flash sur colonne de gel de silice (cyclohexane/acétate d'éthyle 100/0ù66/34) pour donner 1,80 g du composé 79. Rf = 0,38, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 3/1 v/v30 SCHEMA 17 : Préparation des octasaccharides 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86 et 87 OTBDPS HO OH O~ BnO OMe ZHN HO BnO Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-a-L-idopyranosvluronate)-(1 ù>4)- (2-azido-3-O-benzyl-6-O-tert-butvldiphénylsilyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosy l)-(1 ù>4)-f(méthyl 3-0-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 X4)-(2-azido-3-O-benzyl-6-O-tert-butyldiphénylsilyl- 2-désoxy-a-D-glucopyranosyl)-(1 ù>4)l,-(méthyl 3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1ù>4)-3-O-benzyl-2-{f(benzyloxy) carbonyllamino}-2-désoxy-a-D-glucopyranoside (80) Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 ù>4)- (2-azido-3-O-benzyl-6-O-tert-butvldiphénylsilyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosy l)-(1 -*4)-(méthyl 3-0-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 X4)-(2-azido-3-O-benzyl-6-O-tert-butyldiphénylsilyl- 2-désoxy-a-D-glucopvranosvl)-(1 >4)-(méthyl 3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)- (1 ù>4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl)-(1 -*4)-(méthyl 3-O-benzyl-a-L-idopyranosvluronate)-(1 ù>4)-3-O-benzyl-2-{f (benzyloxy)carbonyllamino}-2-désoxy-a-D-glucopyranoside (81) Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 ù>4)-(2-azido-3-O- benzyl-6-O-tert-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl)-(1ù*4)- (méthyl 3-0-benzvl-a-L-idopvranosvluronate)-(1 ù>4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopvranosvl)-(1 -*4)-(méthyl 3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1ù>4)- (2-azido-3-O-benzyl-6-O-tert-butvldiphénylsilyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosy l)-(1 -*4)-(méthyl 3-0-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1--.4)-3-O-benzyl-2-{ f(benzyloxy)carbonyllamino}-2- désoxy-a-o-glucopyranoside (82) Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -*4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl)-(1 -*4)-f (méthyl 3-O-benzyl-a-L- idopyranosvluronate)-(1 X4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl)-(1-*41-(méthyl 3-O-benzyl-a-L-idopvranosvl uronate)-(1-4)-3-O-benzyl-2- {f(benzyloxy)carbonyllamino}-2-désoxy-a-o-glucopyranoside (87) A une solution du composé 79 (373 mg, 0,11 mmol) dans le méthanol (14 mL) est ajouté le fluorure d'ammonium (324 mg, 8,74 mmol). Après 20 heures d'agitation à température ambiante, le mélange réactionnel est déposé sur une colonne de gel Sephadex LH2O (120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) suivie d'une chromatographie flash sur colonne de gel de silice (toluène/acétone 1/0ù>7/3 v/v) pour donner successivement : - Le composé 80 (58,8 mg) CCM : Rf = 0,63, gel de silice, toluène/acétone 65/35 v/v - Le composé 81 (44,4 mg) CCM : Rf = 0,53, gel de silice, toluène/acétone 65/35 v/v - Le composé 82 (37,7 mg) CCM : Rf = 0,45, gel de silice, toluène/acétone 65/35 v/v - Un mélange du composé 83 et du composé 84 (54,0 mg) - Un mélange du composé 85 et du composé 86 (48,3 mg) - Le composé 87 (26,6 mg) CCM : Rf = 0,14, gel de silice, toluène/acétone 65/35 v/v
Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -*4)-(2-azido-3-O- benzyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl)-(1 >4)-(méthyl 3-O-benzyl-a-L- idopyranosyluronate)-(1 -*4)- (2-azido-3-O-benzyl-6-O-tert-butyldiphenylsilyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosy l)-(1 -4) -(méthyl 3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 X4)- (2-azido-3-O-benzyl-6-O-tert-butyldiphenylsilyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosy l)-(1 -*4)-(méthyl 3-0-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -*4)-3-O-benzyl-2-{f (benzyloxy)carbonyllamino}-2- désoxy-a-D-glucopvranoside (83) Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -*4)-(2-azido-3-O- benzyl-6-O-tert-butyldiphenylsilyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl)- (1ù>4)-[(méthyl 3-0- benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -*4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D- • luco • ranos I - 1--34 - méth I 3-O-benz I-a-L-ido • ranos luronate - 1 -*4 -3-0- benzyl-2-{f(benzyloxv)carbonyllamino}-2-désoxy-a-D-cilucopyranoside (84) Le mélange des composés 83 et 84 (260 mg) est purifié par chromatographie flash sur colonne de gel de silice (toluène/méthanol 100/0ù85/15 v/v) pour donner le composé 83 (27,8 mg). CCM : Rf = 0,22, gel de silice, toluène/méthanol 85/15 v/v Les fractions restantes sont à nouveau purifiées par chromatographie flash sur colonne de gel de silice (dichlorométhane/méthanol 100/0ù>97/3 v/v pour donner le composé 84 (45,3 mg). CCM : Rf = 0,13, gel de silice, toluène/méthanol 85/15 v/v Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1-*4)- (2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl)-(1 -*4)-(méthyl 3-O-benzyl-a-L- idopyranosyluronate)-(1 -*4)- (2-azido-3-O-benzyl-6-O-tert-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosy l)-(1 -*4)-(méthyl 3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 X4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl)-(1 -*4)-(méthyl 3-O-benzyl-a-L- idopyranosyluronate)-(1 -*4)-3-O-benzyl-2-{f(benzyloxy)carbonyllamino} -2-désoxy-a-D-glucopyranoside (85) Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -*4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl)-(1 ù>4)-(méthyl 3-O-benzyl-a-L- idopyranosvluronate)-(1 ~4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-q lucopyranosyl)-(1 -4)- (méthyl 3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1---4)- (2-azido-3-O-benzyl-6-O-tertbutyldiphénylsilvl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl )-(1-a4)-(méthyl 3-O-benzyl-a-L-idopyranosvluronate)-(1ù*4)-3-O-benzvl-2-{f (benzvloxv)carbonvllamino}-2-désoxy-a-D-glucopyranoside (86) Le mélange des composés 85 et 86 (135 mg) est purifié par une chromatographie HPLC sur colonne de gel de silice C18 (Waters Sunfire, 5 pm, 150 x 19 mm, acétonitrile/eau 9/1 + acide trifluoroacétique 0,1%) pour donner successivement : - Le composé 85 (32,6 mg), après une chromatographie d'exclusion de taille (Sephadex LH2O, 120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique= 2698,96 ; masse expérimentale : 2698,55 0,65 u.m.a. - Le composé 86 (26,5 mg), après une chromatographie d'exclusion de taille (Sephadex LH2O, 120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique= 2698,96 ; masse expérimentale : 2698,95 1,05 u.m.a.
SCHEMA 18 : Préparation de l'octasaccharide 91 81 Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzol-2-O-triéthylammonium sulfonato-a-L- idopyranosyluronate)-(1 -4)-(2-azido-3-O-benzyl-6-O-tert-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-a- D-glucopyranosyl)-(1-*4)-(méthyl 3-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-a-L- idopyranosvluronate)-(1 ù>4)-(2-azido-3-O-benzyl-6-O-tert-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-a- D-glucopvranosvl)-(1 -*4)-(méthyl 3-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-a-L- idopyranosvluronate)-(1 ù>4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-a-D-glucopyranosyl)-(1 ùg)-(méthyl 3-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -4)-3-O-benzyl-2-fl (benzyloxy)carbonyllamino}-2-désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-a-D-glucopyranoside (88) Le composé 81 (69 mg, 23,5 pmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 28 pour donner le composé 88 (85,1 mg) après chromatographie d'exclusion de taille (Sephadex LH2O, 120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v). CCM : Rf = 0,62, gel de silice, acétate d'éthyle/pyridine/acide acétique/eau 17/9/2,2/5 v/v/v/v.
Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-2-O-ammonium sulfonato-a-L-idopvranosvluronate)-(1-*4)- (2-azido-3-O-benzyl-2-désoxv-a-D-q lucopyranosvl)-(1-+4)-(méthyl 3-O-benzyl-2-O-ammonium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate)-(1 X4)-(2-azido- 3-O-benzyl-2-désoxv-a-o-glucopvranosyl)-(1 >4)-(méthyl 3-O-benzyl-2-O-ammonium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate)-(1->4)- (2-azido-3-O-benzyl-2-désoxv-6-O- ammonium sulfonato-a-D-glucopyranosyl)-(1 >4)-(méthyl 3-O-benzyl-2-O-ammonium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate)-(1--4)-3-O-benzyl-2-ff (benzyloxy)carbonyllamino}-2-désoxv-6-O-ammonium sulfonato-a-D-qlucopyranoside (89) A une solution du composé 88 (85,1 mg, 21,1 pmol) dans le méthanol (2,7 mL) est ajouté le fluorure d'ammonium (31,3 mg, 0,846 mmol). Après 48 heures à 55°C, le mélange réactionnel est déposé sur colonne de gel Sephadex LH2O (95 x 2 cm) éluée par le N,N-diméthylformamide pour donner le composé 89 (64 mg). [a]D 19,4°(c 1,0 ; MeOH) Méthyl (3,4-di-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1 -4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxv-a-D-glucopyranosyl)-(1 -+4)-(3-O-benzyl-2-O- lithium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1-*4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl)-(1 ->4)-(3-O-benzyl-2-O- lithium sulfonato-a-L- idopyranosyluronate de lithium)-(1- 4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O- lithium sulfonato-a-D-glucopyranosyl)-(1-*4)-(3-O-benzyl-2-O- lithium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de lithium )-(1-*4)-3-O-benzyl-2-{f(benzyloxy)carbonyllamino}-2-désoxy-6-O- lithium sulfonato-a-D-qlucopyranoside (90) Le composé 89 (63,3 mg ; 17,8 pmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 29. Une chromatographie sur colonne de gel Sephadex LH2O (120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol/eau 50/50/1 v/v/v) donne le composé 90 (49,8 mg). [a]o 14,6°(c 1,0 ; MeOH) Méthyl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-a4)-(2-amino-2-désoxy-a-D-glucopvranosvl)-(1ù>4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1 ù>4)-(2-amino-2-désoxy-a-o-glucopyranosyl)-(1-a4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 X4)-(2-amino-2-désoxy- 6-O-sodium sulfonato-a-D-glucopyranosyl)-(1-*4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-*4)-2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-a-D-plucopyranoside (91) A une solution du composé 90 (7,6 mg ; 2,6 pmol) dans un mélange tertbutanol/eau 1/1 v/v (516 pL) sont ajoutés, à température ambiante, successivement le formiate d'ammonium (21,2 mg ; 0,33 pmol) et le palladium sur charbon 10% (49,4 mg). Après 4 heures d'agitation, le milieu réactionnel est filtré (filtre Millipore LSWP 5 pm) et déposé sur une colonne de gel Sephadex G-25 fine (95 x 2 cm) éluée par une solution aqueuse de NaCl 0,2 M. Les fractions contenant le composé attendu sont réunies, et déposées sur une colonne de gel Sephadex G-25 fine (95 x 2 cm) éluée par de l'eau.
