FI74020C - Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara 7- -/ -syn-metoxiimino- -(2-aminotiazol-4-yl) acetamido/-3-/(1,2,3-tiadiazol-5-yltio)metyl/-3-cefem-4-karboxylsyraderivat - Google Patents

Description

1 74020

Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten 7-Λ-£δι-syn-metoksi-imino-d-(2-aminotiatsol-4-yyli)asetamido7-3-£*(1,2,3-tiadiatsol-5-yylitio)metyyli7-3-kefem-4-karboksyyli-happojohdannaisten valmistamiseksi 5

Keksintö koskee menetelmää uusien kaavan I mukaisten 7_/J_£*_Syn-metoksi-imino-d— (2-aminotiatsol-4-yyli) asetami-do7-3-£l1,2,3-tiadiatsol-5-yylitio)-metyyli7-3-kefem-4-karboksyylihappojohdannaisten ja niiden farmaseuttisesti 10 hyväksyttävien kationisuolojen valmistamiseksi, ?-°ch3

N-I—C-C-NH -| R —1-N

15 Ö 0J-n^^-CH2-S-(I>

COOH

20 jossa kaavassa R on vety tai C^_g-alkyyli. Näillä yhdisteillä on bakteerinvastainen vaikutus ja ne ovat aktiivisia sekä gram-positiivisten että gram-negatiivisten bakteerien suhteen. Kaavan I mukaiset yhdisteet ovat erityisen tehokkaita sairaaloissa esiintyviä stafylokokkeja vastaan.

25 ZA-patenttijulkaisuissa 757 892, 772 030 ja 781 870 mainitaan yleisesti kefalosporiiniyhdisteitä, joiden 7-ase-massa voi olla 2-aminotiatsoli-4-yyli-syn-metoksi-iminoaset-amidiryhmä ja 3-asemassa 1,2,3-tiadiatsol-5-yyli-tiometyyli-ryhmä. Näissä julkaisuissa ei kuitenkaan spesifisesti kuva-30 ta em. kaavan I mukaisia yhdisteitä eikä niiden valmistusta. Patenttijukaisuista FI 66 618 ja US 4 098 888 tunnetaan kefalosporiinijohdannaisia, jotka rakenteeltaan muistuttavat edellä esitetyn kaavan I mukaisia yhdisteitä. Päinvastoin kuin kaavan I mukaiset yhdisteet mainitut tunnetut yh-35 disteet eivät kuitenkaan ole tehokkaita sairaaloissa esiintyviä stafylokokkeja vastaan. FI-kuulutusjulkaisussa 69 468 2 74020 kuvataan kefalosporiinijohdannaisia, joiden 3-asemassa on 1,2,4-tiadiatsolyylitiometyyliryhmä. Mainituista yhdisteistä ei ole tullut kaupallisia tuotteita, mistä voidaan päätellä, että ne teholtaan ja/tai myrkyllisyydeltään ovat ol-5 leet epäedullisia.

Edellä esitetyssä kaavassa I R on edullisesti metyyli ja erityisesti vety.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä kationisuoloja voidaan valmistaa siten, 10 että a) yhdiste, jonka kaava on

R -r-N

M-S -3 S ^ 15 jossa R tarkoittaa samaa kuin edellä ja M on vety tai al-kalimetallikationi, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on 20 "2Νγε1 ?-0CH3

N---C-C-NH--[ | O

O (M--«v^CH.-O-C-CH

25 Xh polaarisessa luottimessa pH-arvossa noin 6-7,5 noin 40-70°C:ssa noin 4-12 tuntia, minkä jälkeen reaktioseos jääh-30 dytetään ja säädetään pH-arvoon 2,5-3,0, tai b) yhdiste, jonka kaava on „ / SX N-0CHo R2~NH-Vv I " 2

35 2 \ N>—C-COOH

3 74020 jossa Rj on helposti poistettavissa oleva aminosuojaryhmä, saatetaan reagoimaan disykloheksyylikarbodi-imidin kanssa, ja saatu yhdiste, jonka kaava on 5 Γ ς / a >1 N-OCH, “’""K 1«. 3 o L ° J 2 10 jossa R2 tarkoittaa samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on

ντΙ'Ί R1 K

15 0==-CHj-S^g J1

COOH

jossa R tarkoittaa samaa kuin edellä, jolloin saadaan yhdiste, jonka kaava on 20

ν” -<ς ji_ R

I# Λ __ _ f M

0 0=1-N-/J-CH2-S—'\s /

25 COOH

jossa R ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä, minkä jälkeen 30 suojaryhmä R2 poistetaan tai c) yhdiste, jonka kaava on _ „„ / I N-OCH-, R -NH —<v „ 3

35 1 \ J_C-COCH

4 74020 jossa R2 on helposti poistettavissa oleva aminosuojaryhmä, saatetaan reagoimaan fosforipentakloridin kanssa ja saatu yhdiste, jonka kaava on / S > 5 R2 ~m~\s I i!"°CH3 ' N J— C-COC1 jossa R2 tarkoittaa samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on 10

H2N ( N R —j-N

oJ N,^i-CH2-S / ^

COOH ^ S

15 jossa R tarkoittaa samaa kuin edellä, jolloin saadaan yhdiste, jonka kaava on 20 ®

VH -4 I ”'°CK3 /s . s —j-N

'l ΤΛ\ 0 Ora_N ^-ch2-s s /

COOH

25 jossa R ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä, minkä jälkeen suojaryhmä R2 poistetaan; ja haluttaessa saatu kaavan I mukainen yhdiste muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi 30 kationisuolaksi.

