ES2450746B2

ES2450746B2 - Preparación y citotoxicidad de 2-quinolonas

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Publication number: ES2450746B2
Application number: ES201200269A
Authority: ES
Inventors: Benito ALCAIDE ALAÑÓN; Cristina ARAGONCILLO ABÁNADES; Gónzalo GÓMEZ CAMPILLOS; Pedro ALMENDROS REQUENA
Original assignee: Universidad Complutense de Madrid
Current assignee: Universidad Complutense de Madrid
Priority date: 2012-03-14
Filing date: 2012-03-14
Publication date: 2015-01-26
Anticipated expiration: 2032-03-14
Also published as: ES2450746A1

Abstract

Preparación y citotoxicidad de 2-quinolonas.#La invención se refiere a nuevos compuestos que contienen un anillo de 2-quinolona, su modo de obtención y su utilidad en la elaboración composiciones farmacéuticas para el tratamiento de enfermedades asociadas con alteraciones en las células, más concretamente cáncer como agentes antitumorales de baja citotoxicidad. La estructura de estos compuestos consiste en la presencia de un anillo de 2-quinolona funcionalizada en la posición tres con un heteroátomo (grupo amino o amino sustituido).

Description

Preparación y citotoxicidad de 2-quinolonas

5: Sector de la Técnica

Preparación y citotoxicidad de 2-quinolonas

1o: La presente invención se refiere a los compuestos que contienen un anillo de 2-quinolona y a sus usos como composiciones farmacéuticas para el tratamiento de un conjunto de enfermedades (cáncer) en las cuales el organismo produce un exceso de células malignas. Además, la invención se refiere al procedimiento de obtención de dichos compuestos. Por tanto, la invención se puede englobar en el campo químico y/o farmacéutico.

Estado de la Técnica

15 20 25: El cáncer es un crecimiento tisular producido por la proliferación continua de células anormales con capacidad de invasión y destrucción de otros tejidos. El cáncer, que puede originarse a partir de cualquier tipo de célula en cualquier tejido corporal, no es una enfermedad única sino un conjunto de enfermedades que se clasifican en función del tejido y célula de origen. Existen varios cientos de formas distintas, siendo tres los principales subtipos: sarcomas, carcinomas, y linfomas. Entre las medidas terapéuticas tradicionales para el tratamiento del cáncer está incluida la quimioterapia, que consiste en la utilización de fármacos para el tratamiento del cáncer. Puesto que los fármacos se distribuyen en el organismo a través del sistema circulatorio, la quimioterapia es útil para aquellos tumores cuya diseminación los hace inaccesibles a la cirugía o a la radioterapia. Existen multitud de fármacos anticancerosos, la mayor parte de los cuales actúan interfiriendo la síntesis o función del ADN. Por tanto, las células en división son más

