ES2601812T3

ES2601812T3 - Derivados de polímero alto, biocompatible, modificado con sulfhidrilo, de baja modificación, material reticulado del mismo y usos de dicho material

Info

Publication number: ES2601812T3
Application number: ES11823038.2T
Authority: ES
Inventors: Xiaozheng Shu; Weiping Zhong; Yunyun Wang; Meixia Yu
Original assignee: Bioregen Biomedical Changzhou Co Ltd
Current assignee: Bioregen Biomedical Changzhou Co Ltd
Priority date: 2010-09-09
Filing date: 2011-08-04
Publication date: 2017-02-16
Anticipated expiration: 2031-08-04
Also published as: WO2012031515A3; US20130338099A1; CA2810590C; JP6063867B2; US10064889B2; CA2810590A1; EP2614828A4; AU2011301069B2; US9446067B2; AU2011301069A1; CN102399295B; US20160263147A1; CN102399295A; WO2012031515A2; EP2614828B1; EP2614828A2; JP2013537050A

Abstract

Un derivado de macromolécula biocompatible modificado con mercapto que tiene un grado bajo de modificación con mercapto, caracterizado porque: el derivado de macromolécula biocompatible modificada con mercapto contiene al menos tres grupos mercapto en su cadena lateral y tiene un grado de modificación con mercapto <= 4.5%; el derivado de macromolécula biocompatible modificado con mercapto se refiere a un derivado obtenido introduciendo químicamente el grupo mercapto al grupo de cadena lateral de la macromolécula biocompatible; el grado de modificación con mercapto se refiere a un porcentaje de la cantidad del grupo mercapto introducido en la cantidad del grupo de cadena lateral disponible de la macromolécula biocompatible para modificación; y la macromolécula biocompatible se refiere a sulfato de condroitina, dermatán, heparina, heparán, ácido hialurónico, sulfato de dermatán, pectina, y carboximetil quitosán, poli (ácido acrílico), poli (ácido aspártico), poli (ácido tartárico), poli (ácido glutámico) y poli (ácido fumárico), colágeno, gelatina alcalina, gelatina ácida, elastina, proteína de núcleo, laminina de polisacárido y fibronectina, o las sales de los mismos.

Description

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

DESCRIPCION

Derivados de poKmero alto, biocompatible, modificado con sulfhidrilo, de baja modificacion, material reticulado del mismo y usos de dicho material

Campo tecnico

La presente invencion se refiere a un derivado de macromolecula biocompatible con un grado bajo de modificacion, y particularmente a un derivado de macromolecula biocompatible, modificada con mercapto, que tiene un grado bajo de modificacion con mercapto; la presente invencion se refiere ademas a un material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro, que tiene un grado bajo de reticulacion, y adicionalmente se refiere ademas a dicho material reticulado para uso en medicina.

Tecnica antecedente

Las macromoleculas biocompatibles tienen muchas funciones fisiologicas importantes como los efectos significativos del acido hialuronico en el tratamiento visco-suplementario de osteoartritis, promocion en la curacion de heridas, etcetera. Sin embargo, las macromoleculas biocompatibles habitualmente se recambian muy rapidamente in vivo o se disuelven facilmente en el fluido corporal lo cual limita en gran medida sus usos en muchas aplicaciones medicas. Por ejemplo, el curso de tratamiento visco-suplementario de acido hialuronico para osteoartritis es una inyeccion en la rodilla cada semana durante cinco semanas consecutivas lo cual es inconveniente para los pacientes y para los trabajadores medicos y tambien incrementa el riesgo de infeccion. La modificacion qmmica, la reticulacion o la reticulacion despues de la modificacion, es el metodo efectivo para que las macromoleculas biocompatibles prolonguen su recambio y reduzcan su solubilidad in vivo, lo cual expande de modo significativo sus aplicaciones en la medicina clmica. Por ejemplo, en lo que respecta al tratamiento visco-suplementario de osteoartritis, la eficacia de una inyeccion en la rodilla con hialuronato de sodio reticulado es igual a cinco inyecciones en la rodilla con el hialuronato de sodio no reticulado; ademas, el acido hialuronico reticulado ha sido usado ampliamente para propositos cosmeticos como los rellenos dermicos.

Aunque la aplicacion de las macromoleculas biocompatibles en medicina clmica ha sido expandida en gran medida por su modificacion qmmica y/o reticulacion, aun existen conflictos entre la teona y los procesos practicos. Por una parte, para prolongar su recambio y reducir su solubilidad in vivo las macromoleculas biocompatibles deben modificarse qmmicamente y/o reticularse hasta un cierto grado. Por lo tanto, todos aquellos derivados de macromolecula biocompatible, qmmicamente modificada y/o reticulada, o materiales reticulados de la misma, que se aplican ampliamente en la medicina clmica en la actualidad, tienen un alto grado, o relativamente alto grado, de modificacion o de reticulacion tal como el derivado altamente esterificado (100% de esterificacion) de hialuronato de sodio (HYAFF, Fidia, Italia). Por otra parte, la estructura qmmica de las macromoleculas biocompatibles cambia debido a la modificacion qmmica y/o al reticulado, lo cual afecta y reduce su funcion fisiologica y propiedad biocompatible e incluso causa ciertos efectos secundarios. Por ejemplo, los resultados de estudios reportados por Jacob et al. mostraron que MeroGel® (a base de HYAFF altamente modificado) causo reaccion inflamatoria y reaccion de osificacion (Jacob et al., Laryngoscope 112: 3742, 2002).

Sin embargo, la mayor parte de la investigacion actual todavfa se enfoca en mejorar el grado de modificacion y/o de reticulacion para prolongar el recambio y reducir la solubilidad de la macromolecula biocompatible in vivo. En opinion de los inventores, la macromolecula biocompatible altamente modificada y/o reticulada no puede cumplir mejor los requisitos de las aplicaciones clmicas en un numero considerable de casos e incluso puede causar tales efectos secundarios como una reaccion inflamatoria, etcetera. Por lo tanto, la modificacion qmmica y/o la reticulacion de la macromolecula biocompatible tienen que estar balanceados entre los siguientes dos factores: reducir el grado de modificacion qmmica y/o de reticulacion tanto como sea posible para que se mantengan la estructura inicial, la funcion fisiologica y la biocompatibilidad, y mientras tanto que se prolongue apropiadamente el recambio y se reduzca la solubilidad in vivo por la modificacion qmmica y/o la reticulacion para cumplir los requisitos de las aplicaciones clmicas. Sin embargo, es un problema tecnico balancear la modificacion qmmica y/o la reticulacion de la macromolecula biocompatible entre los dos factores anteriores.

La modificacion con mercapto y el reticulado con enlace de disulfuro de la macromolecula biocompatible es un nuevo metodo de modificacion qmmica y de reticulado y tiene muchas ventajas, por lo tanto, muchos usos potenciales importantes en la medicina clmica. Por ejemplo, los derivados de macromolecula biocompatible modificada con mercapto han sido utilizados en la modificacion de actividad qmmica de diversos medicamentos de moleculas pequenas y medicamentos de protema de polipeptido, etcetera, y los materiales reticulados preparados a base de estos derivados de macromolecula biocompatible modificada con mercapto pueden usarse como una matriz de crecimiento celular, una matriz de curacion y regeneracion de heridas, un vehmulo de liberacion sostenida de medicamento, un vendaje para heridas, una matriz celular para incrustacion in situ, etc. (Bernkop-Schnurch, WO2000/025823; Shu et al., Biomacromolecules, 3: 1304, 2002; Bulpitt et al., WO2002/068383; Prestwich et al., WO2004/037164; Prestwich et al., WO2005/056608; Prestwich et al., WO2008/008857; Song, WO2008/071058; Song, WO2008/083542; y Gonzalez et al., WO2009/132226).

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

En terminos generales, se consideraba que se necesitaba un grado mas alto de modificacion con mercapto para la preparacion del subsiguiente material reticulado del derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto y, por lo tanto, en las referencias divulgadas antes, tanto el grado de modificacion con mercapto como el grado de reticulacion de la macromolecula biocompatible son muy altos, tal como en el informe de Shu et al. en el cual 26.8%- 66.8% de los grupos fueron modificados y reticulados (Shu et al., Biomacromolecules, 3: 1304, 2002).

Divulgacion de la presente invencion

Problema tecnico

Un problema tecnico a resolverse por la presente invencion es proporcionar un tipo de derivados de macromolecula biocompatible modificada con mercapto, con bajo grado de modificacion con mercapto. Estos derivados de macromolecula biocompatible modificada con mercapto mantienen la estructura inicial, la funcion fisiologica y la biocompatibilidad de la macromolecula biocompatible original tanto como es posible, pero tambien permiten la preparacion del material reticulado de macromolecula biocompatible con un bajo grado de reticulacion mediante la reticulacion qmmica efectiva del grupo mercapto introducido.

