FI105155B - Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten sappihappojohdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten sappihappojohdannaisten valmistamiseksi Download PDF

Info

Publication number
FI105155B
FI105155B FI904497A FI904497A FI105155B FI 105155 B FI105155 B FI 105155B FI 904497 A FI904497 A FI 904497A FI 904497 A FI904497 A FI 904497A FI 105155 B FI105155 B FI 105155B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
group
mmol
bile acid
mol
solution
Prior art date
Application number
FI904497A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI904497A0 (fi
Inventor
Guenther Wess
Werner Kramer
Original Assignee
Hoechst Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoechst Ag filed Critical Hoechst Ag
Publication of FI904497A0 publication Critical patent/FI904497A0/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI105155B publication Critical patent/FI105155B/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/78—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms, with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/81—Amides; Imides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/26—Radicals substituted by halogen atoms or nitro radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/54—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/56—Amides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J17/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, having an oxygen-containing hetero ring not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J31/00—Normal steroids containing one or more sulfur atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J31/006—Normal steroids containing one or more sulfur atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J31/003
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0005—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring the nitrogen atom being directly linked to the cyclopenta(a)hydro phenanthrene skeleton
    • C07J41/0011—Unsubstituted amino radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0005—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring the nitrogen atom being directly linked to the cyclopenta(a)hydro phenanthrene skeleton
    • C07J41/0027—Azides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/0055—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the 17-beta position being substituted by an uninterrupted chain of at least three carbon atoms which may or may not be branched, e.g. cholane or cholestane derivatives, optionally cyclised, e.g. 17-beta-phenyl or 17-beta-furyl derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/0055—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the 17-beta position being substituted by an uninterrupted chain of at least three carbon atoms which may or may not be branched, e.g. cholane or cholestane derivatives, optionally cyclised, e.g. 17-beta-phenyl or 17-beta-furyl derivatives
    • C07J41/0061—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the 17-beta position being substituted by an uninterrupted chain of at least three carbon atoms which may or may not be branched, e.g. cholane or cholestane derivatives, optionally cyclised, e.g. 17-beta-phenyl or 17-beta-furyl derivatives one of the carbon atoms being part of an amide group
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/0088—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 containing unsubstituted amino radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J43/00—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C07J43/003—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not condensed
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J51/00—Normal steroids with unmodified cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not provided for in groups C07J1/00 - C07J43/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
    • C07J9/005—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane containing a carboxylic function directly attached or attached by a chain containing only carbon atoms to the cyclopenta[a]hydrophenanthrene skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06026—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atom, i.e. Gly or Ala
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Vessels, Lead-In Wires, Accessory Apparatuses For Cathode-Ray Tubes (AREA)
  • Control Of Heat Treatment Processes (AREA)
  • Lubricants (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

