FI88360C - Foerfarande foer framstaellning av tumoerlaekemedel - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av tumoerlaekemedel Download PDFInfo
- Publication number
- FI88360C FI88360C FI853389A FI853389A FI88360C FI 88360 C FI88360 C FI 88360C FI 853389 A FI853389 A FI 853389A FI 853389 A FI853389 A FI 853389A FI 88360 C FI88360 C FI 88360C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- mak
- cells
- mel
- tumor
- antigens
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 13
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 22
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 22
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims abstract description 20
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims abstract description 12
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 35
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 claims description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 101100182914 Caenorhabditis elegans mak-1 gene Proteins 0.000 claims 4
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims 3
- 208000018142 Leiomyosarcoma Diseases 0.000 claims 1
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 claims 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 claims 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 claims 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims 1
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 claims 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 claims 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 claims 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 abstract description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 11
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 10
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 description 3
- 102100025473 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 6 Human genes 0.000 description 3
- 101000914326 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 6 Proteins 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 3
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 2
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 208000002109 Argyria Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- ZNZYKNKBJPZETN-WELNAUFTSA-N Dialdehyde 11678 Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1[C@H](C[C@H](/C(=C/O)C(=O)OC)[C@@H](C=C)C=O)NCC2 ZNZYKNKBJPZETN-WELNAUFTSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 210000001768 subcellular fraction Anatomy 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/47—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2), e.g. cellulases, lactases
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Measuring Pulse, Heart Rate, Blood Pressure Or Blood Flow (AREA)
- Diaphragms For Electromechanical Transducers (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Window Of Vehicle (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
1 88360
Menetelmä kasvainlääkkeen valmistamiseksi
Keksintö koskee menetelmää terapeuttisen aineen valmistamiseksi kasvainsoluista kasvainsairauksien hoi-5 toon.
Esimerkiksi teoksen Mechanisms of Tumor Immunity, toim. Gree et ai., John Wiley & Sons, N.Y., 1977, s. 196, perusteella on tunnettua, että kasvainsairauksia on jo yritetty hoitaa rokottamalla kasvainsoluilla, joita oli 10 muunnettu jäädyttämällä ja sulattamalla, lyofilisoimalla, paineen avulla tai homogenisoimalla. Myös subsellulaarisia fraktioita tai solu-uutteita on käytetty tähän tarkoitukseen. Tähän mennessä kasvainsairautta vastaan ei kuitenkaan tunneta mitään rokotetta.
15 Nyt on yllättäen todettu, että ihmisen kasvaimista peräisin olevia, lyofilisoituja tai aldehydillä käsiteltyjä soluja tai sellaisista saatuja soluaggregaatteja, jotka kantavat antigeenejä, joita DE-hakemusjulkaisussa 33 29 184 kuvatut monoklonaaliset vasta-aineet sitovat, 20 voidaan käyttää terapeuttisena aineena kasvainsairauksien hoidossa.
Keksinnön kohteena on siten menetelmä terapeuttisen aineen valmistamiseksi kasvainsairauden hoitoon, joka aine sisältää kuivattuja tai kemiallisella käsittelyllä stabi-25 loituja ihmisen soluja, jotka kantavat antigeenejä, joita ' ‘ DE-hakemusjulkaisussa 33 29 184 kuvatut monoklonaaliset : vasta-aineet sitovat. Sellaisen terapeuttisen aineen etuna natiivisten kasvainsolujen käyttöön verrattuna on se, että natiiviset solut eivät ole stabiileja, joten ne on valmis-: 30 tettava aina juuri ennen käyttöä. Sen vuoksi niitä ei voi- da standardoidakaan.
Keksinnön mukaiselle menetelmälle kasvainsairauden hoitoon soveltuvan terapeuttisen aineen valmistamiseksi on tunnusomaista se, mitä patenttivaatimuksessa 1 esitetään.
: 35 Ihmisen kasvainsolut, jotka kantavat antigeenejä, joita 2 88360 DE-hakemusjulkaisussa 33 29 184 kuvatut monoklonaaliset vasta-aineet sitovat, kuivataan tai stabiloidaan aldehydi-käsittelyllä ja viimeistellään terapeuttiseksi aineeksi, jolloin mahdollisesti lisätään neuraminidaasia.
