ES2614931T3 - Inhibidores de la piruvato cinasa y métodos de tratamiento de enfermedad - Google Patents

Abstract

Un compuesto seleccionado de**Fórmula** y sales de los mismos, para su uso en el tratamiento de cáncer, en el que el cáncer está seleccionado de cánceres de mama, próstata, pulmón, bronquial, colon, rectal, riñón, renal, piel, pélvico, pancreático, oral, ovario, cabeza, cuello, tiroides, paratiroides, estómago, gastrointestinal, del intestino (por ejemplo, delgado y grueso), cerebro, esófago, hígado, vesícula biliar, pleura, vías biliares intrahepáticas, cuello uterino, testicular, uréter, anal, laringe, faringe, hueso, articular, vulvar, ojo y de la vejiga urinaria, linfoma no Hodgkin, linfoma de Hodgkin, melanomas, carcinomas, carcinomas de células basales, neuroblastomas, mielomas múltiples, leucemias linfocíticas crónicas, cánceres de tejido blando (por ejemplo, corazón), tumores del estroma gastrointestinal, leucemias mieloides crónicas, mesoteliomas malignos, retinoblastomas y sarcomas de tejido blando.

Description

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Inhibidores de la piruvato cinasa y metodos de tratamiento de enfermedad Antecedentes de la invencion

La invencion descrita en el presente documento caracteriza inhibidores de la piruvato cinasa M2 (PKM2) para su uso en el tratamiento de enfermedades relacionadas con la funcion de la piruvato cinasa, que incluyen cancer. En el presente documento tambien se desvela un metodo de identificacion de inhibidores de PKM2.

Las celulas cancerosas se basan principalmente en la glicolisis para generar energla celular, mientras que la mayorla de las celulas "normales" en tejidos adultos utilizan la respiracion aerobia. Esta diferencia fundamental en el metabolismo celular entre celulas cancerosas y celulas normales, llamado el efecto de Warburg, ha sido explotado para fines de diagnostico, pero todavla no ha sido explotado para beneficio terapeutico.

La piruvato cinasa (PK) es una enzima metabolica que convierte fosfoenolpiruvato en piruvato durante la glicolisis. Existen cuatro isoformas de PK en los mamlferos: las isoformas L y R se expresan en hlgado y globulos rojos, la isoforma M1 se expresa en la mayorla de los tejidos adultos, y la isoforma M2 es una variante de corte y empalme de M1 expresada durante el desarrollo embrionario. Todas las celulas tumorales expresan exclusivamente la isoforma M2 embrionaria. Una diferencia muy conocida entre las isoformas M1 y M2 de PK es que M2 es una enzima de baja actividad que se basa en la activacion alosterica por el producto intermedio glicolltico aguas arriba, fructosa-1,6-bisfosfato (FBP), mientras que M1 es una enzima constitutivamente activa.

Todas las celulas tumorales expresan exclusivamente la isoforma M2 embrionaria de piruvato cinasa, sugiriendo PKM2 como una posible diana para la terapia del cancer. PKM2 tambien se expresa en tejido adiposo y linfocitos T activados. Asl, la inhibicion de PKM2 puede ser eficaz en el tratamiento de, por ejemplo, obesidad, diabetes, afecciones autoinmunitarias y enfermedades dependientes de la proliferacion, por ejemplo, hiperplasia prostatica benigna (HPB). Los actuales inhibidores de la piruvato cinasa no son selectivos, haciendo diflcil tratar la enfermedad relacionada con la funcion de la piruvato cinasa.

Los documentos WO 02/072077 A2, US 6 265 588 B1 y Lee W.-H. (Consolidation effect of phenylalanine administration on antitumor activity of a 5 fluorouracil; Kagoshima Daikagu Igaku Zasshi - Medical Journal of the Kagoshima University, U Igakubu, Kagoshima, 1985, 37(3-4): 285-308) desvelan usos de inhibidores de la piruvato cinasa M2 que son diferentes de los compuestos para su uso de la presente invencion.

Eswaran J. et al. (Crystal structures and inhibitor identification for PTPN5, PTPRR and PTPN7: A family of human MAPK-specific protein D4 tyrosine phosphatases; BIOCHEMICAL JOURNAL, 2006; 395(3):483-491) estudian compuestos para la inhibicion de la actividad de fosfatasa por las tirosina fosfatasas PTN5, PTPRR y PTPN7. Se propone que PTNP5 se expresa en exceso en algunos pacientes con leucemia mieloblastica aguda.

Kao R.Y.T. et al. (A small-molecule inhibitor of the ribonucleolytic activity of human angiogenin that possesses antitumor activity; Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 2002; 99(15):10066-71) desvelan inhibidores de ANG en el tratamiento del cancer e informan de la actividad de algunos inhibidores de ANG especlficos contra canceres de prostata y de colon.

El documento WO 03/073999 A2 desvela metodos de modulacion de Pin-1 y ademas desvela que Pin-1 se expresa en exceso en muestras de cancer humano. El documento desvela ademas compuestos que se establece que son compuestos que modulan Pin-1.

El documento US 2004/048283 A1 desvela derivados de 1 -fenil-pirrol y metodos de cribado de moduladores de la transcripcion bacteriana.

El documento WO 2006/122546 A1 desvela la identificacion de compuestos que pueden inhibir la interaccion entre las protelnas PKA y AKAP. Hay una necesidad en la materia de novedosos tratamientos de enfermedad, que incluyen, por ejemplo, cancer, diabetes, obesidad, afecciones autoinmunitarias, enfermedades dependientes de la proliferacion (por ejemplo, HPB), y otras enfermedades relacionadas con la funcion de la piruvato cinasa (por ejemplo, PKm2).

Sumario de la invencion

La descripcion en el presente documento caracteriza inhibidores de la piruvato cinasa M2 para su uso en el tratamiento de enfermedades relacionadas con la funcion de la piruvato cinasa. Estos inhibidores pueden ser utiles para el tratamiento de enfermedades relacionadas con la funcion de la piruvato cinasa, que incluyen, por ejemplo, cancer, diabetes, obesidad, enfermedades autoinmunitarias e HPB. La descripcion en el presente documento

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tambien desvela un metodo de identificacion de inhibidores de PKM2. La presente invention se refiere a un compuesto seleccionado de

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y sales de los mismos,

para su uso en el tratamiento de cancer,

en el que el cancer esta seleccionado de canceres de mama, prostata, pulmon, bronquial, colon, rectal, rinon, renal, piel, pelvico, pancreatico, oral, ovario, cabeza, cuello, tiroides, paratiroides, estomago, gastrointestinal, del intestino (por ejemplo, delgado y grueso), cerebro, esofago, hlgado, veslcula biliar, pleura, vlas biliares intrahepaticas, cuello uterino, testicular, ureter, anal, laringe, faringe, hueso, articular, vulvar, ojo y de la vejiga urinaria, linfoma no Hodgkin, linfoma de Hodgkin, melanomas, carcinomas, carcinomas de celulas basales, neuroblastomas, mielomas multiples, leucemias linfoclticas cronicas, canceres de tejido blando (por ejemplo, corazon), tumores del estroma gastrointestinal, leucemias mieloides cronicas, mesoteliomas malignos, retinoblastomas y sarcomas de tejido blando.

Se desvela un metodo de inhibition de piruvato cinasa M2 en un sujeto en necesidad del mismo administrando al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de formula I:

imagen2

en la que cada uno de R R

1A 1B 1C 1D 1E 1A 1B

R'C, R'D, R'E, X'A, X'B, X1C y X1D se selecciona independientemente de H, haluro, nitro, alquilo Cm, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, OR1K, OC(O)R1L NR1MR1N, NHC(O)R10, NHC(S)R1P NHC(O)OR1Q, NHC(S)0R1R, NHC(O)NHR1S, NHC(S)NHR1T, NHC(O)SR1U, NHC(S)SR1V, NHS(O)2R1W, C(O)OR1x, C(O)NHR1Y, (CH2)1-4OH, C(O)R1Z CH2R1AA, SO3H, SO2R1BB S(O)R1CC SR1DD, SO2NHR1EE y S(CH2)mC(O)OH; y cada uno de

r1K r1L r1M r1N r1O r1P r1Q r1R r1S r1T r1U r1V r1W r1X r1Y r1Z r'AA r1BB R1CC r1DD y R1EE se

selecciona independientemente de H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, heterociclilo C2-6, arilo C6-12, alcarilo C7-14, alq C3-10-heterociclilo y heteroarilo C1-4, y sales de los mismos. En una realization particular, X1A y X1B son ambos metilo, X y X son ambos H, y cada uno de R , R , R , R y R se selecciona independientemente de H, haluro, nitro, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, OR1K, OC(O)R1L, NR1MR1N, NHC(0)R10, NHC(S)R1P, NHC(O)OR1Q, NHC(S)OR1R, NHC(O)NHR1S, NHC(S)NHR1T NHC(O)SR1U, NHC(S)SR1V, NHS(O)2R1W, C(O)OR1X, C(O)NHR1Y, (CH2)1-4OH, C(O)R1Z, CH2R1AA, SO3H, SO2R1bB, S(O)R1cc, SR1DD, SO2NHR1EE y S(CH2)1-4C(O)OH: y cada uno de R1K R1L, R1M, R1N, R'°, R1P, R1Q, R1R, R1S R1T, R1^, R1V, R1W, R1X, R1Y, R1Z, R1AA, R1BB, R1cC, R1dD y

R1EE se selecciona independientemente de H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, heterociclilo C2-6, arilo C6- alcarilo C7-14, alq C3-10-heterociclilo y heteroarilo C1-4, y sales de los mismos.

12,

Este metodo puede usarse para tratar, por ejemplo, diabetes (por ejemplo, tipo I o tipo II), obesidad, enfermedades autoinmunitarias o enfermedades proliferativas (por ejemplo, HPB).

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Se desvela una composicion farmaceutica que contiene un compuesto de formula I. Se desvela una composicion farmaceutica que incluye un compuesto de formula II:

imagen3

2A X2B, X2C, X2D X2E, X2F y X2G se selecciona independientemente de H, alquilo C1-8, heterociclilo C2-6, arilo C6-12, alcarilo C7-

2G

en la que cada uno de X'

alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, heterociclilo C2-6, arilo C6-12, alcarilo C7-14, alq C3-10-heterociclilo y heteroalquilo C1-8; y cada uno de Y , Y y Y se selecciona independientemente de N y CH; y Y se selecciona independientemente de N+ y C; y cada uno de R2A, R2B, R2C, R2D, R2E, R2F, R2G y R2H se selecciona independientemente de H, haluro, nitro, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, OR2K, OC(O)R2L, NR2MR2N, NHC(O)R2°, NHC(S)R2P NHC(O)OR2Q, NHC(S)OR2R, NHC(°)NHR2S, NHC(S)NHR2T, NHC(O)SR2U, NHC(S)SR2V, NHS(°)2R2W, C(°)°R2x, C(°)NHR2Y,

2AA 2BB 2CC 2DD 2EE

NHC(°)NHR ™d2Z CH2R:

R2°, R2P

selecciona independientemente de H, alquilo C1-4; Cj-14, alq C3-10-heterociclilo y heteroarilo C1-4.

(CH2)1-4°H, C(O)R'

4 ... r2n

r2K r2L r2M

S°3H, S°2R2

r2Q r2r, r2S,

R^'

, SR2

r2V r2W

S°2NHR-

r2X, r2Y,

v S(CH2)1-4C(°)°H; y cada uno de

R, R2aa, R2BB, R2CC, R2DD y R2EE se

x2B, x2C, r2C

alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, heterociclilo C2-6, arilo C6-12, alcarilo , y sales de los mismos. En una realizacion particular, cada uno de X2A R2D, R2G y R2H es H; y cada uno de Y2A, Y2C y Y2D es N; y Y2B es N+; y cada uno de X2D, X2E, X2F y X2G

se selecciona independientemente de H

2B 2E 2F

alquilo C1-8, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4 y heteroalquilo C1-8; y cada uno de se selecciona independientemente de H, haluro, nitro, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4,

2M 2N 2° 2P 2Q

R2A, R2B, R2E y R2

°R2k, °C(°)R2L, NR2MR2N NHC(°)R2°, NHC(S)R2P, NHC(°)°R2Q, NHC(S)°R2R, NHC(°)NHR2 NHC(°)SR2U, NHC(S)SR2V, NHS(°)2R2W, C(°)°R2X, C(°)NHR2Y, (CH2)1-4°H, C(O)R2Z, CH2R2AA,

S(O)R, SR2DD, S°2NHR2ee y S(CH2)1-4C(O)OH; y cada uno de R2K, R2L, R2m, R2n, R2°, R2P, R2Q, . . .

R U, R2V, R2W, R2x, R2Y, R2Z, R aa, R2B , R2 C, R2DD y R2EE se selecciona independientemente de H y alquilo C1-4, y

sales de los mismos.

NHC(S)NHR, S°3H, S°2R2BB, r2R, r2S, r2T,

Se desvela un kit que incluye: (i) una composicion farmaceutica que contiene un compuesto de formula II y (ii) instrucciones para administrar el compuesto para el tratamiento de, por ejemplo, cancer, obesidad, diabetes, enfermedades autoinmunitarias o enfermedades proliferativas (por ejemplo, HPB).

Se desvela un metodo de inhibition de piruvato cinasa M2 en un sujeto en necesidad del mismo administrando al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de formula II. El metodo puede usarse para el tratamiento de cancer (por ejemplo, canceres de mama, prostata, pulmon, bronquial, colon, rectal, rinon, renal, piel, pelvico, pancreatico, oral, ovario, cabeza, cuello, tiroides, paratiroides, estomago, gastrointestinal, del intestino (por ejemplo, delgado y grueso), cerebro, esofago, hlgado, veslcula biliar, pleura, vlas biliares intrahepaticas, cuello uterino, testicular, ureter, anal, laringe, faringe, hueso, articular, vulvar, ojo y de la vejiga urinaria, linfoma no Hodgkin, linfoma de Hodgkin, melanomas, carcinomas, carcinomas de celulas basales, neuroblastomas, mielomas multiples, leucemias, leucemias mieloides agudas, leucemias linfoclticas cronicas, canceres de tejido blando (por ejemplo, corazon), tumores del estroma gastrointestinal, leucemias mieloides cronicas, leucemias linfoclticas agudas, mesoteliomas malignos, retinoblastomas, tumores agudos o sarcomas de tejido blando). El metodo tambien puede usarse para tratar, por ejemplo, diabetes (por ejemplo, tipo I o tipo II), obesidad, enfermedades autoinmunitarias o enfermedades proliferativas (por ejemplo, HPB).

