DE2906730A1 - MEANS FOR THE PRESERVATION OF BACTERIAL SAMPLES AND METHODS FOR THEIR PRODUCTION - Google Patents
MEANS FOR THE PRESERVATION OF BACTERIAL SAMPLES AND METHODS FOR THEIR PRODUCTIONInfo
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Description
Patentanwälte Dr-!nj Waller Abitz Dr. r;::-r F. M ο rf Dipl.-h:;·;. ';A. Grifcchneder 8 Miinciien 86, Eüenzenauerstr. 28Patent attorneys Dr-! Nj Waller Abitz Dr. r; :: - r F. M ο rf Dipl.-h:; · ;. '; A. Grifcchneder 8 Miinciien 86, Eüenzenauerstr. 28
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Opus Chemical AB Stora Nygatan 15, S-411 08 Göteborg, SchwedenOpus Chemical AB Stora Nygatan 15, S-411 08 Gothenburg, Sweden
Mittel für die Preservierung von Bakterieproben Means for the preservation of bacterial samples und and Verfahren für deren Herstellung.Process for their manufacture.
Die vorliegande Erfindung bezieht sich auf funktionelle Preserv/ierungsmi ttel mit Einwirkung au,f den Bakterienzuiuachs bei bakteriologischen Laboratoriumuntersuchungen, u/obei orgdnischö Eiorsäurekomplexe zur Anwendung kommen, worzugsujQise zur Anwendung als Zusatz für Transportmittel.The present invention relates to functional Preservation agent with action on the bacterial additives in bacteriological laboratory tests, u / whether organic acid complexes are used, worzugujQise for use as an additive for means of transport.
Die Anwendung von Borsäure für die Preservierung vonThe application of boric acid for the preservation of
^1 A mm ^ 1 A mm
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bakteriologischen Proben war bereits am Anfang des neunzehnten Jahrhunderts bekannt, u.a. durch veterinärmedizinische Arbeiten mit bakteriologischan und produktiqnshjigienischen Untersuchungen an pasteurisierter Milchj, ro die Möglichkeit für und der Vorteil mit der Anwendung von einprozentiger Borsäurelösung als Transportmittel für bakteriologische Laboratoriumproben nachgewiesen wurde. In diesen Versuchen wurde Β,-Tuberkulosis angewendet, und es hat sich gezeigt, dass die Tuberkelbakterien in diesen Miichproben nicht zerstört wurden, weiche Milchproben mit einprozentiger Borsäure konserviert wurden und gleichzeitig wie diese Konservierung die Möglichkeit mitsich führte, die Proben während eines längeren Zeitraumes zu transportieren, ohne dass die Proben unerwünschte Veränderungen erlitten,, die mit der Examination im Laboratorium interferierten» bacteriological samples were already known at the beginning of the nineteenth century, including veterinary samples Working with bacteriological and productive aspects Studies on pasteurized milkj, ro the possibility and the advantage of using one percent boric acid solution as a means of transport has been proven for bacteriological laboratory samples. In these experiments Β, tuberculosis was used, and it has been shown that the tubercle bacteria were not destroyed in these micro-samples, using soft milk samples one percent boric acid were preserved and at the same time how this preservation led to the possibility of to transport the samples for a longer period of time without the samples causing undesired changes suffered "who interfered with the examination in the laboratory"
Die Möglichkeit eintjr Erleichterung der bakteriologischen Laboratoriumsarbeit bei der Bakterienanalyse von Urinproben mit Hilfe von Borsäurekonservierung, war Ende 1920 noch nicht angenommen. Die Bedeutung, Urinproben bei suspekten Harnleiterentzündungen unmittelbar bakteriologisch examinieren zu können, um ein Ueberwachstum der Bakterienstämme im grössten Ausmasse zu vermeiden, wurde - trotzdem, dass Borsäure preanalytisch ohne grössere Störungen der Messungen anderer Parameter angewendet werden kann - ausserordentlich stark unterstrichen. Die Möglichkeit^ Borsäure als einprozentiges Transportmittel anwenden zu können, um dadurch das Ueberwachstum bei Untersuchungen von Brusella Abortus ist bewiesen worden.The possibility of a bacteriological relief Laboratory work on the bacterial analysis of urine samples with the help of boric acid preservation was still in progress at the end of 1920 not accepted. The importance of directly bacteriologically examining urine samples in suspicious ureter inflammation to be able to overgrowth of the bacterial strains It was avoided to the greatest possible extent that boric acid was used preanalytically without major interference with the measurements other parameters can be applied - extraordinary strongly underlined. The possibility of using boric acid as a one-percent means of transport to thereby the overgrowth in studies of Brusella abortus has been proven.