5 Lisäksi esitetään menetelmä kasvainsairauden hoi toon soveltuvan terapeuttisen aineen valmistamiseksi, jolloin ihmisen kasvainsoluista eristetään DE-hakemusjulkaisussa 33 29 184 kuvatun monoklonaalisen vasta-aineen avulla antigeeni ja se viimeistellään terapeuttiseksi aineek-10 si, jolloin mahdollisesti lisätään neuraminidaasia.
Mahdollisuus vahvistaa immuunivastetta neuramini-daasilla on DE-hakemusjulkaisun 26 20 649 perusteella tunnettu .
Terapeuttisella aineella tarkoitetaan ainetta, joka 15 voi olla sekä profylaktinen että ilmenneen sairauden hoitoon soveltuva.
Keksinnön puitteissa käyttökelpoisia soluja saadaan kasvaimista tunnetuilla soluviljelymenetelmillä. Mekaanisesti tai entsymaattisesti sellaisista viljelmistä saadut, 20 mahdollisesti mitomysiini C:llä inaktivoidut solut kuivataan, edullisesti lyofilisoidaan, tai käsitellään aldehy-dillä, edullisesti 1-6 hiiliatomia sisältävällä mono- tai dialdehydillä.
Kemialliseen stabilointiin ja fiksaatioon erityi-25 sen hyvin soveltuviin aineisiin kuuluvat bifunktionaali-set yhdisteet, siis sellaiset yhdisteet, jotka sisältävät kaksi sellaista ryhmää, jotka kykenevät reagoimaan biologisen materiaalin funktionaalisten ryhmien kanssa, ts. "silloittamaan" sen. Niitä ovat esimerkiksi dialdehydit, ·: 30 erityisesti alifaattiset 2-8 hiiliatomia sisältävät dialdehydit. Lisäksi soveltuvia ovat kuitenkin myös 1-4 hiili-atomia sisältävät monoalkanaalit, kuten formaldehydi, joka kykenee reagoimaan bifunktionaalisesti.
Solut esiintyvät yleensä solurykelminä tai yksit-; 35 täisinä soluina. Myös kasvainsoluista eristettyjä anti- 3 88360 geenejä tai solunkappaleita voidaan käyttää. Sellaisia antigeenejä voidaan saada potilaiden kasvainkudoksista, kuten ihmisen kasvaimista, jotka kasvavat vajavaisen immuniteetin omaavissa eläimissä.
5 Määriteltyjä antigeenejä saadaan kasvainsoluista tai niiden kappaleista DE-hakemusjulkaisussa 33 29 184 kuvattujen monoklonaalisten vasta-aineiden avulla.
Esimerkkejä sellaisista antigeeneistä ovat CEA (carcinoembryonic antigen; J. Exp. Med. 122 (1965) 467) ja 10 NCA (non-specific crossreacting antigen; J. Immun. III (1973) 1926), Jotka voidaan eristää kasvainsoluista immuu-niaffiniteettikromatografian avulla. Tätä varten DE-hake-musjulkaisun 34 16 774 taulukossa I esitetyt monoklonaaliset vasta-aineet sidotaan puhdistettuina proteiineina ko-15 valenttisesti CNBr-aktivoituun sefaroosi 4B:hen, ja näiden monoklonaalisten vasta-aineiden tunnistamat antigeenit (CEA, NCA) eristetään DE-TA-paksusuolisyöpäsolu-uutteista. Erästä sopivaa menetelmää on kuvattu Pharmacia-teoksessa Affinity Chromatography, Principles and Methods, 1979, 12-20 18; tiivistelmä on esitetty sivulla 15.
Sellaista monoklonaalisen vasta-aineen avulla saatua antigeeniä voidaan käyttää terapeuttisena aineena, .·.·. esimerkiksi vaikuttavana aineena rokotteissa niiden kas- vainsolujen, joista antigeeni saatiin, aiheuttamaa sai-! 25 rautta vastaan.
