FR2519638A1 - Derives d'aminopropylaminobleomycine, leurs applications therapeutiques et procede pour leur preparation - Google Patents

Abstract

CES DERIVES D'AMINOPROPYLAMINOBLEOMYCINES SONT CEUX DE FORMULE SUIVANTE ET LEUR SEL:BX-NH-(CH)-A-(CH)-BDANS LAQUELLE BX REPRESENTE UN FRAGMENT DE L'ACIDE BLEOMYCINIQUE FORME PAR ELIMINATION DU GROUPE HYDROXY DU GROUPE CARBOXY DE CET ACIDE ET LES SYMBOLES A ET B ONT DES DEFINITIONS SPECIFIQUES. CES DERIVES SONT UTILES NOTAMMENT COMME MEDICAMENTS ANTITUMORAUX AYANT DES EFFETS SECONDAIRES REDUITS. IL EST EGALEMENT DECRIT UN PROCEDE DE PREPARATION DE CES DERIVES.

Description

La présente invention concerne de nouveaux dérivés d'a-

minopropylaminobléomycine.

La bléomycine constitue une famille de substances anti-

biotiques antitumorales découverte en 1966 par Umezawa, un des présents inventeurs, et ses collaborateurs (J of Antiblotics,

19 A, p 200 ( 1966)7 Elle est produite par Streptomyces verti-

cillus, un Actinomycéte, et c'est un glucopqptide basique so-

luble dans l'eau capable de chélater facilement un atome de

cuivre divalent En culture ordinaire, seize membres de la fa-

mille de la bléomycine sont produits et chacun d'eux a été iso-

lé /par exemple Umezawa et coll, Journal of Antibiotics, 19 A, p.210 ( 1966)1 Diverses bléomycines sont également décrites

dans le brevet US 3 922 262 et dans le brevet US Re 30 451.

Par suite de leur activité antitumorale remarquable et malgré certains effets secondaires indésirables, tels qu'une toxicité pulmonaire, les bléomycines ont déjà beaucoup été utilisées dans le domaine clinique de la cancérothérapie; en particulier

on les a utilisées avec succès dans le traitement des épithé-

liomas malpighiens comme cibles principales, du cancer de la peau, du cancer de la tête et du cou, du cancer du poumon et du lymphome malin Il demeure cependant nécessaire d'améliorer encore l'activité antitumorale des bléomycines et de réduire

leurs effets secondaires, en particulier leur toxicité pulmo-

naire. L'attention s'est portée selon l'invention sur le fait que 1 ' aminopropyl-N-méthylaminopropylaminobl'îomycine (désignée

par l'abréviation APMP) inhibe fortement la croissance des cel-

lules Hela et d'importantes études ont donc Été effectuées pour réduire la toxicité pulmonaire de lt APMP L'inventiou

repose sur la découverte qu'il est possible de réduire remar-

quablement la toxicité pulmonaire par modification chimique du groupe amino terminal de 1 'APMP avec divers groupes alkyles substitués. Les pouveaux dérivés d'aminopropylaminobléomycine de l'invention comprennent les formes contenant du cuivre et les

formes dépourvues de cuivre et sont représentés par la formu-

le générale f BY'Z-NH-(CH 2)3 -A(CH 2)3 -B (I)

/W est un fragment form' par élimination du groupe hy-

droxy du groupe carboecy de leacide bléomycinique et est re-

présenté par la formule -

COM 2 NI

1 1

L;.u 2/ 'Nu \ /""

CE CH 2

Ne_S H 2 N

CE 1

3 "Il N 11,C/

H H

El C_

CONH 2

k / C\

CH NR

1 '1 CH i 3

HO CH

NI"Il\, '

0 CH C

il 1 9 c CH O

\ N/ \ CE

1 3

E N CH CH Ho CE 31 S a -l, M H OR i

C O

1 \ /I

B C 1 C, H / a H \C. H 2 OH OH

1 I-11

Bo 1 H //C\

0 NE 2

0 1

CE H N ÀS Ii I',H H H

HOCS 1-1 11-1

H

III /_

c P OEI (le cuivre étant omis pour la forme contenant du cuivre); A représente un groupe de formules

RI Rî R

-N, -N N-, ou -N-R-p, dans lesquelles R 1 est 2)n 2 2 un alkyle inférieur ou un benzyle, R 2 est un alkyle inférieur ou un benzyle, R est un alkylène inférieur et N est zéro ou

un; et B représente un groupe de formule V 4 dans la-

-N-R 3

quelle R et R 4 représentent chacun ( 1) un atome dthydrogène,

3 4

ou ( 2) un groupe alkyle qui peut être substitué par un ou plu-

sieurs groupes phényle, naphtyle, anthryle, furyle, thiophène, norbornène ou cycloalkyle fces groupes substituants peuvent de plus être substitués par un ou plusieurs atomes d'halogène

ou groupesalkyle inférieurs, alcoxy inférieurs, cyano, halo-

génométhyle ou benzyloxy (les groupes benzyloxy peuvent être substitués par un ou plusieurs atomes d'halogène ou groupes

alcoxy inférieurs, benzyloxy ou cycloalkylméthoxy), sous ré-

serve qu'au moins un des symboles R 3 et R 4 représente un grou-

pe autre qu'un atome d'hydrogène.

Comme exemples des groupes alkyle inférieurs, on peut mentionner les groupes méthyles éthyle, n-propyle, isopropyle, n-butyle, isobutyle; pour les halogènes, le fluor, le chlore

et le brome; pour les groupes alkylène inférieurs, les grou-

pes éthylène, triméthylène, tétraméthylène, pentaméthylène et hexaméthylène; pour les groupes cycloalkyle, les groupes

cyclopentyle, cyclohexyle, cycloheptyle, cyclooctyle, cyclo-

décanyle, cyclo-undécanyle, cyclododécanyle et cyclotridécany-

le; pour les groupes alcoxy inférieurs, les groupes méthoxy,

éthoxy, propoxy et butoxy; et pour les groupes halogénomé-

thyle, les groupes trifluorométhyle et trichlorométhyle.

Des exemples de -N représentés par le symbole A ci-

(R 2)n dessus sont 3 N st CH 3 2 H 5 et C 2 H 5 C 6 H 5 lorsque N = O et

CH 3 12 H 5 C 4 H 9 CH 3

-N, N, -N et -N lorsque N = 1 I I il

CH 3 C 2 H 5 C 4 H 9 CH 2 C 6 H 5

Des exemples de

R R 1 CH CH 3

-N-R-N comprennent N (CH 2)3-N-

É 2 É 2 CH 3 CH 3

Comme exemples des composés représentés par la formule

générale (I) qui sont souhaitables du point de vue de l'acti-

vité pharmacologique, on peut mentionner les composés ou A

ICH CH R

représente -N N_, -N-(CH 2)3-N, ou -N dans les-

CH 3 CH 3 (R 2)

quelles R 1 est un alkyle inférieur, R 2 est un alkyle inférieur 2 O ou un benzyle et N est zéro ou 1; R 3 et R 4 de B représentent chacun ( 1) un atome d'hydrogène, ( 2) un benzyle qui peut être substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène ou groupes benzyloxy, cyano, halogénométhyle, halogénobenzyloxy, alcoxy (inférieur)benzyloxy, benzyloxybenzyloxy ou cycloalkylméthoxy, ( 3) naphtylméthyle, ( 4) halogénophényléthyle, ou ( 5) alkyle

inférieur substitué par un cycloalkyle en C 8-C 13, sous réser-

ve qu'au moins un des symboles R 3 et R 4 représente un groupe

autre qu'un atome d'hydrogène.

Des exemples de composés représentatifs de l'invention

figurent dans le tableau 1.

TABLEAU i

composé Nom du composé -Abréviation No

3-{N-Màthyl-N ( 3 ( 2 "-p chlorophényléthylamino)propyll -

1 MCLPE

ami no}propylamino BLM

3 {N-methyl-N l 3 ( 2 "-phényléthylamino) propyll amino}Ipropyl-

2 MPE

amino BLM 3 3-f N-méthyl-N l 3 '<benzylamino)propyil amino}propylamino BLM MBZ

3-{N-fléthyl-N-( 3 ' (p-chlorobenzylamino)propyll amino}propyl-

4 MCLBZ<)

amino BLM 3-{N-mnéthyl-N l 3 ' (m-chlorobenzylamino) propyll amino}propylMCB m amino BLM

3-{N-méthyl-N-l( 3 o-chlorobenzylamino) propyll amino}propyl-

6 MCLBZ (o) amino BLM Ln ru) Ln oe 8 3-{N-roéthyl-N-l 31-(o,pdichlorobenzylamino)propyolamino}propyl MDCLBZ amino BLM (O, P) 9 3-{Nméthyl-N-l 31-(p-fluorobenzylamino)propyllamino}propyl- MFBZ (p) amino BLM 3-{N-Uéthyl-N -l 3 '-(p-bromobenzylamino)propyllamino}propyl MBRBZ (p) amino BLM

3-{N-méthyl-N-l 3 '-(pentafluorobenzylamino)propyllamino}propyl-

il MPFBZ amino BLM

3-{N-mèthyl-N-l 31-(p-methoxybanzylamino)propyllamino}propyl-

12 MMOBZ (p) amino BLM Tableau 1 (suite)

3-{N-trithyl-N-l 31-(m,p-dichlorobenzylamino)propyllamino}propyl-

amino BLM

MDCLBZ

(m, P) c M Ln CN Uà 1 oe 14 3-lN-mèthyl-N-l 31-( 1 " pchlorophénylthylamino)propyllaminol MCLAPE (p) propylamino BLM

3-f N-m 4thyl-N-l 31-(m,p-dibenzyloxybenzylamino)propyllamino}-

MDBZOBZ

propylamino BLM P)

3-f N-méthyl-N-l 3 '-( 311-phelnylpropylamino)propyllamino}propyl-

16 MPP

amino BLM

3-f N-méthyl-N-l 31-( 2,21 diphényléthylamino)propyllamino}-

17 MDPE

propylamino BLM

3-f N-méthyl-N-l 31-(p-cyanobenzylamino)propyllamino}proyl-

MCNBZ amino BLM Tableau 1 (suite)

3-f N-méthyl-N-l 3 '-(o,p-diméthoxybenzylamino)propyllamino}-

propylamino BLM MDMOBZ (o, p) -J r%) Ln -.b %O cx tg i Co

3-{N-mthyl-N-l 3 '-"x -naphtylméthylamino)propyllamino)Pr Opyl-

MNAPH

amino BLM

3-{N inéthyl-N-l 31-( 9-anthramèthylamino)propyll "ino}propyl-

21 MANTRA

amino BLM

3 {N-m éthyl-N l V (cyclo-octylmé thylamino) propyl 1 amino)propyl-

22 Mco amino BLM

3-{N-n'éthyl-N-l 3 '-(dibenzylmàthylamino)propyllamino}propyl-

23 MDBZME

amino BLM

3-{N-méthyl-N-l 31-( 111-phényléthylamino)propyllamino}propyl-

24 MAPE

amino BLM Tableau 1 (suite)

3-{N-rhéthyl-N-l 3 '-(m-trifluorométhylbenzylamino)propyllamino}-

propylamino BLM MTFBZ (m) Co hà Ln -à %O Oè t"; Co Tableau i (suite)

3-{N-methyl-N l 3 ' < 2 '-furylméthylamirno) propyll amino}propyl-

amino BLM MFUR

3-{N-màthyl-N l 3 ' ( 2 " 1-thiénylméthylamino>propyll amino}-

26 MTHIO

propylamino BLM 27 3-{N-mflthyl-N l 3 ' (dibenzylamino>propyll amino} propylamino BLM MDBZ

3 {N-miethyl-N l 3 ' (cyclopentylmèthylamino) propylliamino}-

28 MCP

propylamino BLM 29 3 {N-fléthyl-N l 3 ' (cyclohexylméthylamino) propyll amino}propyl MH amino BLM

3-t N-méthyl-N l 3 (cyclohexyléthylamino)propy 1 l amino}propyl-

&ip L o ru> to %O oe

3- N-méthyl-N-l 31-(cyclo-undê cylméthylamino)propyllamino}-

32 mcu propylamino BLM

3-{N-Mèthyl-N-l 31-( 511-norbornine-2-méthylamino)propyll-

33 MNB

amino)propylamino BLM

3-{N-nithyl-N-l 31-(bis(m,p-dibenzyloxybenzyl)amino)propyll-

34 MDDBZOBZ

aminolpropylaminoÉLM

3-{NN-diméthyl-N-l 31-(dibenzylamino)propyllamino)propy 1-

MMDBZ

amino BLM

3-{NN-dimetthyl-N-l 3 ' (cyclo-octylméthylamino)propyll amino)-

36 mmco propylamïno BLM Tabjea 1 (suite)