Le produit brut 91 ainsi obtenu (5,5 mg) est utilisé tel quel dans l'étape suivante. 55 SCHEMA 19 : préparation de l'octasaccharide 95 82 NaO3SO 95 Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -*4)- (2-azido-3-O-benzyl-6-O-tert-butyldiphenylsilyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosy l)-(1 -4)-(méthyl 3-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -*4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-a-o-glucopyranosyl)-(1 ù>4)-(méthyl 3-O-benzyl-2-O- triéthylammonium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate)-(1 X4)- (2-azido-3-0-benzyl-2-désoxy-6-O-tertbutyldiphenylsilyl-a-o-glucopyranosyl )-(1 ù>4)-(méthyl 3-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate)-(1 ù>4)-3-O-benzyl-2-fr(benzyloxy)carbonyllamino} -2-désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-a-o-glucopyranoside (92) Le composé 82 (16,5 mg, 5,6 pmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 28 pour donner le composé 92 (21,5 mg) après chromatographie sur colonne de gel Sephadex LH2O (120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v). CCM : Rf = 0,73, gel de silice, acétate d'éthyle/pyridine/acide acétique/eau 28/16/3,8/9 v/v/v/v.
Méthyl (méthyl 2-O-ammonium sulfonato-3,4-di-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1-*4)- (2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-o-glucopyranosyl)- (1ù>4)-(méthyl 2-O-ammonium sulfonato-3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 ù>4)-(6-0-ammonium sulfonato 2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl)-(1 ù>4)-(méthyl 2-O-ammonium sulfonato-3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -*4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl)-(1 -->4)-(méthyl 2-O-ammonium sulfonato-3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 ù>4)-6-0-ammonium sulfonato-3-O-benzyl-2-{f(benzyloxy)carbonyllamino} -2-désoxy-a-D-glucopyranoside (93) Le composé 92 (21,5 mg, 5,3 pmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 89 pour donner le composé 93 (21,5 mg) après chromatographie d'exclusion de taille (Sephadex LH2O, 95 x 2 cm, N,N-diméthylformamide). CCM : Rf = 0,63, gel de silice, acétate d'éthyle/pyridine/acide acétique/eau 11/7/1,6/4 v/v/v/v.
Méthyl (3,4-di-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1 -*4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl)- (1 -*4)-(3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1-->4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-a-D-glucopyranosyl)-(1 >4)-(3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1 -*4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl)-(1ù>4)- (3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1ù34)-3-O-benzyl-2-{f (benzyloxy)carbonyllamino}-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-a-D-qlucopyranoside (94) Le composé 93 (14,7 mg, 4,1 pmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 31 pour donner le composé 94 (13,0 mg) après chromatographie d'exclusion de taille (Sephadex LH2O, 95 x 2 cm, dichlorométhane/éthanol/eau 50/50/1 v/v/v). CCM : Rf = 0,56, gel de silice, acétate d'éthyle/pyridine/acide acétique/eau 28/16/3,8/9 v/v/v/v Méthyl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(2-amino-2-désoxy-a-o-glucopyranosyl)- (1ù>4)-(2-0-sodium sulfonato-a-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1 ù>4)-(2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-a-D- glucopyranosyl)-(1 ù>4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -*4)-(2-amino-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl)-(1ù*4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-a-D-glucopyranoside (95) A une solution du composé 94 (13 mg, 4,4 pmol) dans un mélange tert- butanol/eau 1/1 v/v (883 pL) sont ajoutés du formiate d'ammonium (36 mg, 0,57 mmol) et du palladium sur charbon 10% (34 mg). Après 4 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est filtré (filtre Millipore LSWP 5 pm) et concentré à sec. Le résidu est déposé sur une colonne de gel Sephadex G25-fine (95 x 2 cm) éluée par une solution aqueuse de NaCl 0,2 M. Les fractions contenant le composé attendu sont réunies, et déposées sur une colonne de gel Sephadex G-25-fine (95 x 2 cm) éluée par de l'eau. Le produit brut 95 ainsi obtenu (2,5 mg) est utilisé tel quel dans l'étape suivante.
SCHEMA 20 : préparation de l'octasaccharide 99 83 i -o,so sel de triéthylammonium o3so Méthvl (méthyl 3,4-di-O-benzvl-2-O-triéthvlammonium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate)-(1 ù>4)-(2-azido-3-O-benzol-2-désoxv-6-O-triéthvlammonium sulfonato-a-D-glucopvranosvl)-(1- A)-f(méthvl 3-O-benzol-2-O-triéthvlammonium sulfonato-a-L-idopvranosvluronate)-(1 X4)-(2-azido-3-O-benzyl-6-O-tert- butvldiphénvlsilvl-2-désoxv-a-D-glucopyranosvl)-(1-*4)-(méthvl 3-O-benzvl-2-O-triéthvlammonium sulfonato-a-L.-idopvranosvluronate)-(1- 4)1 3-O-benzyl-2-{f(benzvloxv)carbonvllamino}-2-désoxv-6-O-triéthvlammonium sulfonato-a-D-glucopyranoside (96) Le composé 83 (35,1 mg , 12,0 pmol) est traité selon le même mode opératoire 15 que celui décrit pour la préparation du composé 28 pour donner le composé 96 (46,3 mg) après chromatographie sur colonne de gel Sephadex LH2O (120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v). [î]D 111 ° (c 0,95 ; CH2Cl2)
Méthyl (méthyl 2-O-ammonium sulfonato-3,4-di-O-benzyl- -a-L- idopvranosyluronate)-(1 ù>4)-(6-O-ammonium sulfonato -azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl)-(1 -*4)-(méthyl 2-O-ammonium sulfonato 3-O-benzyl-a-L-idopvranosyluronate)-(1 ~4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a- -glucopyranosyl)-(1-34)-(méthyl 2-O-ammonium sulfonato-3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1- >4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl)-(1 ù>4)-(méthyl 2-O-ammonium sulfonato-3- O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1ù>4)-6-O-ammonium sulfonato-3-O-benzyl-2-{f(benzyloxy)carbonyllamino} -2-désoxy-a-D-glucopyranoside (97) Le composé 96 (45,0 mg, 11,2 pmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 89 pour donner le composé 97 (30,8 mg) après chromatographie sur colonne de gel Sephadex LH2O (95 x 2 cm, N,N- diméthylformamide). [a]D 14,7°(c 0,95 ; MeOH)
Méthyl (3,4-di-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1 ù>4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-a-o-glucopyranosyl)- (1ù>4)-f(3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1ù>4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl)-(1 X4)12-(méthyl 3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1--*4)-3-O-benzyl-2-{f(benzyloxv)carbonyllamino} -2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-a-D-glucopyranoside (98) Le composé 97 (27,1 mg, 7,6 pmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 29 pour donner le composé 98 (20,7 mg) après chromatographie sur colonne de gel Sephadex LH2O (95 x 2 cm, dichlorométhane/éthanol/eau 50/50/1 v/v/v). [a]D 14,4°(c 1,01 ; MeOH) Méthyl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-a4)-(2- amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-a-D-glucopyranosyl)-(1 >4)-f(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-+4)-(2-amino-2-désoxy-a-D- glucopyranosyl)-(1 -(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopvranosyluronate de sodium)- (1 ù>4)-2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-a-D-glucopyranoside (99) 59 Le composé 98 (17,5 mg, 5,9 pmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 91 pour donner le composé 99 (9,5 mg). Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique= 2081,38 ; masse 5 expérimentale : 1993,28 0,14 u.m.a. (acides iduroniques observés sous forme COOH).
SCHEMA 21 : préparation de l'octasaccharide 104
80 HO -0350 L103SO 0 NaO3SO 10 Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-a-L-idopyranosvluronate)-(1 -4)-(2-azido-3-O- benzyl-6-O-tert-butvldiphénylsilvl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-f (méthyl 3-0-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1-a4)- (2-azido-3-O-benzyl-6-O-tert-butvldiphénylsilvl-2-désoxy-a-D-glucopyranosy l)-(1 X4)12-(méthyl 3-O-benzyl-a-L-idopvranosvluronate)-(1 -*4)-6-O-benzoyl-3-O-benzyl-2-ff (benzyloxy)carbonyllamino}-2-désoxy-a-o- plucopvranoside (100) Une solution du composé 80 (355 mg , 0,117 mmol), d'anhydride benzoïque (75,8 mg, 0,335 mmol) et de triéthylamine (47,3 pL, 0,335 mmol) dans le 1,2-dichloroéthane (5,6 mL) est agitée à 60°C pendant 24 heures puis 64 heures à température ambiante. Le mélange réactionnel est déposé sur une colonne de gel Sephadex LH2O (120 x 3 cm) éluée par un mélange dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v suivie d'une chromatographie flash sur colonne de gel de silice (toluène/acétone 100/0ù85/15 v/v) pour donner le composé 100 (193,2 mg). CCM : Rf = 0,38, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1 v/v Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1->4)- (2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosyl)-(1--*4)-f (méthyl 3-O-benzyl-a-L- idopvranosyluronate)-(1 X4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopyranosvl)- (1 X4)12-(méthyl 3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1->4)-6-O-benzovl 3-O-benzyl-2-ff(benzyloxy)carbonyllamino}-2-désoxy-a-D-glucopvranoside (101) Le composé 100 (60,0 mg, 0,018 mmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 89 pour donner le composé 101 (46,1 mg) après chromatographie sur colonne de gel Sephadex LH2O (120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v). Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique= 2564,66 ; masse expérimentale : 2563,66 0,19 u.m.a.
Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-a-L-idopvranosvluronate)-(1 ->4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O- triéthylammonium sulfonato-a-D-glucopyranosyl)-(1 ->4)-f (méthyl 3-O-benzyl-2-O- triéthylammonium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -*4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-a-D-glucopyranosyl)-(1 X4)12-(méthyl 3-O-benzy-2-O-triéthylammonium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate)-(1-*4)-6-O-benzovl-3-O-benzyl-2-ff (benzvloxy)carbonvllamino}-2-désoxy-a-D-glucopvranoside (102) Le composé 101 (42,9 mg, 0,016 mmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 28 pour donner le composé 102 (28,7 mg) après chromatographie sur colonne Sephadex LH2O (120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) puis chromatographie flash sur colonne de gel de silice 018 (40-60 pm ; A : méthanol, eau 5%, acétate d'ammonium 23 mM ; B : acétonitrile, méthanol 45%, eau 5%, acétate d'ammonium 17 mM ; A ù B 100/0--*70/30) suivie d'un dessalage sur colonne Sephadex LH2O (95 x 2 cm, dichlorométhane/éthanol/eau 50/50/1 v/v/v).
