PT1551860E - Ligandos de receptores glucocorticóides para o tratamento de distúrbios metabólicos - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO

"LIGANDOS DE RECEPTORES GLUCOCORTICÓIDES PARA O TRATAMENTO DE DISTÚRBIOS METABÓLICOS"

Campo da Invenção

Esta invenção refere-se a compostos novos que são antagonistas selectivos de receptor glucocorticóide hapático, a métodos de preparação desses compostos e a métodos para utilização desses compostos na regulação do metabolismo, em especial, na diminuição dos níveis de glucose no soro e/ou na diminuição do peso corporal.

Antecedentes da Invenção

Um problema importante na diabetes do Tipo 1 e Tipo 2 é de que existe uma produção de glucose excessiva e desadequada pelo fígado. Esta anomalia é a principal causa de hiperglicemia em jejum e ocorre em conjunto com insuficiências na regulação da libertação da insulina e na sensibilidade periférica à insulina. Assim, os agentes que diminuem a produção de glucose no fígado seriam benéficos para o tratamento da diabetes do Tipo 1 e Tipo 2 .

Demonstrou-se que o tratamento intensivo da hiperglicemia da diabetes mellitus do Tipo 1 diminui o desenvolvimento de complicações oculares, renais e neuropáticas, e existem provas que o tratamento também é benéfico para a diabetes do Tipo 2. Os 1 dados disponíveis também indicam que a maioria dos doentes com diabetes do Tipo 2 ou Tipo 1 não está a receber o tratamento apropriado. Esta inadequabilidade existe apesar da existência de vários tipos diferentes de preparações de insulina, bem como outros tratamentos que incluem agentes que estimulam a libertação de insulina (e. g., sulfonilureias); influenciam a produção de glucose no fígado (e. g., metformina); afectam a sensibilidade à insulina (e. g., troglitazona) e a absorção de glucose (e. g., inibidores da α-glucosidase). Apesar da existência de vários agentes activos diferentes por via oral, que diminuem os níveis de glucose no sangue, vários doentes com diabetes do Tipo 2 também necessitam de insulina para controlar os seus níveis de açúcar no sangue. No geral, a utilização de insulina na diabetes do Tipo 2 é superior à da diabetes do Tipo 1, e existe concordância geral de que há uma necessidade para mais agentes activos por via oral para tratar a diabetes do Tipo 2 e outras doenças relacionadas com a obesidade.

As secreções de glucocorticóides da glândula supra-renal (predominantemente cortisol em humanos) foram assim denominadas devido à sua capacidade em regular o metabolismo da glucose. Estes esteróides estimulam a produção de glucose no fígado por estímulo da gluconeogénese, que é a biossíntese de nova glucose (i. e., não glucose do glicogénio). Assim, em insuficiência glucocorticóide existe uma tendência para a hipoglicemia, com produção diminuída de glucose no fígado. 0 desenvolvimento prolongado da doença de Addison nos diabéticos conduz geralmente a níveis diminuídos de glucose. Por outro lado, o excesso de glucocorticóides pode provocar diabetes simples em indivíduos com diabetes mellitus latente e, geralmente, agrava o controlo glicémico em diabéticos estabelecidos. Foram observadas influências semelhantes em vários modelos animais. 2 A produção de glucose acrescida como reacção aos glucocorticóides é devida a efeitos num determinado número de proteínas. Entre estes, são importantes os efeitos em várias transaminases que convertem aminoácidos em precursores de glucose, e a indução de enzimas gluconeogénicas chave como glucose-6 fosfatase e fosfoenolpiruvato carboxicinase (PEPCK). Até mesmo um aumento ligeiro de PEPCK, como obtido em murganhos transgénicos, origina hiperglicemia. Um modelo de murganho genético de diabetes do Tipo 2 tem níveis acrescidos de corticosterona (o glucocorticóide endógeno dessa espécie) e a expressão acrescida concomitantemente de PEPCK. Esta sobre-expressão de PEPCK pode ser reprimida por tratamento com o antagonista de GR RU-38486 resultando numa diminuição na hiperglicemia. Outras proteínas heáticas são reguladas de modo semelhante por glucocorticóides. Por exemplo, a enzima hepática tirosina aminotransferase (TAT) é induzida por tratamento com os agonistas de GR prednisolona ou dexametasona; os níveis elevados desta enzima são normalizados através de tratamento com RU-38486.

As considerações apresentadas acima indicam que se as acções de glucocorticóides endógenos, na produção de glucose no fígado pudessem ser bloqueadas de um modo específico, o controlo glicémico poderia ser melhorado para benefício dos doentes diabéticos. No entanto, até à data, todos os meios para bloquear a acção glucocorticóide têm sido sistémicos. Estes processos resultam em efeitos secundários indesejáveis devido à supressão da sinalização glucocorticóide sistémica. Assim, a adrenalectomia deixa o doente com franca insuficiência supra-renal e com os problemas de doença de Addison. 0 bloqueio da produção de esteróides supra-renal, por exemplo, por metirapona, ou da acção glucocorticóide, por exemplo, com 3 RU-38486, é normalmente de duração de eficácia limitada; e quando é eficaz, também resulta em insuficiência supra-renal generalizada. A longo prazo, a hipersecreção de ACTH compensatória e libertação acrescida de cortisol sobrepõe-se, eventualmente, ao bloqueio e leva a melhor sobre estes tratamentos. Niveis elevados de cortisol periférico podem desencadear efeitos secundários indesejados, como hipocalemia. Pelo contrário, um antagonista especifico de GR no figado não teria estes problemas, deveria neutralizar a produção de glucose acrescida no figado em diabetes mellitus e deveria ser útil para o tratamento da diabetes do Tipo 2.

Esforços anteriores para bloquear a acção de glucocorticóides, como um método para tratar diabetes e obesidade, foram dificultados pelo facto de os compostos utilizados irem, geralmente, bloquear a acção de glucocorticóides em todos os tecidos e conduzirem a potenciais problemas de insuficiência de glucocorticóides, tais como hipotensão, choque e, por fim, a morte se o organismo for exposto a condições de tensão suficientemente fortes. Pelo contrário, um antagonista selectivo de GR no figado com efeitos mínimos fora do fígado poderia ser utilizado como uma terapêutica de linha da frente para diabetes do Tipo 2, ou poderia ser utilizado em conjunto com outras terapêuticas existentes.

Um antagonista selectivo de GR no fígado proporciona várias vantagens. Em primeiro, diminuiria a produção de glucose no fígado. Esta acção terá um efeito significativo no controlo glicémico. De facto, a produção excessiva de glucose no fígado pode ser a principal insuficiência na diabetes do Tipo 2. Em segundo, tal fármaco deve melhorar a sensibilidade à insulina, 4 uma vez que a melhoria geral no meio metabólico e o alivio das insuficiências induzidas por hiperglicemia na acção e secreção da insulina. A necessidade diminuída da secreção de células β, como um resultado de uma redução na glicemia, retardaria a disfunção progressiva de células β, caracteristica da diabetes do Tipo 2. Outra vantagem que um antagonista selectivo de GR no figado teria, em comparação com o tratamento com sulfonilureia ou insulina, é que o doente teria um menor risco de hipoglicemia. A presente invenção é dirigida a compostos de fórmula (I) , que são úteis para o tratamento da diabetes do tipo II, obesidade, Sindrome X, hiperglicemia, hipertensão, eliminação inadequada de glucose, hiperinsulinemia, hiperlipidemia e níveis elevados de glucocorticóides hepáticos,

O o

ou um seu sal farmaceuticamente adequado, em que 5 A é um membro seleccionado do grupo consistindo de -0- ou -NRA, em que RA é um membro seleccionado do grupo consistindo de hidrogénio e alquilo;

Ri, R2, R3, R4, R5, R6 e R7 são membros independentemente seleccionados do grupo que consistindo de hidrogénio, alquilo- (Ci~Ce) , alcenilo, alcinilo, alcoxilo, hidroxilo, alcoxialquilo, hidroxialquilo e halogéneo; e R8, R9 e Rio são membros independentemente seleccionados do grupo consistindo de hidrogénio, alquilo, alcenilo, alcinilo, alcoxilo, hidroxilo, ciano, halogéneo e -NRBRc, em que RB e Rc são membros independentemente seleccionados do grupo consistindo de hidrogénio e alquilo.

Os compostos da presente invenção encontram utilização num método de antagonização selectiva dos efeitos dos receptores glucocorticóides, num mamifero, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I) ·

Os compostos da presente invenção encontram utilização num método de antagonização selectiva dos efeitos dos receptores glucocorticóides no figado, em mamiferos, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais de um composto de fórmula (I).

Os compostos da presente invenção encontram utilização num método para tratar diabetes, hiperglicemia, hiperinsulinemia, eliminação inadequada de glucose, obesidade, Sindrome X, hiperlipidemia, hipertensão diabética e niveis elevados de 6 glucocorticóides hepáticos, compreendendo a administração de um ou mais compostos de fórmula (I). A presente invenção inclui as seguintes formas de realização: i) um composto da invenção para utilização como um medicamento; ii) um composto da invenção para utilização como um medicamento para o tratamento de um estado, num mamifero, seleccionado de diabetes, obesidade ou Sindrome X; iii) um composto da invenção para utilização como um medicamento para o tratamento de um estados, seleccionado de hiperglicemia, eliminação inadequada de glucose, hiperinsulinemia, hiperlipidemia, hipertensão diabética ou niveis elevados de glucocorticóides hepáticos num mamífero; iv) um composto da invenção para utilização como um medicamento para o tratamento de um estado que beneficia da antagonização selectiva dos efeitos dos receptores glucocorticóides no fígado num mamífero; v) utilização de um composto da invenção para o fabrico de um medicamento para o tratamento de um estado, seleccionado de diabetes, obesidade ou Sindrome X num mamífero; vi) utilização de um composto da invenção para o fabrico de um medicamento para o tratamento de um estado, seleccionado de hiperglicemia, eliminação inadequada de glucose, 7 hiperinsulinemia, hiperlipidemia, hipertensão diabética ou niveis elevados de glucocorticóides hepáticos num mamífero; vii) utilização de um composto da invenção para o fabrico de um medicamento para o tratamento de um estado que beneficia da antagonização selectiva dos efeitos dos receptores glucocorticóides no fígado num mamífero; e viii) Uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável.

Ainda noutra forma de realização, a invenção é dirigida a composições farmacêuticas contendo compostos de fórmula (I).

Outra forma de realização da presente invenção é dirigida a pró-fármacos farmaceuticamente adequados de compostos de fórmula (I) ·

Descrição Pormenorizada da Invenção 0 termo "alcenilo" refere-se a um grupo monovalente de dois a doze carbonos, de cadeia linear ou ramificada, derivado de um hidrocarboneto tendo, pelo menos, uma ligação dupla carbono-carbono. Os grupos alcenilo desta invenção podem estar opcionalmente substituídos com 1-5 substituintes seleccionados de alcoxilo, alcanoiloxilo, alcoxicarbonilo, amino, azido, carboxamido, carboxilo, ciano, halo, hidroxilo, nitro, perfluoroalquilo, perfluoroalcoxilo, oxo, tioalcoxilo, arilo substituído ou não substituído, heteroarilo substituído ou não substituído e heterociclo substituído ou não substituído. Os grupos arilo substituídos, heteroarilo substituídos e heterociclo substituídos, que substituem os grupos alquilo desta invenção estão substituídos com, pelo menos, um substituinte seleccionado de alquilo, alcoxilo, carboxilo, azido, carboxaldeído, halo, hidroxilo, perfluoroalquilo e perfluoroalcoxilo. 0 termo "alcoxilo" refere-se a um grupo alquilo ligado ao grupo molecular de origem através de um átomo de oxigénio. 0 termo "alcoxialquilo" refere-se a um grupo alcoxilo ligado ao grupo molecular de origem através de um grupo alquileno. 0 termo "alquilo" refere-se a um grupo monovalente de um a doze carbonos, de cadeia linear ou ramificada, derivado de um hidrocarboneto saturado. Os grupos alquilo desta invenção podem estar opcionalmente substituídos com 1-5 substituintes seleccionados de alcoxilo, alcanoiloxilo, alcoxicarbonilo, amino, azido, carboxamido, carboxilo, ciano, halo, hidroxilo, nitro, perfluoroalquilo, perfluoroalcoxilo, oxo, tioalcoxilo, arilo substituído ou não substituído, heteroarilo substituído ou não substituído e heterociclo substituído ou não substituído. Os grupos arilo substituídos, heteroarilo substituídos e heterociclo substituídos, que substituem os grupos alquilo desta invenção estão substituídos com, pelo menos, um substituinte seleccionado de alquilo, alcoxilo, carboxilo, azido, carboxaldeído, halo, hidroxilo, perfluoroalquilo e perfluoroalcoxilo. 9 0 termo "alcinilo" refere-se a um hidrocarboneto monovalente de dois a doze carbonos, de cadeia linear ou ramificada com, pelo menos, uma ligação tripla carbono-carbono. Os grupos alcinilo desta invenção pode estar opcionalmente substituídos com 1-5 substituintes seleccionados de alcoxilo, alcanoiloxilo, alcoxicarbonilo, amino, azido, carboxamido, carboxilo, ciano, halo, hidroxilo, nitro, perfluoroalquilo, perfluoroalcoxilo, oxo, tioalcoxilo, arilo substituído ou não substituído, heteroarilo substituído ou não substituído e heterociclo substituído ou não substituído. Os grupos arilo substituídos, heteroarilo substituídos e heterociclo substituídos, que substituem os grupos alquilo desta invenção estão substituídos com, pelo menos, um substituinte seleccionado de alquilo, alcoxilo, carboxilo, azido, carboxaldeido, halo, hidroxilo, perfluoroalquilo e perfluoroalcoxilo. O termo "arilo" refere-se a um sistema anelar carbociclico mono- ou bicíclico, tendo um ou dois anéis aromáticos. 0 grupo arilo também pode estar fundido a um anel de ciclo-hexano, ciclo-hexeno, ciclopentano ou ciclopenteno. Os grupos arilo desta invenção pode estar, opcionalmente, substituídos com 1-5 substituintes independentemente seleccionados de alquilo, alcoxilo, alcoxialquilo, alcoxialcenilo, alcanoílo, alcanoiloxilo, alcanoiloxialquilo, alcanoiloxialcenilo, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilalquilo, alcoxicarbonilalcenilo, alquilsulfonilo, alquilsulfonilalquilo, alquilsulfonilalcenilo, amino, aminoalquilo, aminoalcenilo, aminossulfonilo, aminossulfonilalquilo, aminossulfonilalcenilo, azido, carboxaldeido, (carboxaldeido)alquilo, (carboxaldeido)alcenilo, carboxamido, carboxamidoalquilo, carboxamidoalcenilo, carboxilo, carboxialquilo, carboxialcenilo, ciano, cianoalquilo, cianoalcenilo, halo, haloalquilo, haloalcenilo, hidroxilo, 10 hidroxialquilo, hidroxialcenilo, nitro, oxo, perfluoroalquilo, perfluoroalcoxilo, perfluoroalcoxialquilo, perfluoroalcoxialcenilo, tioalcoxilo, tioalcoxialquilo, tioalcoxialcenilo, arilo substituído ou não substituído, heteroarilo substituído ou não substituído e heterociclo substituído ou não substituído. Os grupos arilo heteroarilo e heterociclo substituídos, que substituem os grupos arilo desta invenção estão substituídos com, pelo menos, um substituinte seleccionado de alquilo, alcoxilo, carboxilo, azido, carboxaldeido, halo, hidroxilo, perfluoroalquilo e perfluoroalcoxilo. 0 termo "ciano" refere-se a -CN. 0 termo "halo" ou "halogéneo" refere-se a F, Cl, Br ou I. 0 termo "heterociclo", como aqui utilizado, refere-se a anéis ciclicos de quatro, cinco, seis ou sete membros, não aromáticos, contendo, pelo menos, um átomo seleccionado do grupo consistindo de oxigénio, azoto e enxofre. Os anéis de quatro membros não têm ligações duplas, os anéis de cinco membros não têm ou têm uma ligação dupla e os anéis de seis e sete membros não têm, ou têm uma ou duas, ligações duplas. Os grupos heterociclo da invenção são exemplificados por di-hidropiridinilo, morfolinilo, piperazinilo, pirrolidinilo, tetra-hidropiridinilo, piperidinilo, tiomorfolinilo, 1,3-dioxolanilo, 1,4-dioxanilo, 1,3-dioxanilo, e semelhantes. Os grupos heterociclo desta invenção podem estar fundidos a um grupo arilo ou a um grupo heteroarilo. Os grupos heterociclo da invenção estão ligados ao grupo molecular de origem através de um átomo de carbono ou azoto substituivel no anel. 11

Os heterociclilos também incluem grupos bicíclicos em ponte, em que um grupo heterocíclico monocíclico está em ponte através de um grupo alquileno, tais como

H N Θ

Js

N H e semelhantes.

Os grupos opcionalmente independentemente alcoxialquilo, heterociclo desta invenção substituídos com 1-5 seleccionados de alquilo, alcoxialcenilo, alcanoilo, podem estar substituintes alcoxilo, alcanoiloxilo, alcanoiloxialquilo, alcoxicarbonilalquilo, alquilsulfonilalquilo, aminoalquilo, aminossulfonilalquilo, alcanoiloxialcenilo, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilalcenilo, alquilsulfonilo, alquilsulfonilalcenilo, amino, aminoalcenilo, aminossulfonilo, aminossulfonilalcenilo, azido, carboxaldeído, (carboxaldeido)alquilo, (carboxaldeido)alcenilo, carboxamido, carboxamidoalquilo, carboxamidoalcenilo, carboxilo, carboxialquilo, carboxialcenilo, ciano, cianoalquilo, cianoalcenilo, halo, haloalquilo, haloalcenilo, hidroxilo, hidroxialquilo, hidroxialcenilo, nitro, oxo, perfluoroalquilo, perfluoroalcoxilo, perfluoroalcoxialquilo, perfluoroalcoxialcenilo, tioalcoxilo, tioalcoxialquilo, tioalcoxialcenilo, arilo substituído ou não substituído, heteroarilo substituído ou não substituído e heterociclo substituído ou não substituído. Os grupos arilo, heteroarilo e heterociclo substituídos, que substituem os grupos heterociclo desta invenção estão substituídos com, pelo menos, um 12 substituinte seleccionado de alquilo, alcoxilo, carboxilo, azido, carboxaldeído, halo, hidroxilo, perfluoroalquilo e perfluoroalcoxilo. 0 termo "heteroarilo," como aqui utilizado, refere-se a grupos ciclicos aromáticos, de cinco e seis membros, em que, pelo menos, um átomo é seleccionado do grupo consistindo de N, O e S, e os restantes átomos são carbono. Os anéis de cinco membros têm duas ligações duplas e os anéis de seis membros têm três ligações duplas. Os grupos heteroarilo da invenção estão ligados ao grupo molecular de origem através de um carbono ou azoto, no anel, substituível. Os heteroarilos são exemplificados por furanilo, tienilo, pirrolilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, oxadiazolilo, triazolilo, tiadiazolilo, piridilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, pirazolilo, triazinilo, e semelhantes. Os grupos heteroarilo desta invenção podem estar fundidos a um grupo arilo, um heterociclo, ou outro heteroarilo. Os grupos heteroarilo desta invenção podem estar opcionalmente substituídos com 1-5 substituintes independentemente seleccionados de alquilo, alcoxilo, alcoxialquilo, alcoxialcenilo, alcanoílo, alcanoiloxilo, alcanoiloxialquilo, alcanoiloxialcenilo, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilalquilo, alcoxicarbonilalcenilo, alquilsulfonilo, alquilsulfonilalquilo, alquilsulfonilalcenilo, amino, aminoalquilo, aminoalcenilo, aminossulfonilo, aminossulfonilalquilo, aminossulfonilalcenilo, azido, carboxaldeído, (carboxaldeído)alquilo, (carboxaldeído)alcenilo, carboxamido, carboxamidoalquilo, carboxamidoalcenilo, carboxilo, carboxialquilo, carboxialcenilo, ciano, cianoalquilo, cianoalcenilo, halo, haloalquilo, haloalcenilo, hidroxilo, hidroxialquilo, hidroxialcenilo, nitro, oxo, perfluoroalquilo, perfluoroalcoxilo, 13 perfluoroalcoxialquilo, perfluoroalcoxialcenilo, tioalcoxilo, tioalcoxialquilo, tioalcoxialcenilo, arilo substituído ou não substituído, heteroarilo substituído ou não substituído e heterociclo substituído ou não substituído. 0 arilo, heteroarilo e heterociclo substituídos, que substituem os grupos heteroarilo desta invenção estão substituídos com, pelo menos, um substituinte seleccionado de alquilo, alcoxilo, carboxilo, azido, carboxaldeído, halo, hidroxilo, perfluoroalquilo e perfluoroalcoxilo. 0 termo "hidroxilo" refere-se a -OH. 0 termo "hidroxialquilo" refere-se a um grupo hidroxilo ligado à molécula de origem através de um grupo alquilo. A presente invenção é dirigida a compostos de fórmula (I),

O

d), ou um seu sal ou pró-fármaco farmaceuticamente adequado, em que 14 A é um membro seleccionado do grupo consistindo de -0- ou -NRA, em que RA é um membro seleccionado do grupo consistindo de hidrogénio e alquilo;

Ri, R2, R3, R4, R5, R6 e R7 são membros independentemente seleccionados do grupo consistindo de hidrogénio, alquilo-(Ci-C6), alcenilo, alcinilo, alcoxilo, hidroxilo, alcoxialquilo, hidroxialquilo e halogéneo; e

Rg, R9 e Rio são membros independentemente seleccionados do grupo consistindo de hidrogénio, alquilo, alcenilo, alcinilo, alcoxilo, hidroxilo, ciano, halogéneo e -NRBRc, em que RB e Rc são membros independentemente seleccionados do grupo consistindo de hidrogénio e alquilo.