Borsäure ist bei mehreren verschiedenartigen Studien zurBoric acid is used in several diverse studies
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Anwandung gekommen, humane iuie auch animale, bei Bakterienwachstum und Hemmen v.on diesen in verschiedenen Vehikeln. Trotz dessen wurden in mehreren u/issenschaf tlichen Arbeiten darauf hingewiesen, dass bakteriologische Untersuchungen von Urin (Harnsäure) unmittelbar durchgeführt werden müssen, wenn nicht die Möglichkeit einer l/eru/ahrung bei Kälte (+40C) gegeben ist und in diesem Falle nur mährend einer Zeitdauer von etwa 48 Stunden. Das Problem mit dem Ueberu/achstum bei langsamem Transport der Urinproben zum bakteriologischen Laboratorium besteht also fortwährend. In einer wissenschaftlichen Arbeit vom Ende des Jahres 1960, wurde etwas überraschend darauflhingewiesen, dass beim Studium der Borsäure als Konservierungsmittel, bei Urintransporten nicht beachtet und noch weniger untersucht wurde. In dieser Arbeit wurde auch mitgeteilt, dass die optimale Borsäurekonzentration in einer fertiggestellten Urintransportprobe 1,8 % sein soll, und dass die preanalytische Zeitspanne vier Tage nicht überschreiten sollte.It has been used, human iuie also animal, for bacterial growth and inhibition of these in various vehicles. In spite of this, it has been pointed out in several scientific studies that bacteriological tests of urine (uric acid) must be carried out immediately, if there is no possibility of a test in cold (+4 0 C) and in this case only for a period of about 48 hours. The problem of excessive growth when the urine samples are slowly transported to the bacteriological laboratory therefore persists. In a scientific paper from the end of 1960, it was pointed out, somewhat surprisingly, that boric acid as a preservative was neglected and even less studied during the study of urine transport. In this work it was also stated that the optimal boric acid concentration in a finished urine transport sample should be 1.8 % and that the preanalytical period should not exceed four days.
Trotz dieser wissenschaftlichen, medizinischen Arbeiten und trotz dessen, dass Borsäure früher als funktionelles Konservierungsmittel mit Hinsicht auf den Bakterienzuwachs vorbekannt war, ist diese Methode bei bakteriologischen Laboratoriumsarbeiten sowohl national wie international wenig verwendet wordenDespite this scientific, medical work and despite the fact that boric acid used to be a functional preservative with regard to bacterial growth was previously known, this method is used in bacteriological laboratory work both nationally and internationally little used
Mehrere Gründe können jedoch für das kleine Interesse, diese anscheinend sichere und relativ betrachtet bedeutend billigere Transportmethode als der Kühltransport auszunutzen nachgewiesen werden. Diuse Kühlmethode bedeutet grosse praktische Schwierigkeiten, weil sehr kleine MengenHowever, several reasons can be significant for the small interest, these apparently safe and relatively significant a cheaper method of transport than refrigerated transport can be demonstrated. Diuse means cooling method great practical difficulties because of very small amounts
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Bines Pulvers abgewoben werden müssen, da dieses in sehr kleinen Transportröhrchen transportiert werden sollen, souiie dass Borsäure einen ziemlich niedrigen Auflösungsgrad im Urin hat. Wenn das Pulver ausserdem in Wasser aufgelöst wird, um dadurch leichter in exakten Volumen gemessen werden zu können, ein sehr grosses Volumen Borsäurelösung erhalten wird, um praktisch beim Transport angewendet werden zu können. Um im Laboratorium zwischen Urinproben mit Borsäure und Urinproben ohne Borsäure distingieren zu können, ist ein besonderer Arbeitseinsatz erforderlich,, der sich als praktisch störend erwiesen hat, während die zentralisierte Laboratoriuradiagnostik auf Grund der grossen Anzahl täglich einkommenden Urinproben (etwa 500 pro Tag für grössere Laboratorien) so wenig Arbeitsmomenten wie möglich beansprucht«.Bines powder must be waved off, as this should be transported in very small transport tubes, souiie that boric acid has a rather low degree of dissolution in the urine. If the powder is also in water is dissolved in order to be able to be measured more easily in exact volume, a very large volume of boric acid solution is obtained in order to be practical during transport to be applied. To switch between urine samples with boric acid and urine samples without boric acid in the laboratory Being able to distance yourself is a special effort required, which has proven to be practically disruptive, while the centralized laboratory diagnostics due to The large number of urine samples received daily (around 500 per day for larger laboratories) means that there are few working moments as claimed «.
Löslichkeit der Borsäure in Wasser.Solubility of Boric Acid in Water.
Üei 00C 2,66 g/100 g WasuerAt 0 0 C 2.66 g / 100 g Wasuer
llei 200C 4,9/lUÜ g Wjssür,'llei 20 0 C 4.9 / lUÜ g Wjssür, '
»•as bedeutet, dass im praktischen Anwendungsbereich mit»• as means that in the practical area of application with
keiner höheren Konzentration als dreiprozentige Lösungen gearbeitet werden kann, um dadurch eine Auskristallisation bei Teraperaturschuiankungen zu vermeiden» U.a. aus Kostengründen werden daher kleinst mögliche Transporteinheiten nachgestrebt, und allgemein werden hierbei standardisierte Transportbehälter mit einem Volumen von 10 ml angewendet»no higher concentration than three percent solutions can be used to cause crystallization to avoid in the case of outdoor temperature restrictions »For reasons of cost, among other things Therefore, the smallest possible transport units are strived for, and standardized ones are generally used here Transport container with a volume of 10 ml used »
Bei der Anwendung von dreiprozentiger Borsäurelösung müssen 13 ml dieser Lösung 9 ml Urin zugesetzt werden,- damit die Konzentration an Borsäure 1,8 % werden soll* weiches erforderlich ist, um eine ausreichende Konservierung erhalten zu können. Dieses führt mit sich,, dass sehr vielWhen using three percent boric acid solution, 13 ml of this solution must be added to 9 ml urine, - so that the concentration of boric acid should be 1.8 % * which is necessary in order to be able to obtain sufficient preservation. This entails, that very much
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Wasser den Proben zugeführt wird und dass das Volumen bis über das Doppelte ansteigt.Water is added to the samples and that the volume until it rises more than twice.
