ES2295386T3 - Uso de fucanos en el tratamiento de adherencias, artritis y soriasis. - Google Patents
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Abstract
Uso de un fucano en la preparación de un medicamento para tratar una adherencia potencialmente en un sitio de enfermedad en un animal.
Description
Uso de fucanos en el tratamiento de adherencias,
artritis y soriasis.
La presente solicitud se relaciona con el uso de
un fucano en la elaboración de un medicamento para tratar una
adherencia potencialmente en un sitio de enfermedad en un
animal.
Una adherencia quirúrgica es un tipo de cicatriz
que se forma entre dos partes del cuerpo, usualmente después de
cirugía. Las adherencias pueden originar problemas severos. Por
ejemplo, las adherencias que involucran los órganos reproductivos
femeninos (ovarios, trompas de Falopio) pueden originar
infertilidad, dispareunia (coito doloroso) y dolor pélvico severo.
Las adherencias que ocurren en el intestino pueden originar la
obstrucción o bloqueo del intestino, y las adherencias también se
pueden formar en otros lugares tales como alrededor del corazón, la
columna y en la mano. Además de la cirugía, las adherencias pueden
ser originadas por cosas tales como la endometriosis, infección,
quimioterapia, radiación y cáncer.
Las adherencias, así como también otras
enfermedades angiogénicas relacionadas tales como la artritis y la
soriasis, pueden durar durante semanas, meses o años, requiriendo un
cuidado prolongado y costoso. Ver Robbins Pathological Basis of
Disease by Cotran, R. S., Kumar, V., Robbins, S. L., p75 (W. B.
Saunders Co., 1989). Tales enfermedades y condiciones pueden
desarrollarse en condiciones inflamatorias crónicas con
consecuencias terribles tanto en el bienestar mental como físico
del paciente. Desafortunadamente, existen pocas opciones
terapéuticas para los pacientes con adherencias quirúrgicas,
artritis, y soriasis. A menudo los pacientes se tratan con drogas
tales como anti-inflamatorios esteroides y no
esteroides para aliviar los síntomas de las enfermedades. Sin
embargo, estas terapias pueden no ofrecer un beneficio a largo plazo
adecuado y están asociadas con serios efectos colaterales si se
utilizan demasiado frecuentemente (tales como úlceras gástricas de
anti-inflamatorios no esteroides o toxicidades más
serias del sobre uso de esteroides). Otras drogas
anti-proliferativas y/o
anti-angiogénicas, más potentes tales como las
drogas anticáncer paclitaxel, metotrexato, doxorubicina,
camptotecina y etopósido podrían ofrecer modalidades de tratamiento
agresivas pero el uso de estas drogas contra enfermedades que no
amenacen la vida están limitadas por las toxicidades indeseadas y
los efectos colaterales.
Así, existen necesidades insatisfechas para
compuestos, composiciones, métodos y similares (incluyendo
aproximaciones de suministro) para tratar una o más de estas
enfermedades, preferiblemente más efectivamente con pocos efectos
colaterales. Los presentes compuestos, composiciones, métodos, etc.,
suministran una o más de estas ventajas.
La presente invención suministra el uso de un
fucano en la preparación de un medicamento para tratar una
adherencia potencialmente en un sitio de enfermedad en un animal.
Los fucanos suministran un efecto terapéutico significativo para la
enfermedad aunque también suministran bajos efectos colaterales.
En una modalidad, el animal es un humano y/o el
fucano es fucoidan. El sitio de la enfermedad puede ser un sitio
quirúrgico, y el fucano puede ser para suministro directo como una
composición al sitio de la enfermedad. El fucano puede ser para la
administración sustancialmente continua al sitio de la enfermedad
por vía de liberación controlada de una forma de dosis polimérica,
y la forma de dosis polimérica puede ser una película, parche,
pasta, microesfera, implante, gel, pulverizado o líquido. El fucano
puede ser para la administración como una composición farmacéutica
en una forma que comprende por lo menos una crema, pasta, excipiente
inyectable y polímero. (A menos que expresa o claramente se
establezca de otra manera del contexto, todas las modalidades,
aspectos, características, etc., se pueden mezclar y cazadas,
combinadas, y permutadas de cualquier manera deseada.
El fucano puede ser para la administración como
una composición farmacéutica que comprende el fucano y una cantidad
terapéutica efectiva de por lo menos otra droga. La droga puede ser
por lo menos un paclitaxel, doxorubicina, camptotecina, etopósido,
mitoxantrona, metotrexato, menadiona, plumbagina, juglona,
beta-lapercona ciclosporina, sulfasalacina,
esteroide, rapamicina, retinoide, docetaxel, y colquicina,
oligonucleótido no codificante, ribozima y un inhibidor ARN de
oligunucleótido. La cantidad terapéuticamente efectiva del fucano se
puede suministrar como parte de una composición y la composición
puede comprender desde aproximadamente 0.1% a 35%, 5% a 50%,
20-80%, 80% a 100% p/v del fucano.
La composición además puede comprender por lo
menos un excipiente farmacéutico aceptable, tal como un plurónico,
celulosa, alginato, acrilato, ácido hialurónico, polietilenglicol,
excipiente inyectable, y quitosan. El fucano puede ser para la
administración oral, directamente al sitio de la enfermedad, por vía
de inyección al sitio de la enfermedad, intraocularmente,
intraperitonealmente, intramuscularmente, intraarticularmente,
intralesionalmente, subcutáneamente, intravaginalmente, rectalmente,
o tópicamente, o de otra manera como se desee.
La artritis, soriasis o las enfermedades
oculares angiogénicas se pueden tratar al administrar una cantidad
terapéuticamente efectiva de un fucano a un sitio de enfermedad.
\newpage
Las composiciones farmacéuticas pueden
comprender una forma de dosis polimérica de un fucano que comprende
una cantidad terapéutica efectiva del fucano y por lo menos un
excipiente farmacéutico aceptable seleccionado del grupo que
consiste de plurónico, alginato, acrilato, ácido hialurónico,
polietilenglicol, excipiente inyectable, y quitosan. La forma de
dosis polimérica puede ser una película, pasta, micro esfera,
pulverizado, loción, líquido, o implante u otra forma como se
desee. Las composiciones farmacéuticas también pueden comprender
una cantidad terapéuticamente efectiva de por lo menos otra droga
tal como un oligonucleótido no codificante, ribozima y un inhibidor
ARN oligonucleótido.
La adherencia puede ser una adherencia
quirúrgica.
