ES2283002T3

ES2283002T3 - Carotenoides farmaceuticamente activos.

Info

Publication number: ES2283002T3
Application number: ES96916256T
Authority: ES
Inventors: Alan Norman Howard; John Thomas Dept. of Chemistry LANDRUM; Richard Andrew Dept. of Physics BONE
Original assignee: Howard Foundation
Current assignee: Howard Foundation
Priority date: 1995-06-07
Filing date: 1996-06-07
Publication date: 2007-10-16
Anticipated expiration: 2016-06-07
Also published as: CA2224217A1; ATE355832T1; DE69636951T2; GB2301775B; DK0831797T3; GB2301775A; EP0831797A1; GB9611967D0; EP0831797B1; WO1996040092A1; NZ309130A; CA2224217C; AU719671B2; AU5907896A; DE69636951D1

Abstract

SE DESCRIBEN LOS CAROTENOIDES LUTEINA Y ZEAXANTINA PARA SU USO FARMACEUTICO EN EL TRATAMIENTO DE LA DEGENERACION MACULAR AVANZADA. SE DESPLIEGAN ELEVADAS CONCENTRACIONES PARA PRODUCIR LOS NIVELES ELEVADOS DE CAROTENOIDES EN SUERO QUE SE NECESITAN PARA QUE SEAN CAPTADOS POR LA MACULA.

Description

Carotenoides farmacéuticamente activos.

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La invención se refiere al uso de meso-zeaxantina que incrementa la deposición de pigmento macular en el ojo humano. La invención trata particularmente, pero no exclusivamente, de composiciones farmacéuticas que contienen meso-zeaxantina para el uso en el tratamiento mediante terapia o profilaxis de la enfermedad de la degeneración macular y en particular la relacionada con la edad (AMD).

La mácula es la región anatómica de la retina que en el hombre es responsable de la visión central. Centrada en la fóvea, donde el eje visual se encuentra con la retina, se extiende radialmente hacia el exterior hasta una distancia de aproximadamente 2,75 mm (Davson, 1990). La mácula se divide en la mácula interna y la mácula externa. La mácula interna se extiende radialmente hasta una distancia de 1,5 mm mientras que la mácula externa está definida por el anillo circular colindante. La parte central de la mácula es fácilmente reconocible debido a su coloración amarilla que resulta de la presencia de pigmento macular.

A pesar de su pequeño tamaño, la mácula está dotada del grado de agudeza visual más alto. Por lo tanto, no es sorprendente que se preste un esfuerzo considerable a comprender y, cuando es posible, tratar enfermedades que rompen el funcionamiento normal de la mácula. Una de tales enfermedades es la degeneración macular relacionada con la edad (AMD) que se produce en aproximadamente 20% de la población por encima de la edad de 65 años y es la causa principal de deterioro visual en los EE.UU. de A. y el Reino Unido. La AMD ha sido hasta la actualidad un estado irreversible.

Fue encontrado por Waid (1945) que extractos reunidos del pigmento macular tenían un espectro de absorción similar al de los carotenoides que parecía adaptarse al de la luteína. Un trabajo adicional en los 80 demostró que consistía en luteína y zeaxantina (Bone y otros, 1985).

Un trabajo más reciente (Bone y otros, 1993) ha mostrado que el componente de zeaxantina encontrado en la retina humana está compuesto en sí mismo por los tres posibles estereoisómeros. La Figura 1 muestra las estructuras estereoquímicas de los componentes del pigmento macular. Los grupos hidroxi en 3’ de la luteína y la meso-zeaxantina tienen la misma configuración absoluta, haciendo posible la interconversión mediante un movimiento del doble enlace 4’-5’ (luteína) a la posición 5’-6’ (meso-zeaxantina). De los tres estereoisómeros, SSZ está presente solo como un componente relativamente pequeño. RRZ es de origen dietético mientras que RSZ (o meso-zeaxantina) no es común en la dieta y todavía no se ha de detectado en suero humano. Se ha sugerido que la presencia de RSZ puede ser el resultado de la isomerización de luteína hasta RSZ mediante una enzima.

WO 91/03571 describe un método para preparar zeaxantina.

La función del pigmento macular no se ha determinado inequívocamente. Se ha propuesto que una función puede ser reducir el efecto adverso de la aberración cromática en el medio ocular incrementando de ese modo la agudeza (Walls 1967: Reading and Weale 1974). Actualmente, un punto de vista más generalmente sostenido es que el pigmento actúa probablemente con una capacidad protectora contra los efectos dañinos de la luz azul (Dicthburn 1973, Kirshfeld 1982, Bone y otros, 1984) que puede inducir a la formación de radicales libres reactivos dentro de la retina y la formación de tales especies puede reducirse mucho en individuos que tienen un alto nivel de pigmentación macular. El pigmento macular también puede servir pasivamente como un filtro y proteger a los tejidos sensibles de la luz azul excesiva dañina.

