ES2307293T3 - Utilizacion terapeutica de señuelos de elementos en cis in vivo. - Google Patents

Utilizacion terapeutica de señuelos de elementos en cis in vivo. Download PDF

Info

Publication number
ES2307293T3
ES2307293T3 ES95900450T ES95900450T ES2307293T3 ES 2307293 T3 ES2307293 T3 ES 2307293T3 ES 95900450 T ES95900450 T ES 95900450T ES 95900450 T ES95900450 T ES 95900450T ES 2307293 T3 ES2307293 T3 ES 2307293T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
baselineskip
lure
transcription
gene
cells
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES95900450T
Other languages
English (en)
Inventor
Victor J. Dzau
Gary H. Gibbons
Ryuichi Morishita
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Brigham and Womens Hospital Inc
Original Assignee
Brigham and Womens Hospital Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=22509818&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=ES2307293(T3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Brigham and Womens Hospital Inc filed Critical Brigham and Womens Hospital Inc
Application granted granted Critical
Publication of ES2307293T3 publication Critical patent/ES2307293T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/13—Decoys
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C12N2310/3517—Marker; Tag

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

LA INVENCION PROPORCIONA EL USO DE SEÑUELOS DE OLIGODEOXINUCLEOTIDO PARA EL TRATAMIENTO PROFILACTICO O TERAPEUTICO DE TRASTORNOS ASOCIADOS CON LA UNION DE FACTORES DE TRANSCRIPCION ENDOGENA A GENES IMPLICADOS EN EL CRECIMIENTO CELULAR, DIFERENCIACION Y SEÑALIZACION O A GENES VIRALES. MEDIANTE LA INHIBICION DE FACTORES DE TRANS-ACTIVACION ENDOGENOS DE REGIONES REGULADORAS DE TRANSCRIPCION DE UNION, LOS SEÑUELOS MODULAN LA EXPRESION GENETICA Y ASI REGULAN PROCESOS PATOLOGICOS QUE INCLUYEN INFLAMACION, HIPERPLASIA INTIMA, ANGIOGENESIS, NEOPLASIA, RESPUESTAS INMUNES E INFECCION VIRAL. LOS SEÑUELOS SE ADMINISTRAN EN CANTIDADES Y BAJO CONDICIONES DONDE LA UNION DEL FACTOR DE TRANSCRIPCION ENDOGENA AL GEN ENDOGENO ES INHIBIDA COMPETITIVAMENTE DE FORMA EFECTIVA SIN TOXICIDAD DEL HUESPED SIGNIFICATIVA. LAS COMPOSICIONES OBJETO COMPRENDEN LAS MOLECULAS DE SEÑUELO EN UN CONTEXTO QUE PROPORCIONA FARMACOCINETICOS SUFICIENTES PARA USO TERAPEUTICO EFECTIVO.