Se desvela una composicion farmaceutica que incluye un compuesto de formula III:

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3A 3R 3g 3u

en la que cada uno de X y X se selecciona independientemente de S, O, NH y CH2; y cada uno de X y X se selecciona independientemente de H, alquilo C1-8, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4 y heteroalquilo C1-8; y cada uno de Y3A y Y3B se selecciona independientemente de O, CH, N y S; y X31 esta vaclo cuando Y3A es S u O, X3J esta vaclo cuando Y3B es S u O, de otro modo cada uno de X31 y X3J se selecciona independientemente de H, alquilo C1-8, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4 y heteroalquilo C1-8; y cada uno de Y3C y Y3D se selecciona independientemente de CH y N; y cada uno de R3A, R3B, R3C, R3D, R3E, R3F, R3G, R3H, R31, R3J, X3C, X3D, X3E y X3F se selecciona

independientemente de H, haluro, nitro, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, OR3K, OC(O)R3L, NR3MR3N,

NHC(O)R3°. NHC(S)R3P, NHC(O)OR3Q, NHC(S)OR3R, NHC(O)NHR3S, NHC(S)NHR3T, NHqO)SR3U, NHC(S)SR3V NHS(O)2R3W, C(O)OR3X, C(O)NHR3Yl (CH2K4OH, C(O)R3Z, CH2R3AA, SO3H, SO2R3BB, S(O)R3cc, SR3Dd, SO2NHR3eE y S(CH2)1-4C(O)OH; y cada uno de R3K, R3L, R3M, R3N, R3O, R3P, R3Q, R3R, R3S, R3T, R3U, R3V, R3W, R3X, R3Y, R3Z, R3AA, R , R , R y R se selecciona independientemente de H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, heterociclilo C2-6, arilo C6-12, alcarilo C7-14, alq C3-10-heterociclilo y heteroarilo C1-4, y sales de los mismos. En una realizacion particular, cada uno de X _y X se selecciona independientemente de S y O; y cada uno de X , X , X y X3J es H; y cada uno de Y3A, Y3B, Y3C y Y3D se selecciona independientemente de CH y N; y cada uno de R3A, R3B,

R3C, R3D, R3E,

R3F, R

3 g

R3H, R3I, R3J, X3C, X3D

alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4 NHC(S)OR3R, NHC(O)NHR3s, NHC(S)NHR3T, NHC(O)SR' (CH2)1-4OH, C(O)R3Z, CH2R_3aa, S.O3H1_SO2_R3Bb1 _S(O)R3CC

, X3E y X3F se selecciona independientemente de H OR3k OC(O)R3L nR3MR3N ——3O —"3P

3U

NHC(O)R3O, NHC(S)R

NHC(S)SR3V, NHS(O)2R

3W

SR3DD, SO2NHR

r3W r3X R3Y r3z R'

3EE

R3K, R3L, R3M,

R3N, R3O, R3P, R3Q, R3R, R

r3t, r3u, r3V

_y S(CH2)1-4C(O)OH; y

Z 3AA 3BB 3CC 3

selecciona independientemente de H y alquilo C1-4, y sales de los mismos.

haluro, nitro, , NHC(O)OR3Q, C(O)OR3X, C(O)NHR3Y, cada uno de

R3DD y R3EE se

Se desvela un kit que incluye: (i) una composicion farmaceutica que contiene un compuesto de formula III y (ii) instrucciones para administrar el compuesto para el tratamiento de, por ejemplo, cancer, obesidad, diabetes, enfermedades autoinmunitarias o enfermedades proliferativas (por ejemplo, HPB).

Se desvela un metodo de inhibition de piruvato cinasa M2 en un sujeto en necesidad del mismo administrando al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de formula III. El metodo puede usarse para el tratamiento de cancer (por ejemplo, canceres de mama, prostata, pulmon, bronquial, colon, rectal, rinon, renal, piel, pelvico, pancreatico, oral, ovario, cabeza, cuello, tiroides, paratiroides, estomago, gastrointestinal, del intestino (por ejemplo, delgado y grueso), cerebro, esofago, hlgado, veslcula biliar, pleura, vlas biliares intrahepaticas, cuello uterino, testicular, ureter, anal, laringe, faringe, hueso, articular, vulvar, ojo y de la vejiga urinaria, linfoma no Hodgkin, linfoma de Hodgkin, melanomas, carcinomas, carcinomas de celulas basales, neuroblastomas, mielomas multiples, leucemias, leucemias mieloides agudas, leucemias linfoclticas cronicas, canceres de tejido blando (por ejemplo, corazon), tumores del estroma gastrointestinal, leucemias mieloides cronicas, leucemias linfoclticas agudas, mesoteliomas malignos, retinoblastomas, tumores agudos o sarcomas de tejido blando). El metodo tambien puede usarse para tratar, por ejemplo, diabetes (por ejemplo, tipo I o tipo II), obesidad, enfermedades autoinmunitarias o enfermedades proliferativas (por ejemplo, HPB).

Se desvela una composicion farmaceutica que incluye un compuesto de formula IV:

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en la que cada uno de X4A, X y X se selecciona independientemente de S, O, NH, CH2, y dos atomos de hidrogeno; y cada uno de X4G y X4H se selecciona independientemente de H, alquilo C1-8, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4 y heteroalquilo C1-8; y cada uno de X4D y X4E se selecciona independientemente de O, CH2 NH y S; y X4F se selecciona independientemente de CH y N; y cada uno de R4A, R4B, R4C, R4D, R4E, R4F, R4G R4H y R4I se selecciona independientemente de H, haluro, nitro, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, OR4k, oC(O)R4L, NR4MR4N, NHC(O)R40, NHC(S)R4P, NHC(O)OR4Q, NHC(S)OR4R, NHC(O)NHR4S, NHC(S)NHR4T, NHC(O)SR4U, NHC(S)SR4V NHS(O)2R4W, C(O)OR4X, C(O)NHR4Y, (CH2)1-4OH, C(O)R4Z, CH2R4AA, SO3H, SO2R4BB, S(0)R4cc, SR4Dd, S02NHR4eE y S(CH2)1-4C(O)OH; y cada uno de R4K R4L, R4M, R4N, R40, R4P, R4Q, R4R, R4S, R4T, R4U, R4V, R4W, R4X, R4Y, R4Z, R4AA,

r4b , r4cc, r4dd y r4ee se selecciona independientemente de H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4,

heterociclilo C2-6, realizacion

arilo C6-12, alcarilo C7-

4A

14, alq C3-10-heterociclilo y heteroarilo C1-4, y sales de los mismos. En una se selecciona independientemente de S, O, y dos atomos de

X4B y X4C

particular, cada uno de X , , , ,

hidrogeno; y X4G se selecciona independientemente de H, alquilo C1-8 y heteroalquilo C1-8; y X4H es H; y cada uno de X4D y X4E se selecciona independientemente de O, CH2, NH y S; y X4F se selecciona independientemente de CH y N; y cada uno de R4A, R4B, R4C, R4D, R4E, R4F, R4G, R4H y R41 se selecciona independientemente de H, haluro, nitro, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, OR4K, OC(O)R4L, NR4MR4N, NHC(O)R40, NHC(S)R4P, NHC(O)OR4Q,

NHC(S)OR4R, NHC(0)NHR44^a NHC^NHR^ NHC(O)SR4U, NHC(S)SR4V, NHS(O)2R4W, C(O)OR4X, qO^HR^,

vS(°°4)Wr

(CH2)1-4OH, C(O)R4

.................. r4P,

R4M, R4N, R4O

CH2R4AA, SO3H, SO2R

r4Q r4R r4S r4T r4U r4V

SO2NHR4EE y S(CH2)1- 4X o4Y o4Z r-)4AA r4Bb

R4X, R4Y, R4Z, R'

-4C(O)OH; y R4CC, R4DD

independientemente de H y alquilo C1-4, y sales de los mismos.

cada uno de R4K, R4 y R4EE se selecciona

Se desvela un kit que incluye: (i) una composicion farmaceutica que contiene un compuesto de formula IV y (ii) instrucciones para administrar el compuesto para el tratamiento de, por ejemplo, cancer, obesidad, diabetes, enfermedades autoinmunitarias o enfermedades proliferativas (por ejemplo, HPB).

Se desvela un metodo de inhibition de piruvato cinasa M2 en un sujeto en necesidad del mismo administrando al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de formula IV. El metodo puede usarse para el tratamiento de cancer (por ejemplo, canceres de mama, prostata, pulmon, bronquial, colon, rectal, rinon, renal, piel, pelvico, pancreatico, oral, ovario, cabeza, cuello, tiroides, paratiroides, estomago, gastrointestinal, del intestino (por ejemplo, delgado y grueso), cerebro, esofago, hlgado, veslcula biliar, pleura, vlas biliares intrahepaticas, cuello uterino, testicular, ureter, anal, laringe, faringe, hueso, articular, vulvar, ojo y de la vejiga urinaria, linfoma no Hodgkin, linfoma de Hodgkin, melanomas, carcinomas, carcinomas de celulas basales, neuroblastomas, mielomas multiples, leucemias, leucemias mieloides agudas, leucemias linfoclticas cronicas, canceres de tejido blando (por ejemplo, corazon), tumores del estroma gastrointestinal, leucemias mieloides cronicas, leucemias linfoclticas agudas, mesoteliomas malignos, retinoblastomas, tumores agudos o sarcomas de tejido blando). El metodo tambien puede usarse para tratar, por ejemplo, diabetes (por ejemplo, tipo I o tipo II), obesidad, enfermedades autoinmunitarias o enfermedades proliferativas (por ejemplo, HPB).

Se desvela una composicion farmaceutica que incluye un compuesto de formula V:

imagen6

C2-4 y heteroalquilo C1-8; y cada uno de X5D y X5E se selecciona independientemente de S, NH, O, y CH2; y X5F se selecciona independientemente de O, NH, CH2, y S; y X5G se selecciona independientemente de CH y N; y cada uno

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nitro, alquilo C1-4,

-,5R

de R5A, R5B, R5C, R5D, R5E, R5F, R5G R5H, R51 y R5J se selecciona independientemente de H, haluro, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, OR5K, OC(O)R5L, NR5MR5N, NHC(0)R50, NHC(S)R5P, NHC(0)0R5Q, NHC(S)0R5

NHC(0)NHR5S, NHC(S)NHR5T, NHC(O)SR5U, NHC(S)SR5V, NHS(O)2R5W, C(O)OR5X, C(O)NHR5Y, (CH231-4OH, C(0)R5Z CH2R5AA, SO3H, SO2R5BB, S(O)R5CC, SR5DD, SO2NHR5EE y S(CH2)1-4C(0)0H; y cada uno de R5k, R5l, R5M, R5n, R50, R5P, R5q, R5R, R5S, R5T, R5U, R5V, R5W, R5X, R5Y, R5z, R5AA, R5bB, R5CC, R5DD y R5EE se selecciona

independientemente de H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, heterociclilo C2-6, arilo C6-12, alcarilo C7-14, alq C3- 10-heterociclilo y heteroalquilo C1-4, y sales de los mismos. En una realizacion particular, cada uno de X5A, X5B y X5C es H; y cada uno de X5D y X5E se selecciona independientemente de S y O; y X5F se selecciona independientemente de O, NH, CH2, y S; y X5G se selecciona independientemente de CH y N; y cada uno de R5A, R5B, R5C, R5D, R5E, R5F; r5g r5h, r5i y R5J se selecciona independientemente de H, haluro, nitro, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4 OR5k, 0C(0)R5L, NR5MR5N, NHC(0)R50, NHC(S)R5P, NHC(0)0R5Q, NHC(S)0R5R, NHC(0)NHR5S, NHC(S)NHR5T NHC(0)SR5U, NHC(S)SR5V, NHS(0)2R5W, C(0)0R5X, C(0)NHR5Y, (CH2)1-40H C(0)R5Z, CHR5AA, SO3H, S02R5BB S(0)R5Cc, SR5DD, S02NHR5ee y S(CH2_)1-4C(0)0H; y cada uno de R5K, R5L, R5m, R5N, R50, R5P, R5Q, R5R, R5S, R5T

R5u, R5V, R5W, R5x, R5Y, R5Z, R5aa, R5bB, R5Cc, R5DD y R5EE se selecciona independientemente de H y alquilo C1-4, y sales de los mismos.

Se desvela un kit que incluye: (i) una composicion farmaceutica que contiene un compuesto de formula V y (ii) instrucciones para administrar el compuesto para el tratamiento de, por ejemplo, cancer, obesidad, diabetes, enfermedades autoinmunitarias o enfermedades proliferativas (por ejemplo, HPB).

Se desvela un metodo de inhibition de piruvato cinasa M2 en un sujeto en necesidad del mismo administrando al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de formula V. El metodo puede usarse para el tratamiento de cancer (por ejemplo, canceres de mama, prostata, pulmon, bronquial, colon, rectal, rinon, renal, piel, pelvico, pancreatico, oral, ovario, cabeza, cuello, tiroides, paratiroides, estomago, gastrointestinal, del intestino (por ejemplo, delgado y grueso), cerebro, esofago, hlgado, veslcula biliar, pleura, vlas biliares intrahepaticas, cuello uterino, testicular, ureter, anal, laringe, faringe, hueso, articular, vulvar, ojo y de la vejiga urinaria, linfoma no Hodgkin, linfoma de Hodgkin, melanomas, carcinomas, carcinomas de celulas basales, neuroblastomas, mielomas multiples, leucemias, leucemias mieloides agudas, leucemias linfoclticas cronicas, canceres de tejido blando (por ejemplo, corazon), tumores del estroma gastrointestinal, leucemias mieloides cronicas, leucemias linfoclticas agudas, mesoteliomas malignos, retinoblastomas, tumores agudos o sarcomas de tejido blando). El metodo tambien puede usarse para tratar, por ejemplo, diabetes (por ejemplo, tipo I o tipo II), obesidad, enfermedades autoinmunitarias o enfermedades proliferativas (por ejemplo, HPB).

Se desvela una composicion farmaceutica que incluye un compuesto de formula VI:

imagen7

en la que X se selecciona independientemente de S. independientemente de H, haluro, nitro, alquilo C1-4, NHC(0)R60, NHC(S)R6P, NHC(0)0R6Q, NHC(S)0R6R, NHS(0)2R6W, C(0)0R6X, C(0)NHR y S(CH2)1-4C(0)0H; y cada uno de R6 6BB 6CC 6DD 6EE se selecciona

alcarilo C7-14

6B

R6C y R6D

0R6K, 0C(0)R6L, NR6MR6N

se selecciona

6U

(CH2)1-40H, C(0)R6

K r6L r6M r6N r60

NHC(S)SR

6V

NH y O; y cada uno de R6A, R alquenilo C2-4, alquinilo C2 1HC(0)NHR6S, NHC(S)NHR61, NHC(0)SR6

”, CH2R6AA, SO3H, S02R6BB, S(0)R6CC, SR6DD, S02NHR6EE

r6P r6Q r6R r6S r6T r6U r6V r6W r6X r6Y r6Z r6AA

independientemente de H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, alq C3-10-heterociclilo y heteroarilo C1-4, y sales de los mismos. En una

R6BB, R6CC, R6DD y R6

heterociclilo C2-6, arilo C6-12, ........... . ,

realizacion particular, X6A se selecciona independientemente de S y O; y cada uno de R6C y R6D es H; y cada uno de r6A y r6B se selecciona independientemente de H, haluro, nitro, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, 0R6K, 0C(0)R6L, NR6MR6N, NHC(0)R60, NHC(S)R6P, NHC(0)0R6Q, NHC(S)0R6R, NHC(0)NHR6S, NHC(S)NHR6T, NHC(0)SR6U, NHC(S)SR6V, NHS(0)2R6W, C(0)0R6X, C(0)NHR6Y, (CH2)1-40H, C(0)R6Z, CH2R6AA, SO3H, S02R6BB, S(0)R6Cc, SR6DD, S02NHR6ee y S(CH2)1-4C(0)0H; y cada uno de R6K, R6L, R6M, R6n, R60, R6P, R6Q, R6R, R6S, R6T,

r6u, r6v, r6w, r6x, r6y, r6z, r6aa, r6bB, r6Cc, r6DD y r6EE se selecciona independientemente de H y alquilo C1-4, y sales de los mismos.