La AMD es una enfermedad que se desarrolla gradualmente a lo largo de un período de muchos años siendo la pérdida de visión el resultado definitivo. El tejido dañado tiene un contenido de lípidos inusualmente alto que se ha sugerido que se oxida para formar lipofuscina, un producto fluorescente de la oxidación de lípidos. Se ha postulado que la exposición de la retina a luz azul excesiva puede incrementar la velocidad de formación de lipofuscina (Feeney-Burns y otros, 1990, Gottsch y otros, 1990).

Hasta la fecha se conoce poco acerca de los factores que influyen en la captación de carotenoides en la mácula y no existe una cura o prevención eficaz de la AMD.

Los estudios de carotenoides plasmáticos en el caso de estudios de control de AMD han sido equívocos. En el estudio ocular de Beaver Dam (Mares-Perlman y otros, 1995) no se observaron diferencias en 167 casos y 167 controles en suero que incluía luteína o zeaxantina. En the Eye Disease Case Control Study Group (1993) se presentaron los resultados de 421 casos y 615 controles.

Las personas con niveles de carotenoides séricos en el grupo de medio a alto tenían de un medio a un tercio de riesgo de AMD. Todos los carotenoides medidos, incluyendo luteína, zeaxantina, beta-caroteno, alfa-caroteno y criptoxantina, estaban implicados. En una publicación adicional (Seddon y otros, 1994), estos autores encontraron que el consumo de luteína y zeaxantina (que se obtienen principalmente de hortalizas de hojas de color verde oscuro) estaba muy fuertemente asociado con un riesgo reducido de AMD. Sin embargo, algunas personas con un alto consumo de hortalizas verdes todavía sufrían AMD. Además, Seddon y otros (1995) investigaron la relación entre el riesgo de desarrollar AMD y la toma dietética de carotenoides y vitaminas A, C y E. Una toma dietética superior de carotenoides estaba asociada con un riesgo inferior de AMD.

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Schalch (1992) investigó la idea de que la concentración de carotenoides dietéticos en la mácula no es accidental, pero su presencia puede prevenir o limitar el daño debido a sus propiedades fisicoquímicas y a una capacidad para extinguir radicales libres de oxígeno y oxígeno singlete, que se generan en la retina como consecuencia de la presencia simultánea de luz y oxígeno.

WO96/19215 describe un método para la prevención o el tratamiento de la arteriosclerosis en un mamífero, en donde el método comprende administrar una cantidad eficaz de un tocoferol natural y un caroteno natural para prevenir o tratar la arteriosclerosis en un mamífero que necesite tal prevención o tratamiento.

Los autores de DE4020874 (y la correspondiente Patente de EE.UU. 5.290.605) describen una bebida refrescante nutricional para la protección contra el peligro de la exposición a luz UV, en donde la bebida comprende carotenoides, opcionalmente junto con la vitamina C y/o vitamina E y/u otros antioxidantes fisiológicamente aceptables.

En un extracto publicado en el número de marzo de 1995 de Investigative Ophthalmology and Visual Science (36, supl, 892), se presentó el análisis de carotenoides de 8 ojos normales y 8 ojos de pacientes con AMD. Los resultados sugerían que existía una posible correlación entre un pigmento macular disminuido y el predominio de AMD, pero recomendaban que debe tenerse precaución en esta interpretación debido a que el pigmento macular reducido podía ser un resultado, en vez de una causa, de la enfermedad. Cuando la materia del extracto mencionado anteriormente fue sometida para la publicación a un grupo de revisión, los evaluadores recomendaron el rechazo debido a que el número de muestras analizado era demasiado pequeño. Por lo tanto, eran necesarios resultados adicionales antes de que pudiera adoptarse ninguna conclusión sobre el posible papel preventivo de la luteína/zeaxantina en la AMD.

El objetivo de la presente invención es incrementar el pigmento macular y prevenir o curar la AMD mediante la administración de una composición farmacéutica que comprende meso-zeaxantina en combinación con un portador o diluente farmacéutico.

Un objetivo adicional de la invención es proporcionar el uso de meso-zeaxantina en la fabricación de un medicamento para el uso en el tratamiento de la degradación macular de pigmento amarillo en la mácula de uno ojo de un paciente humano.

Dentro del contexto anterior se ha encontrado ahora sorprendentemente que seleccionando un tipo particular de carotenoide, a saber su meso-zeaxantina, es posible incrementar el pigmento macular en la mácula humana, lo que podría conducir a la prevención y/o el tratamiento de la AMD en los pacientes de riesgo o con la enfermedad.

Por otra parte, la dosis eficaz es bastante sorprendentemente mayor que la que se alcanza normalmente mediante la toma de zeaxantina en hortalizas verdes ricas. Aunque podría sospecharse que puesto que la mácula contiene zeaxantina, la administración de zeaxantina en cantidades similares a las presentes en hortalizas verdes elevaría la concentración de pigmento macular, se ha encontrado bastante sorprendentemente que cuando el carotenoide se administra oralmente en una forma concentrada la cantidad requerida para ser eficaz a corto plazo es considerablemente mayor que la esperada.

