FI63595B - FOERFARANDE FOER STABILIZERING AV BACTERIOLOGICAL PROVER I SYNNERHET URINPROVER - Google Patents

Description

ΓβΙ ««KUULUTUSjULKAISU ,7rnr «TL LBJ (11) utlAggninosskiiift 0 C .. Patentti oySnnetty 11 07 1983 ” Patent neddelat (51) Kv.ik.Va.3 C 12 N 1/04, C 12 (¾ 1/04 SUOMI—FINLAND (21) Nt^ttih.k*niu.-p»t«n«i»eki*iol 7905^1 (22) HtkemltpUvl — AiwBknlnpdi( 19.02.79 ' ' (23) AlkupUvi—GIWgh«t*dif 19.02.79 (41) Tullut Julktaukil — Mlvlt affwitHg 25. 08. 79 ' . /44) NlhtivUulpunon Ja kuuLfulkmtoun pvm. — ηο Αο nrtent- och registarstyreieen ' ΑμΜμ utitfd och utUkriftwi puMmnd (32)(33)(31) PrrOatty «tuolkuu»—Butin* prtorttvt 2U. 02.78ΓβΙ «« ADVERTISING PUBLICATION, 7rnr «TL LBJ (11) utlAggninosskiiift 0 C .. Patent issued on 11 July 1983“ Patent neddelat (51) Kv.ik.Va.3 C 12 N 1/04, C 12 (¾ 1/04 FINLAND —FINLAND (21) Nt ^ ttih.k * niu.-p »t« n «i» eki * iol 7905 ^ 1 (22) HtkemltpUvl - AiwBknlnpdi (19.02.79 '' (23) AlkupUvi — GIWgh «t * dif 19.02.79 (41) Tullut Julktaukil - Mlvlt affwitHg 25. 08. 79 '. / 44) NlhtivUulpunon Ja kuLfulkmtoun pvm. resumes »—Butin * prtorttvt 2U

Ruotsi-Sverige(SE) 78021^7-^ (71) Opus Chemical, Stora Mygatan 15, S-Ull 08 Göteborg, Ruotsi-Sverige(SE) (72) Gerhard Oskar Hentschel, Askim, Thore Carolusson, Göteborg, Ruotsi-Sverige(SE) (7*0 Leitzinger Oy (5*0 Menetelmä bakteriologisten näytteiden, erityisesti virtsanäytteiden stabiloimiseksi - Förfarande för stabilisering av bakteriologiska prover, i synnerhet urinproverSweden-Sweden (SE) 78021 ^ 7- ^ (71) Opus Chemical, Stora Mygatan 15, S-Ull 08 Gothenburg, Sweden-Sweden (SE) (72) Gerhard Oskar Hentschel, Askim, Thore Carolusson, Gothenburg, Sweden-Sweden (SE) (7 * 0 Leitzinger Oy (5 * 0 Method for stabilizing bacteriological samples, in particular urine samples - Förfarande för stabililisering av bacteriologiska prover, i synnerhet urinprover

Oheisen keksinnön kohteena on menetelmä bakteriologisten näytteiden, erityisesti virtsanäytteiden stabiloimiseksi, näytteiden säilyttämiseksi kuljetuksen aikana,The present invention relates to a method for stabilizing bacteriological samples, in particular urine samples, for storing samples during transport,

Boorihapon käyttö bakteriologisten näytteiden säilytyksessä on ollut tunnettua jo tämän vuosisadan alusta, mm. eläinlääketieteellisistä töistä, jotka ovat koskeneet pastöroidun maidon bakteriologista ja tuotantohygieenistä testiä. Näissä töissä on osoitettu mahdollisuus käyttää 1 %:sta boorihappoliuosta apuaineena kuljetuksen aikana bakteriologisiin laboratorioihin sekä näin saavutetut edut. Kokeissa käytettiin B. tuberculosis-bakteeria ja osoittautui, että tuberkeli-bakteerit eivät tuhoutuneet maitonäytteissä, jotka oli säilytetty 1 %:lla boorihapolla. Samalla tämä säilytystapa mahdollisti kauan kestävän näytteiden kuljetuksen ilman, että näytteissä tapahtui mitään ei-suotavia muutoksia, jotka olisivat vaikuttaneet laboratoriotutkimuksiin.The use of boric acid in the storage of bacteriological samples has been known since the beginning of this century, e.g. veterinary work relating to the bacteriological and production hygiene test of pasteurized milk. These works have demonstrated the possibility of using a 1% boric acid solution as an excipient during transport to bacteriological laboratories, as well as the advantages thus obtained. The experiments used B. tuberculosis and showed that the tubercle bacteria were not destroyed in milk samples preserved with 1% boric acid. At the same time, this method of storage allowed long-term transport of samples without any undesirable changes in the samples that would have affected laboratory studies.

2 63595 1920-luvun lopussa ei vielä oltu hyväksytty mahdollisuutta helpottaa bakteriologista laboratoriotyötä boorihapposäilytyksen avulla virtsanäytteiden bakteerianalyyseissä. Erittäin voimakkaasti on painotettu sitä, että epäillyissä virtsatieinfektioissa on välittömästi tutkittava virtsanäytteet bakteriologisesti, jotta vältyttäisiin bakteerikantojen liikakasvulta, huolimatta siitä, että boorihappoa voidaan käyttää esianalyyttiseti häiritsemättä muiden, parametrien mittauksia. Brucella abortus-tutkimuksissa on osoitettu, että liikakasvun välttämiseksi on mahdollista käyttää boorihappoa 1 %:na kuljetusaineena.2,63595 At the end of the 1920s, the possibility of facilitating bacteriological laboratory work by means of boric acid storage in bacterial analyzes of urine samples had not yet been accepted. It has been very strongly emphasized that in suspected urinary tract infections, urine samples must be examined bacteriologically immediately in order to avoid overgrowth of bacterial strains, despite the fact that boric acid can be used pre-analytically without interfering with measurements of other parameters. Brucella abortus studies have shown that it is possible to use 1% boric acid as a vehicle to avoid overgrowth.

