FI119437B - Ei-toksinen, ei-toksigeeninen, ei-patogeeninen Fusarium-ekspressiojärjestelmä ja siinä käytettäviä promoottereita ja terminaattoreita - Google Patents
Ei-toksinen, ei-toksigeeninen, ei-patogeeninen Fusarium-ekspressiojärjestelmä ja siinä käytettäviä promoottereita ja terminaattoreita Download PDFInfo
- Publication number
- FI119437B FI119437B FI965220A FI965220A FI119437B FI 119437 B FI119437 B FI 119437B FI 965220 A FI965220 A FI 965220A FI 965220 A FI965220 A FI 965220A FI 119437 B FI119437 B FI 119437B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- host cell
- cell according
- promoter
- sequence
- seq
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12N9/20—Triglyceride splitting, e.g. by means of lipase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/58—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from fungi
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6427—Chymotrypsins (3.4.21.1; 3.4.21.2); Trypsin (3.4.21.4)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
- Y10S435/929—Fusarium
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Mycology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
f 1 1 9437
Ei-toksinen, ei-toksigeeninen, ei-patogeeninen Fusarium-ekspressiojärjestelmä ja siinä käytettäviä promoottoreita ja terminaattoreita - Icke-toxiskt, icke-toxigeniskt, icke-pa-togeniskt Fusarium-expressionssystem och promotorer och ter-5 minatorer för användning däri 1. Keksinnön ala
Keksintö koskee isäntäsoluja, jotka ovat käyttökelpoisia yh-10 distelmä-DNA-proteiinien tuotannossa. Erityisesti, keksintö koskee ei-toksisia, ei-toksigeenisiä ja ei-patogeenisiä Fusarium-sieni-isäntäsoluja, joita voidaan käyttää yhdistel-mä-DNA-proteiinien, erityisesti entsyymien korkeatasoisessa ekspressiossa. Edelleen keksintö koskee promoottori- ja ter-15 minaattorisekvenssejä, joita voidaan käyttää sellaisessa järjestelmässä.
2. Keksinnön tausta
Yhdistelmä-DNA-isäntäsolujen käyttö heterologisten proteii-20 nien ekspressiossa on viime vuosina yksinkertaistanut huo-. mattavasti kaupallisesti arvokkaiden proteiinien suurten • φ ***. määrien tuotantoa, joita kaupallisesti arvokkaita proteiine- * · · • ** ja on muuten saatavissa vain puhdistamalla luontaisista läh- • · · *· · teistään. Nykyisin on olemassa vaihteleva valikoima ekspres- • · · : 25 siojärjestelmiä, joista voidaan valita minkä hyvänsä määrä- Φ tyn proteiinin tuotantoon, mukaan lukien prokaryoottisia ja : eukaryoottisia isäntiä. Usein sopivan ekspressiojärjestelmän valinta ei riipu vain isäntäsolun kyvystä tuottaa aktiivi-ϊ\. sessa tilassa olevan proteiinin riittäviä saantoja, vaan se 30 voi suuressa määrin riippua myös proteiinin aiotusta lopul- * · · 119437 2 sellaisissa prosesseissa, ovat Neurospora orassa, Acremonium chrysogenum, Tolypocladium geodes, Mucor circinelloides ja Trichoderma reesei, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger ja Aspergillus oryzae.
5 Määrättyjä Fusarium-suvun lajeja on käytetty mallijärjestel-minä kasvipatogeenisuuden ja geenisäätelyn tutkimiseen, kuten Fusarium oxysporum'ia (Diolez et ai., 1993, Gene 131:61-67; Langin et ai., 1990, Curr. Genet 17:313-319; Malardier 10 et ai., 1989, Gene 78:147-156 ja Kistler ja Benny, 1988,
Curr. Genet. 13:145-149), Fusarium solani'a (Crowhurst et ai., 1992, Curr. Genet. 21:463-469), ja Fusarium culmorum'ia (Curragh et ai., 1992, Mycol. Res. 97:313-317). Nämä Fusa-rium-lajit eivät olisi kaupallisesti sopivia heterologisten 15 proteiinien tuotantoon johtuen niiden ei-toivottavista ominaispiirteistä kuten että ne ovat kasvipatogeenejä tai koska ne tuottavat ei-turvalliset tasot mykotoksiinia. Dickman ja Leslie (1992, Mol. Gen. Genet. 235:458-462) kuvaavat Gibbe-rella zeae'n transformoinnin plasmidin, joka sisältää Neuro-20 spora crassa'n nit-2:n. Dickman'in ja Leslie'n kuvaama Gib- • ·, berella zeae-kanta on kasvipatogeeni ja tuottaa tsearaleno- • · nia, estrogeenistä mykotoksiinia. Sanchez-Fernandez et ai.
• · · * * (1991, Mol. Gen. Genet. 225:231-233) kuvaa niaD-mutaation • · · *· · sisältävän Gibberella fujikoroi'n transformoinnin plasmidil- • * * ί.: · 25 la, joka sisältää Aspergillus niger'in niaD-geenin.
« • * · • · * * · · ··» ϊ.ί · Eräs ihanteellinen ekspressiojärjestelmä on sellainen, joka on oleellisen vapaa proteaasin ja mykotoksiinin tuotannosta, myös oleellisen vapaata muiden endogeenisesti tehtyjen eri-3 0 tettyjen proteiinien suurista määristä, ja joka kykenee kor-[· > keampiin ekspressiotasoihin kuin tunnetut isäntäsolut. Nyt * i < *· 'ϊ keksintö now aikaansaa uusia Fusarium-ekspressiojärjestel- ««· miä, jotka täyttävät nämä vaatimukset.
• · • * * m m · »·· · ,·. ; 35 3. Keksinnön yhteenveto • ··
Keksintö aikaansaa ei-toksisen, ei-toksigeenisen ja ei-pato-geenisen yhdistelmä-DNA-Fusarium-isäntäsolun, joka käsittää 119437 3 promoottoriin toimintakykyisesti liittyneenä nukleiinihappo-sekvenssin, joka koodittaa heterologista proteiinia. Tässä määriteltynä "ei-toksinen" tarkoittaa, että isäntäsolu ei vaikuta kuten myrkky kasveihin tai eläimiin. Esimerkiksi, 5 Fusarium-isäntäsolua pidettäisiin ei-toksisena, jos, noin 14 päivää sen jälkeen kun noin 5 hiirtä on injisoitu annoksella noin 20 ml (laimennettu 1:1) 3 päivää vanhaa Fusarium-kasva-tusväliainetta/kg kehonpaino/hiiri, yksikään hiiristä ei kuolisi Fusarium-käsittelyn seurauksena. Tässä määriteltynä 10 "ei-toksigeeninen" tarkoittaa, että isäntäsolut ovat oleellisen vapaita mykotoksiinista määritettynä analyyttisillä vakiomenetelmillä kuten HPLC-analyysillä. Esimerkiksi, Fusa-rium-määrä, jota on kasvatettu 2 x 9-cm:isillä petrimaljoilla, jotka sisältävät kiinteää ravintoväliainetta, voidaan 15 uuttaa orgaanisilla liuottimilla, ja 0,5 % uutteesta voidaan injisoida HPLC:hen analyysiä varten. Tunnettujen mykotoksii-nien puuttuminen osoitetaan havaittavien HPLC-huippujen puuttumisella asemissa, jotka tunnetaan mykotoksiinistandar-deille. Tässä määriteltynä "ei-patogeeninen" tarkoittaa, 20 että isäntäsolut eivät aiheuta merkittävää sairautta terveissä kasveissa tai terveissä eläimissä. Esimerkiksi, Fusa-*···] rium-lajilla, joka on patogeeninen kasveille, voidaan nähdä **.*·ί sienen hyökkäystä kasvin puuaineen kimppuun ja seurauksena * * ·.* : sairaustila, jolle ovat tunnusomaisia tyypilliset lakastu-
Ip· · 25 misoireet. Tässä määriteltynä "heterologinen proteiini" on : :*: proteiini, joka ei ole isäntäsolulle luontainen, tai luon- • · · .*·*; täinen proteiini, johon on tehty modifikaatioita luontaisen sekvenssin muuttamiseksi, tai luontainen proteiini, jonka ekspressio on kvantitatiivisesti muuttunut luontaisen prote- • »» *... 3 0 iinin ekspressioon vaaditun luontaisen säätelysekvenssin, • * * • · · *, kuten promoottorin, ribosominkiinnittymiskohdan, tai vastaa- • · V*i vien käsittelyn seurauksena, tai isäntäsolun muun yhdistel- t" : mä-DNA-tekniikoilla tapahtuvan käsittelyn seurauksena. Nuk- • · · . leiinihapposekvenssi on toimintakykyisesti liittynyt sopi- • · * I 35 vaan promoottorisekvenssiin, joka pystyy ohjaamaan nukle-• · · 1 * iinihapposekvenssin transkriptiota valitussa isäntäsolussa.
119437 4
Keksintö koskee myös menetelmää yhdistelmä-DNA-proteiinien tuottamiseksi, jossa menetelmässä kasvatetaan yhtä edellä mainituista lajeista olevaa isäntäsolua, joka sisältää nuk-leiinihapposekvenssin, joka koodittaa heterologista proteii-5 nia, oloissa, jotka vaikuttavat proteiinin ekspressioon, ja otetaan proteiini talteen viljelmästä. Eräässä edullisessa suoritusmuodossa proteiini on sieniproteiini, edullisimmin sienientsyymi. Keksinnön mukaista menetelmää käyttämällä tuotetaan ainakin noin 0,5 g heterologista proteiinia/1 10 isäntäsolua.
Keksinnön mukainen isäntäsolu erittää odottamattomasti vain alhaiset määrät proteaasia määritettynä kaseiinikirkastus-määrityksellä, joka kuvataan kappaleessa 6.1, alla; erityi-15 sesti havaitaan vain pienet hydrolyysivyöhykkeet, tai ei lainkaan. Keksinnön mukaiset isäntäsolut ja menetelmät ovat odottamattomasti tehokkaampia määrättyjen sienientsyymien yhdistelmä-DNA-tuotannossa kuin mikään muu tunnettu sienilaji, kuten Aspergillus niger, Aspergillus oryzae tai Fusarium 2 0 oxysporum.
• ♦ • · *]*. Lisäksi keksintö koskee promoottorisekvenssiä, joka on joh- • ·· I * dettu geenistä, joka koodittaa Fusarium oxysporum'in tryp- * · ♦ * .* siinimäistä proteaasia tai sen fragmenttia, jolla on oleel- • · · ί·· · 25 lisesti sama promoottoriaktiivisuus kuin mainitulla sekvens- sillä. Promoottorin sekvenssi esitetään in SEQ ID NO:5:ssä.
I»· • · · • « · •
Lisäksi keksintö koskee terminaattorisekvenssiä, joka on johdettu geenistä, joka koodittaa Fusarium oxysporum'in 30 trypsiinimäistä proteaasia tai sen fragmenttia, jolla on .* . oleellisesti sama terminaattoriaktiivisuus kuin mainitulla « · «
*· 1 sekvenssillä. Terminaattorin sekvenssi esitetään SEQ ID
• · * ^ | ♦ ···* NO: 6 : ssa.
• * t · · • · * • » · · ·*·.· 35 4. Piirrosten lyhyt kuvaus • *
Kuviossa 1 esitetään SDS-geeli eritetyistä proteiineista Fusarium graminearum'issa (linja 1); Aspergillus niger'issä 119437 5 (linja 2) ja Aspergillus oryzae'ssa (linja 3). Linjassa 4 esitetään molekyylimassamerkit.
Kuviossa 2 esitetään proteaasimäärityksen tulokset seuraa-5 villa näytteillä: Aspergillus oryzae (kaivo 1); Aspergillus niger (kaivo 2); Fusarium graminearum (kaivo 3); kaivojen tyhjät kontrollit (kaivot 4 - 6).
Kuviossa 3 esitetään plasmidin pJRoyö konstruointi.
10
Kuviossa 4 esitetään SDS-PAGE-analyysi trypsiinityyppisen proteaasin (SP387) erityksestä F. graminearum 20334:n trans-formantissa. Linja 1: molekyylimassamerkit; linja 2: tyhjä: linja 3: puhdistetun trypsintyyppisen proteaasiproteiinin 15 standardi; linja 4: tyhjä; linja 5: F. graminearum-kanta 20334 transformoimaton; linja 6: tyhjä; linja 7: F. graminearum-kanta 20334, joka on transformoitu plasmidilla pJRoy6; linja 8: tyhjä; linja 9: molekyylimassamerkit.
20 Kuviossa 5 esitetään pJRoy20:n restriktiokartta.
• · * • · I*’. Kuviossa 6 esitetään pDM151:n restriktiokartta.
I M • · • ·
» « I
** t* Kuviossa 7 esitetään pDM155:n restriktiokartta.
• * · • * * rt ^ * 25 • · « _ M.* Kuvioissa 8A ja 8B esitetään Carezyme®:n ekspressiotaso Fu- * «· *.· ' sarium graminearum' issa kun DSM 1514 : ää f ermentoidaan Fusa rium graminearum'issa 20 - 160 tuntia. Kuviossa 8A esitetään ·*·,, Carezyme®-määrityksen tulokset. Kuviossa 8B esitetään SDS- .*!*· 3 0 PAGE-analyysi Carezyme®:n tuotannosta mainitussa Fusarium * .·, graminearum'issa. Linja 1: molekyylimassamerkit; linja 2: 20 * · * *·^* tuntia; linja 3: 50 tuntia; linja 4: 70 tuntia; linja 5: 90 • * ···* tuntia; linja 6: 120 tuntia; linja 7: 140 tuntia; linja 8: • 160 tuntia.
• ·· · : 35 • M • *
Kuvioissa 9A ja 9B esitetään Lipolase®:n ekspressiotaso kun DSM 155-10:tä fermentoidaan Fusarium graminearum'issa 20 - 119437 6 160 tuntia. Kuviossa 9A esitetään Lipolase®-määrityksen tulokset. Kuviossa 9B esitetään SDS-PAGE-analyysi Lipolase®-tuotannosta mainitussa Fusarium graminearum'issa. Linja 1: molekyylimassamerkit; linja 2: 20 tuntia; linja 3: 50 tun- 5 tia; linja 4: 60 tuntia; linja 5: 90 tuntia; linja 6: 120 tuntia; linja 7: 140 tuntia; linja 8: 160 tuntia.
Kuviossa 10 esitetään pCaHj4l8:n restriktiokartta.
10 Kuviossa 11 esitetään pDM148:n restriktiokartta.
Kuviossa 12 esitetään pDM149:n restriktiokartta.
Kuviossa 13 esitetään pMHan37:n restriktiokartta.
15
Kuviossa 14 esitetään pDM154:n restriktiokartta.
5. Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus
Fusarium'eille on tunnusomaista myseeli, jota on viljelmässä 20 runsaasti ja puuvillamaisena, ja jolla on usein jonkin ver- . ran vaaleanpunaista, purppuranpunaista tai keltaista sävyä • · *’*. kiinteällä väliaineella. Konidioforit ovat vaihtelevasti • · ♦ *· ** kapeita ja yksinkertaisia, tai paksuja, lyhyitä, epäsäännöl- • · · *· · lisesti haarautuneita, tai niissä on kiehkura talluksia ί 25 (phialides), yksinään tai ryhmittyneinä rikkoutuviksi koni- « *.·/ dioforien massoiksi (sporodochia). Konidioita on pääasialli- ί sesti kahta tyyppiä, jotka usein pysyvät pieninä kosteina tähkinä: makrokonidiot useampisoluisia, hieman käyristyneitä tai taipuneita terävissä kärjissä, tyypillisesti kanootin- * 30 muotoisia ja mikrokonidiota, jotka ovat yksisoluisia, munan- t · · [· ^ muotoisia tai suorakaiteenmuotoisia, syntyneet yksittäin tai • · *. *ί ketjuiksi. Jotkin konidiot ovat välituotteita, 2- tai 3- • · · *...· soluisia, suorakaiteenmuotoisia tai hieman käyriä.
* • · • * * ♦ · * .·, ; 3 5 Eräässä erityisessä suoritusmuodossa keksinnön mukaiset t · · isäntäsolut ovat Fusarium graminearum-kannasta, jolle ovat tunnusomaisia seuraavat ominaispiirteet. Konidiot: Mikro- 119437 7 konidiot puuttuvat. Makrokonidiot ovat selväpiirteisen vä-liseinällisiä, paksuseinäisiä, suoria/kohtuullisen sirppi-mäisiä, epäsäännöllisen käyristyneitä lähes suoralla vatsa-pinnalla ja tasaisen kaarevalla selkäpinnalla. Tyvisolu on 5 selväpiirteisen jalanmuotoinen. Kärkisolu on kartionmuotöinen tai ahtautunut kuten suukappale. Konidioforit: haaroit-tumattomia ja haaroittuneita monotalluksia. Klamydoitiöt: ovat yleensä hyvin hitaita muodostumaan viljelmässä: mikäli niitä esiintyy, niitä muodostuu useimmiten makrokonidioissa, 10 mutta niitä voi muodostua myös myseelissä. Kolonian morfologia: PDA:11a kasvu on nopeaa tiiviillä ilmamyseelillä, joka voi lähes täyttää putken ja on usein väriltään keltaista/-kullanruskeaa reunojen ollessa valkoisia/karmiininpunaisia. Punaruskeat/oranssinväriset rikkoutuvat konidioforien mas-15 sat, mikäli niitä on läsnä, ovat hajallaan kasvavia, esiintyen usein vain kun viljelmät ovat yli 30 päivää vanhoja. Alapinta on tavallisesti karmiininpunaista. Tämä sieni tuottaa "Discolor"-osaston kaikista lajeista eniten sylinteri-mäisiä (selkä- ja vatsapinnat samansuuntaiset) makrokoni-20 dioita.
• · ^
Eräässä erityisimmässä suoritusmuodossa Fusarilon graminea- • · *.'·· rum on Fusarium graminearum Schwabe IMI 145425, joka on :*· ί talletettu kansainväliseen talletuslaitokseen the American • · : 25 Type Culture Collection tulonumerolla ATCC 20334 (US-patent- ·*· · , tijulkaisu 4,041,189), samoin kuin johdannaisia ja mutantte- • · · ja, jotka ovat samalla lailla ei-toksisia, ei-toksigeenisiä ja ei-patogeenisiä, esimerkiksi niitä, jotka esitetään US-patenttijulkaisussa 4,041,189.
: ·..
30 ·· * • · · *·] Ymmärretään, että koko selityksessä ja patenttivaatimuksissa paitsi että käsitteen "Fusamim graminearum" käyttö viittaa !***· tämän lajin organismeihin, se viittaa myös niihin lajeihin, ··· . jotka on aikaisemmin nimitetty tai nimitetään nykyisin muik- • · · • · · *** * 35 si lajeiksi vaihtoehtoisissa luokittelukaavioissa, mutta Φ · *· joilla on samat edellä määritellyt morfologiset - ja kasva- tusominaispiirteet, ja voivat olla F. graminearum'in kanssa 119437 8 samanmerkityksissä. Näitä ovat mm., mutta näihin rajoittumatta, Fusarium roseum, F. roseum var. graminearum, Gibbe-rella zeae, tai Gibberella roseum, Gibberella roseum f. sp. cerealis.
5
Ammattimies ymmärtää myös, että tässä kuvatun tässä kuvatun isäntälajin menestyksekäs transformointi ei rajoitu erityisesti esimerkkeinä esitettyjen vektorien, promoottorien ja valintamarkkerien käyttöön. Yleisesti puhuen, ne tekniikat, 10 jotka ovat käyttökelpoisia F. oxysporum'in, F. solani'n ja F. culmorum'in transformoinnissa, ovat käyttökelpoisia myös keksinnön mukaisilla isäntäsoluilla. Esimerkiksi, vaikka amdS-valintamarkkeri on edullinen, muita käyttökelpoisia valintamarkkereita ovat mm. argB (A. nidulans tai A. niger), 15 trpc (A. niger tai A. nidulans), pyrG (A. niger, A. oryzae tai A. nidulans), niaD (A. nidulans, A. niger, tai F. oxysporum) , ja hygB (E. coli)-markkereita. Promoottori voi olla mikä hyvänsä DNA-sekvenssi, jolla on voimakasta transkrip-tioaktiivisuutta näissä lajeissa, ja se voi olla peräisin 20 geeneistä, jotka koodattavat sekä solunulkoisia että solun- •·. sisäisiä proteiineja, kuten amylaaseja, glukoamylaaseja, * m Γ*. proteaaseja, lipaaseja, sellulaaseja ja glykolyyttisiä ent- • · ", * syymejä. Esimerkkejä sellaisista promoottoreista ovat, mutta • · · *· näihin rajoittumatta, mm. A. nidulans'in amdS-promoottori · · ϊ·ϊ ' 25 tai glykolyyttisten entsyymien geeneistä olevat promootto- rit, esimerkiksi TPI, ADH, GAPDH, ja PGK. Promoottori voi • t* *.· · myös olla homologinen promoottori, ts. käytetylle isännälle luonnollisen geenin promoottori. Promoottorisekvenssi voi myös olla varustettu linkkereillä spesifisten restriktiokoh-3 0 tien lisäämiseksi, jotka helpottavat promoottorisekvenssin .* , liittämistä valitun geenin tai valitun signaalipeptidin tai * « · ** ’* esialueen kanssa.
t*« t : * · · • ·*; Promoottorisekvenssi voi olla johdettu geenistä, joka koo- * * · .*.J 35 dittaa Fusarium oxysporum trypsiinityyppistä proteaasia tai • * sen fragmenttia, jolla on oleellisesti sama promoottoriak-tiivisuus kuin mainitulla sekvenssillä. Promoottorin sek- 119437 9 venssi esitetään SEQ ID N0:5:ssä. Edelleen keksintö koskee nukleiinihapposekvenssejä, jotka hybridisoituvat SEQ ID N0:5:ssä esitetyn promoottorisekvenssin kanssa seuraavissa olosuhteissa: esiliotetaan 5X SSC:ssä ja esihybridisoidaan 1 5 tunnin ajan noin 40 °C:ssa liuoksessa, jossa on 20 % forma-midia, 5X Denhardt'in liuosta, 50 mM natriumfosfaattia, pH 6,8, ja 50 μg denaturoitua ultraäänikäsiteltyä vasikan ka-teenkorvan DNA:ta, minkä jälkeen seuraa 18 tunnin ajan noin 40 °C:ssa hybridisointi samassa liuoksessa, jota on täyden-10 netty 100 μΜ ATP:llä, minkä jälkeen pestään 0,4X SSC:ssä lämpötilassa noin 45 °C, tai jotka ovat ainakin noin 90-%:isesti homologisia ja edullisesti noin 95-%:isesti homologisia SEQ ID NO:5:lie, mutta joilla on oleellisesti sama promoottoriaktiivisuus kuin mainitulla sekvenssillä. Eräässä 15 toisessa suoritusmuodossa promoottori voi olla sekvenssi, joka käsittää suuren joukon sitoutumiskohtia AreA:lle, typ-pirajoituksen aikana ekspressöityjen geenien posiitiivinen säätelijä; näitä kohtia kutsutaan nit-2-kohdiksi Neurospora orassa'ssa (Fu ja Marzlus, 1990, Proc. Natl. Acad. Sei.
20 U.S.A. 87:5331-5335). Promoottorisekvenssiä voidaan modifioida lisäämällä tai korvaamalla sellaisia AreA-kohtia.
• · % • · • · · :/.· Terminaattorit ja polyadenylointisekvenssit voivat myös olla **· : peräisin samoista lähteistä kuin promoottorit. Eräässä eri- • * . **· 25 tyisessä suoritusmuodossa terminaattorisekvenssi voi olla »·· · , peräisin geenistä, joka koodittaa Fusarium oxysporum'in ·»·. trypsiinityyppistä proteaasia tai sen fragmenttia, jolla on S · · oleellisesti sama terminaattoriaktiivisuus kuin mainitulla
sekvenssillä. Terminaattorin sekvenssi esitetään SEQ ID
•#>* 30 NO:6:ssa. Edelleen keksintö käsittää nukleiinihapposekvens- *·* * sit, jotka hybridisoituvat SEQ ID NO:6:ssa esitettyyn ter- ·*·.: minaattorisekvenssiin seuraavissa olosuhteissa: esiliuote- • · ,***· taan 5X SSC:ssä ja esihybridisoidaan 1 tunnin ajan noin 40 • * * *. °C:ssa liuoksessa, jossa on 20 % formamidia, 5X Denhardt's « · · *·* * 35 liuosta, 50 mM natriumfosfaattia, pH 6,8, ja 50 μg denatu- • · · *· *! roitua ultraäänikäsiteltyä vasikan kateenkorvan DNA:ta, minkä jälkeen hybridisoidaan 18 tunnin ajan noin 40 °C:ssa 119437 10 samassa liuoksessa, jota on täydennetty 100 μΜ ATP:llä, minkä jälkeen pestään 0,4X SSC:ssä lämpötilassa noin 45 °C, tai joilla on ainakin noin 90-%:inen homologia ja edullisesti noin 95-%:inen homologia SEQ ID NO:5:lie, mutta joilla on 5 oleellisesti sama terminaattoriaktiivisuus kuin mainitulla sekvenssillä.
Konstruktiin voidaan insertoida myös enhancer-sekvenssejä.
10 Jotta vältettäisiin tarve rikkoa solu ekspressöidyn tuotteen saamiseksi, ja jotta minimoitaisiin ekspressöidyn tuotteen mahdollisen hajoamisen määrä solun sisällä, on edullista, että tuote erittyy solun ulkopuolelle. Tätä varten kiinnostuksen kohteena oleva geeni liitetään eräässä edullisessa 15 suoritusmuodossa esialueeseen, kuten signaaliin tai johto-peptidiin, joka voi ohjata ekspressöidyn tuotteen solun eri-tysreittiin. Esialue voi olla peräisin minkä hyvänsä organismin minkä hyvänsä eritetyn proteiinin geeneistä, tai se voi olla luontainen esialue. Sellaisen esialueen käyttökel-20 poisia käytettävissä olevia lähteitä ovat glukoamylaasi- tai • ·, amylaasigeeni Aspergillus-lajista, amylaasigeeni Bacillus- • · !**. lajista, lipaasi- tai proteinaasigeeni Rhizomucor miehei'- * t* l ) stä, α-faktorin geeni Saccharomyces cerevisiae'sta, tai • « * • p* vasikan prokymosiinigeeni. Esialue voi olla johdettu A.
• · * *·· : 25 oryzae'n TAKA-amylaasin, A. niger'in neutraalin a-amylaasin, \.V A. niger'in happostabiilin α-amylaasin, B. licheniformis'in
• M
*.· t α-amylaasin, Bacillus NCIB 11837:stä olevan maltogeenisen amylaasin, B. stearothermophilus'in α-amylaasin tai B. licheniformis subtilisin'in geenistä. Eräs tehokas signaa-·*·*· 30 lisekvenssi on A. oryzae'n TAKA-amylaasin signaali, Rhizomu- ,* , cor miehei'n asparagiinihappoproteinaasin signaali ja Rhizo- « · « *·/ mucor miehei'n lipaasin signaali. Eräänä vaihtoehtona, voi- | · ···’ daan käyttää myös ekspressöitävälle geenille luontaista esi- ; aluetta, esimerkiksi, SEQ ID N0:4:ssä aminohappojen -24 ja • · · · .*. : 35 -5 olevaa.