Menetelmävaihtoehtoa a) voidaan kuvata seuraavalla reaktiokaaviolla: 5 74020

Reaktiokaavio A

✓s 5 H2 N-f |1 »-°CH3

N-Lc-i-NH-|—rS^ O R-Tj-N

0 tU—CH2-0-C-CH3 + M-S_^

COOH S

(II) (HI) 10

T

15 H2N if || N-OCH- N-La-C-NH--|^N R"]T~I| 0 0J-CH2-S -L\s/N (i)

20 COOH

Yhdiste II, 7-/?-ZPt-syn-metoksi-imino-0<·-(2-aminotiat-25 sol-4-yyli)asetamido-3-(asetoksimetyyli)-3-kefem-4-karboks-yylihappi, jota myös tunnetaan nimellä kefatoksiimi (Cefat-oxime), valmistetaan ZA-patenttijulkaisussa 7 801 870 kuvatulla menetelmällä.

Yhdiste III, 1,2,3-tiadiatsoli-5-tioli, jossa R on 30 vety tai C^g-alkyyliryhmä ja M on vety tai alkalimetalli-kationi, valmistetaan menetelmällä, joka on kuvattu julkaisussa "Five-Membered Heterocyclic Thiones, Part VII (1,2): 1,2,3-Thiadiazole-5-thiolates", J. Hetero, Chem. 15: 1296 (1978). Edellä ja jäljempänä käytetty termi C^_g-alkyyli-35 ryhmä tarkoittaa suoraa tai haarautunutta, 1-6 hiiliatomia sisältävää alkyyliryhmää, kuten metyyli-, etyyli-, n-propyy- 6 74020 li-, isopropyyli-, n-butyyli-, tert-butyyli-, n-heksyyli-tai 2-metyylipentyyliryhmää. Esimerkkeinä sopivista alkali-metallikationeista M ovat natrium- ja kaliumionit.

Menetelmävaihtoehdon a) mukaisesti kefalosporiiniyh-5 distettä II käsitellään tiadiatsoliyhdisteellä III polaarisessa liuottimessa pH-arvon ollessa noin 6-7,5, edullisesti 7-7,5, noin 40-70°C:ssa (edullisesti noin 65°C) suunnilleen 4-12 tuntia, edullisesti noin 6-12 tuntia. Sen jälkeen jäähdytetään reaktioseos ja tehdään happamaksi pH-arvoon 2,5-10 3,0 ja saatu tuote otetaan talteen tavanomaisin menetelmin.

Reaktioseoksessa voidaan käyttää monia erityyppisiä polaarisia liuottimia, kuten asetonitriiliä, dimetyyliform-amidia, dimetyylisulfoksidia, tetrahydrofuraania, alempia alkyylialkoholeja, etoksiloituja eettereitä, esim. diety-15 leeniglykolin dimetyylieetteriä (diglymiä), alempia alkyyli-ftalaatteja, alempia alkyyliketoneja jne. Näistä edullisia ovat dietyylieetteri, asetoni, etyylialkoholi ja näiden seokset. Edullisempia ovat vesipitoiset etyylialkoholin ja asetonin seokset. Vesi on erityisen edullinen liuotti-20 mena.

Reaktio suoritetaan pH-arvossa 6-7,5. Liiallinen happamuus tai emäksisyys tuhoaa /J-laktaamirenkaan ja tuloksena on ei-toivottuja tuotteita. Edullinen pH-arvo on 7-7,5. Reaktio suoritetaan lämpötilassa noin 40-70°C, edullisesti 25 65°C. Vaikka reaktio suoritetaan sopivimmin 1 atmosfäärin paineessa, voidaan myös käyttää yli- tai alipainetta. Reak-tioseosta kuumennetaan noin 4-12 tuntia, edullisesti 6-12 tuntia.

Reaktioajan lopussa reaktioseos jäähdytetään ja teh-30 dään happamaksi edullisesti pH-arvoon 2,5-3,0. Alempaa pH-arvoa ei suositella koska heterosyklisellä amiinilla on taipumus liueta uudelleen ja kun pH-arvo on korkeampi, haluttu lopputuote ei saostu tehokkaasti. Mitä tahansa laimeata mineraalihappoa, kuten rikki- tai kloorivetyhappoa, voi-35 daan käyttää reaktioseoksen hapottamiseen, mutta IN kloori-vetyhappo on edullinen.

7 74020

Lopputuote otetaan talteen sinänsä tunnetulla tavalla, kuten suodattamalla kromatografoimalla, jne.

Haluttaessa voidaan tiatsoliryhmän aminoryhmä suojata edellä oleva reaktiosarjän aikana helposti poistettavalla 5 aminoryhmän suojaryhmällä, esimerkiksi trifenyylimetyyli-, difenyylimetyyli-, klooriasetyyli- tai triklooriasetyyli-ryhmällä (ks. myös ZA 7 801 870 ja ZA 757 892) . Siinä tapauksessa, että aminoryhmä on suojattu tällä tavalla, täytyy eristetty tuote käsitellä tarkoitukseen sopivalla ai-10 neella suojaryhmän poistamiseksi, jolloin saadaan haluttu kaavan I mukainen tuote.