sensibles a la quimioterapia. Los dos principales problemas que limitan la
utilización de la quimioterapia son la toxicidad y la resistencia.
El cisplatino es uno de los agentes más efectivos usado para tratar varios tipos de cánceres humanos (tumores de cabeza, vejiga, testículos y ovarios) (cfr. D. Wang, et al., Nat Rev Drug Discov 2005, 4, 307), pero su eficacia clínica se ha visto mermada por efectos laterales no deseados como nefrotoxicidad y neurotoxicidad. Además, el uso de cisplatino se ha visto limitado por el desarrollo de resistencia de ciertos tumores frente a esta droga (cfr. G. Giaccone, Drugs 2000, 59, 9).
La primera generación de agentes antimitóticos, como taxanos y vinca alcaloides, han demostrado gran actividad y son la base de terapias contra el cáncer bien establecidas (cfr. E. K. Rowinski, et al., Semin Oncol1992, 19, 646). Agentes de este tipo exhiben un amplio rango de eficacia clínica, paralizando la mitosis y conduciendo a la apoptosis (cfr. M. V. Blagosklonny, et al., lnt J Cancer 1999, 83, 151). A pesar de ser efectivas, estas sustancias presentan también problemas de toxicidad (cfr. S. Y. Chan, et al., J Neurobiol 1980, 11, 251; M. Sacille, et al., Lancet 1995, 346, 26) y de resistencia (G. A Orr, et al., Oncogene, 2003, 22, 7280; M. M. Gottesman, Annu Rev Med 2002, 53, 615; M. AJordan, et al., Nat Rev Cancer2004, 4, 253).
Por tanto, existe una oportunidad clínica para el desarrollo de nuevas sustancias antitumorales que sean más específicas y menos tóxicas, y que puedan sobrepasar al mismo tiempo los mecanismos de resistencia de los tumores frente a las drogas tradicionalmente utilizadas.
Descripción de la invención
La presente invención proporciona compuestos heterocíclicos con efectos inhibitorios frente a cuatro líneas celulares de cáncer humano. La estructura de estos compuestos consiste en la presencia de un anillo de 2-quinolona funcionalizada en la posición tres por un heteroátomo (normalmente un grupo
5 amino, o amino sustituido).
Un primer aspecto de la invención se refiere a los compuestos de fórmula general (1) o sus isómeros, sus sales y/o solvatos de los mismos (a partir de ahora compuestos de la invención).
10
donde: 1, R4
R y R5 son iguales o diferentes entre sí y se seleccionan de la lista que comprende hidrógeno (H), hidroxilo (OH), alcoxilo (ORa), un grupo alquilo (C1-Ca), un grupo arilo (Cs-C1a) o un heterociclo, sustituido o no sustituido.
R2
15 y R3 son iguales o diferentes entre sí y se seleccionan de la lista que comprende hidrógeno (H), grupo alquilo (C1-C8), arilo (C6-C18) o heterociclo, halógeno (F, Cl, Br, 1), hidroxilo (OH), alcoxilo (ORa), nitro (N02), amino (NRbRc), sustituido o no sustituido.
---representa la existencia o no de un doble enlace.
20 El término "alcoxilo" se refiere en la presente invención a un grupo de fórmula -ORa en la que Ra es un alquilo (C1-C8) como por ejemplo, y no
limitativamente, metoxilo, etoxilo, propoxilo o benciloxilo. Preferiblemente el

alcoxilo es un metoxilo.

El término "alquilo" se refiere en la presente invención en el caso de R1 , R2 ,

R3 , R4 y/o R5 a cadenas alifáticas, lineales o ramificadas, que tienen de 1 a 8

5: átomos de carbono; por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo,

terc-butilo, sec-butilo, n-pentilo, n-hexilo, ciclohexilo, aunque preferiblemente

tienen de 1 a 3 átomos de carbono. Los grupos alquilo pueden estar

opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes tales como nitro,

hidroxilo, azida, halógeno, ácido carboxílico o por un grupo, sustituido o no

1 O: sustituido, seleccionado entre: arilo, hidroxilo, amido, amino, éster, ácido

carboxílico, éter, tiol, acilamino, carboxamido o nitro. Cuando el grupo alquilo

está sustituido por un arilo se describe como "arilalquilo" como, por ejemplo,

pero no limitativamente, en el caso de un grupo bencilo.

15: El término "arilo" se refiere en la presente invención a una cadena

carbocíclica aromática, que tiene de 6 a 18 átomos de carbono, pudiendo ser

de anillo único o múltiple, en este último caso con anillos separados y/o

condensados. Los grupos arilo pueden estar opcionalmente sustituidos por

uno o más sustituyentes tales como alquilo, alcoxilo, nitro, hidroxilo, azida,

20: halógeno, o ácido carboxílico. Se pueden mencionar como ejemplos de grupo

arilo, y no limitativamente, los grupos; fenilo, naftilo, indenilo o antranilo.

Preferiblemente el grupo arilo es un fenilo.

El término "cicloalquilo" se refiere en la presente invención a una cadena

25: alifática monocíclica o policíclica de 3 a 12 miembros, que está saturada o

parcialmente saturada, y que sólo consiste en átomos de carbono e

hidrógeno, tal como ciclopropilo, ciclohexilo o norbornilo.