* · · • · 119437 11
Halutun tuotteen geeni liitettynä toimintakykyisesti promoottori- ja terminaattorisekvensseihin voidaan sisällyttää vektoriin, joka sisältää valintamarkkerin, tai se voidaan sijoittaa erilliseen vektoriin tai plasmidiin, joka pystyy 5 integroitumaan isäntäkannan genomiin. Vaihtoehtoisesti, käytetyt vektorit voivat pystyä replikoitumaan isäntäsolussa lineaarisina tai rengasmaisina ekstrakromosomaalisina elementteinä. Näitä vektorityyppejä ovat esimerkiksi plasmidit ja minikromosomit. Vektorijärjestelmä voi olla yksi ainoa 10 vektori tai plasmidi, tai kaksi tai useampia vektoreita tai plasmideja, jotka yhdessä sisältävät kokonais-DNA:n, jonka on integroiduttava genomiin. Vektorit tai plasmidit voivat olla lineaarisia tai suljettuja rengasmaisia molekyylejä.
15 Isäntäsolu voidaan transformoida heterologista proteiinia koodittavalla nukleiinihapolla käyttämällä alalla tunnettuja menettelytapoja, kuten transformointia ja elektroporaatiota (katso esimerkiksi julkaisua: Fincham, 1989, Microbial Rev. 53:148-170).
20
Keksinnön mukaista yhdistelmä-DNA-isäntäsolua voidaan kas- vattaa alalla tunnettuja menettelytapoja käyttämällä. Lyhy- esti, isäntäsoluja kasvatetaan standardikasvatusväliaineel- .** · la, kuten sellaisilla, jotka sisältävät yhdistelmän epäor- · , 2 5 gaanisia suoloja, vitamiineja, sopivaa orgaanista hiililäh- . dettä, kuten glukoosia tai tärkkelystä, mitä hyvänsä erilai- ’.V,t sista kompleksisista ravinnelähteistä (hiivauute, hydroly- 1 · « ’ soitu kaseiini, soijajauho ja vastaavat). Yksi esimerkki on FP-l-väliaine (5 % soijajauhoa, 5 % glukoosia, 2 % ·'*’* 30 K2HP04: ää, 0,2 % CaCl2:ta, 0,2 % MgS04 7H20: ta ja 0,1 % plu- # * · * *.* * ronihappoa (BASF) ) . Fermentomti suoritetaan pH-arvossa noin ·*·,· 4,5 - 8,0, ja lämpötilassa noin 20 - 37 °C noin 2-7 päivän • i ,’**· ajan.
♦ ·· • ·
♦ · J
'·' * 3 5 Keksinnön mukaista isäntäsolulajia voidaan käyttää ekspres-*· · söimään mitä hyvänsä kiinnostuksen kohteena olevaa proka-ryoottista tai eukaryoottista heterologista proteiinia, ja 119437 12 edullisesti sitä käytetään ekspressöimään eukaryoottisia proteiineja. Erityisen kiinnostavaa näille lajeille on niiden käyttö heterologisten proteiinien, erityisesti sienient-syymien ekspressiossa. Uusia ekspressiojärjestelmiä voidaan 5 käyttää ekspressöimään entsyymejä kuten katalaasi, lakkaasi, fenolioksidaasi, oksidaasi, oksidoreduktaasit, sellulaasi, ksylanaasi, peroksidaasi, lipaasi, hydrolaasi, esteraasi, kutinaasi, proteaasi ja muut proteolyyttiset entsyymit, ami-nopeptidaasi, karboksipeptidaasi, fytaasi, lyaasi, pektinaa-10 si ja muut pektinolyyttiset entsyymit, amylaasi, glukoamy-laasi, α-galaktosidaasi, β-galaktosidaasi, a-glukosidaasi, β-glukosidaasi, mannosidaasi, isomeraasi, invertaasi, trans-ferääsi, ribonukleaasi, kitinääsi, mutanaasi ja deoksiribo-nukleaasi.
15
Eräässä erityisessä suoritusmuodossa, entsyymi on alkalinen proteaasi, esimerkiksi, Fusarium oxysporum pre-pro-trypsii-nigeeni. Eräässä erityisimmässä suoritusmuodossa genomisek-venssi esitetään SEQ ID NO:3:ssa ja proteiinisekvenssi esi-20 tetään SEQ ID N0:4:ssä.
* f *···* Eräässä toisessa erityisessä suoritusmuodossa entsyymi on t · *,*ϊ alkalinen endoglukanaasi, joka on immunologisesti reaktiivi- • · V : nen vasta-aineen kanssa, joka on kohotettu hyvin puhdistet- ;s· · 25 tua ~43 kD endoglukanaasia vastaan, joka on peräisin Humico- 15*; la insolens, DSM 1800:sta, tai joka on johdannainen ~43 kD:n j*j*: endoglukanaasista, jolla on sellulaasiaktiivisuutta (katso WO 91/17243). Endoglukanaasia, jota kutsutaan tämän jälkeen
*·, nimellä "Carezyme®", voi koodittaa geeni, joka esitetään SEQ
* «· 30 ID NO: 7 : llä, ja sillä voi olla proteiinisekvenssi, joka esi- « · * *, tetään SEQ ID N0:8:ssa. Entsyymi voi myös olla Carezyme®-va- · V'j riantti.
·*· i : • 4 * • Yhä edelleen eräässä toisessa erityisessä suoritusmuodossa
I I J
” * 35 entsyymi on 1,3-spesifinen lipaasi, jota kutsutaan tämän • *♦ * * jälkeen nimellä Lipolase®. Entsyymiä voi koodittaa DNA-sek- venssi, joka esitetään SEQ ID NO:9:ssä, ja sillä voi olla 119437 13 aminohapposekvenssi, joka esitetään SEQ ID NO: 10:ssä. Entsyymi voi myös olla Lipolase®-variantti, esimerkiksi D96L, E210K, E210L (katso W0 92/05249). Ammattimiehet ymmärtävät, ettei käsite "sienientsyymit" sisällä ainoataan luontaisia 5 sienientsyymejä, vaan myös ne sienientsyymit, joita on modifioitu aminohapposubstituutioilla, -deleetioilla, -addi-tioilla, tai muilla modifikaatioilla, jotka voidaan tehdä aktiivisuuden, lämpöstabiilisuuden, pH-sietokyvyn ja vastaavien ominaisuuksien parantamiseksi. Keksinnön mukaista isän-10 täsolulajia voidaan myös käyttää ekspressöimään farmaseuttisesti kiinnostavia heterologisia proteiineja, kuten hormoneja, kasvutekijöitä, reseptoreita, ja vastaavia.
Keksintöä kuvataan edelleen seuraavilla ei-rajoittavilla 15 esimerkeillä.
6. Esimerkit 6.1. Fusarium graminearum 20334 erittää vain alhaisen tason proteiinia 20 Fusarium graminearum-kannan 20334, A. oryzae'n ja A. ni-.. ger'in konidioitiösuspensioita siirrostetaan 25 ml:aan YPD- ’···* väliainetta (1 % hiivauutetta (Difco) , 2 % baktopeptonia *» *· (Difco), 2 % glukoosia) 125-ml: isessa ravistelupullossa, ja ! inkuboidaan 5 päivän ajan 30 °C:ssa pyöritysnopeudella 300 t ;,| j 25 r/min. Viljelmistä olevat supernatanttiliemet kerätään sent-rifugoimalla. Yhteensä 10 μΐ kutakin näytettä sekoitetaan 10 »T: μ1:η kanssa 0,1 M ditiotreitolia (Sigma) ja 10 μ1:η kanssa lisäyspuskuria (40 mM Tris-emästä, 6 % natriumdodekyylisul-”.)>t faattia, 2,5 mM EDTA:ta, 15 % glyserolia, 2 mg/ml bromikre- .···* 30 solipurppuranpunaista) . Näytteitä keitetään 5 min ajan, ja * Φ Ψ ajetaan 4- - l2-%:isella polyakryyliamidigeelillä (Novex).
«,** · ’S Proteiinit havainnollistetaan värjäämällä Coomassie-sinisel- lä. Tulokset (kuvio 1) osoittavat, että Fusarium graminea- * : rum-kanta 20334 tuottaa hyvin vähän erittynyttä proteiinia.
Ή · : 35 * tf 6.2. Fusarium graminearum 20334 erittää vain alhaisen tason proteaaseja 119437 14
Yhteensä 40 μΐ kasvatusliemiä Fusarium graminearum-kannasta 20334, A. oryzae'sta, ja A. niger'ista (katso lukua 6.1., yllä) pipetoidaan kutakin kaivoihin, jotka on leikattu ka-seiiniagarlevylle (2 % rasvatonta kuivamaitoa (Lucerne), 50 5 mM Tris-HCl pH = 7,5, 1 % hienoa agaria (Ditco)). Levyjä inkuboidaan 37 °C:ssa 5 tunnin ajan, ja havaitaan proteiini-hydrolyysivyöhykkeet. Tulokset (kuvio 2) osoittavat, että Fusarium graminearum-kannan 20334 kasvatusliemi sisältää hyvin vähän proteolyyttistä aktiivisuutta.
10 6.3. Fusarium oxysporum'in genomisen prepro-trypsiinigeenin kloonaus F. oxysporum'in genomi-DNA:sta valmistetaan genomi-DNA-kir-jasto lambda-fagiin käyttämällä menetelmiä, kuten sellaisia, 15 jotka kuvataan käsikirjassa: Sambrook et ai., 1989, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY. Yhteensä 50 μg genomi-DNA:ta sulatetaan 1 min ajan 37 °C:ssa tilavuudessa 200 μΐ, joka sisältää 10 mM Tris-puskuria (pH = 7,5), 50 mM NaCl:ää, 7 mM MgCl2:ta, 7 mM 2-merkaptoetanolia 20 ja 4 yksikköä restriktioentsyymiä Sau3A. Osaksi sulatettu DNA, jonka molekyylikoko on 10 - 20 kiloemästä, eristetään agaroosigeelielektroforeesilla, minkä jälkeen seuraa elekt-roeluointi dialyysimembraaniin ja konsentrointi käyttämällä *·· .*.J Elutip-D-kolonnia (Schleicher and Schuell) . 1 μg lambda- .·. ; 25 ulokkeita fagista EMBL4, joka on katkaistu BamHl-restriktio- • · entsyymillä ja käsitelty fosfataasilla (Clonetech) , liite- • · * ***.* tään 300 - 400 μg:n kanssa Sau3A:lla katkaistua genomi-DNA:- • · · ta tilavuudessa 25 μΐ standardiolosuhteissa (katso käsikir- * · Λ *·* ’ jaa Sambrook et ai., 1989, Molecular Cloning, A Laboratory 30 Manual, Cold Spring Harbor, NY). Lamda-fagit valmistetaan • · : *·· tästä liitosseoksesta käyttämällä kaupallisesti saatavaa • · · · reagenssipakkausta (Gigapack Gold II, Stratagene) valmista- .·! : jän ohjeita noudattamalla.
• ·· • · * * * • · • · "* 35 Noin 15 000 yhdistelmä-DNA-lamba-fagin siirrostaminen le- • · : vyille ja suodatinnostojen (Hybond N+-suodattimille, • · :/·· Amersham) tuottaminen suoritetaan käyttämällä standardi- 119437 15 menetelmiä (Sambrook et ai., 1989, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY). Suodattimet käsitellään hybridisointia varten ei-radioaktiivista nukleiinihappojen havaitsemiseen tarkoitetulla Genius-reagenssi-5 pakkauksella (Boehringer Mannheim) käyttämällä standardi-menetelmiä (Sambrook et ai., 1989, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY). Koettimena käytetty DNA on 0,75 kiloemäksen digoksigeniini(DIG)-leimattu PCR-fragmentti F. oxysporum'in trypsiinityyppisen proteaasin 10 (kutsutaan tämän jälkeen nimellä SP387) geenin koko koodi-alueesta, joka on läsnä plasmidissa pSX233, joka on talletettu kansainväliseen talletuslaitokseen NRRL tulonumerolla NRRL B-21241. PCR-reaktion alukkeet ovat 5'-tgcggatccATGGT-CAAGTTCGCITCCGTC ("eteenpäin"-aluke, SEQ ID NO:l) ja 5'-15 gacctcgagTTAAGCATAGGTGTCAATGAA ("taaksepäin"-aluke, SEQ ID NO:2). Molemmissa alukkeissa, pikkukirjaimet edustavat link-kerisekvenssejä ja isot kirjaimet vastaavat SP387-geenin koodialuetta. PCR:n muodostamiseksi, 25 ng 907 emäsparin BamHl/Xbal-DNA-fragmenttia, joka sisältää SP387-geenin plas-20 midista pSX233, sekoitetaan 68 pmoolin kanssa kumpaakin "eteenpäin11- ja "taaksepäin"-alukkeesta.
• ·. DNA-fragmentin ja alukkeiden seoksen tilavuus säädetään 80 • · Γ*. ^l:ksi IX Taq-puskuri/lX DIG-leimaus-seoksella/5 yksikköä • · · I t 25 Taq:tä (Boehringer Mannheim). Reaktio-olosuhteet ovat 95 °C, • * *
** .· 3 min, sitten 35 sykliä, jotka käsittävät [95 °C 30 s, 50 °C
* * : 1 min, 72 °C 1 min] . PCR:llä F. oxysporum'in trypsiinityyp-
\i.: pisestä proteaasista johdettu DNA-sekvenssi esitetään SEQ ID
* * · V : NO:3:ssa. Fagitäplät seulotaan DIG-leimatulla koettimella 30 käyttäen Genius-reagenssipakkauksen (Boehringer Mannheim) modifikaatiota (Engler ja Blum, 1993, Anal. Biochem. 210: « 235-244). Positiiviset kloonit eristetään ja puhdistetaan # .* . toisella levyillesiirrostus- ja hybridisointikierroksella.
* · ·
Valmistetaan yhdistelmä-DNA-lamda-fageja, jotka sisältävät « · *···* 35 F. oxysporum'in trypsiinityyppisen proteaasin geenin, ja • fagista eristetään DNA käyttämällä Quiagen-lamda-midi-val- * * · · .'•J mistusreagenssipakkausta (Quiagen) .
• · 119437 16 6.4. Ekspressioplasmidin pJRoy6 konstruointi Käytetään restriktiokartoitus-, "Southern blotting"- ja hybridisointitekniikkoja (Sambrook et ai., 1989, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY) tun- 5 nistamaan 5,5 kiloemäksen Pstl-restriktioentsyymifragmentin yhdestä yhdistelmä-DNA-fagista, joka sisältää F. oxysporum'-in trypsiinityyppistä proteaasia koodittavan geenin ja reunustavat DNA-sekvenssit. Tämä 5,5 kiloemäksen Pstl-fragmentti alikloonataan Pstl-sulatettuun pUC118:aan, ja plasmidille 10 annetaan nimi pJRoy4 (katso kuviota 3). Plasmidi pJRoy4 sulatetaan EcoRl-restriktioentsyymillä, ja eristetään 3,5 kiloemäksen EcoRl-fragmentti, joka sisältää SP387-geenin ja pUC118-polylinkkerin 43 emäsparin EcoRl/Pstl-alueen, ja alikloonataan pToC90-vektoriin plasmidin pJRoy6 luomiseksi 15 (kuvio 3).
6.5. SP387-ekspressiokasetin konstruointi Konstruoidaan ekspressiokasetti (pJRoy20), joka sisältää SP387-promoottorin ja -terminaattorin liitettynä BamHl-koh- 20 dalla pUC118:aan. Eräs E. coli-kanta, joka sisältää pJRoy2Q:n, on talletettu kansainväliseen talletuslaitokseen NRRL. Promoottorifragmentti luodaan sulattamalla SP387-vek- • ·. torin pJRoy6 EcoRl:llä (joka katkaisee kohdassa -1200) ja
Ncol:llä (joka katkaisee translaation aloituskohdassa, katso « · · I 25 kuviota 5). Terminaattorisekvenssi (emäsparit 2056 - 3107 * · · • .1 kuviossa 5) luodaan PCR-monistuksella käyttämällä seuraavia • 1 1 ··· · oligonukleotideja: • · · • · 1 • · 1
a.: : ETEENPÄIN
30 5'gcacaccatggtcgctggatccATACCTTGTTGGAAGCGTCG3' (SEQ ID NO: 11) * · 1 * · 1 • » ·
TAAKSEPÄIN
• 1 · 5 ' atcggagcatgcggtaccgtttaaacgaattcAGGTAAACAAGATATAATTTTCTG3 ' * · *·;·’ 35 (SEQ ID NO:12) • · • · · * · ( * · · ·
* » I
« ·· • · 119437 17
Isot kirjaimet ovat komplementaarisia SP387-terminaattori-DNA:lle, kun taas pienet kirjaimet ovat häntiä, jotka sisältävät yhdistelmä-DNA-tekniikalla muodostetut restriktiokoh-dat.
5
Kun on sulatettu Ncol:llä ja Sphl:llä, eristetään tulokseksi saatu monistustuote, joka sisältää terminaattorin, jota reunustavat Ncol- ja BamHl-kohdat 5'-päässä, ja reunustavat EcoRl-, Pmel-, Kpm- ja Sphl-kohdat 3'-päässä. Suoritetaan 10 3-tieliitos promoottorifragmentin, terminaattorifragmentin ja Kpnl/Sphl-katkaistun pUC118:n välillä, jolloin muodostuu pJRoy20 (katso kuviota 5).
6.6. Carezyme®-konstruktit 15 Käytetään EcoRV-kohtaa SP387-promoottorin kohdassa -15, ja Ncol-kohtaa, joka on läsnä kohdassa +243 Carezyme®-koodialu-eella, jolloin muodostuu täsmällinen fuusio SP387-promootto-rin ja Carezyme®-geenin välille. PCR-fragmentti, joka sisältää alueen -18 - -1 SP387-promoottorista, ja jota seuraa 20 suoraan alue -1 - +294 Carezyme®-geenistä, luodaan Carezy-me®-vektorista pCaHj418 (katso kuviota 10) käyttämällä seu-raavia alukkeita: • *
’;·1. ETEENPÄIN
• · ·
25 EcoRV
• » **·" i 5 ' ctcttggatatctatctcttcaccATGCGTTCCTCCCCCCTCCT3 ' * : (seq id N0:i3) * · · * * · • · · taaksepäin * 30 5'CAATAGAGGTGGCAGCAAAA3' (SEQ ID NO:14) • * • · • *i .··.·. Pienet kirjaimet eteenpäin-alukkeessa ovat SP387-promootto- • rin emäsparit -24 - -1, kun taas isot kirjaimet ovat Carezy- • · · *· " me®:n emäsparit 1 - 20.
• · « l...: 35 : Käytetään PCR-olosuhteita: 95 °C, 5 min, sen jälkeen seuraa • · · · .•.j 30 sykliä, jotka käsittävät [95 °C, 30 s, 50 °C, 1 min, 72 • · 119437 18 °C, 1 min]. Tulokseksi saatu 0,32 kiloemäksen fragmentti kloonataan vektoriin pCRII käyttämällä yhtiön Invitrogen TA-kloonausreagenssipakkausta, jolloin saadaan tulokseksi pDM148 (katso kuviota li). 0,26 kiloemäksen EcoRV/NcoI-frag-5 mentti eristetään pDM148:sta ja liitetään pCaHj418:sta olevaan 0,69 kiloemäksen Ncol/Bglll-fragmenttiin, ja kloonataan EcoRV/BamHI-sulatettuun pJRoy20:een pDM149:n luomiseksi (katso kuviota 12). 3,2 kiloemäksen EcoRI-Carezyme®-ekspres-siokasetti (SP387 promoottori/Carezyme®/SP387-terminaattori) 10 eristetään pDM149:stä ja kloonataan pToC90:n EcoRI-kohtaan pDM151:n luomiseksi (katso kuviota 6). Ekspressiokonstrukti pDMISI sisältää sekä ekspressiokasetin että amdS-valittavan markkerin. Yksi E. coli-kanta, joka sisältää pDMISI:n, on talletettu kansainväliseen talletuslaitokseen NRRL.
15 6.7. Lipolase®-konstruktit
EcoRV-kohtaa SP387-promoottorin kohdassa -15, ja Sacl-kohtaa Lipolase®-koodausalueen kohdassa +6 käytetään luomaan täsmällisen fuusion SP387-promoottorin ja Lipolase®-geenin vä-20 lille. Konstruoidaan sovitin, joka sisältää viimeiset 15 emäsparia SP387-promoottorista, joita seuraavat ensimmäiset 6 emäsparia Lipolase®-koodausalueesta, ja esitetään alla.
• · « • ·
EcoRV Sacl • · · Ί 25 atctatctcttcaccATGAGGAGCT (SEQ ID NO:15) • · · 1 .· tagatagagaagtggTACTCC (SEQ ID NO: 16) • · t » · « * » * · » *”·* 0,9 kiloemäksen SacI/BamHI-fragmentti Lipolase®-cDNA-geenis- !.: * tä eristetään A. oryzae-ekspressiokonstruktista pMHan37 30 (katso kuviota 13). EcoRV/SacI-sovitin ja SacI/BamHI-Lipo- lase®-fragmentti liitetään ja kloonataan EcoRV/BamHI-sula- tettuun pJRoy20:een plasmidin pDM154 luomiseksi (katso ku- /. viota 14). 3,2 kiloemäksen KpnI-Lipolase®-ekspressiokasetti *./ (SP387-promoottori/Lipolase®/SP387-terminaattori) eristetään « · ’·;·* 35 pDM154:stä, ja kloonataan pToC90:n Kpnl-kohtaan plasmidin jt:‘: pDM155 luomiseksi (katso kuviota 7) . Ekspressiokonstrukti :*·,· pDM155 sisältää sekä Lipolase®-ekspressiokasetin että amdS- • · 119437 19 valittavan markkerin. Eräs E. coli-kanta, joka sisältää pDM151:n, on talletettu kansainväliseen talletuslaitokseen NRRL.
5 6.8. F. graminearum'in transformointi
Fusarium graminearum-kannan ATCC 20334 viljelmiä kasvatetaan 3 viikon ajan 25 °C:ssa 100 x 15 mm petrilevyllä, joilla on Vogel'in väliainetta (Vogel, 1964, Am. Nature 98:435446) plus 1,5 % glukoosia ja 1,5 % agaria. Konidioita (noin 10 108/levy) siirretään 10 ml:aan steriiliä vettä käyttämällä siirtosilmukkaa, ja puhdistetaan suodattamalla 4 juustokan-gaskerroksen läpi ja lopuksi yhden miracloth-kerroksen läpi. Konidiosuspensioita konsentroidaan sentrifugoimalla. 50 ml YPG:tä (1 % hiivauutetta (Difco) 2 % baktopeptonia (Difco), 15 2 % glukoosia) siirrostetaan 10® konidiolla, ja inkuboidaan 14 tunnin ajan 20 °C:ssa, 150 r/min. Tulokseksi saadut hyy-fit siepataan steriilille 0,4-μπ\ suodattimelie, ja pestään peräkkäin steriilillä tislatulla vedellä ja 1,0 M MgS04:llä. Hyyfit suspendoidaan uudelleen 10 ml:aan Novozym® 234 (Novo 20 Nordisk)-liuokseen (2 - 10 mg/ml 1,0 M MgS04:ssä), ja sulatetaan 15 - 30 min ajan 34 °C:ssa sekoittaen nopeudella 80 r/min. Sulamaton hyyfimateriaali poistetaan tulokseksi saa-dusta protoplastisuspensiosta suodattamalla peräkkäin 4
«•I
·*·,· juustovaatekerroksen läpi ja "miracloth"-vaatteen läpi. 20 • · .·. : 25 ml 1 M sorbitolia ajetaan juustovaatteen ja "miracloth"- 4 ,4 vaatteen läpi, ja yhdistetään protoplastiliuoksen kanssa.
• · * "V Kun sekoitettu, protoplastit (noin 5 x 10®) pelletöidään • · "* sentrifugoimalla, ja pestään peräkkäin suspendoimalla uudel- | · * *** leen ja sentrifugoimalla 20 ml:ssa 1 M sorbitolia ja 20 30 ml:ssa STC:tä (0,8 m sorbitolia, 50 mM Tris-HCl:tä, pH = * » • ** 8,0, 50 mM CaCl2) . Pestyt protoplastit suspendoidaan uudel-
«•I
V * leen 4 osaan STC:tä ja 1 osaan SPTC:tä (0,8 M sorbitolia, 40 .*.J % polyetyleeniglykoli 4000 :tta (BDH) , 50 mM Tris-HCl pH = ···, 8,0, 50 mM CaCl2) konsentraatiossa 1 - 2 x 108/ml. 100 μΐ • i *·* 35 protoplastisuspensiota lisätään 5 jug:aan pJRoy6:tta ja 5 • · ♦ ί.ί : μΐ-.aan hepariinia (5 mg/ml STC:sä) polypropyleeniputkissa • · *.*·· (17 x 100 mm) , ja inkuboidaan 30 min ajan jäissä. Protoplas- 119437 20 tisuspensioon sekoitetaan varovasti 1 ml SPTCitä, ja inku-bointia jatketaan 20 min ajan huoneenlämpötilassa. Proto-plastit siirrostetaan levyille selektiiviselle väliaineelle, joka koostuu Cove'n suolasta (Cove, D.J., 1966, Biochem.
5 Biophys. Acta 113:51-56) plus 10 mM asetamidista, 15 mM CsCl2:sta, 2,5 % hienosta agarista (Difco) ja 1,0 M sakkaroosista käyttäen päällystettä samasta väliaineesta, jossa on 0,6 M sakkaroosia ja 1,0 % alhaisessa lämpötilassa sulavaa agaroosia (Sigma). Levyjä inkuboidaan 25 °C:ssa, ja 10 transformantteja ilmaantuu 6-21 päivässä.
6.9. Trypsiinityyppisen proteaasin ekspressio Fusarium gra-minearum'issa
Transformantteja siirretään levyille, joilla on COVE2-väli-15 ainetta (samaa kuin edellä oleva COVE-väliaine, mutta ilman cesiumkloridia ja korvaten 1,0 M sakkaroosin konsentraatiol-la 30 g/1), ja kasvatetaan 3 päivää tai pitempään 25 °C:ssa. 25-ml:isia eriä FP-l-väliainetta (5 % soijajauhoa, 5 % glukoosia, 2 % K2HP04: ää, 0,2 % CaCl2:ta, 0,2 % MgS04 · 7H20: ta ja 20 0,1 % pluronihappoa (BASF)) 150-ml:isissä pulloissa siirros tetaan noin 1-cm:isillä agarpaloilla COVE2-levyviljelmistä, ja inkuboidaan 6 päivän ajan 30 °C:ssa sekoittaen (150 r/min). Supernatanttilieminäytteet otetaan talteen sentrifu- *···* goinnin jälkeen, ja alistetaan seuraavalla tavalla SDS-PAGE- • · \**i 25 analyysille. 30 μΐ kutakin kasvatuslientä sekoitetaan 10 · V ί μ1:η kanssa SDS-PAGE-näytepuskuria (1 ml 0,5 M Tris pH = j.j · 6,8, 0,8 ml glyserolia, 1,6 ml 10-%:ista SDS:ää, 0,4 ml 0,8 : M ditiotreitolia, 0,2 ml l-%:ista bromifenolisinistä) , 2 μΐ »·· 2-%:ista PMSF:ää (Sigma) isopropanolissa, ja 2 μ1:η kanssa 30 glyserolia. Näytteet lisätään 4 minuutiksi kiehuvaan vesi- ··, hauteeseen, ja 40 μΐ kutakin ajetaan 10- - 27-%:isella poly- • · · akryyliamidigeelillä (Novex). Geelit värjätään ja värinpois- t » i tokäsitellään Coomassievärillä standardimenetelmiä käyttä- • 4 mällä. Trypsiinityyppisen proteaasin ekspressiotason on • · · S.,,! 35 määritetty olevan a 0,5 g/1.