Otro problema tecnico a resolverse por la presente invencion es proporcionar un material de macromolecula biocompatible, reticulada, enlazada a disulfuro, con un grado muy bajo de reticulacion, enlazada a disulfuro. El material de la invencion no solamente tiene la estructura inicial, la funcion fisiologica y la biocompatibilidad de la macromolecula biocompatible original, tanto como es posible, sino tambien prolonga su recambio y reduce su solubilidad in vivo, cumpliendo mejor los requisitos de diversas aplicaciones medicinales. Ademas, el material de macromolecula biocompatible, reticulada, enlazada a disulfuro, que permite que su proceso de reticulacion se complete en un contenedor inyectable, es inyectable, conveniente para usar, libre de impurezas, biocompatible y libre de efectos secundarios toxicos y de esta manera tiene perspectivas de aplicacion muy amplias en el campo de la medicina.

Otro problema tecnico a resolverse mediante la presente invencion es proporcionar el material de macromolecula biocompatible, reticulada, enlazada a disulfuro, ya mencionado, para uso en medicina.

Solucion tecnica

Algunos de los terminos usados en la presente invencion se definen tal como sigue.

La macromolecula biocompatible se refiere a una macromolecula que tiene buena biocompatibilidad, que incluye polisacaridos, protemas, macromoleculas sinteticas, etc., en cuyo caso los polisacaridos se seleccionan de sulfato de condroitina, dermatan, heparina, heparan, acido hialuronico, sulfato de dermatan, pectina, carboximetil quitosan asf como tambien las sales (por ejemplo sales de sodio y sales de potasio) de los mismos; las macromoleculas sinteticas se seleccionan de poli(acido acnlico), poli (acido aspartico), poli (acido tartarico), poli (acido glutamico), poli (acido fumarico), asf como tambien las sales (por ejemplo sales de sodio y sales de potasio) de los mismos; las protemas se seleccionan de colageno, gelatina alcalina, gelatina acida, elastina, protema de nucleo, laminina polisacarido, fibronectina, asf como tambien las sales (por ejemplo sales de sodio y sales de potasio) de las mismas. La macromolecula biocompatible es preferiblemente sulfato de condroitina, heparina, heparan, acido hialuronico, poli (acido aspartico), poli (acido glutamico), carboximetil quitosan, gelatina alcalina y gelatina acida, asf como tambien las sales (por ejemplo sales de sodio y sales de potasio) de los mismos, y mas preferiblemente sulfato de condroitina y acido hialuronico, asf como tambien las sales (por ejemplo sales de sodio y sales de potasio) de los mismos.

El derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto se refiere a derivado obtenido introduciendo qmmicamente un grupo mercapto al grupo de cadena lateral de la macromolecula biocompatible; y el grado de modificacion de mercapto se refiere a un porcentaje de la cantidad del grupo mercapto introducido en la cantidad del grupo de cadena lateral disponible para modificacion en la macromolecula biocompatible. Por ejemplo, cuando el grupo carboxilo de cadena lateral del acido hialuronico se somete a modificacion con mercapto, el grado de modificacion con mercapto se refiere a un porcentaje de la cantidad del grupo mercapto en la cantidad total del grupo carboxilo de cadena lateral del acido hialuronico.

El reticulado con enlace de disulfuro se refiere a que el derivado de macromolecula biocompatible modificado con mercapto forma una estructura reticular tridimensional a traves del enlace de disulfuro; y el grado de reticulado de enlace de disulfuro se refiere a un porcentaje de la cantidad del grupo mercapto del derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto que forma el enlace disulfuro en la cantidad del grupo de cadena lateral disponible para modificacion en la macromolecula biocompatible.

El hidrogel se refiere a un composite que contiene mucha agua con una estructura de red de reticulacion tridimensional que se encuentra entre lfquida y solida sin fluidez. La gelificacion se refiere a un proceso por el cual el estado lfquido con fluidez se convierte en gel sin fluidez.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Viscosidad dinamica se refiere a la fuerza por unidad de area de un Ifquido requerida para moverse una unidad de distancia a una unidad de velocidad, la cual tiene una unidad de centipoise (mPas) o poise (Pa s). La viscosidad dinamica es un mdice para evaluar la viscosidad; cuanto mas pequena es la viscosidad dinamica tanto mejor es la fluidez y viceversa.

En un aspecto, la presente invencion proporciona un derivado de macromolecula biocompatible, modificada con mercapto, con un grado bajo de modificacion con mercapto, que no solamente mantiene la estructura inicial, la funcion fisiologica y la biocompatibilidad de la macromolecula biocompatible tanto como es posible, sino que tambien permite la preparacion del material reticulado de la macromolecula biocompatible con un grado bajo de reticulacion mediante reticulacion qmmica efectiva con el grupo mercapto introducido.

En la presente invencion, el derivado de macromolecula biocompatible modificado con mercapto, que tiene un grado bajo de modificacion con mercapto, puede prepararse habitualmente mediante los siguientes metodos que han sido descritos en el documento de patente WO2009006780. Un primer metodo es la qmmica de acoplamiento del grupo amino (hidrazida)/carbodiimida del grupo carboxilo de cadena lateral. La manera usual es tal como sigue: el grupo carboxilo se activa por carbodiimida para formar un producto intermedio que es seguido por sustitucion nucleofflica con un enlace disulfuro que contiene diamino o dihidrazida para producir otro producto intermedio, y finalmente el enlace de disulfuro se reduce a grupo mercapto para obtener el derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto (Shu et al., Biomacromolecules, 3, 1304, 2002; Aeschlimann et al., US 7,196,180B1). Una amina primaria que contiene el grupo mercapto libre (o una amina primaria protegida con mercapto) tambien puede usarse en lugar del enlace de disulfuro que contiene diamino o dihidrazida para obtener el derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto o un producto intermedio con grupo protector mercapto que se desprotege retirando el grupo protector mercapto para obtener el derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto (Gianolio et al., Bioconjugate Chemistry, 16, 1512, 2005). La carbodiimida anterior habitualmente se refiere a 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida clorhidrato. Un segundo metodo es hacer la preparacion por medio de una reaccion directa del grupo carboxilo de cadena lateral con la carbodiimida que contiene el enlace de disulfuro (tal como 2,2'-ditiobis(N-etil-(N'-etilcarbodiimida))), con el derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto preparada que tiene la estructura de la siguiente formula (III) (Bulpitt et al., US 6884788). Un tercer metodo es modificar el grupo amino de cadena lateral y generalmente se divide en dos vfas, es decir modificacion directa e indirecta. El metodo de modificacion directa se refiere a introducir el grupo mercapto mediante la modificacion directa del grupo amino de cadena lateral, tal como la modificacion con mercapto del grupo amino de colageno mediante el ester disuccmico bis-acilcistamina dicarbonil diimidazol activado (Yamauchi et al., Biomaterials, 22, 855, 2001; Nicolas et al., Biomaterials, 18, 807, 1997). En el tercer metodo, la modificacion con mercapto indirecta del grupo amino generalmente se divide en dos pasos. El primer paso es la carboxilacion del grupo amino, y el segundo paso es la modificacion con mercapto del grupo carboxilo mediante el primero o el segundo metodos precedentes. Un cuarto metodo es la modificacion del grupo hidroxilo de cadena lateral. La forma usual es que el grupo hidroxilo es carboxilado en condiciones basicas fuertes y luego el grupo carboxilo se modifica con mercapto de acuerdo con el primero metodo o el segundo metodo precedentes. Por ejemplo, el grupo hidroxilo de cadena lateral de tales macromoleculas como celulosa, acido hialuronico, quitina y quitosan, puede ser carboximetilado y luego se modifica con mercapto mediante la reaccion qmmica del grupo amino (hidrazida)/carbodiimida.

Para la macromolecula biocompatible con uno o mas tipos de grupo funcional (grupo carboxilo, grupo amino y grupo hidroxilo), uno o varios de los metodos anteriores pueden adoptarse para la preparacion del derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto que tiene un grado bajo de modificacion con mercapto, de la presente invencion.

En la presente invencion, el derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto, que tiene un grado bajo de modificacion con mercapto se prepara mediante los metodos de preparacion precedentes, y la presente invencion puede entonces llevarse a cabo ajustando tales parametros como la proporcion de alimentacion de los materiales de reaccion, el tiempo de reaccion y la temperatura de reaccion, etc.

En la presente invencion, la purificacion del derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto que tiene un grado bajo de modificacion con mercapto es muy importante. Las impurezas residuales pueden producir no solamente efectos secundarios toxicos, tales como inflamacion in vivo, sino tambien interfieren con la subsiguiente reticulacion enlazada a disulfuro. En la presente invencion, las impurezas residuales pueden retirarse mediante dialisis y/o precipitacion con solvente organico (por ejemplo etanol), etc.

En la presente invencion, la macromolecula biocompatible adoptada tiene un peso molecular en un intervalo de 1,00010,000,000 usualmente, preferiblemente de 10,000-3,000,000, mas preferiblemente de 20,000-1,500,000.