Estos y otros aspectos, características y
modalidades tal como se establecen dentro de esta solicitud,
incluyen la siguiente Descripción Detallada y los dibujos
anexos.
La Figura 1 es una gráfica de inhibición de
fucoidan o proliferación de célula en sinoviocitos y células de
músculo liso después de 48 horas de exposición.
La Figura 2 es una gráfica de la inhibición de
fucoidan de forbol éster miristato (PMA) inducido por activación de
neutrófilo.
La Figura 3 es una fotografía que describe la
inhibición de fucoidan de la expresión de colagenasa y estromelicina
a una concentración de 0.5% p/v sin inhibición excesiva de la
expresión de proteoglicano.
La Figura 4 es una gráfica de la liberación de
fucoidan de película de etileno vinil acetato.
La Figura 5 es una gráfica de liberación de
fucoidan de una pasta de policaprolactona.
La presente invención se relaciona con el
tratamiento de adherencias al inhibir la proliferación celular, las
respuestas inflamatorias, y la angiogenia utilizando polisacáridos
sulfatados conocidos como fucanos. Parece que los fucanos tales
como el fucoidan pueden inhibir la activación de neutrófilo, inhibir
la liberación de enzima inflamatoria proveniente de células
asociadas a artritis e inhibir la angiogenia en membranas de pollo
y adherencias quirúrgicas. En razón a que todas las células
contienen receptores que se unen a fucosa, en algunas modalidades
los fucanos son directamente suministrados al sitio de la enfermedad
para suministrar una exposición sustancialmente continua al tejido
objetivo a los fucanos (tal como fucoidan) por vía de la liberación
controlada de formas de dosis poliméricas. En razón a que los
fucanos pueden tener múltiples efectos in vivo (en
particular afectando la trombina de la sangre y el complemento) las
liberaciones controladas de sitio directo de los fucanos es una
alternativa a la administración sistémica que puede reducir las
toxicidades hematológicas.
A continuación se discutirá primero en general
los fucanos, las adhesiones, la artritis y la soriasis, luego se
discutirán algunas modalidades de la invención, luego se
suministrarán algunos ejemplos.
Los fucanos (incluyendo el fucoidan) son
polisacáridos sulfatados de alto peso molecular extraídos de malezas
marinas cafés. Estos compuestos les ha sido reportada múltiples
acciones inhibitorias in vivo e in vitro incluyendo
efectos anti-trombina,
anti-proliferativos,
anti-complemento,
anti-cancerígenos y anti-neutrófilo
de migración. Los fucanos pueden bloquear varios eventos de unión a
superficies de célula que incluyen unión
célula-célula a través de moléculas de
integrina-selectina, o al unir la trombina o el
complemento en la sangre o los receptores de mucosa o en
superficies de célula.
Tal actividad se cree que es responsable por las
propiedades anti-inflamatorias por vía (por ejemplo)
inhibición de linfocito o neutrófilo que se une a las células
endoteliales vasculares que podrían evitar la invasión de estas
células en un compartimiento de tejido con la subsecuente
inflamación. Patankar, M.S., et al., J. Biol. Chem. 268:
21770-21776 (1993); Brandley, B.K. et al., J.
Cell Biol. 105: 991-997 (1987). Recientes estudios
también han mostrado que los Fucanos inhiben la proliferación de las
células musculares lisas vasculares, Logeart, D., et al.,
Eur. J. Cell Biol. 74: 376-384 &
385-390 (1997), indicando (pero no demostrando) un
potencial posible anti-reestenosis de estos
compuestos. Los Fucanos han mostrado ser lentamente internalizados
en células luego de la unión a superficie tanto a células
musculares endoteliales como lisas. Glabe, C.G., et al., J.
Cell Science 61: 475-490 (1983); Logeart, D., et
al., Eur. J. Cell Biol. 74: 376-384 (1997).
Riou, D., et al., Anticancer Res., 16
(3A): 1213-1218 (1996); Itoh, H., Anticancer Res.,
13 (6A): 2045-2052 (1993); Nishiro, T., et
al., Thromb. Res., 62: 765-773 (1991); Blondin,
C., et al., Mol. Immunol., 31: 247-253
(1994); Patankar, M.S., et al., J. Biol. Chem., 268:
21770-21776 (1993). En Japón, el fucoidan extraído
de varias malezas marinas se comercializa como un alimento
saludable. El Fucoidan se ha propuesto como un agente cosmético o
dermatológico. La JP 01031707 y la JP 01085905. El Fucoidan se ha
reportado por ser un agente anticancerígeno potencial. Riou, D.,
et al., Anticancer Res., 16: 3a 1213-18
(1996); Itoh, H., Anticancer Res., 15: 5b 1937-47
(1995). El Fucoidan se reportó por no inhibir la angiogenesis in
vitro. Soeda, S., et al., Biochim. Biophysica Acta (1):
127-134 (2000). Similarmente, el fucoidan se
encontró que estimula la proliferación de células HUVE (in
vitro) inducidas por suero, indicando un posible efecto
proangiogénico (aunque la inhibición fue posible cuando estaba
presente el factor de crecimiento de fibroblasto). Giraux, J.,
et al., Eur. J. Cell Biol. 77 4: 352-9
(1998). Estudios también han mostrado que los Fucanos inhiben la
unión monocapa de célula endotelial. Glabe, C.G., J. Cell Science,
61: 475-490 (1983). En razón de las células que
componen los capilares son células endoteliales, este reporte indica
que in vitro, algunos aspectos de la adhesión de la célula
se pueden inhibir pero estos datos no demuestran ningún efecto
angiogénico in vivo del fucoidan. El fucoidan se ha
reportado por inhibir la unión del helicobacter a las células
gástricas que se indican en un efecto de úlcera
anti-gástrico. Shibat, H. J., Nutr. Sci. Vitaminol.
45: 325-336 (1999).
Otros polisacáridos sulfatados que incluyen los
tipos ramificados y lineales se reportan por tener actividad
anticoagulante diferencial. Pereira, M.S., J. Biol. Chem. 12:
7656-67 (1999). El sulfato dextrano y los derivados
se han reportado por inhibir el crecimiento de célula cancerígena,
Bittoun, P., Carbohydrate Res. (3-4):
247-255 (1999) y por tener efectos anticoagulantes,
Mauray, S., J. Biomat. Sci. Poly ed. 9: 373-87
(1998). Los polisacáridos sulfatados han sido propuestos como
agentes anti-virales para uso contra por ejemplo,
SIDA. EP 00293826; JP 01313433.