Es hat sich erwiesen, dass eine mehr wirksame Preservierung erhalten werden kann, u/enn den Proben nur 0,5 - 0,8 % Borsäure, wenn diese als organischer Komplex vorliegt, zugesetzt wird.It has been found that a more effective preservation can be obtained if only 0.5-0.8 % boric acid is added to the samples when this is present as an organic complex.
Weil die Konzentration der Borsäure in diesem Komplex sehr hoch ist, ist ein Zusatz von 0,4 - J.,4 ml oder g in 9 ml Urin ausreichend. Auf diese Art und Weise wird das Volumen in sehr begrenztem Umfang erhöht, so dass die standardisierten Transportrohre zur Anwendung kommen können.Because the concentration of boric acid in this complex is very high is high is an addition of 0.4 - J., 4 ml or g in 9 ml Urine sufficient. In this way the volume is increased to a very limited extent, so that the standardized Transport pipes can be used.
Die vorliegende Erfindung betrifft Preservierungsmittel für bakteriologische Proben, die dadurch gekennzeichnet wird, dass das Mittel aus organischen Borsäurekomplexen von der GattungThe present invention relates to preservatives for bacteriological samples, which is characterized in that the agent consists of organic boric acid complexes of the genus
0>0>
besteht, in der R:consists in which R:
EtylenglykolEthylene glycol
Propandiol-1,21,2-propanediol
GlycerolGlycerol
FruktosFructos
MannitolMannitol
SorbitolSorbitol
oder andere wasserlösliche Dioxi- oder Polyoxi-l/erbindungen sein kann, denen 1-2 mol Wssser entzogen ist und die durch Erhitzung innerhalb bestimmter Zeit- und Temperatur-or other water-soluble dioxi- or polyoxy-l / compounds can be, from which 1-2 mol of water is withdrawn and which by heating within certain time and temperature
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spannen hergestellt werden, luobei ein gewisser Teil des Reaktionstuassers abgezogen' wird und dadurch das Enderzeugnis ein bestimmtes Wassergehalt enthält» Die Konzentration der Borsäure in diesen Komplsxen, wird durch Ueberschuss der organischen Verbindungen durch das in diesen enthaltene Wasser geregelt.clamping are made, luobei a certain part of the reaction tank is withdrawn 'and thereby the end product contains a certain water content »The Concentration of boric acid in these complexes is determined by Excess of the organic compounds regulated by the water contained in them.
Um leichter feststellen zu können, ob ein Preservierungsmittel zugesetzt wurde, kann dieses, mit Metylanblau odereinem anderen geeigneten Farbstoff, der die bakteriologische Untersuchung nicht beeinflusst, eingefärbt u/erden»To make it easier to determine if there is a preservative was added, this can be done with methylan blue or a other suitable dye which does not affect the bacteriological examination, colored and / or ground »
100 Gewichtsanteile Etylenglykol 17 Geujichtsanteile Borsäure BP u/urden bis 980C erhitzt, wobei Wasser abgespaltet wurde, luonach die Temperatur unter einer Zeitspanne won vier Minuten bis auf 1120C erhöht wurde. Hierbei wurde 2 mol Wasser entzogen.100 parts by weight Etylenglykol 17 Geujichtsanteile boric acid BP and / ere to 98 0 C heated water being split off, luonach the temperature below a period won four minutes to 112 0 C was increased. Here, 2 mol of water was removed.
Borsäuregehalt = 17,7 % Boric acid content = 17.7 %
pH im konzentrierten Reaktionsprodukt = 2,5 pH in zehnprozentiger Wasserlösung = 4,4pH in the concentrated reaction product = 2.5 pH in ten percent water solution = 4.4
124 Gewichtsanteile Glycerol DAB 6 d = 1,23 17 Gewichtsanteile Borsäure BP124 parts by weight of glycerol DAB 6 d = 1.23 17 parts by weight of boric acid BP
tuerden bis auf 1100C erhitzt, wodurch die Reaktion gestartet und 2 mol Wasser abgespaltet wurde« Das Wassergehalt stieg in der Reaktionsmischung won 11,3 % bis auf 22,3 °/a an. Die Temperatur wurde unter einer Zeitspanne won drei Minuten auf 129°C erhöht, wonach die Erhitzung unterbrochen wurde und das Reaktionsarzeugnis abkühlen durfte.tuerden heated to 110 0 C, whereby the reaction started and water was cleaved 2 mol "The water content increased in the reaction mixture won 11.3% up to 22.3 ° / a to. The temperature was increased to 129 ° C over a period of three minutes, after which the heating was discontinued and the reaction product was allowed to cool.
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Wassergehalt = 15,5 % Water content = 15.5 %
Borsäuregehalt -- 12,4 fa Boric acid content - 12.4 fa
pH im konzentrierten Reaktionserzeugnis = 1,3pH in the concentrated reaction product = 1.3
pH in zehnprozentiger Wasserlösung = 3,9pH in ten percent water solution = 3.9
Metylenblau wurde in einer Konzentration von 5-50 ppm zugesetzt.Methylene blue was found at a concentration of 5-50 ppm added.
100 Gewichtsan teile d-rMannitol100 parts by weight of d-r-mannitol
70 Gewichtsanteile Wasser70 parts by weight of water
32 Geiuichtsanteile Borsäure32 boric acid equivalents
wurden auf 8O0C erhitzt, wobei die Reaktion begann. Die Temperatur wurde unter einer Zeitspanne von sieben Minuten auf 112°C erhöht, uuobei 2 mol Wasser entzogen u/urde.were heated at 8O 0 C, where the reaction began. The temperature was increased to 112 ° C over a period of seven minutes, with 2 mol of water removed.