De acordo com uma forma de realização da presente invenção, proporciona-se um composto de fórmula (I), em que Ri, R2, R3 e R4 são hidrogénio; e R5 é um membro seleccionado do grupo consistindo de hidrogénio e alquilo e A, R6, R7, Rs, R9, Rio, Ra, Rb e Rc estão definidos na fórmula (I).

Noutra forma de realização da presente invenção, proporciona-se um composto de fórmula (I), em que Ri, R2, R3, R4, R8, R9 e Rio são hidrogénio; R5 é um membro seleccionado do grupo consistindo de hidrogénio e alquilo; R6 é OH; R7 é alcino e A, R8, Rg, Rio, Ra, Rb e Rc estão definidos na fórmula (I) .

Noutra forma de realização da presente invenção, proporciona-se um composto de fórmula (I), em que Ri, R2, R3, R4,

Rs, R9 e Rio são hidrogénio; R5 é um membro seleccionado do grupo consistindo de hidrogénio e alquilo; R6 é OH; R7 é -C=C-CH3 e A, Rg, Rg, Rio, Ra, Rb e Rc estão definidos na fórmula (I) . 15

Noutra forma de realização da presente invenção, proporciona-se um composto de fórmula (I), em que Ri, R2, R3, R4, R8, R9 e Rio são hidrogénio; R5 é um membro seleccionado do grupo consistindo de hidrogénio e alquilo; R6 é OH; R7 é -C=c-CH3; A é NCH3 e R8, Rg, Rio, Ra, Rb e Rc estão definidos na fórmula (I) .

Noutra forma de realização da presente invenção, proporciona-se um composto de fórmula (I), em que R6 é OH; R7 é -C=C-CH3,· A é “0-, e Ri, R2, R3, R4, R5, Rs, R^ Ricn Ra, Rb e Rc estão definidos na fórmula (I).

Outra forma de realização da presente invenção é dirigida a pró-fármacos farmaceuticamente adequados dos compostos de fórmula (I).

Numa forma de realização, a presente invenção é dirigida a pró-fármacos que são clivados para libertar um composto de fórmula (I) no aparelho digestivo.

Noutra forma de realização da presente invenção, proporciona-se um composto de fórmula (II),

16 ou um seu sal farmaceuticamente adequado, em que A é um membro seleccionado do grupo consistindo de -0- e -NRA; Ri, R2, R3, R4, Rs, Rg e R7 são membros independentemente seleccionados do grupo consistindo de hidrogénio, alquilo-(Οχ-Οε), alcenilo, alcinilo, alcoxilo, hidroxilo, alcoxialquilo, hidroxialquilo e halogéneo; Rs, R9 e Rio são membros independentemente seleccionados do grupo consistindo de hidrogénio, alquilo, alcenilo, alcinilo, alcoxilo, hidroxilo, ciano, halogéneo e -NRBRc; Ra é um membro seleccionado do grupo consistindo de hidrogénio e alquilo; RB e Rc são seleccionados do grupo consistindo de hidrogénio e alquilo; e um de PDi e PD2 é um grupo tal que o composto de fórmula (II) é um éster, um fosfato, um fosforiloximetilcarbonato, um carbamato, um éter aciloximetilico ou um éter fosforiloximetílico e o grupo é clivado in vivo; e o outro de PDi e PD2 tem um daqueles significados ou é um átomo de hidrogénio.

Noutra forma de realização da presente invenção, proporciona-se um composto de fórmula (II), como definido acima, em que um de PDi e PD2 é seleccionado do grupo consistindo de (2-amonioetoxi)carbonilo, (3-amoniopropoxi)carbonilo, fosforilo, fosforiloximetilo, 4-amoniobutanoílo, 5-amoniopentanoílo e 4-amoniobutanoiloximetilo; e o outro de PDi e PD2 tem um daqueles significados ou é um átomo de hidrogénio.

Noutra forma de realização da presente invenção, proporciona-se um composto de fórmula (II) , como definido acima, em que as unidades PDi e/ou PD2 são clivadas in vivo no aparelho digestivo. 17

Noutra forma de realização da presente invenção, proporciona-se um composto de fórmula (II) em que Ri, R2, R3, R4, R8, R9 e Rio são hidrogénio; R5 é um membro seleccionado do grupo consistindo de hidrogénio e alquilo; R6 é OH; R7 é -0=0-0¾. Os compostos da presente invenção encontram utilização num método de antagonização selectiva dos efeitos dos receptores glucocorticóides num mamifero, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I).

Os compostos da presente invenção encontram utilização num método de antagonização selectiva dos efeitos dos receptores glucocorticóides num mamifero, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (II).

Os compostos da presente invenção encontram utilização num método de antagonização selectiva dos efeitos dos receptores glucocorticóides no figado em mamíferos, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I).

Os compostos da presente invenção encontram utilização num método de antagonização selectiva dos efeitos dos receptores glucocorticóides no figado em mamíferos, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (II).

Os compostos da presente invenção encontram utilização num método para tratar diabetes, obesidade ou Síndrome X num mamífero, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I). 18

Os compostos da presente invenção encontram utilização num método para tratar diabetes, obesidade ou Sindrome X num mamifero, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (II).

Os compostos da presente invenção encontram utilização num método para tratar hiperglicemia, eliminação inadequada de glucose, hiperinsulinemia, hiperlipidemia, hipertensão diabética ou niveis elevados de glucocorticóides hepáticos num mamifero, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I).

Os compostos da presente invenção encontram utilização num método para tratar hiperglicemia, eliminação inadequada de glucose, hiperinsulinemia, hiperlipidemia, hipertensão diabética ou niveis elevados de glucocorticóides hepáticos, num mamifero, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (II).

Numa forma de realização da presente invenção, proporciona-se uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I) em combinação com um veiculo farmaceuticamente adequado.

Numa forma de realização da presente invenção, proporciona-se uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (II) em combinação com um veiculo farmaceuticamente adequado. 19

Na presente invenção, o termo "pró-fármaco" representa compostos que são transformados in vivo no composto de fórmula (I), por exemplo, por hidrólise no sangue ou no aparelho digestivo. Uma discussão aprofundada é proporcionada em T. Higuchi e V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14 de A.C.S. Symposium Series, e em Edward B. Roche, ed., Bioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987, os quais estão aqui incorporados por referência. 0 termo "pró-fármacos farmaceuticamente adequados" representa os pró-fármacos dos compostos da presente invenção que são, no âmbito da avaliação médica, adequada para utilização no contacto com os tecidos de humanos e animais inferiores, sem demasiadas toxicidade, irritação, reacção alérgica, e semelhantes, em proporção com uma razão beneficio/risco razoável, e eficaz na sua utilização pretendida, assim como as várias formas iónicas, dos compostos da invenção. Por exemplo, os pró-fármacos de éster podem ser preparados de acordo com os métodos de Anderson e Taphouse, descritos em J. Pharm. Sei. 1981, 70, 181-186. Os pró-fármacos de fosfato podem ser preparados de acordo com os métodos descritos por Kitagawa, Mohri, e Kitagawa em Arzneim.-Forschung 1972, 22, 402-410; ou pelos processos de Thaisrivongs et al. em J. Med. Chem. 1993, 36, 2575-2577. Os carbonatos e carbamatos de fosforiloxi-metilo podem ser preparados de acordo com as estratégias apresentadas por Safadi, Oliyai, e Stella em Pharm. Res. 1993, 10(9), 1350-1355. Estes e outros pró-fármacos, incluindo éteres aciloximetilicos e fosforiloximetílicos também podem ser preparados de acordo com as estratégias apresentadas por Hewawasam et al., em Bioorg. Med. Chem. Letts. 2003, 13, 1695-1698. Outros exemplos de pró-fármacos solúveis em água são 20 descritos por Y. Hattori, S. Kawakami, F. Yamashita, e M. Hashida em J. Controlled Release 69 (2000) , 369-377, e por R. Sauer, J. Maurinsh, U. Reith, P. Fulle, K-N. Klotz, e C. Muller em J. Med. Chem. 2000, 43, 440-448, aqui incorporados como exemplo. O termo "sal farmaceuticamente adequado" representa os sais que são, no âmbito da avaliação médica, adequados para utilização no contacto com os tecidos de humanos e animais inferiores, sem demasiadas toxicidade, irritação, reacção alérgica, e semelhantes, e estão em proporção com uma razão beneficio/risco razoável. Os sais farmaceuticamente adequados são bem conhecidos na técnica. Por exemplo, S. M. Berge, et al. descrevem, em pormenor, sais farmaceuticamente adequados em J. Pharmaceutical Sciences, 66: 1-19 (1977). Os sais podem ser preparados in situ durante o isolamento final e purificação dos compostos da invenção, ou separadamente, por reacção da função base livre com um ácido orgânico adequado. Os sais de adição de ácido representativos incluem sais de acetato, adipato, alginato, ascorbato, aspartato, benzenossulfonato, benzoato, bissulfato, borato, butirato, canforato, canforsulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanossulfonato, fumarato, gluco-heptonato, glicerofosfato, hemissulfato, heptonato, hexanoato, bromidrato, cloridrato, iodidrato, 2-hidroxi-etanossulfonato, lactobionato, lactato, laurato, laurilsulfato, malato, maleato, malonato, metanossulfonato, 2-naftalenossulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tartarato, tiocianato, toluenossulfonato, undecanoato, valerato, e semelhantes. Os sais de metais alcalinos ou alcalino-terrosos representativos incluem 21 de sódio, lítio, potássio, cálcio, magnésio, e semelhantes, bem como amónio não tóxico, amónio quaternário, e catiões de amina, incluindo, mas sem estar limitado a, amónio, tetrametilamónio, tetraetilamónio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, etilamina, e semelhantes.

Os compostos da presente invenção podem existir como estereoisómeros, em que os centros assimétricos ou quirais estão presentes. Estes compostos são designados pelos símbolos "R" ou "S," dependendo da configuração dos substituintes em torno do átomo de carbono quiral. A presente invenção contempla vários estereoisómeros e as suas misturas. Os estereoisómeros incluem enantiómeros e diastereoisómeros, e as misturas equivalentes de enantiómeros são designadas por (±) . Os estereoisómeros individuais de compostos da presente invenção podem ser preparados por síntese, a partir de materiais de partida comercialmente disponíveis, que contêm centros assimétricos ou quirais, ou por preparação de misturas racémicas seguido de resolução, bem conhecida pelos peritos na técnica. Estes métodos de resolução são exemplificados por (1) ligação de uma mistura de enantiómeros ao auxiliar quiral, separação da mistura resultante de diastereoisómeros por recristalização ou cromatografia e libertação do produto opticamente puro do auxiliar ou (2) separação directa da mistura de enantiómeros em colunas de cromatografia quiral.

Os isómeros geométricos também podem existir nos compostos da presente invenção. A presente invenção contempla os vários isómeros geométricos e suas misturas resultantes do arranjo dos substituintes em torno de uma ligação dupla carbono-carbono ou por arranjo dos substituintes em torno de um anel. Os substituintes em torno de uma ligação dupla carbono-carbono são 22 designados como estando na configuração Z ou E, em que o termo "Z" representa substituintes no mesmo lado da ligação dupla carbono-carbono e o termo "E" representa substituintes em lados opostos da ligação dupla carbono-carbono. Os arranjos dos substituintes em torno de um anel são designados como cis ou trans, em que o termo "cis" representa substituintes no mesmo lado do plano do anel e o termo "trans" representa substituintes em lados opostos do plano do anel. As misturas de compostos em que os substituintes estão dispostos no mesmo lado, ou em lados opostos, do plano do anel são designados por cis/trans. A presente invenção também proporciona composições farmacêuticas, que compreendem compostos da presente invenção, formuladas em conjunto com um ou mais veiculos farmaceuticamente adequados não tóxicos. As composições farmacêuticas podem ser especialmente formuladas para administração oral, na forma sólida ou liquida, para injecção parentérica ou para administração rectal.

As composições farmacêuticas desta invenção podem ser administradas em humanos, e outros animais, por via oral, rectal, parentérica, intracisternal, intravaginal, intraperitoneal, tópica (como pós, unguentos ou gotas), bucal ou como uma preparação oral ou nasal para pulverização. O termo administração "parentérica" refere-se a modos de administração que incluem injecção e infusão intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, intra-esternal, subcutânea e intra-articular.

As composições farmacêuticas desta invenção para injecção parentérica compreendem soluções, dispersões, suspensões ou emulsões, aquosas ou não aquosas, esterilizadas, farmaceuticamente adequadas, bem como pós esterilizados para 23 reconstituição em soluções ou dispersões injectáveis esterilizadas, mesmo antes da utilização. Exemplos de veiculos, diluentes, solventes ou transportadores, aquoso e não aquosos, adequados incluem água, etanol, polióis (tais como glicerol, propilenoglicol, polietilenoglicol, e semelhantes), e suas misturas adequadas, óleos vegetais (tal como azeite), e ésteres orgânicos injectáveis, tal como oleato de etilo. A fluidez apropriada pode ser mantida, por exemplo, pela utilização de materiais de revestimento, tal como lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula desejado no caso de dispersões, e pela utilização de tenso-activos. Por outro lado, o tamanho de partícula reduzido pode manter a actividade biológica.

Estas composições também podem conter adjuvantes, tais como conservantes, agentes molhantes, agentes emulsionantes e agentes de dispersão. A prevenção da acção de microrganismos pode ser assegurada pela inclusão de vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabeno, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, e semelhantes. Também pode ser desejável incluir agentes isotónicos, tais como açúcares, cloreto de sódio, e semelhantes. A absorção prolongada da forma farmacêutica injectável pode ser conseguida pela inclusão de agentes que retardam a absorção, tais como monoestearato de alumínio e gelatina.

Nalguns casos, de modo a prolongar o efeito do fármaco, é desejável abrandar a absorção do fármaco a partir da injecção subcutânea ou intramuscular. Isto pode ser conseguido pela utilização de uma suspensão líquida de material cristalino ou amorfo com baixa solubilidade em água. A velocidade de absorção do fármaco depende, então, da sua velocidade de dissolução que, por sua vez, pode depender do tamanho do cristal e forma 24 cristalina. Em alternativa, a absorção retardada de uma forma de fármaco, administrada por via parentérica, é conseguida por dissolução ou suspensão do fármaco num veiculo de óleo.

As formas injectáveis em depósito são preparadas por formação de matrizes micro-encapsuladas do fármaco em polímeros biodegradáveis, tal como poliláctido-poliglicólico. Dependendo da razão entre o fármaco e o polímero e a natureza do polímero utilizado em particular, a velocidade de libertação do fármaco pode ser controlada. Exemplos de outros polímeros biodegradáveis incluem poli(ortoésteres) e poli(anidridos). As formulações injectáveis em depósito também são preparadas por retenção do fármaco em lipossomas ou micro-emulsões que são compatíveis com os tecidos corporais.

As formulações injectáveis podem ser esterilizadas, por exemplo, por filtração através de um filtro de retenção bacteriana ou por incorporação de agentes de esterilização na forma de composições sólidas esterilizadas que podem ser dissolvidas ou dispersas em água esterilizada ou outro meio injectável esterilizado, mesmo antes da utilização.

As formas de dosagem sólidas para administração oral incluem cápsulas, comprimidos, pílulas pós e grânulos. Nestas formas de dosagem sólidas, o composto activo é misturado com, pelo menos, um excipiente ou veículo inerte, farmaceuticamente adequado, tais como citrato de sódio ou fosfato dicálcico e/ou a) enchimentos ou diluentes, tais como amidos, lactose, sacarose, glucose, manitol e ácido silícico, b) ligantes, tais como, por exemplo, carboximetilcelulose, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarose e acácia, c) humidificantes, tal como glicerol, d) agentes de desintegração, tais como ágar-ágar, 25 carbonato de cálcio, amido de batata ou tapioca, ácido alginico, determinados silicatos e carbonato de sódio, e) agentes retardantes de solução, tal como parafina, f) aceleradores de absorção, tal como compostos de amónio quaternário, g) agentes molhantes, tais como, por exemplo, álcool cetilico e monoestearato de glicerol, h) absorventes, tais como caulino e argila de bentonite, e i) lubrificantes, tais como talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietilenoglicóis sólidos, laurilsulf ato de sódio, e suas misturas. No caso de cápsulas, comprimidos e pílulas, a forma de dosagem também pode compreender agentes tampão.

As composições sólidas de um tipo semelhante também podem ser utilizadas como enchimentos em cápsulas de gelatina de enchimento macio ou duro, utilizando excipientes como lactose ou açúcar de leite, bem como polietilenoglicóis de elevado peso molecular, e semelhantes.

As formas de dosagem sólidas de comprimidos, drageias, cápsulas, pílulas e grânulos podem ser preparadas com revestimentos e invólucros, tais como revestimentos entéricos e outros revestimentos bem conhecidos na técnica de formulação farmacêutica. Podem conter, de um modo opcional, agentes opacificantes e também podem ter uma composição tal que libertem o(s) ingrediente(s) activo(s) apenas, ou de um modo preferido, numa determinada zona do aparelho intestinal, opcionalmente, de um modo retardado. Exemplos de composições moldáveis que podem ser utilizadas incluem substâncias poliméricas e ceras.