En la presente invencion, se mantiene la mayor parte de la estructura inicial de la macromolecula biocompatible, con un grado muy bajo de modificacion con mercapto. El derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto que tiene un grado bajo de modificacion con mercapto de la presente invencion contiene al menos tres grupos mercapto en su cadena lateral, que tienen un grado de modificacion con mercapto de < 4.5%, preferiblemente 0.5%-3.0%, mas preferiblemente 0.75%-2.5%.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Los investigadores generalmente tienen el prejuicio tecnico respecto del derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto, que un grado superior de modificacion con mercapto es esencial para la preparacion del subsiguiente material reticulado y que cumple los requisitos de las aplicaciones clmicas. Por ejemplo, la investigacion de Prestwich et al. mostraron que solamente el derivado de macromolecula biocompatible con un alto grado de modificacion con mercapto podfa rearticularse bien (Prestwich et al., WO2008/008857). Por lo tanto, los investigadores tienden por lo general a mejorar el grado de modificacion con mercapto de la macromolecula biocompatible. En 1983, Sparer et al. divulgaron los derivados de glicosaminoglicano ester metflico de (acido hialuronico y sulfato de condroitina)-cistema, en cuyo caso el ester metflico de cistema estaba acoplado con el glicosaminoglicano a traves de un enlace de amida, y 5%- 87% del grupo carboxilo de cadena lateral del glicosaminoglicano fue modificado en un grupo mercapto (Sparer et al., capftulo 6, paginas 107-119, Controlled Release Delivery System, editado por Theodore J. Roseman y S.Z. Mansdorf, Marcel Dekker Inc.). En 2005 Gianolio et al. divulgaron el derivado de acido hialuronico-cisteamina, en cuyo caso la cisteamina estaba acoplada con el grupo carboxilo de cadena lateral del acido hialuronico por medio de un enlace de amida y 22% del grupo carboxilo de cadena lateral del acido hialuronico fue modificado en el grupo mercapto (Gianolio et al., Bioconjugate Chemistry, 16: 1512-1518, 2005). En 2008 Yin et al. divulgaron el derivado de acido hialuronico- cisteamina, en cuyo caso la cisteamina estaba acoplada con el grupo carboxilo de cadena lateral del acido hialuronico a traves de un enlace de amida, el derivado contema tanto 10-200 mmol/g de grupos mercapto, como tambien 120-500 mmol/g de enlace de disulfuro, y el grado de modificacion con mercapto fue de 10%-48% calculado con base en que la unidad de repeticion de disacarido del acido hialuronico tema un peso molecular de 400 (es decir 10%-48% del grupo carboxilo de cadena lateral del acido hialuronico fue modificada con mercapto) (Yin et al., CN 101367884). El derivado de acido hialuronico modificado con mercapto, acoplado por medio del enlace de hidrazida, divulgado por Shu et al. tema un grado de modificacion con mercapto de 26.8%-66.8% (Shu et al., Biomacromolecules, 3: 1304, 2002).

Sin embargo, cuando el grado de modificacion con mercapto es alto, la estructura inicial de la macromolecula biocompatible se modifica creativamente lo cual puede comprometer su funcion fisiologica y biocompatibilidad. Por ejemplo, los resultados de la investigacion de Wang et al. mostraron que el derivado de quitosan modificado con mercapto produjo toxicidad celular significativa a un alto grado de modificacion con mercapto (Wang et al., Chemical Journal of Chinese Universities, 29: 206-211,2008). La presente investigacion tambien mostro que el alto grado de modificacion con mercapto cambio la estructura del acido hialuronico e interfirio en el enlazamiento con su receptor (por ejemplo CD44).

En la presente invencion, el derivado de macromolecula biocompatible modificado con mercapto que tema un bajo grado de modificacion con mercapto fue purificado mediante uno mas de los metodos anteriores con las impurezas residuales usualmente menores que 1/1,000 e incluso que 1/10,000 (contenido en peso).

La presente invencion tiene los siguientes efectos ventajosos: el derivados de macromolecula biocompatible modificada con mercapto con un grado bajo de modificacion con mercapto de la presente invencion tiene un muy bajo grado de modificacion con mercapto, no solo manteniendo la estructura inicial, la funcion fisiologica y la biocompatibilidad de la macromolecula biocompatible tanto como es posible, sino tambien teniendo tales caractensticas como el bajo consumo de materias primas y un tiempo breve de reaccion. Ademas, el derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto que tiene un grado bajo de modificacion con mercapto de la presente invencion pueden usarse convenientemente en la preparacion de materiales reticulados y cumpliendo los requisitos de diversas aplicaciones clmicas. Ademas, la presente invencion tambien supera el prejuicio tecnico precedente de que un alto grado de modificacion con mercapto es esencial para la preparacion del subsiguiente material reticulado del derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto y cumple los requisitos de las aplicaciones clmicas.

En otro aspecto, la presente invencion proporciona un material de macromolecula biocompatible reticulada, enlazada con disulfuro, con un muy bajo grado de reticulacion enlazada con disulfuro, que no solamente mantiene la estructura inicial, la funcion fisiologica y la biocompatibilidad de la macromolecula biocompatible tanto como es posible, sino tambien prolonga su recambio y reduce la solubilidad in vivo, cumpliendo mejor los requisitos de diversas aplicaciones clmicas. El material de macromolecula biocompatible reticulada, enlazada con disulfuro de la presente invencion usualmente esta presente en forma de hidrogel que tiene un contenido de agua preferiblemente de mas de 95% (p/v, g/ml), y mas preferiblemente de mas de 98% (p/v, g/ml). El hidrogel de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de la presente invencion puede hacerse en diversas formas solidas tales como pelmula esponja despues de secarse o liofilizarse.

El hidrogel de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de la presente invencion fue hecha a partir del derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto que tiene un grado bajo de modificacion con mercapto de la presente invencion. Un primer metodo de preparaciones tal como sigue: el derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto, que tiene un grado bajo de modificacion con mercapto de la presente invencion, se disuelve en agua para obtener una solucion de una concentracion adecuada (habitualmente de 0.2%-5.0%), la cual se ajusta a un valor de pH espedfico (habitualmente neutro, es decir un valor de pH de aproximadamente 7) y luego el grupo mercapto se oxida bajo la accion del oxfgeno en el aire y el oxfgeno disuelto en la solucion para formar gradualmente el enlace de disulfuro, lo que hace que la solucion se gelatine gradualmente y se incremente gradualmente la viscosidad dinamica de la solucion, lo que hace finalmente de la solucion pierda fluidez para formar una estructura de red reticulada

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

tridimensional. Un oxidante (por ejemplo, peroxido de hidrogeno) puede agregarse ademas a la solucion anterior para acelerar el proceso de reticulacion.

Un segundo metodo de preparacion del hidrogel de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de la presente invencion es usar el metodo divulgado por Shu et al. (WO2010043106). En este metodo, el proceso de gelificacion puede completarse en un contenedor inyectable y el gel tiene la ventaja de permitir la inyeccion, el uso conveniente, sin impurezas, con buena biocompatibilidad, sin efectos secundarios toxicos, etc. Este metodo es espedficamente tal como sigue: el derivado de macromolecula biocompatible modificado con mercapto que tiene un grado bajo de modificacion con mercapto de la presente invencion se disuelve en agua para obtener una solucion de una concentracion adecuada (habitualmente de 0.2%-5.0%), la cual se ajusta a un valor de pH espedfico (habitualmente neutro), y luego la solucion se envasa en un contenedor inyectable y se sella, y el grupo mercapto forma gradualmente el enlace de disulfuro principalmente bajo la accion de la oxidacion del oxfgeno disuelto en la solucion, lo que hace que la solucion se gelatine gradualmente y se incremente gradualmente la viscosidad dinamica de la solucion, lo cual hace finalmente que la solucion pierda fluidez para formar una estructura reticulada de red tridimensional. Un oxidante (por ejemplo, peroxido de hidrogeno) puede agregarse ademas a la solucion anterior para acelerar el proceso de reticulacion.

Un procedimiento aseptico o un procedimiento de esterilizacion terminal (por ejemplo el procedimiento de esterilizacion al calor humedo usado comunmente en la industria farmaceutica) pueden adoptarse en la produccion cuando se adopta el segundo metodo de preparacion del hidrogel de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de la presente invencion para cumplir los diferentes requisitos de la medicina clmica. La lmea de produccion para llenado, utilizada comunmente en la industria farmaceutica, puede usarse para realizar la produccion a gran escala industrial con un rendimiento por hora que facilmente es de mas de 3000 unidades. La lmea de produccion de llenado puede seleccionarse de una lmea de produccion de pre llenado de jeringa completamente automatica en lmea recta o una maquina de pre llenado y taponado completamente automatica de jeringa de colmena, fabricada por la compama Groninger, y una maquina de llenado del lfquido en jeringa pre-esterilizada, fabricada por la compama Bosch de Alemania, etc.. El contenedor inyectable puede ser una jeringa hecha de vidrio o de plastico, tal como la jeringa de pre-esterilizacion Hypak SCF fabricada por la compama BD, y la jeringa tambien puede reemplazarse por tales contenedores extrudibles como una bolsa plastica blanda.