‘ ; Rokotteena käytettävän materiaalin laadunvalvonta ·;* suoritetaan esimerkiksi monoklonaalisilla vasta-aineilla toteuttavan vakioinnin avulla tai erottamalla kaikki solu-proteiinit SDS-polyakryyliamidigeelielektroforeesin tai : 30 isoelektrisen fokusoinnin (1. dimensio), joka on yhdistetty SDS-polyakryyliamidigeelielektroforeesiin (2. dimensio), avulla ja värjäämällä sen jälkeen geeli (hopeavär-‘ : jäys).
Antigeenimateriaalia käytetään edullisesti yhdessä 35 apuaineen, erityisesti neuraminidaasin (DE-hakemusjulkaisu 4 88360 26 20 649), kanssa intradermaalisesti ja edullisesti sakki lautarokotusmenettelyä (Cancer Immunol, and Immunother. 6 (1979) 47-58, erityisesti s. 48) noudattaen. Sellaista rokotetta käytetään edullisesti määrätyissä vaiheissa ole-5 via paksusuolensyöpiä (Duke C) vastaan sekä muita sellaisia kasvaimia vastaan, jotka kantavat rokotteessa olevia antigeenejä tai epitooppeja. Sellaisia muita kasvaimia ovat kiinteät tuumorit, esimerkiksi haimasyöpä, mahasyövät, rintasyövät ja keuhkosyövät. Rokotetta voidaan antaa 10 parenteraalisesti tai suun kautta. Antigeenejä voidaan käyttää fysiologiseen suolaliuokseen liuotettuina tai sus-pendoituina, edullisesti intradermaalisesti PBS:ssä.
Rokotteen antigeenikoostumuksen stabiilisuuden arvioimiseksi suoritettiin kaksi testiä: 15 a) Terasaki-lIF-koe (epäsuora immunofluoresenssi
Terasaki-mikromaljan syvennyksissä kasvavia tuumorisoluja käyttäen) monoklonaalisilla vasta-aineilla, joiden spesifisyys vaihteli. Tämän kokeen avulla on mahdollista mitata membraaniantigeenien, joita vastaan on käytettävissä usei-20 ta monoklonaalisia vasta-aineita, esiintyminen intaktien tuumorisolujen pinnalla [Cancer Detection and Prevention 6 (1983) 181-184]. Näin oli mahdollista todeta voimakkaat muutokset DE-TA-solumembraanissa viljelyn aikana.
b) Kaikkien soluproteiinien saattaminen liukene-25 viksi detergentin avulla (Hybridoma 1 (1982) 413-421) ja sen jälkeinen SDS-polyakryyliamidigeelielektroforeesi yhdistettynä hopeavärjäykseen [Anal. Biochcm. 105 (1980) 361-363]. Näiden menetelmien yhdistäminen takaa sen, että DE-TA-solulinjan kokonaisproteiinisisällössä ei ole tapah-30 tunut merkittäviä muutoksia.
Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä.
Esimerkki 1
Karsinoomasolulinjaa BW X (Wienin syöpäsolututki-muskeskus) viljeltiin soluviljelmässä yksisolukerroksena : 35 muovipulloissa RPMI-1640-väliaineessa [Moore, G.E., 5 88360
Gerner, R.E., Franklin, H.A., Culture of Normal Human Leucocytes, J.A.M.A. 199 (1967) 519-524], joka sisälsi 10 % fetaalisen vasikan seerumia. Yhteensulautuneiden vilje-mien kiinni toisissaan kasvavat solut irrotettiin mekaani-5 sesti tai trypsiinillä, joka oli liuotettu fetaalisen vasikan seerumia sisältämättömään RPMI-1640-väliaineeseen, kollagenaasi inaktivoitiin lisäämällä RPMI-1640:een liuotettua fetaalisen vasikan seerumia, ja sen jälkeen solut poistettiin kudosviljelypulloista ja pestiin kolmesti fos-10 faattipuskuroidulla keittosuolaliuoksella (PBS), jonka lämpötila oli 37 °C.