Por otra parte, se ha encontrado que en una muestra suficientemente grande para garantizar conclusiones, el contenido de luteína/zeaxantina de las retinas de ojos de personas con AMD era 30% o menor que el de personas con ojos normales.

De acuerdo con esto, la presente invención proporciona en un aspecto meso-zeaxantina para el uso como un suplemento farmacéutico o alimenticio, particularmente en la elevación del pigmento macular y la prevención o el tratamiento de la degeneración macular relacionada con la edad. En general, el agente activo (es decir, meso-zeaxantina) puede usarse en el régimen de dosificación total de hasta 100 mg al día, típicamente 10-50 mg al día, con una dosificación óptima de 30 mg al día.

La dosis depende del momento de la administración. Cuando la mácula está agotada de pigmento macular, se usa normalmente una dosis alta (alrededor de 30 mg/día). Los usos de acuerdo con la invención se dirigen principalmente a una alta dosificación del paciente (es decir, cantidades de 10 mg/día o superiores) y tratan especialmente en modalidades preferidas de alcanzar niveles séricos del carotenoide de al menos 0,7 ó 0,8 mm/ml.

Durante el período inicial de administración, se prefiere usar una dosis grande alrededor de 30 mg/día durante varias semanas. Sin embargo, cuando se alcanza una constante en la concentración de pigmento macular es preferible una dosis de mantenimiento de, por ejemplo, alrededor de 7,5 mg/día. La razón de esto es que a la dosis alta la piel se vuelve amarilla debido al color amarillo de la meso-zeaxantina. Este es un efecto secundario no deseable. Aunque puede tolerarse durante un tiempo corto, es preferible una dosis inferior para el mantenimiento ya que es suficiente para mantener el nivel de pigmento macular en un nivel deseable, y no provoca pigmentación de la piel.

Una forma de dosificación unitaria tal como, por ejemplo, una tableta de 750 mg o, por ejemplo, una cápsula de 800 mg que ha de usarse en una base diaria puede contener de 0,1% a aproximadamente 12,5% en peso de zeaxantina y otros ingredientes pueden comprender:

Beta-caroteno: de aproximadamente 2 a aproximadamente 20 mg, por ejemplo aproximadamente 5 mg

Licopeno: de aproximadamente 2 a aproximadamente 20 mg, por ejemplo aproximadamente 5 mg

Vitamina A: de aproximadamente 400 a aproximadamente 600 RE, por ejemplo aproximadamente 500 RE

Vitamina C: de aproximadamente 75 a aproximadamente 250 mg, por ejemplo aproximadamente 100 mg

Vitamina E: de aproximadamente 50 a aproximadamente 250 mg, por ejemplo aproximadamente 100 mg

Selenio: de aproximadamente 80 a aproximadamente 120 mg, por ejemplo aproximadamente 90 mg

Cobre: de aproximadamente 2 a aproximadamente 4 mg, por ejemplo aproximadamente 3 mg

Zinc: de aproximadamente 10 a aproximadamente 20 mg, por ejemplo aproximadamente 15 mg

Manganeso: de aproximadamente 2 a aproximadamente 5 mg, por ejemplo aproximadamente 4 mg

Ubiquinona: de aproximadamente 10 a aproximadamente 100 mg, por ejemplo aproximadamente 50 mg

Portador (Coenzima Q10): de aproximadamente 150 a aproximadamente 250 mg, por ejemplo aproximadamente 175 o aproximadamente 200 mg

De acuerdo con esto, puede ser deseable emplear una dosis alta de meso-zeaxantina seguida por una dosis inferior cuando el pigmento macular alcanza una constante. Para los expertos en la técnica, la pigmentación macular puede medirse mediante un fotómetro oscilatorio (véase el Ejemplo 2).

La composición de la invención es especialmente útil para incrementar el pigmento macular en la mácula humana y en un tratamiento preventivo de la degeneración macular relacionada con la edad.

Como se observará a partir de la Figura 1 de los dibujos, la luteína y la zeaxantina son estereoisómeros. Pueden existir diastereoisómeros de zeaxantina en tres formas diferentes en la naturaleza, a saber zeaxantina (la forma 3R,3’R), meso-zeaxantina (la forma 3R,3’S) y zeaxantina 3S,3’S.

La meso-zeaxantina es un isómero que no está presente en la naturaleza (al menos en abundancia) aparte de en el ojo del primate, y se cree que es sintetizada en el ojo mediante conversión enzimática.

Al llevar a cabo la invención, puede usarse un compuesto como el definido en su forma libre.

La invención proporciona una composición farmacéutica, composición que comprende meso-zeaxantina junto con un diluyente o portador farmacéuticamente aceptable.

Tal composición puede estar en forma a granel o, más preferiblemente, en forma de dosificación unitaria. Así, por ejemplo, la composición puede formularse como una tableta, una cápsula, un polvo, una solución o una suspensión.