El término "heterociclo": se refiere en la presente invención a una cadena

monocíclica o policíclica de 3 a 12 miembros, que está saturada, parcialmente

saturada o insaturada, y que consiste en átomos de carbono y de al menos

un heteroátomo seleccionado del grupo que consiste en nitrógeno, oxígeno,

5: azufre o selenio. Preferiblemente el heteroátomo es nitrógeno y el ciclo es un

anillo: de 5 o 6 eslabones. Se pueden mencionar como ejemplos de

heterociclo, pero no limitativamente: pirrol, pirrolidina, piperidina e indol.

En: una realización preferida de los compuestos de la invención, R1 es un

1 O: grupo alquilo (C1-Ca).

En otra realización preferida de los compuestos de la invención, R2 y R3 son

halógenos. Más preferiblemente R2 es: hidrógeno y/o R3 es halógeno. Más

preferiblemente R3 es cloro.

15

En otra realización preferida de los compuestos de la invención, R4 y R5 son

grupos alquilo o arilo. Más preferiblemente R4 es alquilo y/o R5 es arilo. Más

preferiblemente R4 es metilo y R5 es un grupo fenilo sustituido.

20: En una realización más preferida, los compuestos de la invención se

seleccionan de la lista que comprende:

1-bencil-3-[ ( 4-metoxifenil)(metil)amino ]quinolin-2( 1 H)-ona;

3-[(4-metoxifenil)(metil)amino]-1-metilquinolin-2(1 H)-ona;

3-[(4-metoxifenil)(metil)amino]-1-fenilquinolin-2( 1 H)-ona;

25: 3-[(4-metoxifenil)(metil)amino ]-1-metil-6-nitroquinolin-2( 1 H)-ona;

8-cloro-3-[(4-metoxifenil)(metil)amino ]-1-metilquinolin-2( 1 H)-ona;

6-cloro-3-[( 4-metoxifenil)(metil)amino ]-1-metilquinolin-2( 1 H)-ona;

6-bromo-3-[(4-metoxifenil)(metil)amino]-1-metilquinolin-2(1 H)-ona;

6-fluoro-3-[(4-metoxifenil)(metil)amino]-1-metilquinolin-2(1 H)-ona; o cualquiera de sus sales, preferiblemente clorhidratos.
Otro aspecto de la presente invención se refiere a los compuestos de fórmula general (1) para su uso en la elaboración de un medicamento o composición farmacéutica, preferiblemente para el tratamiento y/o prevención de cáncer, enfermedades autoinmunes, enfermedades infecciosas, y en general, de cualquier enfermedad cuyo tratamiento y/o prevención es susceptible de beneficiarse de las actividades biológicas mostradas por los compuestos descritos en la presente invención, o bien a una sal, derivado o solvato de los mismos, o bien a un profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos.
El término "cáncer" tal y como se utiliza en la presente descripción, se refiere a una alteración de las células tumorales que tienen capacidad de invadir tejidos o de producir metástasis en lugares distantes del tumor primario. Son ejemplos representativos, aunque no limitativamente, de cáncer: cáncer de mama, cánceres ginecológicos, cáncer de colon, cáncer de próstata, cáncer de piel, cáncer hepatocelular, cáncer de pulmón, cáncer de esófago, cáncer gástrico, cáncer de páncreas, cáncer de vejiga, cáncer de hígado, cáncer del tracto urinario, cáncer tiroideo, cáncer renal, melanoma, cáncer de cerebro, sarcoma, linfoma o leucemia.
Las enfermedades autoinmunes y/o inflamatorias se pueden seleccionar de la lista que comprende, no limitativamente, lupus eritematoso sistémico, diabetes mellitus de tipo 1, esclerosis múltiple, síndrome de Sjogren, artritis reumatoide, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC, o bien COPO en sus siglas en inglés), colitis crónica o diversas alergias.

Las enfermedades infecciosas causadas por microorganismos patógenos

pueden ser infecciones víricas como por ejemplo gripe, SIDA o hepatitis;

infecciones bacterianas como por ejemplo clamidiosis, tuberculosis,

estreptococosis o pseudomoniasis; o infecciones parasitarias como por

5: ejemplo leishmaniosis, malaria o tripanosomiasis.