Méthyl (3,4-di-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1ù>4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-a-D-glucopyranosyl)-(1ù>4)-f(3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1-*4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-a-D-glucopyranosyl)-(1 ù>4)j,-(3-0-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopvranosvluronate de lithium)-(1 ù>4)-3-O-benzyl-2-{f(benzyloxy)carbonyllamino} -2-désoxy-a-D-glucopyranoside (103) Le composé 102 (28,7 mg, 7,5 pmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 29 pour donner le composé brut 103 (17,3 mg).
Méthyl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1ù>4)-(2-20 amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-a-D-glucopvranosvl)-(1 ù>4)-f(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1ù*4)-(2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-a-D-• luco • ranos I 1-+4 2-O-sodium sulfonato-a-L-idopvranosvluronate de sodium)-(1ù>4)-2-amino-2-désoxy-a-D-glucopyranoside (104) Le composé 103 (17,3 mg, 5,7 pmol) est traité selon le même mode opératoire 25 que celui décrit pour la préparation du composé 91. Le composé brut 104, ainsi obtenu, est de nouveau saponifié. A une solution du composé brut 104 dans un mélange tétrahydrofurane/méthanol 1/1 v/v (506 pL) est ajoutée, à 0°C une solution 0,7 M d'hydroxyde de lithium dans l'eau (202 pL, qsp pour avoir une concentration finale de 0,2 M). Après 1 heure à 0°C puis 16 heures à température ambiante, le milieu 30 réactionnel est chromatographié sur une colonne d'exclusion (Sephadex G 25 fine, 95 x 2 cm, NaCl 0,2 M puis Sephadex G 25 fine, 95 x 2 cm, eau) pour donner le composé 104 (6,5 mg). 1H RMN [600 MHz] (D2O) S des protons anomériques : 5,45 ; 5,44 ; 5,43 ; 5,26 5,25 ; 5,24 ; 5,18 ; 4,98 ppm 35 SCHEMA 22 : préparation de I'octasaccharide 108 OH HO Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-a-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-(méthyl 3-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate)-(1 X4)- (2-azido-3-O-benzyl-6-O-tertbutyldiphénylsilyle-2-désoxy-a-D-glucopyranosy l)-(1 -*4)-(méthyl 3-O-benzyl-2-O- triéthylammonium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate)-(1-*4)-(2-azido-3-O-benzyl-2- 03SO sel de triéthylammonium OS03 0 Me02C OBn - OBn 0 BnO~~ \ OMe Z\ BnO 03SO NH BnO O3SO sel d'ammonium OH OSO3LI OSO3Li 0 zC OBn 5 Li02C7 OBn 0 .. ` O O~ BnO-~ \ OMe ~ 0 BnO O L1O3SO NHZ BnO LiO3SO 107 LIO3SO désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-a-D-glucopvranosvl)-(1-*4)-(méthyl 3-0-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -4)-3-O-benzyl-2-désoxy-2-l(benzyloxy)carbonyllamino-6-O-triéthylammonium sulfonato-a-D-glucopvranoside (105) Le composé 85 (31,4 mg, 11,6 pmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 28 pour donner le composé 105 (40,2 mg) après chromatographie sur colonne de gel Sephadex LH2O (120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol/eau 50/50/1 v/v/v).
Méthyl (méthyl 2-O-ammonium sulfonato-3,4-di-O-benzyl-a-L- idopvranosvluronate)-(1 ->4)-(6-O-ammonium sulfonato-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy- - a-D-glucopvranosvl)-(1 >4)-(méthyl 2-O-ammonium sulfonato-3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 ->4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-q lucopyranosyl)-(1-+4)-(méthyl 2-O-ammonium sulfonato-3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1 -->4)-(6-0- ammonium sulfonato-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-o-glucopvranosyl)-(1->4)-(méthyl 2-O-ammonium sulfonato-3-O-benzyl-a-L-idopyranosyluronate)-(1->4)-6-O-ammonium sulfonato-3-O-benzyl-2-l(benzyloxy) carbonyllamino-2-désoxy-a-D-glucopyranoside (106) Le composé 105 (38,4 mg, 9,68 pmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 89 pour donner le composé 106 (28,4 mg) après chromatographie sur colonne de gel Sephadex LH2O (95 x 2 cm, N,N-diméthylformamide). Rf = 0.21 (AcOEt-pyridine-AcOH-H2O 28/16/3.8/9).
Méthyl (3,4-di-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1 ->4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-a-D-glucopvranosyl)-(1->4)-(3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1->4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-a-D-glucopvranosvl)-(1-*4)- (3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1 ->4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O- lithium sulfonato-a-D-glucopyranosyl)-(1 - 4)-(3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1-*4)-3-O-benzyl-2-désoxy-2-j(benzyloxy) carbonyllamino-6-O-lithium sulfonato-a-D-glucopvranoside (107) Le composé 106 (28,4 mg, 7,62 pmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 89 pour donner le composé 107 (28,0 mg) après chromatographie sur colonne de gel Sephadex LH2O (95 x 2 cm, dichlorométhane/éthanol/eau 50/50/1 v/v/v). Rf = 0.12 (AcOEt-pyridine-AcOH-H2O 28/16/3.8/9).
Méthvl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-am ino-2-désoxv-6-O-sodium sulfonato-a-D-glucopvranosvl)-(1-4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopvranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-amino-2-désoxv-a-D-plucopvranosvl)-(1-4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopvranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-a-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopvranosyluronate de sodium)-(1-4)-2-amino-2-désoxv-6-O-sodium sulfonato-a-o-glucopvranoside (108) Le composé 107 (5,8 mg, 2,85 pmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 91 pour donner le composé 108 (2,5 mg) qui est utilisé tel quel dans l'étape suivante. 1H RMN [600 MHz] (D2O) 5 des protons anomériques : 5,45 ; 5,44 ; 5,42 ; 5,26 ; 5,25 ; 5,24 ; 5,17 ; 5,03 ppm SCHEMA 23 : préparation de l'octasaccharide 111 OH O,so Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-a-L-idopvranosvluronate)-(1 ù>4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-a-D-glucopvranosyl)-f (1 -4)-(méthyl 3-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate)-(1ù*4)- (2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-a-D-glucopvranosvl)12-(1 ù>4)-(méthyl 3-O-benzyl-2-O- triéthylammonium sulfonato-a-L-idopyranosvluronate)-(1ù>4) -3-O-benzyl-2-benzyloxycarbonylamino-2-désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-a-D- glucopvranoside (109) Le composé 87 (37,0 mg, 0,15 mmol) est séché par co-distillation de N,N-diméthylformamide (3 x 1,4 mL) puis est mis en solution dans le N,N- diméthylformamide (1,4 mL). A cette solution on ajoute le complexe trioxyde de soufretriéthylamine (109 mg ; 6,01 mmol). Le mélange est agité pendant 16 heures à 55 °C à l'abri de la lumière puis l'excès de réactif est détruit avec du méthanol (25 pL). Le milieu réactionnel est déposé sur une colonne Sephadex LH2O (120 x 3 cm) éluée par mélange dichlorométhane/éthanol 1/1 pour conduire au composé 109 (59,8 mg). Rf = 0,26, gel de silice, acétate d'éthyle/pyridine/acide acétique/eau 28/16/3,8/9.
Méthyl (3,4-di-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1-*4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-a-D-glucopvranosyl)-f(1 -4)-(3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1 -*4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-a-D-glucopvranosyl)12-(1-*4)-(3-0-benzyl-2-O-lithium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1->4)-3-O-benzyl-2- benzyloxycarbonylamino-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-a-D-glucopvranoside (110) A une solution du composé 109 (57,3 mg, 13,7 pmol) dans un mélange tétrahydrofurane/méthanol 1/1 v/v (2,2 mL) est ajoutée, à 0 °C, une solution 0,7 M d'hydroxyde de lithium dans l'eau (0,88 mL ; q.s.p concentration finale de 0,2 M). Après 1 heure à 0 °C puis 16 heures à température ambiante, le milieu réactionnel est déposé sur une colonne Sephadex LH2O (120 x 3 cm) éluée par mélange dichlorométhane/éthanol/eau 50/50/1 v/v/v pour conduire au composé 110 (38,1 mg) [a]D 13,1 c 1,0 ; MeOH)
Méthyl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1->4)-(2- amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-a-D-glucopyranosvl)-j(1-*4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1--*4)-(2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-a-D-glucopyranosyl)1,-(1-4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosvluronate de sodium)-(1->4)-2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-a-o-qlucopyranoside (111) A une solution du composé 110 (40 mg, 12,8 pmol) dans un mélange tert- butanol/eau 1/1 v/v (2,6 mL) sont ajoutés du formiate d'ammonium (105 mg, 1,67 mmol) et du palladium sur charbon 10% (260 mg). Après 4 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est filtré (filtre Millipore LSWP 5 pm) et concentré à sec. Le résidu est déposé sur une colonne de gel Sephadex G25-fine (95 x 2 cm) éluée par une solution aqueuse de NaCI 0,2 M. Les fractions contenant le composé attendu sont réunies, et déposées sur une colonne de gel Sephadex G-25-fine (95 x 2 cm) éluée par de l'eau. Le produit brut 111, ainsi obtenu (14,7 mg), est utilisé tel quel dans l'étape suivante. Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique= 2285,47 ; masse expérimentale : 2197,20 0,34 u.m.a. (acides iduroniques observés sous forme 35 COOH).
68 Exemples de composés selon l'invention :
EXEMPLE 1 : Méthyl (4-O-propvl-2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-*4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D- plucopvranosvl)-(1-*4)-f(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1 -+4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl-(1 -4)j- (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 ù>4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranoside (composé n° 1) NaO3SO A une solution du composé 30 (180 mg, 0,077 mmol) dans une solution saturée aqueuse d'hydrogénocarbonate de sodium (15 mL, 100 mUmmol) fraîchement préparée sont ajoutés, à 0°C et sous atmosphère d'argon, l'hydrogénocarbonate de sodium solide (1,17 g, 13,9 mmol) puis par portions en 30 minutes le complexe pyridinetrioxyde de soufre (985 mg, 6,19 mmol). Après 16 heures à température ambiante, on dépose le mélange réactionnel sur une colonne de Sephadex G-25 fine (90 x 3 cm) éluée par une solution aqueuse de NaCI 0,2 M. Les fractions contenant le composé attendu sont réunies, et déposées sur une colonne de Sephadex G-25 fine (90 x 3 cm) éluée par de l'eau. Après concentration des fractions contenant le composé attendu, on obtient 200 mg du composé 1. 'H RMN [600 MHz] (D2O) 8 des protons anomériques : 5,45 ; 5,42 (2 H) ; 5,22 ; 25 5,21 ; 5,20 ; 5,18 ; 5,03 ppm. Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique= 2735,72 ; masse expérimentale : 2734 u.m.a.