Se desvela un kit que incluye: (i) una composicion farmaceutica que contiene un compuesto de formula VI y (ii) instrucciones para administrar el compuesto para el tratamiento de, por ejemplo, cancer, obesidad, diabetes, enfermedades autoinmunitarias o enfermedades proliferativas (por ejemplo, HPB).

Se desvela un metodo de inhibicion de piruvato cinasa M2 en un sujeto en necesidad del mismo administrando al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de formula VI. El metodo puede usarse para el tratamiento de cancer (por ejemplo, canceres de mama, prostata, pulmon, bronquial, colon, rectal, rinon, renal, piel, pelvico, pancreatico, oral, ovario, cabeza, cuello, tiroides, paratiroides, estomago, gastrointestinal, del intestino (por ejemplo, delgado y

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grueso), cerebro, esofago, hlgado, veslcuia biliar, pleura, vlas biliares intrahepaticas, cuello uterino, testicular, ureter, anal, laringe, faringe, hueso, articular, vulvar, ojo y de la vejiga urinaria, linfoma no Hodgkin, linfoma de Hodgkin, melanomas, carcinomas, carcinomas de celulas basales, neuroblastomas, mielomas multiples, leucemias, leucemias mieloides agudas, leucemias linfoclticas cronicas, canceres de tejido blando (por ejemplo, corazon), tumores del estroma gastrointestinal, leucemias mieloides cronicas, leucemias linfoclticas agudas, mesoteliomas malignos, retinoblastomas, tumores agudos o sarcomas de tejido blando). El metodo tambien puede usarse para tratar, por ejemplo, diabetes (por ejemplo, tipo I o tipo II), obesidad, enfermedades autoinmunitarias o enfermedades proliferativas (por ejemplo, HPB).

Se desvela una composicion farmaceutica que incluye un compuesto de formula VII:

imagen8

en la que cada uno de X7A y X‘“ se independientemente de S, nH, CH2 y independientemente de H, haluro, nitro NHC(O)R70, NHC(S)R7P,

NHS(0)2R7W, C(0)0R7X,

x7B

NHC(0)0R C(0)NHR’”

7Q

7Y

x7C

7F

se selecciona se selecciona

,7L NR7MR7N

selecciona independientemente de S, NH y 0; y X7'

0; y cada uno de R7A, R7B, R7C, R7D, R7E y alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4 0R7K, 0C(0)R' NHC(S)0R7R, NHC(0)NHR7S, NHC(S)NHR7T, NHC|0)SR7, NHC(S)SR7V,

, (CH2)i-40H, C(0)R7Z, CH2R7AA, S03HL S02R7BB, S(0)R7cC, SR7DD, S02NHR7EE y S(CH2)i-4C(0)0H; y cada uno de R7K, R7L, R7M, R7N, R70, R7P, R7Q, R7R, R7s, R7T, R7u, R7V, R7W, R7X, R7Y, R7Z, R7A,

7BB 7CC 7DD 7EE

R , R , R y R se selecciona independientemente de H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, heterociclilo C2-6, arilo C6-12, alcarilo C7-14, alq C3-10-heterociclilo y heteroarilo C1-4, y sales de los mismos. En una

endientemente de S

7C

NH y 0; y X7C se selecciona R7D y R7E se selecciona independientemente

R7

realizacion particular, cada uno de X7A y X7B se selecciona indei independientemente de S, NH, CH2 y 0; y cada uno de R7A, R7 de H, haluro nitro, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, 0R7K, 0C(0)R7L, NR7MR7N, NHC(0)R70, NHC(S)R7P,

NHC(0)0R7Q, NHC(S)0R7R, NHC(0)NHR7S, NHC(S)NHR7T NHC(0)SR7U, NHC(S)SR7V, NHS(0)2R7W, C(0)0R7X, C(0)NHR7Y, (CH2)1-40H, C(0)R7Z, CH2R7AA, S03H, S02R7bB, S(0)R7CC, SR7DD, S02NHR7EE v S(CH2)1-4C(0)0H; y cada uno de R7K, R7L, R7M, R7n, R70, R7P, R7Q, R7R, R7S, R7T, R7u, R7V, R7W, R7X, R7Y, R7Z, R7aa, R7BB, R7cC, R7DD y

R7EE se selecciona independientemente de H y alquilo C1-4; y R7F se selecciona independientemente de 0C(0)R7F , NHC(0)R7FF NHC(S)R7FF NHC(0)0R7FF, NHC(S)0R7FF, NHC(0)NHR7FF, NHC(S)NHR7FF, NHC(0)SR7FF,

NHC(S)SR7FF, NHS(0)2R7FF, C(0)0R7FF, C(0)NHR7FF, C(0)R7ff, S02R7FF, S(0)R7FF y S02NHR7FF, donde R7FF esta seleccionado de H y alquilo C1-4, y sales de los mismos.

Se desvela ademas un kit que incluye: (i) una composicion farmaceutica que contiene un compuesto de formula VII y (ii) instrucciones para administrar el compuesto para el tratamiento de, por ejemplo, cancer, obesidad, diabetes, enfermedades autoinmunitarias o enfermedades proliferativas (por ejemplo, HPB).

Se desvela ademas un metodo de inhibicion de piruvato cinasa M2 en un sujeto en necesidad del mismo administrando al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de formula VII. El metodo puede usarse para el tratamiento de cancer (por ejemplo, canceres de mama, prostata, pulmon, bronquial, colon, rectal, rinon, renal, piel, pelvico, pancreatico, oral, ovario, cabeza, cuello, tiroides, paratiroides, estomago, gastrointestinal, del intestino (por ejemplo, delgado y grueso), cerebro, esofago, hlgado, veslcula biliar, pleura, vlas biliares intrahepaticas, cuello uterino, testicular, ureter, anal, laringe, faringe, hueso, articular, vulvar, ojo y de la vejiga urinaria, linfoma no Hodgkin, linfoma de Hodgkin, melanomas, carcinomas, carcinomas de celulas basales, neuroblastomas, mielomas multiples, leucemias, leucemias mieloides agudas, leucemias linfoclticas cronicas, canceres de tejido blando (por ejemplo, corazon), tumores del estroma gastrointestinal, leucemias mieloides cronicas, leucemias linfoclticas agudas, mesoteliomas malignos, retinoblastomas, tumores agudos o sarcomas de tejido blando). El metodo tambien puede usarse para tratar, por ejemplo, diabetes (por ejemplo, tipo I o tipo II), obesidad, enfermedades autoinmunitarias o enfermedades proliferativas (por ejemplo, HPB).

Se desvela una composicion farmaceutica que incluye un compuesto de formula VIII:

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en la que X8C se selecciona independientemente de NH, CH=CH o N=CH; y cada uno de X8A, X8B y X8D se selecciona independientemente de CH y N; y cada uno de X8E, X8F y X8G se selecciona independientemente de S, NH, CH2 y O; y cada uno de R8A, R8B, R8C, R8D, R8E y R8F se selecciona independientemente de H, alquilo C1-4,

alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, heterociclilo C2-6, arilo C6-12, alcarilo C7-14, alq C3-10-heterociclilo y heteroalquilo C1-4, y sales de los mismos. En una realizacion particular, X8C se selecciona independientemente de NH, CH=CH o N=CH; y cada uno de X , X y X se selecciona independientemente de CH y N; y cada uno de X y X se selecciona independientemente de S y O; X 8G es CH2; y cada uno de R8A, R8B, R8C, R8D, R8E y R8F se selecciona independientemente de H y alquilo C1-4, y sales de los mismos.

Se desvela un kit que incluye: (i) una composicion farmaceutica que contiene un compuesto de formula VIII y (ii) instrucciones para administrar el compuesto para el tratamiento de, por ejemplo, cancer, obesidad, diabetes, enfermedades autoinmunitarias o enfermedades proliferativas (por ejemplo, HPB).

Se desvela un metodo de inhibition de piruvato cinasa M2 en un sujeto en necesidad del mismo administrando al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de formula VIII. El metodo puede usarse para el tratamiento de cancer (por ejemplo, canceres de mama, prostata, pulmon, bronquial, colon, rectal, rinon, renal, piel, pelvico, pancreatico, oral, ovario, cabeza, cuello, tiroides, paratiroides, estomago, gastrointestinal, del intestino (por ejemplo, delgado y grueso), cerebro, esofago, hlgado, veslcula biliar, pleura, vlas biliares intrahepaticas, cuello uterino, testicular, ureter, anal, laringe, faringe, hueso, articular, vulvar, ojo y de la vejiga urinaria, linfoma no Hodgkin, linfoma de Hodgkin, melanomas, carcinomas, carcinomas de celulas basales, neuroblastomas, mielomas multiples, leucemias, leucemias mieloides agudas, leucemias linfoclticas cronicas, canceres de tejido blando (por ejemplo, corazon), tumores del estroma gastrointestinal, leucemias mieloides cronicas, leucemias linfoclticas agudas, mesoteliomas malignos, retinoblastomas, tumores agudos o sarcomas de tejido blando). El metodo tambien puede usarse para tratar, por ejemplo, diabetes (por ejemplo, tipo I o tipo II), obesidad, enfermedades autoinmunitarias o enfermedades proliferativas (por ejemplo, HPB).

Se desvela un metodo de identification de inhibidores de la actividad de la piruvato cinasa. Este metodo incluye combinar piruvato cinasa y fosfoenolpiruvato en una solution, activar dicha piruvato cinasa anadiendo fructosa-1,6- bisfosfato (FBP) a la solucion, poner en contacto la solucion con una molecula de interes, cuantificar la cantidad de un sustrato presente en la solucion, y determinar si la molecula inhibe o no la actividad de la piruvato cinasa. La piruvato cinasa puede ser, por ejemplo, la isoforma M1 o M2. La solucion puede ademas ponerse en contacto con lactato deshidrogenasa. El sustrato cuantificado en la solucion puede ser, por ejemplo, ATP o NADH. La cuantificacion del sustrato puede completarse usando, por ejemplo, absorbancia, fluorescencia, dispersion Raman, fosforescencia, luminiscencia, actividad de luciferasa o radiactividad. El metodo puede incluir ademas la etapa adicional de comparar la inhibicion de la actividad de las isoformas M1 y M2 de la piruvato cinasa.

Tambien se desvela un metodo de tratamiento de cancer en un sujeto en necesidad del mismo administrando una cantidad eficaz de un inhibidor que es selectivo para la isoforma m2 de la piruvato cinasa. El metodo puede usarse para el tratamiento de cancer (por ejemplo, canceres de mama, prostata, pulmon, bronquial, colon, rectal, rinon, renal, piel, pelvico, pancreatico, oral, ovario, cabeza, cuello, tiroides, paratiroides, estomago, gastrointestinal, del intestino (por ejemplo, delgado y grueso), cerebro, esofago, hlgado, veslcula biliar, pleura, vlas biliares intrahepaticas, cuello uterino, testicular, ureter, anal, laringe, faringe, hueso, articular, vulvar, ojo y de la vejiga urinaria, linfoma no Hodgkin, linfoma de Hodgkin, melanomas, carcinomas, carcinomas de celulas basales, neuroblastomas, mielomas multiples, leucemias, leucemias mieloides agudas, leucemias linfoclticas cronicas, canceres de tejido blando (por ejemplo, corazon), tumores del estroma gastrointestinal, leucemias mieloides cronicas, leucemias linfoclticas agudas, mesoteliomas malignos, retinoblastomas, tumores agudos o sarcomas de tejido blando). Tambien se desvelan metodos de tratamiento de, por ejemplo, diabetes (por ejemplo, tipo I o tipo II), obesidad, enfermedades autoinmunitarias o enfermedades proliferativas (por ejemplo, HPB) en un sujeto en necesidad de los mismos administrando una cantidad eficaz de un inhibidor que es selectivo para la isoforma M2 de la piruvato cinasa.

Por "cantidad eficaz" se indica la cantidad de una composicion farmaceutica desvelada en el presente documento requerida para tratar o prevenir una enfermedad tal como, por ejemplo, cancer, diabetes, obesidad, enfermedades autoinmunitarias y enfermedades dependientes de la proliferation, tales como HPB. La cantidad eficaz de una composicion farmaceutica desvelada en el presente documento usada para tratamiento terapeutico o profilactico varla dependiendo del modo de administration, la edad, peso corporal y salud general del sujeto. Por ultimo lugar, el

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medico tratante decidira la cantidad apropiada y pauta de dosificacion. Una cantidad tal se denomina la "cantidad eficaz".

Por "selectivo" se indica inhibicion al menos 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 6 veces o 10 veces mayor de M2 que de M1 en las condiciones expuestas en el Ejemplo 4.

Por "composicion farmaceutica" se indica una composicion que contiene un compuesto desvelado en el presente documento (es decir, un compuesto de cualquiera de las formulas (I)-(VI 11)) o un compuesto para el uso de la invencion, formulado con un excipiente farmaceuticamente aceptable, y fabricado o vendido en conformidad con las reglas de una agencia reguladora gubernamental como parte de una pauta terapeutica para el tratamiento o la prevencion de enfermedad en un mamlfero. Las composiciones farmaceuticas pueden formularse, por ejemplo, para administracion por via oral en forma de dosificacion unitaria (por ejemplo, un comprimido, capsula, comprimido oblongo, capsula de gel o jarabe), para administracion topica (por ejemplo, como una crema, gel, locion o pomada), para administracion intravenosa (por ejemplo, como una solucion esteril libre de embolos en partlculas y en un sistema de disolvente adecuado para uso intravenoso), o para cualquier otra formulacion descrita en el presente documento.

Compuestos utiles en las composiciones farmaceuticas desveladas en el presente documento pueden incluir aquellos descritos en el presente documento en cualquiera de sus formas farmaceuticamente aceptables, que incluyen isomeros tales como diaestereomeros y enantiomeros, sales, solvatos, profarmacos y polimorfos, de los mismos, ademas de mezclas racemicas de los compuestos descritos en el presente documento.

Por "profarmaco" se indica una molecula que, tras el metabolismo en el cuerpo de un sujeto, se convierte qulmicamente en otra molecula que sirve a un fin terapeutico u otro farmaceutico (por ejemplo, una molecula de farmaco que contiene un acido carboxllico contiene un enlace amida o ester en su forma de profarmaco, que se escinde tras el metabolismo).

Por "tratar" se indica administrar una composicion farmaceutica para fines profilacticos y/o terapeuticos. Por "prevenir una enfermedad" se refiere al tratamiento profilactico de un sujeto que todavla no esta enfermo, pero que es susceptible a, o de otro modo esta en riesgo de, una enfermedad particular. Por "tratar una enfermedad" o usar para tratamiento "terapeutico" se refiere a administrar el tratamiento a un sujeto que ya padece una enfermedad para mejorar o estabilizar la afeccion del sujeto.