La formación de adherencia es un proceso
complejo en el cual los tejidos que son normalmente separados en el
cuerpo crecen uno entre el otro. Las adherencias quirúrgicas
(también conocidas como adherencias
post-quirúrgicas) se desarrollan de otra manera
respuesta al curado de herida normal de los tejidos al trauma y
ocurren en más de dos tercios de todos los pacientes quirúrgicos
abdominales. Ellis, H., Surg. Gynecol. Obstet. 133:497 (1971);
Wiebel, M-A. y Majno, G., Am. J. Surg. 126: 345
(1973). Las consecuencias de estas adherencias son variadas y
dependen del sitio quirúrgico involucrado. Los problemas pueden
incluir dolor, infertilidad, obstrucción de los intestinos y aún un
riesgo creciente de morir después de la cirugía cardiaca. diZerega,
G. S., Prog. Clin. Biol. Res. 381: 1-18 (1993);
diZerega, G. S., Fertil. Steril. 61:219-235 (1994);
Dobell, A. R., Jain, A. K., Ann. Thorac. Surg. 37:
273-278
(1984).
(1984).
El proceso de formación de adherencia involucra
inicialmente el establecimiento de una red de fibrina y reparación
de tejido normal. El proceso de reparación normal permite la
fibrinólisis junto con la reparación mesotelial. Sin embargo, en
formación de adherencia quirúrgica la matriz de fibrina madura como
fibroblastos prolifera en la red y ocurre la angiogenia dando como
resultado el establecimiento de una adherencia organizada a los 3 a
5 días. Buckman, R.F., et al., J. Surg. Res.
21:67-76 (1976); Raferty, A. T., J. Anat. 129:
659-664 (1979).
Los procesos inflamatorios incluyen la
activación del neutrófilo en los tejidos traumatizados, la
deposición de fibrina y la unión de tejidos adyacentes, la invasión
de macrófago, la proliferación de fibroblasto en el área, la
deposición de colágeno, la angiogenia y el establecimiento de
tejidos de adherencia permanente. Eventualmente, las terapias
preventivas incluyen la prevención de la deposición de fibrina, la
reducción de la inflamación (drogas
anti-inflamatorias esteroides y no esteroides) y la
remoción de depósitos de fibrina.
Intentos con intervención para evitar la
formación de adherencias
post-quirúrgicas han incluido el uso de técnicas de
hidroflotación o dispositivos de barrera. La hidroflotación
involucra la instalación de grandes volúmenes de soluciones de
polímero tales como dextrano. El grupo de estudio de adherencia,
Fertil. Steril. 40:612-619 (1983), o carboximetil
celulosa, Elkins, T. E., et al., Fertil. Steril.
41:926-928 (1984), en el espacio quirúrgico en un
intento de mantener los órganos aparte. Las membranas de barrera
sintética hechas de celulosa regenerada oxidada (Interceed^{TM}),
el politetrafluoroetileno (membrana quirúrgica
Gore-tex) y las membranas completamente
reabsorvibles hechas de una combinación de ácido
hialurónico/carboximetilcelulosa (HA/CMC)
(Sepra-film^{TM}) también se han utilizado para
reducir la formación de adherencia post-quirúrgica
tanto en animales como en humanos. Burns, J. W. et al., Eur.
J. Surg. Suppl. 577: 40-48 (1997); Burns, J. W.,
et al., Fertil. Steril. 66:814-821 (1996);
Becker, J. M., et al., J. Am. Coll. Surg.
183:297-306 (1996). El éxito de estas membranas
HA/CMC puede derivar de su capacidad de suministrar la separación de
tejido durante el proceso de reparación de herida peritoneal cuando
de forman las adherencias. Las membranas se observaron por formar
un recubrimiento viscoso claro en el tejido dañado durante
3-5 días después de la aplicación, un período de
tiempo que es compatible con el curso de tiempo de la formación de
adherencia post-quirúrgica. Ellis, H., Br. J. Surg.
50: 10-16 (1963). La administración intraperitoneal
de los agentes anti-inflamatorios tales como
dexametasona o corticosteroides produjeron una inhibición marginal
de la formación de adherencia diZerega. G. S. Fertil. Steril.
61:219-235 (1994); Hockel, M., Ann. Chir. Gynecol.
76: 306-313 (1987).
La artritis, tal como la artritis reumatoide
(RA) es una enfermedad inflamatoria crónica debilitante que afecta
casi al 2% de la población mundial. Esta condición se caracteriza
por dolor, hinchamiento, proliferación de células sinoviales
(formación de paños), angiogenia y destrucción del tejido de
articulación. En las etapas avanzadas de la enfermedad a menudo se
dañan órganos críticos y puede ser fatal. La enfermedad involucra
miembros múltiples del sistema inmune (macrófagos/monocitos,
neutrófilos, células B y células T) interacciones del complejo
citoquina y mal funcionamiento y proliferación de células
sinoviales. El tratamiento agresivo temprano se recomienda ahora
con enfermedades que modifican las drogas
anti-reumáticas (DMARDS) tales como el metotrexato y
combinaciones con ciclosporina o azatioprina. Artritis y Reumatismo,
39(5):713-722 (1996).
La artritis inducida por cristal afecta casi el
1% de la población y se caracteriza por la activación inducida por
cristal de macrófagos y neutrófilos en las articulaciones y que es
seguida por dolor agudo durante muchos días. La enfermedad progresa
de tal forma que los intervalos entre episodios se vuelven más
cortos y la morbilidad del paciente se incrementa hasta niveles
inaceptables. Esta enfermedad se trata generalmente sintomáticamente
con los NSAID. Para una discusión más detallada de la
patofisiología de esta enfermedad y otras formas de artritis
inflamatoria ver McCarty, et al., Artritis and Allied
Conditions by Lea and Febiger, Filadelfia 1495 (1985).
La soriasis es una enfermedad de la piel
inflamatoria crónica común, caracterizada por lesiones engrosadas y
escamosas levantadas que rascan, queman, picazón y sangrado fácil.
Más del 2% de los Americanos sufren de soriasis y los pacientes a
menudo tienen condiciones artríticas acompañantes. La causa de la
enfermedad es desconocida y no existe cura para la enfermedad
actualmente. Hay evidencia que soporta el concepto de una
enfermedad auto-inmune. La enfermedad se caracteriza
además por la activación de neutrófilo, la proliferación de célula y
la angiogenia.