Borsäuregehalt = 10,8 % Boric acid content = 10.8 %
pH im konzentrierten Reaktionserzeugnis = 0,85pH in the concentrated reaction product = 0.85
pH in zehnprozentiger Wasserlösung = 3,5pH in ten percent water solution = 3.5
Das Erzeugnis durftö danach abkühlen und wurde zu Tabletten gepresst. The product was then allowed to cool down and pressed into tablets.
100 Geu/ichtsanteile Fruktos1 100 weight fructos 1
50 Geiuichtsanteile Wasser50 equal parts water
36 Geu/ichtsanteile Borsäure36 weight parts boric acid
u/urden bis auf 800C erhitzt, wonach die Temperatur unter einer Zeitspanne von sechs Minuten bis auf 109 C erhöht wurde, wobei 2 mol Wasser entzogen wurde,u / ere heated up to 80 0 C, after which the temperature was raised under a period of six minutes to 109 C, with 2 mol of water has been withdrawn,
Borsäuregehalt = 12,1 % Boric acid content = 12.1 %
pH im konzentrierten Reaktionserzeugnis = 1,1 pH in zehnprozentiger Wasserlösung = 4,2pH in the concentrated reaction product = 1.1 pH in ten percent water solution = 4.2
Das Reaktionserzeugnis wurde zu Tabletten gepresst.The reaction product was compressed into tablets.
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100 Gewichtaanteile Propandiol-1,2100 parts by weight of 1,2-propanediol
25 Gewichtsanteile Borsäure
wurden bis auf 98°C erhitzt, wonach die Temperatur unter einer Zeitspanne von zehn Minuten bis auf 16O°G erhöht
wurde.25 parts by weight boric acid
were heated to 98 ° C, after which the temperature was raised under a ten minute period up to 16O ° G.
Borsäuregehalt = 20 j6Boric acid content = 20 j6
pH im konzentrierten Eeaktionserzeugnis = 1,7 pH in zehnprozentiger Wasserlösung = 4Φ6pH in the concentrated reaction product = 1.7 pH in ten percent water solution = 4 Φ 6
wurde mit Metylenblau eingefärbt.was colored with ethylene blue.
Ber Borsäure-Glycerol-Komplex, der nach dem Beispiel, 2 hergestellt ist, ist untersucht worden,, inwiefern eine individuelle Empfindlichkeit zwischen verschiedenen Bakterienarten vorliegt, bei verschiedener Bakterienanzahl und in Proben, die gleichzeitig mehrere verschiedene Bakterienstämme enthalten dadurch, dass Proben teils vor und teils nach dem üblich vorkommenden Transporttyp (weniger als ein Tag), und in Proben, die eine längere Zeitspanne vor der Züchtung gelagert, untersucht wurden. Mit dieser Untersuchung wurde auch beabsichtigt, individuell die verschiedenen, im Erzeugnis enthaltenen Komponenten betreffend ihre antibakterielle Wirkung untersuchen zu können und gleichzeitig: zu versuchen zu beurteilen, wie gross die Abweichungen von den Instruktionen sind, die betreffend zugesetzter Menge des borsäurehaltigen Konservierungserzeugnisses bzw. Menge Urin, toleriert werden können;The boric acid-glycerol complex, which is prepared according to example 2, has been investigated to what extent there is an individual sensitivity between different types of bacteria, with different numbers of bacteria and in samples that contain several different bacterial strains at the same time, by samples partly before and partly according to the usual type of transport (less than a day), and in samples that were stored for a longer period of time before cultivation. This study was also intended to individually different, contained in the product components to investigate their antibacterial action concerning the same time: to try to assess how big are deviations from the instructions concerning the amount added of boric acid preservative product or amount of urine , can be tolerated;
Zwei Typen dieser Versuche sind durchgeführt,.Two types of these attempts are carried out.
1) Yon Patienten mit Bakteriuri wurden Proben genommen,, Teils wurden Proben vom Personal des Laboratoriums und teils wurden Proben vom Abteilungspersonal genommen und 1) Samples were taken from patients with bacteriuri, partly samples were taken by laboratory staff and partly samples were taken by department staff
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mit dem üblichen Transport ins Laboratorium transportiert. In den Fällen, wo die Proben und die Transporte vom Personal des Laboratoriums durchgeführt würden, hatte man volle Kontrolle über die Probenabnahmetechnik und über die Transportzeitdauer. Proben wurden nach der Waschung und Trocknung als e.g. "mid-stream- -Proben" genommen und innerhalb einer Zeitspanne von einer Stunde ausgezüchtet. Die Auezüchtung wurde auf Blut'agarplatten, Origalskiagar und Acidsorbitolagar durchgeführt. Die Quantitätsbestimmung wurde nach der Auszüchtung von einer Serienverdünnung der Urinproben in Kochsalz vorgenommen. Die Arbeitsbestimmung wurde mit bisher üblicher Routinenmethode nach primärer Inkubierung unter einer Zeitspanne von achtzehn Stunden und bei 37°C durchgeführt.transported to the laboratory in the usual way. In the cases where the samples and the transports were carried out by the laboratory staff, they had full control over the sampling technique and the transport time. Samples were after washing and drying as e.g. "mid-stream -Samples "taken and within a period of one hour outbred. The cultivation was carried out on blood agar plates, origalski agar and acid sorbitol agar carried out. The quantitative determination was made after the cultivation of a serial dilution of the urine samples made in table salt. The working determination was carried out with the routine method customary up to now after primary incubation carried out under a period of eighteen hours and at 37 ° C.
