ES2237144T3 - Nuevos derivados de cefalotaxano y procedimiento para su preparacion. - Google Patents

Nuevos derivados de cefalotaxano y procedimiento para su preparacion.

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Abstract

Procedimiento para la preparación de cefalotaxano que porta cadena lateral que presenta la fórmula siguiente, y/o una sal del mismo: Ù-CO-O-CTX en la que Ù (¿omega¿) es un radical representativo del fragmento de cadena terminal y ¿CO- es el carbonilo del grupo éster unido al cefalotaxano; el radical Ù-CO- se corresponde con: - la fórmula de heterocicloalcano sustituido siguiente: en la que n está comprendida entre 0 y 8; Z es heteroátomo de oxígeno o de azufre, ó NH; R5 es hidrógeno; alquilo, CH2COOCH3, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heterocicloalquilo, éter de oxígeno que porta uno de los radicales anteriormente indicados; R6 y R8 son, independientemente, hidrógeno; alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heterocicloalquilo, R6 y R8 pueden estar incluidos en un ciclo; el éter de oxígeno porta uno de los radicales anteriormente indicados.

Description

Nuevos derivados de cefalotaxano y procedimiento para su preparación.
La presente invención se refiere a un procedimiento para la preparación de derivados de cefalotaxano que portan una cadena lateral.
El término "cefalotaxanos" se refiere a compuestos o sales de los mismos que presentan un esqueleto básico de fórmula:
1
en la que p es igual a 1 ó 2 (siendo posible que dos unidades sean iguales o diferentes y estén unidas mediante un enlace sencillo o un átomo de oxígeno), que puede contener diversos sustituyentes oxigenados (éteres alifáticos o aromáticos, alcoholes libres o esterificados, enoles y/o fenoles libres o sustituidos, éteres con puente, y más generalmente cualquier sustituyente que se encuentra habitualmente en el estado natural en compuestos de este tipo).
Las harringtoninas son alcaloides de elevado interés en la quimioterapia anticáncer, en particular sobre determinados hematosarcomas que son multirresistentes a las terapias existentes. La selectividad de las harringtoninas, que se basa en un nuevo mecanismo de acción relacionado con la síntesis de proteínas, es tal que esta serie presenta un gran futuro en la terapia anticáncer.
Varias compilaciones de la literatura proporcionan una revisión aparentemente exhaustiva de todo el conocimiento relacionado con los cefalotaxanos, en orden cronológico: [C.R. Smith, Jr, R.G. Powell y K.L. Mikolajczack, Cancer Treat. Rep., vol. nº 60, 1157 (1976); C.R. Smith, Jr, L. Kenneth, K.L. Mikolajczack y R.G. Powell en "Anticancer Agent Based on Natural Product Model", 391 (1980); Liang Huang y Zhi Xue en "The Alkaloids", vol. XXIII (editor A. Brossi), 157 (1984); M. Suffness y G.A. Cordell en "The Alkaloids, Chemistry and Pharmacology" (editor A. Brossi), vol. 25, 57-69, 295-298 (1987); P.J. O'Dwyer, S.A. King, D.F. Hoth, M. Suffness y B. Leyland-Jones, Journal of Clinical Oncology 1563 (1986); T. Hudlicky, L.D. Kwart y J.W. Reed en "Alkaloid: Chemical and Biological Perspectives" (editor S.W. Pelletier), vol. 5, 639 (1987); M.A. Miah, T. Hudlicky y J. Reed en "The Alkaloids", vol. 51; 199 (1998)].
Las actividades antiparasíticas, en particular sobre el hematozoo del paludismo, también han sido reconocidas [J.M. Whaun y N.D. Brown, Ann. Trop. Med. Par., vol. 84:229 (1990)].
La homoharringtonina (HHT), el elemento más activo de la serie, es activo a dosis diarias de 2,5 mg/m^{2} de área corporal o superiores en 24 horas, es decir, como guía, a dosis veinte veces inferiores a la del Taxol. HHT ya ha pasado por catorce pruebas clínicas de fase I y II y es el único producto conocido capaz del 70% de reinducción de remisiones hematológicas completas en pacientes que sufren de leucemias mieloides crónicas que han adquirido resistencia al alfa-interferón [S. O'Brien, H. Kantarjian, M. Keating, M. Beran, C. Koler, L.E. Robertson, J. Hester, M. Rios, M. Andreeff y M. Talpaz, Blood, 332 (1995); Leukemia Insights, vol. 3, nº 1 (1998)].
Las harringtoninas se extrajeron hace más de 35 años de una cefalotaxacea exclusivamente asiática conocida como Cephalotaxus harringtonia, tras el programa de investigación sobre nuevos agentes anticáncer en el reino vegetal desarrollado por el National Cancer Institute. De hecho, los alcaloides de Cephalotaxus consisten esencialmente (por lo menos en el 50%) de cefalotaxina, un precursor biosintético de las harringtoninas, representando estas últimas individualmente un porcentaje muy pequeño del contenido en alcaloides totales.
Aparte de su baja concentración en su estado natural en el material vegetal de partida, las harringtoninas se encuentran mezcladas con muchas especies congéneres que presentan estructuras químicas muy similares. De esta manera, en un cromatograma de cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) y alta resolución de un extracto semipurificado de alcaloide, se identifican no menos de varias decenas de ésteres de cefalotaxina.
Si consideramos:
-
por una parte, que las harringtoninas en general son relativamente no cristalogénicas, tal como sugiere la flexibilidad de las cadenas laterales, que generalmente están ramificadas y son alifáticas, y
-
por otra parte, que estos ésteres, en particular la harringtonina y homoharringtonina, están contaminados con congéneres que son biológicamente activos y muy difíciles de separar, incluso mediante HPLC analítica de alta resolución,
el estado actual de la técnica no permite producir estos compuestos de manera viable a escala industrial con respecto a la pureza requerida para los principios farmacéuticamente activos.
Aunque son biosintéticamente similares a los alcaloides del género Erythrina, los cefalotaxanos son alcaloides que presentan una estructura única en la naturaleza, que únicamente se encuentra en el género Cephalotaxus, que es el único género de la familia Cephalotaxacea. Por otra parte, las cadenas laterales de las diversas especies congéneres de harringtonina se derivan todas del metil hemiéster del carboxilo primario del ácido (2R) citramálico 3a (ver el Esquema 1, adjunto) mediante sustitución del metilo terciario utilizando radicales alquilo o aralquilo que pueden estar no sustituidos o sustituidos con hidroxilos terciarios, siendo posible que los últimos forman un éter cíclico con un alcohol terciario (derivados anhidro).
El Esquema 1 adjunto muestra los ejemplos principales de congéneres de harringtonina, todos ellos con actividad citostática significativa en diferentes grados. Ninguno de los análogos artificiales de ésteres de cefalotaxina sintetizados hasta el momento que se citan en la literatura presenta por lo menos la subestructura 3b (ver Esquema 1) y carecen de actividad citostática significativa.
Resulta conveniente indicar que, aunque botánicamente muy similar a las cefalotaxaceas, las taxáceas contienen alcaloides triterpeno (taxinas) acompañadas por triterpenos no alcaloides, taxanos, que también presenta una estructura única en la naturaleza. Aunque son completamente diferentes de los taxanos en términos de estructura química y mecanismo de acción anticáncer, las harringtoninas presentan analogías con los taxanos en más de un aspec-
to:
-
presentan propiedades citostáticas,
-
consisten en un esqueleto policíclico, un precursor biosintético inactivo de la estructura completa, sobre la que se injerta una cadena lateral que contiene una combinación similar de sustituyentes hidrofílicos e hidrofóbicos,
-
la parte policíclica de los taxanos (bacatinas en el sentido amplio) y de las harringtoninas (cefalotaxinas) es relativamente abundante en las partes renovables de la planta, mientras que las moléculas activas (harringtoninas y taxanos) son diez a cien veces menos abundante en dichas partes,
-
el tejo ciruelo (Cephalotaxus) es un árbol raro, incluso más raro que el tejo (Taxus) y es mucho menos ubicuo que este último.
Resulta de los hechos anteriormente indicados, a través de la semisíntesis de los taxanos mediante adición de una cadena sintética de una 10-desacetilbacatina III originada en un extracto, la semisíntesis asimétrica de las harringtoninas mediante la esterificación de una cefalotaxina de origen natural es de considerable valor médico y económico. Además, la población actual de Cephalotaxus es relativamente reducida, incluso en su hábitat original. De esta manera, durante su importación en Europa con fines ornamentales durante el siglo pasado, Cephalotaxus harringtonia ya no estaba presente en forma espontánea en el este de China y en el norte de Japón. La utilización de un precursor presente en una parte renovable del árbol (la hoja) con el fin de preparar homo-harringtonina de manera semisintética es, de esta manera, de considerable interés medioambiental, más si se tiene en cuenta que hasta el momento no se ha conseguido la síntesis total de cefalotaxina ópticamente activa, a pesar de que se han llevado a cabo estudios sintéticos extensivos sobre este aspecto (sin embargo, se han llevado a cabo cierto número de laboriosas síntesis de cefalotaxina racémica que comprenden entre 10 y 15 etapas: ver la revisión bibliográfica anterior).
Si se considera que se necesitan varios cientos de toneladas por año de este árbol raro y de crecimiento lento (de crecimiento incluso más lento que Taxus sp.) para satisfacer las necesidades actuales del mercado de homoharringtonina (varios kilogramos al año), mientras que la semisíntesis sólo consumiría unas cuantas toneladas de partes renovables del árbol (hojas). Además, la homoharringtonina (HHT) de origen natural disponible actualmente en el mercado de los principios activos está contaminada con sus congéneres, que son muy difíciles de separar por su similitud estructural, incluso mediante cromatografía líquida de alto rendimiento "preparativa".
En primer lugar, debe indicarse que, debido a que la utilización de la cefalotaxina misma como fuente para la semisíntesis no ha sido justificada en términos económicos, hasta el momento no se ha descrito ningún procedimiento para la extracción selectiva de esta sustancia. Además, entre los compuestos activos, sólo la harringtonina y la isoharringtonina han sido el sujeto de solicitudes de patente estadounidenses para su preparación mediante extracción [R.G. Powell et al., patentes US nº 3.793.454 y US nº 3.870.727]. La harringtonina ha sido sujeto de un patente japonesa (patente JP nº 58-032.880] y la desoxiharringtonina ha sido el sujeto de una patente estadounidense (patente US nº 3.959.312]. Respecto a la preparación de la homoharringtonina misma, ha sido el sujeto de únicamente unos cuantos estudios de semisíntesis [T. Hudlicky, L.D. Kwart y J.W. Reed en "Alkaloid: Chemical and Biological Perspectives" (editor S.W. Pelletier), vol. 5, 639 (1987); M.A. Miah, T. Hudlicky y J. Reed en "The Alkaloids", vol. 51, 199 (1998)], pero no existe ninguna solicitud de patente sobre un procedimiento de semisíntesis o incluso sobre un procedimiento de extracción.
Otro aspecto que proporciona a la presente invención una ventaja todavía mayor es que la cefalotaxina puede servir como un trampolín para la síntesis de cefalotaxoides y harringtoides que resulten útiles para las quimioterapias antitumorales (tumores cancerosos y no cancerosos), antiparasítica, antifúngica, antiviral y antibacteriana.