3-f N-mithyl-N-l 31-(cycloheptylniàthylamino)propyllaminol-

propylamino BLM MCHEP il ri Ln NO CN - Uà 1 oe

3-{ NN-dibutyl-N-l 3 '-(diben ylamino)propyllamino}propyl-

38 BBDBZ

amino BLM

3-{N-méthyl-N-benzyl-N-l 31-dibenzylamino)propyllaminolpropyl-

39 MTBZ

amino BLM 3-{N-benzyl-N-l 31-(dibenzylamino)propyllaminolpropylamino BLM ATBZ

3-{NN-diméthyl-N-l 31-(NN-dimèthyl-N-( 3 l'-dibenzylaminopropyl)-

41 PPDBZ

amino)propyllaminà}propylamino BLM

3-{NN"dimethyl-N l 3 (NN-diméthyl-N ( 311-cyclo-,octylmethyl-

42 PPCO

aminopropyl)amino)propyllaminolpropylamino BLM 43 3-l 41-( 3 "dibeiizylaminopropyl)pipéridyllpropylamino BLM PYDBZ Tableau 1 (suite)

3-{NN-diéthyl-N-fg'-(dibenzylamino)propyllamino}propyl-

amino BLM EEDBZ -1 rla tn %O

CN 1

Lm 1 C* Table au i (suite) 3 l 4 ( 3 "-p-chlorobenzylamirnopropyl) pipçridyll propylamino BLM

PYCLBZ

3 l 4 ' ( 3 " 1-cyclo Octylméthylaminopropyl) pipéridyll propylamino BLM PYCO

3-{N,N-diéthyl-N l 3 ' ( 2 "-p-chlorophényléthylamino)propyll -

46 EECLPE

amino}propylamino BLM

3-{N-méthyl-N l 3 ' (cyclotridécylméthylamino>propyll amino}-

47 MCT

propylamino BLM

3-{N-méthyl-N-l 3 ' (bis ( 3 " 1,4 "-di <p-chlorobenzyloxy)benzyl)-

48 MDDCL

aminopropyl amino}Ipropylamino BLM

3-{N-méthyl-N-l 3 ' (bis ( 3 ",4 " 1-di(m,p-dichlorobenzyloxy)benzyl) -

49 MDDCL

amino) propyl Iamino}propylamino BLM

3-{N-méthyl-N-l 3 ' (bis( 3 ",4 " 1-di(p-méthoxybenzyloxy)benzyl)-

MDDMO

aminopropyll amino}propylamino BLM r'> % O %

W I

oe

3-IN-methyl-N l 3 bis (p cyclo-octylméth oxybenzyl)amino) -

52 MDCDBZ

propyllamino}propyl'amino BLM

3-f N-méthyl-N-l 31-(bis( 3 ",411,511-tribenzyloxybenzyl)amino)-

53 MDTBZOBZ

propyllamino}propylamino BLM IP An T VATI 1 (-ctiiii-pl

3-IN-méthyl-N-l 31 (bis( 4 "-(p-benzyloxy)benzyloxy)benzyl)amino)-

propyllamino}propylamino BLM

MDBZOBZOBZ

k w

Nota: IIBLMI' signifie 'blëomycine'.

ri tn -.b

W 1

ce 2519638 i

Parmi ces composés, les plus souhaitables sont les com-

posés N s 7, 15, 18, 19, 20, 22, 32, 34, 35, 37, 38, 39, 41,

42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 S 49, 50, 51, 52 et 53, en particu-

lier 32, 34 et 43.

Les composés de l'invention représentés par la formule

générale (I) sont préparés comme indiqué ci-dessous.

On obtient les présents composés de formule (I) en laissant une aminopropylaminobléomycine de formule

/ -N (CH 2)3-A-(CH 2)3-2 (II)

dans laquelle e Xç et A sont comme défini ci-dessus, se conden-

ser par réduction avec un composé carbonylique de formule Rs-CO-R 6 (III)

dans laquelle R 5 et R 6 représentent chacun ( 1) un atome dthy-

drogène, ( 2) un cycloalkyle, ( 3) un alkyle qui peut être subs-

titué par un ou plusieurs groupes cycloalkyle ou phényle (le groupe phényle peut tre substitué par un atome dthalogène),

( 4) un phényle qui peut être substitué par un ou plusieurs ato-

mes d'halogène ou groupes alkyle inférieurs, cycloalkylmtho-

xy, alcoxy inférieurs, benzyloxy, cyano, halogénométhyle, ha-

log 1 nobenzyloxy, alcoxy(inférieur)benzyloxy ou benzyloxybenzy-

loxy, ( 5) un naphtyle,( 6) un thiophène, ( 7) un furyle, ( 8) un anthryle ou un norbornène; sous réserve qu'au moins un des

symboles R 5 et R 6 représente un groupe autre qu'un atome d'hy-

drogèe. Les agents réducteurs utilisés dans la condensation

c prennent les composés de type borohydrure, tels que le cya-

obro Fhydrure de sodium La condensation peut également être effectuée par hydrogénation catalytique avec un catalyseur tel que le charbon palladié La quantité du composé carbonylique utilisé varie selon le type du produit désiré et ne peut pas

être généralisée sans réserve, mais dans l'ensemble est com-

* prise dans la gamge de 0,5 A 25, généralement de 0,7 à 20 moles par mole du composé de formule (II) On obtient principalement un dérivé dans lequel R 4 représente un atome d'hydrogène, par emploi de 1 à 1,5 mole du composé carbonylique, tandis qu'on obtient un dérivé dans lequel R 3 et R 4 représentent le même groupe, lorsqu'on en utilise 10 moles Lorsqu'on désire un dé- rivé dans lequel R 1, R 3 et R 4 représentent le même groupe (par

exemple le composé n 40), on emploie 15 moles du composé car-

bonylique Si le-composé de formule (III) est difficilement

soluble dans le méthanol, comme c'est le cas du m,p-dibenzylo-

xybenzaldéhyde par exemple, on peut réduire sa quantité en prolongeant la durée de réaction On effectue la condensation

dans un solvant tel que le méthanol, l'eau, le diméthylforma-

mide, l'acétonitrile ou un de leurs mélanges Bien qu'elle dé-

pende du type du produit désiré, la température de réaction

est généralement de -5 à 70 C, de préférence de O à 50 C.

Elle est de O à 25 C lorsque le symbole R 4 du dérivé désiré représente un atome d'hydrogène, tandis qu'on préfère une

température plus élevée, telle que 35 à 50 C, lorsqu'on uti-

lise une cétone ou un aldéhyde dans lesquels R 3 et R 4 sont

semblables et ont un empêchement stérique important, ou un al-

déhyde de faible solubilité La durée de réaction est de 3 à heures Une durée de réaction plus longue est avantageuse pour la condensation lorsqu'on utilise un aldéhyde ayant un

empéchement stérique important ou une faible solubilité.

On effectue l'isolement du présent dérivé obtenu comme

décrit ci-dessus de la façon suivante.

Lorsqu'on utilise un composé de type borohydrure comme agent réducteur, on ajuste le p H du mélange réactionnel à 1 avec de l'acide chlorhydrique, on agite pendant 5 à 10 minutes

A la température ordinaire pour décomposer l'excès d'agent ré-

ducteur, puis on neutralise, on chasse le méthanol par distil-

lation sous pression réduite et on extrait par l'éther ou le

butanol pour éliminer l'excès d'aldéhyde ou de cétone On des-

sale la couche aqueuse par passage à travers une colonne gar-

nie d'une résine adsorbante telle que par exemple lt Amberlite Q f"w"u du chlorhydrate dépourvu de cuivre Si on utilise de l'1 acide sulfurique aqueux au lieu de l'acide chlorhydrique aqus=, on obtient un sulfate On peut donc obtenir le sel

désiré en choisissant l'acide utilisé dans le stade d'élutiori.

Par hydrolyse avec de l'acide chlorhydrique aqueux 6 N

à 105 &C pendant 20 heures, le dérivé d'aminopropylaiuinobléo-

mycine préparé comme décrit ci-dessus fournît des produits de

décomposition comuns aux blé omycine s,, y compris la 1 L-thréoeuî-

ne, 1 ' acide p- auino-3 ( 4-amino-6-carboxy-5-méthylpyriaidine-2-"

yi) propionique, Il tcide 4-amnino-3-hydroxy-2-méthyl-fl-penta-

norgue, la 13-bydroxy-L-histidine, la J 3-amaino-L-alanine et l'acide 2 ' -( 2-am inoéthyl) -2,4 ' -bithiazole-4-carboxyliques en plus de composés de type amine * D'autre part, par méthanolyse

avec de l"Auberlist 15, le dérivé d' aminopropylaminobléomy-

cine fournit, comme c'est le cas de la bléomycine, le 1-gulose

et le méthy 1 lgicoside du 3-0-carbamoyl-D-mannose, que lton dé-

tecte par chromatographie gazeuse Les faits ci-dessus sont en faveur de l'attribution de la structure chimiue Illustrée

par la formule générale (I) précitée aux dérivés d'lamînopro-

pylaminobléomycine préparés selon le procédé de l'invention.

Comme composés de formule (II) constituant des matiè-

res de départ pour la synthèse des présents dérivés de bléo-

imycine, on peut mentionner ( 1) la 3-IN-( 3-aminopropyl)amin Q 7

propylaminoblêamycine (AFP), ( 2) la 3-/X-( 3-aminopropyl)-N-

iméthylaminolpropylaminobléomycine (APMP), ( 3 > la 3-/N-( 3-anino-

prapyl) -N, N-diaéthylaminclpropyl aminobléomycine < 1141 H),

( 4) la 3-/k ( 3-aminopropyl)-Ne N-diéthylaminoj 7 propylaminobléo-

mycine (HEMI), ( 5) la 3-/bl-( 3-aminopropyl) -N,N-dibutylamin Ql propylainoblécwaycine (BBHH), ( 6) la 3 i N 43 ' '-31 qc 1

-N', W-diméthylamino) propyll-N, N-diméthylamino) propylamino-

bléowrcine (PP 4 M), ( 7) la 3-lC 4 ( 3-aminopropyl)pipérazine-IL-

yúilpoopyla 3 uinobléomycine (PY),-et ( 8) la 3-ZN-< 3-amin-opropyl)'-

N .méthyl-N-benzylamino/propylarninobléomycine (MBZHH (les lettres entre parenthèses sont des abréviations> Pour synthétiser ces composés ( 1) on condense l'acide blécmycinique avec un composé représenté par la formule générale (IV)

2 (CH 2)3-A-(CH 2)3-NH 2 (IV)

dans laquelle A est comme précédemment défini, d'une façon semblable à celle d'un procédé connu lpar exemple un procédé décrit dans la demande de brevet JA publiée 63 089/79; le

brevet US 4 195 0187 ou ( 2) on cultive en présence d'une ami-

ne de formule (IV) une souche productrice de bléomycine de Streptomyces verticillus, telle que par exemple Streptomyces

verticillus NK-68-144 (ATCC 31307) comme décrit dans le bre-

vet US Re 30 451 Des exemples des composés représentés par la formule (IV) comprennent ( 1) la bis( 3-aminopropyl)amine,

( 2) la bis( 3-aminopropyl)méthylamine, ( 3) un sel de bis( 3-

aminopropyl)diméthylammonium, ( 4) un sel de bis( 3-aminopropyl)

diéthylammonium, ( 5) un sel de bis( 3-aminopropyl)dibutylammo-

nium, ( 6) le 1,3-Zbis( 3-aminopropyl)diméthylaminq/propane, ( 7) la 1,4/bis( 3-aminopropyl)l 7 pipérazine et ( 8) un sel de

bis( 3-aminopropyl)(méthyl)benzylammonium.

Parmi les composés de formule (IV), ceux représentés par les formules générales (I Va) ou (I Vb) sont de nouveaux composés synthétisés pour la première fois selon l'invention R 2 (I Va)

NH 2 (CH 2) 3 (CH 2) 3-NH 2

R

2

il (I Vb) NH 2(CH 2)3 -N-R-N-(CH 2)3-NH 2 (I Vb)

R 2 R 2

dans lesquelles Rio R 2 et R sont comme défini ci-dessous On prépare par exemple ces composés selon les modes opératoires

suivants.