Description

Utilización terapéutica de señuelos de elementos en cis in vivo.
Introducción Campo técnico
El campo de la presente invención se encuentra en el tratamiento terapéutico de enfermedades con ácidos nucleicos de doble cadena que unen factores de transcripción.
Antecedentes
Una amplia variedad de enfermedades son el resultado de la sobreexpresión o la subexpresión de uno o más genes. Determinadas células pueden producir cantidades insuficientes de una proteína (por ejemplo, la insulina) o demasiadas de otras proteínas, siendo una proteína normal (por ejemplo, el TNF), una proteína mutante (por ejemplo, un oncogén), o una proteína no huésped (por ejemplo, el HIV-TAT). La última meta de la intervención terapéutica en dichas enfermedades es una modulación selectiva de la expresión génica.
Varios procedimientos de modulación transcripcional in vitro se han divulgado incluyendo la utilización de ácidos nucleicos antisentido capaces de unir mensajes nacientes, la inmunización intracelular con mutantes negativos dominantes.
Con las amplias aplicaciones terapéuticas potenciales, se han extendido enormes esfuerzos por parte de destacados laboratorios y clínicas por todo el mundo para extender estos procedimientos in vivo. Hasta el momento, la estrategia del señuelo del factor de transcripción nunca se ha adoptado satisfactoriamente in vivo.
Literatura relevante
La descripción de los roles de los factores de transcripción se pueden encontrar en Nevins, Science 258, 424-429 (1992); Dalton, EMBO J. 11, 11797 (1992); Yee et al. ibid. 6, 2061 (1987), Weintraub et al., Nature 358, 259-261 (1992), Pagano et al., Science 255, 1144-1147 (1992). La proteína de envoltura vírica - liposoma mediada por transfección se describe en Kaneda et al., Science 243, 375 (1989). Ritzenthaler et al. (1991) Biochem. J. 280, 157-162; Ritzenthaler et al (1993) J. Biol. Chem. 268, 13625-13631; Bielinska et al., Science 16, 997-1000 (1990) y Sullenger et al., Cell 63, 601-608 (1990) describen la inhibición de la transcripción con ácidos nucleicos de doble cadena.
Se puede encontrar una discusión general referente al mecanismo de la restenosis en Libby et al., Circulation 86, III-47 (1992) y en Clowes et al., J. Cardiovasc. Pharmacol. 14, S12-15 (1989).
Descripción resumida de la invención
La presente invención proporciona señuelos de ADN de doble cadena para el tratamiento terapéutico de enfermedades asociadas con la unión de factores de transcripción endógenos a genes implicados en la proliferación, diferenciación y señalización celulares, bloqueando la capacidad de los factores de transactivación endógenos para modular la expresión génica y, de ese modo, regular los procesos patológicos que incluyen la restenosis, la hiperplasia intimal, la hiperplasia neoíntimal o la neoplasia, en el que el factor de transcripción se selecciona a partir de los grupos E2F, AP-I, SSRE y TRE.
Los tratamientos comprenden la administración a un paciente de "señuelos" de ácidos nucleicos de doble cadena de manera que los señuelos sean capaces de entrar en las células diana del paciente y unir específicamente un factor de transcripción endógeno, inhibiendo de ese modo de manera competitiva el factor de transcripción desde la unión hasta un gen endógeno. Los señuelos se administran en cantidades y bajo condiciones con los que la unión del factor de transcripción endógeno hacia el gen endógeno se inhibe de manera competitiva con eficacia sin toxicidad significativa para el huésped. Las composiciones sometidas comprenden las moléculas del señuelo en un contexto en el que mantiene la suficiente farmacocinética para su eficaz utilización terapéutica.
Descripción de las realizaciones específicas
Las composiciones se proporcionan para modular la expresión génica in vivo mediante la administración de la composición a un paciente para introducir en una célula diana los señuelos moleculares que comprenden ADN de doble cadena, para que los factores de transcripción endógenos se unan a la célula diana. Son empleados varios procedimientos para la administración in vivo de los señuelos de manera que entren señuelos suficientes en las células dianas para inhibir de manera competitiva el factor de transcripción unido a una zona reguladora génica endógena.
Las composiciones que se emplean comprenden los "señuelos": moléculas de ácido nucleico de doble cadena con una alta afinidad de unión para los factores de transcripción orientados. Los factores de transcripción orientados son proteínas ligadoras de ADN de doble cadena de secuencia específica, endógenas, que modulan (aumentan o disminuyen) el ratio de transcripción de uno o más genes específicos en la célula diana. Esencialmente cualquier dicho factor de transcripción (de ahora en adelante, "factor de transcripción") se puede dirigir siempre que se pueda identificar un señuelo específico capaz de inhibir de manera competitiva la unión hacia el gen endógeno. Son conocidos por la técnica numerosos factores de transcripción y sus secuencias de unión, como también lo son los procedimientos para la identificación de dichos complementos; por ejemplo, ver Wang y Reed (1993) Nature 364, 121 y Wilson et al. (1991) Science 252, 1296. Tal y como se utiliza en la presente invención, endógeno quiere decir que el factor génico o de transcripción está presente en la célula diana a la vez que se introduce el señuelo. Los factores de transcripción y los elementos en cis relacionados, los procesos celulares impactados y la indicación terapéutica incluyen:
1
La longitud, la estructura y la secuencia nucleótida del señuelo variará dependiendo del factor de transcripción orientado, la indicación, la vía de administración, etc. Por ejemplo, los factores de transcripción orientados se unen con frecuencia con diferentes grados de afinidad a varias secuencias, normalmente compartiendo un alto grado de homología. Por lo tanto, uno puede decidir por utilizar una secuencia relacionada con un gen diana particular o por utilizar una secuencia de consenso basada en el nucleótido en cada lugar en que sucede más frecuentemente en las secuencias de unión para que se una el factor de transcripción particular.
Además de la afinidad de la unión, los señuelos también se seleccionan para específicar uniones. Idealmente, los señuelos serán muy específicos para el(los) factor(es) de transcripción tales que se minimizan sus efectos en las células no diana y los procesos metabólicos no orientados de las células diana. Dicha selección se lleva a cabo in vitro mediante uniones comparativas para conocer los factores de transcripción y los fragmentos nucleares y en cultivo e in vivo mediante el ensayo de la función de células no orientadas y los efectos en modelos de células no orientadas.
Los señuelos contienen suficiente secuencia nucleótida para garantizar una especificidad y afinidad suficientes de la unión del factor de transcripción orientado para una eficacia terapéutica. Para la mayor parte, los factores de transcripción orientados requerirán al menos seis pares de bases, habitualmente al menos aproximadamente ocho pares de bases para una especificidad y afinidad de unión suficientes. Con frecuencia, el proporcionar los señuelos con secuencias flanqueantes (comprendidas entre aproximadamente 5 y 50 pares de bases) junto al lugar de unión aumentan la afinidad y/o la especificidad de la unión. En consecuencia, se pueden presentar los elementos en cis flanqueando las zonas y se pueden construir los oligonucleótidos concatenados con repeticiones consecutivas de las secuencias flanqueantes de la unión y/o los elementos en cis.
En una realización, los señuelos son oligonucleótidos no replicativos de menos de 100 pares de bases, habitualmente de menos de 50 pares de bases y habitualmente libres de secuencia codificante, ante todo siendo desde la zona 5' no codificante de un gen. Alternativamente, los señuelos pueden comprender una parte de un gran plásmido, incluyendo los vectores virales, capaces del mantenimiento episomal o la replicación constitutiva en la célula diana para proporcionar términos más largos o exposición intracelular mejorada para la secuencia del señuelo. Los plásmidos se seleccionan en base a la compatibilidad con la célula diana, el tamaño y los lugares de restricción, la frecuencia replicativa, el mantenimiento del número de copias, etc. Por ejemplo, se prefieren los plásmidos con vida media relativamente corta en la célula diana en situaciones donde se desea mantener la modulación transcripcional terapéutica durante menos tiempo que la vida de la célula diana. Ejemplares de plásmidos incluyen vectores de expresión pUC conducidos por un promotor beta-actin y un potenciador CMV, conteniendo los vectores elementos derivados a partir de los potenciadores RVS o SV40, etc. El vector adenoviral se integra de forma preferente en el cromosoma 19 y se puede utilizar la expresión a largo plazo.
Los oligonucleótidos que se emplean pueden estar presentes de forma natural o de una forma diferente a la natural, donde los nucleótidos sintéticos se pueden modificar en una amplia variedad de formas; ver, por ejemplo, Bielinska et al (1990) Science 250, 997. De ese modo, los oxígenos se pueden sustituir por el nitrógeno, el azufre o el carbono; el fósforo se puede sustituir por el carbono; la desoxirribosa se puede sustituir por otros azúcares, o las bases individuales se pueden sustituir por una base no natural. En cada caso, cualquier cambio será evaluado respecto al efecto de la modificación en el enlace del oligonucleótido al factor de transcripción orientado, así como cualquier deterioro de los efectos fisiológicos. Estas modificaciones han encontrado una amplia aplicación para los oligonucleótidos "antisentido", tal y como su seguridad y su mantenimiento de la afinidad de la unión, que se encuentra bien comprobada en la literatura. Ver, por ejemplo, Wagner et al., Science 260, 1510-1513 (1993). Las cadenas se pueden sintetizar según medios convencionales utilizando la síntesis de la fosforamidita, sintetizados automáticos disponibles comercialmente, y similares.