Por "coeficiente de Tanimoto" se indica una medida de la similitud qulmica entre dos compuestos que indican la fraccion de subestructuras comunes mantenidas entre ellos. Se desvelan once compuestos cabeza de serie y sus homologos estructurales para su uso en el tratamiento de diversas enfermedades relacionadas con la funcion de la piruvato cinasa, tales como, por ejemplo, cancer. Un compuesto se identifica como un homologo estructural de un compuesto cabeza de serie si tiene un numero significativo de subestructuras en comun con ese compuesto cabeza de serie, de forma que el coeficiente de Tanimoto que mide la similitud estructural entre aquellos dos compuestos tiene un valor de 0,85 o mayor (en una escala de 0 a 1). El coeficiente de Tanimoto entre dos compuestos se determina calculando la relacion del numero de subestructuras mantenidas en comun por los dos compuestos con respecto al numero de subestructuras totales presentes en al menos uno de los dos compuestos. Los coeficientes de Tanimoto tambien pueden calcularse usando huellas digitales binarias entramadas en las que cada huella digital codifica la composicion de subestructura de un compuesto y el coeficiente de Tanimoto es la relacion del numero de bits establecido en "1" en ambas huellas digitales de los compuestos dividido entre el numero de bits establecido en "1" en cualquier huella digital del compuesto usando metodos conocidos en la tecnica (veanse, por ejemplo, Patterson et al., J. Med. Chem. 39:3049-59, 1996; Matter et al., J. Med. Chem. 40:1219-29, 1997; Potter et al., J. Med. Chem. 41:478-88, 1998; Taylor et al., J. Chem. Inf. Comp. Sci. 35:59-67, 1995; y Delaney et al., Mol. Diversity 1:217-22, 1996). En la presente invencion, se usa un metodo tal que usa huellas digitales de Daylight para calcular coeficientes de Tanimoto y as! identificar compuestos presentes en bases de datos qulmicas publicamente disponible (por ejemplo, PubChem y Chembank) que son homologos estructurales de un compuesto cabeza de serie (vease, por ejemplo, Martin et al., J. Med. Chem. 45:4350-8, 2002; Daylight Chemical Information Systems Inc., Irvine, CA). Un compuesto cabeza de serie y compuesto estructuralmente homologo que tiene un coeficiente de Tanimoto de 0,85 o mayor como se calcula usando huellas digitales de Daylight es conocido por tener una probabilidad del 30 % o mayor (por ejemplo, 50 % o 75 %) de tener la misma actividad biologica, dependiendo en parte de la potencia del compuesto cabeza de serie, por ejemplo, que tiene una CI50 inferior a 10 micromolar o que tiene una CI50 entre 10 micromolar y 100 micromolar, y en parte de la actividad biologica en consideration, como se conoce en la tecnica (veanse, por ejemplo, Martin et al., J. Med. Chem. 45:4350-8, 2002; y Klekota et al., J. Chem. Info. Model. 45:1824-36, 2005).

En las descripciones genericas de los compuestos descritos en el presente documento, el numero de atomos de un tipo particular en un grupo sustituyente se da generalmente como un intervalo, por ejemplo, un grupo alquilo que contiene de 1 a 4 atomos de carbono o alquilo C1-4. Referencia a un intervalo tal pretende incluir referencias especlficas a grupos que tienen cada uno del numero entero de atomos dentro del intervalo especificado. Por ejemplo, un grupo alquilo de 1 a 4 atomos de carbono incluye cada uno de C1, C2, C3 y C4. Un heteroarilo C1-4, por

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ejemplo, incluye de 1 a 3 atomos de carbono, ademas de uno o mas heteroatomos. Otros numeros de atomos y otros tipos de atomos pueden indicarse de una manera similar.

Como se usa en el presente documento, los terminos "alquilo" y el prefijo "alq-" son incluyentes de tanto grupos de cadena lineal y cadena ramificada como de grupos clclicos, es decir, cicloalquilo. Grupos clclicos a modo de ejemplo incluyen grupos ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo. Un grupo "alquilo C1-4" tiene de 1 a 4 atomos de carbono. Un grupo "alquilo C1-8" tiene de 1 a 8 atomos de carbono. Los grupos alquilo, por ejemplo, un grupo alquilo C1-4 o un grupo alquilo C1-8, pueden estar sustituidos o sin sustituir. Sustituyentes a modo de ejemplo incluyen grupos alcoxi, ariloxi, sulfhidrilo, alquiltio, ariltio, haluro, hidroxilo, fluoroalquilo, perfluoroalquilo, amino, aminoalquilo, amino disustituido, amino cuaternario, hidroxialquilo, carboxialquilo y carboxilo. Alquilos C1-4 y alquilos C1-8 incluyen metilo; etilo; n-propilo; isopropilo; ciclopropilo; ciclopropilmetilo; ciclopropiletilo; n-butilo; iso-butilo; sec-butilo; terc- butilo; y ciclobutilo.

Por "alquenilo" se indica un grupo hidrocarburo ramificado o sin ramificar que contiene uno o mas dobles enlaces. Un grupo "alquenilo C2-4" tiene de 2 a 4 atomos de carbono. Alquenilo, por ejemplo, un grupo alquenilo C2-4, puede estar sustituido o sin sustituir. Sustituyentes a modo de ejemplo incluyen grupos alcoxi, ariloxi, sulfhidrilo, alquiltio, ariltio, haluro, hidroxilo, fluoroalquilo, perfluoroalquilo, amino, aminoalquilo, amino disustituido, amino cuaternario, hidroxialquilo, carboxialquilo y carboxilo. Alquenilos C2-4 incluyen vinilo; alilo; 2-ciclopropil-1-etenilo; 1-propenilo; 1- butenilo; 2-butenilo; 3-butenilo; 2-metil-1-propenilo; y 2-metil-2-propenilo.

Por "alquinilo" se indica un grupo de hidrocarburo ramificado o sin ramificar que contiene uno o mas triples enlaces. Un grupo "alquinilo C2-4" tiene de 2 a 4 atomos de carbono. Alquinilo, por ejemplo, un grupo alquinilo C2-4, puede estar sustituido o sin sustituir. Sustituyentes a modo de ejemplo incluyen grupos alcoxi, ariloxi, sulfhidrilo, alquiltio, ariltio, haluro, hidroxi, fluoroalquilo, perfluoroalquilo, amino, aminoalquilo, amino disustituido, amino cuaternario, hidroxialquilo, carboxialquilo y carboxilo. Alquinilos C2-4 incluyen etinilo, 1-propinilo, 2-propinilo, 1-butinilo, 2-butinilo y 3-butinilo.

Por "heterociclilo C2.6" se indica un anillo heteroclclico estable monoclclico de 5 a 7 miembros o biclclico de 7 a 14 miembros que esta saturado, parcialmente insaturado, o insaturado (aromatico), y que consiste en 2 a 6 atomos de carbono y 1, 2, 3 o 4 heteroatomos independientemente seleccionados del grupo que consiste en N, O y S y que incluye cualquier grupo biclclico en el que cualquiera de los anillos heteroclclicos anteriormente definidos esta condensado con un anillo de benceno. El grupo heterociclilo puede estar sustituido o sin sustituir. Sustituyentes a modo de ejemplo incluyen grupos alcoxi, ariloxi, sulfhidrilo, alquiltio, ariltio, haluro, hidroxi, fluoroalquilo, perfluoroalquilo, amino, aminoalquilo, amino disustituido, amino cuaternario, hidroxialquilo, carboxialquilo y carboxilo. Los heteroatomos de nitrogeno y azufre pueden estar opcionalmente oxidados. El anillo heteroclclico puede estar unido covalentemente mediante cualquier heteroatomo o atomo de carbono que produzca una estructura estable, por ejemplo, un anillo de imidazolinilo puede estar unido en cualquiera de las posiciones de atomo de carbono del anillo o en el atomo de nitrogeno. Un atomo de nitrogeno en el heterociclo puede estar opcionalmente cuaternizado. Preferentemente, cuando el numero total de atomos de S y O en el heterociclo supera 1, entonces estos heteroatomos no son adyacente entre si. Heterociclos incluyen 1H-indazol, 2-pirrolidonilo, 2H,6H-1,5,2-ditiazinilo, 2H-pirrolilo, 3H-indolilo, 4-piperidonilo, 4aH-carbazol, 4H-quinolizinilo, 6H-1,2,5-tiadiazinilo, acridinilo, azocinilo, bencimidazolilo, benzofuranilo, benzotiofuranilo, benzotiofenilo, benzoxazolilo, benztiazolilo, benztriazolilo, benztetrazolilo, bencisoxazolilo, bencisotiazolilo, bencimidazalonilo, carbazolilo, 4aH-carbazolilo, b-carbolinilo, cromanilo, cromenilo, cinnolinilo, decahidroquinolinilo, 2H,6H-1,5,2-ditiazinilo, dihidrofuro[2,3-b]tetrahidrofurano, furanilo, furazanilo, imidazolidinilo, imidazolinilo, imidazolilo, 1 H-indazolilo, indolenilo, indolinilo, indolizinilo, indolilo, isobenzofuranilo, isocromanilo, isoindazolilo, isoindolinilo, isoindolilo, isoquinolinilo, isotiazolilo, isoxazolilo, morfolinilo, naftiridinilo, octahidroisoquinolinilo, oxadiazolilo, 1,2,3-oxadiazolilo, 1,2,4-oxadiazolilo, 1,2,5-oxadiazolilo,

1.3.4- oxadiazolilo, oxazolidinilo, oxazolilo, oxazolidinilperimidinilo, fenantridinilo, fenantrolinilo, fenarsazinilo, fenazinilo, fenotiazinilo, fenoxatiinilo, fenoxazinilo, ftalazinilo, piperazinilo, piperidinilo, pteridinilo, piperidonilo, 4- piperidonilo, pteridinilo, purinilo, piranilo, pirazinilo, pirazolidinilo, pirazolinilo, pirazolilo, piridazinilo, piridooxazol, piridoimidazol, piridotiazol, piridinilo, piridilo, pirimidinilo, pirrolidinilo, pirrolinilo, pirrolilo, quinazolinilo, quinolinilo, 4H- quinolizinilo, quinoxalinilo, quinuclidinilo, carbolinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidroisoquinolinilo, tetrahidroquinolinilo, 6H-1,2,5-tiadiazinilo, 1,2,3-tiadiazolilo, 1,2,4-tiadiazolilo, 1,2,5-tiadiazolilo, 1,3,4-tiadiazolilo, tiantrenilo, tiazolilo, tienilo, tienotiazolilo, tienooxazolilo, tienoimidazolilo, tiofenilo, triazinilo, 1,2,3-triazolilo, 1,2,4-triazolilo, 1,2,5-triazolilo,

1.3.4- triazolilo, xantenilo. Heterociclos de 5 a 10 miembros preferidos incluyen piridinilo, pirimidinilo, triazinilo, furanilo, tienilo, tiazolilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tetrazolilo, benzofuranilo, benzotiofuranilo, indolilo, bencimidazolilo, 1 H-indazolilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, benzotriazolilo, bencisoxazolilo, oxindolilo, benzoxazolinilo, quinolinilo e isoquinolinilo. Heterociclos de 5 a 6 miembros preferidos incluyen piridinilo, pirimidinilo, triazinilo, furanilo, tienilo, tiazolilo, pirrolilo, piperazinilo, piperidinilo, pirazolilo, imidazolilo, oxazolilo, isoxazolilo y tetrazolilo.

Por "arilo" se indica un grupo aromatico que tiene un sistema de anillos que comprende atomos de carbono con electrones n conjugados (por ejemplo, fenilo). El grupo "arilo C6-12" tiene de 6 a 12 atomos de carbono. Grupos arilo, por ejemplo, grupos arilo C6-12, pueden incluir opcionalmente anillos monoclclicos, biclclicos o triclclicos, en los que cada anillo tiene deseablemente cinco o seis miembros. El grupo arilo, por ejemplo, grupos arilo C6-12, puede estar

sustituido o sin sustituir. Sustituyentes a modo de ejemplo incluyen grupos alquilo, hidroxi, alcoxi, ariloxi, sulfhidrilo, alquiltio, ariltio, haluro, fluoroalquilo, carboxilo, hidroxialquilo, carboxialquilo, amino, aminoalquilo, amino monosustituido, amino disustituido y amino cuaternario.

Por "alcarilo C7-14" se indica un alquilo sustituido con un grupo arilo (por ejemplo, bencilo, fenetilo o 3,45 diclorofenetilo) que tiene de 7 a 14 atomos de carbono.

Por "alq C3-io-heterociclilo" se indica un grupo heteroclclico sustituido con alquilo que tiene de 7 a 14 atomos de carbono, ademas de uno o mas heteroatomos, independientemente seleccionados del grupo que consiste en N, O, S y P (por ejemplo, 3-furanilmetilo, 2-furanilmetilo, 3-tetrahidrofuranilmetilo o 2-tetrahidrofuranilmetilo).

Por "heteroalquilo C1-4" se indica un grupo alquilo, alquenilo o alquinilo ramificado o sin ramificar que tiene de 1 a 4 10 atomos de carbono, ademas de 1, 2 o 3 heteroatomos independientemente seleccionados del grupo que consiste en N, O, S y P. Por "heteroalquilo C1-8" se indica un grupo alquilo, alquenilo o alquinilo ramificado o sin ramificar que tiene de 1 a 8 atomos de carbono, ademas de 1, 2 o 3 heteroatomos independientemente seleccionados del grupo que consiste en N, O, S y P. Heteroalquilos incluyen aminas terciarias, aminas secundarias, eteres, tioeteres, amidas, tioamidas, carbamatos, tiocarbamatos, hidrazonas, iminas, fosfodiesteres, fosforamidatos, sulfonamidas y 15 disulfuros. Un heteroalquilo puede incluir opcionalmente anillos monoclclicos, biclclicos o triclclicos, en los que cada anillo tiene deseablemente tres a seis miembros. El grupo heteroalquilo puede estar sustituido o sin sustituir. Sustituyentes a modo de ejemplo incluyen grupos alcoxi, ariloxi, sulfhidrilo, sulfato, alquiltio, ariltio, haluro, hidroxilo, fluoroalquilo, perfluoroalquilo, amino, aminoalquilo, amino disustituido, amino cuaternario, hidroxialquilo, hidroxialquilo, carboxialquilo y carboxilo.

20 Por "acilo" se indica un resto qulmico con la formula R-C(O)-, en la que R esta seleccionado de alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, heterociclilo C2-6, arilo C6-12, alcarilo C7-14, alq C3-1o-heterociclilo o heteroalquilo C1-4.

Por "haluro" se indica bromo, cloro, yodo o fluor.

Por "fluoroalquilo" se indica un grupo alquilo que esta sustituido con fluor.

Por "perfluoroalquilo" se indica un grupo alquilo que consiste en solo atomos de carbon y de fluor.

25 Por "carboxialquilo" se indica un resto qulmico con la formula -(R)-COOH, en la que R esta seleccionado de alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, heterociclilo C2-6, arilo C6-12, alcarilo C7-14, alq C3.10-heterociclilo o heteroarilo C1-4.

Por "hidroxialquilo" se indica un resto qulmico con la formula -(R)-OH, en la que R esta seleccionado de alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, heterociclilo C2-6, arilo C6-12, alcarilo C7-14, alq C3-1o-heterociclilo o heteroalquilo C1-4.

Por "alcoxi" se indica un sustituyente qulmico de formula -OR, en la que R esta seleccionado de alquilo C1-4, 30 alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, heterociclilo C2-6, arilo C6-12, alcarilo C7-14, alq C3-1o-heterociclilo o heteroalquilo C1-4.

Por "ariloxi" se indica un sustituyente qulmico de formula -OR, en la que R es un grupo arilo C6-12.