En el hidrogel de macromolecula biocompatible reticulada de enlace de disulfuro de la presente invencion, el derivado de macromolecula biocompatible modificado con mercapto, que tiene un bajo grado de modificacion con mercapto de la presente invencion, se utiliza como materia prima y el grado de reticulacion enlazada con disulfuro depende del grado de modificacion con mercapto (< 4.5%); por lo tanto, el hidrogel de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de la presente invencion tambien tiene un grado muy bajo de reticulacion enlazada con disulfuro (< 4.5%). Habitualmente mas de la mitad de los grupos diol en el hidrogel de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de la presente invencion se oxida para producir el enlace de disulfuro, lo cual da lugar a la formacion de la estructura de red reticulada tridimensional, perdida de fluidez de la solucion lfquida y la muy alta viscosidad dinamica. Comparada con la solucion no reticulada, la viscosidad dinamica del hidrogel de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de la presente invencion se incrementa habitualmente en mas de 50 veces y puede incrementarse en mas de 500 veces en condiciones optimas. El hidrogel de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de la presente invencion tiene tales caractensticas que tiene una ventaja unica en tales aplicaciones clmicas importantes como la prevencion y el control de adhesion post-operativa y el tratamiento visco-suplementario de osteoartritis.

La viscosidad dinamica del hidrogel de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de la presente invencion se midio con un viscosfmetro de rotacion a una tasa de cizallamiento de no menos de 0.25 Hz y una temperatura de 25 ± 0.1 °C de acuerdo con el segundo metodo en el Apendice VI G de la Farmacopea de la Republica Popular China (segunda parte, edicion de 2005), y tfpicamente es de mas de 10,000 centipoises (mPas), preferiblemente mayor que 25,000 centipoises (mPas), y mas preferiblemente mayor que en 40,000 centipoises (mPas).

El material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de la presente invencion puede contener uno o mas derivados de macromolecula biocompatible modificada con mercapto que tienen un grado bajo de modificacion con mercapto de la presente invencion, asf como tambien una o mas de otras sustancias. Estas sustancias pueden ser polisacaridos, protemas o macromolecula sinteticas tales como sulfato de condroitina, heparina, heparan, acido algmico, acido hialuronico, poli (acido aspartico), poli (acido glutamico), quitosan, carboximetil-quitosan, colageno, gelatina alcalina y gelatina acida y como tambien las sales (por ejemplo sales de sodio y sales de potasio) y derivados de los mismos, preferiblemente hialuronato de sodio, sulfato de condroitina, heparina sodica, gelatina alcalina y gelatina acida, etc., y mas preferiblemente hialuronato de sodio, sulfato de condroitina y heparina sodica; estas sustancias tambien pueden ser ingredientes activos que incluyen esteroides, antibioticos, medicamentos para el tratamiento de tumores y diversos medicamentos de protema de polipeptidos tales como hormonas corticales (de esteroides), por ejemplo beclometasona, dipropionatos de beclometasona, budesonide, dexametasona, prednisolone, y prednisone; nuevamente como diversos medicamentos de protema de polipeptido, por ejemplo diversos factores de crecimiento (un factor de crecimiento alcalino, un factor de crecimiento acido, un factor de crecimiento de vaso sangumeo, un factor de crecimiento de osificacion, etc.),

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

y acidos nucleicos (por ejemplo ARN). Estos ingredientes activos pueden dispersarse y/o disolverse en forma de partmulas solidas en el material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de la presente invencion.

En la presente aplicacion en el campo de la medicina se requiere que el hidrogel de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro debe tener una vida util de almacenamiento apropiada, y sus propiedades deben ser estables. Sin embargo, el hidrogel de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro que tiene un alto grado de modificacion no es estable, el hidrogel se contrae gradualmente de modo que se extrae una gran cantidad de agua del hidrogel mientras se incrementa el tiempo de almacenamiento lo cual hace que la viscosidad dinamica se reduzca en gran medida y afecte seriamente las propiedades de gel, por lo cual no se cumplen las necesidades de las aplicaciones clmicas practicas y se restringe seriamente la aplicacion del hidrogel de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro en el campo de la medicina. Por ejemplo, el volumen del hidrogel se contrae en aproximadamente 30% despues que el hidrogel de acido hialuronico reticulado enlazado con disulfuro (que tiene un grado de modificacion con mercapto de 13.5%) ha sido almacenado a temperatura ambiente durante seis meses.

El hidrogel de macromolecula biocompatible reticulado enlazado con disulfuro de la presente invencion fue hecho a partir del derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto que tiene un grado bajo de modificacion con mercapto de la presente invencion, los efectos tecnicos inesperados se lograron y el problema anterior de inestabilidad del hidrogel de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro fue resuelto. Los ensayos de estabilidad acelerada de seis meses mostraron que el hidrogel de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro tema buena estabilidad, lo cual se describira adicionalmente con referencia a los ejemplos.

La presente invencion tiene los siguientes efectos ventajosos: el material de macromolecula biocompatible reticulado enlazado con disulfuro de la presente invencion, que tiene un muy bajo grado de reticulacion, no solo mantiene la estructura inicial, la funcion fisiologica y la biocompatibilidad de la macromolecula biocompatible tanto como es posible, sino que tambien tiene la viscosidad dinamica muy alta, prolonga efectivamente el recambio y reduce la solubilidad de la macromolecula biocompatible in vivo, cumple mejor los requisitos de diversas aplicaciones clmicas. La presente invencion tiene ademas el siguiente efecto tecnico ventajoso de que el hidrogel de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de la presente invencion tiene buena estabilidad.

En otro aspecto, la presente invencion proporciona ademas la aplicacion del anterior material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro en el campo de la medicina.

Las aplicaciones del material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de la presente invencion en medicina incluyen los siguientes aspectos: puede usarse como vendaje para heridas en la piel u otras heridas para promover la curacion de heridas; tambien puede usarse para prevenir adhesion lo cual incluye la adhesion fibrosa entre tejidos u organos despues de cirugfa (por ejemplo, cirugfa de sinusitis); tambien puede usarse en el tratamiento visco- suplementario de osteoartritis como un lubricante de rodilla.

Las aplicaciones del material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro, preparada mediante la presente invencion en farmacia incluyen que puede usarse como un vehmulo de liberacion sostenida para diversas sustancias terapeuticas activas para realizar liberacion sostenida. Las sustancias terapeuticas activas pueden ser un medicamento qmmico o un factor biologicamente activo, que incluyen antiflogfsticos, antibioticos, analgesicos, anestesicos, promotores de curacion de heridas, promotores o inhibidores de crecimiento celular, inmuno-estimulantes, medicamentos antivirales, etc.

Efectos ventajosos

La presente invencion tiene los siguientes efectos ventajosos: el derivado de macromolecula biocompatible modificado con mercapto que tiene un grado bajo de modificacion con mercapto de la presente invencion tiene un muy bajo grado de modificacion con mercapto, manteniendo no solamente la estructura inicial, la funcion fisiologica y la biocompatibilidad tanto como es posible sino tambien teniendo caractensticas tales como consumo bajo de materia prima y un presupuesto de breve tiempo de reaccion. Ademas, el derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto que tiene un grado bajo de modificacion con mercapto de la presente invencion puede usarse de manera conveniente en la preparacion de materiales reticulados y cumpliendo los requisitos de diversas aplicaciones clmicas. Ademas, la presente invencion tambien supera el prejuicio tecnico precedente de que un alto grado de modificacion con mercapto es esencial para la preparacion del subsiguiente material del derivado de macromolecula biocompatible reticulada modificada con mercapto y para cumplir los requisitos de las aplicaciones clmicas.

La presente invencion tiene los siguientes efectos ventajosos: el material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de la presente invencion, que tiene un muy bajo grado de reticulacion, no solo mantiene la estructura inicial, la funcion fisiologica y la biocompatibilidad de la macromolecula biocompatible tanto como es posible, sino que tambien tiene la viscosidad dinamica muy alta, prolongue efectivamente el recambio y reduce la solubilidad de la macromolecula biocompatible in vivo, cumple mejor los requisitos de diversas aplicaciones clmicas. La presente

invencion tambien tiene el siguiente efecto tecnico ventajoso de que el hidrogel de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de la presente invencion tiene buena estabilidad.

Descripcion del dibujo

La Fig. 1 es un diagrama esquematico de los resultados experimentales del ejemplo 12 de la presente invencion (es decir 5 un diagrama de distribucion de peso de una pata trasera izquierda).

Mejor modo

Modo para invencion

Los siguientes ejemplos pueden hacer que aquellos versados en la tecnica entiendan mas completamente la presente invencion.