2519638 i XAD-2 (Rohm and Haas Co)' dans l'eau distillée pour adsorber le produit désiré sur la résine Après lavage de la colonne

avec de l'eau distillée pour éliminer le sel, on élue la pha-

se adsorbée avec du méthanol aqueux acide tel que par exemple un mélange 1/4 (v/v)d'acide chlorhydrique aqueux 1/50 N et de méthanol pour recueillir les fractions d'éluat contenant un dérivé bleu de bléomycine S'il est nécessaire, on neutralise la fraction combinée avec du Dowex @ 44 (résine échangeuse d'anions de type OH de Dow Chemical Co) puis on concentre sous pression réduite et on lyophilise pour obtenir une poudre brute bleue du dérivé désiré Pour améliorer la pureté, on

traite la poudre brute de la façon suivante.

On fait passer une solution de' la poudre brute dans l'eau distillée à travers une colonne garnie de CM-Sephadex

C-25 (type Na; Pharmacia Fine Chemicals Co) que l'on a équi-

librée avec une solution tampon d'acide acétique-acétate de sodium 1/20 M a p H 4,5 pour effectuer l'adsorption du produit désiré sur la résine On élue ensuite la phase adsorbée selon

une technique à gradient linéaire de concentration qu'on réa-

lise par addition continue de chlorure de sodium à la solution

tampon ci-dessus pour accroître progressivement la concentra-

tion en chlorure de sodium à 1,0 M Si des fractions d'éluat contenant le produit désiré se révèlent être encore souillées par des impuretés, on fait suivre la chromatographie précitée d'une autre chromatographie utilisant une résine adsorbante telle que par exemple l I Amberlite 2 XAD-2, qu'on réalise par

passage d'une solution de la substance brute dans l'eau dis-

tillée à travers une colonne garnie de la résine dans une so-

lution tampon telle que par exemple une solution aqueuse à 4 % d'acétate d'ammonium, pour adsorber le produit désiré sur la résine et on élue la phase adsorbée selon une technique à gradient linéaire de concentration qu'on réalise par addition en continu de méthanol à la solution tampon pour accrottre progressivement la concentration de méthanol Dans ce cas, l'élution est telle que les matières de départ n'ayant pas 2519638 i

réagi sont éluées en premier et suivies d'un dérivé dans le-

quel R 4 est l'hydrogène et finalement d'un dérivé dans lequel

R 3 et R 4 représentent le même groupe Il est possible de sé-

parer les fractions en utilisant un dispositif de surveillan-

ce à ultraviolets Si la fraction désirée contient encore des impuretés, on doit répéter la chromatographie ci-dessus pour

obtenir leur élimination complète.

On débarrasse du méthanol les fractions combinées con-

tenant le produit désiré par distillation sous pression ré-

duite, on les dessale en utilisant de l'Amberlite DXAD-2 et on les lyophilise pour obtenir une poudre amorphe bleue d'un dérivé d'aminopropylaminobléomycine contenant du cuivre On

obtient la forme dépourvue de cuivre par élimination du cui-

vre de la forme contenant du cuivre selon un procédé connu tel que le procédé utilisant de l'EDTA (brevet publié JA 31

875/77; brevet US 3 929 993) Un exemple de mode d'élimina-

tion du cuivre est décrit ci-dessous.

On dissout le produit contenant du cuivre dans de

l'eau distillée et on fait passer la solution obtenue à tra-

vers une colonne garnie d'Amberlite( XAD-2 dans l'eau dis-

tillée pour adsorber le produit désiré On lave ensuite la

colonne de résine avec une solution aqueuse contenant du chlo-

rure de sodium et 5 % du sel disodique de l'acide éthylène-

diaminetétraacétique (en abrégé EDTA 2 Na) pour entra Pner l'ion

cuivre par l EDTA 2 Na, en laissant l'aminopropylaminobléony-

cine dépourvue de cuivre adsorbée sur la résine On lave la résine avec une solution de chlorure de sodium pour éliminer l'EDTA 2 Na puis avec de l'eau distillée et finalement on élue avec du méthanol aqueux acide tel que par exemple un mélange 1/4 (v/v) d'acide chlorhydrique aqueux 1/50 N et de méthanol

pour recueillir les fractions qui présentent un maximum d'ab-

sorption à 290 nm On ajuste le p H des fractions combinéez à

6,0 avec du Dowex e 44 (type CH; Dow Chemical Co), on con-

centre sous pression réduite et on lyophilise pour obtenir une poudre blanche amorphe d'une aminopropylaminobléomycine sous On prépare un composé de formule (I Va) dans laquelle R 1

et R 2 représentent le même groupe, par réaction d'une 3-amino-

propyl-N,N-dialkylamine représentée par la formule générale: R

NH-2 (CH 2)3-N-R 2 (V)

(dans laquelle R 1 et R 2 représentent le même groupe et sont comme défini ci-dessus) avec 1,5 équivalent de chlorure de benzoyle, addition d'un alcali au mélange réactionnel pour l'alcaliniser, extraction du mélange avec un solvant organique

pour obtenir une 3-benzamidopropyl-N,N-dialkylamine représen-

tée par la formule générale: R 1

C 6 H 5-CO-NH-(CH 2)3-N 1 R 2 (VI)

(dans laquelle R 1 et R 2 représentent le même groupe et sont conme défini ci-dessus) puis réaction de cette amine avec le N-( 3-bromopropyl) phtalimide pour transformer l'amine en un sel d'amonium quaternaire de formule générale: R 1 IC 6 H 5-CONH-(c H 2)3-N(CH 2)3-N Pht 7 Br (VII)

R 2

R 2 (dans laquelle Pht représente le groupe phtalyle; et R 1 et R 2 représentent le même groupe et sont comme défini ci-dessus), hydrolyse du sel quaternaire par chauffage avec de l'acide chlorhydrique 6 N à 110 C pendant 8 heures, élimination de

l'acide phtalique et de l'acide benzoúque formés comme sous-

produits, concentration de l'hydrolysat mélangé pour éliminer

autant que possible l'acide chlorhydrique, dissolution du ré-

sidu dans l'eau distillée, passage de la solution à travers

une colonne d'une résine échangeuse d'anions (type Cl) et con-

centration de l'effluent pour obtenir le chlorhydrate du com-

posé de formule <I Va) dans laquelle Ri et R 2 représentent le

même groupe Comme exemples de comiposés préparés Seloni le mo-

de opératoire ci-dessus, on peut mentionner un sel de bis( 3-

aminopropyl)diméthylammonium, un -sel de bis( 3-amintmpropyl)dié'-

thylammonium et un sel de bis( 3-amir 4 opropyl)dibuty I-ammonium-

On prépare un autre composé dé formule (I Va) dans la-

quelle Ri et R sont des groupes diffégrents, par exemple par

réaction de la N-méthylbenzylamine avec-2 équivalents de 3-

bromopropylphtalimide en présence d'une base et hydrolyse du sel dfmmonium quaternaire obtenu comme décrit ci-dessus Un exemple de composé préparé selon ce procédé est un sel de bis

( 3-aminopropyl) (méthyl) benzylammonium.

Pour préparer un composé de formule (IV), on fait par

exemple réagir le 1,3-bis(diméthylamîno)propane avec le 3-bro-

mopropylphtalimide pour f&rmer le 1,3-,/bis< 3-phtalimidopropyl)

diméthylamiunawpropane, on hydrolyse le composé obtenu comme dé-

crit ci-dessus, on élimine l'acide phtalique formé comme sous-

produit de l'hydrolysat mélangé, on soumet le mélange à un change d'ions et on concentre Un exemple de composé préparé selon ce mode opératoire est le tétrachlorhydrate de 1,,3-/bis

( 3-aiuinopropyl)diméthylamâinof 7 propane-

Les composés de formule générale ( 111 j) utiliséecomme

autre matière de départ comprennent le p-chiorophényla Gzétal-

déhyde, le phénylacétaldéhyde, le benzalcb T Mwde, le'p-chlo-

robenzaldéhydep le m-chlorobenlzaldéhyde,, Ito-chlorcibenzal-

déhydes, le mp-iichlorobenzaldéhyde, i Lvo,p-dichlornbenzal-

déhyde, le p-úluorobenizaldéhyde, le p>, 4 tromobenzalçl&hyde, le

pentafluorobenzaldéhyde, le p-méthoxyb Dîmzaldékhyde,, Ilo,p- diméthoxybenzaldéhyde, le p-chloroph 4 nmylméthyl'kétene, le

m, p-dibenzyloxybenlzaldéhyde, le 3-phfioylpropanol, le diphé-

nylacétaldéhyde, le p-cyanobenzaldébsyde, le m-trifluoroué-

thylbenzaldéhyde, la 1,3-diphénylacêtone, 1 ' acétophénone, le furfural, le thiophène-2-carbaldéhyde, la cyclohexanone, le 2cyclohexylacêtaldéhyde, la 5-norbornène-2-acéta Jldéhyde,

1 ' naphtylaldéhyde, l' anthraceêne-9-aldêhyde, le Cyclo-

octanecarbaldéhyde, le 2 thi ophènecarbalaiéhycle, le cyclo-

pentanecarbaldéhyde,, le cyclohexanecarbaldébyde, le cycloo-

heprtanecarbaldéhyde, le cyclo-octanecarbaldéhyde, le cyclo-

undêcmecarbaldéhyde, le *m,p-dibenzyloxybenzalidéhyde, le

cyclotridécanecarbaldéhyde, le 3, 4-di(p-chlorobenzyloxy)ben-

zad&yde, le-3,4 -di(m,p-dichlorobenzyloxy)benzaldéhyde,

le 3 4-dl (p-uéthaoxybenzyl oxy) benzaldéhyde, le 4 (p-benzyloxy-

benzyloxcy) benaldéhyde, le p-cyclo-oc tylméthoxybenzaldéhyde, et le 3,4, 5-triben'zyloxybenzaldéhyde Parmi ces composés de uveulx Composes sont le 3,4 dli(p-chlorobenzyloxy)benzal dé & hyde, le 3,4-di( 3 ',4 ' dichlorobenzyloxy)benzaldéhyde, le

3, 4-di( p-méthomybenzyloocy>benzalcdkhyde, le 4 ( 4 ' -benzyloxy-

benzyloxy) benza 3 ldéhyde, et le 4-cyclo-octyluéthoxybenzaldéhyde.

On les parépare de la façon suivante:

R 7 X +HO-2-CHO -R 7-O CHO

<HO)n ( 7) au Rr i X)(I) X

ou Rrepr*mm te un groupe p-ua&thoxybenzyle, 3, 4-dichloro-

Izy 1 e, chlorabenzyle, p-benzyloxybenzyle ou cyclooctyl-

méthyle, X représente un halogène et N est O ou 1 On fait réaglir -m c> oms&-é de formule (VIII) et un composé de formule <IX)d un solvant tel que l'acétone, à une température

comprisse entre la températdre ordinaire et le point d' ébulli-

tion du solvant Après achèvement de la réaction, on chasse

le solvant du mélange réactionnel par distillation et on -

lange avec de l'eau et un solvant organique pour transférer l'aldéhyde dans la phase organique Si nécessaire, on purifie

le produit brut obtenu à partir de la phase organique par re-

cristal>lisation ou par chromatographie sur une colonne de gel

de silce ou de résine adsorbante pour obtenir un produit pur.

Le cyclotridécanecarbaldéhyde précédemment mentionné est également un nouveau composé que l'on prépare de la façon suivante: on ajoute du tétrachlorure de titane à un mélange

de poudre de zinc, de tétrahydrofuranne anhydre et de dibro-

mométhane On ajoute au mélange obtenu de la tricyclodécanone

pour obtenir le méthylènecyclotridécane que l'on époxyde en-

suite avec l'acide m-chloroperbenzoique Après purification,

on fait réagir le produit époxydé avec l'éthérat de trifluo-

rure de bore dans le dichlorométhane anhydre pour obtenir la

cyclotridécanecarbaldéhyde.

Les propriétés physico-chimiques de dérivés d'amino-

propylaminobléomycine caractéristiques de l'invention figurent

dans le tableau 2.