Menetelmävaihtoehtoa b) voidaan kuvata seuraavalla reaktiokaaviolla: 8 74020

ReaktiokaayjLQ B

/N fl-0CH3 , 5 R2-NH—\ jj—C-COOH + ( )— N=C=N-/ ) XIT ,_/ \_7 (IV) >/ (V) 10 *· /\ N-OCH3 + H2N-rf'S '1 R2'NH\^ ji-C-C— 0 ollsj-02'5^ 3*

15 ^ COOH S

(VI) (VII) 20 S\ / \ N—OCH3 R2-NH-\ I II /S,,

^ I»— c—C— NH —-X "1 R-T—N

25 N ° 0=— H^LcH2-S-/3 s)

Xh (VIII) 30 ▼ 35 /S N-0CH3

NH2 “C II

\ y— C —C —NH —-f Ί R—7-N

A Y v 0=Lh^Lch2-s-^s^

(I) COOH

9 74020

Yhdiste IV, 2-(2-R2-amino-4-tiatsolyyli)-2-syn-metoksi-iminoetikkahappo, jossa R2 on tavanomainen helposti poistettava aminoryhmä suojaava ryhmä, valmistetaan joko BE-patentin 850 662 tai ZA-patentin 7 703 775, 7 720 030 ja 5 7 507 892 mukaisilla menetelmillä. Esimerkkeinä sopivista aminoryhmää suojaavista ryhmistä ovat peptidikemiassa yleisesti käytetty alkyylikarbonyyli, esim. formyyli-, asetyy-li- tai propionyyliryhmä; alkoksikarbonyyliryhmä esim. met-oksiasetyyli- tai metoksipropionyyliryhmä; substituoitu 10 alkoksikarbonyyliryhmä, esim. trikloorietoksikarbonyyliryh-mä; substituoitu aryylialkoksikarbonyyliryhmä esim. p-nitro-bentsyylioksikarbonyyli- ja trifenyylimetyyliryhmä. Tri-fenyylimetyyliryhmä on edullinen.

Yhdiste VII, 7-amino-3-(1,2,3-tiadiatsoli-5-yyli)-15 tiometyyli-3-sefeeni-4-karboksyylihappo, jossa R on vety tai C^_g-alkyyliryhmä, valmistetaan julkaisussa "3-£l,2,3-Thiadiazol-5-ylthio)methyl7cephalosporins", J. Med. Chem. 22(10): 1214 (1979), kuvatulla menetelmällä.

Menetelmävaihtoehdon b) mukaisesti yhdisteen IV anne-20 taan reagoida disykloheksyylikarbodi-imidin (yhdiste V) kanssa liuottimessa (metyleenikloridissa, kloroformissa tai etyyliasetaatissa) sekoittaen 0-5°C:ssa 15-45 minuuttia ja sen jälkeen huoneen lämpötilassa 1-2 tuntia jonka jälkeen seos suodatetaan. Yhdistettä VI sisältävä suodos jäähdyte-25 tään jää/metanolihauteessa ja sen annetaan reagoida yhdisteen VII (jossa R on edellä määritellyn mukainen ryhmä) ja trietyyliamiinin kylmän liuoksen kanssa, jolloin liuotin on sama kuin edellä. Tätä seosta sekoitetaan 0-5°C:ssa 15-45 minuuttia ja sen jälkeen huoneen lämpötilassa yli yön. Reak-30 tioseos uutetaan peräkkäin kylmällä laimealla mineraaliha-polla, kylmällä vedellä, kylmällä suolavedellä ja kuivataan. Haihduttamalla liuotin saadaan öljy, joka liuotetaan diok-saanin ja eetterin 1:1 seokseen. Lisätään dietyyliamiiinia ja liuos jäähdytetään ja suodatetaan, jolloin saadaan sivu-35 tuotteena 2-(2-R2-amino-4-tiatsolyyli)-2-syn-metoksi-imino-etikkahapon dietyyliammoniumsuola. Suodos laimennetaan eet- 10 74020 terillä, jäähdytetään ja suodatetaan jolloin saadaan 7-/Γ2-(2-R2-amino-4-tiatsolyyli)-2-syn-metoksi-iminoasetamido7-3-(1,2,3-tiadiatsol-5-yyli)-tiometyyli-3-kefem-4-karboksyy-lihappo (yhdiste VII, jossa R ja R2 tarkoittavat samaa kuin 5 edellä) dietyyliammoniumsuolana.

Tämän suolan annetaan reagoida sopivan aineen kanssa R2~suojaryhmän poistamiseksi. Tällaiset aineet ovat yleisesti tunnettuja. Kun R2 on trifenyylimetyyliryhmä, on edullista käsitellä ko. yhdistettä 80 % muurahaishapolla 10 huoneen lämpötilassa 1-4 tuntia. Reaktioseos laimennetaan sen jälkeen vedellä ja suodatetaan. Suodos haihdutetaan 25-35°C:ssa ja tuote seostetaan eetteristä, jolloin saadaan haluttu kaavan I mukainen yhdiste.