Las células de la piel pueden seguir dos rutas
de crecimiento, el crecimiento normal o curación de herida. En el
crecimiento normal, las células se crean en la capa basal y se
mueven a través de la epidermis a la superficie de la piel. Las
células muertas son liberadas de la superficie a la misma tasa en la
que se forman las nuevas por debajo. Durante la curación de herida,
el crecimiento acelerado y la reparación se disparan dando como
resultado un recambio rápido de células de la piel, un suministro
sanguíneo creciente e inflamación. En algunos aspectos la soriasis
es un proceso de curación de herida exagerado. Si la piel no libera
las células de la piel (queratinocitos) tan rápidamente como ellos
se forman entonces puede ocurrir una acumulación. Esto puede
conducir a lesiones escamosas y a la angiogenia (para incrementar el
suministro de sangre). Al mismo tiempo, los linfocitos, neutrófilos
y macrófagos pueden crear dolor, hinchamiento e inflamación. Las
terapias de droga habituales incluyen el uso de agentes
anti-inflamatorios esteroides y no esteroides para
tratar los síntomas inflamatorios. El metotrexato y la ciclosporina
también se utilizan con eficacia marginal. Los costos habituales de
tratar la soriasis en los Estados Unidos son de más de
\textdollar3 billones por año.
La presente invención suministra el uso de
fucanos (que incluyen derivados y análogos de éstos) en la
elaboración de un medicamento para el tratamiento de adherencias
quirúrgicas (donde tratamiento se utiliza aquí incluye tanto el
tratamiento de condiciones existentes como la inhibición de
condiciones potenciales). Como se demostró en los Ejemplos de
adelante, los fucanos (y en particular, fucoidan) inhiben la
proliferación celular, las respuestas/eventos
anti-inflamatorios y la angiogenia, que incluyen por
ejemplo en adherencias quirúrgicas.
En una modalidad, los fucanos tales como el
fucoidan se utilizan para inhibir o evitar la angiogenia. En otra
modalidad, los fucanos tales como el fucoidan se utilizan para
inhibir o evitar la activación de la célula inflamatoria, de tal
forma que las células que inician las respuestas inflamatorias tales
como los sitios de enfermedad se pueden inhibir. Esto es
importante, por ejemplo, en razón de que muchas enfermedades tales
como, por ejemplo, la osteoartritis, no están necesariamente
asociadas con la acumulación de célula inflamatoria en los sitios
de la enfermedad. Así, tal uso de fucanos puede inhibir o evitar la
activación con más extracción de los macrófagos residentes, los
neutrófilos y otras células iniciadoras de inflamación que originan
los efectos crónicos no deseados de la enfermedad. Tales
actividades del fucano se aplican aquí a adherencias
quirúrgicas.
En una modalidad de esta invención, los fucanos,
que incluyen derivados y análogos de éstos, se pueden formular en
una formulación de liberación controlada para suministrar
concentraciones efectivas sostenidas del agente para ser
suministradas en los sitios de la enfermedad. En otra modalidad, el
fucoidan se utiliza en el tratamiento de adherencias quirúrgicas.
Se suministran aquí ejemplos. Tales ejemplos demuestran la acción
inhibitoria del fucoidan contra los condrocitos primarios (células
involucradas en la artritis reumatoide) derivadas de cartílago
fresco. Esto indica que el agente tiene potencial como agente
anti-artrítico. En particular, la capacidad
aparente del fucoidan para inhibir la producción de colagenasa y
estromelicina ofrece aproximaciones terapéuticas donde la liberación
de estos y/o otras metaloproteinasas originan problemas médicos.
En otras modalidades, el fucoidan se puede
utilizar en combinación con otros agentes terapéuticos para permitir
la buena eficacia contra el proceso de enfermedad con baja
toxicidad. Por ejemplo, en el tratamiento de adherencias
quirúrgicas, drogas potentes anti-proliferativas,
tales como doxorubicina, camptotecina, etoposido, mitoxantrona,
metotrexato, menadiona, plumbagina, juglona,
beta-lapercona ciclosporina, sulfasalazina,
esteroides, rapamicina, retinoides, paclitaxel, docetaxel,
colquicina y otros inhibidores de microtúbulo, y otros análogos y
derivados de éstos pueden tener toxicidades indeseadas a
concentraciones de droga requerida para la inhibición de los
procesos de adherencia sin la presencia de fucan, pero ellos pueden
ser útiles en concentraciones más bajas en combinación con fucanos,
tales como fucoidan, para lograr los resultados deseados.
En otra modalidad se propone que el fucano pueda
en si mismo ser la forma de dosis del agente. Por ejemplo, los
fucanos se pueden hacer en películas delgadas que se pueden colocar
directamente sobre el área de trauma quirúrgica de tal forma que la
disolución lenta del fucano expone los tejidos a la concentración
sostenida y efectiva del agente. De hecho, tal formulación puede
actuar como un sistema de suministro de droga de liberación
controlada para si mismo (como el agente activo) o para otros
agentes (tales como paclitaxel) que se pueden colocar en la
formulación. Los fucanos también se pueden conformar en tabletas,
cápsulas, micro esferas, pastas, geles, polvos, aerosoles o dados
oralmente, rectalmente, como un sólido o como una solución.
En general, los fucanos se pueden administrar
solos o como una parte de la composición mediante la aplicación o
inyección como una pasta, gel, pulverizado, particulado, película,
solución, líquido, loción, crema o implante. Las rutas y sitios de
administración incluyen oralmente, sistémicamente, intraocularmente,
subcutáneamente, intraperitonealmente, intramuscularmente,
intraarticularmente, intralesionalmente, intravaginalmente,
rectalmente o tópicamente, tal como en un parche. Estas rutas
pueden también, en ciertos casos, ser el sitio propuesto de acción
del fucano o la forma de dosis de combinación de la droga fucano. La
cantidad terapéuticamente efectiva del fucano se puede suministrar
como una parte de un compuesto y puede comprender 5% a 50%,
20-80%, 80% a 100% p/v de la composición. Los
fucanos se pueden suministrar en vasijas o recipientes adecuados,
que a su vez se pueden suministrar en kits y también se pueden
suministrar con una etiqueta, preferiblemente una etiqueta probada
por la agencia regulatoria gubernamental apropiada tal como la Food
and Drug Administration en los Estados Unidos de América.
Para el tratamiento de adherencias, las
composiciones que contienen fucanos o fucano se pueden aplicar
directamente a la enfermedad o al sitio quirúrgico como una
solución, partícula, suspensión, película, pasta, gel, pulverizado,
líquido, loción, implante u otra forma deseada. Las adherencias
también se pueden tratar mediante el suministro sistémico del
fucano que utiliza las rutas de administración intravenosa,
subcutánea, intramuscular, intraperitoneal, oral, u otras según se
desea.