Soluja, joiden määrä oli noin 107 ja jotka esiintyivät suurimmaksi osaksi rykelminä, inkuboitiin 1 tunnin ajan 37 °C:ssa 1 ml:ssa PBS:ä, joka sisälsi 100 pg miιοί 5 mysiini C:tä. Näin inaktivoidut solut pestiin sen jälkeen kolmesti PBS:llä ja (a) kolmesti 0,18 M ammoniumvetykarbo-naattipuskurilla, jonka pH oli säädetty etikkahapolla arvoon 7,4. 107 solua vastaava solusedimentti sekoitettiin 100 μΐ:aan samaa ammoniumvetykarbonaattipuskuria ja jäädy-20 tettiin -70 °C:ssa. Tämän jälkeen jäädytetty materiaali kylmäkuivattiin ja säilytettiin jääkaapissa +4 °C:ssa pie-nessä ilmatiiviisti suljetussa lasipullossa. Tällä tavalla käsiteltyä solumateriaalia voidaan antaa rokotteena poti-laalle PBS:ään sekoitettuna.
I. I 25 Vaihtoehtoisesti (b) soluja inkuboitiin 5 minuut tia +4 °C:ssa PBSrssä, joka sisälsi 0,1 % glutaraldehydiä, "** ’ ylimääräinen glutaraldehydi poistettiin kolmesti suori tetulla PBS-pesulla, jonka jälkeen soluja inkuboitiin 2-%:iseen BSA:n (bovine serum albumin) kanssa 5 minuuttia *.*·! 30 +4 °C:ssa ja ne pestiin kolmesti PBStllä. Näin käsiteltyjä : ; soluja voidaan säilyttää +4 °C:ssa ja antaa rokotteena po- ’ : tilaalle.
; Vaihtoehtoisesti (c) soluja inkuboitiin yön yli formaliinissa 25 °C:ssa Lillyn [Benno Romeis, Oldenburg 35 Verlag MUnchen, (1968), luku 266, s. 65] menettelyä nou- 6 88360 dattaen ja aikä ajoin ravistaen. Solut (noin 108) sentrifu-goitiin (10 minuuttia keskipakokiihtyvyydellä 800 g), su-pernatantti dekantoitiin, ja solusedimentti suspendoitiin 7 ml:aan kahdesti tislattua vettä (* yksi pesu). Tämä pe-5 sutoimenpide toistettiin neljästi 1 tunnin välein. Tämän jälkeen solusedimentti pestiin kolmesti 1 tunnin välein 70-%:isella etanolilla kunkin erän ollessa 7 ml. Seuraa-vaksi solusedimentti pestiin kolmesti 30 minuutin välein 80-%:isella etanolilla kunkin erän ollessa 7 ml. Seuraa-10 vaksi solusedimentti pestiin kolmesti 30 minuutin välein 96-%:isella etanolilla kunkin erän ollessa 7 ml. Seuraa-vaksi solusedimentti pestiin kolmesti 30 minuutin välein 99-%:isella etanolilla kunkin erän ollessa 7 ml. Tämän jälkeen solusedimentti pestiin 30 minuutin välein kolmella 15 7 ml:n erällä steriiliä PBS:ä ja säilytettiin steriilisti 4 °C:ssa. Tällä tavalla käsiteltyjä soluja voidaan varastoida 4 °C:ssa ja antaa rokotteena potilaalle.
Esimerkki 2
Antigeenien eristämiseksi kasvainsoluista immuuni-20 affiniteettikromatografian avulla puhdistetut monoklonaaliset vasta-aineet, jotka reagoivat spesifisesti rokotteena käytettävien kasvainsolujen pinnalla olevien antigeenien kanssa, sidottiin kovalenttisesti CNBr-aktivoi-tuun sefaroosi 4B:hen. Tämä suoritettiin Pharmacia-teoksen 25 Affinity Chromatography, Principles and Methods, 1979, s. 12-18, erityisesti s. 15, mukaisesti. Sen jälkeen kantajaan sidottuja monoklonaalisia vasta-aineita inkuboitiin solusolubilisaattien kanssa 2 tuntia +4 °C:ssa aika ajoin ravistaen. Nämä oli saatu hajotuspuskuriuutolla [5 g/1 : 30 natriumdeoksikolaattia, 0,5 mmol/1 PMSF:ä (* fenyylimetyy-lisulfonyylifluoridi), PBS, pH 8,3] mekaanisesti viljely-pulloista poistetuista viljelmäsoluista, kuten artikkelissa Hybridoma 1 (1982) 413-421, erityisesti sivulla 414 on kuvattu.