Os compostos activos também podem estar na forma micro-encapsulada, se apropriado, com um ou mais dos excipientes acima mencionados. 26

As formas de dosagem líquidas para administração oral incluem emulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires farmaceuticamente adequados. Além dos compostos activos, as formas de dosagem líquidas podem conter diluentes inertes geralmente utilizados na técnica, tais como, por exemplo, água ou outros solventes, agentes de solubilização e emulsionantes, tais como álcool etílico, álcool isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, álcool benzílico, benzoato de benzilo, propilenoglicol, 1,3-butilenoglicol, dimetilformamida, óleos (em particular, óleos de semente de algodão, amendoim, milho, gérmen, azeite, rícino e sésamo), glicerol, álcool tetra-hidrofurfurílico, polietilenoglicóis e ésteres de ácido gordo de sorbitano, e suas misturas.

Além dos diluentes inertes, as composições orais também podem incluir adjuvantes, tais como agentes molhantes, agentes emulsionantes e de suspensão, agentes edulcorantes, aromatizantes e perfumantes.

As suspensões podem conter, além dos compostos activos, agentes de suspensão, como, por exemplo, álcoois isostearílicos etoxilados, polioxietilenosorbitol e ésteres de sorbitano, celulose microcristalina, meta-hidróxido de alumínio, bentonite, ágar-ágar e tragacanto, e suas misturas.

As composições para administração rectal ou vaginal são, de um modo preferido, supositórios que podem ser preparados por mistura dos compostos desta invenção com excipientes ou veículos adequados não irritantes, tais como manteiga de cacau, polietilenoglicol ou uma cera para supositório que são sólidos à temperatura ambiente mas líquidos à temperatura corporal e, 27 assim, fundem no recto ou na cavidade vaginal e libertam o composto activo.

Os compostos da presente invenção também podem ser administrados na forma de lipossomas. Como é conhecido na técnica, os lipossomas são geralmente derivados de fosfolipidos ou outras substâncias lipidicas. Os lipossomas são formados por cristais liquidos hidratados mono- ou multi-lamelares que estão dispersos num meio aquoso. Pode ser utilizado qualquer lipido metabolizável não tóxico, fisiologicamente adequado, capaz de formar lipossomas. As composições presentes em forma de lipossoma podem conter, além do composto da presente invenção, estabilizantes, conservantes, excipientes, e semelhantes. Os lipidos preferidos são os fosfolipidos e as fosfatidilcolinas (lecitinas), naturais e sintéticos.

Os métodos para formar lipossomas são conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, Prescott, Ed., Methods in Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, New York, N.Y. (1976), p. 33 et seq.

As formas de dosagem para administração tópica de um composto desta invenção incluem pós, soluções para pulverização, unguentos e inaladores. 0 composto activo é misturado sob condições esterilizadas com um veiculo farmaceuticamente adequado e quaisquer conservantes, tampões ou propulsantes necessários que podem ser desejados. As formulações oftálmicas, unguentos oculares, pós e soluções também estão contempladas no âmbito desta invenção.

Os niveis de dosagens reais dos ingredientes activos nas composições farmacêuticas desta invenção podem variar de modo a 28 obter uma quantidade do(s) composto (s) activo(s) que é eficaz para conseguir a resposta terapêutica desejada para um doente, composições e modo de administração, em particular. 0 nivel de dosagem seleccionado irá depender da actividade do composto em particular, da via de administração, da gravidade do estado a ser tratado e do estado e historial médico antecedente do doente a ser tratado. No entanto, está no âmbito da técnica começar com doses do composto a níveis inferiores ao necessário para conseguir o efeito terapêutico desejado e para aumentar gradualmente a dosagem até se conseguir o efeito desejado.

De um modo geral, são administrados, por via oral, a um doente mamífero, níveis de dosagem de cerca de 0,1 até cerca de 50, de um modo mais preferido, de cerca de 1 até cerca de 10 mg de composto activo, por quilograma de peso corporal, por dia. Se desejado, a dosagem diária eficaz pode ser dividida em doses múltiplas para fins de administração, e. g., duas a quatro doses individuais por dia.

Os compostos da invenção podem ser preparados por utilização de reacções apresentadas nos Esquemas a seguir. Será prontamente evidente para um perito na técnica que os compostos podem ser sintetizados por substituição dos reagentes apropriados nestas sínteses e que os passos, em si, podem ser realizados numa ordem variável. Por exemplo, nos esquemas a seguir, R1, R2, R3, R4, R5, R8, R9 e Rio, quando conveniente, são hidrogénio apenas para facilitar a ilustração. A química utilizada nos esquemas pode ser realizada quando estes grupos são outros que hidrogénio. Também será evidente que os passos de protecção e desprotecção podem ser realizados para completar, com sucesso, as sínteses dos compostos. Uma discussão aprofundada de grupos protectores é proporcionada em Protective 29

Groups in Organic Synthesis, 3a edição, John Wiley & Sons, New York (1999) .

As abreviaturas que foram utilizadas nas descrições do esquema e dos exemplos são como se segue: DMF para N,N-dimetilformamida, DMSO para sulfóxido de dimetilo, HFA para hexafluoroacetona tri-hidratada, PPh3 para trifenilfosfina, OsCA para tetraóxido de ósmio, NaBH4 para boro-hidreto de sódio, (iPr)2EtN para diisopropiletilamina, NaI04 para periodato de sódio, LiOH para hidróxido de litio, TBTU para tetrafluoroborato de 2-(ΙΗ-benzotriazol-1-il)-1,1,2,2-tetrametilurónio, NBS para N-bromossuccinimida; e THF para tetra-hidrofurano.

Esquema 1. Preparação de intermediários activados de ácido biliar

:ooch3 rso2ci

.COOCHj RS02CI OU NXSVPPhj

30

Esquema 2. Preparação de intermediários de antagonista de glucocorticóide

Esquema 3. Associação de fragmentos

Os compostos da presente invenção podem ser preparados de acordo com os métodos descritos nos Esquemas 1-3. Está descrito no Esquema 1 um método para a incorporação de potenciais grupos ligantes em intermediários de ácido eólico. 0 éster metilico do ácido eólico é activado, de um modo selectivo, na posição 3, por exemplo, por tratamento com um haleto de sulfonilo, ou semelhantes. 0 álcool 3 activado é deslocalizado com etilenoglicol e o álcool resultante é activado, como um grupo 31 abandonante, para proporcionar o intermediário Z, por exemplo, por conversão num haleto, sulfonato, e semelhantes.

No Esquema 2, os intermediários A e B são preparados a partir da cetona-cetal conhecida, em vários passos, como se segue. A adição de um reagente organometálico, por exemplo, brometo de propinilmagnésio, e semelhantes, à cetona C-17 conduz ao β-álcool correspondente como o estereoisómero predominante. A epoxidação selectiva da ligação dupla A(5,10) utilizando, por exemplo, peróxido de hidrogénio catalisado por hexafluoroacetona, conduz a um epóxido insaturado que reage de um modo SN2' com um reagente organometálico, por exemplo, brometo de 4-(N-Boc-N-metil)-fenilmagnésio, para proporcionar o álcool alilico A correspondente, substituído em C-ll. A desprotecção catalisada por ácido utilizando, por exemplo, ácido p-toluenossulfónico hidratado ou ácido clorídrico, e semelhantes, ocorre com eliminação concomitante do álcool C-5, para proporcionar uma enona do tipo B.

No Esquema 3, seguindo uma desprotecção opcional do substituinte de ligação em C-ll, este fragmento é acoplado com o ácido biliar Z modificado, descrito no Esquema 1, utilizando, por exemplo, uma base do tipo trietilamina, e semelhantes, para remover o ácido obtido no decorrer da reacção. A hidrólise do grupo éster no produto C ligado resultante origina o composto alvo. 32

Esquema 4. Associação alternativa de fragmentos

0 Esquema 4 descreve uma alternativa à estratégia de acoplamento descrita no Esquema 3. Após uma desprotecção opcional do grupo ligante em C-ll, o intermediário A do Esquema 2 pode ser directamente acoplado com o ácido biliar Z modificado do Esquema 1. 0 produto acoplado é tratado com um ácido para remover o acetal C-3 e eliminar o álcool C-3, e a enona-éster C resultante é hidrolisada, como descrito anteriormente, para dar o composto alvo. 33

Esquema 5. Associação alternativa de intermediários de antagonista de glucocorticóide

Esquema 5A.

Esquema 5B.

Para facilitar os estudos de estrutura-actividade, podem ser preparados intermediários B chave de acordo com várias 34 estratégias alternativas, como descrito no Esquema 5. Assim, por exemplo, como descrito no Esquema 5A, a epoxidação da olefina Δ5,10 pode preceder a adição do substituinte C-17. Outras transformações do epoxi-álcool resultante são como descritas anteriormente no Esquema 2. De um modo alternativo, a adição do substituinte C-17 pode ser adiada até uma fase posterior da síntese. Neste caso, como demonstrado no Esquema 5B, a ordem dos passos de adição C-ll e C-17 estão invertidos. Todas as outras transformações são como descritas no Esquema 2.

Esquema 6.

och3 Y *-^0

OOCH, -pg como no Esquema 1

och3

As formas de pró-fármacos dos compostos da invenção podem ser preparadas de acordo com os métodos apresentados nos Esquemas 6-10. No Esquema 6, o grupo hidroxilo C-3 de um derivado do ácido eólico está protegido, por exemplo, como um éster, éter trialquilsilílico, e semelhantes, permitindo que os grupos hidroxilo C-7 e/ou C-12 sejam tratados com uma forma latente da unidade que pode sofrer clivagem in vivo. Exemplos deste grupo reactivo (LPD-X) podem incluir um dialquilfosfocloridrato, um ácido activado, um cloroformato, e 35 semelhantes. 0 grupo protector C-3 é removido de um modo selectivo e o álcool C-3 resultante é convertido num potencial grupo ligante, como descrito anteriormente no Esquema 1, proporcionando o intermediário D.

Esquema 7.

Em alternativa, como apresentado no Esquema 7, um composto Z, preparado de acordo com o Esquema 1, pode ser tratado no hidroxilo C-7 e/ou C-12 com uma forma latente da unidade que pode sofrer clivagem in vivo para proporcionar directamente o intermediário. 36

Esquema 8.

A

Como apresentado no Esquema 8, o composto Y preparado de acordo com o Esquema 6 ou Esquema 7, pode ser tratado com a dienona B (após uma desprotecção opcional), como no Esquema 3, para proporcionar o produto D acoplado completamente protegido. A hidrólise do éster em D é seguida por remoção dos grupos protectores para proporcionar o ácido do pró-fármaco final. Em alternativa, o produto D acoplado pode ser preparado por reacção do intermediário A (após desprotecção opcional) com o composto Y, seguido de tratamento sob condições ácidas. 37

Esquema 9.

,COOH 0 Esquema 9 demonstra que o composto D pode ser preparado directamente a partir do penúltimo intermediário C por reacção com uma forma latente da unidade que pode sofrer clivagem in vivo. Exemplos deste grupo reactivo pode incluir um dialquilfosfocloridrato, um ácido activado, um cloroformato, e semelhantes. A hidrólise do éster em D é seguida por remoção dos grupos protectores para proporcionar o ácido do pró-fármaco final.

Esquema 10.

.COOH

.COOH 38 0 Esquema 10 indica que os compostos da presente invenção podem ser utilizados directamente na preparação de formas de pró-fármacos. O composto é tratado com uma forma latente da unidade que pode sofrer clivagem in vivo, seguido por remoção dos grupos protectores. Exemplos deste grupo reactivo pode incluir um dialquilfosfocloridrato, um ácido activado, um cloroformato, e semelhantes. A invenção será agora descrita em conjunto com as formas de realização preferidas dos Esquemas, as quais não pretendem limitar o seu âmbito. Pelo contrário, a invenção abrange todas as alternativas, modificações, e equivalentes que estão incluídos no âmbito das reivindicações. Assim, os seguintes exemplos apresentam uma prática especialmente preferida da invenção, sendo entendido que os exemplos têm o objactivo ilustrativo de determinadas formas de realização preferidas e são apresentadas para proporcionar o que se crê ser a descrição mais útil e prontamente entendida dos seus processos e aspectos conceptuais. 39 Métodos de Sintese

As abreviaturas que foram utilizadas nas descrições dos esquemas e dos Exemplos que se seguem são: EtOAc para acetato de etilo, CH2CI2 para diclorometano, CHCI3 para clorofórmio, CH3CN para acetonitrilo, THF para tetra-hidrofurano, MTBE para éter terc-butilico de metilo.

Parte Experimental

O

ΌΗ O 40

Exemplo 1 ácido (3β,5β,7α,12α)-7,12-di-hidroxi-3-{2-[{4-[173-hidroxi-3-oxo-17a-prop-l-inilestra-4,9-dien-lip-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico

Exemplo IA (3α,5β,7α,12α)-7,12-Di-hidroxi-3-(metanossulfoniloxi)colan-24-oato de metilo

Foi adicionado, gota a gota durante 30 minutos, cloreto de metanossulfonilo (5,04 mL, 65,1 mmol) a uma solução de éster metilico do ácido eólico (25 g, 59,2 mmol) em piridina (75 mL), sob agitação a 0 °C. A reacção foi deixada a aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 6 horas. A mistura reaccional foi vertida numa mistura de EtOAc (200 mL), HC1 a 1 N (200 mL) e gelo. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi lavada com HC1 a 1 N (2x50 mL) , seca (Na2S04) e concentrada, para proporcionar um óleo amarelo claro. O material em bruto foi passado através de uma camada de silica, eluindo com EtOAc a 50%/hexanos, para proporcionar 24,5 g (83%) do composto em epígrafe, como um óleo amarelo claro que se tornou 41 numa espuma pegajosa branca, quando colocada numa bomba de alto vácuo.

Exemplo 1B (3β, 5β, 7α, 12α)-7,12-Di-hidroxi-3-(2-hidroxietoxi)colan-24- oato de metilo

Foi carregado um vaso sob pressão (balão de 250 mL) contendo o composto do Exemplo IA (10,0 g, 20 mmol) com etilenoglicol (20 mL) e piridina (4 mL) à temperatura ambiente, selado e, em seguida, aquecido a 120 °C durante 4 horas. A reacção foi arrefecida à temperatura ambiente, diluída com EtOAc (50 mL) e parada com HC1 a 1 N (30 mL) . As camadas foram separadas e a camada orgânica foi lavada com HC1 a 1 N (2 x 30 mL) , seca (Na2SC>4) e concentrada. A purificação por cromatografia em sílica gel (acetona a 10%->40%/hexanos) proporcionou o composto em epígrafe (3,5 g, 37%). MS (ESI) m/e 484 (M+NH4) + . 42

Exemplo 1C (3β,5β,7α,12α)-7,12-Di-hidroxi-3-[2 - (ρ-toluenossulfoniloxi)etoxi]colan-24-oato de metilo 0 composto do Exemplo 1B (1,50 g, 3,2 mmol) foi dissolvido em 15 mL de clorofórmio e 15 mL de piridina; foi adicionado cloreto de p-toluenossulfonilo (920 mg, 4,83 mmol) e a mistura foi agitada durante a noite. Foi adicionado clorofórmio (250 mL) , a solução resultante foi lavada com solução de HC1 a 5% e Na2SC>4 sat. Após remoção do solvente in vacuo, o produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (acetato de etilo a 40%->60%/hexanos). O rendimento do composto em epígrafe foi de 1,40 g (71%) .

43

Exemplo 1D N-Boc-N-metil-4-bromoanilina É dissolvido, em 10 mL de THF, 5,0 mmol de 4-bromoanilina (0,86 g) ; é adicionado 1,09 g (5,0 mmol) de dicarbonato de di-terc-butilo e a solução resultante é aquecida a 50 °C durante 5 horas. A reacção é dividida entre água e acetato de etilo; a camada orgânica é lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre Na2S04 e concentrada para dar um sólido branco. Este material em bruto é dissolvido em 20 mL de THF seco e arrefecido num banho de gelo; e é adicionado, em pequenas porções, 250 mg (1,25 eq) de NaH (dispersão a 60% em óleo). A evolução de gás deixou, após 15 min, um semi-sólido do tipo espuma. É adicionado mais THF (10 mL) para quebrar a espuma, seguido de 0,50 mL (1,6 eq) de iodometano. A mistura resultante é agitada durante a noite, aquecendo lentamente até à temperatura ambiente. A mistura reaccional é cuidadosamente adicionada a H3PO4 aquoso a 1 N (formação de algum gás!), a mistura resultante é extraída com acetato de etilo. A camada orgânica é lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio e seca sobre Na2S04. O produto em bruto é purificado por cromatografia em silica gel, eluindo com um gradiente de acetato de etilo 0->10%/hexanos, proporcionando 1,08 g (total de 76%) do composto em epígrafe como um óleo ligeiramente amarelado.

44

Exemplo ΙΕ (5' R, 10' R, 13' S)-13'-metil- 1',2', 6',1’, 8',12',13',14',15',16'-deca-hidro-17'ff-espiro[1,3-dioxolano-2,3' -[5,10]epoxiciclopenta[a]fenantren]-17'-ona

Foi adicionado, gota a gota, solução de H202 a 30% (2,7 g, 23,8 mmol) a uma solução de dieno (5,0 g, 15,9 mmol) , hexafluoroacetona tri-hidratada (349 mg, 1,59 mmol) e piridina (75 mg, 0, 95 mmol) em CH2C12 (160 mL) a 0 °C. A reacção foi agitada a 0 °c, durante 2 horas, e à temperatura ambiente durante 2 dias (seguida por TLC) . A reacção foi parada com solução de Na2 s203 a 10%, extraída com CH2C12 (250 mL x 3) e seca sobre Na2S04. Os solventes foram removidos in vacuo e o sólido amarelo resultante foi triturado com 35 mL de éter dietilico com agitação magnética, durante a noite, num frasco fechado. A mistura foi filtrada por sucção através de um funil de vidro sinterizado de porosidade grosseira, enxaguando três vezes com 5 mL de éter dietilico e deixado sob vácuo a secar durante 1 hora. A pasta filtrada resultante foi raspada até um pó fino e seco in vacuo para proporcionar o composto em epígrafe (2,0 g, rendimento de 38%). O material reminiscente (~ 2,6 g) pode ser novamente submetido ao processo acima para recuperar mais 0,5 g de alfa-epóxido.

45

Exemplo 1F (5'R,10'R,13'SrΠ'S)-13'-metil-17'-prop-l-inil-1',2',7',8',12',13',14',15',16',17'-deca-hidro-6'H-espiro[1,3-dioxolano-2,3'-[5,10]epoxiciclopenta[a]fenantren]-17'-ol

Foi adicionado, gota a gota, solução de brometo de 1-propinilmagnésio (1,2 mL, 0,60 mmol, 0,5 M em THF) a uma solução de 100 mg (0,30 mmol) do composto do Exemplo 1E, em THF (1,2 mL, destilado) a 0 °C. A mistura reaccional foi agitada durante 2 h. O solvente foi removido in vacuo; o residuo foi parado com solução aquosa saturada de NH4C1 e extraído com EtOAc (20 mL x 3). Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre Na2S04. A remoção do solvente in vacuo deu 110 mg do composto em epígrafe (rendimento: ~ 100%).

