JP3474879B2 - ＮＦ−κＢに起因する疾患の治療および予防剤 - Google Patents

ＮＦ−κＢに起因する疾患の治療および予防剤

Info

Publication number
JP3474879B2
JP3474879B2 JP53394796A JP53394796A JP3474879B2 JP 3474879 B2 JP3474879 B2 JP 3474879B2 JP 53394796 A JP53394796 A JP 53394796A JP 53394796 A JP53394796 A JP 53394796A JP 3474879 B2 JP3474879 B2 JP 3474879B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
decoy
disease
therapeutic
prophylactic agent
diseases
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
JP53394796A
Other languages
English (en)
Inventor
竜一 森下
俊男 荻原
聡子 杉本
和宏 前田
郁夫 川村
敏行 千葉
Original Assignee
アンジェスエムジー株式会社
竜一 森下
俊男 荻原
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by アンジェスエムジー株式会社, 竜一 森下, 俊男 荻原 filed Critical アンジェスエムジー株式会社
Application granted granted Critical
Publication of JP3474879B2 publication Critical patent/JP3474879B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/13—Decoys
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】 技術分野 本発明は、サイトカインや接着因子等の転写調節因子
の１つとして知られるNF−κＢに起因する様々な疾患の
予防又は治療に関する。詳細にはNF−κＢのデコイ、該
デコイを含有するNF−κＢに起因する疾患の治療および
予防剤ならびに治療および予防方法に関する。
背景技術 喘息、ガン、心臓病、自己免疫疾患およびウイルス感
染症などの様々な疾患は、異なる症状を示すにも拘わら
ず、１種類または数種類の蛋白質が、過剰発現あるいは
過少発現したことが原因の多くを占めることが示唆され
ている。また、蛋白質の発現には様々な転写活性化因子
および転写抑制因子等の転写調節因子が関与している。
転写調節因子の１つとして知られているNF−κＢは、p6
5とp50のヘテロダイマーからなっている。通常は、細胞
質内に阻害因子ＩκＢが結合した形で存在し、核移行が
阻止されている。ところが、何らかの原因でサイトカイ
ンや、虚血、再潅流といった何らかの刺激が加わるとＩ
κＢがリン酸化され、分解されることにより、NF−κＢ
は活性化されて核内に移行する。NF−κＢは染色体のNF
−κＢ結合部位に結合することにより、その下流にある
遺伝子の転写を促進する。NF−κＢにより制御される遺
伝子には、例えば、IL−１、IL−６、IL−８などのサイ
トカイン類や、VCAM−１やICAM−１などの接着因子があ
る。
発明の開示 これらのサイトカイン類や接着因子の生産の活性化
が、虚血性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、ガンの転
移浸潤、悪液質等の種々の疾患を引き起こす一つの原因
となっていると予測し、鋭意研究の結果、NF−κＢに起
因する疾患の治療には、NF−κＢの核酸結合部位に対す
るデコイ、つまりNF−κＢが結合する核酸部位と特異的
に拮抗する化合物を投与することによりNF−κＢにより
活性化される遺伝子の発現を抑制することが非常に有効
であることを見いだし、本発明を完成した。
すなわち、本発明は、NF−κＢのデコイを主成分とし
て含有する、NF−κＢに起因する種々の疾患の治療およ
び予防剤及びその予防治療方法を提供するものである。
本発明の治療予防剤の対象とする疾患は、NF−κＢに
起因する疾患、すなわち、転写調節因子NF−κＢが制御
する遺伝子の所望しない活性化に起因する疾患であり、
このような疾患としては、例えば虚血性疾患、炎症性疾
患、自己免疫疾患、ガンの転移・浸潤、悪液質等が挙げ
られる。虚血性疾患としては虚血性臓器疾患（例えば心
筋梗塞、急性心不全、慢性心不全等の虚血性心疾患、脳
梗塞等の虚血性脳疾患および肺梗塞等の虚血性肺疾患
等）、臓器移植・臓器手術後の予後の悪化（例えば心移
植、心臓手術、腎移植、腎臓手術、肝移植、肝臓手術、
骨髄移植、皮膚移植、角膜移植、肺移植等の予後の悪
化）、再潅流障害、PTCA後の再狭窄等が挙げられる。炎
症性疾患としては腎炎、肝炎、関節炎等の種々の炎症、
急性腎不全、慢性腎不全、動脈硬化等が挙げられる。ま
た、自己免疫疾患としてはリューマチ、多発性硬化症、
橋本甲状腺炎等が挙げられる。特に本発明により得られ
るNF−κＢのデコイを主成分として含有する医薬品は、
虚血性疾患の再潅流障害、臓器移植又は臓器の手術後の
予後の悪化、PTCA後の再狭窄、ガンの転位・湿潤、ガン
発生後に伴う体重減少等の悪液質の治療および予防には
好適である。
本発明で用いられるNF−κＢのデコイとしては、染色
体上に存在するNF−κＢの核酸結合部位と特異的に拮抗
する化合物であればよく、例えば核酸およびその類似体
が含まれる。好ましいNF−κＢのデコイの例としては、
核酸配列GGGATTTCCC（配列表の配列番号１の5'末端から
８から17番目の配列）またはその相補体を含むオリゴヌ
クレオチド、その変異体、またはこれらを分子内に含む
化合物があげられる。オリゴヌクレオチドはDNAでもRNA
でもよく、またそのオリゴヌクレオチド内に核酸修飾体