35 Kuormitettu kantaja sentrifugoitiin ja suspendoi
tiin pesun suorittamiseksi hajotuspuskuri SDS:ään [20 mM
7 88360
Tris-HCl, pH 8,0, 0 5 g/1 Nonidet P-40:ä (= oktyylifenyy- lietyleenioksidi; Fluka AG), 5 g/1 natriumdeoksikolaat-tla, 1 mmol/1 etyleenidiaminotetra-asetaattia, 1 g/1 nat-riumdodekyylisulfaattia (SDS)]. Tämä pesutoimenpide tois-5 tettlin kolmesti. Seuraavaksi kantaja pestiin kahdesti hajotuspuskurilla, johon ei ollut lisätty SDS:ä, ja sen jälkeen kerran pesupuskurilla (2 M Tris-HCl, pH 8,0, 10 mmol/1 NaCl:ä, 0,1 mmol/1 EDTA:a, 0,5 g/1 NP-40:ä). Näin puhdistetut antigeenit irrotettiin kiinteästä kantajasta 10 joko +95 °C:ssa suoritetulla 5 minuutin kiehauttamisella tai +4 °C:ssa 6 M NH4SCN:ssä toteutetulla 30 minuutin inku-boinnilla.
> f «
Claims (3)
1. Menetelmä terapeuttisen aineen valmistamiseksi kasvainsairauden hoitoon, tunnettu siitä, että 5 ihmisen kasvainsolut, jotka kantavat antigeenit 1-17 (Ag 1 - Ag 17), joiden molekyylipainot ovat 33 kD ± 3 (Ag 1), 134 kD ± 3 (Ag 2), 80 kD ± 3 (Ag 3), 55 kD + 3 (Ag 4), 60 kD ± 3 (Ag 5), 54 kD ± 3 (Ag 6), 260 kD ± 3 (Ag 7), Ag 8:n ja Ag 9:n eivät ole määritettävissä, 10 143 kD ± 3 ja 119 kD ± 3 (Ag 10), 178 kD (Ag 11), Ag 12:n ei ole määritettävissä, 34 kD ± 3 (Ag 13), 195 kD ± 3 (Ag 14), 44 kD ± 7 (Ag 15), Ag 16:n ei ole määritettävissä ja 130 ± 3 (Ag 17), jolloin Ag 1 - Ag 17 reagoivat mo-noklonaalisten vasta-aineiden 1-17 (MAK 1 - MAK 17) 15 kanssa ja näillä monoklonaalisilla vasta-aineilla on taulukossa esitetty reaktiomalli 9 88360 Vasta-aineiden MAK 1 - MAK 17 vaikutus in vitro-soluihin Testattuja soluja Keuhko-5 kasvain- solulin- 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 joja CaLu—1 +++ +++ +++ — E-14 +- + + + + + + + + -- --- +
10 B 109/4 + + -+ --- -- ___ A 549 +++ +---_ Oat 75 + + - + - + + + - + - - - + + - + SHP-77 ++-+ +++ -+ Chago + -- + + -- + + - - - - - - +
15 Bro-Ca-Hoff ++--+ - - + - - Haimakasvain-solulinjoja PaTuII + + - - + - - - + ± Pa Tu III +-+ + - --
20 MIA-Pa-Ca 2 + + -- - + -- - - - - - - - - Pane-1 ++-+-++- Gynekologisen : kasvaimen solulinjoja .X 25 Bewo + - + + + + + - -- + + - + ; HeLa ++ + ; Pa-1 + + + + - + -- + - - - - - - + Melanooma- solulinjoja
3. Mel-ULF + + - + - + + -± - + - + - + + Mel-RPMI + + - + - + + -+ - - - + - + Mel-51-2 + + - + -- -- ± - - - - - - + . Mel-21-C-48 + + - + + - + -+ + - + + - + + ; ei sukua olevia 35 kasvainsolu- linjoja : ZR-75-1 + + - - + + - - +-- MCF-7 + + - +--- - - ____ Mamina-Ca-12 + - - + + + - Calon-Ca-Ax + - - - - (jatkuu..) ίο 88360 (jatkoa) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 Colon-Wi ++----- ---
5 HT-1080 + + - Leiomyosarkom + + Hypernephrom TUW IMR 32 +-- -- --- ---- Raji +_____ _ ___
10 Daudi + - - - - _ - - - 1788 + ---- 6666/1 + ---- - - - - - Immunozytom + - - + - - Normaaleja 15 imusoluja Lymfosyytit ++------- - i - - - + Monosyytit ++------- - - - - - + Granulosyytit - - - - - - ± Erytrosyytit ---------
20 Luuydin ++--+---- - - - - - + Ihmisen normaaleja fibroblasteja LL-29 ++ -- --- -- ___
2. Hu-Fi-Br 32 + + + -- -- --- ------ ·. Hu-Fi-Br 43 ++ -- ---- -- -- Hu-Fi-Br 47 ++ -- ---- -- Hu-Fi-Br 16 +++--- Hu-Fi-Mel-1 +++------ - -- --