EXEMPLE 2 : Méthyl (4-O-propyl-2-O-sodium sulfonato-a-L-idopvranosvluronate 30 de sodium)-(1-.4)-(2-désoxy -6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-plucopvranosyl)-(1-*4)-f(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopvranosvluronate de sodium)- (1-*4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopvranosvl-1-+4 2-O-sodium sulfonato-a-L-ido • ranos luronate de sodium - 1ù>4 -2-désox -6- O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranoside (composé n° 2) NaO,SO 2 Le composé 37 (29,5 mg, 11,56 pmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation de l'exemple 1 pour donner le composé 2 (7,4 mg) après purification sur chromatographie échangeuse d'ions (colonne SAX, conditions : 0,5 mL/min, A : H2O, B : NaCl 2 M, gradient 30% de B à 90% en 30 min) suivie d'une chromatographie sur colonne de gel Sephadex G-25 fine (54 x 1,7 cm, eau). 1H RMN [600 MHz] (D20) S des protons anomériques : 5,45 ; 5,42 ; 5,41 (2 H) ; 5,22 ; 5,21 (2H) ; 5,20 ; 5,18 ; 5,03 ppm. Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique= 3401,12 ; masse expérimentale : 3400,40 0,76 u.m.a.
EXEMPLE 3 : [Méthvl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-*4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D- glucopyranosyl)-(1->4)-f(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopvranosvluronate de sodium)- (1 -*4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D- glucopvranosyl)-(1-X4)12-2-O-sodium sulfonato-a-L.-idopvranosidel-uronate de sodium (composé n° 3) OMe NaO3SO 3 Le composé brut 55 (48,7 mg) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation de l'exemple 1 pour donner le composé 3 (37,6 mg ). 1H RMN [600 MHz] (D20) S des protons anomériques : 5,43 (2H) ; 5,35 ; 5,25 ; 5,24 ; 5,19 ; 5,18 ; 5,09 ppm.
EXEMPLE 4 : Méthvl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 ù>4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopvranosyl)-(1 ù>4)-(2-0- sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1ù>4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopvranosyl)-(1ù>4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopvranosyl)-(1- +4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1-->4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranoside (composé n° 4) NaO3SO 4
Le composé 91 (5,5 mg, 2,64 pmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation de l'exemple 1 pour donner le composé 4 (4,5 mg). 1H RMN [600 MHz] (D20) 8 des protons anomériques : 5,44 ; 5,40 ; 5,31 ; 15 5,25 ; 5,24 ; 5,22 ; 5,16 ; 5,03 ppm. Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique= 2489,55 ; masse expérimentale : 2465,63 0,64 u.m.a.
EXEMPLE 5 : Méthvl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de 20 sodium)-(1 -4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopvranosyl)-(1 4)-(2-0- sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -*4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopvranosvl)-(1ù>4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopvranosvluronate de sodium)-(1 -*4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopvranosyl)-(1 >4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L- 25 idopyranosyluronate de sodium)-(1-*4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranoside (composé n° 5) HO OH OH O NaOzCOH O NaO2C~ OH O \ / \O~ HHO 0 HO NaO3SNHOMe NaO3SNH HO O NaONH % NaO3SO NaO3SO NaO3SO 5
Le composé 95 (2,5 mg, 1,2 pmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation de l'exemple 1 pour donner le composé 5 (1,9 mg). 1H RMN [600 MHz] (D20) 8 des protons anomériques : 5,45 ; 5,43 ; 5,33 ; 5,25 ; 5,23 ; 5,21; 5,16 ; 5,05 ppm.
EXEMPLE 6 : Méthyl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopvranosvluronate de sodium)-(1 ù>4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D- glucopyranosyl)-(1ù>4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopvranosvluronate de sodium)- (1 -*4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1 ù>4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopvranosvluronate de sodium)-(1 -*4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1 ù>4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1-*4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranoside (composé n° 6) NaO3SO 6
Le composé 99 (8,9 mg, 4,28 pmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation de l'exemple 1 pour donner le composé 6 (7,3 mg). 'H RMN [600 MHz] (D20) 8 des protons anomériques : 5,46 ; 5,32 (2 H) ; 5,26 ; 5,25 ; 5,21 ; 5,20 ; 5,05 ppm. Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique= 2489,55 ; masse expérimentale : 2488,00 1,5 u.m.a.
EXEMPLE 7 : Méthyl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-*4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D- glucopvranosvl)- (1ù>4)-(2-0-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1 -*4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosvl)-(1 -4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosvluronate de sodium)-(1-*4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato- 2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1-*4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1ù>4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-qlucopyranoside (composé n° 7) NaO3SO 7
Le composé 108 (3,7 mg, 1,42 pmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation de l'exemple 1 pour donner le composé 7 (1,8 mg). 1H RMN [600 MHz] (D20) 8 des protons anomériques : 5,46 ; 5,42 ; 5,31; 5,26 ; 5,24 ; 5,22 ; 5,18 ; 5,03 ppm.
EXEMPLE 8 : Méthyl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosvluronate de sodium)-(1 -4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D- plucopvranosvl)-F(1 ù>4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1 ù>4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D- glucopvranosvl) 2-(1ù4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosvluronate de sodium)- (1ù>4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-(sulfonato)amino-a-D-glucopvranoside (composé n° 8) NaO3SO 8 Le composé 111 (42 mg, 18,4 pmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation de l'exemple 1 pour donner le composé 8 (44,1 mg). 1H RMN [600 MHz] (D20) S des protons anomériques : 5,45 ; 5,44 ; 5,25 ; 5,24 25 (2H) ; 5,20 ; 5,04 ppm. Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique= 2693,84 ; masse expérimentale : 2692,97 0,18 u.m.a.
EXEMPLE 9: Méthyl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopvranosvluronate de sodium)-(1 -4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonato)amino-a-D- glucopyranosyl)-f(1-*4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1-*4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D- glucopyranosyl)j~-(1ù>4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L.-idopvranosvluronate de sodium)-(1-->4)-2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranoside (composé n° 9) OH OSO3Na OSO3Na O NaOZCOH OSO3Na NaOZC OH 0 O NaOzC OH ù_~~ p O O HO Na03SNHOMe NaO2C OH O HO O O NaO3SNHNa03S0 NaO3SNH HO O NaO3SNH NaO3SO HO T NaO3SO NaO3SO 9 Le composé 104 (6,5 mg, 2,98 pmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation de l'exemple 1 pour donner le composé 9 (6,0 mg). 1H RMN [600 MHz] (D20) b des protons anomériques : 5,44 (2H) ; 5,43 ; 5,22 (2H) ; 5,19 ; 5,18 ; 5,05 ppm.
Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique= 2591,60 ; masse expérimentale : 2591,80 0,33 u.m.a.
Les composés selon l'invention ont fait l'objet d'essais pharmacologiques permettant de déterminer leur effet agoniste des récepteurs des FGFs et leur activité 20 sur l'angiogenèse, ainsi que sur la revascularisation post-ischémique.
Modèle d'angiogenèse in vitro : activité spécifique envers le FGF2 Le modèle d'angiogenèse in vitro correspond à un réarrangement de cellules endothéliales veineuses humaines sur une matrice biologique. La matrice est réalisée 25 en distribuant, dans chaque puits d 'une plaque de 96 puits (Becton Dickinson 353872), 60 pl de Matrigel dilué au 1/3 (Growth factor reduced Matrigel : Becton Dickinson 356230) dans du collagène (rat Tail collagène, type I : Becton Dickinson 354249 ). La matrice biologique se durcit après 1 heure à 37°C. Des cellules endothéliales veineuses humaines (HUVEC réf : C-12200 - 30 Promocell) ensemencées sur la matrice biologique à 7800 cellules/puits dans 120 pl de milieu EBM (Endothelial Basal Medium, Lonza C3121) + 2% SVF (sérum de veau foetal - Lonza) + hEGF (Epidermal Growth Factor Humaine Recombinante - Lonza) 10 pg/mI. Les cellules sont stimulées avec le FGF2 (R&D Systems / 234 - FSE - 0 50) 10 ng/ml ou avec les produits de l'invention pendant 18 heures à 37°C en présence de 5% de CO2. Après 24 heures, les cellules sont observées au microscope (objectif X4) et l'analyse de la longueur des pseudo-tubules est effectuée à l'aide d'un logiciel d'image (BIOCOM-logiciel Visiolab 2000). Dans ce test d'angiogenèse in vitro, les composés de l'invention présentent une activité spécifique comprise entre 10-6 M et 10-12 M. Par exemple, les composés n° 1 et 7 sont actifs à 10-6 M.
Le composé 10 de formule suivante : OMe os(); 10
testé sous forme de sel de sodium, a lui aussi démontré une activité dans ce test 15 d'angiogenèse in vitro.
Modèle d'implant en cellulose chez la souris Ce modèle est une adaptation du modèle décrit par Andrade et al. (Microvascular Research, 1997, 54, 253-61) afin de tester des produits 20 pharmacologiques susceptibles d'activer l'apparition de l'angiogenèse. Les animaux (souris blanches BALB/c J consanguines) sont anesthésiées avec un mélange Xylazine (Rompun , 10 mg/kg) / Kétamine (Imalgène 1000, 100 mg/kg) par voie intra-péritonéale. Le dos de l'animal est rasé et désinfecté à l'Héxomédine . Une poche d'air est créée en sous-cutané sur le dos de la souris par injection de 5 ml 25 d'air stérile. Une incision d'environ 2 cm, sur le haut du dos de l'animal est réalisée afin d'introduire un implant de cellulose stérile (disque de 1 cm de diamètre, 2 mm d'épaisseur, Cellspon ref 0501) imprégné avec 5011 de solution stérile contenant le produit à tester. L'incision est ensuite suturée et nettoyée à l'Héxomédine . Les jours suivants la pose de l'implant, les souris peuvent recevoir dans l'implant 30 le produit par une injection à travers la peau (50 pl/implant/jour) sous anesthésie gazeuse (Isoflurane à 5% (Aerrane , Baxter)).