10 Ejemplo 1: Preparacion y caracterizacion del derivado de acido hialuronico modificado con mercapto

La preparacion fue hecha de acuerdo con el metodo divulgado por Shu et al. en Biomacromolecules, 3, 1304, 2002. Se adiciono dehidrazida ditiodipropionica a una solucion de acido hialuronico (11.9 g) en agua destilada (2L).la mezcla fue agitada hasta disolverse. Despues se ajusto el valor de pH de la solucion a 4.75 con acido clorhndrico de 0.1 mol/L; se adiciono una cierta cantidad de 1-etil-3-(3-dimetilaminepropil) carbodiimida clorhidrato (EDCI) (Aldrich, Estados Unidos) 15 de acuerdo con la tabla 1 con agitacion electromagnetica. Se adiciono continuamente una cantidad de acido clortndrico de 0.1 mol/L a la solucion anterior para mantener la solucion a pH 4.75. La reaccion se termino adicionando hidroxido de sodio de 1.0 mol/L para ajustar el valor de pH 7.0. Despues se adicionaron 100 g de ditiotreitol (Diagnostic Chemical Limited, Estados Unidos) y una cantidad de hidroxido de sodio de 1.0 mol/L con agitacion. El valor de pH de la solucion se ajusto a 8.5. La reaccion se agito de modo electromagnetico a temperatura ambiente durante 24 horas. Luego se 20 adiciono acido clorhndrico de 1 mol/L a la solucion anterior hasta un pH de 3.0. La solucion anterior se cargo a un tubo de

dialisis (corte de peso molecular (MWCO) de 3,500, Sigma, Estados Unidos), y fue sometida a dialisis durante 5 dfas frente a gran cantidad de acido clorhndrico de 0.001 mol/L y cloruro de sodio de 0.2 mol/L; el dializado se cambiaba cada 8 horas; luego la solucion se sometio nuevamente a dialisis por 3 dfas frente a gran cantidad de acido clorhndrico de 0.001 mol/L, y el dializado se cambiaba cada 8 horas. Finalmente, la solucion en el tubo de dialisis se recogio para aplicacion 25 directa o liofilizacion para producir un solido en forma de floculos.

El contenido el grupo mercapto fue detectado mediante el metodo modificado de Ellman, reportado por Shu et al. en Biomacromolecules, 3, 1304, 2002 y el grado de modificacion con mercapto fue calculado, o el grado de modificacion con mercapto fue medido usando resonancia magnetica nuclear de espectro de hidrogeno (1H-RMN) (con D2O en calidad de solvente) (tomando el pico de absorcion del grupo metilo caractenstico del grupo acetilo de acido hialuronico como el 30 estandar interno). El grado de modificacion con mercapto se refiere a un porcentaje de la cantidad del grupo mercapto en la cantidad total del grupo carboxilo de cadena lateral del acido hialuronico, con los resultados de medicion tal como sigue:

Tabla 1: Grado de modificacion con mercapto

Numero de serie: 1 2 3 4 5 6 7 8 9

Cantidad de alimentacion de EDCI (g): 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 2.4 9.6

Grado de moficiacion con mercapto (%): 0.48 1.04 1.46 2.33 3.24 4.18 4.61 10.6 37

Ejemplo 2: Preparacion y caracterizacion del derivado de sulfato de condroitina modificado con mercapto

35 1 g sulfato de condroitina (tipo c, de cartflago de tiburon, Sigma, Estados Unidos) fue disuelto en 100 ml de agua destilada

para dar una solucion clara y transparente. A la solucion se adicionaron 0.6 gramos de dihidrazida ditiodipropionica. La mezcla se agito hasta disolverse. Luego se ajusto el valor de pH de la solucion a 4.75 con acido clorhndrico de 0.1 mol/L y se adiciono cierta cantidad de 2-etil-3-(3-dimetilaminepropil) carbodiimida clorhidrato (EDCI) (Aldrich, Estados Unidos) de acuerdo con la tabla 2 con agitacion electromagnetica. Se adiciono continuamente una cantidad de acido clorhndrico 40 de 0.1 mol/L a la solucion anterior para mantener la solucion a pH 4.75. La solucion se agito de modo electromagnetico durante 2 horas a temperatura ambiente. Luego se adicionaron 10 g de ditiotreitol (Diagnostic Chemical Limited, Estados Unidos) y un poco de hidroxido de sodio de 0.1 mol/L con agitacion. Entretanto, continuamente fue adicionado hidroxido de sodio de 0.1 mol/L para mantener la solucion a pH 8.5, y la solucion fue agitada de modo electromagnetico durante 4 horas a temperatura ambiente. Luego se agrego acido clorhndrico de 6 mol/L a la solucion anterior hasta pH 3.0. La 45 solucion anterior se cargo a tubo de dialisis (del MWCO de 2,000, Sigma, Estados Unidos), y fue sometida a dialisis durante 5 dfas frente a 2 L de solucion de acido clorhndrico (0.001 mol/L) y cloruro de sodio (0.3 mol/L), y el dializado se

cambio cada 8 horas; luego la solucion se sometio a dialisis nuevamente por 3 dfas frente a 2 L de acido clortndrico (0.001 mol/L), y el dializado se cambio cada 8 horas. Finalmente la solucion en el tubo de dialisis fue recogida para aplicacion directa o liofilizacion para dar solido blanco en forma de floculos.

El contenido del grupo mercapto fue detectado mediante el metodo modificado de Ellman reportado por Shu et al. en 5 Biomacromolecules, 3, 1304, 2002 y fue calculado el grado de modificacion con mercapto, o fue medido el grado de modificacion con mercapto usando la resonancia magnetica nuclear de espectro de hidrogeno (1H-RMN) (con D2O en calidad de solvente) (tomando el pico de absorcion del grupo metilo caractenstico del grupo acetilo de sulfato de condroitina como el estandar interno). El grado de modificacion con mercapto se refiere a un porcentaje de la cantidad del grupo mercapto en la cantidad total del grupo carboxilo de cadena lateral del sulfato de condroitina, con los resultados de 10 medicion tal como sigue:

Tabla 2: Grado de modificacion con mercapto

Numero de serie: 1 2 3 4 5 6 7 8 9

Cantidad de alimentacion de EDCI (g): 0.01 0.015 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.12 0.48

Grado de moficiacion con mercapto (%): 0.88 1.54 1.96 3.33 4.50 5.18 6.81 15.6 42.1

Ejemplo 3: Preparacion y caracterizacion del derivado de acido hialuronico modificado con mercapto

Se adicionaron sal sodica de sulfo-N-hidroxi succinimida (Sulfo-NHS), cistamina diclorhidrato (CYS) y 1-etil-3-(3- 15 dimetilaminopropil) carbodiimida clorhidrato (EDCI) a una solucion de acido hialuronico (10 g) en agua destilada (1L) respectivamente de acuerdo a las cantidades en la tabla 3. La mezcla fue agitada hasta disolverse. Luego se ajusto el valor de pH de la solucion a 4.5-6.5 con acido clortndrico de 0.1 mol/L con agitacion electromagnetica para hacer reaccionar por un penodo de tiempo. Continuamente se adiciono una cantidad de acido clortndrico de 0.1 mol/L a la solucion anterior para mantener la solucion a pH 4.5-6.5. La reaccion fue terminada adicionando hidroxido de sodio de 20 1.0 mol/L para ajustar el valor de pH a 8.5. Luego se adicionaron con agitacion 50 g de ditiotreitol (Diagnostic Chemical

Limited, Estados Unidos) y una cantidad de hidroxido de sodio de 1.0 mol/L. El valor de pH de la solucion fue ajustado a 8.5. La solucion fue agitada de modo electromagnetico durante 24 horas a temperatura ambiente. Luego se adiciono acido clortndrico de 1 mol/L a la solucion anterior hasta un pH de 3.0. La solucion anterior fue cargada a tubo de dialisis (el MWCO de 3,500, Sigma, Estados Unidos), y fue sometida a dialisis por 5 dfas frente a gran cantidad de acido clortndrico 25 de 0.001 mol/L y cloruro de sodio de 0.5 mol/L, y el dializado cambio cada 8 horas; luego la solucion se sometio a dialisis nuevamente durante 3 dfas frente a gran cantidad de acido clortndrico de 0.001 mol/L, y el dializado cambio cada 8 horas. Finalmente, se recogio la solucion en el tubo de dialisis para aplicacion directa o liofilizacion para producir un solido blanco en forma de floculos.