30 Hu-Fi-Mag-13 + +------- ___ __ Eläinsoluja Vero - + -- -- -- -- ___+_ Vinttikoira --------- BHK ------+-- - - - - - - : 35 Rotan fibro- blasti _________ Hiiren fibro- blasti - _ _ _ - - n 88360 + = merkittävä positiivinen reaktio välillisessä immuno-fluoresenssikokeessa, radioimmuunimäärityksessä ja syto-fluorometrisessä määrityksessä ± = heikosti positiivinen reaktio osalla testatuista po-5 pulaatioista - = ei mitään merkitsevää reaktiota kuivataan tai stabiloidaan aldehydikäsittelyllä, minkä jälkeen mahdollisesti lisätään neuraminidaasia.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n-10 n e t t u siitä, että jonkun MAK 1 - MAK 17 vasta-aineen avulla, joka on suunnattu antigeeniä Ag 1 - Ag 17 vastaan, jolloin antigeenien 1 - 17 (Ag 1 - Ag 17) molekyylipainot ovat 33 kD
± 3 (Ag 1), 134 kD ± 3 (Ag 2), 80 kD ± 3 (Ag 3), 55 kD ± 3 15 (Ag 4), 60 kD ± 3 (Ag 5), 54 kD ± 3 (Ag 6), 260 kD ± 3 (Ag 7), Ag 8:n ja Ag 9:n eivät ole määritettävissä, 143 kD ± 3 ja 119 kD ± 3 (Ag 10), 178 kD (Ag 11), Ag 12:n ei ole määritettävissä, 34 kD ± 3 (Ag 13), 195 kD ± 3 (Ag 14), 44 kD ± 7 (Ag 15), Ag 16:n ei ole määritettävis-20 sä ja 130 ± 3 (Ag 17), ja vasta-aineet MAK 1 - MAK 17 omaavat patenttivaatimuksessa 1 esitetyn taulukon mukaisen reaktiomallin, eristetään ihmisen kasvainsoluista antigee-ni, minkä jälkeen mahdollisesti lisätään neuraminidaasia. 12 88360
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3432714 | 1984-09-06 | ||
| DE19843432714 DE3432714A1 (de) | 1984-09-06 | 1984-09-06 | Tumortherapeutikum und verfahren zu seiner herstellung |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI853389A0 FI853389A0 (fi) | 1985-09-04 |
| FI853389L FI853389L (fi) | 1986-03-07 |
| FI88360B FI88360B (fi) | 1993-01-29 |
| FI88360C true FI88360C (fi) | 1993-05-10 |
Family
ID=6244749
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI853389A FI88360C (fi) | 1984-09-06 | 1985-09-04 | Foerfarande foer framstaellning av tumoerlaekemedel |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0173951B1 (fi) |
| JP (1) | JPS6168427A (fi) |
| AT (1) | ATE64531T1 (fi) |
| CA (1) | CA1277600C (fi) |
| DE (2) | DE3432714A1 (fi) |
| DK (1) | DK172253B1 (fi) |
| ES (1) | ES8704082A1 (fi) |
| FI (1) | FI88360C (fi) |
| GR (1) | GR852149B (fi) |
| IE (1) | IE58638B1 (fi) |
| IL (1) | IL76289A (fi) |
| PT (1) | PT81093B (fi) |
| ZA (1) | ZA856807B (fi) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3806565A1 (de) * | 1988-03-01 | 1989-09-14 | Deutsches Krebsforsch | Virusmodifizierte tumorvakzinen fuer die immuntherapie von tumormetastasen |
| AT398900B (de) * | 1991-02-12 | 1995-02-27 | Pekar Rudolf Dr | Vakzine für eine immuntherapie |
| US7105159B1 (en) | 1992-11-05 | 2006-09-12 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Antibodies to prostate-specific membrane antigen |
| US7070782B1 (en) | 1992-11-05 | 2006-07-04 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Prostate-specific membrane antigen |
| US6953668B1 (en) | 1992-11-05 | 2005-10-11 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Prostate-specific membrane antigen |
| ATE342356T1 (de) * | 1992-11-05 | 2006-11-15 | Sloan Kettering Inst Cancer | Prostata-spezifisches membranantigen |
| US6569432B1 (en) | 1995-02-24 | 2003-05-27 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Prostate-specific membrane antigen and uses thereof |
| CA2212846A1 (en) | 1995-02-24 | 1996-08-29 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Prostate-specific membrane antigen and uses thereof |