Las composiciones administradas pueden comprender señuelos en forma individual o mezclas de señuelos. Habitualmente, la mezcla no excederá de 4 señuelos diferentes, habitualmente no excederá de 2. Los señuelos se administrarán al huésped en una forma que permita la internalización celular de los señuelos en una cantidad suficiente para inhibir de manera competitiva la unión del factor de transcripción orientado hacia un gen endógeno. El huésped es normalmente un mamífero, habitualmente un humano. El procedimiento de administración seleccionado depende principalmente de la célula diana, la naturaleza del señuelo, el huésped, el tamaño del señuelo. Procedimientos ejemplares se describen en los ejemplos de la presente invención; los procedimientos adicionales que incluyen la transfección con un retrovirus, la proteína - liposoma mediada por transfección de la envoltura vírica, la lipofectina, etc., se describen en Dzau et al., Trends in Biotech 11, 205-210 (1993).
Cuando se administran en liposomas, la concentración de señuelo en el lumen se encontrará generalmente en el rango entre aproximadamente 0,1 \muM y 50 \muM por señuelo, más habitualmente entre aproximadamente 1 \muM y 10 \muM, y mucho más habitualmente a aproximadamente 3 \muM. Mediante otras técnicas, habitualmente uno determinará empíricamente la velocidad de aplicación, utilizando técnicas convencionales para determinar los rangos deseados.
En algunas situaciones se puede desear el proporcionar la fuente del señuelo con un agente que oriente las células diana, tal como un anticuerpo específico para una proteína de la membrana superficial en la célula diana, un ligando para un receptor en la célula diana, etc.
Además, cuando los liposomas están implicados, uno puede desear el incluir proteínas asociadas con la endocitosis, donde las proteínas se unen a una proteína de membrana externa relacionada con la endocitosis. De ese modo, uno puede utilizar proteínas o fragmentos de la cápside del mismo trópico para un tipo de célula particular, anticuerpos para proteínas que sufren internalización en el ciclo, proteínas que orientan la localización intracelular y la mejora de la vida media intracelular.
Las aplicaciones de las terapéuticas sometidas son preferentemente locales, para restringirse a un lugar histológico de interés.
Se pueden utilizar diversas técnicas para proporcionar las composiciones sometidas en el lugar de interés, tal como la inyección, la utilización de catéteres, trocares, proyectiles, gel de pluronic, endoprótesis vasculares, polímeros para la liberación controlada de fármacos u otro dispositivo que proporcione un acceso interno, o similares. Cuando esté accesible un órgano o un tejido debido a que se ha extraído de un paciente, dicho órgano o tejido se puede bañar en un medio que contenga las composiciones sometidas, las composiciones sometidas se pueden pintar sobre el órgano, o se pueden aplicar de cualquier manera conveniente. Alternativamente, se puede practicar la administración sistémica del señuelo utilizando, por ejemplo, la lipofección, los liposomas con orientación de tejido (por ejemplo, un anticuerpo), etc. La administración sistémica es la más aplicable cuando la distribución del factor de transcripción orientado se limita sobre todo a los tipos de célula orientadas.
Los parámetros óptimos del tratamiento variarán con la indicación, el señuelo, el estado clínico, etc., y generalmente se determinan empíricamente, utilizando la orientación que se proporciona en la presente invención.
Los ejemplos siguientes se ofrecen a modo de ilustración y no a modo de limitación.
Experimental Ejemplo 1 Transfección de señuelo del grupo E2F en Células Cultivadas
Para los extractos nucleares, las células musculares lisas vasculares ("VSMCs") se estimularon con suero hasta el confluente. Después del confluente, las células se hicieron quiescentes mediante la colocación en un medio libre de suero durante 48 horas. Después de la transfección con los oligodeoxinucleotidos del señuelo ("ODN"; 14 bases de pares, (números de identificación de la secuencia: 01 y 02)) esencialmente tal y como se describieron en Morishita et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sel. USA, 90, 8474-8479, las células se estimularon mediante un 5% de suero. Después de 6 horas, se extrajo ARN mediante ARNzol (Tel-Test Inc, Texas - USA) Chomczynski and Sacchi (1987) Anal. Biochem. 162, 156-159. Los niveles de PCNA, cdc2 y beta-actin mARNs se midieron mediante la RT-PCR (Morishita et al. (1993) supra). El iniciador del PCNA (nucleótidos 150-177 de cADN del PCNA de rata) y el iniciador 5' del cdc2 (nucleótidos 54-75 de cADN del cdc2 de humanos) se describieron anteriormente (Morishita et al. (1993) supra). Los iniciadores complementarios para el gen beta-actin de rata se obtuvieron a partir de Clontech Laboratories Inc. (Palo Alto, California - USA). Las alícuotas de ARN se amplificaron de manera simultánea mediante la PCR (30 ciclos) y se compararon con un control negativo (iniciadores sin ARN). Los productos de amplificación se sometieron a electroforesis en un gel de agarosa al 2% y teñidos con bromuro de etidio. Se realizó un ensayo de retardo en gel tal y como se describió anteriormente (Horiuchi et al., J. Biol. Chem. 266. 16247-16254
(1991).
El ODN de doble cadena de 14 pares de bases (números de identificación de la secuencia: 01 y 02) suprimieron con eficacia la unión del factor de transcripción del grupo E2F hacia un lugar de unión específica en el VSMCs estimulado con suero. Ver también Hiebert et al. (1989) PNAS 86, 3594. La transfección con el señuelo ODN del grupo E2F inhibió notablemente la inducción de c-myc, cdc2 y la expresión mARN del PCNA en respuesta a la estimulación del suero. El señuelo ODN del grupo E2F no tenía efecto en la expresión beta-actin mARN. Además, el elemento ODN del grupo E2F de sentido erróneo de control que contiene dos sustituciones de pares de bases que eliminan el enlace del grupo E2F no inhibió la inducción de la expresión del ARN de c-myc, cdc2 y PCNA en respuesta a la estimulación del suero. En relación con la inhibición eficaz de la expresión génica reguladora del ciclo celular, la transfección con el señuelo del grupo E2F de 14 pares de bases también suprimió la proliferación del VSMC estimulado con suero. En contraste, el elemento ODN del grupo E2F de sentido erróneo (números de identificación de la secuencia: 3 y 4) no tienen efecto en la mitogenesis inducida por el suero.
Para confirmar además la especificidad de esta respuesta al señuelo del grupo E2F, se empleó un ODN de doble cadena de 30 pares de bases (números de identificación de la secuencia: 05 y 06) que contenían dos elementos en cis del grupo E2F de 8 pares de bases capaces de la unión específica al grupo E2F (Weintraub et al., Nature 358, 259-261 (1992)). En el señuelo del grupo E2F de 30 pares de bases del quinto nucleótido de los elementos en cis del grupo E2F de 8 pares de bases se cambiaron desde C hasta G. A pesar de estas diferencias en las secuencias flanqueantes y la composición del nucleótido, ambos señuelos del grupo E2F unen con eficacia el grupo E2F e inhiben la proliferación de la célula muscular lisa vascular (VSMC) estimulada por suero. Además, un elemento ODN del grupo E2F de sentido erróneo de 30 pares de bases (números de identificación de la secuencia: 07 y 08) con substituciones de 5 pares de bases con los elementos de consenso del grupo E2F de 8 pares de bases no pudo unir el grupo E2F y también no pudo inhibir la proliferación de la VSMC estimulada por suero. De ese modo, estos estudios in vitro documentaron que la transfección con el señuelo ODN del elemento en cis del grupo E2F une el factor de la transcripción del grupo E2F, bloqueado la inducción de la expresión génica reguladora del ciclo celular e inhibiendo la proliferación VSMC de una forma específica de la secuencia.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 2 Señuelos del grupo E2F In Vivo
Los liposomas se prepararon como sigue: la fosfatidilserina, la fosfatidilcolina, y el colesterol se mezclaron con una relación de peso (1:4,8:2) para crear una mezcla de lípido. El lípido se hidrató en una solución de sal equilibrada que contenía ODN (números de identificación de la secuencia: 01 y 02) (110 nmol). El HVJ (cepa Z) purificado se inactivó mediante radiación ultravioleta momentos antes de su utilización. La suspensión del liposoma se mezcló con el HVJ (cepa Z) (20.000 unidades hemaglutinantes), se incubó, y después se eliminó el HVJ libre mediante la centrifugación por gradiente de densidad de la sucrosa. La concentración final del ADN encapsulado se calculó según lo divulgado anteriormente (Morishita et al. (1993) supra). Este procedimiento da lugar a una absorción celular y a una concentración nuclear más rápida, llevando a una eficacia de la transfección con el ODN cien veces más alta que la lipofección o procedimientos pasivos de absorción.
\newpage
Las secuencias del ODN fosforotioato utilizaron:
2 
\vskip1.000000\baselineskip
También examinamos otro juego de señuelos ODNs que contenían dos lugares de unión:
3
El VSMC de la aorta de rata (paso 4 - 10) se estudió en un estado confluente y quiescente en un medio libre de suero (Morishita et al, J. Clin. Invest. 91, 2580-2585 (1993)). Las células se incubaron con los liposomas del virus hemaglutinante de liposoma de Japón (HVJ) (3 \muM) a 4ºC durante 5 minutos y a 37ºC durante 30 minutos. Tres días después de la transfección en el suero bovino (CS) o en el medio libre de suero, se determinó el número de células mediante un Contador Hematológico Coulter (Coulter, Florida - USA).
Ejemplo 3 Efecto del señuelo ODN en la expresión génica in vivo