Sept jours après la pose de l'éponge, les souris sont sacrifiées par une dose létale de Pentobarbital sodique (CEVA santé animale), administrée par voie intrapéritonéale. La peau est ensuite découpée, environ 1 cm autour de l'éponge en évitant la cicatrice afin de dégager la peau et l'éponge. L'éponge est ensuite découpée en plusieurs morceaux et placée dans un tube Ribolyser contenant 1 ml de tampon de lyse (Cell Death Detection ELISA, Roche). Les tubes sont agités 4 fois consécutives, durant 20 secondes, force 4, au broyeur cellulaire (FastPrep FP 120). Les tubes sont ensuite centrifugés 10 minutes à 2000 g à 20°C et les surnageants sont congelés à -20°C en attendant le dosage de l'hémoglobine. Le jour du dosage, les tubes sont à nouveau centrifugés après décongélation et la concentration d'hémoglobine est mesurée avec le réactif de Drabkin (Sigma, volume à volume) par lecture au spectrophotomètre à 405 nm contre une gamme étalon d'hémoglobine bovine (Sigma). La concentration d'hémoglobine dans chaque échantillon est exprimée en mg/mi d'après la régression polynomiale réalisée à partir de la gamme. Les résultats sont exprimés en valeur moyenne ( sem) pour chaque groupe. Les différences entre les groupes sont testées avec une ANOVA suivie d'un test de Dunnett sur la racine carrée des valeurs. Dans ce test in vivo, les composés de l'invention ont démontré une activité spécifique comprise entre 5 et 45 ng/site. Ainsi, les composés 1 et 7 sont actifs à la concentration de 45 ng/site.
II apparaît donc que les composés selon l'invention ont une activité agoniste des récepteurs des FGFs et une activité sur l'angiogenèse, ainsi que sur la revascularisation post-ischémique. Ces composés peuvent donc être utilisés pour la préparation de médicaments, notamment de médicaments utiles pour le traitement des maladies nécessitant une activation des récepteurs des FGFs ou de médicaments utiles dans des pathologies nécessitant une activation de l'angiogenèse et une revascularisation post-ischémique.
Ainsi, selon un autre de ses aspects, l'invention a donc pour objet des médicaments qui comprennent un composé de formule (I) ou le composé 10, ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ces derniers.
Plus généralement, l'invention a pour objet des médicaments qui comprennent un composé de formule (I) : (1) dans laquelle : - RI représente un groupe -OSO3 ou groupe hydroxyle, - R2 représente soit un groupe -0-alkyle, soit un monosaccharide de formule (II), où R représente un groupe alkyle : osa, - R3 représente un disaccharide de formule (III) : oso3 dans laquelle : - R4 représente un groupe -OSO3 ou un groupe hydroxyle, 15 - R5 représente un disaccharide de formule (IV) : (N) oso3 dans laquelle : 20 - R6 représente un groupe -OSO3 ou un groupe hydroxyle, - R, représente soit un groupe hydroxyle, soit un monosaccharide de formule (V) ci-dessous, soit un disaccharide de formule (VI) : O a~/ Y HO \ HS03 NHS03 o
HO (V)
dans laquelle : - R8 représente un groupe -OS03 ou un groupe hydroxyle, - R9 représente soit un groupe hydroxyle, soit un groupe -0-alkyle, soit un disaccharide de formule (VII) : 0so, dans laquelle Rio représente un groupe -0-alkyle, à la condition que : R9 représente un groupe hydroxyle ou un groupe -0-alkyle lorsque R2 représente un monosaccharide de formule (Il) telle que définie ci-dessus ; R7 représente un disaccharide de formule (VI) telle que définie ci-dessus lorsque R2 représente un groupe -0-alkyle ; et R,, R4, R6 et R8 ne représentent pas simultanément des groupes hydroxyles.
De tels composés regroupent ceux de formule (I) définis ci-avant, ainsi que l'heptasaccharide 10 défini précédemment, décrit dans la demande de brevet US 2006/0079483 Al. 20 Ces médicaments trouvent leur emploi en thérapeutique, notamment dans le traitement de l'ischémie (ischémie cardiaque, ischémie artérielle des membres inférieurs), le traitement des maladies associées à un rétrécissement ou à une obstruction des artères ou des artérites, le traitement des angines de poitrine, le 25 traitement de la thromboangéite oblitérante, le traitement de l'athérosclérose, le traitement de l'inhibition de la resténose après angioplastie ou endoartérectomie, le traitement de la cicatrisation, le traitement pour la régénération musculaire, le traitement pour la survie des myoblastes, le traitement de la neuropathie périphérique, le traitement des dommages nerveux post-opératoires, le traitement de déficiences nerveuses telles que la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, la maladie du prion et la dégénérescence neuronale chez l'alcoolique, le traitement de démences, le traitement pour l'amélioration de la survie du greffon de pancréas bioartificiel chez le patient diabétique, le traitement de l'amélioration de la la revascularisation des greffons et de la survie des greffes, le traitement de la dégénérescence rétinienne, le traitement de la rétinite pigmentaire, le traitement de l'ostéoarthrite, le traitement de la pré-éclampsie ou le traitement des lésions vasculaires et du syndrome de détresse respiratoire aiguë, le traitement pour la réparation des cartilages, le traitement pour la réparation et la protection osseuse, le traitement pour la réparation et la protection des follicules pileux et pour la protection et la régulation de la croissance capillaire.
L'ischémie est une diminution de la circulation artérielle dans un organe entraînant une baisse de la concentration en oxygène dans les tissus lésés. Dans les mécanismes de revascularisation post-ischémiques, deux mécanismes principaux entrent en jeu : l'angiogenèse et l'artériogenèse. L'angiogenèse est le processus de génération de nouveaux vaisseaux capillaires à partir de vaisseaux pré-existants. L'artériogenèse contribue au développement (augmentation en taille et en calibre) des vaisseaux collatéraux autour de la zone ischémiée ou avasculaire.
Parmi les facteurs de croissance impliqués dans ces processus de revascularisation, la famille des FGF et notamment le FGF-2 a été la plus largement décrite (Post, M. J., Laham, R., Sellke, F. W. & Simons, M. Therapeutic angiogenesis in cardiology using protein formulations. Cardiovasc Res 49, 522-31 , 2001). Ainsi, le FGF2 et ses récepteurs représentent des cibles très pertinentes pour les thérapies visant à induire les processus d'angiogenèse et d'artériogenèse (Khurana, R. & Simons, M. Insights from angiogenesis trials using fibroblast growth factor for advanced arteriosclerotic disease. Trends Cardiovasc Med 13, 116-22, 2003).
L'une des applications des composés de l'invention est le traitement post- ischémique après occlusion au niveau cardiaque ou des artères périphériques. En ce qui concerne le traitement de l'ischémie cardiaque, un des essais cliniques les plus prometteurs est un essai clinique où du FGF-2 était séquestré dans des micro-sphères d'alginate en présence d'héparine (Laham, R. J. et al. Local perivascular delivery of basic fibroblast growth factor in patients undergoing coronary bypass surgery: results of a phase I randomized, double-blind, placebo-controlled trial. Circulation 100, 1865-71, 1999). Ces micro-sphères étaient implantées proche du foyer ischémique au niveau du myocarde. Après 90 jours, tous les patients traités au FGF2 ne présentaient aucun symptôme cardiaque ischémique. En comparaison, dans le groupe contrôle, 3 des 7 patients possédaient à 90 jours des symptômes persistants et 2 patients ont eu recours à de la chirurgie vasculaire. De façon intéressante, le bénéfice de la thérapie étaient maintenu après 3 ans de suivi. Ces observations suggèrent que des composés mimant le FGF2 peuvent représenter une thérapie de choix pour le traitement des conséquences de l'ischémie cardiaque. Trois essais cliniques sur l'injection de FGF2 dans l'artère coronaire ont été réalisés lors de traitement du rétrécissement des artères coronaires (Laham, R. J. et al.
Intracoronary basic fibroblast growth factor (FGF-2) in patients with severe ischemic heart disease: results of a phase I open-label dose escalation study. J Am Colt Cardiol 36, 2132-9, 2000; Simons, M. et al. Pharmacological treatment of coronary artery disease with recombinant fibroblast growth factor-2: double-blind, randomized, controlled clinical trial. Circulation 105, 788-93, 2002 ; Unger, E. F. et al. Effects of a single intracoronary injection of basic fibroblast growth factor in stable angina pectoris. Am J Cardiol 85, 1414-9, 2000). Le résultat de ces trois essais montre que les infusions intra-coronaires de FGF2 sont bien tolérées et améliorent significativement l'état des patients. Ainsi, les composés décrits dans l'invention peuvent trouver une application dans le traitement des maladies associées à un rétrécissement des artères coronaires et notamment dans le traitement des angines de poitrine.
Les maladies des artères distales et notamment les artérites des membres inférieurs sont dues à l'obstruction chronique des artérioles irriguant les extrémités. Ces pathologies touchent principalement les membres inférieurs. Dans un essai clinique de phase I, des patients ayant des pathologies des artères périphériques entraînant la claudication ont reçu des injections de FGF2 (Lazarous, D. F. et al., Basic fibroblast growth factor in patients with intermittent claudication: results of a phase I trial. J Am Coli Cardiol 36, 1239-44, 2000). Dans ce contexte, le FGF2 était bien toléré chez ces patients et les données cliniques suggèrent un effet bénéfique du FGF2 notamment sur l'amélioration de la marche. Ces données cliniques suggèrent que les composés de l'invention représentent un outil thérapeutique de choix pour le traitement des maladies associées à une obstruction des artères distales.
La maladie de Buerger ou thromboangéite oblitérante affecte les structures vasculaires distales et se caractérisent par une artérite distale des jambes avec douleurs et ulcérations. Dans ce contexte, une induction de l'angiogenèse et de la vasculogenèse représenterait une thérapie pour cette pathologie. Les composés de ladite invention représentent une thérapie de choix pour la thromboangéite oblitérante.
La neuropathie périphérique est une atteinte axonale ou démyélinisante du nerf périphérique moteur et/ou sensitif qui entraîne une désensibilisation des membres distaux. Une des complications secondaires majeures du diabète est le développement chronique d'une neuropathie périphérique. Dans ce contexte, Il a été démontré que le FGF2 induisait une régénération axonale qui pourrait être une thérapie de choix dans dans le traitement de la lésion des nerfs périphériques et donc dans la neuropathie périphérique (Basic fibroblast growth factor isoforms promote axonal elongation and branching of adult sensory neurons in vitro. Klimaschewski L, Nindl W, Feurle J, Kavakebi P, Kostron H. Neuroscience. 2004;126(2):347-53). De par l'activité agoniste des récepteurs du FGF, les composés de ladite invention représenteraient un traitement de choix dans la neuropathie périphérique chez le patient sain ou diabétique.