2) Laboratoriumversuche mit experimentell hergestelltem, bakterienhaltigern Urin sind durchgeführt worden, um die Testung von besonderen Bakterienstämmen zu ermöglichen. Für diese l/ersuche wurden acht Bakterienstämme angewendet, die bei Uriniuegentzündungen üblich vorkommend sind, und zwar:2) Laboratory tests with experimentally prepared urine containing bacteria have been carried out to to enable the testing of special bacterial strains. Eight bacterial strains were used for this application used, which are common in urinary inflammation are, namely:
Escherichia coli
KlebsieilaEscherichia coli
Klebsieila
Pseudomonas aeruginosa
Pseudomanas mirabilis
Enterokokken
Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus saprophyticusPseudomonas aeruginosa
Pseudomanas mirabilis
Enterococci
Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus saprophyticus
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In l/ersuchen, die einen besonders empfindlichen Bakterien»tamm benötigten,,, wurden Gonokokken angewendet. ·In requests for a particularly sensitive bacterial strain needed ,,, gonococci were applied. ·
Die Untersuchungen wurden hauptsächlich zum Vergleich zwischen der Lagerung in gekühlter Umgebung bzw«, in Rauetemperatur mit Boro-Glycerol-Zusat? ausgeführt«.The investigations were mainly for comparison between storage in a cool environment or in room temperature with boroglycerol additive? carried out «.
Als Referenzwert ist das Züchtungsargebnie angewendet morden, das nach der Auszüchtung innerhalb einer Zeitspanne von einer- Stunde nach der Probeentnahme erhalten wurde.The breeding result is used as a reference value morden obtained after outgrowth within a period of one hour after sampling.
Für die l/ersuche wurde teils reine Borsäure in Pulverform, teils verschiedene Konzentrationen des Borsäure-Komplexes nach dem Beispiel 2 angewendet.Partly pure boric acid in powder form was used for the sometimes different concentrations of the boric acid complex according to Example 2 are used.
Von Bakterienkolonien auf Agarplatten wurde eine Schlammung in physiologischem Kochsalz vorgenommen. Die Quantitätsbestimmung wurde mit Hinsicht des nachgestrebten Zieles durchgeführt, eine Bakterienmenge zwischen etwa 100 000 und 10 QOQ OOO/ml Urin nach dem Zusatz der Schlammung in uninfektiertem Urin zu erhalten.Bacterial colonies on agar plates were sludged in physiological table salt. The determination of the quantity was made with regard to the pursued goal carried out an amount of bacteria between about 100,000 and 10 QOQ OOO / ml urine after the addition of the sludge in to receive uninfected urine.
ErgebnisResult
l/ersuche wurden mit Borsäure in Pulverform durchgeführt. Zu 9 ml Urin wurde 0,1 g Borsäure zugesetzt« Die angewendeten Teststämme gehen aus der Tabelle 1 hervor*Tests were carried out with boric acid in powder form. 0.1 g boric acid was added to 9 ml urine «The test strains used are shown in Table 1 *
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nachBred
after
+424
+4
säure
+220C24 h boron
acid
+22 0 C
•f 4th
• f
säure
+220C48 h boron
acid
+22 0 C
Tabelle 1 (l0 log der Anzahl der Bakterien)Table 1 (l0 log of the number of bacteria)
Der nach der Methodebeschreibung hergestellte, bakterienh altige Urin wurde quantitätsbestimmt und in ziuei Portionen geteilt. Die eine Portion wurde bei +40C aufgestellt und zur anderen Portion wurde Borsäure zugesetzt und in Raumtemperatur aufbewahrt. Die Quantitätsbestimmung u/urde nach einer Zeitspanne won 24 Stunden und nach 48 Stunden vorgenommen. Aus der Tabelle geht hervor, dass keine bemerkenswerten Abweichungen eingetreten sinct, weder der Urin in gekühltem Zustand oder bei Raumtemperatur mit Borsäurezusatz gelagert morden ist.The bacteria-containing urine produced according to the method description was quantified and divided into two portions. One portion was placed at +4 0 C and to another portion of boric acid was added and stored in room temperature. The quantity determination was made after a period of 24 hours and after 48 hours. The table shows that there were no noticeable deviations, neither the urine was cooled or stored at room temperature with the addition of boric acid.
Patientenprobe: Proben wurden von sechs geriatrischen Patienten in der Altersheimpflege genommen. Die Proben u/urden innerhalb einer Zeitspanne von einer Stunde ausgezüchtet, wonach die Proben im Einklang mit dem Obigen behandelt wurden. Aus der Tabelle 2 geht hervor, dass die Abweichungen für sotuohl die gekühlten wie die in Borsäure gelagerten Proben kleiner als eine 10 - Potenz beträgt.Patient sample: Samples were taken from six geriatric patients taken in nursing homes. The samples were taken grown out within a period of one hour, after which the samples were treated in accordance with the above became. From Table 2 it can be seen that the deviations for both the cooled and those stored in boric acid Samples is less than a 10-power.
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NAOHGnnno?NAOHGnnno?