または／および擬核酸を含むものであってもよい。ま
た、これらのオリゴヌクレオチド、その変異体、または
これらを分子内に含む化合物は１本鎖でも２本鎖であっ
てもよく、線状であっても環状であってもよい。変異体
とは上記配列の一部が、変異、置換、挿入、欠失してい
るもので、NF−κＢが結合する核酸結合部位と特異的に
拮抗する核酸を示す。さらに好ましいNF−κＢのデコイ
しては、上記核酸配列を１つまたは数個含む２本鎖オリ
ゴヌクレオチドまたはその変異体があげられる。本発明
で用いられるオリゴヌクレオチドは、リン酸ジエステル
結合部の酸素原子をイオウ原子で置換したチオリン酸ジ
エステル結合をもつオリゴヌクレオチド（Ｓ−オリ
ゴ）、または、リン酸ジエステル結合を電荷をもたない
メチルホスフェート基で置換したオリゴヌクレオチド等
の生体内でオリゴヌクレオチドが分解を受けにくくする
ために改変したオリゴヌクレオチド等が含まれる。
本発明で用いられるNF−κＢのデコイの製造方法とし
ては、一般的な化学合成法または生化学合成法を用いる
ことが出来る。例えばNF−κＢのデコイとして核酸を用
いる場合、遺伝子工学で一般的に用いられる核酸合成法
を用いることが出来、例えば、DNA合成装置を用いて目
的のデコイヌクレオチドを直接合成してもよいし、また
これらの核酸、それを含む核酸またはその一部を合成し
た後、PCR法またはクローニングベクター等を用いて核
酸を増幅してもよい。さらに、これらの方法により得ら
れた核酸を、制限酵素等を用いて切断後、DNAリガーゼ
等を用いて結合等を行い目的とする核酸を製造してもよ
い。また、さらに細胞内でより安定なデコイヌクレオチ
ドを得るために、核酸の塩基、糖、リン酸部分を例えば
アルキル化、アシル化等の化学修飾を施してもよい。
本発明により得られるNF−κＢのデコイを主成分とし
て含有する製剤は、主薬が患部の細胞または目的とする
組織の細胞内に取り込まれるような製剤であれば特に限
定されるものではなく、NF−κＢのデコイ単独で、もし
くは慣用の担体と混合して、経口投与、非経口投与、局
所投与ないしは外用の形で投与される。これらの製剤は
溶液、懸濁液、シロップ、リポソーム製剤、乳剤、シロ
ップ等の液体の投与形態であってもよいし、錠剤、顆粒
剤、粉末剤、カプセル剤などの固形の投与形態であって
もよい。必要に応じ、上記製剤には各種の担体、助剤、
安定剤、潤滑剤、その他一般に使用される添加剤、例え
ば乳糖、クエン酸、酒石酸、ステアリン酸、ステアリン
酸マグネシウム、白陶土、蔗糖、コーンスターチ、タル
ク、ゼラチン、寒天、ペクチン、落花生油、オリーブ
油、カカオバター、エチレングリコールなどを添加する
ことができる。
特に、NF−κＢのデコイとして核酸またはその修飾体
を用いる場合には、好ましい製剤としては一般に用いら
れている遺伝子導入法で用いられる形態、例えばセンダ
イウイルス等を用いた膜融合リポソーム製剤やエンドサ
イトーシスを利用するリポソーム製剤等のリポソーム製
剤、リポフェクトアミン（ライフテックオリエンタル社
製）等のカチオン性脂質を含有する製剤またはレトロウ
イルスベクター、アデノウイルスベクター等を用いるウ
イルス製剤を用いるのが有利であり、特に膜融合リポソ
ーム製剤が好ましい。
リポソーム製剤は、そのリポソームの構造体が、大き
な１枚膜リポソーム（LUV）、多重層リポソーム（ML
V）、小さな一枚膜リポソーム（SUV）のいずれであって
もよい。その大きさも、LUVでは200から1000nm、MLVで
は400から3500nm、SUVでは20から50nm程度の粒子系をと
り得るが、センダイウイルス等を用いる膜融合リポソー
ム製剤の場合は粒子系200から1000nmのMLVを用いるのが
好ましい。
リポソームの製造方法は、デコイが保持されるもので
あれば特に限定されるものではなく、慣用の方法、例え
ば逆相蒸発法（Szoka,F.,et al:Biochim.Biophys.Acta,
Vol.601 559（1980））、エーテル注入法（Deamer,D.
W.:Ann.N.Y.Acad.Sci.,Vol.308 250（1978））、界面活
性剤法（Brunner,J.,et al:Biochim.Biophys.Acta,Vol.
455 322（1976））等を用いて製造することができる。
リポソーム構造を形成するための脂質としてはリン脂
質、コレステロール類や窒素脂質等が用いられるが、一
般的にはリン脂質が好適であり、ホスファチジルコリ
ン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロー
ル、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタ
ノールアミン、ホスファチジン酸、カルジオリピン、ス
フィンゴミエリン、卵黄レシチン、大豆レシチン、リゾ
レシチン、等の天然リン脂質、あるいはこれらを常法に
よって水素添加したものの他、ジセチルホスフェート、
ジステアロイルホスファチジルコリン、ジパルミトイル
ホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジル
エタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルセリ
ン、エレオステアロイルホスファチジルコリン、エレオ
ステアロイルホスファチジルエタノールアミン、エレオ
ステアロイルホスファチジルセリン等の合成リン脂質等
を使用することができる。
これらのリン脂質を含む脂質類は単独で用いることも
できるが、２種以上を併用することも可能である。この
とき、エタノールアミンやコリン等の陽性基をもつ原子
団を分子内に持つものを用いることにより、電気的に陰
性なデコイヌクレオチドの結合率を増加させることもで
きる。これらリポソーム形成時の主要リン脂質の他に一
般にリポソーム形成用添加剤として知られるコレステロ
ール類、ステアリルアミン、α−トコフェロール等の添
加剤を用いることもできる。
このようにして得られるリポソームは患部の細胞また
は目的とする組織の細胞内に取り込みを促進するため