Il est clairement établit que le FGF2 est un activateur des cellules nerveuses durant le développement. Des résultats récents suggèrent que le FGF2 serait également un facteur pivotai pour promovoir la régénération des neurones chez l'adulte (Sapieha PS, Peltier M, Rendahl KG, Manning WC, Di Polo A., Fibroblast growth factor- 2 gene delivery stimulates axon growth by adult retinal ganglion cells after acute optic nerve injury. Mol Cell Neurosci. 2003 Nov;24(3):656-72.). Par leurs activités agonistes des récepteurs des FGF, les composés de ladite invention représenterait une thérapie de choix dans la réparation des dommages nerveux post-opératoires, dans la réparation de déficiences nerveuses tel que la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, la maladie du prion, la dégénérescence neuronale chez l'alcoolique ou dans les cas de démences.
La prolifération et la migration des cellules musculaires lisses vasculaires contribuent à l'hypertrophie intimale des artères et joue ainsi un rôle prépondérant dans l'athérosclérose et dans la resténose après angioplastie et endoarterectomie. Il a été démontré qu'un facteur angiogène, le VEGF, réduisait significativement l'épaississement de l'intima en accélérant la ré-endothélialisation (Van Belle, E., Maillard, L., Tio, F. O. & Isner, J. M. Accelerated endothelialization by local delivery of recombinant human vascular endothelial growth factor reduces in-stent intimai formation. Biochem Biophys Res Commun 235, 311-6, 1997). Ainsi, les composés de la présente invention, possédant une activité pro-angiogène, peuvent être utiles dans le traitement de l'athérosclérose et dans l'inhibition de la resténose après angioplastie ou endoartérectomie.
Le réseau vasculaire est essentiel au développement et à la préservation des tissus. En promouvant la délivrance des nutriments, de l'oxygène et des cellules, les vaisseaux sanguins aident à maintenir l'intégrité fonctionnelle et structurale des tissus. Dans ce contexte, l'angiogenèse et la vasculogenèse permettent de préserver et de perfuser les tissus après une ischémie. Les facteurs de croissance angiogéniques comme le VEGF et le FGF2 favorisent ainsi la revascularisation pour la régénération des tissus. Les composés présentés dans l'invention pourraient représenter un traitement de choix dans le traitement pour la régénération des muscles.
Les processus de régénération musculaire sur les muscles dystrophiques ou normaux dépendent de l'apport de cytokines et de facteurs de croissance angiogéniques au niveau local (Fibbi, G., D'Alessio, S., Pucci, M., Cerletti, M. & Del Rosso, M. Growth factor-dependent proliferation and invasion of muscle satellite cells require the cell-associated fibrinolytic system. Biol Chem 383, 127-36, 2002). Il a été proposé que le système FGF était un système critique de la régénération musculaire, de la survie et de la prolifération des myoblastes (Neuhaus, P. et al. Reduced mobility of fibroblast growth factor (FGF)-deficient myoblasts might contribute to dystrophic changes in the musculature of FGF2/FGF6/mdx triple-mutant mice. Mol Cell Biol 23, 6037-48, 2003). Le FGF2 ainsi que les composés de ladite invention pourraient être exploités afin de promouvoir la régénération cardiaque. Ils amélioreraient ainsi la perfusion du myocarde après ischémie (Hendel, R. C. et al. Effect of intracoronary recombinant human vascular endothelial growth factor on myocardial perfusion: evidence for a dose-dependent effect. Circulation 101, 118-21, 2000) ainsi que la survie et la progression de myoblastes transplantés et notamment dans la dystrophie musculaire de Duchenne.
L'angiogenèse est un phénomène essentiel durant la cicatrisation cutanée. Les nouveaux vaisseaux formés apportent l'oxygène et les nutriments nécessaires à la réparation tissulaire. Dans le cas de patient diabétique, la cicatrisation est un processus lent et difficile présentant des défauts d'angiogenèse. Les FGFS font partie des facteurs de croissance les plus impliqués dans les processus d'angiogenèse durant la phase de cicatrisation. Certains FGF sont fortements sur-régulés dans les cellules du derme après une blessure cutanée. Par leurs activités agonistes des récepteurs du FGF, les composés de ladite invention représenteraient une thérapie de choix pour le traitement de la cicatrisation chez le patient sain ou diabétique
La transplantation de pancréas bio-artificiel est une technique très prometteuse pour le traitement de certains type de diabète. II a été démontré, chez le rat diabétique, que la vascularisation dans les pancréas bio-artificiel était beaucoup plus importante quand les pancréas étaient imprégnées de microsphères portant du FGF2 (Sakurai, Tomonori; Satake, Akira, Sumi, Shoichiro, (noue, Kazutomo, Nagata, Natsuki, Tabata, Yasuhiko. The Efficient Prevascularization Induced by Fibroblast Growth Factor 2 With a Collagen-Coated Device Improves the Cell Survival of a Bioartificial Pancreas. Pancreas. 28(3):e70-e79, April 2004). Cette revasculaisation améliore ainsi la survie des pancréas bio-artificiel implantés et par conséquent la survie du greffon. Par leurs activités agonistes des récepteurs du FGF, les composés de ladite invention représenteraient une thérapie de choix dans l'amélioration de la survie du greffon de pancréas bioartificiel chez le patient diabétique et de façon plus générale dans l'amélioration de la la revascularisation des greffons et par conséquent dans la survie des greffes.
La rétinite pigmentaire est une pathologie impliquant la dégénérescence progressive de la rétine caractérisée par une dégénérescence des photorécepteurs et une oblitération des vaisseaux rétiniens. Landenranta et al. (An anti-angiogenic state in mice and humans with retinal photoreceptor cell degeneration. Proc Natl Acad Sci USA 98, 10368-73, 2001) ont proposé que des facteurs de croissance angiogéniques régulent la coordination neurale et la vascularisation associée de la rétine en fonctionnant simultanément comme facteurs de survie des photorécepteurs et comme régulateur des cellules endothéliales. Dans ce contexte, l'injection intra-vitréenne de FGF2 retarde la dégénérescence des photorécepteurs en agissant sur la survie et sur l'angiogenèse rétinienne (Faktorovich, E. G., Steinberg, R. H., Yasumura, D., Matthes, M. T. & LaVail, M. M. Basic fibroblast growth factor and local injury protect photoreceptors from light damage in the rat. J Neurosci 12, 3554-67,1992). Ces observations démontrent l'intérêt des composés décrits dans l'invention comme thérapie dans la dégénérescence rétinienne et notamment dans la rétinite pigmentaire.
Dans le domaine de l'ostéoarthrite, de nombreuses études sont réalisées pour restaurer le cartilage articulaire détruit. Dans ce contexte, il a été reporté que la prolifération et la différenciation des chondrocytes étaient stimulées par le FGF2 in vitro (Kato Y, Gospodarowicz D. Sulfated proteoglycan synthesis by confluent cultures of rabbit costal chondrocytes grown in the presence of fibroblast growth factor. J Cell Biol. 1985 Feb;100(2):477-85). De plus, Cuevas et al. ont montré que le FGF2 induit la réparation du cartilage in vivo (Cuevas P, Burgos J, Baird A. Basic fibroblast growth factor (FGF) promotes cartilage repair in vivo. Biochem Biophys Res Commun. 1988 Oct 31;156(2):611-8). Takafuji et al. ont également montré que des implants de FGF2 amélioraient de façon significative des cartilages temporo-mandibulaires de lapins souffrant d'ostéoarthrites (Takafuji H, Suzuki T, Okubo Y, Fujimura K, Bessho K Regeneration of articular cartilage defects in the temporomandibular joint of rabbits by fibroblast growth factor-2: a pilot study. Int J Oral Maxillofac Surg. 2007 Oct;36(10):934-7). Ces observations démontrent l'intérêt des composés décrits dans l'invention comme thérapie dans le traitement de l'ostéoarthrite et de la réparation des cartilages.
Dans le domaine de la réparation osseuse, un des besoins essentiels est de trouver des agents qui stimulent la formation de l'os. Parmi les principaux facteurs de croissance, il est établi que l'administration systémique de FGF2 facilite la réparation de l'os (Acceleration of fracture healing in nonhuman primates by fibroblast growth factor-2. Kawaguchi H, Nakamura K, Tabata Y, Ikada Y, Aoyama I, Anzai J, Nakamura T, Hiyama Y, Tamura M. J Clin Endocrinol Metab. 2001 Feb;86(2), 875-880). L'application locale de FGF2 dans des matrices de gélatine accélère la réparation osseuse chez des primates suggérant l'utilité clinique du FGF2 dans le traitement des fractures. Par les propriétés agonistes pour les récepteurs du FGF, les composés de ladite invention pourrait représenter un traitement de choix dans la réparation osseuse La pré-eclampsie est une pathologie du placenta associée à un défaut de vascularisation (Sherer, D. M. & Abulafia, O. Angiogenesis during implantation, and placental and early embryonic development. Placenta 22, 1-13, 2001). Ces défauts de vascularisation seraient dus à un défaut d'angiogenèse et entraîneraient des perturbations au niveau du placenta pouvant aboutir à la mort du foetus. Les composés de l'invention pourraient être un traitement de choix pour pallier à un défaut d'angiogenèse dans les placentas pré-éclamptiques. En plus des effets inducteurs de l'angiogenèse, les facteurs de croissance comme le VEGF ou le FGF2 protègent les cellules endothéliales des inducteurs 35 intrinsèques et extrinsèques de l'apoptose. La voie de signalisation intrinsèque est activée par les mitochondries en réponse à un stress comme la déprivation ou les dommages sur l'ADN, alors que la voie de signalisation extrinsèque est induite par la liaison de facteurs pro-apoptotique comme le TNF-a ou Fas. Il est maintenant clairement décrit que le VEGF et le FGF2 sont deux facteurs de survie des cellules endothéliales (Role of Raf in Vascular Protection from Distinct Apoptotic Stimuli : A Alavi, J.D. Hood, R. Frausto, D. G. Stupack, D.A. Cheresh : Science 4 July 2003: Vol. 301. no. 5629, pp. 94-96). Le Syndrome de Détresse Respiratoire Aiguë (ARDS) se caractérisent par des problèmes cardio-vasculaires et neuropsychiatriques. Dans le cadre des problèmes cardio-vasculaires les patients présentent des lésions vasculaires importantes et notamment une induction de l'apoptose des cellules endothéliales élevée. Récemment, Harnacher & al. ont démontré que les fluides de lavages bronchoalvéolaires de patients atteint d'ARDS présentaient une activité pro-apoptotique contre les cellules endothéliales micro-vasculaire de poumon (Tumor necrosis factor-alpha and angiostatin are mediators of endothelial cytotoxicity in bronchoalveolar lavages of patients with acute respiratory distress syndrome. Am J Respir Crit Care Med. 2002 Sep 1;166(5):651-6 : Harnacher J, Lucas R, Lijnen HR, Buschke S, Dunant Y, Wendel A, Grau GE, Suter PM, Ricou B.). Par leur activité de survie sur les cellules endothéliales, les produits de l'invention pourraient présenter un traitement de choix dans l'amélioration vasculaire des patients atteints de lésions vasculaires et notamment des patients atteint d'ARDS.