Las composiciones de acuerdo con la invención pueden prepararse usando el agente activo carotenoide de acuerdo con la práctica de los suplementos alimenticios o la práctica farmacéutica convencional. Los diluyentes, excipientes o portadores que pueden usarse son bien conocidos en la técnica de la formulación y la forma elegida para cualquier régimen particular dependerá del contexto dado y de la elección del formulador.

Al llevar a cabo la invención, el carotenoide activo puede usarse junto con otros agentes activos. Entre tales otros agentes, pueden mencionarse, por ejemplo, los siguientes, a saber, otro carotenoide tal como licopeno o alfa-, beta-, gamma- o delta-caroteno, o uno o más de los siguientes antioxidantes, a saber, vitamina A, vitamina C, vitamina E (\alpha-tocoferol y otros tocoferoles activos), selenio, cobre, zinc, manganeso y ubiquinona (coenzima Q10).

El uso de una mezcla que contiene un tocoferol tal como \alpha-tocoferol se prefiere especialmente puesto que se cree que tal mezcla proporciona un efecto sinérgico.

Los carotenoides se destruyen parcialmente en el tracto gastrointestinal mediante oxidación. Añadiendo vitamina E y/o vitamina C, este proceso se inhibe y se absorbe más carotenoide. El inhibidor puede incluirse como parte de una composición, como parte de una invención o administrada separadamente.

Además de los aspectos anteriores, la invención incluye el uso de su carotenoide meso-zeaxantina, en la fabricación de un medicamento para incrementar el pigmento en la mácula del ojo humano para el tratamiento o la prevención de la degeneración macular relacionada con la edad u otro trastorno de degradación del pigmento macular.

Por otra parte, la invención incluye un procedimiento para la fabricación de un medicamento para los propósitos mencionados anteriormente.

Los siguientes Ejemplos pretenden ilustrar la invención a modo de ejemplo solamente. Se hace referencia en los Ejemplos a las Figuras 2 a 4 de los dibujos, en las que:

La Figura 2 muestra para ojos tanto normales como con AMD la relación L:Z media para cada disco o corona de tejido retinal representada frente a la relación MZ:Z media. Las relaciones de luteína a zeaxantina y meso-zeaxantina son consecuentemente inferiores para ojos con AMD en comparación con los normales.

La Figura 3a de Referencia muestra el incremento dependiente del tiempo en el nivel de luteína en suero del Sujeto JTL (Ejemplo 2). Las barras de error representan las desviaciones estándar en las medidas. El día "0" representa el principio del suplemento con luteína.

La Figura 3b de Referencia muestra el incremento dependiente del tiempo en el nivel de luteína en suero del Sujeto RAB (Ejemplo 2). Las barras de error representan las desviaciones estándar en las medidas. El día "0" representa el principio del suplemento con luteína.

La Figura 4a de Referencia muestra las medidas diarias de la densidad óptica de pigmento macular para el sujeto JTL (Ejemplo 2) desde 7 días antes del comienzo (día "0") del suplemento con luteína hasta el día 72. Ojo izquierdo - círculos sólidos; ojo derecho - círculos abiertos. La línea sólida es el ajuste lineal de mínimos cuadrados para los datos del ojo izquierdo y tiene una pendiente de 15,3 x 10^{-3} unidades de absorbancia por semana. La línea punteada es un ajuste para los datos del ojo derecho y tiene una pendiente de 12,5 x 10^{-3} unidades de absorbancia por semana.

La Figura 4b de Referencia muestra las medidas diarias de la densidad óptica de pigmento macular para el sujeto RAB (Ejemplo 2) desde 7 días antes del comienzo (día "0") del suplemento con luteína hasta el día 83. Ojo izquierdo -
círculos sólidos; ojo derecho - círculos abiertos. La línea sólida es el ajuste lineal de mínimos cuadrados para los datos del ojo izquierdo y tiene una pendiente de 3,1 x 10^{-3} unidades de absorbancia por semana.

La línea punteada es un ajuste para los datos del ojo derecho y tiene una pendiente de 2,3 x 10^{-3} unidades de absorbancia por semana.

La Figura 4c de Referencia muestra medidas diarias de la densidad óptica de pigmento macular para el mismo sujeto que en el caso de la Figura 4b durante un período más prolongado de administración de luteína que incluye el período representado en la Figura 4b.

Las Figuras 5a, 5b y 5c de Referencia muestran las medidas diarias de la densidad óptica de pigmento macular para el mismo sujeto que en el caso de la Figura 4a para un período más prolongado de administración de luteína que incluye el período representado en la Figura 4a, refiriéndose la Figura 5a al ojo derecho del sujeto, refiriéndose la Figura 5b al ojo izquierdo y representando la Figura 5c la media de I-D.

Ejemplo 1 1.1 Análisis de carotenoides en los ojos

Un análisis de HPLC de retinas obtenidas de individuos normales y con AMD se efectuó usando una muestra suficientemente grande para garantizar conclusiones sobre la importancia de la luteína y la zeaxantina maculares en la prevención de la AMD. La cantidad y la distribución de los carotenoides maculares, incluyendo los estereoisómeros, se determinaron y se compararon para 15 ojos normales y 22 con AMD, para determinar si existe una evidencia a favor o en contra de la hipótesis de que la protección con pigmento macular de la exposición a la luz representa un papel significativo para reducir la AMD.