に、膜融合促進物質、例えばセンダイウイルス、不活化
センダイウイルス、センダイウイルスより精製された膜
融合促進蛋白質、ポリエチレングリコール等を加えるこ
とができる。
リポソーム製剤の製造法の例を具体的に説明すると、
たとえば前記したリポソーム形成物質をコレステロール
等と共にテトラヒドロフラン、クロロホルム、エタノー
ル等の有機溶媒に溶解し、これを適当な容器に入れて減
圧下に溶媒を留去して容器内面にリポソーム形成物質の
膜を形成する。これにNF−κＢのデコイを含有する緩衝
液を加えて攪拌し、得られたリポソームにさらに所望に
より前記した膜融合促進物質を加えた後、リポソームを
単離する。このようにして得られるNF−κＢのデコイを
含有するリポソームは適当な溶媒中に懸濁させるか、或
いはいったん凍結乾燥したものを適当な溶媒に再分散さ
せて治療に用いることができる。膜融合促進物質はリポ
ソーム単離後、使用までの間に加えてもよい。
この様にして得られたNF−κＢのデコイを主成分とし
て含有する製剤における、デコイの含有割合は、NF−κ
Ｂに起因する疾患を有効に阻止できる量が含有されてい
れば特に限定されず、適用疾患、適用部位、投与形態お
よび投与方法に応じて種々設定することができる。
この様にして得られるNF−κＢを主成分として含有す
る医薬品は、疾患の種類、使用するデコイの種類等によ
り各種の方法で投与することができ、例えば虚血性疾
患、炎症性疾患、自己免疫疾患およびガンの転移・湿
潤、悪液質においては血管内投与、疾患部位に塗布、疾
患部位内に投与または疾患部位に血管内投与等する事が
できる。さらに具体的な例としては、たとえば臓器梗塞
等でPTCAを行う場合には、同時またはその前後に患部血
管に投与する事ができ、また、臓器移植等では移植する
臓器を予め本願で用いられる製剤で処置して用いてもよ
い。また、たとえば変形関節炎リュウマチ等では直接関
節内に注入して用いることもできる。
NF−κＢのデコイの投与量は、年齢その他患者の条
件、疾病の種類、使用するデコイの種類等により適宜選
択されるが、例えば血液内投与、筋肉内投与、関節内投
与等では一般には１回あたり10から10、000nmoleを１日
１回から数回投与する事ができる。
発明を実施するための最良の形態 以下に本発明の実施例によりさらに具体的に説明す
る。
実施例１ NF−κＢのデコイ（デコイオリゴヌクレオチ
ド）の合成 DNA合成機でＳ−オリゴ用いて、それぞれ下記の塩基
配列を持つNF−κＢのデコイオリゴヌクレオチドおよび
スクランブルデコイオリゴヌクレオチド（NF−κＢのデ
コイヌクレオチドと同じ塩基組成を持つが配列がランダ
ムなヌクレオチド）を合成した。これらのヌクレオチド
を80度、30分加熱した後、室温に２時間かけて室温まで
冷却し、２本鎖DNAを得た。
NF−κＢデコイオリゴヌクレオチド スクランブルデコイオリゴヌクレオチド 実施例２ リポソーム製剤の製造 フォスファチジルセリン、フォスファチジルコリンお
よびコレステロールを重量比1:4.8:2（合計10mg）をテ
トラヒドロフランに溶解させた。ロータリーエバポレー
ターを用いて、この脂質溶液からテトラハイドロフラン
を除去し、脂質をフラスコ表面に付着させた。このフラ
スコに、実施例１で得られたNF−κＢデコイオリゴヌク
レオチド（0.7mg）を含む生理食塩水（BSS;139mM NaCl,
5.4mM KCl,10mM Tris−HCl,pH7.6）200mlに加え、常法
により、攪拌及び超音波処理し、NF−κＢのデコイオリ
ゴヌクレオチドを含むリポソーム懸濁液を調製した。得
られたリポソーム懸濁液（0.5ml,10mgの脂質を含有）
に、精製したセンダイウイルス（Ｚ株:10000 hemagluti
nating units）を使用する３分前にUV照射（110erg/mm2
/sec）で不活化したものを混合し、BSSで合計4mlとし
た。混合物を４℃で５分間保持した後、37℃で穏やかに
30分間振とうした。スクロース密度勾配遠心により、リ
ポソームに結合していないセンダイウイルスを除いた
後、最上層を採取し、BSSで濃度を調節し、８μＭのNF
−κＢデコイオリゴヌクレオチドが封入されたリポソー
ム製剤を得た。同様にNF−κＢデコイオリゴヌクレオチ
ドの代わりに実施例１で得られたスクランブルデコイオ
リゴヌクレオチドを用いて製剤を得た。
実施例３ 再灌流モデル実験 （１）実験方法 ９−10週齢のSDラットをペントバルビタールナトリウ
ムで麻酔した後、気道に近接した左頸動脈にカニューレ
を挿入し心臓の大動脈弁の近傍（冠動脈の流入口の近
く）に留置した。さらに、気管にカニューレをほどこ
し、人工呼吸器につないで人工呼吸をおこなった。その
後、左胸部肋間を切開し、ラット心臓の左前下行枝を糸
で結紮し、虚血を作成した。30分後、結紮した糸を切
り、再灌流を開始した後すぐに実施例２で作成したリポ
ソームに封入したNF−κＢデコイヌクレオチドおよびス
クランブルデコイヌクレオチドを1.5ml/ラットで冠動脈
の流入口の近くに留置したカニューレにより投与した。
その後、閉胸し、気管も縫合し生存放置しておく。24時
間後、ラットを再度麻酔し、心臓を取り出し、生理食塩
水で洗浄した後、ラット心室を６切片に切断し、TTC
（塩化テトラゾリウム）染色を行った。６切片の写真を
取り、それぞれ画像解析を行った。なお、梗塞領域は以
下の式に従って算出した。
梗塞率（％）＝６切片の梗塞面積の和/6切片の面積の和X100 なお、統計計算は多重間比較（Anova）にて実施し
た。
（２）結果 結果を表１に示した。無処置群とスクランブルデコイ
投与群においては、両間にほぼ同程度の心筋梗塞の発生
が観察されたが、NF−κＢデコイヌクレオチド投与群で
はその発生が19％と、無処置群並びにスクランブルデコ
イ投与群に比し梗塞が有意（Ｐ＜0.01）に抑制されてい
た。
なお、梗塞直前投与においても同様に抑制効果が得ら
れた。
実施例 ４ ガン転移の抑制 （１）実験方法 ７週令のC57BL/6系雌性マウスに、マウス細網肉腫M50