Por "alquiltio" se indica un sustituyente qulmico de formula -SR, en la que R esta seleccionado de alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, heterociclilo C2-6, arilo C6-12, alcarilo C7-14, alq C3-10-heterociclilo o heteroalquilo C1-4.

Por "ariltio" se indica un sustituyente qulmico de formula -SR, en la que R es un grupo arilo C6-12.

35 Por "amino cuaternario" se indica un sustituyente qulmico de formula -(R)-N(R')(R")(R"')+, en la que R, R', R" y R'" son cada uno independientemente un grupo alquilo, alquenilo, alquinilo o arilo. R puede ser un grupo alquilo que une el atomo de nitrogeno del amino cuaternario, como sustituyente, a otro resto. El atomo de nitrogeno, N, se une covalentemente a cuatro atomos de carbono de grupos alquilo y/o arilo, produciendo una carga positiva en el atomo de nitrogeno.

40 Otras caracterlsticas y ventajas de la invencion seran evidentes de la siguiente Descripcion detallada, los dibujos y las reivindicaciones.

Breve descripcion de los dibujos

La Figura 1 muestra once compuestos de ejemplo que pertenecen a las ocho familias qulmicas diferentes, identificadas en el cribado descrito en el presente documento, que inhiben la actividad de PKM2, inhiben la 45 glicolisis e inhiben el crecimiento de celulas de cancer.

La Figura 2 muestra los homologos estructurales y coeficientes de Tanimoto de (a) compuesto A2, (b)

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compuesto A3, (c) compuesto B1, (d) compuesto C1, (e) compuesto D1, (f) compuesto D2, (g) compuesto E1, (h) compuesto F1, (i) compuesto G1 y (j) compuesto H1.

La Figura 3 muestra las secuencias de peptidos usadas para producir anticuerpos especlficos para PKM1 y PKM2.

La Figura 4 muestra que los tejidos tumorales y las llneas celulares expresan la isoforma M2 de la piruvato cinasa. La Figura 4a es una inmunotransferencia de lisados de protelna de la glandula mamaria de ratones MMTV-neu antes (N) y despues (T) del desarrollo de tumor. T1-T4 representa lisados de tumores que se desarrollaron en cuatro ratones diferentes. Se inmunotransfirieron protelnas de extractos de celulas totales para PKM1, PKM2 y actina. La Figura 4b muestra una inmunotransferencia de lisados de protelna de llneas celulares. A549 y H1299 son llneas celulares de carcinoma de pulmon; 293T es una llnea celular de rinon embrionario transformada; HeLa es una llnea celular de carcinoma cervical; y MCF-10a es una llnea de celulas de epitelio de mama inmortalizada. Se incluyo lisado de musculo de raton como control para la tincion de anticuerpo contra M1. Los extractos de celulas totales se sondaron con anticuerpos hacia PKM1, PKM2 y GAPDH (control).

La Figura 5a muestra una inmunotransferencia de celulas H1299 que expresa establemente construcciones de ARNhc y construcciones de rescate. Se infectaron celulas con retrovirus que contenlan el vector vaclo, pLHCX, o pLHCX con M1 de raton marcado con flag (mM1) o M2 de raton (mM2). Despues de dos semanas de seleccion en higromicina, las celulas se infectaron con lentivirus que contenla el vector pLKO con ARNhc de control (c) o ARNhc que inactiva la expresion de PKM2 (kd). Entonces se seleccionaron las celulas en puromicina durante una semana. Se inmunotransfirieron extractos de celulas totales con anticuerpos para PKM, flag y GAPDH. La Figura 5b muestra las tasas glicollticas de las celulas inactivadas y de rescate. Las barras indican e.e.m. (n = 3) en la Figura 5b.

La Figura 6 muestra que la expresion de M1 reduce la tumorigenicidad de celulas de cancer de pulmon. La Figura 6a muestra la formacion de tumor con el tiempo en ratones sin pelo inyectados con celulas H1299 de rescate de M1 y M2. Despues de 43 dlas, 3/7 ratones inyectados con celulas M1 y 7/8 ratones inyectados con celulas M2 formaron tumores. La Figura 6b muestra ratones inyectados con celulas M1 en el flanco izquierdo y las celulas M2 en el flanco derecho. El raton (i) solo formo un tumor a partir de las celulas M2. El raton (ii) formo un tumor mas grande a partir de las celulas M2 que a partir de las celulas M1. La Figura 6c muestra tumores diseccionados de ratones sin pelo. Se muestran solo tres tumores derivados de celulas M1 (fila superior), y estos tumores fueron mas pequenos que cuatro de los tumores a partir de las celulas M2 (fila inferior). La Figura 6d muestra la masa de los tumores diseccionados. Cada punto representa la masa tumoral de un raton. La llnea azul indica la masa tumoral media que se origina a partir de las celulas M1 y celulas M2. La Figura 6e es una inmunotransferencia de lisados de tumor que se origina a partir celulas M1, celulas M2, o una mezcla 50/50 de celulas M1 y M2 (M1/M2). El panel izquierdo muestra lisados de las celulas inyectadas. El panel derecho muestra lisados de los tumores diseccionados. Los lisados se inmunotransfirieron con anticuerpos hacia M1, M2, piruvato cinasa (reconoce tanto M1 como M2), flag y GAPDH.

Las Figuras 7a-d muestran la activacion especlfica de PKM2 y la inhibition de la actividad enzimatica de piruvato cinasa. La Figura 7a muestra la actividad enzimatica de PKM2 recombinante medida en presencia o ausencia de fructosa-1,6-bisfosfato (FBP). La Figura 7b muestra la actividad enzimatica de PKM1 recombinante medida en presencia o ausencia FBP. La Figura 7c muestra que la cantidad de PKM2 anadida a la reaction disminuyo para aumentar el tiempo de reaccion y facilitar el cribado. La actividad enzimatica de PKM2 recombinante se midio en presencia o ausencia de concentraciones crecientes del compuesto B1. La Figura 7d muestra la actividad enzimatica de PKM1 recombinante medida en presencia o ausencia de concentraciones crecientes del compuesto B1.

La Figura 8 representa la toxicidad del compuesto A2 (Figura 8a) y D1 (Figura 8b) en celulas de cancer de pulmon humano despues de dos dlas de tratamiento en comparacion con el tratamiento de control con DMSO. La Figura 9 representa la toxicidad del compuesto A2 (Figura 9a) y D1 (Figura 9b) en celulas FL5.12, una llnea celular de pre-linfocitos de raton, despues de veinte horas de tratamiento, en presencia (+) o ausencia de factor de crecimiento (IL-3).

La Figura 10 muestra la diferenciacion y proliferation de linfocitos T. Una transferencia Western muestra la expresion de PKM2, pero no PKM1, en linfocitos T. La elevada expresion de PKM2 se muestra en momentos de tiempo tras la activacion de linfocitos T con anticuerpos anti-CD3 y anti-CD28.

La Figura 11 muestra una transferencia Western que ilustra la expresion selectiva de PKM2 en celulas embrionarias y celulas adiposas.

Descripcion detallada

En el presente documento se desvela un metodo de cribado para la identification de inhibidores de PKM2. Se identificaron ocho familias qulmicas en el cribado (formulas (I)-(VIII); Figura 1). Se encontraron once compuestos (Figura 2) que inhiblan la glicolisis, afectaban la proliferacion e iniciaban la muerte celular. Estos compuestos y sus homologos estructurales (Figura 2) pueden ser utiles para el tratamiento de, por ejemplo, cancer, diabetes, obesidad, enfermedades autoinmunitarias, enfermedades dependientes de la proliferacion (por ejemplo, HPB), y otras enfermedades relacionadas con la funcion de PKM2.

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Sfntesis de compuestos

La slntesis de los compuestos desvelados en el presente documento y los compuestos para el uso de la invencion puede implicar proteccion y desproteccion selectivas de alcoholes, aminas, sulfhidrilos y grupos funcionales de acido carboxllico en uno o mas reactantes. Por ejemplo, grupos protectores comunmente usados para aminas incluyen carbamatos, tales como terc-butilo, bencilo, 2,2,2-tricloroetilo, 2-trimetilsililetilo, 9-fluorenilmetilo, alilo y m-nitrofenilo. Otros grupos protectores comunmente usados para aminas incluyen amidas, tales como formamidas, acetamidas, trifluoroacetamidas, sulfonamidas, trifluorometanosulfonilamidas, trimetilsililetanosulfonamidas y terc- butilsulfonilamidas. Ejemplos de grupos protectores comunmente usados para acidos carboxllicos incluyen esteres, tales como esteres de metilo, etilo, terc-butilo, 9-fluorenilmetilo, 2-(trimetilsilil)etoximetilo, bencilo, difenilmetilo, O- nitrobencilo, orto-esteres y halo-esteres. Ejemplos de grupos protectores comunmente usados para alcoholes incluyen eteres, tales como eteres de metilo, metoximetilo, metoxietoximetilo, metiltiometilo, benciloximetilo, tetrahidropiranilo, etoxietilo, bencilo, 2-naftilmetilo, O-nitrobencilo, P-nitrobencilo, P-metoxibencilo, 9-fenilxantilo, tritilo (incluyendo metoxi-tritilos) y sililo. Ejemplos de grupos protectores comunmente usados para sulfhidrilos incluyen muchos de los mismos grupos protectores usados para los hidroxilos. Ademas, los sulfhidrilos pueden protegerse en una forma reducida (por ejemplo, como disulfuros) o una forma oxidada (por ejemplo, como acidos sulfonicos, esteres sulfonicos o amidas sulfonicas). Pueden elegirse grupos protectores de forma que se requieran condiciones selectivas (por ejemplo, condiciones acidas, condiciones basicas, catalisis por un nucleofilo, catalisis por un acido de Lewis, o hidrogenacion) para eliminar cada uno, excluyendo otros grupos protectores en una molecula. Las condiciones requeridas para la adicion de grupos protectores a funcionalidades amina, alcohol, sulfhidrilo y acido carboxllico y las condiciones requeridas para su elimination se proporcionan en detalle en "T.W. Green and P.G.M. Wuts: Protective Groups in Organic Synthesis" (2a ed., 1991, John Wiley & Sons) y "P.J. Kocienski: Protecting Groups" (1994, Georg Thieme Verlag).

En los esquemas sinteticos proporcionados en el presente documento, el uso de grupos protectores es evidente del contexto para aquellos expertos en la materia donde para cualquier amina, aldehldo, acido carboxllico, sulfhidrilo o alcohol, puede usarse cualquiera de los grupos protectores enumerados anteriormente.

Compuestos de formula I

Los compuestos desvelados en el presente documento incluyen compuestos de formula (I).

imagen10

En la formula (I), cada uno de R haluro, nitro, alquilo

R1

B, R' C2-4,

1A V1B

X1

nitro alquilo C1-4. alquenilo ^2-4, NHC(O)OR1Q, NHC(S)OR1r NHC(O)NHR1s C(O)NHR1Y, (CH2)1-4OH, C(O)R1Z, CH2R1AA, cada uno de R1K R1L, R1M, R1n, R^, R1P, R1Q

->1EE

X1C y X1D se selecciona independientemente de H, OR1K, OC(O)R1L, NR1MR1N, NHC(O)R1°, NHC(S)R1P, 1T NHC(O)SR, NHC(S)SR1V, NHS(O)2R1W, C(O)OR1X, S(O)R1cc, SR1DD, SO2NHR1EE y S(CH2)1-4C(O)OH; y

r1T' r1u 'r1V r1W r1X r1Y r1Z r1AA r1BB' r1CC r1DD

R1D, R, X alquinilo C2-4 NHC(S)NHR SO3H, SO2R1

R1R, R1S, R", R u, R", R"’, RX, R", R Z, R , R1BB, RCC, RDD y

R1EE se selecciona independientemente de H, alquilo C1-4, alquenilo C2.4, alquinilo C2.4, heterociclilo C2_e, arilo Ce-12, alcarilo C7-14, alq C3-10-heterociclilo y heteroarilo C1-4. Compuestos de formula (I) para el uso de la invencion incluyen compuestos A1, A2 y A3. En una realizacion preferida, R1A es un hidroxilo y R1B o R1C es un acido carboxllico.

Los compuestos de formula (I) pueden sintetizarse a partir de anilina para proporcionar, despues de la formacion de pirrol seguido de una o mas reacciones de sustitucion electrofila aromatica (SEA), los compuestos de fenilpirrol deseados (vease el Esquema 1).

imagen11

Compuestos de formula II

Los compuestos desvelados en el presente documento incluyen compuestos de formula (II).

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En la formula (II), cada uno de X2A, X2B, X2C, X2D, X2E,

X2F y X2G se selecciona independientemente de H, alquilo Ci-8,

alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, heterociclilo C2-6, arilo C6-12, alcarilo C7-14, alq C3-io-heterociclilo y heteroalquilo C1-8; y cada uno de Y2A, Y2C y Y2D se selecciona independientemente de N y CH; y Y2B se selecciona independientemente de N+ y C; y cada uno de R, R, R, R2D, R2E, R, R y R2H se selecciona independientemente de H, haluro, 10 nitro, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, OR2K, OC(O)R2L, NR2MR2N, NHC(O)R2° NHC(S)R2P NHC(O)OR2Q, NHC(S)0R2R, NHC(O)NHR2S, NHC(S)NHR2T, NHC(O)SR2U, NHC(S)SR2V, NHS(O)2R2w, C(O)OR2x, C(O)NHR2Y, (CH2K4OH, C(O)R2Z, CH2R2AA, SO3H, SO2R2BB, S(O)R2CC, SR2DD, SO2NHR2EE y S(CH2)1-4C(O)OH; y cada uno de

r2K r2L r2M r2N r2O r2P r2Q r2R r2S r2T r2U r2V r2W r2X r2Y r2Z r2aA r2BB r2CC r2DD y r2EE se

selecciona independientemente de H, alquilo C^4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, heterociclilo C2-6, arilo C6-12, alcarilo 15 C7-14, alq C3-1o-heterociclilo y heteroalquilo C1-4. Los compuestos de formula (II) incluyen, por ejemplo, el compuesto

B1.

Los compuestos de formula (II) pueden sintetizarse, por ejemplo, como se describe en Pawlik et al., Eur. J. Org. Chem. 2003:3065-80, 2003 (vease el Esquema 2).

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Segun la bibliografla, pueden sintetizarse colorantes de 5,5',6,6'-tetracloro-1,1'-din-alquil-3,3'-bis(w-

carboxialquil)bencimidacarbocianina (1) en un procedimiento de cuatro etapas (vease el Esquema 2, ruta I) a partir de 2,4,5-tricloronitrobenceno (7), que se convierte mediante tratamiento con n-alquilaminas en 4,5-dicloro-orto- nitroanilinas (8). La reduccion y ciclacion simultanea con acido acetico da entonces 4,5-dicloro-2- metilbencimidazoles (5). Estos se cuaternizan, tanto con las sulfonas respectivas en el caso de los colorantes sustituidos con 3,3'-di-(w-sulfoalquilo) como con w-bromoalquilnitrilos o esteres etllicos de acidos alcanoicos en el caso de los colorantes sustituidos con 3,3'-bis(w-carboxialquilo), y posteriormente se saponifican. Dos equivalentes de los bromuros de 1-alquil-3-(w-carboxialquil)-5,6-dicloro-2-metilbencimidazolio (6) as! obtenidos se transforman en los colorantes de bencimidacarbocianina 1 respectivos mediante tratamiento con yodoformo en presencia de metoxido de sodio (De Rossi et al., J. Prakt. Chem. Chem.-Ztg. 337:203-8, 1995).