El contenido del grupo mercapto fue detectado mediante el metodo modificado de Ellman reportado por Shu et al. en 30 Biomacromolecules, 3, 1304, 2002 y se calculo el grado de modificacion con mercapto, o se midio el grado de modificacion con mercapto usando la resonancia magnetica nuclear del espectro de hidrogeno (1H-RMN) (con D2O en calidad de solvente) (tomando el pico de absorcion del grupo metilo caractenstico del grupo acetilo de acido hialuronico como estandar interno). El grado de modificacion con mercapto se refiere a un porcentaje de la cantidad del grupo mercapto en la cantidad total del grupo carboxilo de cadena lateral del acido hialuronico, con los resultados de medicion tal como sigue:

35 Tabla 3: Grado de modificacion con mercapto

Numero de serie: 1 2 3 4 5 6 7 8 9

Sulfo-NHS (g): 5.43 21.62 5.43 11.62 2.72 10.86 21.62 5.43 5.43

CYS (g): 22.6 11.3 33.9 17 5.625 22.6 11.3 22.6 11.3

EDCI (g): 4.8 9.6 4.8 2.4 2.4 1.2 1.2 2.4 0.72

Tiempo de reaccion (horas): 12 3 1 1 1 1 8 8 8

Grado de moficiacion con mercapto (%): 13.5 4.83 1.54 0.84 0.73 0.51 2.14 3.97 1.28

Ejemplo 4: Preparacion del hidrogel de acido hialuronico reticulado enlazado con disulfuro

Los dos tipos de derivado de acido hialuronico modificado con mercapto preparados en el ejemplo 1 (que tienen un grado de modificacion con mercapto de 2.33% y 4.18%, y se indican como los Nos. 4 y 6 en la Tabla 1, respectivamente) fueron 40 disueltos para dar una solucion de 10 mg/ml, una solucion de 15 mg/ml y una solucion de 20 mg/ml, respectivamente, con los valores de pH ajustados a 7.4. Las anteriores soluciones (2 ml) se transfirieron a botellas de vidrio de 10 ml y se

5

10

15

20

25

30

35

40

sellaron respectivamente y reposar una temperature ambiente por una semana. De esta manera las soluciones perdieron su fluidez y formaron los hidrogeles reticulados y el contenido de agua de los hidrogeles (g/ml) fue respectivamente de 99%, 98.5% y 98%.

Ejemplo 5: Preparacion del hidrogel de sulfato de condroitina reticulado enlazado con disulfuro

El derivado de sulfato de condroitina modificado con mercapto, preparado en el ejemplo 2 (que tiene un grado de modificacion con mercapto de 4.50%, y se indica como No. 5 en la Tabla 2) fue disuelto para dar una solucion de 50 mg/ml y una solucion de 80 mg/ml, respectivamente, con los valores de pH ajustados a 7.4. Las anteriores soluciones (2 ml) fueron transferidas a botellas de vidrio de 10 ml y selladas respectivamente, y reposar una temperatura ambiente por una semana. De esta manera, las soluciones perdieron su fluidez y formaron los hidrogeles reticulados y el contenido de agua de los hidrogeles (g/ml) fue respectivamente de 95% y 92%.

Ejemplo 6: Preparacion del hidrogel de acido hialuronico reticulado enlazado con disulfuro

Los cuatro tipos de derivados de acido hialuronico modificado con mercapto, preparados en el ejemplo 3 (que tienen un grado de modificacion con mercapto de 1.28%, 1.54%, 2.14% y 3.97%, y se indican como los Nos. 3, 7, 8 y 9 en la Tabla 3, respectivamente) fueron disueltos para dar una solucion de 5 mg/ml solution, una solucion de 7.5 mg/ml y una solucion de 10 mg/ml, respectivamente, con los valores de pH ajustados a 7.4. Las anteriores soluciones (2 ml) fueron transferidas a botella de vidrio de 10 ml y selladas respectivamente y reposaron a temperatura ambiente durante 10 dfas. De esta manera las soluciones perdieron su fluidez y formaron los hidrogeles reticulados y el contenido de agua de los hidrogeles (g/ml) fue respectivamente de 99.5%, 99.25% y 99%.

Ejemplo 7: Preparacion de hidrogel de acido hialuronico o reticulado enlazado con disulfuro

El derivado de acido hialuronico modificado con mercapto, preparado en el ejemplo 3 (que tiene un grado de modificacion con mercapto de 2.14%, y se indica como el No. 7 en la Tabla 3) fue disuelto para dar una solucion de 10 mg/ml y luego se adicionaron la solucion de acido hialuronico (5 mg/ml) y la solucion de sulfato de condroitina (10 mg/ml) de acuerdo con una proporcion del volumen de 2:1, respectivamente, con el valor de pH ajustado a 7.4. 2 ml de la solucion anterior fue transferida a una botella de vidrio de 10 ml y sellada, y reposo a temperatura ambiente durante 10 dfas. De esta manera la solucion perdio su fluidez informo el hidrogel reticulado.

Ejemplo 8: Medicion de viscosidad dinamica del hidrogel de acido hialuronico reticulado enlazado con disulfuro

La viscosidad dinamica del hidrogel de acido hialuronico reticulado enlazado con disulfuro, preparado en el ejemplo 6, fue medida con un viscosfmetro de rotacion a una tasa de cizallamiento de no menos de 0.25 Hz y una temperatura de 25 ± 0.1 °C de acuerdo con el segundo metodo en el Apendice VI G del volumen II, Farmacopea de la Republica Popular China (Edicion de 2005), con los resultados tal como se muestran en la tabla 4. La viscosidad dinamica del hidrogel reticulado fue incrementada en 408-547 veces en comparacion con la solucion correspondiente de acido hialuronico no modificado.

Tabla 4. Viscosidad dinamica (mPas)

Concentracion de acido hialuronico (mg/ml): Grado de Grado de Grado de Grado de Grado de

moficiacion
moficiacion
moficiacion
moficiacion
moficiacion

con mercapto (%) 0: con mercapto (%) 1.28 con mercapto (%) 1.54 con mercapto (%) 2.14 con mercapto (%) 3.97

5: 137 75000 78000 81000 88000

7.5: 198 >100000 >100000 >100000 >100000

10: 245 >100000 >100000 >100000 >100000

Ejemplo 9: Preparacion y ensayo de estabilidad del hidrogel de acido hialuronico reticulado enlazado con disulfuro

Hidrogel 1: El derivado de acido hialuronico modificado con mercapto, preparado en el ejemplo 3 (que tiene un grado de modificacion con mercapto de 13.5%, y se indica como el No. 1 en la Tabla 3) fue disuelto para dar una solucion de 10 mg/ml, con el valor de pH ajustado a 7.4. 2 ml de la solucion anterior se transfirieron a una botella de vidrio de 10 ml y se sello, y reposo a temperatura ambiente por 10 dfas. De esta manera la solucion perdio su fluidez informo el hidrogel reticulado.

Hidrogel 2: El hidrogel preparado en el ejemplo 6 (el derivado modificado con mercapto de acido hialuronico, preparado en el ejemplo 3, que tiene una concentracion de acido hialuronico de 10 mg/ml y un grado de modificacion con mercapto de 1.54%, se indica como el No. 3 en la Tabla 3).

De esta manera es claro que el grado de modificacion con mercapto de la materia prima de Hidrogel 2 (es decir 1.54%) es obviamente mas bajo que el de la materia prima de Hidrogel 1 (es decir 13.5%); es decir, el grado de reticulacion del hidrogel 2 es obviamente mas bajo que el del hidrogel 1.

Ensayo de estabilidad: se realizo un ensayo de estabilidad acelerada en los hidrogeles de acuerdo con el Principio Gma 5 de Ensayo de Estabilidad de Sustancias Medicamentosas y Producto Medicamentoso, tal como esta dispuesto en XIX C de volumen II, Farmacopea China, edicion de 2010, con la temperatura mantenida a 40 ±2 °C por 6 meses; el muestreo y la medicion de la viscosidad dinamica y el porcentaje de contraccion (%) del hidrogel al final de 0, 1, 2, 3 y 6 meses durante el ensayo, con los resultados tal como se muestran en la tabla 5. Para el hidrogel 1 que tiene un alto grado de reticulacion, para el cual se realizaron ensayos de estabilidad acelerada, la viscosidad dinamica se redujo de manera 10 pronunciada y el volumen del gel disminuyo de manera consecutiva; el volumen del gel tuvo un porcentaje que disminrna en 10.2%, 35.1%, 39.2% y 41.4% respectivamente despues de 1,2, 3 y 6 meses, con una gran cantidad de agua extrafda del gel. Mientras que el hidrogel 2 tema un bajo grado de reticulacion segun la presente invencion mantuvo una buena estabilidad.

Tabla 5: Resultados de ensayos de estabilidad


: Tiempo (mes) 0 Tiempo (mes) 1 Tiempo (mes) 2 Tiempo (mes) 3 Tiempo (mes) 6

Hidrogel 1: Viscosidad dinamica >100000 8750 < 5000 < 5000 < 5000

Hidrogel 1: Porcentaje de concentracion (%) 0 10.2 35.1 39.2 41.4

Hidrogel 2: Viscosidad dinamica >100000 >100000 >100000 >100000 >100000

Hidrogel 2: Porcentaje de concentracion (%) 0 0 0 0 0

15

Ejemplo 10: El hidrogel de acido hialuronico o reticulado enlazado con disulfuro para prevenir estenosis de ostium de seno despues de la cirugfa de sinusitis

10 conejos blancos machos, pasteurizados de Nueva Zelanda, con un peso de 3.5-4.0 kg fueron anestesiados mediante inyeccion intramuscular de ketamina (35 mg/kg) y toluolzosin (5 mg/kg). Despues de pelar el lado trasero externo de sus 20 narices, los conejos fueron desinfectados con yodo y luego anestesiados con un lfquido mezclado de 3 ml de lidocama al 1% y adrenalina 1:100,000. En condiciones asepticas se hizo una incision perpendicular de 2.5 mm a lo largo de la lmea media y los tejidos blandos y el periosteo cubierto sobre el geniantro se levantaron se separaron. La pared anterior del geniantro se abrio con un taladro electrico quirurgico y se quebro entre la pared media del geniantro y la cavidad nasal con un taladro de corte esferico de 4 mm, formando de esta manera un ostium cilmdrico de 4 mm de diametro sin mucosa 25 en el borde. 5 conejos en ambos lados del ostium se llenaron con el hidrogel preparado en el ejemplo 6 (que tema una concentracion de acido hialuronico de 10 mg/ml, y un grado de modificacion con mercapto de 1.54%) (el grupo tratado), y los otros 5 conejos en sus ambos lados del ostium se llenaron con nada (el grupo de control). Luego, el periosteo fue suturado de manera interrumpida con una sutura absorbible y la piel fue suturada con una sutura absorbible para sellar el geniantro. No se autorizo otro vendaje. Los animales fueron alimentados con dieta normal y agua potable despues de la 30 operacion.