Monissa eri tutkimuksissa, sekä ihmisillä että eläimillä, jotka ovat koskeneet bakteereiden kasvua ja sen estämistä eri väliteaineissa on käytetty boorihappoa. Monissa tieteellisissä töissä huomautetaan tästä huolimatta, että virtsan bakteriologiset tutkimukset on suoritettava välittömästi, jos säilyttäminen kylmässä (+4°C) ei ole mahdollista, ja mikäli kylmäsäilytys on mahdollista tällöinkin ainoastaan 48 tunnin aikana. Virtsanäytteiden hitaassa kuljetuksessa bakteriologisiin laboratorioihin esiintyvä liikakasvu on siis yhä ongelma. Eräässä 1960-luvun lopun työssä huomautetaan hieman yllättäen, että tutkimuksia, jotka koskevat boorihappoa säilytysaineena virtsanäytteiden kuljetuksessa, ei ole otettu huomioon ja vielä vähemmän tutkittu.Boric acid has been used in many different studies, both in humans and animals, on the growth of bacteria and its inhibition in various media. Nevertheless, many scientific papers point out that bacteriological examinations of urine must be carried out immediately if cold storage (+ 4 ° C) is not possible, and if cold storage is still possible only for 48 hours. Thus, overgrowth in the slow transport of urine samples to bacteriological laboratories is still a problem. A work in the late 1960s points out, somewhat surprisingly, that studies on boric acid as a preservative in the transport of urine samples have not been taken into account and even less studied.

Tässä työssä ilmoitetaan, että boorihapon konsentraatio on optimaati-sesti valmiissa kuljetettavaksi tarkoitetussa virtsanäytteessä 1,8 %, ja että esianalyyttinen aika ei saa ylittää 4 päivää.In this work, it is reported that the concentration of boric acid in the ready-to-transport urine sample is optimally 1.8%, and that the pre-analytical time should not exceed 4 days.

Huolimatta näistä lääketieteellisistä töistä ja huolimatta siitä, että boorihappo oli aikaisemmin tunnettu bakteereiden kasvun suhteen funktionaalisena säilytysaineena, tämä menetelmä on levinnyt vain vähän kansallisesti tai kansainvälisesti bakteriologisessa laboratoriotyössä.Despite these medical works and despite the fact that boric acid was previously known as a functional preservative for bacterial growth, this method has received little nationally or internationally in bacteriological laboratory work.

Tähän vähäiseen kiinnostukseen hyväksyä näennäisesti varma ja suhteellisen selvästi taloudellisempi kuljetusmenetelmä kuin kylmäkuljetus voidaan osoittaa kuitenkin monia syitä. Menetelmään liittyy suuria käytännön vaikeuksia, koska on mitattava hyvin pieniä määriä jauhetta, sillä tämä on kuljetettava hyvin pienissä kuljetusputkissa, ja koska boorihapolla on suhteellisen alhainen liukoisuus virtsaan. Jos jauhe il 3 63595 sitä paitsi liuotetaan veteen, jotta helpommin voitaisiin mitata täsmälliset tilavuudet, saadaan niin suuri tilavuus boorihappoliuosta ja virtsaa, että tämä on käytännössä kuljetuksissa mahdotonta. Jotta laboratoriossa voitaisiin ottaa virtsanäytteet, joissa on boorihappoa, ja boorihappoa sisältämättömät virtsanäytteet, tarvitaan ylimääräinen työvaihe, joka on käytännössä häiritsevä, koska keskitetyssä labora-toriodiagnostiikkassa työvaiheita on oltava niin vähän kuin mahdollista päivittäin tulevan suuren virtsanäytemäärän vuoksi (noin 500 per päivä suurehkossa laboratoriossa).However, many reasons can be shown for this low interest in adopting a seemingly safe and relatively clearly more economical method of transport than refrigerated transport. The method involves great practical difficulties because very small amounts of powder have to be measured, as this has to be transported in very small transport tubes, and because boric acid has a relatively low solubility in urine. Moreover, if the powder il 3 63595 is dissolved in water in order to facilitate the accurate measurement of accurate volumes, such a large volume of boric acid solution and urine is obtained that this is practically impossible during transport. In order to be able to take uric acid-containing and non-boric acid-free urine samples in the laboratory, an additional work step is required, which is practically annoying because in centralized laboratory diagnostics there are as few work steps as possible due to the large daily urine sample (approximately 500 per day).

Boorihapon liukoisuus veteen on: 0°C:ssa 2,66 g/100 g vettä 20°C:ssa 4,9 g/100 g vettä mikä tarkoittaa, että käytännössä ei voida toimia suuremmilla konsentraatioilla kuin 3-prosenttisilla liuoksilla, jotta vältettäisiin kiteytyminen lämpötilojen vaihdellessa. Mm. kustannussyistä on käytettävä mahdollisimman pieniä kuljetusyksiköltä, joiden tilavuus on 10 ml.The solubility of boric acid in water is: 2.66 g / 100 g of water at 0 ° C 4.9 g / 100 g of water at 20 ° C, which means that it is practically impossible to operate at concentrations higher than 3% solutions to avoid crystallization. when temperatures vary. For reasons of cost, for example, the smallest possible transport unit with a capacity of 10 ml must be used.

Kun käytetään 3-prosenttista boorihappoliuosta 9 ml:aan virtsaa on lisättävä 13 ml liuosta, jotta boorihapon konsentraatioksi saadaan 1,8 %, mikä tarvitaan säilytyksen aikaansaamiseksi. Tämä tarkoittaa, että näytteisiin lisätään paljon vettä ja että tilavuus tulee yli kaksinkertaiseksi.When a 3% boric acid solution is used, 13 ml of solution must be added to 9 ml of urine to give a boric acid concentration of 1.8%, which is necessary to achieve storage. This means that a lot of water is added to the samples and the volume more than doubles.

On osoittautunut, että säilyminen saadaan tehokkaammaksi lisäämällä boorihappoa, jos tämä on orgaanisena kompleksina.It has been shown that preservation is made more efficient by the addition of boric acid if this is an organic complex.

Koska boorihapon konsentraatio tässä kompleksissa on korkea, on täysin riittävää, että 9 ml:aan virtsaa lisätään 0,4 - 1,4 ml tai g. Tällä tavoin tilavuutta lisätään niin vähän, että voidaan käyttää standardisoituja kuljetusputkia.Since the concentration of boric acid in this complex is high, it is quite sufficient to add 0.4 to 1.4 ml or g to 9 ml of urine. In this way, the volume is increased so little that standardized transport pipes can be used.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista se, että näytteeseen lisätään boorihappokompleksia, jonka kaava on 4 63595 o o" oThe method according to the invention is characterized in that a boric acid complex of the formula 4 63595 o o "o is added to the sample.