Los compuestos de la presente invención representados por la fórmula (1)

pueden incluir isómeros, dependiendo de la presencia de enlaces múltiples

(por ejemplo Z, E), incluyendo isómeros ópticos o enantiómeros, dependiendo

de la presencia de centros quirales. Los isómeros, enantiómeros o

1o: diastereómeros individuales o las mezclas de los mismos caen dentro del

alcance de la presente invención, es decir, el término isómero también se

refiere a cualquier mezcla de isómeros, como diastereómeros, racémicos,

etc., incluso a sus isómeros ópticamente activos o las mezclas en distintas

proporciones de los mismos. Los enantiómeros o diastereómeros

15: individuales, así como sus mezclas, pueden separarse mediante técnicas

convencionales.

El término "derivado" tal como aquí se utiliza incluye tanto a compuestos

farmacéuticamente aceptables, es decir, derivados de compuestos de fórmula

20: (1) que pueden ser utilizados en la elaboración de un medicamento, como

derivados farmacéuticamente no aceptables ya que éstos pueden ser útiles

en la preparación de derivados farmacéuticamente aceptables. La naturaleza

del derivado farmacéuticamente aceptable no es crítica, siempre y cuando

sea farmacéuticamente aceptable.

25

Asimismo, dentro del alcance de esta invención se encuentran los

profármacos de los compuestos de fórmula (1). Tal como aquí se utiliza, el

término "profármaco" incluye a cualquier compuesto derivado de un compuesto de fórmula (1) -por ejemplo y no limitativamente: ésteres (incluyendo ésteres de ácido carboxílico, ésteres de ácidos fosfóricos, ésteres de ácidos sulfónicos, etc.), amidas, uretanos, etc.-que al ser administrado a un individuo puede ser transformado directa o indirectamente en dicho compuesto de fórmula (1) en el mencionado individuo. Ventajosamente, dicho derivado es un compuesto que aumenta la biodisponibilidad del compuesto de fórmula (1) cuando se administra a un individuo o que potencia la liberación del compuesto de fórmula (1) en un compartimento biológico. La naturaleza de dicho derivado no es crítica siempre y cuando pueda ser administrado a un individuo y proporcione el compuesto de fórmula (1) en un compartimento biológico de un individuo. La preparación de dicho profármaco puede llevarse a cabo mediante métodos convencionales conocidos por los expertos en la materia.
Los compuestos de la invención pueden estar en forma cristalina como compuestos libres o como solvatos. Tal como aquí se utiliza, el término "solvato", incluye tanto solvatos farmacéuticamente aceptables, es decir, solvatos de compuestos de fórmula (1) que pueden ser utilizados en la elaboración de un medicamento, como solvatos farmacéuticamente no aceptables ya que éstos pueden ser útiles en la preparación de solvatos o sales farmacéuticamente aceptables. La naturaleza del solvato farmacéuticamente aceptable, siempre y cuando sea farmacéuticamente aceptable. En una realización particular, el solvato es eun hidrato. Los solvatos pueden obtenerse por métodos convencionales de solvatación conocidos por los expertos en la materia.
Para su aplicación en terapia, los compuestos de fórmula (1), sus isómeros,

derivados, sales, profármacos o solvatos, se encontrarán, preferentemente,

en una forma farmacéuticamente aceptable o sustancialmente pura, es decir,

que tiene un nivel de pureza farmacéuticamente aceptable excluyendo los

5: aditivos farmacéuticos normales tales como diluyentes y portadores, y no

incluyendo material considerado tóxico a niveles de dosificación normales.

Los compuestos de la presente invención de fórmula (1) se pueden obtener o

producir mediante una síntesis química o generarse a partir de una materia

1 O: natural de distinto origen.

Otro aspecto de la presente invención se refiere a un procedimiento de

obtención de los compuestos de la invención de fórmula (1) o un isómero, sus

sales y/o solvato del mismo, que comprende los siguientes pasos que se

15: resumen en el Esquema 1:

A) Preparación de N-alquil(o aril) isatinas de fórmula general (11), por:

A1) alquilación del nitrógeno oxindólico de isatinas [fórmula general

(111)] con un haluro de alquilo, preferiblemente haluros de metilo;

A2) arilación del nitrógeno oxindólico de isatinas [fórmula general

20: (111)] con un haluro de arilo, preferiblemente halobencenos;

8) Formación de iminoisatinas de fórmula general (IV) por reacción de

N-alquil(o aril) isatinas de fórmula general (11) con arilaminas,

preferiblemente anisidina; y

C) Expansión de anillo de las iminoisatinas de fórmula general (IV) por

25: reacción catalizada por sales metálicas con alquildiazometanos,

preferiblemente trimetilsilildiazometano.

imagen1Esquema 1
0
A1 oA2
1~ o ó N 3 H
R
(111) imagen2

Donde: R1 ,: R2 , R3 , R4 y R5 están descritos anteriormente.