(oll=au-ruu-lO,-l ap urd); H urg 1 n D np n D np queu (UID 1 /% 1 S) ulu 4 ut Dua-4 uc) gsoc Lwoo np -aquoo q Soduloc Jaa A Tn D ap n Aanodgp ou Z.4 & a SQ 101 qctoaq Dals np qsoduioo np aqqalo T Apai Tn uo Tlu T Agaqv qsoduio D uo Tidaoscrep uinm Txv N OTIT 6 L "O (T 6) T 6 Z z adciw T T go IT LL'o ( 98) T 6 Z (d) ZElHaw OT úOIT ze'o ( 68 T 6 Z (d) Ziga W 6 6610 SL JO ( 68 T 6 Z o) mimaw 8 zolli ZL 4 O ( 68 T 6 Z (d lui)z El IDClw L , 11 18, O (T 6 T 6 Z ( 0)zari DN 9

1 8 CO (T 6 T 6 Z (UI) ZEIIIDN 91

6 Od T LL If O (T 6 T 6 Z (d) zamw P ,11 ( 90 T)T 6 Z ZElw E

8011 TBJO (POT) 16 Z

,11 SLJO (L 8) -l 6 z 1 Z nua Tqul %c cx d 1 Es " O (POT) -16 Z scivw -10 '11 Eq'o ( 88) -16 E awzgaw zo 1 i: ZOO ( 98,)-l 6 z ZE

(TL ) PSE

(EL d 6 Z

58 ', O 89,0 (PE ESú TZ

86 'O SLIO (LIT) M Hd VNW oz 66 "O VL'O (L 8) -16 Z zajiw 61 Ln go 1 T Eq 1 O ( 96) T 6 Z ZEINDW 81 LO "I ZLO' ( 68) 16 Z sciclw LI g OIT 6 L'O (ZOI) T 6 Z cidw 91 06 '0 SSIO (sq) ssz ACI lui) Zgoz GGN SI PO,T 9 L'O ( 88) 16 Z (CI) scivri Dw Pl WO E 810 (ool) E 8 Z (d O) Zgowaw ET LO'l E 810 (POT) 'l 6 Z (d) z Eloww ZT ( 9-4 Tns) E me elqvj, m 1 % O O q- Ln (%i %D C 4

L 6 L O

66 1 O

col T

86 1 O

66 'O

GL & O

P O LT

66 1 O

TO,, 1

pot 1 vi 1 T

ET Il.

oo II zoli go 'T sslo SPIO 091 o IL 40

L 9 & O

zi & O 8 LIO

PS & O

PLIO

ZL & O

SL & O

Te & 0, sglo

113 '0

t 8 lo (E 8 (Le ( 06 ( 06 (Le ( 98 ( 96 (Le ( 06 ( 06 M (T 6 (es (T 6 ( 86

) 16 Z

) 16 Z

) 16 Z

) 16 Z -

) 16 E

) sez

) T 6 Z

) T 6 Z

) T 6 Z

) 16 Z

) 16 Z

) T 6 Z

) T 6 e

) 16 Z

) 16 Z

ZEIJJN

zacigia ZElGlq 2 r ODWW

ZúICIWW

ZROZELCIGW

GNW n Dw da HDW ZHDW NHDW CIDW ZEIGW Oi Hiw utijw 6 E: 8 E L E 9 E 9 E p E E E z ú 1 ú 0 E 6 Z 8 z L E 9 E 9 z nv a Tqvj, (a 4 Tns) Z en lo tn 61 4 O 10 4 O ( 19) t 6 z zgozeiciw ES Tg 4 O zolo (L 8) L 8 z ZEIODCIN zs 171 4 O 80 'o (P 8 zez ZúIOZEIOZEICI Pl Tg L 8 'O si &O (ú 6 08 Z owciaw os zoto TO 1 o (ZB t 8 z IIZ)GCIClW 6 t, L T 1 O TIO&O (TOT) 98 Z IIDCICIW 8 p

901 T ú 00 ( 66) Z 6 Z IDW C

ZL'O (Z 8) 16 Z 51 dri Dsa 9 V 86 & O nlo ( 66 T 6 Z OD Ad st, TOLI 08 O ( 66 16 Z ZEMM t, t, 96 io L 9 O (ú 6 16 E ZSCIACI ú z -1, -1 ZGL O (L 8 - l 6 Z OZ)dd zv 69 & O (P 8 16 Z Z 19 (icid T TF 96 '0 os& O (L 8 T 6 Z ZELLV O t, (a,4,rns) Z ne a T Cilel TABLE AU 2 (suite) Nota * 1 Silica gel 6 CF 254 sîlanised(R> (Merck Co);mélanige /40 (v/y) de méthanol et de solution à 6 % d'acétate d'ammonium * 2 Avicel SF(R> (FMC Co); mélange 27/75/900 (v/v) d'acide formique,

d'acide acétique et dfeau, à 00 V, 15 minutes.

Co Co Les propriétés biologiques d'exemples typiques des

composés de l'invention sont décrites ci-dessous.

( 1) Activité antimicrobienne contre Mycobacterium smegmatis ATCC 697 et Bacillus subtilis L'activité contre les micro-organismes d'essai ci-dessus a été déterminée selon la méthode des cylindres sur plaque

d'agar attribuant A la bléomycine A 2 (forme dépourvue de cui-

vre) utilisée comme standard une activité de 1 000 ug/mg.

( 2) Activité d'inhibition de la croissance des cellules He La 53 On ensemence avec des cellules He La S un milieu (MM contenant 10 % de sérum de veau) placé dans une botte de Pétri en plastique Deux jours après l'ensemencement, on ajoute la bléomycine & étudier au milieu et on poursuit l'incubation

* pendant encore 3 jours puis on compte le nombre des cellules.

On calcule le pourcentage d'inhibition de la croissance en utilisant l'équation Pourcentage d'inhibition de la croissance (en %) = 100 x (B-A) / (B-C) dans laquelle A est le nombre final des cellules au troisième

jour après l'addition d'un échantillon étudié, B est le nom-

bre final de cellules dans le témoin (sans l'addition de l'é-

chantillon A étudier) et C est le nombre de cellules le jour de l'addition de l'échantillon étudié On détermine la DI 50 (concentration produisant une inhibition de 50 %) à partir de la courbe de la concentration de l'échantillon en fonction

du pourcentage d'inhibition.

Les résultats des essais obtenus en ( 1) et ( 2) figu-

rent dans le tableau 3.

lui/bti eanl In D ue vqe H BOT ëTT Tiqns Log DDI-î iîiiisîix UOT:kl T Agaclv ON -nlleo sep aouves Toao ifitiîBîg G-1,4 U 00 18-14 U 00

19 1

el % 09 v qu à-r n D op n Aanod 9 p 9 RUU 100 builbri ino op r L Aanod 9 p #Ioaluo D np U 014 titUa DUOD qsodwoo np auue Tqozo Tm T,4 uv en 0 % %Il tn çi Ti L 9 ' v E E 09 t 1 Ls i O

SL A O

i 1 z 8 à O 01 i -l

08 & O

Ls 10 oz à O oglo Pç 40 096 L fflsi

9 TT 8

ETOCT,

-90 T

8 P 59

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p 8 C 9 ZBZL

0089 T

z 9 jd N (CI) zigu EIN (CI) z gaw #O Zqu Daw oui) ziali Daw (,O) zoemw (Ut) z El IDN (d) zg IDW ZGW 2 lCIW acil DN

0 609 T

St Te Op 6 z úffl úest 06 PS ziTL OEU, 099 L

99 ZET

(d (a k 6 ú' O 97901 96 GG O I Htlw 9 E Oú O 8 t,96 06 Ltp unaw sz 00 1 680 VI T 06 L sldv N t, z 9 t, 1 ú 69 Z OZ 6 f 7 l SIW Zgaw E z 0 OUT 098 zz zz 08 O vost, OSZET Tz 8 L O SBLP 1899 Hc IVNW oz st O ú 909 t,098 (lu) zaîi N 61 Le E:P E:91 E Z EINDN 81 00 1 PSSE t,80 TZ adaw LI 9 t, O 6 ZOT ESP 8 91 9 E O ZLLI 9 TSP (d tu) zgozúlali si zsi O 691,9 69691 (d) aclvq Dw PT 0 ú,T ZTúç TSES (d O) z Gowaw ET SL'O L 099 16 t S (d) ZGOWN zi (a 4 Tns) E nva-lqiej, Tableau 3 (suite)

27 MDBZ 14194 1138 0,89

28 MCP 13595 16180 1,00

29 MCHM 15414 12148 0,63

MCHE 35030 14440 0 T 56

31 MCHEP 25924 20143 O r 48

32 MCU 28308 8146 0,58

33 MNB 16219 13332 0,68

34 MDDBZOBZ 164 49 0,38

MMDBZ 13784 1742 0 t 87

36 MMCO 21840 20000 0129

37 EEDBZ 10680 1047 0170

38 BBDBZ 17910 530 2,00

39 MTBZ 7746 580 2,30

ATBZ 4450 479 1190

41 PPDBZ 16000 7100 0,66

42 PPCO 26000 14600 0,51

o 0 %i ow I v-Cr% LA Z 9 L O 9 z il zgozaiaw Es ú 11 O 6 P 89 Z zigo Dclw zs zlio 9 t, zgozúlozgaw Tg 06 L O SE sel ONCIGI 4 os ri L IIDCIGGW 6 V

ú 90 O 8 EZ

890 O 8 PT

81 O 09 LT 916 ú L V

zs O OTECT 08 PLI 9 t, is O 00191 OOOEI? TE'O 0809 OSEIT p t, os L O OEUT OMT zacixa Et, (;a-4 Tns) E n-e;aiqvj, Il ressort du tableau 3 que les composés de l'invention ont une activité inhibitrice puissante contre les cellules

He La cultivées ainsi qu'une activité antimicrobienne puissante.

( 3) Toxicité pulmonaire (fibrose pulmonaire) chez la souris. On utilise des souris de souche ICR (mâles); âgées de

semaines; 9 souris par groupe) A chaque souris on admi-

nistre une dose journalière de 5 mg/kg du composé â étudier par injection intrapéritonéale une fois par jour pendant 10

jours consécutifs Après achèvement de l'administration pré-

déterminée, on maintient les souris pendant 5 semaines sous observation puis on les tue et on les autopsie pour examiner

la fréquence et l'importance de la fibrose pulmonaire On ef-

fectue l'évaluation par comparaison du nombre de souris ayant

reçu l'administration souffrant de fibrose pulmonaire et 1 'im-

portance de la maladie Les résultats des examens figurent

dans le tableau 4.

Dans le tableau 4, l'importance de la maladie est éva-

luée comme suit: O Point: pas de fibrose 1 Point: accumulation d'exsudat dans les alvéoles pulmonaires et modification fibreuse des parois alvéolaires 2 Points: fibrose dans plusieurs régions 4 Points: fibrose disséminée 6 Points: -fibrose dans plus des deux tiers de la

surface -totale.

On calcule le "rapport" par comparaison avec le "com-

plexe bléomycinet' Comme le montre le tableau 4, certains des présents composés ne produisent aucune fibrose pulmonaire et même dans

les cas o on observe une fibrose, le degré de toxicité pulmo-

naire est nettement réduit, la fréquence étant inférieure a

la moitié environ et l'importance inférieure au septième en-

virxme des valeurs correspondant à 1 t APMP-BLM Comme à ce jour il était très difficile de supprimer les effets secondaires des bléomycines, en particulier la fibrose pulmonaire, il est surprenant que l'invention fournisse un composé ne présentant pas d'effet secondaire conduisant à une fibrose pulmonaire chez un animal de laboratoire.