Para cada ojo normal y con AMD, la retina neural se cortó en un disco central y dos coronas concéntricas usando trefinas de 3, 11 y 21 mm. Para extraer los carotenoides, los tejidos se trituraron en etanol/agua (1:1) a los que se añadían 10 ng de éster monometílico de luteína como un patrón interno. La separación y la cuantificación de fracciones de zeaxantina y luteína eran mediante HPLC en fase inversa usando una columna Phenomenex. Los derivados de carbamato de estereoisómeros individuales tanto de zeaxantina como de luteína se separaron en una columna de HPLC en fase normal usando los métodos de Ruttiman y otros (1983) y Schiedt y otros (1995), representándose los resultados en la Figura 2.

1.2 Resultados y Conclusiones

Como se muestra en la Tabla posterior, los ojos con AMD tenían de media aproximadamente 70% del carotenoide total encontrado en los controles, una cifra que era muy constante a través de la retina. Diecisiete (77%) de los veintidós ojos con AMD tenían cantidades totales de luteína y zeaxantina en los 3 mm centrales de la retina que estaban por debajo de la media (5,9 pmol/mm^{2}) para el grupo de control. Para las dos coronas, que tenían diámetros externos de 11 y 21 mm, respectivamente, se encontró que 15 (68%) del grupo con AMD era inferior en carotenoides totales que las regiones correspondientes en el grupo de control.

Se encontró que las diferencias observadas entre los ojos de control y con AMD en las coronas internas eran estadísticamente significativas (en una prueba de unilateral p<0,05); la diferencia en las coronas media y externa se encontraron casi significativas (p<0,1).

Se encontró que las distribuciones relativas de carotenoide a lo largo de la retina para ojos normales y con AMD eran esencialmente las mismas. Ambos grupos se caracterizaban por una disminución en la cantidad de meso-zeaxantina y un incremento relativo en luteína con la distancia creciente desde la fóvea. Las cantidades relativas de luteína y meso-zeaxantina en comparación con la zeaxantina eran consecuentemente inferiores en las retinas con AMD en comparación con retinas normales.

1

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Ejemplo 2 de Referencia

Captación de luteína en adultos humanos

(Fuera del alcance de la invención)

2.1 Captación en Suero

Se efectuó un experimento para determinar si el suplemento dietético con luteína y zeaxantina puede cambiar eficazmente los niveles de pigmento en la mácula.

La densidad óptica del pigmento de la mácula se midió para cada sujeto usando el método de fotometría oscilatoria (Bone y Sparrock, 1971; Bone y otros, 1992). La concentración de pigmento en la mácula es proporcional a su densidad óptica y se supuso que la cantidad real de pigmento era proporcional a la concentración. Así, la densidad óptica se tomó como una medida de la cantidad total de pigmento.

Se midieron la luteína y la zeaxantina en suero mediante HPLC convencional.

Dos varones adultos sanos (de edad/peso 42 años/60 kg y 51 años/61 kg) ingerían el equivalente a 30 mg de luteína al día en la forma de ésteres de luteína (fuentes: flores de caléndula) suspendidos en 2 ml de aceite de canola. Esto se continuó durante un período de 138 días y a continuación la dosis de luteína se interrumpió. El análisis químico ha mostrado que el producto contiene aproximadamente 97% de luteína y 3% de zeaxantina. Los niveles de luteína/zeaxantina en suero en ayunas de ambos individuos se determinaron mediante HPLC convencional en la mañana de la primera dosis como una medida de la línea de base. Se extrajeron muestras de sangre a intervalos de 2-3 horas a lo largo del primer día para ambos sujetos y a continuación diariamente para los tres días siguientes. Después de la primera semana de suplemento, las muestras de sangre se extrajeron semanalmente. La sangre se recogió en un tubo separador de suero Vacutainer estándar que no contenía anticoagulante. Después de dejar aproximadamente 30 min para la coagulación, la muestra se centrifugó durante 10 minutos y el suero se retiró mediante una pipeta. Las muestras de sangre se almacenaron a -20ºC antes del análisis. Los carotenoides se extrajeron del suero mediante una pequeña modificación de métodos ampliamente usados (Guiliano y otros, 1993; Handelmann y otros, 1992). Partes alícuotas de 200 \mul de suero se diluyeron con 2 ml de etanol/agua al 50% para asegurar la precipitación de los componentes proteínicos. 20 \mul de un patrón interno, éter de monohexiluteína, que contenía aproximadamente 90 mg, se añadieron a la solución en este punto para la cuantificación de los carotenoides mediante HPLC. Esta solución se extrajo tres veces con porciones de 2 ml de hexano sometiendo a turbulencia la muestra durante 1 min seguido por centrifugación durante 5 minutos y pipeteando la capa de hexano. Las tres porciones de hexano se secaron bajo una corriente de nitrógeno gaseoso y se almacenaron bajo nitrógeno a -20ºC hasta que se completaba el análisis.