R ^ B ^ H tai R B RHR 2 B 2 H or R B RH

[Χ0^ XoJ[Χ0 ^ XoJ

jossa R tarkoittaa: etyleeniglykolia, propaanidiolia-1,2, glyserolia, fruktoosia, mannitolia, sorbitolia tai muita veteen liukenevia dioksi- tai polyoksiyhdisteitä ja että kompleksia lisätään sellainen määrä, että boorihapon pitoisuus näytteessä on 0,2 - 1,4 paino-%, edullisesti 0,4 - 0,8 paino-%.wherein R represents: ethylene glycol, propanediol-1,2, glycerol, fructose, mannitol, sorbitol or other water-soluble dioxoxy or polyoxy compounds and that the complex is added in an amount such that the boric acid content of the sample is 0.2 to 1.4% by weight, preferably 0.4 to 0.8% by weight.

Jotta voitaisiin helpommin todeta, onko säilytysainetta lisätty, kompleksit voidaan värjätä metyleenisinisellä tai muulla sopivalla väriaineella, joka ei häiritse bakteriologista tutkimusta.To make it easier to determine whether a preservative has been added, the complexes can be stained with methylene blue or another suitable dye that does not interfere with bacteriological examination.

Seuraavissa esimerkeissä on kuvattu keksinnön mukaisesti käytettyjen boorihappokompleksien valmistus.The following examples describe the preparation of boric acid complexes used in accordance with the invention.

Esimerkki 1Example 1

100 paino-osaa etyleeniglykolia 17 paino-osaa boorihappoa BP100 parts by weight of ethylene glycol 17 parts by weight of boric acid BP

kuumennettiin 98°C:een, jolloin vettä lohkesi pois. Tämän jälkeen lämpötila nostettiin 112°C:een 4 minuutin aikana. Tällöin poistui 2 moolia vettä.was heated to 98 ° C whereupon the water split off. The temperature was then raised to 112 ° C over 4 minutes. This removed 2 moles of water.

Boorihappopitoisuus = 17,7 % pH väkevässä reaktiotuotteessa =2,5 pH 10-prosenttisessa vesiliuoksessa = 4,4Boric acid content = 17.7% pH in concentrated reaction product = 2.5 pH in 10% aqueous solution = 4.4

Esimerkki 2Example 2

124 paino-osaa glyserolia DAB 6 d = 1,23 17 paino-osaa boorihappoa BP124 parts by weight of glycerol DAB 6 d = 1.23 17 parts by weight of boric acid BP

kuumennettiin 110°C:een, jolloin reaktio alkoi ja 2 moolia vettä lohkesi pois. Reaktioseoksen vesipitoisuus nousi 11,3 %:sta 22,3 %:iin.heated to 110 ° C, at which point the reaction began and 2 moles of water split off. The water content of the reaction mixture increased from 11.3% to 22.3%.

i- 5 63595 Lämpötilaa nostettiin 3 minuutissa 129°C:een, minkä jälkeen lämmitys lopetettiin ja reaktiotuote sai jäähtyä.i-5 63595 The temperature was raised to 129 ° C in 3 minutes, after which the heating was stopped and the reaction product was allowed to cool.

Vesipitoisuus = 15,5 %Water content = 15.5%

Boorihappopitoisuus = 12,4 % pH väkevässä reaktiotuotteessa = 1,3 pH 10-prosenttisessa vesiliuoksessa = 3,9Boric acid content = 12.4% pH in concentrated reaction product = 1.3 pH in 10% aqueous solution = 3.9

Metyleenisinistä lisättiin niin, että sen konsentraatioksi tuli 5-50 ppm.Methylene blue was added to a concentration of 5-50 ppm.

Esimerkki 3 100 paino-osaa d-mannitolia 70 paino-osaa vettä 32 paino-osaa boorihappoa kuumennettiin 80°C:een, jolloin reaktio alkoi. Lämpötila nostettiin 7 minuutissa 112°C:een, jolloin poistui 2 moolia vettä. Boorihappopitoisuus = 10,8 % pH väkevässä reaktiotuotteessa = 0,85 pH 10-prosenttisessa vesiliuoksessa = 3,5Example 3 100 parts by weight of d-mannitol 70 parts by weight of water 32 parts by weight of boric acid were heated to 80 ° C, at which time the reaction began. The temperature was raised to 112 ° C in 7 minutes to remove 2 moles of water. Boric acid content = 10.8% pH in concentrated reaction product = 0.85 pH in 10% aqueous solution = 3.5

Tuote sai jäähtyä ja puristettiin sen jälkeen tableteiksi.The product was allowed to cool and then compressed into tablets.

Esimerkki 4 100 paino-osaa fruktoosia 50 paino-osaa vettä 36 paino-osaa boorihappoa kuumennettiin 80°C:een, minkä jälkeen lämpötila nostettiin 6 minuutissa 109°C:een, jolloin poistui 2 moolia vettä.Example 4 100 parts by weight of fructose 50 parts by weight of water 36 parts by weight of boric acid were heated to 80 [deg.] C., after which the temperature was raised to 109 [deg.] C. in 6 minutes to remove 2 moles of water.

Boorihappopitoisuus = 12,1 % pH väkevässä reaktiotuotteessa = 1,1 pH 10-prosenttisessa vesiliuoksessa = 4,2 Reaktiotuote puristettiin tableteiksi.Boric acid content = 12.1% pH in concentrated reaction product = 1.1 pH in 10% aqueous solution = 4.2 The reaction product was compressed into tablets.

Esimerkki 5 100 paino-osaa propaanidiolia-1,2 25 paino-osaa boorihappoa kuumennettiin 98°C:een, jonka jälkeen lämpötila nostettiin 10 minuutissa 160°C:een.Example 5 100 parts by weight of propanediol-1,2 25 parts by weight of boric acid were heated to 98 ° C, after which the temperature was raised to 160 ° C in 10 minutes.

Boorihappopitoisuus = 20 % 6 63595 pH väkevässä reaktiotuotteessa = 1,7 pH 10-prosenttisessa vesiliuoksessa =4,6 Värjättiin metyleenisinisellä.Boric acid content = 20% 6 63595 pH in concentrated reaction product = 1.7 pH in 10% aqueous solution = 4.6 Stained with methylene blue.