Los conejos fueron sacrificados despues de dos semanas. Se hizo una incision en la herida curada despues de la muerte para exponer la cavidad del seno. El residuo en la cavidad deceno fue lavada con agua y se succiono suavemente con extractor. La pared media del seno se inspecciono con un endoscopio nasal de 30° y se registro. Cada ostium fue medido con una regla de escala milimetrica. Se observo el ostium y se midio mediante el metodo doble-ciego. El ostium en el 35 grupo tratado tema un diametro de 2.78 ±1.17 mm, mientras que el ostium del grupo de control tema un diametro de 0.7

± 0.52 mm.

La estenosis del ostium, como un problema importante con la cirugfa clmica de sinusitis, afectara el efecto quirurgico e incluso causara el relapso de sinusitis. Los resultados anteriores indican que el hidrogel de acido hialuronico reticulado enlazado con disulfuro, que tiene un bajo grado de reticulacion segun la presente invencion, puede prevenir la estenosis 40 del ostium de manera significativa y de esta manera se espera que tenga amplias aplicaciones en clmica.

Ejemplo 11: Aplicacion del hidrogel de acido hialuronico reticulado enlazado con disulfuro en prevencion de adhesion posoperatoria

Se utilizo modelo de ciego de rata reportado por Hemadeh et al. (Surgery 114: 907-10, 1993) y Yetkin et al. (Int J Surg 7: 561-65, 2009). El procedimiento es resumido tal como sigue: se dividieron 32 ratas en 3 grupos y el brillo de serosa de la 45 serosa del ciego fue descartada utilizando gasa esteril hasta que la superficie estaba sangrando; luego se anadio una

5

10

15

20

25

30

35

40

45

gota de etanol anhidro sobre la superficie sangrante para inducir mas adhesion; el Grupo 1 fue un grupo de control sin ningun tratamiento, el grupo 2 fue tratado con 1 ml de solucion de acido hialuronico (10 mg/ml) disponible comercialmente, y el grupo 3 fue tratado con el hidrogel preparado en el ejemplo 6 (que tiene una concentracion de acido hialuronico de 10 mg/ml y un grado de modificacion con mercapto de 1.54%); finalmente la herida superficial de las ratas fue suturada. Despues de dos semanas las ratas fueron sacrificadas y diseccionadas para observar el estado de adhesion.

La adicion fue evaluada de acuerdo con el sistema de evaluacion de adhesion de Yetkin et al. (Int J Surg 2009; 7: 56165), con los resultados tal como se muestran en la Tabla 6. El grupo de control blanco (grupo 1) tema adhesion severa, el grupo terapeutico de acido hialuronico disponible comercialmente (grupo 2) tema un cierto grado de adhesion y el hidrogel de acido hialuronico reticulado enlazado con disulfuro segun la presente invencion (grupo 3) tema los mejores efectos en prevencion de adhesion.

Tabla 6: Puntuacion de la adhesion

: Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3

Puntaje de adhesion: 3.4 ± 0.699 1.333±1.231 0.4±0.699

Ejemplo 12: Aplicacion del hidrogel de acido hialuronico reticulado enlazado con disulfuro en el tratamiento visco- suplementario de osteoartritis

Fue utilizado el modelo de artritis de conejo reportado por Mihara et al. (Osteoarthritis y Cartilage 15: 543-549, 2007). El procedimiento se describen brevemente tal como sigue: el conejo fue anestesiado mediante inyeccion intramuscular de ketamina (35 mg/kg) y toluolzosin (5 mg/kg). Se corto la articulacion de la rodilla izquierda del conejo en el lado de la rotula con una incision de 2 cm y luego fue cortado el ligamento colateral lateral expuesto; el extremo del tendon fue cortado abierto para exponer el menisco lateral seguido de un corte de 3.0-4.0 mm retirado del centro del menisco lateral; la capa de musculo subcutanea y la capa de piel fueron suturadas, y se inyecto aproximadamente 0.2 ml de ampicilina mediante inyeccion intramuscular en la pierna.

Despues de la reseccion parcial de menisco los conejos se dividieron en tres grupos: el grupo 1 fue un grupo de control con suero fisiologico y respectivamente tuvo una inyeccion con 0.2 ml de suero fisiologico los dfas 0, 3, 6, 9 y 12 despues de la cirugfa (un total de 5 inyecciones); el grupo 2 fue un grupo tratado con acido hialuronico, y respectivamente tuvo una inyeccion interaccion particular con 0.2 ml de solucion de acido hialuronico comercialmente disponible (10 mg/ml) en los dfas 0, 3, 6, 9 y 12 despues de la cirugfa para tratamiento (un total de 5 inyecciones); el grupo 3 fue un grupo tratado con el hidrogel de acido hialuronico reticulado enlazado con disulfuro segun la presente invencion y tuvo una inyeccion intraarticular con el hidrogel preparado en el ejemplo 6 (que tema una concentracion de acido hialuronico de 10 mg/ml y un grado de modificacion con mercapto de 1.54%) el dfa 0 despues de la cirugfa (un total de 1 inyeccion); el mdice de dolor fue medido para la rodilla posoperatoria en 0, 2, 5, 8, 11 y 14 dfas despues de la cirugfa, con el mdice de dolor caracterizado por la distribucion de peso de la pata trasera izquierda (Mihara et al., Osteoarthritis y Cartilage 15: 543-549, 2007); los conejos fueron sacrificados 15 dfas despues y se evaluo la apariencia y la histologfa del dano de rodilla posoperatorio.

La evaluacion de apariencia y la evaluacion histologica del dano de rodilla posoperatorio indico que el hidrogel de acido hialuronico reticulado enlazado con disulfuro segun la presente invencion tuvo un efecto protector equivalente en la rodilla posoperatoria al grupo tratado con acido hialuronico pero fue significativamente mejor que el grupo de control con suero fisiologico. La distribucion de peso sobre la pata trasera de izquierda indico que 8, 11 y 14 dfas despues de la cirugfa el grupo tratado (grupo 3) del hidrogel de acido hialuronico reticulado enlazado con disulfuro segun la presente invencion fue significativamente mejor que el grupo de control de suero fisiologico (grupo 1) (p < 0.05); mientras que en todos los puntos de tiempo de observacion posoperatoria el grupo tratado con acido hialuronico (grupo 2) no tuvo diferencia estadfsticamente significativa en efectos con el grupo de control con suero fisiologico (grupo 1) (p > 0.05), y el grupo (grupo 3) tratado con hidrogel de acido hialuronico reticulado enlazado con disulfuro segun la presente invencion no tuvo diferencia estadfsticamente significativa en efectos con el grupo tratado con acido hialuronico (grupo 2) (p > 0.05) (vease Fig. 1).

Los resultados anteriores indican que el hidrogel de acido hialuronico reticulado enlazado con disulfuro segun la presente invencion tiene efectos significativos en el tratamiento visco-suplementario de osteoartritis, con una inyeccion en la rodilla capaz de lograr la eficacia equivalente de cinco inyecciones en la rodilla con el acido hialuronico no reticulado.

Ejemplo 13: Preparacion y caracterizacion del hidrogel de acido hialuronico reticulado enlazado con disulfuro que contiene medicamento

5

10

15

20

25

30

En el procedimiento de preparacion del hidrogel de acido hialuronico reticulado enlazado con disulfuro del ejemplo 6 (que tiene una concentracion de acido hialuronico de 10 mg/ml y un grado de modificacion con mercapto de 3.97%), 0.1-10 mg de hormonas corticales (por ejemplo beclometasona, dipropionato de beclometasona, budesonide, dexametasona, prednisolone, y prednisone) se adicionaron respectivamente para hacer las hormonas corticales uniformemente dispersadas en el hidrogel reticulado preparado.

Se adicionaron 10 ml de solucion de regulador de pH de fosfato a 0.2 ml del anterior hidrogel reticulado que contiene medicamento colocado en un tubo plastico de centnfuga de 15 ml. Luego estuvo de centnfuga se coloco en un agitador (37 °C, 100 rpm), y la absorcion de ultravioleta de los medicamentos en el sobrenadante se midio a intervalos regulares. Las longitudes de onda de medicion fueron tal como sigue: Beclometasona 246 nm, dipropionato de beclometasona 240 nm, budesonida 248 nm, dexametasona 242 nm, prednisolona 248 nm, y prednisona 244 nm.