Los extractos de suero se disolvieron en 40 \mul de etanol antes de la inyección. Las muestras se agitaron vigorosamente en un mezclador de turbulencia durante 1 min para asegurar la disolución de la muestra. Se llevaron a cabo dos análisis de réplica usando partes alícuotas de 20 \mul. Los carotenoides séricos se eluyeron a un caudal de 1 ml/min a través de una columna Adsorbosphere ODS 3 \mum HS de 15 cm x 4,6 mm acoplada a una columna Spherisorb ODS 5 \mum de 25 cm x 4,6 mm (Keystone Scientific) con detección de los carotenoides a 451 nm.

Las Figuras 3a y 3b muestran el incremento en la concentración de luteína en suero en los dos sujetos durante el transcurso del tiempo del experimento de suplemento. La concentración de luteína en ambos sujetos se incrementaba en un factor de aproximadamente 10 veces en la primera semana y permanecía alta posteriormente.

2.2 Captación Macular

La densidad óptica del pigmento macular se midió para cada sujeto usando el método de fotometría oscilatoria heterocromática (Bone y Sparrock, 1971; Bone y otros, 1992). La concentración de pigmento en la mácula es proporcional a su densidad óptica y se suponía que la cantidad de pigmento era proporcional a la concentración. Así, la densidad óptica se tomó como una medida de la cantidad total de pigmento.

En el método oscilatorio, se presenta al ojo un pequeño estímulo visual que alterna en longitud de onda entre 460 nm, la longitud de onda de absorbancia máxima del pigmento macular, y 544 nm, donde la absorbancia del pigmento es 0 (Bone y otros, 1992). Por encima de una cierta frecuencia, se produce fusión de color pero el estímulo continúa oscilando. A una frecuencia superior, puede alcanzarse una condición crítica en la que la oscilación puede eliminarse solo si los dos componentes de la longitud de onda se igualan en luminancia. Si el estímulo se observa periféricamente, de modo que la imagen caiga fuera de la mácula, ninguna longitud de onda es atenuada por el pigmento macular. Sin embargo, si el estímulo se observa centralmente, la intensidad de la luz de 460 nm debe incrementarse para compensar la absorción por el pigmento macular para alcanzar un ajuste de luminancia. Así, es posible determinar la densidad óptica de un pigmento macular de un sujeto a la longitud de onda máxima, o incluso a cualquier otra longitud de onda.

La validez de esta técnica depende de que la respuesta espectral relativa de los receptores sea la misma en las posiciones central y periférica usadas. La oscilación, que el sujeto busca eliminar, es de luminancia y, suponiendo condiciones fototópicas, la luminancia se debe lo más probablemente a una respuesta aditiva de los conos sensibles a longitud de onda larga y media (Guth y otros, 1980). Existe evidencia de que estos dos tipos de conos están presentes en relaciones iguales en las dos posiciones usadas (Wooten y Wald, 1973). Generalmente se asume que los conos de longitud de onda corta, cuyas abundancias relativas difieren entre las dos posiciones, no contribuyen a la luminancia (Guth y otros, 1980), aunque otros, usando técnicas oscilatorias, han buscado eliminar su participación (Pease y otros, 1987; Werner y otros, 1987; Hammond y otros, 1995). La justificación definitiva del presente procedimiento ha de encontrarse en la reproducción exacta del espectro de absorbancia de pigmento macular que él genera (Bone y otros, 1992).

El aparato consistía en un sistema de observación maxwelliano de dos canales basado en una sola fuente de luz, una lámpara de arco de xenón de 75 W. Las longitudes de onda de los dos canales se determinaron mediante filtros de interferencia de 460 nm y 540 nm, respectivamente, teniendo semianchuras de 7 y 9 nm. Los canales se combinaron mediante un espejo semicircular giratorio, y una abertura circular en una pantalla blanca proporcionaba un estímulo de un diámetro de 1,5º. Cruces filares facilitaban la fijación central del estímulo. La pantalla tenía 18º de diámetro y se iluminó con luz blanca de la misma fuente. La iluminancia de la pantalla se ajustó para proporcionar la misma iluminancia retinal de 4 log Td como el estímulo. Se consideraba que era suficientemente alta para minimizar problemas asociados con la intrusión de bastones, que de otro modo podría afectar diferencialmente a las medidas en la mácula y la retina periférica (Wyszcki y Stiles, 1982). Un pequeño LED rojo se situó 8º por encima del centro del estímulo para proporcionar una marca de fijación para la visión periférica del estímulo. La intensidad del canal de 460 nm era ajustable por el sujeto a través de un prisma compensado de densidad neutra cuya graduación podía registrarse mediante un botón. La frecuencia de oscilación también estaba bajo el control del sujeto a través de un potenciómetro. Una mordedura por impresión dental ajustable aseguraba la colocación exacta y estable del ojo del sujeto con relación a la pupila de salida.