P 29 06 730.9 OPUS CHEMICAL ABP 29 06 730.9 OPUS CHEMICAL AB
tientPa.
tient
tet nachBred
tet after
+40C24 hours
+4 0 C
säure
+220C24 h boron
acid
+22 0 C
+4°C48 h
+ 4 ° C
säure
+22OC 48 h boron
acid
+ 22OC
Um herausfinden zu können, ob Glycerol in sich selbst
eine hemmende Wirkung auf die Bakterien ausübt, wurden
folgende Versuche durchgeführt:To be able to find out if glycerol in itself
has an inhibitory effect on the bacteria
carried out the following tests:
Fünfzehn frische Bdkterienisolatan von Patienten mit
Bakterluri wurde Urin zugesetzt, der in drei Portionen
für die Lagerung bei +40C, für die Lagerung in Raumtemperatur
mit zugesetzter Borsäure und für die Lagerung bei +220C mit zugesetztem Glycerol quantitätsbestimmt
und aufgeteilt u/urde. Aus der Tabelle 3 gehen die untersuchten
Bükterienstämme und die gemessenen Veränderungen in 10-log heruor. In keinem der vorkommenden Fälle u/urden
eine Hemmung durch den Zusatz des Glycerols erhalten. Veränderungen
in den gekühlt gelagerten bzw. bei Raumtemperatur
gelagerten Proben mit Borsäurezusatz waren in sämtlichen
Fällen weniger als eine IQ-Potenz.Fifteen fresh bacterial isolates from patients with
Bacterial luri was added to the urine in three servings
for storage at +4 0 C, for storage at room temperature with added boric acid and for storage at +22 0 C with added glycerol
and divided u / urde. From Table 3, the investigated Bükeria strains and the measured changes in 10-log are derived. In none of the cases that occurred were any inhibition obtained by the addition of the glycerol. Changes in the samples stored refrigerated or at room temperature with the addition of boric acid were less than an IQ potency in all cases.
Um herausfinden zu können, ob eine negative Wirkung durch die Kombination von Borsäure-Komplex nach dem Beispiel 2 und dar gekühlten Lagerung erhalten tuerden kannte, wurden folgende Versuche durchgeführt?In order to be able to find out whether a negative effect could be obtained from the combination of boric acid complex according to Example 2 and the refrigerated storage , the following tests were carried out?
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Dem Urin wurden fünf verschiedene Bakterienarten zugesetzt. Die Proben wurden quantitätsbestimmt und aufgeteilt, Unbehandelter Urin uiurde bei -200C aufbemart. Einer anderen Portion der Proben wurde Borsäure-Komplex nach dem Beispiel 2 zugesetzt und teils bei +4 C und teils bei Haumtempyratur aufbewahrt.Five different types of bacteria were added to the urine. The samples were determined quantity and divided Untreated urine uiurde at -20 0 C aufbemart. Boric acid complex according to Example 2 was added to another portion of the samples and stored partly at +4 C and partly at skin temperature.
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(nach Beispiel 2)
18 h +4 C 18 h +220C3oric acid-glycerol complex
(according to example 2)
18 h +4 C 18 h +22 0 C
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Aus dar Tabelle geh>t hervor, dass die Kombination der gekühlten Lagerung und Borsäure-Glycerol-Komplex nach dem Beispiel 2 keine abweichenden Ergebnisse nach einer Lagerung unter einer Zeitspanne won 18 Stunden mit sich führt. Die Gafrierung des Urins führt ganz unzufriedenstellende, quantitative Ergebnisse mit sich. Die Abweichungen sind grosser für gramm-negativ/e Stäbe als für gramm-positive Kokken.The table shows that the combination of refrigerated storage and boric acid-glycerol complex according to Example 2 does not lead to any deviating results after storage for less than 18 hours. The gauging of the urine leads to very unsatisfactory quantitative results. The deviations are larger for gram-negative / e rods than for gram-positive cocci.
Um die Wirkung des Glycerols auf die Bakterien herausfinden zu können, wurden Versuche mit einem besonders empfindlichen Bakterienstamm durchgeführt:To find out the effect of the glycerol on the bacteria To be able to do so, experiments were carried out with a particularly sensitive bacterial strain:
Urine mit und ohne Glycerolzusatz u/urden verglichen. Zu 9 ml Urin wurde 0,65 ml Glycerol zugesetzt« Gonokokken u/urden sowohl diesem Urin wie Urin ohne Glycerolzusatz zugeführt. Die Quantitätsbestimmung wurde nach Zeitspannen von einer, zwei, vier und sechs Stunden v/orgenommen. Aus der Tabelle 5 geht der prozentuelle Anteil der ursprünglich zugeführten Gonokokken, die nach der betreffenden Zeitspanne zurück isoliert werden können, hervor. Aus der Tabelle geht auch hervor, dass die Gonokokken im Urin schnell abgetötet werden und nach vier Stunden nach dem Zusatz nicht mehr vorgefunden werden können, mährend der Zusatz von Glycerol mit sich führt, dass Gonokokken nach einer Zeitspanne von sechs Stunden fortwährend isoliert werden können.Urines with and without added glycerol were compared. to To 9 ml of urine, 0.65 ml of glycerol was added. Gonococci both form this urine and urine without the addition of glycerol fed. The determination of the quantity was carried out after periods of one, two, four and six hours. the end Table 5 shows the percentage of gonococci that were originally administered after the relevant period of time can be isolated back out. The table also shows that the gonococci in the urine can be killed quickly and can no longer be found after four hours after the addition, during the The addition of glycerol causes gonococci to be continuously isolated after a period of six hours can be.