76細胞１×104個を静脈内投与し、その24時間後に、実
施例２と同様にして製造したNF−κＢデコイヌクレオチ
ド0.2ml（6nmoles）を静脈内投与した。コントロール群
には生理食塩水0.2mlを投与した。M5076の静脈内投与後
14日目に解剖し、肝臓表面上の腫瘍結節数を実体顕微鏡
下で計数した。一群当たり10匹のマウスを用いた。統計
学的解析には、Kruskal−Wallisの検定及びDunnettの多
重比較検定を用いた。
（２）結果 コントロール群の腫瘍結節数が、平均値166、中央値1
73（116〜198）であったのに対しNF−κＢデコイ投与群
では、平均値29、中央値27（19〜54）であり、NF−κＢ
デコイ投与群とコントロール群との間には危険率１％以
下で有意な差が認められた。
実施例 ５ 悪液質の抑制 （１）実験方法 ７週令のBALB/c系雄性マウスに、マウス結腸ガンColo
n26の2mm角の腫瘍片を皮下移植し、その７日目からNF−
κＢデコイまたはスクランブルデコイ各0.2ml（6nmole
s）を腫瘍内に投与し、経時的に体重及び腫瘍重量を計
測した。また、13日目に解剖し、副睾丸脂肪及び腓腹筋
を摘出し、その重量を測定した。さらに、残ったすべて
の臓器及び腫瘍を除いたカルカス湿重量を測定した。腫
瘍重量は、各腫瘍の長径及び短径より以下の式にて腫瘍
重量を計算した。
腫瘍重量（mg）＝長径×短径2/2 一群当たり10匹のマウスを用いた。統計学的解析には、
一元配置分散分析及びDunnettの多重比較検定を用い
た。
（２）結果 担癌群においては腫瘍の増殖に伴い、体重、副睾丸脂
肪重量、腓腹筋重量及びカルカス湿重量の有意な減少が
認められた。NF−κＢデコイ投与群では、体重を47％、
副睾丸脂肪重量を42％、腓腹筋重量を60％及びカルカス
湿重量を52％改善させたが、スクランブルデコイ投与群
では全く回復作用を示さなかった。腫瘍重量には明らか
な作用は認められなかった。
配列表 （１）配列番号:1: （ｉ）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ:20 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数:2本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：合成DNA （iii）配列：配列番号:1: （１）配列番号:2: （ｉ）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ:20 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数:2本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：合成DNA （iii）配列：配列番号:2:
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 森下 竜一 大阪府大阪市淀川区宮原２−11−22− 502 (72)発明者 荻原 俊男 大阪府箕面市桜ケ丘２−７−29 (72)発明者 杉本 聡子 京都府京都市北区小山南大野町33−４− 201 (72)発明者 前田 和宏 奈良県大和高田市東中１−７−38 (72)発明者 川村 郁夫 大阪府枚方市東中振２−９−１−715 (72)発明者 千葉 敏行 奈良県奈良市中辻町１−１−503 (56)参考文献 特開 平６−209778（ＪＰ，Ａ) ＥＣＫ，Ｓｔｅｐｈｅｎ Ｌ．ｅｔ ａｌ，Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｐ ｈｏｒｂｏｌ ｅｓｔｅｒ−ｉｎｄｕｃ ｅｄ ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｄｈｅｎｓ ｉｏｎ ｂｙ ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｆ ＮＦ−κＢ ｉｎ ｖｉｖｏ，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＡＮＤ ＣＥＬＬＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯ ＧＹ，1993年，Ｖｏｌ．13，Ｎｏ．10, ｐｐ6530−6536 ＢＩＥＬＩＮＳＫＡ，Ａｎｎａ ｅｔ ａｌ，Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗｉ ｔｈ ｄｏｕｂｌｅ−ｓｔｒａｎｄｅｄ ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，Ｓ ＣＩＥＮＣＥ，1990年，Ｖｏｌ．250, ｐｐ997−1000 ＮＡＫＡＪＩＭＡ，Ｔｏｓｈｉｈｉｋ ｏ ｅｔ ａｌ，Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎ ｔ ｏｆ ＮＦ−κＢ ａｃｔｉｖａｔ ｉｏｎ ｉｎ ｔｈｒｏｍｂｉｎ−ｉｎ ｄｕｃｅｄ ｈｕｍａｎ ｖａｓｃｕｌ ａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃ ｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ, ＢＩＯＣＨＥＭＩＣＡＬ ＡＮＤ ＢＩ ＯＰＨＹＳＩＣＡＬ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＣＯＭＭＵＮＩＣＡＴＩＯＮ，1994 年，Ｖｏｌ．204，Ｎｏ．２，ｐｐ950− 955 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A61K 48/00 A61K 31/7088 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ) ＥＭＢＡＳＥ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ)