Tambien se muestran rutas de slntesis alternativas en el Esquema 2. Se condenso 4,5-dicloro-orto-fenilendiamina (2) con acido acetico segun Dandegaonker y Kanabur (Dandegaonker, Monatsh. Chem. 99:1467-72, 1968), dando el 5,6-diclorobencimidazol (3), que sirve de compuesto de partida para la variacion tanto de los sustituyentes en los atomos de nitrogeno 1,1' como 3,3'.

En la ruta de reaccion II, el grupo 3-(3-cianopropilo) se introduce primero mediante reaccion nucleofila entre (3) y w- bromoalquilnitrilos dando los compuestos (4), que se cuaternizan simultaneamente con bromuros de n-alquilo y se hidrolizan dando 1-alquil-3-(3-carboxipropil)-5,6-diclorobencimidazoles (6). Finalmente, como en De Rossi et al., la condensacion de dos equivalentes de (6) con yodoformo en medio alcalino da los colorantes (1). Si se usa 1,8- diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU) en lugar del metoxido de sodio comun, la reaccion puede realizarse a temperatura ambiente.

En la ruta de reaccion III, los sustituyentes de 1-alquilo se introducen primero en (3) por reaccion nucleofila con los bromuros de alquilo correspondientes, dando los compuestos (5). Estos se transforman en precursores (6) mediante cuaternizacion tanto con esteres etllicos de acido w-bromoalcanoico como con w-bromoalquilnitrilos, con hidrolisis posterior. En el caso de los colorantes sustituidos con 3,3'-bis(w-sulfoalquilo), la cuaternizacion se logra mediante la reaccion usual con las sulfonas correspondientes (Poppe et al., Photogr. Photophys. Photochem. 63:149-58, 1969). Los compuestos se purifican de la forma usual mediante precipitacion en soluciones de metanol o sulfoxido de dimetilo mediante la adicion de pequenas cantidades de agua.

Esquema 2

imagen13

<cH,m

llCHI,/NaOCH,

<CH,LH

(CHj).COOH <CH2),-CCiOH

£

HjVCOOH <

6 C (CHj)JI

G^^Nli2 HO Ac / HCI 5 N

I) NaOII /DMSO

ruta I

H(CH2)„NHz

ruta

ruta 1112) B^CHjk-CN

XXP

I T Y -

2)Ac20 __

(CHi^CDOH dbhCHjVX

I) Hta^Br

[X =CN. CXXMu)

2) HBr

2) HBr

DIKCHABr 6A, 6B, 6D, 6E

CHI

DBU

) CHIj/ 1,8-diazabiciclo[5.4.0lundec-7-eno (DBU)

o NaOMe

I (Bromuro)

• (Betaina)

DBU o

NaOMe

ic {Sal de betaina)

5

10

15

Compuestos de formula III

Los compuestos desvelados en el presente documento incluyen compuestos de formula (III).

imagen14

En la formula (III), cada uno de X3A y X3B se selecciona independientemente de S, O

NH y CH2; y cada uno de X3G y alquilo C1-8, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4 y heteroalquilo C1-8; y cada uno

^ ^11 M .. O. .. V3I x-____- _______. w3A

X3H se selecciona independientemente de H,

de Y3A y Y3B se selecciona independientemente de O, CH, N y S; y X3 esta vaclo cuando Y3A es S u O, X3J esta vaclo cuando Y3B es S u O, de otro modo cada uno de X3 y X3J se selecciona independientemente de H, alquilo C1-8, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4 y heteroalquilo C1-8;_y cada uno de Y3C y Y3D se selecciona independientemente de CH y N; y cada uno de R3A, R3B R3C, R3D, R3E, R3F, R3G, R3H, R3 R3J, X3C, X3D, X3E y X3F se selecciona

independientemente de H, haluro, nitro, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, OR3K, OC(O)R3L, NR3MR3N,

NHC(O)R3°. NHC(S)R3P, NHC(O)OR3Q, NHC(S)OR3R, NHC(O)NHR3S, NHC(S)NHR3T, NHC(O)SR3, NHC(S)SR3V NHS(O)2R3W, C(O)OR3X, C(O)NHR3Y, (CH2K4OH, C(O)R3Z, CH2R3AA, SO3H, SO2R3BB, S(O)R3cC, SR3DD SO2NHR3eE y S(CH2)1-4C(OjOH; y cada uno de R3K, R3L, R3M, R3N, R3O, R3P, R3Q, R3R, R3S, R3T, R3U, R3V, R3W R3X, R3Y, R3Z, R3AA, R , R , R y R se selecciona independientemente de H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4,

3J

heterociclilo C2-6, arilo C6-12, alcarilo C7-14, incluyen, por ejemplo, el compuesto C1.

alq C3-10-heterociclilo y heteroarilo C1-4. Los compuestos de formula (III)

Los compuestos de formula (III) pueden sintetizarse a partir de derivados de becimidazol para proporcionar, despues de la aminacion reductora seguida de C-alquilacion, los compuestos deseados (vease el Esquema 3).

imagen15

Compuestos de formula IV

Los compuestos desvelados en el presente documento incluyen compuestos de formula (IV).

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10

En la formula (IV), cada uno de X4A, X4B y X4C se selecciona independientemente de S, O, NH, CH2, y dos atomos de hidrogeno; y cada uno de X4G y X4H se selecciona independientemente de H, alquilo C1-8, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4 y heteroalquilo C1-8; y cada uno de X4D y X4E se selecciona independientemente de O, CH2, NH y S; y X4F se selecciona independientemente de CH y N; y cada uno de R4A, R4B, R4C, R4D, R4E, R4F, R4G, R4H y R41 se selecciona independientemente de H, haluro, nitro, alquilo, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, OR4K, OC(O)R4L, NR4mR4N, NHC(O)R40, NHC(S)R4P, NHC(O)0R4Q, NHC(S)0R4R, NHC(0)NHR4s, NHC(S)NHR4T, NHC^SR, NHC(S)SR4V, aNHS(0)2R4W,

C(0)0R, C(0)NHR4Y, (CH2J1-4OH, C(0)R4< 4C(0)0H; y cada uno de R4K, R4L, R4M, R4N,

, CH2R4A

R40, R4P,

A, SO3H, SO2R r4Q, r4R, r4S, r

4BB,

4T

SR0)rr

sr4

4V' r4W

SO2NHR

r4X, r4Y,

y S(CH2>

4AA 4BB

r4Z R4AA' r4BE3"

R4CC, R4DD y R4EE se selecciona independientemente de H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, heterociclilo C2- 6, arilo Ce-12, alcarilo C7-14, alq C3-10-heterociclilo y heteroarilo C1-4. Los compuestos de formula (IV) incluyen, por ejemplo, los compuestos D1 y D2. En una realizacion preferida, X4A es O o S y X4D esta sustituido en para con respecto al grupo que contiene X4H.

Los compuestos de formula (IV) pueden sintetizarse como se describe en los Esquemas 4, 5, 6, 7 y 8:

5

En primer lugar, se prepara un sistema de anillos biciclico, por ejemplo, por formacion de amida, ester, eter o enoleter,

por formacion de ester como se describe en, por ejemplo, Gaylord et al., Organic Synthesis 32:25, 1952) (Esquema 4),

Esquema 4

imagen17

y opcionalmente seguido de metilenacion del ester como se describe en, por ejemplo, Pine et al., Organic Synthesis 69:72, 1990) (Esquema 5),

10

imagen18

o por formacion de amida como se describe en, por ejemplo, Allen et al., Organic Synthesis 26:92, 1946) (Esquema 6),

imagen19

o por formacion de eter usando la sintesis de Williamson (Esquema 7),

5

Esquema 7

imagen20

y luego condensacion, por ejemplo, de diversas 2,4-tiazolidindionas sustituidas con diversos benzaldehidos sustituidos usando piperidina como base, en etanol a reflujo, como se describe en Momose et al., Chem. Pharm. Bull. 39:1440, 1991, y Bruno et al., Bioorg. & Med. Chem. 10:1077-84, 2002) (Esquema 8).

imagen21

Compuestos de formula V

Los compuestos desvelados en el presente documento incluyen compuestos de formula (V).

imagen22

En la formula (V), cada uno de X

5A

5B 5C

X y X se selecciona independientemente de H, alquilo C1-8, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4 y heteroalquilo C1-8; y cada uno de X5D y X5E se selecciona independientemente de S, NH, O y CH2; y X5F se selecciona independientemente de O, NH cH2 y S; y X5G se selecciona independientemente de cH y N; y cada uno de R5A, R5B, R5C, R5D, R5E, R5F, R5G, R5h, R51 y R5J se selecciona independientemente de H, haluro, nitro,

10 alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, OR5K, OC(O)R5L, NR5MR5N, NHC(O)R50, NHC(S)R5P, NHC(O)OR5Q, NHC(S)0R5R, NHC(0)NHR5s, NHC(S)NHR5T, NHC(0)SR5U, NHC(S)SR5V, NHS(0)2R5W, C(0)0R5X, C(0)NHR5Y, (CH2)1-40H, C(0)R5Z, CH2R5AA, S03H, S02R5Bb, S(0)R5CC, SR5DD, S02NHR5EE y S(CH2)1-4C(0)0H; y cada uno de

r5K r5L r5M r5N r50 r5P r5Q r5r r5S r5t r5U r5V r5W r5X r5Y r5Z r5aA R5BB r5CC r5DD y r5EE se

selecciona independientemente de H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, heterociclilo C2-6, arilo C6-12, alcarilo 15 C7-14, alq C3-10-heterociclilo y heteroarilo C1-4. Los compuestos de formula (V) incluyen, por ejemplo, compuesto E1.

5

Los compuestos de formula (V) pueden sintetizarse por condensation de derivados de aldehfdo cinamico con diversos nucleofilos carbanionicos, como se representa en el Esquema 9.

5

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imagen23

Compuestos de formula VI

Los compuestos desvelados en el presente documento incluyen compuestos de formula (VI).

imagen24

En la formula (VI), X6A se selecciona independientemente de S, NH y O; y cada uno de R6A, R6B, R6C y R6D se selecciona independientemente de H, haluro, nitro, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, OR6K, OC(O)R6L NR6MR6N, NHC(O)R6°, NHC(S)R6P, NHC(°)°R6Q NHC(S)°R6R, NHC(°)NHR6s NHC(S)NHR6T, NHC(O)SR6U NHC(S)SR6V, NHS(O)2R6W, C(°)°R6X, C(°)NHR6Y, (CH2)i-4°H, C(°)R6z, CH2R6aa, S°3H, S°2R6BB, S(°)R6CC SR6DD, S°2NHR6EE y S(CH2)i-4C(°)°H; y cada uno de R6K, R6L, R6M, R6N, R6°, R6P, R6Q, R6R, R6S, R6T, R6U, R6V, R6W

R6X, R6Y, R6Z, R6AA, R6BB, R6CC, R6DD y R6EE se selecciona independientemente de H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4

alquinilo C2-4, heterociclilo C2-6, arilo C6-12, alcarilo C7-14, de formula (VI) incluyen, por ejemplo, el compuesto F1.

alq C3-10-heterociclilo y heteroalquilo C1-4. Los compuestos

Los compuestos de formula (VI) pueden sintetizarse a partir de derivados de furano, tiofeno y pirrol por reacciones de sustitucion electrofila aromatica (SEA) secuenciales, como se representa en el Esquema 10.

Esquema 10

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Compuestos de formula VII

Los compuestos desvelados en el presente documento incluyen compuestos de formula (VII).

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5

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En la formula (VII), cada uno de X7A y X7B se selecciona independientemente de S NH y O; y X7C se selecciona independientemente de S, NH, CH2 y O; y cada uno de R7A, R7B, R7C, R7d, R7e y R7F se selecciona

"7K OC(O)R7L, nr7Mr7N

independientemente de H, haluro, nitro, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, OR

7R

NHC(O)R7O, NHC(S)R7P, NHS(O)2R7W, C(O)OR7X,

NHC(O)OR

\7Y

7Q

NHC(S)OR

C(O)NHR7Y, (CH2)1-4OH, C(O)R

NHC(O)NHR7S, NHC(S)NHR7T 7Z CH2R7AA, SO3H, SO2R7BB

NHC(O)SR7U, NHC(S)SR S(O)R7CC 7DD 7EE

7V

y S(CH2)1-4C(OJOH; y cada uno de R , R

R7BB, R7CC, R7DD y R7EE se selecciona

heterociclilo C2-6, arilo C6-12, alcarilo C7-14, incluyen, por ejemplo, el compuesto G1.

-,7s

r7m R7N R/O R7P R7Q R7R R7S R71 R7U R7V R7W R7

independientemente de H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, alq C3-10-heterociclilo y heteroarilo C1-4. Los compuestos de formula (VII)

SR7

,7X

SO2NHR'

R7Y, R7Z, R7AA,

Los compuestos de formula (VII) pueden sintetizarse a partir de derivados de furano, tiofeno o pirrol por una reaccion de sustitucion aromatica de radicales, seguido de una reaccion de ciclacion intramolecular, como se representa en el Esquema 11.

Esquema 11

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Compuestos de formula VIII

Los compuestos desvelados en el presente documento incluyen compuestos de formula (VIII).

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En la formula VIII, X8C se selecciona independientemente de NH, CH=CH o N=CH; y cada uno de X8A, X8B y X8D se selecciona independientemente de CH y N; y cada uno de X , X y X se selecciona independientemente de S, NH, CH2 y O; y cada uno de R8A, R8B, R8C, R8D, R8E y R8F se selecciona independientemente de H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4, alquinilo C2-4, heterociclilo C2-6, arilo C6-12, alcarilo C7-14, alq C3-10-heterociclilo y heteroalquilo C1-4. Los compuestos de formula (VIII) incluyen, por ejemplo, el compuesto H1.

El compuesto de formula (VIII) puede sintetizarse a partir de la reaccion de un dieno, tal como ciclopentadieno, furano, tiofeno o un derivado de pirrol, con un dienofilo apropiadamente sustituido mediante la reaccion de Diels Alder, como se representa en el Esquema 12.

Esquema 12

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Inhibicion qufmica de PKM2

Actualmente, ningun compuesto usado para inhibir la glicolisis esta autorizado para su uso en un sujeto. Una limitacion a los actuales inhibidores glicollticos es que no son especlficos, que es problematico dada la importancia de la utilizacion de glucosa en tejidos normales. Como PKM2 es especlfico para celulas cancerosas, tejido adiposo y celulas inmunogenicas activadas, es una diana ideal para la inhibicion de la glicolisis en celulas cancerosas y la inhibicion de enfermedades asociadas a la expresion de PKM2. Asl, se ideo un cribado para identificar inhibidores de PKM2.