• » • · · • · f 444 4 4 4 4 4 4 4 44 4 4 119437 21 6.10. Entsyymimääritykset 6.10.1. Carezyme®
Puskuri: Natriumfosfaatti (50 mM, pH 7,0)
Substraatti: AZCL-HE-selluloosaa (Megazyme) tasolla 2 mg/ml 5 puskuria
Entsyymistandardi: 100 mg Carezyme®-standardia (10070 ECU/g) liuotetaan 1 ml:aan puskuria, ja säilytetään -20 °C:ssa.
Tämä kantaliuos laimennetaan 1:100 puskuriin välittömästi 10 ennen entsyymimäärityksissä käyttöä. Määritysalue on 0,5 -5,0 ECU/ml. Käytetään muuntokerrointa 650000 ECU/g Carezyme®:ää.
Substraattiliuosta (990 μΐ) lisätään 24-kaivoisen mikrotiit-15 terilevyn näytekaivoihin. Substraattiin lisätään 10 μΐ Care-zyme®-näytettä (laimennettu puskuriin tuottamaan aktiivisuuden välillä 0,5 ja 10 ECU/ml). Reaktioita inkuboidaan 30 min ajan 45 °C:ssa siirtäen supernatantin 96-kaivoiselle mikro-tiitterilevylle, ja mitataan absorbanssi 650 nmrllä.
20 6.10.2. Lipolase®
Määrityspuskuri: 0,1 M MOPS, pH 7,5, joka sisältää 4 mM
*; CaCl2:ta ··· • ♦ ♦ · · • ·· • · ί 25 Substraatti: 10 ml p-nitrofenyylibutyraattia (pNB) . 1 ml: ssa DMSO: ta; * · » *’V Lisää 4 ml puskuria substraattiin DMSO:ssa 3 S · ::: 1Kantaliuoskonsentraatio = 11,5 mM 20-%:isessa DMSO:ssa : : : ♦ 30 Entsyymistandardi: Lipolase®:ää (23100 LU/g) liuotetaan ta- ί '1 solia 1000 LU/ml 50-%:iseen glyseroliin, ja säilytetään -20 ·· · * · · „ - V · °C:ssa.
: Tämä kantaliuos laimennetaan 1:100 puskuriin välittömästi • ···, ennen määritystä. Määritysalue on 0,125 - 3,0 LU/ml.
* « »·· 35 • ♦ • · · * · · 2 · · « · 119437 22 100 μΐ pNB-kantaliuosta lisätään 100 μΙ-.ΆΆη sopivasti laimennettua entsyyminäytettä. Aktiivisuus (mOD/min) mitataan 405 nm:llä 5 min ajan 25 °C:ssa.
5 6.10.3. SP387-määritys L-BAPNA-substraatti valmistetaan laimentamalla 0,2 M L-BAP-NA:n (Sigma B3133) kantaliuosta dimetyylisulfoksidissa (säilytetään pakastettuna) tasolle 0,004 M puskurissa (0,01 M dimetyyliglutaarihappoa (Sigma), 0,2 M boorihappoa ja 0,002 10 M kalsiumkloridia, säädetty NaOH:lla pH-arvoon 6,5) juuri ennen käyttöä. 1 μΐ viljelmää sentrifugoitiin (145 000 x g, 10 min). 100-μΐ erä laimennettua kasvatuslientä lisätään 100 μΐ:aan substraattia 96-kaivoisella mikrotiitterilevyllä. Absorption muutos 405 nm:llä määritetään 30 sekunnin välein 15 5 min ajan 25 °C:ssa ELISA-lukijaa käyttämällä. Tulokset lasketaan suhteessa puhdistettuun SP387-standardiin.
6.11. Carezyme®:n ekspressio
Puhdistetaan 23 pDM151-transformanttia, kasvatetaan raviste-20 lupulloissa soija/glukoosi-väliaineella, ja määritetään 9 päivän kuluttua Carezyme®-aktiivisuuden suhteen (Taulukko 1 - katso alla). 4 transformanttia ekspressöi Carezyme®:ää ta-solia noin 50 - 100 mg/1. Transformanttia pDM151-4 kasvate- • · « .1.$ taan pienimittakaavaisissa fermenttoreissa käyttäen olosuh- • · : 25 teitä, jotka on kehitetty SP387:n tuotannolle (katso kappa- 1 1 letta 6.9) . Noin 6,0 g/1 Carezyme®:ää ilmenee 7 päivän ku- * · · "V luttua (kuvio 8A) . Carezyme® käsittää yli 90 % eritetyistä
J 1 J
proteiineista 7 päivän pohjalta (kuvio 8A). Carezyme® käsit- 2 1 ! ** ‘ tää yli 90 % eritetyistä proteiineista SDS-geelielektrofo- 30 reesin pohjalta (kuvio 8B).
• φ « 1 • · · * ·· · • · 1 • · 1 * • · • · « r 1 1 • 1 * 1 1 i : 35 « · * · · • · I ·1· ·
ft » « I
• 1« « · 119437 23
Taulukko I
Transformantti # ECU/ml mg/1 5 pDM 151.3 - 4 58,2 90 pDM 151.3 - 5 0 0 pDM 151.3 - 6 0 0 pDM 151.3 - 10 0 0 pDM 151.3 - 11 2,46 4 10 pDM 151.3- 12 0 0 pDM 151.3 - 13 12,2 19 pDM 151.3 - 14 47,3 73 pDM 151.3 - 15 22,7 35 pDM 151.3 - 16 0 0 15 pDM 151.3 - 17 0 0 pDM 151.3 - 18 0 0 pDM 151.3 - 19 0 0 pDM 151.3 - 21 0 0 pDM 151.3 - 22 43,7 67 20 pDM 151.3 - 23 1,25 2 pDM 151.3 - 24 17,8 27 pDM 151.3 - 25 38 58 • 1. pDM 151.3 - 26 0 0 pDM 151.3 - 27 10,5 16 : 1, 25 pDM 151.3 - 28 49,3 76 ♦ 1 · ** .1’ pDM 151.3 - 29 19,8 30 pDM 151.3 - 30 22,7 35 »i· • 2 *.1 1 6.12. Lipolase®:n ekspressio 30 Puhdistetaan 15 pDM155-transformanttia, kasvatetaan raviste- · • lupulloissa soija/glukoosi-väliaineessa, ja määritetään 9 päivää myöhemmin Lipolase®-aktiivisuuden suhteen (taulukko 2 . - katso seuraavaa sivua) .
• · · • · · • » ··· * : ·;· 35 « · • · · » · · «·· ♦ · • · · • «· 2 • » 119437 24
Taulukko II
Transformantti # LU/ml mg/ml pDM 155 - 1 669 167 5 pDM 155 - 2 45,2 11 pDM 155 - 3 180 45 pDM 155 - 4 0 0 pDM 155 - 5 55,4 14 pDM 155 - 6 116 29 10 pDM 155 - 7 704 176 pDM 155 - 8 214 54 pDM 155 - 9 17,1 4 pDM 155 - 10 712 178 pDM 155 - 11 511 128 15 pDM 155 - 12 0 0 pDM 155 - 13 0 0 pDM 155 - 14 0 0 pDM 155 - 15 153 38 pDM 155 - 16 0 0 20 pDM 155 - 17 0 0 pDM 155 - 18 0 0 pDM 155 - 19 129 32 pDM 155 - 20 378 95 * · ,*]*! pDM 155 - 21 216 54 : *. 25 » · * * · ^ * ,* 4 transformanttia ekspressöi Lipolase®:ää tasolla noin 100 - • » » *··#5 200 mg/1 (pNB-määrityksen perusteella) . Transformanttia 114 ·Σ·* pDM155-10 kasvatetaan pienimittakaavaisissa fermenttoreissa • i· i käyttämällä olosuhteita, jotka kehitettiin SP387-tuotannolle 30 (katso lukua 6.9). Noin 2,0 g/1 Lipolase:a ilmenee 7 päivän { *.. lukuttua (kuvio 8A) . Lipolase® käsittää yli 90 % eritetyistä ΓΓ: proteiineista SDS-geelielektroforeesin pohjalta (kuvio 8B).
« · > · « • »« *.,* 7 . Mikro-organismien talletus
| J
*;·' 35 Seuraavat biologiset materiaalit on talletettu kansainväli- : seen talletuslaitokseen the Agricultural Research Service *« · ^ **·.: Patent Culture Collection (NRRL) , Northern Regional Research 4 « 119437 25
Center, 1815 University Street, Peoria, Illinois, 61604, USA.
Kanta Tulonumero Talletuspäivämäärä 5 E. coli, joka NRRL B-21285 20. kesäkuuta 1994 sisältää pJRoy6:n E. coli, joka NRRLB-21418 10. maaliskuuta 1995 sisältää 10 E.coli, joka NRRLB-21419 10. maaliskuuta 1995 sisältää pDM151:n E. coli, joka NRRLB-21420 10. maaliskuuta 1995 sisältää pDM155:n 15 Kannat on talletettu olosuhteissa, jotka varmistavat, että viljelmän saanti on mahdollinen tämän patenttihakemuksen ollessa ratkaisematta laitoksen the Comissioner of Patents and Trademarks määrittämälle henkilölle sääntöjen 37 C.F.R §1.14 ja 35 U.S.C. §122 ja kansainvälisen Budapestin sopi-20 muksen ehtojen mukaisesti. Tallenne edustaa kunkin talletetun kannan biologisesti puhdasta viljelmää. Tallenne on saatavissa vieraiden patenttilakien sitä vaatiessa maissa, / \ joissa kohdepatenttihakemuksen vastineet, tai sen jälkeläi- «·» ,·. : siä jätetään. Olisi kuitenkin ymmärrettävä, että tallenteen
« M
• · 25 saatavuus ei muodosta lisenssiä kohteena olevan keksinnön • < * .* toteuttamiseksi hallituksen myöntämät patenttioikeudet osit-
» t I
*",* tain kumoten.
*» · • « « · · • ·« • * · ·* * Tässä kuvatut erityiset suoritusmuodot eivät rajoita tässä 30 kuvattua ja vaadittua keksintöä, koska nämä suoritusmuodot Βψ • *·· on tarkoitettu keksinnön useiden näkökantojen kuvauksiksi.
:T: Kaikki samanarvoiset suoritusmuodot on tarkoitettu tämän • / · keksinnön suoja-alaan kuuluviksi. Itse asiassa edellä ole- • · 4 l..‘ vasta kuvauksesta ilmenee ammattimiehille tässä esitettyjen I : ”* 35 ja kuvattujen lisäksi keksinnön erilaisia modifikaatioita.
« * ;,· : Sellaiset modifikaatiot on myös tarkoitettu oheisten patentti*.: tivaatimuksen suoja-alaan kuuluviksi.
119437 26 Tässä viitataan eri viitteisiin, joiden sisältö liitetään tähän kokonaisuudessaan viitteeksi.
f · 9 9 9 9 · 9 *» 9 « « < • «* * · 9 9 V * t • · • ·
V
*.9 9 9 9% • 99 9 m 9 9 9 9 9 9 9* • «* *· * 9 9 9 99 9 9 9 9 9 » 999 9 9 9 9*9 » ♦
« I
ϊ 9 9 % 9 9 9 · *9% i : «»· 9 9 9 9 9· 9 9 9 «f* · 9 9 9%9 • 99 9 9 119437 27
SEKVENSSILUETTELO
(1) YLEISET TIEDOT: (i) HAKIJA: (A) NIMI: Novo Nordisk Biotech, Inc.
(B) KATU: 1445 Drew Avenue, Ste. 105 (C) KAUPUNKI: Davis (D) OSAVALTIO: California
(E) MAA: USA
(F) POSTINUMERO: 95616-4880 (G) PUHELIN: (916) 757-8100 (H) TELEFAX: (916) 758-0317 (ii) KEKSINNÖN NIMITYS: EI-TOKSINEN, EI-TOKSIGEENINEN, EI-PATOGEENINEN FUSARIUM-EKSPRESSIOJÄRJESTELMÄ JA SIINÄ KÄYTETTÄVIÄ PROMOOTTOREITA JA TERMINAATTOREITÄ (iii) SEKVENSSIEN LUKUMÄÄRÄ: 16 (iv) KIRJEENVAIHTO-OSOITE: (A) VASTAANOTTAJA: Novo Nordisk of North America, Inc.
(B) KATU: 405 Lexington Avenue, 64th Floor (C) KAUPUNKI: New York (D) OSAVALTIO: New York
(E) MAA: USA
(F) POSTINUMERO: 10174-6401 (v) KONEKOODIMUOTO: (A) VÄLINETYYPPI: disketti (B) TIETOKONE: IBM PC-yhteensopiva
(C) KÄYTTÖJÄRJESTELMÄ: PC-DOS/MS-DOS
(D) OHJELMISTO: Patent In Release #1.0, Version #1.30 • a • (vi) NYKYISEN HAKEMUKSEN TIEDOT: S#*.· (A) HAKEMUSNUMERO: määrättävä *,5 (B) JÄTTÖPÄIVÄ: 15. kesäkuuta 1995 V: (O luokitus: ♦ « · · {,V (vii) ETUOIKEUSHAKEMUKSEN TIEDOT: • J,.· (A) HAKEMUSNUMERO: US 08/269,449 ,V. (B) JÄTTÖPÄIVÄ: 30. kesäkuuta 1994 • « · (vii) ETUOIKEUSHAKEMUKSEN TIEDOT: (A) HAKEMUSNUMERO: US 08/404,678 : (B) JÄTTÖPÄIVÄ: 15. maaliskuuta 1995 >4· V *' (viii) ASIAMIEHEN TIEDOT: ..·] · (A) NIMI: Agris Dr., Cheryl H.
*/·! (B) REKISTERINUMERO: 34,086
,·". (C) VIITE/LUETTELONUMERO 4216.204-WO
··» i |\ (ix) TIETOLIIKENNEYHTEYSTIEDOT: *;·* J (A) PUHELIN: 212-867-0123 :*·.ϊ (B) TELEFAX: 212-878-9655 • 4 119437 28 (2) SEKVENSSIN ID NO:1 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 30 emäsparia (B) TYYPPI: nukleiinihappo (C) JUOSTEISUUS: yksijuosteinen (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEQ ID NO:1: TGCGGATCCA TGGTCAAGTT CGCTTCCGTC 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:2 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 30 emäsparia (B) TYYPPI: nukleiinihappo (C) JUOSTEISUUS: yksijuosteinen (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEQ ID NO:2: GACCTCGAGT TAAGCATAGG TGTCAATGAA 30 (2) SEKVENSSIN ID NO:3 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 998 emäsparia (B) TYYPPI: nukleiinihappo (C) JUOSTEISUUS: yksijuosteinen (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEQ ID NO:3: • · ATCATCAACC ACTCTTCACT CTTCAACTCT CCTCTCTTGG ATATCTATCT CTTCACCATG 60 • · "*. GTCAAGTTCG CTTCCGTCGT TGCACTTGTT GCTCCCCTGG CTGCTGCcGC TCCTCAGGAG 120 • · · • · · *. ATCCCCAACA TTGTTGGTGG CACTTCTGCC AGCGCTGGCG ACTTTCcCTT CATCGTGAGC 180 • t · • · ATTAGCCGCA ACGGTGGCCC CTGGTGTGGA GGTTCTCTCC TCAACGCCAA CACCGTCTTG 240 • · · • * * ACTGCTGCCC ACTGCGTTTC CGGATACGCT CAGAGCGGTT TCCAGATTCG TGCTGGCAGT 300 • * « • · · CTGTCTCGCA CTTCTGGTGG TATTACCTCC TCGCTTTCCT CCGTCAGAGT TCACCCTAGC 360 * · · • * * • TACAGCGGAA ACAACAACGA TCTTGCTATT CTGAAGCTCT CTACTTCCAT CCCCTCCGGC 420 .. GGAAACATCG GCTATGCTCG CCTGGCTGCT TCCGGCTCTG ACCCTGTCGC TGGATCTTCT 480 • · GCCACTGTTG CTGGCTGGGG CGCTACCTCT GAGGGCGGCA GCTCTACTCC CGTCAACCTT 540 Φ · * *\ CTGAAGGTTA CTGTCCCTAT CGTCTCTCGT GCTACCTGCC GAGCTCAGTA CGGCACCTCC 600 • « :/·; GCCATCACCA ACCAGATGTT CTGTGCTGGT GTTTCTTCCG GTGGCAAGGA CTCTTGCCAG 660 * · · : : GGTGACAGCG GCGGCCCCAT CGTCGACAGC TCCAACACTC TTATCGGTGC TGTCTCTTGG 720 • · · I .*. GGTAACGGAT GTGCCCGACC CAACTACTCT GGTGTCTATG CCAGCGTTGG TGCTCTCCGC 780 • · * • * · · : TCTTTCATTG ACACCTATGC TTAAATACCT TGTTGGAAGC GTCGAGATGT TCCTTGAATA 840 • · · • · TTCTCTAGCT TGAGTCTTGG ATACGAAACC TGTTTGAGAA ATAGGTTTCA ACGAGTTAAG 900 AAGATATGAG TTGATTTCAG TTGGATCTTA GTCCTGGTTG CTCGTAATAG AGCAATCTAG 960 1 1 9437 29 ATAGCCCAAA TTGAATATGA AATTTGATGA AAATATTC 998 (2) SEKVENSSIN ID NO:4 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 248 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (C) JUOSTEISUUS: yksijuosteinen (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Proteiini (B) ASEMA: 1..224 (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS: Peptidi (B) ASEMA: -24..0 (D) LISÄTIEDOT: /tuote» "MUU" /huomautus= "Leima=pre-propeptidi" (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEQ ID NO:4:
Met Vai Lys Phe Ala Ser Vai Vai Ala Leu Vai Ala Pro Leu Ala Ala -20 -15 -10
Ala Ala Pro Gin Glu Ile Pro Asn Ile Vai Gly Gly Thr Ser Ala Ser -5 15
Ala Gly Asp Phe Pro Phe Ile Vai Ser Ile Ser Arg Asn Gly Gly Pro 10 15 20
Trp Cys Gly Gly Ser Leu Leu Asn Ala Asn Thr Vai Leu Thr Ala Ala 25 30 35 40 « *···' His Cys Vai Ser Gly Tyr Ala Gin Ser Gly Phe Gin Ile Arg Ala Gly .*. : 45 50 55 • M • * .·. : Ser Leu Ser Arg Thr Ser Gly Gly Ile Thr Ser Ser Leu Ser Ser Vai *. : 60 65 70 • * « : Arg Vai His Pro Ser Tyr Ser Gly Asn Asn Asn Asp Leu Ala Ile Leu . .·. 75 80 85 • · · * · * #·;·, Lys Leu Ser Thr Ser Ile Pro Ser Gly Gly Asn Ile Gly Tyr Ala Arg ·.·’ : 90 95 100
Leu Ala Ala Ser Gly Ser Asp Pro Vai Ala Gly Ser Ser Ala Thr Vai 105 110 115 120 • · · · *... Ala Gly Trp Gly Ala Thr Ser Glu Gly Gly Ser Ser Thr Pro Vai Asn : ί : 125 130 135 » .·. : Leu Leu Lys Vai Thr Vai Pro Ile Vai Ser Arg Ala Thr Cys Arg Ala
*. *: 140 145 ISO
• · ·
Gin Tyr Gly Thr Ser Ala Ile Thr Asn Gin Met Phe Cys Ala Gly Vai • 155 160 165 • · • · * ··· · Ser Ser Gly Gly Lys Asp Ser Cys Gin Gly Asp Ser Gly Gly Pro Ile ί 170 175 180 • t* • ·
Vai Asp Ser Ser Asn Thr Leu Ile Gly Ala Vai Ser Trp Gly Asn Gly 185 190 195 200 119437 30
Cys Ala Arg Pro Asn Tyr Ser Gly Vai Tyr Ala Ser Val Gly Ala Leu 205 210 215
Arg Ser Phe lie Asp Thr Tyr Ala 220 (2) SEKVENSSIN ID NO:5 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 1206 emäsparia (B) TYYPPI: nukleiinihappo (C) JUOSTEISUUS: yksijuosteinen (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEQ ID NO:5: GAATTCTTAC AAACCTTCAA CAGTGGAGAC TTCCGACACG ACATATCGAT CCTTTGAAGA 60 TACGGTGAGC GTCAGATCAT GAATTTCATA CATCCTCACG TCCTTCCTCT TTCAAACTAT 120 GCAAAGTCCT TCTAGTACCT CCCAAAACTT GATTTACGCG CTCTCCAATC AAAAGTACCT 180 TCCAAAAGTG ATCTACCTCA GCTCTAGATC AGGGCACCTA TTCGCAAAGA TCTACAAGCT 240 GAACTAGTAA GCATAGCGGG AGAATATCCC ACATCATTCG AGAAGGCCTT CGTATTAGAC 300 CTAGTGGGAT CGACAGAAAA GATAAGACGG AGATAGATGC TATGTTTGGA AGGTAGGGGA 360 TGGAATAGGA TGCAACAGGT ATTGGCATAA GCGATGCAAT AGGTGCATCT AGAAACTAGG 420 TGACAGACTG GCCACAGAGG TGTATCCTAT GCAGGTCGAT GCGTGCGTTA TCGCAGGGCT 480 GCTATTGCGT GGTGGTGGCT ACAAAAGTTC TATGTGGTTT CCAGTTTCAG AATATTGGGC 540 CATTGTGATT GATGGCGCAT GACCGAATTA TAGCAGTGAA CCCCGCCCAG AGTAGTAGTG 600 CAGATGCGCT TTGATGCTTG GCGATTCCTC GGGCTAAATA ACTCCGGTTG GTCTGTAGAA 660 « '···' TGCTGACGCG ATGATCCTTC GGCATTAATC GTAGATCTTG GGGGGGGATA AGCCGATCAA 720 • · * *· " AGACACACTG TAGATCAGCT CTTCGATGAC TCTTACCAGC TTTATAATAA CATTCATCTT 780 • φ • · · ’· Ϊ GAACGTCTTT TTCGTCCAGT GTTTACCTTT CGTCCTATTT ATCCGTCATA TCCACAGTGT 840 : TATTGGCGAT agagttatcg ACTTTCCTCA TCGGGATACT GGCCCCTGCT GCCAAGGGCC 900 TTATATGCCG ATCACTTTCA CGGGAGCATG ATAAGGTTAA TGCTTCTTCT GAATGCCGAA 960 • ·· * CTAGACTACG GAACAACGGA GCTTAGTACC AGAAAGGCAG GTACGCCTAT TCGCAAACTC 1020 CGAAGATACA ACCAAGCAAG CTTATCGCGG GATAGTAACC AGAGAGGCAG GTAAGAAGAC 1080 • · • *·· ACAACAACAT CCATAGCTAT GTAGATTCTC GAATATAAAA GGACCAAGAT GGACTATTCG 1140 *· * v‘ · AAGTAGTCTA TCATCAACCA CTCTTCACTC TTCAACTCTC CTCTCTTGGA TATCTATCTC 1200 Ϊ TTCACC 1206 • · • · Ϊ***: (2) SEKVENSSIN ID NO: 6 TIEDOT: ··· j ;*; (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: *" I (A) PITUUS: 1188 emäsparia :.*·· (B) TYYPPI: nukleiinihappo (C) JUOSTEISUUS: yksijuosteinen (D) TOPOLOGIA: lineaarinen 119437 31 (Xl) SEKVENSSIN KUVAUS: SEQ ID NO: 6: TAAATACCTT GTTCGAAGCG TCGAGATGTT CCTTGAATAT TCTCTAGCTT GAGTCTTGGA 60 TACGAAACCT GTTTGAGAAA TAGGTTTCAA CGAGTTAAGA AGATATGAGT TGATTTCAGT 120 TGGATCTTAG TCCTCGTTGC TCGTAATAGA GCAATCTAGA TAGCCCAAAT TGAATATGAA 180 ATTTGATGGA AATATTCATT TCGATAGAAG CAACGTGAAA TGTCTAGCAG GACGAAAAGT 240 AGATCAAGGC TGTTATGTTC CCCGACCAAC CTACCTTGAT GTCAGTCTGC GAGTCGTGTG 300 CAGTGACCCA GAATGATGGA TTGACTTGGA CATTTTCTGT CTATGAAGTA TTATGAACAT 360 GAATATCGTT TCCTCATTAT CTATGTTGGC AGCCTAAAGT TTTACCATAT AGCTAGCAAT 420 CAGTCAAGTA TCTGCGTATG AAGGGTTGTT AAGCCAGGAC GGTATCAGCG TTGAATATTT 480 AAAGAATGAT ATGAGATAAT CAACATTGAC ATGATAAAAG AAAAGGGGAA ACAAATTGTG 540 CATATAGTAA AGACTTCAGG TCGACCCCTC AATAGACATA TGCGAACCGA AAACCAACAG 600 GATACAATTT ATAGATAAGT ATAACTACAG TTATCTGTCT GCCGAACAAA TACTCTTTTG 660 TGAAACAAAT GAAGAGTACA TAAGCTACAG TTCCTCAGTA GGAACATCCT TTACAATAAC 720 TCCCTTGACT TCCTTCAGCT TCTCAATAGC CTCCAAAGTC ATCGGTCTGC CATCAAGGCA 780 CGTCAGCTCT GGTGTAGCAT ACAGCAGTGC CATACTTACG GAGGATAGGA AGTGGGAGGA 840 ATCGTTCGTG TCTGCCTCCA AAAATCGACA CCAGTGTCCT TTTTGACGAT ACTGATATGG 900 TGGTAAGCTT GGGAGTCTAT TGTTGACGTT GCATCACTTA CTTAAGCACG GTTTCATTCC 960 TCTGCTGATA GTCCTCCAAC TTCTCGAAGT CGTAAACGAT GGCCTATAGT ATCTTATTGA 1020 GAAATATGTC TTCTCAGAAA ATTATATCTT GTTTACCTTT CGGTCCGCCA TGGCTGCTAA 1080 AACTGCTGGG AAATTCAAAA GCGCAGCACA AGCAGCAAGA GTGATGGGCA CAACGTGATA 1140 • · *...’ TGTTGATAAA AGCATCAGTA TCGATAAGTT CCACTCAGAA ACCTGCAG 1188 • · • · · (2) SEKVENSSIN ID NO: 7 TIEDOT: * · • · · • « // (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: :.! : (A) PITUUS: 1060 emäsparia . (B) TYYPPI: nukleiinihappo (C) JUOSTEISUUS: yksijuosteinen : ·* : (D) TOPOLOGIA: lineaarinen * (ix) OMINAISPIIRRE:
. (A) NIMI/SELITYS : CDS
(B) ASEMA: 10..924 * · · »ti (ix) OMINAISPIIRRE: (A) NIMI/SELITYS : mat_peptidi /./ (B) ASEMA: 73..924 • » ··· (ix) OMINAISPIIRRE: :.· (A) nimi/SELITYS: sig_peptidi : (B) ASEMA: 10..72 • ·· • · (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEQ ID NO:7: GGATCCAAG ATG CGT TCC TCC CCC CTC CTC CCG TCC GCC OTT GTG GCC 48
Met Arg Ser Ser Pro Leu Leu Pro Ser Ala Vai Vai Ala 119437 32 -21 -20 -15 -10 GCC CTG CCG GTG TTG GCC CTT GCC GCT GAT GGC AGG TCC ACC CGC TAC 96
Ala Leu Pro Val Leu Ala Leu Ala Ala Asp Gly Arg Ser Thr Arg Tyr -5 15 TGG GAC TGC TGC AAG CCT TCG TGC GGC TGG GCC AAG AAG GCT CCC GTG 144
Trp Asp Cys Cys Lys Pro Ser Cys Gly Trp Ala Lys Lys Ala Pro Val 10 15 20 AAC CAG CCT GTC TTT TCC TGC AAC GCC AAC TTC CAG CGT ATC ACG GAC 192
Asn Gin Pro Val Phe Ser Cys Asn Ala Asn Phe Gin Arg lie Thr Asp 25 30 35 40 TTC GAC GCC AAG TCC GGC TGC GAG CCG GGC GGT GTC GCC TAC TCG TGC 240
Phe Asp Ala Lys Ser Gly Cys Glu Pro Gly Gly Val Ala Tyr Ser Cys 45 SO 55 GCC GAC CAG ACC CCA TGG GCT GTG AAC GAC GAC TTC GCG CTC GGT TTT 288
Ala Asp Gin Thr Pro Trp Ala val Asn Asp Asp Phe Ala Leu Gly Phe 60 65 70 GCT GCC ACC TCT ATT GCC GGC AGC AAT GAG GCG GGC TGG TGC TGC GCC 336
Ala Ala Thr Ser lie Ala Gly Ser Asn Glu Ala Gly Trp Cys Cys Ala 75 80 85 TGC TAC GAG CTC ACC TTC ACA TCC GGT CCT GTT GCT GGC AAG AAG ATG 384
Cys Tyr Glu Leu Thr Phe Thr Ser Gly Pro Val Ala Gly Lys Lys Met 90 95 100 GTC GTC CAG TCC ACC AGC ACT GGC GGT GAT CTT GGC AGC AAC CAC TTC 432
Val Val Gin Ser Thr Ser Thr Gly Gly Asp Leu Gly Ser Asn His Phe 105 110 115 120 GAT CTC AAC ATC CCC GGC GGC GGC GTC GGC ATC TTC GAC GGA TGC ACT 480
Asp Leu Asn lie Pro Gly Gly Gly Val Gly lie Phe Asp Gly Cys Thr 125 130 135 119437 33 ACC ACC TGC GTC GCT GGC AGC ACT TGC ACG AAG ATT AAT GAC TGG TAC 912
Thr Thr Cys Val Ala Gly Ser Thr Cys Thr Lys lie Asn Asp Trp Tyr 265 270 275 280 CAT CAG TGC CTG TAGACGCAGG GCAGCTTGAG GGCCTTACTG GTGGCCGCAA 964
His Gin Cys Leu CGAAATGACA CTCCCAATCA CTGTATTAGT TCTTGTACAT AATTTCGTCA TCCCTCCAGG 1024 GATTGTCACA TAAATGCAAT GAGGAACAAT GAGTAC 1060 (2) SEKVENSSIN ID NO:8 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 305 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (ii) MOLEKYYLITYYPPI: proteiini (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEQ ID NO: 8:
Met Arg Ser Ser Pro Leu Leu Pro Ser Ala Vai Vai Ala Ala Leu Pro -21 -20 -15 -10
Vai Leu Ala Leu Ala Ala Asp Gly Arg Ser Thr Arg Tyr Trp Asp Cys -5 15 10
Cys Lys Pro Ser Cys Gly Trp Ala Lys Lys Ala Pro Vai Asn Gin Pro 15 20 25
Vai Phe Ser Cys Asn Ala Asn Phe Gin Arg Ile Thr Asp Phe Asp Ala 30 35 40
Lys Ser Gly Cys Glu Pro Gly Gly Vai Ala Tyr Ser Cys Ala Asp Gin 45 50 55
Thr Pro Trp Ala Vai Asn Asp Asp Phe Ala Leu Gly Phe Ala Ala Thr .* *· 60 65 70 75 ··· ·*· · Ser Ile Ala Gly Ser Asn Glu Ala Gly Trp Cys Cys Ala Cys Tyr Glu ’· '· 80 85 90 • · • · « *· · Leu Thr Phe Thr Ser Gly Pro Vai Ala Gly Lys Lys Met Vai Vai Gin . 95 100 105 • « * ··· ♦ , ,·, Ser Thr Ser Thr Gly Gly Asp Leu Gly Ser Asn His Phe Asp Leu Asn M.* 110 115 120 ·»· V * Ile Pro Gly Gly Gly Vai Gly Ile Phe Asp Gly Cys Thr Pro Gin Phe 125 130 135 j·, Gly Gly Leu Pro Gly Gin Arg Tyr Gly Gly Ile Ser Ser Arg Asn Glu J ·· 140 145 150 155 ··· ·,♦ · Cys Asp Arg Phe Pro Asp Ala Leu Lys Pro Gly Cys Tyr Trp Arg Phe • 160 165 170 • ♦ • · *· *· Asp Trp Phe Lys Asn Ala Asp Asn Pro Ser Phe Ser Phe Arg Gin Vai j*". 175 180 185 **« , *. Gin Cys Pro Ala Glu Leu Vai Ala Arg Thr Gly Cys Arg Arg Asn Asp Ϊ : : 190 195 200 * · f · }**.' Asp Gly Asn Phe Pro Ala Vai Gin Ile Pro Ser Ser Ser Thr Ser Ser * * 205 210 215
Pro Vai Asn Gin Pro Thr Ser Thr Ser Thr Thr Ser Thr Ser Thr Thr 220 225 230 235 34 1194 11
Ser Ser Pro Pro Vai Gin Pro Thr Thr Pro Ser Gly Cys Thr Ala Glu 240 245 250
Arg Trp Ala Gin Cys Gly Gly Asn Gly Trp Ser Gly Cys Thr Thr Cys 255 260 265
Vai Ala Gly Ser Thr Cys Thr Lys Ile Asn Asp Trp Tyr His Gin Cys 270 275 280
Leu (2) SEKVENSSIN ID NO:9 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 876 emäsparia (B) TYYPPI: nukleiinihappo (C) JUOSTEISUUS: yksijuosteinen (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEQ ID NO: 9: ATGAGGAGCT CCCTTGTGCT GTTCTTTGTC TCTGCGTGGA CGGCCTTGGC CAGTCCTATT 60 CGTCGAGAGG TCTCGCAGGA TCTGTTTAAC CAGTTCAATC TCTTTGCACA GTATTCTGCA 120 GCCGCATACT GCGGAAAAAA CAATGATGCC CCAGCTGGTA CAAACATTAC GTGCACGGGA 180 AATGCCTGCC CCGAGGTAGA GAAGGCGGAT GCAACGTTTC TCTACTCGTT TGAAGACTCT 240 GGAGTGGGCG ATGTCACCGG CTTCCTTGCT CTCGACAACA CGAACAAATT GATCGTCCTC 300 TCTTTCCGTG GCTCTCGTTC CATAGAGAAC TGGATCGGGA ATCTTAACTT CGACTTGAAA 360 GAAATAAATG ACATTTGCTC CGGCTGCAGG GGACATGACG GCTTCACTTC GTCCTGGAGG 420 TCTGTAGCCG ATACGTTAAG GCAGAAGGTG GAGGATGCTG TGAGGGAGCA TCCCGACTAT 480 • CGCGTGGTGT TTACCGGACA TAGCTTGGGT GGTGCATTGG CAACTGTTGC CGGAGCAGAC 540
• »I
,*. ί CTGCGTGGAA ATGGGTATGA TATCGACGTG TTTTCATATG GCGCCCCCCG AGTCGGAAAC 600 f · Φ • · I AGGGCTTTTG CAGAATTCCT GACCGTACAG ACCGGCGGAA CACTCTACCG CATTACCCAC 660 • · • * , ACCAATGATA TTGTCCCTAG ACTCCCGCCG CGCGAATTCG GTTACAGCCA TTCTAGCCCA 720 • · · * · » · p t\ GAGTACTGGA TCAAATCTGG AACCCTTGTC CCCGTCACCC GAAACGATAT CGTGAAGATA 780 i i · *·· GAAGGCATCG ATGCCACCGG CGGCAATAAC CAGCCTAACA TTCCGGATAT CCCTGCGCAC 840 CTATGGTACT TCGGGTTAAT TGGGACATGT CTTTAG 876 (2) SEKVENSSIN ID NO:10 TIEDOT: V · · :T: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 291 aminohappoa (B) TYYPPI: aminohappo I./ (C) JUOSTEISUUS: yksi juosteinen *../ (D) TOPOLOGIA: lineaarinen * (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEQ ID NO: 10: ; Met Arg Ser Ser Leu Vai Leu Phe Phe Vai Ser Ala Trp Thr Ala Leu *, ·· 1 5 10 15
Ala Ser Pro Ile Arg Arg Glu Vai Ser Gin Asp Leu Phe Asn Gin Phe 20 25 30 119437 35
Asn Leu Phe Ala Gin Tyr Ser Ala Ala Ala Tyr Cys Gly Lys Asn Asn 35 40 45
Asp Ala Pro Ala Gly Thr Asn He Thr Cys Thr Gly Asn Ala Cys Pro 50 55 60
Glu Val Glu Lys Ala Asp Ala Thr Phe Leu Tyr Ser Phe Glu Asp Ser 65 70 75 80
Gly Val Gly Asp Val Thr Gly Phe Leu Ala Leu Asp Asn Thr Asn Lys 85 90 95
Leu He Val Leu Ser Phe Arg Gly Ser Arg Ser He Glu Asn Trp He 100 105 110
Gly Asn Leu Asn Phe Asp Leu Lys Glu He Asn Asp He Cys Ser Gly 115 120 125
Cys Arg Gly His Asp Gly Phe Thr Ser Ser Trp Arg Ser Val Ala Asp 130 135 140
Thr Leu Arg Gin Lys Val Glu Asp Ala Val Arg Glu His Pro Asp Tyr 145 150 155 160
Arg Val Val Phe Thr Gly His Ser Leu Gly Gly Ala Leu Ala Thr Val 165 170 175
Ala Gly Ala Asp Leu Arg Gly Asn Gly Tyr Asp He Asp Val Phe Ser 180 165 190
Tyr Gly Ala Pro Arg Val Gly Asn Arg Ala Phe Ala Glu Phe Leu Thr 195 200 205
Val Gin Thr Gly Gly Thr Leu Tyr Arg He Thr His Thr Asn Asp He 210 215 220
Val Pro Arg Leu Pro Pro Arg Glu Phe Gly Tyr Ser His Ser Ser Pro 225 230 235 240 • 9 *Jt,· Glu Tyr Trp He Lys Ser Gly Thr Leu Val Pro Val Thr Arg Asn Asp t . 245 250 255 * * * • * * • . lie Val Lys lie Glu Gly He Asp Ala Thr Gly Gly Asn Asn Gin Pro i * : 260 265 270 e * «{I Asn lie Pro Asp He Pro Ala His Leu Trp Tyr Phe Gly Leu lie Gly *",* 275 280 285 » J · ’** Thr Cys Leu * : : 290 • (2) SEKVENSSIN ID NO :11 TIEDOT: · (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 42 emäsparia (B) TYYPPI: nukleiinihappo (C) JUOSTEISUUS : yksi juosteinen *,/ (D) TOPOLOGIA: lineaarinen *·* (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEQ ID NO:11: J ·*· GCACACCATG GTCGCTGGAT CCATACCTTG TTGGAAGCGT CG 42 V*: (2) SEKVENSSIN ID NO: 12 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 56 emäsparia 119437 36 (B) TYYPPI: nukleiinihappo (C) JUOSTEISUUS: yksijuosteinen (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEQ ID NO:12: ATCGGAGCAT GCGGTACCGT TTAAACGAAT TCAGGTAAAC AAGATATAAT TTTCTG 56 (2) SEKVENSSIN ID NO:13 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 44 emäsparia (B) TYYPPI: nukleiinihappo (C) JUOSTEISUUS: yksijuosteinen (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEQ ID NO:13: CTCTTGGATA TCTATCTCTT CACCATGCGT TCCTCCCCCC TCCT 44 (2) SEKVENSSIN ID NO:14 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 20 emäsparia (B) TYYPPI: nukleiinihappo (C) JUOSTEISUUS: yksijuosteinen (D) TOPOLOGIA: lineaarinen (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEQ ID NO:14: CAATAGAGGT GGCAGCAAAA 2 0 (2) SEKVENSSIN ID NO:15 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 25 emäsparia t\j (B) TYYPPI: nukleiinihappo ' 1 (C) JUOSTEISUUS: yksijuosteinen i/ ; (D) TOPOLOGIA: lineaarinen Ϊ.: i (xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEQ ID NO: 15: . ATCTATCTCT TCACCATGAG GAGCT 25 J t f ·1 t 'V: (2) SEKVENSSIN ID NO:16 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: ;1,jt (A) PITUUS: 21 emäsparia (B) TYYPPI: nukleiinihappo ί1ϊ\1 (C) JUOSTEISUUS: yksijuosteinen (D) TOPOLOGIA: lineaarinen i · • » ·
4 M
(xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEQ ID NO: 16: *.,/ TAGATAGAGA AGTGGTACTC C 21 i f « · · * t · *·· · f 0 « • m r
Claims (30)
1. Ei-toksinen, ei-toksigeeninen, ei-patogeeninen yhdistel-mä-DNA-Fusarium-isäntäsolu, tunnettu siitä, että se käsittää nukleiinihapposekvenssin, joka koodittaa heterolo- 5 gista proteiinia toimintakykyisesti promoottoriin liittyneenä.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen isäntäsolu, tunnet -t u siitä, että Fusarium on Fusarium graminearum. 10
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen isäntäsolu, tunnet-t u siitä, että Fusarium graminearum’illa on ATCC 20334:n tunnistusominaispiirteet.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen isäntäsolu, tunnet-t u siitä, että heterologinen proteiini on sieniproteiini.
5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen isäntäsolu, tunnet-t u siitä, että heterologinen proteiini on eritettyä pro- 20 teiinia.
6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen isäntäsolu, tunnet- ... t u siitä, että heterologinen proteiini on sieni entsyymiä. • · • · · • · » · · *· 25
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen isäntäsolu, tunnet- » t • * « *· " t u siitä, että sienientsyymi on katalaasia, lakkaasia, fe- • · : nolioksidaasia, oksidaasia, oksidoreduktaasia, sellulaasia, ί,ί.ί ksylanaasia, peroksidaasia, lipaasia, hydrolaasia, esteraa- :Y: siä, kutinaasia, proteolyyttistä entsyymiä, aminopeptidaa- 30 siä, karboksipeptidaasia, fytaasia, lyaasia, pektinolyyttis-tä entsyymiä, amylaasia, glukoamylaasia, a-galaktosidaasia, t · .···, β-galaktosidaasia, α-glukosidaasia, β-glukosidaasia, manno- • · sidaasia, isomeraasia, invertaasia, transferaasia, ribonuk- * · • · · : leaasia, kitinaasia tai deoksiribonukleaasia. • · · : : 35 ··· .:.
8. Patenttivaatimuksen 6 mukainen isäntäsolu, tunnet - **·· t u siitä, että sienientsyymi on proteaasi. • · 38 1 1 9 4 3 7
9. Patenttivaatimuksen 6 mukainen isäntäsolu, tunnet-t u siitä, että sienientsyymi on alkalinen proteaasi.
10. Patenttivaatimuksen 9 mukainen isäntäsolu, tunnettu siitä, että alkalinen proteaasi on Fusarium oxy-sporum'in trypsiinityyppinen proteaasi.
11. Patenttivaatimuksen 10 mukainen isäntäsolu, t u n- 10. e t t u siitä, että Fusarium oxysporum’in trypsiinityyp-pisellä proteaasilla on SEQ ID NO:4:ssä esitetty aminohapposekvenssi .
12. Patenttivaatimuksen 6 mukainen isäntäsolu, t u n - 15. e t t u siitä, että sienientsyymi on endoglukanaasi tai sen variantti.
13. Patenttivaatimuksen 12 mukainen isäntäsolu, tunnettu siitä, että endoglukanaasilla on SEQ ID NO:8:ssa 20 esitetty aminohapposekvenssi.
14. Patenttivaatimuksen 6 mukainen isäntäsolu, t u n - ... n e t t u siitä, että sienientsyymi on 1,3-lipaasi tai sen * m variantti. • · · *· " 25 • · *. *ί
15. Patenttivaatimuksen 14 mukainen isäntäsolu, t u n - • · ·.: : n e t t u siitä, että 1,3-lipaasilla on SEQ ID NO:10:ssä esitetty aminohapposekvenssi. ♦ · · * · · • « ·
16. Patenttivaatimuksen 1 mukainen isäntäsolu, t u n - .*.·. n e t t u siitä, että heterologinen proteiini on hormoni, • · · ,···, kasvutekijä tai reseptori.
• · • · · • · : 17. Patenttivaatimuksen 1 mukainen isäntäsolu, t u n - *·· 35. e t t u siitä, että promoottori on sienipromoottori. ·φ· ···· • · 39 1 1 9437
18. Patenttivaatimuksen 17 mukainen isäntäsolu, tunnettu siitä, että promoottori on A. nidulans amdS:stä oleva promoottori. 5
19. Patenttivaatimuksen 17 mukainen isäntäsolu, tunnettu siitä, että mainittu sienipromoottori on johdettu geenistä, joka koodittaa Fusarium oxysporum'in trypsiini-tyyppistä proteaasia tai sen fragmenttia, jolla on oleelli- 10 sesti sama promoottoriaktiivisuus kuin mainitulla sekvenssillä.
20. Patenttivaatimuksen 19 mukainen isäntäsolu, tunnettu siitä, että mainittu promoottorisekvenssi esite- 15 tään SEQ ID N0:5:ssä.
21. Patenttivaatimuksen 1 mukainen isäntäsolu, tunnettu siitä, että se käsittää myös valittavissa olevan markkerin. 20
22. Patenttivaatimuksen 21 mukainen isäntäsolu, tunnettu siitä, että markkeri on argB, trpC, pyrG, amdS, ... niaD tai hygB. • · • · ·*· • · • · · *· " 25
23. Patenttivaatimuksen 1 mukainen isäntäsolu, t u n - · · *.**: n e t t u siitä, että se käsittää myös terminaattorin. • · • · · • · *· · ί
: : 24. Patenttivaatimuksen 23 mukainen isäntäsolu, t u n - n e t t u siitä, että mainittu terminaattori on johdettu 30 geenistä, joka koodittaa Fusarium oxysporum'in trypsiini-tyyppistä proteaasia tai sen fragmenttia, jolla on oleelli- * φ « .···. sesti sama terminaattoriaktiivisuus kuin mainitulla sekvens- **:** sillä. • · • * · • · · ··« · • · ·
25. Patenttivaatimuksen 24 mukainen isäntäsolu, t u n -n e t t u siitä, että mainittu terminaat tori sekvenssi esi-tetään SEQ id NO:6:ssa. · 40 119437
26. Menetelmä kiinnostuksen kohteena olevan proteiinin tuottamiseksi, tunnettu siitä, että kasvatetaan ei-tok-sista, ei-toksigeenistä, ei-patogeenistä yhdistelmä-DNA-Fusarium-isäntäsolua, joka käsittää mainittua proteiinia koo- 5 dittavan nukleiinihapposekvenssin liittyneenä toimintaky-kyisesti promoottoriin, ja eristetään mainittu proteiini.
27. Promoottorisekvenssi, tunnettu siitä, että se on johdettu geenistä, joka koodittaa Fusarium oxysporum'in tryp- 10 siinityyppistä proteaasia tai sen fragmenttia, jolla on oleellisesti sama promoottoriaktiivisuus kuin mainitulla sekvenssillä, jolloin mainitulla promoottorilla on SEQ ID NO:5:ssä esitetty sekvenssi.
28. Patenttivaatimuksen 27 mukainen promoottorisekvenssi, tunnettu siitä, että promoottorisekvenssillä on SEQ ID No:5:ssä esitetty DNA-sekvenssi.
29. Terminaattorisekvenssi, tunnettu siitä, että se 20 on johdettu geenistä, joka koodittaa Fusarium oxysporum'in trypsiinityyppistä proteaasia tai sen fragmenttia, jolla on oleellisesti sama terminaattoriaktiivisuus kuin mainitulla • M sekvenssillä, jolloin mainitulla terminaattorilla on SEQ id • · ϊ,1·· NO:6:ssa esitetty sekvenssi. 25 • · • 30. Patenttivaatimuksen 29 mukainen terminaattorisekvenssi, M» 1 . tunnettu siitä, että terminaattorisekvenssillä on SEQ • M ID NO: 6 : ssa esitetty DNA-sekvenssi.