Esimerkin 2 mukaisesti valmistetulla boorihappo-glyseroli-kompleksil-la on tutkittu eri bakteerilajien yksittäistä herkkyyttä eri bakteerimäärillä ja näytteistä, jotka samanaikaisesti sisältävät monia eri bakteerikantoja, tutkimalla näytteet sekä ennen tavallisesti kyseeseen tulevaa kuljetustapaa (alle vuorokausi) ja sen jälkeen, osaksi myös näytteistä, joita on säilytetty kauemmin ennen viljelyä. Tarkoitus oli myös yksitellen tutkia tuotteeseen sisältyvät eri komponentit niiden antibakteerisen vaikutuksen suhteen sekä yrittää arvioida, kuinka suuria poikkeamia voidaan tehdä ohjeista, joita on annettu boorihappopitoisen säilytysvalmisteen lisätyn määrän tai virtsan määrän suhteen.The boronic acid-glycerol complex prepared according to Example 2 has been tested for the individual susceptibility of different bacterial species with different bacterial counts and samples containing many different bacterial strains simultaneously, both before and after the usual mode of transport (less than one day). has been stored longer before cultivation. It was also intended to examine the various components of the product one by one in terms of their antibacterial activity and to try to assess how large deviations can be made from the instructions given for the amount of boric acid-containing preservative added or the amount of urine.

On suoritettu kahden tyyppisiä kokeita: 1) Näytteitä on otettu bakteerivirtsaisuudesta kärsivistä potilaista. Osittain näytteet on ottanut laboratorion henkilökunta, osittain osastojen henkilökunta ja kuljetettu tavallista kuljetustietä laboratorioon. Tapauksissa, joissa laboratorion henkilökunta on suorittanut näytteidenoton ja kuljetuksen, näytteenottotekniikka ja kuljetus-aika on ollut täydellisessä valvonnassa. Näytteet on otettu pesun ja kuivauksen jälkeen nk. "mid-stream-näytteinä" ja viljelty tunnin kuluessa. Viljely on suoritettu veriagar-levyillä, drigalski-agarilla ja happosorbitoli-agarilla. Näytteet on kvantitoitu viljelyn jälkeen sarjalaimentamalla virtsanäyte keittosuolassa. Lajin määrittäminen on suoritettu tavanomaisella rutiinimenetelmällä ensin inkuboi-malla 18 tuntia 37°C:ssa.Two types of experiments have been performed: 1) Samples have been taken from patients with bacterial urination. Partly the samples were taken by the laboratory staff, partly by the department staff and transported by the usual transport route to the laboratory. In cases where sampling and transport have been performed by laboratory personnel, the sampling technique and transport time have been under complete control. After washing and drying, the samples are taken as so-called "mid-stream samples" and cultured within one hour. Culture has been performed on blood agar plates, drigalski agar and acid sorbitol agar. Samples are quantified after culture by serial dilution of a urine sample in saline. Species determination has been performed by a conventional routine method, first incubating for 18 hours at 37 ° C.

2) Eri kantojen testaus mahdollistettiin suorittamia 11a laboratoriokokeita kokeellisesti valmistetulla, bakteeripitoisella virtsalla. Kokeissa on käytetty kahdeksaa, virtsatieinfektioissa tavallista bakteerikantaa, so.:2) Testing of different strains was made possible by 11a laboratory experiments with experimentally prepared bacterial urine. Eight bacterial strains common in urinary tract infections have been used in the experiments, ie:

Escherichia coli KlebsiellaEscherichia coli Klebsiella

Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas mirabilisPseudomonas aeruginosa Pseudomonas mirabilis

IIII

77

Enterokokit 635 9 5Enterococci 635 9 5

Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Staphylococcus saprophyticusStaphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Staphylococcus saprophyticus

Erityisen herkkää koekantaa tarvitsevissa kokeissa on käytetty gonokokkeja.Gonococci have been used in experiments requiring a particularly sensitive test population.

Kokeet on suoritettu pääasiassa vertaamalla näytteitä, jotka on säilytetty kylmässä ja vastaavasti huoneen lämpötilassa, kun jälkimmäisessä tapauksessa on lisätty boori-glyserolia.The experiments have been performed mainly by comparing samples stored in the cold and room temperature, respectively, with the addition of boron-glycerol in the latter case.

Vertailuarvona on käytetty sitä kasvatustulosta, joka on saatu viljelemällä tunnin sisällä näytteenotosta.The reference result is the culture result obtained by culturing within one hour of sampling.

Kokeissa on käytetty osaksi puhdasta boorihappoa jauhemuodossa, osaksi eri konsentraatioina esimerkin 2 mukaista boorihappo-komplek-sia.The experiments use partly pure boric acid in powder form, partly different concentrations of the boric acid complex according to Example 2.

Kokeellinen bakteerivirtsaisuus-virtsa:Experimental bacterial urine:

Agarlevyiltä saaduista bakteeripesäkkeistä tehtiin liete fysiologiseen keittosuolaliuokseen. Kvantitatiivinen määritys suoritettiin niin, että bakteerimäärä saatiin välille noin 100 000 ja 10 miljoonaa/ml virtsaa sen jälkeen, kun liete oli lisätty infektoitumattomaan virtsaan.Bacterial colonies obtained from agar plates were slurried in physiological saline. The quantification was performed so that the bacterial count was obtained between about 100,000 and 10 million / ml of urine after the addition of the slurry to the uninfected urine.

TuloksetScore

Kokeet suoritettiin jauhemuodossa olevalla boorihapolla. 9 ml:aan virtsaa lisättiin 0,1 g boorihappoa. Käytetyt koekannat on esitetty taulukossa 1.The experiments were performed with boric acid in powder form. To 9 ml of urine was added 0.1 g of boric acid. The test strains used are shown in Table 1.

63595 863595 8

Aika, minkä jäi- <1 h 24 h 2h boori- 48 h 48 h boori- keen kasvatettu +4°C happo , .op happoTime to ice <1 h 24 h 2h boron 48 h 48 h boron grown + 4 ° C acid, .op acid

+22 C * L +22ÖC+22 C * L + 22 ° C

Enterococci 6,7 6,3 6,3 6,2 6,2Enterococci 6.7 6.3 6.3 6.2 6.2

Proteus mirabilis 6,3 6,3 6,3 6,1 6,1Proteus mirabilis 6.3 6.3 6.3 6.1 6.1

Staphylococcus aureus 5,8 5,9 5,7 5,9 5,8Staphylococcus aureus 5.8 5.9 5.7 5.9 5.8

Pseudomonas 6,2 6,1 6,0 6,0 5,9Pseudomonas 6.2 6.1 6.0 6.0 5.9

Klebsiella 6,1 5,8 6,2 6,0 6,7 E. coli 5,5 5,5 5,3 5,2 5,1Klebsiella 6.1 5.8 6.2 6.0 6.7 E. coli 5.5 5.5 5.3 5.2 5.1

Taulukko 1 (bakteereiden lukumäärään 10 log)Table 1 (number of bacteria 10 log)

Menetelmän kuvauksen mukaisesti valmistettu, bakteeripitoinen virtsa tutkittiin kvantitatiivisesti ja jaettiin kahteen osaan. Toinen osa laitettiin +4°C:een ja toiseen osaan lisättiin boorihappoa ja säilytettiin huoneen lämpötilassa. Kvantitatiivinen määritys suoritettiin 24 ja 48 tunnin kuluttua. Taulukosta ilmenee, että mitään huomattavia poikkeamia ei esiinny, kun virtsaa on säilytetty kylmässä tai huoneen lämpötilassa, jolloin jälkimmäisessä tapauksessa on lisätty boorihappoa.Bacterial urine prepared according to the description of the method was quantified and divided into two parts. One part was placed at + 4 ° C and the other part was treated with boric acid and stored at room temperature. Quantitative determination was performed after 24 and 48 hours. The table shows that no significant deviations occur when the urine has been stored cold or at room temperature, in which case boric acid has been added.