La surrégulation endogène de FGF7 (ou KGF) et de FGF18 semble être un important mécanisme pour favoriser la prolifération, la migration et la protection des follicules pileux dans des cas pathologiques ou suite à un traitement tumoral (Comprehensive Analysis of FGF and FGFR Expression in Skin: FGF18 Is Highly Expressed in Hair Follicles and Capable of Inducing Anagen from Telogen Stage Hair Follicles. Mitsuko Kawano, Akiko Komi-Kuramochi, Masahiro Asada, Masashi Suzuki, Junko Oki, Ju Jiang and Toru Imamura). Par leur activité agoniste sur les récepteurs du FGF, les composés de ladite invention pourraient présenter un traitement de choix pour la réparation et la protection des follicules pileux et dans la protection et la régulation de la croissance capillaire.
Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne des compositions pharmaceutiques comprenant, en tant que principe actif, un composé selon l'invention ou un composé 10. Ces compositions pharmaceutiques contiennent une dose efficace d'au moins un composé selon l'invention ou du composé 10, ou un sel pharmaceutiquement acceptable dudit composé, ainsi qu'au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. Lesdits excipients sont choisis selon la forme pharmaceutique et le mode d'administration souhaité, parmi les excipients habituels qui sont connus de l'Homme du métier.
Ainsi, l'invention a pour objet une composition pharmaceutique comprenant, en tant que principe actif, au moins un composé de formule (I) dans laquelle : - R, représente un groupe -OSO3 ou groupe hydroxyle, - R2 représente soit un groupe -0-alkyle, soit un monosaccharide de formule (Il), 10 où R représente un groupe alkyle : os03 - R3 représente un disaccharide de formule (III) : oso3 dans laquelle : - R4 représente un groupe -OSO3 ou un groupe hydroxyle, - R5 représente un disaccharide de formule (IV) : Os03 dans laquelle : - R6 représente un groupe -OSO3 ou un groupe hydroxyle, 25 - R7 représente soit un groupe hydroxyle, soit un monosaccharide de formule (V) ci-dessous, soit un disaccharide de formule (VI) : 15 20 HO OS0O 3 00C OH O 3~ \O HO HO O y R NHS03 NHS03 (V) dans laquelle : - R8 représente un groupe -OS03 ou un groupe hydroxyle, - R9 représente soit un groupe hydroxyle, soit un groupe -O-alkyle, soit un disaccharide de formule (VII) : OS03 O 0 (VII) HO Rio 0s03 dans laquelle Rio représente un groupe -0-alkyle, à la condition que : R9 représente un groupe hydroxyle ou un groupe -0-alkyle lorsque R2 représente un monosaccharide de formule (II) telle que définie ci-dessus ; R, représente un disaccharide de formule (VI) telle que définie ci-dessus lorsque R2 représente un groupe -0-alkyle ; et R,, R4, R6 et R8 ne représentent pas simultanément des groupes hydroxyles, ou un sel pharmaceutiquement acceptable dudit composé, ainsi qu'au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable.
Dans les compositions pharmaceutiques de la présente invention pour l'administration orale, sublinguale, sous-cutanée, intramusculaire, intra-veineuse, topique, locale, intratrachéale, intranasale, transdermique ou rectale, le principe actif ci-dessus ou son sel peut être administré sous forme unitaire d'administration, en mélange avec des excipients pharmaceutiques classiques, aux animaux et aux êtres humains pour la prévention ou le traitement des troubles ou des maladies ci-dessus.
Les formes unitaires d'administration appropriées comprennent les formes par voie orale telles que les comprimés, les gélules molles ou dures, les poudres, les granules et les solutions ou suspensions orales, les formes d'administration sublinguale, buccale, intratrachéale, intraoculaire, intranasale, par inhalation, les formes d'administration topique, transdermique, sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse, les formes d'administration rectale et les implants. Pour l'application topique, on peut utiliser les composés selon l'invention dans des crèmes, gels, pommades ou lotions. Les formes d'administration injectables sont particulièrement avantageuses, comprenant de façon classique le composé actif mis en solution dans de l'eau pour injection, en présence de chlorure de sodium. La dose unitaire de composé actif doit être adaptée à l'effet thérapeutique recherché ; elle peut être comprise par exemple entre 0.1 et 100 mg de principe actif.
La présente invention, selon un autre de ses aspects, concerne également une méthode de traitement des pathologies ci-dessus indiquées qui comprend l'administration à un patient d'une dose efficace d'un composé selon l'invention ou d'un composé 10, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables. Ainsi, l'invention a pour objet une méthode de traitement des pathologies ci-dessus indiquées qui comprend l'administration à un patient d'une dose efficace d'un composé de formule (I) dans laquelle : - R, représente un groupe -OSO3 ou groupe hydroxyle, - R2 représente soit un groupe -0-alkyle, soit un monosaccharide de formule (II), où R représente un groupe alkyle : (HH) osa, - R3 représente un disaccharide de formule (III) : osa; dans laquelle : - R4 représente un groupe -OSO3 ou un groupe hydroxyle, 30 - R5 représente un disaccharide de formule (IV) : 0s03 dans laquelle : - R6 représente un groupe -OS03 ou un groupe hydroxyle, - R, représente soit un groupe hydroxyle, soit un monosaccharide de formule (V) ci-dessous, soit un disaccharide de formule (VI) : HO~vT, O O NHSO3 (V)
dans laquelle : - R8 représente un groupe -OS03 ou un groupe hydroxyle, - R9 représente soit un groupe hydroxyle, soit un groupe -0-alkyle, soit un disaccharide de formule (VII) : oso3 dans laquelle R10 représente un groupe -0-alkyle, à la condition que : R9 représente un groupe hydroxyle ou un groupe -0-alkyle 20 lorsque R2 représente un monosaccharide de formule (II) telle que définie ci-dessus ; R, représente un disaccharide de formule (VI) telle que définie ci-dessus lorsque R2 représente un groupe -0-alkyle ; et R,, R4, R6 et R8 ne représentent pas simultanément des groupes hydroxyles, ou un sel pharmaceutiquement acceptable dudit composé. Os03 O ~n0 (VII) HO NHSO3 15 25 Les médicaments, compositions pharmaceutiques et méthode de traitement selon l'invention peuvent également concerner l'un quelconque des sous-groupes de composés définis précédemment.

Claims (22)

  1. REVENDICATIONS1. Composés oligosaccharidiques répondant à la formule (I) : dans laquelle : - R, représente un groupe -OSO3 ou groupe hydroxyle, - R2 représente soit un groupe -O-alkyle, soit un monosaccharide de formule (II), 10 où R représente un groupe alkyle : (il) oso3 - R3 représente un disaccharide de formule (III) : oso3 dans laquelle : - R4 représente un groupe -OSO3 ou un groupe hydroxyle, - R5 représente un disaccharide de formule (IV) : (1) 15 20 (N) oso3dans laquelle : - R6 représente un groupe -OS03 ou un groupe hydroxyle, - R7 représente soit un groupe hydroxyle, soit un disaccharide de formule (VI) : oso3 dans laquelle : - R8 représente un groupe -OS03 ou un groupe hydroxyle, - R9 représente soit un groupe hydroxyle, soit un groupe -O-alkyle, soit un disaccharide de formule (VII) : oso3 dans laquelle Rio représente un groupe -O-alkyle, à la condition que : R9 représente un groupe hydroxyle ou un groupe -0-alkyle lorsque R2 représente un monosaccharide de formule (Il) telle que définie ci-dessus ; R7 représente un disaccharide de formule (VI) telle que définie ci-dessus lorsque R2 représente un groupe -O-alkyle ; et R,, R4, R6 et R8 ne représentent pas simultanément des groupes hydroxyles ; sous forme acide ou sous la forme de l'un quelconque de leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
  2. 2. Composés selon la revendication 1, dans lesquels R2 représente un monosaccharide de formule (II) et R7 représente un groupe hydroxyle.
  3. 3. Composés selon la revendication 1 ou la revendication 2, répondant à la formule (I-1) ci-dessous, dans laquelle R7 représente un groupe hydroxyle et R, R,, R4 et R6 sont tels que définis dans la revendication 1 : OS03 0 O(VII) HO NHSO325oso, OR os(); sous forme acide ou sous la forme de l'un quelconque de leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
  4. 4. Composés selon la revendication 1, dans lesquels R2 représente un groupe -0-alkyle.
  5. 5. Composés selon la revendication 1 ou la revendication 4, répondant à la 10 formule (1-2) ci-dessous, dans laquelle R2 représente un groupe -0-alkyle et R,, R4, R6, R8 et R9 sont tels que définis dans la revendication 1 : R2 oso, sous forme acide ou sous la forme de l'un quelconque de leurs sels 15 pharmaceutiquement acceptables.
  6. 6. Composés selon la revendication 1, dans lesquels : - R2 représente un groupe -O-alkyle, et - R7 représente un disaccharide de formule (VI) telle que définie dans la 20 revendication 1, dans laquelle R9 représente un disaccharide de formule (VII) telle que définie dans la revendication 1.
  7. 7. Composés selon la revendication 1 ou la revendication 6, répondant à la formule (1-3) ci-dessous, dans laquelle R2 et R9 sont tels que définis dans la 25 revendication 6 et R,, R4, R6, R8 et Rio sont tels que définis dans la revendication 1 :R2 sous forme acide ou sous la forme de l'un quelconque de leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
  8. 8. Composés selon la revendication 1, dans lesquels : - R2 représente un groupe -0-alkyle, et - R, représente un disaccharide de formule (VI) telle que définie dans la revendication 1, dans laquelle R9 représente soit un groupe hydroxyle, soit un groupe 10 -0-alkyle.
  9. 9. Composés selon la revendication 1 ou la revendication 8, répondant à la formule (1-2) ci-dessous, dans laquelle R,, R4, R6 et R8 sont tels que définis dans la revendication 1, R2 représente un groupe -O-alkyle et R9 représente soit un groupe 15 hydroxyle, soit un groupe -O-alkyle : 0s03 R2 Os03 sous forme acide ou sous la forme de l'un quelconque de leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
  10. 10. Composés selon la revendication 8 ou la revendication 9, dans lesquels R9 représente un groupe -O-alkyle.