Tableau 4

Fréquence Importante Nombre de souris Note total de fibrose Composé atteintes de fibrose pulmonaire/nombre total No pulmonaire Rapport d'animaux d'essai Rapport

(%) (%)

, , _

1 2/9 ( 22) 0,35 3/27 ( 11) 0,13

2 3/9 ( 33) 0,53 7/27 ( 26) 0,31

3 2/8 ( 25) 0,40 2/24 ( 8) 0,10

4 1/7 ( 14) 0722 1/21 ( 5) 0,19

4/9 ( 44) 0770 7/27 ( 26) 0,31

6 5/9 ( 56) 0,90 6/27 ( 22) 0,26

7 1/9 ( 11) 0118 1/27 ( 4) 0,05

8 1/9 ( 11) 0,18 2/27 ( 7) 0,08

9 2/9 ( 22) 0135 3/27 ( 11) 0,13

2/9 ( 22) 0,35 4/27 ( 15) 0,18

11 2/9 ( 22) 0,35 2/27 ( 7) O ? 08

n o Us W oe oui O (O LEIO 0090 (O 6/0 oolo (O LZ/0 oolo (O 6/0 SE 00 'o (O LZIO 0090 (O 6/0 SE 00 O (o LZ/0 00 O (O 6/0 PE

00 ( O (O LZ/0 00 O (O 6/0 ZE

aoto (L 91/1 zclo (oz S/T LZ 00 LO (O LZIO ooto (O 6/0 zz & O (v LZIT 8 T&O ( 1-1 6/1 oz Soto LZ/T 8 TIO Cui 6/T 61 004 O (O LZ/0 oolo (O 6/0 81

O (L ST/I ZE 10 (OZ) S/T LT

soi O 4 LZIT 8 T&O (TT) 6/T si ET& O (TT) 4 z/ú SEL O (zz) 6/7, VT

ET'O) BT/Z ú 940 (CE) 9/Z ET

LT 4 O 41) TZ/ú 9 t, à O ( 6 Z) LIZ ZT (aq Tns) p n-ea Tqiel Co m Ito O,. qrl tn (y si L 9 oolo 00 i O oo',o 00 O

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00 & O

00 L O

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00 40 oolo oolo ( 8 L,l), ( O ( O ( O ( O ( O (O ( O ( O ( O ( O ( O (O') ( O 9 il

00 & O

ooto OOL O oot O 00 LO ooto

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oolo

00 L O

oolo oolo Lt/8 P LZ/0 LZIO LZIO LEIO 4 z/o LZIO LZ/o LZ/0 LZ/0 LZIO LEIO LZ/0 LZIO

( 001)

( O ( O) ( O ( O ( O ( O ( O ( O ( O ( O ( O ( O (O 6/6 6/0 6/0 6/0 6/0 6/0 6/ O 6/0 6/0 6/0 6/0 6/0 6/0 6/0 ciwcilv Es Es Tg os 6 P 8 P L p 91, 9 v p v ú p z p 1 P Co cq (aq Tns) p nuelqvj,

( 4) Toxicité aiguë.

On a déterminé la DL 50 par administration de plusieurs

composés caractéristiques de l'invention pendant 10 jours con-

sécutifs. 1 Méthode expérimentale. On administre par voie sous-cutanée à des souris mâles de souche CDF 1/SLC (âgées de 6 semaines, 7 animaux par groupe) divers composés de l'invention, la dose différant selon chaque composé On évalue la DL 50 (dose journalière) à partir de la

mortalité au cours de la période d'administration selon la mé-

thode de Behrens-K Hrber.

2 Résultats expérimentaux.

Les résultats figurent dans le tableau 5.

TABLEAU 5

o 1 r

Comme il ressort de leurs propriétés biologiques pré-

cédemment décrites, les composés de l'invention ont une acti-

vité antitumorale et leurs effets secondaires, tels que la to-

xicité pulmonaire, sont fortement réduits On peut donc pré-

voir que les présents composés soient utiles comme médicaments 3 o D carcinostatiques ayant des effets secondaires réduits Lors

dg l'emploi comme médicament carcinostatique, on peut adminis-

trer le composé sous diverses formes d'administration telles que par exemple des préparations solides, des pommades et des

solutions mais généralement sous forme d'injections On effec-

tue l'administration une à cinq fois par semaine et la dose Composés DL 50 N Abréviation (mg/kg J)

32 MCU 17,5

34 MDDBZOBZ 60,0

37 EEDBZ 50,0

43 PYDBZ 12,5

Complexe bléomycine 20

est c 5 à 200 mg par semaine.

L'invention est illustrée de façon détaillée par les

exemples non limitatifs suivants.

Exem Dle 1 Stade A:

A une solution de 1,0 g de trichlorhydrate de 3-%N-

méthyl-N-( 3-aminopropyl)aminojpropylaminobléomycine (forme contenant du Cu) dans 30 ml de méthanol, on ajoute 227 mg de cycloundécanecarbaldéhyde puis 26 mg de cyanoborohydrure de sodium On laisse le mélange réagir à la température ordinaire pendant 16 heures On ajuste le p H du mélange réactionnel à

1,0 avec de l'acide chlorhydrique 6 N et on laisse reposer pen-

dant 10 minutes pour que la réaction s'achève On neutralise

ensuite le mélange réactionnel avec une solution 1 N d'hydro-

xyde de sodium et on chasse le-méthanol par distillation sous pression réduite On porte le résidu à 50 ml avec de l'eau distillée et on extrait avec de l'éther pour éliminer l'excès d'aldéhyde On fait passer la couche aqueuse à travers une colonne de 100 ml de volume garnie d'Amberlite XAD2 Rohm et Haas Co) dans un mélange 1/1 (v/v) d'tune solution aqueuse d'acétate d'ammonium à 4 % et d'une solution aqueuse d'acide acétique à 2 % pour adsorber le produit désiré On élue la

phase adsorbée selon une technique à gradient linéaire de con-

centration en utilisant 500 ml de ladite solution tampon à laquelle on ajoute en continu 500 ml de méthanol On recueille les fractions dont le volume total est de 200 ml que l'on a éluées avec des concentrations en méthanol d'environ 65 % et

qui présentent des maximums d'absorption à des longueurs d'on-

de d'environ 290 nm On fait passer la solution aqueuse obtenue à partir de ces fractions après élimination par distillation sous pression réduite du méthanol, à travers une colonne de ml de volume garnie d'Amberlite XAD-2 (Rohm et Haas Co) dans l'eau distillée pour adsorber le produit désiré On lave la colonne avec 150 ml d'eau distillée et on élue le produit désiré avec un mélange 1/4 (v/v) d'acide chlorhydrique aqueux 1/50 M et de méthanol On recueille les fractions bleues du dérivé de bléomycine, on neutralise avec du Dowex 44 (une résine échangeuse d'anions de type OH de Dow Chemical Co)

puis on concentre sous pression réduite et on lyophilise.

On dissout la poudre lyophilisée obtenue ci-dessus dans ml d'eau distillée et on fait passer à travers une colonne ayant un volume de 100 ml garnie de CM-Sephadex C-25 (type Na', Pharmacie Fine Chemicals Co) que l'on a équilibrée avec du tampon acide acétique-acétate de sodium 1/20 M à p H 4,5 pour effectuer l'adsorption sur la colonne On élue le produit désiré selon une technique à gradient linéaire de concentration que l'on réalise par addition continue de chlorure de sodium

à ladite solution tampon pour porter progressivement la concen-

tration du chlorure de sodium à 1,0 M On laisse au total 550 ml de l'éluant traverser la colonne et on recueille au total

ml de fractions bleues éluées à des concentrations en chlo-

rure de sodium d'environ 0,65 M On dessale les fractions re-

cueillies avec l'Amberlite XAD-2 que l'on a employée ci dessus et on lyophilise pour obtenir 872 mg (rendement 79 %) de 3-( N-méthyl-N-3 ' (cyclo-undécanylméthylamino)propyl aminot propylaminobléomycine contenant du cuivre sous forme d'une

poudre amorphe bleue.

Stade B:

On dissout le produit contenant du cuivre, 872 mg, ob-

tenu dans le stade A, dans 18 ml d'eau distillée Pour éliminer

le cuivre, on fait passer la solution obtenue à travers une co-

lonne ayant un volume de 100 ml garnie d'Amberlite XAD-2 dans

l'eau distillée pour effectuer l'adsorption et on lave la ré-

sine avec 300 ml d'une solution aqueuse contenant du chlorure de sodium et 5 % d'EDTA 2 Na puis successivement avec 100 ml d'une solution à 2 % de chlorure de sodium et 150 ml d'eau

distillée et finalement on élue la phase adsorbée avec un mé-

lange 1/4 (v/v) d'acide chlorhydrique aqueux 1/50 N et de mé-

thanol pour recueillir les fractions d'éluat qui présentent

des maxima d'absorption aux longueurs d'onde d'environ 290 nm.

On ajuste le p H des fractions recueillies à 6,0 avec du Dowex

44 (type OH, Dow Chemical Co), on concentre sous pression ré-

duite puis on lyophilise pour obtenir 758 mg (rendement 90 %)

d'une poudre amorphe blanche de 3 N-méthyl-N-/3 '-(cyclo-undé-

-canylméthylamino)propyl/amino/propylaminobléomycine (composé n 032) sous forme du trichlorhydrate dépourvu de cuivre Ce composé présente un maximum d'absorption UV a 291 nm et une E ( 1 %/lcm) de 87, mesurés dans l'eau distillée Les maxima

d'absorption IR (exprimés en nombre d'ondes cm)mesurés se-

lon la technique de la pastille de K Br sont: 3425, 2950,

1650, 1550, 1520, 1440, 1400, 1260, 1190, 1140, 1100, 1060,

1020, 980, 800 D'autres propriétés physico-chimiques figurent

dans le tableau 2.

Selon la réaction ci-dessus, on utilise comme composant de type aldéhyde 988 mg de m,p-dibenzyloxybenzaldéhyde et on effectue la réaction à 27 C pendant 70 heures On purifie le mélange réactionnel et on élimine le cuivre de la même façon que celle décrite ci-dessus pour obtenir 762 mg (rendement 57 %)

d'une poudre amorphe incolore de 3-t N-méthyl-N-f 3 't-(bis(mp-

dibenzyloxybenzyl) amino)propylaminotpropylaminobléomycine

(composé n 34) sous forme du trichlorhydrate dépourvu de cui-

vre Ce composé présente un maximum d'absorption UV à 285 nm

et une E(l%/lcm) de 86, mesurés dans l'eau distillée Les ma-

xima d'absorption infrarouge (en nombre d'ondes, cm-1) mesurés selon la méthode de la pastille de K Br sont: 3425, 2950, 1650,

1550, 1510, 1460, 1430, 1380, 1320, 1270, 1190, 1140, 1060,

1020, 960, 800, 730, 690, 650.

De façon semblable, on utilise comme aldéhyde 174 mg de

cyclo-octanecarboxaldéhyde et on laisse réagir & la températu-

re ordinaire pendant 24 heures puis on purifie et on élimine le cuivre pour obtenir 605 mg (rendement 58 %) d'une poudre amorphe incolore de 3 i N-méthyl-N-/3 '-(cyclo-octylméthylamino) propyliamino 3 propylaminobléomycine (composé n 22) sous forme du trichlorhydrate dépourvu de cuivre Ce composé présente un

maximum d'absorption UV à 291 nm et une E( 1 %/l cm) de 86, me-

sures dans l'eau distillée Les maxima d'absorption IR (en

nombre d'ondes, cm) mesurés selon la technique de la pastil-

le de K Br sont: 3425, P 925, 1650, 1550, 1520, 1440, 1400,

1330, 1260, 1190, 1140, 1100, 1060, 1020, 980, 800.

De façon semblable, on prépare les compos 6 S indiqu 6 s

dans le tîbleau 6.

Tableau 6

Composé NombreJ Durée deTempératuj d 4 iéComposédedpr (fmue I) d'écjuivalente réactionre de, Rendement du composé (h) réactionj No III _ _ __ _ ( O IC) i p-Chloro Dhénylacàtald'hyde 1,2 16 22 66

2 phénylac 4 taldehyde 1,2 16 22 71.