46

Exemplo 1G 4- ( (5.R, 11.R, 13S, 17S) -5, 17-di-hidroxi-13-metil-17-prop-l-inil-1,2,4,5,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-tetradeca-hidroespiro[ciclopenta[a]fenantreno-3,2'-[1,3]dioxolan]-11-il)fenil(metil)carbamato de terc-butilo

Um balão de 50 mL carregado com Mg em pó (44 mg, 1,8 mmol) foi seco, com secador de ar quente, sob N2. Após arrefecimento do dispositivo à temperatura ambiente, foram adicionados THF (2 mL) e um pequeno cristal de iodo. Foi adicionado, à mistura eficazmente agitada, 0,6 mL de uma solução do composto do Exemplo 1D (500 mg, 1,75 mmol) em THF (2 mL). Após a mistura ter sido aquecida ao refluxo durante cerca de 5 minutos, a cor do iodo tornou-se rapidamente incolor e, em seguida, a mistura foi arrefecida à temperatura ambiente. Foi adicionada, gota a gota, durante 20 minutos, a solução de brometo restante. A mistura foi arrefecida num banho de gelo-água durante 30 minutos e, em seguida, foi adicionado, numa porção, Cul (132 mg, 0, 69 mmol, pó) . Após a mistura ter sido agitada durante 2 minutos, foi adicionada uma solução do composto do Exemplo 1F (256 mg, 0,69 mmol) em THF (2 mL) , provocando a formação de um precipitado volumoso amarelo claro. Após 30 minutos, foi lentamente adicionada solução de NH4C1 (5 mL, sat), seguido de EtOAc (10 mL) . Após a mistura ter sido agitada durante 10 minutos, a camada aquosa foi separada e extraída com EtOAc. A camada orgânica combinada foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (3 x) , seca sobre Na2S04 e concentrada. O produto em bruto foi purificado por HPLC (fase normal) para proporcionar o composto em epígrafe (352 mg, rendimento de 90%). 47 Η“

Exemplo 1Η 17β-ΕίάΓθχί-11β-(4-(metilamino)fenil)-17g-prop-l-inilestra-4,9-dien-3-ona O composto do Exemplo 1G (36 mg) foi dissolvido em 0,3 mL de uma solução de TsOH. H2O/CH2CI2/THF (1,9 g/3 mL/3,8 mL) ; a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura reaccional foi adicionada, gota a gota, a solução de NaHCCç (2 mL, saturado) e, em seguida, extraída com EtOAc (3 x) . A camada orgânica combinada foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre Na2S04 e concentrada. O produto em bruto foi purificado por TLC preparativa para proporcionar o composto em epígrafe (20 mg, rendimento de 74%). v o

Ό 48

Exemplo II (3β,5β,7α,12α)-7,12-Di-hidroxi-3-{2-[{4-[-17β-ΕίάΓθχί-3-oxo-17g-prop-l-inilestra-4,9-dien-l^-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-oato de metilo 0 composto do Exemplo 1C (15 g, 24,2 mmol) e o composto do Exemplo 1H (11 g, 26,5 mmol) foram combinados com Nal (2,7 g) e diisopropiletilamina (3,12 g) , em 400 mL de acetonitrilo, numa garrafa de 1 litro sob pressão. A solução foi aquecida a 100 °C. TLC (EtOAc:hexano, 60:40) ou HPLC foram utilizados para verificar o fim da reacção; não foi observado nenhum material de partida após 16 horas. A mistura reaccional foi arrefecida à temperatura ambiente e filtrada por Celite; os solventes foram removidos in vacuo. O material em bruto foi diluído com EtOAc (500 mL) e lavado com solução saturada de cloreto de amónio (2 x 100 mL) . O solvente foi removido in vacuo e o material em bruto foi carregado numa coluna de sílica gel para eluir com hexano/EtOAc (3:2-1:1-2:3). Foram recolhidas fracções puras e concentradas para proporcionar 14,5 g (63,3%) do composto em epígrafe.

Exemplo 1J Ácido (3β,5β,7α,12α)-7,12-di-hidroxi-3-{2 - [ {4 - [17p-hidroxi-3-oxo-17a-prop-l-inilestra-4,9-dien^-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico O composto do Exemplo II (1,40 g, 1,62 mmol) foi dissolvido em 15 mL de THF; foi adicionado 15 mL de LiOH aquoso a 1 N e a mistura resultante foi agitada durante 5 horas à temperatura 49 ambiente. 0 solvente orgânico foi removido in vacuo e foi adicionada água suficiente para fazer uma fase. A solução foi acidificada com ácido acético para precipitar um sólido amarelo claro que foi recolhido por filtração e lavado várias vezes com água. 0 produto foi seco durante a noite num liofilizador. Rendimento de 1,35 g (98%) do composto em epígrafe. RMN de XH (500 MHz , MeOH) δ 7,07- -7,71 (m, 4H), 5,76 (s, 1H) , 4,57 (d, 1H) , 3, 95 (S, 1H), 3, 78 (d, 1H) r 3,74 (t, 1H) , 3,44 (m, 1H) , 3,23 (m, 3H) , 2 ,86 (m, - 1H) , 2, 66 (m, 1H), 2 , 50 (m, 2H) , 2,16 -2,41 (m, 7H) , 2,15 (m, 2H) , 2, 08 (m, 1H) , 1, 95 (m, 3H) , 1,85 (m, 5H) , 1,75 (m, 5H), 1, 57 (m, 7H) , 1,40 (m, 8H) , 1,31 (m, 6H) , 1,01 (d, 3H), 0, 92 (m, 5H) t 0,71 (s, 3H) , 0,48 (s, 3H) ; MS (ESI) m/e 850 (M+H)+, 848 (M-H) ; Massa exacta Calcd. para C54H75NO7: 850,5616; encontrado 850,5620. Síntese alternativa de ácido (3β,5β,7α,12α)-7,12-di-hidroxi-3-{2- [ {4- [ 17β-ϊιίόηοχί-3-οχο-17α-ρηορ-1-ίηί1β3ίη3-4, 9-dien-l^-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico. \)

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Exemplo 1K, alternativa ao Exemplo IA (3α,5β,7a,12a)-7,12-Di-hidroxi-3-(p-toluenossulfoniloxi)-colan-24-oato de metilo

Foi adicionado, gota a gota, durante 2,5 horas, a uma solução de éster metílico do ácido eólico (1000,0 g, 2,366 mol), em piridina (2250 mL) a -10 °C, uma solução de cloreto de p-toluenossulfonilo (654,2 g, 2,431 mol) em piridina (650 mL) mantendo a temperatura reaccional de -10 a -6 °C. A solução foi misturada, a -10 °C, por mais 12,5 horas, diluida com água (61,8 g) com arrefecimento continuo. A mistura a -7,5 °C foi adicionada, durante um periodo de 43 minutos, a uma mistura de MTBE (5 L) e HC1 a 6 N (6,2 L). As camadas foram separadas e a fase orgânica foi lavada com NaHCCL a 7% (2 L) , seguido de NaCl a 2% (2 L) e, finalmente, com tampão fosfato a pH 7 (2 L) . A fase orgânica foi filtrada, concentrada sob pressão reduzida com MTBE (3 x 200 mL) para dar 1608,93 g de um óleo muito viscoso de cor palha clara (rendimento, com potência ajustada, de 95,3%) que foi directamente utilizado no passo seguinte. RMN de ΧΗ (CDCI3, 400 MHz) δ 7,79 (d, J = 8,5 Hz, 2H) , 7,32 (d, J = 8,6 Hz, 2H) , 4,40-4,31 (m, 1H), 3,97 (s 1, 1H), 3,83 (s 1, 1H), 3,68 (s, 3H), 2,60-2,50 (m, 1H), 2,45 (s, 3H), 2,43-1,34 (m, 25H), 0,99 (d, J= 6,3 Hz, 3H) , 0,88 (s, 3H) , 0,69 (s, 3H) . MS (ESI) Esperado = 576; base = 594,2 (576 + NH4+) .

51

Exemplo 1L, alternativa ao Exemplo 1B (3β,5β,7 α,12α)-7,12-Di-hidroxi-3-(2-hidroxietoxi)colan-24-oato de metilo

Foi carregado, ao tosilato secundário em bruto do exemplo 1K (1297,3 g, 2,25 mol) contendo MTBE residual (311,5 g), etilenoglicol (2516 g, 40,5 mol) e piridina (445 g, 5,63 mol) e a mistura foi aquecida a 60 °C, durante 15 horas, em seguida, 80 °C durante 4 horas. A mistura foi arrefecida abaixo de 30 °C e foi adicionado acetato de isopropilo (5,3 L) seguido de HC1 a 1,15 M (3387 mL) . As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraida com acetato de isopropilo (3 L). Os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio a 10% (5 L) , em seguida, concentrados para um resíduo. O resíduo foi dissolvido em metanol (15 L) e água (7,5 L) e a mistura foi extraída com heptano (30 L) . Foi adicionada mais água (7,5 L) e a solução metanol/água foi aquecida a 45 °C, em seguida, extraída com heptano (2 x 30 L) . A fase metanol/água foi arrefecida à temperatura ambiente, em seguida, foram adicionados cloreto de metileno (15 L) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio a 20% (15 L) e as camadas foram separadas. A solução de cloreto de metileno foi removida, sob pressão reduzida, e foi adicionado tolueno ao resíduo, o produto foi filtrado e seco para proporcionar o composto do Exemplo 1B como um sólido branco (462,2 g, 44%). RMN de XH (CDC13, 400 MHz) , δ 3,97 (m, 1H) , 3,85 (m, 1H) , 3,70 (m, 2H) , 3,65 (s, 3H) , 3,58 (m, 1H) , 3,47 (m, 2H) , 1,10-2,40 (m, 27H) , 0,98 (d, J = 6,3 Hz, 3H) , 0,91 (s, 3H) , 0,69 (s, 3H) . MS (M + NH4)+ = 484,3. 52

Exemplo 1Μ, alternativa ao Exemplo 1C (3β,5β,7α,12α)-7,12-Di-hidroxi-3-[2-(iodo)etoxi]colan-24-oato de metilo

Foi adicionado, gota a gota durante 35 minutos, a uma solução do álcool primário do exemplo 1B (30,0 g, 64,2 mmol) , em piridina (67,5 mL) a -11 °C, cloreto de p-toluenossulf onilo (15,57 g, 81,5 mmol) em piridina (22,5 mL) mantendo a temperatura reaccional de -11 a -8 °C. A reacção foi misturada a -12 °C por mais 6 horas, em seguida, parada por adição de água (1,5 g). A mistura reaccional parada, a -12,5 °C, foi adicionada durante um período de 5 minutos numa mistura de éter t-butílico de metilo (180 mL) e HC1 a 3 N (369 mL) e as camadas foram separadas. A fase orgânica foi lavada com NaHC03 a 7% (90 mL) , seguido de NaCl a 2% (90 mL) e, finalmente, com solução tampão a pH 7 (90 mL) . Em seguida, a fase orgânica foi concentrada sob pressão reduzida e seguida com MTBE (90 mL) , em seguida, com acetona (90 mL) para proporcionar 51,26 g de óleo viscoso. Foi adicionada acetona (386 mL) seguido de iodeto de sódio (14,45 g, 96,4 mmol) e a mistura reaccional foi aquecida ao refluxo, sob azoto, até consumo do tosilato. Foram adicionados MTBE (200 mL) e H2O (200 mL) à mistura reaccional arrefecida e as camadas foram separadas. A fase orgânica foi lavada com H20 (150 mL), 53 concentrada, depois, seguida com CH3CN. O produto foi isolado de CH3CN por filtração e seco para proporcionar 29,51 g (76,9%) do composto em epígrafe.

Exemplo IN, alternativa ao Exemplo 1H -173-hidroxi-lip- (4- (metilamino) fenil) -17a-pr0p_]_-inilestra-4,9-dien-3-ona 0 composto do Exemplo 1G (36 mg) foi dissolvido em 0,3 mL de uma solução de TsOH.H20/CH2C12/THF (1,9 g/3 mL/3,8 mL) ; a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura reaccional foi adicionada, gota a gota, a solução de NaHC03 (2 mL, saturado) e, em seguida, extraída com EtOAc (3 vezes) . A camada orgânica combinada foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre Na2S04 e concentrada. O produto em bruto foi purificado por TLC preparativa para proporcionar o composto em epígrafe (20 mg, rendimento de 74%). 54

Exemplo 10, alternativa adicional ao Exemplo 1H -17ft-hidroxi-llft- (4- (metilamino) fenil) -17ot-prop-l-inilestra-4,9-dien-3-ona

Foi adicionada, a uma solução de (11β,17α)-17-hidroxi-ll-(4-(dimetilamino)fenil)-17-prop-l-inilestra-4, 9-dien-3-ona (200 g, 0,466 mol) em CH2CI2 (500 mL) , uma solução filtrada de NMO (260 g, 2,22 mol) em CH2C12 (1250 mL), que foi seca sobre Na2S04, e a solução resultante foi arrefecida a -10 °C sob N2. Foi adicionada, gota a gota, durante 25 minutos, uma solução de TPAP (16,1 g, 0,046 mol) em CH2CI2 (150 mL) e a solução resultante foi misturada a -10 < 0 0 reacção foi parada por adição de bissulfito de sódio a 10% (2100 mL) , através de um funil de adição, durante 20 min. Em seguida, a solução foi aquecida até à temperatura ambiente e agitada mais 10 min. Foram adicionados EtOAc (3,5 L) e H2O (2 L) e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi novamente extraida com EtOAc (2 L) e os orgânicos combinados foram lavados com tampão fosfato a pH 7 (2 x 4 L). Em seguida, a camada orgânica foi filtrada por celite e descolorada com carbono (Darco G-60, 46,1 g). A solução do produto foi concentrada e o produto precipitou. O produto foi filtrado e seco para dar 130,17 g da formamida (63,0%). RMN de ΧΗ (CDCI3, 400 MHz) δ 8,47 (s, 1H), 7,22 (d, J = 8,1 Hz, CM 7 ,09 (d, J = 8,7 Hz, 2H) , 5, 80 (s, 1H) , 4,44 (d, J = 7,2 Hz, 1H) , 3,31 (s, 3H), 2,85-2,2 (m, 11H) , 1,92 (s, 1H) , , 2,1-1,3 (m, 6H), 0, 53 (s, 3H) . A amostra também contém ca. de 20% em mol de EtOAc. MS (ESI), Μ + 1 = 444, Μ - 1 = 442.

Foi adicionada, a uma solução de formamida (130,17 g, 0,265 mol) em metanol (2,6 L) a 15-20 °C, uma solução aquosa de HC1 a 5 °C (696 mL de HC1 conc. e 1440 mL de H2O) . A reacção foi 55 aquecida até à temperatura ambiente e misturada durante 40 horas. A mistura reaccional foi arrefecida a 15 °C e o pH foi ajustado por adição de solução de Na2CC>3 a 10%. O produto começou a precipitar a pH 3 (pH final = 7,05 a 12 °C) . O produto foi isolado por filtração, em seguida, a pasta húmida foi dissolvida em CH2CI2 (700 mL) , as camadas foram separadas e a camada orgânica foi concentrada, sob vácuo, até um resíduo espesso. Após troca de solvente para CH3CN, o produto foi filtrado e seco para proporcionar o composto do Exemplo 1H (104,2 g, 85,4%). RMN de ΧΗ (CDC13, 400 MHz) δ 6, 98 (d, , J = 8,1 Hz, 2H) , 6, 56 (d, J = 8,7 Hz, 2H) , 5, 77 (s, 1H) , 4, 35 (d, J = 6,9 Hz, 1H) , 2,83 (s , 3H), 2,85-2,1 (m, 10H) , 1, 91 (s, 3H) , 2,1-1,3 (m, 6H) , 0,53 (s, 3H). A amostra contém também ca. de 80 mole % de CH3CN. MS (ESI), Μ + 1 = 416, Μ - 1 = 414.

Exemplo IP, alternativa ao Exemplo II (3β,5β,7α,12α)-7,12-Di-hidroxi-3 - {2 - [ { 4 - [ 17β-1ιϊά^χϊ-3-οχο-17g-prop-l-inilestra-4,9-dien-ll^~ il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-oato de metilo

Foi aquecida, a 80 °C sob azoto durante 18 h, uma solução do composto do Exemplo 1H (4,0 g, 9,63 mmol) , o iodeto primário 56 do Exemplo 1M (7,44 g, 12,9 mmol), diisopropiletilamina (1,66 g, 12,9 mmol) em N,N-dimetilacetamida (20 mL). A mistura reaccional arrefecida foi diluída com acetato de isopropilo (50 mL) e lavada com NH4C1 a 10% (50 mL) , em seguida, com tampão fosfato a pH 7 (50 mL) . Em seguida, a fase orgânica foi concentrada in vacuo e o produto em bruto foi submetido a cromatograf ia em sílica (de EtOAc a 50%/heptano até EtOAc a 100%) para proporcionar o composto em epígrafe (5,95 g, 76,8%).

Exemplo 1Q, alternativa adicional ao Exemplo II (3β,5β,7α,12α)-7,12-Di-hidroxi-3 - {2 - [ { 4 - [ 17β-ίιίάηοχί-3-οχο-17a-prop-l-inilestra-4,9-dien-l^- il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-oato de metilo

Foi aquecida, a 80 °C sob azoto durante 19 h, uma solução de (11β,17,α)-17-hidroxi-ll-(4-(dimetilamino)fenil)-17-prop-l-inilestra-4,9-dien-3-ona (4,14 g, 9,63 mmol), o iodeto primário do Exemplo 1L (7,44 g, 12,9 mmol), diisopropiletilamina (1,66 g, 12,9 mmol) em N, N-dimetilacetamida (20,7 mL) . A mistura reaccional arrefecida foi diluída com acetato de isopropilo (50 mL) e lavada com NH4C1 a 10% (50 mL) , em seguida, com tampão fosfato a pH 7 (50 mL). Em seguida, a fase orgânica foi concentrada in vacuo e o produto em bruto foi submetido a cromatografia em sílica (de EtOAc a 50%/heptano até EtOAc a 100%) para proporcionar o composto em epígrafe (4,96 g, 60,6%). 57

Exemplo IR, alternativa adicional ao Exemplo II (3β,5β,7α,12α)-7,12-Di-hidroxi-3 - {2 - [ { 4 - [17β-]ιίοΐΓθχ1-3-οχο-17a-prop-l-inilestra-4, 9-άίθη-11β- il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-oato de metilo O álcool primário do Exemplo 1B (8,69 g, 18,62 mmol) foi dissolvido em CH2CI2 (87 mL) e foi adicionado N,N-diisopropiletilamina (6,14 g, 47,52 mmol) e a solução foi arrefecida de -45 a -55 °C. Foi adicionado, de -52 °C a -47 °C, durante 2,5 h, anidrido trifluorometanossulfónico (5,31 g, 18,82 mmol) . A solução foi misturada a ca. de -48 °C durante 47 min., em seguida, foi adicionado (11β,17a)-17-hidroxi-ll-(4-(dimetilamino)fenil)-17-prop-l-inilestra-4,9-dien-3-ona (5,00 g, 11,6 mmol) e a mistura foi aquecida a -6 °C e misturada durante 88 h. A solução foi lavada com solução de NH4C1 a 10% e o solvente foi removido in vacuo. O residuo foi dissolvido em acetonitrilo (50 mL) e o solvente foi removido in vacuo; foi adicionado acetonitrilo para obter um volume final de acetonitrilo de ca. de 10 mL/g de anilina de partida. Foram adicionados, à solução, N,N-Diisopropiletilamina (2,27 g, 17,56 mmol) e Nal (5,24 g, 34,96 mmol) e a mistura foi aquecida ao refluxo e misturada durante 45 h. A solução ligeiramente turva foi arrefecida e foram adicionados CH2CI2 (20 mL) e EtOAc (50 mL) e a solução foi lavada com solução de NH4C1 a 5% seguido de solução de NaCl a 20%. A purificação por cromatografia em silica gel (gradiente de EtOAc/heptano) proporcionou o composto em epigrafe (82,7%). 58 ρ

Exemplo IS, alternativa ao Exemplo 1J Ácido (3β, 5β, 7α, 12α)-7, 12-di-hidroxi-3-{2-[{4-[17β-ΗίάΓοχί-3-oxo-17g-prop-l-inilestra-4,9-dien-lip-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico

Foi carregado KOH a 3 N (33,3 mL, 100 mmol), a uma velocidade para manter uma temperatura interna < 7 °C, a uma solução do composto do Exemplo II (17,28 g, 20,0 mmol, potência química de 91%, assim, 15,72 g, 18,2 mmol) em EtOH (173 mL) a 5 °C. A reacção foi agitada a 5 °C durante 17 horas. A mistura reaccional foi neutralizada com HC1 a 3 N (33,3 mL, 100 mmol) mantendo a temperatura interna < 10 °C (pH final foi ajustado de 4,63 a 4,87 com 0,2 mL de KOH a 3 N) . A mistura reaccional cristalizou após alguns minutos, após a adição de HC1 a 3 N. A mistura reaccional foi deixada a aquecer até à temperatura ambiente, semeada (20 mg de núcleos de cristalização), aquecida a 40 °C durante 3 horas e lentamente arrefecida, até à temperatura ambiente, agitada por mais 16 horas. A pasta foi filtrada, lavada e seca para proporcionar 14,30 g (92,4%) do composto em epígrafe. 59 ο

Exemplo 2 ácido_(3β, 7α, 12α) -7, 12-di-hidroxi-3- (2- (4- (17β-1ιίάΓθχί-3- oxo-17a-prop-l-inilestra-4,9-άίβη-11β-ί1)-2-metilfenoxi)etoxi)colan-24-6ico

Exemplo 2A l-Aliloxi-4-bromo-2-metil-benzeno

Foi adicionado, a uma solução de 4-Bromo-2-metil-fenol (2,0 g, 10,7 mmol) em THF (100 mL) , Cs2C03 sólido (3,8 g, 11,7 mmol) e brometo de alilo (1,9 mL, 21,4 mmol). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 20 horas. Depois de completa, a solução foi diluída com NH4C1 aquoso e extraída duas vezes com acetato de etilo. Os extractos orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos (MgS04) , concentrados in vacuo e purificados por cromatografia em coluna (acetato de etilo de 0 a 100% em hexanos) para proporcionar 1,1 g (45%) de um sólido branco. 60

Exemplo 2B (3β,7α,12α)-7,12-Di-hidroxi-3-(2-((metilsulfonil)oxi)etoxi)colan-24-oato de metilo 0 composto do exemplo 1B (1,0 g, 2,1 mmol) foi dissolvido em THF (21 mL) e arrefecido a 0 °C. Foi adicionado, à solução arrefecida, cloreto de metanossulfonilo (0,25 mL, 3,21 mmol) seguido da adição, gota a gota, de trietilamina (0,45 mL, 3,21 mmol). A solução reaccional foi aquecida até à temperatura ambiente e deixada a agitar durante a noite. Foi adicionado NH4C1 aquoso saturado e a solução foi extraída duas vezes com acetato de etilo. A fase orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (MgS04) , concentrada e purificada por cromatografia em coluna (hexanos:acetato de etilo 1:1). O rendimento do produto foi de 429 mg (37%).