1 105155
Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten sappihappojohdannaisten valmistamiseksi *
Keksintö koskee uusien terapeuttisesti käyttökel-• 5 poisten sappihappojohdannaisten valmistusta, joiden kaava on W - X - G (I) 10 jotka koostuvat modifioidusta sappihappotähteestä G:
R(8) O
R(7)J
15 G
R(3) R(6) R(4) H R(5) 20 jossa R(3) - R(8) ovat samanlaisia tai erilaisia ja niillä on seuraavat merkitykset: sidos ryhmään W - X-, jolloin yhteensä enintään kaksi W - X-ryhmää voivat olla sitotuneina, R (3) ja R (4) , R (5) ja R(6), ja R(7) ja R(8) kul-25 loinkin yhdessä merkitsevät karbonyyliryhmän happea tai ne merkitsevät radikaalia
O O O
H II il H, -SL, -NHL, -NL2, -S-C-L, -NH-C-L, -O-P-OL,
3 0 OL
’· O
II
-O-S-OL, -L, joissa
S
35 L on H, tyydyttynyt tai tyydyttymätön, haarautunut tai 2 105155 haarautumaton alkyyliryhmä, jossa on 1 - 10 hiiliatomia, sykloalkyyli, jossa on 3 - 8 hiiliatomia, fenyyliryhmä, joka on substituoimaton tai jossa on 1 - 3 substituenttia, jotka on valittu ryhmästä F, Cl, Br, (Cx_4)-alkyyli ja 5 (Cx_4)-alkoksi, bentsyyliryhmä, joka on substituoimaton tai jossa on 1 - 3 substituenttia, jotka on valittu ryhmästä F, Cl, Br, (Cx_4) —alkyyli ja (Cx_4)-alkoksi; ja Y on -OH, -ONa, -OMe tai -NHCH2CH2S03H; sitovasta ryhmästä X, joka on suora sidos tai väliryhmä X: 10
0 0 O
Il II II
- S - S - S - N - C - N -,
Il I I
o R (1) R (1)
15 O 0 Q O
H II II II
-O-P-O, -P-O-, -O-P-N-, - P - N - li i I il OR(2) OR(2) OR (2) R(1) OR(2) R(l)
O
II
20 - N - P - N -,
I l I
R(1) OR(2) R (1)
O O
H II
-S-S-, -O-S-O-, - S - N -
11 II I
_ -·25 OO R (1)
O S
Il H
-N-C-N-, -N-C-N-, i(l) R (1) R (1) RU) 30 -CH2-CH2-, -CH=CH-, -C=C-,
O
II
- N - C (CH2) n - , 35 R (1) 3 105155 (Q) r li - O - (CH2) n -, - N - (CH2) n -, - S - (CH2) n -, R(l) 5 0 0
II II
- N - S - (CH2) n -, - C - N - (CH2) n - , R(2) R(2) 10 ? - S - N - (CH2) n 0 - , -0-( V o - , ft R(2) )=( - o -/oV 0 - , 15 o ,-.
- N - C - (CH2) n - 0- , - N - / )-0-, R (2 ) R (1) '-' 20 - N -/ O V O - , R(1)Nv-' 25 0 y-\ 9 » // \ n - N - S - (CH2) n - 0-, - ο -Γ y-C-N, R (2) 0 \=J R (2) 30 0 0
il II
-N-C-M-C-N-I I
* R (2) R{2) 35 0
II
- N - C - (CH2) n -0- (CH2)„ - 0 - , R (2) 4 105155 0 0 0 0 II |l II |l - N-C-M-C-N- (CHa)n-0- , -N-C-M-C-0-(CHj)n-0- , R (2) R (2) R (2) 5
joissa O
II
R(1) on H, (C^g)-alkyyli; ryhmä R(2)-C, fenyyli, bentsyyli, joka on substituoimaton tai jossa on 1 - 3 substituenttia, jotka on valittu ryhmästä F, Cl, Br, (C:.4)-alkyyli ja 10 (^_4) -alkoksi ; R(2) on H, (C^g)-alkyyli, fenyyli, bentsyyli, joka on substituoimaton tai jossa on 1 - 3 substituenttia, jotka on valittu ryhmästä F, Cl, Br, (C1.i) -alkyyli ja (C^J-alkoksi; m = 0 - 6 ; 15 n = 1 - 16; p = 1, 2 tai 3; r = 0 - 2; ja M = - (CH2) m- , - (C=C) p-, -C*C-, ΓθΤ tai i O ; 20 ja vaikuttavan aineen osasta W, joka on klorambusiili n—P y- (ch2)3coci ci^n/ \=y 25 HMG-CoA-reduktaasi-inhibiittori tai prolyylihydroksylaasi-inhibiittori.
Lääkeaineiden anto suun kautta on yleisin ja mukavin lääkeaineiden antotapa. Jotta kuitenkin vaikutusaine 30 pääsisi verisuoneen, maha-suoli-seudussa on tapahduttava imeytymisprosessi. Sen jälkeen lääkeaine jakautuu kehoon spesifisiä ominaisuuksiaan vastaavasti. Lukuisat lääkeaineet imeytyvät kuitenkin vain hyvin huonosti tai käytännöllisesti katsoen eivät imeydy lainkaan, joten anto suun 35 kautta ei ole mahdollista.
5 105155
On tunnettua, että kytkemällä imeytymättömiä lääkeaineita vitamiiniin B12, näitä lääkeaineita saadaan menemään suoneen (Proceed. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 15 (1988) Controlled Release Society Inc., ks. PCT/AU 86/ 5 0299).
Tämän imeytymistien hyvin vähäisestä kapasiteetista vitamiini B12:n välityksellä johtuen vain hyvin vähäisiä lääkemääriä voidaan saada menemään kehoon.
Nyt on havaittu, että kaavan I mukaisia sappihap-10 pojohdannaisia voidaan käyttää vaikeasti imeytyvien tai imeytymättömien vaikutusaineiden tekemiseksi imeytyviksi, mikä mahdollistaa näiden aineiden anto suun kautta suurinkin annoksin. Sen lisäksi sappihappojohdannaisten avulla vaikutusaineisiin voidaan saada aikaan maksan 15 suhteen spesifinen vaikutus.
Erityisen edullisia ovat kaavan I mukaisia yhdisteitä ovat ne, joissa G on 20 R(81 ? R'7,4 „ r,3) —r(si 25 R(4) H R(5) jossa R(3) - R(8) ovat samanlaisia tai erilaisia ja joilla on seuraava merkitys: sidos ryhmään W-X-, jolloin siihen voi olla sitoutunut enintään kaksi W-X-yksikköä, 30 - '· 0 0
li II
H, -NHL, -NH-C-L, -0-P-0L, i
* OL
35 6 105155 joissa L merkitsee H:ta, tyydyttynyttä alkyylitähdettä, jossa on 1 - 6 C-atomia, joka voi olla sivuketjuinen tai sivuketjuton, fenyy-litähdettä, joka on substituentiton tai jossa voi olla 1 -5 3 substituenttia sarjasta F, Cl, Br, alkyyli tai (C^J alkoksi, Y on -OH, -ONa tai -NHCH2CH2-S03H; ja X on valittu ryhmästä 10 -N- R(l)
O O
Il M
-C-N- , - S - N -
I II I
15 R(1) O R(1)
0 II
-N-C- (CH2)n-0-, R (2) 20
O
II
-S-N-(CH2)P-0-,
Il I
O R (2)
25 O O O
Il II II
-N-C-M-C-N- (CHa)r-0- , - N - S - (CHJ-O- 1 I II.
R (2) R (2) R (2) O
joissa O
30 R(l) = H, (Cj.jg) alkyyli, R(2)-C, fenyyli, bentsyyi^ jQ·^ loin aromaattiset renkaat ovat substituentittomia t a i niissä on 1 - 3 substituenttia sarjasta F, Cl, Br, (C )al kyy li ja (C^) alkoksi, 7 105155 R(2) = H, (Ci.8) alkyyli, fenyyli, bentsyyli; kukin substi-tuentiton tai joissa on 1 - 3 substituenttia sarjasta F, Cl, Br, alkyyli tai alkoksi, jossa on 1 - 4 C-atomia, n = 1 - 16, ja 5 M = -CH2-CH2- -CH=CH-.
Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa siten, että a) kun X on suora sidos, saatetaan sappihapon G 3-, 10 7- tai 12-asemassa oleva -OH-ryhmä reagoimaan vaikuttavan aineen W karboksyylihapporyhmän aktivoidun muodon kanssa mahdollisesti lisäämällä emästä, tai b) kun X on suora sidos, saatetaan sappihapon G 3-, 7- tai 12-asemassa oleva, suojaryhmällä suojattu -OH-ryhmä 15 reagoimaan vaikuttavan aineen W karboksyylihapporyhmän aktivoidun muodon kanssa mahdollisesti lisäämällä emästä, tai c) kun X on väliryhmä, saatetaan vaikuttavan aineen W karboksyylihapporyhmä tai aktivoitu karboksyylihapporyh- 20 mä reagoimaan G-X-osan X-ryhmässä olevan terminaalisen aminoryhmän kanssa mahdollisesti lisäämällä emästä, tai d) kun X on väliryhmä, saatetaan sappihapon G 3-, 7- tai 12-asemassa oleva aminoryhmä reagoimaan X-W-osan X-ryhmässä olevan terminaalisen karboksyylihapporyhmän tai 25 aktivoidun karboksyylihapporyhmän kanssa mahdollisesti lisäämällä emästä.
G-X:ää ja W-X:ää valmistetaan joko tunnettujen, tai mikäli eivät ole tunnettuja, alla lähemmin selostettujen menetelmien mukaisesti.
30 Xs suora sidos * ’ Sappihappoja käytetään joko vapaassa muodossa tai suojatussa muodossa. W:n kanssa kytkeytymisen jälkeen seu-5 raa mahdollisesti suojaryhmien lohkaisu ja C-24-karboksyy- lifunktion muuttaminen kaavan I mukaiseksi johdannaiseksi.
35 Suojaryhmiksi soveltuvat alkoholiryhmien osalta tar- β 105155 koituksenmukaisesti asetyyli, tetrahydropyranyyli, t-bu-tyylidimetyylisilyyli tai bentsyyli. Suojaryhminä C-24-karboksyyliryhmän osalta kysymykseen tulevat erilaiset alkyyli- tai bentsyyliesterit, kuten myöskin esim. ortoes-5 terit.
Sappihappo reagoi esimerkiksi ensisijaisesti 3-aseman kohdalla, mutta myös 7-aseman kohdalla karboksyyli-happojen aktivoitujen muotojen, kuten happokloridien tai seka-anhydridien kanssa lisättäessä emäksiä, kuten trial-10 kyyliamiinia, pyridiiniä, mutta myös NaOH:a huoneenlämpö- tilassa sopivissa liuottimissa, kuten tetrahydrofuraanissa, metyleenikloridissa tai etikkaesterissä, mutta myöskin dimetyyliformamidissa (DMF) tai dimetoksietaanissa (DME).
Erilaiset isomeerit voidaan erottaa esim. kromato-15 grafisesti. Käyttämällä sopivia suojaryhmiä reaktio voi daan suorittaa selektiivisesti. Samalla tavalla vastaavat aminosappihapot voidaan muuttaa vastaaviksi amideiksi. Tällöinkin reaktio voidaan suorittaa suojattujen tai vapaiden sappihappojen kanssa.
20 Samalla tavalla muita kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan kytkeä tunnettujen standardimenetelmien mukaisesti .
X = väliryhmä
Edellä mainittuja menetelmiä käytetään myös W-X:n 25 kytkennän suorittamiseksi G:n kanssa tai W:n kytkennän X-G: n kanssa. Tarkoituksenmukaisesti käytetään tällöinkin sappihappo-osaa joko suojatussa tai suojaamattomassa muodossa .
Ensisijainen valmistusmenetelmä perustuu siihen, 30 että W:n reaktiokykyisten muotojen annetaan reagoida X-G:n reaktiokykyisten muotojen kanssa. Kytkeytymisen jälkeen suojaryhmien lohkeaminen ja C-24-karboksyylin muuttuminen ovat mahdollisesti yhteydessä keksinnön mukaisten yhdisteiden muodostamiseen.
35 Reaktiokykyisten sappihapporakenneosien X-G valmis tus on esitetty kaaviossa 1-4 sappihapon ollessa esimerkkinä .
Kaavio 1: X-G ilman suojaryhmää 9 105155 HO C02H ho ch3so2ci Ι/Λ^00215
5 pyridiini f H
HO H ’ 0H MäD' H '' OH
karboksyylihappo III
Ms= CH3SOo 10 1) H0(CHJ OH i n pyridiini ^2) MeOH, H+ H? w H0 15 /Αχβ ^3^201
MsO(CHo>nO^ 5—^'··OH
2 H H0(CH2)n0 H 'ΌΗ
v IV
20 NaK3
DMSO
V
25
HO
: v./-λ/· C02CH3 HO
AnlX : °°2ΟΗ3 30 '’® H2N_(a2)n°^^iN^^' » ' ^ z n h (¾
VI VII
10 105155
Kaavio 2: X-G ΤΗΡ:n ollessa suojaryhmä (THP = tet-rahydropyranyyli) pLvv- "Ly^002™3 ••QÄ" pyr > jTT«T* HO·' ' OH ,Τ^'ΟΗ
karboksvylihappometyyliesteri VIII
10 1) o,pprs
2) K2CO3, MeOH
IHP O ' . CO2CH3 15 Λγ ^ C02CH3 NEt3, CH2CI2
HO° H " CTHP
X IX
20 1.HO-(CH2)n-CH
NEt3
1 K2C03,>teDH
Y
THP 0 00,CH, ΐγν ^ -3 ΊΗΡ o 25 1. CH-jSO^l / 2 3
H0(CH2) 0,^T^'''0THP -JTJK H
XI XII
30 1. NaN3, DMSO
2. H2, Pd/C
Ψ ^ ? x^v^C02CH3 H2N-(H2C)n 0 j1 ' ' (y^yrp
XIII
Kaavio 3: X-G t-BuMe2Si:n ollessa suojaryhmä 105155 11 t-BuMe2SiO co^ 5 t-BuMe2SiOTf Γη^Ι) I I 'ui L· 2,6- lutidiini ΧΑΛΑ CH2C12 I Till fi
MsO- (CH-,) -0 „ πη -* Z/',, 2 n H CH MsO(CH2)nO H C6iMe2t-Bu
V XIV
1) NaN3, DMSO
10 j2> H2,M/C
t-BuMe2SiO
15 H2N-(CH2)rp ^SH^,,'0SiMs2t_Bu
XV
105155 12
Kaavio 4: X-G α-konfiguraation ollessa kohdalla 3-C
H0 CO2CH3 EXs^r^C02CK3 5 rr^ ~i-PrEt2N *
H 0 H OH
sappihappometyyliesteri XVIII
1) tai teksyyliboraani 10 2) Na0H/H2O2 HO \/ns/co2ch3 h9 \/vv^CC!2CH3
CH3CO2CI
Ksc/^0' ^φ^'0Η ^ HO ^0° H 09
XX
1. NaN3 XIX
DM SO
2. H2
20 Pc/C
v H? C02CK3 • * 25 rtnir
Η2Ν//^/Λ^01’ h f,OH
XXI
30 3-OH-ryhmien vaihto diolien H0(CH2)n0H avulla onnis tuu antamalla vastaavien mesylaattien reagoida vastaavien diolien kanssa, joita käytetään ensisijaisesti ylimäärin, lisäämällä emäksiä, kuten pyridiiniä, lutidiinia, mutta myös trietyyliamiinia.
13 105155
Yhdisteiden IV ja XI primaarisen OH-ryhmän annetaan reagoida edelleen standardimenetelmien mukaisesti· Siten esim. XI muutetaan hapettimien kanssa vastaavaksi karbok-syylihapoksi XVI [R(ll):n ollessa THP], ensisijaisesti 5 kromi-VI-reagensseilla tai erilaisilla kaliumpermanganaat- tisysteemeillä. Vastaavasti sopivia ovat myös muut suoja-ryhmät .
RM1) ? o HO-C- (H2C) n_i~0 OR (11) R(ll) = THP, bentsyyli, t-BuMe2Si, bentsyylioksikarbonyyli 15 (Z), asetyyli
Amiinit VII, XIII ja XV voidaan muuttaa meripihka-happoanhydridin kanssa sopivissa liuottimissa, ensisijaisesti metyleenikloridilla, tolueenissa tai myös pyridii-20 nissä karboksyylihapoiksi XVII.
r CO2CH3
ThTJ> XVII
o o 25 HO-C-H2CH2C-^ N-(CH2) n-CT^T^A“· OR(10)
' H
H
R(10) = H, THP, t-BuMe2Si, asetyyli, bentsyyli, bentsyylioksikarbonyyli (Z) 30
Kaavio 4 kuvaa sappihapporakenneosien valmistusta, jotka ovat 3a-konfiguraation omaavia. Yhdisteiden XVIII hydrobooraukseen soveltuvat erilaiset boraanit, kuten BH;, Thexylboran tai 9-BBN. Yhdistettä XVIII voidaan käyttää, 35 kuten kaaviossa 4 alkoholiryhmien osalta suojaamattomana 14 105155 tai myös suojattuna THP:n, asetyylin, bentsyylin ym:n ryhmien kanssa.
Käyttö lääkeaineena
Sappihapot näyttelevät merkittävää fysiologista 5 osaa lipidien ruoansulatuksessa. Niitä vapautuu maksasta sappirakon kautta suoleen ja kehittävät siellä fysiologiset vaikutuksensa lipidien ruoansulatuksen yhteydessä. Suurin osa erittyneistä sappihapoista saadaan takaisin suoli-maksa-verenkierron kautta. Ne joutuvat ohutsuolen 10 suolilievelaskimoiden ja porttisuoniston kautta takaisin maksaan. Suolessa tapahtuvan takaisinimeytymisen yhteydessä osallisina ovat sekä aktiiviset että myös passiiviset kuljetustapahtumat. Suoli-maksa-verenkierrossa sappihapot esiintyvät sekä vapaina happoina että myös glysiini- ja 15 tauriinikonjugaattien muodossa.
On havaittu, että kaavan I mukaiset yhdisteet imeytyvät ja päätyvät verisuoneen. Siten on mahdollista käyttämällä hyväksi sappihappojen luonnollisia takaisinimey-tymismekanismeja, saada aikaan imeytymättömien tai vaik-20 easti imeytyvien lääkeaineiden entistä parempi imeyty minen.
Sen lisäksi tällä systeemillä on muu tärkeä ominaisuus: Lääkeaineiden osalta, nimittäin imeytymättömien ja imeytyvien osalta saavutetaan elinselektiivinen vaikutus 25 nimenomaan sellaisten selimien suhteen, jotka omaavat sappihappojen kuljetusmekanismeja, kuten esim. kudoksissa suoli-maksa-verenkiertotapauksessa (esim. hepatotrooppinen vaikutus). Tämän avulla voidaan pyrkiä pienentämään tai jopa estämään useiden lääkeaineiden systeemisiä sivuvaiku-30 tuksia.
Entistä parempi imeytyminen tai elinselektiivinen vaikutus on toivottavaa useiden lääkeaineiden osalta, kuten esim. peptidien, antibioottien, virusvastaisten aineiden, syöpälääkkeiden, maksasuoja-aineiden, veren runsas-35 rasvaisuuden vastaisten aineiden, vesityslääkkeiden, ve renpainetta alentavien, reniini-inhibiittorien, prolyyli- 15 105155 hydroksylaasiestäjien, sokeritautia ehkäisevien aineiden osalta.
Farmakologisesti tehokkaat molekyylit voivat kehittää aktiivisuutensa eri tavoin:
5 keksinnön mukaisessa kytketyssä muodossa W-X-G
sappihappotähteen lohkeamisen jälkeen yhdysjäsenen X kanssa vapaassa muodossa W ilman X:ää ja G:tä kolmessa mainitussa tapauksessa samanaikaisesti.
10 Kaavan I mukaisia yhdisteitä annetaan erilaisina annosmuotoina, ensisijaisesti suun kautta tablettien, kapselien tai nesteiden muodossa. Päivittäinen annos liikkuu potilaan kehon painosta ja yleisrakenteesta riippuen alueella 3-5 000 mg, ensisijaisesti kuitenkin annos-15 alueella 10 - 500 mg. Keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää liuotettuna tai suspendoituna farmakologisesti vaarattomiin orgaanisiin liuottimiin, kuten yksi- tai useampiarvoisiin alkoholeihin, kuten esim. etanoliin tai glyseriiniin, triasetiiniin, öljyihin, kuten esim. aurin-20 gonkukkaöljyyn, kalanmaksaöljyyn, eettereihin, kuten esim. dietyleeniglykolidimetyylieetteriin tai myös polyeetterei-hin, kuten esim. polyetyleeniglykoliin tai myös muiden farmakologisesti vaarattomien polymeerikantajien, kuten esim. polyvinyylipyrrolidonin tai muiden farmaseuttisesti 25 hyväksyttävien lisäaineiden, kuten tärkkelyksen, syklo-dekstriinin tai polysakkaridien kanssa. Edelleen keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan antaa yhdessä muiden lääkeaineiden kanssa.
Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä.
30 Esimerkkejä
1. W-X-G, X = suora sidos Esimerkki 1 HO
?v^oo2h H0 h H3C^ O * 16 105155 20 g (51 mmol) desoksisappihappoa pantiin ensin 50 ml:aan dioksaania ja 20 ml:aan pyridiiniä ja huoneenlämpötilassa lisättiin 30 ml asetanhydridiä. Kolmen päivän kuluttua haihdutettiin kuiviin ja jäännös liuotettiin 5 300 ml:aan etikkahappoa. Hapettamista varten lisättiin 14 g kaliumkromaattia 60 ml:ssa vettä. Annettiin olla paikoillaan kolme päivää huoneenlämpötilassa. Jatkokäsittelyä varten lisättiin 4 litraa vettä ja uutettiin eetterillä (3 x) . Yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin natriumsul-10 faatilla ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin 200 ml:aan 1-norm. KOH:n vesiliuosta. 24 tunnin kuluttua tuote saostettiin 1-norm. HCl:lla. Kromatografoimalla si-likageelillä (sykloheksaani/etikkaesteri/etikkahapposeos = 40:100:1) saatiin 14,0 g (35,9 mmol, 70 %) yhdistettä 15 "Esimerkki 1".
Esimerkki 2
S03H
H0 H
14,0 g (35,9 mmol) yhdistettä "Esimerkki 1" liuo-25 tettiin 100 ml:aan dioksaania ja lisättiin 8,3 ml tri-n-butyyliamiinia. Sen jälkeen lisättiin tiputtamalla 3,75 ml kloorimuurahaishappoetyyliesteriä. 30 minuuttia huoneen lämpötilassa pitämisen jälkeen lisättiin 4,75 g tauriinia liuotettuna 38 ml:aan 1-norm. NaOH:a. 24 tuntia huoneen-30 lämpötilassa sekoittamisen jälkeen haihdutettiin kuiviin ja jäännös jaettiin 400 ml:aan 1-norm. HCl:a ja eetteriä liukeneviin osiin. Vesifaasi uutettiin kolme kertaa eetterillä. Yhdistetyt orgaaniset faasit haihdutettiin kuiviin ja jäännös liuotettiin kuumaan etanoliin, suodatettiin ja 35 haihdutettiin kuiviin, jolloin tuote kiteytyi. Saanto 9,5 g yhdistettä "Esimerkki 2".
17 105155
Esimerkki 3 c1v^n -f~'\ (chj)3ccci ___ f^ty
5 ci^ W + fjTK
* o ° «V1 10 “>-0^
H
500 mg klorambusiilia muutettiin 25 ml:ssa diok-saania 1,5 ml:n kanssa oksalyylikloridia huoneenlämpöti- 15 lassa 2 g:n molekyyliseulaerän (4Ä) läsnä ollessa 24 tunnin kuluessa happokloridiksi. Haihdutettiin kuiviin ja jäännös liuotettiin 15 ml:aan kuivaa dioksaania. Tämä liuos lisättiin tiputtamalla N2:n suojaamana 30 minuutin kuluessa kiehuvaen liuokseen, jossa oli 900 mg esimerkin 2 20 yhdistettä 60 mlrssa dioksaania. Viiden tunnin kiehuttami-sen jälkeen haihdutettiin kuiviin ja jäännös kromatogra-foitiin silikageelillä (CHCl3/MeOH/HOAc = 12:1:2). Saanto 250 mg yhdistettä "Esimerkki 3".
Esimerkki 4 : ”25 q H° ^ C1 o i V^Anh/vso3h HO ^
H
30 0
o O
ΛΝΗ^5°3Η 35 Cl o
Cl ^ H
18 105155
Esimerkissä 3 selostetulla tavalla 500 mg:sta klor-ambusiilia valmistettiin klorambusiilin happokloridiliuos ja annettiin reagoida samalla tavalla 400 mg:n kanssa de-soksitaurokoolihappoa. Kromatografoimalla etikkaesterillä 5 (etikkaesteri/sykloheksaani/HOAc = 100:90:1; sitten CHC13/ MeOH = 5:1) saatiin 350 mg yhdistettä "Esimerkki 4".
Esimerkki 5 0 o 10 h C1^N ..CJS1* C1/V W h
15 HO 3H ^S°3H
20 5 mg yhdistettä "Esimerkki 3" liuotettiin liuotettiin seokseen 150 μΐ dioksaania/15 μΐ 100 mmoolia natrium-fosfaattipuskuria pH 7,4 ja lisättiin 100 mCi:ta Na[3H]-BH^ta (11,8 Ci/mmol). Kahden tunnin kuluttua huoneenlämpö-: ’ 25 tilassa pitämisen jälkeen lisättiin 20 μΐ 5-norm. HCl:a.
Preparatiivisen ohkokromatografiän avulla (HPTLC-DC-levy, 0,5 mm, butanoli/H0Ac/H20 = 9:1:2) saatiin 2 mCirtä yhdistettä "Esimerkki 5".
Esimerkki 6 30 0 35 MsO ^
H OH N3^r^"'0H
n 19 105155 a) Liuokseen, jossa oli 43,6 g (89,6 mmol) yhdistettä "Esimerkki 10" litrassa kuivaa DMF:a, lisättiin 6,2 g (95,4 mmol) natriumatsidia ja sekoitettiin 45 minuuttia 130 *C:ssa. Jäähdyttämisen jälkeen kaadettiin ve- 5 teen ja uutettiin dietyylieetterillä (3 x). Yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin kuiviin.
b) Esteröinti suoritettiin "Esimerkin 11b" mukaisesti. Kromatografoimalla etikkaesterillä (sykloheksaani/ 10 etikkaesteri 1:1) saatiin 18,9 g (42,2 mmol, 47 %) atsidia "Esimerkki 6".
C25H41N3°4 (447), MS (FAB, 3-NBA/LiCl): 454 (M+Li*).
Esimerkki 7
0 O
15 HO HO
s OMe 5 OMe 20 K3 K <0H H2N h 'ok 3,0 g (6,7 mmol) yhdistettä "Esimerkki 6" liuotettiin 100 mitään metanolia ja hydrattiin 2 g:n kanssa Pd/C:tä huoneenlämpötilassa ja normaalipaineessa. Kata-25 lyytti suodatettiin pois ja suodos haihdutettiin kuiviin. Kromatografoimalla silikageelillä (metanoli/NEt, 95:5) saatiin 1,6 g (3,8 mmol, 57 %) amiinia "Esimerkki 7”.
C25H63N 04 (421 ), MS (FAB): 422 (M+H*).
20 105155
Esimerkki 8 .HO O H0. _ ?,
5 ^rXilT/ ® OH O
* xy —o^^^k'CIXv"
Η'ύ*ΗΛ' 09 : H H W
H Q F
Q* φ 10
Seosta, jossa oli 500 mg (1,19 mmol) yhdistettä "Esimerkki 7", 10 ml trietyyliamiinia, 200 mg (1,61 mmol) 15 4-dimetyyliaminopyridiiniä ja 520 mg (1,20 mmol) laktonia "Esimerkki 125" (ks. valmistusta julkaisuista DE 3 823 045-A, US 4 925 852) 25 ml:ssa kuivaa THF, lämmitettiin 48 tuntia kiehuttaen. Liuotin haihdutettiin pois ja jäännös kromatografoitiin silikageelillä (kloroformi/metanoli 20 9:1). Saanto 520 mg (0,61 mmol), 51 %) yhdistettä "Esi merkki 8".
C25H69FN207 ( 852) MS, (FAB, 3-NBA/LiCl ) : 859 (M+Li’ ) . Esimerkki 9 : 25 H° - V—V’ CH OH o OH o: o
f I Ji Γ H H } ΛΛ^ NA-*" nA
30 H H F
o. ¢) 35 105155 21
Esimerkkien 79 - 88 mukaisesti saatiin yhdistettä "Esimerkki 9".
C51H67FN207 (840), MS (FAB, 3-NBA/LiCl): 847 (M+Li*).
2. X-G, X = välijäsen 5 Esimerkki 10
HO HO
o O&P ° oir 10 HO'^^Kx^cH H3C-S-0
Π -5 M H
O
100 g:aan (0,245 mmol) sappihappoa, joka oli 500 ml:ssa pyridiiniä, tiputettiin 0 °C:ssa 23,1 ml 15 (0,294 mmol) metaanisulfonihappokloridia. Annettiin olla 30 minuuttia 0 °C:ssa ja sekoitettiin kaksi tuntia huoneenlämpötilassa. Seos kaadettiin seokseen 3 000 ml vet-tä/400 ml väk. H2S04: a ja uutettiin etikkaesterillä (3 x). Yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin MgS04:lla ja haih-20 dutettiin kuiviin. Kromatografoimalla silikageelillä (etikkaesteri/sykloheksaani/HOAc 5:5:1) saatiin kvantitatiivisesti yhdistettä "Esimerkki 10". Preparatiivisiin tarkoituksiin lisäpuhdistus ei ollut välttämätöntä.
Esimerkki 11 . · 25
HO HO
r CO^ . ^^s^C02CH3
h3c-^·' iM'-CH
30 0 a) 119 g (0,245 mmol) yhdistettä "Esimerkki 10" lämmitettiin seoksessa 500 ml etyleeniglykolia/100 ml pyridiiniä kaksi tuntia 100 °C:ssa. Seos kaadettiin seokseen 35 1 500 ml vettä/100 ml väk. H2S0«: a ja uutettiin etikkaeste- 22 105155 rillä (3 x). Yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin (MgSO<) ja haihdutettiin kuiviin.
b) Esteröintiä varten jäännös liuotettiin 1 100 ml:aan HCl:n metanoliliuosta (valmistettu tiputtamalla 5 100 ml asetyylikloridia 1 000 mitään metanolia) ja sekoi tettiin yön ajan huoneenlämpötilassa. Liuos kaadettiin 2 000 mitään vettä ja uutettiin eetterillä (3 x). Yhdistetyt orgaaniset faasit pestiin kyllästetyllä NaHC03:n vesiliuoksella ja kuivattiin (MgSO,,). Haihduttamalla liuotin 10 ja flash-kromatografoimalla silikageelillä (etikkaesteril-lä, sitten seoksella etikkaesteri/metanoli = 10:1) saatiin 37,1 g (0,08 mmol, 33 %) yhdistettä "Esimerkki 11".
C27H3606 ( 4 6 6 ), MS (FAB, 3-NBA/Li J): 473 (M+Li*).
Tuote sisältää 10 %:iin asti 3a-isomeeria, joka 15 mahdollisesti voidaan eristää vastaavan johdannaisen muodostamisen jälkeen.
Esimerkin 11 mukaisesti valmistettiin taulukon 1 yhdisteitä. (Pienempien α-isomeeriosien ohella saatiin pääasiallisesti β-isomeeria.).
20
Taulukko 1
O
HO v/x X
ϊ OCH3
• ' 25 \ H [ J
R(3) mi*'''™ 23 1 05 1 55
Esim._B-R(3)_<?C -R(4)_MS (FAB, 3-NBA/LiJ tai LiCi) 12 H0-(CH2)3-0- H C28H4806(480); 487 (M+Li+) 13 H0-(CH2)4-0- H C29H50O6(494); 501 (M+Li+) 14 H0-(CH2)5-0- H c30H52O6(508); 515 (M+Li+) 5 15 H0-(CH2)6-0- H C31H5406(522); 529 (M+Li+) 16 HO-(CH2)10-O- H C35H6206(578); 585 (M+Li+) 601 (M+Na+) 17 HO-(CH2)2-0-(CH2)2-0- H C29H50O7(510); 517 (M+Li+) is h3c-ch-ch2-o- h c28k48o6( 480); 487 (M+Li+)