Un catéter Fogarty de 2 French se utilizó para inducir la lesión vascular en las ratas Sprague-Dawley macho (400 - 500 g; Laboratorios Charles River Breeding) (Hanke et al., Circ. Res. 67, 651-659 (1990)). Estas ratas se anestesiaron, y se introdujo una cánula en la carótida común izquierda mediante la arteria carótida externa. Después de la lesión vascular de la carótida común, el segmento distal dañado se aisló transitoriamente mediante ligaduras temporales. El complejo del HVJ se infundió en el segmento y se incubó durante 10 minutos a temperatura ambiente. No se observaron efectos neurológicos o vasculares adversos en ningún animal que experimentaba este procedimiento.
Para el análisis del ARN, los vasos se cultivaron durante 6 horas (c-myc y beta-actin) y un día (cdc2 quinasa, PCNA y beta-actin) después de la transfección. Se extrajo el ARN de los vasos intactos dañados o no tratados con el señuelo ODN mal apareado o del señuelo ODN del grupo E2F (3 \muM) mediante ARNzol (Tel-Test Inc., Texas - USA). Se llevó a cabo la RT-PCR tal y como se describió anteriormente. Para la tinción con BrdU, se inyectó la BrdU en las ratas (100 mg/kg subcutáneamente y 30 mg/kg intraperitonealmente en las 18 horas previas, y entonces 30 mg/kg intraperitonealmente en las 12 horas previas al sacrificio (Hanke et al., supra)). Las ratas se sacrificaron después del día cuatro después de la transfección. Se eliminó la arteria carótida después de la perfusión - fijación con paraformaldehido al 4%, y se procesó mediante inmunohistoquímica de una manera estándar utilizando anticuerpos anti-BrdU (Amersham). La proporción de células positivas de la BrdU se determinó mediante recuento celular bajo microscopia óptica en un diseño experimental ciego.
Los procedimientos de transfección se describieron anteriormente. El complejo HVJ - ODN (3 \muM) se administró en las arterias carótidas dañadas de rata. Dos semanas después de la transfección, se sacrificaron las ratas y se fijaron los vasos por perfusión con paraformaldehido al 4%. Se analizaron tres secciones individuales del centro de los segmentos transfectados. Además, también se analizaron tres secciones de la sección central de la zona no transfectada dañada. Los animales se codificaron para que la operación y el análisis se realizaran sin conocer el tratamiento que recibieron cada uno de los animales. Se midieron las áreas íntimal y medial en una tabla de digitalización (Southern Micro Instruments, Georgia - USA). Se utilizó el análisis de la varianza con la posterior prueba de Duncan para determinar las diferencias significativas en múltiples comparaciones. Un P < 0,05 se consideró significativo.
Las secuencias de señuelos se secuencia aleatoria y del elemento de respuesta a progestágenos (PRE) utilizados como control de los ODNs son tal y como sigue:
5
Un día después de la lesión con balón, los niveles de mARN de c-myc, cdc2 y PCNA se elevaron en los vasos carotídeos transfectados con el elemento ODN del grupo E2F de sentido erróneo de control tal y como se detectó mediante la RT-PCR. Sin embargo, la transfección in vivo del señuelo ODN del elemento en cis del grupo E2F dio lugar a una disminución marcada en niveles de mARN de c-myc, cdc2 y PCNA hasta unos niveles apenas perceptibles similares a los de los vasos ilesos. Además, los señuelos del elemento en cis del grupo E2F inhibieron significativamente la incorporación de la bromodeoxiuridina (BrdU) (un marcador de la síntesis del ADN) dentro de la pared del vaso 4 días después de la lesión tal y como se comparó con el material del ODN del grupo E2F de sentido erróneo. Además, la transfección con el señuelo ODN del grupo E2F (n = 8) dio lugar a una marcada supresión de la formación de neoíntima dos semanas después de la angioplastia en comparación con los vasos tratados sólo con el complejo
HVJ - liposoma (n = 5) o los vasos tratados con el señuelo ODN de control de secuencia aleatoria (n = 8). La selectividad del efecto del señuelo ODN se confirmó además por el hecho de que la inhibición de la formación de neoíntima se limitó al área de la transfección intraluminal (ratio neoíntima/medial; lesiones transfectadas = 0,291 \pm 0,061 frente a lesiones no transfectadas = 1,117 \pm 0,138, P < 0,01). En cambio, los segmentos carotídeos dañados adyacentes fuera del área de transfección con el señuelo exhibieron lesiones neoíntimales similares al control tratado con ODN mal apareado. Además, en la inhibición de la formación de neoíntima no se produjo ni la transfección de los señuelos de secuencia aleatoria (14 pares de bases) ni los señuelos del elemento de respuesta a progestágenos (27 pares de bases) (Klein-Hitpass et al., Cell 60, 247-257 (1990)).
La especificidad del efecto inhibitorio del señuelo ODN contra el grupo E2F sobre la formación de neoíntima se sostiene mediante varias líneas de evidencia: (1) los dos señuelos ODN del grupo E2F diferentes se unen al factor de transcripción del grupo E2F de una forma específica de la secuencia y la transfección con el señuelo ODN del grupo E2F inhibió totalmente la proliferación de la VSMC in vitro, mientras que el ODN mal apareado no lo hizo; (2) los experimentos in vitro e in vivo documentaron que el señuelo ODN del grupo E2F inhibió selectivamente la expresión de los genes reguladores del ciclo celular orientado (c-myc, PCNA y cdc2 quinasa) transactivado mediante el grupo E2F, pero no mediante beta-actin (probablemente, se pudieron inhibir otros genes transactivados del grupo E2F tales como el c-myb); (3) el señuelo ODN del grupo E2F redujo específicamente un marcador cuantitativo de la progresión del ciclo celular in vivo (marcaje con BrdU); (4) la administración del señuelo ODN, pero no el mal apareado, del grupo E2F inhibió notablemente la formación de neoíntima; (5) la prevención de la formación de neoíntima se limitó al área transfectada con el señuelo ODN; y (6) ni los señuelos de secuencia aleatoria ni los señuelos del elemento en cis del PRE inhibieron la formación de neoíntima.
Ejemplo 4 Expresión de Renina en Glándula Submandibular (SMG) Cultivada Línea Celular
Para evaluar los mecanismos moleculares que regulan la expresión génica de la renina específica del tejido, empleamos una línea celular (SCA-9) derivada de un tumor de la SMG. Esta línea, derivada a partir de un gen de ratón de dos reninas (Swiss Webster) se ha divulgado por contener renina. Utilizando la inmunohistoquímica y el análisis por extensión con iniciadores, confirmamos mediante la inmunohistoquímica que esta línea celular expresa la renina. Además, como consecuencia del origen de la SMG de esta línea celular, solamente se transcribe el gen Ren2. Para aclarar el mecanismo detrás del silenciamiento del gen Ren1 en esta línea celular, examinamos si el elemento de la respuesta negativa, el NRE, la proteína ligadora estaba presente en estas células. Los extractos nucleares se prepararon a partir de las células cultivadas de la SMG y el ensayo de retardo en gel se realizó utilizando el oligonucleótido ^{32}P-NRE como prueba. Una proteína específica: el complejo de ADN se observó que se podría competir específicamente con el oligonucleótido del NRE no marcado.
Estos resultados muestran que el patrón de la expresión de renina en esta línea de células es similar al considerado en la SMG in vivo; se validan la utilización de estas células para los estudios del mecanismo por el cual se regula la expresión de renina.
Ejemplo 5 Utilización del "Señuelo" para Validar la Importancia de las Interacciones Cis - Trans
Examinamos la viabilidad del enfoque "señuelo" para ensayar si la interacción de la proteína ligadora del NRE:NRE es responsable del silenciamiento del gen Ren1 en la SMG y en la línea celular derivada de la SMG. Este ensayo se basa en la competición in vivo para los factores de actuación en trans. La competición se encuentra entre los elementos en cis endógenos que se encuentran en el gen diana y los oligonucleótidos agregados de manera exógena que se corresponden con esa secuencia cis. Esta competición atenuará la auténtica interacción cis - trans, dando lugar a la eliminación de los factores trans del elemento cis, con la posterior modulación de la expresión génica.
Un oligonucleótido de doble cadena marcadas con FITC (33 mer), que corresponde al NRE, se introdujo en la línea celular de la SMG utilizando la tecnología del HVJ - liposoma. Las células se incubaron con el HVJ - liposoma que contenía el señuelo del NRE a 4ºC durante 10 minutos y después a 37ºC durante 30 minutos. Las células aceptaron inmediatamente los oligómeros según lo evidenciado por la intensa señal fluorescente que se localizó en el núcleo (Figura 1C). Las células se cosecharon 24 horas más tarde, se preparó el ARN y se sometió al análisis por extensión con iniciadores para examinar la expresión de los genes Ren1 y Ren2. Consecuentes con nuestra hipótesis, la introducción de las secuencias del NRE en estas células dio lugar a la inducción de la expresión del gen Ren1. La expresión del gen Ren2 no se vio influenciada por la administración del oligonucleótido del NRE.
Estos resultados muestran que la interacción de la proteína ligadora del NRE:NRE es responsable de silenciar la expresión Ren1 en esta línea celular y demuestra la viabilidad de usar el enfoque del "señuelo" para examinar las interacciones cis - trans responsables de la regulación de la expresión génica de la renina.
Ejemplo 6 Transferencia Génica in vivo en la SMG
Transfectamos 10 \mug de nuestros vectores de expresión en la SMG de un ratón DBA/2J utilizando el complejo HVI - Liposoma - ADN tal y como se describió anteriormente. Ello se consiguió inyectando directamente en las zonas múltiples de la glándula con un volumen total de 100 \mul utilizando una aguja de calibre 27. Tres días después de la transfección, se eliminó la SMG, se homogeneizó, y el sobrenadante se ensayó para la actividad CAT. La transfección con el pUtk-CAT dirigió la expresión de CAT (Horiuchi et al. (1991) supra). La presencia del fragmento Ren1 Xba (que contiene la zona CRE/NRE) disminuyó la expresión CAT aproximadamente el 90%. La supresión de la secuencia del NRE mediante mutagenesis in vitro dio lugar a la recuperación de la expresión CAT. Estos resultados demuestran que es posible utilizar transferencia génica in vivo para examinar la expresión génica en la SMG in vivo.