3 benzaldéhyde 1,2 16 22 85 4 benzaldethyde 112 48 O 45 4 pehlorobenzaldèhyde 1,2 16 22 66 m-chlorobenzaldéhyde 1,2 16 22 83 6 or*hlorobenzaldéhyde i 216 22 69 7 m,p-dichlorobenzaldéhyde 1,2 16 22 77 8 o,p-dichlorobenzaldéhyde 11 2 16 22 71 9 p-fluorobenzaldéhyde 1, 2 16 22 80 p-bromobenzaldéhyde 1,2 16 22 75 il Pentafluorobenzaldehyde 1,2 16 22 56 ut

Tableàu 6

12 p-méthoxybenzaldehyde 1,2 16 22 80 13 o, p-d imethdxybenzaldehyde 1,2 16 22 58 14 p-chloro-acétophénone 210 24 37 57 m,pdibenzyloxybenzaldéhyde 1,2 18 22 63 16 3-Phenylpropanal 112 16 22 74 17 diiphenylaceltaldéhyde 1,2 16 22 67 18 p-tiyanobenzaldhyde 1,2 16 22 83 19 m- trifluoromethylbenzaldéhyde 1,2 18 22 87 a-niaphty 11 aldéhyde 112 18 22 60 21 anthracene-9-aldehyde 112 18 22 61 22 c Yclo- cctanecarbaldéhyde 2,0 24 37 58 23 1,3-diphenylacetone 5,0 30 37 71 24 actoph A'one 5,0 30 22 59 furfural 112 16 * 22 71 26 2- thiophinecarbaldéhyde 1,2 16 22 5 rga %O ex Tableau 6 (suite) 27 bernzaldehyde 10 0 16 22 67 28 dyclopentanecarbaldethyde 1 2 16 22 61 29 c yclohexanecarbaldéhyde 1 2 16 22 60 2-cyclohexylacetaldehyde 1 2 16 22 54 31 cycloheptylcarbaldehyde, 1 2 16 22 74 32 cyc 1 o - undecanecarbaldéhyde 2 0 16 22 71 33 5-nïorbornène-2-carbaldghyde 1 2 16 22 52 34 m,p-dibenzyloxybenzaldéhyde 5 0 70 27 57 47 Qyclotrid 4 canecarba 1 dèhyde 2 O 16 22 66 48 3,4-di<p-chlorobenzyloxy) 4 0 96 27 54 benzaldèhyde 49 3,4-di(m,p-dichloraob nzyloxy) 4 0 120 40 44 benizalddhyde 3,4-di(p-méthoxybenzyloxy) 4 0 24 40 49 benzald 4 hyde 51 4 -(i-benzyloxybenzyloxy) 4 0 24 40 41 -ben za ldèhyde Ln, t" Co Tahleitu 6 (sxuite) Ln I Co P-cyclo-,acctylmethylo'xybenlzal du-hyde 4,0 48 40 33 3, 4,5-tribenzyloxybenizaldahyde 4,0 24 40 44 Exem le 2 Stade A:

A une solution de 1,0 g de trichlorure de 3- N,N-

diéthyl-N ( 3-aminopropyl)amin Q 7 propylaminobléomycine (forme contenant du cuivre) dans 30 ml de méthanol, on ajoute 642 mg de benzaldéhyde puis 51 mg de cyanoborohydrure de sodium On laisse le mélange réagir à la température ordinaire pendant 16 heures D'une façon semblable à celle de l'exemple 1, on traite le mélange réactionnel avec de l'acide chlorhydriques on extrait par l'éther, on soumet à une chromatographie sur une colonne d'Amberlite XAD-2 puis on dessale en utilisant

de l'Amberlite XAD-2 conmme décrit précédemment et on lyophi-

lise pour obtenir 832 mg (rendement 75 %) de 3 N,N-diéthyl-

N-_' (dibenzylamino)propy L;aminolpropylaminobléomycine sous

forme d'une poudre amorphe bleue.

Stade B; On dissout le produit contenant du cuivre pesant 832 mg obtenu dans le stade A, dans 17 ml d'eau distillée puis on élimine le cuivre comme dans le stade B de l'exemple 1, on concentre sous pression réduite et on lyophilise pour obtenir

739 ng (rendement 92 %) d'une poudre amorphe blanche dépour-

vue de cuivre de trichlorhydrate de 3-i N,N-diéthyl-N-1 f 3 '-(di-

benzylamino)propyl Jamino propylaminobléomycine (composé n 37).

Il présente un maximum d'absorption UV à 291 nm et une E( 1 %/

1 cm) de 90 mesurés dans l'eau distillée Les maxima d'absorp-

-1 tion IR (en nombre d'ondes cm), mesurés selon la technique de la pastille de K Br sont: 3425, 2975, 2925, 1640, 1550,

1520, 1490, 1450, 1400, 1320, 1260, 1190, 1140, 1100, 1060,

1020, 980, 910, 800, 740, 690.

D'une façon semblable à celle décrite ci-dessus, on

utilise 1,0 g de tétrachlorure de 3 N,N-diméthyl-N-Z 3 '-(N,N-

diméthyl-N ( 3 '-aminopropyl)amino)propy 17 amino propylaminobléo-

mycine (forme contenant du cuivre) comme matière première qu' on laisse réagir avec 607 mg de benzaldéhyde et on purifie le mélange réactionnel et on élimine le cuivre pour obtenir 587 mg (rendement 55 %) d'une poudre amorphe incolore dépourvue de

cuivre de tétrachlorure de 3 N,N-diméthyl-N- 3 '-(N,N-dimé-

thyl-N ( 3 "-dibenzylaminopropyl)amino)propy iamin 3 propylamino-

bléomycine (composé n 41) Elle présente un maximum d'absorp-

tion UV à 291 nm et une E( 1 %/ 1 cm) de 84, mesurés dans l'eau distillée Les maxima d'absorption IR (en nombre d'ondes cm-1) mesurés selon la méthode de la astille de K Br sont: 3425,

2950, 1650, 1560, 1490, 1460, 1400, 1330, 1260, 1190, 1160,

1100, 1060, 1020, 980, 800, 740, 600.

On effectue une réaction de la même façon que ci-des-

sus en utilisant 161 mg de cyclo-octanecarbaldéhyde au lieu du benzaldéhyde et de façon semblable on purifie le mélange

réactionnel et on élimine le cuivre pour obtenir 539 mg (ren-

dement 52 %) d'une poudre amorphe incolore dépourvue de cui-

vre de tétrachlorhydrate de 3, NN-diméthyl-N-/'3 t-(N,N-dimé-

thyl-N-( 3 "-cyclo-octylméthylaminopropyl)amino)propyljamino)

propylaminobléomycine (composé n 42) Elle présente un maxi-

mun d'absorption UV à 291 nm et une E( 1 %/ 1 cm) de 87, mesu-

rés dans l'eau distillée Les maxima d'absorption IR (en nom-

bre d'ondes, cm-1) mesurés selon la méthode de la pastille de K Br sont: 3425, 2950, 1720, 1660, 1550, 1520, 1490, 1450,

1400, 1360, 1260, 1190, 1140, 1100, 1060, 1020, 980, 880, 800.

De façon semblable, on utilise comme matière de départ 1,0 g de tétrachlorhydrate de 3-/4 '-( 3 "-aminopropyl)pipéridy J 7 propylaminobléomycine (forme contenant du cuivre) qu'on laisse réagir avec 623 mg de benzaldéhyde et on purifie le mélange

réactionnel et on élimine le cuivre pour obtenir 695 mg (ren-

dement 65 %) d'une-poudre amorphe incolore dépourvue de cuivre

de tétrachlorhydrate de 3-4 ',-( 3,,-dibenzylaminopropyl)pipéri-

dy Vpropylaminobléomycine (composé n 43) Elle présente un

maximum d'absorption UV à 291 nm et une E(l %/ 1 cm) de 93.

Les maxima d'absorption IR (en nombre d'ondes cm-1) mesurés selon la méthode de la pastille de K Br, sont: 3425, 2950,

1660, 1560, 1520, 1500, 1460, 1260, 1190, 1140, 1100,1060,

1030, 980, 880, 810, 740, 700.

De façon semblable, on prépare les composés indiqués dans

le tableau 7.

* Op Ameplvqavoeuvqooo To AD WPCICI o Dda z t? 99 91 0110 T ap Aqap Tiazueqwpdd ZElGdd IV G 9 O ?: O "S T ap Aiqap Tiezuoq dcilv ZEIJJV OP 89 91 o 9 ep Kqap Tezuaq HHZEN zgiw 6 E 99 91 O 0-l ep Kqaplezuecj HHEIEI ZSCIGE 1 8 ú 69 91 O " 01 ep Ktlgplvzueq HH 51 a z EICI 521 LE Ls PE VE ep Kqep Teqa-eogue-4000 TOA O HHWW ODNN 9 E 91 0110 T ep K"Plezueq HHWW ZEIGWN SE M (tr) qsodmoz np luatu Uo Tqole 9 a ep goodtu OD 9 Tn WZO-z e P, -apueu ap eganc Sq UOT'e A Tnb 9,P goodmoo np 92 T 99 P quodmo D Ln L nvelqvl 9 1 ap Aqeple Ig Dul Auàqdoaolq D-d HHSR z Ir ID 2 l 99 v EV tz Ad OD d 9 ap Aqe luzuaqojolqo-d Ad ZElIIZ)IKCI P 99 91 O " 01 ep Klqap 7 llezuoq Ad ZEIC 17 %d en 1.0 0 % v- Ln 1 i Ln ( 91 Tns) L nu Olqvl

2 519638

Exemole 3 Dans 300 ml d'eau distillée on met en suspension 50 g

de 3-aminopropyldiméthylamine et 62 g de bicarbonate de sodium.

On ajoute goutte à goutte à la suspension en refroidissant dans la glace et en agitant énergiquement, 105 g ( 1,5 équiva- lent) de chlorure de benzoyle Après 6 heures de réaction & la température ordinaire, on acidifie le mélange réactionnel à p H 4 avec de l'acide chlorhydrique concentré et on extrait avec de l'éther éthylique pour éliminer l'excès de chlorure de benzoyle On ajuste le p H de la couche aqueuse à 12 avec une solution aqueuse 5 N d'hydroxyde de sodium et on extrait

par le chloroforme On sèche l'extrait chloroformique sur sul-

fate de sodium et on chasse le solvant par distillation sous

pression réduite pour obtenir 91 g de 3-benzamidopropyldimé-

thylamine On ajoute au résidu une solution de 118 g (un équi-

valent) de N-3-bromopropylphtalimide dans 300 ml de tétrahy-

drofuranne Après 18 heures d'agitation à la température ordi-

naire, on recueille par filtration les cristaux incolores pré-

cipités, on lave avec du tétrahydrofuranne et on sèche pour obtenir 188 g (rendement 90 %) de cristaux incolores du sel

d'ammonium quaternaire On dissout ce sel dans 1 000 ml d'aci-

de chlorhydrique 6 N et on chauffe à 110 C pendant 8 heures poux effectuer l'hydrolyse Après refroidissement, on élimine

par filtration l'acide phtalique et l'acide benzofque préci-

pités et on évapore le filtrat à sec sous pression réduite pour éliminer l'excès d'acide chlorhydrique On dissout le résidu dans de l'eau distillée et on fait passer à travers une colonne d'une résine échangeuse d'ions Dowex -1 (type C 1,

volume 600 ml) On évapore l'effluent à sec sous pression ré-

duite pour obtenir 96 g (rendement 90 %) de trichlorhydrate de

bis( 3-aminopropyl)diméthylammonium Ce composé est trop hy-

groscopique pour qu'on puisse déterminer son point de fusion.

Le spectre de RMP mesuré dans l'eau lourde, présente les va-

leurs suivantes de: 2,1-2,8 ppm, 4 H(m), 2,4 ppm, 6 H (s), 3,1 -3,9 ppm, 8 H (m) (les lettres entre parenthèses indiquent

les types des signaux: m = multiplet; S = singulet) Ces va-

leurs concordent avec la structure attribuée Les maxima d'ab-

sorption IR (en nombre d'ondes, cm) mesurés selon la méthode de la pastille de K Br, sont: 3425, 2975, 2625, 2000, 1600,

1480, 1470, 1350, 1320, 1300, 1230, 1200, 1160, 1140, 1060,

1040, 1000, 930, 840, 760.

De façon semblable à celle décrite ci-dessus, en uti-

lisant la 3-aminopropyldiéthylamine et la 3-aminopropyldibutyl-

amine, on obtient respectivement le trichlorhydrate de bis( 3-

aminopropyl)diéthylammonium et le trichlorhydrate de bis( 3-

aminopropyl)dibutylammonium Les propriétés physico-chimiques

de ces composés figurent dans le tableau 8.