Potilasnäytteet: Näyteet otettiin kuudelta pitkäaikaishoidossa olevalta geriatriselta potilaalta. Näytteet viljeltiin tunnin kuluessa, minkä jälkeen näytteet käsiteltiin samalla tavoin kuin edellä. Taulukosta 2 ilmenee, että sekä jäähdytettynä että boori-hapossa säilytettyjen näytteiden poikkeamat ovat pienempiä kuin 10-potenssi.Patient samples: Samples were taken from six geriatric patients in long-term care. The samples were cultured for one hour, after which the samples were treated in the same manner as above. Table 2 shows that the deviations of the samples stored both refrigerated and in boric acid are less than 10-power.

1 h 24 h 24 h boori" 48 h 4 h boori- las jälkeen , ,o~ u Λ ,1 h 24 h 24 h boron "after 48 h 4 h boron glass,, o ~ u Λ,

Viljelty__+4 C +<°C ^apgo 1. E.coli 7,5 7,7 7,7 7,6 7,6 2. E.coli 7,1 6,9 6,9 7,1 6,6 3. Proteus 6,9 6,5 7,0 7,0 7,2 4. Proteus 7,4 7,4 7,2 7,3 7,1 5. Proteus 6,3 5,9 6,3 5,6 6,4 6. Proteus 6,9 6,8 6,7 6,8 6,7Cultured __ + 4 C + <° C ^ apgo 1. E.coli 7.5 7.7 7.7 7.6 7.6 2. E.coli 7.1 6.9 6.9 7.1 6.6 3. Proteus 6.9 6.5 7.0 7.0 7.2 4. Proteus 7.4 7.4 7.2 7.3 7.1 5. Proteus 6.3 5.9 6.3 5, 6 6.4 6. Proteus 6.9 6.8 6.7 6.8 6.7

Taulukko 2 9 63595Table 2 9 63595

Jotta voitaisiin selvittää, onko itse glyserolilla ehkäisevä vaikutus bakteereihin, suoritettiin seuraava koe;In order to determine whether glycerol itself has a inhibitory effect on bacteria, the following experiment was performed;

Viisitoista bakteerivirtsaisuudesta kärsivästä potilaasta saatua tuoretta bakteerieritettä lisätiin virtsaan, joka tutkittiin kvantitatiivisesti ja jaettiin kolmeen osaan, joista yksi säilytettiin +4°C;ssa, toinen huoneen lämpötilassa lisäämällä boorihappoa ja kolmas 22°C;ssa lisäämällä glyserolia. Testatut bakteerikannat ja havaittujen muutosten 10-logaritmit on esitetty taulukossa 3. Yhdessäkään tapauksessa glyserolin lisääminen ei ole estänyt bakteereiden kasvua. Kylmässä säilytetyissä ja huoneen lämpötilassa säilytetyissä näytteissä, joihin jälkimmäisiin oli lisätty boorihappoa, muutokset olivat kaikissa tapauksissa pienempiä kuin 10-potenssi.Fresh bacterial secretions from fifteen patients with bacterial urination were added to the urine, which was quantitatively examined and divided into three portions, one stored at + 4 ° C, one at room temperature with boric acid, and the third at 22 ° C with glycerol. The bacterial strains tested and the 10-logarithms of the changes observed are shown in Table 3. In neither case did the addition of glycerol inhibit bacterial growth. In the samples stored cold and stored at room temperature to which boric acid had been added to the latter, the changes were in all cases less than 10-power.

Jotta voitaisiin saada selville, voidaanko negatiivinen vaikutus aikaansaada yhdistämällä esimerkin 2 mukainen boorihappokompleksi ja kylmässä säilyttäminen, suoritettiin seuraava koe: Virtsaan lisättiin viittä erilaista bakteerilajia. Näytteet tutkittiin kvantitatiivisesti ja jaettiin osiin. Käsittelemätöntä virtsaa säilytettiin -20°C;ssa. Esimerkin 2 mukaista boorihappokompleksia lisättiin toiseen näyte-erään ja säilytettiin sekä 24°C;ssa että huoneen lämpötilassa.In order to find out whether the negative effect can be obtained by combining the boronic acid complex of Example 2 and cold storage, the following experiment was performed: Five different bacterial species were added to the urine. The samples were examined quantitatively and divided into portions. Untreated urine was stored at -20 ° C. The boronic acid complex of Example 2 was added to the second batch and stored at both 24 ° C and room temperature.

10 6359510 63595

Aika, minkä jälkeen viljelty- 24 h boori- 24 h glyseroli 1 h 24nh happo ,„°rTime after which cultured- 24 h boron- 24 h glycerol 1 h 24nh acid, „° r

+4°C +22°C +22 C+ 4 ° C + 22 ° C +22 C

Proteus 1 5,8 5,85 6,0 >9Proteus 1 5.8 5.85 6.0> 9

Proteus 2 5,7 5,8 5,9 >9Proteus 2 5.7 5.8 5.9> 9

Proteus 3 6,5 6,5 7,1 8,15Proteus 3 6.5 6.5 7.1 8.15

Proteus 4 8,05 8,05 8,25 8,20Proteus 4 8.05 8.05 8.25 8.20

Proteus 5 8,2 8,0 8,25 8,7Proteus 5 8.2 8.0 8.25 8.7

Proteus 6 6,05 6,3 6,15 >9Proteus 6 6.05 6.3 6.15> 9

Klebsiella 1 4,75 4,4 4,55 >9Klebsiella 1 4.75 4.4 4.55> 9

Klebsiella 2 6,7 6,7 6,5 >9Klebsiella 2 6.7 6.7 6.5> 9

Klebsiella 3 7,3 8,3 7,5 8,2Klebsiella 3 7.3 8.3 7.5 8.2

Klebsiella 4 6,05 5,7 5,45 >9Klebsiella 4 6.05 5.7 5.45> 9

Klebsiella 5 6,8 6,75 6,9 7,5Klebsiella 5 6.8 6.75 6.9 7.5

Pseudomonas 1 7,5 7,0 7,3 7,8Pseudomonas 1 7.5 7.0 7.3 7.8

Pseudomonas 2 7,8 8,0 7,3 8,2Pseudomonas 2 7.8 8.0 7.3 8.2

Enterococci 5,35 4,4 5,5 >9 E. coli 7,7 7,7 7,8 8,05Enterococci 5.35 4.4 5.5> 9 E. coli 7.7 7.7 7.8 8.05