Stundenf
hours
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Der Versuch tuurde mit Zusätzen won verschiedenen Farbstoffen durchgeführt. Löfflers Metylsnblau (0,5 g/1000 ml) wurde verdünnt und dem Urin zugesetzt» Der Farbstoff in;-einer Konzentration won 0,01 ml/9ml Urin konnte deutlich mit blossem Auge wahrgenommen werden. Utn die Wirkung des metylenblauen Farbstoffes auf die !Bakterien heraus« finden zu können, wurden Versuche mit einer zehnfach stärkeren Lösung vorgenommen. Borsäure-Glycerol-Komplex wurde mit und ohne Metylenblau der Probe zugesetzt« Aus der Tabelle 6 geht hervor, dass der Zusatz won Metylenblau auf die Quantitätsbestimraung deir geprobten Bakterienstämme nicht störend einwirkte.The experiment was done with the addition of various dyes carried out. Löfflers Metylsnblau (0.5 g / 1000 ml) was diluted and added to the urine "The dye in; -einer Concentration of 0.01 ml / 9 ml urine could be clearly seen with the naked eye. Utn the effect of the ethylene blue dye on the! bacteria out « To be able to find, attempts were made with a ten times stronger solution. Boric acid-glycerol complex was added to the sample with and without ethylene blue. Table 6 shows that the addition won Ethylene blue on the quantity determination deir sampled Bacterial strains did not interfere.
Metylenblau
+ 22°CAfter 24 hours with
Methylene blue
+ 22 ° C
blau
*22DCWithout metyien-
blue
* 22 D C
aeruginosaPseudomonas
aeruginosa
Um herausfinden zu können, in welchem Ausmasse Ibtaeichungen von der Methodenbeschreibung betreffend die Menge Urin bzw. die Menge Borsäure-Komplex-Zusatz genacht tifecden können, wurden Versuche mit verschiedenen Konzentrationen vorgenommen»To be able to find out to what extent Ibta calibration from the description of the method regarding the amount of urine or the amount of boric acid complex addition tests were carried out with different concentrations »
Für diese Versuche wurde Urin mit Zusatz won E.-CoIi ange-For these experiments, urine with the addition of E. coli was used.
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OPUS CHEMICAL AB - *>0 OPUS CHEMICAL AB - *> 0
iuendet. Mit dem Ausgangspunkt von früheren Berichten über die dienliche Konzentration von Borsäure und nach auf Erfahrungen aufgebauten Berichtigungen, u/urde ein Borsäure-Glycerolkomplex mit 12,4 % Borsäure hergestellt. Zur üblichen Urinprobemenge - 9ml - wurden neun i verschiedene Mengen von 0,4 bis 0,8 ml (0,65 ml entspricht 0,62 % Borsäure) Borsäure zugesetzt. Die Proben u/urde η bei +220C unter einer Zeitspanne von 24 Stunden gelagert. Die Quantitätsbestimmung wurde teils von einer fast fünf Monate alten Lösung und teils von neu aufbereiteter Lösung vorgenommen. Veränderungen innerhalb des S/erdünnungsbereiches waren kleiner als eine 10-Potenz. Der Borsäure- -Komplex wurde in einer Portionstüte verpackt. Durch die Wahl von 0,65 ml pro Portionstüte, wurde das Ergebnis mutmasslich nicht beeinfluss, wenn durch Wachlässigkeit gegebenenfalls unterlassen wurde, ein drittel des Inhaltes der Urinprobe zu entleeren und damit eine niedrigere Konzentration der Borsäure zu erhalten, die vorausbestimmt war. Die Methode scheint auch dadurch eine gewisse Konzentrationserhöhung zu dulden, dass zu wenig Urin in ein Rohr gefüllt wird. Nach durchgeführten Berechnungen duldet die Methode, dass man versäumt, 3 - 4 ml der rekommendierten 9 ml zu zusetzen.i ends. Using the starting point of previous reports on the appropriate concentration of boric acid, and adjustments based on experience, a boric acid-glycerol complex containing 12.4 % boric acid was prepared. To the usual urine sample amount - 9 ml - nine different amounts of 0.4 to 0.8 ml (0.65 ml corresponds to 0.62 % boric acid) of boric acid were added. U / urde η stored the samples at +22 0 C under a 24 hour period. The quantity was determined partly from a solution that was almost five months old and partly from a newly prepared solution. Changes within the dilution range were less than a 10 power. The boric acid complex was packaged in a sachet. By choosing 0.65 ml per sachet, the result was presumably not influenced if, due to negligence, the patient failed to empty a third of the contents of the urine sample and thus obtain a lower concentration of boric acid, which was predetermined. The method also seems to tolerate a certain increase in concentration because too little urine is poured into a tube. According to the calculations carried out, the method tolerates that one neglects to add 3 - 4 ml of the recommended 9 ml.