T&rbleztu 8 Amine'ytéié IR (cm),j Astille R * 2 R e synthétisée' 60 M Hz, D 20 m bi -amipropyil-3425, 2975, 2625, 2000, 2,1 2,8 4 H() diméthylammonium 1600, 1480, 1470, 1350, 3,1 3,9 8 H (ni) 1320, 1300, 1230, 1200, 2,4 6 H (s) 2,63 0, 08

1160, 1140, 1060, 1040,

1000, 930, 840, 760

trichlorhydrate de bis( 3-aiminopropyl)diethyl 3425, 2975, 2500, 200 d, 1, 6 6 H (t) -ammonium 1600, 1480, 1400, 1280, 2,0 2,7 4 H (ni) 1180, 1060, 1000, 950, 3,1 4,0 12 H <ni) 2,43 0,14

900, 880, 800, 750

trichlorhydrate de bis( 3-aminopropyl>dibutyl 3425, 2975, 2650, 2000, 1, 15 3 H (t) -ammonium 1600, 1470, 1400, 1390, 1,3 2,2 8 H (m 1350, 1280, 1260, 1180, 2,0 2,7 4 H (n) 1,89 0,44 1070, 1030, 990, 950, 3,1 4,0 12 H (i

900, 840, 800, 750

(J' r N> Co TABLEAU 8 (suite) Nota: * 1 Lettres entre parenthèses: S = singulet, t = triplet et m = multiplet * 2 Vitesse d'électrophorèse par rapport & l'alanine (R = 1,O) en électrophorèse sur couche mince L Avicel\-$SF (FMC Co); acide formique-acide acétique-eau ( 25/75/900 v/v); 800 V; 6 minutez * 3 Mobilité en chromatographie en couche mince: gel de silice 60 F 254 (Merck Co); méthanol-acétate d'ammonium aqueux & 10 %ammoniaque A 10 % ( 1/1/1 v/v);

réaction colorée A la ninhydrine.

CO Co

Exemple 4

A une solution de 53,6 g ( 2 équivalents) de N-(bromo-

propyl)phtalimide dans 300 ml d'acétonitrile, on ajoute 13 g

de N,N,N',N'-tétraméthyl-l,3-diaminopropane On agite le mé-

lange à la température ordinaire pendant 18 heures pour for- mer le dibromure de 1,3-l( 3-phtalimidopropyl)diméthylamin Q 7

propane sous forme d'un précipité blanc On recueille le pré-

cipité par filtration, on lave avec de l'acétonitrile et on sèche Le rendement est de 90 % On dissout ce sel d'ammonium

quaternaire dans 200 ml d' acide chlorhydrique 6 N et on chauf-

fe à 110 C pendant 8 heures pour effectuer l'hydrolyse Après refroidissement, on élimine par filtration l'acide phtalique précipité On fait passer le filtrat à travers une colonne de

résine échangeuse d'ions Dowvex -1 (type C 1; volume 1 200 ml).

On évapore l'effluent à sec sous pression réduite pour obte-

nir 28,7 g de tétrachlorhydrate de 1,3-bis/( 3-aminopropyl)di-

méthylamin Q Jpropane.

Ce composé est trop hygroscopique pour qu'on puisse déterminer son point de fusion Le spectre de RMP, mesuré dans l'eau lourde, présente les valeurs suivantes de cl (ppm):

2,0-2,9, 6 H (m); 3,0-4,0, 12 H (m); 3,45, 12 H (s) Les let-

tres entre parenthèses ont la même signification que précé-

demment Les valeurs de l correspondent à la structure du

composé indiqué ci-dessus Les valeurs de-Rf et de Rm, déter-

minées dans les conditions indiquées dans le nota du tableau 7 sont respectivement 0,02 et 2,56 Les maxima d'absorption IR (en nombre d'ondes, cm 1) sont: 3425, 2975, 2600, 2000,

1720, 1600, 1480, 1470, 1400, 1300, 1230, 1200, 1150, 1060,

1000, 960, 920, 900, 850, 760.

Exemple 5 -

A une solution de 20 g de N-méthylbenzylamine dans 300 ml de tétrahydrofuranne, on ajoute 17 g de triéthylamine et 89 g de N-( 3bromopropyl)phtalimide On agite le mélange a la température ordinaire pendant 17 heures On recueille par filtration le précipité incolore qui se sépare et on le

recristallise dans l'éthanol aqueux pour obtenir 76 g (rende-

ment 80,o) de cristaux incolores On dissout les cristaux dans

380 ml d'acide chlorhydrique 6 N et on chauffe à 110 C pen-

dant 8 heures puis on refroiditt on élimine l'acide phtalique précipité par filtration, on concentre sous pression réduite pour éliminer l'excès d'acide chlorhydrique, on dissout dans l'eau distillée et on fait passer à travers une colonne d'une

résine échangeuse d'ions, Dowex Q-l (type C 1; volume 200 ml).

On évapore l'effluent à sec sous pression réduite pour obte-

nir 41 g (rendement 90 % de trichlorhydrate de bis( 3-amino-

propyl)méthylbenzylammonium Ce composé est trop hygroscopique pour qu'on puisse déterminer son point de fusion Le spectre

de RMP, mesuré dans l'eau lourde, présente les valeurs suivan-

tes de d (ppm): 1,9 2,8, 4 H (m); 2,9 4,0, 8 H (m); 3,2, 3 H (s); 4,70 4, 75, 2 H (m); 7,7, 5 H (s); les lettres entre

parenthèses sont comme définies ci-dessus Ces valeurs correspon-

dent à la structure du composé précité Les valeurs de Rf et Rm déterminées dans les conditions indiquées dans le nota du tableau 7 sont respectivement de 0,29 et 2,14 Les maxima

d'absorption IR (en nombre d'ondes, cm-1) mesurés selon la mé-

thode de la pastille de K Br sont les suivantes: 3425, 2975,

2650, 2000, 1600, 1470, 1400, 1310, 1220, 1200, 1180, 1140,

1070, 1030, 1000, 960, 890, 780, 750, 730, 700.

Exemple de référence 1.

Dans 10 ml de diméthylformamide, on dissout 1 000 mg

d'acide bléomycinique (chélate de cuivre) et 2 948 mg de 1-

hydroxybenzotriazole (en abrégé HOBT) On ajoute à la solution

en la refroidissant à O C en l'agitant, 1 500 mg ( 10 équiva-

lents par rapport à l'acide bléomycinique) de dicyclohexylcar-

bodiimide (en abrégé DCC) Dix minutes après, on ajoute au mé-

lange une solution de 1 953 mg ( 10 équivalents par rapport à

la bléomycine) de trichlorhydrate de N-( 3-aminopropyl)-N,N-

diméthylaminopropylamine, que l'on a préparée séparément et

2 206 mg ( 30 équivalents par rapport à la bléomycine) de N-

méthylmorpholine dans 5 ml de diméthylformamide On laisse le mélange réagir en l'agitant à la température ordinaire pendant

4 heures On ajoute au mélange réactionnel dix fois son vo-

lume d'acétone pour précipiter le produit désiré On lave le

précipité à fond avec de l'acétone, on dissout dans l'eau dis-

tillée, on fait passer à travers une colonne ayant un volume de 100 ml garnie de CM-Sephadex C-25 (type Na+, Pharmacia Fine Chemicals Co) que l'on a équilibrée avec une solution tampon acide acétique-acétate de sodium 1,20 M (p H 4,5) pour effectuer l'adsorption On élue la phase adsorbée selon une technique à gradient linéaire de concentration que l'on réalise

en ajoutant en continu du chlorure de sodium à la solution tam-

pon ci-dessus pour porter progressivement la concentration en chlorure de sodium à 1,0 m On recueille les fractions bleues

éluées à environ 0,45 M, on les dessale en utilisant de l'Am-

berlite XAD-2, comme précédemment décrit et on lyophilise pour obtenir 624 mg de 3-/N-3-aminopropyl)-N,N-diméthylamin Q/

propylainobléomycine contenant du cuivre sous forme d'une pou-

dre amorphe bleue Les maxima d'absorption UV mesurés dans

l'eau distillée sont situés à 292 nm et à 243 nm avec respec-

tivement des valeurs de E( 1 5 / 1 cm} de 124 et 155 Les ma-

xima d'absorption IR (en nombre d'ondes, cm 1) mesurés selon la méthode de la pastille de K Br, sont: 3425, 2975, 2925, 1720,

1640, 1560, 1460, 1400, 1370, 1330, 1300, 1250, 1200, 1140,

1100, 1060, 1010, 990, 930, 880, 760.

D'autres propriétés physico-chimiques figurent dans le

tableau 9.

D'une façon semblable à celle décrite ci-dessus, on

synthétise les composés indiqués dans le tableau 9.

Tableau 9

composé Amine utilisée comme Maximum ccqu du Electrophor Ese synthétisé matière de départ, composé d'absorption composé du composé de formule II de formule IV UV du produit contenant du contenant du (abréviation) contenant du Cu, R f 1 2 Cu, nr (E 1 %/lcm) f Cu Rm sel de MMHH bis( 3aminopropyl)dimethyl 292 ( 124) 0,81 1,10 -ammonium 243 ( 155) sel de EEHH bis( 3-aminopropyl)diéthyl 292 ( 116) 0,82 1,06 -ammonium 243 ( 145) sel de BBHH bis( 3-aminopropyl)dibutyl 292 ( 112) 0,73 1,04 -ammonium 243 ( 139) sel de PP 4 M bis( 3-aminopropyl)methyl 292 ( 111) 0,42 1,15 benzylammonium 243 ( 138) MBZHH 1,3-lbis( 3-aninopropyl) 292 ( 123) 0,70 1,03 dimethylaminolpropane 244 ( 152) Ln D r.% Ln %O Co TABL EAU 9 (suite) Nota * 1 Gel de silice 60 IF 254 sila nised E (Merck Co);

méthaxnol-acétate d'amumonium à 6 % ( 45/55 v/y).

* 2 Avicel SF (PMC Co);acide formique-ac de acétique-eau

( 25/75/900); 800 V; 15 minutes.

j O % Exemple de r 6 férence 2

Synthèse du 3,4-di-( 3,4 ' -dichlorobenzyloxy)benzaldéhyde.

A une solution de 2 g de dihydroxy-3,4 benzaldéhyde dans ml d'acétone, on ajoute 4,40 g de carbonate de potassium anhydre et 6,24 g de bromure de 3, 4-dichlorobenzyle On porte

le mélange à reflux pendant 24 heures On chasse ensuite l'acé-

tone du mélange réactionnel par distillation sous pression ré-

duite, on mélange avec 200 ml d'eau et on extrait le produit

désiré avec 200 ml de chloroforme On sèche la couche de chlo-

roforme sur du sulfate de sodium anhydre et on chasse le chlo-

roforme par distillation sous pression réduite pour précipiter des cristaux blancs On recristallise les cristaux bruts dans l'alcool éthylique pour obtenir 4,99 g de cristaux incolores ayant un point de fusion de 181-183 C Le spectre d'absorption IR du composé, mesuré selon la méthode de la pastille de K Br, présente les maxima d'absorption suivants (en nombre d'ondes, cm-1): 658, 693, 710, 760, 795, 805, 830, 875, 1030, 1135,

1168, 1200, 1245, 1280, 1370, 1403, 1437, 1460, 1470, 1510,

1585, 1600, 1690, 2730, 2830, 2870, 2910, 3070.

Le spectre de RMN mesuré dans le deutérochloroforme présente les signaux suivants: 5,20 (s) 2 H; 6,93 7,67 (m) 9 H; 5,23 (s) 2 H; 9,87 (s) 1 H.

D'une façon semblable à celle décrite ci-dessus, on ob-

tient les composés indiqués dans le tableau 10.

Tableau 10 '

Composé de départ Produit désiré' <formule X) _____

f Formule IX Point.

Formule IX Nomde IR RMN k Formu 1 e VIIIA No fusion oc 3,4-dihydroxybenz 3,4-di-(p 108-110 660, 680, 755, 800, 835, 5,16 (s) 2 H, aldéhyde chloro 848, 870, 1013, 1033, 1090, 5,20 (s 3) 211, bromure de benzyloxy) 1135, 1168, 1208, 1236, 1270, 6,9 7,6 p-chlorobenzyle benzald&hyde 1350, 1380, 1407, 1437, 1456, (m) 1111, 1493, 1510, 1575, 1585, 1600, 9,82 (s) 111

1685, 1900, 2740, 2870, 2910,

3,4-dihydroxybenz 3,4-di-<p 750, 764, 790, 820, 860, '3,88 <s) 6 H 1, aldéhyde m 4thoxy subs 8-75, 935, 960, 985, 1000, 5,18 (s) 211, chlorure de benzyloxy) stance 1028, 1118, 1170, 1187, 1235, 5,22 (s) 211, chlorurende benhuileusee 1255, 1270, 1310, 1340, 1390, 6,83 7,6 pméthoxybenzyle huileuse 1430, 1465, 1520, 1590, 1620, <m) 1111, 1700, 2740, 2850, 2880, 2950, 9,84 (s) I 1 H M) Co

( 9) 98 6

(ZH P "T

08 "L '96 9 ME

11 Z (ZII -l'el " 9987, 'OPLE Z 69 T " 009 T 'L 8 LI P) 8 L 'ú 'OILI '99 T 'S Pt IT #g Zt T #ú 6 úT éouvl ep Kqeplvzuoq HST 109 ú 1 úTCT ISSZT TZT 091 T -sqns (,Kxoq-4 a op eanuioaq afixer S 9 ', -1 " O TTT "EEOT '0101 9098 'OE 8 -TK-4000 TOKO) -V ep Kiqeplezueq Kxoapxiq-e oe m % O

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Ir- Ln Cu Il OSOE à OT 8 z

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H-1 (s) E 8,16 l HúT (tu)

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IHV (s) L Ols e T Azueq AXOT Azuaq-v op eanzo Tgo ep KqeplvzueqhxoapÀtl-t ep A Me jvzueq p (,tçxol Azuaq Kxo-l,, zue-q-,p) -P iffl-ZOT (e,4 Tns), 01 nue-lqvl

Exemple de référence 3.