Taulukko 3Table 3

Bakteeri Siirroste Boorihappo-glyserolikomp- , leksi (esim. 2 mukainen)Bacterial Inoculum Boric Acid-Glycerol Complex (e.g. according to 2)

___18 h +4°C 18 h +22°C_-20°C___18 h + 4 ° C 18 h + 22 ° C_-20 ° C

E. coli 5,7 5,5 5,8 3,5E. coli 5.7 5.5 5.8 3.5

Prot. mirabilis 6,5 6,0 6,2 2,4Prot. mirabilis 6.5 6.0 6.2 2.4

Pseudomonas 6,9 6,1 6,3 3,9Pseudomonas 6.9 6.1 6.3 3.9

Enterococci 6,5 6,0 6,0 4,2Enterococci 6.5 6.0 6.0 4.2

Staph, aureus 6,0 6,0 6,0 5,7Staph, aureus 6.0 6.0 6.0 5.7

Taulukko 4 li 11 63595Table 4 li 11 63595

Taulukosta käy ilmi, että kylmässä säilyttämisen ja esimerkin 2 mukaisen boorihappo-glyseroli-kompleksin yhdistäminen ei anna poikkeavia tuloksia 18-tuntisen säilytyksen jälkeen. Virtsan jäädyttäminen antaa täysin epäluotettavia kvantitatiivisia tuloksia. Gram-nega-tiivisilla kannoilla poikkeamat ovat suurempia kuin gram-positiivi-silla kokeilla.The table shows that the combination of cold storage and the boronic acid-glycerol complex of Example 2 does not give abnormal results after 18 hours of storage. Freezing urine gives completely unreliable quantitative results. Gram-negative strains have larger deviations than gram-positive experiments.

Jotta saataisiin selville glyserolin vaikutus bakteereihin, suoritettiin koe erityisen herkällä kannalla:In order to find out the effect of glycerol on bacteria, an experiment was performed on a particularly sensitive strain:

Verrattiin virtsaa, johon oli lisätty glyserolia, ja virtsaa ilman glyserolilisäystä. 9 ml:aan virtsaa lisättiin 0,65 ml glyserolia. Gonokokkeja lisättiin sekä tähän virtsaan että glyserolia sisältämättömään virtsaan. Kvantitatiivinen määritvs suoritettiin yhden, kahden, neljän ja kuuden tunnin kuluttua. Taulukossa 5 on esitetty alkuaan lisättyjen gonokokkien se prosentuaalinen osuus, joka voidaan eristää uudelleen vastaavan ajan kuluttua. Taulukosta käy ilmi, että gonokokit kuolevat virtsassa nopeasti ja että niitä ei voi löytää neljä tuntia lisäyksen jälkeen, kun taas glyserolin lisääminen vaikuttaa sen, että gonokokkeja voidaan eristää kuuden tunnin kuluttua.Urine supplemented with glycerol and urine without glycerol supplementation were compared. To 9 ml of urine was added 0.65 ml of glycerol. Gonococci were added to both this urine and glycerol-free urine. Quantitative determination was performed after one, two, four and six hours. Table 5 shows the percentage of gonococci initially added that can be re-isolated after the corresponding time. The table shows that gonococci die rapidly in the urine and cannot be found four hours after addition, whereas the addition of glycerol affects that gonococci can be isolated after six hours.

Testiorganismi Tuntia Virtsa, jossa 0,65 ml v. .Test organism Hours Urine with 0.65 ml v.

glyserolia/9 ml virtsaglycerol / 9 ml urine

Gonococci 1 100 % 80 % 2 100 % 60 % 4 40 % 1 % 6 10 % 1 %Gonococci 1 100% 80% 2 100% 60% 4 40% 1% 6 10% 1%

Taulukko 5Table 5

Suoritettiin kokeita lisäämällä eri väriaineita. Loffler'in metyleeni-sinistä (0,5 g/1000 ml) laimennettiin ja lisättiin virtsaan. Paljas silmä kykenee selvästi havaitsemaan värin konsentraatiossa 0,01 ml/ 9 ml virtsaa. Jotta saataisiin selville metyleenisinisen vaikutus bakteereihin, suoritettiin koe kymmenen kertaa vahvemmalla liuoksella. Näytteeseen lisättiin boorihappo-glyseroli-kompleksia, jossa oli metyleenisinistä, ja kompleksia ilman metyleenisinistä. Taulukosta 6 käy ilmi, että metyleenisinisen lisääminen ei häirinnyt testattujen 63595 12 bakteerikantojen kvantitatiivista tutkimusta.Experiments were performed by adding different dyes. Loffler's methylene blue (0.5 g / 1000 mL) was diluted and added to the urine. The naked eye is able to clearly detect color at a concentration of 0.01 ml / 9 ml of urine. To find out the effect of methylene blue on bacteria, the experiment was performed with a ten times stronger solution. A boric acid-glycerol complex with methylene blue and a complex without methylene blue were added to the sample. Table 6 shows that the addition of methylene blue did not interfere with the quantitative study of the 63595 12 bacterial strains tested.

Siirroste 24 h kuluttua, kun Ilman metyleeni- mukana metyleeni- sinistä _sinistä +22°C_+22°C_ E. Coli 5,6 5,5 5,3Inoculation after 24 h when Without methylene blue methylene blue + 22 ° C_ + 22 ° C_ E. Coli 5.6 5.5 5.3

Proteus mirabilis 6,0 5,9 6,0Proteus mirabilis 6.0 5.9 6.0

Pseudomonas aeruginosa 6,0 5,9 5,9Pseudomonas aeruginosa 6.0 5.9 5.9

Enterococci 6,2 6,0 5,9Enterococci 6.2 6.0 5.9

Staph.aureus_6,0_6,0_6,2_Staph.aureus_6,0_6,0_6,2_

Taulukko 6Table 6

Virhemarginaalit;Error margins;

Jotta saataisiin selville, kuinka paljon voidaan poiketa menetelmän kuvauksessa mainitusta virtsamäärästä ja vastaavasti boorihappo-kompleksi-lisäyksen määrästä, suoritettiin koe eri konsentraatioilla.In order to find out how much can be deviated from the amount of urine mentioned in the description of the method and the amount of boric acid complex addition, respectively, the experiment was performed at different concentrations.