Las harringtoninas consisten en un alcohol policíclico alcaloide complejo (cefalotaxina) esterificado con una cadena lateral, aislado no presentan más actividad biológica que la cefalotaxina, pero es esencial para la actividad biológica del todo. La saponificación de la cadena lateral bajo condiciones restrictivas conduce a la cefalotaxina base libre y a los ácidos harringtónicos. La unión de las cadenas laterales tiene lugar al final de la biosíntesis. Se ha demostrado que el catabolismo que conduce a esta reacción podría desencadenarse in vivo bajo la influencia de estrés ambiental o fisiológico ejercido sobre la planta [N.E. Delfel, Phytochemistry 403 (1980)].
La cefalotaxina, cuya parte policíclica consiste en 5 anillos fusionados, presenta una nueva configuración que es única en la naturaleza, es decir, una benzodioxoacepina sobre la que se fusiona un sistema espiro-pirrolidino-pentenodiol. El cefalotaxano contiene cuatros centros asimétricos: tres "carbonos asimétricos" y un nitrógeno amínico terciario heterocíclico. La única función reactiva es un alcohol secundario situado en la posición 3, siendo el metil enol éster situado en posición 2 potencialmente vulnerable al ataque de protones. El todo forma una estructura pseudohelicoidal que enjaula el hidroxilo en el tubo formado por la tetrahidracepina. La base cefalotaxina forma fácilmente sales cristalogénicas altamente estables (por ejemplo hidrocloruros y perhidrocloruros).
Este alcaloide es relativamente insensible a los medios básicos. Por otra parte, varios autores han descrito cierto nivel de sensibilidad a los ácidos y a la cuaternización del nitrógeno con yoduro de metilo, conduciendo a la racemización por inversión simultánea de los 3 centros asimétricos y del nitrógeno [D.J. Abraham, R.D. Rosensten y E.L. McGandy, Tetrahedron Letters, 4085 (1969)]. Sin embargo, un periodo de varios días en solución a pH 1-4 a 20ºC deja esta estructura intacta (observación personal).
Este compuesto y sus congéneres que no están O-acilados en posición 3 son biológicamente inactivos.
Todas las cadenas laterales de las harringtoninas que presentan actividad biológica significativa contiene en común la unidad 2-alquil-2-carbometoximetil-2-hidroxiacetilo.
La cadena alquilo, de longitud variables, presenta en el extremo o bien una ramificación que constituye un isopropilo que porta (harringtonina HT y homoharringtonina HHT) o no porta (desoxihomoharringtonina DHT) un alcohol terciario, o un radical fenilo (por ejemplo la serie neoharringtonina aislada más recientemente). En el caso de las anhidroharringtoninas, la cadena puede cerrarse mediante deshidratación entre los dos alcoholes terciarios, por ejemplo formando un anillo tetrahidropirano sustituido. El único hidroxilo de la cefalotaxina porta el carboxilo terciario de este complejo diéster. El único centro quiral en la cadena lateral está situado ( a la unión éster. Contiene, además de la primera cadena secundaria, un hidroxilo que, debido a su naturaleza terciaria, no puede epimerizarse.
El Esquema 2 adjunto muestra resumidamente los procedimientos conocidos para preparar las harringtoninas.
Hasta el momento se han descrito varias semisíntesis de ésteres de cefalotaxina natural y varias series de análogos, que presentan cadenas simplificadas pero confieren a estos análogos una actividad citotóxica reducida, en particular las de la desoxiharringtonina y de la isoharringtonina. La mayoría de ellas se refiere a ésteres más simples y menos funcionalizados que los que constituyen HT y HHT, los ésteres más útiles en quimioterapia [por ejemplo, desoxiharringtonina, isoharringtonina, T. Hudlicky, L.D. Kwart y J.W. Reed en "Alkaloid: Chemical and Biological Perspectives" (editor S.W. Pelletier), vol. 5, 639 (1987)].
Toda la literatura desde 1972 hasta el presente [Mikolajczack et al., Tetrahedron 1995 (1972); T. Hudlicky, L.D. Kwart y J.W. Reed en "Alkaloid: Chemical and Biological Perspectives" (editor S.W. Pelletier), vol. 5, 639 (1987); M.A. Miah, T. Hudlicky y J. Reed en "The Alkaloids", vol. 51, página 236 (1998)] indica que hasta el momento ha sido imposible esterificar el hidroxilo secundario altamente impedido estéricamente de la cefalotaxina 2a con el carboxilo terciario de la cadena alcanoilo del ácido harringtónico 3e totalmente preformado con el fin de producir una harringtonina 4b, es decir, la conversión 2a + 3e (4b, tal como se describe en el ejemplo mostrado en el esquema siguiente).
2
La mayoría de las síntesis descritas hasta el momento implican, de esta manera, la unión de la cadena lateral secundaria -CH_{2}CO_{2}Me, es decir,
1º)
mediante la reacción de Reformatsky entre el bromoacetato de metilo y el carbonilo (real o potencial) en la cadena lateral preunida a la cefalotaxina, en presencia de cinc, o
2º)
mediante la formación previa de un reactivo organo-litio.
Todas las síntesis descritas consisten, de esta manera, en la esterificación de la cefalotaxina utilizando el cloruro de (-ceto-alcanoilo 7 que carece del hidroxilo terminal y que no contiene ni la cadena secundaria situada ( respecto al carboxilo terciario, ni el hidroxilo terciario ( respecto al carboxilo, proporcionando 8, el cual se convierte seguidamente en una harringtonina 4a, de acuerdo con la reacción indicada a continuación.
3
En la fórmula 8, CTX representa el radical cefalotaxilo de fórmula:
4
Debe indicarse que esta (-hidroxialquilación, que simultáneamente crea el centro quiral en la cadena lateral, nunca se ha conseguido asimétricamente.
Unas cuantas rutas sintéticas implican una esterificación de la cefalotaxina con un cloruro de hemisuccinilo sustituido, opcionalmente seguida de la introducción posterior del hidroxilo o hidroxilos terciarios.
De esta manera, hasta el momento no se ha conseguido la O-acilación de la cefalotaxina, utilizando precursores de cadenas quirales totalmente preformadas y funcionalizadas (respecto al carboxilo terciario (T. Hudlicky, L.D. Kwart y J.W. Reed en "Alkaloid: Chemical and Biological Perspectives" (editor S.W. Pelletier), vol. 5, páginas 661 a 675 (1987); M.A. Miah, T. Hudlicky y J. Reed en "The Alkaloids", vol. nº 51, páginas 224 a 236 (1998)].
En consecuencia, los procedimientos para preparar harringtoninas mediante semisíntesis que se han descrito hasta la fecha en la técnica existente adolecen de las desventajas siguientes:
- falta de estereoselectividad,
- convergencia pobre,
- rendimientos mediocres,
- funcionalización y construcción de la cadena sobre un sustrato raro y caro, y
- hasta la fecha no se ha obtenido la homoharringtonina quiral.
Debido a que la cefalotaxina está presente en la naturaleza en forma parcialmente racemizada [observación personal; Huang et al., Scientia Sinica, vol. nº XXIII, 835 (1980)], los procedimientos de la técnica anterior que hacen uso de una cefalotaxina natural como material de partida sólo pueden resultar en teoría en harringtoninas parcialmente racemizadas. El artículo de Hiranuma et al. ("Studies and Cephalotaxus Alcaloids, Stereospecific Total Synthesis of Homoharringtonine", Journal of Organic Chemistry, vol. nº 48, nº 26:5321-5326, 1983) describe un procedimiento para preparar homoharringtonina mediante la esterificación secuencial de la cefalotoxina.
El presente documento indica que se ha seleccionado la esterificación secuencial debido a la falta de éxito de los otros intentos. En particular, los intentos de sintetizar la harringtonina mediante una reacción de una etapa finalmente no han tenido éxito.
Así, la presente invención presenta la ventaja de que se obtienen harringtoninas enatioméricamente puras incluso a partir de cefalotaxina racémica, debido a que:
1º)
el centro asimétrico en la cadena lateral se crea antes de la etapa de esterificación, es decir, el precursor de la cadena lateral puede obtenerse en forma enantioméricamente pura antes de unirlo,
2º)
los diastereoisómeros obtenidos en el caso de una cefalotaxina racémica pueden separarse mediante cromatografía.
La presente invención consiste en:
-
esterificar el alcohol libre impedido de una cefalotaxina o, alternativamente, el alcóxido de metal correspondiente, utilizando una cadena en la forma de un ácido carboxílico oxacicloalcano terciario adecuadamente sustituido que está totalmente preformado en términos del esqueleto y de la funcionalización, con el fin de preparar ácidos anhidrohomoharringtónicos mediante semisíntesis.
-
abrir las cadenas laterales cíclicas formadas de esta manera con el fin de obtener los dioles correspondientes, es decir, las harringtoninas (definidas anteriormente).
-
describir una nueva preparación para todos los diastereoisómeros de las cadenas laterales dihidroxiladas de las harringtoninas en una forma cíclica deshidratada (ácidos anhidroharringtónicos) o en los que los dos grupos hidroxilo están protegidos conjuntamente por grupos protectores difuncionales formando un anillo.
-
resolver todos los ácidos harringtónicos y anhidroharringtónicos, con el fin de acoplarlos separadamente con las cefalotaxinas.
Así, una parte de la presente invención consiste en sintetizar, en particular, anhidroharringtonina, harringtonina, anhidro-homoharringtonina y homoharringtonina.
La presente invención se refiere asimismo a la esterificación de cefalotaxinas o alcóxidos metálicos de las mismas con N-alquil- y N-carbamoil-2-alquilisoserina.
Tras las observaciones y estudios comparativos llevados a cabo en la serie taxano, se ha encontrado que, a pesar del volumen estérico, el cual es todavía mayor que el del hidroxilo de las cefalotaxinas, el hidroxilo situado en la posición 13 en el esqueleto taxano ha hecho posible recibir la acilación con una cadena relativamente voluminosa tal como, por ejemplo, una N-benzoilfenilisoserina protegida en posición 2' (aunque han fracasado todos los intentos de acilar la bacatina protegida con una cadena que porta un grupo (hidroxilo protegido con un grupo benzoilo).
Un estudio experimental de acilación con una cadena muy voluminosa, tal como el ácido piválico, ha demostrado la imposibilidad de acilar el hidroxilo situado en la posición 13 de una bacatina protegida utilizando el procedimiento de la dialquil carbodiimida, mientras que la misma reacción realizada sobre la cefalotaxina ha demostrado un acoplamiento sencillo de la cadena pivaloilo.
También se ha demostrado, nuevamente en la serie taxano, que la mejora de la compactación dinámica de la cadena alcanoilo o aralcanoilo mediante una protección cíclica bifuncional facilita mucho el acoplamiento. De esta manera, por ejemplo las solicitudes de patente francesa [J.P. Robin et al., FR nº 95/12739 y nº 95/15557] indican que las N-benzoil-fenil-isoserinas lineales adecuadamente protegidas reaccionan en varias horas a 80ºC con formación de productos de epimerización; los precursores cíclicos oxazolina o oxazolidina reaccionaron en menos de una hora a 25ºC.