Claims (6)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】NF−κＢのデコイを含有するNF−κＢに起
    因する疾患の治療剤または予防剤であって、該NF−κＢ
    のデコイは、 配列番号１に記載された配列の5'末端から８〜17番目で
    表される第一配列またはその相補体を含む核酸 であり、 該NF−κＢに起因する疾患が虚血性疾患、ガンの転移・
    浸潤または悪液質である、 治療剤または予防剤。
  2. 【請求項２】前記NF−κＢに起因する疾患が虚血性疾患
    である、請求項１に記載の治療剤または予防剤。
  3. 【請求項３】前記NF−κＢに起因する疾患が虚血性疾患
    における再潅流障害、臓器移植又は臓器の手術後の予後
    の悪化、PTCA後の再狭窄である、請求項２に記載の治療
    剤または予防剤。
  4. 【請求項４】前記NF−κＢに起因する疾患が虚血性心疾
    患における再潅流障害、心臓移植又は心臓の手術後の予
    後の悪化、PTCA後の再狭窄である、請求項２に記載の治
    療剤または予防剤。
  5. 【請求項５】前記NF−κＢに起因する疾患がガンの転移
    ・浸潤、悪液質である、請求項１に記載の治療剤または
    予防剤。
  6. 【請求項６】リポソーム製剤である、請求項１に記載の
    治療剤または予防剤。
JP53394796A 1995-05-12 1996-05-10 ＮＦ−κＢに起因する疾患の治療および予防剤 Expired - Lifetime JP3474879B2 (ja)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP7-285504 1995-02-11
JP7-114990 1995-05-12
JP11499095 1995-05-12
JP28550495 1995-11-02
PCT/JP1996/001234 WO1996035430A1 (fr) 1995-05-12 1996-05-10 TRAITEMENT ET PREVENTION DE MALADIES ASSOCIEES A NF-λB