Es evidente a partir de los anteriores resultados, que los procedimientos y las composiciones sometidas proporcionan oportunidades para prevenir la lesión a partir de las enfermedades proliferativas agudas o las enfermedades que implican la expresión de proteínas, tales como las proteínas asociadas con la división, la adhesión y/o la migración celulares. De ese modo, los procedimientos y las composiciones sometidas pueden proporcionar tratamientos profilácticos y terapéuticos seguros para un número de enfermedades asociadas con la proliferación y la inflamación celulares, que se traduce en condiciones patógenas.
\vskip1.000000\baselineskip
Referencias citadas en la descripción La lista de referencias citadas por el Solicitante está únicamente para comodidad del lector. No forma parte del documento de la Patente Europea. A pesar del gran cuidado que se ha llevado en recopilar las referencias, los errores o las omisiones no pueden ser excluidos y la Oficina de Patentes Europeas niega toda responsabilidad en esta consideración. 
\vskip1.000000\baselineskip
Documentos de la patente citados en la descripción
\bullet EP 95900450 A [0044]
\vskip1.000000\baselineskip
Literatura no patente citada en la descripción
\bulletNEVINS. Science, 1992, volumen 258, 424-429 [0005]
\bulletDALTON. EMBO J., 1992, volumen 11, 11797 [0005]
\bulletYEE et al. EMBO J., 1987, volumen 6, 2061 [0005]
\bulletWEINTRAUB et al. Nature, 1992, volumen 358, 259-261 [0005] [0026]
\bulletPAGANO et al. Science, 1992, volumen 255, 1144-1147 [0005]
\bulletKANEDA et al. Science, 1989, volumen 243, 375 [0005]
\bulletRITZENTHALER et al. Biochem. J., 1991, volumen 280, 157-162 [0005]
\bulletRITZENTHALER et al. J. BioL Chem., 1993, volumen 268, 13625-13631 [0005]
\bulletBIELINSKA et al. Science, 1990, volumen 16, 997-1000 [0005]
\bulletSULLENGER et al. Cell, 1990, volumen 63, 601-608 [0005]
\bulletLIBBY et al. Circulation, 1992, volumen 86, III-47 [0006]
\bulletCLOWES et al. J. Cardiovasc. Pharmacol., 1989, volumen 14, 12-15 [0006]
\bulletWANG; REED. Nature, 1993, volumen 364, 121 [0010]
\bulletWILSON et al. Science, 1991, volumen 252, 1296 [0010]
\bulletBIELINSKA et al. Science, 1990, volumen 250, 997 [0015]
\bulletWAGNER et al. Science, 1993, volumen 260, 1510-1513 [0015]
\bulletDZAU et al. Trends in Biotech, 1993, volumen 11, 205-210 [0016]
\bulletMORISHITA et al. Proc. Natl. Acad. Sel. USA, 1993, volumen 90, 8474-8479 [0024]
\bulletCHOMCZYNSKI; SACCHI. Anal. Biochem., 1987, volumen 162, 156-159 [0024]
\bulletHORIUCHI et al. J. Biol. Chem., 1991, volumen 266, 16247-16254 [0024]
\bulletHIEBERT et al. PNAS, 1989, volumen 86, 3594 [0025]
\bulletMORISHITA et al. J. Clin. Invest., 1993, volumen 91, 2580-2585 [0030]
\bulletHANKE et al. Circ. Res., 1990, volumen 67, 651-659 [0031]
\bulletKLEIN-HITPASS et al. Cell, 1990, volumen 60, 247-257 [0035]
(1) INFORMACIÓN GENERAL:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
SOLICITANTE:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE: Dzau, Víctor J.
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
CALLE: 110 Dudley Road
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
CIUDAD: Newton
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
ESTADO: Massachusetts
\vskip0.500000\baselineskip
(E)
PAÍS: ESTADOS UNIDOS DE AMÉRICA
\vskip0.500000\baselineskip
(F)
CÓDIGO POSTAL (CP): 02159
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TÍTULO DE LA INVENCIÓN: Utilización terapéutica de señuelos de elementos en cis in vivo 
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
NÚMERO DE SECUENCIAS: 12
\vskip0.800000\baselineskip
(iv)
FÓRMULA LEGIBLE POR EL ORDENADOR:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
TIPO DE MDIO: Disquete
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
ORDENADOR: IBM compatible PC
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
SOFTWARE: PatentIn Release #1.0, Versión #1.25 (EPO)
\vskip0.800000\baselineskip
(v)
DATO DE LA SOLICITUD VIGENTE:
\vskip0.800000\baselineskip
NÚMERO DE SOLICITUD: EP 95900450.8
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA EL NÚMERO DE IDENTIFICACIÓN DE LA SECUENCIA: 1:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 14 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
ORIENTACIÓN: doble
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: cADN
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: NÚMERO DE IDENTIFICACIÓN DE LA SECUENCIA: 1:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
CTAGATTTCC CGCG 
\hfill
14 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA EL NÚMERO DE IDENTIFICACIÓN DE LA SECUENCIA: 2:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 14 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
ORIENTACIÓN: doble
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: cADN
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: NÚMERO DE IDENTIFICACIÓN DE LA SECUENCIA: 2:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GATCCGCGGG AAAT 
\hfill
14 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA EL NÚMERO DE IDENTIFICACIÓN DE LA SECUENCIA: 3:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 14 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
ORIENTACIÓN: doble
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: cADN
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: NÚMERO DE IDENTIFICACIÓN DE LA SECUENCIA: 3:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
CTAGATTTCG AGCG 
\hfill
14 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA EL NÚMERO DE IDENTIFICACIÓN DE LA SECUENCIA: 4:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 14 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
ORIENTACIÓN: doble
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: cADN
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: NÚMERO DE IDENTIFICACIÓN DE LA SECUENCIA: 4:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GATCCGCTCG AAAT 
\hfill
14 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA EL NÚMERO DE IDENTIFICACIÓN DE LA SECUENCIA: 5:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 30 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
ORIENTACIÓN: doble
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: cADN
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: NÚMERO DE IDENTIFICACIÓN DE LA SECUENCIA: 5:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GATCAAAAGC GCGAATCAAA AGCGCGAATC 
\hfill
30 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA EL NÚMERO DE IDENTIFICACIÓN DE LA SECUENCIA: 6:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 30 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
ORIENTACIÓN: doble
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: cADN
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: NÚMERO DE IDENTIFICACIÓN DE LA SECUENCIA: 6:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GATTCGCGCT TTTGATTCGC GCTTTTGATC 
\hfill
30 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA EL NÚMERO DE IDENTIFICACIÓN DE LA SECUENCIA: 7:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 30 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
ORIENTACIÓN: doble
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: cADN
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: NÚMERO DE IDENTIFICACIÓN DE LA SECUENCIA: 7:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GATCAAAGAA CTGAATCAAA GAACTGAATC 
\hfill
30 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA EL NÚMERO DE IDENTIFICACIÓN DE LA SECUENCIA: 8:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 30 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
ORIENTACIÓN: doble
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: cADN
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: NÚMERO DE IDENTIFICACIÓN DE LA SECUENCIA: 8:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GATTCAGTTC TTTGATTCAG TTCTTTGATC 
\hfill
30 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA EL NÚMERO DE IDENTIFICACIÓN DE LA SECUENCIA: 9:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 14 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
ORIENTACIÓN: doble
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: cADN
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: NÚMERO DE IDENTIFICACIÓN DE LA SECUENCIA: 9:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
TCCAGCTTCG TAGC 
\hfill
14 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA EL NÚMERO DE IDENTIFICACIÓN DE LA SECUENCIA: 10:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 13 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
ORIENTACIÓN: doble
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: cADN
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: NÚMERO DE IDENTIFICACIÓN DE LA SECUENCIA: 10:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GCTAGCTAGG AAG 
\hfill
13 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA EL NÚMERO DE IDENTIFICACIÓN DE LA SECUENCIA: 11:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 27 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
ORIENTACIÓN: doble
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: cADN
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: NÚMERO DE IDENTIFICACIÓN DE LA SECUENCIA: 11:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GATCCTGTAC AGGATGTTCT AGCTACA 
\hfill
27 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA EL NÚMERO DE IDENTIFICACIÓN DE LA SECUENCIA: 12:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 27 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
ORIENTACIÓN: doble
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: cADN
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: NÚMERO DE IDENTIFICACIÓN DE LA SECUENCIA: 12:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
TGTAGCTAGA ACATCCTGTA CAGGATC 
\hfill
27