Los fucanos se pueden utilizar para el
tratamiento de enfermedades angiogénicas del ojo. Por ejemplo, la
retinopatía diabética es una complicación que potencialmente lleva
a la ceguera de la diabetes que daña los vasos sanguíneos de la
retina seguido por el nuevo crecimiento de vasos sanguíneos
(angiogenia) que origina la visión borrosa o la destrucción de la
retina. La degeneración macular es causada por la invasión de nuevos
vasos sanguíneos inmediatamente por debajo de la retina y es la
causa principal de la ceguera en los Estados Unidos y en Europa con
200,000 nuevos casos cada año en los Estados Unidos y solamente el
15% de aquellos tratables con las terapias láser habituales. Una
aproximación farmacológica al tratamiento de estas enfermedades se
puede suministrar utilizando los métodos y composiciones discutidos
aquí adaptados para uso con el ojo. Por ejemplo, los fucanos se
pueden aplicar directamente a la superficie o inyectar en el ojo.
Las modificaciones a tales sistemas incluyen reticulación química
para disminuir la tasa de disolución de la forma de dosis, o la
mezcla con otros excipientes tales como plurónicos, alginatos,
acrilatos, celulosa, ácido hialurónico, polietilenglicoles,
quitosan, que incluyen análogos y derivados de estos, y numerosos
otros agentes de formulación farmacéuticamente aceptables.
En otra modalidad de la invención, los fucanos
forman un gel acuoso cargado con excipientes positivamente cargados
tales como, por ejemplo, quitosan o
poli-1-lisina. Las drogas tales
como, por ejemplo, un oligonucleótido no codificante, la ribozima y
el inhibidor ARN de oligonucleótido, se pueden incorporar en tal gel
para la aplicación al sitio de enfermedad. Alternativamente tal gel
que contiene droga, o la droga disuelta en una solución de fucano,
se puede secar y moler en partículas. Estas partículas se pueden
entonces aplicar al sitio de la enfermedad para actuar como una
forma de dosis de liberación controlada, o, las partículas pueden
actuar como un agente de transfección en razón a que los fucanos
unidos a la superficie se toman hacia las células. La aplicación de
tales partículas puede ser además facilitada por el uso de
excipientes farmacéuticamente aceptables tales como excipientes
tales como plurónicos, celulosa, alginatos, acrilatos, ácido
hialurónico, polietilenglicoles, quitosan, excipientes inyectables,
que incluyen análogos y derivados de éstos, y numerosos vehículos
basados en poliméricos.
Con relación a la transfección y el uso de los
fucanos con los agentes de secuencia de ácido nucleico, el área de
avance de medicina conocida como terapia génica está restringida por
el uso de temas de suministro de droga por medio del cual los
fragmentos de gen o las cadenas de ácido nucleico, tal como los
oligonucleótidos que incluyen ribozimas, nucleótidos no codificante
e inhibidores de ARN oligonucleótido, pueden tener su toma de
célula inhibida debido a la carga y al gran peso molecular de estos
compuestos. Recientemente, el uso de micropartículas (tal como
fosfato de calcio) que contienen el gen o los ácidos nucleicos se
han propuesto como agentes de transfección de tal forma que ellos
se unen a la superficie celular y son tomados por endocitosis o
invaginación, que da como resultado la entrada celular del gen o el
ácido nucleico. La mayoría de las células contienen receptores de
mucosa sobre la superficie de la membrana. La presente invención
suministra el uso de fucanos como agentes de transfección para las
cadenas de ácido nucleico. En una modalidad, la cadena de ácido
nucleico se puede unir o encapsular dentro de una micropartícula de
fucoidan y la partícula se puede reticular químicamente para inhibir
la disolución antes de la aplicación al sitio de la célula
objetivo.
Los fucanos, sean solos o en combinación con
otras drogas, se pueden utilizar en combinación con materiales
implantados en el cuerpo. Esos materiales pueden incluir numerosos
dispositivos médicos tales como catéteres, desviadores, membranas,
endoprótesis, esponjas, rellenos, articulaciones de reemplazo
artificial y partes de éstos y otros implantes ortopédicos
relacionados. Tales implantes pueden contener o estar recubiertos
con fucanos, sea solo o en combinación con otras drogas y
excipientes.
A menos que se indique otra cosa, excepto dentro
de las reivindicaciones, el uso de "o" incluye "y"
viceversa. Términos no limitantes no pueden ser considerados como
limitantes a menos que expresamente se establezca, o se indique
claramente el contexto, de otra manera. (Por ejemplo, "que
incluye", "que tiene", y "que comprende" típicamente
indican "que incluye sin limitación"). Las formas singulares,
incluyendo en las reivindicaciones, tales como "un",
"una", y "el" incluyen la referencia plural a menos que se
establezca expresamente, o el contexto claramente lo indique, de
otra manera.
La proliferación se determinó utilizando la sal
de bromuro de dimetiltiazol difeniltetrazolio (MTT) ensayo de
proliferación/citotoxicidad.
En el día uno, 1500-2000 células
de músculo liso (aorta toráxica embriónica de rata A7r5) o
sinoviocitos (HIG.82 de conejo) se colocaron por pozo sobre una
placa de 96 pozos, dejando la primera columna libre de células
(blanco). La placa se colocó en el incubador de CO_{2} a 37ºC. Al
día siguiente el fucoidan se agregó a varias concentraciones. No se
agregó fucoidan a la primera columna (blanco) y la segunda columna
(columna no tratada) para control. Las células fueron expuestas
durante 48 horas. Al final del período de exposición, 50 \mul de
sal de bromuro de dimetiltiazol difeniltetrazolio (MTT) disueltas en
medio fueron agregadas y se les permitió incubar durante 4 horas a
37ºC. El medio fue entonces aspirado y se agregaron 200 \mul de
dimetil sulfóxido (DMSO). La placa se agitó durante 30 minutos y la
absorbancia se leyó a 562 nm. La medición de la densidad óptica se
convirtió al número de células utilizando una gráfica estándar de
densidad óptica con el número de células conocido y la viabilidad
celular se expresó como el crecimiento % (este valor es el %
comparado con las células de control).
Como se muestra en la Figura 1, el fucoidan
indujo una concentración dependiente de la inhibición de la
proliferación de la célula después de 48 horas de exposición tanto
para las células musculares de sinoviocitos como de músculo liso.