10 OH
Esimerkki 19 -^00^ HO C02CH3
HO^O^^j "’OH H3C-S^°V^O/^S^X^',OH
0 20 37,1 g:aan (0,08 mol) yhdistettä "Esimerkki 11”, joka oli 150 mlrssa pyridiiniä, tiputettiin 0 ®C:ssa 6,6 mol. (0,084 mol) metaanisulfonihappokloridia. Sekoitettiin 15 minuuttia 0 eC:ssa ja tunnin ajan huoneenlämpö-tilassa. Reaktioseos kaadettiin 500 ml:aan vettä ja uutet- 25 tiin etikkaesterillä (3 x). Kuivaamalla yhdistetyt orgaaniset faasit (MgS04), poistamalla liuotin ja kromatografoi-maila silikageelillä (etikkaesteri/sykloheksaani = 3:1) saatiin 37,7 g (0,07 mol, 87 %) mesylaattia "Esimerkki 19".
30 C2fiH<60BS ( 544), MS (FAB, 3-NBA/Li J) : 551 (M + Li*).
24 105155
Esimerkki 20
HO
co2CH3 HO
H3C-S-0 O H jj 0
li H OH
O
37,7 g (0,07 mol) metylaattia "Esimerkki 19" se-10 koitettiin 4,95 g:n kanssa (0,076 mol) natriumatsidia 150 ml:ssa kuivaa DMSO:a kaksi tuntia 70 °C:ssa. Reaktio-seos kaadettiin veteen ja uutettiin etikkaesterillä (3 x). Yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin (MgS0<) ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin tolueeniin ja toluee-15 ni poistettiin jälleen rotaatiohaihduttimessa (2 x). Saanto 34,5 g yhdistettä "Esimerkki 20" (kvantitatiivinen). Atsidin annettiin enempää puhdistamatta reagoida välittömästi seuraavassa vaiheessa.
Esimerkki 21 20 "? ysA°2CH3
25 Ν'3^0 H
31,1 g (0,063 mol) yhdistettä "Esimerkki 20", joka oli 500 ml:ssa etikkaesteriä, hydrattiin 20 g:11a Pd/C:tä (10 %) huoneenlämpötilassa ja normaalipaineessa. Katalyyt-30 ti suodatettiin pois ja suodos haihdutettiin kuiviin. Kro-matografoimalla silikageeliliä (etikkaesteri/metanoli/ NEt3 = 5:1:1) saatiin 21,0 g (0,045 mol, 71 %) amiinia "Esimerkki 21".
C2?H<,N05 (465); KS (FAB, 3-NBA/LiJ): 472 (M-*-Li*) .
25 105155
Esimerkkien 19 - 21 mukaisesti valmistettiin taulukon 2 yhdisteitä.
Taulukko 2
5 HO
r(3) XHJ ”
10 0H
R(4) -£:*Li.3.L__n-R(4) MS (FAS, 3-NBA/LiJ) 15 22 K2N-(CH2)3-0- H C28H49N05(479); 486 (K+Li+) 23 H2N-(CH2)4-0- K C29H51N05(493); 500 (M+Li+) 24 K2N-(CH2)5-0- H C30H53NO5(507); 514 (K*Li+) 25 K2K-(CH2)6-0- H C31H55N05(521); 528 (M+Li+) 26 H2N-(CH2)10-O- H C35H63N05(577); 584 (K+Li+) 20 27 K2li- (CH2)2-C- (CH2)2-0- H C2gH51N06 (509) ; 516 (K + Li4 ) 26 K3C-CH2-CH2-0- H C26H49NOs(479); 486 (Iv>Ll+) nh2
Sappihapon mukaisesti muiden esimerkkejä 10 - 28 25 vastaavien sappihappojen annettiin reagoida ja saatiin taulukkoa 3 vastaavia yhdisteitä.
a) Lähtemällä desoksisappihaposta:
Taulukko 3 30 ‘ : K? \^X^/C02CH3
I T H 1 H
35 r(3) R(4) 26 105155
Esim, β- R ( 3 )_n-R(4) MS (FAB, 3-NBA/LiJ)_ 29 H0-(CH2)2-0- H C27H4605(450); 457 (M+Li+) 30 K0-(CH2)3-0- H C28H4805(464); 471 (M+Li+) 5 31 H0-(CH2)5-0- H C30H52O5(492); 499 (M+Li+) 32 HO-(CH2)10-O- H c35h62°5(562); 569 (M+L1+) 33 H2N- (CH2)2-0- H C27H47N04<449) · 456 (M+Li+) 34 H2N-(CH2)5-0- H C30H53NO4(491); 498 (M+Li+) 10 b) Lähtemällä Chenodesoksisappihaposta:
Taulukko 4 C02CH3 15 / R(3)—J1sh| h > \ 'oh R(4) 20
Esim, β - R ( 3 )_a- R (4)_MS(FAB , 3-NBA/LiJ)_ 35 H0-(CH2)2-0- H C27H4605(450); 457 (M + L i + ) 36 H0-(CK2)3-0- H C28H48°5(464); 471 (M+Li+) 37 H0-(CH2)5-0- H C30H52°5(492): 499 (M+Li+) 25 38 HO-(CK2)10-O- H C35K6205(562); 569 (M+Li+) 39 H2N-(CH2)2-0- H c27H47N04(449); 456 (M+Li+) 40 H2N-(CH2)5-0- H c30H53NO4(491); 498 (M+Li+) 30 c) Lähtemällä litosappihaposta:
Taulukko 5 27 105155 \ys/c02cH3
R(3)-jv\jH
' H R (4)
Esim. B-R( 3 )_a-Rli) 10-- ——MA (FAE, 3-NBA/LiJ)_
41 H0-(CH2)2-0- H
42 HO-(Ch')3-0- H =27H46°4<«4>; *« <M+L\> 43 H0-(o4) -0- H ε2β„4β04,4*β>; «5 (H*U ) 2 Λ „ C30H5?O4(476); 483 (M + Li ) 44 HO- (CH,)nn-0- H JO 52 4' + , „ ---—-C^H^O* (546) ; 653 (M + Li )
15 45 H?N-(CHjJj-O- H 6^-4V----TTT
222 „ C27H47N0^(433); 440 (M+Li ) 46 H2N-(CK2)5-0- H 2747 3 T. + x 2 25 C30H53NO3<475); 482 (K+Ll >
Esimerkki 47 20 R(10)O 002CH3 Γη|> R(10)O 002^3 ... 25 HjN-v^o h' 'or(10) H°Y^ o N^\0 OR(10)
H
Esimerkki 47 a) [R(10) e Hj 2,0 g (4,3 mmol) yhdistettä "Esimerkki 21” sekoitettiin seoksessa 25 ml THF/5 ml trietyyliamiinia 430 mg:n 30 (4,3 mmol) kanssa meripihkahappoanhydridiä 30 minuuttia ' huoneenlämpötilassa. Reaktioseos kaadettiin 2-norm.
HC1:ään ja uutettiin etikkaesterillä (3 x). Kuivaamalla yhdistetyt orgaaniset faasit (MgS04) ja poistamalla liuotin saatiin 2,4 g (4,2 mmol, 98 %) yhdistettä "Esimerkki 47a" 35 [R(10) = H].
C3iH51NOe (565), MS (FAB, 3-NBA/LiJ): 578 (M+2Li’-H).
28 105155
Esimerkki 47 b) [R(10) = t-BuMe2Si] Täysin 47 a:n mukaisesti esimerkistä 58 saatiin yhdistettä "Esimerkki 47 b)".
Esimerkki 47 c) [R(10) = tetrahydropyranyyli = THF] 5 Täysin 47 a:n mukaisesti esimerkistä 55 saatiin yhdistettä "Esimerkki 47 C)".
Esimerkki 48 H0 H "* '0H h3c ^0 15 100 g:aan (0,237 mol) sappihappometyyliesteriä, joka oli 750 ml:ssa pyridiiniä, tiputettiin 0 °C:ssa 20,3 ml (0,284 mol) asetyylikloridia. Kahden tunnin sekoittamisen jälkeen huoneenlämpötilassa lisättiin 0 °C:ssa vielä kerran 3,4 ml (0,047 mol) asetyylikloridia 20 ja sekoitettiin vielä tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Reaktioseos kaadettiin jääveteen ja uutettiin etikkaeste-rillä (3 x). Yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin (MgSO<) ja haihdutettiin kuiviin. Kromatografoimalla jäännös silikageelillä (sykloheksaani/etikkaesteri = 1,5:1) · 25 saatiin 95,8 g (0,206 mol, 87 %) monoasetaattia "Esimerkki 48" .
Esimerkki 49 THP 0 30 H? C02^3 K3C ^0 H3c ^ ΊΗΡ 29 105155 50,0 g (0,108 mol) monoasetaattia "Esimerkki 48" liuotettiin seokseen 250 ml dikloorimetaania/250 ml di-hydropyraania ja huoneenlämpötilassa lisättiin 10,0 g py-ridinium(tolueeni-4-sulfonaattia) ja sekoitettiin kaksi 5 päivää huoneenlämpötilassa. Reaktioliuos laimennettiin 1 500 ml :11a dietyylieetteriä, orgaaninen faasi pestiin kaksi kertaa puolikyllästetyllä keittosuolan vesiliuoksella ja kuivattiin MgS04:lla. Poistamalla liuotin saatiin 75 g (kvantitatiivisesti) bis-THP-eetteriä "Esimerkki 49", 10 jota käytettiin enempää puhdistamatta seuraavassa vaiheessa .
Esimerkki 50 I®0^O)2CH3
HjC-^ θ' H ° TS> HO TKP
20 46,6 g:aan (noin 0,055 mol) yhdistettä "Esimerkki 49", joka oli 300 ml:ssa kuivaa metanolia, lisättiin huoneenlämpötilassa 37,8 g (0,275 mol) kaliumkarbonaattia ja sekoitettiin kolme tuntia. Liuotin poistettiin pääosiltaan ja jäännös kaadettiin seokseen 2-norm. suolhappo/toluee- · ' 25 ni. Vesifaasi uutettiin kaksi kertaa tolueenilla ja yhdis tetyt orgaaniset faasit pestiin kerran vedellä ja kaksi kertaa kyllästetyllä NaHC03:n vesiliuoksella. Kuivaamalla MgS04:lla, poistamalla liuotin ja kromatografoimalla sili-kageelillä (sykloheksaani/etikkaesteri = 3:2) saatiin 30 28,8 g (0,059 mmol, 89 %) yhdistettä "Esimerkki 50".
’ · C35H5B07 (590), MS (FAB, 3-NBA/LiJ): 597 (M+Li') .
• · 30 105155
Esimerkki 51 CO2CH3
HO '''^Η^'Ο THP H3C-S-0 O THP
O
Esimerkin 10 mukaisesti 28,8 g:sta (0,048 mol) esi-10 merkin 14 yhdistettä saatiin 30,3 g (0,045 mol, 94 %) me-sylaattia "Esimerkki 51".
Esimerkki 52
THP O CO CH THP O
: UU2UM 3 ^-^00^3
H3C-S-0'^ h Vb THP H0\X\ O o THP
II
0 20 a) 46,0 g (0,068 mol) mesylaattia "Esimerkki 51" kiehutettiin paluujäähdyttäjön alla 2,5 tuntia seoksen 300 ml etyleeniglykolia/75 ml trietyyliamiinia kanssa. Reaktioseos kaadettiin 1-norm. suolahappoon ja uutettiin dietyylieetterillä (2 x). Yhdistetyt orgaaniset faasit 25 pestiin kerran vedellä, kaksi kertaa kyllästetyllä nat-riumvetykarbonaatin vesiliuoksella, kuivattiin (MgS04) ja liuotin poistettiin. Jäännös liuotettiin tolueeniin ja haihdutettiin kuiviin (2 x).
b) Jäännös liuotettiin 500 ml:aan kuivaa metanolia, 30 lisättiin 40,0 g kaliumkarbonaattia ja sekoitettiin 1,5 tuntia huoneenlämpötilassa. Metanoli poistettiin reaktio-seoksesta vakuumissa suurimmaksi osaksi ja jäännös kaadettiin seokseen 2-norm. suolahappo/tolueeni. Vesifaasi uutettiin kaksi kertaa tolueenilla, yhdistetyt orgaaniset 35 faasit pestiin kerran kyllästetyllä natriumvetykarbonaatin 3i 105155 vesiliuoksella, kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin kuiviin. Flash-kromatografoimalla silikageelillä (syklohek-saani/etikkaesteri 2:1) saatiin 25,6 g (0,040 mol, 60 %) yhdistettä "Esimerkki 52".
5 C37H6208 (634), MS (FAB, 3-NBA/Li J) : 641 (M+Li*).
Esimerkki 53 ΊΗΡ 0 002013 ^2013 ΊΗΡ Η3θ4/θΝΛ0 h 'o ΊΗΡ
O
Esimerkin 19 mukaisesti saatiin yhdistettä "Esi-15 merkki 53".
Esimerkki 54
ΊΗΡ O THP O
I * v^v^002CH3 20 ° rrtrv iC^l*^**
H,C-S^ OH - ° H "0,W
3 II
O
*
Esimerkin 20 mukaisesti saatiin yhdistettä "Esi-25 merkki 54".
Esimerkki 55 003PK3
S3\^\ o rap ^ THP
Esimerkin 21 mukaisesti saatiin yhdistettä "Esimerkki 55" .
35 C37H63N07 (633), MS (FAB, 3-NBA/LiJ) : 640 (M+Li* ) .
32 105155
Esimerkki 56 H? / 002^3 t-BuMe2SiO „ H-,C-S-0\A 0 H ' ^ H3C-S-0V^0 h ''0SLMe2t-Bu J U 0 o
Liuokseen, jossa oli 24,5 g (0,045 mol) yhdistettä 10 "Esimerkki 19" ja 26,5 ml (0,227 mol) 2,6-dimetyylipyri-diiniä 150 mlrssa dikloorimetaania, tiputettiin 0 eC:ssa 31,2 ml (0,136 mol) tert-butyylidimetyylisilyylitriflaat-tia. Sekoitettiin 15 minuuttia 0 °C:ssa ja kaksi tuntia huoneenlämpötilassa. Reaktioseos kaadettiin kyllästettyyn 15 NaHC03:n vesiliuokseen ja uutettiin dikloorimetaanilla (3 x). Yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin magnesium-sulfaatilla ja haihdutettiin kuiviin. Flash-kromatografoi-malla silikageelillä (etikkaesteri/sykloheksaani = 1:3) saatiin 23,5 g (0,03 mol, 67 %) yhdistettä "Esimerkki 56". 20 C40H7608Si2S (772), MS (FAB, 3-NBA/LiJ): 779 (M+Li').
Esimerkki 57 Ηί-iov-o' OSMbjMu h ''OSMejt-Bu
Il o 23,4 g (0,03 mol) yhdistettä "Esimerkki 56" muutet-30 tiin esimerkin 20 mukaisesti kvantitatiivisesti atsidiksi "Esimerkki 57".
33 105155
Esimerkki 58 t-BuMe2SiO _^C02CH3 t-BuMe2SiO C02CH3
No ^ h2N \^\o OSiMeot-Ba 3\^\0 h OSiMe2t-Bu . H 2
Atsidi "Esimerkki 57" hydrattiin esimerkin 21 mukaisesti. Saanto silikageelillä kromatografoinnin jälkeen 10 (etikkaesteri/MeOH/NEt3 = 18:1:1) 10,0 g (0,014 mmol, 48 %) 0,03 moolista yhdisteestä "Esimerkki 56" laskien.
C39H75N05Si2 (693), MS (FAB, 3-NBA/LiJ): 700 (M+Li*) .
Esimerkki 59 K HO O 0
AiX^0Ke H° h"* 'oh 20
Bn - bentsyyli
Liuosta, jossa oli 500 mg (1,07 mmol) yhdistettä "Esimerkki 21" ja 76 mg (0,33 mmol) tetraetyyliortotita-25 naattia 10 ml:ssa kuivaa bentsyylialkoholia, sekoitettiin kahdeksan tuntia 100 eC:ssa. Jäähdyttämisen jälkeen lisättiin 100 ml etikkaesteriä. Seosta ravisteltiin 1-norm. HCl:n kanssa (1 x) ja 8-%:isen NaHCO,-liuoksen kanssa (1 x). Orgaaninen faasi kuivattiin MgS04:lla ja haihdutet-30 tiin kuiviin. Kromatografoimalla silikageelillä (etikkaes-* t teri/metanoli(NEt3 = 5:1:1) saatiin 360 mg (6,64 mmol, 62 %) bentsyyliesteriä "Esimerkki 59”.
C33H51N05 ( 541 ), MS (FAB): 542 (M + H*).
Esimerkki 60 34 1 05 1 55 HO C02t-Bu
Esimerkki 60a 10
H0 C02CK3 HO
H0 \X^0 H *" ^OH *
15 M
Bn = bentsyyli 42 g (0,09 mol) yhdistettä "Esimerkki 11" sekoitettiin 270 ml:ssa N-etyylidi-isopropyyliamiinia 20 61,5 g:n (0,36 mol) kanssa bentsyylibromidia kolme tuntia 100 eC:ssa (hauteen lämpötila). Sen jälkeen reaktiotuote kaadettiin seokseen, jossa oli 1,8 litraa vettä ja 180 ml väkevää rikkihappoa ja uutettiin etikkaesterillä (2 x). Yhdistetyt orgaaniset faasit pestiin kerran 1-norm. suola-25 hapolla, vedellä ja kyllästetyllä NaHC03:n vesiliuoksella, kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin kuiviin. Kromatogra-foimalla jäännös silikageelillä seoksella etikkaesteri/ sykloheksaani = 1:1 saatiin 14,54 g (0,026 mol, 29,0 %) yhdistettä "Fsimerkki 60a".
30 C34H5206 ( 5 5 6 ), MS (FAB, 3-NBA/Li Cl ) : 563 (M+Li’).
Esimerkki 60b 105155 35
C02CH3 HO
/xz Bno
H OH
16,14 g (0,029 mol) yhdistettä "Esimerkki 60a" 10 liuotettiin 450 ml:aan metanolia, lisättiin 37 ml (0,037 mol) 1-norm. natronlipeän vesiliuosta ja kiehutettiin kahdeksan tuntia paluujäähdyttäjän alla. Sen jälkeen metanoli poistettiin rotaatiohaihduttimessa, jäännös liuotettiin 320 ml:aan vettä ja lisättiin 37 ml (0,037 mol) 1-15 norm, suolahapon vesiliuosta. Syntynyt happo uutettiin etikkaesterillä (2 x). Yhdistetyt orgaaniset faasit pestiin kaksi kertaa vedellä, kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin kuiviin. Kiteistä jäännöstä hierrettiin 150 ml:n kanssa di-isopropyylieetteriä, suodatettiin erilleen ja 20 kuivattiin vakuumissa. Saatiin 13,85 g (0,025 mol, 88,0 %) yhdistettä "Esimerkki 60b", jonka sulamispiste oli 144 -146 eC.
C33H50O6 ( 542), MS (FAB, 3-NBA/TEA): 565 (M+Na*).
Esimerkki 60c 25 1 2 3 4 5 6
1 " "" °n ^ ° H °H
2 ' a) Anhydridin muodostaminen 3 13,8 g (0,0254 mol) yhdistettä "Esimerkki 60b" 4 liuotettiin 250 ml:aan absoluuttista tetrahydrofuraania ja 5 7,69 g:aan (0,0762 mol) trietyyliamiinia. Huoneenlämpöti- 6 lassa lisättiin tiputtamalla 6,28 g (0,03 mol) 2,6-dikloo- 36 105155 ribentsoyylikloridia ja sen jälkeen sekoitettiin kolme tuntia kiehuttaen.
b) Esterin muodostaminen
Kohdassa a) valmistettu anhydridiliuos jäähdytet-5 tiin +10 eC:seen ja peräkkäin lisättiin 28,12 g (0,38 mol) tert-butanolia ja 3,1 g (0,0254 mol) 4-dimetyyliarninopyri-diiniä, sitten lämmitettiin tunnin kuluessa kiehuvaksi ja sekoitettiin kiehuttaen neljä tuntia. Sen jälkeen reaktio-seoksesta poistettiin vakuumissa suurin osa tetrahydrofu-10 raanista. Jäännös liuotettiin etikkaesteriin ja pestiin kolme kertaa perusteellisesti vedellä ja kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin kuiviin.
Kromatografoimalla jäännös silikageelillä seoksella etikkaesteri/sykloheksaani = 1:1 saatiin 6,85 g yhdistettä 15 "Esimerkki 60c" (0,0114 mol, 45,0 %). Sulamispiste 79 -80 'C.
Esimerkki 60d HO ^^sy^>C02t-Bu HO C02t-Bu
BnO . H ^ KO
C H '0H K '0H
7,14 g (0,0119 mol) yhdistettä "Esimerkki 60c" hyd-25 rattiin 250 mlrssa etikkaesteriä 1,5 g:11a Pd/C-katalyyt-tiä (10 %) huoneenlämpötilassa ja normaalipaineessa. Vedyn sitoutumisen päätyttyä katalyytti suodatettiin pois ja suodos haihdutettiin kuiviin. Saatiin 6,0 g yhdistettä "Esimerkki 60d" (0,0117 mol, 98,9 %).
30 C3CH5206 (508), MS (FAB, 3-NBA/LiCl ) , 515 (M+Li*).
Esimerkki 60e
H? \^^C02t-Bu U2lK^0 Jj · OH
37 1 05 1 55
Esimerkkien 19 - 28 mukaisesti yhdisteestä "Esimerkki 60d" valmistettiin yhdistettä "Esimerkki 60e".
C30H53N 05 (507), MS (FAB, 3-NBA/LiCl): 514 (M+Li*).
Esimerkki 61 5 c°2CH3
10 H
1U ^0 H OH
42,2 g (0,1 mol) sappihappometyyliesteriä, 300 ml (1,8 mol) N-etyylidi-isopropyyliamiinia ja 10 ml (0,12 mol) allyylibromidia lämmitettiin kahdeksan tuntia paluu-15 jäähdyttäjän alla kiehuttaen. Kunkin reaktioajan tunnin kuluttua lisättiin vielä kulloinkin 5 ml allyylibromidia (DC-kontrolli, sykloheksaani/etikkaesteri = 1:1). Reaktio-seos kaadettiin seokseen 400 ml väk. H2S04/2 0 00 ml vettä ja uutettiin etikkaesterillä (3 x). Yhdistetyt orgaaniset 20 faasit pestiin kulloinkin kerran 1-norm. HCl:lla, vedellä ja kyllästetyllä NaHC03-liuoksella. Kuivaamalla (MgS04), vetämällä pois liuotin ja kromatografoimalla jäännös sili-kageelillä (n-heptaani/etikkaesteri - 4:1 - 3:1 - 2:1) saatiin 21,91 g (0,047 mol, 47 %) yhdistettä "Esimerkki 25 61".
C2eH«6°s (462K MS (FAB, 3-NBA/LiCl ): 469 (M+Li*).
Esimerkki 62 C02CH3
H '' OH K ÖH
38 105155 (1) Teksyyliboraanin valmistus: Argon-atmosfäärin suojaamana 0 °C:ssa 85 ml:aan 1-molaarista Bh3-THF-liuosta (THF) tiputettiin 85 ml 1-molaarista 2,3-dimetyylibuteeni-liuosta (THF). Sekoitettiin 0 °C:ssa.
5 (2) Hydrobooraus: Kohdan (1) mukaisesti valmistet tuun liuokseen tiputettiin 0 °C:ssa 8,6 g (18,59 mmol) olefiinia "Esimerkki 61" 25 ml:ssa THF:a. Seoksen oltua kolme tuntia 0 °C:ssa sen annettiin lämmetä huoneenlämpö-tilaan (DC-kontrolli). Seoksen oltua 16 tuntia huoneenläm-10 pötilassa lisättiin tiputtamalla tuoretta valmistettua teksyyliboraaniliuosta (THF). Sekoitettiin uudelleen huoneenlämpötilassa. Sen jälkeen kun mitään lähtöainetta ei enää ollut osoitettavissa, reaktioseos siirrettiin argon-atmosfäärin suojaamana varovaisesti voimakkaasti sekoit-15 taen natronlipeän vesiliuokseen (boraaniekvivalenttia kohden 1 ekvivalentti NaOH:a). Tämän jälkeen lisättiin tiputtamalla jäillä jäähdyttäen 30-%:ista vetyperoksidi 1iuosta (2 ekvivalenttia yhtä ekvivalenttia kohden boraania). Seoksen oltua 20 minuuttia 0 °C:ssa lämmitettiin 30 mi-20 nuuttia 50 °C:ssa. Paremman faasien erottumisen vuoksi lisättiin kyllästettyä keittosuolaliuosta. Vesifaasi uutettiin eteyyliasetaatilla (2 x) ja yhdistetyt orgaaniset faasit pestiin kyllästetyllä natriumvetysulfiittiliuoksel-la (2 x) ja sen jälkeen natriumkloridiliuoksella (1 x) .
• ' 25 Kuivaamalla MgS04:lla, poistamalla liuotin ja kromatogra- foimalla silikageelillä (seoksin etyyliasetaatti - etyyli-asetaatti/MeOH = 20:1) saatiin 5,0 g (10,4 mmol, 56 %) yhdistettä "Esimerkki 62".
Rf (etyyliasetaatti): 0,18 30 C2eH4604 (480), MS (FAB, 3-NBA/LiCl): 487 (M+Li*) .
Tämän ohella saatiin 1,0 g sekundaarista alkoholia. Rf (etyyliasetaatti): 0,27.
Esimerkki 63
Esimerkkien 19 - 28 mukaisesti yhdisteestä "Esi- 35 merkki 62" saatiin yhdistettä "Esimerkki 63".
39 1 05 1 55
5 H2N h *OH
(X-G, a-konfiguraation ollessa kohdalla 3-C) C28H49N05 (479), MS (FAB, 3-NBA/LiCl): 486 (M+Li*).
10 Esimerkki 64
HO AcO
15 ^ HO . 0H H° OAc
0 H
Vaihe a) C0->CHt 20 H0 Ύ^'' HO ^^/C°2CK3 rip . rip
n ^ ^ H
25 75 g (0,161 mol) yhdistettä "Esimerkki 11" sekoitettiin 21,6 g:n (0,177 mol) kanssa 4-dimetyyliaminopyri-diiniä ja 26,7 g:n (0,177 mol) kanssa tert-butyylidimetyy-lisilyylikloridia 500 ml:ssa kuivaa dikloorimetaania neljä 30 tuntia huoneenlämpötilassa. Reaktioseos kaadettiin veteen ja uutettiin etikkaesterillä (3 x). Yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin kuiviin. Saanto 93,6 g (kvantitatiivinen) silyylieetteriä. Preparatiivi-siin tarkoituksiin jatkopuhdistus ei ollut välttämätöntä.
35 C33H60O6Si (580), MS (FAB, 3-NBA/LiCl): 587 (M+Li*).
40 105155
Vaihe b) HO \j/\^C02CH3 AcO v^v^C02CH3 5 Me,t-3u ^ r^rn
I 2 H H I H J H
SiO t-BuM82SiON^^ OAc
Seokseen, jossa oli 10 g (0,0172 mol) vaiheen a) 10 mukaisesti saatua silyylieetteriä ja 5,3 g (0,032 mol) 4-dimetyyliaminopyridiiniä 100 mlrssa kuivaa pyridiiniä, lisättiin tiputtamalla 0 0C:ssa 4,1 ml (0,043 mol) etikka-happoanhydridiä. Sekoitettiin neljät untia huoneenlämpötilassa. Reaktioseos kaadettiin veteen ja uutettiin etikka-15 esterillä (3 x). Yhdistetyt orgaaniset faasit pestiin kyllästetyllä NaHC03:n vesiliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Haihduttamalla liuotin pois ja kromatografoimalla silika-geelillä (etikkaesteri/sykloheksaani = 1:3) saatiin 10 g (0,015 mol, 87,7 %) diasetaattia.
20 C37H64OeSi (774); MS (FAB, 3-NBA/LiCl): 671 (M+Li*).
Vaihe c) CO2CH3 HO H0 v^s^C02CH3 1
H
10 g (0,015 mol) vaiheen b) mukaisesti saatua di-30 asetaattia sekoitettiin 5,2 g:n (0,0165 mol) kanssa tetra-butyyliammoniumfluoridi-trihydraattia 100 ml:ssa tetrahyd-rofuraania tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Reaktioseos kaadettiin veteen ja uutettiin etikkaesterillä (3 x). Yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin (MgSO<) ja haihdutet-35 tiin kuiviin. Alkoholia saatiin kvantitatiivisesti. Prepa- 4! 105155 ratiivisiin tarkoituksiin jatkopuhdistus ei ollut välttämätöntä .
C31H50O8 (550), MS (FAB, 3-NBA/LiCl): 557 (M+Li*).
Vaihe d)
5 HO
H0 1 J AcO CO.CHo ^-Bu C$v nm- 10 ^ ° H OH 2 OAc 7,35 g (0,0133 mol) vaiheen c) mukaisesti saatua alkoholia sekoitettiin 50 g:n (0,133 mol) kanssa pyridi-niumdikromaattia 150 ml:ssa kuivaa dimetyyliformamidia 24 15 tuntia huoneenlämpötilassa. Reaktioseos kaadettiin veteen ja uutettiin dietyylieetterillä (3 x). Yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin (MgSO,,) ja haihdutettiin kuiviin. Kromatografoimalla silikageelillä (etikkaesteri/syklohek-saani - 9:1) saatiin 5,1 g (0,009 mol, 58 %) yhdistettä 20 "Esimerkki 64".
C31H<e0, ( 564 ), MS (FAB, 3-NBA/LiCl ) : 571 (M+Li*).
3. W-X-G, X = välijäsen Esimerkki 65 25 ci' ΓΤΠα H2N oh
30 HO
r Nr^v^C02CH3 1 f 01 >—. O ΎηΤ1 ci^/KO^VJ,-,®^° H "Oi 35 42 1 05 1 55
Seokseen, jossa oli 1,96 g (6,44 mmol) klorambusii-lia (Sigma) seoksessa 100 ml THF/20 ml trietyyliamiinia, lisättiin tiputtamalla 0 °C:ssa 0,62 ml (6,44 mmol) kloo-rimuurahaishappoetyyliesteriä ja sekoitettiin 15 minuut-5 tia. 0 °C:ssa lisättiin tiputtamalla 3,0 g (6,44 mmol) yhdistettä "Esimerkki 21" THF:iin liuotettuna ja sen jälkeen sekoitettiin 30 minuuttia huoneenlämpötilassa. Reak-tioseos kaadettiin veteen ja uutettiin kolme kertaa etik-kaesterillä. Yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin 10 (MgS04) ja haihdutettiin kuiviin. Kromatografoimalla sili- kageelillä (etikkaesteri/metanoli = 9:1) saatiin 3,9 g (5,2 mmol, 81 %) yhdistettä "Esimerkki 65”. Sulamispiste 45 - 50 °C.
C41H64C12N206 (750), MS (FAB, 3-NBA/LiJ): 751 (M+Li*).
15 Esimerkki 66 co2ch3 d 0
20 ^ H * 0H
Cl^v'
HO
r C02H
^ /\^o h '’oh
Cl A/ '-
Liuokseen, jossa oli 1,96 g (2,6 mmol) yhdistettä 30 "Esimerkki 65" 20 ml:ssa etanolia, tiputettiin 5 ml 1- norm. natronlipeän vesiliuosta. Kolme tuntia huoneenlämpötilassa pitämisen jälkeen lisättiin vielä 5 ml 1-norm. natronlipeän vesiliuosta ja sekoitettiin uudelleen kolme tuntia. Reaktioseos kaadettiin 200 ml:aan vettä, neutra-35 loitiin 1-norm. suolahapon vesiliuoksella ja uutettiin 43 1 05 1 55 kolme kertaa etikkaesterillä. Yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin (MgSO«) ja haihdutettiin kuiviin. Saanto 1,91 g (2,6 mmol, kvantitatiivinen) yhdistettä "Esimerkki 66". Sulamispiste 60 - 70 °C.
5 C40H62Cl2N2O6 (736), MS (FAB, 3-NBA/LiJ) : 743 (M+Li*).
Esimerkki 67 H° 10 f T H J ^ C1^\ nh^V ®
Cl-/ HO o 15 Cl ^V-/\_JL_ NH’/V'0^ H >ch
ClssS
Liuokseen, jossa oli 1,5 g (2,03 mmol) yhdistettä "Esimerkki 66" ja 0,97 ml (4,06 mmol) tri-n-butyyliamii-20 nia 10 mlrssa dioksaania, tiputettiin 0 eC:ssa 0,2 ml (2,03 mmol) kloorimuurahaishappoetyyliesteriä ja sekoitettiin 15 minuuttia 0 ®C:ssa. Sen jälkeen lisättiin tiputtamalla 0 eC:ssa liuos, jossa oli 0,508 g (4,06 mmol) tau-riinia 4 mlrssa 1-norm. natronlipeän vesiliuosta. Sekoi-. · 25 tettiin tunnin ajan huoneenlämpötilassa, kaadettiin 200 ml:aan vettä ja neutraloitiin 1-norm. suolahapon vesi-liuoksella. Uutettiin etikkaesterillä lisäämällä vähän metanolia (3 x) ja yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin (MgS04). Poistamalla liuotin ja flash-kromatografoimalla 30 silikageelillä (etikkaesteri/metanoli * 4:1, sitten 2:1) saatiin 1,59 g (1,89 mmol, 93 %) yhdistettä "Esimerkki 67". Sulamispiste 130 - 140 eC.
C42H67C12N3OsS (843), MS (FAB, 3-NBA/LiJ): 856 (M+Li’).
Esimerkki 68 105155 44
«°^C02H
C ^NA /—Tv a M -CMv οΉτ "·« o
ho R
^ nh^ οο-,η 10 «vv ciM “νχοΜί,"
o H