La utilización de las mismas condiciones indicadas anteriormente con una cadena que se ha sometido a una ciclización deshidratante anterior, ha permitido la acilación de la cefalotaxina o de los alcóxidos de la misma en unas cuantas horas a temperatura ambiente.
La facilidad con que se dio dicha acilación resultó si cabe más sorprendente porque muchos autores han diseñado síntesis que presentan las desventajas indicadas anteriormente, a partir de la observación de la imposibilidad de acilar que se explica por el impedimento estérico en los dos sitios: el hidroxilo de la cefalotaxina y el carboxilo terciario de la cadena lateral precursora [Mikolajczack et al., Tetrahedron 1995 (1972)].
De acuerdo con una realización o procedimiento preferido según la invención, la función hidroxilo de un fefalotaxano se esterifica con un derivado 2-carboxil-2-alquil-1-oxacicloalcano.
El hidroxilo de un cefalotaxano cuyo esqueleto corresponde a la fórmula general 1, o más particularmente, un alcohol secundario situado en posición 3 de una cefalotaxina o alcóxido metálico de la misma, correspondiente, respectivamente, a las fórmulas generales CTX-O-H y CTX-O-M, en las que M es un metal y CTX-, el radical cefalotaxilo indicado anteriormente, se esterifican con la función ácido carboxílico terciario de un cicloéter sustituido que presenta la fórmula general del tipo 3k, o alternativamente, con preferencia una de sus formas activadas, aislada o formadas in situ, que presenta la fórmula general del tipo 3l, con el fin de proporcionar 4c, según la reacción siguiente:
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R^{5} es hidrógeno, alquilo, CH_{2}COOCH_{3}, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heterocicloalquilo, éter de oxígeno que porta uno de los radicales anteriormente indicados;
R^{6} y R^{8} son, independientemente el uno del otro,
-
hidrógeno,
-
alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heterocicloalquilo, siendo posible que R^{5} y R^{8} estén unidos entre sí formando un anillo
-
éter de oxígeno que porta uno de los radicales anteriormente indicados.
n se encuentra comprendida entre 0 y 8.
A es un grupo saliente capaz de dejar atrás una carbocación, 3l puede ser, de esta manera, en particular: haluro de ácido, anhídrido, anhídrido mixto o anhídrido cíclico (cuando R^{5}=-CH_{2}CO-).
El ácido libre del tipo 3k o cualquier forma actividad de los ácidos del tipo 3l pueden utilizarse para esterificar los cefalotaxanos correspondientes a la fórmula general, 1 o por ejemplo, las cefalotaxinas del tipo CTX-OH. Alternativamente, el anhídrido de 3l puede prepararse aisladamente y aislarse y después ponerse en contacto con el alcohol. De manera similar, este es el caso para los anhídridos cíclicos del tipo 3p.
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en la que n, R^{6} y R^{8} presentan los mismos significados que los anteriormente indicados,
y que pueden prepararse fácilmente a partir de los diácidos que presenta el fin, nuevamente, de proporcionar 3k mediante esterificación del metanol, o alternativamente, para unirse de la manera indicada anteriormente a la función alcohol de una cefalotaxina del tipo 2 con, sin embargo, un rendimiento más pobre que el anterior, metilando posteriormente la función ácida primaria de manera convencional utilizando metanol en presencia de un ácido protónico o de un ácido de Lewis, o alternativamente, utilizando complejo de eterato de trifluoruro de boro/metanol o diazometano.
Aunque menos efectivo y más laborioso, el procedimiento que hace uso del cloruro de ácido 3k proporcionó el éster deseado 4c.
Todos los reactivos del tipo 3k, 3l y 2, así como los ésteres resultantes del tipo 4c pueden utilizarse solos, en forma enantioméricamente pura, o en forma de una mezcla racémica o en forma de mezclas diastereoisoméricas. Los intermediarios pueden, en determinados casos, no aislarse, o formarse in situ de manera efímera.
La reacción puede tener lugar a una temperatura comprendida entre 0ºC y 140ºC, con o sin un disolvente orgánico, siendo posible para estos disolventes estar solos o en una mezcla.
La esterificación del hidroxilo de cefalotaxano con un derivado 2-carboxil-2-alquil-1-oxacicloalcano puede llevarse a cabo mediante transferencia de acilo al alcohol o mediante el procedimiento carbodiimida.
La reacción de esterificación mediante transferencia de acilo al alcohol se lleva a cabo ventajosamente de acuerdo a seis modelos específicos:
(a) esterificación del ácido libre con el alcohol en catálisis ácida,
(b) esterificación mediante transferencia de acilo mediante anhídridos o haluros,
(c) esterificación mediante transferencia de acilo utilizando ésteres activados,
(d) esterificación con triflato de escandio,
(e) esterificación con eterato de trifluoro de boro,
(f) esterificación mediante el procedimiento tioéster.
La esterificación (a) tiene lugar poniendo en contacto el ácido del tipo 3k y el alcohol del tipo 2 en un codisolvente y en presencia de un catalizador ácido. El desplazamiento del equilibrio puede promoverse mediante la adición de un agente deshidratante o mediante inducción azeotrópica o mediante partición entre dos disolventes inmiscibles, uno de los cuales es miscible con el éster formado y el otro con agua. Estos diversos procedimientos pueden combinarse entre sí.
El catalizador ácido puede ser un ácido protónico, tal como, por ejemplo, ácido sulfúrico, ácido hidroclórico, ácido bórico, preferentemente ácido para-toluenosulfónico, o un ácido de Lewis que puede estar o no soportado sobre un polímero, tal como, por ejemplo, cloruro de aluminio, clorotrimetilsilano o, preferentemente, eterato de trifluoruro de boro. Ventajosamente, también pueden utilizarse, por ejemplo, una resina de intercambio iónico o bisulfato sobre grafito.
El agente deshidratante puede ser, por ejemplo, un agente deshidratante que consista en una sal inorgánica de bajo contenido en agua e inerte con respecto a la reacción, tal como sulfato de magnesio, sulfato de sodio, cloruro de calcio o, preferentemente, un tamiz molecular.
La esterificación (a) hace uso de las mismas condiciones de reacción que las indicadas anteriormente. Sin embargo, con el fin de resultar en la formación del ión acilio característico del presente procedimiento, se sustituyen los catalizadores ácidos ordinarios con, por ejemplo, ácido sulfúrico anhidro o superácidos, tales como, por ejemplo, ácido hidrofluórico y sus derivados o pentafluoruro de antimonio.
La esterificación (b) consiste en utilizar las mismas condiciones físicas de operación que las utilizadas anteriormente, pero utilizando 3l, en el que A representa un halógeno (haluro de ácido), otra molécula de alcanoilo que es idéntica (anhídrido) o diferente (anhídrido mixto), tal como, por ejemplo, trifluoroacetilo, 2,4,6-triclorobenzoilo, formilo, metoxiformilo, sulfonatos, fosfatos y clorofosfato.
En una variante del procedimiento anterior, y en el caso específico en el que R^{5}=CH_{2}CO_{2}H, puede utilizarse un anhídrido cíclico del tipo 3p
7
en el que n, R^{6} y R^{8} tienen los mismos significados que los indicados anteriormente, que puede prepararse muy sencillamente mediante el tratamiento del diácido que presenta anhídrido acético, por ejemplo bajo las condiciones generales de operación para la preparación de los anhídridos mixtos indicados posteriormente.
La catálisis puede ser ácida, tal como se indica en el procedimiento anterior, o preferentemente, alcalina, por ejemplo una base terciaria, tal como piridina y/o dimetilaminopiridina (DMAP), pirrolidinopiridina (PPY), trietilamina o una base más fuerte, tal como hidruro, por ejemplo hidruro de calcio. El disolvente preferentemente puede ser un disolvente aprótico, por ejemplo hexano, tolueno, diclorometano, tetrahidrofurano y/o piridina.
La esterificación (c) es un procedimiento similar a la esterificación (b). Estos procedimientos de preparación de éster también pueden utilizarse ventajosamente e implican, por ejemplo, intermediarios 1-aciloxi-1,2,3-triazol, formamidinio, silil éster o 2-aciloxipiridinio.
También puede utilizarse el procedimiento del carbonildiimidazol, en el que está implicado un intermediario N-acilimidazol.
El procedimiento de la carbodiimida utiliza un agente acoplante deshidratante, tal como una carbodiimida, por ejemplo diciclohexilcarbodiimida (DCC), 1,3-diisopropilcarbodiimida (DIC) ó 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etil-carbodiimida.
La reacción puede estar catalizada por una base terciaria, tal como, por ejemplo, piridina y/o dimetilaminopiridina (DMAP), pirrolidinopiridina (PPY), trietilamina, 4-morfolinopiridina o cualquier otra base sustituida. También pueden utilizarse, por ejemplo, N-hydroxibenzotriazol (HOBt) o N-hidroxisuccinimida (HO-Su).
La proporción molar de 3l respecto a 2 puede estar comprendida entre 1/1 y 4/1.
La reacción preferentemente puede llevarse a cabo bajo gas inerte a una presión cercana a la atmosférica, preferentemente a una temperatura comprendida entre 0ºC y aproximadamente 110ºC.
Los disolventes utilizados preferentemente son los disolventes orgánicos, tales como, por ejemplo, tolueno y/o diclorometano y/o cloroformo y/o tetrahidrofurano y/o piridina y/o dimetilformamida.
La aplicación de los procedimientos descritos anteriormente, para los oxacicloalcanos carboxílicos sustituidos, al acoplamiento de sus precursores sintéticos, los ácidos (lineales) 1-hidroxi-1-metoxicarbonilmetilalquenocarboxílicos hicieron posible, contra todo pronóstico, la síntesis de ésteres del tipo 4c en una sola etapa a partir de (-hidroxiácidos etilénicos terciarios del tipo 3f en lugar de la secuencia 3f(3k(3l(4c.
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en la que m se encuentra comprendida entre 0 y 3,
en la fórmula 4c, n, R^{5}, R^{6}, R^{8} y CTX- tienen los mismos significados que los indicados anteriormente.
En efecto, el (-hidroxiácido etilénico terciario 3f tratado bajo condiciones similares a las indicadas anteriormente proporcionó directamente el éster cíclico de las cefalotaxinas del tipo 4c sin aislamiento de un intermediario. En el caso del procedimiento que implica un anhídrido mixto 3l, se ha supuesto que la (-lactona correspondiente se forma in situ debido a la presencia de una banda infrarroja a 1840 cm^{-1}.
Estos elementos fueron confirmados por la formación y aislamiento de 3l, utilizando 3f sólo bajo las condiciones de activación descritas anteriormente, es decir, para formar el anhídrido mixto, por ejemplo en presencia de cloruro de 2,4,6-triclorobenzoilo, o alternativamente, por ejemplo, en el procedimiento denominado DCC indicado anteriormente.
Los cicloéteres carboxílicos sustituidos del tipo 3k, el etilénico terciario sustituido (-hidroxiácidos del tipo 3f, sus intermediarios activados y los anhídridos cíclicos del tipo 3p pueden acoplarse con las cefalotaxinas, sea en la serie racémica, o más ventajosamente, en la serie ópticamente activa.