Kokeessa käytettiin virtsaa, johon oli lisätty E. coli-bakteereita. Boorihapon sopivaa konsentraatiota koskevien aikaisempien raporttien tulosten perusteella ja suorittamalla kokemukseen perustuvia säätötoimenpiteitä valmistettiin boorihappo-glyserolikompleksi, joka sisälsi 12,4 % boorihappo. Normaliin virtsanäytemäärään (9 ml) lisättiin yhdeksän eri määrää välillä 0,4-0,8 ml (0,65 ml vastaa 0,82 % boori-happoa). Näytteitä säilytettiin 24 tuntia +22°C:ssa. Kvantitatiivinen tutkimus suoritettiin osaksi yli 5 kuukautta vanhalla liuoksella, osaksi juuri valmistetulla liuoksella. Laimennusalueella muutokset olivat pienempiä kuin 10-potenssi. Boorihappokompleksi oli esipakattu annospussiin. Valitsemalla 0,65 ml per annospussi ei todennäköisesti tuloksiin vaikuta se, että huolimattomuudesta tyhjennetään sisällöstä kolmasosa virtsanäytteeseen ja näin saadaan alhaisempi boorihappokon-sentraatio kuin on tarkoitus. Menetelmän tarkkuus ei kärsi siitä, että konsentraatio jonkin verran kasvaa kaadettaessa putkeen liian vähän virtsaa. Laskelmien perusteella menetelmä sallii senkin, että suositellusta 9 mlssta jätetään lisäämättä 3 - 4 ml.Urine supplemented with E. coli was used in the experiment. Based on the results of previous reports on the appropriate concentration of boric acid and performing experience-based control procedures, a boric acid-glycerol complex containing 12.4% boric acid was prepared. To the normal volume of urine sample (9 ml) was added nine different volumes between 0.4-0.8 ml (0.65 ml corresponds to 0.82% boric acid). Samples were stored for 24 hours at + 22 ° C. The quantitative study was performed partly with a solution more than 5 months old, partly with a freshly prepared solution. In the dilution range, the changes were less than 10-power. The boric acid complex was prepackaged in a sachet. Choosing 0.65 ml per sachet is unlikely to be affected by the fact that negligence empties one-third of the contents into the urine sample, resulting in a lower boric acid concentration than intended. The accuracy of the method is not compromised by the fact that the concentration increases somewhat when too little urine is poured into the tube. Based on the calculations, the method also allows 3 to 4 ml of the recommended 9 ml to be omitted.

Loppukoe:Final exam:

Loppukoe suoritettiin näytteillä, jotka oli otettu bakteerivirtsaisuu- 13 63595 desta kärsivistä potilaista. Kaikki näytteidenotot suoritettiin lisäämällä liuosta annospussista ja näytteet kuljetettiin tavanomaisella laboratoriorutiinilla. Näytteiden toiseen osaan lisättiin boorihappo-glyseroli-kompleksia ja säilytettiin huoneen lämpötilassa. Toinen osa jäädytettiin ja kuljetettiin kylmänä. Molempia näytetyyppejä säilytettiin 24 tuntia, minkä jälkeen suoritettiin kvantitatiivinen tutkimus.The final experiment was performed on samples taken from patients with bacterial urinary incontinence. All sampling was performed by adding the solution from the sachet and the samples were transported according to the usual laboratory routine. To the second portion of the samples was added boric acid-glycerol complex and stored at room temperature. The other part was frozen and transported cold. Both sample types were stored for 24 hours, after which a quantitative study was performed.

Tulokset on esitetty taulukossa 7._The results are shown in Table 7._

Potilas Syntymäaika Suku- Bakteeri Bakteereiden määrä/ml virtsaa n:o puoli boorihappo-glyseroli-kompleksi _+22°C_+4°C_ 1 96 10 16 N E. coli 6,80 6,86 2 90 04 13 M Klebsiella 7,67 7,48 3 86 03 30 N E. coli 8,42 8,20 4 94 09 06 N Staph.aureus 6,60 7,00Patient Date of birth Sex Bacteria Bacteria count / ml urine No. half boric acid-glycerol complex _ + 22 ° C_ + 4 ° C_ 1 96 10 16 N E. coli 6.80 6.86 2 90 04 13 M Klebsiella 7, 67 7.48 3 86 03 30 N E. coli 8.42 8.20 4 94 09 06 N Staph.aureus 6.60 7.00

Proteus 6,23 6,69 E. coli . 6,90 7,28 5 07 30 18 N E. coli 6,40 6,76 6 93 12 25 N E. coli 3,30*) 2,00*) 7 96 10 16 N E. coli 7,50 7,65 8 98 10 29 N Enterococci 3,90*) 3,60*) 9 91 02 25 M Enterococci 5,17 5,11Proteus 6.23 6.69 E. coli. 6.90 7.28 5 07 30 18 N E. coli 6.40 6.76 6 93 12 25 N E. coli 3.30 *) 2.00 *) 7 96 10 16 N E. coli 7.50 7 , 65 8 98 10 29 N Enterococci 3.90 *) 3.60 *) 9 91 02 25 M Enterococci 5.17 5.11

Proteus 6,20 6,00 10 92 12 11 M Klebsiella 7,59 8,36 11 93 04 13 N E. coli 8,15 8,34 12 01 10 05 M Proteus 4,85 5,96Proteus 6.20 6.00 10 92 12 11 M Klebsiella 7.59 8.36 11 93 04 13 N E. coli 8.15 8.34 12 01 10 05 M Proteus 4.85 5.96

Enterococci 4,15**) 4,11**)Enterococci 4.15 **) 4.11 **)

Difteria sauvoja 8,04 8,00 13 97 11 05 N Proteus 6,48 7,70Diphtheria rods 8.04 8.00 13 97 11 05 N Proteus 6.48 7.70

Enterococci 5,90 5,78Enterococci 5.90 5.78

Klebsiella 7,18 7,08 14 N E. coli 8,07 8,17 15 87 02 06 M Enterococci 7,47 7,47Klebsiella 7.18 7.08 14 N E. coli 8.07 8.17 15 87 02 06 M Enterococci 7.47 7.47

Proteus mirabilis 6,69 6,69Proteus mirabilis 6.69 6.69

Proteus vulgaris 7,77 7,77 _Staph, epidermidis 7,30_5,60Proteus vulgaris 7.77 7.77 _Staph, epidermidis 7.30_5.60

Taulukko 7. Bakteereiden lukumäärän 10 log. sen jälkeen, kun 9 ml virtsanäytettä, jossa oli 0,65 ml boorihappo-glyseroli-kompleksia eli 0,82 % boorihappoa, säilytettiin huoneen lämpötilassa verrattuna virtsaan, jota säilytettiin +4°C:ssa.Table 7. Number of bacteria 10 log. after 9 ml of a urine sample containing 0.65 ml of boric acid-glycerol complex or 0.82% boric acid was stored at room temperature compared to urine stored at + 4 ° C.