La frecuencia de oscilación se fijó a un valor predeterminado que, para la visión central por el sujeto, permitiría que la oscilación se eliminara solo a lo largo de un intervalo muy pequeño de graduaciones del prisma. Esta frecuencia estaba en el intervalo de 25 a 35 Hz. Habiendo fijado el prisma triangular para cumplir la condición de ausencia de oscilación, el sujeto se adaptaba a las condiciones de visión fijando un ojo en las cruces filiares del estímulo durante dos minutos. El otro ojo del sujeto se tapó mediante un parche ocular. Al final de este período, el sujeto procedía a hacer una serie de 10 a 15 graduaciones del prisma triangular, intentando obtener el centro del intervalo de falta de oscilación. El prisma triangular se desviaba aleatoriamente después de cada graduación. En ocasiones, el sujeto no podía eliminar la oscilación totalmente sino que en cambio buscaba una condición de oscilación mínima. Esto era seguido por otra serie de 10 a 15 graduaciones mientras se fijaba en el LED, habiéndose reducido la frecuencia hasta 12 a 16 Hz para reducir el intervalo de ausencia de oscilación. El procedimiento entero se repitió a continuación para el otro ojo del sujeto. La densidad óptica del pigmento macular del sujeto se midió diariamente durante un período de una semana antes del comienzo del suplemento con luteína y diariamente después.

Las Figuras 4a y 4b muestran la absorbancia del pigmento macular durante el transcurso del tiempo de los experimentos en los dos sujetos. Un incremento en el pigmento macular del sujeto JTL era observable en primer lugar el día 14º del suplemento. Este sujeto tenía niveles de pigmento macular en ambos ojos que se determinó experimentalmente mediante medidas repetidas que eran iguales (\pm2%) a los valores iniciales de 0,57 y 0,58 que se determinaban promediando 15 medidas obtenidas a lo largo de un período de tiempo de 17 días. La comparación de estos valores con la media de 15 medidas obtenidas a lo largo del período de 18 días al final del experimento daba valores de 0,67 y 0,70 para el ojo derecho e izquierdo, respectivamente, mostrando que el incremento en la densidad óptica del pigmento macular es altamente significativo (p<0,0005) tanto para el ojo derecho como el izquierdo, basándose en una prueba t unilateral. Después de interrumpir la dosis de luteína el día 138, la densidad óptica continuaba ascendiendo hasta aproximadamente el día 180 y a continuación alcanzaba una constante.

Para el sujeto RAB, se encontró que los ojos izquierdo y derecho tenían una densidad de pigmento macular significativamente diferente. El valor medio inicial para el ojo derecho era 0,66 mientras que el del ojo izquierdo era 0,76. Esto correspondía a una diferencia de 15% entre los ojos izquierdo y derecho del sujeto. Se encontró que el incremento en el pigmento macular determinado comparando las medias iniciales para cada ojo y la media final (0,70 derecho, 0,79 izquierdo) era altamente significativo (p<0,001).

Después de interrumpir la dosis el día 138, la densidad óptica continuaba ascendiendo en ambos ojos hasta el día 200 y entonces alcanzaba una constante. Después de varias semanas de administración de luteína, las palmas de las manos de cada uno de lo sujetos se volvían de un color amarillo apreciable. Este estado es similar al inducido por beta-caroteno a la misma dosis.

Se observó que el incremento de la pigmentación macular era un proceso lento, a pesar de los altos niveles de luteína en plasma. Esto puede deberse parcialmente a la necesidad de que la luteína se difunda en la región macular avascular de la retina.

El ensayo establecía una relación entre los niveles en suero incrementados de luteína y los incrementos correspondientes y la concentración de luteína en la mácula del ojo humano. El suplemento con luteína a largo plazo de individuos que tienen bajos niveles de pigmentación macular podría dar como resultado un incremento significativo en el nivel de pigmentación dentro de la mácula.

Los presentes datos sugieren que la pigmentación macular funciona para proteger la retina. Una velocidad incrementada de fotooxidación podría acompañar a los niveles de pigmento macular inferiores en algunos individuos y podría contribuir a una acumulación más rápida de lesiones patológicas asociadas con la AMD.

Ejemplo 3 de Referencia

Se preparó una cápsula usando los siguientes ingredientes mediante mezcladura simple y encapsulaciones habituales:

Ingredientes por cápsula	Indicación de la Etiqueta	mg por Cápsula
Éster de Luteína	30 mg de luteína	200
Lecitina		50
Aceite de Soja		200

Se recomienda una cápsula al día después de la comida.

En el ejemplo anterior, el éster de luteína puede reemplazarse por una mezcla de isómeros de zeaxantina (zeaxantina normal, meso-zeaxantina y zeaxantina 3S,3’S). El uso de meso-zeaxantina colocaría la cápsula resultante dentro del alcance de la presente invención.