En el caso del acoplamiento entre uno de los tipos anteriores de ácido, en la forma de mezclas racémicas, con un solo enantiómero de una cefalotaxina, se ha descubierto cierta estereoselectividad debido a la quiralidad y gran impedimento estérico del sitio de reacción, en el sentido de que la proporción entre cada uno de los dos diastereoisómeros es generalmente diferente de 1.
La separación de los dos diastereoisómeros formados del tipo 4c (R^{5}=CH_{2}CO_{2}Me), conocida como "anhidroharringtonina"
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en la que n, R^{6}, R^{8} y CTX- tienen los mismos significados que los indicados anteriormente, puede llevarse a cabo mediante cromatografía preparativa en una fase denominada normal, por ejemplo en gel de sílice nativo como fase estacionaria y una mezcla de disolventes orgánicos como fase móvil, o preferentemente, en una fase reversa, por ejemplo en un sílice inerte injertado con grupos apolares, tales como, por ejemplo, cadenas organosililo, cianoalquilo, fenilalquilo, preferentemente octadecil-alquil-silano, y una mezcla de disolventes acuosos como fase móvil.
En el caso de un acoplamiento enantioespecífico, no se observa traza de epimerización en ninguna de las partes originales, y el único diastereoisómero obtenido puede cristalizarse. Cuando este diastereoisómeros no es cristalino, se cromatografía mediante cromatografía flash con el fin de eliminar los residuos de reactivos, y seguidamente se precipita mediante la adición de un no-disolvente, con el fin de aislarlo en la forma de polvo amorfo.
En el esquema siguiente se muestra la apertura de los carboxilatos de cicloéteres de cefalotaxina del tipo 4c para proporcionar el alcohol halogenado 4d.
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en estas fórmulas, n, R^{5}, R^{6}, R^{8} y CTX- tienen los mismos significados que los indicados anteriormente, siendo X un heteroátomo, tal como un halógeno.
Los éteres cíclicos del tipo 4c pueden, en determinados ejemplos, presentar la característica particular de contener simultáneamente un metil enol éter, por ejemplo en posición 2 de las cefalotaxinas. A pesar de la inercia habitual de los éteres cíclicos verdaderos (es decir, éteres no hemiacetales), la puesta en contacto de una solución de 4c en un disolvente orgánico, preferentemente un disolvente clorado, tal como, por ejemplo, diclorometano, dicloroetano o cloroformo, bajo condiciones controladas, es decir, en presencia, por ejemplo, de un ácido hidrohálico diluido, preferentemente ácido bromhídrico en ácido acético, a temperatura baja, o bien en presencia de un halo-trialquilsilano, o alternativamente, de un trihaluro de boro, por ejemplo tribromuro de boro, a temperatura baja en un disolvente orgánico, preferentemente un disolvente clorado, tal como, por ejemplo, diclorometano, dicloroetano o cloroformo, permite abrirlo selectivamente para proporcionar un alcohol halogenado del tipo 4d, en el que X=halógeno, con un rendimiento cuantitativo sin formación apreciable del producto de O-desmetilación, incluso en el caso de las cefalotaxinas que portan enol éter o éteres u otras funciones sensibles a agentes de rotura de éteres. En cualquier caso, en caso de una desmetilación accidental, el enol puede ser selectivamente metilado de nuevo con facilidad, tal como se describe en la literatura (por ejemplo mediante disolución en metanol en presencia de ácido para-toluenosulfónico).
Los alcoholes halogenados del tipo 4d, en los que X=halógeno, son de gran interés como sustratos, conduciendo necesariamente a análogos heteroatómicos, debido a la muy buena reactividad hacia la sustitución del halógeno que portan.
Otra variante consiste en poner en contacto el producto de tipo 4c con un ácido acuoso opcionalmente en un codisolvente miscible o inmiscible. El ácido puede ser, por ejemplo, protónico, y en tal caso es un ácido orgánico o inorgánico, preferentemente ácido hidroclórico, tetrafluorobórico o fórmico. En este caso, los dioles del tipo 4b pueden aislarse directamente sin pasar a través de la etapa de alcohol halogenado descrita anteriormente.
Los alcoholes halogenados del tipo 4d, en los que X=halógeno, se hidrolizan según el esquema siguiente:
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en el que n, R^{6}, R^{8}, R^{5}, X y CTX- tienen los mismos significados que los indicados anteriormente.
Los alcoholes halogenados del tipo 4d son particularmente adecuados para la hidrólisis controlada, en la que se ponen en contacto con una base inorgánica acuosa, tal como, por ejemplo, hidróxido sódico diluido, carbonato sódico, o preferentemente, carbonato de bario, a una temperatura comprendida entre 0ºC y 30ºC, bajo agitación, para proporcionar los dioles del tipo 4b.
Una variante consiste en llevar a cabo la hidrólisis in situ de los intermediarios alcohol halogenado del tipo 4d al final de la reacción, la cual preferentemente se lleva a cabo tratando el éter cíclico del tipo 4c en diclorometano en presencia de ácido bromhídrico en ácido acético, y añadiendo directamente agua o la solución de hidrólisis en el medio de reacción mientras está frío y aplicando agitación vigorosa.
El procedimiento de acuerdo con la invención es particularmente adecuado para la preparación de azaharringtoninas, análogos nitrogenados de las harringtoninas.
Con el fin de demostrar, por ejemplo, la flexibilidad de la utilización de los alcoholes halogenados del tipo 4d, en los que X=halógeno como sustratos, estos materiales se sometieron, por ejemplo, a acidólisis mediante tratamiento utilizando, por ejemplo, etanol, metanol o dimetilformamida, que, mediante hidrogenolisis en solución en un disolvente orgánico, tal como, por ejemplo, un alcanol o un éster inferior, condujo al amino alcohol que presenta la fórmula 4f (aminodesoxiharringtonina). La amina después puede someterse a amidación bajo las condiciones Schotten-Baumann, es decir, en medio acuoso en presencia de una base inorgánica como catalizador, proporcionando un amido alcohol del tipo 4e
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en el que Z=NHCOR ó NHCOAr, siendo R y Ar tal como se ha definido anteriormente, más específicamente grupos alquilo o arilo, respectivamente, que pueden estar o no estar sustituidos. La amina 4f también puede estar sec-alquilada para proporcionar una alquil-amino-desoxi-harringtonina (Z=NHR ó Z=NHAr o Z=NR_{2} ó Z=NHAr_{2}, siendo posible que los dos radicales R y Ar sean iguales o independientes) o acilada para proporcionar amidas (Z=NHCOR ó Z=NHCOAr) o carbamatos (Z=NHCOOR) derivados de la aminodesoxiharringtonina correspondiente 4f,
siendo n, R^{5}, R^{6}, R^{8}, R^{9}, X y CTX- tal como se ha definido anteriormente.
Alternativamente, los éteres cíclicos del tipo 4c pueden resultar adecuados para la reacción de Ritter en presencia de un nitrilo (que puede servir de disolvente) a una temperatura baja comprendida entre -100ºC y +30ºC en presencia de un ácido, tal como ácido sulfúrico, ácido perclórico, o preferentemente, ácido tetrafluorobórico, para proporcionar un acilamino-desoxi-harringtonina (Z=NHCOR ó Z=NHCOAr) derivada de la aminodesoxiharringtonina correspondiente 4f.
La extracción de las cefalotaxinas del tipo 2 se lleva a cabo según los procedimientos indicados posteriormente.
Las cefalotaxinas del tipo 2 pueden prepararse de acuerdo con los métodos descritos en la literatura, sea por síntesis o por extracción. En el último caso, debido a que ningún método utiliza una puesta en contacto directa del material vegetal de partida con un ácido acuoso, se ha descubierto que es ventajoso describir esto en la presente invención. El material vegetal fresco o seco se pone en contacto durante 24 horas con una mezcla acuosa-orgánico acidificada utilizando un ácido inorgánico diluido o una ácido orgánico débil, de manera que se traiga el pH a un valor comprendido entre 1 y 4, preferentemente 3. El ácido inorgánico puede ser, por ejemplo, ácido sulfúrico o ácido hidroclórico y el ácido orgánico puede ser ácido cítrico, ácido láctico o ácido tartárico, por ejemplo el disolvente orgánico puede ser, por ejemplo, un alcanol inferior, una cetona, tetrahidrofurano o cualquier otro disolvente miscible en agua utilizando en la extracción según los expertos en la materia. El contenido de agua se encuentra comprendido entre el 20% y el 80%, preferentemente el 50%. La solución obtenida puede cromatografiarse o basificarse directamente con el fin de ser contra-extractiva debido a que, en contraste con los métodos descritos en la literatura, no contiene clorofila y/o grasa vegetal. La contra-extracción utilizando un disolvente orgánico inmiscible en agua, tal como un éster inferior, o preferentemente, un hidrocarburo halogenado inferior, más particularmente diclorometano, proporciona una mezcla de alcaloides totales aislados en forma de un polvo blanco. Existen varios procedimientos para purificar alcaloides de Cephalotaxus, pero ninguno en particular en fase reversa, está dirigido específicamente hacia la purificación de cefalotaxinas y más particularmente de la cefalotaxina de fórmula 2a.
El presente procedimiento para purificar cefalotaxina, que forma una parte integral del nuevo procedimiento para la semisíntesis de harringtoninas, de esta manera implica la cromatografía en fase reversa, que nunca ha sido utilizada para este fin. Esta cromatografía en fase reversa utiliza como fase estacionara, por ejemplo, un sílice inerte injertado con grupos apolares, tales como, por ejemplo, cadenas organosililo, cianoalquilo, fenilaquilo o, preferentemente, octadecilalquilsilano, tales como las que se encuentran comercialmente, y una mezcla de disolventes acuosos como fase móvil, preferentemente el agua misma (sin disolvente orgánico), el pH se ajusta a entre 2 y 4 con un ácido inorgánico, tal como ácido hidroclórico, fosfórico o sulfúrico. También resulta ventajoso añadir un aditivo, tal como, por ejemplo, amonio acuoso o trietilamina. De acuerdo con este procedimiento, que es económicamente muy ventajoso debido a que evita la utilización de disolvente orgánico y permite la reutilización de la fase estacionara para virtualmente cientos de operaciones, la cefalotaxina se obtiene con un rendimiento de recuperación cuantitativa y con una pureza superiores al 95%.
El procedimiento anterior hace posible obtener no sólo cefalotaxinas levorrotatorias presentes naturalmente en el material vegetal, sino también cefalotaxinas racémicas también presentes en estado natural.
Los alcóxidos metálicos, correspondientes a la fórmula general 1b (n=1 a 12) en los que M es un metal, más particularmente un metal alcalino, tal como sodio, potasio o litio, o un metal de transición, por ejemplo circonio, titanio o cinc, pueden obtenerse mediante metalación de uno o más de los hidroxilos en los mono- o polihidroxicefalotaxanos correspondientes a la fórmula general 1a (x=1 a 12) y en los que M es más particularmente un metal alcalino o metal alcalino-térreo o cualquier otro metal que convencionalmente pueda dar lugar a la formación de un alcóxido.
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Dicha formación de alcóxido es de gran valor para acilar más fácilmente en esta forma los hidroxilos impedidos de los cefalotaxanos y más particularmente para acoplar este cefalotaxano con precursores acilantes de las cadenas laterales, conduciendo automáticamente a las harringtoninas que son el sujeto de la presente invención.