Menetelmävaihtoehtoa c) voidaan kuvata seuraavalla 15 reaktiokaaviolla: 74020

Reaktiokaavio q , /S-n N-OCH3

5 R2-NH-<v H J ^ ^-C~C00H

(IV) 10

V

R2-Nh-/ ^ f'0CH3 H2N-P-ι-j— N

(IX) COOH

(VII) 20 11 aN-0CH3 'ί'ΝΗ~[~Τ^ Ί r'7T"\\ ο μ 1ch2-s-( 3» <VIII) doOH s 30 ’ f 35 ,S“\ N-OCH3

H2N A3-"-f-NH-T—i^s r -T-B

° 0J—(I)

COOH

12 74020

Yhdiste IV muutetaan 2-(2-R2-amino-4-tiatsolyyli)-2-syn-metoksi-iminokarbonyylikloridiksi (yhdiste IX) seuraa-valla tavalla: Yhdiste IV ja molaarisesti ekvivalentti määrä tertiääristä orgaanista amiinia (edullisesti trietyyli-5 amiinia) liuotetaan hydroksyylivapaaseen orgaaniseen liuot-timeen (esim. metyleenikloridiin, kloroformiin tai hiilitet-rakloridiin, edullisesti metyleenikloridiin tai kloroformiin) ja jäähdytetään. Tähän kylmään sekoitettuun seokseen lisätään useina annoksina fosforipentakloridia 15-30 minuu-10 tin aikana ja reaktioseosta sekoitetaan 0-5°C:ssa vielä 15-45 minuuttia jonka jälkeen sekoitetaan noin 1 tunti huoneen lämpötilassa. Reaktioseos haihdutetaan alennetussa paineessa, liuotetaan uudelleen kloroformiin tai metyleenikloridiin ja haihdutetaan uudestaan. Jäännös liuotetaan 15 asetoniin ja suodatetaan jolloin saadaan kiteinen trietyyli-ammoniumvetykloridi-sivutuote, joka heitetään pois.

Yhdistettä IX sisältävä asetonisuodos lisätään noin 30 minuutin aikana sekoitettuun jääkylmään yhdisteen VII vesi/astoniseokseen (3:2 tilav:tilav.), joka sisältää 1 20 mooliekvivalentin heikkoa emästä kuten natriumkarbonaattia ja 2 mooliekvivalenttia orgaanista tertiääristä amiinia, edullisesti trietyyliamiinia. Tätä reaktioseosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa noin tunnin ajan, hapotetaan pH-arvoon 2 laimealla vesipitoisella hapolla (esim. 4N kloori-25 vetyhapolla), laimennetaan vedellä, uutetaan toistuvasti

orgaanisella liuottimena kuten metyleenikloridilla, kloroformilla, etyyliasetaatilla tai bentseenillä, edullisesti etyyliasetaatilla, pestään toistuvasti vedellä, kuivataan ja haihdutetaan jolloin saadaan kaavan VII mukainen yhdiste. 30 R2~suojaryhmä poistetaan käsittelemällä kaavan VII

mukaista yhdistettä sopivalla aineella, jolloin saadaan kaavan I mukainen yhdiste.

Kaavan I mukaiset yhdisteet voidaan muuttaa farmaseuttisesti hyväksyttäviksi kationisuoloiksi sinänsä tun-35 netulla tavalla.

13 74020

Edullisia kationisuoloja ovat alkalimetalli-, esim. natrium- ja kaliumsuolat. Natriumsuola on erityisen edullinen. Yhdisteet ovat farmakologisesti hyväksyttyjen myrkyttömien kationisuolojensa kanssa vastaavanlaisia.

5 On yleensä edullista, että menetelmävaihtoehtojen a), b) ja c) eri reaktiovaiheissa saadut tuotteet erotetaan ja/tai eristetään ennen niiden käyttämistä lähtöaineina seuravissa reaktiovaiheissa. Erotus ja eristäminen voidaan suorittaa sopivalla puhdistusmenetelmällä, kuten haihdutuk-10 sella, kiteytyksellä pylväskromatografiällä, ohutlevykro-matografiällä, tislauksella jne.

Kaavan I mukaiset yhdisteet ovat biologisesti aktiivisia ja niillä on tehokas antibakteerinen vaikutus, mikä on osoitettu Miiller-Hinton-agar-laimennuskokeella, jonka 15 tulokset ilmenevät taulukoista I, II, III.

Taulukossa I ovat yhdisteet merkitty seuraavasti: Yhdiste Ia = I-^-Z^—syn-metoksi-imino-^-d-aminotiatsol- 4-yyli)asetamidoJ-B-^d,2,3-tiadiatsol-5-yylitio)-metyyli/- 3-kefem-4-karboksyylihappo.

20 Yhdiste II = Cephalotin (Lilly) 5 74020

Taulukko I

Pienin inhiboiva konsentraattio ;ug/ml

Yhdiste

- Organismi Ia U

Gram-negatiiviset

Klebsiella pneumoniae STFD-79-16 .015 1 10 " " SSC-78-1 .015 1 oxytoca K-81-6 -03 2

Enterobacter aerogenes STFD-79-14 -03 128 " cloacae K-79-16 .25 >128 K-81-46 .12 64

Serratia matcescens Tin-7ft-.i5 " " ΠΗΓ 77 7 1 >128 15 n n QHC-77-2 i >128 K-81-39 \l2

Proteus morganii K-79-25 .015 >128 .. .... . K-77-3 ' 4 >128 rettgeri N-76-1 .015 , >128 20 Providencia stuartti K-81-29 .06 >128