• · · . . 30 • · · • · · • · ·«· • ♦ • · • · 1 * • · • 1 · • · · « · ··» • ♦ • t • » · ««· ···· • · 119437 41
Applications Claiming Priority (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US26944994A | 1994-06-30 | 1994-06-30 | |
US26944994 | 1994-06-30 | ||
US40467895A | 1995-03-15 | 1995-03-15 | |
US40467895 | 1995-03-15 | ||
US9507743 | 1995-06-15 | ||
PCT/US1995/007743 WO1996000787A1 (en) | 1994-06-30 | 1995-06-15 | Non-toxic, non-toxigenic, non-pathogenic fusarium expression system and promoters and terminators for use therein |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI965220A0 FI965220A0 (fi) | 1996-12-27 |
FI965220A FI965220A (fi) | 1997-02-25 |
FI119437B true FI119437B (fi) | 2008-11-14 |
Family
ID=26953701
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI965220A FI119437B (fi) | 1994-06-30 | 1996-12-27 | Ei-toksinen, ei-toksigeeninen, ei-patogeeninen Fusarium-ekspressiojärjestelmä ja siinä käytettäviä promoottereita ja terminaattoreita |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5837847A (fi) |
EP (2) | EP1559776A3 (fi) |
JP (2) | JP3167729B2 (fi) |
CN (2) | CN1151762A (fi) |
AT (1) | ATE294871T1 (fi) |
AU (1) | AU2705895A (fi) |
DE (1) | DE69534185T2 (fi) |
FI (1) | FI119437B (fi) |
WO (1) | WO1996000787A1 (fi) |
Families Citing this family (688)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU3634797A (en) * | 1996-07-24 | 1998-02-10 | Meiji Seika Kaisha Ltd. | Enzyme endoglucanase and cellulase preparations containing the same |
US7883872B2 (en) * | 1996-10-10 | 2011-02-08 | Dyadic International (Usa), Inc. | Construction of highly efficient cellulase compositions for enzymatic hydrolysis of cellulose |
US5811381A (en) * | 1996-10-10 | 1998-09-22 | Mark A. Emalfarb | Cellulase compositions and methods of use |
AU7381098A (en) | 1997-05-16 | 1998-12-08 | Novo Nordisk Biotech, Inc. | Polypeptides having prolyl pipeptidyl aminopeptidase activity and nucleic acids encoding same |
ATE395424T1 (de) * | 1998-05-20 | 2008-05-15 | Novozymes Inc | Verfahren zur herstellung von heterologen polypeptiden in trichothecene mangelmutanten filamentlösen pilzen |
EP1117808B1 (en) * | 1998-10-06 | 2004-12-29 | Mark Aaron Emalfarb | Transformation system in the field of filamentous fungal hosts: in chrysosporium |
CN1197965C (zh) | 1998-10-26 | 2005-04-20 | 诺维信公司 | 在丝状真菌细胞内构建和筛选目的dna文库 |
WO2000042203A2 (en) * | 1999-01-13 | 2000-07-20 | Novozymes Biotech, Inc. | Methods for producing polypeptides in cyclohexadepsipeptide-deficient cells |
US6361973B1 (en) | 1999-03-22 | 2002-03-26 | Novozymes Biotech, Inc. | Promoters for expressing genes in a fungal cell |
JP4620253B2 (ja) | 1999-03-22 | 2011-01-26 | ノボザイムス,インコーポレイティド | 菌類細胞中で遺伝子を発現させるためのプロモーター |
EP1214426A2 (en) | 1999-08-31 | 2002-06-19 | Novozymes A/S | Novel proteases and variants thereof |
AR027509A1 (es) | 2000-01-10 | 2003-04-02 | Maxygen Aps | Conjugados g-csf |
RU2278123C2 (ru) | 2000-02-11 | 2006-06-20 | Максиджен Холдингз Лтд. | Молекулы, подобные фактору vii или viia |
ATE469223T1 (de) | 2000-03-14 | 2010-06-15 | Novozymes As | Pilz transkriptionsaktivator zur verwendung in verfahren zur herstellung von polypeptiden |
EP2287296A1 (en) | 2000-06-26 | 2011-02-23 | Novozymes A/S | Lipolytic enzyme |
CA2419896C (en) | 2000-08-21 | 2014-12-09 | Novozymes A/S | Subtilase enzymes |
CA2419577A1 (en) | 2000-09-05 | 2002-03-14 | Novozymes A/S | Manganese lipoxygenase |
HUP0303251A2 (hu) | 2001-02-27 | 2003-12-29 | Maxygen Aps | Béta-interferon-szerű molekulák |
CA2444735C (en) | 2001-04-20 | 2012-10-23 | Novozymes A/S | Lipoxygenase |
EP1421224B1 (en) | 2001-06-26 | 2012-10-17 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellobiohydrolase i activity and polynucleotides encoding same |
DE10207702C1 (de) * | 2002-02-22 | 2003-08-28 | Albrecht Gmbh | Einstellbare Gelenkorthese |
DE60331644D1 (de) | 2002-04-22 | 2010-04-22 | Novozymes Inc | Verfahren zur herstellung von varianten einer dna-sequenz in filamentösen pilzen |
US8148155B2 (en) | 2002-04-22 | 2012-04-03 | Novozymes, Inc. | Methods for increasing homologous recombination of a nucleic acid sequence |
DE60328802D1 (de) * | 2002-08-30 | 2009-09-24 | Novozymes Inc | Verfahren zur herstellung von säugetier-trypsinen |
ATE452184T1 (de) * | 2002-09-24 | 2010-01-15 | Novozymes Inc | Mikrobielle trypsinvarianten mit chymotrypsinaktivität und diese codierende nukleinsäuren |
AU2003266941A1 (en) | 2002-10-01 | 2004-04-23 | Novozymes A/S | Family gh 61 polypeptides |
CN101497908B (zh) | 2002-11-18 | 2014-05-21 | 诺维信股份有限公司 | 用于在真菌细胞中表达基因的启动子变体 |
DE60328715D1 (de) | 2002-12-20 | 2009-09-17 | Novozymes As | Polypeptide mit cellobiohydrolase ii-aktivität und dafür kodierende polynucleotide |
CN101629204A (zh) | 2003-03-31 | 2010-01-20 | 诺维信股份有限公司 | 在缺乏酶的黑曲霉突变体中生产生物物质的方法 |
WO2004097012A2 (en) | 2003-04-28 | 2004-11-11 | Novozymes A/S | Phospholipase and method of producing it |
ES2347658T3 (es) | 2003-05-02 | 2010-11-03 | Novozymes Inc. | Variantes de beta-glucosidasas. |
AU2004247802B2 (en) | 2003-06-19 | 2010-08-05 | Novozymes A/S | Proteases |
US20060236414A1 (en) | 2003-06-19 | 2006-10-19 | Novozymes A/S | Proteases and methods for producing them |
EP1675941B1 (en) | 2003-06-25 | 2013-05-22 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha-amylase activity and polynucleotides encoding same |
EP2617825B1 (en) | 2003-08-25 | 2015-04-01 | Novozymes, Inc. | Variants of glycoside hydrolases |
ATE516347T1 (de) | 2003-10-23 | 2011-07-15 | Novozymes As | Protease mit verbesserter stabilität in detergentien |
MXPA06004463A (es) | 2003-10-28 | 2006-06-27 | Novozymes North America Inc | Enzimas hibridas. |
CN1902310B (zh) | 2003-10-28 | 2011-09-21 | 诺维信股份有限公司 | 具有β-葡糖苷酶活性的多肽和编码所述多肽的多核苷酸 |
WO2005066339A2 (en) | 2004-01-06 | 2005-07-21 | Novozymes A/S | Polypeptides of alicyclobacillus sp. |
ES2468366T3 (es) | 2004-01-30 | 2014-06-16 | Novozymes Inc. | Polip�ptidos con actividad de mejora celulol�tica y polinucle�tidos que los codifican |
EP1715736A4 (en) | 2004-02-12 | 2008-09-03 | Novozymes Inc | POLYPEPTIDES HAVING XYLANASE ACTIVITY AND POLYNUCLEOTIDES ENCODING SAME |
CN1922314B (zh) | 2004-02-25 | 2010-05-05 | 诺维信公司 | 真菌细胞壁降解酶 |
PT3219806T (pt) | 2004-03-25 | 2020-06-30 | Novozymes Inc | Métodos para degradar ou converter polissacarídeos da parede celular de plantas |
WO2005100573A2 (en) | 2004-04-16 | 2005-10-27 | Dsm Ip Assets B.V. | Fungal promoters for expressing a gene in a fungal cell |
US7148404B2 (en) | 2004-05-04 | 2006-12-12 | Novozymes A/S | Antimicrobial polypeptides |
US8633006B2 (en) | 2004-06-29 | 2014-01-21 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having alpha-glucosidase activity and polynucleotides encoding same |
KR101545424B1 (ko) | 2004-05-27 | 2015-08-18 | 다니스코 유에스 인크. | 입상 전분 가수분해 활성을 가진 산-안정성 알파 아밀라아제 및 효소 조성물 |
US7413887B2 (en) | 2004-05-27 | 2008-08-19 | Genecor International, Inc. | Trichoderma reesei glucoamylase and homologs thereof |
US9045748B2 (en) | 2004-05-27 | 2015-06-02 | Novozymes, Inc. | Methods for transforming and expression screening of filamentous fungal cells with a DNA library |
DK1756273T3 (da) | 2004-06-14 | 2010-02-01 | Novozymes As | Signalpeptid til frembringelse af et polypeptid |
MXPA06014649A (es) | 2004-06-21 | 2007-03-12 | Novozymes As | Proteasas. |
EP1766002B1 (en) | 2004-06-21 | 2015-11-18 | Novozymes A/S | Stably maintained multiple copies of at least two orf in the same orientation |
EP2298872A3 (en) | 2004-09-30 | 2011-08-10 | Novozymes A/S | Polypeptides having lipase activity and polynucleotides encoding same |
BRPI0517539A (pt) | 2004-10-04 | 2008-10-14 | Novozymes As | polipeptìdeo isolado, polinucleotìdeo isolado, construto de ácido nucleico, vetor de expressão recombinante, célula hospedeira recombinante, métodos para produzir o polipeptìdeo, e para melhorar o valor nutricional de uma ração animal, célula de planta, parte de planta ou planta transgênica, animal não-humano, transgênico, ou produtos, ou elementos do mesmo, uso de pelo menos um polipeptìdeo, aditivo de ração animal, e, composição de ração animal |
AR050895A1 (es) | 2004-10-04 | 2006-11-29 | Novozymes As | Polipeptidos que tienen actividad de fitasa y polinucleotidos que los codifican |
EP1814996A2 (en) | 2004-11-19 | 2007-08-08 | Novozymes A/S | Polypeptides having antimicrobial activity and polynucleotides encoding same |
EP1831384B1 (en) | 2004-12-22 | 2015-08-12 | Novozymes A/S | Polypeptides having glucoamylase activity and polynucleotides encoding same |
PL2410048T3 (pl) | 2005-01-24 | 2017-02-28 | Dsm Ip Assets B.V. | Sposób otrzymywania związku będącego przedmiotem zainteresowania w komórce grzyba nitkowatego |
KR20070121676A (ko) | 2005-03-16 | 2007-12-27 | 노보자임스 에이/에스 | 사상 진균류에서의 디펜신의 재조합 발현 |
PL1863834T3 (pl) | 2005-03-22 | 2010-12-31 | Novozymes As | Polipeptydy i kodujące je kwasy nukleinowe |
AR053066A1 (es) | 2005-04-26 | 2007-04-18 | Novozymes As | Arabinofuranosidasas |
CA2606475C (en) | 2005-04-27 | 2015-06-16 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
EP1967584B1 (en) | 2005-08-16 | 2011-03-23 | Novozymes A/S | Polypeptides of strain bacillus SP. P203 |
JP2009507474A (ja) | 2005-08-26 | 2009-02-26 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | 抗菌活性を有するポリペプチド及びそれをコードするポリヌクレオチド |
EP2385110A3 (en) | 2005-09-30 | 2011-11-16 | Novozymes, Inc. | Methods for enhancing the degradation or conversion of cellulosic material |
ATE514770T1 (de) | 2005-10-17 | 2011-07-15 | Novozymes As | Verwendung von pilzmutanten zur expression von antikörpern |
US20090176219A1 (en) | 2005-11-29 | 2009-07-09 | Lucie Parenicova | Dna binding site of a transcriptional activator useful in gene expression |
BRPI0708949B1 (pt) | 2006-03-20 | 2017-04-04 | Novozymes As | métodos para degradar ou converter um material celulósico, para produzir uma susbtância, e para produzir um polipeptídeo tendo atividade endoglucanase, e, célula microbiana recombinante |
WO2007115201A2 (en) | 2006-03-30 | 2007-10-11 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
MX2008012632A (es) | 2006-04-04 | 2008-10-13 | Novozymes As | Variantes de fitasa. |
US20080026376A1 (en) | 2006-07-11 | 2008-01-31 | Huaming Wang | KEX2 cleavage regions of recombinant fusion proteins |
US8198046B2 (en) | 2006-07-11 | 2012-06-12 | Danisco Us Inc. | KEX2 cleavage regions of recombinant fusion proteins |
DK2044203T3 (da) | 2006-07-14 | 2014-01-20 | Novozymes Inc | Fremgangsmåder til forøgelse af ekspression af gener i en svampecelle |
US8586330B2 (en) | 2006-07-14 | 2013-11-19 | Novozymes A/S | Methods for producing secreted polypeptides having biological activity |
US8546106B2 (en) | 2006-07-21 | 2013-10-01 | Novozymes, Inc. | Methods of increasing secretion of polypeptides having biological activity |
CA2663711C (en) | 2006-09-22 | 2017-02-28 | Danisco Us Inc. | Acetolactate synthase (als) selectable marker from trichoderma reesei |
MX2009003472A (es) | 2006-10-10 | 2009-06-02 | Danisco Us Inc Genencor Div | Variantes de glucoamilasa con propiedades alteradas. |
WO2009048488A1 (en) | 2007-10-09 | 2009-04-16 | Danisco Us, Inc., Genencor Division | Glucoamylase variants with altered properties |
DK2431470T3 (da) | 2006-11-30 | 2018-01-29 | Novozymes As | DNase expression i rekombinante værtsceller |
US9862956B2 (en) | 2006-12-10 | 2018-01-09 | Danisco Us Inc. | Expression and high-throughput screening of complex expressed DNA libraries in filamentous fungi |
EP2102366A4 (en) | 2006-12-10 | 2010-01-27 | Dyadic International Inc | EXPRESSION AND HIGH-DROP SCREENING OF COMPLEX EXPRESSED DNA LIBRARIES IN FADENED MUSHROOMS |
ES2386991T3 (es) | 2006-12-18 | 2012-09-10 | Danisco Us Inc. | Nuevas composiciones de laccasas y sus procedimientos de utilización |
US8143046B2 (en) | 2007-02-07 | 2012-03-27 | Danisco Us Inc., Genencor Division | Variant Buttiauxella sp. phytases having altered properties |
US20080220498A1 (en) | 2007-03-06 | 2008-09-11 | Cervin Marguerite A | Variant Buttiauxella sp. phytases having altered properties |
AU2008214663B2 (en) | 2007-02-15 | 2013-10-03 | Dsm Ip Assets B.V. | A recombinant host cell for the production of a compound of interest |
JP5643083B2 (ja) | 2007-03-26 | 2014-12-17 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | ハフニア・フィターゼ |
DE102007016139A1 (de) | 2007-03-30 | 2008-10-02 | Jenabios Gmbh | Verfahren zur regioselektiven Oxygenierung von N-Heterozyklen |
DK2147107T3 (da) | 2007-05-09 | 2011-10-24 | Novozymes As | Fremgangsmåde til ekspressionskloning, som er egnet til selektion af bibliotekskloner, der producerer et polypeptid af interesse |
US8093016B2 (en) | 2007-05-21 | 2012-01-10 | Danisco Us Inc. | Use of an aspartic protease (NS24) signal sequence for heterologous protein expression |
US7977078B2 (en) | 2007-08-24 | 2011-07-12 | Codexis, Inc. | Ketoreductase polypeptides for the production of (R)-3-hydroxythiolane |
WO2009033071A2 (en) * | 2007-09-07 | 2009-03-12 | Dyadic International, Inc. | Novel fungal enzymes |
CA2699201C (en) | 2007-09-12 | 2017-04-18 | Danisco Us Inc. | Trichoderma promoter |
US8609386B2 (en) | 2007-09-18 | 2013-12-17 | Novozymes A/S | Polypeptides having tyrosinase activity and polynucleotides encoding same |
US8592194B2 (en) | 2007-10-09 | 2013-11-26 | Danisco Us Inc. | Glucoamylase variants with altered properties |
CA2705941C (en) | 2007-11-20 | 2018-05-22 | Danisco Us Inc. | Glucoamylase variants with altered properties |
DK2215224T3 (da) | 2007-11-27 | 2014-01-27 | Novozymes As | Polypeptider med alfa-glucuronidaseaktivitet og polynukleotider, der koder for dem |
ES2490608T3 (es) | 2007-12-06 | 2014-09-04 | Novozymes A/S | Polipéptidos con actividad de esterasa de acetilxilano y polinucleótidos que codifican los mismos |
NZ598403A (en) | 2007-12-19 | 2012-07-27 | Novozymes As | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
US8673609B2 (en) | 2008-04-18 | 2014-03-18 | Danisco Us Inc. | Buttiauxella sp. phytase variants |
AU2009254546B2 (en) | 2008-06-06 | 2014-09-25 | Novozymes A/S | Variants of a family 44 xyloglucanase |
US8178333B2 (en) | 2008-06-24 | 2012-05-15 | Codexis, Inc. | Biocatalytic processes for the preparation of substantially stereomerically pure fused bicyclic proline compounds |
US8426178B2 (en) | 2008-08-27 | 2013-04-23 | Codexis, Inc. | Ketoreductase polypeptides for the production of a 3-aryl-3-hydroxypropanamine from a 3-aryl-3-ketopropanamine |
PL2342323T3 (pl) | 2008-09-26 | 2013-11-29 | Novozymes As | Warianty fitazy z hafnia |
WO2010059413A2 (en) | 2008-11-20 | 2010-05-27 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having amylolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
EP2373788A1 (en) | 2008-12-04 | 2011-10-12 | Novozymes Inc. | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
US9493759B2 (en) | 2008-12-12 | 2016-11-15 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having aspartic endopeptidase activity and polynucleotides encoding same |
EP2376527A1 (en) | 2008-12-12 | 2011-10-19 | Novozymes Inc. | Polypeptides having lipase activity and polynucleotides encoding same |
US20110269206A1 (en) | 2008-12-15 | 2011-11-03 | Novozymes, Inc | Polypeptides Having Catalase Activity And Polynucleotides Encoding Same |
US8633030B2 (en) | 2008-12-16 | 2014-01-21 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having carboxypeptidase activity and polynucleotides encoding same |
US20110271407A1 (en) | 2008-12-16 | 2011-11-03 | Novozymes, Inc. | Polypeptides Having Alpha-Mannosidase Activity And Polynucleotides Encoding Same |
US8338121B2 (en) | 2008-12-19 | 2012-12-25 | Novozymes, Inc. | Methods for determining cellulolytic enhancing activity of a polypeptide |
CN102325889A (zh) | 2008-12-19 | 2012-01-18 | 诺维信股份有限公司 | 增加纤维素材料水解的方法 |
US8809033B2 (en) | 2008-12-19 | 2014-08-19 | Novozymes, Inc. | Methods for increasing hydrolysis of cellulosic material in the presence of cellobiose dehydrogenase |
CN102325893A (zh) | 2008-12-19 | 2012-01-18 | 诺维信股份有限公司 | 在过氧化物酶存在下增加纤维素材料酶法水解的方法 |
MX2011006645A (es) | 2008-12-23 | 2011-09-06 | Danisco | Polipeptidos con actividad de xilanasa. |
US8349325B2 (en) | 2008-12-23 | 2013-01-08 | Abbott Laboratories | Soluble FMS-like tyrosine kinase-1 (sFLT-1) antibody and related composition, kit, methods of using, and materials and method for making |
HUE052297T2 (hu) | 2009-01-08 | 2021-04-28 | Codexis Inc | Transzamináz polipeptidek |
EP2389437B1 (en) | 2009-01-21 | 2015-10-21 | Novozymes A/S | Polypeptides having esterase activity and nucleic acids encoding the same |
WO2010088387A1 (en) | 2009-01-28 | 2010-08-05 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having beta-glucosidase activity and polynucleotides encoding same |
WO2010088447A1 (en) | 2009-01-30 | 2010-08-05 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha-amylase activity and polynucleotides encoding same |
US8629324B2 (en) | 2009-01-30 | 2014-01-14 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having expansin activity and polynucleotides encoding same |
WO2010091221A1 (en) | 2009-02-06 | 2010-08-12 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha-amylase activity and polynucleotides encoding same |
EP2408314A1 (en) | 2009-03-17 | 2012-01-25 | Novozymes A/S | Polypeptides having tyrosinase activity and polynucleotides encoding same |
BRPI1013483B1 (pt) | 2009-03-24 | 2019-04-24 | Novozymes A/S | Construção de ácido nucleico, vetor de expressão recombinante, célula hospedeira microbiana transgênica, métodos para produzir o polipeptídeo, para degradar um xilano acetilado e para produzir um produto de fermentação, e, composição |
EP2414506B1 (en) | 2009-03-31 | 2017-05-03 | Codexis, Inc. | Improved endoglucanases |
JP2012524530A (ja) | 2009-04-22 | 2012-10-18 | ディーエスエム アイピー アセッツ ビー.ブイ. | 対象組換えポリペプチドの産生方法 |
EP2248893A1 (en) | 2009-05-06 | 2010-11-10 | Novozymes A/S | DFPase Enzymes from Octopus Vulgaris |
US20100298612A1 (en) | 2009-05-22 | 2010-11-25 | Codexis, Inc. | Engineered biosynthesis of fatty alcohols |
EP2435561B1 (en) | 2009-05-29 | 2018-08-08 | Novozymes Inc. | Methods for enhancing the degradation or conversion of cellulosic material |
BRPI1012923B1 (pt) | 2009-06-02 | 2018-10-16 | Novozymes As | célula hospedeira microbiana transgênica, métodos para produzir um polipeptídeo, para produzir um mutante de uma célula mãe, para degradar ou converter um material celulósico, para produzir um produto de fermentação, para fermentar um material celulósico, construto de ácido nucleico, e, vetor de expressão |
HUE055413T2 (hu) | 2009-06-22 | 2021-11-29 | Codexis Inc | Ketoreduktáz-közvetített sztereoszelektív útvonal alfa-klóralkoholokhoz |
US8945826B2 (en) | 2009-06-26 | 2015-02-03 | Novozymes A/S | Heat-stable carbonic anhydrases and their use |
CA2766585C (en) | 2009-06-30 | 2016-03-01 | Codexis, Inc. | Production of fatty alcohols with fatty alcohol forming acyl-coa reductases (far) |
CN102597243B (zh) | 2009-07-07 | 2015-05-20 | 诺维信股份有限公司 | 具有纤维素分解增强活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸 |
JP2012533312A (ja) | 2009-07-22 | 2012-12-27 | ディーエスエム アイピー アセッツ ビー.ブイ. | 目的の化合物を産生するための改善された宿主細胞 |
JP2013500004A (ja) | 2009-07-24 | 2013-01-07 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | 炭水化物オキシダーゼ |
WO2011014458A1 (en) | 2009-07-28 | 2011-02-03 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having phytase activity and polynucleotides encoding same |
US9273320B2 (en) | 2009-08-07 | 2016-03-01 | Novozymes A/S | Method of producing a sweet protein |
PE20121504A1 (es) | 2009-08-19 | 2012-11-05 | Dupont Nutrition Biosci Aps | Variantes de glucoamilasa |
CN102712915B (zh) | 2009-08-19 | 2014-12-10 | 丹尼斯科美国公司 | 具有改良比活和/或热稳定性的葡糖淀粉酶的组合变体 |
MX2012002095A (es) | 2009-08-21 | 2012-04-10 | Novozymes As | Polipeptidos que tienen actividad de isoamilasa y polinucleotidos que codifican los mismos. |
CA2772695A1 (en) | 2009-09-01 | 2011-03-10 | Novozymes, Inc. | Methods for improving malic acid production in filamentous fungi |
EP3805348A3 (en) | 2009-09-17 | 2021-07-14 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
CN102712916B (zh) | 2009-09-18 | 2015-11-25 | 诺维信股份有限公司 | 具有β-葡糖苷酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸 |
CN102648277B (zh) | 2009-09-25 | 2015-05-20 | 诺维信公司 | 蛋白酶变体的用途 |
CN102648273B (zh) | 2009-09-25 | 2017-04-26 | 诺维信公司 | 枯草蛋白酶变体 |
US8211665B2 (en) | 2009-09-29 | 2012-07-03 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same |
CA2775358A1 (en) | 2009-09-29 | 2011-04-07 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
EP2483402A1 (en) | 2009-09-30 | 2012-08-08 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
WO2011041594A1 (en) | 2009-09-30 | 2011-04-07 | Codexis, Inc. | Recombinant c1 b-glucosidase for production of sugars from cellulosic biomass |
CN108165542A (zh) | 2009-09-30 | 2018-06-15 | 诺维信股份有限公司 | 具有纤维素分解增强活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸 |
CN102597228A (zh) | 2009-10-23 | 2012-07-18 | 诺维信股份有限公司 | 纤维二糖水解酶变体及编码其的多核苷酸 |
US20120260371A1 (en) | 2009-10-29 | 2012-10-11 | Novozymes A/S | Polypeptides Having Cellobiohydrolase Activity and Polynucleotides Encoding Same |
EP2496694B1 (en) | 2009-11-06 | 2017-04-19 | Novozymes, Inc. | Compositions for saccharification of cellulosic material |
CN104694517B (zh) | 2009-11-06 | 2019-06-28 | 诺维信股份有限公司 | 具有木聚糖酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸 |
EP2496693B1 (en) | 2009-11-06 | 2017-10-25 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
PL2504017T3 (pl) | 2009-11-25 | 2014-06-30 | Codexis Inc | Rekombinacyjne warianty beta-glukozydazy do wytwarzania rozpuszczalnych cukrów z biomasy celulozowej |
CA2781399C (en) | 2009-11-25 | 2015-01-20 | Codexis, Inc. | Recombinant thermoascus aurantiacus beta-glucosidase variants for production of fermentable sugars from cellulosic biomass |
CN102869770B (zh) | 2009-11-30 | 2015-12-16 | 诺维信公司 | 具有葡糖淀粉酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸 |
EP2507372B1 (en) | 2009-11-30 | 2015-02-25 | Novozymes A/S | Polypeptides having glucoamylase activity and polynucleotides encoding same |
ES2534067T3 (es) | 2009-12-01 | 2015-04-17 | Novozymes A/S | Polipéptidos que tienen actividad de glucoamilasa y polinucleótidos que codifican los mismos |
EP2507369A1 (en) | 2009-12-03 | 2012-10-10 | Novozymes A/S | Variants of a polypeptide with lipolytic activity and improved stability |
AU2010329917B2 (en) | 2009-12-09 | 2014-12-04 | Novozymes A/S | Methods of producing GH8 xylanase variants |
WO2011072191A2 (en) | 2009-12-11 | 2011-06-16 | Novozymes A/S | Protease variants |
EP3000871A1 (en) | 2009-12-18 | 2016-03-30 | Novozymes, Inc. | Methods for producing polypeptides in protease-deficient mutants of trichoderma |
EP2501792A2 (en) | 2009-12-29 | 2012-09-26 | Novozymes A/S | Gh61 polypeptides having detergency enhancing effect |
WO2011080353A1 (en) | 2010-01-04 | 2011-07-07 | Novozymes A/S | Stabilization of alpha-amylases towards calcium depletion and acidic ph |
US8617856B2 (en) | 2010-01-07 | 2013-12-31 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Fatty acid-producing hosts |
AU2011214324B2 (en) | 2010-02-11 | 2014-11-20 | Dsm Ip Assets B.V. | Host cell capable of producing enzymes useful for degradation of lignocellulosic material |
US8865637B2 (en) | 2010-02-25 | 2014-10-21 | Novozymes Als | Variants of a lysozyme and polynucleotides encoding same |
WO2011104284A1 (en) | 2010-02-25 | 2011-09-01 | Novozymes A/S | Polypeptides having antimicrobial activity |
BR112012020309A2 (pt) | 2010-03-03 | 2015-11-03 | Novozymes As | "variante isolado de uma xilanase precursora, polinucleotídeo isolado, célula hospedeira, métodos para produzir e para obter um variante, planta transgênica, parte da planta ou célula da planta, e, métodos para degradar um material contendo xilano, para tratar uma polpa, e para produzir xilose." |