5 1O: Otro aspecto de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica útil para el tratamiento y/o prevención de enfermedades cancerosas, en adelante composición farmacéutica de la invención, que comprende un compuesto o mezcla de compuestos de fórmula (1), en cantidad terapéuticamente efectiva, o una sal, profármaco, solvato, derivado o este reo isómero de los mismos farmacéuticamente aceptable, junto con un portador, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable, para la administración a un paciente.

15: Los adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables que pueden utilizarse en dichas composiciones son los adyuvantes y vehículos utilizados habitualmente en la elaboración de composiciones terapéuticas y conocidos por los técnicos en la materia.

20: En el sentido utilizado en esta descripción, la expresión "cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a la cantidad del agente o compuesto capaz de desarrollar la acción terapéutica determinada por sus propiedades

farmacológicas, calculada para producir el efecto deseado y, en general,

vendrá determinada, entre otras causas, por las características propias de los

compuestos, incluyendo la edad, estado del paciente, la severidad de la

alteración o trastorno, y de la ruta y frecuencia de administración.

5

Los compuestos de fórmula (1) descritos en la presente invención, sus

derivados, sales, profármacos y/o solvatos así como las composiciones

farmacéuticas que los contienen se pueden utilizar junto con otros fármacos,

o principios activos, adicionales para proporcionar una terapia combinada.

1O: Dichos fármacos adicionales pueden formar parte de la misma composición

farmacéutica o, alternativamente, pueden ser proporcionados en forma de

una composición separada para su administración simultánea o no a la de la

composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (1), o un

profármaco, solvato, derivado o sus sales.

15

En otra realización particular, dicha composición terapéutica se prepara en

forma sólida o suspensión acuosa, en un diluyente farmacéuticamente

aceptable. La composición terapéutica proporcionada por esta invención se

puede administrar por cualquier vía apropiada, para lo cual dicha composición

20: se formulará en la forma farmacéutica adecuada a la vía de administración

elegida. En una realización particular, la administración de la composición

terapéutica proporcionada por esta invención se efectúa por vía oral, tópica,

recta o parenteral (incluyendo subcutánea, intraperitoneal, intradérmica,

intramuscular, intravenosa, etc.).

25

El uso de los compuestos de la invención es compatible con su uso en

protocolos en que los compuestos de fórmula (1), o sus mezclas, se usan por

sí mismos o en combinaciones con otros tratamientos o cualquier

procedimiento médico.

A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y

5: sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos,

componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos,

ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la

descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos

y figuras se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean

1o: limitativos de la presente invención.

Descripción de la figuras

Fig. 1.-Muestra los ensayos de citotoxicidad (gráfica dosis-respuesta) frente a

células tumorales de la línea celular HL-60 (leucemia promielocítica humana)

15: incubadas con diferentes compuestos de fórmula (1) -6-cloro-3-[(4-

metoxifenil)(metil)amino]-1-metilquinolin-2(1 H)-ona (GGC-4), 6-fluoro-3-[(4-

metoxifenil)(metil)amino]-1-metilquinolin-2(1 H)-ona (GGC-5), 6-bromo-3-[(4-

metoxifenil)(metil)amino ]-1-metilquinolin-2( 1 H)-ona (GGC-6) y 3-[(4-

metoxifenil)(metil)amino ]-1-metil-6-nitroquinolin-2( 1 H)-ona (GGC-7) -durante

20: 3 días. Todas las determinaciones se llevaron a cabo por triplicado.