Escherichia coli STFD-79-20 015 L

:: :: ιψ :o3 t K-81-14 .06 64

Salmonella sp. SSC-79-57 25 64 25 Arizona) QHC-77-3 ]03 2

Citrobacter sp. K-81-27 .03 1

Acinetobacter sp. STFD-79-17 16 >128 K-77-1 i 4 >128 m „ K-77-6 I 16 >128 30 Pseudomonas aeruginosa SSC-78-13 64 >128

Il li o 32 >128 TUL-78-2 128 >128

Gram-positiiviset

Enterococcus sp. OSU-75-1 77 „ 35 " " SM-77-15 32 32

Staphylococcus aureus SSC-79-18 25 25 " ” FU-79-19-2 ;5 *5 ;; ssc-so-is .5 ;5 _Smith_ .25 .17 15 74020

Taulukossa II ovat eri yhdisteet merkitty seuraa-valla tavalla:

Yhdiste Ia = 7- /3 -q( -syn-metoksi-imino- cL -(2-amino- tiatsoli-4-yyli)asetamido/-3-^I,2,3-tiadiatsol-5-yylitio)-5 metyyli7-3-kefein -4-karboksyylihappo.

Yhdiste II = Cefotaxime (Hoechst)

Yhdiste 111= Cefmenoxime (Takeda)

Yhdiste IV = Deftizoxime (Fujisawa)

Yhdiste V = Moxalactam (Lilly) 10 Yhdiste VI = Cefoxitin (Merck)

Yhdiste VII= Cefaperazone (Pfizer) 16 74020 ----^- »-n m in in m cm h-l · . . . .

> CM rH CM CM <—I CM CM fl CM CM r—I CM CO

CM

f-H

'g ·—1 v£5 > CMCNi—IHrtH(MCM>J CM CM CM CM ^ CM CM--t O' a.___ v ζ>4

0 > CM CO CM CM CM CM ^ CO MT'T'J’CMMrsa’CMvrcO

•H

P

P CD --------------

nJ +J

fd co in m mmm m P -h > . ....

P Ό t-l rHf—11—trHf—r—I <J· r-1 r—I 00

! G Λ CM

<1> X P-t S__ o / »—I cm I—I 'H.jHCMHHCMijNr CMCMCMCMsTvJ-CMCMcn

(0 >—I

>

•H

o, _ _______ X '

•H

X t—I m m m m m η -H 1-1 ' ‘ · Ό

|_| 1—1 rHCMCM r—(i—I i—If—I r-1 CM t-li—tr—I

G

Ο -H

^ m cm cm cm cm cm m mmmmmcMm "5 nj i—imHr—ti—ti—ccMmm cmcmcmcmniahcm r-i Cu ......... ........_ 3---π------ H >

H G

H (U

I G P1 β

fd Q) -H

DIG «

φ·Η O

G > CU

-H *· •Η ·Η Ή co-P co co co (0 <o i §

4-) -P

* -¾ (0 <0 I—I Ή i

I I

H CÖ <0

g 4J -P

co a) Q> •H JQ Λ I i s

o « <U

P p 3 3

CO CQ

OHMJlA M OO \C OO O'r-l >J

CO ΠιΓιΜ^ΗΗΗΗΗ CO CM CM CO CO CO Ό Mf vi CM 3 I I I I I I I I I 3 I I I I I I I I I

ο σ'σ» σ'O'o'σ'σ'σ'σ' ο σ' σ' σ' σ» σ' σ' σ' σ' σ' o r^r^r^r^r^r^r^r^r-» ο γ~~- γ~~ ι—- ι—^ γ— ο ο y o o ο O co: ::::::: O co: :::::::

’—f CO r—I CO

>> . >,

X X

o- a co aj *-> u co to 74020

Taulukossa III ovat yhdisteet merkitty seuraaval-la tavalla:

Yhdiste Ib(i) = 7-/3 q( -syn-met-oksi-imino- o( -(2-aainotiatsoli-4-yyli)asetamido7~3-^l,2,3-tiadiatsoli-4-5 metyyli-5-yylitio)metyyli7“3-kefem -4-karboksyylihappo. Yhdiste II = Cephalothin (Lilly) 18 74020

Taulukko III

Pienin inhiboiva 5 konsentraattio ;ug/ml

Organismi Yhdiste ___I b ( i) n

io :-—-—----— I

Klebsiella pneumoniae STFD-79-6 <03 5

Il SSC-78-1 7^03 l’ { AD <.03 .03

Enterobacter aerogenes STFD-79-14 .12 >128 cloacae K-79-16 .25 >128 15 Serratia marcescens TUL-78-15 2 >128 QHC-77-2 2 >128

Proteus morganii K-79-25 <.03 >128 I rettgeri N-76-1 <.03 >128 j Escherichia coli STFD-79-20 <.03 2 20 i .. ,. “-06 4 „ „ ESS 22-31 <.03 < .03 ATCC 25922 <.03 ~2 | Salmonella sp SSC-79-57 1 64 (arizona) QHC-77-3 .06 2

Acinetobacter sp. STFD-79-17 32 i >128 K-77-1 , 4 >128

Pseudomonas aeruginosa SSC-78-13 ! 64 >128 .. il· 12-4-4 ! 64 j >128 !