US20110229921A1 (en) | 2010-03-18 | 2011-09-22 | Abbott Laboratories | METHODS OF ASSAYING URINARY NEUTROPHIL GELATINASE-ASSOCIATED LIPOCALIN (uNGAL) IN THE PROGNOSIS OF CADAVERIC KIDNEY TRANSPLANT FUNCTION IN A PATIENT, INCLUDING A PATIENT DIAGNOSED WITH DELAYED GRAFT FUNCTION (DGF), A METHOD OF ASSAYING uNGAL IN THE ASSESSMENT OF RISK OF DGF IN A PATIENT DIAGNOSED WITH EARLY GRAFT FUNCTION (EGF), AND RELATED KITS |
ES2758795T3 (es) | 2010-03-26 | 2020-05-06 | Novozymes As | Variantes de fitasa termoestables |
CN102918151B (zh) | 2010-03-31 | 2015-09-09 | 诺维信股份有限公司 | 纤维二糖水解酶变体及编码其的多核苷酸 |
WO2011127802A1 (en) | 2010-04-14 | 2011-10-20 | Novozymes A/S | Polypeptides having glucoamylase activity and polynucleotides encoding same |
WO2011150313A1 (en) | 2010-05-28 | 2011-12-01 | Codexis, Inc. | Pentose fermentation by a recombinant microorganism |
CN103003298B (zh) | 2010-06-04 | 2016-02-10 | 诺维信股份有限公司 | 在丝状真菌中产生c4二羧酸 |
US8835604B2 (en) | 2010-06-12 | 2014-09-16 | Adenium Biotech Aos | Antimicrobial peptide variants and polynucleotides encoding same |
AU2011271094B2 (en) | 2010-06-21 | 2015-01-22 | Novozymes, Inc. | Aspergillus aculeatus derived polypeptides having C4-dicarboxylic acid transporter activity and polynucleotides encoding same |
CN102947458B (zh) | 2010-06-21 | 2016-05-04 | 诺维信股份有限公司 | 用于丝状真菌中c4-二羧酸的改善的产生的方法 |
WO2011161207A1 (en) | 2010-06-25 | 2011-12-29 | Novozymes A/S | Polynucleotides having promoter activity |
WO2011163558A1 (en) | 2010-06-25 | 2011-12-29 | Abbott Laboratories | Materials and methods for assay of anti-hepatitis c virus (hcv) antibodies |
CN103068978B (zh) | 2010-06-25 | 2017-01-18 | 诺维信公司 | 具有前导序列功能的多核苷酸 |
US8802412B2 (en) | 2010-06-25 | 2014-08-12 | Novozymes A/S | Polynucleotides having promoter activity |
BR112012033361A2 (pt) | 2010-06-28 | 2020-10-20 | Codexis, Inc. | acul-redutases formadoras de álcoois graxos (fars) e seus modos de uso. |
CN103108951A (zh) | 2010-06-30 | 2013-05-15 | 诺维信公司 | 具有β-葡糖苷酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸 |
CN103459600B (zh) | 2010-07-01 | 2016-10-19 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 用于生产感兴趣的化合物的方法 |
US8865448B2 (en) | 2010-07-30 | 2014-10-21 | Cleanvantage Llc | Aspergillus containing beta-glucosidase, beta-glucosidases and nucleic acids encoding the same |
US20130189747A1 (en) | 2010-08-12 | 2013-07-25 | Novozymes, Inc. | Compositions Comprising A Polypeptide Having Cellulolytic Enhancing Activity And A Sulfur-Containing Compound And Uses Thereof |
WO2012022745A1 (en) | 2010-08-17 | 2012-02-23 | Novozymes A/S | A brewing method |
BR112013003906A2 (pt) | 2010-08-20 | 2018-07-17 | Codexis Inc | uso de proteínas da família glicosideo hidrolase no processamento de celulose. |
CN103180438A (zh) | 2010-08-24 | 2013-06-26 | 诺维信公司 | 热稳定性Persephonella碳酸酐酶及其用途 |
US9187742B2 (en) | 2010-08-30 | 2015-11-17 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
WO2012030858A2 (en) | 2010-08-30 | 2012-03-08 | Novozymes A/S | Polypeptides having hemicellulolytic activity and polynucleotides encoding same |
WO2012030844A1 (en) | 2010-08-30 | 2012-03-08 | Novozymes A/S | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
WO2012030845A2 (en) | 2010-08-30 | 2012-03-08 | Novozymes A/S | Polypeptides having beta-glucosidase activity, beta-xylosidase activity, or beta-glucosidase and beta-xylosidase activity and polynucleotides encoding same |
WO2012030849A1 (en) | 2010-08-30 | 2012-03-08 | Novozymes A/S | Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same |
EP2611914A1 (en) | 2010-08-30 | 2013-07-10 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
WO2012035103A1 (en) | 2010-09-16 | 2012-03-22 | Novozymes A/S | Lysozymes |
WO2012044836A1 (en) | 2010-09-30 | 2012-04-05 | Novozymes, Inc. | Variants of polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
WO2012044835A1 (en) | 2010-09-30 | 2012-04-05 | Novozymes, Inc. | Variants of polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
CA2809916A1 (en) | 2010-10-01 | 2012-04-05 | Novozymes A/S | Polypeptides having endopeptidase activity and polynucleotides encoding same |
DK3023492T3 (en) | 2010-10-01 | 2018-03-05 | Novozymes Inc | Beta-glucosidase variants and polynucleotides encoding them |
US20130260423A1 (en) | 2010-10-26 | 2013-10-03 | Novozymes North America, Inc. | Methods of Saccharifying Sugar Cane Trash |
CA2810903A1 (en) | 2010-10-29 | 2012-05-03 | Novozymes A/S | Recombinant n-propanol and isopropanol production |
US8728804B2 (en) | 2010-10-29 | 2014-05-20 | Novozymes A/S | Polypeptides having succinyl-CoA: acetoacetate transferase activity and polynucleotides encoding same |
CN103282504A (zh) | 2010-11-02 | 2013-09-04 | 诺维信股份有限公司 | 用家族61多肽预处理纤维素材料的方法 |
US9212354B2 (en) | 2010-11-04 | 2015-12-15 | Novozymes Inc. | Polypeptides having cellobiohydrolase activitiy and polynucleotides encoding same |
DK2637515T3 (da) | 2010-11-08 | 2017-11-27 | Novozymes As | Polypeptider med glucoamylaseaktivitet og polynukleotider, som koder for dem |
CN103298932B (zh) | 2010-11-08 | 2016-08-10 | 诺维信公司 | 具有葡糖淀粉酶活性的多肽和编码该多肽的多核苷酸 |
US20120115244A1 (en) | 2010-11-09 | 2012-05-10 | Abbott Laboratories | Materials and methods for immunoassay of pterins |
WO2012062817A1 (en) | 2010-11-12 | 2012-05-18 | Novozymes A/S | Polypeptides having phospholipase c activity and polynucleotides encoding same |
US9139823B2 (en) | 2010-11-12 | 2015-09-22 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
EP2640833B1 (en) | 2010-11-18 | 2016-08-24 | Novozymes, Inc. | Chimeric polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
WO2012075151A2 (en) | 2010-11-30 | 2012-06-07 | Novozymes, Inc. | Promoters for expressing genes in a fungal cell |
EP2649188A1 (en) | 2010-12-06 | 2013-10-16 | Novozymes North America, Inc. | Methods of hydrolyzing oligomers in hemicellulosic liquor |
EP2649419B1 (en) | 2010-12-07 | 2020-05-20 | Vnomics Corp. | System for measuring and reducing vehicle fuel waste |
US9284588B2 (en) | 2010-12-16 | 2016-03-15 | Novozymes, Inc. | Promoters for expressing genes in a fungal cell |
WO2012098246A1 (en) | 2011-01-20 | 2012-07-26 | Novozymes A/S | Expression of plant peroxidases in filamentous fungi |
DK2668265T3 (en) | 2011-01-26 | 2017-10-16 | Novozymes As | Hitherto unknown glycoside hydrolases from thermophilic fungi |
CN110628803A (zh) | 2011-01-26 | 2019-12-31 | 诺维信公司 | 具有纤维二糖水解酶活性的多肽及编码该多肽的多核苷酸 |
MX2013007720A (es) | 2011-01-26 | 2013-08-09 | Novozymes As | Polipeptidos que tienen actividad celobiohidrolasa y polinucleotidos que codifican para los mismos. |
DK2668270T3 (en) | 2011-01-26 | 2019-01-07 | Novozymes Inc | Polypeptides with cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding them |
WO2012103322A1 (en) | 2011-01-26 | 2012-08-02 | Novozymes A/S | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
US9434972B2 (en) | 2011-01-31 | 2016-09-06 | Novozymes North America, Inc. | Processes for enzymatic refining of pretreated cellulosic material for saccharification |
EP2678352B1 (en) | 2011-02-23 | 2017-12-06 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
AR085253A1 (es) | 2011-02-23 | 2013-09-18 | Danisco | Metodo para producir una clorofilasa |
US8722387B2 (en) | 2011-02-28 | 2014-05-13 | Novozymes, Inc. | Microorganisms for C4-dicarboxylic acid production |
WO2012122518A1 (en) | 2011-03-09 | 2012-09-13 | Novozymes A/S | Methods of increasing the cellulolytic enhancing activity of a polypeptide |
US9409958B2 (en) | 2011-03-10 | 2016-08-09 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
EP2683732B1 (en) | 2011-03-11 | 2016-08-24 | DSM IP Assets B.V. | Vector-host system |
EP3333258A3 (en) | 2011-03-25 | 2018-07-25 | Novozymes A/S | Method for degrading or converting cellulosic material |
US8663962B2 (en) | 2011-03-30 | 2014-03-04 | Codexis, Inc. | Pentose fermentation by a recombinant microorganism |
US20140080182A1 (en) | 2011-03-31 | 2014-03-20 | Novozymes, Inc. | Cellulose Binding Domain Variants and Polynucleotides Encoding Same |
WO2012135659A2 (en) | 2011-03-31 | 2012-10-04 | Novozymes A/S | Methods for enhancing the degradation or conversion of cellulosic material |
US9926547B2 (en) | 2011-04-28 | 2018-03-27 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
BR112013027463A2 (pt) | 2011-04-29 | 2017-09-26 | Novozymes Inc | métodos para degradar ou converter, e para fermentar um material celulóliso, para produzir um produto de fermentação, e para limpar ou lavar uma superfície dura ou roupa suja, e, composição de detergente |
EP2710132A1 (en) | 2011-05-19 | 2014-03-26 | Novozymes, Inc. | Methods for enhancing the degradation of cellulosic material with chitin binding proteins |
EP2710133A1 (en) | 2011-05-19 | 2014-03-26 | Novozymes, Inc. | Methods for enhancing the degradation of cellulosic material with chitin binding proteins |
EP2527432A1 (en) | 2011-05-23 | 2012-11-28 | Novozymes A/S | Bi-directional cytosine deaminase-encoding selection marker |
EP2527448A1 (en) | 2011-05-23 | 2012-11-28 | Novozymes A/S | Simultaneous site-specific integrations of multiple gene-copies in filamentous fungi |
CN103620029B (zh) | 2011-06-24 | 2017-06-09 | 诺维信公司 | 具有蛋白酶活性的多肽和编码它们的多核苷酸 |
DK2726651T3 (en) | 2011-06-28 | 2019-01-28 | Codexis Inc | PROTEIN INVARIANT GENERATION BY REGION SHUFFLING |
HUE058093T2 (hu) | 2011-06-30 | 2022-06-28 | Novozymes As | Eljárás alfa-amilázok szkrínelésére |
WO2013003219A1 (en) | 2011-06-30 | 2013-01-03 | Codexis, Inc. | Pentose fermentation by a recombinant microorganism |
MX353621B (es) | 2011-06-30 | 2018-01-22 | Novozymes As | Variantes de alfa-amilasa. |
WO2013006756A2 (en) | 2011-07-06 | 2013-01-10 | Novozymes A/S | Alpha amylase variants and polynucleotides encoding same |
CN103827298A (zh) | 2011-07-15 | 2014-05-28 | 诺维信公司 | 脂肪酶变体及其编码多核苷酸 |
CN109022518A (zh) | 2011-07-22 | 2018-12-18 | 诺维信北美公司 | 用于预处理纤维素材料和改进其水解的方法 |
BR112014002405A2 (pt) | 2011-08-04 | 2017-04-04 | Novozymes As | polopeptídeo e polinucleotídeo isolados, composição, construto de ácido nucleico ou vetor de expressão, célula hospedeira recombinante, planta transgênica, parte da planta ou célula de planta, métodos para produzir um polipeptídeo e uma proteína, e, processos para degradar um material celulóssico, para produzir um produto de fermentação, e para fermentar um material celulósico |
BR112014002401B1 (pt) | 2011-08-04 | 2021-08-03 | Novozymes A/S | Célula hospedeira transgênica de fungo filamentoso, métodos para produzir um polipeptídeo e uma proteína, e, construto de ácido nucleico ou um vetor de expressão |
WO2013021065A1 (en) | 2011-08-10 | 2013-02-14 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same |
EP2742129B1 (en) | 2011-08-10 | 2017-08-02 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same |
WO2013021059A1 (en) | 2011-08-10 | 2013-02-14 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same |
EP2742130B1 (en) | 2011-08-10 | 2017-11-01 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same |
WO2013021064A1 (en) | 2011-08-10 | 2013-02-14 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same |
EP2742060B1 (en) | 2011-08-10 | 2017-03-01 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same |
WO2013021062A1 (en) | 2011-08-10 | 2013-02-14 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same |
JP2014531895A (ja) | 2011-08-15 | 2014-12-04 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | セルラーゼ活性を有するポリペプチドおよびそれをコードするポリヌクレオチド |
US20140295027A1 (en) | 2011-08-19 | 2014-10-02 | Novozymes A/S | Polypeptides Having Protease Activity |
BR112014003444A2 (pt) | 2011-08-19 | 2017-03-14 | Novozymes Inc | célula hospedeira recombinante, e, método para produzir um ácido c4-dicarboxílico |
WO2013028701A1 (en) | 2011-08-22 | 2013-02-28 | Codexis, Inc. | Gh61 glycoside hydrolase protein variants and cofactors that enhance gh61 activity |
WO2013028912A2 (en) | 2011-08-24 | 2013-02-28 | Novozymes, Inc. | Methods for producing multiple recombinant polypeptides in a filamentous fungal host cell |
BR112014004193A2 (pt) | 2011-08-24 | 2017-03-28 | Novozymes Inc | célula hospedeira recombinante de trichoderma, métodos para produzir uma composição enzimática, composição enzimática, processos para degradar um material celulósico, para sintetizar um produto de fermentação e para fermentar um material celulósico |
US9404101B2 (en) | 2011-08-24 | 2016-08-02 | Novozymes, Inc. | Methods for obtaining positive transformants of a filamentous fungal host cell |
BR112014004186B1 (pt) | 2011-08-24 | 2020-12-15 | Novozymes, Inc. | Composição enzimática, célula hospedeira de fungo filamentoso recombinante, método para produzir uma composição enzimática, processos para degradar um material celulósico, para sintetizar um produto de fermentação, e, para fermentar um material celulósico |
CA2846690A1 (en) | 2011-08-26 | 2013-03-07 | Novozymes A/S | Polypeptides having glucoamylase activity and polynucleotides encoding same |
WO2013036526A1 (en) | 2011-09-06 | 2013-03-14 | Novozymes A/S | Glucoamylase variants and polynucleotides encoding same |
WO2013036861A1 (en) | 2011-09-08 | 2013-03-14 | Codexis, Inc | Biocatalysts and methods for the synthesis of substituted lactams |
WO2013034106A1 (en) | 2011-09-09 | 2013-03-14 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha-amylase activity and polynucleotides encoding same |
WO2013039776A1 (en) | 2011-09-13 | 2013-03-21 | Novozymes North America, Inc. | Methods of hydrolyzing and fermenting cellulosic material |
WO2013043910A1 (en) | 2011-09-20 | 2013-03-28 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
CN104204200B (zh) | 2011-09-22 | 2017-06-09 | 诺维信公司 | 具有蛋白酶活性的多肽和编码它们的多核苷酸 |
US20150031091A1 (en) | 2011-09-30 | 2015-01-29 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha-amylase activity and polynucleotides encoding same |
US20140329284A1 (en) | 2011-09-30 | 2014-11-06 | Novozymes, Inc. | Chimeric Polypeptides Having Beta-Glucosidase Activity and Polynucleotides Encoding Same |
BR112014007647A2 (pt) | 2011-09-30 | 2017-04-18 | Novozymes As | “variante de 3-hpdh, polipeptídeo tendo atividade de 3-hpdh, polinucleotídeo isolado, célula hospedeira microbiana transgênica, e, método para produzir 3-hp |
KR20140090992A (ko) | 2011-10-04 | 2014-07-18 | 유니버시티 오브 플로리다 리서치 파운데이션, 인크. | D-락테이트 탈수소효소 활성을 가지는 글리세롤 탈수소효소 변이체 및 이의 용도 |
ES2638669T3 (es) | 2011-10-11 | 2017-10-23 | Novozymes A/S | Variantes de glucoamilasa y polinucleótidos que las codifican |
EP4253534A3 (en) | 2011-10-17 | 2024-02-07 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same |
CA2852601C (en) | 2011-10-17 | 2023-05-23 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same |
CA2851855A1 (en) | 2011-10-31 | 2013-05-10 | Bp Corporation North America Inc. | Use of plant promoters in filamentous fungi |
WO2013064075A1 (en) | 2011-10-31 | 2013-05-10 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
US20130109055A1 (en) | 2011-10-31 | 2013-05-02 | Bp Corporation North America Inc. | Use of mammalian promoters in filamentous fungi |
BR112014011902A2 (pt) | 2011-11-18 | 2017-05-16 | Novozymes As | polipeptídeo e polinucleotídeo isolados, célula hospedeira recombinante, métodos para produzir um polipeptídeo, e para produzir um mutante de uma célula parental, processos para produzir uma proteína, para degradar ou converter um material celulósico ou material contendo xilano, para produzir um produto de fermentação, e para fermentar um material celulósico ou material contendo xilano, e, formulação de caldo integral ou composição de cultura de células |
BR112014012165A2 (pt) | 2011-11-21 | 2020-06-23 | Novozymes, Inc. | Variante de um polipeptídeo gh61, polinucleotídeo isolado, célula hospedeira recombinante, método para produção de uma variante de um polipeptídeo gh61, processos para degradação ou conversão de um material celulósico, para produção de um produto de fermentação, e para fermentação de um material celulósico, composição enzimática, formulação de caldo completo, ou composição de cultura celular, composição detergente, e método de limpeza ou lavagem de uma superfície dura ou roupa. |
US9695433B2 (en) | 2011-11-22 | 2017-07-04 | Novozymes Inc. | Polypeptides having beta-xylosidase activity and polynucleotides encoding same |
BR112014012170A2 (pt) | 2011-11-25 | 2020-06-23 | Novozymes A/S | polipetídeo isolado, composição, aditivo de ração animal, uso de um polipetídeo, métodos de isolamento de dna de bastérias, e de produção de um poliptídeo, polinucleotídeo isolado, constructo de ácido nucleico ou vetor de expressão, célula hospedeira recombinante, e, planta, parte de planta ou célula de planta |
EP2785732B1 (en) | 2011-12-01 | 2017-04-12 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having beta-xylosidase activity and polynucleotides encoding same |
US9404093B2 (en) | 2011-12-02 | 2016-08-02 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same |
US9169469B2 (en) | 2011-12-02 | 2015-10-27 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity and polynucleotides encoding same |
EP2788491B1 (en) | 2011-12-09 | 2019-01-23 | Danisco US Inc. | Ribosomal promotors from b. subtilis for protein production in microorganisms |
EP3272862A1 (en) | 2011-12-16 | 2018-01-24 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having laccase activity and polynucleotides encoding same |
BR112014014697A2 (pt) | 2011-12-19 | 2020-10-27 | Novozymes, Inc. | polipeptídeo isolado, composição, polinucleotídeo isolado, construto de ácido nucleico ou vetor de expressão, célula hospedeira recombinante, métodos para produzir um polipeptídeo e uma proteína, para gerar oxigênio molecular, e para remover peróxido de hidrogênio do tecido, processos para degradar ou converter um material celulósico, e para produzir um produto de fermentação, e, formulação de caldo integral ou composição de cultura de células |
US9611462B2 (en) | 2011-12-20 | 2017-04-04 | Codexis, Inc. | Endoglucanase 1B (EG1B) variants |
US10036050B2 (en) | 2011-12-20 | 2018-07-31 | Novozymes, Inc. | Cellobiohydrolase variants and polynucleotides encoding same |
US10174301B2 (en) | 2011-12-28 | 2019-01-08 | Novozymes A/S | Methods for improving the nutritional value of the animal feed using a protease |
US8993248B2 (en) | 2011-12-31 | 2015-03-31 | Abbott Laboratories | Truncated human vitamin D binding protein and mutation and fusion thereof and related materials and methods of use |
EP2807254B1 (en) | 2012-01-26 | 2017-08-02 | Novozymes A/S | Use of polypeptides having protease activity in animal feed and detergents |
IN2014DN06191A (fi) | 2012-02-03 | 2015-10-23 | Procter & Gamble | |
ES2794644T3 (es) | 2012-02-03 | 2020-11-18 | Novozymes As | Variantes de lipasa y polinucleótidos que las codifican |
EP2817325B1 (en) | 2012-02-20 | 2019-06-26 | Novozymes A/S | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
EP2828385B1 (en) | 2012-03-23 | 2018-02-07 | Codexis, Inc. | Biocatalysts and methods for synthesizing derivatives of tryptamine and tryptamine analogs |
EP2834353B1 (en) | 2012-04-02 | 2017-07-19 | Novozymes A/S | Lipase variants and polynucleotides encoding same |
EP2841569A2 (en) | 2012-04-23 | 2015-03-04 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha-glucuronidase activity and polynucleotides encoding same |
CN104245930A (zh) | 2012-04-23 | 2014-12-24 | 诺维信公司 | 具有葡萄糖醛酸酯酶活性的多肽以及编码其的多核苷酸 |
CA2868308A1 (en) | 2012-04-27 | 2013-10-31 | Novozymes, Inc. | Gh61 polypeptide variants and polynucleotides encoding same |
CN117904080A (zh) | 2012-05-07 | 2024-04-19 | 诺维信公司 | 具有黄原胶降解活性的多肽以及编码其的核苷酸 |
HUE042605T2 (hu) | 2012-05-08 | 2019-07-29 | Codexis Inc | Biokatalizátorok és kémiai vegyületek hidroxilálására szolgáló eljárások |
CN104428313B (zh) | 2012-05-11 | 2017-11-17 | 科德克希思公司 | 工程化亚胺还原酶以及用于酮和胺化合物的还原胺化的方法 |
CN109234250A (zh) | 2012-05-31 | 2019-01-18 | 诺维信公司 | 具有有机磷水解酶活性的多肽 |
EP2855659A1 (en) | 2012-05-31 | 2015-04-08 | Novozymes A/S | Improved selection in fungi |
BR112014031026A2 (pt) | 2012-06-11 | 2017-06-27 | Codexis Inc | variantes de beta-xilosidase fúngica. |
BR112014031526A2 (pt) | 2012-06-19 | 2017-08-01 | Dsm Ip Assets Bv | promotores para expressar um gene em uma célula |
CN104394708A (zh) | 2012-06-20 | 2015-03-04 | 诺维信公司 | 具有蛋白酶活性的多肽在动物饲料和洗涤剂中的用途 |
WO2014009473A1 (en) | 2012-07-12 | 2014-01-16 | Novozymes A/S | Polypeptides having lipase activity and polynucleotides encoding same |
EA201500142A1 (ru) | 2012-07-19 | 2015-07-30 | ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. | ШТАММ, ДЕФИЦИТНЫЙ ПО AgsE |
KR102114010B1 (ko) | 2012-08-16 | 2020-05-25 | 방글라데시 주트 리서치 인스티튜트 | 흑부병으로부터의 셀룰로즈 및/또는 헤미셀룰로즈 분해 효소 및 이의 용도 |
MY169809A (en) | 2012-08-16 | 2019-05-16 | Bangladesh Jute Res Institute | Pectin degrading enzymes from macrophomina phaseolina and uses thereof |
US9828595B2 (en) | 2012-08-17 | 2017-11-28 | Novozymes A/S | Thermostable asparaginase variants and polynucleotides encoding same |
WO2014028833A1 (en) | 2012-08-17 | 2014-02-20 | Novozymes A/S | Methods for co-silencing expression of genes in filamentous fungal strains and uses thereof |
MX2015002211A (es) | 2012-08-22 | 2015-05-08 | Novozymes As | Metaloproteasa de exiguobacterium. |
CN104603266B (zh) | 2012-08-22 | 2017-11-10 | 诺维信公司 | 来自脂环酸芽孢杆菌属的金属蛋白酶 |
MX2015002099A (es) | 2012-08-22 | 2015-05-11 | Dupont Nutrition Biosci Aps | Variantes que tienen actividad glucoamilasa. |
BR112015004701B1 (pt) | 2012-09-05 | 2022-06-14 | Novozymes A/S | Composição, uso de um polipeptídeo isolado, polinucleotídeo isolado, construção de ácido nucleico ou vetor de expressão, célula hospedeira de expressão recombinante, métodos para produção de um polipeptídeo, para melhorar o valor nutricional de uma ração animal, e para tratamento de proteínas, composição de ração animal, aditivo de ração animal, e, ração animal |
US20140073022A1 (en) | 2012-09-10 | 2014-03-13 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Production of polyhydroxyalkanoates with a defined composition from an unrelated carbon source |
EP2898076B1 (en) | 2012-09-19 | 2018-03-07 | DSM IP Assets B.V. | Cell modification method using essential genes as markers and optionally recycling these |
US20150210991A1 (en) | 2012-09-19 | 2015-07-30 | Novozymes, Inc. | Methods For Enhancing The Degradation Or Conversion Of Cellulosic Material |
WO2014058896A1 (en) | 2012-10-08 | 2014-04-17 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
WO2014056922A2 (en) | 2012-10-12 | 2014-04-17 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity |
US9611459B2 (en) | 2012-10-12 | 2017-04-04 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity |
CN104704116B (zh) | 2012-10-12 | 2018-09-28 | 诺维信公司 | 具有过氧合酶活性的多肽 |
EP2906685B1 (en) | 2012-10-12 | 2018-08-15 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity |
US9453207B2 (en) | 2012-10-12 | 2016-09-27 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity |
WO2014056921A2 (en) | 2012-10-12 | 2014-04-17 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity |
WO2014056916A2 (en) | 2012-10-12 | 2014-04-17 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity |
WO2014066141A2 (en) | 2012-10-24 | 2014-05-01 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
WO2014076232A2 (en) | 2012-11-19 | 2014-05-22 | Novozymes A/S | Isopropanol production by recombinant hosts using an hmg-coa intermediate |
CA2891482A1 (en) | 2012-11-20 | 2014-05-30 | Codexis, Inc. | Pentose fermentation by a recombinant microorganism |
US9624270B2 (en) | 2012-11-29 | 2017-04-18 | Mississippi State University | Engineering the production of a conformational variant of occidiofungin that has enhanced inhibitory activity against fungal species |