Pueden producirse PKM1 y PKM2 para su uso en el metodo de cribado por cualquier metodo conocido en la tecnica para la expresion de protelnas recombinantes. Por ejemplo, pueden introducirse acidos nucleicos que codifican el polipeptido deseado en diversos tipos de celulas o sistemas libres de celulas para la expresion. Pueden generarse sistemas de expresion en eucariotas (por ejemplo, llneas de celulas COS, HEK293T, CHO y NIH) y procariotas (por ejemplo, E. coli) en los que una secuencia de PKM se introduce en un plasmido u otro vector, que entonces se usa para transformar celulas vivas. Las construcciones en las que el ADNc de PKM contiene el marco de lectura abierto entero, o fragmento biologicamente activo del mismo, se insertan en la orientacion correcta en un plasmido de expresion y pueden usarse para la expresion de protelnas. Sistemas de expresion en procariotas y eucariotas permiten la expresion y recuperacion de protelnas de fusion en los que la protelna PKM se une covalentemente a una molecula de marca en tanto el lado del extremo amino como del extremo carboxi, que facilita la identificacion y/o purificacion. Ejemplos de marcas que pueden usarse incluyen marcas de epitopes de hexahistidina, HA, FLAG y c- myc. Puede manipularse un sitio de escision enzimatica o quimica entre la proteina PKM y la molecula de marca de manera que la marca pueda eliminarse tras la purificacion.

La actividad de la enzima PKM medida en el ensayo de cribado puede medirse, por ejemplo, monitorizando la concentracion de un sustrato (por ejemplo, ATP o NADH) presente en la mezcla de reaccion. El piruvato, producido por la actividad enzimatica de la piruvato cinasa, se convierte en lactato por lactato deshidrogenasa, que requiere el consumo de NADH (NADH ^ NAD+). Asi, la actividad de PKM2 puede medirse indirectamente monitorizando el consumo de NADH mediante, por ejemplo, ensayos de fluorescencia. Adicionalmente, la actividad de la enzima PKM2 puede monitorizarse directamente midiendo la produccion de ATP, ya que el ATP se produce cuando el fosfoenolpiruvato se convierte en piruvato. Metodos de monitorizacion de la cantidad de sustrato en una mezcla de reaccion incluyen, por ejemplo, absorbancia, fluorescencia, dispersion Raman, fosforescencia, luminiscencia, ensayos de luciferasa y radiactividad.

El procedimiento de cribado requiere la presencia de componentes especificos en la mezcla de reaccion. Los componentes utilizados en el ensayo incluyen, por ejemplo, un nucleosido difosfato (por ejemplo, ADP), fosfoenolpiruvato, NADH, lactato deshidrogenasa, FBP, un agente reductor (por ejemplo, ditiotreitol), un detergente (por ejemplo, Brij 35), glicerol y un disolvente (por ejemplo, DMSO). Condiciones de reaccion a modo de ejemplo se encuentran en la Tabla 1.

Tabla 1

Componente de la condicion de reaccion

Cantidad

ADP

0,1-5,0 mM

Fosfoenolpiruvato

0,1-5,0 mM

NADH

10-1000 pM

Lactato deshidrogenasa

0,1-10 unidades

Fructosa-1,6-bisfosfato

1-500 pM

DTT

0,1-50 mM

Brij 35

0,01-1 %

Glicerol

0,1-10 %

Piruvato cinasa M2 (usada para el cribado)

1-100 pg

DMSO

1-10 %

Los compuestos candidatos pueden elegirse si demuestran inhibicion de la enzima PKM superior al 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99 o 99,9 %.

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Terapia

Los compuestos descritos en el presente documento son utiles en el tratamiento de, por ejemplo, cancer, obesidad, diabetes, afecciones autoinmunitarias y enfermedades dependientes de la proliferacion. Puede realizarse terapia sola o en combinacion con otra terapia (por ejemplo, cirugla, radioterapia, quimioterapia, inmunoterapia, terapia antiangiogenesis o terapia genica). La duracion de la terapia de combinacion depende del tipo de enfermedad o trastorno que esta tratandose, la edad y afeccion del paciente, la etapa y tipo de la enfermedad del paciente, y como el paciente responde al tratamiento. La terapia puede administrarse en ciclos de terapia y de descanso, que incluyen periodos de descanso.

Cancer

Los inhibidores de PKM2, descritos en el presente documento, pueden usarse en el tratamiento de, por ejemplo, cancer. Los canceres incluyen leucemias (por ejemplo, leucemia aguda, leucemia linfocltica aguda, leucemia mielocltica aguda, leucemia mieloblastica aguda, leucemia promielocltica aguda, leucemia mielomonocltica aguda, leucemia monocltica aguda, eritroleucemia aguda, leucemia cronica, leucemia mielocltica cronica, leucemia linfocltica cronica), policitemia vera, linfoma (enfermedad de Hodgkin, enfermedad no Hodgkin), macroglobulinemia de Waldenstrom, enfermedad de las cadenas pesadas y tumores solidos tales como sarcomas y carcinomas (por ejemplo, fibrosarcoma, mixosarcoma, liposarcoma, condrosarcoma, sarcoma osteogenico, cordoma, angiosarcoma, endoteliosarcoma, linfangiosarcoma, linfangioendoteliosarcoma, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de colon, cancer pancreatico, cancer de mama, cancer de ovario, cancer de prostata, carcinoma de celulas escamosas, carcinoma de celulas basales, adenocarcinoma, carcinoma de las glandulas sudorlparas, carcinoma de las glandulas sebaceas, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma broncogenico, carcinoma de celulas renales, hepatoma, carcinoma de las vlas biliares, coriocarcinoma, seminoma, carcinoma embrionario, tumor de Wilm, cancer de cuello uterino, cancer uterino, cancer testicular, carcinoma de pulmon, carcinoma de pulmon de celulas pequenas, carcinoma de vejiga, carcinoma epitelial, glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craneofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma acustico, oligodendroglioma, schwanoma, meningioma, melanoma, neuroblastoma y retinoblastoma). Segun la invencion, los compuestos para el uso de la invencion o sales de los mismos son para su uso en el tratamiento de cancer, en el que el cancer esta seleccionado de canceres de mama, prostata, pulmon, bronquial, colon, rectal, rinon, renal, piel, pelvico, pancreatico, oral, ovario, cabeza, cuello, tiroides, paratiroides, estomago, gastrointestinal, del intestino (por ejemplo, delgado y grueso), cerebro, esofago, hlgado, veslcula biliar, pleura, vlas biliares intrahepaticas, cuello uterino, testicular, ureter, anal, laringe, faringe, hueso, articular, vulvar, ojo y de la vejiga urinaria, linfoma no Hodgkin, linfoma de Hodgkin, melanomas, carcinomas, carcinomas de celulas basales, neuroblastomas, mielomas multiples, leucemias, leucemias linfoclticas cronicas, canceres de tejido blando (por ejemplo, corazon), tumores del estroma gastrointestinal, leucemias mieloides cronicas, mesoteliomas malignos, retinoblastomas, tumores agudos y sarcomas de tejido blando.

Enfermedades autoinmunitarias y trastornos proliferativos

Los inhibidores de PKM2, descritos en el presente documento, pueden usarse para tratar, por ejemplo, enfermedades autoinmunitarias o trastornos proliferativos. Los trastornos autoinmunitarios incluyen, por ejemplo, diabetes de tipo I, enfermedad de Crohn, esclerosis multiple, artritis, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistemico, tiroiditis autoinmune (de Hashimoto), enfermedades autoinmunes del hlgado (por ejemplo, hepatitis y cirrosis biliar primaria), hipertiroidismo (por ejemplo, enfermedad de Graves y tirotoxicosis), diabetes resistente a la insulina, insuficiencia suprarrenal autoinmune (por ejemplo, enfermedad de Addison),

ooforitis autoinmune, orquitis autoinmune, anemia hemolltica autoinmune, hemoglobinuria paroxlstica por frlo, enfermedad de Behcet, trombocitopenia autoinmune, neutropenia autoinmune, anemia perniciosa, anemia pura de globulos rojos, coagulopatlas autoinmunes, miastenia grave, encefalomielitis alergica experimental, polineuritis autoinmune, penfigo y otras enfermedades bullosas, carditis reumatica, slndrome de Goodpasture, slndrome postcardiotomla, slndrome de Sjogren, polimiositis, dermatomiositis y esclerodermia. Los trastornos autoinmunitarios se describen en las patentes de EE.UU. N.° 5.891.435 y 6.773.705.

Los trastornos proliferativos incluyen, por ejemplo, cancer (por ejemplo, benigno y maligno), hiperplasia prostatica benigna, psoriasis, queratinizacion anormal, trastornos linfoproliferativos (por ejemplo, un trastorno en el que hay proliferacion anormal de celulas del sistema linfatico), artritis reumatoide cronica, arteriosclerosis, reestenosis, retinopatla diabetica y trastornos neurodegenerativos. Los trastornos proliferativos se describen en las patentes de EE.UU. N.° 5.639.600 y 7.087.648.

Diabetes y obesidad

El tejido adiposo expresa PKM2. Asl, los compuestos descritos en el presente documento pueden ser utiles en el tratamiento de la obesidad. Adicionalmente, los inhibidores de PKM2 descritos en el presente documento pueden ser

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utiles en el tratamiento de diabetes de tipo II, ya que la inhibicion de PKM2 puede permitir la disminucion de la produccion de llpidos en tejido adiposo.

Pautas terapeuticas adicionales

Si se desea, pueden proporcionarse pautas terapeuticas adicionales junto con los compuestos descritos en el presente documento. Por ejemplo, pueden administrarse agentes terapeuticos con los inhibidores de PKM2 descritos en el presente documento a concentraciones conocidas por ser eficaces para tales agentes terapeuticos. Agentes particularmente utiles incluyen, por ejemplo, agentes antimicrobianos, agentes antiinflamatorios, agentes antivirales, agentes antifungicos, analgesicos, anestesicos, sedantes, lubricantes, agentes inmunomoduladores y derivados de 5-aminosalicilato.

Si se emplea mas de un agente, los agentes terapeuticos pueden administrarse por separado o pueden mezclarse en una unica formulacion. Cuando los agentes estan presentes en diferentes composiciones farmaceuticas, pueden emplearse diferentes vlas de administration. Las vlas de administration incluyen, por ejemplo, administration ocular, por inhalation, parenteral, dermica, transdermica, bucal, rectal, sublingual, perilingual, nasal, topica, o administracion por via oral. La administracion parenteral incluye administracion intravenosa, intraperitoneal, subcutanea y intramuscular.

Los agentes terapeuticos descritos en el presente documento pueden mezclarse con componentes activos o inertes adicionales, por ejemplo, en vehlculos farmaceuticamente aceptables convencionales. Un vehlculo farmaceutico puede ser cualquier sustancia no toxica compatible adecuada para la administracion de las composiciones de la presente invention a un paciente. Vehlculos farmaceuticamente aceptables incluyen, por ejemplo, agua, solution salina, tampones y otros compuestos, descritos, por ejemplo, en the Merck Index, Merck & Co., Rahway, New Jersey. Tambien pueden usarse formulaciones de liberation lenta o un aparato de liberation lenta para la administracion continua.

Ademas de la administracion de agentes terapeuticos, la pauta terapeutica adicional puede implicar otras terapias, que incluyen modification al estilo de vida del sujeto que esta tratandose.

Formulacion de composiciones farmaceuticas

La administracion de los compuestos descritos en el presente documento puede ser por cualquier medio adecuado que produzca una concentration del compuesto que sea eficaz en el tratamiento de la enfermedad asociada a la funcion de PKM2. El compuesto puede estar contenido en cualquier cantidad apropiada en cualquier sustancia de vehlculo adecuado. La composition puede proporcionarse en una forma de dosificacion que es adecuada para la via de administracion oral, parenteral (por ejemplo, intravenosa o intramuscular), rectal, cutanea, nasal, vaginal, inhalante, piel (por ejemplo, un parche), ocular o intracraneal. Asl, la composicion puede estar en forma de, por ejemplo, comprimidos, capsulas, plldoras, polvos, granulos, suspensiones, emulsiones, soluciones, geles que incluyen hidrogeles, pastas, pomadas, cremas, apositos, rociados, dispositivos de administracion osmotica, supositorios, enemas, inyectables, implantes, esprays o aerosoles. Las composiciones farmaceuticas pueden formularse segun la practica farmaceutica convencional (vease, por ejemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20a edition, 2000, ed. A.R. Gennaro, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, y Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick and J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York).

Las composiciones farmaceuticas desveladas en el presente documento pueden formularse para liberar el compuesto activo inmediatamente tras la administracion o en cualquier momento o periodo de tiempo predeterminado despues de la administracion. Los ultimos tipos de composiciones son generalmente conocidos como formulaciones de liberacion controlada, que incluyen (i) formulaciones que crean concentraciones sustancialmente constantes del (de los) agente(s) de la invencion dentro del cuerpo durante un periodo de tiempo

prolongado; (ii) formulaciones que despues de un tiempo de retardo predeterminado crean concentraciones

sustancialmente constantes de los agentes de la invencion dentro del cuerpo durante un periodo de tiempo

prolongado; (iii) formulaciones que sostienen la action del (de los) agente(s) durante un periodo de tiempo

predeterminado manteniendo un nivel eficaz relativamente constante del (de los) agente(s) en el cuerpo con minimization concomitante de efectos secundarios no deseables asociados a fluctuaciones en el nivel en plasma del (de los) agentes(s) (patron cinetico en diente de sierra); (iv) formulaciones que localizan la accion del (de los) agente(s), por ejemplo, colocation espacial de una composicion de liberacion controlada adyacente a o en el tejido u organo enfermo; (v) formulaciones que logran la comodidad de dosificacion, por ejemplo, administrar la composicion una vez por semana o una vez cada dos semanas; y (vi) formulaciones que dirigen la accion del (de los) agente(s) usando vehlculos o derivados qulmicos para administrar la combination a un tipo de diana celular particular. La administracion de la combinacion en forma de una formulacion de liberacion controlada se prefiere especialmente para compuestos que tienen una ventana de absorcion estrecha en el tubo gastrointestinal o una semivida biologica relativamente corta.

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Puede seguirse cualquiera de varias estrategias con el fin de obtener la liberacion controlada en la que la tasa de liberacion sobrepasa la tasa de metabolismo del compuesto en cuestion. En un ejemplo, la liberacion controlada se obtiene por seleccion apropiada de diversos parametros y componentes de formulacion, que incluyen, por ejemplo, diversos tipos de composiciones y recubrimientos de liberacion controlada. Asl, la combinacion se formula con excipientes apropiados en una composicion farmaceutica que, tras la administracion, libera la combinacion de una manera controlada. Ejemplos incluyen composiciones de comprimido o capsula unitario individual o multiple, soluciones en aceite, suspensiones, emulsiones, microcapsulas, complejos moleculares, microesferas, nanopartlculas, parches y liposomas.

Las formulaciones para administracion parenteral pueden, por ejemplo, contener excipientes, agua esteril o solucion salina, polialquilenglicoles tales como polietilenglicol, aceites de origen vegetal, o naftalenos hidrogenados. Pueden usarse pollmero de lactida biodegradable biocompatible, copollmero de lactida/glicolida o copollmeros de polioxietileno-polioxipropileno para controlar la liberacion de los compuestos. Pueden usarse formulaciones en nanopartlculas (por ejemplo, nanopartlculas biodegradables, nanopartlculas de llpidos solidos y liposomas) para controlar la biodistribucion de los compuestos. Otros sistemas de administracion parenteral potencialmente utiles incluyen partlculas de copollmero de etileno-acetato de vinilo, bombas osmoticas, sistemas de infusion implantables y liposomas.