Liuokseen, jossa oli 1,5 g (2,03 mmol) yhdistettä 15 "Esimerkki 66" ja 0,97 ml (4,06 mmol) tri-n-butyyliamiinia 10 mlrssa dioksaania, lisättiin tiputtamalla 0 °C:ssa 0,2 ml (2,03 mmol) kloorimuurahaishappoetyyliesteriä ja sekoitettiin 15 minuuttia 0 °C:ssa. Tämän jälkeen lisättiin liuos, jossa oli 0,305 g (4,06 mmol) glysiiniä 20 4,0 mlrssa 1-norm. natronlipeän vesiliuosta ja sekoitet tiin neljä tuntia huoneenlämpötilassa. Reaktioseos kaadettiin 200 ml:aan vettä, neutraloitiin 1-norm. suolahapon vesiliuoksella ja uutettiin etikkaesterillä. Yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin (MgSO,), haihdutettiin kuiviin 25 ja flash-kromatografoitiin silikageelillä (etikkaesteri/ metanoli « 2:1). Saanto 1,15 g (1,45 mmol, 71 %) yhdistettä "Esimerkki 68”. Sulamispiste 75 - 85 °C.
C42H65C12N307 (793), MS (FAB, 3-NBA/LiJ): 806 (M+2 Li'-H) .
ZU: W-H-Z, jossa X « välijäsen
Esimerkit 69 - 78 45 1 05 1 55 ΠΟ OMe = "O'0 * £βΡ
T H?N-T-0 * 'OH
Q J H
0
HO
X I OMe 10 * ^XlC)
°H OH ° jT h J H
Q N - T - O H 4,,OH
H
15 Esimerkki 69 0 h3c^VT^^? ) H3C T = “CH2CH2" 20
Seosta, jossa oli 750 mg (1,61 mg) yhdistettä "Esimerkki 21”, 5 ml trietyyliamiinia, 200 mg (1,61 mmol) di-25 metyyliaminopyridiiniä (DMAP) ja 651 mg (1,61 mmol) mevi-noliinia 25 ml:ssa kuivaa THF:a, lämmitettiin 48 tuntia kiehuttaen. Liuotin poistettiin ja jäännös kromatografoi-tiin silikageelillä (etikkaesteri/metanoli = 19:1). Saanto 900 mg (1,03 mmol, 64 %) yhdistettä "Esimerkki 69". Sula-30 mispiste 78 - 80 °C.
: C51He3NO10 ( 869), MS (FAB, 3-NBA/LiJ): 876 (M+Li*).
*6 105155
Esimerkki 70
F
h3c 5 T = "CH2CH2" Q = F'^v^h3c^\CH3 ch3
Esimerkin 69 mukaisesti esimerkin 21 kanssa saatiin yhdistettä "Esimerkki 70". Sulamispiste 70 - 75 °C. Cs3H75F2N02 (891), MS (FAB, 3-NBA/LiJ): 898 (M+Li*).
(Laktonikomponenttien valmistamiseksi ks. julkaisua DE 3 722 807-A; ks. myös julkaisua Tetrahedron Letters 29, ^ 929 - 930 (1988), jossa on selostettu yhdisteitä, joissa F:n vieressä ei ole metyyliryhmiä).
Esimerkki 71
F
20 T = -CH2CH2- o = E3C's^UO:!i3 ch3 ch3 25
Esimerkin 69 mukaisesti esimerkin 21 kanssa saatiin yhdistettä "Esimerkki 71". Sulamispiste 65 - 70 °C. C52H7tFN09 (865), MS (FAB, 3-NBA/LiJ): 872 (M+Li"). (Laktonikomponenttien valmistamiseksi ks. julkaisua DE 30 3 819 999-A, Esimerkki 1; ks. myös selostusta, joka on edellä olevan hakemuksen farmakologisen osan edellä).
Esimerkki 72 <7 105155
F
5 T = -CH2CH2CH2- °s'/ Q = H3C Y>l^L/CH3 CH3 CH3 10 Esimerkin 69 mukaisesti esimerkin 21 kanssa saatiin yhdistettä "Esimerkki 72".
C52H78FN09 ( 879), MS (FAB, 3-NBA/LiCl ) : 886 (M+Li*). Esimerkki 73
F
15 Λ T = “CK CH - Λ ^CH o Q = S -3 Φ
Esimerkin 69 mukaisesti esimerkin 21 kanssa saatiin yhdistettä "Esimerkki 73".
25 C5<H-3F2N05S (949 ), MS (FAB, 3-NBA/LiCl ) : 956 (M+Li*).
(Laktonikomponenttien valmistamiseksi ks. julkaisua DE P 3 929 913).
Esimerkki 74
F
30 fS
T = _CH2CK2CH2~ 0 = /CH, φ c,i
F
48 105155
Esimerkin 69 mukaisesti esimerkin 22 kanssa saatiin yhdistettä "Esimerkki 74".
C55H75F2NO,S (963), MS (FAB, 3-NBA/LiCl): 970 (M+Li*). Esimerkki 75
5 F
O = T = -ch2ch2- CH3 10 ch3
Esimerkin 69 mukaisesti esimerkin 21 kanssa saatiin yhdistettä "Esimerkki 75", sulamispiste 74 - 76 °C. C54H73FN208 ( 896), MS (FAB, 3-NBA/Li J) : 903 (M+Li*).
15 Esimerkki 76
F
Q = T = "CH2CH2CK2-
20 ^ XjT CH
O kV
CH3
Esimerkin 69 mukaisesti esimerkin 22 kanssa saatiin 25 yhdistettä "Esimerkki 76".
C„H7SFN208 ( 910), MS (FAB, 3-NBA/LiCl ) : 917 (M+Li*). Esimerkki 77
F
: 09 OH o j'^''
K 'OH
CH, 35 105155 49
Esimerkin 69 mukaisesti esimerkin 63 kanssa saatiin yhdistettä "Esimerkki 77".
C55H75FN2Oe (910), MS (FAB, 3-NBA/LiCl): 917 (M+Li*). Esimerkki 78
5 F
n _ T = ~CHCH0- Q " 1 f T CH3
Cr-v013 ch3
Esimerkin 69 mukaisesti esimerkin 28 kanssa saatiin yhdistettä "Esimerkki 78".
C55H75FN2°e (910), MS (FAB, 3-NBA/LiCl): 917 (M+Li*).
15 Esimerkit 79 - 88
Vaihtoehto A
0 HO _ 1 • OMe 20 °H °K °
0H T 0 fjTjH
sAAA OH
30 Esimerkki 79
O
h3c^Y^o J
n - 4 * I T = -CH CP - » ' jxr " 105155 50
250 mg (0,29 mmol) esimerkin 69 yhdistettä liuotettiin 5 ml:aan etanolia ja lisättiin 2,0 ml 1-norm. natron-lipeän vesiliuosta. Kuuden tunnin sekoittamisen jälkeen huoneenlämpötilassa neutraloitiin 1-norm. suolahapolla ja 5 uutettiin etikkaesterillä (3 x). Yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin kuiviin. Saanto 230 mg (0,27 mmol, 94 %) yhdistettä "Esimerkki 79". C5oHeiN0io (855), MS (FAB, 3-NBA/LiJ): 862 (M+Li*). Vaihtoehto B
io o 0Me
OH OH 0 H HO λIL
oM^ob H \ rtHrf a) >4. 0 0 0
K-T-0 F 0H HO A
°·· A>
20 ('hTX
h3cxch3 ^XIxj o o o Γ Th h 0 N-T-0 H 0H H? ν/^Λ}Η 2 5 OK OK 0
0ΛΛΛν.τ.ο/ H "'oh H
Esimerkki 80 30
F
o = O
T * -ch2ch2-
35 f ^CB
CHj 105155 51 a) 400 mg (0,45 mmol) esimerkin 70 yhdistettä ja kide-p-tolueenisulfonihappoa liuotettiin 20 ml-.aan seosta asetoni/dimetoksipropaani 1:1 ja sekoitettiin huoneenlämpötilassa. 15 minuutin kuluttua liuotin haihdutettiin pois 5 ja jäännös kromatografoitiin silikageelillä (kloroformi/ metanoli 19:1) . Saanto 390 mg (0,42 mol, 93 %) asetonidia. C56H79F2N08 (931) , MS (FAB, 3-NBA/LiCl) : 938 (M+Li*) .
b) 390 mg (0,42 mmol) asetonidia liuotettiin 20 ml:aan etanolia ja lisättiin 5 ml 1-norm. natronlipeän 10 vesiliuosta. Viiden tunnin sekoittamisen jälkeen huoneenlämpötilassa neutraloitiin 2-norm. suolahapolla ja uutettiin etikkaesterillä (3 x) . Yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin kuiviin. Raakatuot-teen annettiin reagoida puhdistamatta enempää.
15 c) Kohdan b) raakatuote liuotettiin 20 ml:aan THF:a ja lisättiin 5 ml 2-norm. suolahappoa. Kahden tunnin sekoittamisen jälkeen lisättiin 100 ml vettä ja uutettiin etikkaesterillä (3 x) . Yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin kuiviin. Flash-kromato- 20 grafoimalla silikageelillä (dikloorimetaani/metanoli 9:1) saatiin 250 mg (0,29 mmol, 68 %) yhdistettä "Esimerkki 80c" .
C52H,3F2N08 (877), MS (FAB, 3-NBA/LiCl) : 884 (M+Li4) .
Esimerkit 81 - 88 25 Esimerkin 79 tai 80 mukaisesti saatiin yhdisteitä "Esimerkit 81 - 88" yhdisteistä 71 - 78.
Taulukko 6 52 105155
Esim. Q T Lähtöaine MS (FAB, 3-NBA/ ______LiJ tai LiCl
5 X
81 -CH2CK2- 71 C50H74FNOg (851) /X-v'-Os^' 858 (M+Li+) H3^Ulr-CH3 ch7 ch3 10 82 F -CK2CK2CK2- 72 C51K76FNC9 (865)
Ky) 672 (M+Li+) 15 H3C^-UyCH3 CK 3 CH3
F
83 -CH2CH2- 73 C53H71F2NC9S
Kyy (935) 20 936 (M+K+)
XyCSj
25 64 p -CH2CH2CH2- 74 C54H73F2K~9S
(94S) 956 (»L i + ) X'Wy' Os^ f(^vCK3 30 Cr‘3 85 *’ F -CH2CH2- 75 C53H71FN203 fp^ (882) 889 (M + Li"*-) 35 pOiNX^CH3 K<^ ch3 105155 53
Esim. Q T Lähtöaine NS (FAB, 3-NBA/ _______LiJ tai Li Cl)
F
66 (j -CH2CH2CH2- 76 C54E73FN20S
AA (896) J CH, 903 <K+Li+) fi'l 3 K^ ch3 o H? 10 67 fj OH OH O C54H73FN2°8 VA f f tr (896) ^V\^0' H '-OH O03 (M + Li + )
Ky ch3 ^ 88 -CH-CH2' 78 ^54^73^2^8
Ky κ CH3 (896)
Ch3 903 (N+Li+ ) ch3 20 Esimerkit 89 - 98
O
H°
OH OH O
25 ΛΛΛ A^kA h
C/ ^ ^^N-T-0 H OH
H
O
HO ^ v AJA 0_ Ka*
30 OH OH O
ΛΛΛ K „ λΜ··, h„ q T\— j. — O jj Or.
H
54 1 05 1 55
Esimerkki 89
O
= H3C-"VS ? 5 Η3° T ~ “ch2ch2_ H3C' 150 mg (0,175 mmol) esimerkin 79 yhdistettä liuo-10 tettiin 10 ml:aan etanolia ja lisättiin 1,75 ml 0,1-norm. natronlipeän vesiliuosta. 10 minuutin sekoittamisen jälkeen huoneenlämpötilassa liuotin haihdutettiin pois. Saanto 150 mg (kvantitatiivinen) natriumsuolaa "Esimerkki 89".
Esimerkit 90 - 98 15 Esimerkin 89 mukaisesti saatiin yhdisteitä "Esimer kit 90 - 98".
55 105155
Taulukko 7
Esim._Q _T_Lähtöaine_ H3C ί 5 90 Yj -CH2CH2- 80 F CH 3 ch3 10
F
91 Av -CH9CH9- 81
O
Ί T
ch3 ch3
F
92 i -CH2CH2CH2- 82
20 Q
ΛυΌν/ ch3 ch3 25 ” φ » A CK3
T I
94 F -CH2CH2CH2- 84
F CA
35 A
AJaL^ch3
S
ch3
Taulukko 7 (jatkoa) 56 1 05 1 55
Esim. _Q_T_Lähtöaine
F
5 (S
95 -CH2CH2- 85 CP^CH3 CH3 10
F
96 ifj -CH2CH2CH2- 86 15 CH3 O CH3 HO _ r 1 . 1 O Na + 20 57 f (7γ) 87
jJJ OH OH O [ K
. N Χ\Λ 0'°'li '' OH
CH3 h ·. 25 O -3 98 - CHCH->- 88 r 1 ^ 1 CK3 30 ^ΑκΊγ^0Η3 ^ ch3 35 105155 57
Esimerkit 99 - 108 H0 Ϊ
X 'V^^ÖH
H-,c ch3 3 X I H I / 5 0 0 0
H H OH
O
HO v >vA
Ξ OH
10 * AAlA
OH OH O Γ^ΐΗΐίί
H H
15
Esimerkki 99 0
h3c "VS
20 K3<: CB3 T = -CH2CH2- tj r* '
*V
400 mg (0,45 mmol) esimerkin 69 asetonidia (ks. esimerkkejä 79 - 88, vaihtoehto B) liuotettiin 40 ml:aan 25 absoluuttista THF:a, lisättiin 0,12 ml (0,90 mmol) tri-etyyliamiinia ja jäähdytettiin 0 °C:seen. Lisättiin 0,07 ml (0,68 mmol) kloorimuurahaishappoetyyliesteriä ja sekoitettiin 15 minuuttia. Sen jälkeen lisättiin tiputtamalla liuos, jossa oli 100 mg (1,3 mmol) glysiiniä 30 12 ml:ssa 0,1-norm. natronlipeän vesiliuosta. Lämmitettiin huoneenlämpötilaan ja sekoitettiin vielä tunnin ajan. Seos kaadettiin veteen, tehtiin happameksi 2-norm. suolahapolla • ja uutettiin etikkaesterillä (3 x). Yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin kuiviin. Jään-35 nös liuotettiin 50 ml:aan THF:a, lisättiin 10 ml 1-norm.
105155 58 suolahappoa ja sekoitettiin neljä tuntia huoneenlämpötilassa. Kaadettiin veteen, uutettiin etikkaesterillä (3 x), yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin kuiviin. Flash-kromatografoimalla silikageelillä 5 (kloroformi/metanoli 7:3) saatiin 230 mg (0,25 mmol, 56 %) yhdistettä "Esimerkki 99".
(912) , MS (FAB, 3-NBA/LiCl) : 919 (M+Li + ) . Esimerkit 100 - 108
Esimerkin 99 mukaisesti saatiin yhdisteitä "Esimer-10 kit 100 - 108".
« · 59 1 05 1 55 *— Ή
< J
03
2 O' O O
I O -—' '—I <—>. rH —' n JN + ° + O +
4J 2 -H (N TO (N H
IN J 2 2 2 vJ
03 Ή Lxj 4- ix4 4 [x4 4
<U vDE Γ" 2 0'S
[υ·Η p» ' 'x·' t'-
—.-3 2*3« SCO 2 <N
^ n >h n o m m <n <ji in οι σ> & in oi n m m nj E U'-'Ch U ·— C"i O'-σ' o' 0 4-1
• JC
U) G> I jc o;
•H *-5 J
c -c: O *C Ή j-> JJ <3 C « > IT, 4-> C c
O CO ·-*-> CO O «5 C h I
•*n 'O O rH (NJ
c — o r*** r^ O >* r-
4J
sC Ή {Λ J c: c
CN
TT·
I I O
<N CS fsj
EXE
u u u
N <N <N
H 2 2 2 u u u
> I I
jp ^
. 5 v CP
\ - ) \ = > \ = J f s <>u «Q-u l. u-OK3 -oo
' : 10® " >f ' V
- . ~ ' Uro «
-· * ΓΟ -R
- E Λ fc, s- -w Ξ ·Η O fH csj —
c in O O O
^ — *""1 rH iH
60 1 05 1 55 o r—. Ή <. ο tn tn mo o 2 rH — rH —
I -H O + O + O
en a <N(C ovjnj. o + +> 2 2 2 2 ro -h
' (N + ' (N + 2 J
m >—i ms ms m + < u <3* ^ vo — ^ «^s m Ή —- Γ- \0 r- ·—. — "-'j x m m m o σ* xo in oi h ii o m mno tn tn o o in h o in σι
S U T rH U^rH CJ — CH
- E ro •H ·Η tn o
•H 0) e JT
o · e 4J tn o
o 4J
vj ^ ,e C Ή «C C3 ·· +J > e tn
h o ro £ £ S
O π X 1 1 ^
:0 W Π Ή I
Λ Ό :c x: o ro >· r~ i
<N
. U I
ΓΗ (N CM
mmm
D U U
H <N (N <N
»r »r ö u u i i i • · ro m ro co . u X X \ „ en , }V Γν e O-5 ä .,-ο-ο ww ϊ "" ~-o «-o- o ^ § 3 t! , ro ^ tn e b o o o
rr - r-l rH rH
61 105155 *~3 '—- ·Η
< iJ
m ζ ι ·η σι σ> "·« σ ^ n m Ο + Ο + Ο + 4J m ·Η Ο ·Η <Ν Ή
Ζ J Ζ J Ζ J
¢01-1 [V|+ CU + Cu + < U νϋ Σ νΟΣ ΌΣ
Cu ·Η -—' — Γ" -—- — Γ-· '—’ —J K n I n I η vomo νο m o (O m ο ιη ιη σ> νο m σ» νο m σ» νο ς υ ^ σ' υ-'Ο' u ^ σ' - e S δ 'σ w ο \ •-Ι G 4-1 *—Ο ο · ο Γ 4-> υ; ο \ c χ. -μ — — κ — J= f - C ·<! /
«BO CZ
· ·*-> > vD \ CO
= S . ^ \ r- r» •h o co / σ -u cc v o «o ( \ /\ _
<N (N
►M 'Ά ^ u run H n < o: n: z \ u-u V < z=
o A
n _ \ ro ” “Ow V ’-jrrc^ I . ~ "b ‘<x? " "b E /-\ v=/ ΐ vo r- ν') cc H i o o \_/ o n f—i '—' »h 62 1 05 1 55
Esimerkkien 89 - 98 mukaisesti esimerkkien 100 -108 yhdisteistä valmistettiin niiden Na-suoloja.
Esimerkit 109 - 118 H0 . ^ ?,
5 h2c CH
0xo 3 rjQ .
οΛΧΛ. /Cöv Q N-T-o · ίΤ 'Oh
H
10
OH OH O
2 5 N-T-0 ^ Jj^JH
H
Esimerkki 109 0 j 20 q . H3C^i^-0 > ‘...CCr h3^ 400 mg (0,45 mmol) esimerkin 69 asetonidia (ks.
25 esimerkkejä 79 - 88, vaihtoehto B) liuotettiin 40 ml:aan absoluuttista THF:a, lisättiin 0,12 ml (0,90 mmol) tri-etyyliamiinia ja jäähdytettiin 0 °C:seen. Lisättiin 0,07 ml (0,68 mmol) kloorimuurahaishappoetyyliesteriä ja sekoitettiin 15 minuuttia. Sen jälkeen lisättiin tiput- 30 tamalla liuos, jossa oli 160 mg (1,3 mmol) tauriinia 12 mlrssa 0,1-norm. natronlipeän vesiliuosta. Lämmitettiin huoneenlämpötilaan ja sekoitettiin vielä tunnin ajan. Seos kaadettiin veteen, tehtiin happameksi 2-norm. suolahapolla ja uutettiin etikkaesterillä (3 x). Yhdistetyt orgaaniset 35 faasit kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin kuiviin. Jään- 63 105155 nös liuotettiin 50 ml:aan THF:a, lisättiin 10 ml 1-norm. suolahappoa ja sekoitettiin neljä tuntia huoneenlämpötilassa. Kaadettiin veteen, uutettiin etikkaesterillä (3 x), yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin MgS04:lla ja haih-5 dutettiin kuiviin.
Flash-kromatografoimalla silikageelillä (dikloori-metaani/metanoli 7:3) saatiin 270 mg (0,28 mmol, 62 %) yhdistettä "Esimerkki 109".
C52H86N2012S (962), MS (FAB, 3-NBA/LiCl): 969 (M+Li1) .
10 Esimerkit 110 - 118
Esimerkin 109 mukaisesti saatiin yhdisteitä "Esimerkit 110 - 118".
t ψ 64 105155 — m < ^ O CO to
CQ ,ΓΗ '—I i—1 rH
Z uJ O rH r-r. rH '— I CN + O + O + n 2 .-h {N rt rs rt •H es J Z 2 2 2 'rt fci+ Uj+ [jli + e *j co s o> s <πε < Γ"~ Γ- ^ ·— CO ^ fai-1 X X 00 X rs
·— U CO H M 1/1 H ror-'-LD
•h m O' O' i/i o' co m σ> σ' to j u — cr> u—σ' u—en 2
' E S
•rH ·Η v to o
•H O 4J
O · o 4J ϋ) o o Λί Jj 0" JZ
fC -H Ä
j<S e O »H <N
·· - > r- r- r** G t0 e O -•H O CO O J CD :0 Ά \ 4J --I |
jC 'G
»e — CT J >»
CN
*T«
i i G
_TS JS CS
G G u H es rs rs
X XX
U U U
I I I
rrt r-i se
v \ X \ U
„ \ ro \ u co \ m rt // x y \ x / \ x o o; f u o )— u o >— u ® // ^_5 \_x ί \ u u 3 ' n ro
^ j= O X Ή X CSX
rt M ’ rH Ή rH
a rH H r-i 105155
rs (N
< 1D CO CO
CO -H rH rH CO
Z J rH — t-i —' o
i O + O + rH
n (N ns rs <fl O +
. Z Z Z Z n -H
* 'P rs+ CN+ Z J
O 3 UyJS C14S tu +
< \£> 00 — vOS
r- es r-vo — — ·— U K ^ m ϊ in ¢1 te eri •H m O id voor- ι/l co o en J m «-I o in r-ι o m σ' oi s u — -h u—rH υ—σι - E e
•H -H
TO 10 o -—l o -U C £ o o J-> M 0 O -n k — n
(3 -H
ur r _ .. jj > en <3< m e m r- r- r~ e o
Ή C CC
n -π x o v- JJ -F- | x Έ
;ί3 X X
X >. r- rs
K
1 U
rs rs rs r z z x
HO U U
rs rs rs
K K X
u u u
I I I
rn
n 'n , O
I Z \ ^ \ (J _ \ o >y\x - \ . ^ \ . "1 '/ \_υ /—\ V-/ __ yJ k-// V// ^
i 1 "-o- 'v-o O
ή -r- rn ^ un
l-1 -i »-< rs rH
rH rH rH
66 105155 < o 03 ·η v) m m 2 J o ·— O--' o — I rH + I + τ—I +
CO O . Ή O -H O -H
—i n j n j n j ' 'C Z + Z + Z + i* ε 1¾ ε < CO — '— O '— CO — [jy—< r- co r- ro r- ro — u x o o x o o x o o •H vDOrH I/O O t-I vO O r-i Λ H O I/) H O 03--(0 ε U'-'H CJ — i—( 0--.-1 ' B Έ ~ •H -H ("η Ό « C n
•H O -P
5 . f "\ u m c ) o p / s. ^ ~ i (Z · — ' ι-s c vD 2 X r- co ··+->> r— /O' r— c v: 0-/ II* ) c .·./1 X—o' X \ / -Λ i >-(..· X)
G 5 <N
H cv v re x > un
U (XX
' ) O-U
° \ co r k/ ^ v i C \ V 1 \ u CO _ \ '•o \ U — - /\_3 e*/ 5 Λ \ χ : j - b = - rH t—I V==/ r—(
JZ jf. rH »H rH
67 105155
Esimerkkien 89 - 98 mukaisesti simerkkien 109 - 118 yhdisteistä valmistettiin niiden Na-suoloja.
W-X-G, W = mallipeptidi (D-analyylipeptidejä)
Mallipeptidien valmistus sappihappoihin kytkentää 5 varten
Esimerkin 21 yhdisteen kytkentään käytettäviä N-päätesuojattuja D-alanyylipeptidejä (suojaryhmä esim. bentsyylioksikarbonyyli tai Boc: tert-butyylioksikarbonyy- li) tai niiden aktiiviestereitä valmistetaan ja karakteri-10 soidaan peptidikemiassa yleisten tavallisten menetelmien mukaisesti (ks. esim. Houben-Weyl, Bände 15/1 ja 15/2).
N-päätteiset suojatut oligo-D-analyylipeptidit kytketään joko aktiiviesterinsä muodossa, esim. N-hydroksi-sukkiini-imidi (OSu)- tai 1-hydroksibentsotriatsoli (OBt) 15 -esterinä tai kondensointireagenssien (esim. disyklohek-syylikarbodi-imidin) avulla lisäämällä rasemisoitumisen estävää reagenssia, esimerkiksi N-hydroksisukkiini-imidiä (HSOu) tai 1-hydroksibentsotriatsolia (HOBt) sappihappo-johdannaisen aminofunktion kanssa.
20 Sen jälkeen poistetaan peptidisuojaryhmä sekä sap- pihappojohdannaisen metyyliesteriryhmä, jolloin tällöin käytetyn ortogonaalisen suojaryhmästrategian avulla - N-päätteinen suojaryhmä voidaan lohkaista esim. hydraamalla (Z) tai asidolyyttisesti (Boc), kun taas sappihappojohdan-25 naisen metyyliesteriryhmä saippuoituu - myös osittain suojattujen sappihappopeptidikonjugaattien synteesi on mahdollista .
Kulloisetkin välituotteet sekä lopputuote puhdistetaan yleensä kolonnikromatografisesti ja ohkokromatografi-30 sesti sekä karakterisoidaan ’H-NMR-spektroskopian avulla.
ββ 105155
Esimerkit 119 - 121
HO
: CQOH
j H- D- AI a-D-Ala- NH- (CH2)20 ^--—__ 10 ΛΛ
GS
Esimerkki 119 Z-D-Äla-D-Äla-NH-(CH2) 2-GS-OCH3 485 mg (1,04 mmol) esimerkin 21 yhdistettä ja 15 467 mg (1,14 mmol) yhdistettä Z-D-Ala-D-Ala-OSu liuotetaan 10 ml:aan dikloorimetaania ja sekoitetaan 1,5 tuntia huoneenlämpötilassa. Liuottimen poistamisen jälkeen vakuumis-sa, saadaan 930 mg kiinteää jäännöstä, joka kromatografoi-daan piihappogeelipylväässä (50 x 2 cm, Matrex Silicagel 20 70 - 200 pm). Eluentti: dikloorimetaani/metanoli/etikka- happo 85:10:5.
Fraktiot 3 ja 4 sisältävät haluttua tuotetta; fraktio 4 sisältää lisäksi vielä N-hydroksisukkiini-imiöiä, joka liuottimen poistamisen jälkeen, hiertämällä jäännöstä 25 veden tai vahvasti laimennetun suolahapon kanssa, voidaan poistaa.
Molempien fraktioiden puhdistamisen jälkeen saadaan 450 mg (57 %) yhdistettä "Esimerkki 119" valkeana kiinteänä aineena.
30 Rf (dikloorimetaani/metanoli/etikkahappo 85:10:5): 0,76 Rf (n-butanoli/etikkahappo/vesi 40:40:10): 0,89.
Esimerkki 120 N-D-Ala-D-Ala-NH- (CH2) 2-GS -0CH3 280 mg (0,37 mmol) yhdistettä Z-D-Ala-D-Ala-NH-35 (CH2)j-GS-OCHj liuotetaan 5 ml:aan metanolia. Reaktioastia 69 105155 huuhdellaan useaan kertaan neutraalilla kaasulla, lisätään 28 mg hydrauskatalyyttiä (palladium/aktiivihiili, 10 %) ja hydrataan kolme tuntia huoneenlämpötilassa. Mainitun ajan kuluttua ohkokromatografiän perusteella (dikloorimetaani/ 5 metanoli/etikkahappo 85:10:5) läsnä ei ole enää reagens-sia. Reaktioseos suodatetaan membraanisuodattimen läpi (Schleicher u. Schuell, RC 58, 0,2 μτη) , suodos haihdutetaan kuiviin rotaatiohaihduttimessa, jäännökseen lisätään kaksi kertaa dietyylieetteriä ja haihdutetaan uudelleen 10 kuiviin rotaatiohaihduttimessa. Saadaan 225 mg (98 %) val-keaa-keltaista jauhemaista kiinteää ainetta, joka liuotetaan metanoliin ja sekoitetaan 10 minuuttia aktiivihiiltä lisäten huoneenlämpötilassa. Suodattamisen, liuottimen vakuumissa haihduttamisen ja kuivaamisen jälkeen saadaan 15 190 mg (83 %) yhdistettä "Esimerkki 120" valkeana jauhee na .
R{ (n-butanoli/etikkahappo/vesi 40:40:10): 0,55.
Esimerkki 121
H-D-Ala-D-Ala-NH- (CH2) 2-GS-OH
20 120 mg (O', 19 mmol) yhdistettä H-D-Ala-D-Ala-Nh- (CH2) 2-GS-OCH3 liuotetaan 2 ml:aan metanolia, lisätään tiputtamalla huoneenlämpötilassa 2 ml 0,1-norm. natriumhyd-roksidin vesiliuosta ja sekoitetaan neljä tuntia samassa lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseoksen pH säädetään 2-25 norm, suolahapon vesiliuoksella arvoon 3 ja haihdutetaan rotaatiohaihduttimessa kuiviin.
Jäännöstä hierretään pienessä etanolimäärässä ja suodatetaan liukenematon aines pois. Suodos haihdutetaan kuiviin, hierretään kerran eetterin ja kerran pentaanin 30 kanssa, suodatetaan ja kuivataan. Saadaan 107 g yhdistettä > ' "Esimerkki 121" valkeana kiinteänä aineena (sisältää vielä noin 10 % natriumkloridia). Saanto 85 %.
Rf (n-butanoli/etikkahappo/vesi 40:40:10): 0,54.
Samalla tavalla kuin yhdistettä "Esimerkki 121", 35 saatiin yhdistettä "Esimerkki 122".
70 105155
Esimerkki 122
Z-D-Ala-D-Ala-NH-(CH2) 2-GS-OH
Z - bentsyylioksikarbonyyli
Esimerkki 123 5 H? co2ch3 CONHCH^CH^OCH, Γ«|Λ /s ^K^C0C1 4Νν^·0·^κ4·>οΗ
10 ^ H
3) V H° \^s^C02H
CONHCH2CH2OCH3 I
15 rn
^ N^c - NH ^ OH
U
O
a) 500 mg:aan (2,23 mmol) happokloridia (valmis-20 tettu vastaavasta karboksyylihaposta antamalla reaktion tapahtua tionyylikloridin ja katalyyttisen DMF-määrän kanssa, kaksi tuntia kiehuttaen), joka oli 25 ml:ssa mety-leenikloridia, lisättiin 0 °C:ssa tiputtamalla 1,04 g (2,23 mmol) yhdistettä "Esimerkki 21" seoksessa 5 ml mety-25 leenikloridia/1 ml trietyyliamiinia. Tämän jälkeen sekoitettiin kaksi tuntia huoneenlämpötilassa. Reaktioseos kaadettiin veteen ja vesifaasi uutettiin metyleenikloridilla (3 x). Yhdistetyt orgaaniset faasit pestiin kyllästetyllä NaHCOj-liuoksella (1 x) ja kuivattiin (MgS0<). Poistamalla 30 liuotin ja kromatografoimalla silikageelillä (etikkaeste-ri/metanoli = 15:1) saanto oli 314 mg.
b) 100 mg (1,49 mmol) kohdan a) mukaisesti saatua tuotetta liuotettiin 20 ml:aan etanolia ja sekoitettiin 4 ml:n kanssa 1-norm. NaOH:a yön ajan. Neutralointia var- 35 ten lisättiin 4 ml suolahappoa ja uutettiin etikkaesteril- 71 105155 lä. Yhdistetyt orgaaniset faasit pestiin kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Poistamalla liuotin saatiin 89,1 mg yhdistettä "Esimerkki 123". C36H55N3°8 (657), MS (FAB, 3-NBA/LiJ): 664 (M+Li*).
5 Esimerkki 124 H? Xk^/C02CH3 coci | HT>
10 ^K^C02CH3 H2\^v OH
H? . * ^ro H
a) aY^32h 15 % J-' o^i^h C V~' 0 H 'oh ώοο2Κ 20
Esimerkin 123 mukaisesti saatiin yhdistettä "Esimerkki 124".
C33H4£N206 ( 600), MS (FAB, 3-NBA/LiCl): 607 (M + Li*), 613 (M+2Li-H ) *, 619 (M+3Li-2H)\ 35 Laktonikomponenttien valmistusohje esimerkkiä 71 varten julkaisun DE 3 819 999 mukaisesti.
4(R)-hydroksi-6(S)-[ (2,4-di-isopropyyli-6-p-fluori-f enyyli ) fenoksimetyy 1 i ] tetrahydro - 2H-pyran -2-onin synteesi 30 Vaihe 1 2,4-di-isopropyylifenoli
Seosta, jossa on 145 g (0,65 mol) 3,5-di-isopropyy-li-2-hydroksibentsoehappoa (XI), 540 ml (588 g, 4,55 mol) kinoliinia ja 7,5 g (0,024 mol) kuparikromiittia (2CuO· 35 Cr203 ) sekoitetaan kaksi tuntia 190 °C:ssa (ulkolämpötila 72 105155 225 °C). Jäähdytetään noin 10 °C:seen, tehdään happameksi edelleen jäähdyttäen noin litralla puoliväkevää suolahappoa pH-arvoon 1-2, uutetaan tolueenilla ja uute pestään 2-norm, suolahapolla, sitten vedellä ja sitten NaHC03-5 liuoksella. Kuivataan, suodatetaan, haihdutetaan kuiviin ja tislataan suurtyhjössä. Saadaan 105 g otsikon yhdistettä XIII vaaleankeltaisena öljynä, kp. 81 - 84 °C/0,2 tor-ria.
^-NMR (CDClj) : δ 1,20 (6H, d) ; 1,25 (6H, d) ; 3,00 (2H, 2 x 10 hept.); 4,10 (1H, s, br) ,· 6,5 0 - 7,0 0 (3H, m).
Vaihe 2 2,4-di-isopropyyli-6-bromifenoli 95 °C:n lämpöiseen liuokseen, jossa on 102,3 g (0,57 mol) 2,4-di-isopropyylifenolla 900 ml:ssa jääetik-15 kaa, lisätään 1 g rautajauhetta, sitten tiputtamalla 101 g (32,2 ml, 0,63 mol) bromia 90 minuutin kuluessa. Sekoitetaan vielä tunnin ajan 100 °C:ssa, jäähdytetään, reaktio-seos jaetaan tolueeniin ja veteen liukeneviin osiin ja tolueenifaasi pestään NaHC03-liuoksella. Kuivataan, suoda-20 tetaan, haihdutetaan kuiviin ja jäännös tislataan suurtyh jössä. Saadaan 125 g otsikon yhdistettä vaaleankeltaisena öljynä, kp. 85 °C/0,15 torrin vakuumissa.
Ή-NMR (CDClj) : δ 1,20 (6H, d) ; 1,25 (6H, d) ; 2,80 (1H, hept.); 3,25 (1H, hept.); 5,35 (1H, s); 6,87 - 7,20 (2H, 25 m) .
MS (79eV) : m/e = 256/258 (M*), 241/243 (M*-CH3).
Vaihe 3 l-bentsyylioksi-2,4-di-isopropyyli-6-bromibentseeni