Claims (9)

1. Utilización de ADN de doble cadena que tiene una secuencia específica para la unión de un factor de transcripción que modula la transcripción de al menos un gen en la preparación de un medicamento para modular la transcripción génica in vivo dentro de células de mamíferos mediante la introducción de dicho ADN de doble cadena en el núcleo de dichas células en una cantidad suficiente para inhibir de manera competitiva la unión de dicho factor de transcripción a dicho gen y, de ese modo, tratar profilácticamente o terapéuticamente una condición que requiere la inhibición de la restenosis, la hiperplasia intimal, la hiperplasia neoíntimal o la neoplasia, en el que dicho factor de transcripción se selecciona a partir de E2F, AP-I, SSRE y TRE.
2. Utilización de la Reivindicación 1, en el que dicho ADN de doble cadena es capaz de una replicación episomal en dicha célula.
3. Utilización de la Reivindicación 1, en el que dicho ADN de doble cadena consiste en oligonucleótidos de menos de 100 pares de bases de longitud.
4. Utilización según cualquiera de las Reivindicaciones 1, 2 y 3, en el que dicho medicamento comprende además liposomas, y dicho ADN de doble cadena está contenido dentro del lumen de dichos liposomas.
5. Utilización de la Reivindicación 4, en el que la concentración del ADN de doble cadena en el lumen se encuentra en el rango de 0,1 a 50 \muM.
6. Utilización de la Reivindicación 5, en el que dichos liposomas comprenden un lípido y una proteína de la envoltura vírica.
7. Utilización de la Reivindicación 6, en el que dicha envoltura vírica proviene del virus hemaglutinante del Japón.
8. Utilización según cualquiera de las Reivindicaciones precedentes, en el que dichas células son células musculares lisas vasculares en el lugar de una lesión vascular y el medicamento se encuentra para prevenir la restenosis.
9. Utilización según cualquiera de las Reivindicaciones precedentes, en el que dichas células son capaces de conducir a una restenosis como resultado de una formación de neoíntima, y es necesario el producto de transcripción de dicho gen para la proliferación celular.
ES95900450T 1993-10-29 1994-10-28 Utilizacion terapeutica de señuelos de elementos en cis in vivo. Expired - Lifetime ES2307293T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US14471793A 1993-10-29 1993-10-29
US144717 1993-10-29