61

Exemplo 2C 11β-(4-(aliloxi)-3-metilfenil)-17β-ΗίάΓθχί-17α-ρΓορ-1-inilestra-4,9-dien-3-ona

Foi adicionado Mg em pó (916 mg, 38 mmol) num balão de fundo redondo e seco por chama. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, foi adicionado um cristal de iodo. Foi adicionado, aos sólidos combinados, 30 mL de THF e a suspensão foi imersa num banho de água. Em seguida, foi adicionado, gota a gota, o composto preparado no exemplo 2A (8,6 g, 38 mmol como uma solução em 10-30 mL de THF) . O inicio da reacção, indicado pela perda da cor do iodo, ocorreu durante os 15 minutos da adição do brometo. A solução reaccional foi arrefecida a 0 °C e foi adicionado, numa porção, Cul (3,6 g, 19 mmol). Após 2 minutos, foi rapidamente adicionada uma solução do epóxido do exemplo 1F (2,8 g, 7,5 mmol), dissolvida em 10 mL de THF. Após agitação a 0 °C durante 1 hora, a reacção foi parada com NH4C1 aquoso e extraída com acetato de etilo. Os extractos orgânicos foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos (MgS04) e concentrados. O resíduo em bruto foi dissolvido em THF (150 mL) e foi adicionado HC1 a 2 M (75 mL) . A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Foi adicionado NaHCCç aquoso para neutralizar a reacção e a solução resultante foi extraída com acetato de etilo. Os extractos orgânicos foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos (MgS04) , concentrados e purificados por cromatografia em coluna (hexanos:acetato de etilo 4:1). O rendimento da reacção foi de 737 mg (21%). 62 Η

Exemplo 2D 17β-ΗίάΓθχί-11β- (4-hidroxi-3-metilfenil) -17ot-prop-l-inilestra-4,9-dien-3-ona 0 composto descrito no exemplo 2C (737 mg, 1,6 mmol) foi dissolvido em cloreto de metileno (8 mL). Foi adicionado, a esta solução, fenilsilano (0,4 mL, 3,2 mmol) e Pd(Pb3)4 (186 mg, 0,2 mmol), altura em que a mistura reaccional ficou negra. Após agitação durante 1 hora à temperatura ambiente, a solução foi diluída com solução aquosa saturada de cloreto de sódio e extraída duas vezes com acetato de etilo. As fracções orgânicas combinadas foram secas sobre MgS04, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna (hexanos:acetato de etilo 70:30) para proporcionar 369 mg (55%) de produto sólido branco.

63

Exemplo 2E (3β,7α,12α)-7,12-Di-hidroxi-3-(2-(4-(17β-ΗίάΓθχί-3~οχο-17α-prop-l-inilestra-4,9-dien-l^-il)-2-metilfenoxi)etoxi)colan-24-oato de metilo 0 fenol do exemplo 2D (252 mg, 0,6 mmol) e o mesilato preparado no Exemplo 2B (390 mg, 0,7 mmol) foram combinados e dissolvidos em THF (6 mL). Foi adicionado, a essa solução, CS2CO3 (600 mg, 1,8 mmol) e nBu4NI (450 mg, 1,2 mmol) e a mistura resultante foi aquecida a 55 °C durante 24 horas. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura foi diluida com solução aquosa saturada de cloreto de sódio e extraida com acetato de etilo. As fracções orgânicas foram secas sobre MgSCg, concentradas in vacuo e purificadas utilizando cromatografia em coluna (hexanos:acetato de etilo 70:30). O rendimento do acoplamento foi de 480 mg (93%).

Exemplo 2F ácido_(3β, 7α, 12α) -7,12-di-hidroxi-3- (2- (4- (17β-1ιίάηοχί-3- oxo-17a-prop-l-inilestra-4,9-άίθη-11β-ί1)-2-metilfenoxi)etoxi)colan-24-óico O éster descrito no Exemplo 2E foi dissolvido numa mistura de THF (2 mL) e metanol (2 mL). Foi adicionado, a essa mistura, LiOH (1,4 mL de uma solução a 1 M em água). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. Em seguida, a mistura reaccional foi diluída com água e lavada com éter dietílico. A fracção aquosa foi acidificada com H3PO4 a 1 M e extraída com acetato de etilo. As fracções orgânicas combinadas 64 foram secas sobre MgS04 e concentradas in vacuo. 0 sólido branco sujo, em bruto, não foi ma is purif :icado . RMN de XH (300 MHz, CDCls) : δ 6, 95 (d, J = 2,03 Hz, 1H) , 6, 84 (m, 1H) , 6, 71 (d, J = 8 ,48 Hz, 1H) , 5, 76 (s, 1H) , 4,34 (d, J = 6,10 Hz, 1H) , 4,06 (m, 2H) , 3, 99 (s, 1H) , 3, 85 (d, J = = 2, 37, 1H) , 3,72 (dd, J = 4,58, 6, 27 Hz, 2H) , 3 , 65 (d, J = 2 !, 71 Hz, 1H) , 2,75 (m, 2H), 2,59 (m, 4H) , 2,36 (m, 12H) , 2, 19 (s, 3H) , 1, 97 (m, 4H), 1, 90 (m, 3H) , 1,54 (m, 19H) , 1, 01 (m, 3H) , 0, 90 (s, 3H), 0,71 (í 3, 3H) , 0 ,53 (s, 3H) . MS (ESI) m/e 851 ,6 (M+H) +, 849,6 (M-H).

Exemplo 3 Ácido (3 β,5β,7α,12α)-7,12-di-hidroxi-3-{2-[{4-[17ft-hidroxi-3-oxo-17a-prop-l-inilestra-4,9-dien-lip-il]-2-fluorofenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico

65

Exemplo 3A N-Boc-N-metil-2-fluoro-4-bromoanilina 0 composto foi preparado de acordo com os processos do Exemplo 1D, substituindo 4-bromo-2-fluoroanilina por 4-bromoanilina.

Exemplo 3B 2-fluoro-4-((11R,13S,17S)-17-hidroxi-13-metil-17-prop-l-inil-1,2,6,7,8,11,12,13,14,15,16,17-dodeca- hidroespiro[ciclopenta[a]fenantreno-3,2'-[1,3]dioxolan]-11-il)fenil(metil)carbamato de terc-butilo 0 composto foi preparado utilizando os processos do Exemplo 1G, substituindo o composto do Exemplo 3A pelo composto do

Exemplo 1D (rendimento de 95%) . RMN de XH (3 00 MHz, DMSO) δ 7, 23 (t, J = 8, 4 Hz, 1H) , 7,06 (m, 1H) , 7, 02 (m, 1H) , 5, 07 (s, 1H) , 4,26 (d, J = 6, 3 Hz, 1H) , 4, 17 (m r 1H) , 3, 91 -3, 70 (m, 4H) , 3, 08 (s, 3H) , 2,33- -0, 98 (m, 16H) , 1, 83 (s, 3H) , 1, 29 (s, 9H), 0,32 (s, 3H); MS (ESI) m/e 578 (M+H)+. 66

Exemplo 3C 11β-(3-fluoro-4-(metilamino)fenil)-17β-1ιϊά^χϊ-17α-ρΓορ-1-inilestra-4,9-dien-3-ona

Foi adicionada, gota a gota, uma solução de TFA em CH2CI2 (6 mL de solução a 50%) a uma solução do composto do Exemplo 3B (490 mg, 0,85 mmol) em CH2CI2 (2 mL) a 0 °C. A mistura resultante foi agitada a 0 °C durante 35 minutos. A mistura reaccional foi neutralizada por adição, gota a gota, de solução de NaHCCb (saturada) e, em seguida, extraída com EtOAc (3 vezes). A camada orgânica combinada foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre Na2SC>4 e concentrada. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (acetato de etilo a 33%/hexano) para proporcionar 0 composto em epígrafe (244 mg, rendimento de 66%). RMN de XH (300 MHz , CDCI3) δ 6,84-6, 76 (m, 2H) , 6, 64 (t, J = 8,3 Hz, 1H) , 5, 77 (s, 1H), 4,33 (d, J= 6,9 Hz, 1H) , 2,87 (s, 3H) , 2,81-1,30 (m, 18H) , 1,89 (s, 3H) , 0,55 (s, 3H); MS (ESI) m/e 434 (M+H)+, 432 (M-H)". 67

Exemplo 3D Ácido_ΐΏΘίί1(3β,5β,7α,12α)-7,12-di-hidroxi-3-{2 - [{4 - [17β- hidroxi-3-oxo-17a-prop-l-inilestra-4,9-dien-lip-il]-2-fluorofenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico

Foi aquecido, a 115 °C durante 40 horas, num tubo selado, uma mistura do composto do Exemplo 1C (79 mg, 0,13 mmol) , o composto do Exemplo 3C (55 mg, 0,13 mmol), diisopropiletilamina (25 mg, 0,193 mmol) e Nal (15 mg, 0,16 mmol) em CH3CN (1,9 mL) . A mistura reaccional foi tomada em EtOAc e lavada com solução de NH4C1 e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04 e concentrada. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em silica gel (acetato de etilo a 40%/hexano) para proporcionar o composto em epígrafe (68 mg, rendimento de 61%) . RMN de (300 MHz, CDCI3 ) δ OO ÁO -6,7 (m, 3H) , 5 ,77 (s, 1H), 4, 34 (d, J = 6, 9 Hz, 1H) , 3, 98 (m, 1H) 3, 83 (m, 1H) , 3,67 (s, , 3H), 3, 53-3,32 (m, 5H) , 2, 91 (s, 3H) 2,80 -1,10 (m, 44H), 1, 89 (s, 3H) , 0,98 (d, r J = 6, 3 Hz, 3H) 0,89 (s, 3H) , 0, 69 (s, 3H) , 0,55 (s, 3H) ; MS (ESI) m/ 882 (M+H) +, 880 (M-H) “. 68 ρ

Exemplo 3Ε Ácido (3β,5β,7α,12α)-7,12-di-hidroxi-3-{2-[{4-17β-1ιίάηοχί-3-oxo-17a-prop-l-inilestra-4,9-άίθη-11β-ί1]-2-fluorofenill}(metil)amino]etoxi}colan-24-6ico

0 composto do Exemplo 3D (360 mg, 0,408 mmol) foi dissolvido em 6 mL de THF e CH3OH (1:1). Em seguida, foi adicionado a 0 °C, 2,5 mL de solução de LiOH (1 M, aquoso). A mistura resultante foi agitada durante 5 horas à temperatura ambiente. O solvente orgânico foi removido in vacuo e foi adicionada água suficiente para fazer uma fase. A solução foi acidificada com ácido acético para precipitar um sólido amarelo claro que foi extraído com EtOAc (3 vezes) . A camada orgânica combinada foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio e seca sobre Na2S04. A concentração in vacuo deu o composto em epigrafe : (350 mg, rendimento de 98%) . RMN de 1 H (300 MHz, CDC13) δ 6, 83-6, 74 (m, 3H) , 5, 78 (s, 1H) , 4,34 (d, J = 7,2 Hz, 1H) , 3, 98 (m, 1H) , 3, 84 (m, 1H) , 3, 52- -3, 33 (m, 5H) , 2,92 (s, 3H) , 2, 80-1, 10 (m, 44H) , 1,85 3 (s, 3H) , 0, 99 (d, J = 6,0 Hz, 3H) , 0, 89 (s, 3H) , 0, 69 (s, 3H) , 0,55 (s, 3H) r MS (ESI) m/e 868 (M+H)+, 866 (M-H)~. 69

Exemplo 4

Ácido (3β,5β,7α,12α)-7,12-di-hidroxi-3-{2-[{4-[17β-ΕίάΓθχί-16a-metil-3-oxo-17g-prop-l-inilestra-4,9-άίθη-11β-il]fenil)(metil)amino]etoxi}colan-24-óico

Exemplo 4A

(5'R,10'R,13'S,6'R)-13',16'-dimetil-1',2',6',7',8',12',13',14',15'-nona-hidro-17'H-espiro[1,3-dioxolano-2,3'-[5,10]epoxiciclopenta[a]fenantren]-17' - ona O composto do Exemplo 1E (3,0 g, 9,1 mmol) foi dissolvido em 30 mL de THF, arrefecido a -78 °C. Foi adicionado, à solução arrefecida, LiHMDS (1,0 M em THF, 9,5 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 1 hora a -78 °C. Foi adicionado,

rapidamente, Mel (6,0 mL, 91 mmol) por uma seringa e a solução foi aquecida até à temperatura ambiente durante 20 minutos. A 70 reacção foi parada com a adição de NH4CI aquoso e extraída duas vezes com acetato de etilo. Os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos (MgS04) e concentrados in vácuo, para proporcionar 3,03 g (97%) do composto em epígrafe, o qual foi utilizado sem mais purificação.

Exemplo 4B

(5'a, 10'.R, 13' S, 16'-R, 17'S)-13',16' -dimetil-17'-prop-l-inil-1',2',7',8',12',13',14',15', 17'-nona-hidro-6'ff-espiro[1,3-dioxolano-2,3' -[5, 10]epoxiciclopenta[a]fenantren]-17'-ol O composto descrito no Exemplo 4A (3,03 g, 8,80 mmol) foi dissolvido em THF (35 mL) e arrefecido a 0 °C. Foi adicionado, numa porção, brometo de propinilmagnésio (0,5 M em THF, 35 mL) . A mistura reaccional foi agitada durante 2,5 horas a 0 °C. Após estar completa, a reacção foi parada com NH4C1 aquoso e extraída com acetato de etilo. A fracção orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (MgSCL) e concentrada in vacuo. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia em coluna (hexanos:acetato de etilo 70:30) para proporcionar 1,0 g (29%) do composto em epígrafe. 71

Exemplo 4C

17β-Μ(ΐ3:οχί-16θί-Γηθ1:ί1-11β- (4- (metilamino) fenil) -17a-prop-l-inilestra-4,9-dien-3-ona

Foi adicionado Mg de Rieke (1,0 M em THF, 13 mL) , juntamente com 2 0 mL de THF, a um balão de fundo redondo, com três tubuladuras, seco por chama (equipado com um condensador de refluxo, rolha de vidro e septo de borracha). Em seguida, foi adicionado, gota a gota, o composto descrito no Exemplo 1D (1,86 g, 6,50 mmol) . Após a adição de uma pequena porção do brometo, o balão foi aquecido com um secador de ar quente até se iniciar a reacção. O brometo restante foi adicionado, em porções, permitindo que a mistura reaccional entre em refluxo e, em seguida, arrefeça. Após a adição completa, a solução reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente e, em seguida, foi arrefecida num banho de gelo. Foi adicionado, numa porção, Cul (1,23, 6, 50 mmol). Após 2 minutos, foi rapidamente adicionado uma solução do composto descrito no Exemplo 4B (1,0 g, 2,6 mmol) em 6 mL de THF. Após agitação a 0 °C durante 1 hora, a reacção foi parada com NH4C1 aquoso e extraída com acetato de etilo. Os extractos orgânicos foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos (MgS04) e concentrados. O resíduo em bruto foi dissolvido em 7,6 mL de THF e 6 mL de CH2CI2. Foi adicionado, a esta solução, TsOH (3,8 g, 19,9 mmol) e a solução resultante foi agitada à temperatura 72 ambiente durante 3 h. Foi adicionado NaHCCg aq. sat. para neutralizar a reacção e a solução resultante foi extraída com acetato de etilo. Os extractos orgânicos foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos (MgS04) concentrados e purificados por cromatografia em coluna (hexanos:acetato de etilo 70:30). O composto em epígrafe foi isolado com rendimento de 34% (250 mg).

Exemplo 4D

(3β,5β,7α,12α)-7,12-Di-hidroxi-3-{2-[{4-[17β-hidroxi-l6a-metil-3-oxo-17a-prop-l-inilestra-4,9-dien-lip-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-oato de metilo

Num tubo sob pressão, a anilina descrita no Exemplo 4C (250 mg, 0,581 mmol) foi combinada com o tosilato do Exemplo 1C (361 mg, 0,581 mmol) e dissolvida em 8 mL de acetonitrilo. Foi adicionado, a essa solução, Nal (104 mg, 0, 696 mmol) e base de Hiinig (0,2 mL, 0, 873 mmol) . A mistura reaccional foi agitada a 60 °C durante 2 dias. Após arrefecimento à temperatura ambiente, a solução foi diluída com solução aquosa saturada de cloreto de sódio e extraída com acetato de etilo. A fracção orgânica foi 73 lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (MgS04) e concentrada in vacuo. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia em coluna (hexanos:acetato de etilo 3:2) para proporcionar 215 mg (42%) do composto em epígrafe.