  11. 11. Composés selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, choisis parmi 25 les composés suivants : - Méthyl (4-O-propyl-2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1- 4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1->4)-[(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1->4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl- 20(1ùAl-(2-0-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1ù 4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranoside (n° 1) ; - Méthyl (4-O-propyl-2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -*4)-(2-désoxy -6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D- glucopyranosyl)-(1 -4)-[(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1 -*4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl-(1ù4)]3-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-*4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranoside (n° 2) ; -[Méthyl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1ù 4)-(2- désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-[(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -*4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1ù A)]2-2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranoside]-uronate de sodium (n° 3) ; - Méthyl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1ù 4)-(2- désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-(2-O-sodium sulfonatoa-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1ù 4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1 -*4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1ù 4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D- glucopyranosyl)-(1 -4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1 -4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranoside (n° 4); - Méthyl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1ù 4)-(2-O-sodium sulfonatoa-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -*4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1ù 4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-*4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1ù4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1ù4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranoside (n° 5) ; - Méthyl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1ù4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-a-o-glucopyranosyl)-(1-4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1 ->4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranoside (n° 6) ; - Méthyl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1->4)-(2- désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-g lucopyranosyl)- (1->4)-(2-0-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1->4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1->4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1->4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranoside (n° 7) ; - Méthyl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-+4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium(sulfonatoamino)-a-D-g lucopyranosyl)-[(1->4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1->4)-(2-désoxy-6-O- sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)]2-(1->4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1->4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-(sulfonato)amino-a-D-glucopyranoside (n° 8) ; et - Méthyl (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1->4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonato)amino-a-o-glucopyranosyl)-[(1->4)- (2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -*4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranosyl)]2-(1-4)-(2-O-sodium sulfonato-a-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1->4)-2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-a-D-glucopyranoside (n° 9).
  12. 12. Médicament, caractérisé en ce qu'il comprend un composé de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 11 et dans laquelle R, représente soit un groupe hydroxyle, soit un monosaccharide de formule (V) ci-dessous, soit un disaccharide de formule (VI), où R8 et R9 sont tels que définis dans l'une quelconque des revendications 1 à 11 : HO Mou un sel pharmaceutiquement acceptable de ce dernier.
  13. 13. Médicament selon la revendication 12, caractérisé en ce qu'il comprend un 5 composé de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 11 ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ce dernier.
  14. 14. Médicament selon la revendication 12, caractérisé en ce qu'il comprend le composé 10 : os(); 10 10 ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ce dernier.
  15. 15. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend un 15 composé de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, et dans laquelle R, représente soit un groupe hydroxyle, soit un monosaccharide de formule (V) ci-dessous, soit un disaccharide de formule (VI), où R8 et R9 sont tels que définis dans l'une quelconque des revendications 1 à 11 : HO 20 (V) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ce dernier, ainsi qu'au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. 25
  16. 16. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend un composé de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 11 ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ce dernier, ainsi qu'au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable.
  17. 17. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend le composé 10 : OMe Os03 ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ce dernier, ainsi qu'au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable.
  18. 18. Utilisation d'un composé de formule (I) selon l'une quelconque des 10 revendications 1 à 11 et dans laquelle R, représente soit un groupe hydroxyle, soit un monosaccharide de formule (V) ci-dessous, soit un disaccharide de formule (VI), où R8 et R9 sont tels que définis dans l'une quelconque des revendications 1 à 11 : 10 HO (V) pour la préparation d'un médicament utile pour le traitement des pathologies nécessitant une activation des récepteurs des FGFs.
  19. 19. Utilisation selon la revendication 18 pour la préparation d'un médicament 20 utile pour le traitement des pathologies nécessitant une activation de l'angiogenèse et une revascularisation post-ischémique.
  20. 20. Utilisation selon la revendication 18 ou 19 pour la préparation d'un médicament utile pour le traitement de l'ischémie, telle que l'ischémie cardiaque et 25 l'ischémie artérielle des membres inférieurs, le traitement des maladies associées à un rétrécissement ou à une obstruction des artères ou des artérites, le traitement des angines de poitrine, le traitement de la thromboangéite oblitérante, le traitement de l'athérosclérose, le traitement de l'inhibition de la resténose après angioplastie ou 15endoartérectomie, le traitement de la cicatrisation, le traitement pour la régénération musculaire, le traitement pour la survie des myoblastes, le traitement de la neuropathie périphérique, le traitement des dommages nerveux post-opératoires, le traitement de déficiences nerveuses telles que la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, la maladie du prion et la dégénérescence neuronale chez l'alcoolique, le traitement de démences, le traitement pour l'amélioration de la survie du greffon de pancréas bioartificiel chez le patient diabétique, le traitement de l'amélioration de la la revascularisation des greffons et de la survie des greffes, le traitement de la dégénérescence rétinienne, le traitement de la rétinite pigmentaire, le traitement de l'ostéoarthrite, le traitement de la pré-éclampsie ou le traitement des lésions vasculaires et du syndrome de détresse respiratoire aiguë, le traitement pour la réparation des cartilages, le traitement pour la réparation et la protection osseuse, le traitement pour la réparation et la protection des follicules pileux et pour la protection et la régulation de la croissance capillaire.
  21. 21. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 18 à 19, dans laquelle ledit composé répond à la formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 11.
  22. 22. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 18 à 20, dans laquelle ledit composé est le composé 10 : HO oso, 10 ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ce dernier.
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US13/369,677 US9527930B2 (en) 2009-08-14 2012-02-09 FGF receptor-activating N-sulfate oligosaccharides, preparation thereof, and therapeutic use thereof
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2949115B1 (fr) 2009-08-14 2012-11-02 Sanofi Aventis OLIGOSACCHARIDES N-SULFATES ACTIVATEURS DES RECEPTEURS DES FGFs, LEUR PREPARATION ET LEUR APPLICATION EN THERAPEUTIQUE
FR2970969B1 (fr) * 2011-01-27 2013-10-18 Sanofi Aventis Oligosaccharides 3-o-alkyles activateurs des recepteurs des fgfs, leur preparation et leur application en therapeutique
GB201516066D0 (en) 2015-09-10 2015-10-28 Young & Co Llp D Treatment of retinitis pigmentosa

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1992018546A1 (fr) * 1991-04-17 1992-10-29 Glycomed, Inc. Polysaccharides sulfates en tant qu'inhibiteurs de la proliferation cellulaire dans les muscles lisses
FR2800074A1 (fr) * 1999-10-22 2001-04-27 Aventis Pharma Sa Nouveaux oligosaccharides, leur preparation et les compositions pharmaceutiques les contenant
US20040068108A1 (en) * 1996-06-14 2004-04-08 Philippe Duchaussoy Synthetic polysaccharides, process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2597484B1 (fr) * 1986-04-17 1988-12-23 Sanofi Sa Glycosaminoglycanes de type heparine ou heparane-sulfate dotes d'une activite sur la division et la differentiation cellulaires, leur preparation et leurs applications therapeutiques.
EP0300099A1 (fr) 1987-07-20 1989-01-25 Akzo N.V. Pentasaccharides
IL102758A (en) 1991-08-23 1997-03-18 Akzo Nv Glycosaminoglycanoid derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions comprising them
FR2704226B1 (fr) 1993-04-22 1995-07-21 Sanofi Elf 3-desoxy oligosaccharides, leurs procedes de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
ES2147216T3 (es) 1993-09-01 2000-09-01 Akzo Nobel Nv Bisconjugados que comprenden dos sacaridos y un grupo de union.
FR2751334B1 (fr) 1996-07-19 1998-10-16 Sanofi Sa Polysaccharides synthetiques, procede pour leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant
FR2773804B1 (fr) 1998-01-19 2000-02-18 Sanofi Sa Polysaccharides de synthese, procede pour leur preparation et compositions pharmaceutiques le contenant
US6617316B1 (en) 1999-10-22 2003-09-09 Aventis Pharma Oligosaccharides, their preparation and pharmaceutical compositions containing them
EP2343077B1 (fr) * 2001-09-12 2013-07-17 SIGMA-TAU Research Switzerland S.A. Inhibiteurs d'héparanase à base de dérivés de glycosaminoglycanes totalement N-désulfatés capables d'activité anti-angiogène et dépourvu d'effet anticoagulant
RU2005100966A (ru) * 2002-06-18 2005-08-10 Гликорес 2000 С.Р.Л. (It) Низкомолекулярный сверхсульфатированный полисахарид
US7582737B2 (en) * 2004-07-20 2009-09-01 Academia Sinica Orthogonally protected disaccharide building blocks for synthesis of heparin oligosaccharides
FR2873377B1 (fr) * 2004-07-23 2006-10-13 Sanofi Synthelabo Derives d'azasucre, inhibiteurs d'heparanases, leur procede de preparation, les compositions en contenant et leur utilisation
FR2949114B1 (fr) * 2009-08-14 2011-08-26 Sanofi Aventis OCTASACCHARIDES N-ACYLES ACTIVATEURS DES RECEPTEURS DES FGFs, LEUR PREPARATION ET LEUR APPLICATION EN THERAPEUTIQUE
FR2949115B1 (fr) 2009-08-14 2012-11-02 Sanofi Aventis OLIGOSACCHARIDES N-SULFATES ACTIVATEURS DES RECEPTEURS DES FGFs, LEUR PREPARATION ET LEUR APPLICATION EN THERAPEUTIQUE

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1992018546A1 (fr) * 1991-04-17 1992-10-29 Glycomed, Inc. Polysaccharides sulfates en tant qu'inhibiteurs de la proliferation cellulaire dans les muscles lisses
US20040068108A1 (en) * 1996-06-14 2004-04-08 Philippe Duchaussoy Synthetic polysaccharides, process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
FR2800074A1 (fr) * 1999-10-22 2001-04-27 Aventis Pharma Sa Nouveaux oligosaccharides, leur preparation et les compositions pharmaceutiques les contenant

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
C. TABEUR ET AL.: "Oligosaccharides corresponding to the regular sequence of heparin: chemical synthesis and interaction with FGF-2", BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 7, 1999, pages 2003 - 2012, XP002575365 *
CODEE J D C ET AL: "The synthesis of well-defined heparin and heparan sulfate fragments", DRUG DISCOVERY TODAY: TECHNOLOGIES, ELSEVIER, vol. 1, no. 3, 1 December 2004 (2004-12-01), pages 317 - 326, XP004767969, ISSN: 1740-6749 *

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