WO2014086706A1 (en) | 2012-12-07 | 2014-06-12 | Novozymes A/S | Method for generating site-specific mutations in filamentous fungi |
CN104884464B (zh) | 2012-12-11 | 2021-02-02 | 诺维信公司 | 具有磷脂酶c活性的多肽以及对其进行编码的多核苷酸 |
CN104870639A (zh) | 2012-12-14 | 2015-08-26 | 诺维信公司 | 具有纤维素分解增强活性的多肽以及编码它们的多核苷酸 |
WO2014099653A1 (en) | 2012-12-17 | 2014-06-26 | Novozymes A/S | Alpha-amylases and polynucleotides encoding same |
US20150337280A1 (en) | 2012-12-19 | 2015-11-26 | Novozymes A/S | Polypeptides Having Cellulolytic Enhancing Activity And Polynucleotides Encoding Same |
MX363360B (es) | 2012-12-21 | 2019-03-21 | Novozymes As | Polipéptidos que poseen actividad proteasa y polinucleótidos que los codifican. |
US10023872B2 (en) | 2012-12-21 | 2018-07-17 | Novozymes, Inc. | Methods for producing heterologous polypeptides in mutants of trichoderma |
US9902943B2 (en) | 2012-12-21 | 2018-02-27 | Codexis, Inc. | Engineered biocatalysts and methods for synthesizing chiral amines |
BR112015014624A2 (pt) | 2012-12-24 | 2017-10-10 | Novozymes As | polipeptídeo isolado, composição, polinucleotídeo isolado, construto de ácido nucleico ou vetor de expressão, célula hospedeira recombinante, e, método para tratamento de têxtil |
US9902946B2 (en) | 2013-01-03 | 2018-02-27 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same |
JP6486835B2 (ja) | 2013-01-18 | 2019-03-20 | コデクシス, インコーポレイテッド | カルバペネム合成に有用な人口生体触媒 |
ES2802807T3 (es) | 2013-02-04 | 2021-01-21 | Dsm Ip Assets Bv | Polipéptido degradador de carbohidratos y sus usos |
MX2015010078A (es) | 2013-02-06 | 2016-01-25 | Novozymes As | Uso de polipeptidos con actividad proteasa en alimentos para animales. |
CA2902824C (en) | 2013-02-28 | 2021-06-22 | Codexis, Inc. | Engineered transaminase polypeptides for industrial biocatalysis |
EP2964760B1 (en) | 2013-03-08 | 2021-05-12 | Novozymes A/S | Cellobiohydrolase variants and polynucleotides encoding same |
WO2014145768A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Bp Corporation North America Inc. | Use of non-fungal 5' utrs in filamentous fungi |
EP2984162B1 (en) | 2013-03-15 | 2019-10-23 | DSM IP Assets B.V. | Use of thermophilic nucleases for degrading nucleic acids |
WO2014147219A1 (en) | 2013-03-21 | 2014-09-25 | Novozymes A/S | Polypeptides having phospholipase a activity and polynucleotides encoding same |
EP2976416B1 (en) | 2013-03-21 | 2018-05-16 | Novozymes A/S | Polypeptides with lipase activity and polynucleotides encoding same |
US20160060660A1 (en) | 2013-04-05 | 2016-03-03 | Université Du Luxembourg | Biotechnological production of itaconic acid |
TR201819061T4 (tr) | 2013-04-18 | 2019-01-21 | Novozymes As | Proteaz Aktivitesine Sahip Polipeptitler Ve Bunları Kodlayan Polinükleotitler |
HUE043549T2 (hu) | 2013-04-18 | 2019-08-28 | Codexis Inc | Átszerkesztett fenilalanin-ammónia-liáz polipeptidek |
WO2014177541A2 (en) | 2013-04-30 | 2014-11-06 | Novozymes A/S | Glucoamylase variants and polynucleotides encoding same |
DK3372680T3 (da) | 2013-04-30 | 2021-01-11 | Novozymes As | Glucoamylasevarianter og polynukleotider, som koder for dem |
US9556465B2 (en) | 2013-05-10 | 2017-01-31 | Novozymes A/S | Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same |
RU2712877C2 (ru) | 2013-05-14 | 2020-01-31 | Новозимс А/С | Моющие композиции |
WO2014183921A1 (en) | 2013-05-17 | 2014-11-20 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha amylase activity |
CN105264058B (zh) | 2013-06-06 | 2022-03-29 | 诺维信公司 | α-淀粉酶变体以及对其进行编码的多核苷酸 |
WO2014202624A2 (en) | 2013-06-19 | 2014-12-24 | Dsm Ip Assets B.V. | Rasamsonia gene and use thereof |
WO2014202620A2 (en) | 2013-06-19 | 2014-12-24 | Dsm Ip Assets B.V. | Rasamsonia gene and use thereof |
WO2014202622A2 (en) | 2013-06-19 | 2014-12-24 | Dsm Ip Assets B.V. | Rasamsonia gene and use thereof |
WO2014202621A1 (en) | 2013-06-20 | 2014-12-24 | Dsm Ip Assets B.V. | Carbohydrate degrading polypeptide and uses thereof |
RU2015156280A (ru) | 2013-07-04 | 2017-08-09 | Новозимс А/С | Полипептиды, обладающие эффектом против переосаждения, и полинуклеотиды, кодирующие их |
US20160160196A1 (en) | 2013-07-09 | 2016-06-09 | Novozymes A/S | Polypeptides with Lipase Activity And Polynucleotides Encoding Same |
CA2916905A1 (en) | 2013-07-10 | 2015-01-15 | Novartis Ag | Multiple proteases deficient filamentous fungal cells and methods of use thereof |
CA2915336C (en) | 2013-07-17 | 2024-03-12 | Novozymes A/S | Pullulanase chimeras and polynucleotides encoding same |
CA2917690A1 (en) | 2013-07-26 | 2015-01-29 | Biomethodes | Novel variant trichoderma reesei endoglucanases |
EP3033420B1 (en) | 2013-08-15 | 2018-02-21 | Novozymes A/S | Polypeptides having beta-1,3-galactanase activity and polynucleotides encoding same |
US9708630B1 (en) | 2013-10-08 | 2017-07-18 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Cells and methods for producing fatty alcohols |
WO2015059133A1 (en) | 2013-10-22 | 2015-04-30 | Novozymes A/S | Cellobiose dehydrogenase variants and polynucleotides encoding same |
SG11201601344PA (en) | 2013-10-25 | 2016-05-30 | Novozymes As | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
JP6643987B2 (ja) | 2013-11-13 | 2020-02-12 | コデクシス, インコーポレイテッド | ケトン化合物およびアミン化合物の還元的アミノ化のための操作されたイミンレダクターゼおよび方法 |
EP2876156A1 (en) | 2013-11-26 | 2015-05-27 | Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives | New enzymes and method for preparing hydroxylated L-lysine or L-ornithine and analogs thereof |
EP3074513A1 (en) | 2013-11-26 | 2016-10-05 | Novozymes A/S | Enzyme compositions and uses thereof |
EP3074509B1 (en) | 2013-11-29 | 2019-03-06 | Novozymes A/S | Peroxygenase variants |
EP3077517B1 (en) | 2013-12-02 | 2018-10-17 | DSM IP Assets B.V. | Ice structuring protein |
WO2015085920A1 (en) | 2013-12-11 | 2015-06-18 | Novozymes A/S | Cutinase variants and polynucleotides encoding same |
EP2886656A1 (en) | 2013-12-18 | 2015-06-24 | Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives | New enzyme and method for preparing 4-hydroxyl benzyl alcohol and derivatives thereof |
EP3453757B1 (en) | 2013-12-20 | 2020-06-17 | Novozymes A/S | Polypeptides having protease activity and polynucleotides encoding same |
EP3415624B1 (en) | 2014-01-22 | 2021-08-04 | Novozymes A/S | Pullulanase variants and polynucleotides encoding same |
CN105849121B (zh) | 2014-01-22 | 2020-12-29 | 诺维信公司 | 具有脂肪酶活性的多肽和编码它们的多核苷酸 |
WO2015134773A1 (en) | 2014-03-05 | 2015-09-11 | Novozymes A/S | Compositions and methods for functionalizing and linking materials |
CN106068077B (zh) | 2014-03-05 | 2019-06-07 | 诺维信公司 | 用于改进农作物的收获后特性的组合物和方法 |
CN106062270A (zh) | 2014-03-05 | 2016-10-26 | 诺维信公司 | 使用木葡聚糖内糖基转移酶改进非纤维素纺织材料的性质的组合物和方法 |
BR112016020374A2 (pt) | 2014-03-05 | 2018-01-23 | Novozymes As | formulação, e, métodos para potenciar o crescimento de plantas e para formular um ou mais agentes agricolamente benéficos |
US20160333292A1 (en) | 2014-03-05 | 2016-11-17 | Novozymes A/S | Compositions and Methods for Improving Properties of Cellulosic Textile Materials with Xyloglucan Endotransglycosylase |
CN111500552A (zh) | 2014-03-12 | 2020-08-07 | 诺维信公司 | 具有脂肪酶活性的多肽和编码它们的多核苷酸 |
CN106103708A (zh) | 2014-04-01 | 2016-11-09 | 诺维信公司 | 具有α淀粉酶活性的多肽 |
EP3550015B1 (en) | 2014-04-10 | 2021-11-10 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same |
RU2737535C2 (ru) | 2014-04-11 | 2020-12-01 | Новозимс А/С | Моющая композиция |
EP3131921B1 (en) | 2014-04-15 | 2020-06-10 | Novozymes A/S | Polypeptides with lipase activity and polynucleotides encoding same |
WO2015161019A1 (en) | 2014-04-16 | 2015-10-22 | Codexis, Inc. | Engineered tyrosine ammonia lyase |
WO2015177152A1 (en) | 2014-05-19 | 2015-11-26 | Dsm Ip Assets B.V. | Proline-specific endoprotease |
ES2744898T3 (es) | 2014-05-19 | 2020-02-26 | Dsm Ip Assets Bv | Endoproteasa específica de prolina |
WO2015177153A1 (en) | 2014-05-19 | 2015-11-26 | Dsm Ip Assets B.V. | Proline-specific endoprotease |
AR100606A1 (es) | 2014-05-27 | 2016-10-19 | Novozymes As | Variantes de lipasas y polinucleótidos que las codifican |
AR100605A1 (es) | 2014-05-27 | 2016-10-19 | Novozymes As | Métodos para la producción de lipasas |
BR112016027884B1 (pt) | 2014-05-30 | 2023-05-02 | Novozymes A/S | Variante de uma xilanase da família 11 de gh genitora, polinucleotídeo, construção de ácido nucleico, vetor de expressão, célula hospedeira, e, métodos de produção de uma variante de xilanase da família 11 de gh e de degradação de um material contendo xilana |
DK3152315T3 (en) | 2014-06-06 | 2018-11-26 | Novozymes As | ENZYME COMPOSITIONS AND APPLICATIONS THEREOF |
ES2712402T3 (es) | 2014-06-25 | 2019-05-13 | Novozymes As | Variantes de xilanasa y polinucleótidos que las codifican |
WO2016007623A1 (en) | 2014-07-09 | 2016-01-14 | Codexis, Inc. | Novel p450-bm3 variants with improved activity |
CN108064266A (zh) | 2014-07-21 | 2018-05-22 | 格利科斯芬兰公司 | 在丝状真菌中具有哺乳动物样n-聚糖的糖蛋白的制备 |
US20170267980A1 (en) | 2014-08-20 | 2017-09-21 | Novozymes A/S | Xyloglucan Endotransglycosylase variants and Polynucleotides Encoding Same |
WO2016037096A1 (en) | 2014-09-05 | 2016-03-10 | Novozymes A/S | Carbohydrate binding module variants and polynucleotides encoding same |
EP3209788B1 (en) | 2014-10-23 | 2019-06-05 | Novozymes A/S | Glucoamylase variants and polynucleotides encoding same |
EP3221447A1 (en) | 2014-11-20 | 2017-09-27 | Novozymes A/S | Alicyclobacillus variants and polynucleotides encoding same |
EP3224354B1 (en) | 2014-11-25 | 2021-01-13 | Codexis, Inc. | Engineered imine reductases and methods for the reductive amination of ketone and amine compounds |
WO2016090059A1 (en) | 2014-12-02 | 2016-06-09 | Novozymes A/S | Laccase variants and polynucleotides encoding same |
CN107002054A (zh) | 2014-12-05 | 2017-08-01 | 诺维信公司 | 脂肪酶变体以及编码它们的多核苷酸 |
CN107002049A (zh) | 2014-12-16 | 2017-08-01 | 诺维信公司 | 具有n‑乙酰基葡萄糖胺氧化酶活性的多肽 |
US20170362613A1 (en) | 2014-12-19 | 2017-12-21 | Novozymes A/S | Recombinant Host Cells For The Production Of 3-Hydroxypropionic Acid |
DK3234143T3 (da) | 2014-12-19 | 2023-09-04 | Novozymes As | Sammensætninger omfattende polypeptider med xylanaseaktivitet og polypeptider med arabinofuranosidaseaktivitet |
LT3237621T (lt) | 2014-12-22 | 2023-09-25 | Codexis, Inc. | Žmogaus alfa-galaktozidazės variantai |
EP3242950B1 (en) | 2015-01-06 | 2021-10-06 | DSM IP Assets B.V. | A crispr-cas system for a filamentous fungal host cell |
DK3256577T3 (da) | 2015-02-10 | 2020-09-14 | Codexis Inc | Ketoreduktase polypeptider til syntesen af chirale forbindelser |
EP3262165B1 (en) | 2015-02-24 | 2020-06-03 | Novozymes A/S | Cellobiohydrolase variants and polynucleotides encoding same |
US10358664B2 (en) | 2015-02-27 | 2019-07-23 | Novozymes A/S | Mutant host cells for the production of 3-hydroxypropionic acid |
US10385352B2 (en) | 2015-03-09 | 2019-08-20 | Novozymes A/S | Methods of introducing multiple expression constructs into a eukaryotic cell |
WO2016164583A2 (en) | 2015-04-07 | 2016-10-13 | Novozymes A/S | Methods for selecting enzymes having enhanced activity |
EP3280818A2 (en) | 2015-04-07 | 2018-02-14 | Novozymes A/S | Methods for selecting enzymes having lipase activity |
AR104205A1 (es) | 2015-04-09 | 2017-07-05 | Dsm Ip Assets Bv | Fosfolipasa c |
CN107531762A (zh) | 2015-05-07 | 2018-01-02 | 科德克希思公司 | 青霉素g酰化酶 |
US9920102B2 (en) | 2015-05-15 | 2018-03-20 | Albert Einstein College Of Medicine, Inc. | Fusion tags for protein expression |
PT3298138T (pt) | 2015-05-22 | 2022-11-02 | Dupont Nutrition Biosci Aps | Acetolactato descarboxilase |
CN116676293A (zh) | 2015-05-27 | 2023-09-01 | 国投生物科技投资有限公司 | 具有纤维二糖水解酶活性的多肽以及对其进行编码的多核苷酸 |
MX2017015126A (es) | 2015-06-02 | 2018-03-28 | Dsm Ip Assets Bv | Uso de proteina estructurante del hielo. |
US10858637B2 (en) | 2015-06-16 | 2020-12-08 | Novozymes A/S | Polypeptides with lipase activity and polynucleotides encoding same |
WO2016205127A1 (en) | 2015-06-18 | 2016-12-22 | Novozymes A/S | Polypeptides having trehalase activity and the use thereof in process of producing fermentation products |
WO2016207373A1 (en) | 2015-06-26 | 2016-12-29 | Novozymes A/S | Polypeptides having peroxygenase activity |
DK3313193T3 (da) | 2015-06-26 | 2021-06-07 | Novozymes As | Fremgangsmåde til fremstilling af en kaffeekstrakt |
BR112017028065A2 (pt) | 2015-06-26 | 2018-09-11 | Novozymes As | sistema de bioacabamento |
CA2987160C (en) | 2015-07-01 | 2022-12-13 | Novozymes A/S | Methods of reducing odor |
AU2016286612B2 (en) | 2015-07-02 | 2021-01-28 | Novozymes A/S | Animal feed compositions and uses thereof |
US10822598B2 (en) | 2015-07-06 | 2020-11-03 | Novozymes A/S | Lipase variants and polynucleotides encoding same |
JP6691558B2 (ja) | 2015-07-07 | 2020-04-28 | コデクシス, インコーポレイテッド | 改善された活性を持つ新規のp450−bm3バリアント |
US20180216089A1 (en) | 2015-07-24 | 2018-08-02 | Novozymes, Inc. | Polypeptides Having Beta-Xylosidase Activity And Polynucleotides Encoding Same |
CN108138153A (zh) | 2015-07-24 | 2018-06-08 | 诺维信股份有限公司 | 具有***呋喃糖苷酶活性的多肽以及编码它们的多核苷酸 |
WO2017017292A1 (es) | 2015-07-29 | 2017-02-02 | Abengoa Bioenergía Nuevas Tecnologías, S. A. | Expresión de enzimas beta-xilosidasas recombinantes |
EP3341475A1 (en) | 2015-08-24 | 2018-07-04 | Novozymes A/S | Beta-alanine aminotransferases for the production of 3-hydroxypropionic acid |
KR20180043365A (ko) | 2015-09-02 | 2018-04-27 | 듀폰 뉴트리션 바이오사이언시즈 에이피에스 | 글리코시드 하이돌라제 및 동물에서의 병원성 감염의 예방 및/또는 치료에서 이의 용도 |
CN107949637A (zh) | 2015-09-04 | 2018-04-20 | 诺维信公司 | 抑制酶组合物的aa9溶解性多糖单加氧酶催化的失活的方法 |
WO2017046260A1 (en) | 2015-09-17 | 2017-03-23 | Novozymes A/S | Polypeptides having xanthan degrading activity and polynucleotides encoding same |
EP3353195B1 (en) | 2015-09-22 | 2021-11-10 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
WO2017050652A1 (en) | 2015-09-25 | 2017-03-30 | Dsm Ip Assets B.V. | Asparaginase |
US10844360B2 (en) | 2015-10-07 | 2020-11-24 | Novozymes A/S | Polypeptides |
CN108291215A (zh) | 2015-10-14 | 2018-07-17 | 诺维信公司 | 具有蛋白酶活性的多肽以及编码它们的多核苷酸 |
ES2891339T3 (es) | 2015-10-14 | 2022-01-27 | Novozymes As | Variantes de glucoamilasa y polinucleótidos que codifican las mismas |
EP3362556A1 (en) | 2015-10-14 | 2018-08-22 | Novozymes A/S | Polypeptide variants |
WO2017070219A1 (en) | 2015-10-20 | 2017-04-27 | Novozymes A/S | Lytic polysaccharide monooxygenase (lpmo) variants and polynucleotides encoding same |
WO2017075426A1 (en) | 2015-10-30 | 2017-05-04 | Novozymes A/S | Polynucleotide constructs for in vitro and in vivo expression |
EP3380608A1 (en) | 2015-11-24 | 2018-10-03 | Novozymes A/S | Polypeptides having protease activity and polynucleotides encoding same |
US10870838B2 (en) | 2015-12-01 | 2020-12-22 | Novozymes A/S | Methods for producing lipases |
CN108368158A (zh) | 2015-12-02 | 2018-08-03 | 法国农业科学研究院 | 具有抗微生物活性的新型肽和能够将肽中的l-构型残基转变成d-构型氨基酸的新型酶 |
CA3005953A1 (en) | 2015-12-22 | 2017-06-29 | Albumedix Ltd | Improved protein expression strains |
MX2018007485A (es) | 2015-12-30 | 2018-08-01 | Novozymes As | Variantes de enzimas y polinucleotidos que las codifican. |
EP3408386A1 (en) | 2016-01-29 | 2018-12-05 | Novozymes A/S | Beta-glucanase variants and polynucleotides encoding same |
WO2017140807A1 (en) | 2016-02-16 | 2017-08-24 | Monaghan Mushrooms Group | Fungal polypeptides having lysozyme activity |
CN108699600A (zh) | 2016-02-23 | 2018-10-23 | 诺维信公司 | 改进的新一代测序 |
CN109415712A (zh) | 2016-03-02 | 2019-03-01 | 诺维信公司 | 纤维二糖水解酶变体和编码它们的多核苷酸 |
DK3419991T3 (da) | 2016-03-04 | 2023-01-16 | Danisco Us Inc | Modificerede ribosomale genpromotorer til proteinproduktion i mikroorganismer |
DK3433358T3 (da) | 2016-03-24 | 2022-09-26 | Novozymes As | Cellobiohydrolasevarianter og polynukleotider, der koder for dem |
CN109312333A (zh) | 2016-04-07 | 2019-02-05 | 诺维信公司 | 选择具有蛋白酶活性的酶的方法 |
EP3445776B1 (en) | 2016-04-19 | 2021-02-17 | Novozymes A/S | Rlma-inactivated filamentous fungal host cell |
MX2018013139A (es) | 2016-04-29 | 2019-02-13 | Novozymes As | Composiciones detergentes y sus usos. |
EP3452497B1 (en) | 2016-05-03 | 2021-02-17 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding the same |
EP3452587B1 (en) | 2016-05-05 | 2021-09-08 | Codexis, Inc. | Penicillin-g acylases |
US11186833B2 (en) | 2016-05-09 | 2021-11-30 | Novozymes A/S | Variant polypeptides with improved performance and use of the same |
EP3246401A1 (en) | 2016-05-20 | 2017-11-22 | Commissariat À L'Énergie Atomique Et Aux Énergies Alternatives | New fatty acid decarboxylase and its uses |
WO2017202979A1 (en) | 2016-05-24 | 2017-11-30 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha-galactosidase activity and polynucleotides encoding same |
MX2018013875A (es) | 2016-05-24 | 2019-09-04 | Novozymes As | Composiciones que comprenden polipeptidos que tienen actividad galactanasa y polipeptidos que tienen actividad beta-galactosidasa. |
BR112018073875A2 (pt) | 2016-05-24 | 2019-02-26 | Novozymes As | polipeptídeo isolado, composição, grânulo, aditivo de ração animal, formulação líquida, ração animal, métodos para liberar galactose de material à base de planta, para melhorar um ou mais parâmetros de desempenho de um animal e o valor nutricional de uma ração animal, para preparar uma ração animal e para produzir o polipeptídeo, uso, polinucleotídeo, construto de ácido nucleico ou vetor de expressão, e, célula hospedeira recombinante. |
AU2017270231A1 (en) | 2016-05-24 | 2018-11-15 | Novozymes A/S | Compositions comprising polypeptides having galactanase activity and polypeptides having beta-galactosidase activity |
WO2017205535A1 (en) | 2016-05-27 | 2017-11-30 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
WO2017211803A1 (en) | 2016-06-07 | 2017-12-14 | Novozymes A/S | Co-expression of heterologous polypeptides to increase yield |
SG11201809575TA (en) | 2016-06-09 | 2018-11-29 | Codexis Inc | Biocatalysts and methods for hydroxylation of chemical compounds |
US10829748B2 (en) | 2016-06-10 | 2020-11-10 | Dsm Ip Assets B.V. | Mutant lipase and use thereof |
SG11201810998WA (en) | 2016-06-15 | 2019-01-30 | Codexis Inc | Engineered beta-glucosidases and glucosylation methods |
US10421951B2 (en) | 2016-06-22 | 2019-09-24 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Gene construct encoding mutant thioesterase, mutant thioesterase encoded thereby, transformed host cell containing the gene construct, and method of using them to produce medium-chain fatty acids |
EP3263699B1 (en) | 2016-06-30 | 2020-07-01 | Fornia BioSolutions, Inc. | Novel phytases and uses thereof |
CN109642226A (zh) | 2016-06-30 | 2019-04-16 | 丹尼斯科美国公司 | 天冬氨酸蛋白酶 |
WO2018002261A1 (en) | 2016-07-01 | 2018-01-04 | Novozymes A/S | Detergent compositions |
EP3481949B1 (en) | 2016-07-05 | 2021-06-09 | Novozymes A/S | Pectate lyase variants and polynucleotides encoding same |
WO2018009520A1 (en) | 2016-07-06 | 2018-01-11 | Novozymes A/S | Improving a microorganism by crispr-inhibition |
WO2018007573A1 (en) | 2016-07-08 | 2018-01-11 | Novozymes A/S | Detergent compositions with galactanase |
MX2019000139A (es) | 2016-07-08 | 2019-06-10 | Novozymes As | Polipeptidos que tienen actividad xilanasa y polinucleotidos que los codifican. |
BR112019000089A2 (pt) | 2016-07-08 | 2019-07-09 | Novozymes As | variante de xilanase, composição, grânulo, aditivo de ração animal, formulação líquida, ração animal, métodos para aprimorar um ou mais parâmetros de desempenho de um animal, para solubilizar xilana a partir do material à base de planta, para liberar amido do material à base de planta, para aprimorar o valor nutricional de uma ração animal, para preparar uma massa ou um produto assado preparado a partir da massa, de produção de uma variante de xilanase e para obter uma variante de xilanase, uso de uma variante de xilanase, processo de produção de um produto de fermentação, polinucleotídeo isolado, construto de ácido nucleico ou vetor de expressão, e, célula hospedeira recombinante. |
CA3027272C (en) | 2016-07-13 | 2022-06-21 | The Procter & Gamble Company | Bacillus cibi dnase variants and uses thereof |
US11326152B2 (en) | 2016-07-18 | 2022-05-10 | Novozymes A/S | Lipase variants, polynucleotides encoding same and the use thereof |
WO2018017792A1 (en) | 2016-07-20 | 2018-01-25 | Novozymes A/S | Heat-stable metagenomic carbonic anhydrases and their use |
CN109642225A (zh) | 2016-07-21 | 2019-04-16 | 诺维信公司 | 丝氨酸蛋白酶变体以及对其进行编码的多核苷酸 |
EP3487995B1 (en) | 2016-07-21 | 2021-05-26 | Novozymes A/S | Serine protease variants and polynucleotides encoding same |
WO2018015444A1 (en) | 2016-07-22 | 2018-01-25 | Novozymes A/S | Crispr-cas9 genome editing with multiple guide rnas in filamentous fungi |
DK3487873T3 (da) | 2016-07-22 | 2021-05-25 | Novozymes As | Forbedret filamentøs svampevært |
WO2018026868A1 (en) | 2016-08-01 | 2018-02-08 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
EP3504329A1 (en) | 2016-08-24 | 2019-07-03 | Novozymes A/S | Xanthan lyase variants and polynucleotides encoding same |
CN109563498A (zh) | 2016-08-24 | 2019-04-02 | 汉高股份有限及两合公司 | 包含黄原胶裂解酶变体i的洗涤剂组合物 |
EP3504330A1 (en) | 2016-08-24 | 2019-07-03 | Novozymes A/S | Gh9 endoglucanase variants and polynucleotides encoding same |
EP3504313A1 (en) | 2016-08-24 | 2019-07-03 | Henkel AG & Co. KGaA | Detergent composition comprising gh9 endoglucanase variants i |
IL264686B1 (en) | 2016-08-26 | 2024-03-01 | Codexis Inc | Engineered imine reductases and methods for reversible amination of ketone and amine compounds |
CN109563522A (zh) | 2016-09-15 | 2019-04-02 | 诺维信公司 | 真菌宿主细胞中dna片段的基因组整合 |
BR112019004988A2 (pt) | 2016-09-16 | 2019-06-04 | Dupont Nutrition Biosci Aps | variantes de decarboxilase de acetolactato que tem atividade específica aprimorada |
EP3532592A1 (en) | 2016-10-25 | 2019-09-04 | Novozymes A/S | Detergent compositions |
US20210284991A1 (en) | 2016-11-21 | 2021-09-16 | Novozymes A/S | Yeast Cell Extract Assisted Construction of DNA Molecules |
JP7019202B2 (ja) | 2017-01-05 | 2022-02-15 | コデクシス, インコーポレイテッド | ペニシリンgアシラーゼ |
MX2019008967A (es) | 2017-02-01 | 2019-09-10 | Novozymes As | Variantes de alfa-amilasas. |
BR112019015689A2 (pt) | 2017-02-01 | 2020-04-14 | Procter & Gamble | composições de limpeza compreendendo variantes de amilase |
CA3175070A1 (en) | 2017-02-03 | 2018-08-09 | Codexis, Inc. | Engineered glycosyltransferases and steviol glycoside glucosylation methods |
SG11201906880VA (en) | 2017-02-13 | 2019-08-27 | Codexis Inc | Engineered phenylalanine ammonia lyase polypeptides |
BR112019017271A2 (pt) | 2017-02-20 | 2020-04-14 | Novozymes As | enzima lipolítica para uso em panificação |
EP3592429A1 (en) | 2017-03-06 | 2020-01-15 | DuPont Nutrition Biosciences ApS | Novel fungal fucosidases and their use in preventing and/or treating a pathogenic infection in an animal |
CN110431224A (zh) | 2017-03-13 | 2019-11-08 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 锌双核簇转录调控因子缺陷型菌株 |
WO2018167153A1 (en) | 2017-03-17 | 2018-09-20 | Novozymes A/S | Improved filamentous fungal host cell |
WO2018172155A1 (en) | 2017-03-23 | 2018-09-27 | Novozymes A/S | Improved filamentous fungal host cells |
US11208639B2 (en) | 2017-03-31 | 2021-12-28 | Novozymes A/S | Polypeptides having DNase activity |
EP3601549A1 (en) | 2017-03-31 | 2020-02-05 | Novozymes A/S | Polypeptides having dnase activity |
WO2018178061A1 (en) | 2017-03-31 | 2018-10-04 | Novozymes A/S | Polypeptides having rnase activity |
US20200109388A1 (en) | 2017-04-03 | 2020-04-09 | Novozymes A/S | Recovery Process |
CN110651029B (zh) | 2017-04-04 | 2022-02-15 | 诺维信公司 | 糖基水解酶 |
US20200109352A1 (en) | 2017-04-04 | 2020-04-09 | Novozymes A/S | Polypeptide compositions and uses thereof |
US20200109354A1 (en) | 2017-04-04 | 2020-04-09 | Novozymes A/S | Polypeptides |
CN110651048A (zh) | 2017-04-11 | 2020-01-03 | 诺维信公司 | 葡糖淀粉酶变体和编码它们的多核苷酸 |
CA3061133A1 (en) | 2017-04-27 | 2018-11-01 | Codexis, Inc. | Ketoreductase polypeptides and polynucleotides |