Fig. 2.-Muestra los ensayos de citotoxicidad (gráfica dosis-respuesta) frente a

células tumorales de la línea celular HT-180 (fibrosarcoma humano)

incubadas con diferentes compuestos de fórmula (1) -6-cloro-3-[(4-

25: metoxifenil)(metil)amino]-1-metilquinolin-2(1H)-ona (GGC-4), 6-fluoro-3-[(4-

metoxifenil)(metil)amino]-1-metilquinolin-2(1 H)-ona (GGC-6) y 3-[(4-

metoxifenil)(metil)amino]-1-metil-6-nitroquinolin-2(1 H)-ona (GGC-7) -durante

3 días. Todas las determinaciones se llevaron a cabo por triplicado.

Fig. 3.-Muestra los ensayos de citotoxicidad (gráfica dosis-respuesta) frente a células tumorales de la línea celular HT-29 (adenocarcinoma de colon humano) incubadas con diferentes compuestos de fórmula (1) -6-cloro-3-[(4-metoxifenil)(metil)amino]-1-metilquinolin-2(1 H)-ona (GGC-4), 6-fluoro-3-[(4-metoxifenil)(metil)amino]-1-metilquinolin-2(1 H)-ona (GGC-5), 6-bromo-3-[(4-metoxifenil)(metil)amino]-1-metilquinolin-2(1 H)-ona (GGC-6) y 3-[(4-metoxifenil)(metil)amino ]-1-metil-6-nitroquinolin-2( 1 H)-ona (GGC-7) -durante 3 días. Todas las determinaciones se llevaron a cabo por triplicado.
Fig. 4.-Muestra los ensayos de citotoxicidad (gráfica dosis-respuesta) frente a células tumorales de la línea celular MDA-MB231 (carcinoma de pulmón humano) incubadas con diferentes compuestos de fórmula (1) -6-cloro-3-[(4-metoxifenil)(metil)amino ]-1-metilquinolin-2( 1 H)-ona (GGC-4), 6-fluoro-3-[(4-metoxifenil)(metil)amino]-1-metilquinolin-2(1 H)-ona (GGC-5), 6-bromo-3-[(4-metoxifenil)(metil)amino]-1-metilquinolin-2(1 H)-ona (GGC-6) y 3-[(4-metoxifenil)(metil)amino]-1-metil-6-nitroquinolin-2(1 H)-ona (GGC-7) -durante 3 días. Todas las determinaciones se llevaron a cabo por triplicado. Modo de realización de la invención
A continuación se ilustrará la invención mediante unos ensayos realizados por los inventores, que no son, sin embargo, limitativos del alcance de la invención.
Ejemplo 1
Este ejemplo se refiere al método de preparación de N-aril isatinas
1-Fenilindolin-2, 3-diona

5 1 O: Sobre una disolución de 221 mg (1 ,5 mmol) de isatina comercialmente disponible en acetonitrilo anhidro (5 mL) en atmósfera de argon, se añade yodobenceno (337 mg, 1,65 mmol), K2C03 (415 mg, 3 mmol), Cul (191 mg, O, 15 m moles) y N,N'-dimetilciclohexano-1 ,2-diamina (42,7 mg, 0,30 m mol). La reacción se calienta en tubo cerrado a 140°C hasta la desaparición del material de partida (c.c.f). Una vez finalizada la reacción, se deja enfriar hasta alcanzar la temperatura ambiente y se añade HCI (1M, 15 mL). El crudo de reacción se extrae con AcOEt (6 x 15 mL), la fase orgánica se seca con MgS04 y el disolvente se elimina a presión reducida. El crudo de reacción se purifica por cromatografía en columna (n-hexano/acetato de etilo, 2:1) para dar 211 mg (63%) del producto como un sólido anaranjado.

15: P.f.: 137139 °C; 1H NMR (300 MHz, CDCb, 25 °C): o =7.70 (ddd, J =0,.5, 1.5, 7.5 Hz, 1 H), 7.51 (m, 6 H), 7.18 (td, J =1.0, 7.5 Hz, 1 H), 6.91 (d, J =8.0 Hz, 1 H); 13C NMR (75 MHz, CDCb, 25 °C): o= 183.1, 157.5, 151.9, 138.5, 133.4, 130.2, 129.0, 126.2, 125.8, 124.5, 117.7, 111.5; IR (CH2CI2): o= 1750 cm-1 .