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2002263431A Division JP4159836B2 (ja) 1995-05-12 2002-09-09 ＮＦ−κＢに起因する疾患の治療および予防剤

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP3474879B2 true JP3474879B2 (ja) 2003-12-08

Family

ID=26453615

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP53394796A Expired - Lifetime JP3474879B2 (ja) 1995-05-12 1996-05-10 ＮＦ−κＢに起因する疾患の治療および予防剤

Country Status (9)

Country Link
US (4) US6262033B1 (ja)
EP (1) EP0824918B1 (ja)
JP (1) JP3474879B2 (ja)
AT (1) ATE357922T1 (ja)
DE (1) DE69636997T2 (ja)
DK (1) DK0824918T3 (ja)
ES (1) ES2285712T3 (ja)
PT (1) PT824918E (ja)
WO (1) WO1996035430A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPWO2006075776A1 (ja) * 2005-01-13 2008-06-12 アンジェスＭｇ株式会社 慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症（ＣｙｓｔｉｃＦｉｂｒｏｓｉｓ）または肺高血圧症（ｐｕｌｍｏｎａｒｙｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ）治療剤

Families Citing this family (50)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0732929B1 (en) * 1993-10-29 2008-05-14 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Therapeutic use of cis-element decoys in vivo
DE69636997T2 (de) * 1995-05-12 2007-07-12 Anges MG Inc., Ibaraki HEILUNG UND VORBEUGUNG VON DURCH NF-kappaB VERURSACHTEN ERKRANKUNGEN
CN1159061C (zh) 1997-02-15 2004-07-28 千年药物公司 通过nf-kappab的抑制治疗梗塞
US6586661B1 (en) 1997-06-12 2003-07-01 North Carolina State University Regulation of quinolate phosphoribosyl transferase expression by transformation with a tobacco quinolate phosphoribosyl transferase nucleic acid
WO1999001155A1 (fr) * 1997-07-04 1999-01-14 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Cephalo-protecteur
ES2219033T3 (es) * 1998-07-22 2004-11-16 Daiichi Suntory Pharma Co., Ltd. Inhibidores de nf-kappa b que contienen derivados de indano como ingrediente activo.
US7002003B1 (en) 1998-07-30 2006-02-21 University Of South Florida Method for the inhibition of function of STAT transcription factors
DE19926216A1 (de) * 1999-06-09 2001-02-22 Metallgesellschaft Ag Verfahren zur Herstellung von Bariumsulfat, Bariumsulfat und Verwendung des Bariumsulfats
AU7315400A (en) * 1999-09-17 2001-04-24 Daiichi Suntory Pharma Co., Ltd Preventives or remedies for myocarditis, dilated cardiomyopathy and cardiac insufficiency containing NF-kappab inhibitors as the active ingredient
WO2002018607A2 (en) * 2000-08-30 2002-03-07 North Carolina State University Transgenic plants containing molecular decoys that alter protein content therein
JP2002065278A (ja) * 2000-08-31 2002-03-05 Anges Mg Inc Ｈｖｊの融合タンパク質を含有する遺伝子移入ビヒクル
CA2427825A1 (en) * 2000-11-07 2002-05-16 North Carolina State University Putrescine-n-methyltransferase promoter
AU2002258399A1 (en) * 2001-02-16 2002-09-19 Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. Use of trail and antiprogestins for treating cancer
ATE390938T1 (de) * 2001-02-20 2008-04-15 Anges Mg Inc Topische anwendung eines nf-kb decoys zur behandlung atopischer dermatitis
KR20040019301A (ko) * 2001-06-08 2004-03-05 벡터 토바코 리미티드 담배에서 니코틴 및 니트로사민 수준의 조절
US20060157072A1 (en) * 2001-06-08 2006-07-20 Anthony Albino Method of reducing the harmful effects of orally or transdermally delivered nicotine
EP1449541A4 (en) * 2001-11-22 2006-05-31 Anges Mg Inc COMPOSITIONS FOR INHIBITING THE DISPOSAL OF TRANSPLANTED ORGANS AND METHOD FOR THEIR USE