Pueden utilizarse varios métodos para la metalación del hidroxilo o hidroxilos de un cefalotaxano. Por ejemplo, puede utilizarse un hidruro metálico, un alquilmetal, una amida o, más generalmente, cualquier agente capaz de intercambiar o ceder un átomo de metal.
La simple puesta en contacto de un cefalotaxano hidroxilado en solución orgánica, preferentemente bajo un gas inerte, con un hidruro metálico, tal como, por ejemplo, hidruro potásico, hidruro de litio o, más particularmente, hidruro sódico, conduce a un alcóxido metálico de cefalotaxano que puede, por ejemplo, servir como un sustrato in situ con el fin de unir, por ejemplo, un grupo alquilo, acilo o alquilsililo adecuadamente sustituido. El disolvente orgánico puede ser un disolvente aprótico adecuado, tal como un éter, más particularmente tetrahidrofurano, un hidrocarburo aromático líquido, preferentemente tolueno o, más generalmente, cualquier disolvente orgánico que sea líquido bajo las condiciones de temperatura y presión utilizadas y que no presente reactividad apreciable hacia el reactivo. La temperatura del medio de reacción puede estar comprendida entre -90ºC y +30ºC.
La simple puesta en contacto de un cefalotaxano hidroxilado en solución orgánica, preferentemente bajo gas inerte, con un hidrocarburo metalado, tal como, por ejemplo, un hidrocarburo con litio, preferentemente butil-litio, conduce a los mismos alcóxidos metálicos que los indicados anteriormente. Pueden utilizarse los mismos disolventes que los indicados anteriormente, excepto que, debido a que la reactividad de los hidrocarburos metálicos es generalmente mayor que la de los hidruros metálicos, la temperatura se encuentra comprendida entre -100ºC y -20ºC, preferentemente entre -60ºC y -80ºC.
La simple puesta en contacto de un cefalotaxano hidroxilado en solución orgánico, preferentemente bajo gas inerte, con una amida, preferentemente una amida de metal alcalino, por ejemplo una dialquilamida de metal alcalino, tal como diciclohexilamida de litio o diisopropilamida de litio o bis(trialquilsilil)amida de metal alcalino (litio, potasio o sodio) conduce a los mismos alcóxidos metálicos que los indicados anteriormente. Pueden utilizarse los disolventes indicados anteriormente.
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A título de ejemplo y sin menos cabo de la generalidad de la presente invención, la cefalotaxina 2a en solución agitada en tetrahidrofurano a -70ºC, tratada con un equivalente de butil-litio o bis(trimetilsilil)amida de litio conduce, en unas cuantas horas, al alcóxido de litio 2h que, al atraparlo in situ con anhídrido acético, proporciona la 3-O-acetilcefalotaxina 2b.
A continuación se detalla la preparación de los cicloéteres carboxílicos racémicos sustituidos del tipo 3k.
Según una primera variante, la preparación de estos cicloéteres carboxílicos puede llevarse a cabo mediante la ciclización de los (-hidroxiácidos etilénicos terciarios sustituidos del tipo 3f de acuerdo con el esquema siguiente:
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siendo m, R, R^{5}, R^{6}, R^{8} y A tal como se ha definido anteriormente.
Los cicloéteres carboxílicos sustituidos del tipo 3k, tales como, por ejemplo, A ó B de fórmulas:
17
pueden prepararse a partir de los (-hidroxiácidos etilénicos terciarios sustituidos del tipo 3f, mediante la disolución simple en un disolvente orgánico en presencia de un ácido.
Según una segunda variante, la preparación de estos cicloéteres carboxílicos puede llevarse a cabo mediante la ciclización concomitante con la formación de las especies acilantes. Tal como se ha indicado anteriormente, los ácidos cuyo alcohol terciario es libre, tales como 3f, se ciclizan espontáneamente por la acción de un agente deshidratante requerido para una determinada técnica para acilar un alcohol cefalotaxina indicado anteriormente y después esterificar éste último, proporcionando 4c.
En ausencia de un sustrato alcohólico para recibirlo, el alcohol etilénico terciario del tipo 3f conduce, bajo condiciones de operación anhidras, al aislamiento del intermediario acilante 3l, indicado anteriormente o, mediante hidrólisis, al aislamiento de los ácidos del tipo 3k.
En este caso, el procedimiento utilizado es estrictamente el descrito para el acoplamiento que implica la formación de una especie acilante in situ pero en ausencia de un sustrato del tipo cefalotaxina.
Según una tercera variante, estos cicloéteres carboxílicos sustituidos del tipo 3k pueden prepararse mediante la desprotección del carboxilo terciario del precursor adecuadamente sustituido 3h,
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siendo R^{5}, R^{8}, R^{6} y n tal como se ha definido anteriormente y GP representa un grupo protector para los ácidos, con GP=R, como caso específico.
Según una cuarta variante, en el caso específico en el que R^{5}=CH_{2}CO_{2}R, los cicloéteres carboxílicos adecuadamente sustituidos del tipo 3k, tales que R^{5}=CH_{2}CO_{2}R, que se muestra a continuación,
19
siendo R^{8}, R^{6} y n son tal como se han definido anteriormente,
Puede prepararse mediante la saponificación total de los diésteres correspondientes 3j, de manera que R^{5}=CH_{2}CO_{2}
R, seguido de la metilación selectiva ligera del intermediario diácido 3r, de manera que R^{5}=CH_{2}CO_{2}H.
20
En efecto, este procedimiento llevado a cabo a temperatura ambiente y con un seguimiento riguroso de la cinética de reacción, conduce a la saponificación selectiva del éster primario anteriormente indicado; de esta manera, proporciona acceso a los derivados del tipo 3t, en los que R=GP, a continuación,
21
siendo R^{8}, R^{6}, GP tal como se ha definido anteriormente,
que pueden acoplarse con las cefalotaxinas utilizando los procedimientos descritos anteriormente con el fin de asegurar la ausencia de trans-esterificación durante el acoplamiento de los ácidos terciarios que forman el sujeto de la presente invención.
Según una quinta variante, la preparación de estos cicloéteres carboxílicos puede llevarse a cabo mediante metanolisis regioselectiva del anhídrido cíclico correspondiente.
Tal como se ha indicado anteriormente, el diácido 3r conduce, mediante auto-deshidratación, al anhídrido cíclico 3p, el cual es un buen agente acilante para alcoholes, de manera que mediante metanolisis también se obtiene preferentemente 3k, en el que R^{5}=CH_{2}CO_{2}Me, lo que constituye un procedimiento adicional de preparación.
A continuación se detalla la preparación de los (-hidroxiácidos etilénicos terciarios sustituidos del tipo 3f.
Los (-hidroxiácidos etilénicos terciarios sustituidos que son los precursores de los monoácidos del tipo 3f pueden, al igual que sus análogos cíclicos del tipo 3k indicados anteriormente, obtenerse:
-
sea mediante desprotección selectiva de los precursores del tipo 3i,
22
-
sea, por ejemplo en el caso de los diácidos del tipo 3s, en los que R^{5}=CH_{2}CO_{2}H,
23
mediante metilación selectiva del carboxilo primario en particular, introduciendo los reactivos en contacto prolongado en solución metanólica a temperatura ambiente o utilizando el complejo trifluoruro de boro/metanol.
Los diácidos del tipo 3s en los que R^{5}=CH_{2}CO_{2}H pueden obtenerse mediante saponificación de los diésteres correspondientes del tipo 3q, en los que R^{5}=CH_{2}CO_{2}Me introduciendo este último en contacto con un exceso de base en un medio acuoso,
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siendo m, R, R^{8} y R^{6} tal como se ha definido anteriormente.
El alcohol puede ser un alcohol inferior, tal como metanol, etanol o, preferentemente, isopropanol, y la base puede ser, por ejemplo, una base metal alcalino o metal alcalino-térreo o un hidróxido de metal de tierra rara o amonio acuoso. Cuando la reacción tiene lugar a una temperatura comprendida entre 0ºC y 30ºC durante un periodo comprendido entre 15 minutos y 1 hora, la saponificación regioselectiva del éster primario puede obtenerse sin ninguna dificultad resultante. Incrementando la temperatura hasta el punto de ebullición de la mezcla de disolvente y/o alargando el tiempo de reacción, se obtiene el diácido con buen rendimiento y sin formación de productos secundarios.
Los diácidos del tipo 3s en los que R^{5}=CH_{2}CO_{2}H pueden, debido a sus propiedades cristalogénicas, obtenerse generalmente en forma enantioméricamente pura mediante cristalizaciones sucesivas de mezclas enantioméricamente enriquecidas hasta la obtención de una rotación óptica constante.
Los diácidos obtenidos anteriormente pueden convertirse seguidamente en (-hidroxiácidos etilénicos terciarios sustituidos del tipo 3f en los que R^{5}=CH_{2}CO_{2}Me mediante monoesterificación selectiva del carboxilo primario, utilizando metanol en presencia de un ácido protónico o un ácido de Lewis, o alternativamente utilizando el complejo de trifluoruro de boro/eterato/metanol o diazometano.
En efecto, al igual que para los análogos cíclicos del tipo 3t en los que R^{5}=CH_{2}CO_{2}H tal como anteriormente, el presente procedimiento llevado a cabo a temperatura ambiente y bajo seguimiento riguroso de la cinética de reacción conduce a la saponificación selectiva del éster primario anterior; de esta manera, proporciona acceso a los derivados del tipo 3u en los que R^{5}=CH_{2}CO_{2}H, que pueden acoplarse con las cefalotaxinas utilizando los procedimientos descritos anteriormente con el fin de asegurar la ausencia de trans-esterificación durante el acoplamiento de los ácidos terciarios que forman el sujeto de la presente invención.
Los (-hidroxiésteres etilénicos terciarios sustituidos del tipo 3q pueden prepararse de acuerdo con el esquema indicado a continuación:
25
teniendo R^{6}, R^{8}, m y R^{5} los mismos significados que los indicados anteriormente.
Los ésteres etilénicos del tipo 3q pueden preparase de acuerdo con los numerosos procedimientos descritos en la literatura para casos similares, tales como, por ejemplo, la (-hidroxialquilación del 1-alquil o 1-alquenil-1-ceto éster del tipo 9.
A título de ejemplo y sin eliminar nada de la generalidad a la presente invención, la (-hidroxialquilación del 1-alquenil-1-ceto éster del tipo 9 con el metoxicarbonilmetil enolato de litio (R^{5}M=MeOCOCH_{2}Li) o el reactivo organocinc correspondiente (reacción de Réformatsky, en la que R^{5}MX=MeOCOCH_{2}ZnBr) conduce al diéster 3q en el que R^{5}=CH_{2}CO_{2}Me.
Las mismas reacciones aplicadas a un éster quiral (R=R*) condujeron a una mezcla de diastereoisómeros separables que, tras la desprotección de la función ácido terciario, condujeron cada uno al diastereoisómero de la pareja.
Además, la reacción de (-hidroxialquilación del 1-alquil o 1-alquenil-1-ceto éster del tipo 9, llevada a cabo en presencia de un agente inductor de quiralidad, tal como esparteína o quinina, puede proporcionar un enriquecimiento enantiomérico significativo, que puede potenciarse adicionalmente mediante cristalización fraccionada.