| DE19506483A1 (de) * | 1995-02-24 | 1996-08-29 | Jens Dr Dr Atzpodien | Lyophilisat-Vakzine |
| AU2002356844C1 (en) | 2001-10-23 | 2010-03-04 | Amgen Fremont Inc. | PSMA antibodies and protein multimers |
| US20050215472A1 (en) | 2001-10-23 | 2005-09-29 | Psma Development Company, Llc | PSMA formulations and uses thereof |
| CN1315536C (zh) * | 2002-09-13 | 2007-05-16 | 李进 | 肿瘤抗原疫苗及其制备方法和疫苗组合物 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4152410A (en) * | 1975-09-03 | 1979-05-01 | Eisai Co., Ltd. | Diagnosis reagent for neoplasm and method for diagnosis of neoplasm |
| DE2643215A1 (de) * | 1976-09-25 | 1978-04-06 | Bayer Ag | Cancerostatisch wirksame praeparationen aus tumorzellen und ein verfahren zu ihrer herstellung |
| ZA776822B (en) * | 1976-11-24 | 1979-06-27 | D Mccollester | Vaccine and method for immunotherapy of neoplastic disease |
| DE2918927A1 (de) * | 1979-05-10 | 1980-11-20 | Hans Prof Dr Limburg | Arzneipraeparat zur behandlung von carcinomen und verfahren zu dessen herstellung |
| US4446122A (en) * | 1979-12-28 | 1984-05-01 | Research Corporation | Purified human prostate antigen |
| US4468457A (en) * | 1981-06-01 | 1984-08-28 | David M. Goldenberg | Method for producing a CSAp tryptic peptide and anti-CSAp antibodies |
| DE3329184A1 (de) * | 1983-08-12 | 1985-02-21 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Monoklonale antikoerper mit spezifitaet fuer membran-assoziierte antigene |
| DE3416774A1 (de) * | 1984-05-07 | 1985-11-14 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Monoklonale antikoerper, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung |
-
1984
- 1984-09-06 DE DE19843432714 patent/DE3432714A1/de not_active Withdrawn
-
1985
- 1985-08-27 DE DE8585110757T patent/DE3583265D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1985-08-27 AT AT85110757T patent/ATE64531T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-08-27 EP EP85110757A patent/EP0173951B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-09-03 DK DK402485A patent/DK172253B1/da not_active IP Right Cessation
- 1985-09-04 GR GR852149A patent/GR852149B/el unknown
- 1985-09-04 FI FI853389A patent/FI88360C/fi not_active IP Right Cessation
- 1985-09-04 ES ES546701A patent/ES8704082A1/es not_active Expired
- 1985-09-04 IL IL76289A patent/IL76289A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-09-05 JP JP60195000A patent/JPS6168427A/ja active Pending
- 1985-09-05 IE IE219185A patent/IE58638B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-09-05 PT PT81093A patent/PT81093B/pt not_active IP Right Cessation
- 1985-09-05 ZA ZA856807A patent/ZA856807B/xx unknown
- 1985-09-05 CA CA000490026A patent/CA1277600C/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI88360B (fi) | 1993-01-29 |
| DK402485A (da) | 1986-03-07 |
| PT81093B (pt) | 1988-07-01 |
| IE852191L (en) | 1986-03-06 |
| ATE64531T1 (de) | 1991-07-15 |
| EP0173951A3 (en) | 1988-06-08 |
| JPS6168427A (ja) | 1986-04-08 |
| CA1277600C (en) | 1990-12-11 |
| ES546701A0 (es) | 1987-03-16 |
| IE58638B1 (en) | 1993-10-20 |
| FI853389L (fi) | 1986-03-07 |
| DK402485D0 (da) | 1985-09-03 |
| IL76289A0 (en) | 1986-01-31 |
| ZA856807B (en) | 1986-04-30 |
| PT81093A (de) | 1985-10-01 |
| FI853389A0 (fi) | 1985-09-04 |