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2307293T3 true ES2307293T3 (es) 2008-11-16

Family

ID=22509818

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES95900450T Expired - Lifetime ES2307293T3 (es) 1993-10-29 1994-10-28 Utilizacion terapeutica de señuelos de elementos en cis in vivo.

Country Status (8)

Country Link
US (5) US6774118B1 (es)
EP (3) EP1340505A3 (es)
AT (1) ATE395065T1 (es)
DE (1) DE69435100D1 (es)
DK (1) DK0732929T3 (es)
ES (1) ES2307293T3 (es)
PT (1) PT732929E (es)
WO (1) WO1995011687A1 (es)

Families Citing this family (45)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2307293T3 (es) 1993-10-29 2008-11-16 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Utilizacion terapeutica de señuelos de elementos en cis in vivo.
US6399376B1 (en) * 1993-11-05 2002-06-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of vascular cell adhesive molecule expression through oligonucleotide interactions
DE69534197T2 (de) * 1994-11-17 2006-02-16 Taiho Pharmaceutical Co. Ltd. Doppelsträngiges oligonukleotid und karzinostatisches mittel das dieses als aktiven inhaltsstoff enthält
JP3474879B2 (ja) 1995-05-12 2003-12-08 アンジェスエムジー株式会社 ＮＦ−κＢに起因する疾患の治療および予防剤
US6946246B1 (en) * 1997-04-08 2005-09-20 The United States Of America As Represented By The Administrator Of The National Aeronautics And Space Administration Production of functional proteins: balance of shear stress and gravity
AU5329599A (en) * 1998-07-30 2000-02-21 University Of South Florida Method for the modulation of function of transcription factors
US6599741B1 (en) 1999-09-14 2003-07-29 Avontec Gmbh Modulating transcription of genes in vascular cells
WO2002018607A2 (en) * 2000-08-30 2002-03-07 North Carolina State University Transgenic plants containing molecular decoys that alter protein content therein
AU2002248185A1 (en) * 2000-12-14 2002-07-16 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Inhibition of angiogenesis by nucleic acids
EP1362600B1 (en) * 2001-02-20 2008-04-02 AnGes MG, Inc. TOPICAL USE OF NF-kB DECOYS FOR TREATING ATOPIC DERMATITIS
DE10148828B4 (de) * 2001-10-04 2005-05-19 Avontec Gmbh Modulation der Expression STAT-1-abhängiger Gene
DE60231063D1 (de) * 2002-02-01 2009-03-19 Anges Mg Inc N zur behandlung von aneurysmen
US20030224992A1 (en) * 2002-03-15 2003-12-04 Praecis Pharmaceuticals Inc. Transcription factor modulators and uses thereof
CN1240439C (zh) 2002-03-28 2006-02-08 南京凯基生物科技发展有限公司 肿瘤基因开关药物
TWI231312B (en) 2002-04-26 2005-04-21 Anges Mg Inc Novel dumbbell decoy oligodeoxynucleotides and use thereof
DE10240417A1 (de) * 2002-09-02 2004-03-11 Avontec Gmbh Decoy-Oligonukleotid-Hemmung der CD40-Expression
DE10242319A1 (de) * 2002-09-12 2004-03-25 Avontec Gmbh Funkionelle Korrektur der-786C/T-Varianz des humanen eNOS-Gens
US20040266712A1 (en) * 2003-04-08 2004-12-30 Mcevoy Leslie M. Selective inhibition of vascular smooth muscle cell proliferation
WO2005035547A2 (en) * 2003-10-06 2005-04-21 Corgentech, Inc. E2f oligonucleotide decoy molecules
US7824857B2 (en) 2003-12-02 2010-11-02 Musc Foundation For Research Development Methods and compositions for diagnosing epithelial cell cancer
WO2005079217A2 (en) * 2003-12-19 2005-09-01 University Of Cincinnati Oligonucleotide decoys and methods of use
US8034619B2 (en) * 2003-12-19 2011-10-11 University Of Cincinnati Polyamides for nucleic acid delivery
WO2005084254A2 (en) 2004-02-27 2005-09-15 Musc Foundation For Research Development Enhanced detection of rna using a panel of truncated gene-specific primers for reverse transcription
US7482158B2 (en) * 2004-07-01 2009-01-27 Mathison Brian H Composite polynucleic acid therapeutics
EP1774025A4 (en) 2004-07-09 2009-09-16 Univ Pittsburgh IDENTIFYING MARKERS IN LUNG AND BREAST CANCER
US20060293264A1 (en) * 2004-07-22 2006-12-28 Grandis Jennifer R STAT3 decoy oligonucleotides and uses therefor
EP1803811B1 (en) 2004-10-22 2011-05-11 AnGes MG, Inc. Chimeric (double) decoy
US7585848B2 (en) 2005-01-11 2009-09-08 Rush University Medical Center Methods and compositions for treating, inhibiting and reversing disorders of the intervertebral disc
US20060234973A1 (en) * 2005-04-14 2006-10-19 Kevin Fitzgerald Transcription factor RNA interference reagents and methods of use thereof
US20090143319A1 (en) * 2005-06-06 2009-06-04 Angesmg, Inc. Transcription factor decoy
EP1978096A1 (en) 2005-12-22 2008-10-08 Genomidea Inc Novel oligonucleotide and nf-kappa b decoy comprising the same
CA2634291A1 (en) * 2005-12-22 2007-06-28 Institut De Cardiologie De Montreal Transcription factor decoy oligodeoxynucleotides having multiple cis elements
US8501478B2 (en) * 2006-06-15 2013-08-06 University Of Cincinnati Trehalose click polymers for delivery of biologically active molecules
WO2008100292A2 (en) 2006-10-16 2008-08-21 Genelux Corporation Modified vaccinia virus strains for use in diagnostic and therapeutic methods
JP5384120B2 (ja) 2007-02-16 2014-01-08 アンジェスＭｇ株式会社 歯周病、及び外科手術による歯槽骨欠損の治療剤
WO2008141308A2 (en) * 2007-05-11 2008-11-20 Adynxx, Inc. Gene expression and pain
WO2009117484A2 (en) 2008-03-18 2009-09-24 University Of South Florida Small molecule e2f inhibitor
CN102046208B (zh) 2008-03-28 2014-07-02 安琪士摩奇株式会社 包含转录因子诱饵作为活性成分的用于外部应用的组合物
WO2011084694A1 (en) 2009-12-17 2011-07-14 University Of Pittsburgh-Of The Commonwealth System Of Higher Education Stabilized stat3 decoy oligonucleotides and uses therefor
CN104487096B (zh) 2012-05-10 2020-09-15 埃迪恩克斯股份有限公司 用于活性成分递送的配制物
JP6453212B2 (ja) 2012-07-13 2019-01-16 ウェイブ ライフ サイエンシズ リミテッドＷａｖｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｌｔｄ． キラル制御
WO2015031628A1 (en) * 2013-08-28 2015-03-05 Oregon Health & Science University Synthetic oligonucleotides for detection of nucleic acid binding proteins
ES2750689T3 (es) 2014-08-15 2020-03-26 Adynxx Inc Señuelos oligonucleotídicos para el tratamiento del dolor
JPWO2017068790A1 (ja) * 2015-10-23 2018-08-09 レナセラピューティクス株式会社 核酸複合体
WO2018067165A1 (en) * 2016-10-07 2018-04-12 Miami University Engineered oncolytic viruses containing hyper-binding sites to sequester and suppress activity of oncogenic transcription factors as a novel treatment for human cancer