Suspensiota, jossa on 166,5 g (1,2 mol) kaliumkar-30 bonaattia 124 g:ssa (0,48 mol) edellä mainittua bromifeno-: lia, 91,52 g (0,12 mol) bentsyylikloridia ja 2 litraa 2- butanonia, lämmitetään kiehuttaen 24 tuntia.
Jäähdytetään, epäorgaaninen kiinteä aine suodatetaan pois, suodos haihdutetaan kuiviin vakuumissa ja jään-35 nös jaetaan tolueeniin ja veteen liukeneviin osiin. To- 73 105155 lueenifaasi pestään kyllästetyllä keittosuolaliuoksella, kuivataan, suodatetaan ja haihdutetaan kuiviin. Jäännös kromatografoidaan silikageelillä sykloheksaani/tolueeni-seoksella 9:1. Saadaan 155 g otsikon yhdistettä värittömä-5 nä öljynä.
Vähäiset bentsyylikloriditähteet poistetaan suur-tyhjössä. Puhdistaminen voidaan suorittaa myös tislaamalla (kp. 150 °C/0,15 torria).
1H-NMR (CDClj) : δ 1,18 (6H, d) ; 1,22 (6H, d) ; 2,80 (1H, 10 hept.); 3,32 (1H, hept.); 4,90 (2H, s); 6,93 - 7,60 (7H, m) .
MS (70eV): m/e = 346/348 (M*), 267, 254/256, 91.
Vaihe 4 l-bentsyylioksi-2,4-di-isopropyyli-6-p-fluorifenyy-15 li-bentseeni
Valmistetaan Grignard-yhdiste 48,62 g:sta (0,14 mol) vaiheen 3 bromidia ja 3,53 g:sta (0,147 mol) Mg-lastuja 120 ml:ssa absoluuttista THF:a (= 60 °C, 1 tunnin aikana).
20 Tämä Grignard-liuos lisätään nopeasti liuokseen, jossa on 31,08 g (0,14 mol) 4 - fluorijodibentseeniä ja 3,23 g (2,8 mmol) tetrakis(trifenyylifosfiini)palladiumia (O) 140 ml-.ssa absoluuttista THF:a. Sisälämpötila kohoaa 15 minuutin kuluessa 55 - 60 °C:seen. Seitsemän minuutin ” ‘ 25 kuluttua muodostuu sakkaa. Sekoitetaan tunnin ajan 50 - 58 °C:ssa, annetaan olla yön ajan huoneenlämpötilassa, jaetaan eetteriin ja l-norm. suolahappoon liukeneviin osiin, eetterifaasi pestään l-norm. suolahapolla, sitten vedellä ja sitten kyllästetyllä NaHC03-liuoksella. Kuiva-30 taan, suodatetaan ja haihdutetaan kuiviin. Tarvittaessa tuote puhdistetaan kromatografoimalla silikageelillä syk-loheksaani/tolueeni-seoksella 4:1 tai tislaamalla (kp.
· 180 °C/0,3 torria). Saadaan 49,3 g otsikon yhdistettä vä rittömänä kiinteänä aineena,· sulamispiste 65 - 67 °C.
74 105155 XH-NMR (CDClj) : δ 1,30 (12H, d) ; 2,95 (1H, hept. ) ; 3,45 (1H, hept.); 4,40 (2H, s); 6,90 - 7,80 (11H, m).
MS (Cl): m/e = 363 (M+H*) , 362 (M+) , 285, 263.
Vaihe 5 5 2,4-di-isopropyyli-6-p-fluorifenyyli-fenoli
Liuokseen, jossa on 49,3 g (0,136 mol) vaiheen 4 bentsyylieetteriä litrassaq etikkaesteriä ja 100 ml jää-etikkaa, lisätään 4 g 10-%:ista Pd-hiiltä ja ravistellaan 20 minuuttia vetyatmosfäärissä (H2:n sitoutuminen vilkas-10 ta) . Katalyytti suodatetaan pois, haihdutetaan kuiviin, jäännös liuotetaan useaan kertaan tolueeniin ja haihdutetaan kunakin kertana kuiviin vakuumissa. Saadaan 34,4 g otsikon yhdistettä värittömänä öljynä, kp. 115 °C/0,1 tor-ria.
15 aH-NMR (CDClj, 270 MHz): δ 1,25 (6H, d) ; 1,29 (6H, d) ; 2,87 (1H, hept.); 3,31 (1H, hept.); 4,95 (1H, s, br); 6,88 (1H, d) ; 7,08 (1H, d) ; 7,18 (2H, m); 7,45 (2H, m).
MS (70eV) : m/e = 272 (M*), 257 (M*-CH3).
Vaihe 6 20 6(S)-[(2,4-di-isopropyyli-6-p-fluorifenyyli)fenok- simetyyli]-3,4,5,6-tetrahydro-2(R,S)-metoksi-4(R)-(t-butyylidifenyylisilyyoksi)-2H-pyraani
Suspensioon, jossa on 27,6 g (0,2 mol) kaliumkarbonaattia ja spaatelin kärjellinen hydrokinonia 250 ml.-ssa · · 25 abs. DMSO:a, lisätään 27,2 g (0,1 mol) vaiheen 5 fenolia.
Sekoitetaan tunnin ajan huoneenlämpötilassa ja lisätään sitten liuos, jossa on 56 g (0,11 mol) 6(S)-jodi-metyyli-3,4,5,6-tetrahydro-2(R,S)-metoksi-4(R)-(t-butyylidifenyy-lisilyylioksi)-2H-pyraania (ks. valmistusta julkaisusta 30 EP-A 0 216 127, R, = t-butyylidifenyylisilyyli) 250 mlrssa .· abs. DMSO:a. Sekoitetaan neljä tuntia 50 - 55 °C:n sisälämpötilassa (DC (silikageeli, 1. kehitys sykloheksaani/ etikkaesteri-seoksella 9:1, 2. kehitys sykloheksaani/etik-kaesteri-seoksella 15:1) osoittaa jodidin täydellisen rea-35 goitumisen (Rf 0,5), jonkin verran jäljellä on lähtöfenolia 75 105155 (Rf 0,7), pääasiallisesti kaavan V tuotetta (Rf 0,6). Annetaan jäähtyä ja reaktioseos jaetaan eetteriin ja puolikyl-lästettyyn keittosuolaliuokseen liukeneviin osiin. Vesi-faasi uutetaan vielä kerran eetterillä. Yhdistetyt orgaa-5 niset faasit pestään keittosuolaliuoksella, kuivataan
MgS04:lla, suodatetaan ja haihdutetaan kuiviin. Raakatuote kromatografoidaan silikageelillä tolueeni/sykloheksaani-seoksella 2:1, sitten 100-%:isella tolueenilla, sitten tolueeni/etikkaesteri-seoksella 30:1. Saadaan 51 g otsikon 10 yhdistettä värittömänä hartsina.
XH-NMR (CDClj) : δ 1,10 (9H, s); 1,28 (12H, d) ; 1,4 - 2,2 (4H, m); 2,93 (2H, 2 x hept.); 3,40 (2H, m); 3,52 (3H, s); 3,97 - 4,40 (2H, qui + m); 4,87 (1H, dd) , 6,87 - 7,90 (16H, m).
15 MS (CI): m/e = 654 (M*), 597 (M'- tert-bu) , 539, 519, 323, 293, 135, 127.
Vaihe 7 6 (S)-[2,4-di-isopropyyli-6-p-fluorifenyyli)fenoksi-metyyli]-3,4,5,6-tetrahydro-2(R,S)-hydroksi-4(R)- 20 (t-butyylidifenyylisilyylioksi)-2H-pyraani
Liuosta, jossa on 40,2 g (61,4 mmol) laktolieet-teriä vaiheesta 6 kolmessa litrassa THF:a, 3 litraa vettä, 4,2 litraa jääetikkaa, sekoitetaan 24 tuntia 80 85 °C-.ssa iulkolämpötila) . Liuotin poistetaan vakuumissa .. 25 ja jäännöstä haihdutetaan kolme kertaa tolueenin kanssa vakuumissa. Kromatografoimalla sykloheksaani/etikkaesteri-seoksella 12:1 kahden litran läpi silikageeliä saadaan 33,4 g (saanto 85 %) otsikon yhdistettä värittömänä amorfisena jauheena.
30 MS (FAB): m/e = 640 (M‘), 5129, 367, 323, 283, 271, 257. Vaihe 8 6 (S)- [2,4-di-isopropyyli-6-p-fluorifenyyli)fenoksi-metyyli] -3,4,5,6-tetrahydro-4 (R) - (t-butyylidifenyylisilyylioksi) -2H-pyran-2-oni 35 Liuokseen, jossa on 33,4 g (52,1 mmol) vaiheen 7 laktolia ja 19,25 g (52,1 mmol) tetrabutyyliammoniumjodi- 76 105155 dia 2,5 litrassa absoluuttista metyleenikloridia, lisätään sekoittaen ja jäähdyttäen 46,9 g (208,4 mmol) N-jodisuk-kiini-imidiä. Sekoitetaan valolta suojattuna typen suojaamana tunnin ajan 10 °C:ssa, 20 tuntia huoneenlämpötilassa.
5 Reaktioliuos pestään vedellä, sitten kaksi kertaa NaHS03-liuoksella, sitten kyllästetyllä NaCl-liuoksella, kuivataan, suodatetaan ja haihdutetaan kuiviin. Jäännös liuotetaan pieneen määrään metyleenikloridia ja suodatetaan syk-loheksaani/etikkaesteri-seoksen 98:2 kanssa silikageelin 10 läpi. Saadaan 32,1 g otsikon yhdistettä värittömänä hartsina.
1H-NMR (CDC13, 270 MHz): δ 1,06 (9H, s); 1,23 (6H, d) ; 1,26 (6H, d); 1,59 (2H, m); 2,41 (1H, dd); 2,59 (1H, m); 2,90 (1H, hept.); 3,36 (1H, hept.); 3,48 (2H, ABX:n AB); 4,29 15 (1H, qui); 4,80 (1H, m); 6,96 (1H, d); 7,03 (2H, m); 7,10 (1H, d); 7,36 - 7,52 (8H, m); 7,58 - 7,73 (4H, m) MS (70eV, 70 °C) : m/e = 638 (M*), 581 (M*-tert-bu) , 539 (581 - propeeni), 283, 199 Vaihe 9 20 4(R)-hydroksi-6(S)-[2,4-di-isopropyyli-6-p-fluori- fenyyli)fenoksimetyyli]tetrahydro-2H-pyran-2-oni
Liuokseen, jossa on 31,0 g (48,5 mmol) vaiheen 8 silyyliyhdistettä 1,5 litrassa tetrahydrofuraania (suodatettu emäks. Al203:n läpi), lisätään 11,65 g (194 mmol) 25 jääetikkaa, sen jälkeen 45,92 g (145,5 mmol) tetrabutyyli-ammoniumfluoridi-trihydraattia. Sekoitetaan 20 tuntia huoneenlämpötilassa. Liuottimet poistetaan vakuumissa ja jäännös jaetaan heti eetteriin ja veteen liukeneviin osiin. Vesifaasi uutetaan vielä kaksi kertaa eetterillä. 30 Yhdistetyt orgaaniset faasit pestään kyllästetyllä keitto-suolaliuoksella, kuivataan MgS0„:lla, suodatetaan ja haihdutetaan kuiviin. Jäännös liuotetaan tolueeniin ja haihdutetaan kuiviin vakuumissa. Raakatuote kromatografoidaan 2 kg :11a silikageeliä sykloheksaani/etikkaesteri-seoksella 77 1 05 1 55 1:1. Saadaan 15,7 g (saanto 81 %) otsikon yhdistettä värittömänä kiinteänä aineena, sulamispiste 145 - 147 °C. "H-NMR (CDC13, 270 MHz): δ 1,25 ja 1,27 (12H, 2 x d) ; 1,67 (1H, s, br.); 1,76 (1H, dtd) ; 1,87 (1H, ddd) ; 2,58 (1H, 5 ddd); 2,69 (1H, dd); 2,91 (1H, hept.); 3,39 (1H, hept.); 3,54 (2H, ABX: n AB); 4,38 (1H, qui) ; 4,68 (1H, m); 6,97 (1H, d); 7,10 (3H, d+m); 7,51 (2H, m) MS (FAB) : m/e = 400 (M+) , 257
Laktonikomponenttien valmistusohje esimerkkiä 73 10 varten julkaisun DE 3 292 913 mukaisesti.
Vaihe 1 2-bromi-6-isopropyy1i-feno1i 198,1 ml (3,85 mol) bromia tiputettiin -5 0 °C:ssa liuokseen, jossa oli 470 g natriumhydroksidia 15 2 litrassa vettä. Seosta sekoitettiin vielä 10 minuuttia tässä lämpötilassa. Syntynyt natriumhypobromidiliuos tiputettiin -5-0 °C:ssa liuokseen, jossa oli 464 g 40-%:ista dimetyyliamiini-vesiliuosta (4,11 mol) 50 ml.-ssa vettä. Seosta sekoitettiin vielä 30 minuuttia, sitten orgaaninen 20 faasi erotettiin ja vesifaasi uutettiin kaksi kertaa 750 ml:11a metyleenikloridia. Yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin nopeasti magnesiumsulfaatilla ja suodatettiin. Suodos tiputettiin -10 °C:ssa liuokseen, jossa oli 500 g (3,67 mol) orto-isopropyylifenolia 900 ml:ssa metyleeni-' 25 kloridia. Kun suodoksesta oli lisätty noin 2/3, muodostui kiinteää ainetta ja reaktioseos tuli viskoosiseksi ja vaikeasti sekoitettavaksi. -10 °C:ssa lisättiin 500 ml metyleenikloridia ja seosta sekoitettiin edelleen tunnin ajan. Kiinteä aine suodatettiin erilleen, pestiin pienellä mää-30 rällä kylmää metyleenikloridia, suspendoitiin 1,5 litraan - ‘ 2-norm. rikkihappoa ja sekoitettiin huoneenlämpötilassa, kunnes kaikki kiinteä aine oli muuttunut öljyksi. Orgaaninen faasi erotettiin, vesifaasi uutettiin metyleeniklori-dillä. Yhdistetyt orgaaniset faasit pestiin keittosuola-35 liuoksella, kuivattiin ja liuotin poistettiin vakuumissa.
78 1 05 1 55 Jäännös tislattiin vesivakuumissa 30 cm:n Vigreux-kolonnin läpi.
391,7 g (1,82 mol) väritöntä öljyä, kp. 122 - 124 °C/21 torria; saanto 49,6 %.
5 NMR (60 MHz): δ 1,20 (d, 6H, CH3) ; 3,23 (sept., 1H, CH) ; 5,42 (s, 1H, OH); 6,4 - 7,2 (M, 3H, arom. -H).
Vaihe 2 2-(p-fluorifenyyli)-6-isopropyyli-fenoli a) 18,7 g:aan (0,77 mol) magnesiumlastuja lisättiin 10 kolme jodikidettä ja lisäyskohtaa kuumennettiin kuumailma- laitteella (RFön), kunnes jodihöyryt kolvissa olivat nähtävissä. Jäähdytettiin huoneenlämpötilaan ja lisättiin 20 ml absoluuttista THF:a. 131,3 g (0,75 mol) p-bromifluoribent-seeniä pantiin 500 ml:n tiputussuppiloon ja siitä lisät-15 tiin noin 2 ml reaktiokolviin. Reaktioseoksen ruskea väri katosi nopeasti ja seurasi voimakas lämmönkehittyminen kiehumiseen asti. Reaktioseokseen lisättiin heti edelleen 50 ml absoluuttista THF:a ja tiputussuppilossa ollut p-bromifluoribentseeni laimennettiin 200 ml :11a THF:a. Tätä 20 liuosta lisättiin sitten tiputtamalla siten, että lievä kiehuminen saatiin pidetyksi käynnissä. Sen jälkeen reak-tioseosta kiehutettiin vielä tunnin ajan paluujäähdyttäjän alla ja sitten jäähdytettiin 50 °C:seen.
b) Toisessa kolvissa liuoksesta, jossa oli 52,0 g 25 (0,24 mol) 2-bromi-6-isopropyyli-fenolia 150 ml:ssa abso luuttista THF:a, karkotettiin liuennut happi johtamalla 20 minuutin ajan liuoksen läpi typpeä. Lisättiin 1,7 g (1,5 mmol) tetrakis(trifenyylifosfiini)palladiumia(O) pitämällä happikontakti mahdollisimman pienenä.
30 Sitten vaiheen a) Grignard-1iuos siirrettiin kak- soiskanyylin avulla (,,RFlex-Needle", firma Aldrich) typpi-paineen alaisena tähän liuokseen, jolloin tapahtui lämmön kehittymistä. Siirron nopeus valittiin sellaiseksi, että lievää kiehumista voitiin ylläpitää. Sen jälkeen lämmitet-35 tiin vielä kuusi tuntia kiehuttaen. Reaktioseos jäähdytet- 79 105155 tiin ja kaadettiin seokseen, jossa oli 500 g jäitä ja 100 ml väkevää suolahappoa. Orgaaninen faasi erotettiin ja vesifaasi uutettiin 3 x 100 ml :11a eetteriä. Yhdistetyt orgaaniset faasit pestiin 100 ml :11a kyllästettyä keitto-5 suolaliuosta, kuivattiin ja liuotin poistettiin. Jäännös tislattiin vakuumipumpun avulla 30 cm-.n Vigreux-kolonnin läpi. Esitisleen jälkeen (30 - 65 °C/0,2 torria) tislautui puhdas tuote (kp. 107 - 109 °C/0,5 torria) värittömänä öljynä, joka vasta-astiassa ja osittain myös jo tislaus-10 sillassa kiteytyi (sp. 44 - 46 °C) . Sillan tukkeutumisen estämiseksi tämä lämmitettiin noin 50 °C:seen. Saanto 37.8 g otsikon yhdistettä (164 mmol); 68,4 % teoreettisesta. GC-analyysi (30 m fused silica-Säule DB-5 "polydife-nyylidimetyylisiloksaani", kerroksen paksuus 0,25 μτη, si- 15 säläpimitta 0,32 mm, 180 °C, inj. 240 °C:ssa, 1 baari H2) : tret: 4,4 6 min; puhtaus > 99,9 %.
NMR (270 MHz): δ 1,28 (d, 6H, CH3) ; 3,32 (sept., 1H, CH) ; 5.08 (s, 1H, OH); 6,9 - 7,5 (m, 7H, arom. -H).
MS (DCI, isobutaani) : m/e = 231 (M+H*) , 230 (M’), 215 (M'~ 20 CH3) .
Vaihe 3 2-(p-fluorifenyyli)-4-tiosyanaatto-6-xsopropyyli-fenoli
Suspensiota, jossa oli 70,9 g (838 mmol, 5,0 ekvi-25 valenttia) natriumtiosyanaattia 200 ml:ssa metanolia, sekoitettiin 20 minuuttia huoneenlämpötilassa. Lisättiin 40,0 g (173,8 mmol, 1,0 ekvivalenttia) 2-(p-fluorifenyyli)-6 - isopropyyli - fenolia ja seosta sekoitettiin 20 minuuttia. 14,32 ml (277,8 mmol, 1,6 ekvivalenttia) bromia 30 liuotettiin 50 ml:aan metanolia (eksoterminen) ja tämä liuos tiputettiin 15 - 20 °C-.ssa 20 minuutin aikana edellä mainittuun reaktioliuokseen. Reaktioseos värjäytyi keltaiseksi ja fenoli liukeni täydellisesti. Reaktioseosta sekoitettiin 30 minuuttia. DC-analyysi (tolueeni/syklohek-35 saani 1:1) osoitti lähtöaineen reagoineen täydellisesti 80 105155 (Rf = 0,54). Otsikon yhdisteen ohella (Rf = 0,32) epäpuhtautena syntyi vain vähäisin määrin vastaavaa para-bromi-yhdistettä, joka kromatografoitui lähtöaineen kanssa (R£ = 0,54), mutta voidaan erottaa muunlaisen värjäytyrnisen pe-5 rusteella. Reaktioseos kaadettiin seokseen 400 g jäitä/ 400 ml 2-norm. suolahappoa ja uutettiin 4 x 200 ml :11a tolueenia. Uutteet pestiin natriumsulfiitin vesiliuoksella, suodatettiin, pestiin kyllästetyllä keittosuolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa.
10 Jäljelle jäänyt keltainen kiinteä aine liuotettiin 500 ml:aan kuumaa sykloheksaania ja lisättiin 5 g aktiivi-hiiltä. Sen jälkeen kiehutettiin paluujäähdyttäjän alla viisi minuuttia ja kuuma suspensio suodatettiin vakuumissa. Erilleen suodatettu aktiivihiili pestiin sen jälkeen 15 20 ml :11a kuumaa sykloheksaania. Lähes väritön suodos jäähtyi hitaasti ja jäähdytettiin sitten vielä 12 tuntia 10 °C:ssa.
Värittömät kiteet (otsikon yhdisteet) suodatettiin erilleen ja kuivattiin vakuumissa. 47,6 g:n (165,7 mmol) 20 saanto vastaa 95,3 %:n saantoa. Sulamispiste 94,5 - 96 °C. NMR (60 MHz): δ 1,26 (d, 6H, CH3) ; 3,32 (sept., 1H, CH) ; 5,46 (s, 1H, OH); 7,0 - 7,6 (m, 6H, arom.-H).
MS (DCI, isobutaani) : m/e = 288 (Μ+ΗΊ , 272 (M*-CH3) ; 261.
VAihe 4 25 2-(p-fluorifenyyli)-4-(p-fluorifenyylitio)-6-iso- propyyli-fenoli p-fluorifenyylimagnesiumbromidin THF-liuos (100 ml) [3,11 g:sta (128 mmol) magnesiumia ja 22,0 g:sta (13,8 ml, 126 mmol) p-bromifluoribentseeniä] valmistettiin, kuten 30 vaiheessa 2. Lisättiin tiputtamalla liuos, jossa oli 6,04 g (21 mmol) 2-(p-fluorifenyyli)-4-1iosyanaatto-6-isopropyyli-fenolia (vaiheesta 3) 50 ml:ssa THF:a, 50 °C:ssa ja sekoitettiin vielä kaksi tuntia 40 50 °C:ssa. Seos jäähdytettiin ja kaadettiin 500 ml.-aan 35 jääkylmää 2-norm. suolahappoa. Uutettiin kolme kertaa 81 105155 200 ml :11a eetteriä. Yhdistetyt uutteet pestiin keittosuolaliuoksella, kuivattiin ja liuotin poistettiin vakuumis-sa.
Jäljelle jäänyt öljy (otsikon yhdiste) (7,5 g, 5 21 mmol, saanto «100 %) oli DC-analyysin (sykloheksaani/ etyyliasetaatti 9:1) ja aH-NMR-arvojen perusteella puhdasta .
NMR (60 MHz): δ 1,25 (d, 6H, CH3) ; 3,31 (sept., 1H, CH) ; 5,22 (S, 1H, OH); 6,8 - 7,8 (m, 10H, arom.-H).
10 MS (DCI, isobutaani) : m/e = 357 (M+H+) ; 356 (M*) .
Vaihe 5 (3R,5S)-6-metyylisulfonyylioksi-3,5-O-isopropyli- deeni-3,5-dihydroheksaanihappo-tert-butyyliesteri
Liuokseen, jossa oli 175,7 g (676 mmol) (3R,5S)-6-15 hydroksi-3,5-0-isopropylideeni-3,5-dihydroksiheksaanihap- po-tert-butyyliesteriä (ks. EPÄ 0 319 847), 1,7 litrassa absoluuttista metyleenikloridia ja 1,7 litraa absoluuttista pyridiiniä, tiputettiin 0-5 °C:ssa 116,2 g (1,01 mol, 1,5 ekvivalenttia) metaanisulfonihappokloridia. Sekoitet-20 tiin jäillä jäähdyttäen 90 minuuttia, sitten reaktioseos konsentroitiin 30 °C:ssa vakuumissa ja tolueeniin liuottamisen jälkeen pääosa jäljellä olevasta pyridiinistä poistettiin imemällä vakuumissa. Jäännös liuotettiin tolueeniin ja pestiin kaksi kertaa vedellä, kerran kyllästetyllä 25 natriumvetykarbonaattiliuoksella, kerran kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella, sitten kuivattiin, suodatettiin ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäljelle jäänyt öljy kiteytyi huoneenlämpötilassa muutamassa minuutissa käytännöllisesti katsoen täydellisesti. Kiteet suodatettiin 30 erilleen, murskattiin imusuodattimella, pestiin kylmällä - : petrolieetterillä ja kuivattiin vakuumissa.
Saatiin 192,0 g (568 mmol) väritöntä kiinteää ai-, netta, sp. 75 - 76 °C. Konsentroimalla suodos, suodatta malla kiteet erilleen ja pesemällä ne pienellä määrällä 35 kylmää petrolieetteriä, saatiin edelleen 34,8 g (103 mmol) 82 105155 lievästi epäpuhdasta tuotetta, sp. 69 - 73 °C. Otsikon yhdisteen kokonaissaanto: 226,8 g (671 mmol, 99,3 %) .
NMR (270 MHz, CD2C12) : δ 1,18 - 1,33 (m, 1H, CH2, aksiaalinen); 1,36 (s, 3H, CH3) ; 1,42 (s, 9H, tert-bu) ; 1,46 (s, 5 3H, CH3) ; 1,56 (dt, 1H, CH2, äquat.) ; 2,36 (ABX-systeemin AB-osa, 2H, CH2) ; 3,03 (s, 3H, CH3-S02) ; 4,09 - 4,23 (m, 3H, OCHj ja O-CH); 4,24 - 4,37 (m, 1H, OCH).
MS (DCI-isobutaani) : m/e = 283 (M+H+ - > = ) .
Vaihe 6 10 {2,2-dimetyyli-4(S)-[(2-p-fluorifenyyli-4-p-fluori- fenyylitio-6-isopropyyli)fenoksimetyyli]-6(R)-tert-bu toksikarbonyylime tyyli }-1,3-dioksolaani
Liuokseen, jossa oli 4,0 g (11,2 mmol) 2-(p-fluori-fenyyli)-4-p-fluorifenyylitio)-6-isopropyyli-fenolia (vai-15 he 4) 25 ml.-ssa kuivaa heksametyylifosforihappotriamidia (HMPT), lisättiin 2,02 g (14,6 mmol, 1,3 ekvivalenttia) jauhettua kaliumkarbonaattia ja noin 10 mg kruunueetteriä 18-Crown-6 (firma Aldrich). Suspensiota sekoitettiin 20 minuuttia huoneenlämpötilassa, sitten lisättiin 4,55 g 20 (13,5 mmol, 1,2 ekv.) (3R,5S)-6-metyylisulfonyylioksi-3,5- O-isopropylideeni-3,5-dihydroksiheksaanihappo-tert-butyy-liesteriä (vaihe 5) ja sekoitettiin kaksi päivää 75 - 80 °C:ssa. Reaktioseos värjäytyi tummaksi ja tuli paksu-juoksuisemmaksi. Se kaadettiin 200 ml:aan natriumdivety-25 fosfaatin vesiliuosta ja uutettiin useaan kertaan eetterillä. Yhdistetyt uutteet pestiin kyllästetyllä keittosuolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin vakuu-missa ja saatiin 8,64 g ruskehtavaa öljyä.
Kromatografoimalla kolonnissa (sykloheksaani/etyy-30 liasetaatti 10:2 + 1 o/oo trietyyliamiinia) saatiin 4,96 g (8,28 mmol, 74,0 %:n saannoin) vaaleankeltaista, sitkeää öljyä (otsikon yhdistettä).
NMR (270 MHz, C6D6) : δ 0,98 - 1,07 (M, 2H, CH2) ; 1,19 + 1,20 (2 x d, 6H, CH{CH3) 2) ; 1,38 (s, 9H, tert-bu); 1,39 + 1,31 35 (2 x s, 6H, OC(CH3)2); 2,12 (dd, 1H, CH2C02) ; 2,42 (dd, 1H, 105155 83 CH2C02) ; 3,27 (dd, 1H, 0-CH2) ; 3,37 (dd, 1H, 0-CH2) ; 3,65 (sept., 1H, CH(CH3)2); 3,65 - 3,76 (τη, 1H, O-CH) ; 4,10 - 4,21 (m, 1H, O-CH); 6,60 + 6,82 (AA' BB'-systeemi, 4H, arom.-H); 7,12 - 7,18 (m, 2H, arom.-H); 7,22 - 7,29 (τη, 5 3H, arom.-H); 7,45 (d, 1H, arom.-H).
MS (DCI, isobutaani) : m/e = 598 (M+) , 543 (M+H* - >=) , 485.
Vaihe 7 3(R),5(S)-dihydroksi-6-[(2-p-fluorifenyyli-4-p- f luorifenyylitio-6-isopropyyli) fenoksi] heksaanihap-10 po-tert-butyyliesteri
Liuosta, jossa oli 4,47 g (7,47 mmol) vaiheen 6 asetonidia 50 ml:ssa tetrahydrofuraania, 50 ml etanolia ja 5 ml 2-norm, suolahappoa, sekoitettiin 16 tuntia huoneenlämpötilassa. DC-analyysi (sykloheksaani/etyyliasetaatti 15 1:1) osoitti lähtöaineen (Rf = 0,78) muuttuneen lähes kvan titatiivisesti tuotteeksi (Rf = 0,59). Reaktioseosta ravisteltiin natriumvetykarbonaatin vesiliuoksessa ja uutettiin useaan kertaan eetterillä. Uutteet pestiin kyllästetyllä keittosuolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin 20 vakuumissa. Jäännös (4,46 g ruskehtavaa öljyä) puhdistettiin kromatografoimalla kolonnissa (sykloheksaani/etyyliasetaatti 2:1) ja saatiin 3,37 g (6,03 mmol) otsikon yhdistettä värittömänä öljynä (saanto 80,8 %).
NMR (270 MHz, C6D6) : δ 1,1 - noin 1,4 (m, osittain vahvojen 25 singlettien peitossa, 2H, CH2) ; 1,18 (d, 6H, CH(CH312); 1,31 (S, 9H, tert-bu); 2,00 (dd, 1H, CH--C02); 2,13 (dd, 1H, CH2-C02) ; 3,15 (s, leveä, 1H, OH); 3,36 (ABX - systeemien AB-osa, 2H, OCH2) ; 3,52 (s, leveä, 1H, OH); 3,56 (sept . , 1H, CH (CH3) 2) ; 3,76 - 3,96 (m, 2H, 2 x CHOH) ; 6,61 + 6,79 30 (AA' BB'-systeemi, 4H, arom.-H); 7,14 - 7,27 (m, 5H, • ’ arom.-H); 7,45 (1H, arom.-H).
MS (FAB, 3-NBA) : m/e = 558 (M*), 519, 503 (M* - >= + H*), 356 (fenolirakenneosan M*) .
·♦ 105155
Vaihe 8 4(R)-hydroksi-6(S)-[(2-p-fluorifenyyli-4-p-fluori-fenyylitio-6-isopropyyli) fenoksimetyyli] -3,4,5,6-tetrahydro-2H-pyran-2-oni 5 Liuokseen, jossa oli 5,59 g (10,0 mmol) tert-butyy- liesteriä (vaihe 7) 20 ml:ssa metyleenikloridia, tiputettiin 5 ml trifluorietikkahappoa. Reaktioseosta sekoitettiin kaksi tuntia huoneenlämpötilassa. DC-analyysi (syklo-heksaani/etyyliasetaatti 1:1) osoitti tert-butyyliesterin 10 (Rf = 0,12) ja merkityksettömäksi määräksi polaarittomia epäpuhtauksia. Reaktioseos seostettiin natriumvetykarbo-naattijauheella, säädettiin sitten natriumkarbonaattijauheella neutraaliksi, ravisteltiin sen jälkeen veden kanssa ja uutettiin useaan kerään eetterin kanssa. Yhdistetyt 15 orgaaniset faasit pestiin natriumvetykarbonaattiliuoksel-la, sitten keittosuolaliuoksella, kuivattiin, suodatettiin ja haihdutettiin kuiviin. Jännös kromatografoitiin silika-geelikolonnissa sykloheksaani/etyyliasetaatti-seoksella 1:1 ja saatiin 3,88 g (8,0 mmol, saanto 80 %) väritöntä 20 kiinteää ainetta (otsikon yhdistettä), sp. 170 - 172 °C.
NMR (270 MHz): δ 1,30 + 1,32 (2 x d, 6H, CH(CH3)2); 1,72 -1,94 (m, 3H, CH2 ja OH); 2,67 (ABX-systeemin AB-osa, 2H, CH.COj); 3,47 (sept., 1H, CH(CH3)2); 3,59 (ABX-systeemin AB-osa, 2H, 0CH2); 4,40 (m, 1H, CH-OH); 4,72 (m, 1H, CH-OCO); 25 6,80 - 7,55 (m, 10H, arom.-H).
MS (DCI, isobutaani): m/e = 484 (M*), 467 (M*-0H), «·- ,0 85 105155
Farmakologiset arvot Lääkeaine-seppihappokonjugaattien elinselektiivinen vaikutus
Klorampusiili, [4- (bis-N-(2'-kloorietyyli)aminofe- 5 nyyli]voihappo, on solun kasvua ehkäisevä tekijä pahanlaatuisten kasvaimien hoitamiseksi. Klorampusiilia erittyy pääasiallisesti munuaisten välityksellä. Klorampusiilin kovalenttisen kytkennän avulla sappihappoihin saadaan aikaan klorampusiilin maksan suhteen spesifinen vaikutus, 10 kuten seuraavat kokeet vahvistavat.
1. Klorambusiili-sappihappokonjugaattien vuorovaikutus sidosproteiinien kanssa sappihappoihin maksasoluissa