Die Endversuche wurden mit von Patienten mit Bakteriuri genommenen Proben ausgeführt. Alle Probenabzüge wurden mit Zusatz von der Portionstüte und der Transport wurde mit üblichen Routinen durchgeführt. Ein Teil der Probe wurde mit Boro-Glycerol-Komplex versehen und in Raumtemperatur aufbewahrt, der andere Teil wurde gekühlt und in gekühltem Zustand transportiert. Beide Probentypen u/urden danach unter einer Zeitspanne von 24 Stunden gelagert, wonach dieThe final tests were carried out on samples taken from patients with bacteriuri. All sample prints were made with The addition of the sachet and the transport were carried out with the usual routines. Part of the sample was made provided with boro-glycerol complex and at room temperature kept, the other part was refrigerated and transported in a refrigerated state. Both sample types are then under stored for a period of 24 hours, after which the
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Quantitätsbestimmung vorgenommen wurde. Die Ergebnisse gehen aus der Tabelle 7 hervor«Determination of the quantity has been made. The results are shown in table 7 «
ent
Mr»Pati
ent
Mr »
datumBirth
date
schlechtGe
bad
Bakterien/ml Urin
Boro-G-lycerol=·
-Komplex
^220G +40Cnumber
Bacteria / ml urine
Boro-G-lycerol = ·
-Complex
^ 22 0 G +4 0 C
Tabelle 7» 10 log» der Anzahl Bakterien nach der Preservierung von 9 ml Urinprobe mit 0,65 ml Boro-Glycerol-Komplex entsprechend Q982$ Borsäure bei Raumtemperatur und mit beiTable 7 "10 log" of the number of bacteria after the preservation of 9 ml urine sample with 0.65 ml boroglycerol complex corresponding to Q 9 82 $ boric acid at room temperature and with at
+4 G preserviertem Urin verglichen» #)+4 G preserved urine compared » #)
< Nicht bemerkenswerte Bakteriuri ' Scheinbar nicht bemerkenswerte Bakteriuri<Unremarkable Bakteriuri ' Seemingly unremarkable bacteriuri
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MACMAC
Grosse Probleme liegen beim Transport von Proben für bakteriologische Züchtungen vor. Es treffen unerwünschte Veränderungen ein, wenn dia Auszüchtung nicht innerhalb einer sehr kurzen Zeitspanne nach dem Probeabzug durchgeführt werden kann. Diese Veränderungen können jedoch durch den Kühltransport verhindert u/erden. Eine Kühlung der Proben kann gegebenenfalls eine Gefrierung der Probe mit sich führen, welches jedoch für mehrere Bakterienarten schädlich ist. Das Kühlverfahren ist sehr schwerfällig und unökonomisch. Die Anwendung der Borsäure als preserv/ierenden Zusatz in Urinproben ist schon früher nachgewiesen und ist mit erneuten l/ersuchen verifiert worden. Die Wachteile mit der pulverförmigen Borsäure hat neue l/ersuche initiert, Borsäure in Lösungen zu erhalten. Borsäure-Glycerol-Komplex wurde nach dem Beispiel 2 hergestellt und Metylenblau zugesetzt, um dadurch den Zusatz in den Proben sichtbar machen zu können, Souiohl laboratoriumtechnische wie klinische Probenuntersuchungen haben gezeigt, dass die Komposition nach der Erfindung die nachgestrebte Wirkung mit sich führte. Veränderungen in den Proben sind während einer Zeitspanne von zwei Tagen nicht aufgetreten. Eine grosse Anzahl verschiedener Bakterienarten, aktuell als Etiologi für Urinwegentzündungen, sind untersucht u/orden. Eine antibakteriologische Wirkung ist für keinen der enthaltenen Komponenten bei angewendeter Konzentration nachgewiesen worden. Die Austitrierung der Sicherheitsgrenzen für ein fehlerhaftes Anwenden des Erzeugnisses hat gezeigt, dass wahrscheinlich eine dreizigprozentige Fehlerdosierung toleriert werden kann, sowohl über wie unter der rekommendierten Konzentration.The transport of samples for bacteriological cultivations. It hit undesirable Changes occur if the outgrowth has not been carried out within a very short period of time after the proofing can be. These changes can, however, be prevented and / or grounded by refrigerated transport. A cooling of the samples can lead to freezing of the sample, but this is the case for several types of bacteria is harmful. The cooling process is very cumbersome and uneconomical. The application of boric acid as preserv / ierenden addition in urine samples is already earlier verified and verified with renewed requests. The weak parts with the powdered boric acid initiated new attempts to obtain boric acid in solutions. Boric acid-glycerol complex was prepared according to Example 2 and methylene blue added in order to be able to make the addition visible in the samples, Souiohl laboratory technology as clinical sample examinations have shown that the composition according to the invention the desired effect with it. Changes in the samples are over a period of two days did not occur. A large number of different types of bacteria, currently as an etiology for urinary tract inflammation, are being investigated. It has an antibacteriological effect has not been detected for any of the contained components at the concentration used. The titration of the Safety limits for incorrect application of the Product has shown that probably a thirty percent Error dosage can be tolerated, both above and below the recommended concentration.
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Durch dia Konzentration des Lirzeugnisses ist man nicht an einen gewissen,, besonderen Kohrtyp gebunden,, sondern man kann sich an die Probewolumen und Rohrtypen geschmeidig anpassen, die in verschiedenen Laboratorien zur Anwendung kommeno Es ist offenbar;, dass dieses System bedeutend geschmeidiger als der Kühltransport ist und dass die Gefahr für Gefrierschäden an den Proben beseitigt isto l/om Transportgesichtspunkt bietet die Methode grössere Geschmeidigkeit und bedeutend kleinere Unkosten ano Ein richtig durchführbarer Kühltransport ists wie es sich praktisch ertuiesen hat 5, nur sehr schwer durchzuführen«,Due to the concentration of the light product, one is not tied to a certain "special type of tube" but one can adapt smoothly to the sample volumes and tube types that are used in different laboratories. It is evident that this system is significantly more flexible than refrigerated transport and that the risk of freezing damage to the samples is eliminated o l / om the transport point of view, the method offers greater flexibility and significantly lower costs o A properly feasible refrigerated transport is s as it has been found in practice 5, only very difficult to carry out «,
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