Los ceto ésteres del tipo 9 se obtienen convencionalmente mediante C-semiacilación del carbanión del alquil o haluros de alquenilo correspondientes del tipo 10 con un oxalato de dialquilo.
Una de las ventajas sobre la técnica anterior del procedimiento sintético que forma el sujeto de la presente invención está en la posibilidad de acoplar una cadena enteramente preformada con las cefalotaxinas. De esta manera, la preparación de los ácidos anhidroharringtónicos anteriores en forma enantioméricamente pura 3k es de interés considerable, debido a que la creación post-acoplamiento del centro quiral en posición 2' de las harringtoninas durante la unión de la cadena secundaria, tal como se describe en la técnica anterior, conduce a una mezcla epimérica, por una parte, que es muy difícil de separar y, por otra parte, a una pérdida de aproximadamente el 50% de las escasas cefalotaxinas (no reciclables en un procedimiento para fabricar una sustancia medicinal utilizando buenas prácticas de fabricación).
Se han utilizado varios procedimientos para conseguir este objetivo. Todos se aplican tanto a los monoácidos cíclicos del tipo 3k o a los precursores diácidos del tipo 3r, y a sus precursores etilénicos lineales del tipo 3f, también siendo posible aplicar los procedimientos de cromatografía quiral a los precursores que no presentan ninguna función capaz de establecer un enlace químico reversible con una especie quiral (en este caso funciones ácido libre).
De acuerdo con una primera etapa del procedimiento para la preparación enantio-específica de estos ácidos, se formó una mezcla epimérica mediante combinación con un alcohol o amina quirales.
Las reacciones para esterificar una función alcohol secundario impedido de una cefalotaxina con ácidos oxacicloalcanocarboxílicos del tipo 3k anteriormente indicados (incluyendo los formados in situ a partir de (-hidroxiácidos etilénicos terciarios del tipo 3f) también pueden aplicarse a la esterificación de otro alcohol quiral con el fin de convertir una mezcla racémica, o una mezcla con enriquecimiento enantiomérico parcial de ácidos del tipo 3k, en una mezcla diastereoisomérica en la que todos los métodos de separación no quiral ya pueden aplicarse. Los procedimientos anteriores también son aplicables sin modificar la amidación de las aminas primarias o secundarias quirales.
De esta manera, cuando los ácidos oxacicloalcanocarboxílicos del tipo 3k o sus precursores etilénicos lineales se hacen reaccionar con un alcohol quiral, designado como R*OH, o con una amida quiral R'*R*NH (siendo posible que R'* se sustituya con un hidrógeno), se obtienen dos especies químicas con propiedades físicoquímicas diferenciadas (por ejemplo RMN, punto de fusión, solubilidad, propiedades cromatográficas, ataque enzimático o microbiológico, etc.). El alcohol o la amida preferentemente deben estar impedidos y poseer el centro quiral en el sitio de unión con el carboxilo terciario del ácido de tipo 3k. El alcohol puede ser, por ejemplo, mentol, borneol, valinol o, preferentemente, quinina. La amina puede ser, por ejemplo, efedrina; más generalmente, puede utilizarse cualquier alcohol o amida quirales comerciales.
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teniendo n, R^{5}, R^{6}, R^{8} y A los mismos significados que los indicados anteriormente, teniendo R* el mismo significado que R, pero es quiral.
A título de ejemplo, y sin restar nada de generalidad a la presente invención, la (-)-quinina que, al igual que las cefalotaxinas, es un alcaloide con una función alcohol secundario estéricamente impedida, reacciona con la mezcla racémica de los ácidos oxacicloalcanocarboxílicos del tipo 3k para proporcionar la mezcla de los dos epímeros correspondientes 3v, en los que R^{5}=CH_{2}CO_{2}Me y 3w, de manera que R^{5}=CH_{2}CO_{2}Me:
27
Las mezclas binarias de epímeros obtenidas mediante la combinación con un compuesto quiral pueden separarse por ejemplo mediante cristalización fraccionada, mediante destilación, mediante extracción contracorriente líquido-líquido y, dado el elevado valor añadido de estos intermediarios, mediante cualquier técnica cromatográfica preparativa común, por ejemplo cromatografía de fase normal, cromatografía de exclusión, preferentemente en fase reversa o en fase normal injertada. Debido a que estos procedimientos son sinérgicos, pueden combinarse ventajosamente con el fin de mejorar la pureza diastereoisomérica.
A título de ejemplo y sin restar nada de generalidad a la presente invención, la mezcla de los dos epímeros 3v (en los que n=3; R^{6}=R^{8}=Me; R^{5}=CH_{2}CO_{2}Me) y 3w (en los que n=3; R^{6}=R^{8}=Me; R^{5}=CH_{2}CO_{2}Me), indicados en el ejemplo anterior, pueden separarse sin dificultad y con un rendimiento cuantitativo utilizando una fase injertada del tipo octadecilsilano y una fase móvil metanol/agua.
La regeneración del oxacicloalcano-ácidos carboxílicos del tipo 3k en forma enantiomérica pura puede llevarse a cabo mediante hidrólisis total seguida de remetilación selectiva del carboxilo primario de un diastereoisómero adecuadamente seleccionado (ver secuencia anterior 3j (3k) o, cuando sea un enlace éster con un oxígeno en la posición bencilo (ver, por ejemplo, la quinina, anteriormente), mediante hidrogenolisis simple. En el último tipo de caso, la desventaja de la hidrogenolisis se ve compensada en gran parte por el ahorro de una etapa en un producto caro.
A título de ejemplo y sin restar nada de generalidad de la presente invención, (-)-quinina (2'R)-anhidroharringtonato 3v (en el que n=3; R^{6}=R^{8}=Me; R^{5}=CH_{2}COMe) proporcionó un ácido (2R)-anhidroharringtónico del tipo 3k y dihidrodesoxiquinina que, de esta manera, no puede reciclarse, aunque esto es una desventaja menor a la vista del bajo coste de este alcaloide. Alternativamente, la doble saponificación de 3v seguido de la remetilación selectiva proporciona un producto que es enteramente idéntico al ácido (2R)-anhidroharringtónico del tipo 3k indicado anteriormente.
El enantiómero de configuración no natural (2S) puede, tras experimentar las mismas conversiones a su enantiómero (2R), explotarse, por ejemplo, con fines de estudios de relación estructura-actividad.
Según una primera etapa del procedimiento para la preparación enantio-específica de estos ácidos, las mezclas racémicas se resuelven formando sales con una especie básica quiral.
Las mezclas racémicas de ácidos carboxílicos oxacicloalcano del tipo 3k (incluyendo los formados in situ a partir de (-hidroxiácidos etilénicos terciarios del tipo 3f) pueden formar una sal con una amina quiral simplemente juntándolos en solución en un disolvente orgánico. Aunque la mayoría de los procedimientos descritos anteriormente para separar los ésteres y amidas formados con 3k son aplicables (por ejemplo cromatografía), debido a que las sales formadas son en general altamente cristalogénicas, preferentemente se lleva a cabo cristalización fraccionada para resolver los ácidos del tipo 3k. Los disolventes utilizados, solos o como parte de una mezcla, preferentemente pueden ser disolventes orgánicos polares que pueden combinarse con agua o no, tales como, por ejemplo, cetonas, alcoholes y ésteres inferiores. La reacción para formar la sal preferentemente tiene lugar a una temperatura comprendida entre 0ºC y 100ºC. La recristalización puede llevarse a cabo redisolviendo la sal en una mezcla cuyo poder de disolución puede ajustarse con precisión mediante la utilización de las combinaciones anteriores de disolventes y variando la temperatura de acuerdo con técnicas estándar utilizadas por los expertos en la materia. Cuando el enriquecimiento diastereoisomérico se considere suficiente, la sal se descompone en presencia, por ejemplo, de un ácido acuoso diluido, tal como ácido hidroclórico o sulfúrico. La extracción del enantiómero del ácido regenerado puede llevarse a cabo utilizando un disolvente orgánico inmiscible en agua tal como, por ejemplo, un éster inferior.
A título de ejemplo y sin restar nada de generalidad a la presente invención, la mezcla racémica de ácidos (2R ó 2S)-anhidroharringtónicos del tipo 3k puede resolverse, por ejemplo, juntándolos con (-)-efedrina, seguido de recristalización fraccionada en una mezcla de acetato de etilo/metanol.
El ácido 2R-anhidroharringtónico del tipo 3k se regenera a continuación poniendo en contacto la sal purificada con ácido hidroclórico 2N y extrayendo continuamente la fase acuosa ácida con acetato de etilo.
Los ácidos oxacicloalcanocarboxílicos del tipo 3k descritos anteriormente pueden someterse a cromatografía quiral preparativa.
Los productos finales se purifican mediante HPLC, proporcionando los productos finales para la utilización farmacéutica.
A pesar de los niveles de rendimiento de los modernos métodos de síntesis, de semisíntesis y de purificación de sustancias naturales, en la actualidad se ha establecido en las regulaciones publicadas por las autoridades sanitarias en los países industrializados que los niveles de impureza superiores a uno por mil (0,1% m/m) en una sustancia medicinal pueden resultar perjudiciales para el paciente.
Además, existe una demanda sistemática de identificación seguida de estudios toxicológicos de cualquier sustancia toxicológicamente desconocida que exceda de este umbral, con el fin de obtener solicitudes farmacéuticas para la autorización comercial de los productos medicinales.
La pureza diastereoisomérica (siendo un caso específico la pureza enantiomérica) puede, además, conducir a aberraciones terapéuticas; por ejemplo, se conoce bien que la quinina (ver la fórmula anterior) es un agente antimalaria, mientras que uno de sus diastereoisómeros es un antifibrilante cardíaco.
En el campo terapéutico de las sustancias que constituyen el sujeto de la presente invención, es común encontrar multiplicaciones de entre 10 y 100 del principio activo o de un efecto secundario mediante cambios menores (involuntarios en el presente documento) en las estructuras moleculares.
Entre los procedimientos para conseguir dicho nivel de pureza, la cromatografía industrial de alta resolución ocupa una posición de elección, siendo su elevado coste un argumento de poco peso en comparación con el muy elevado valor añadido de los sofisticados principios activos, la robustez que proporcionan a los procesos y la seguridad que ofrecen a los usuarios.
A título de ejemplo y sin restar nada de generalidad a la presente invención, la homoharringtonina 4b, en la que n=3; R^{6}=R^{8}=Me; R^{5}=CH_{2}CO_{2}Me, CTX-=cefalotaxilo,
28
en las que R^{6}, R^{8}, R^{5}, n y CTX- son tal como se han definido anteriormente, puede liberarse de su epímero al mismo tiempo que sus otras impurezas relacionadas mediante cromatografía preparativa en fase reversa utilizando una fase reversa injertada de tipo octadecilsilano como fase estacionaria y una mezcla adecuadamente ajustada de metanol/agua como fase móvil.
El presente procedimiento proporciona un producto cuya suma de impurezas relacionadas es inferior al 0,5% y para el que ninguna de estas impurezas tomada individualmente excede del 0,1%.