Tabla 7. Porcentaje acumulado de liberacion de los medicamentos en diferentes puntos de tiempo

Tiempo (dte): Beclometasona Dipropionato de beclometasona Budesonide Dexametasona Prednisolone Prednisone

7: 68% < 1% 26% 41% 95% 86%

14: 87% < 1% 43% 63% 100% 99%

21: 94% < 1% 61% 75% 100% 100%

De los resultados de la tabla 7 anterior puede verse que el hidrogel de acido hialuronico reticulado enlazado con disulfuro es un buen vetnculo de liberacion sostenida de medicamento que tiene buenos efectos de liberacion sostenida para las seis hormonas corticales. Debido a la diferencia en la caractenstica hidrofuga de los medicamentos, las conductas de liberacion de los medicamentos del hidrogel son muy diferentes. Mientras mas fuerte sea la caractenstica hidrofuga del medicamento mas sostenida es la liberacion. Por ejemplo, la prednisolone mas hidrofflica fue liberada basicamente en su totalidad en 7 dfas, mientras que para el dipropionato de beclometasona muy hidrofugo la liberacion fue raramente detectada.

Aplicabilidad industrial

Las aplicaciones en medicina del material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de la presente invencion incluyen los siguientes aspectos: es capaz de mejorar la curacion de heridas, puede usarse como vendaje para heridas en la piel u otras heridas; tambien puede usarse para prevenir la adhesion, lo que incluye la adicion fibrosa entre tejidos u organos despues de cirugfa (por ejemplo una cirugfa de sinusitis); tambien puede usarse en el tratamiento visco-suplementario de osteoartritis como un lubricante de rodilla.

Las aplicaciones en farmacia del material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro, preparado segun la presente invencion incluyen que puede usarse como un vetnculo de liberacion sostenida para diversas sustancias terapeuticas activas para realizar una liberacion sostenida. Las sustancias terapeuticas activas pueden ser medicamentos qmmicos o factores biologicamente activos, incluyendo antiflogfsticos, antibioticos, analgesicos, anestesicos, promotores de curacion de heridas, promotores o inhibidores de crecimiento celular, inmuno-estimulantes, medicamentos antivirales, etc.

Texto listado de secuencias

Claims

5

10

15

20

25

30

35

40

45

REIVINDICACIONES

1. Un derivado de macromolecula biocompatible modificado con mercapto que tiene un grado bajo de modificacion con mercapto, caracterizado porque: el derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto contiene al menos tres grupos mercapto en su cadena lateral y tiene un grado de modificacion con mercapto < 4.5%; el derivado de macromolecula biocompatible modificado con mercapto se refiere a un derivado obtenido introduciendo qmmicamente el grupo mercapto al grupo de cadena lateral de la macromolecula biocompatible; el grado de modificacion con mercapto se refiere a un porcentaje de la cantidad del grupo mercapto introducido en la cantidad del grupo de cadena lateral disponible de la macromolecula biocompatible para modificacion; y la macromolecula biocompatible se refiere a sulfato de condroitina, dermatan, heparina, heparan, acido hialuronico, sulfato de dermatan, pectina, y carboximetil quitosan, poli (acido acnlico), poli (acido aspartico), poli (acido tartarico), poli (acido glutamico) y poli (acido fumarico), colageno, gelatina alcalina, gelatina acida, elastina, protema de nucleo, laminina de polisacarido y fibronectina, o las sales de los mismos.
2. El derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto que tiene un grado bajo de modificacion con mercapto de acuerdo con la reivindicacion 1, caracterizado porque el grado de modificacion con mercapto es de 0.5%- 3.0%.
3. El derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto que tiene un grado bajo de modificacion con mercapto de acuerdo con la reivindicacion 2, caracterizado porque el grado de modificacion con mercapto es de 0.75%-
2.5%.
4. El derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto que tiene un grado bajo de modificacion con mercapto de acuerdo con la reivindicacion 1, caracterizado porque la macromolecula biocompatible es sulfato de condroitina, heparina, heparan, acido hialuronico, poli (acido aspartico), poli (acido glutamico), carboximetil quitosan, gelatina alcalina y gelatina acida, con las sales de los mismos.
5. El derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto que tiene un grado bajo de modificacion con mercapto de acuerdo con la reivindicacion 4, caracterizado porque la macromolecula biocompatible es sulfato de condroitina y acido hialuronico, con las sales de los mismos.
6. El derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto que tiene un grado bajo de modificacion con mercapto de acuerdo con la reivindicacion 1, caracterizado porque la macromolecula biocompatible tiene un peso molecular en un intervalo de 1,000-10,000,000.
7. El derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto que tiene un grado bajo de modificacion con mercapto de acuerdo con la reivindicacion 6, caracterizado porque la macromolecula biocompatible tiene un peso molecular en un intervalo de 10,000-3,000,000.
8. El derivado de macromolecula biocompatible modificada con mercapto que tiene un grado bajo de modificacion con mercapto de acuerdo con la reivindicacion 7, caracterizado porque la macromolecula biocompatible tiene un peso molecular en un intervalo de 20,000-1,500,000.
9. Materiales de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro hechos de uno o demas derivados de macromolecula biocompatible modificada con mercapto que tienen un grado bajo de modificacion con mercapto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-8.
10. El material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de acuerdo con la reivindicacion 9, caracterizado porque el material incluye pelfcula y esponja en una forma solida.
11. El material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de acuerdo con la reivindicacion 9, caracterizado porque el material es hidrogel.
12. El material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de acuerdo con la reivindicacion 11, caracterizado porque el hidrogel en el contenido de agua de mas de 95%, el cual es un porcentaje de peso/volumen.
13. El material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de acuerdo con la reivindicacion 12, caracterizado porque el hidrogel tiene un contenido de agua de mas de 98%, el cual es un porcentaje de peso/volumen.
14. El material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de acuerdo con la reivindicacion 11, caracterizado porque el hidrogel tiene una viscosidad dinamica de mas de 10,000 mPa s.
15. El material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de acuerdo con la reivindicacion 14, caracterizado porque el hidrogel tiene una viscosidad dinamica de mas de 25,000 mPa s.

5

10

15

20

25

30

35
16. El material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de acuerdo con la reivindicacion 15, caracterizado porque el hidrogel tiene una viscosidad dinamica de mas de 40,000 mPas.
17. El material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 9-16, caracterizado porque el material contiene ademas uno o mas de polisacaridos, protemas, macromoleculas sinteticas e ingredientes activos.
18. El material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de acuerdo con la reivindicacion 17, caracterizado porque el polisacarido, la protema y la macromolecula sintetica son sulfato de condroitina, heparina, heparan, acido algmico, acido hialuronico, poli (acido aspartico), poli (acido glutamico), quitosan, carboximetil quitosan, colageno, gelatina alcalina y gelatina acida, con las sales de los mismos.
19. El material reticulado de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de acuerdo con la reivindicacion 18, caracterizado porque el polisacarido, la protema y la macromolecula sintetica son hialuronato de sodio, sulfato de condroitina, heparina sodica, gelatina alcalina y gelatina acida.
20. El material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de acuerdo con la reivindicacion 19, caracterizado porque el polisacarido, la protema y la macromolecula sintetica son hialuronato de sodio, sulfato de condroitina y heparina sodica.
21. El material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de acuerdo con la reivindicacion 17, caracterizado porque los ingredientes activos pueden estar dispersos en el material reticulado en forma de partmulas solidas, o disueltos en el material reticulado.
22. El material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de acuerdo con la reivindicacion 17 o 21, caracterizado porque los ingredientes activos incluyen esteroides, antibioticos, medicamentos antitumorales y diversos medicamentos de protema de peptidos.
23. El material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de acuerdo con la reivindicacion 22, caracterizado porque los ingredientes activos son hormonas corticales que incluyen beclometasona, propionato de beclometasona, budesonide, dexametasona, prednisolone, y prednisone.
24. Un material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 9-23 para usar en medicina.
25. El material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro para usar de acuerdo con la reivindicacion 24, caracterizado porque el uso incluye un uso en la preparacion de una formulacion de prevencion de adhesion posoperatoria, un uso en preparacion de una formulacion para el tratamiento visco-suplementario de osteoartritis, y un uso como vehmulo de liberacion sostenida de sustancias terapeuticas activas.
26. El material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro para usar de acuerdo con la reivindicacion 25, caracterizado porque las sustancias terapeuticas activas son medicamentos qrnmicos o factores biologicamente activos.
27. El material de macromolecula biocompatible reticulada enlazada con disulfuro para usar de acuerdo con la reivindicacion 26, caracterizado porque las sustancias terapeuticas activas son antiflogfsticos, antibioticos, analgesicos, anestesicos, promotores de curacion de heridas, promotores o inhibidores de crecimiento celular, inmunoestimulantes, o medicamentos antivirales.