Maksaperuskudossolut ottavat sappihappoja portti-laskimoverestä ja erittyvät puolestaan sappeen. Sappihap-15 pojen kulkeutuminen membraanien läpi maksasolun veri- ja sappipuolelle, sappihappojen kulkeutuminen erilaisiin so-luorganelleihin, kuten sauvajyväsiin, solun kasvuverkkoon jne. ja kulkeutuminen maksasolun solulimassa tapahtuu erilaisten spesifisten sappihappojen sidosproteiinien väli-20 tyksellä. Sappihapot sitoutuvat myös säännösteleviin proteiineihin ja sappihappoaineenvaihdunnan entsyymeihin.
Nämä fysiologisesti tärkeät sappihappojen sidospro-teiinit identifioitiin ja luonnehdittiin molekyylien foto-affiniteettimerkintämenetelmän avulla. Tämän menetelmän 25 periaate perustuu siihen, että fotoreaktiivinen radioaktiivisesta merkitty sappihappojohdannainen sitoutuu luonnollisten sappihappojen mukaisesti fysiologisiin sidospro-teiineihin. Säteilyttämällä UV-valolla tässä johdannaisessa saadaan aikaan hyvin reaktiivisia kemiallisia välituot-30 teitä, kuten karbeeneja, nitreenejä tai radikaaleja, jotka ' suuren reaktiivisuutensa perusteella liittymällä kaksois- sidoksiin tai yksinkertaisten sidosten kiinnityskohtaan, reagoivat heti sidosproteiinien kanssa ja sitoutuvat näihin kovalenttisesti. Tämän radioaktiivisen sappihappojoh-35 dannaisen kovalenttisen sitoutumisen avulla sidosproteii- ee 105155 nin kanssa silloin myös sidosproteiinit tulevat merkityksi radioaktiivisesti ja voidaan erilaisten proteiinien erottamisen jälkeen maksasolusta identifioida esim. elektroforeesin avulla ja määrittää niiden molekyylipaino.
5 Jos sellainen fotoaffiniteettimerkkaus suoritetaan aineen X' läsnä ollessa, joka myöskin sitoutuu sappihappoa sitoviin proteiineihin, X' kilpailee radioaktiivisen sappi happo johdannaisen kanssa sidoksesta sappihappoa sitovien proteiinien kanssa; vastaavien sidosproteiinien radioak-10 tiivinen merkkiytyminen tulee siten X' :n läsnä ollessa vähäisemmäksi. Jos X' sitä vastoin on aine, joka ei sitoudu sappihappoa sitoviin proteiineihin, sappihappoa sitovien proteiinien merkkiytyminen X':n läsnä ollessa ei vähene .
15 3,6 x 106 rotanmaksasta tuoreena eristettyjä mak- saperussoluja (noin 3 mg proteiinia), jotka olivat 1,5 ml:ssa puskuria I (118 mmol NaCl, 4,74 mmol KC1, 0,59 mmol KH2P04, 0,59 mmol Na2HP04 x 2 H20, 1,185 mmol MgCl2 x 6 H20, 24,87 mmol NaHC03, 1,25 mmol CaCl2, 5,5 mmol 20 D-glukoosia), pH 7,35 puskuria, johon oli johdettu tunnin ajan karbogeenikaasua (95 % 02/5 % C02) , inkuboitiin 37 °C:ssa pimeässä 1,25 μττιοοίίη (25 μΟί) kanssa (7,7-atso-3a-12a-dihydroksi - 5β[3β-3Η]kolan-24-oyyli)-2-aminoetaani-sulfonihappoa, jolloin läsnä ei ollut tai oli 250 μιτ>οο1ί3 : 25 yhdistettä "Esimerkki 3" ja sen jälkeen säteilytettiin 350 nm:ssä Rayonet RPR-100 Photoreaktor'issa viisi minuuttia 16 RPR 3 500 Ä-lampuilla. Tämän jälkeen solususpensio laimennettiin 10 ml.-ssa jääkylmää puskuria I ja solut se-dimentoitiin sentrifugoimalla kolme minuuttia nopeudella 30 1 000 x g. Solut suspendoitiin uudelleen 10 ml: aan pus kuria I ja sedimentoitiin uudelleen sentrifugoimalla. Sakka liuotettiin 600 μΐ-.aan tris/HCl-puskuria (pH 6,8)/2 % natriumdodekyylisulfaattia (SDS/5 % 2-merkaptoetanoli/10 % glyseriini/0,001 % bromifenolisinistä) lämmitettiin viisi 35 minuuttia 90 °C:ssa ja sentrifugoitiin 20 minuuttia nopeu-
• I
87 1 05 1 55 della 40 000 x g. Kirkasta pintakerrosta liuenneine pro-teiineineen käytettiin jatkossa. Kulloinkin 100 μΐ (500 μg proteiinia) pantiin katkonaisille SDS-levygeeleille (200 x 170 x 2,7 mm, kokonaisakryyliamidikonsentraatio 12 %) ja 5 proteiinit erotettiin elektroforeesin avulla 50 V:n jännitteellä. Elektroforeesin jälkeen geelit kiinnitettiin 12,5-%:isessa trikloorietikkahappoliuoksessa ja väritettiin 0,08-%:isella Serva Blau R 250 -liuoksella seoksessa 25 % etanolia/8 % etikkahappo/67 % vettä. Värin poistami-10 sen jälkeen geelejä tasapainotettiin 20 minuuttia 1-molaa-risessa natriumsalisylaattiliuoksessa 70-%:isessa metano-lissa ja sen jälkeen kuivattiin. Radioaktiivisesti merkittyjen proteiinien jakautuminen määritettiin fluorografia-menetelmällä panemalla kuivatut geelit Kodak-X-Omat AR 15 -röntgenfilmeille ja valottamalla -80 °C:ssa (14 d). Mustatut filmit mitattiin densitometrilla. Erilaisten sappi-happoa sitovien proteiinien merkintöjen väheneminen yhdisteen "Esimerkki 3" läsnä ollessa fotoaffiniteettimerkinnän aikana ilmoitetaan prosentteina kontrolleihin nähden las-20 kettuna.
Sappihappoa sitovien Sappihappoa sitovien maksasoluproteiinien proteiinien estymis-%, molekyylipaino kun läsnä on 250 pmoolia yh- • 25 distettä "Esimerkki 3" 67 000 (albumiini) 90,5 54 000 (rnembraanin kuljetus- proteiini) 89,6 48 000 (rnembraanin kuljetus-30 proteiini) 88,8 - .. 43 000 (solurunkoproteiini) 88,1 36 000 (kuljetusproteiini solulimassa) 98,1 33 000 (sideproteiini 35 sauvajyväsissä) 93,2 t • · 88 1 05 1 55 2. Maksasolujen proteiinien alkylointi yhdisteen "Esimerkki 5" avulla
Tuoreena eristettyjä maksaperussoluja (2 x 106) in-kuboitiin 2 mlrssa puskuria 1 37 °C:ssa 30 pCi:n kanssa 5 yhdistettä "Esimerkki 5". 10, 30, 40 ja 60 minuutin kuluttua poistettiin kulloinkin 500 μΐ proteiinia) ja laimennettiin 10 ml:ssa jääkylmää puskuria 1. 3-minuuttisen sentrifugoinnin jälkeen nopeudella 1 000 x g sakka suspen-doitiin uudelleen 10 ml:aan puskuria 1 ja suspensio sent-10 rifugoitiin uudelleen. Solusakat liuotettiin kulloinkin 100 μ1:η eriin seosta 62,5 mmoolia tris/HCl-puskuria (pH
6,8)/2 % SDS:ää/5 % 2-merkaptoetanolia/10 % glyseriiniä/ 0,001 % bromifenolisinistä, sentrifugoitiin 30 minuuttia nopeudella 48 000 x g ja pintakerrokset pantiin katkonai-15 sille SDS-levygeeleille (200 x 170 x 2,7 mm). Elektrofo-reettisen erotuksen jälkeen geelit kiinnitettiin ja väritettiin. Radioaktiivisuuden jakautumisen määrittämiseksi yksityiset geelilevyt jaettiin 2 mm:n leikkeisiin, proteiinit sulatettiin inkuboimalla 0,5 ml:n kanssa Biolute 20 S:ää ja sen jälkeen kun oli lisätty 5 ml Szintillator Quickszint 501:tä, näytteet mitattiin nestetuikemittaus-laitteessa.
Ir.kubaatioaika Merkittyjer. maksa- Radioaktiivisuus (minuuttia) proteiinien ir.cle- merkityissä nsk- 25 kvylipainot (kDa) saproteiineissa (cpm-arvoina) 0 / <30 30 10 48, 67 48: 408; 67: 102 30 122, 54, 48, 42, ' 122: 1064; 54: 1811 ’’ 33, 28 48: 1375; 42: 1777 33: 1116; 28: 2190 40 122, 60, 54, 48, 122: 1549; 54: 2385 42, 33, 28 48: 2420; 42: 2650 33: 1474; 28: 2682 o b 60 122, 54, 48, 42 122: 997; 54: 1949 35, 33, 28 48: 2074; 42: 1725 28: 2163 β9 105155
Yhdiste "Esimerkki 5" aiheuttaa maksasolun proteiinien radioaktiivisen merkittymisen sekä membraaneissa että myös solulimassa ja soluorganelleissa. Tunnettujen fysiologisesti tärkeiden sappihappoa sitovien proteiinien (54, 5 48, 33 kDa) ohella merkittyvät myös muut maksasoluproteii- nit (esim. 122, 35, 28 kDa).
Nämä kokeet osoittavat, että alkyloiva farmakologisen vaikutuksen kannalta tärkeä klorampusiilin ominaisuus on saatu säilymään myös vaikutusaineen kytkemisen jälkeen 10 sappihappoihin. Keksitty radioaktiivinen merkittyminen aiheutuu proteiinien merkittymisestä vahingoittumattoman klorampusiili-sappihappokonjugaatin avulla, koska radioaktiivinen merkittyminen on paikallistunut sappihappo-osaan.
Keksinnön mukaisia yhdisteitä W-X-G yhteytetään 15 siis maksasoluista ja voivat alkyloida proteiineja. W-X-G: ssä yhtyvät sekä klorampusiilimolekyylin (alkyloiva vaikutus) että myös sappihapon (sappihapon spesifisten siir-tymisteiden hyväksikäyttö) ominaisuudet.
3. Yhdisteen "Esimerkki 5" aineenvaihdunta tuoreina 20 eristettyjen maksaperussolujen avulla
Tuoreina eristettyjä maksaperussoluja (1,8 x 106) inkuboitiin 750 μΐιεεβ puskuria I 5,5 μ(Γΐ:η kanssa yhdistettä "Esimerkki 5" 37 °C:ssa. 10, 20, 30, 40 ja 60 minuutin kuluttua poistettiin kulloinkin 100 μΐ solususpensio-25 ta, laimennettiin 10 ml :11a jääkylmää puskuria I ja sent-rifugoitiin viisi minuuttia nopeudella 1 000 x g. Solusak-kaan lisättiin sappihapon uuttamiseksi kaksi kertaa kummallakin kerralla 100 μΐ kloroformi/metanoli-liuosta (tilavuussuhde 1:1). Orgaaniset uutteet haihdutettiin kuiviin 30 N2-virtauksessa, jäännökset liuotettiin 20 μ1:η eriin diok-saania ja pantiin HPTLC-ohkolevyille. Sen jälkeen kun kro-matogrammi oli kehitetty seoksen n-butanoli/etikkahappo/ vesi (tilavuussuhde 9:1:2). ollessa eluenttina, levy kuivattiin, suihkutettiin 1-molaarisella natriumsalisylaatin 35 metanoliliuoksella ja pantiin kuivauksen jälkeen Kodak-X- 90 105155
Omat AR -röntgenfilmille. Viikon valotuksen jälkeen -80 °C:ssa filmi kehitettiin ja radioaktiivisuuden jakautuminen määritettiin densitometrian avulla. Radioaktiivisuuden jakautuminen yksityisiin metaboliitteihin on ilmoi-5 tettu prosentteina.
Inkubointi- "Esim. 5" Metabol. 1 Metabol. 2 Metabol. 3 aika (min) R^=0,49 Rf=0,32 RT-=0,36 Rf=0,21 10 31,34 33,79 38,03 5,62 10 20 26,51 29,49 32,25 11,74 30 23,76 29,88 34,18 12,16 40 13,78 33,52 40,93 11,75 60 11,00 33,7 45,7 10,3 15 Metaboliitti 1: (3a,12ö-dihydroksi-5B[12a-3H]kolan- 24-oyyli)-2-aminoetaanisulfonihappo
Metaboliitti 2: (3a,12a-dihydroksi-5B[12B-3H]kolan-24-oyyli)-2-aminoetaanisulfonihappo
Metaboliitti 3: Ei identifioitu 20 "Esimerkki 5" absorboituu maksasoluista solun sisään ja joutuu aineenvaihdunnan solunsisäisiin paikkoihin. Klorampusiili-sappihappokonjugaatti hajaantuu hydrolyytti-sesti nopeasti vapaaksi klorampusiilivaikutusaineeksi ja 25 sappihapoksi, klorampusiili menee siten sappihappokonju-gaattien muodossa sappihappokuljetussysteemien mukana soluihin, voidakseen vaikuttaa siellä farmakologisesti.
Sappihappoihin kytketyt solun kasvua ehkäisevät aineet soveltuvat siten erityisesti sellaisten solujen 30 pahanlaatuisten kasvaimien ja niiden haarapesäkkeiden hoitamiseen, jotka kykenevät absorboimaan sappihappoja.
9i 105155
Sappihappojohdannaisten vuorovaikutus sisälmysten sappihappokuljetussysteemin kanssa ohutsuolipäässä 4.1. Sukareunusmembraanirakkuloiden valmistus kaniinien sykkyräsuolesta 5 Sukareunusmembraanirakkuloiden valmistus ohutsuolen suolisoluista tapahtui ns. Mg2+-sukkautusmenetelmällä. Uusiseelantilaisia kaniiniuroksia (kehon paino 2 - 2,5 kg) tapettiin ruiskuttamalla laskimonsisäisesti 0,5 ml yhdistettä T-61R. Irrotettiin ohutsuoli ja huuhdeltiin jääkyl-10 mällä fysiologisella keittosuolaliuoksella. Sukareunus-membraanirakkulan valmistamiseen käytettiin 3/10 ohutsuolen päätteestä (mitattuna suunnassa suu - peräaukko, so. sykkyräsuolen päätä, joka sisältää aktiivista Naista riippuvaa sappihappokuljetussysteemiä) . Suolet pakastettiin 15 typen suojaamana -80 °C:ssa. Membraanirakkulan valmistamiseksi jäätyneet suolet sulatettiin 30 °C:ssa vesihauteessa. Limakalvo kaavittiin irti ja suspendoitiin 60 mlraan jääkylmää seosta, jossa oli 12 mmoolia tris/HCl-puskuria (pH 7,1)/300 mmoolia manniittia, 5 mmoolia EGTA:ta/10 mg/1 20 fenyylimetyylisulfonyylifluoeidia/l mg/1 trypsiini-inhi-biittoria soijapavuista, (32 U/mg)/5 mg/1 trypsiini-inhi-biittoria naudankeuhkoista (193 U/mg)/5 mg/1 Bacitra-cin'ia. Sen jälkeen kun oli laimennettu 300 ml:ksi jääkylmällä tislatulla vedellä, homogenoitiin laitteella Ultra- • 25 turrax (18-Stab, IKÄ Werk Staufen, BRD) kolme minuuttia 75 %:n maksimiteholla jäillä jäähdyttäen. Kun oli lisätty 3 ml 1-mol. MgCl2-liuosta (loppukonsentraatio 10 mmolaari-nen), annettiin olla paikoillaan tarkalleen minuutin ajan 0 °C:ssa. Lisäämällä Mg21:a kasautuvat solumembraanit ja 30 sakkautuvat sukareunusmembraanit lukuun ottamatta. 15-mi- - " nuuttisen sentrifugoinnin jälkeen nopeudella 3 000 x g (5 000 kierrosta/min, SS-34-roottori) sakka heitetään pois - ja pintakerrosta, joka sisältää sukareunusmembraanit, sentrifugoidaan 30 minuuttia nopeudella 26 700 x g (15 000 35 kierrosta/min, SS-34-roottori). Pintakerros heitettiin « 92 1 05 155 pois, sakka homogenoitiin uudelleen 60 ml:aan seosta, jossa oli 12 mmoolia tris/HCl-puskuria (pH 7,1)/60 mmoolia manniittia, 5 mmoolia EFTA:ta laitteella Potter Elvejhem Homogenisator (Braun, Melsungen, 900 kierros/min, 10 5 Hiibe). Sen jälkeen kun oli lisätty 0,1 ml 1-mol. MgCl2-liuosta ja inkubaatioajan oltua 15 minuuttia 0 °C:ssa, sentrifugoitiin uudelleen 15 minuuttia nopeudella 3 000 x g. Sen jälkeen pintakerrosta sentrifugoitiin vielä kerran 30 minuuttia nopeudella 46 000 x g (15 000 kierros/min, 10 SS-34-roottori). Sakka liuotettiin 30 ml:aan 10 mmol seos ta tris/Hepes-puskuria (pH 7,4)/300 mmoolia manniittia ja (29 Hiibe) suspendoitiin uudelleen laitteella Potter Elvejhem Homogenisator homogeeniseksi nopeudella 1 000 kierros-ta/min. 30-minuuttisen sentrifugoinnin jälkeen nopeudella 15 48 000 x g (20 000 kierrosta/min, SS-34-roottori) sakka liuotettiin seokseen, jossa oli 0,5 - 2 ml Tris/Hepes-puskuria (pH 7,4)/280 mmoolia manniittia (loppukonsentraatio 20 mg/ml) ja suspendoitiin uudelleen tuberkuliiniruiskun avulla, jossa oli 27 Gauge'n neula. Rakkulaa käytettiin 20 joko heti valmistamisen jälkeen kuljetustutkimuksia varten tai säilytettiin -196 °C:ssa 4 mg:n erinä nestemäisessä typessä.
4.2. Na+:sta riippuvan [3H] tautokolaatin absorboitumisen estyminen sykkyräsuolen sukareunusmembraanirakossa 25 Perusaineiden yhtyminen sukareunusrakkulaan määri tettiin ns. membraanisuodatustekniikan avulla. 10 μΐ rak-kulasuspensiota (100 μg proteiinia) pipetoitiin pisaroina pienen polystyreeni-inkubointiputken (11 x 70 mm) seinämään, jolla oli inkubaatioväliainetta vastaavien ligandien 30 kanssa (90 μΐ). Inkubaatioväliaine sisälsi 0,75 μΐ 0,75 μCi:tä [3H (G) ] - taurokolaattia) spesifinen aktiivisuus : 2,1 Ci/mmooli/0,5 μΐ 10 mmol, taurokolaattia/8,75 μΐ nat-rium-kuljetuspuskuria (10 mmol. tris/Hepes, (pH 7,4)/ 100 mmol. manniittia/100 mmol. NaCl) (Na-T-P) tai 8,75 μΐ 35 kalium-kuljetuspuskuria (10 mmol. tris/Hepes (pH 7,4)/ 1 · 93 105155 100 mmol manniittia/100 mmol. KCl) (K-T-P) ja 80 μΐ kyseistä inhibiittoriliuosta, kulloinkin kokeen jälkeen Na-T-puskuriin tai K-T-puskuriin liuotettuna. Inkubaatioväli-aine suodatettiin polyvinylideenifluoridi-membraanisuodat-5 timen (SYHV LO 4NS, 0,45 μιη, 4 mm$, Millipore, Eschborn, B.R.D) läpi. Sekoittamalla rakkula inkubaatioväliaineen kanssa käynnistettiin kuljetuksen mittaus. Taurokolaatin konsentraatio inkubaatioerässä oli 50 ^moolia. Halutun inkubaatioajan (tavallisesti l min) jälkeen kuljetus py-10 säytettiin lisäämällä 1 ml jääkylmää katkaisuliuosta (10 mmol tris/Hepes (pH 7,4)/150 mmol. KCl). Syntynyt seos suodatettiin heti erilleen 25 - 35 mbaarin vakuumissa sel-luloosanitraattikalvosuodattimen läpi (ME 25, 0,45 μτη, läpimitta 25 mm, Schleicher & Schuell, Dassel, BRD). Suo-15 datin pestiin sen jälkeen 5 ml :11a jääkylmää katkaisu- liuosta .
Radioaktiivisesti merkityn taurokolaatin yhtymisen mittaamiseksi kalvosuodatin liuotettiin 4 ml :11a Scintillators Quickszint 361:tä (Zinsser Analytik GmbH, Frank-20 furt, BRD) ja radioaktiivisuus mitattiin nestetuikemit-tausta käyttäen mittauslaitteessa TriCarb 2500 (Canberra Packard, GmbH, Frankfurt, BRD). Mitatut arvot saatiin laitteen kalibroinnin jälkeen standardinäytteiden avulla ja mahdollisen esiintyneen kemiluminoinnin korjauksen jäl-25 keen arvoina dpm (hajaantuminen minuuttia kohden).
Kontrolliarvot määritettiin kulloinkin Na-T-P:ssä ja K-T-P:ssä. Yhtymisen Na-T-P:ssä ja K-T-P:ssä välinen ero antoi Na':sta riippuvan kuljetusosan. ICb0 Na‘:na merkittiin se inhibiittorin konsentraatio, jonka yhteydessä 30 Na*:sta riippuva kuljetusosa oli estynyt 50-%:iseen kontrolliin verrattuna laskien; vastaava koskee IC25- ja IC76-arvojen tietoja.
Katso tuloksia taulukossa 1.
94 105155 εεε εεε εεεεεεεεεεεεε lo a a. a. a a a aaaaaaaaaaaaa U cooo co cn r- «i^Lri^o^ocor^ai^ni^
hh <i< m r-~ r^r^n ovO^'tf'r'-mcomcorocNCNCN
T-l fNJ (NJ H H (N <-i r-
O
« εεεε εεε εεεε εεεεεεεεεεεεε a a a a a a a a a a a aaaaaaaaaaaaa ^ o t* m mm 0 U '
z> h ® n n m νο σ' o~ *}* r- r- voromcomoocoocN^rococN
m ? <N h co co «3< n co co o «Nmtrfii^NH .-i
> (N r-l ι—I (N
C ^
• rJ
Γ v λ: — εεε εεεε εεεεεεεεεεεεε m o a a a a a a a aaaaaaaaaaaaa z <N tr.
cU —. οοψ tsccoo in co h m vO m h σι <i o m fvj co CC >-H £ Ό \D Oi ^ Π CO H i—IHHHrlHHrlrlri ' ' ' z ~ ^ ro ro rz cc ·* C fr ^ — <z <z 1 £- _ _ EE.
~ —r — — \£> co σι o h (n LDt^L^Lfir^f-^rc^Or-Jcrno — ,-. ; ; vDvO^D H (N ^ rvj fNCCOr^COCOCC'CCO^C^^C' .C Ί' _C rH r-H rH τΗ γ—I r—I r*H r—{ : * I· T - - i ·- — : c c c c i- „ * j * · · · j - ^· · j j j · j
5 CT I
7 - L < - ϊ-ζζζζ ^ O -. _ = j | § 7 7 ε T z 105155 95 5. Sappihappojohdannaisten yhteytys maksan kautta porttilaskimoverestä ja erittyminen sapessa
Sappihappojohdannaisten selektiivisen yhteytyksen maksassa ja niiden hepatotrooppisen vaikutuksen tutkimi-5 seksi nukutettuihin rottiin injektoitiin boluksena vastaavia johdannaisia suolilievelaskimoon ja analysoitiin näiden johdannaisten sekä vastaavien vaikutusaineiden tai vaikutusainemetaboliittien erittyminen sapessa.
5.1. In vivo perfundoitu maksa 10 Spraque-Dawley-urosrotille (kehonpaino 300 - 500 g) ei annettu ravintoa ja ne saivat vapaasti vettä. Uretaani-narkoosin alaisena (5 ml/kg i.m. uretaania 30 %) henkitor-ven avaamisen jälkeen avattiin vatsa leikkaamalla keskiviivaa myöten. Mahanportti sidottiin ja sappitiehyee-15 seen, työntämällä polyetyleeniletku (d = 0,05 mm) maksan eteen asti, pantiin kanyyli ja sappi kanavoitiin. Eriteti-lavuus mitattiin 15 minuutin välein. 60-minuuttisen alku-juoksutuksen jälkeen aineita (0,5 ml 1 mmol. liuosta 0,9-%:isessa NaCl-liuoksessa) aplikoitiin 30 sekunnin ai-20 kana suolilievelaskimoon ja sappieritettä koottiin edellä mainituin aikavälein (2, 4, 6, 8, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120 min). Ensin aplikoitiin sap-pihappojohdannaista, 2-tuntisen kokoamisajan jälkeen aplikoitiin vastaavaa vaikutusainetta. 120 minuuttia koeaineen 25 antamisen jälkeen mitattiin rakon tilavuus ja myös virtsa kerättiin. Sappi- ja virtsanäytteitä varastoitiin kokeen aikana jäissä ja sen jälkeen syväjäädytettiin.
5.2. Sappihappojohdannaisten analyysi sapessa 10 μΐ kutakin sappinäytettä pantiin Microcaps'in 30 avulla (firma Drummond, Broomall, USA) DC-levyille (10 x . · 20 cm, Kieselgel 60 spezial Schihtdicke 0,25 mm, nro 37581, firma Riedel-de Haen, Seelze, BRD) ja ohkolevyjä kuivattiin ilmassa 20 minuuttia.
Levyt kehitettiin seuraavissa liuottimissa: · 96 105155
Aine Liuotin
Klorampusiili Kloroformi/metanoli (10:1, til./til.)
Esimerkki 67 Butanoli/jääetikka/vesi (9:2:1, til./til.)
Esimerkki 125 5 K*-suola Butanoli/jääetikka/vesi (9:2:1, til./til.)
Esimerkki 85 Kloroformi/metanoli (3:1, til./til.)
Esimerkki 86 Kloroformi/metanoli (3:1, til./til.)
Liuottimien aineosia saatiin tavallisilta valmistalo jilta puhtausasteeltaan mahdollisimman korkealaatuisina.
Levyjen kehittämisen ja kuivaamisen jälkeen määritettiin vaikutusaineiden ja sappihappojohdannaisten tai niiden aineenvaihduntatuotteiden jakautuminen densitometrian avulla (Densitometer CD 50, DESAGA; Heidelberg). Detektio 15 tapahtui heijastusmoodissa lineaarisen skannauksen yhtey dessä aaltopituudella 252 nm (klorampusiili/klorampusiili-konjugaatti) tai 260 nm (muut aineet).
Kromatogrammien analysoimiseksi sappihappojohdannaisten, vaikutusaineiden tai vaikutusainemetaboliittien 20 suhteellinen intensiteetti ilmaistiin kromatogrammilla pinta-alayksikköinä.
« • « 97 1 05 1 55
CM NnMOVDfOCOLOfOOOfO^i^CO^CCfO
c w oooco^N*<tSN(NjroNfOfOinoco
E COOONNrOvDNrOMCO^COvDOiD^-rO
E + i~M r^. *-H Γ*-* P-·* MD o f~H
3 »—H CM CM CM «““( *Ή U) ^
iH
~ I
c c C 0 0
C X -H
•n 4J
C C C C
c .. ^ w NPOCMOoroco^rocoroomcoaicoco
• H Z CJ ^ (/} OOOCO^N^SNCMrONnm^OCO
^ j oJ Ο ΝΟΟΝΝΓΟ^Ν^ΝΟΟ'ώΟΟ^νΰιΓί^ΓΟ
.-1 ο T3 XZU* HSHNSOOiOH
4JQ X I O CD hCMCMCMhh c ε c 5 ν', cc (ο ·Η -r-ι c Γ7 i-> o c CC --! ---- CO c
K C ,_ K
c -h C3 3 c
0 -H ' AJ -H
^ X ^ -j
C *H *»τ ·Η CC
on c —. m
r-H Γ" -H —> > CO
u e c cc
S Ή -m C — -J W
C ^ 'H J 2-0
E ^ *—i c EC
Cm c y. — -H
£ g § £ ? ii c BSSSSSSSQSBSSSQSB
--n -j ^ 1. 5 c _C cc C- — o V-<
5 ' = O
o - £ 1 - x ” Ξ X 3 S 2 i « = K Ä J > ^ X ~ 1 c 5 i
5 - ~ C
• >Γ
—CC
x S - ^ldcooct'wch o σι —i m w c .h S “ “ .” —iCO^rvD—iCOCOO—> M ^ O r-ι M o rl O - _ OOOOriCOiCcSJl Λ N J) Min ιβιΛ
~ "C *“H *“M f-H f~H »-H
— 5 < ^ C 2 ΓΝ — 0 3 2 -i ^ .if co«3-v£>coou->ooooooooooo ^ MrliSjCC’flD^NCOQlOr-lfSj
rH fH T*—I
• * 98 105155 δ c Ή
<C
c δ
ΤΞ I
JZ I a 0 (3 e n x> H ooooooooo
<DLnC+4J CONiiUO^NONCO
5 m 3 ., t! vOHI^HvOI^vDHrj1 ra-H ij-p inr^oooicncooovDin ϋ ίο λ; e k h I 3 λ; ε -p o
x JJ P ε Ό XI C
, 3 ϋ 3 x: 3 -Ή x. ji ε w x> x ·* -P -P x>
<3 K O
> k ε 1 0 o o o I x x S' >52 ooooooooo τι
^ X--T ^CÖO^-tfCOOOCS! C
J: I ru I ^vDvD<NvD-O^CT»Cri o o •H ^ j*i >s <\ΓΟ^^ΓΟΓΝ(ΝγΗ»Η Tito ZC ω
Zm C ·Η Γ5 ·Η Ό
10 -PO
^ ln CO
rs) -H O E
»-H 4J Cl -H
C P -P C
C C -P CO
• H Z -r-< CO
-Γ-. — OOOOOOOOOOOO KO
X p C 'i^iCtNO^OifliD^Nii CC
X C -X Ν<ίΗΟΌΟΝΗΙ/1£Μ/)ψ C ,H
= _2^ nn^^iOiOvD^ntvlINN xx K c c x ~ ε I o
3 E
*—> *r* c-r- ooooooa'CDOiNconNiOHccun - ^ csjfsjco^o^cocNrg^cN^c^tfO^coiflin
Moco^n^maicovDOH^OfN^o
g .1 THCNCOCOvOt^r-ICNjCOvOvO^trOfnmrOrO
E 'T -1 H H
C?. *>· -Z Z —' Z +' -Z — oooocor-csir-r^cMi-ioniNjinLnrH x k x »-' ώ000ι/ΐΜϊιΛ00ίΓιι/ιη<ί0ηιί - c- r^ossrcNvDCNjr-r^oncoorsooo^ x Ό cT O O c £. 5j TT Η(Ν<\(\Μ^ΜΝΝ(ΝΝΝ^(ΝΗΓ>) £
J ^ CO
r ^ r o ^ co »- Ό co w ^ co
E C ,H
·— ·«-» Ό
Z c -.n C
liZ — -n O C
.Z — O E
.i. ooooHtNr^r-iiNor^^iT'nvoro^ ^ Z
• Z = oc\' co^^r-H^r^corvju^roOLor^r^Ln z o .z - o^n^^^N^H^nHH^OfNinLr) co »o c.: o — HHHOincDOUl^ONHHrlrlH Z .3 <-t £ ^
<N
vX
-Ui .u:
D
r—I O
3 33 <N<rocoomooooooooooo
., S < rHrHCNO^Lnor^OOOOrHCN
HHH
99 105155 I ~ (3 ·Η ’ 4J 4-> C 4-> * + oooooooooooo '3 COONO^CO(NCO^vOOCO .5 £ o CNvDCOO^rsjf-'O^n^CO ^ r, k ^ HH^nnnnncNfNiNH jj i -h c o e ό -u e ξ χ: o c ω >, e -u
•H
in c a Γ- 3 K n 1 c> Ϊ •H O (3 J-1 ~ λ; i u J! OOOOOOOOOOOO +-1 .* X - —1 (NOCOCO'i'si'COCOiNCsJOvO "1 2 I 5 ^ ['-OvOcsJ^rNio^Oin^rO 2 I S O >. H H (N (N fN CN r—I ,5 « • rf —· Ui
[/) C -H
U 3 in «u o
fN -H C C
.-t 4J c ε c 4J U Ή C C' ·“ —1 i-j •M s ·Η = o f OOOOOOOOCOOOOOOO “ 7 rrx vDO^NO^^ON^OlNffiOt*^ ‘ !: g £ Ο ιη(ΟνΟ>ΟΟνβνΟιΛ£ΟΟι/1ώνΙ)^^ ς .2 w HrlHHrlrlfSHHHrlrl
V. C O
K 2- £ t ^
<Z -H
" 3 00000000000030000 c + -π \OvD\D^\Dcooc^HHrs'>n^f/)(^ . - i-iuTcj'LnLnovOii-^oO'-HOr^^i'no = ^ ~ O tHrsj^vor^r^tnc^i πινινηιπηγϊη
Ζ ~ V V V V V V V V V T
- — _ c <?.>·§ • -*· i r ’s *0-1 - r 1^;-. oooooooooooocoooo - c X = · ~ NC<focciN(\M.Ti/iLTinuTi/iini/iin “i7- ^-(»s-fsjvc^or^n - „ x Si" rHnnmr-i vvvvvvvvv J: £
ιΛ T C
-,· ._ - c -:-- 00000000000000000 ~ ? T T ~ ^(NNODKvOC;CCOONNCO^CO<i --
-- Z o-Hr^ooi-icc-— ooi-Or-ioO'i'tNjo -O
<3 (N'i’vocooiriooooooooooo .-2 HHfSnt'i/lvO^tOtJ'OH^ iH i—I t—( • «