CN110651038A (zh) | 2017-05-05 | 2020-01-03 | 诺维信公司 | 包含脂肪酶和亚硫酸盐的组合物 |
EP3401385A1 (en) | 2017-05-08 | 2018-11-14 | Henkel AG & Co. KGaA | Detergent composition comprising polypeptide comprising carbohydrate-binding domain |
US20210130743A1 (en) | 2017-05-08 | 2021-05-06 | Novozymes A/S | Mannanase Variants and Polynucleotides Encoding Same |
EP3622064A1 (en) | 2017-05-08 | 2020-03-18 | Novozymes A/S | Mannanase variants and polynucleotides encoding same |
WO2018206535A1 (en) | 2017-05-08 | 2018-11-15 | Novozymes A/S | Carbohydrate-binding domain and polynucleotides encoding the same |
JP7401902B2 (ja) | 2017-05-08 | 2023-12-20 | コデクシス, インコーポレイテッド | 遺伝子操作されたリガーゼバリアント |
WO2018231462A1 (en) | 2017-06-14 | 2018-12-20 | Codexis, Inc. | Engineered transaminase polypeptides for industrial biocatalysis |
JP7282693B2 (ja) | 2017-06-20 | 2023-05-29 | アルブミディクス リミティド | 改良されたタンパク質発現株 |
WO2018234465A1 (en) | 2017-06-22 | 2018-12-27 | Novozymes A/S | XYLANASE VARIANTS AND POLYNUCLEOTIDES ENCODING THE SAME |
WO2019005337A1 (en) | 2017-06-27 | 2019-01-03 | Codexis, Inc. | PENICILLIN G ACYLASES |
CA3065246A1 (en) | 2017-06-28 | 2019-01-03 | Novozymes A/S | Polypeptides having trehalase activity and polynucleotides encoding same |
CN111032863A (zh) | 2017-06-30 | 2020-04-17 | 科德克希思公司 | T7 rna聚合酶变体 |
CA3066767A1 (en) | 2017-06-30 | 2019-01-03 | Codexis, Inc. | T7 rna polymerase variants |
CN110770283A (zh) | 2017-07-24 | 2020-02-07 | 诺维信公司 | 湿磨中的gh5和gh30 |
AU2018307960B2 (en) | 2017-07-28 | 2023-03-23 | The Trustees Of Princeton University | Fusion tags for recombinant protein expression |
US10081800B1 (en) | 2017-08-03 | 2018-09-25 | Fornia Biosolutions, Inc. | Lactonase enzymes and methods of using same |
US11220679B2 (en) | 2017-08-08 | 2022-01-11 | Novozymes A/S | Polypeptides having trehalase activity |
US20210130744A1 (en) | 2017-08-24 | 2021-05-06 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Detergent composition comprising xanthan lyase variants ii |
CA3070749A1 (en) | 2017-08-24 | 2019-02-28 | Novozymes A/S | Gh9 endoglucanase variants and polynucleotides encoding same |
US11359188B2 (en) | 2017-08-24 | 2022-06-14 | Novozymes A/S | Xanthan lyase variants and polynucleotides encoding same |
WO2019038059A1 (en) | 2017-08-24 | 2019-02-28 | Henkel Ag & Co. Kgaa | DETERGENT COMPOSITIONS COMPRISING GH9 ENDOGLUCANASE VARIANTS II |
EP3675646A1 (en) | 2017-09-01 | 2020-07-08 | Novozymes A/S | Animal feed additives comprising polypeptide having protease activity and uses thereof |
WO2019046703A1 (en) | 2017-09-01 | 2019-03-07 | Novozymes A/S | METHODS OF ENHANCING GENOME EDITION IN FUNGI |
AR112955A1 (es) | 2017-09-01 | 2020-01-08 | Novozymes As | Aditivos de alimento animal que comprenden polipéptidos que tienen actividad proteasa y usos de los mismos |
US11447714B2 (en) | 2017-09-26 | 2022-09-20 | Bunge Global Innovation, Llc | Enzymatic removal of chlorophyll substrates from triacylglycerol-based oils |
EP3688150A1 (en) | 2017-09-27 | 2020-08-05 | Novozymes A/S | Lipase variants and microcapsule compositions comprising such lipase variants |
CA3072932C (en) | 2017-09-27 | 2023-09-26 | The Procter & Gamble Company | Detergent compositions comprising lipases |
BR112020006621A2 (pt) | 2017-10-02 | 2020-10-06 | Novozymes A/S | polipeptídeos com atividade de mananase e polinucleotídeos codificando os mesmos |
CN111417725A (zh) | 2017-10-02 | 2020-07-14 | 诺维信公司 | 具有甘露聚糖酶活性的多肽和编码它们的多核苷酸 |
ES2910120T3 (es) | 2017-10-27 | 2022-05-11 | Procter & Gamble | Composiciones detergentes que comprenden variantes polipeptídicas |
MX2020004145A (es) | 2017-10-27 | 2020-08-03 | Novozymes As | Variantes de desoxirribonucleasa (dnasa). |
DE102017125560A1 (de) | 2017-11-01 | 2019-05-02 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Reinigungszusammensetzungen, die dispersine iii enthalten |
DE102017125558A1 (de) | 2017-11-01 | 2019-05-02 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Reinigungszusammensetzungen, die dispersine i enthalten |
DE102017125559A1 (de) | 2017-11-01 | 2019-05-02 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Reinigungszusammensetzungen, die dispersine ii enthalten |
EP3706780A4 (en) | 2017-11-07 | 2021-12-22 | Codexis, Inc. | TRANSGLUTAMINASE VARIANTS |
EP3707252A1 (en) | 2017-11-10 | 2020-09-16 | Novozymes A/S | Temperature-sensitive cas9 protein |
WO2019096903A1 (en) | 2017-11-20 | 2019-05-23 | Novozymes A/S | New galactanases (ec 3.2.1.89) for use in soy processing |
EP3485734A1 (en) | 2017-11-21 | 2019-05-22 | Technische Universität München | Method for preparing food products comprising rye |
EP3488854A1 (en) | 2017-11-22 | 2019-05-29 | Technische Universität München | Method for preparing xyloglucan-oligosaccharides |
US11725197B2 (en) | 2017-12-04 | 2023-08-15 | Novozymes A/S | Lipase variants and polynucleotides encoding same |
US11015180B2 (en) | 2017-12-13 | 2021-05-25 | Codexis, Inc. | Carboxyesterase polypeptides for amide coupling |
US11408009B2 (en) | 2017-12-18 | 2022-08-09 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Host cell expression of 4-hydroxyphenylacetaldehyde synthase for production of salidroside, icariside D2, and precursors |
EP3502242A1 (en) | 2017-12-20 | 2019-06-26 | Technische Universität München | New xylanase with improved thermostability and increased enzyme activity on arabinoxylan |
US20210017544A1 (en) | 2017-12-22 | 2021-01-21 | Novozymes A/S | Counter-Selection by Inhibition of Conditionally Essential Genes |
CN111868239A (zh) | 2018-02-08 | 2020-10-30 | 诺维信公司 | 脂肪酶、脂肪酶变体及其组合物 |
EP3749759A1 (en) | 2018-02-08 | 2020-12-16 | Novozymes A/S | Lipase variants and compositions thereof |
US20230272353A1 (en) | 2018-02-23 | 2023-08-31 | Novozymes A/S | Long Non-Coding RNA-Expression In Fungal Hosts |
EP3530744A1 (en) | 2018-02-23 | 2019-08-28 | University of Limerick | A polypeptide having xylanase and/or cellulase activity |
CN112004931A (zh) | 2018-03-26 | 2020-11-27 | 诺维信公司 | 真菌伴侣蛋白 |
EP3775190A1 (en) | 2018-03-29 | 2021-02-17 | Novozymes A/S | Mannanase variants and polynucleotides encoding same |
CA3096900A1 (en) | 2018-04-09 | 2019-10-17 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha-amylase activity and polynucleotides encoding same |
CN112272701B (zh) | 2018-04-19 | 2024-05-14 | 诺维信公司 | 稳定化的纤维素酶变体 |
WO2019201785A1 (en) | 2018-04-19 | 2019-10-24 | Novozymes A/S | Stabilized cellulase variants |
US20230250406A1 (en) | 2018-05-18 | 2023-08-10 | Dsm Ip Assets B.V. | Mutant lipase and use thereof |
CA3100611A1 (en) | 2018-05-18 | 2019-11-21 | Dsm Ip Assets B.V. | Mutant lipase and use thereof |
CA3102968A1 (en) | 2018-06-12 | 2019-12-19 | Codexis, Inc. | Engineered tyrosine ammonia lyase |
WO2020002575A1 (en) | 2018-06-28 | 2020-01-02 | Novozymes A/S | Polypeptides having pectin lyase activity and polynucleotides encoding same |
KR20210031933A (ko) | 2018-07-09 | 2021-03-23 | 코덱시스, 인코포레이티드 | 조작된 포스포펜토뮤타제 변이체 효소 |
US11466259B2 (en) | 2018-07-09 | 2022-10-11 | Codexis, Inc. | Engineered galactose oxidase variant enzymes |
MX2021000326A (es) | 2018-07-09 | 2021-03-25 | Codexis Inc | Desoxirribosa-fosfato aldolasas modificadas geneticamente. |
AU2019300838A1 (en) | 2018-07-09 | 2021-01-07 | Codexis, Inc. | Engineered pantothenate kinase variant enzymes |
CA3103718A1 (en) | 2018-07-09 | 2020-01-16 | Codexis, Inc. | Engineered purine nucleoside phosphorylase variant enzymes |
WO2020012266A1 (en) | 2018-07-12 | 2020-01-16 | Novartis Ag | Biocatalytic synthesis of olodanrigan (ema401) from 3-(2-(benzyloxy)-3-methoxyphenyl)propenoic acid with phenylalanine ammonia lyase |
EP3820833A4 (en) | 2018-07-12 | 2022-08-03 | Codexis, Inc. | MODIFIED AMMONIA-LYASE PHENYLALANINE POLYPEPTIDES |
WO2020028039A1 (en) | 2018-07-30 | 2020-02-06 | Codexis, Inc. | Engineered glycosyltransferases and steviol glycoside glucosylation methods |
WO2020025357A1 (en) | 2018-08-02 | 2020-02-06 | Novozymes A/S | Preparation of combinatorial libraries of dna constructs using introns |
WO2020043836A1 (en) | 2018-08-31 | 2020-03-05 | Novozymes A/S | Polypeptides having protease activity and polynucleotides encoding same |
US11993762B2 (en) | 2018-10-03 | 2024-05-28 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha-mannan degrading activity and polynucleotides encoding same |
US11434475B2 (en) | 2018-10-09 | 2022-09-06 | Novozymes A/S | Modified filamentous fungal host cell for encoding a secreted polypetide of interest |
SG11202103639SA (en) | 2018-10-29 | 2021-05-28 | Codexis Inc | Engineered dna polymerase variants |
EP3874051A1 (en) | 2018-10-31 | 2021-09-08 | Novozymes A/S | Genome editing by guided endonuclease and single-stranded oligonucleotide |
CN113166211A (zh) | 2018-11-28 | 2021-07-23 | 诺维信公司 | 改善的丝状真菌宿主细胞 |
JP2022513649A (ja) | 2018-11-28 | 2022-02-09 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | 修飾された糸状菌宿主細胞 |
US20220145339A1 (en) | 2018-12-10 | 2022-05-12 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Method for preparation of primary amine compounds |
EP3894565A1 (en) | 2018-12-12 | 2021-10-20 | Novozymes A/S | Methods for increasing the productivity of a filamentous fungal cell in the production of a polypeptide |
US20220025348A1 (en) | 2018-12-12 | 2022-01-27 | Novozymes A/S | Polypeptides Having Xylanase Activity And Polynucleotides Encoding Same |
SG11202105668PA (en) | 2018-12-14 | 2021-06-29 | Codexis Inc | Engineered tyrosine ammonia lyase |
CA3123598A1 (en) | 2018-12-20 | 2020-06-25 | Codexis, Inc. | Human alpha-galactosidase variants |
EP3898962A2 (en) | 2018-12-21 | 2021-10-27 | Novozymes A/S | Polypeptides having peptidoglycan degrading activity and polynucleotides encoding same |
FI3898985T3 (fi) | 2018-12-21 | 2023-05-05 | Novozymes As | Proteiinien tandemekspressio |
CA3126184A1 (en) | 2019-01-11 | 2020-07-16 | River Stone Biotech Aps | Recombinant host cells with improved production of l-dopa, dopamine, (s)-norcoclaurine or derivatives thereof |
WO2020161354A1 (en) | 2019-02-08 | 2020-08-13 | Pili | Recombinant host cells to produce anthraquinone derivatives |
WO2020173817A1 (en) | 2019-02-28 | 2020-09-03 | Novozymes A/S | Calcite binding proteins |
CN113784990A (zh) | 2019-03-08 | 2021-12-10 | 丹尼斯科美国公司 | 融合多肽 |
WO2020187883A1 (en) | 2019-03-18 | 2020-09-24 | Novozymes A/S | Polypeptides having pullulanase activity suitable for use in liquefaction |
EP3737751A1 (en) | 2019-03-21 | 2020-11-18 | Fornia BioSolutions, Inc. | Additional phytase variants and methods |
CN113646076A (zh) | 2019-03-27 | 2021-11-12 | 邦吉全球创新有限责任公司 | 用于从基于三酰基甘油的油中去除叶绿素衍生物的二氧化硅吸附剂处理 |
WO2020198731A2 (en) | 2019-03-28 | 2020-10-01 | Danisco Us Inc | Engineered antibodies |
US20220169953A1 (en) | 2019-04-03 | 2022-06-02 | Novozymes A/S | Polypeptides having beta-glucanase activity, polynucleotides encoding same and uses thereof in cleaning and detergent compositions |
WO2020207944A1 (en) | 2019-04-10 | 2020-10-15 | Novozymes A/S | Polypeptide variants |
MX2021012289A (es) | 2019-04-12 | 2021-11-12 | Novozymes As | Variantes de glucosido hidrolasa estabilizadas. |
EP3969576A1 (en) | 2019-05-15 | 2022-03-23 | Novozymes A/S | Temperature-sensitive rna-guided endonuclease |
EP3976769A1 (en) | 2019-05-27 | 2022-04-06 | Octarine Bio IVS | Genetically modified host cells producing glycosylated cannabinoids |
US20220251528A1 (en) | 2019-06-24 | 2022-08-11 | Novozymes A/S | Alpha-Amylase Variants |
EP3986996A1 (en) | 2019-06-24 | 2022-04-27 | The Procter & Gamble Company | Cleaning compositions comprising amylase variants |
WO2020260061A1 (en) | 2019-06-25 | 2020-12-30 | Novozymes A/S | Counter-selection by inhibition of conditionally essential genes |
WO2021001400A1 (en) | 2019-07-02 | 2021-01-07 | Novozymes A/S | Lipase variants and compositions thereof |
WO2021013464A1 (en) | 2019-07-25 | 2021-01-28 | Novozymes A/S | Filamentous fungal expression system |
WO2021018783A1 (en) | 2019-07-26 | 2021-02-04 | Novozymes A/S | Modified filamentous fungal host cell |
JP2022545718A (ja) | 2019-08-30 | 2022-10-28 | コデクシス, インコーポレイテッド | 操作されたリパーゼ改変体 |
WO2021048172A2 (en) | 2019-09-09 | 2021-03-18 | River Stone Biotech Aps | Delivery vehicle for in situ delivering of pharmaceutical agents |
MX2022002834A (es) | 2019-09-16 | 2022-04-06 | Novozymes As | Polipeptidos con actividad beta-glucanasa y polinucleotidos que los codifican. |
WO2021062435A1 (en) | 2019-09-27 | 2021-04-01 | The Procter & Gamble Company | Consumer product compositions comprising fatty acid photodecarboxyalases |
WO2021064068A1 (en) | 2019-10-03 | 2021-04-08 | Novozymes A/S | Polypeptides comprising at least two carbohydrate binding domains |
CA3155372A1 (en) | 2019-10-28 | 2021-05-06 | Sharief Barends | Microbial host cells for the production of heterologous cyanuric acid hydrolases and biuret hydrolases |
US20210139879A1 (en) | 2019-10-31 | 2021-05-13 | The Procter & Gamble Company | Consumer Product Compositions Comprising P450 Fatty Acid Decarboxylases |
JP2023506305A (ja) | 2019-12-19 | 2023-02-15 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | キシラナーゼバリアント及びそれをコードするポリヌクレオチド |
EP4077679A4 (en) | 2019-12-20 | 2024-04-24 | Codexis Inc | MODIFIED ACID ALPHA-GLUCOSIDASE VARIANTS |
WO2021123307A2 (en) | 2019-12-20 | 2021-06-24 | Novozymes A/S | Polypeptides having proteolytic activity and use thereof |
CN115052477A (zh) | 2020-01-24 | 2022-09-13 | 诺维信公司 | 在多肽生产中具有提高的生产力的丝状真菌细胞的突变体 |
JP2023511739A (ja) | 2020-01-31 | 2023-03-22 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | マンナナーゼバリアント及びそれをコードするポリヌクレオチド |
EP4097226A1 (en) | 2020-01-31 | 2022-12-07 | Novozymes A/S | Mannanase variants and polynucleotides encoding same |
EP4103709A2 (en) | 2020-02-10 | 2022-12-21 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha-amylase activity and polynucleotides encoding same |
US20230235367A1 (en) | 2020-02-10 | 2023-07-27 | Novozymes A/S | Process for producing ethanol from raw starch using alpha-amylase variants |
US20230142991A1 (en) | 2020-02-10 | 2023-05-11 | Novozymes A/S | Alpha-amylase variants and polynucleotides encoding same |
US20230220366A1 (en) | 2020-02-26 | 2023-07-13 | Novozymes A/S | Polypeptide Variants |
EP4118195A1 (en) | 2020-03-12 | 2023-01-18 | Novozymes A/S | Crispr-aid using catalytically inactive rna-guided endonuclease |
WO2021202473A2 (en) | 2020-03-30 | 2021-10-07 | Danisco Us Inc | Engineered antibodies |
EP3892708A1 (en) | 2020-04-06 | 2021-10-13 | Henkel AG & Co. KGaA | Cleaning compositions comprising dispersin variants |
JP2023520312A (ja) | 2020-04-08 | 2023-05-17 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | 炭水化物結合モジュールバリアント |
EP4133064A2 (en) | 2020-04-10 | 2023-02-15 | Codexis, Inc. | Engineered transaminase polypeptides |
CA3175523A1 (en) | 2020-04-13 | 2021-10-21 | Antti Virtanen | Methods, complexes and kits for detecting or determining an amount of a .beta.-coronavirus antibody in a sample |
WO2021214059A1 (en) | 2020-04-21 | 2021-10-28 | Novozymes A/S | Cleaning compositions comprising polypeptides having fructan degrading activity |
US20230183759A1 (en) | 2020-05-20 | 2023-06-15 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Cells and methods for producing methyl ketones |
WO2022031804A1 (en) | 2020-08-04 | 2022-02-10 | Abbott Laboratories | Improved methods and kits for detecting sars-cov-2 protein in a sample |
WO2022034211A1 (en) | 2020-08-13 | 2022-02-17 | Novozymes A/S | Phytase variants and polynucleotides encoding same |
MX2023001888A (es) | 2020-08-25 | 2023-03-10 | Novozymes As | Variantes de una xiloglucanasa de la familia 44. |
EP4204548A1 (en) | 2020-08-28 | 2023-07-05 | Novozymes A/S | Polyester degrading protease variants |
JP2023539632A (ja) | 2020-08-28 | 2023-09-15 | コデクシス, インコーポレイテッド | 操作されたプロテアーゼバリアント |
BR112023003643A2 (pt) | 2020-08-28 | 2023-03-28 | Codexis Inc | Amilase recombinante, composição, sequência de polinucleotídeo recombinante, vetor de expressão, célula hospedeira, métodos para produzir uma amilase recombinante e para tratar e/ou prevenir os sintomas de insuficiência pancreática, composição farmacêutica para o tratamento de insuficiência pancreática, e, uso |
US20220112446A1 (en) | 2020-10-09 | 2022-04-14 | The Procter & Gamble Company | Cleaning composition comprising an alpha-dioxygenase |
EP4229189A1 (en) | 2020-10-13 | 2023-08-23 | Novozymes A/S | Glycosyltransferase variants for improved protein production |
US20240035005A1 (en) | 2020-10-29 | 2024-02-01 | Novozymes A/S | Lipase variants and compositions comprising such lipase variants |
MX2023004938A (es) | 2020-11-02 | 2023-05-17 | Novozymes As | Variantes de glucoamilasa y polinucleotidos que codifican las mismas. |
WO2022090555A1 (en) | 2020-11-02 | 2022-05-05 | Novozymes A/S | Leader peptides and polynucleotides encoding the same |
EP4026900A3 (en) | 2020-12-17 | 2022-10-05 | Fornia BioSolutions, Inc. | Xylanase variants and methods |
US11898174B2 (en) | 2020-12-18 | 2024-02-13 | Codexis, Inc. | Engineered uridine phosphorylase variant enzymes |
EP4023757A1 (en) | 2020-12-29 | 2022-07-06 | The Protein Brewery B.V. | Methods for generating selection marker-free transformants of heterokaryotic organisms |
WO2022147147A1 (en) | 2020-12-30 | 2022-07-07 | Abbott Laboratories | Methods for determining sars-cov-2 antigen and anti-sars-cov-2 antibody in a sample |
WO2022175440A1 (en) | 2021-02-18 | 2022-08-25 | Novozymes A/S | Inactive heme polypeptides |
EP4305146A1 (en) | 2021-03-12 | 2024-01-17 | Novozymes A/S | Polypeptide variants |
EP4060036A1 (en) | 2021-03-15 | 2022-09-21 | Novozymes A/S | Polypeptide variants |
WO2022197512A1 (en) | 2021-03-15 | 2022-09-22 | The Procter & Gamble Company | Cleaning compositions containing polypeptide variants |
US20240060061A1 (en) | 2021-03-15 | 2024-02-22 | Novozymes A/S | Dnase variants |
CN117120599A (zh) | 2021-04-02 | 2023-11-24 | 科德克希思公司 | 工程化鸟苷酸激酶变体酶 |
CA3214972A1 (en) | 2021-04-02 | 2022-10-06 | Codexis, Inc. | Engineered adenylate kinase variant enzymes |
CN117157397A (zh) | 2021-04-02 | 2023-12-01 | 科德克希思公司 | 工程化环状GMP-AMP合酶(cGAS)变体酶 |
CN117222735A (zh) | 2021-04-02 | 2023-12-12 | 科德克希思公司 | 工程化乙酸激酶变体酶 |
AU2022270929A1 (en) | 2021-05-07 | 2023-10-19 | River Stone Biotech Aps | Glycosylated opioids |
EP4347813A1 (en) | 2021-05-27 | 2024-04-10 | Novozymes A/S | Transcriptional regulators and polynucleotides encoding the same |
WO2022268885A1 (en) | 2021-06-23 | 2022-12-29 | Novozymes A/S | Alpha-amylase polypeptides |
WO2023006699A1 (en) | 2021-07-30 | 2023-02-02 | Københavns Universitet | Cells and method for producing isoprenoid molecules with canonical and non-canonical structures |
US20230089159A1 (en) | 2021-09-16 | 2023-03-23 | The Procter & Gamble Company | Cleaning composition comprising an engineered fatty acid alpha-dioxygenase |
WO2024015953A1 (en) | 2022-07-15 | 2024-01-18 | Danisco Us Inc. | Methods for producing monoclonal antibodies |
WO2024100063A1 (en) | 2022-11-08 | 2024-05-16 | River Stone Biotech Aps | Genetically modified benzylisoquinoline alkaloid-producing host cells with modified efflux transporter gene expression |
WO2024108175A2 (en) | 2022-11-17 | 2024-05-23 | Recombia Biosciences, Inc. | Constructs and methods for biosynthesis of gastrodin |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3937654A (en) * | 1970-05-14 | 1976-02-10 | Ranks Hovis Mcdougall Limited | Production of edible protein substances |
IE35176B1 (en) * | 1970-05-14 | 1975-11-26 | Ranks Hovis Mcdougall Ltd | Improvements in the production of edible protein containing substances |
US4163692A (en) * | 1977-04-25 | 1979-08-07 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Low phosphate growth of fungal mycelia |
US5364770A (en) * | 1985-08-29 | 1994-11-15 | Genencor International Inc. | Heterologous polypeptides expressed in aspergillus |
US4935349A (en) * | 1986-01-17 | 1990-06-19 | Zymogenetics, Inc. | Expression of higher eucaryotic genes in aspergillus |
US5070020A (en) * | 1988-05-09 | 1991-12-03 | Eli Lilly And Company | Recombinant dna expression vectors and dna compounds that encode deacetoxycephalosporin c synthetase |
GB8904762D0 (en) * | 1989-03-02 | 1989-04-12 | Glaxo Group Ltd | Biological process |
GB9011347D0 (en) * | 1990-05-21 | 1990-07-11 | Ici Plc | Production of a proteinaceous composition |
CA2069147A1 (en) * | 1991-05-22 | 1992-11-23 | Kazuaki Kitano | Dna and its use |
FR2681076B1 (fr) * | 1991-09-06 | 1994-11-18 | Sanofi Elf | Adn recombinant codant pour une proteine a activite endochitinase. |
US5360901A (en) * | 1992-03-04 | 1994-11-01 | Genencor International, Inc. | Gene sequence encoding Aspergillus niger catalase-R |
-
1995
- 1995-06-15 CN CN95193875A patent/CN1151762A/zh active Pending
- 1995-06-15 AU AU27058/95A patent/AU2705895A/en not_active Abandoned
- 1995-06-15 DE DE69534185T patent/DE69534185T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-15 WO PCT/US1995/007743 patent/WO1996000787A1/en active IP Right Grant
- 1995-06-15 EP EP05103695A patent/EP1559776A3/en not_active Withdrawn
- 1995-06-15 EP EP95922334A patent/EP0777737B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-15 AT AT95922334T patent/ATE294871T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-06-15 CN CN200710096070A patent/CN101659926A/zh active Pending
- 1995-06-15 JP JP50326796A patent/JP3167729B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-12-27 FI FI965220A patent/FI119437B/fi not_active IP Right Cessation
-
1997
- 1997-08-29 US US08/921,426 patent/US5837847A/en not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-11-16 JP JP2000349977A patent/JP3511005B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FI965220A0 (fi) | 1996-12-27 |
AU2705895A (en) | 1996-01-25 |
JP3511005B2 (ja) | 2004-03-29 |
EP0777737B1 (en) | 2005-05-04 |
US5837847A (en) | 1998-11-17 |
EP1559776A3 (en) | 2006-01-11 |
FI965220A (fi) | 1997-02-25 |
DE69534185T2 (de) | 2006-02-23 |
JPH10500024A (ja) | 1998-01-06 |
JP3167729B2 (ja) | 2001-05-21 |
EP1559776A2 (en) | 2005-08-03 |
CN101659926A (zh) | 2010-03-03 |
CN1151762A (zh) | 1997-06-11 |
ATE294871T1 (de) | 2005-05-15 |
JP2001169791A (ja) | 2001-06-26 |
DE69534185D1 (de) | 2005-06-09 |
WO1996000787A1 (en) | 1996-01-11 |
EP0777737A1 (en) | 1997-06-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI119437B (fi) | Ei-toksinen, ei-toksigeeninen, ei-patogeeninen Fusarium-ekspressiojärjestelmä ja siinä käytettäviä promoottereita ja terminaattoreita | |
JP5264825B2 (ja) | 菌類細胞中で遺伝子を発現させるためのプロモーター | |
CA1341532C (en) | Heterologous polypeptides expressed in filamentous fungi, processes for making same, and vectors for making same | |
FI117388B (fi) | Valintamerkkigeenittömät hiivakannat, menetelmä niiden valmistamiseksi ja näiden kantojen käyttö | |
US5602004A (en) | Thermophilic fungal expression system | |
US6060305A (en) | Non-toxic, non-toxigenic, non-pathogenic Fusarium expression system | |
WO1996034962A1 (en) | Scytalidium catalase gene | |
WO1998020136A1 (en) | Glucose oxidases | |
WO2001068864A1 (en) | Fungal transcriptional activator useful in methods for producing polypeptides | |
JP4563585B2 (ja) | ポリペプチドの生成方法において有用な菌類転写活性化因子 | |
US5667990A (en) | Aspergillus expression system | |
JP2002515252A (ja) | 糸状菌変異体細胞においてポリペプチドを生産するための方法 | |
JP2002535990A (ja) | 真菌細胞においてポリペプチドを生産する方法 | |
US5770371A (en) | Modification of cryptic splice sites in heterologous genes expressed in fungi | |
AU690617B2 (en) | (Aspergillus foetidus) expression system | |
JP4860820B2 (ja) | シクロヘキサデプシペプチド欠損細胞におけるポリペプチドの産生方法 | |
JP2000513588A (ja) | Dna配列、これらのdnaの発現、該dnaによってコードされる好熱性ラッカーゼならびにその使用 | |
JP2000513223A (ja) | 真菌中で発現される異種遺伝子中の陰性スプライス部位の変更 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
FG | Patent granted |
Ref document number: 119437 Country of ref document: FI |
|
MA | Patent expired |