ATCC 27853 j 64 | >128 I

Enterococcus sp. OSU-75-1 j 8 1 16 SM-77-15 I 8 ; 16 i :

Staphylococcus aureus SSC-79-18 25 : 12 il FU-79-19-2 !5 ' .‘12 .. „ Smith -25 ; .03 SSC-80-15 1 ! .5 35 Micrococcus luteus PCI 1001 <.03 .03 19 74020

Uusien yhdisteiden käyttökelpoisuuden osoittaa myös niiden kyky estää systeemisiä letaalisia infektioita hiirissä. Sovelletussa testissä käytettiin Charier River Laboratories CD-I kannan naarashiiriä, jokainen painoltaan 5 20+2 grammaa. Hiiriin tartutettiin intraperitonaalisella injektiolla tarpeellinen määrä bakteereja, (ks. taulukko IV), jotka olivat 0,5 mlrssa 5 % musiinia (s. aureus kannat) tai viljelyväliaineessa (S. pyögenes tai E. coli), jolloin 95-100 % hoitamattomista hiiristä kuoli 48 tunnissa.

10 30 minuutin kuluttua tartuttamisesta hiiriin injek toitiin subkutaanisesti erisuuruisina annoksina tutkittavaa yhdistettä, joka oli 0,5 ml:ssa 0,2 % vesipitoista agaria. Seitsemän päivän kuluttua tartuttamisesta eloonjäämissuhde todettiin. Yhdisteellä Ia suoritettiin kolme erillistä koet- 15 ta ja tulokset yhdistettiin. Taulukossa IV tulokset on ilmoitettu mediaani-(ED5Q)-arvoina, jotka määritettiin todennäköisyyslaskennalla .

Taulukossa IV yhdiste Ia on T-^-Z^-syn-metoksi-imino-ot- (2-aminotiatsoli-4-yyli) asetamido7-3-Z-3-Z~( 1,2,3-tiadiat- 20 soli-5-yylitio)metyyli7~3-kefem-4-karboksyylihappo.

Taulukko IV

Mediaani-ED50 (95 % Infektiota aiheuttava bakteeri todennäköisyydellä) ^ ___Yhdiste Ia_

Staphylococcus aureus Smith 2,9 (2,4-3,6)

Staphylococcus aureus Fu-79-2 6,1 (4,4-8,4) ^ Staphylococcus pyogenes C 203 0,1 (0,08-0,13)

Escherichia coli 311 0,35 __(0,28-0,44) 20 7402 0

Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä. Mikäli toisin ei mainita ovat kaikki lämpötilat celsiusasteissa ja ympäristön- tai huoneen lämpötilalla tarkoitetaan noin 20°C. Prosentit ovat painoprosentteja ja moolit ovat grammamoole-5 ja. Termillä "ekvivalentti" tarkoitetaan reagenssimäärää, joka ilmaistuna mooleina on sama kuin edellä tai jäljempänä ko. esimerkissä mainitun reagenssin moolimäärää.

Esimerkki 1 7^-ffi-syn-metoksi-imino-<X- (2-aminotiatsol-4-yyli) -10 asetamido7-3-£~( 1,2,3-tiadiatsol-5-yylitio)metyylj7-3-kefem- 4-karboksyylihappo

Liuos, joka sisältää 245 mg 7/*-i£*-syn-metoksi-imino-ä-(2-aminotiatsol -4- yyli)asetamido7-kefalosporiinihapon natriumsuolaa ja 78 mg 1,2,3-tiadiatsoli-5-tiolin kalium-15 suolaa 5 ml:ssa vettä, lämmitetään 65°C:ssa pH-arvossa 7,3, 6 tuntia. Liuos uutetaan etyyliasetaatilla ja pH säädetään arvoon 2,5 IN kloorivetyhapolla. Muodostunut saostuma otetaan talteen suodattamalla, jolloin saadaan 70 mg haluttua KBr tuotetta ruskeana kiinteänä aineena. IR λ 5,62 μ (β-20 laktaamikarbonyyli? PMR (dg DMSO) & 3,87 (s, 3H, -OCH^), 6,75 (s, 1H, tiatsoli-5-H), 8,90 (s, 1H, tiadiatsoli-4-H).

Esimerkki 2 7/3-Ztf-syn-metoksi-imino-ct- (2-aminotiatsol-4-yyli) -asetamido7-3-^~(l, 2,3-tiadiatsol-5-yylitio)metyyli7-3-kefem-25 4-karboksyylihappo

Liuokseen, joka sisältää 13,0 g 2-(2-trifenyylimetyy-liamino-4-tiatsolyyli)-2-syn-metoksi-iminoetikkahappoa 60 ml:ssa metyleenikloridia lisätään 3,17 g disykloheksyyli-karbodi-imidiä. Seosta sekoitetaan kylmässä 30 minuuttia ja 30 sen jälkeen 1,5 tuntia huoneen lämpötilassa. Karbamidi poistetaan saostamalla, suodos jäähdytetään jää/metanolihautees-sa ja suodokseen lisätään kylmä liuos, joka koostuu 4,4 g:sta 7-amino-3-(1,2,3-tiadiatsol-5-yyli)tiometyyli-3-kefem- 4-karboksyylihaposta ja 3,72 ml:sta trietyyliamiinista 60 35 ml:ssa metyleenikloridia. Tätä seosta sekoitetaan kylmässä 30 minuuttia ja sen jälkeen yli yön huoneen lämpötilassa.