Claims (17)

100 105155 Patenttivaatimus Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten sappi-happojohdannaisten valmistamiseksi, joiden kaava on 5 W - X - G (I) jotka koostuvat modifioidusta sappihappotähteestä G:
10 R(8) O R(7)J rrifP ib R(3) R(6) R(4) R(5) jossa R(3) - R(8) ovat samanlaisia tai erilaisia ja niillä on seuraavat merkitykset: 20 sidos ryhmään W - X-, jolloin yhteensä enintään kaksi W - X-ryhmää voivat olla sitotuneina, R (3) ja R (4) , R (5) ja R(6), ja R(7) ja R(8) kulloinkin yhdessä merkitsevät karbonyyliryhmän happea tai ne merkitsevät radikaalia 25 O O O H, -SL, -NHL, -NL,, -S-C-L, -NH-C-L, -O-P-OL, OL O II
30 -O-S-OL, -L, joissa II o L on H, tyydyttynyt tai tyydyttymätön, haarautunut tai haarautumaton alkyyliryhmä, jossa on 1 - 10 hiiliatomia, 35 sykloalkyyli, jossa on 3 - 8 hiiliatomia, fenyyliryhmä, • « ιοί 105155 joka on substituoimaton tai jossa on 1 - 3 substituenttia, jotka on valittu ryhmästä F, Cl, Br, (C^)-alkyyli ja (Ci.*) -alkoksi, bentsyyliryhmä, joka on substituoimaton tai jossa on 1 - 3 substituenttia, jotka on valittu ryhmästä 5 F, Cl, Br, (Cj_^) —alkyyli ja {^.4)-alkoksi; ja Y on -OH, -ONa, -OMe tai -NHCH2CH2S03H; sitovasta ryhmästä X, joka on suora sidos tai väliryhmä X:
0. O Π 11 11
10. S -, - S - S -, - N - C - N -, Il I I o R(l) R (1) 0 0 0 O n M II II -O-P-O, -P-O-, - O - P - N -, - P - N - II II l|
15 OR (2) OR (2) OR (2) R(l) OR(2) R(l) O - N - P - N -,
1. I R(1) OR(2) R(1) 20 O O -S-S-, - 0 - S - 0 -, - S - N - li li l O O R (1)
25. S - N - C - N - , - N - C - N - , I I I I R(l) R (1) R (1) R Cl) ; 30 -CH2-CH2-, -CH=CH-, -CSC-, O - N - C (CH2) n- , R (1) 35 102 105155 (n)r - O - (CH2) n -, - N - (CH2) n -, - s - (CH2) n -, R (1) 5 0 0 - N - S - (CH2) n -, - C - N - (CH2) n - , I I R(2) R(2) 10 u /-\ - S - N - (CH2) n O - , - 0 -( V O - , O R (2) y=( -0-(0)-0-, 15 - N - C - (CH2) π - Ο- , _ίί~\ ° ' R (2) RUr-' 20 - N -/o\- 0 - , R (1) '-' 25 S ° - N - S - (CH2) n - 0 - , - O y— C - N I H \—/ R (2) 0 R<2) 30 0 0 li II -N-C-M-C-N- I I R (2 ) R(2) 35 103 105155 O II - N - C - (CH2) n - O - {CH2) n - o - , R (2) 5 0 0 0 0 Il II II l[ - N-C-M-C-N- (CH2)n-0- , -N-C-M-C-O-(CH2)n-0- , I I I R(2) R(2) R(2) 10 joissa O 11 R (1) on H, (Cj.g)-alkyyli; ryhmä R(2)-C, fenyyli, bentsyyli, joka on substituoimaton tai jossa on 1 - 3 substituenttia, jotka on valittu ryhmästä F, Cl, Br, (Cj.4) -alkyyli ja 15 (Cj.^) -alkoksi ; R (2) on H, (Cj.8)-alkyyli, fenyyli, bentsyyli, joka on substituoimaton tai jossa on 1 - 3 substituenttia, jotka on valittu ryhmästä F, Cl, Br, [C1.A)-alkyyli ja (C..<) -alkoksi ; m = 0 - 6 ; 20 n * 1 - 16; p = 1, 2 tai 3; r = 0 - 2; ja YY M= * (CH2) m- , - (C=C) p - , -CsC-, tai |OT ; 25 ja vaikuttavan aineen osasta W, joka on klorambusiili c!X/N_0',cH2i3coci HMB-CoA-reduktaasi-inhibiittori tai prolyylihydroksylaasi-inhibiittori, tunnettu siitä, että 35 a) kun X on suora sidos, saatetaan sappihapon G 3-, 7- tai 12-asemassa oleva -OH-ryhmä reagoimaan vaikuttavan 104 105 155 aineen W karboksyylihapporyhmän aktivoidun muodon kanssa mahdollisesti lisäämällä emästä, tai b) kun X on suora sidos, saatetaan sappihapon G 3-, 7- tai 12-asemassa oleva, suojaryhmällä suojattu -OH-ryhmä 5 reagoimaan vaikuttavan aineen W karboksyylihapporyhmän aktivoidun muodon kanssa mahdollisesti lisäämällä emästä, tai c) kun X on väliryhmä, saatetaan vaikuttavan aineen W karboksyylihapporyhmä tai aktivoitu karboksyylihapporyh- 10 mä reagoimaan G-X-osan X-ryhmässä olevan terminaalisen aminoryhmän kanssa mahdollisesti lisäämällä emästä, tai d) kun X on väliryhmä, saatetaan sappihapon G 3-, 7- tai 12-asemassa oleva aminoryhmä reagoimaan X-W-osan X-ryhmässä olevan terminaalisen karboksyylihapporyhmän tai 15 aktivoidun karboksyylihapporyhmän kanssa mahdollisesti lisäämällä emästä. 105 1 05 1 55
FI904497A 1989-09-14 1990-09-12 Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten sappihappojohdannaisten valmistamiseksi FI105155B (fi)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE3930696 1989-09-14
DE3930696A DE3930696A1 (de) 1989-09-14 1989-09-14 Gallensaeurederivate, verfahren zu ihrer herstellung, verwendung als arzneimittel