Ejemplo 2

20: Este ejemplo se refiere a la preparación de iminoisatinas

(Z)-3-( 4-Metoxifenilimino)-1-metil-5-nitroindolin-2-ona

25: A una disolución de 0,75 g {3,63 mmol) de 1-metil-5-nitroindolin-2,3-diona (K. Zheng et al. Angew Chem lnt Ed 2011, 50, 2573) y p-anisidina (0,45 g, 3,63 mmol) en benceno (7,5 mL) se calienta a reflujo toda la noche en un aparato Dean-Stark. La mezcla de reacción se enfria a temperatura ambiente y el

disolvente se elimina bajo presión reducida para dar 0,75 g (71 %) de la imina en una relación de isómeros E:Z (70:30) como un sólido anaranjado que se usa directamente en la etapa siguiente sin necesidad de purificación.
P.f.: 154156 °C; 1H NMR (300 MHz, CDCb, 25 °C): o =8.38 (d, J =8.8 Hz, 1H, E+Z), 8.06 (s, 1H, E+Z), 7.56 (d, J =8.8 Hz, 1H, E+Z), 7.15 {d, J =8.6 Hz, 1.4H, E), 7.06 (d, J = 8.9 Hz, 1.4H, E), 6.97 (m, 1.2H, Z), 3.93 (s, 2.1 H, E),
3.90 (s, 0.9H, Z), 3.43 {s, 2.1 H, E), 3.33 {s, 0.9H, Z); 13C NMR (75 MHz, CDCb, 25 °C): o = 163.4 (E), 160.0(Z), 159.1 (E), 157.9 (Z), 152.2 (E), 150.4 (E), 149.8 {Z), 146.4 (Z), 143.0 (E), 141.6 (E), 140.0 (Z), 129.6 (E), 128.5 (Z), 125.5 (E), 123.0 {Z), 120.9 (E), 120.7 (Z), 118.0 (Z), 115.5 (E), 114.8 (E),
114.0 (Z)113.7 (Z), 109.0 (E), 108.1 (Z), 55.6 (E), 55.5 (Z), 26.8 (E), 26.4 (Z); IR (CH2CI2): o= 1738, 1610, 1336, 1293, 1251 cm-1.
Ejemplo 3
Preparación de compuestos de fórmula general (1) por expansión de anillo de iminoisatinas de fórmula general (IV)
3-[( 4-Metoxifenil)(metil)amino]-1-meti/-6-nitroquinolin-2(1 H)-ona
Sobre una disolución de 79 mg (0,25 mmol) de {Z)-3-(4-metoxifenilimino)-1-metil-5-nitroindolin-2-ona y Sc(OTf)3 (541 mg, 11 mol%) en diclorometano anhidro (2 ml) enfriada a O°C, se añade trimetilsilildiazometano (63 mg, 0,55 mmol). La mezcla de reacción se agita a dicha temperatura hasta la completa desaparición del material de partida (c.c.f). Una vez finalizada la reacción, el disolvente se elimina a presión reducida y el crudo se purifica por cromatografía en columna de gel de sílice, utilizando como eluyente n-
hexano/acetato de etilo (1 :1) para dar 51 mg (60%) del producto como un
sólido anaranjado.
P.f.: 196198 °C; 1H NMR (300 MHz, CDCb, 25 °C): D =8.36 (d, J =2.5 Hz, 1H), 8.21 (dd, J = 9.2, 2.6 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.11 (s, 1H), 7.02 y 6.87 (d, J =9.1 Hz, 2H cada uno), 3.81 y 3.74 (s, 3H cada uno), 3.35 (s, 3H); 13C NMR (75 MHz, CDCIJ, 25 °C): o= 159.0, 156.4, 142.5, 142.1, 141.4, 139.9, 123.7, 122.3, 121.5, 121.3, 118.5, 114.5, 114.1, 55.4, 42.1, 30.6; IR (CH2CI2): D = 1659, 1609, 1510, 1338, 1243; HRMS (ES): calculado(%) para C1sH17N304 [M+ Ht: 340.1297; encontrado: 340.1296.
Ejemplo 4
Ensayos biológicos de los compuestos de fórmula (/)
Valoración del perfil de citotoxicidad
La citotoxicidad de los compuestos de fórmula (1) se examina en cuatro líneas celulares, a saber HL-60 (leucemia promielocítica humana), HT-180 (fibrosarcoma humano), HT-29 (adenocarcinoma de colon humano) y MDA-MB231 (carcinoma de pulmón humano) mediante experimentos de cultivo in vitro.
Para el caso de la familia de compuestos de fórmula (1), los mejores resultados se obtienen con un compuesto que fue el más activo en todos los tipos de células ensayadas, con valores de IC5o por debajo de un microgramo por mililitro. La sustitución del grupo nitro en este tipo de moléculas por halógenos, disminuye la toxicidad, exhibiendo el derivado clorado la actividad