La presente invención se refiere a un procedimiento para la preparación de cefalotaxano que porta una cadena lateral de la siguiente fórmula y/o una sal del mismo:
\Omega-CO-O-CTX
en la que,
\Omega ("omega") es un radical representativo del fragmento terminal de la cadena y -CO- es el carbonilo del grupo éster unido al cefalotaxano;
el radical \Omega-CO- se corresponde con:
-
la fórmula de heterocicloalcano sustituido siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
29
en la que n está comprendida entre 0 y 8;
Z es un heteroátomo de oxígeno o de azufre, ó NH
R^{5} es hidrógeno, alquilo, CH_{2}COOCH_{3}, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heterocicloalquilo, éter de oxígeno que porta uno de los radicales anteriores,
R^{6} y R^{8} son, independientemente,
hidrógeno,
alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heterocicloalquilo,
R^{6} y R^{8} pueden incluirse en un ciclo;
éter de oxígeno que porta uno de los radicales anteriores;
-
o con la siguiente fórmula de alqueno lineal:
\vskip1.000000\baselineskip
30
en la que m está comprendida entre 1 y 8; R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido anteriormente;
\newpage
-
o con la fórmula siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
31 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que n, R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido anteriormente;
Z y Q^{2} son, independientemente, oxígeno, NH ó heteroátomo de azufre;
Q^{1} es un átomo de carbono o silicio;
R^{9} y R^{10} son, independientemente, hidrógeno, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heterocicloalquilo;
presentando R^{9} y/o R^{10} la capacidad de no existir o de conjuntamente formar un heteroátomo y/o de establecer un enlace múltiple con Q^{1}, presentando R^{9} y R^{11} la capacidad de no existir, de establecer un enlace múltiple entre dos átomos de carbono que los portan; y
R^{11} es hidrógeno, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo o alquilcarbonilo;
en los que
-
O-CTX es un fragmento cefalotaxano o sal del mismo que presenta la fórmula siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
32 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que p es igual a 1 ó 2;
estando unidos los dos tipos de radicales, -\Omega y -CTX indicados anteriormente, con un enlace éster -CO-O-
reuniendo dicho procedimiento:
-
un ácido carboxílico de fórmula general \Omega-CO-OH ó una sal del mismo;
-
o una forma activada de un ácido que presenta la fórmula general \Omega-CO-A ó una sal del mismo con \Omega-CO, el cual presenta la fórmula siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
33 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que n, Z, R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido anteriormente;
\newpage
-
ó \Omega-CO que presenta la fórmula siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
34 
\vskip1.000000\baselineskip
m está comprendida entre 1 y 8; Z, R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido anteriormente;
-
ó \Omega-CO que presenta la fórmula siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
35 
\vskip1.000000\baselineskip
y en la que n, Z, Q^{1}, Q^{2}, R^{5}, R^{6}, R^{8}, R^{9}, R^{10} y R^{11} son tal como se han definido anteriormente
-
ó \Omega-CO-A que representa un anhídrido cíclico que presenta la fórmula siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
36 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que n, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido anteriormente:
con,
-
un cefalotaxano que porta un grupo hidroxilo o una sal del mismo, de fórmula H-O-CTX, en la que CTX se define tal como se ha definido anteriormente;
-
o un alcóxido metálico de fórmula M-O-CTX, en la que CTX se define tal como se ha definido anteriormente y M es un metal;
-
o una forma activada de su grupo hidroxilo de fórmula Y-O-CTX, en la que -O-CTX se define tal como se ha definido anteriormente e Y es un grupo saliente para permitir una carga negativa sobre el átomo de oxígeno mediante la división entre Y- y -O-CTX, o para permitir una carbocación mediante división entre Y-O- y -CTX;
con la posible presencia de uno o varios aditivos de reacción para formar dicho cefalotaxano que porta una cadena lateral y/o una sal del mismo.
Más preferentemente, Z es un átomo de oxígeno y el cefalotaxano es una cefalotaxina que presenta la fórmula siguiente, o una sal del mismo:
37
en la que R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4} son, independientemente, hidrógeno, grupo hidroxilo o alcóxido.
El cefalotaxano, tal como se ha definido anteriormente, es la cefalotaxina que presenta la fórmula siguiente, o una sal del mismo, en la que R^{1} es hidroxilo, R^{2} es metoxilo, R^{3} y R^{4} son hidrógeno.
38
R^{5} es preferentemente hidrógeno o -CH_{2}-CO-O-Me.
El radical \Omega-CO preferentemente es uno en el que n=1 a 4, R^{6} y R^{8} son metilo.
El radical \Omega-CO puede ser uno en el que n=1 ó 2, R^{6} es fenilo y R^{8} es hidrógeno.
Cuando R^{5} es -CH_{2}-CO-O-Me, R^{1}=OH, R^{2}=OMe, R^{3}=R^{4}=H, el cefalotaxano es preferentemente uno en el que n=0, Z es NH y R^{8} es hidrógeno.
A puede ser \Omega-CO-O, en el que \Omega es tal como se ha definido anteriormente, o A es un haluro.
A también puede ser un radical del compuesto \Omega-CO-A que presenta la capacidad de generar la división del enlace entre el grupo carbonilo y el sustituyente A de \Omega-CO-A, proporcionando \Omega-CO^{+} y A^{-}.
Además, A es un radical seleccionado de entre los sustituyentes siguientes:
metoxiformiloxi de fórmula MeOCOO^{-},
trifluoroacetiloxi de fórmula CF_{3}COO^{-},
alquilsulfonoxi de fórmula RSO_{3}^{-},
fosfoxi de fórmula (RO)_{2}PO^{-},
halofosfoxi de fórmula ROP(Cl)O^{-},
trialquilsililoxi de fórmula R_{3}SiO^{-},
fórmulas en las que R es alquilo,
cloruro de dimetil-formamidinio de fórmula
39
o bromuro de aciloxi-piridinio de fórmula
40
A también puede ser un radical 2,4,6-triclorobenzoiloxi o un radical que presenta la fórmula siguiente:
41
En el caso en el que A es 2,4,6-triclorobenzoiloxi, el reactivo de fórmula \Omega-CO-A se obtiene poniendo en contacto un ácido \Omega-CO-OH, tal como se ha definido anteriormente, con cloruro de 2,4,6-triclorobenzoilo en presencia de uno o más aditivos de O-acetilación.
En el caso en el que A sea un carbonidimidazol, el reactivo de fórmula \Omega-CO-A se obtiene poniendo en contacto un ácido \Omega-CO-OH, tal como se ha definido anteriormente, con carbonil-diimidazol en presencia de un alcóxido.
De acuerdo con el método de la carbodiimida, el aditivo de acoplamiento es una carbodiimida sustituida y/o un aditivo básico, tal como una amina terciaria, por ejemplo.
Por ejemplo, la carbodiimida sustituida se selecciona de entre ciclohexilcarbodiimida (DCC), 1,3-diisopropilcarbodiimida (DIC) y clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etil-carbodiimida.
El alcóxido de cefalotaxano, que presenta la fórmula M-O-CTX, en la que M y CTX son tal como se han definido anteriormente, puede obtenerse poniendo en contacto un cefalotaxano de fórmula H-O-CTX, en la que CTX es tal como se ha definido anteriormente, con el metal mismo, un amiduro, un hidruro metálico o un metal alcalino.
M puede ser un metal alcalino, tal como litio, potasio o sodio.
El objetivo de la presente invención también es la preparación de nuevos compuestos tales como:
-
el alcóxido de litio de cefalotaxina, que presenta la fórmula siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
42
-
el alcóxido sódico de cefalotaxina, que presenta la fórmula siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
43
-
Cuando la cadena lateral cíclica del cefalotaxano que porta una cadena lateral, y/o una sal del mismo, presenta la fórmula siguiente:
44
en la que n, R^{5}, R^{6}, R^{8}, CTX y Z son tal como se han definido anteriormente, dicha cadena se ha abierto con un agente y/o radical E electrofílico protónico o no protónico en un medio acuoso o no acuoso, proporcionando un compuesto intermedio que presenta la fórmula siguiente:
45
en la que n, CTX, R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido anteriormente, E es hidrógeno o el radical electrofílico fijado provisional o definitivamente;
el compuesto intermediario anteriormente indicado puede atacarse con un agente o con un radical nucleofílico Z', añadido deliberadamente o posiblemente presente en el medio, y
-
cuando la cadena lateral cíclica de cefalotaxano portador de cadena lateral, y/o una sal del mismo, presenta la fórmula siguiente:
46
en la que n, R^{5}, R^{6}, R^{8}, R^{9}, R^{10} y R^{11} son tal como se han definido anteriormente y Z' es un heteroátomo;
dicha cadena se abre mediante hidrólisis o solvolisis suave con posible presencia de aditivos de activación y/o de apertura, proporcionando un cefalotaxano abierto portador de cadena lateral que presenta la fórmula siguiente:
47
en la que n, CTX, R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido anteriormente;
Z' es:
-
un halógeno o un heteroátomo que porta un hidrógeno o un radical R^{11} tal como se ha definido anteriormente;
-
o un hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo o heterocicloalquilo.
Por ejemplo, los ésteres de cefalotaxina que presentan las fórmulas siguientes:
48
49
en las que R^{5}, R^{6}, R^{8}, Z', X y CTX son tal como se han definido anteriormente;
-
bromodesoxiharringtonina (n=2) y bromo-desoxihomoharringtonina (n=3)
50
en la que CTX se define tal como se ha definido anteriormente.
-
aminodesoxiharringtonina (n=2) y aminodesoxihomoharringtonina (n=3)
51
en la que CTX es tal como se ha definido anteriormente.
Además, cuando la cadena lateral cíclica del cefalotaxano portador de cadena lateral y/o de la sal del mismo presenta la fórmula siguiente:
52
en la que n, R^{5}, R^{6}, R^{8}, CTX y Z son tal como se han definido anteriormente,
dicha cadena se abre mediante tratamiento con una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, en un disolvente halogenado, preferentemente diclorometano, seguido de hidrólisis in situ para proporcionar, sin aislamiento del intermediario, un cefalotaxano portador de cadena lateral que presenta la fórmula siguiente:
53
en la que n, CTX, R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido anteriormente.
Los ácidos se corresponden con la fórmula siguiente:
\Omega-CO-OH
en la que el radical \Omega se define tal como se ha definido anteriormente;
dicha fórmula equivalente a compuestos que contienen una mezcla racémica de las fórmulas (+)-\Omega-CO-OH y (-)-\Omega-CO-OH, en la que (+)-\Omega-CO-OH representa el enantiómero dextrógiro y (-)-\Omega-CO-OH representa el enantiómero levógiro,
a)
poniendo en contacto dicha mezcla racémico o una de sus formas activadas de fórmula:
\Omega-CO-A
que es tal como se ha definido anteriormente;
(dicha mezcla racémica o dicha forma activada generan, respectivamente:
-
un anión que presenta la fórmula (\Omega-CO-O);
-
o un catión que presenta la fórmula (\Omega-CO)*)
con una forma enantiomérica pura de entidad quiral, simbolizando dicho "agente de resolución" con \Delta* (delta asterisco), presentando la capacidad para formar:
-
una combinación estable, mediante enlace covalente;
-
o una combinación lábil fácilmente reversible, mediante puentes de hidrógeno o mediante interacción hidrofóbica;
-
o unión de labilidad intermedia mediante interacción electrostática;
proporcionando una mezcla diastereomérica de \Omega-CO-O-\Delta* y de \Omega-CO-\Delta*.
b)
seguidamente mediante separación física de la mezcla de dos diastereómeros o dos compuestos complejos o más generalmente de dos nuevas entidades física y/o químicamente diferentes de las obtenidas;
c)
a continuación, mediante regeneración y finalmente mediante separación de cada uno de los enantiómeros de fórmula genérica \Omega*-CO-OH, en la que \Omega* ("omega estrella") representa el símbolo genérico del mismo radical quiral en cualquiera de los dos o en la otra forma enantiomérica pura, que presenta las fórmulas siguientes (+)-\Omega-CO-OH y (-)-\Omega-CO-OH, que son tal como se han definido anteriormente.