2i 74020

Reaktioseos uutetaan peräkkäin kylmällä 0,5 N kloorivety-hapolla, vedellä ja suolaliuoksella ja kuivataan sen jälkeen magnesiumsulfaatilla. Haihduttamalla liuotin saadaan öljy/ joka liuotetaan 30 mitään dioksaanin ja 30 mitään 5 eetterin seokseen. Lisätään 2,92 ml dietyyliamiinia ja seos jäähdytetään ja suodatetaan jolloin saadaan sivutuotteena 6.2 g 2-(2-trifenyylimetyyliamino-4-tiatsolyyli)-2-syn-metoksi-iminoetikkahapon dietyyliammoniumsuolaa. Suodos laimennetaan 500 mltksi eetterillä, jäähdytetään ja suoda- 10 tetaan jolloin saadaan 8,5 g 7-^2-(2-trifenyylimetyyliamino- 4-tiatsolyyli)-2-syn-(metoksi-imino)asetamido7~3-(1,2,3— tiadiatsol-5-yyli)tiometyyli-3-kefem-4-karboksyylihappoa sen dietyyliammoniumsuolana.

Seosta, joka sisältää 2,4 g edellä mainittua dietyy-15 liammoniumsuolaa ja 20 ml 80 % muurahaishappoa sekoitetaan huoneen lämpötilassa 2 tuntia jonka jälkeen laimennetaan 2 0 ml tila vettä ja suodatetaan. Suodos haihdutetaan kuiviin 35°C:ssa ja jäännös hierretään jauheeksi eetterissä, suodatetaan ja kuivataan jolloin saadaan 1,4 g haluttua tuotetta.

20 IR ^ 5,62 μ (β-laktaamikarbonyyli); PMR (dg DMSO) S3,87 (s, 3H,-OCH3), 6,75 (s, 1H, tiatsoli-5-H, 8,90 (s, 1H, tiadiatsoli-4-H).

Esimerkki 3

Natrium-7-ftZ*-syn-metoksi-imino-rt-(2-aminotiatsol-25 4-yyli) -asetamido7-3-^~(l, 2,3-tiadiatsol- 5 - yylitio) metyyljj- 3 -kefem - 3-karboksylaatti 3,5 g 7-/3-^¾-syn-metoksi-imino-ol- (2-aminotiatsol-4- yyli) asetamido7-3-/T(l, 2,3-tiadiatsoli-5-yylitio) metyylit- 3 -kefem - 4-karboksyylihappoa liuotetaan 100 ml:aan vettä 30 lisäämällä tipoittain 6,6 ml IN natriumhydroksidia. Tämä liuos suodatetaan ja suodos kylmäkuivataan jolloin saadaan KBr 3.3 g haluttua tuotetta. IR 5,68 /u (/*-laktaamikarbon-

IUcIX

yyli); PMR (dg DMSO) &3,80 (s, 3H, -OCH3, 6,65 (s, 1H, tiatsoli-5-H), 9,10 (s, 1H, tiadiatsoli-4-H) 22 7 4 0 2 0

Esimerkki 4 7-amino-3-Z~( 1,2,3-tiadiatsoli-4-metyyli-5-yylitio) -metyyli7~3 -kefem - 4-karboksyylihappo

Seos, joka sisältää 4,04 g 7-aminokefalosporiinihap-5 poa, 2,30 g natrium-4-metyyli-1,2,3-tiadiatsoli-5-tiolaat-tia ja 30 ml:ssa asetonia, refluksoidaan sekoittaen 2,5 tuntia. Reaktioseos jäähdytetään huoneen lämpötilaan, hapote-taan pH-arvoon 3,5 ja saostuma otetaan talteen, pestään vedellä ja kuivataan jolloin saadaan 3,7 g haluttua tuotet- vor 10 ta. IR λ 5,59 Ai (^-laktaamikarbonyyli); PMR (d,- DMSO) max o &2,60 (s, 3H, tiadiatsoli-S-CH-j) .

Esimerkki 5 7/9-Z5t~syn-metoksi-imino-c<- (2-trifenyylimetyyliamino tiatsol - 4- yyli) asetamido7-3-£"(l, 2,3-tiadiatsoli-4-metyyli-15 5-yylitio)-metyylj7~3-kefem - 4-karboksyylihappo 2,08 g fosforipentakloridia lisätään useina annoksina kylmään liuokseen, joka sisältää 4,44 g 2-(2-trifenyylimetyyliamino- 4- tiatsolyy li- 2-syn-metoksi-iminoetikkahappoa ja 1,41 ml trietyyliamiinia 70 ml:ssa metyleenikloridia.

20 Tätä seosta sekoitetaan kylmässä 30 minuuttia ja sen jälkeen huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Liuotin poistetaan alennetussa paineessa. Jäännös liuotetaan 70 ml:aan metyleenikloridia ja haihdutetaan uudelleen kuiviin. Tämä jäännös suspendoidaan 50 ml:aan asetonia, suodatetaan ja suodos 25 lisätään tipottain sekoittaen kylmään seokseen, joka sisältää 2,53 g 7-amino-3-/"(l,2,3-tiadiatsoli-4-metyyli-5-yyli-tio) metyyli7-3 - kefem - 4-karboksyylihappo, 0,84 g natriumbikarbonaattia ja 2,82 ml trietyyliamiinia 75 ml:ssa vettä, johon on lisätty 50 ml asetonia. Tätä seosta sekoitetaan 30 kylmässä 30 ja hapotetaan pH-arvoon 2. Lisätään 100 ml vettä ja seos uutetaan kolmella 150 ml etyyliasetaattiannok-sella. Yhdistetyt etyyliasetaattiuutokset pestään vedellä ja suolavedellä, kuivataan magnesiumsulfaatilla ja haihdu- KBr tetaan, jolloin saadaan 6,3 g haluttua tuotetta. IRλ ^ ' max 35 5,31 ai (/i-laktaamikarbonyyli) PMR (dg DMSO) 2,62 (s, 3H, tiadiatsoli-S-CH^), 3,93 (s, 3H,-OCH.j), 6,85 (s, 1H, tiat-soli-5-H).