Préparation du cyclotridécanecarbaldéhyde.

A un mélange agité de 3 g de poudre de zinc, 50 nml de tétrahydrofuranne anhydre et 2,66 g de dibromométhane, on ajoute goutte à goutte une solution de 2,13 g de tétrachlorure

de titane anhydre dans 5 ml de dichlorométhane Après 15 minu-

tes, on ajoute goutte à goutte à la solution obtenue une so-

lution de 2 g de cyclotridécanone dans 8 ml de tétrahydrofu-

ranne anhydre On laisse le mélange réagir à la température ordinaire pendant 12 heures On dilue le mélange réactionnel

avec 50 ml de pentane, on mélange avec 100 ml d'acide chlo-

rhydrique 1-M et on mélange par agitation On lave successive-

ment la couche organique avec de l'eau, une solution aqueuse

diluée de bicarbonate de sodium et une solution aqueuse satu-

rée de chlorure de sodium puis on sèche et on concentre pour obtenir le méthylènecyclotridécane On refroidit à -15 C une solution de cette substance dans 40 ml de dichlorométhane

anhydre et on l'ajoute goutte à goutte en agitant à une solu-

tion de 2,64 g d'acide m-chloroperbenzolque dans 40 ml de di-

chlorométhane anhydre Après 3 heures de réaction, on lave la couche organique successivement avec une solution à 10 % de sulfite de sodium, une solution à 7 % de bicarbonate de sodium et une solution saturée de chlorure de sodium puis on sèche et on concentre sous pression réduite On purifie le résidu par chromatographie sur gel de silice Con développe avec un mélange 20/1 d'éther de pétrole et d'acétate d'éthyle/ pour obtenir 2,04 g (rendement 95 % par rapport à la cétone) d'un époxyde On refroidit à -18 C une solution de 1 ' époxyde dans le dichlorométhane anhydre et on ajoute goutte à goutte de

l'éthérat de trifluorure de bore Après achèvement de l'addi-

tion, on ajoute de l'eau au mélange réactionnel On sépare

la couche organique puis on concentre et on purifie par chro-

matographie sur gel de silice pour obtenir le cyclotridécane-

carbaldéhyde huileux avec un rendement de 60-70 % Le spectre d'absorption IR de ce composé mesuré selon la méthode de la pastille de K Br présente les maximums d'absorption suivants:

723, 735, 825, 970, 1070, 1110, 1128, 1196, 1220, 1225, 1285,

1350, 1420, 1450, 1465, 1590, 1710, 1735, 2700, 2870, 2920.

Le spectre de RMN,mesuré dans le deut 6 rochloroforme, présente les signaux suivants: 1,39 (s large) 24 H; (-CH 2 x 12), 2,1 2,5 (m) 1 H; (CH) 9,58 (d, 3 = 1,8 Hz)

1 H (-CHO).

R EV E N DI C A T I O N S

1 Aminopropylaminobléomycine représentée par la for-

mule générale ou un de ses sels:

ZBX-NH(CH 2)3-A-(CH 2)3-B

dans laquelle /BXZ représente un fragment d'acide bléomycini- que formé par élimination du groupe hydroxy du groupe carboxy dudit acide; A représente un groupe de formules: N ( 2)n N\ s

R R

I 1 R 11

ou R N -

R 2 R 2

dans lesquelles R 1 est un alkyle inférieur ou un benzyle, R 2 est un alkyle inférieur ou un benzyle, R est un alkylène

inférieur et N est O ou 1; et B représente un groupe de for-

R 4 mule N R 3 dans laquelle R 3 et R 4 sont chacun ( 1) un atome d'hydrogène ou ( 2) un groupe alkyle qui peut être substitué

par un ou plusieurs groupes phényle, naphtyle, anthryle, fu-

ryle, thiophène, norbornène ou cycloalkyle /tes groupes subs-

tituants peuvent être de plus substitués par un ou plusieurs

atomes d'halogène ou groupes alkyle inférieurs, alcoxy infé-

rieurs, cyano, halogénométhyle ou benzyloxy (le groupe benzy-

loxy peut être substitué par un ou plusieurs atomes d'halo-

gène ou groupes alcoxy inférieurs, benzyloxy ou cycloalkylmétho-

xy)7, sous réserve qu'au moins un des symboles R 3 et R 4 soit

un groupe autre qu'un atome d'hydrogène.

2 Aminopropylaminobléomycine ou un de ses sels selon la revendication 1, dans laquelle A est N, v-J,

CH CH R

i 3 1 3 Il

N (CH 2)3 _ N _, ou __ N _ (o R 1 est un alkyle infé-

i I I

CH 3 CH 3 (R 2)

rieur, R 2 est un alkyle inférieur ou un benzyle et N est O ou 1); et R 3 et R 4 dans B sont chacun ( 1) un hydrogène, ( 2) un benzyle qui peut être substitué par un ou plusieurs atomes

d'halogène ou groupes benzyloxy, cyano, halogénom 6thyle, halo-

génobenzyloxy, alcoxy(inférieur)benzyloxy, benzyloxybenzyloxy,

ou cycloalkylméthoxy, ( 3) naphtylméthyle ( 4) halogénophényl-

éthyle, ou ( 5) un alkyle inférieur substitué par un cyclo-

alkyle en C 8 C 13.

3 Aminopropylbléomycine ou un de ses sels selon la revendication 1, dans laquelle A est: CH

1 3 -

N ou N N; R 3 dans B est un groupe benzyle,

un groupe benzyle substitu 6 par un ou plusieurs groupes benzy-

loxy, un groupe méthyle substitué par un cycloalkyle en C 1-

C 13 et R 4 dans B est un atome d'hydrogène, un groupe benzyle ou un groupe benzyle substitué par un ou plusieurs groupes

benzyloxy.

4 Aininopropylbléomycine selon l'une quelconque des

revendications précédentes, constituée singulièrement par:

la 3 N-méthyl-N-l 3 't-(cyclo-undécanylméthylamino) propyllaminotpropylaminobléomycine, la 3-(N-méthyl-N-/3 '-(bis(m,pdibenzyloxybenzyl) amino)propyllamino)propylaminobléomycine, et

la 3-f 4 t-( 3,"-dibenzylaminopropyl)pipéridyl 7 propyl-

aminobléomycine. Un procédé pour préparer un dérivé d'aminopropylaminobléomycine représenté par la formule g 6 N 6 rale suivante ou un de ses sels:

/BX/-NH (CH 2)3-A (CH 2) 3 B

dans laquelle ZBXZ représente un fragment d'acide bléomycini-

que formé par 6 élimination du groupe hydroxy du groupe carboxy dudit acide; A repr 6 sente un groupe de formules R 1 Rl R ou i il 7 _ _'_ ou N R N-7

(R 2) N à R 2

dans lesquelles 251963 e R 1 est un alkyle inférieur ou un benzyle, R 2 est un alkyle inférieur ou un benzyle, R est un alkylène inférieur et n est O ou 1; et B est un groupe de formule R

N R 3

dans laquelle R 3 et R 4 sont chacun ( 1) un atome d'hydrogène ou ( 2) un groupe alkyle substitué par un ou plusieurs groupes phényle, naphtyle, anthryle, furyle, thiophène, norbornene ou cycloalkyle Zces groupes substituants peuvent de plus être substitués par un ou plusieurs atomes d'halogène ou groupes alkyle inférieurs, alcoxy inférieurs, cyano, halogénométhyle ou benzyloxy (le groupe benzyloxy peut être substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène ou groupes alcoxy inférieurs, benzyloxy ou cycloalkylméthoxy)J, sous réserve qu'au moins un

des symboles R 3 et R 4 soit un groupe autre qu'un atome d'hy-

drogène, qui consiste à laisser une aminopropylaminobléomycine représentée par la formule générale: t BX -NH-(CH 2)3-A-(CH)3-NH 2

dans laquelle /BX/ et A sont comme définis ci-dessus, se con-

denser par réduction avec un composé carbonylique représenté par la formule générale

R 5 CO R 6

dans laquelle R 5 et R 6 sont chacun ( 1) un atome d'hydrogène, ( 2) un cycloalkyle, ( 3) un alkyle qui peut 4 tre substitué par

* un ou plusieurs groupes cycloalkyle ou phényle (le groupe phé-

nyle peut de plus 9 tre substitué par un atome, d'halogène), ( 4) un phényle qui peut 9 tre substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène ou groupes alkyle inférieurs, cycloalkylméthoxy,

alcoxy inférieurs, benzyloxy, cyano, halogénométhyle, halogé-

nobenzyloxy, alcoxy(inférieur)benzyloxy ou benzyloxybenzyloxy, ( 5) naphtyle, ( 6) thiophène, ( 7) furyle, ( 8) anthryle ou ( 9) norbornène; sous réserve qu'au moins un de R 5 et R 6 soit un

groupe autre qu'un atome d'hydrogène.

6 Procédé selon la revendication 5, dans lequel A est

CH 3 CH 3 1

N N (CH-

_ N, _N (CH 2)3 _ N, ou N CH 3 CH 3 (R 2)n o R est un alkyle inférieur, R 2 est un alkyle inférieur ou un benzyle et N est O ou 1; R 5 et R 6 du composé carbonylique sont chacun ( 1) un atome d'hydrogène, ( 2) un cycloalkyle,

( 3) un alkyle substitué par un halogénophényle, ( 4) un phény-

le qui peut être substitué par un ou plusieurs atomes d'halo-

gène ou groupes benzyloxy, cyano, halogénométhyle, halogéno-

benzyloxy, alcoxy (inférieur)benzyloxy, benzyloxybenzyloxy ou

cycloalkylméthoxy ou ( 5) naphtyle.

7 Procédé selon la revendication 5, dans lequel A est CH -N ou X N R 5 est un atome d'hydrogène et R 6 est un groupe phényle qui peut être substitué par un ou plusieurs

groupes benzyloxy ou un groupe cycloalkyle.

8 Procédé selon la revendication 5, dans lequel A est CH 1 H 3

N ou N et R -CO-R est le cyclo-undécanecarbal-

déhyde ou le benzaldéhyde, ce dernier pouvant être substitué

par un ou plusieurs groupes benzyloxy.

9 Procédé selon la revendication 5, dans lequel le rapport molaire de l'aminopropylaminobléomycine au composé

carbonylique est 1/0,5-25.

10 Procédée selon la revendication 5, dans lequel la condensation est effectuée dans un solvant et en présence

d'un agent réducteur entre -5 C et 70 C pendant 3 à 70 heures.

11 Procédé selon la revendication 10, dans lequel le

solvant est le méthanol, l'eau, le diméthylformamide, l'acéto-

nitrile ou un de leurs mélanges.

12 Procédé selon la revendication 10, dans lequel l'a-

gent réducteur egt un composé de type boro hydrure ou du char-

bon palladié.

13 Amine représentée par la formule g 6 nérale:

H 2 N ( CH 2) 3-A' (CH 2) 3-NH 2

dans laquelle A' représente un groupe de formule

R R R

il il,l

N,

N _, ou RN-

1 1 1

R 2 dans lesquelles R 1 et R 2

R 2 R 2

sont chacun un alkyle inférieur ou un benzyle et R est un

alkylène inférieur.

14 Médicaent utilisable notanrent ctome antitum 6 ral, caract&-

ris 6 en ce qu'il contient à titre de principe actif, une

aminopropylaminobléomycine ou un de ses sels selon l'une quel-

conque des revendications 1 à 4.