Las concentraciones inhibitorias que dio el 50% del efecto sobre la
proliferación (IC50) fueron de 15 \muM y 6 \muM
respectivamente.
Este experimento incubó neutrófilos humanos
recientemente preparados con fucoidan a 0.5% p/v seguido por
estimulación de células con el PMA. La estimulación (o activación)
de las células indujo la generación de anión superóxido que se
podría medir mediante la emisión de luz (quimioluminiscencia). La
inhibición de la función de neutrófilo se determinó entonces por la
inhibición de quimioluminiscencia. Solución de sal amortiguada de
Hanks (HBSS) pH 7.4 se utilizó a lo largo de todo el estudio. Todos
los químicos se compraron de Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO) a
menos que se establezca de otra manera. Todos los experimentos se
desarrollaron a 37ºC. Los neutrófilos fueron preparados de sangre
entera citrada humana recientemente recolectada. En resumen, 400 ml
de sangre se mezclaron con 80 ml de dextrano T500 4% (Farmacia LKB,
Biotechnology AB Uppsala, Suecia) en HBSS y se les permitió
asentarse durante 1 h. El plasma se recolectó continuamente y
aplicaron 5 ml y 5 ml de Ficoll Paque (Farmacia) en tubos de
polipropileno de 15 ml (Corning, NY). Seguida por centrifugación a
500 x g durante 30 min, las placas de neutrófilo se lavaron libres
de eritrocitos por 20 s de choque hipotónico. Los neutrófilos
fueron resuspendidos en HBSS, mantenidos sobre hielo y utilizados
para experimentos dentro de las 3 h. La viabilidad y la pureza del
neutrófilo fue siempre mayor del 90%.
Las células se incubaron con varias
concentraciones de fucoidan durante 15 minutos a 37ºC antes de la
adición de PMA.
Los estudios de quimioluminiscencia fueron
desarrollados a concentración de células de 5 x 10^{6} células
por ml en HBSS con PMA a 0.5 \muM. A los tubos se les agregó 10
\muL de luminol disuelto en 25% de DMSO en HBSS para dar una
concentración final de 1 mM y las muestras se mezclaron para iniciar
la activación de neutrófilo. La quimioluminiscencia se monitoreó
utilizando el Luminómetro LKB (Modelo 1250) a 37ºC con agitación
inmediatamente antes de las mediciones. Los tubos de control
contenían células, fucoidan y luminol.
El fucoidan inhibió fuertemente el PMA inducido
por activación de neutrófilo como se muestra en la Figura 2. Los
datos son para tres incubaciones separadas de
PMA-neutrófilo. Estos datos demuestran un efecto
anti-inflamatorio del fucoidan.
Este ensayo mide los niveles de ARN de dos
metaloproteinasas, colagenaza y estromeilicina. La sobre expresión
de estos genes da como resultado la secreción de estas dos enzimas
de los condrocitos articulares y pueden representar parte de la
patofisiología de la artritis reumatoide. Los agentes que inhiben la
sobre expresión de la colagenaza y la estromelicina son agentes
potenciales antiartríticos. Este potencial antiartrítico se puede
disminuir si el agente también inhibe la expresión del gen
proteoglicano significativamente. La expresión del gen
proteoglicano es parte de la fisiología normal de los condrocitos.
El cultivo de condrocito primario se aisló recientemente de
cartílago de becerro. Las células fueron puestas en placa (a 2.5 x
10^{6}/ml) en platos de cultivo de 100 x 20 mm e incubados en un
medio F12 de Ham que contiene 5% de suero bovino fetal (FBS)
durante toda la noche a 37ºC. Las células fueron mantenidas sin
alimento con medio libre de suero durante toda la noche. Las
células fueron pre-tratadas con camptotecina a
concentraciones de 10^{-6}M, 10^{-7}M y 10^{-8}M durante 6
horas. Luego el IL-1 (20 ng/ml) se agregó a cada
placa y las placas se incubaron durante unas 18 horas adicionales.
El ARN total se aisló mediante el método de isotiocianato de
guanidina acidificado y sometido a electroforesis sobre un gel
desnaturalizado. Las muestras de ARN desnaturalizadas (15 \mug)
se analizaron mediante electroforesis de gel en un gel
desnaturalizante 1%, transferido a una membrana de nylon, e
hibridizada respectivamente con la sonda de cADN de colagenaza
marcada con ^{32}P, la sonda de cADN de estromelicina marcada con
^{32}P, la sonda de cADN de proteoglicano marcado ^{32}P y el
fosfato dehidrogenasa de gliceraldehído marcado con ^{32}P
(PAGDH) cADN. Los niveles de PAGDH actuaron como un estándar
interno para asegurar una carga aproximadamente igual. Los
resultados experimentales sobre las películas de rayos X se
exploraron y analizaron con ScanJet HP.
El fucoidan inhibió completamente la expresión
de colagenaza y estromelicina a una concentración de 0.5% p/v sin
inhibición excesiva de la expresión de proteoglicano como se muestra
en la Figura 3. A una concentración de 0.1% p/v hubo una inhibición
potente de la expresión de colagenaza y estromelicina sin ningún
efecto inhibitorio de la expresión de proteoglicano. Estos datos
demuestran un efecto anti-inflamatorio de
fucoidan.
Los huevos de pollo fertilizados se obtuvieron
de un criadero local en una incubadora con un rotador automático a
37ºC durante 3.5 días antes de descascaramiento u oclusión.
Las láminas de papel encerado estéril se
colocaron sobre una ventana que se creó en el espacio aéreo y se
utilizaron para evitar la contaminación y la deshidratación de los
contenidos de los huevos. Estas láminas, que miden 4 cm x 4 cm, se
esterilizaron al pulverizarlas con 70% de etanol y permitirles
secarse en la caperuza del flujo laminar. Después de tres días los
huevos se rotaron manualmente en la incubadora de tal forma que su
extremo filoso se levantó durante 5-10 minutos para
permitir la separación de los contenidos del huevo de la membrana
interior. Utilizando 70% de etanol y Kimwipes, la cáscara de huevo
completa se enjuagó para ayudar limpiar y sanear el exterior del
huevo. Dentro de la caperuza de flujo laminar, el huevo se mantuvo
con la parte roma del lado hacia arriba y se hizo un hueco en el
extremo romo del huevo al romper cuidadosamente la cubierta con el
extremo del forceps. Los remanentes de la cáscara se removieron
suavemente con los forceps para formar un hueco en el extremo romo.