Family Cites Families (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5804374A (en) * 1980-12-05 1998-09-08 Massachusetts Insti. Technology Nuclear factors associates with transcriptional regulation
US6150090A (en) * 1986-01-09 2000-11-21 Massachusetts Institute Of Technology Nuclear factors associated with transcriptional regulation
US5276019A (en) 1987-03-25 1994-01-04 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US5264423A (en) 1987-03-25 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
WO1991011535A1 (en) * 1990-01-30 1991-08-08 Childrens Hospital Of Los Angeles Inhibition of transcription by double-stranded oligonucleotides
EP0580754A1 (en) * 1991-04-18 1994-02-02 The Salk Institute For Biological Studies Oligodeoxynucleotides and oligonucleotides useful as decoys for proteins which selectively bind to defined dna sequences
US6262022B1 (en) * 1992-06-25 2001-07-17 Novartis Ag Pharmaceutical compositions containing cyclosporin as the active agent
US6699985B2 (en) * 1991-08-21 2004-03-02 Arsinur Burcoglu Method of treating HIV infection and related secondary infections thereof
ES2181677T3 (es) * 1991-08-23 2003-03-01 Univ Nebraska Metodo y composiciones utiles en la reprogramacion celular.
AU3584993A (en) * 1992-01-27 1993-09-01 Trustees Of The University Of Pennsylvania, The Methods and compositions for neutralizing intracellular nucleic acid-binding protein biological activity in a cell, including methods and compositions useful to regulate gene function
WO1993015227A1 (en) * 1992-01-29 1993-08-05 Duke University Method of assaying for the oncogenic state of cells
US5821234A (en) 1992-09-10 1998-10-13 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Inhibition of proliferation of vascular smooth muscle cell
NZ257181A (en) * 1992-10-29 1997-07-27 Medical Res Council Transcription factor dp-1, dna, vectors and host cells therefor
US5631237A (en) 1992-12-22 1997-05-20 Dzau; Victor J. Method for producing in vivo delivery of therapeutic agents via liposomes
KR100306376B1 (ko) * 1993-10-29 2001-11-30 순이찌 시오자와 간엽계세포의증식길항저해제
ES2307293T3 (es) * 1993-10-29 2008-11-16 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Utilizacion terapeutica de señuelos de elementos en cis in vivo.
US6399376B1 (en) * 1993-11-05 2002-06-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of vascular cell adhesive molecule expression through oligonucleotide interactions
JP3474879B2 (ja) * 1995-05-12 2003-12-08 アンジェスエムジー株式会社 ＮＦ−κＢに起因する疾患の治療および予防剤
US6890909B1 (en) * 1997-07-04 2005-05-10 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Brain-protective agent
US20050203612A1 (en) * 2000-12-22 2005-09-15 Avantec Vascular Corporation Devices delivering therapeutic agents and methods regarding the same
EP1362600B1 (en) * 2001-02-20 2008-04-02 AnGes MG, Inc. TOPICAL USE OF NF-kB DECOYS FOR TREATING ATOPIC DERMATITIS
EP1449541A4 (en) * 2001-11-22 2006-05-31 Anges Mg Inc COMPOSITIONS FOR INHIBITING THE DISPOSAL OF TRANSPLANTED ORGANS AND METHOD FOR THEIR USE
DE60231063D1 (de) * 2002-02-01 2009-03-19 Anges Mg Inc N zur behandlung von aneurysmen
US20060135449A1 (en) * 2002-03-29 2006-06-22 Yoshiki Sawa Decoy compositions for treating and preventing brain diseases and disorders
EP1512415A4 (en) * 2002-05-29 2005-11-09 Anges Mg Inc LURE COMPOSITION FOR TREATING AND PREVENTING INFLAMMATORY DISEASES
WO2004060317A2 (en) * 2002-12-31 2004-07-22 Genta Incorporated Combination of gallium compounds with nonchemotherapeutic anticancer agents in the treatment of neoplasia
EP1462111A1 (en) * 2003-03-28 2004-09-29 Universiteit Utrecht Holding B.V. Composition for inducing immunotolerance
US20040191779A1 (en) * 2003-03-28 2004-09-30 Jie Zhang Statistical analysis of regulatory factor binding sites of differentially expressed genes
WO2005051229A2 (en) * 2003-11-24 2005-06-09 Avantec Vascular Corporation Devices delivering therapeutic agents and methods regarding the same
US7378509B2 (en) * 2003-12-02 2008-05-27 Anesiva, Inc. NF-kappaB oligonucleotide decoy molecules
US7585848B2 (en) * 2005-01-11 2009-09-08 Rush University Medical Center Methods and compositions for treating, inhibiting and reversing disorders of the intervertebral disc
US20060258604A1 (en) * 2005-05-10 2006-11-16 Warren Strober Compositions and methods for the treatment of inflammatory bowel disease utilizing NF-kappaB decoy polynucleotides

Also Published As

Publication number Publication date
DK0732929T3 (da) 2008-09-01
US20020128217A1 (en) 2002-09-12
EP0732929B1 (en) 2008-05-14
EP1350514A3 (en) 2004-07-07
ATE395065T1 (de) 2008-05-15
EP1340505A3 (en) 2004-07-14
US20040229833A1 (en) 2004-11-18
EP1350514A2 (en) 2003-10-08
US6821956B2 (en) 2004-11-23
US20030186922A1 (en) 2003-10-02
EP1340505A2 (en) 2003-09-03
EP0732929A1 (en) 1996-09-25
EP0732929A4 (en) 2001-11-14
PT732929E (pt) 2008-08-26
WO1995011687A1 (en) 1995-05-04
US20020052333A1 (en) 2002-05-02
DE69435100D1 (de) 2008-06-26
US6774118B1 (en) 2004-08-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2307293T3 (es) Utilizacion terapeutica de señuelos de elementos en cis in vivo.
ES2692886T3 (es) Métodos y medios para el salto eficaz de al menos uno de los siguientes exones del gen de distrofia muscular de Duchenne humana: 43, 46, 50-53
TWI836693B (zh) 抑制ｌｐａ之基因表現之組合物及方法
ES2551154T3 (es) Procedimiento para la eficiente omisión del exón (44) en distrofia muscular de Duchenne y medios asociados
JP2022000426A (ja) キメラ２重鎖核酸
Lu et al. In vivo application of RNA interference: from functional genomics to therapeutics
ES2256893T3 (es) Secuencias antisentido antitumorales dirigidas contra componentes r1 y r2 de la reductasa ribonucleica.
Kishida et al. Sequence‐specific gene silencing in murine muscle induced by electroporation‐mediated transfer of short interfering RNA
ES2199936T3 (es) Oligonucleotidos cerrados de las clases &#34;sentido&#34; y &#34;antisentido&#34;, y sus aplicaciones.
ES2290951T3 (es) Oligonucleotidos antisentido que combaten el corte y empalme aberrante y metodos de uso de los mismos.
KR101670085B1 (ko) 단백질 키나아제 3의 발현을 억제하기 위한 수단
EP1636385A2 (en) Inhibition of gene function by delivery of polynucleotide-based gene expression inhibitors to mammalian cells in vivo
AU2008204486A1 (en) Dbait and its standalone uses thereof
CA2662065A1 (en) Dbait and uses thereof
KR101052289B1 (ko) 클러스테린 양의 감소에 의한 흑색종의 치료
KR20180104692A (ko) Angpt2 및 pdgfb를 표적화하는 rna 복합체를 사용하는 혈관신생 관련 질환의 치료
KR20020013501A (ko) 리보뉴클레오타이드 환원효소의 ｒ1 및 ｒ2 성분에표적하는 항암성 안티센스 서열
Kim et al. Therapeutic efficacy of modified anti-miR21 in metastatic prostate cancer
WO2013056670A1 (zh) 小干扰RNA及其应用和抑制plk1基因表达的方法
JPH10512559A (ja) 過増殖症の併用療法
Phillips Gene therapy for hypertension: sense and antisense strategies
Schmid et al. Direct gene transfer into the rat pancreas using DNA‐liposomes
ES2918975T3 (es) Tratamiento de la distrofia facioescapulohumeral
US20040220131A1 (en) Method for treatment of cancerous angiogenic disorders
CN116670172A (zh) 表达免疫检查点抑制剂的癌症特异性反式剪接核酶及其用途