14 63595 ’ Ei huomattavaa bakteerivirtsaisuutta14 63595 ’No significant bacterial urination

Luultavasti ei huomattavaa bakteerivirtsaisuuttaProbably no significant bacterial urination

Bakteriologiseen viljelyyn tarkoitettujen näytteiden kuljetuksessa esiintyy suuria vaikeuksia. Jos viljely ei tapahdu lyhyen ajan kuluessa näytteen otosta, tapahtuu ei-suotavia muutoksia. Muutokset voidaan estää suorittamalla kuljetus kylmässä. Näytteiden jäähdyttämiseen voi joskus liittyä näytteen jäätyminen, joka on haitallista monille bakteerilajeille. Jäähdytysmenetelmä on kömpelö ja epätaloudellinen. Jo aikaisemmin on osoitettu boorihapon käyttö virtsanäytteiden säilytysaineena ja tämä on vahvistettu uusilla kokeilla. Jauhemaisen boorihapon haitat ovat käynnistäneet kokeet käyttää boorihappoa liuoksena. Esimerkin 2 mukaisesti on valmistettu boori-happo-glyseroli-kompleksi ja lisätty metyleenisinistä, jotta lisäys voitaisiin nähdä näytteessä. Sekä laboratoriomittaiset että kliiniset näytetutkimukset ovat osoittaneet, että keksinnön mukaisella seoksella on haluttu vaikutus. Kahden vuorokauden aikana näytteissä ei ole esiintynyt muutoksia. Testauksen kohteena on ollut suuri joukko erilaisia bakteerilajeja, jotka ovat ajankohtaisia virtsatieinfektioiden etiologiassa. Millään komponentilla ei ole osoittaunut olevan käytetyssä konsentraatiossa mitään antibakteerista vaikutusta. Tuotteen väärinkäytön varmuusmarginaalien arviointi on osoittanut, että todennäköisesti voidaan sietää 30-prosenttinen väärinannostus, sekä ylös- että alaspäin, suositellusta konsentraatiosta.There are major difficulties in transporting samples for bacteriological culture. If the culture does not take place within a short time after sampling, undesirable changes occur. Changes can be prevented by performing cold transport. Cooling of samples can sometimes involve sample freezing, which is detrimental to many bacterial species. The cooling method is clumsy and uneconomical. The use of boric acid as a preservative in urine samples has already been demonstrated in the past and this has been confirmed by new experiments. Disadvantages of powdered boric acid have triggered experiments to use boric acid as a solution. According to Example 2, a boron-acid-glycerol complex was prepared and added from methylene blue so that the addition could be seen in the sample. Both laboratory-scale and clinical sample studies have shown that the composition of the invention has the desired effect. There have been no changes in the samples for two days. A large number of different bacterial species that are topical in the etiology of urinary tract infections have been tested. No component has been shown to have any antibacterial effect at the concentration used. The assessment of safety margins for product misuse has shown that a 30% misdose, both up and down, of the recommended concentration is likely to be tolerated.

Tuotteen konsentraatio ei sido mihinkään erityiseen putkityyppiin vaan voidaan joustavasti käyttää niitä näytetilavuuksia ja putkityyp-pejä, joita käytetään eri laboratorioissa.The concentration of the product does not bind to any particular tube type but the sample volumes and tube types used in different laboratories can be flexibly used.

Ilmeistä on, että tämä menetelmä on selvästi joustavampi kuin kylmä-kuljetus ja että sillä päästään eroon vaarasta, että jäähtyminen vahingoittaa näytteitä. Kuljetuksen kannalta menetelmä tarjoaa suuremman joustavuuden ja merkittävästi alhaisemmat kustannukset. Käytännössä on osoittautunut, että kylmäkuljetus on erittäin vaikea suorittaa oikein.It is obvious that this method is clearly more flexible than cold transport and that it eliminates the risk of cooling damaging the samples. In terms of transportation, the method offers greater flexibility and significantly lower costs. In practice, it has proven to be very difficult to carry out refrigerated transport correctly.

I·I ·

Claims (4)

63595 1563595 15 1. Menetelmä bakteriologisten näytteiden, erityisesti virtsanäytteiden stabiloimiseksi, näytteiden säilyttämiseksi kuljetuksen aikana, tunnettu siitä, että näytteeseen lisätään boorihappokomplek-sia, jonka kaava on ^°\ /°l r^°x /\" R B H tai R 'R H 1^0^ ^o] jossa R tarkoittaa: etyleeniglykoliä, propaanidiolia-1,2, glyserolia, fruktoosia, mannitolia, sorbitolia tai muita veteen liukenevia dioksi- tai polyoksiyhdisteitä ja että kompleksia lisätään sellainen määrä, että boorihapon pitoisuus näytteessä on 0,2 - 1,4 paino-%, edullisesti 0,4 - 0,8 paino-%.A method for stabilizing bacteriological samples, in particular urine samples, during storage of samples, characterized in that a boric acid complex of the formula ^ R \ or ° lr ^ ° x / \ "RBH or R 'RH 1 ^ 0 ^ ^ o] wherein R represents: ethylene glycol, propanediol-1,2, glycerol, fructose, mannitol, sorbitol or other water-soluble dioxane or polyoxy compounds and that the complex is added in an amount such that the boric acid content of the sample is 0.2 to 1.4% by weight. %, preferably 0.4 to 0.8% by weight. 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että näytteeseen lisätään boorihappokompleksin seosta.A method according to claim 1, characterized in that a mixture of boric acid complex is added to the sample. 3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään sellaista boorihappokompleksia, joka sisältää värilisäainetta.Process according to Claim 1 or 2, characterized in that a boric acid complex containing a color additive is used. 4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että värilisäaineena käytetään metyylisinistä 5-50 ppm.Process according to Claim 3, characterized in that 5 to 50 ppm of methyl blue are used as the color additive.