Este hueco circular se hizo tan largo como de 2 a 3 cm en diámetro
sin dañar la membrana interior. Una vez que se creo el hueco en la
cubierta, la membrana de la cáscara interior (que guarda los
contenidos del huevo) se giró suavemente y se removió utilizando los
forceps, teniendo cuidado de no dañar la membrana corioalantóica
(CAM)(que guarda la yema y el embrión de pollo en desarrollo).
El hueco fue entonces cubierto con la lámina del
papel de cera con para-película esterilizada al
tensionar suavemente la para-película y luego
colocarla alrededor del hueco. El huevo fue luego colocado en el
soporte para huevo en la incubadora (37ºC) y ubicado de tal forma
que se evitara la rotación. Después de 6 días cada huevo se removió
uno por uno de la incubadora (lado romo hacia arriba), y la
para-película que cubre la ventana se removió para
acceso directo al CAM, que se origina del intestino trasero del
embrión. Los glóbulos de
poli(epsilon-caprolactona) cargados con
fucoidan (PCL) se elaboraron al fundir PCL a 60ºC y al mezclar
físicamente el fucoidan en el PCL y permitirle a los glóbulos
endurecerse al enfriar hasta temperatura ambiente. Los glóbulos de
fucoidan se colocaron en un lecho capilar en crecimiento del CAM.
Los contenidos del huevo fueron entonces resellados con la lámina
de para-película y colocados de nuevo en la
incubadora a 37ºC. Después de 2 días más, se registró el análisis
de vascularidad CAM (48 horas después de colocar la droga sobre el
lecho capilar CAM). El efecto de la droga sobre el CAM se calificó
utilizando una balanza avascular, que califica el efecto de la droga
como 0, 1, 2 o 3. Los valores de la escala avascular describen lo
siguiente:
- 0
- Sin actividad antiangiogénica
- 1
- Reducción Microvasal
- 2
- Pequeña zona avascular que mide el tamaño del glóbulo de droga (2mm de diámetro)
- 3
- Zona avascular que mide 4-5mm de diámetro.
El fucoidan potencialmente inhibió la angiogenia
en el CAM como se muestra en la Tabla 1. Las concentraciones de
fucoidan tan bajas como del 2% p/p en PCL parcial o completamente
inhibieron la angiogenia en 4 o 2 CAM respectivamente.
Estos datos demuestran una actividad
antiangiogénica de fucoidan y muestran que una formulación de
liberación lenta polimérica del fucoidan es un método efectivo de
liberar las concentraciones terapéuticamente efectivas de la droga
sin inducir toxicidad indebida.
Cinco mg de fucoidan (Sigma) y 45 mg de etileno
vinil acetato (EVA, peso molecular aproximadamente 50k,
Polysciences) se disolvieron/suspendieron en 1 ml de diclorometano.
Doscientos \mul de solución fueron pipeteados sobre discos de
teflón de 1 cm de diámetro y se les permitió secarse durante toda la
noche (evaporación de disolvente) para formar películas elásticas
delgadas para dar aproximadamente 10 mg de películas con
aproximadamente un grosor de 100 \mum.
La tasa de liberación de droga proveniente de
estas películas se midió al colocar secciones de 5 mg de películas
en 20 ml de tubos de vidrio tapados que contienen 10 ml de solución
salina amortiguada de fosfato (PBS) pH 7.4. Los tubos se taparon, y
se colocaron en un agitador orbital a 37ºC. En momentos específicos,
los tubos se removieron y la cantidad de droga liberada se analizó
mediante espectroscopia de absorbancia. El perfil de liberación del
fucoidan (Figura 4) se caracterizó por una explosión inicial de
liberación de droga seguida por una liberación sostenida lenta.
Esta forma de dosis del fucoidan representa una formulación
biocompatible, biodegradable, inyectable de la droga que libera la
droga de una manera controlada.
Pasta PCL: El fucoidan se mezcló en
policaprolactona (PCL, polímeros Birmingham, peso molecular 54k) a
60ºC mediante pulverización de espátula a una concentración de 10%
p/p. Esta mezcla fue entonces pipeteada en jeringas plásticas de 1
ml y se les permitió enfriarse. Esta formulación se podría inyectar
a través de agujas calibre 18 a 56ºC.
Para medir la liberación de la droga de la pasta
PCL, alícuotas de 10 mg de pasta fundida se inyectaron sobre la
base de los tubos de vidrio de 15 ml y se le permitió enfriarse y
consolidarse. Se agregaron quince ml de PBS a cada tubo y los tubos
se taparon, y rodados extremos sobre extremo en un horno a 37ºC. En
los momentos específicos, los tubos se removieron y la cantidad de
droga liberada se analizó mediante espectroscopia de absorbancia.
Los perfiles liberados de fucoidan se muestran en la Figura 5. La
liberación de fucoidan se caracterizó por una explosión inicial de
liberación de droga seguida por una liberación sostenida lenta. Esta
forma de dosis de fucoidan representa una formulación
biocompatible, biodegradable, inyectable de la droga que libera la
droga de una manera controlada.
El modelo de pared lateral cecal de rata de
adherencias quirúrgicas se utilizó para investigar el efecto del
fucoidan sobre las adherencias quirúrgicas. En este modelo, 16 ratas
se dividieron en dos grupos de 8. Después del trauma quirúrgico,
las ratas se trataron inmediatamente con películas de ácido
hialurónico reticulado (HA) que contienen fucoidan o fueron no
tratadas (grupo de control).
Materiales y Métodos. Se obtuvo
hialuronato de sodio grado médico de Lifecore Scientific. Todos los
disolventes fueron grado HPLC y obtenidos de Fisher. Los platos
Petri plásticos se obtuvieron de Fisher Scientific. Se obtuvo
etil-3-(dimetilamino) carbodiimida (EDAC) y fucoidan
de Sigma (St. Louis. Mo).
Preparación de Películas. Las películas
cargadas con fucoidan fueron hechas al preparar una solución de 0.6%
p/v de fucoidan, 0.4% p/v de hialuronato de sodio y 0.15% p/v de
glicerol en agua. Las películas de control (no fucoidan) fueron
hechas al preparar una solución o mezcla de 0.4% p/v de hialuronato
de sodio y 0.15% p/v de glicerol en agua. Las películas cargadas
con fucoidan y las películas de control se moldearon de estas
soluciones al pipetear 4 g de cada solución en platos Petri
plásticas con diámetro de 2.5 cm separadas y secadas durante 24
horas a 60ºC. El agente de reticulación EDAC se incluyó a 4mM
(concentración final). Cada película seca fue entonces removida
cuidadosamente del plato Petri utilizando una hoja quirúrgica.