WO2003063911A1 (fr) * 2002-02-01 2003-08-07 Anges Mg, Inc. Compositions pharmaceutiques contenant un leurre et procede d'utilisation
US20060135449A1 (en) * 2002-03-29 2006-06-22 Yoshiki Sawa Decoy compositions for treating and preventing brain diseases and disorders
WO2003086076A1 (en) * 2002-04-09 2003-10-23 Vector Tobacco Ltd. Tobacco having reduced nicotine and nitrosamines
EP1499721B1 (en) 2002-04-26 2013-05-29 AnGes MG, Inc. CIRCULAR DUMBBELL DECOY OLIGODEOXYNUCLEOTIDES (CDODN) CONTAINING DNA BINDINGS SITES FOR THE TRANSCRIPTION FACTOR NF-kappa B
CN1306964C (zh) * 2002-05-29 2007-03-28 安琪士摩奇株式会社 治疗和预防炎症性疾病的诱饵组合物
CN1674881A (zh) * 2002-06-26 2005-09-28 学校法人庆应义塾 含NF－κB抑制剂的医药组合物
WO2004026342A1 (ja) * 2002-09-20 2004-04-01 Anges Mg, Inc. NFκBデコイを含有する移植片新生内膜肥厚に対する保護剤
CN1784248B (zh) * 2003-05-09 2010-11-10 森下龙一 收容药剂的无针注射器
WO2005004913A1 (ja) * 2003-07-09 2005-01-20 Anges Mg, Inc. デコイを含む薬学的組成物およびその使用方法
US6884443B2 (en) 2003-08-07 2005-04-26 General Mills, Inc. Compositions and methods relating to freezer-to-oven doughs
WO2005056020A2 (en) * 2003-12-02 2005-06-23 Corgentech, Inc. Nf-kb oligonucleotide decoy molecules
US8034619B2 (en) * 2003-12-19 2011-10-11 University Of Cincinnati Polyamides for nucleic acid delivery
SE0400399D0 (sv) * 2004-02-20 2004-02-20 Index Pharmaceuticals Ab Methods and compositions for the treatment or prevention of secondary ischemic injury
US7482158B2 (en) * 2004-07-01 2009-01-27 Mathison Brian H Composite polynucleic acid therapeutics
WO2006034433A2 (en) * 2004-09-21 2006-03-30 Anesiva, Inc. Delivery of polynucleotides
US8067384B2 (en) * 2004-10-22 2011-11-29 Anges Mg, Inc. Chimera (double) decoy
WO2006064886A1 (ja) * 2004-12-16 2006-06-22 Anges Mg, Inc. 骨形成調節剤
US7585848B2 (en) 2005-01-11 2009-09-08 Rush University Medical Center Methods and compositions for treating, inhibiting and reversing disorders of the intervertebral disc
US20090214630A1 (en) * 2005-05-10 2009-08-27 Warren Strober Compositions and Methods for the Treatment of Inflammatory Bowel Disease Utilizing NF-KappaB Decoy Polynucleotides
US20060258604A1 (en) * 2005-05-10 2006-11-16 Warren Strober Compositions and methods for the treatment of inflammatory bowel disease utilizing NF-kappaB decoy polynucleotides
EP1892293A4 (en) 2005-06-06 2008-12-10 Anges Mg Inc TRANSCRIPTION FACTOR DECOY
US20100167390A1 (en) * 2005-12-22 2010-07-01 Toshohiro Nakajima Novel Oligonucleotide and NF-kB Decoy Comprising the Same
US8501478B2 (en) * 2006-06-15 2013-08-06 University Of Cincinnati Trehalose click polymers for delivery of biologically active molecules
JP4602298B2 (ja) * 2006-08-31 2010-12-22 ホソカワミクロン株式会社 医薬製剤
WO2008099906A1 (ja) 2007-02-16 2008-08-21 Anges Mg, Inc. 歯周病、及び外科手術による歯槽骨欠損の治療剤
JP5312747B2 (ja) * 2007-03-01 2013-10-09 ジェノミディア株式会社 Ｈｖｊエンベロープによるタンパク質の導入方法
EP2818550B1 (en) 2007-05-11 2016-12-28 Adynxx, Inc. Gene expression and pain
EP2266626B1 (en) * 2008-03-28 2014-06-18 AnGesMG, Inc. Composition for external application comprising transcription factor decoy as active ingredient
JP5057587B2 (ja) * 2009-05-20 2012-10-24 アンジェスＭｇ株式会社 デコイを含む薬学的組成物およびその使用方法
WO2013024763A1 (ja) 2011-08-12 2013-02-21 独立行政法人理化学研究所 核酸アプタマーの作製方法
US9700624B2 (en) 2012-05-10 2017-07-11 Adynxx, Inc. Formulations for the delivery of active ingredients
AU2015301491A1 (en) 2014-08-15 2017-02-02 Adynxx, Inc. Oligonucleotide decoys for the treatment of pain
JPWO2017068790A1 (ja) * 2015-10-23 2018-08-09 レナセラピューティクス株式会社 核酸複合体