Las formulaciones para inhalacion pueden contener excipientes o pueden ser soluciones acuosas que contienen, por ejemplo, polioxietileno-9-lauril eter, glicolato y desoxicolato, o pueden ser soluciones aceitosas para administracion en forma de gotas nasales, o como un gel. La concentracion del compuesto en la formulacion variara dependiendo de varios factores, que incluyen la dosificacion del farmaco que va a administrarse, y la via de administracion.

Las formulaciones para uso oral incluyen comprimidos que contienen el (los) principio(s) activo(s) en una mezcla con excipientes farmaceuticamente aceptables no toxicos. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes inertes o cargas (por ejemplo, sacarosa y sorbitol), agentes lubricantes, deslizantes y antiadhesivos (por ejemplo, estearato de magnesio, estearato de cinc, acido estearico, sllices, aceites vegetales hidrogenados, o talco). Tambien pueden proporcionarse formulaciones para uso oral en forma de dosificacion unitaria como comprimidos masticables, comprimidos, comprimidos oblongos o capsulas (por ejemplo, como capsulas de gelatina dura en las que el principio activo se mezcla con un diluyente solido inerte o como capsulas de gelatina blanda en las que el principio activo se mezcla con agua o un medio de aceite).

El compuesto puede administrarse opcionalmente como una sal farmaceuticamente aceptable, tal como, por ejemplo, una sal de adicion de acido no toxica o complejo metalico que se usa comunmente en la industria farmaceutica. Ejemplos de sales de adicion de acido incluyen, por ejemplo, acidos organicos (por ejemplo, acidos acetico, lactico, pamoico, maleico, cltrico, malico, ascorbico, succlnico, benzoico, palmltico, suberico, salicllico, tartarico, metanosulfonico, toluenosulfonico o trifluoroacetico), acidos polimericos (por ejemplo, acido tanico o carboximetilcelulosa) y acidos inorganicos (por ejemplo, acido clorhldrico, acido bromhldrico, acido sulfurico o acido fosforico). Los complejos metalicos incluyen, por ejemplo, complejos de cinc y de hierro.

Las formulaciones pueden administrarse a sujetos humanos en cantidades terapeuticamente eficaces. Intervalos de dosis tlpicos son de aproximadamente 0,01 pg/kg a aproximadamente 2 mg/kg de peso corporal por dla. La dosificacion de farmaco preferida que va a administrarse es probable que dependa de variables tales como el tipo y el grado del trastorno, el estado de salud general del sujeto particular, el compuesto especlfico que se administra, los excipientes usados para formular el compuesto y su via de administracion. Pueden usarse ensayos cllnicos estandar para optimizar la dosis y frecuencia de dosificacion para cualquier compuesto particular.

Ejemplos

Ejemplo 1. Expresion de PKM2 en tejido tumoral

Para confirmar que los tejidos tumorales cambian la expresion de PK de una isoforma adulta a la isoforma M2 embrionaria, se generaron anticuerpos que distinguen PKM1 de PKM2 (Figura 3). Se analizaron tejidos de glandula mamaria de ratones MMTV-neuNT, un modelo de tumor de cancer de mama, antes y despues del desarrollo tumoral de la expresion de la isoforma de PK. Las celulas se lisaron en tampon de lisis Nonidet P-40 y se llevo a cabo analisis de transferencia Western segun protocolos convencionales. Como se muestra en la Figura 4a, la isoforma de PK primaria antes del desarrollo de tumor es PKM1; sin embargo, la isoforma primaria de cuatro tumores independientes es PKM2. Todas las llneas celulares examinadas, que incluyen multiples llneas de cancer derivadas de diferentes tejidos, tambien expresan exclusivamente la isoforma M2 de PK (Figura 4b).

Ejemplo 2. La inhibicion de PKM disminuye la glicolisis en tejido tumoral

Se evaluo la funcion de PKM2 en la glicolisis por inactivacion de ARN de horquilla pequena (ARNhc) (Figura 5a). Se midieron las tasas de glicolisis celular siguiendo la conversion de 5-3H-glucosa en 3H2O. El ensayo se realizo con

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celulas unidas a placa de tejido. Las celulas se lavaron una vez en PBS, antes de la incubacion en tampon de Krebs que contenia glucosa 10 mM enriquecida con 10 pCi de 5-3H-glucosa. Despues de una hora, se transfirieron muestras triplicadas de medios a tubos de PCR que contenian HCl 0,2 N y se determino la cantidad de 3H2O generada por difusion, como se ha descrito previamente en la materia.

Los datos muestran que la inactivacion estable de PKM2 en la linea de celulas de cancer de pulmon humano H1299 produce tasas glicoliticas reducidas (Figura 5b).

Ejemplo 3. La expresion de M1 reduce la tumorigenicidad de celulas de cancer de pulmon

Para determinar si la expresion de la isoforma M2 es importante para el crecimiento de celulas tumorales in vivo, se realizaron estudios de xenoinjerto usando las celulas de rescate M1 y M2. Se inyectaron ratones sin pelo con 5 millones de celulas H1299 de rescate de M1 o M2, y se monitorizo el crecimiento tumoral durante un periodo de siete semanas. Como se muestra en la Figura 6a, los ratones inyectados con las celulas M1 mostraron un retraso en el desarrollo tumoral en comparacion con aquellos inyectados con las celulas M2. Se desarrollaron menos tumores a partir de las celulas M1, y aquellos que lo hicieron fueron mas pequenos en tamano (Figuras 6b y 6c). Como se juzga por la masa tumoral total, las celulas M2 dieron lugar a tumores significativamente mayores que las celulas M1 (Figura 6d). El analisis de transferencia Western de los tumores desarrollados muestra que las proteinas mM1 y mM2 de rescate marcadas con flag son retenidas en los tumores. Sin embargo, la expresion endogena de PKM2 volvio en ambos casos (Figura 6e). No se recuperaron tumores que expresaran unicamente mMl. Para determinar si esto era el resultado de la perdida de inactivacion mediada por ARNhc de PKM2 endogeno o si represento una ventaja del crecimiento selectivo para las celulas que expresan M2, se inyecto una mezcla 50/50 de celulas M1 y M2 en ratones sin pelo. Los tumores que surgieron de la mezcla de celulas M1 y M2 solo retuvieron la expresion de la proteina de rescate flag-mM2, demostrando que la mayoria del tumor, si no el tumor entero, se derivo de las celulas que expresan M2 (Figura 6e). Estos datos muestran que la expresion de PKM2 proporciona una ventaja de crecimiento selectivo para celulas tumorales in vivo.

El cambio a la isoforma M2 de PK en celulas tumorales es suficiente para producir el fenotipo metabolico conocido como el efecto de Warburg. Sin embargo, no queda claro como el piruvato producido a partir de PKM2 se convierte en lactato mientras que el piruvato producido a partir de PKM1 se metaboliza en las mitocondrias. Una explication es que la expresion de M2 produce una expresion mas alta de lactato deshidrogenasa. Alternativamente, la expresion de M2 podria conducir a una densidad mitocondrial reducida y disminucion de la expresion de proteinas implicadas en la fosforilacion oxidativa. Para probar esta hipotesis, los presentes inventores analizaron la expresion de lactato deshidrogenasa y proteinas F1F0-ATPasa en las celulas M1 y M2. No se detectaron diferencias en los niveles de proteina (datos no mostrados); sin embargo, actividades diferenciales de lactato deshidrogenasa o proteinas implicadas en la fosforilacion oxidativa en las celulas M1 y M2 podrian explicar el desplazamiento observado a glicolisis aerobia en las celulas que expresan M2.

Ejemplo 4. Metodo de identificacion de inhibidores de la piruvato cinasa

Se ideo un cribado in vitro para identificar inhibidores de PKM2. Utilizando la capacidad de PKM2, pero no PKM1, para ser alostericamente activado por fructosa-1,6-bisfosfato (FBP), se realizo un cribado para identificar moleculas que inhiben especificamente la activation de PKM2 por FBP.

Se expresaron PKM1 y PKM2 recombinante en E. coli y se purificaron usando una columna Ni-NTA segun protocolos convencionales. Se mezclo PKM2 (2 pg) con los siguientes componentes: ADP 0,6 mM, fosfoenolpiruvato 0,5 mM, NADH 200 pM, 1-4 unidades de lactato deshidrogenasa, FBP 50 pM, DTT 1 mM, 0,02 % de Brij 35, 5 % de glicerol, y la molecula de prueba con una concentration de DMSO final del 5 %. Una reaction de control carecio de la molecula de prueba. Las moleculas de prueba usadas en este ejemplo se seleccionaron de una biblioteca que contenia mas de 100.000 compuestos.

Se realizo el cribado primario usando PKM2 en presencia de FBP. Los compuestos se eligieron como posibles "aciertos" si el compuesto demostro inhibition de la actividad de PKM2 superior al 50 %. La actividad se midio monitorizando la concentracion de NADH. El piruvato, producido por la actividad enzimatica de la piruvato cinasa, se convierte en lactato por lactato deshidrogenasa, que requiere el consumo de NADH (NADH ^ NAD+). Asi, la actividad de PKM2 se midio indirectamente monitorizando el consumo de NADH mediante ensayos de fluorescencia. Adicionalmente, la actividad de la enzima PKM2 se monitorizo directamente midiendo la production de ATP, ya que se produce ATP cuando el fosfoenolpiruvato se convierte en piruvato por PKM2.

Este mismo metodo de cribado se uso entonces para volver a probar moleculas candidatas para la inhibicion de PKM1 para determinar que compuestos candidatos son activos contra PKM2, pero no PKM1. Ejemplos de activacion especifica de PKM2 por compuestos cabeza de serie se muestran en la Figura 7.

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La Figura 1 muestra once compuestos candidatos que pertenecen a ocho generos qulmicos diferentes que inhiben PKM2, inhiben la glicolisis e inhiben el crecimiento de celulas cancerosas.

Ejemplo 5. CI50 de la inhibicion de PKM2 e inhibicion del crecimiento de cancer de los once compuestos cabeza de serie y porcentaje de inhibicion de PKM2 y PKM1 a la concentracion de cribado

Para estudios in vitro, se incubo piruvato cinasa recombinante con el compuesto indicado (Tabla 2) y se evaluo la actividad de la enzima, como se describe en el Ejemplo 4. Para determinar la CI50, se determino la actividad enzimatica a diversas concentraciones de inhibidor. Los porcentajes mostrados en la Tabla 2 reflejan la inhibicion de la actividad enzimatica con respecto a la ausencia de compuesto cuando la enzima se incuba con 50 pM del compuesto indicado. Para estudios in vivo, se incubaron llneas celulares de cancer de pulmon humano con concentraciones crecientes del compuesto indicado y se informa la concentracion requerida para destruir >90 % de las celulas.

Tabla 2

Compuesto (familia)

CI50 in vitro (PKM2) CI50 in vivo 1 PKM22 PKM1 2

A1 (I)

~90 pM >100 pM 50% 15%

A2 (I)

7 pM -250 pM 50% 15%

A3 (I)

> 100 pM > 100 pM 50% 0%

B1 (II)

~10 pM - 85% 0%

C1 (III)

- - 75% 20%

D1 (IV)

20 pM -250 pM 70% 15%

D2 (IV)

- - 25% 0%

E1 (V)

- - 25% 15%

F1 (VI)

10 pM -90 pM - -

G1 (VII)

~70 pM >500 pM - -

H1 (VIII)

90 pM >500 pM - -

1 Datos in vivo obtenidos usando celulas de cancer de pulmon humano H1299 y A549 2 La concentracion de cribado se estimo a 50 pM.

Ejemplo 5. Inhibicion del crecimiento de celulas cancerosas por compuestos candidatos

Se expusieron celulas de cancer de pulmon humano a concentraciones crecientes de compuestos candidatos A2 y D1. La toxicidad de los compuestos se midio determinando el porcentaje de celulas supervivientes. Las celulas se trataron con control con DMSo como control. La Figura 10 representa la toxicidad de compuestos A2 (Figura 8a) y D1 (Figura 8b) en celulas H1299 en comparacion con el tratamiento de control con DMSO.

Ejemplo 7. Supresion inmunitaria por compuestos candidatos

Se trataron celulas de pre-linfocito de raton (celulas FL5.12) con compuestos candidatos A2 (Figura 9a) y D1 (Figura 9b) durante veinte horas en presencia y ausencia de factor de crecimiento (IL-3). La retirada del factor de crecimiento aumenta la toxicidad del compuesto candidato, sugiriendo que enfermedades autoinmunitarias pueden tratarse inhibiendo PKM2.

Ejemplo 8. Expresion de PKM2 en celulas inmunogenicas

Se monitorizo la expresion de PKM1 y PKM2 en linfocitos T intactos usando anticuerpos contra PKM1 y PKM2 especlficos generados (vease la Figura 3). Como se muestra en la transferencia Western en la Figura 10, los linfocitos T expresan piruvato cinasa M2, pero no la isoforma M1. La expresion de piruvato cinasa M2 aumento tras la activacion de linfocitos T con anticuerpos anti-CD3 y anti-CD28 a los momentos de tiempo de 24 horas y 48 horas.

Ejemplo 9. Expresion de PKM2 en tejido adiposo y celulas proliferantes

La Figura 11 representa una transferencia Western que muestra la expresion selectiva de piruvato cinasa M2 en celulas embrionarias y celulas adiposas. Estos datos sugieren que los inhibidores de PKM2 pueden usarse para tratar enfermedades tales como, por ejemplo, diabetes, obesidad y enfermedades dependientes de la proliferacion 5 (por ejemplo, HPB).

Claims (2)

1. REIVINDICACIONES

   1. Un compuesto seleccionado de

   imagen1

   y sales de los mismos,

   5 para su uso en el tratamiento de cancer,

   en el que el cancer esta seleccionado de canceres de mama, prostata, pulmon, bronquial, colon, rectal, rinon, renal, piel, pelvico, pancreatico, oral, ovario, cabeza, cuello, tiroides, paratiroides, estomago, gastrointestinal, del intestino (por ejemplo, delgado y grueso), cerebro, esofago, hlgado, veslcula biliar, pleura, vlas biliares intrahepaticas, cuello uterino, testicular, ureter, anal, laringe, faringe, hueso, articular, vulvar, ojo y de la vejiga urinaria, linfoma no 10 Hodgkin, linfoma de Hodgkin, melanomas, carcinomas, carcinomas de celulas basales, neuroblastomas, mielomas multiples, leucemias linfoclticas cronicas, canceres de tejido blando (por ejemplo, corazon), tumores del estroma gastrointestinal, leucemias mieloides cronicas, mesoteliomas malignos, retinoblastomas y sarcomas de tejido blando.
2. 2. El compuesto para su uso segun la reivindicacion 1, en el que el cancer esta seleccionado de canceres bronquial, de colon, rectal, rinon, renal, pelvico, pancreatico, oral, cabeza, cuello, estomago, gastrointestinal, del intestino (por 15 ejemplo, delgado y grueso), hlgado, veslcula biliar, pleura, vlas biliares intrahepaticas, testicular, ureter, anal, laringe, faringe, hueso, articular, vulvar, ojo y de la vejiga urinaria, linfoma no Hodgkin, linfoma de Hodgkin, melanomas, carcinomas, carcinomas de celulas basales, neuroblastomas, mielomas multiples, leucemias linfoclticas cronicas, tumores del estroma gastrointestinal, leucemias mieloides cronicas, leucemias linfoclticas agudas, mesoteliomas malignos, retinoblastomas.

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