Exemplo 4E

Ácido (3β, 5β, 7α, 12α) - 7,12-di-hidroxi-3 - {2 - [ { 4 - [17p-hidroxi-16a-metil-3-oxo-17a-prop-l-inilestra-4,9-dien-lip-iljfenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico 0 composto descrito no Exemplo 4D (215 mg, 0,244 mmol) foi dissolvido em 3 mL de THF e 3 mL de MeOH. Em seguida, foi adicionada uma solução aquosa de LiOH (1,0 M, 1,0 mL) e a solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. A solução alcalina foi extraída uma vez com Et20, acidificada com H3P04 a 1 N e extraída com acetato de etilo. A fracção de acetato de etilo foi seca com Na2S04 e concentrada in vacuo. O sólido branco não necessitou de mais purificação. RMN de XH (500 MHz, MeOH) δ 7,07-7,71 (m, 4H) , 5,76 (s, \—1 4,4 (d, 1H) , 3, 95 (s, 1H) , 3,78 (sl, 1H) , 3, 74 (t, 1H) , 3, 44 (m, 4H) KO 00 CM (m, 1H) , 2,66 (m, 1H) , 2,50 (m, 2H) , 2,16- -2,41 (m, 9H) , 2,15 (m, 2H) , 2,08 (m, 1H), 1, 9 (m, 3H) , 1,85 (m, 5H) , 74 1,75 (m, 5H) , 1,57 (m, 7H) , 1,40 (m, 8H) , 1,31 (m, 6H) , 1,05 (d, 3H) , 1, 01 (d, 3H) , 0,81 (s, 3H), 0,71 (s , 3H) , 0,6 (s, 3H) . MS (ESI) m/e 864 (M+H) + , 863 (Μ-H)-; Massa exacta Calcd. para C55H78NO7: 864,5769; Encontrado 864,5773.

Exemplo 5. ácido_(3 β,5β,7α,12α)-7-[(2-amonioetoxi)carboniloxi]-12- hidroxi-3-{2-[{4-[(17p-hidroxi-3-oxo-17a-prop-l-inilestra-4, 9-dien-l^-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico Ο

75

Exemplo 5A. Ácido metil(3β,5β,7α,12α)-7-(4-nitrofenoxicarboniloxi)-12-hidroxi-3-{2-[{4-[173-hidroxi-3-oxo-17a-prop-l-inilestra-4,9-dien-lip-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico

Foi adicionado, a uma solução bem agitada do composto do Exemplo II (1,20 g, 1,39 mmol) em piridina (4,1 mL) , a 0 °C, 4-nitrofenilcloroformato (698 mg, 3,47 mmol) e aquecida à temperatura ambiente durante a noite. A mistura reaccional foi dividida entre H3P04 (1 N) e EtOAc. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04 e concentrada. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em silica gel (acetato de etilo a 50%/hexanos) para proporcionar o composto em epígrafe (0,70 g, rendimento de 49%).

76

Exemplo 5B. Ácido_metil(3β,5β,7α,12α)-7-[2-(terc- butiloxicarbonilamino)etoxicarboniloxi]-12-hidroxi-3-{2-[{4-[ 17β-ίιίάΓθχί-3-οχο-17β-ρΓορ-1-ίηί1θ5ίΓβ-4, 9-άίβη-11β-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico

Foi agitada, a 90 °C durante a noite, uma mistura do composto do Exemplo 5A (83 mg, 0,081 mmol) , 2-(terc-butiloxicarbonilamino)etanol (26 mg, 0,161 mmol), DMAP (10 mg) e base de Hiinig (0,1 mL) em acetonitrilo (1 mL) . A mistura reaccional foi dividida entre H20 e EtOAc. A fase orgânica foi seca sobre Na2SC>4 e concentrada in vacuo. O residuo foi purificado por cromatografia em silica gel (acetato de etilo a 45%/hexano) para dar o composto em epígrafe (73 mg, rendimento de 86%).

Exemplo 5C. ácido (3 β,5 β,7α,12α)-7-(2-aminoetoxi)carboxi-12-hidroxi-3-{2-[{4-[17ft-hidroxi-3-oxo-17a-prop-l-inilestra-4, 9-dien-llft-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico

Foi adicionada uma solução de HC1 em 1,4-dioxano (4 M, 0,3 mL) ao composto do Exemplo 5B (20 mg, 0,019 mmol). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 6 horas. A mistura reaccional foi purificada por HPLC (fase reversa) para proporcionar o composto em epígrafe (5 mg, rendimento de 28%) . RMN de XH (300 MHz, CD3OD) δ 7,33-7,21 (m, 2H) , 7,18-7,07 (m, 2H) , 5,75 (s, 1H) , 4,75 (m, 1H), 4,51 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,42 -4,31 (m, 1H) , 4,30-4,23 (m, 1H) , 3,98 (m, 1H) , 3,71-1,07 77 (m, 52H) , 3, 14 0, 93 (s, 3H) , 937 (M+H)+ , 935 (s, 3H), 1,86 (s, 0,72 (s, 3H), (M-H)

3H), 1,02 (d, J 0,51 (s, 3H); = 6,6 Hz, 3H) , MS (ESI) m/e

Exemplo 6. ácido_(3 β,5β,7α,12α)-7-[ (3-amoniopropoxi)carboniloxi]-12- hidroxi-3-{2-[{4-[(17β-ΗίάΓθχί-3-οχο-17α-ρΓορ-1-ίηί1θ3ΐ:^-4,9-dien-11β-il]fenil} (metil)amino]etoxi}colan-2 4-óico

78

Exemplo 6A. Ácido_metil(3β,5β,7α,12α)-7-[3-(fcerc- butiloxicarbonil)aminopropoxicarboniloxi]-12-hidroxi-3-{2-[{4-[17β-1ιίά^χί-3-οχο-17οί-ρ^ρ-1-ίηί1θ3ί^-4,9-άίοη-11β-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico preparado utilizando os 5B, substituindo por 2-(t-butilcarbonil- 0 composto em epígrafe foi processos do Exemplo 3-(t-butiloxicarbonilamino)propanol amino)etanol (65%).

O

79

Exemplo 6B. ácido_(3β, 5β, 7α, 12α) - 7- [3 - (terc- butiloxicarbonil)aminopropoxicarboniloxi]-12-hidroxi-3-{2-[{4-[17β-ΕίάΓθχ1-3-οχο-17α-ρΓορ-1-ίηίΐ65ίΓΒ-4,9-άίθη-11β-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico 0 composto 5 (46 mg, 0,043 mmol) foi dissolvido em 2,5 mL de THF e CH3OH (1:1,5) . Em seguida, foi adicionado, a 0 °C, 0,8 mL de solução de LiOH (1 M, aquosa) . A mistura resultante foi agitada, durante a noite, à temperatura ambiente. O solvente orgânico foi removido in vacuo e foi adicionada água suficiente para fazer uma fase. A solução foi acidificada com H3PO4 (1 M) para precipitar um sólido amarelo claro que foi extraído com EtOAc (2 vezes) . A camada orgânica combinada foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio e seca sobre Na2S04. A concentração in vacuo proporcionou o composto 6 em epígrafe (46 mg, rendimento de 100%).

Exemplo 6C. ácido_(3 β,5β,7α,12α)-7-[(3-amoniopropoxi)carboniloxi]-12- hidroxi-3-{2-[{4-[17β-]ι1άηοχί-3-οχο-17α-ρηορ-1-ζηϋ65ίηη-4,9-dien-l^-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico

Foi adicionada, a 0 °C, uma solução de HC1 em 1,4-dioxano (4 M, 0,4 mL) ao composto do Exemplo 6B (24 mg, 0,023 mmol). A mistura resultante foi agitada a 0 °C durante 0,5 hora e, em seguida, à temperatura ambiente durante 0,5 hora. A mistura reaccional foi purificada por HPLC (fase reversa) para proporcionar o composto em epígrafe (5 mg, rendimento de 23%) . 80 RMN de ΧΗ (30 0 MHz, CD3OD) δ 7,46-7,36 (m, 4H) , 5,77 (s, 1H), 4,73 (m, 1H) , 4,57 (d, J = 6,8 Hz, 1H) , 4,31-4,21 (m, 1H), 4,21 -4,10 (m, 1H) , 3, 98 (m, 1H), 3,82-1, 06 (m, 54H), 3,24 (s, 3H) , 1,86 (s, 3H) , 1,02 : (d, J = 6, 4 Hz, 3H) , 0,95 (s, 3H), 0,73 (s, 3H), 0,49 (s, • 3H) ; MS (ESI) m/e 951 (M+H)+, 949 (M-H)

Exemplo 7. Ácido_(3β,5β,7α,12α)-7-fosforiloxi-12-hidroxi-3-{2-[{4- [17p-hidroxi-3-oxo-17a-prop-l-inilestra-4,9-dien-lip-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico

81

Exemplo 7A. Ácido metil(3β,5β,7α,12α)-7-dialilfosforiloxi-12-hidroxi-3-{2 - [ {4-[17p-hidroxi-3-oxo-17a-prop-l-inilestra-4, 9-dien-lip-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico 0 composto do Exemplo II é dissolvido em THF e arrefecido a 0 °c. É adicionado, gota a gota, n-butil-lítio (solução a 2,5 M em hexanos; 1,5 eq) ; forma-se um sólido branco e dispersa-se, e a solução torna-se amarelo claro. É adicionado fosfocloridrato de dialilo (2 eq) , provocando uma descoloração rápida da cor; a solução é aquecida lentamente até à temperatura ambiente e agitada durante a noite. A reacção é diluida com solução aquosa de bicarbonato e extraida com acetato de etilo. A camada orgânica é seca (Na2SC>4) , filtrada e concentrada ín vacuo. 0 material em bruto é purificado por cromatografia em coluna. p

>H 82

Exemplo 7B. Ácido_(3β,5β,7α,12α)-7-dialilfosforiloxi-12-hidroxi-3-{2- [ {4 - [17β-1ί1άΓθχ1-3-οχο-17α-ρΓορ-1-ίηί1β3ίΓ3-4, 9-άίθη-11β-11]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico 0 composto do Exemplo 7A é dissolvido em THF; é adicionada uma solução aquosa de LiOH e a mistura resultante é agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. A reacção é parada por adição de ácido fosfórico aquoso (1 N) e extraida com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas (NaS04) , filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O material em bruto é utilizado sem mais purificação.

Exemplo 7C. Ácido_(3β,5β,7α,12α)-7-fosforiloxi-12-hidroxi-3-{2-[{4- [17β-1ιίά^χί-3-οχο-17α-ρ^ρ-1-ίηίΐ65ί^-4,9-άί6η-11β-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico 0 composto do Exemplo 7B é dissolvido em THF; são adicionados trifenilfosfina (0,5 eq), ácido fórmico (2 eq), n-butilamina (2 eq) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0) (0,3 eq) e a mistura resultante é agitada, à temperatura ambiente, durante 3 horas. Os solventes são removidos in vacuo; o resíduo é tomado em NaOH aquoso a 1 N e extraído com diclorometano. A fase aquosa é acidificada com ácido fosfórico aquoso (1 N); o produto é purificado por HPLC de fase reversa. 83 ο

Exemplo 8. Ácido_(3β,5β,7α,12α)-7-fosforiloximetoxi-12-hidroxi-3-{2- [ {4 - [17β-1ιίάηοχί-3-οχο-17α-ρ^ρ-1-ίηίΐ65ί^-4, 9-άίθη-11β-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico

Exemplo 8A. Ácido metil(3β,5β,7a,12a)-7-metiltiometoxi-12-hidroxi-3-{2-[ {4- [17β-1ιίάΓθχί-3-οχο-17α-ρΓορ-1-ίηίΐ03ίΓΒ-4, 9-άίθη-11β-iljfenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico O composto arrefecido num do Exemplo II é dissolvido em piridina e banho de gelo; é adicionado cloreto de 84 metiltiometilo (1,2 eq) e a mistura é aquecida à temperatura ambiente, em seguida, aquecida a 90 °C durante a noite. Os solventes são removidos in vacuo; o residuo é dividido entre ácido fosfórico aquoso (1 N) e acetato de etilo. O extracto orgânico é lavado com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seco (Na2S04) , filtrado e concentrado in vacuo. O material em bruto é purificado por cromatografia em coluna.

Exemplo 8B. Ácido_metil(3β,5β,7α,12α)-7-clorometoxi-12-hidroxi-3-{2- [ {4- [17β-Μάηοχί-3-οχο-17α-ρηορ-1-1ηϋ65ίηη-4, 9-dien-llft-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico O composto do Exemplo 8A é dissolvido em diclorometano; é adicionado cloreto de sulfurilo (1,1 eq) e a mistura é agitada à temperatura ambiente até consumo do material de partida. A reacção é parada pela adição de bicarbonato de sódio aquoso; a camada orgânica é removida, e a fase aquosa é novamente extraida com diclorometano. As fases orgânicas combinadas são secas (Na2S04), filtradas e concentradas in vacuo. O material em bruto é utilizado sem mais purificação. 85

V

Exemplo 8C. Ácido_metil(3β,5β,7α,12α)-7-dialilfosforiloximetoxi-12- hidroxi-3-{2-[{4-[17β-Ε1άΓθχί-3-οχο-17α-ρΓορ-1-1η11θ3ΕΓθ-4,9-dien-lip-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico 0 composto do Exemplo 8B é dissolvido em THF. É adicionado dialilfosfato de prata e a mistura é aquecida ao refluxo durante a noite. Após arrefecimento à temperatura ambiente, a mistura reaccional em bruto é passada através de uma camada de sílica gel para remover sais.

86

Exemplo 8D. Ácido (3β,5β,7α,12α)-7-dialilfosforiloximetoxi-12-hidroxi- 3-{2-[{4-[173-hidroxi-3-oxo-17a-prop-l-inilestra-4,9-dien-lip-11]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico O composto do Exemplo 8C é dissolvido em THF; é adicionada uma solução aquosa de LiOH e a mistura resultante é agitada, à temperatura ambiente, durante 3 horas. A reacção é parada por adição de ácido fosfórico aquoso (1 N) e extraída com acetato de etilo. 0 material em bruto é utilizado sem mais purificação.

Exemplo 8E. Ácido_(3β,5β,7α,12α)-7-fosforiloximetoxi-12-hidroxi-3-{2- [ { 4 - [ 14β-1ιίά^χί-3-οχο-17α-ρ^ρ-1-1ηϊΐ63ί^-4, 9-dien-llft-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico 0 composto do Exemplo 8D é dissolvido em THF; trifenilfosfina (0,5 eq) , são adicionados ácido fórmico (2 eq) , n-butilamina (2 eq) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,3 eq) e a mistura resultante é agitada, à temperatura ambiente, durante 3 horas. Os solventes são removidos in vacuo; o resíduo é retomado em NaOH aquoso a 1 N e extraído com diclorometano. A fase aquosa é acidificada com ácido fosfórico aquoso (1 N); o produto é purificado por HPLC de fase reversa. 87 ο

Exemplo 9. ácido (3β,5β,7α,12α)-7-(4-amoniobutanoiloxi)-12-hidroxi-3-{2 - [ {4 - [17β-1ί1άΓθχ1-3-οχο-17α-ρΓορ-1-1η11θ3ΕΓ3-4, 9-άίθη-11β-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico \>

88

Exemplo 9A. Ácido_metil (3β, 5β, 7α, 12α) -7- (4-fcerc- butoxicarbonilaminobutanoiloxi)-12-hidroxi-3-{2—[{4—[17β— hidroxi-3-oxo-17a-prop-l-inilestra-4,9-dien-lip- il]fenil}amino]etoxi}colan-24-óico 0 composto do Exemplo 8B é dissolvido em DMF; é adicionado ácido 4-terc-butoxicarbonilaminobutanóico (1,3 eq) em conjunto com 1,2 equivalentes de CS2CO3. A mistura resultante é agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura reaccional é dividida entre ácido fosfórico aquoso (1 N) e acetato de etilo. 0 extracto orgânico é seco (Na2S04) , filtrado e concentrado in vacuo. 0 material em bruto é purificado em silica gel utilizando um gradiente de acetato de etilo em hexanos para proporcionar o composto em epígrafe. o

89

Exemplo 9B. ácido_(3β,5β,7α,12α)-7- (4-terc- butoxicarbonilaminobutanoiloxi)-12-hidroxi-3-{2-[{4-[17 β — hidroxi-3-oxo-17a-prop-l-inilestra-4,9-dien-l^-iljfenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico 0 composto do Exemplo 9A é dissolvido em THF; é adicionada uma solução aquosa de LiOH e a mistura resultante é agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. A reacção é parada por adição de ácido fosfórico aquoso (1 N) e extraida com acetato de etilo. 0 material em bruto é utilizado sem mais purificação.

Exemplo 9C. ácido (3β,5β,7α,12α)-7-(4-amoniobutanoiloxi)-12-hidroxi-3-{2 - [ {4 - [17β-1ιίά^χί-3-οχο-17α-ρ^ρ-1-ίηίΐ65ί^-4, 9-dien-l^~ il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico 0 composto do Exemplo 9B é tratado com uma solução de HC1 (4 N) em dioxano. A mistura resultante é agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura reaccional é purificada por HPLC (fase reversa) para proporcionar o composto em epigrafe. o

90

Exemplo 10. ácido (3β, 5β, 7α, 12α)-7-(5-amoniopentanoiloxi)-12-hidroxi-3-{2-[{4-[17p-hidroxi-3-oxo-17a-prop-l-inilestra-4,9-άίθη-11β-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico

Exemplo 10A. Ácido_me til (3β, 5β, 7α, 12α) - 7- (5 -terc- butoxicarbonilaminopentanoiloxi)-12-hidroxi-3-{2-[{4-[17 β — hidroxi-3-oxo-17a-prop-l-inilestra-4,9-dien-l^- il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico O composto do Exemplo 8B é dissolvido em DMF; é adicionado ácido 4-terc-butoxicarbonilaminobutanóico (1,3 eq) , em conjunto com 1,2 equivalentes de CS2CO3. A mistura resultante é agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura reaccional é dividida entre ácido fosfórico aquoso (1 N) e acetato de etilo. O extracto orgânico é seco (Na2S04), filtrado e concentrado in vacuo. O material em bruto é purificado em sílica gel, 91 utilizando um gradiente de acetato de etilo em hexanos para proporcionar o composto em epigrafe.