23 74020

Esimerkki 6 7/3-^-syn-metoksi-imino-c*- (2-aminotiatsol-4-yyli) -asetamido7~3-Zr( 1, 2,3-tiadiatsoli-4-metyyli-5-yylitio) -metyyli7-3 -kefem · 4-karboksyylihappo 5 4,0 g 7/*-£öl-syn-metoksi-imino-<Jl-(2-trifenyylimetyyli- aminotiatsol-4- yyli) asetamido7-3-ZT(l,2,3-tiadiatsoli-4-metyyli-5-yylitio)metyyli-3-kefem - 4-karboksyylihappoa lisätään 40 ml:aan 80 % muurahaishappoon ja seosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 2,5 tuntia. Lisätään 40 ml 10 vettä, seos suodatetaan ja suodos haihdutetaan kuiviin 35°C:ssa. Jäännös hierretään jauheeksi vedessä, suodatetaan ja kuivataan jolloin saadaan 1,7 g haluttua tuotetta. IR λΚΒ^ 5,32 μ (^-laktaamikarbonyyli) , PMR (d, DMSO) ^2,62 (s, 3H, tiadiatsoli-S-CH^), 3,90 (s, 3H, -OCH^), 6,82 (s, 15 1H, tiatsoli-5-H).

Claims (4)

24 74020

1. Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten kaavan I mukaisten 7-^-^-syn-metoksi-imino-oC-(2-ami-5 notiatsol-4-yyli) asetamidg7~3-Z.il,2,3-tiadiatsol-5-yylitio) - metyyli.7-3-kefem-4-karboksyylihappojohdannaisten ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien kationisuolojen valmistamiseksi,

10 H„ li I »-«»3 s N-Lc'=-NH -η-S ' ~Λ R— _N

0. I il CH2_s-N (I) 15. s COOH jossa kaavassa R on vety tai C^_g-alkyyli, tunnet-t u siitä, että 20 a) yhdiste, jonka kaava on m-sJTJ 25 jossa R tarkoittaa samaa kuin edellä ja M on vety tai al-kalimetallikationi, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on 30 - C-C-NH ^ 5 ^ o ^ f I °

3. O =1-N ^J-cK2-0-c-Ch3 COOH 25 74020 polaarisessa liuottimessa pH-arvossa noin 6-7,5 noin 40-70°C:ssa noin 4-12 tuntia, minkä jälkeen reaktioseos jäähdytetään ja säädetään pH-arvoon 2,5-3,0, tai b) yhdiste, jonka kaava on 5 R2-NH~\ Il ϋ-°=Η3 N ^—C-COOH 10 jossa R2 on helposti poistettavissa oleva aminosuojaryh-mä, saatetaan reagoimaan disykloheksyylikarbodi-imidin kanssa, ja saatu yhdiste, jonka kaava on 15 / \ R_-NH—/. N-OCH- Λ,Λπ- 0 _ 0 __ 2 20 jossa R2 tarkoittaa samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on H n—-R—-N

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 7/^-^C-svn-metoksi-imi- 5 no-Qt- (2-aminotiatsol-4-yyli) asetamido7-3-Z.7lr2,3-tiadiat-sol-5-yylitio)metyyllL7"3-kefem-4-karboksyylihappo.

2. Li-c-HH-T—R-jj-h N/ i 1 II » 35 COOH 26 7 4 0 2 0 jossa R ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä, minkä jälkeen suojaryhmä R2 poistetaan tai c) yhdiste, jonka kaava on 5 /‘S VNH-<\ I 'N -1—C-COOH jossa R2 on helposti poistettavissa oleva aminosuojaryh-10 mä, saatetaan reagoimaan fosforipentakloridin kanssa ja saatu yhdiste, jonka kaava on S 1 "'°°Η3

15. C-C°C1 jossa R2 tarkoittaa samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on

20 S vt/ ;i r7“nw COOH 25 jossa R tarkoittaa samaa kuin edellä, jolloin saadaan yhdiste, jonka kaava on R2_NH 1 N-OCH c

5. Z X\ ‘1 « 3 R-,-N \ N c_c_NH 1-^ η 7Γ v\ o 0J— COOH 35 jossa R ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä, minkä jälkeen suojaryhmä R2 poistetaan; ja haluttaessa saatu kaavan I mu- 27 7 4 0 2 0 kainen yhdiste muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi kationisuolaksi.

2 I | Il

25 U=1 N —CH-S -1 n y' 2 ^ s/' COOH jossa R tarkoittaa samaa kuin edellä, jolloin saadaan yhdiste, jonka kaava on 30 R -NH—/ Π N-OCH

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 7/i-/^T-syn-metoksi-imi-ηο-oC- (2-aminotiatsol-4-yyli) asetamido_7-3- (1,2,3-tiadiatsol- 10 4-metyyli-5-yylitio)metyyli7-3-kefem-4-karboksyylihappo. 28 7 4 0 2 0