| DE3583265D1 (de) | 1991-07-25 |
| IL76289A (en) | 1992-01-15 |
| ES8704082A1 (es) | 1987-03-16 |
| EP0173951B1 (de) | 1991-06-19 |
| GR852149B (fi) | 1986-01-03 |
| DK172253B1 (da) | 1998-02-09 |
| EP0173951A2 (de) | 1986-03-12 |
| DE3432714A1 (de) | 1986-04-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI88360C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av tumoerlaekemedel | |
| CA1194794A (en) | Synthetic peptide specific antigenic determinant and method of manufacturing antigenic materials therefrom | |
| US4224404A (en) | Production of specific immune nucleic acids cell dialysates and antibodies | |
| Nowinski et al. | Characteristics of the structural components of the mouse mammary tumor virus: II. Viral proteins and antigens | |
| US4816253A (en) | Novel mutant strain of Listeria monocytogenes and its use in production of IgM antibodies and as an immunotherapeutic agent | |
| Billing et al. | Human leukemia antigen. I. Production and characterization of antisera | |
| JPH01501939A (ja) | 免疫抑制ペプチドおよび使用法 | |
| JPS60500716A (ja) | ウイルス腫瘍遺伝子からの合成ポリペプチド | |
| US4567041A (en) | Mutant strain of Listeria monocytogenes and its use in production of IgM antibodies and as an immunotherapeutic agent | |
| JPH06205671A (ja) | 形質転換細胞の抽出および培養ならびにそれらに対する抗体の製造 | |
| CN105175527A (zh) | 一种乳腺癌特异性的热休克蛋白复合物及其应用 | |
| US4758549A (en) | Lymphokine, monoclonal antibody specific to the lymphokine and their production and uses | |
| US5002878A (en) | Novel lymphokine, monoclonal antibody specific to the lymphokine, and their production and uses | |
| Charney et al. | Demonstration, purification, and partial characterization of abnormal (HSL) antigens in stable human cell lines | |
| Boone et al. | Preparation of membrane fractions with enhanced tumor-transplantation-antigen activity from tumor cells infected with influenza virus | |
| Burke et al. | The effect of antibody to L-phenylalanine mustard conjugate on malignant cells selectively marked through “early inflammatory-like” vascular permeability | |
| US6294172B1 (en) | Monoclonal antibodies with specificity for membrane-associated antigens | |
| Sorg et al. | Immunological Properties of Amylose, Dextran and Polyvinylalcohol Conjugated with Polytyrosyl‐Peptides | |
| RU2287339C1 (ru) | Способ получения препарата, содержащего комплекс белков теплового шока 70,90,96, ассоциированных с антигенными пептидами | |
| Domingue et al. | Antibodies to bacterial vaccines demonstrating specificity for human choriogonadotropin (hCG) and immunochemical detection of hCG-like factor in subcellular bacterial fractions | |
| Lee et al. | The use of antifibrin antibodies for the destruction of tumor cells: I. Localization of antifibrin antibodies in a methylcholanthrene-induced sarcoma in guinea pigs | |
| Wingen et al. | Evidence for developmental changes of type IV collagen in glomerular basement membrane | |
| CA1223206A (en) | Antigenic modification of polypeptides | |
| Saya et al. | Derivation of a brain tumor-selective monoclonal antibody from hybridoma between mouse myeloma and rat spleen cells immune to syngeneic glioma | |
| SU820015A1 (ru) | Способ получени вакцин против лейкоза крупного рогатого скота |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: BEHRINGWERKE AKTIENGESELLSCHAFT |