Ejemplo 4 de Referencia

Se preparó una cápsula usando los siguientes ingredientes mediante mezcladura simple y encapsulación habitual:

Ingredientes por cápsula	Indicación de la Etiqueta	mg por Cápsula
Éster de Luteína	10 mg de luteína	75
Éster de Zeaxantina	10 mg de zeaxantina	75
Lecitina		25
Aceite de Soja		100

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Lo anterior es una mezcla de 50% de cada carotenoide. En la cápsula anterior, la zeaxantina podría representar todos sus isómeros ((zeaxantina, meso-zeaxantina y 3S,3’S-zeaxantina). El uso de meso-zeaxantina situaría a la cápsula resultante dentro del alcance de la presente invención.

Ejemplo 5 de Referencia

(Fuera del Alcance de la Invención)

Ingredientes por cápsula	Indicación de la Etiqueta	mg por Cápsula
Vitamina C (Ácido ascórbico)	150 mg	160
\alpha-tocoferol	100 mg	110
Éster de Luteína	15 mg de luteína	90
Lecitina		25
Aceite de Soja		75

\vskip1.000000\baselineskip

Una dosis diaria adecuada para el tratamiento de la AMD serían dos cápsulas diarias.

Ejemplo 6 de Referencia

(Fuera del Alcance de la Invención)

Se repitió el procedimiento del Ejemplo 7, excepto que se incluyeron 30 mg de coenzima Q10 en la mezcla.

Ejemplo 7 de Referencia

(Fuera del Alcance de la Invención)

Una cápsula ovalada de tamaño 12 de peso nominal 800 mg se preparó a partir de los siguientes ingredientes mediante mezcladura simple y encapsulación habitual:

100

Una cápsula al día es muy adecuada para la administración a largo plazo y tiene además propiedades antioxidantes valiosas.

Ejemplo de Referencia 8

(Fuera del Alcance de la Invención)

Se preparó una composición dietética de fórmula en polvo seco mezclando 150 mg de éster de luteína al día con un producto Cambridge Diet (The Cambridge Diet es una Marca Comercial Registrada) obtenido de Cambridge Health Plan Ltd, Norwich, Inglaterra, bajo la identificación del producto.

Referencias

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Claims

1. Un medicamento que comprende meso-zeaxantina en combinación con un portador o diluyente farmacéutico.

2. Una composición de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende además otro constituyente biológicamente activo.

3. Una composición de acuerdo con la reivindicación 2, en la que el otro constituyente biológicamente activo es un antioxidante.

4. Una composición de acuerdo con la reivindicación 3, en la que dicho antioxidante es otro carotenoide o es vitamina A, vitamina C, vitamina E, selenio, cobre, zinc, manganeso o ubiquinona (coenzima Q10).

5. Una composición de acuerdo con la reivindicación 4, en la que dicho otro carotenoide es luteína; licopeno; o alfa-, beta-, gamma- o delta-caroteno.

6. Una composición de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, en la forma de un suplemento alimenticio en la que la meso-zeaxantina está contenida como un micronutriente.

7. Una composición de acuerdo con cualquier reivindicación precedente y en forma de dosificación unitaria que contiene de 10 mg a 100 mg de carotenoide o carotenoides por dosis.

8. Una composición de acuerdo con la reivindicación 7, que contiene de 20 mg a 50 mg de carotenoide o carotenoides por dosis.

9. Una composición de acuerdo con la reivindicación 7, que contiene 30 mg de carotenoide o carotenoides por dosis.

10. Una composición de acuerdo con cualquier reivindicación precedente y en forma de tableta, cápsula, polvo o solución o suspensión.

11. Una composición de acuerdo con cualquier reivindicación precedente y comprendida por una mezcla de luteína y meso-zeaxantina que comprende de 10% a 90% en peso de luteína y de 90% a 10% en peso de meso-zeaxantina.

12. Una composición de acuerdo con cualquier reivindicación precedente y en la forma de una mezcla que comprende luteína y meso-zeaxantina junto con lecitina y aceite de soja.

13. Uso de meso-zeaxantina para la fabricación de un medicamento para el uso en el tratamiento de la degradación macular de pigmento amarillo en la mácula de un ojo de un paciente humano.

14. Un envase para el transcurso de un tratamiento farmacéutico, que comprende medios que definen receptáculos individuales accesiblemente cerrados que retienen unidades de dosificación respectivas de una composición farmacéutica que comprende meso-zeaxantina junto con un portador, estando dispuestos dichos receptáculos en el envase en un primer grupo de unidades de alta dosificación y un segundo grupo de unidades de dosificación inferior, sumando el primer grupo de receptáculos al menos 14 y teniendo en cada uno una o más unidades de dosificación que proporcionan una dosificación total de al menos 10 mg/receptáculo de carotenoide o carotenoides.

15. Un envase de acuerdo con la reivindicación 14, en el que el segundo grupo de receptáculos suma al menos 14.

16. Un envase de acuerdo con la reivindicación 14 o la reivindicación 15, en el que el segundo grupo de receptáculos tiene en cada uno una o más unidades de dosificación que proporcionan una dosificación total de no más de 7,5 mg/receptáculo de carotenoides.