Esterilización. Las películas se
empacaron entre papel de pesado 5 cm x 5 cm (Fisher Scientific) y
selladas con calor en bolsas plásticas. Las películas fueron
entonces térmicamente esterilizadas utilizando irradiación gama de
una fuente de cobalto 60 y expuestas a 2.5 Mrad de radiación con
enfriamiento del tubo sellado sobre hielo.
Estudios en Animales. El trauma
quirúrgico se indujo como sigue: 16 ratas Sprague Dawley maduras,
que pesa cada una 225-350 g se obtuvieron de
Charles River Laboratories, Wilmington, MA. Solamente los animales
que parecieron aproximadamente normales (es decir, que muestran un
recubrimiento no arrugado limpio, ojos claros brillantes y una
postura activa) se utilizaron en el estudio. Los animales se
asignaron aleatoriamente a uno de dos grupos, pesados y
anestesiados con una inyección sencilla de clorhidrato de quetamina
(6mg/kg), administrados en el músculo grande del muslo. El abdomen
se afeitó y se limpió con alcohol. Se hizo una incisión de 4 cm en
la piel iniciando aproximadamente a 2 cm caudal a la línea alba
aunque el músculo se tensionó con forceps. El cecum fue sometido a
abrasión cuatro veces sobre la superficie ventral y dorsal con un
dispositivo de abrasión mecánico, que le permite el operador
independiente, la abrasión controlada sobre un área definida. Las
adherencias del cecum se evaluaron y se calificaron de acuerdo a un
sistema de calificación predefinido:
- 0
- = No adherencias
- 1
- = Adherencia de película con plano fácilmente identificable
- 2
- = Adherencia media con plano libremente disectable
- 3
- = Adhesión moderada con disección difícil de plano
- 4
- = Adherencia densa con plano no disectable.
(Las adherencias grado 1 son el nivel más bajo
de adhesión discernible (una adhesión de película con un plano
identificable)).
Luego de la abrasión del cecum, los animales del
Grupo 1 no recibieron tratamiento. Los animales en los Grupos 2
recibieron películas de fucoidan-HA discutidas
anteriormente. Las películas se envolvieron alrededor del cecum.
Las incisiones fueron entonces cerradas con sutura 3.0 Dexon. Siete
días luego de la operación, los animales se sometieron a eutanasia
y se evaluaron para la presencia de grado 2 (o mayor) de adherencias
post-operativas. El grado de adherencias 2 se
definió como las adherencias medias con un plano libremente
disectable.
- \bullet
- Membranas solamente cubiertas aproximadamente la mitad del cecum
- \bullet
- No se notaron anormalidades luego de la necroscopia (sin material residual, no ascitos, no signos de curación anormal, en el cecum o en la incisión de línea media)
Los resultados demuestran la inhibición efectiva
de la formación de adherencia mediante películas cargadas con
flucoidan en razón a que incidencia media de las adherencias se
redujo y el % de ratas sin adherencias se incrementó en ratas
tratadas con fucoidan. Las películas cargadas con fucoidan que
cubren completamente el cecum podrían ser aún más efectivas al
inhibir la formación de adhesión.
Claims (20)
1. Uso de un fucano en la preparación de un
medicamento para tratar una adherencia potencialmente en un sitio
de enfermedad en un animal.
2. El uso de la reivindicación 1 en donde la
enfermedad es un sitio quirúrgico, y el fucano es para dirigir el
suministro como una composición al sitio de enfermedad.
3. El uso de la reivindicación 1 o
reivindicación 2 en donde el fucano es para administración oral.
4. El uso de la reivindicación 1 o
reivindicación 2 en donde el fucano es para la administración por
vía de inyección al sitio de la enfermedad.
5. El uso de la reivindicación 1 o
reivindicación 2 en donde el fucano es para administración
intraocularmente, subcutáneamente, intraperitonealmente,
intramuscularmente, intraarticularmente, intralesionalmente,
intravaginalmente, rectalmente o tópicamente.
6. El uso de cualquier reivindicación precedente
en donde el fucano es fucoidan.
7. El uso de cualquier reivindicación precedente
en donde el fucano es para administración sustancialmente continua
al sitio de la enfermedad por vía de liberación controlada de una
forma de dosis polimérica.
8. El uso de la reivindicación 7 en donde la
forma de dosis polimérica comprende una película, parche, pasta,
microesfera, implante, gel, pulverizado o líquido.
9. El uso de una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 8 en donde el fucano es para la administración
como una composición farmacéutica en una forma que comprende por lo
menos uno de una crema, pasta, excipiente inyectable y polímero.
10. El uso de cualquier reivindicación
precedente en donde el fucano es para administración como una
composición farmacéutica que comprende el funcan y una cantidad
terapéuticamente efectiva de por lo menos una droga.
11. El uso de la reivindicación 10 en donde la
droga comprende por lo menos uno de un paclitaxel, doxorubicina,
camptotecina, etoposido, mitoxantrona, metotrexato, menadiona,
plumbagina, juglona, beta-lapercona ciclosporina,
sulfasalazina, esteroide, rapamicina, retinoide, docetaxel,
colquicina, un oligonucleótido no codificante, ribozima y un
inhibidor de ARN oligonucleótido.
12. El uso de una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 11 en donde el fucano es para suministro como
parte de una composición y la composición comprende 0.1% a 35% p/v
del fucano.
13. El uso de una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 11 en donde el fucano es para suministro como
parte de una composición y la composición comprende 80% a 100% p/v
del fucano.
14. El uso de una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 11 en donde el fucano es para suministro como
parte de una composición y la composición comprende 5% a 50% p/v
del fucano.
15. El uso de una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 11 en donde el fucano es para suministro como
parte de una composición y la composición comprende 20% a 80% p/v
del fucano.
16. El uso de una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 15 en donde el fucano es parte de una
composición que además comprende por lo menos un excipiente
farmacéuticamente aceptable.
17. El uso de la reivindicación 16 en donde el
excipiente farmacéuticamente aceptable se selecciona del grupo que
consiste de un plurónico, celulosa, alginato, acrilato, ácido
hialurónico, polietilenglicol, y quitosan.
18. El uso de una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 17 en donde el fucano es para la administración
directamente al sitio de enfermedad.
19. El uso de una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 18 en donde el animal es un humano.
20. El uso de una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 19, en donde la adherencia es una adherencia
quirúrgica.
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