Publications (2)

Publication Number Publication Date
FI904497A0 FI904497A0 (fi) 1990-09-12
FI105155B true FI105155B (fi) 2000-06-30

Family

ID=6389405

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI904497A FI105155B (fi) 1989-09-14 1990-09-12 Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten sappihappojohdannaisten valmistamiseksi

Country Status (21)

Country Link
US (3) US5462933A (fi)
EP (1) EP0417725B1 (fi)
JP (3) JP2568306B2 (fi)
KR (1) KR0166962B1 (fi)
AT (1) ATE152117T1 (fi)
AU (1) AU637822B2 (fi)
CA (1) CA2025294C (fi)
CY (1) CY2112B1 (fi)
DE (2) DE3930696A1 (fi)
DK (1) DK0417725T3 (fi)
ES (1) ES2100858T3 (fi)
FI (1) FI105155B (fi)
GR (1) GR3024095T3 (fi)
HU (1) HU213395B (fi)
IE (1) IE903329A1 (fi)
IL (1) IL95668A (fi)
NO (1) NO303450B1 (fi)
NZ (1) NZ235285A (fi)
PT (1) PT95299B (fi)
TW (1) TW199097B (fi)
ZA (1) ZA907300B (fi)

Families Citing this family (79)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3930696A1 (de) * 1989-09-14 1991-03-28 Hoechst Ag Gallensaeurederivate, verfahren zu ihrer herstellung, verwendung als arzneimittel
US5474767A (en) * 1990-07-26 1995-12-12 Monsanto Company Polyamines and method for preparation thereof
US5693769A (en) * 1991-12-13 1997-12-02 Transcell Technologies, Inc. Glycosylated steroid derivatives for transport across biological membranes and process for making and using same
US5795870A (en) * 1991-12-13 1998-08-18 Trustees Of Princeton University Compositions and methods for cell transformation
US5338837A (en) * 1991-12-13 1994-08-16 The Trustees Of Princeton University Glycosylated steroid derivatives for transport across biological membranes and process for making same
EP0548793A3 (en) * 1991-12-20 1995-11-02 Hoechst Ag Ethylenic-unsaturated bile acid derivatives, process for their production and preliminary processes therefor
ATE135380T1 (de) * 1991-12-20 1996-03-15 Hoechst Ag Polymere und oligomere von gallensäurederivaten, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als arzneimittel
US5639866A (en) * 1993-02-23 1997-06-17 Princeton University Single-step formation of multiple glycosidic linkages
IL108748A0 (en) * 1993-02-23 1994-08-26 Univ Princeton Solution and solid-phase formation of glycosidic linkages
TW289020B (fi) * 1993-05-08 1996-10-21 Hoechst Sktiengesellschaft
TW289021B (fi) * 1993-05-08 1996-10-21 Hoechst Ag
TW289757B (fi) * 1993-05-08 1996-11-01 Hoechst Ag
IT1269839B (it) * 1994-05-26 1997-04-15 Bracco Spa Coniugati di acidi biliari, loro derivati con complessi metallici e relativi usi
US5585470A (en) * 1994-06-23 1996-12-17 Transcell Technologies, Inc. Process for the manufacture of 3-amino-substituted glycosylated bile acids
US6262277B1 (en) 1994-09-13 2001-07-17 G.D. Searle And Company Intermediates and processes for the preparation of benzothiepines having activity as inhibitors of ileal bile acid transport and taurocholate uptake
US5994391A (en) * 1994-09-13 1999-11-30 G.D. Searle And Company Benzothiepines having activity as inhibitors of ileal bile acid transport and taurocholate uptake
US6268392B1 (en) 1994-09-13 2001-07-31 G. D. Searle & Co. Combination therapy employing ileal bile acid transport inhibiting benzothiepines and HMG Co-A reductase inhibitors
US6642268B2 (en) 1994-09-13 2003-11-04 G.D. Searle & Co. Combination therapy employing ileal bile acid transport inhibiting benzothipines and HMG Co-A reductase inhibitors
US6107494A (en) * 1994-09-13 2000-08-22 G.D. Searle And Company Substituted 5-aryl-benzothiepines having activity as inhibitors of ileal bile acid transport and taurocholate uptake
DE4432708A1 (de) * 1994-09-14 1996-03-21 Hoechst Ag Modifizierte Gallensäuren, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung
IL123998A (en) * 1998-04-08 2004-09-27 Galmed Int Ltd Conjugates of bile salts and pharmaceutical preparations containing them
IL142650A (en) * 1998-04-08 2007-06-03 Galmed Int Ltd Use of bile acid conjugates or bile salts and fatty acids or fatty acids in the preparation of pharmaceuticals for lowering cholesterol, for the treatment of fatty liver and for the treatment of hyperglycemia and diabetes
KR20010043558A (ko) * 1998-05-13 2001-05-25 한센 핀 베네드, 안네 제헤르, 웨이콥 마리안느 감수분열 조절 화합물
CN1342090A (zh) 1998-12-23 2002-03-27 G·D·瑟尔有限公司 适用于心血管疾病的回肠胆汁酸转运抑制剂和贝酸衍生物的组合
AU2157500A (en) 1998-12-23 2000-07-31 G.D. Searle Llc Combinations of cholesteryl ester transfer protein inhibitors and bile acid sequestering agents for cardiovascular indications
DE69908643T2 (de) 1998-12-23 2004-05-13 G.D. Searle Llc, Chicago Kombinationen von cholesteryl ester transfer protein inhibitoren und nicotinsäure derivaten für kardiovaskuläre indikationen
ATE242009T1 (de) 1998-12-23 2003-06-15 Searle Llc Kombinationen von cholesteryl ester transfer protein inhibitoren und fibronsäure derivaten für kardiovaskuläre indikationen
IT1304501B1 (it) * 1998-12-23 2001-03-19 Bracco Spa Uso di derivati di acidi biliari coniugati con complessi metallicicome "blood pool agents" per l'indagine diagnostica tramite risonanza
CA2356156A1 (en) 1998-12-23 2000-07-06 G.D. Searle Llc Combinations of ileal bile acid transport inhibitors and bile acid sequestring agents for cardiovascular indications
HUP0201972A3 (en) 1998-12-23 2005-06-28 G D Searle Llc Chicago Combinations of ileal bile acid transport inhibitors and cholesteryl ester transfer protein inhibitors for cardiovascular indications
AU2157400A (en) 1998-12-23 2000-07-31 G.D. Searle & Co. Combinations of cholesteryl ester transfer protein inhibitors and hmg coa reductase inhibitors for cardiovascular indications
GB9907048D0 (en) * 1999-03-27 1999-05-19 Karobio Ab Novel glucocorticoid receptor ligands for the treatment of meta bolic disorders
GB2355009A (en) * 1999-07-30 2001-04-11 Univ Glasgow Peptides conjugated to bile acids/salts
DE60034954D1 (de) 1999-09-14 2007-07-05 Xenoport Inc Substrate und screeningverfahren für transportproteine
DE19950686B4 (de) * 1999-10-21 2006-06-29 Martin-Luther-Universität Halle-Wittenberg Multifunktionelle Spacer
JP2003528830A (ja) 2000-03-10 2003-09-30 ファルマシア・コーポレーション テトラヒドロベンゾチエピン類の製造方法
AU2002211863A1 (en) * 2000-10-06 2002-04-15 Xenoport, Inc. Bile-acid derived compounds for providing sustained systemic concentrations of drugs after oral administration
EP1361847A2 (en) * 2000-10-06 2003-11-19 Xenoport, Inc. Bile-acid conjugates for providing sustained systemic concentrations of drugs
EP1358200A4 (en) * 2000-10-06 2005-07-20 Xenoport Inc COMPOUNDS DERIVED FROM GALLENIC ACID TO IMPROVE THE ORAL ABSORPTION AND SYSTEMIC BIOVERABILITY OF MEDICAMENTS
US8975246B2 (en) 2001-04-17 2015-03-10 Galmed Research And Development Ltd. Bile acid or bile salt fatty acid conjugates
US7053076B2 (en) * 2001-08-29 2006-05-30 Xenoport, Inc. Bile-acid derived compounds for enhancing oral absorption and systemic bioavailability of drugs
BR0213501A (pt) 2001-11-02 2004-08-24 Searle Llc Compostos de benzotiepina mono- e di-fluorada como inibidores de transporte de ácido biliar co-dependente de sódio apical (asbt) e captação de taurocolato
AU2003207431A1 (en) 2002-01-17 2003-09-02 Pharmacia Corporation Novel alkyl/aryl hydroxy or keto thiepines.
PT1551860E (pt) * 2002-06-19 2007-02-28 Karobio Ab Ligandos de receptores glucocorticóides para o tratamento de distúrbios metabólicos
US7141559B2 (en) 2002-06-19 2006-11-28 Karo Bio Ab Glucocorticoid receptor ligands for the treatment of metabolic disorders
AU2003293423A1 (en) 2002-12-06 2004-06-30 Xenoport, Inc. Carbidopa prodrugs and uses thereof
EP1583564B1 (en) * 2003-01-13 2009-07-01 Bracco Imaging S.p.A Improved linkers for radiopharmaceutical compounds
GB0307918D0 (en) 2003-04-05 2003-05-14 Astrazeneca Ab Therapeutic use
WO2005066150A1 (en) * 2004-01-02 2005-07-21 Hetero Drugs Limited A novel process for the preparation of simvastatin
JP4896870B2 (ja) * 2004-04-08 2012-03-14 ヤード・テヒノロギース・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング 細胞膜ラフトと相互作用する構造を含む三者複合体およびその使用
AU2005231622B2 (en) * 2004-04-08 2011-05-26 Jadolabs Gmbh Tripartite conjugates containing a structure interacting with cell membrane rafts and their use
EP1765406A4 (en) * 2004-05-21 2012-11-28 Mediplex Corp ADDITIVES FOR IMPROVED MUCOSAL ABSORPTION OF THERAPEUTIC AGENTS
WO2005121069A1 (en) * 2004-06-04 2005-12-22 Xenoport, Inc. Levodopa prodrugs, and compositions and uses thereof
WO2005121070A1 (en) * 2004-06-04 2005-12-22 Xenoport, Inc. Levodopa prodrugs, and compositions and uses thereof
US20060003976A1 (en) * 2004-06-04 2006-01-05 Yuehua Zhang Cholesterol/bile acid/bile acid derivative-modified therapeutic drug compounds
NZ569485A (en) 2005-12-05 2011-06-30 Xenoport Inc Levodopa prodrug mesylate, compositions thereof, and uses thereof
US7709527B2 (en) * 2006-12-21 2010-05-04 Xenoport, Inc. Levodopa dimethyl-substituted diester prodrugs compositions, and methods of use
US7829592B2 (en) * 2006-12-21 2010-11-09 Xenoport, Inc. Catechol protected levodopa diester prodrugs, compositions, and methods of use
CN101367859B (zh) * 2007-08-17 2011-05-11 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 脂肪酸胆汁酸偶合物及其医药用途
KR101239008B1 (ko) * 2008-03-31 2013-03-04 한양대학교 산학협력단 바일산 유도체 및 그의 응용
US8865868B2 (en) * 2008-08-06 2014-10-21 Novo Nordisk Healthcare Ag Conjugated proteins with prolonged in vivo efficacy
US8399513B2 (en) * 2008-10-20 2013-03-19 Xenoport, Inc. Levodopa prodrug mesylate hydrate
CN102186804A (zh) * 2008-10-20 2011-09-14 克塞诺波特公司 合成左旋多巴酯前药的方法
ES2542202T3 (es) 2009-01-22 2015-08-03 Novo Nordisk Health Care Ag Compuestos de hormonas de crecimiento estables
WO2011015649A1 (en) 2009-08-06 2011-02-10 Novo Nordisk Health Care Ag Growth hormones with prolonged in-vivo efficacy
CA2789236C (en) 2009-11-09 2014-09-09 Xenoport, Inc. Pharmaceutical compositions and oral dosage forms of a levodopa prodrug and methods of use
JP5875527B2 (ja) 2010-01-22 2016-03-02 ノヴォ・ノルディスク・ヘルス・ケア・アーゲー ｉｎ−ｖｉｖｏにおける効力が延長された成長ホルモン
BR112012018162A2 (pt) 2010-01-22 2017-10-03 Novo Nordisk Healthcare Ag Compostos de hormônio do crescimento estáveis
US20110294767A1 (en) 2010-05-26 2011-12-01 Satiogen Pharmaceuticals, Inc. Bile acid recycling inhibitors and satiogens for treatment of diabetes, obesity, and inflammatory gastrointestinal conditions
MX363161B (es) 2011-10-28 2019-03-13 Lumena Pharmaceuticals Inc Inhibidores de la recirculación de ácidos biliares para el tratamiento de hipercolemia y enfermedad hepática colestásica.
ES2633766T3 (es) 2011-10-28 2017-09-25 Lumena Pharmaceuticals Llc Inhibidores de reciclaje de ácido biliar para el tratamiento de enfermedades de hígado colestático pediátrico
JP2016514684A (ja) 2013-03-15 2016-05-23 ルメナ ファーマシューティカルズ エルエルシー 原発性硬化性胆管炎および炎症性腸疾患の処置のための胆汁酸再循環阻害剤
MX2015013196A (es) 2013-03-15 2016-04-15 Lumena Pharmaceuticals Inc Inhibidores de reciclaje de acidos biliares para el tratamiento de la enfermedad de reflujo gastroesofagico y esofago de barrett.
JP6464145B2 (ja) 2013-04-05 2019-02-06 ノヴォ・ノルディスク・ヘルス・ケア・アーゲー 成長ホルモン化合物製剤
CN104693264B (zh) * 2015-02-09 2016-09-21 华南理工大学 一种化合物及其制备方法和应用
CN106046101B (zh) * 2016-05-25 2018-01-05 华南理工大学 一种糖原磷酸化酶抑制剂及其制备方法和应用
CN106496300B (zh) * 2016-10-19 2018-05-18 上海博志研新药物技术有限公司 花生胆酸及其中间体的制备方法
AU2020221834A1 (en) 2019-02-12 2021-09-02 Mirum Pharmaceuticals, Inc. Genotype and dose-dependent response to an ASBTI in patients with bile salt export pump deficiency
WO2023105494A1 (en) 2021-12-10 2023-06-15 Universidade Do Porto Cationic steroid compounds, method of obtaining thereof, formulations comprising thereof and their uses

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2441129A (en) * 1942-05-23 1948-05-11 Berczeller Arpad Bile acid derivatives of aryl sulfonamides
US3937815A (en) * 1975-12-05 1976-02-10 SPA--Societa Prodotti Antibiotici S.p.A. Lysozyme derivatives
FR2457302A1 (fr) * 1979-05-23 1980-12-19 Roussel Uclaf Nouveau procede de purification de l'acide ursodesoxycholique
JPS5754151A (en) * 1980-09-18 1982-03-31 Takeda Chem Ind Ltd Physiologically active substance b-52653 and its preparation
JPS57131735A (en) * 1981-02-09 1982-08-14 Takeda Chem Ind Ltd Preparation of quinones
US4418059A (en) * 1981-07-20 1983-11-29 Montefiore Medical Center Nucleoside ester compositions
US4499020A (en) * 1981-07-21 1985-02-12 Montefiore Hospital And Medical Center, Inc. Mixed anhydrides and processes thereof
FR2511007A1 (fr) * 1981-08-07 1983-02-11 Roussel Uclaf Procede de preparation de l'acide ursodesoxycholique a partir de l'acide 3a, 7b, 12a-trihydroxycholanique et produit intermediaire utilises
NL8201492A (nl) * 1982-04-07 1983-11-01 Rijksuniversiteit Werkwijze ter bereiding van een op de 4-plaats equatoriaal gesubstitueerde symmetrisch-polycycloethyleenverbinding; op de 4-plaats equatoriaal gesubstitueerde symmetrisch-polycycloethyleenverbinding alsmede een op basis van de verbinding bereid thermochemiluminescerend merkmateriaal of thermochemiluminescerend sondeermateriaal.
EP0105404A1 (en) * 1982-09-30 1984-04-18 Merck & Co. Inc. Derivatives of steroid compounds linked to cyotoxic agents and process for their preparation
DE3432094A1 (de) * 1984-08-31 1986-03-06 Hoechst Ag, 6230 Frankfurt Ester der pyridin-2,4- und -2,5- dicarbonsaeure als arzneimittel zur inhibierung der prolin- und lysinhydroxylase
JPS62175497A (ja) * 1986-01-28 1987-08-01 Wakunaga Pharmaceut Co Ltd 胆汁酸誘導体およびその製造法
US5238948A (en) * 1987-02-10 1993-08-24 Hoechst Aktiengesellschaft Pyridine-2,4- and -2,5-dicarboxylic acid derivatives and medicaments based on these compounds
DE3854854D1 (de) * 1987-07-10 1996-02-15 Hoechst Ag 3-Desmethyl-mevalonsäurederivate, Verfahren zu ihrer Herstellung, pharmazeutische Präparate auf Basis dieser Verbindungen, ihre Verwendung sowie Zwischenprodukte
US4968790A (en) * 1988-08-12 1990-11-06 American Cyanamid Company Antidiabetic phosphates
DE3930696A1 (de) * 1989-09-14 1991-03-28 Hoechst Ag Gallensaeurederivate, verfahren zu ihrer herstellung, verwendung als arzneimittel
DE3931432A1 (de) * 1989-09-21 1991-04-04 Hoechst Ag Pyrimidin-4,6-dicarbonsaeurediamide, verfahren zu deren herstellung sowie verwendung derselben sowie arzneimittel auf basis dieser verbindungen

Also Published As

Publication number Publication date
DK0417725T3 (da) 1997-11-03
IE903329A1 (en) 1991-04-10
JP2642089B2 (ja) 1997-08-20
EP0417725B1 (de) 1997-04-23
CA2025294C (en) 2001-11-27
HU213395B (en) 1997-06-30
PT95299A (pt) 1991-05-22
ES2100858T3 (es) 1997-07-01
AU637822B2 (en) 1993-06-10
JP2568306B2 (ja) 1997-01-08
CA2025294A1 (en) 1991-03-15
GR3024095T3 (en) 1997-10-31
NO903999D0 (no) 1990-09-13
NO303450B1 (no) 1998-07-13
ZA907300B (en) 1991-06-26
DE3930696A1 (de) 1991-03-28
HU905893D0 (en) 1991-03-28
EP0417725A3 (en) 1992-03-18
US5668126A (en) 1997-09-16
TW199097B (fi) 1993-02-01
IL95668A0 (en) 1991-06-30
JP2642090B2 (ja) 1997-08-20
NO903999L (no) 1991-03-15
EP0417725A2 (de) 1991-03-20
ATE152117T1 (de) 1997-05-15
JPH0892276A (ja) 1996-04-09
DE59010706D1 (de) 1997-05-28
US5646272A (en) 1997-07-08
FI904497A0 (fi) 1990-09-12
KR910006319A (ko) 1991-04-29
NZ235285A (en) 1993-05-26
US5462933A (en) 1995-10-31
JPH0892277A (ja) 1996-04-09
JPH03109396A (ja) 1991-05-09
PT95299B (pt) 1997-06-30
KR0166962B1 (ko) 1999-01-15
AU6244190A (en) 1991-03-21
HUT56115A (en) 1991-07-29
IL95668A (en) 1995-03-30
CY2112B1 (en) 2002-04-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI105155B (fi) Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten sappihappojohdannaisten valmistamiseksi
KR100319562B1 (ko) 담즙산유도체,이의제조방법및이를함유하는저지질혈증제
KR100221690B1 (ko) 담즙산 유도체 및 이의 제조방법
KR100333151B1 (ko) 단량체성담즙산유도체
KR100333149B1 (ko) 담즙산의테트라졸유도체및이를포함하는약제
CN1950376B (zh) 莪术醇衍生物、含该衍生物的组合物及所述衍生物的制药用途
AU2003224672B2 (en) Macrocyclic compounds useful as pharmaceuticals
JP6513853B2 (ja) （ｓ，ｓ）−セコイソラリシレジノールジグルコシド及び（ｒ，ｒ）−セコイソラリシレジノールジグルコシドの製造
JP2009256388A (ja) 選択された蛋白質を分解する方法および複合化合物
JPS62175497A (ja) 胆汁酸誘導体およびその製造法
FI89055C (fi) Foerfarande foer framstaellning av nya androstan-17-karboxylsyraestrar
Dei et al. Design and synthesis of aminoester heterodimers containing flavone or chromone moieties as modulators of P-glycoprotein-based multidrug resistance (MDR)
AU618536B2 (en) Novel 3&#39;,4&#39;-dinitrogen substituted epipodophyllotoxin glucoside derivatives
Smith et al. Cardenolide analogs. 14. Synthesis and biological activity of glucosides of 17. beta.-modified derivatives of digitoxigenin
KR970001532B1 (ko) 신규한 에스트라디올 유도체-클로람부실 결합체, 그의 제조방법 및 그를 포함하는 약학 조성물
RU2264393C2 (ru) Конденсированные производные тиоколхицина и баккатина в качестве противоопухолевых агентов
DK167574B1 (da) Fremgangsmaade til fremstilling af en 16,17-acetalsubstitueret androstan-17beta-(2-oxoethylenoxy)-forbindelse
JP7350854B2 (ja) Ｆｘｒ作動薬の固体形態、結晶形態、結晶体ａ、その調製方法および応用
WO2019020068A1 (zh) 甾体类衍生物fxr激动剂的结晶或无定型物、其制备方法和用途
RU2804320C2 (ru) Твердая форма, кристаллическая форма и кристаллическая форма а агониста fxr, и способ их получения, и их применение
JPS6363698A (ja) 胆汁酸誘導体およびその塩ならびにその製造法
KR930006770B1 (ko) 비스테로이드성 항염증제로서의 피라졸 유도체 및 그 제조방법
CN116731072A (zh) 一种氯尼达明前药化合物、制备方法及其应用
JPS629119B2 (fi)

Legal Events

Date Code Title Description
FG Patent granted

Owner name: HOECHST AKTIENGESELLSCHAFT