Exemplo 10B. ácido_(3β, 5β, 7α, 12α) - 7- (5-fcerc- butoxicarbonilaminopentanoiloxi)-12-hidroxi-3-{2-[{4-[17β- hidroxi-3-oxo-17a-prop-l-inilestra-4,9-dien-l^- il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico 0 composto do Exemplo 9A é dissolvido em THF; é adicionado uma solução aquosa de LiOH e a mistura resultante é agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. A reacção é parada por adição de ácido fosfórico aquoso (1 N) e extraída com acetato de etilo. 0 material em bruto é utilizado sem mais purificação. 92

Exemplo 10C. ácido (3β,5β,7α,12α)-7-(5-amoniopentanoiloxi)-12-hidroxi-3-{2-[{4-[17 3-hidroxi-3-oxo-17g-prop-l-inilestra-4, 9-dien-lip-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico O composto do Exemplo 9B é tratado com uma solução de HC1 (4 N) em dioxano. A mistura resultante é agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura reaccional é purificada por HPLC (fase reversa) para proporcionar o composto em epígrafe. p

NHj* 93

Exemplo 11. ácido_(3 β,5β,7α,12α)-7-(4-amoniobutanoiloximetoxi)-12- hidroxi-3-{2-[{4-[17β-ΗίάΓθχί-3-οχο-17α-ρΓορ-1-ίηί1β5ίΓβ-4,9-dien-ΐΐβ-ίΐ]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico

H

Exemplo 11A. éster_clorometí lico do ácido_4- terc- butoxicarbonilaminobutanóico É dissolvido ácido 4-N-terc-butoxicarbonilaminobutanóico (5 mmol) em 20 mL de DMF; são adicionados 10 mmol de trietilamina e 20 mmol de cloroiodometano, e a solução resultante é agitada, durante 24 h, à temperatura ambiente. A mistura reaccional é dividida entre acetato de etilo e água; a camada orgânica é lavada com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A solução resultante é seca (Na2S04) , filtrada e concentrada in vacuo. O material em bruto é purificado em silica gel utilizando um gradiente de acetato de etilo em hexanos para proporcionar o composto em epigrafe. 94

Exemplo 11B. Ácido_metil(3β,5β,7α,12α)-7-(4-terc- butoxicarbonilaminobutanoiloximetoxi)-12-hidroxi-3-{2-[{4-[17β- hidroxi-3-oxo-17a-prop-l-inilestra-4,9-dien-l^- il]fenil}(metil)amino]colan-24-óico 0 composto do Exemplo II (1 mmol) é combinado com uma quantidade equimolar do composto do Exemplo 11A em 1 mL de acetonitrilo. São adicionados diisopropiletilamina (2 eq) e Nal (20 mg) e a mistura resultante é aquecida a 90 °C durante 20 h. A mistura reaccional é dividida entre acetato de etilo e água; o extracto orgânico é lavado com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seco (Na2SC>4) , filtrado e concentrado in vacuo. O material em bruto é purificado em silica gel utilizando um gradiente de acetato de etilo em hexanos para proporcionar o composto em epígrafe. 95

Exemplo 11C Ácido_(3β, 5β, 7α, 12α) - 7- (4-terc- butoxicarbonilaminobutanoiloximetoxi)-12-hidroxi-3-{2-[{4-[17β- hidroxi-3-oxo-17a-prop-l-inilestra-4,9-dien-l^- il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico 0 composto do Exemplo 11B é dissolvido em THF; é adicionada uma solução aquosa de LiOH e a mistura resultante é agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. A reacção é parada por adição de ácido fosfórico aquoso (1 N) e extraída com acetato de etilo. 0 material em bruto é utilizado sem mais purificação. 96

Exemplo IIP, ácido_(3β,5β,7α,12α)-7-(4-amoniobutanoiloximetoxi)-12- hidroxi-3-{2-[{4-[17β-ΗίάΓθχ1-3-οχο-17α-ρΓορ-1-1η11β5ίΓβ-4,9-dien-ΙΙβ-ΙΙ]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico 0 composto do Exemplo 11C é tratado com uma solução de HC1 (4 N) em dioxano. A mistura resultante é agitada à temperatura ambiente durante 20 min. A mistura reaccional é purificada por HPLC (fase reversa) para proporcionar o composto em epígrafe.

Dados biológicos

Uma estratégia para obter compostos selectivos do fígado é o de conjugar os mesmos com um ácido biliar, tal como ácido eólico. Esta estratégia foi recentemente revista por Kramer e Wess (Kramer, W.; Wess, G.; "Bile acid transport Systems as pharmaceutical targets"; Eur. J. Clin. Invest. 1996, 26, 715-732) . Por exemplo, foram preparados conjugados do ácido biliar com a hormona da tiróide T3 e com inibidores da HMG-CoA reductase. Demonstrou-se que ambas as classes de conjugados reduziam os níveis de colesterol no sérum, minimizando ao mesmo tempo, efeitos periféricos indesejáveis. Estes resultados demonstram que os conjugados do ácido biliar podem, por vezes, ser selectivos do fígado e capazes de proporcionar, ao fígado, concentrações terapeuticamente úteis de fármaco. Um aspecto curioso dos conjugados do ácido biliar é o de serem absorvidos a partir do aparelho intestinal, excretados para a bílis e reabsorvidos várias vezes. Assim, os ácidos biliares podem representar um mecanismo extremamente eficaz de libertação sustida. No entanto, os conjugados do ácido biliar devem ser 97 cuidadosamente projectados. Os sítios de ligação no fármaco de origem e no ácido biliar devem ser escolhidos para permitir que cada um proporcione as propriedades desejadas para as espécies ligadas. Um ligante deve ser seleccionado e ligado à molécula do fármaco de origem de modo a reter um nível apropriado da actividade bioquímica desejada (por exemplo, actividade enzimática ou afinidade ligante ao receptor) e selectividade. De um modo semelhante, o componente ácido biliar deve ser seleccionado e um ligante deve ser ligado de um modo que permita que o ácido biliar direccione o conjugado selectivamente para o fígado. Além disso, de modo a produzir um agente para libertação oral, as propriedades gerais do conjugado resultante devem ser optimizadas para permitir a absorção ao longo do lúmen intestinal, através de ambos, ou de uma combinação de mecanismos activos (mediados por transportador) e passivos (difusão). 0 documento EP0417725 descreve derivados de ácido biliar para o tratamento de várias doenças. Os derivados em questão têm "um radical do ácido biliar modificado" ligado, por meio de um ligante, a "uma unidade W do composto activo, que é um péptido, um antibiótico, uma substância anti-viral, um agente anti-cancerígeno, um agente hepatoprotector, um antilipidémico, um diurético, um hipotensivo, um inibidor de renina ou um inibidor de prolina hidroxilase." A patente U.S. N° 5780444 descreve uma série de ácidos nucléicos conjugados a ácido biliar como agentes para transformar células, e reivindica, de forma genérica, "um conjugado compreendendo um ácido biliar, ou o seu análogo, ... ligado covalentemente, directa ou indirectamente, a um ou mais de outros compostos". 0 documento W09944616 descreve ácidos biliares modificados como agentes antibióticos. Uma das modificações permitidas é "um grupo ligante ligado a um segundo esteróide". Estes exemplos, em conjunto com o estudo resumido no 98 artigo de revisão de Kramer e Wess, indicam todos que uma estratégia de conjugação de ácido biliar pode conduzir a agentes com actividade selectiva no figado. No entanto, nenhum descreve como é que tal estratégia pode ser implementada no caso especifico em que o agente farmacológico activo é um antagonista glucocorticóide. De facto, os factores que contribuem para o desenvolvimento de um antagonista glucocorticóide para administração oral e hepatosselectivo não são claros, como resumido nos exemplos apresentados na Tabela I.

RU-38486

GR -

Figura^i conjugados representativos de ^ ácido bilialh . .-K-—--—jntagc.ni.sta de --incluindo o composto do Exemplo ^ 99

Tabela I. Efeito de Esteróides conjugados a Ácido Biliar nas Respostas de Glucocorticóide Hepático e Sistémico

Inibição das respostas mediadas por GR Composto TAT Glicogénio Linfócitos RU-38486 100% 74% 108% Composto 1 85% 111% 35% Composto A 39% 9% 9% Composto B 11% 20% 4% Composto C Nenhuma inibição Nenhuma inibição 14% Composto D* 22% Nenhuma inibição 8% Todos os compostos doseados, por via oral, em ratos, a 100 mpk excepto o *Composto D, doseado por via subcutânea, a 23 mpk. A análise da actividade in vivo e selectividade hepática pode ser realizada utilizando um único estudo farmacológico, envolvendo um estimulo com prednisolona administrada a ratos. A prednisolona é um agonista de glucocorticóide distribuída de uma forma ubíqua e, como tal, apresenta efeitos agonistas de GR em compartimentos hepáticos e extra-hepáticos. A administração de uma dose de 10 mg por kg (10 mpk) de prednisolona a ratos normais conduz a um factor multiplicativo de 3 na indução da enzima tirosina aminotransferase (TAT) regulada por glucocorticóide durante o decurso de uma experiência de 7 horas. Ao mesmo tempo, o agonista desencadeia um aumento de ~ 60% na deposição de glicogénio hepático. Pensa-se que ambos os efeitos são mediados por activação directa de GR hepático; os resultados de tais experiências estão demonstrados na Figura 1. 100 A actividade glucocorticóide sistémica conduz a uma reacção anti-inflamatória, que é o resultado de uma supressão da actividade linfocitica ligada a GR. Na prática, o protocolo de estimulo com prednisolona, descrito acima, conduz a uma diminuição dos niveis de linfócitos circulantes em ratos normais (resultados resumidos na Figura 2) . Assim, o estudo do estimulo com prednisolona permite uma avaliação, controlada internamente, da activação hepática e GR sistémica in vivo; e proporciona um ensaio para determinar a capacidade selectiva de qualquer composto antagonista de GR em bloquear respostas hepáticas (uma característica desejável) sem afectar os receptores glucocorticóides sistémicos (um efeito secundário indesejável). 0 RU-38486 é um protótipo de antagonista de GR que está amplamente distribuído pelo corpo após administração oral e que demonstra efeitos numa variedade de tipos de tecidos. Na experiência de estimulo com prednisolona, no rato, o RU-38486 bloqueia completamente o efeito agonista na indução de TAT a uma dose de 30 mpk, por via oral (Tabela I). Na mesma experiência, a deposição induzida por prednisolona de glicogénio hepático também é completamente suprimida. Assim, o RU-38486 tem o perfil desejado de um agente activo, por via oral, para bloquear o receptor glucocorticóide hepático. No entanto, este agente também tem efeitos em compartimentos extra-hepáticos, como indicado pela sua capacidade em bloquear a resposta de linfopenia produzida pela prednisolona nesta mesma experiência. Estes efeitos extra-hepáticos tornam o RU-38486 um candidato improvável para terapêutica a longo prazo. 101

Actividade da Tirosina Aminotransferase 14- O) E 12- c

não tratado pred

Glicogénio Hepático 100 -

não tratado pred

Linfócitos do Plasma 14,-

não tratado pred

Figura 2. Os efeitos de toma dose de 10 pmk de prednisolona em respostas reguladas por glucocorticóide hepático (TAT, glicogénio) e sistémico (níveis de linfócitos) no rato

Foi preparada uma variedade de moléculas conjugadas por ligação de antagonistas de GR a ácidos biliares (ver Figura 1 para estruturas representativas). Estes compostos podem ser avaliados para actividade in vivo e selectividade no figado utilizando os processos de ensaio descritos acima. Os compostos aqui reivindicados são capazes de bloquear os efeitos hepáticos da prednisolona neste modelo de estímulo de rato, sem ter um efeito significativo na actividade sistémica. Por exemplo, o composto do Exemplo 1 provoca bloqueio, praticamente total, dos aumentos induzidos por pred na actividade de TAT e níveis de glicogénio (85% e 111%, respectivamente) com uma pequena variação no número de linfócitos circulantes (só um bloqueio de 35% da supressão induzida por pred), quando doseado oralmente a 100 mpk (Tabela I) . É de prever que este perfil de antagonismo selectivo do fígado seja vantajoso na terapêutica a longo prazo, 102 por exemplo, como seria necessário para o tratamento de distúrbios metabólicos como a diabetes.

Os pormenores específicos da estrutura química necessária para conseguir um agente para libertação oral, selectivo do fígado, para antagonizar o receptor glucocorticóide, não são claros. O Composto do Exemplo 1 tem três componentes principais: um fragmento do tipo antagonista de glucocorticóide, que confere as propriedades bioquímicas desejadas; um fragmento do tipo ácido biliar que auxilia no direccionamento do conjugado para o compartimento hepático; e um fragmento ligante que não deve apenas manter os outros dois componentes ligados, para conservar as suas actividades individuais, mas também contribuir para as propriedades físico-químicas gerais do conjugado. Variações mínimas em qualquer um destes três componentes podem, de um modo imprevisto, conduzir à perda deste perfil farmacológico desejável. Por exemplo, o componente ácido biliar do Composto do Exemplo 1 pode ser trocado do ácido eólico para o ácido taurocólico, produzindo o Composto A (Figura 1). Como esperado, o Composto A retém uma afinidade para o GR semelhante à do Composto 1 (o IC50 face ao GR humano é de 3,6 nM para o Composto 1, 3,0 nM para o Composto A). No entanto, a actividade farmacológica (Tabela I) dos dois compostos é bastante diferente. Ao contrário do Composto 1, este análogo apresenta apenas um efeito modesto para inibir a activação de TAT (inibição de 39% com a mesma dose oral) e não tem praticamente nenhum efeito nem na deposição de glicogénio nem na resposta de linfopenia. Não é selectivo para GR hepático vs. efeitos sistémicos; de facto, tem uma actividade in vivo mínima. Variações simples no fragmento ligante, como demonstrado nos Compostos B e C, também podem conduzir a análogos que não são capazes de bloquear as respostas de glucocorticóide hepático. 103

Isto é verdade, até mesmo no caso mais convencional (como no Composto C) em que as modificações no ligante não resultam numa variação no sitio de ligação no fragmento do antagonista de GR ou no fragmento de ácido biliar. Estas variações modestas produzem um efeito minimo na afinidade das moléculas conjugadas para GR (o IC50 face ao GR humano é de 3,1 nM para o Composto B, 4,3 nM para o Composto C) . Finalmente, uma variação na escolha do antagonista de GR especifico que é alvo utilizando esta estratégia, pode ter um efeito significativo nas propriedades da molécula conjugada. 0 RU-43044 é um antagonista de GR esteroidal com uma potência (IC50 = 2,2 nM face ao GR humano) muito semelhante à do RU-38486 (IC50 = 1,1 nM) . 0 RU-43044 pode estar ligado a ácido eólico de um modo análogo ao descrito anteriormente, para dar o Composto D. 0 Composto D liga-se ao GR com uma potência semelhante à do Composto 1 (IC50 = 5,2 nM, vs 3,6 nM para o Composto 1); mas é inactivo in vivo e demonstra nenhuma selectividade no modelo de estimulo com prednisolona no rato. Como demonstram os exemplos acima, os pormenores estruturais que conduzem a um composto com a farmacologia selectiva de figado desejada não são facilmente discerniveis e previsíveis.

Seria previsível que o bloqueio sistémico de GR provocado, por exemplo, pelo tratamento com RU-38486, induzisse uma resposta compensatória mediada pelo eixo hipotálamo-pituitária-supra-renal (HPA). 0 estimulo hipotalâmico despoletado por um glucocorticóide sistémico suprimido conduz à secreção da hormona adrenocorticotrófica (ACTH) pela glândula pituitária. A ACTH actua na glândula supra-renal para estimular a produção de glucocorticóides endógenos, como o cortisol (no homem) ou a corticosterona (em roedores). Na prática, uma dose oral de RU-38486 produz aumentos nos niveis circulantes de ACTH e 104 corticosterona em murganhos normais (ver Figura 3) . Uma dose semelhante do composto do Exemplo 1 não consegue estimular o eixo HPA, como evidenciado por uma ausência de variação num destes parâmetros. Este resultado confirma o resultado da experiência de estimulo com prednisolona no rato, que o Composto 1 demonstra farmacologia selectiva de figado. Também proporciona uma evidência adicional que sugere que o Composto 1 pode ser capaz de diminuir a glucose através de bloqueio de GR hepático sem produzir efeitos secundários resultantes da activação de HPA. Assim, análogos como o Composto 1 podem ter um perfil de eficácia e segurança melhorado para o tratamento de doenças metabólicas como a diabetes e obesidade.

Resposta da corticosterona a antagonistas de glucocorticóides 350 -

não tratado RU-38486 Composto 1

Resposta de ACTH a antagonistas de glucocorticóides 250 -

não tratado RU-38486 Composto 1

Figura 3. Efeito dos antagonistas de glucocorticóides no eixo hipotálamo-pituitária-supra-renal (HPA). O RU-38486 e o Composto 1 são administrados numa dose de 100 mpk a murganhos normais; as respostas são medidas após 1 h. 105 Métodos para Estudos de Ligação de Radioligando com Glucocorticóide Humano e Receptor de Progesterona no Citosol

A 3(H)-dexametasona (TRK 645) aqui referida, a seguir, como 3(H)-dex foi adquirida da Pharmacia Amersham, Uppsala, Suiça. A dexametasona aqui referida, a seguir, como dex foi adquirida da SIGMA. As placas de polipropileno de 96 poços Costar (3794 ou 3365) foram adquiridas da Life Technologies AB, Táby, Suiça. 0 filtro GF/B (1450-521), cassete de filtro (1450-104), cera de cintilação MeltiLex (1450-441), saco para amostra (1450-42), Microbeta™ 1450-PLUS e Microsealer 1495-021 fora todos adquiridos da Wallac Oy, Turkku, Finlândia. Os receptores de glucocorticóides humano foram extraídos de células Sf9 infectadas com um vector de transferência de baculovirus recombinante contendo os genes hGR clonados. O baculovirus recombinante foi criado utilizando o sistema de expressão BAC-TO-BAC (Life Technologies) de acordo com as instruções do fabricante. As sequências de codificação de hGR foram clonadas num vector de transferência de baculovirus por técnicas correntes. Os baculovirus recombinantes que expressam hGR foram amplificados e utilizados para infectar células Sf9. As células infectadas foram recolhidas 48 h após a infecção. Os receptores foram extraídos do sedimento celular com um tampão fosfato (EDTA a 1 mM, KP04 a 20 mM (pH 8), Glicerol a 8,6%, MTG a 12 mM, Na2Mo04 a 20 mM) . A concentração de hGR no extracto foi determinada como ligação específica de 3(H)-dex com o ensaio G25, como descrito em J. Steroid Biochem. Molec. Biol. 50, N° 5/6, 313-318, 1994 e estimada como sendo, aproximadamente, de 25 nM. O extracto foi dividido em alíquota e armazenado a -70 °C O ensaio de ligação ao filtro: Foram preparadas séries de diluição dos compostos de ensaio e dexametasona, como 106 referência, a partir de soluções de reserva (dex a 1 mM) a 10 mM em DMSO. Foi adicionado 10 yL das diluições, em duplicado, aos poços. Os extractos celulares foram diluídos 10 vezes em tampão EPMo + MTG (EDTA a 1 mM, HP04 a 20 mM (pH 8), MTG a 6 mM) . O extracto diluído foi adicionado aos poços (110 yL) . As 3(H)-dex foram diluídas até 10-10,8 nM, a partir da solução de reserva, em tampão EPMo + MTG. Foram adicionados, aos poços, 110 pL da 3 (H)-dex diluída. A concentração final de hGR na experiência foi estimada em 1 nM. Todas as preparações foram realizadas à temperatura ambiente (20-25 °C), em gelo, e com tampões temperados a +4 °C. As placas foram incubadas, durante a noite, a +4 °C (15-20 h). A incubação foi parada por filtração através de filtro GF/B no Tomtec Cellharvester. A filtração no Tomtec Cellharvester foi programada como se segue: 1) Preparação antes da filtração com tampão EP (EDTA a 1 mM, HP04 a 20 mM (pH 8)) 2 x (Lavagem/Asp 0,6 seg, Asp 0,5 seg) ; 2) Pré-humedecimento do filtro de GF/B com tampão EP + PEI (tampão EP, Polietilenimina a 0,3%) (Asp 0,8 seg) . 3) Filtração/colheita da placa de incubação de 96 poços 3 x (Lavagem/Asp 0,6 sg, Asp 0,5 sg) . O filtro GF/B foi seco durante, pelo menos, 1 h a 65 °C. Uma cera de cintilação

MeltiLex foi fundida sobre o filtro com o Microsealer. O filtro foi colocado num saco para amostra, o qual, em seguida, foi aparado com tesoura para se ajustar à cassete de filtro. As cassetes foram colocadas na Microbeta e medidos durante 1 min/posição, devolvendo ccpm (contagens correctas por minuto).