más alta entre los diferentes sustituyentes halogenados. Los compuestos de

fórmula (1) muestran unas curvas dosis-respuesta típicas para líneas celulares

de leucemia o fibrosarcoma, con una pronunciada disminución de la

supervivencia celular a concentraciones cercanas al valor de ICso. A pesar de

5: esto, las curvas dosis-respuesta muestran un efecto bifásico en el crecimiento

de células humanas tumorales de colon y pulmón. En la primera fase de la

curva (a las concentraciones más bajas de los compuestos), se observa una

disminución aguda en la supervivencia celular, debida probablemente a un

efecto de la droga en las células tumorales proliferantes. Un segundo cambio

1 O: de dirección en la curva sugiere un efecto citotóxico ejercido por altas

concentraciones de la droga en células tumorales no desarrolladas.

Hay que destacar que algunos de los compuestos de fórmula (1) ensayados

exhiben efectos inhibitorios muy notables contra las cuatro líneas celulares

15: tumorales humanas, mostrando valores de IC50 que son similares, e incluso

inferiores, a los descritos previamente para compuestos de uso generalizado

como el etoposido o el cisplatino.

Cultivos celulares

20

Todas las líneas celulares tumorales usadas en esta invención se obtienen de

la "Type Culture Collection (ATCC)." Las células de fibrosarcoma humano HT-

1 080 se mantienen en un medio de Dulbecco/Eagle modificado (DMEM), que

contiene glucosa (4,5 g/L), glutamina (2mM), penicilina (50 IU/mL),

25: estreptomicina (50 JJg/mL), y anfotericina (1.25 JJg/mL) suplementada con

10% FBS. Las células de adenocarcinoma humano de colon HT-29 se

mantienen en un medio McCoy's 5A que contiene glutamina (2mM), penicilina

(50 IU/mL), estreptomicina (50 JJg/mL), y anfotericina (1 ,25 JJg/mL)

suplementada con 1O% FBS. Las células de carcinoma humano de pulmón MDA-MB231 y leucemia promielocítica humana HL-60 se mantienen en un medio RPMI1640 que contiene glutamina (2mM), penicilina (50 IU/mL), estreptomicina (50 J.IQ/mL), y anfotericina (1.25 J.lg/mL) suplementada con 10
5 y 20 % FBS, respectivamente.
Ensayos de citotoxicidad
El ensayo de reducción por tinción del bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-
10 2,5-difeniltetrazolio se lleva a cabo en una microplaca de 96 pocillos utilizando el método de Mosmann (cfr. T. Mosmann, J lmmunol Methods 1983, 65, 55). 2 x 1 03 células tumorales en un volumen total de 100 J.IL de sus respectivos caldos de cultivo se incuban con diluciones seriadas de los compuestos de fórmula (1). Después de 3 días de incubación (37°C, 5% C02 e una atmósfera
15 húmeda) se adicionan 10 J.ll de MIT (5 mg/ml in PBS) a cada pocillo y la placa se incuba durante cuatro horas más a 37°C. El formazán resultante se disuelve en 150 J.IL de HCI 0,04 N en 2-propanol y su concentración se determinó por espectrofotometría a 550 nm. Todas las determinaciones se llevaron a cabo por triplicado. Los valores de IC50 se calculan en zonas
20 semilogarítmicas dosis-respuesta en las que la concentración del compuesto produce un 50% de supervivencia celular.