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6410516B1 (en) * 1986-01-09 2002-06-25 President & Fellows Of Harvard College Nuclear factors associated with transcriptional regulation
WO1992020795A1 (en) 1991-05-17 1992-11-26 Cetus Oncology Corporation INHIBITOR OF NF-λB TRANSCRIPTIONAL ACTIVATOR AND USES THEREOF
CA2105595A1 (en) 1992-09-23 1994-03-24 Ramaswamy Narayanan Antisense polynucleotides
CA2131587A1 (en) 1993-09-07 1995-03-08 Yinon Ben-Neriah Method for regulation of nf-kb
EP0652290A1 (en) * 1993-09-07 1995-05-10 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Method for regulation of NF-kB
JPH07114990A (ja) 1993-10-14 1995-05-02 Plus Kk ハロゲンランプ調光装置
EP0732929B1 (en) 1993-10-29 2008-05-14 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Therapeutic use of cis-element decoys in vivo
US6399376B1 (en) * 1993-11-05 2002-06-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of vascular cell adhesive molecule expression through oligonucleotide interactions
JPH07285504A (ja) 1994-04-14 1995-10-31 Asano Seiki Kk 粉粒体充填装置
DE69636997T2 (de) 1995-05-12 2007-07-12 Anges MG Inc., Ibaraki HEILUNG UND VORBEUGUNG VON DURCH NF-kappaB VERURSACHTEN ERKRANKUNGEN

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ＢＩＥＬＩＮＳＫＡ，Ａｎｎａ ｅｔ ａｌ，Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗｉｔｈ ｄｏｕｂｌｅ−ｓｔｒａｎｄｅｄ ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，ＳＣＩＥＮＣＥ，１９９０年，Ｖｏｌ．２５０，ｐｐ９９７−１０００
ＥＣＫ，Ｓｔｅｐｈｅｎ Ｌ．ｅｔ ａｌ，Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｐｈｏｒｂｏｌ ｅｓｔｅｒ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｄｈｅｎｓｉｏｎ ｂｙ ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｆ ＮＦ−κＢ ｉｎ ｖｉｖｏ，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＡＮＤ ＣＥＬＬＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ，１９９３年，Ｖｏｌ．１３，Ｎｏ．１０，ｐｐ６５３０−６５３６
ＮＡＫＡＪＩＭＡ，Ｔｏｓｈｉｈｉｋｏ ｅｔ ａｌ，Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ＮＦ−κＢ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｒｏｍｂｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｈｕｍａｎ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ＢＩＯＣＨＥＭＩＣＡＬ ＡＮＤ ＢＩＯＰＨＹＳＩＣＡＬ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＣＯＭＭＵＮＩＣＡＴＩＯＮ，１９９４年，Ｖｏｌ．２０４，Ｎｏ．２，ｐｐ９５０−９５５

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPWO2006075776A1 (ja) * 2005-01-13 2008-06-12 アンジェスＭｇ株式会社 慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症（ＣｙｓｔｉｃＦｉｂｒｏｓｉｓ）または肺高血圧症（ｐｕｌｍｏｎａｒｙｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ）治療剤

Also Published As

Publication number Publication date
DE69636997T2 (de) 2007-07-12
US20060116344A1 (en) 2006-06-01
EP0824918B1 (en) 2007-03-28
EP0824918A4 (en) 2004-11-17
PT824918E (pt) 2007-06-22
US7871983B2 (en) 2011-01-18
DK0824918T3 (da) 2007-06-04
US20040162250A1 (en) 2004-08-19
DE69636997D1 (de) 2007-05-10
WO1996035430A1 (fr) 1996-11-14
EP0824918A1 (en) 1998-02-25
US20020098162A1 (en) 2002-07-25
ES2285712T3 (es) 2007-11-16
US6262033B1 (en) 2001-07-17
ATE357922T1 (de) 2007-04-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP3474879B2 (ja) ＮＦ−κＢに起因する疾患の治療および予防剤
JP4987022B2 (ja) デコイを含む薬学的組成物およびその使用方法
AU2002255285B2 (en) Circular dumbbell decoy oligodeoxynucleotides (CDODN) containing DNA bindings sites of transcription
JPWO2003099339A1 (ja) 炎症性疾患を処置および予防するためのデコイ組成物
EP1470826B1 (en) Decoy-containing pharmaceutical compositions for the treatment of aneurysms
JP2005505521A (ja) 極性成分および非極性成分を含む脂質を含む医薬組成物
JP4215219B2 (ja) 脳保護剤
US7704962B1 (en) Small oligonucleotides with anti-tumor activity
JP4159836B2 (ja) ＮＦ−κＢに起因する疾患の治療および予防剤
WO2005004913A1 (ja) デコイを含む薬学的組成物およびその使用方法
JP4033502B2 (ja) リボザイム、リポソーム製剤及びその用途
JP4305857B2 (ja) デコイを含む薬学的組成物およびその使用方法
JP2002193813A (ja) デコイを含む薬学的組成物およびその使用方法
JP2005336081A (ja) Ｎｒ２ｂ−ｎｍｄａ受容体の再発現抑制剤

Legal Events

Date Code Title Description
S531 Written request for registration of change of domicile

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531

S533 Written request for registration of change of name

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533

R350 Written notification of registration of transfer

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

EXPY Cancellation because of completion of term