Para compostos capazes de deslocalizar a 3(H)-dexametasona do receptor, foi determinado um valor de IC50 (a concentração necessária para inibir em 50% a ligação de 3 (H) -dex) por um modelo logístico não linear de quatro parâmetros; 107 b — ( (bmax

- bmin) /(1+(1/ IC50) S) ) + bminI é a concentração adicionada de inibidor ligante, IC50 é a concentração para o inibidor a metade da ligação máxima e S é um factor de declive.1 Para determinações da concentração de (H)-dex nas soluções, foi realizada contagem de cintilação periódica num Wallac Rackbeta 1214 utilizando a solução de cintilação Supermix™ (Wallac) . 1 Haggblad, J., Carlsson, B., Kivelá, P., Siitari H., (1995)

Biotechniques 18, 146-151. 0 instrumento Microbeta gera o valor de cpm médio/minuto (contagens por minuto) e corrige variações individuais entre os detectores gerando, assim, valores de cpm corrigidos. Constatou-se que a eficácia de contagem entre os detectores diferiu menos que cinco por cento.

Foi utilizado um protocolo semelhante para determinar a afinidade dos compostos da presente invenção para o receptor de progesterona (PR).

Os compostos da presente invenção demonstram afinidade ligante para o receptor glucocorticóide e selectividade para GR relativamente a PR, como indicado a seguir:

Exemplo n° Ligação GR (IC50, μΜ) Ligação PR (IC50, μΜ) 1 0,0036 0,0087 2 0,0028 0,0023 3 0,0020 0,0045 4 0,0033 0,0016 108

Os compostos da presente invenção podem ser avaliados pela sua actividade in vivo utilizando os modelos descritos a seguir. Estes mesmos modelos in vivo também podem ser utilizados para proporcionar uma indicação da capacidade de determinados compostos em bloquear a acção de glucocorticóides selectivamente no figado.

Modelo de Estimulo com Prednisolona no Rato para Avaliação de Antagonistas de Receptor Glucocorticóide Direccionados para o Figado

Ratos Sprague Dawley machos com 150 g, em jejum durante a noite, foram doseados, por via oral, com veiculo RU-486 (30-100 mg/kg) ou com antagonistas do receptor glucocorticóide seleccionados (30-100 mg/kg), 60 minutos antes de um estimulo oral com prednisolona a 10 mg/kg. Após seis horas do estímulo com prednisolona, os ratos foram sacrificados com CO2 e sangrados através de uma perfusão cardíaca para avaliação dos níveis de linfócitos no sangue e fármaco no plasma. São recolhidos pedaços para biopsia do fígado com 7 mm para avaliação dos níveis de tirosina aminotransferase (TAT), glicogénio hepático e antagonista de GR. Também são removidos mais tecido de fígado, gordura recto-peritoneal, músculo esquelético, rim e pele de uma biopsia de orelha para isolamento e avaliação de mRNA. A prednisolona aumenta os niveis de TAT hepático e de glicogénio, e induz linfopenia grave durante o período de estímulo de 6 horas. Em doses de 100 mpk, o RU-486 antagoniza completamente estas respostas hepática e periférica. 109

Os compostos da presente invenção demonstram eficácia in vivo e selectividade hepática no modelo acima, como demonstrado na Tabela 1.

Modelo de Activação de Hipotálamo-Pituitária-Supra-renal (HPA) em Murganho

Murganhos machos CD-I, sem jejum, pesando aproximadamente 25 g, são doseados com veiculo, RU-486 (30-100 mg/kg) ou antagonista de GR (30-100 mg/kg) às 08.00 h quando os níveis de corticosterona são baixos. Após duas horas, os murganhos são sacrificados com CO2, sangrados por perfusão cardíaca e o plasma analisado para os níveis de corticosterona, por espectroscopia de massa, e de hormona adrenocorticotrópica (ACTH) por ELISA. Os cérebros e plasma também são removidos para análise dos níveis de antagonista de GR. Em doses de 100 mpk, o RU-486 aumenta significativamente os níveis de ACTH e corticosterona quando comparado com controlos de veículo. A presente invenção apresenta uma capacidade reduzida para estimular o eixo HPA, como indicado na Figura 3.

Os compostos da presente invenção podem ser utilizados para o tratamento de doenças associadas com um excesso de resposta glucocorticóide hepático. As referidas doenças incluem, mas sem estarem limitadas a, as seguintes: diabetes, obesidade, Síndrome X, hiperglicemia, eliminação inadequada de glucose, hipertensão, hiperinsulinemia, hiperlipidemia ou níveis elevados de glucocorticóides hepáticos.

Para o tratamento de diabetes, Síndrome X ou hiperglicemia, os compostos da presente invenção podem ser utilizados isolados 110 ou em combinação com qualquer agente antidiabético ou anti-hiperglicémico existente. Os agentes que podem ser utilizados como parte da referida terapêutica de combinação incluem, mas sem estarem limitados, insulina, miméticos da insulina, tais como mecasermina ou semelhantes, secretagogos de insulina, tais como nateglinida, exendina, ou semelhantes, sensibilizadores de insulina, tais como pioglitazona, rosiglitazona ou semelhantes, sulfonilureias, tais como glipizida, gliburida ou semelhantes, biguanidas, tais como metformina, fenformina ou semelhantes, metiglinidas, tais como repaglinida ou semelhantes, e inibidores de α-glucosidase, tais como acarbose, miglitol ou semelhantes. Outros agentes semelhantes são conhecidos por um perito na técnica. A capacidade dos compostos da presente invenção para tratar diabetes, Sindrome X ou hiperglicemia, isolados ou em combinação com outro agente, pode ser demonstrada utilizando os modelos e processos descritos aqui ou de acordo com os métodos de Friedman et ai., em J. Biol. Chem. 1997, 272(50), 31475-31481. Outros destes métodos para testar a eficácia dos compostos da presente invenção são conhecidos por um perito na técnica.

Para o tratamento de obesidade, os compostos da presente invenção podem ser utilizados isolados ou em combinação com qualquer agente anti-obesidade existente. Os agentes que podem ser utilizados como parte da referida terapêutica de combinação incluem, mas sem estarem limitados, agentes anoréticos, tais como bromocriptina, dexfenfluramina e semelhantes, inibidores de recaptação de monoamina, tais como sibutramina e semelhantes, simpatomiméticos, tais como fentermina, fendimetrazina e semelhantes, inibidores de absorção de ácidos gordos, tais como orlistat ou semelhantes, e tiromiméticos, tais como triiodotironina ou semelhantes. Outros destes agentes 111 anti-obesidade são conhecidos por um perito na técnica. A capacidade dos compostos da presente invenção para tratar obesidade, isolados ou em combinação com outro agente, pode ser demonstrada de acordo com os modelos e processos descritos por Langley e York, em Am. J. Physiol. 1990, 259 (Reg. Int. Comp. Phys. 28) R539-544, ou por Walker e Romsos, em Am. J. Physiol. 1992, 262 (Endo. Metab. 25) E-110-117. Outros destes métodos para testar a eficácia dos compostos da presente invenção são conhecidos por um perito na técnica.

Para o tratamento de eliminação inadequada de glucose ou niveis elevados de glucocorticóides hepáticos, os compostos da presente invenção podem ser utilizados isolados ou em combinação com qualquer agente existente que efectua a absorção de glucose ou produção de glucose hepática. Os agentes que podem ser utilizados como parte da referida terapêutica de combinação incluem, mas sem estarem limitados a, insulina, miméticos da insulina, tais como mecasermina ou semelhantes, secretagogos da insulina, tais como nateglinida, exendina, ou semelhantes, sensibilizadores de insulina, tais como pioglitazona, rosiglitazona ou semelhantes, sulfonilureias, tais como glipizida, gliburida ou semelhantes, biguanidas, tais como metformina, fenformina ou semelhantes, e metiglinidas, tais como repaglinida ou semelhantes. Outros destes agentes são conhecidos por um perito na técnica. A capacidade dos compostos da presente invenção para tratar eliminação inadequada de glucose ou a resposta a glucocorticóides hepáticos elevados, isolados ou em combinação com outro agente, pode ser demonstrada de acordo com os modelos e processos descritos aqui ou de acordo com os métodos de Terrettaz, Assimacopoulos-Jeannet, e Jeanrenaud, em Endocrinology. 1986, 118: 674-678. Outros destes métodos para 112 testar a eficácia dos compostos da presente invenção são conhecidos por um perito na técnica.

Para o tratamento de hipertensão diabética, os compostos da presente invenção podem ser utilizados isolados ou em combinação com qualquer agente anti-hipertensivo existente. Os agentes que podem ser utilizados como parte da referida terapêutica de combinação incluem, mas sem estarem limitados a, inibidores de ACE, tais como captopril, enanlipril, ou semelhantes, diuréticos, tais como furosemida, hidroclorotiazida, ou semelhantes, bloqueadores β, tais como atenolol, carvedilol, ou semelhantes, e bloqueadores de cálcio, tais como amlodipina, nifedipina, ou semelhantes. Outros destes agentes são conhecidos por um perito na técnica. A capacidade dos compostos da presente invenção para tratar hipertensão diabética, isolados ou em combinação com outro agente, pode ser demonstrada de acordo com os modelos e processos descritos por Velasquez et al., em Hypertension 1997 (5), 1232-1237. Outros destes métodos para testar a eficácia dos compostos da presente invenção são conhecidos por um perito na técnica.

Para o tratamento de hiperinsulinemia, os compostos da presente invenção podem ser utilizados isolados ou em combinação com qualquer agente existente que proporcione os niveis de insulina ou sensibilidade à insulina. Os agentes que podem ser utilizados como parte da referida terapêutica de combinação incluem, mas sem estarem limitados a, insulina, miméticos da insulina, tais como mecasermina ou semelhantes, secretagogos da insulina, tais como nateglinida, exendina, ou semelhantes, e sensibilizadores de insulina, tais como pioglitazona, rosiglitazona ou semelhantes. Outros destes agentes são conhecidos por um perito na técnica. A capacidade dos compostos 113 da presente invenção para tratar hiperinsulinemia, isolados ou em combinação com outro agente, pode ser demonstrada de acordo com os modelos e processos descritos aqui ou de acordo com os métodos de Shulman, et al., em Metabolism 1991, 40(10): 1025-1030; ou de acordo com os processos descritos por Hevener, Reichart, e Olefsky, em Diabetes 2000, 49(12): 2154-2159. Outros destes métodos para testar a eficácia dos compostos da presente invenção são conhecidos por um perito na técnica.

Para o tratamento de hiperlipidemia, os compostos da presente invenção podem ser utilizados isolados ou em combinação com qualquer agente anti-hiperlipidémico existente. Os agentes que podem ser utilizados como parte da referida terapêutica de combinação incluem, mas sem estarem limitados a, niacina, estatinas, tais como lovastatina, simvastatina, ou semelhantes, fibratos, tais como fenofibrato, gemfibrozil, ou semelhantes, e sequestrantes, tais como colestiramina, colestipol, ou semelhantes. Outros destes agentes são conhecidos por um perito na técnica. A capacidade dos compostos da presente invenção para tratar hiperlipidemia, isolados ou em combinação com outro agente, pode ser demonstrada de acordo com os modelos e processos descritos por Olivier, et al., em Atherosclerosis 1988, 74 (1-2), 15-21. Outros destes métodos para testar a eficácia dos compostos da presente invenção são conhecidos por um perito na técnica.

Lisboa, 8 de Fevereiro de 2007 114

Claims (20)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula (I); O

   ou um seu sal farmaceuticamente adequado, em que de -0- ou do grupo A é um membro seleccionado do grupo consistindo -NRa, em que RA é um membro seleccionado consistindo de hidrogénio e alquilo; Ri, R2, R3, R4, R5, R6 e R7 são membros independentemente seleccionados do grupo consistindo de hidrogénio, alquilo-(C1-C6), alcenilo, alcinilo, alcoxilo, hidroxilo, alcoxialquilo, hidroxialquilo e halogéneo; e R8, R9 e Rio são membros independentemente seleccionados do grupo consistindo de hidrogénio, alquilo, alcenilo, alcinilo, alcoxilo, hidroxilo, ciano, halogéneo e -NRBRc, em 1 que Rb e Rc são membros independentemente seleccionados do grupo consistindo de hidrogénio e alquilo.
2. 2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que Ri, R2, R3 e R4 são hidrogénio; e R5 é um membro seleccionado do grupo consistindo de hidrogénio e alquilo.
3. 3. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que Ri, R2, R3, R4, Rs, R9 e Rio são hidrogénio; R5 é um membro seleccionado do grupo consistindo de hidrogénio e alquilo; R6 é OH; e R7 é alcino.
4. ‘4- GD, ou um seu sal farmaceuticamente adequado, em que 4 A é um membro seleccionado do grupo consistindo de -0- e -NRa; Ri, R2, R3, R4, R5, R6 e R7 são membros independentemente seleccionados do grupo consistindo de hidrogénio, alquilo-(Ci-C6), alcenilo, alcinilo, alcoxilo, hidroxilo, alcoxialquilo, hidroxialquilo e halogéneo; Re, R9 e Rio são membros independentemente seleccionados do grupo consistindo de hidrogénio, alquilo, alcenilo, alcinilo, alcoxilo, hidroxilo, ciano, halogéneo e -NRBRc; Ra é um membro seleccionado do grupo consistindo de hidrogénio e alquilo; Rb e Rc são seleccionados do grupo consistindo de hidrogénio e alquilo; e um de PDi e PD2 é um grupo tal que o composto de fórmula (II) é um éster, um fosfato, um fosforiloximetilcarbonato, um carbamato, um éter aciloximetilico ou um éter fosforiloximetílico e o grupo é clivado in vivo; e o outro de PDi e PD2 tem um daqueles significados ou é um átomo de hidrogénio.

   4. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que Ri, R2, R3, R4, Rs, R9 e Rio são hidrogénio; R5 é um membro seleccionado do grupo consistindo de hidrogénio e alquilo; R6 é OH; e R7 é -C=c-CH3. 2
5. 5. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que Ri, R2, R3, R4, Rs, R9 e Rio são hidrogénio; Rs é um membro seleccionado do grupo consistindo de hidrogénio e alquilo; Rê é OH; R7 é -C=c-CH3; e A é -NCH3.
6. 6. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o composto de fórmula (I) é seleccionado do grupo consistindo de ácido (3β, 5β, 7α, 12α) - 7, 12-di-hidroxi-3-{2 - [ {4 - [17β-1ιίάηοχί- 3-oxo-17a-prop-l-inilestra-4,9-dien-l^- il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico; ácido (3β, 5β, 7α, 12α) - 7, 12-di-hidroxi-3-{2 - [ {4 - [17β-1ιίάηοχί-3-oxo-17a-prop-l-inilestra-4,9-dien-l^-il]-2-fluorofenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico; e ácido (3 β,5β,7α,12α)-7,12-di-hidroxi-3-{2-[{4-[17β-1ιίάηοχί-16a-metil-3-oxo-17a-prop-l-inilestra-4,9-άίβη-11β-il]fenil}(metil)amino)etoxi}colan-24-óico. 3
7. 7 . Composto de acordo com a reivindicação 1, em que R-6 é OH; R7 é -C=c-CH3; e A é -0-.
8. 8. Composto de acordo com a reivindicação 7, em que o composto de fórmula (I) é ácido (3 β,7α,12α)-7,12-di-hidroxi-3-(2-(4-(17p-hidroxi-3-oxo-17a-prop-l-inilestra-4,9-dien-l^-il)-2-metilfenoxi)etoxi)colan-24-óico.
9. 9. Composto de fórmula (II),
10. 10. Composto de acordo com a reivindicação 9, em que um de PDi e PD2 é seleccionado do grupo consistindo em (2-amonioetoxi)carbonilo, (3-amoniopropoxi)carbonilo, fosforilo, fosforiloximetilo, 4-amoniobutanoilo, 5-amoniopentanoilo e 4-amoniobutanoiloximetilo; e o outro de PDi e PD2 tem um destes significados ou é um átomo de hidrogénio. 5
11. 11. Composto de acordo com a Reivindicação 10, em que Ri, R2, R3, R4, Re, R9 e Rio são hidrogénio; R5 é um membro seleccionado do grupo consistindo de hidrogénio e alquilo; e R6 é OH; e R7 é -C=c-CH3.
12. 12. Composto de acordo com a Reivindicação 11, em que o composto de fórmula (II) é seleccionado do grupo consistindo de ácido (3β, 5β, 7α, 12α)-7-[(2-amonioetoxi)carboniloxi]-12- hidroxi-3 - {2 - [ { 4 - [ (17β-ϊι1άηοχί-3-οχο-17α-ρηορ-1-ίηί1θ3^3- 4.9- άίβη-11β-ί1]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico; ácido (3β, 5β,7α,12α)-7-[(3-amoniopropoxi)carboniloxi]-12- hidroxi-3-{2-[{4-[(17β-hidroxi-3-oxo-17α-prop-l-inilestra- 4.9- dien-l^-il]fenil](metil)amino]etoxi}colan-24-óico; Ácido (3β,5β,7α,12α)-7-fosforiloxi-12-hidroxi-3-{2 —[{4 — [ 17β-ϊιίάηοχί-3-οχο-17α-ρ^ρ-1-ίηί1β8^3-4, 9-άίβη-11β-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico; Ácido (3β,5β,7α,12α)-7-fosforiloximetoxi-12-hidroxi-3-{2-[ { 4 - [ 17β-ϊιϊά^χϊ-3-οχο-17α-ρ^ρ-1-ϊηϊΐΘ3^3-4, 9-άϊβη-11β-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico; 6 ácido (3β,5β,7α,12α)-7-[(4-amoniobutanoiloxi)-12-hidroxi-3-{2 - [ {4 - [ (17β-ΜάΓθχί-3-οχο-17α-ρΓορ-1-ίηί1θ3ΐ:Γ3-4, 9-dien-Ιΐβ-iljfenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico; ácido (3 β,5β,7α,12α)-7-[(5-amoniopentanoiloxi)-12-hidroxi- 3—{2— [ {4— [ (17β-ϊιίάΓθχί-3-οχο-17α-ρΓορ-1-ίηί1θ3^3-4, 9-dien-11β-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico; e ácido (3 β,5β,7α,12α)-7-[ (4-amoniobutanoiloximetoxi)-12- hidroxi-3-{2 - [ {4 - [ (17β-ϊιίάΓθχί-3-οχο-17α-ρΓορ-1-ίηί1θ3^3-4,9-dien-l^-il]fenil}(metil)amino]etoxi}colan-24-óico.
13. 13. Composto como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 12 para utilização como um medicamento
14. • 14 . Composto como reivindicado na reivindicação 13 para utilização como um medicamento para o tratamento de um estado seleccionado de diabetes, obesidade ou Síndrome X, num mamífero.
15. LO \—1 Composto como reivindicado na reivindicação 13 para utilização como um medicamento para o tratamento de um estado seleccionado de hiperglicemia, eliminação inadequada de glucose, hiperinsulinemia, hiperlipidemia, hipertensão diabética ou niveis elevados de glucocorticóides hepáticos, num mamífero.
16. 16. Composto como reivindicado na reivindicação 13 para utilização como um medicamento para o tratamento de um estado que beneficia da antagonização selectiva dos efeitos dos receptores glucocorticóides no fígado, num mamífero. 7
17. 17. Utilização de um composto como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 12 para a preparação de um medicamento para o tratamento de um estado seleccionado de diabetes, obesidade ou Sindrome X, num mamífero.
18. 18. Utilização de um composto como reivindicação em qualquer uma das reivindicações 1 a 12 para a preparação de um medicamento para o tratamento de um estado seleccionado de hiperglicemia, eliminação inadequada de glucose, hiperinsulinemia, hiperlipidemia, hipertensão diabética ou níveis elevados de glucocorticóides hepáticos, num mamífero.
19. 19. Utilização de um composto como reivindicação em qualquer uma das reivindicações 1 a 12 para a preparação de um medicamento para o tratamento de um estado que beneficia da antagonização selectiva dos efeitos dos receptores glucocorticóides no fígado, num mamífero.
20. 20. Composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, em combinação com um veículo farmaceuticamente adequado. Lisboa, 8 de Fevereiro de 2007