Preferentemente, \Omega-CO- es:
-
un radical que presenta la fórmula siguiente:
54
en la que n, Z, R^{6}, R^{8} y R^{5} son tal como se han definido anteriormente;
-
o un radical que presenta la fórmula siguiente:
55
en la que m, Z, R^{6}, R^{8} y R^{5} son como se ha definido anteriormente;
-
o un radical que presenta la fórmula siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
56
en la que n, R^{5}, R^{6}, R^{8}, Z, Q^{2}, Q^{1}, R^{9}, R^{10} y R^{11} son como se ha definido anteriormente.
La combinación estable puede representarse mediante un éster de la fórmula siguiente: \Omega-CO-O-\Delta*, en la que \Omega y \Delta* son como se ha definido anteriormente, dicha combinación estable se obtiene poniendo en contacto un ácido con un alcohol quiral que presenta la fórmula HO-\Delta*, en la que \Delta* es tal como se ha definido anteriormente, de acuerdo con el procedimiento de la invención.
La combinación estable puede representarse mediante una amida que presenta cualquiera de entre las fórmulas \Omega-CO-NH-\Delta* ó \Omega-CO-N-\Delta*, en las que \Omega y \Delta* son como se ha definido anteriormente, obteniendo dicha combinación estable al poner en contacto un ácido con amina quiral primaria o secundaria que presenta las fórmulas H_{2}N-\Delta* ó NN=\Delta*, en las que \Delta* es tal como se ha definido anteriormente, de acuerdo con el procedimiento de la invención.
La combinación estable puede representarse mediante un tioéster con la fórmula siguiente: \Omega-CO-S-\Delta*, en la que \Omega y \Delta* son tal como se han definido anteriormente, obteniendo dicha combinación estable poniendo en contacto un ácido con un tiol quiral que presenta la fórmula HS-\Delta*, en la que \Delta* es tal como se ha definido anteriormente, según el procedimiento de la invención.
Finalmente, la combinación iónica puede representarse mediante una sal preparada simplemente poniendo en contacto el ácido con una amina quiral que presenta cualquiera de las siguientes tres fórmulas:
\Omega-CO-O^{\bullet}[NH-\Delta\text{*}]^{+}
\Omega-CO-O^{\bullet}[NH_{2}-\Delta\text{*}]^{+}
\Omega-CO-O^{\bullet}[NH_{3}-\Delta\text{*}]^{+}
en las que \Omega y \Delta* son tal como se han definido anteriormente.
La introducción de una combinación basada en un enlace lábil se consigue mediante cromatografía con ayuda de una fase estacionaria quiral.
La introducción de una combinación basada en un enlace lábil interatómico o intermolecular, dentro de una red cristalina, se consigue mediante cristalización fraccionada iniciada por un precursor quiral.
El alcohol quiral HO-\Delta* es:
-
una (-)-quinina que presenta la fórmula siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
57 
\vskip1.000000\baselineskip
-
o bien (-)- ó (+)-metil mandelato que presenta las fórmulas siguientes:
\vskip1.000000\baselineskip
58 
\vskip1.000000\baselineskip
-
o bien (-)- ó (+)-mentol que presenta las fórmulas siguientes:
\vskip1.000000\baselineskip
59 
\vskip1.000000\baselineskip
La amina quiral H_{2}N-\Delta* es (-)- ó (+)-efedrina que presenta las fórmulas siguientes:
\vskip1.000000\baselineskip
60 
\vskip1.000000\baselineskip
La presente invención se refiere a los siguientes compuestos nuevos:
-
el (-)-quinidil (2'R)-(-)-anhidro-homoharringtonato y el (-)-quinidil (2'S)-(-)-anhidro-homoharringtonato correspondiente respectivamente con las dos fórmulas siguientes:
61
-
el (-)-mentil (2'R)-(-)-anhidro-homoharringtonato y el (-)-mentil (2'S)-(-)-anhidro-homoharringtonato correspondientes respectivamente con las dos fórmulas siguientes:
62
-
el (-)-metilmandelil (2'R)-(-)-anhidro-homoharringtonato y el (-)-metilmandelil (2'S)-(-)-anhidro-homoharringtonato correspondiente, respectivamente, a las dos fórmulas siguientes:
63
-
el (-)-efedrinio (2'R)-(-)-anhidro-homoharringtonato y el (-)-efedrinio (2'S)-(-)-anhidro-homoharringtonato, co-rrespondientes, respectivamente, a las dos fórmulas siguientes:
64
Según el procedimiento de la invención, cuando el ácido carboxílico es el ácido carboxílico heterocicloalcano terciario que presenta la fórmula siguiente:
65
en la que n, Z, R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido anteriormente, dicho ácido se obtiene mediante tratamiento con disolvente aprótico o prótico, finalmente en presencia de aditivo de ciclización y/o agente deshidratante, siendo dicho tratamiento finalmente apoyado con el transporte físico del agua formada.
-
o bien un ácido etilénico terciario abierto que presenta la fórmula siguiente:
66
en la que m, Z, R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido anteriormente.
-
o bien un éster que presenta la fórmula siguiente:
67
en la que m se encuentra comprendida entre 1 y 8, Z, R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido anteriormente, R^{12} no es un radical CTX tal como se ha definido anteriormente y representa R^{5} y/o un grupo protector de ácidos y/o un grupo quiral;
seguidamente se elimina R^{12} posteriormente, sea mediante saponificación sólo o mediante hidrogenolisis, o más generalmente mediante el procedimiento existente en el estado de la técnica para eliminar grupos protectores de ácidos.
En ausencia de aditivo de ciclización, la reacción de ciclización tiene lugar mediante calentamiento sólo.
Preferentemente, el aditivo de ciclización es un ácido prótico, tal como ácido sulfónico o fórmico, o un ácido prótico, incluido en forma inmovilizada.
En la etapa de preparación del ácido descrita anteriormente, Z es un átomo de oxígeno.
El objetivo de la presente invención también es la preparación de los siguientes compuestos nuevos y los compuestos nuevos:
-
el ácido carboxílico heterocicloalcano terciario, incluidas las sales y cada una de sus formas enantioméricas puras o en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
68
en la que n, Z, R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido anteriormente y R^{5} no es hidrógeno;
excepto los compuestos en los que Z es un átomo de oxígeno y:
1º)
n=0 y R^{5} no es un radical -CH_{2}CO_{2}H ó -CH_{2}CO_{2}CH_{3};
2º)
n=0 y R^{5} es un radical -CH_{2}CO_{2}CH_{3} y R_{6}=R_{8}=metilo;
3º)
n=2 y simultáneamente R^{6}=R^{8}=metilo y R^{5}=OMe o hidroxilo;
4º)
n=2 y simultáneamente R^{6}=R^{8}=metilo y R^{5} es radical CH_{2}CO_{2}CH_{3} o metilo;
5º)
n=3 y simultáneamente R^{6} es hidroxilo y R^{8} es metilo y R^{5} es un radical -CH_{2}CO_{2}CH_{3};
6º)
n=3 y simultáneamente R^{6}=R^{8}=metilo y R^{5}=OH ó metilo o etilo;
7º)
cuando n=2 ó 3 y R^{5}=CH_{3}, R^{6} y R^{8} independientemente el uno del otro representan H ó Me;
8º)
cuando n=3 y R^{6}=R^{8}=H, R^{5} representa un grupo etilo o metilo;
9º)
cuando n=3 y R^{6}=R^{8}=H, R^{5} representa -CH(CH_{3})=CHCH_{3}, -CH_{2}CH(CH_{3})=CH_{2}, -CH_{2}CH=CH_{2} ó un grupo 3-ciclohexenilo;
10º)
cuando n=2, R^{5} representa etilo, n-pentilo o fenilo, R^{6}=R^{8}=H.
-
el ácido carboxílico oxacicloalcano terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras o en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
69
en la que n está comprendida entre 0 y 8, R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido anteriormente, pero no son hidrógeno simultáneamente,
excepto los compuestos correspondientes a las excepciones nº 1 a nº 10, definidas anteriormente.
-
el ácido carboxílico heterocicloalcano terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
70
en la que n está comprendida entre 0 y 8, Z, R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido anteriormente, R^{5} no es hidrógeno y R^{12} no es un radical CTX y es tal como se ha definido anteriormente;
excepto los compuestos en los que Z es un átomo de oxígeno y que presenta las excepciones nº 1 a nº 10 definidas anteriormente.
-
el hemiéster carboxílico oxacicloalcano terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
71
en la que n está comprendida entre 0 y 8, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido anteriormente,
excepto los compuestos que presentan las excepciones nº 1 a nº 10 definidas anteriormente.
-
el hemiéster carboxílico oxacicloalcano terciario o ácido anhidro-homoharringtónico, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras en forma racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
72
en la que n está comprendida entre 0 y 8, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido anteriormente, R^{12} es un radical hidrocarbono diferente de CTX tal como se ha definido anteriormente,
excepto los compuestos que corresponden a las excepciones 1 a 10 definidas anteriormente.
-
el hemiéster carboxílico oxacicloalcano terciario o ácido anhidro-harringtónico, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
73
-
el hemiéster carboxílico oxacicloalcano terciario o ácido anhidro harringtónico, incluidas sus sales y cada una de las formas enantioméricas puras en mezcla racémica o en composición variable, que corresponde a la fórmula siguiente:
-
el ácido carboxílico oxacicloalcano terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
74
en la que n y R^{5} son tal como se han definido anteriormente,
excepto los compuestos que presentan las excepciones nº 1 a nº 10 definidas anteriormente.
-
el ácido carboxílico oxacicloalcano terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
75
en la que n está comprendida entre 1 y 8.
-
el ácido carboxílico oxacicloalcano terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
76
en la que n está comprendida entre 0 y 8.
-
el ácido carboxílico oxacicloalcano terciario o ácido oxanhidroneoharringtónico, incluidas las sales y cada unas de las formas enantioméricas puras en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
77
-
el ácido carboxílico oxacicloalcano terciario o ácido oxanhidro-neohomoharringtónico, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
78
-
el ácido carboxílico oxacicloalcano terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
79
-
el ácido carboxílico alqueno terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
80
en la que m está comprendida entre 1 y 8, R^{6} y R^{8} son como se ha definido anteriormente, pero no son hidrógeno simultáneamente, y R^{5} no es hidrógeno ni heteroátomo.
-
el ácido carboxílico alqueno terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
81
en la que m, R^{6}, R^{8} y R^{12} son tal como se han definido anteriormente y m' está comprendida entre 1 y 8.
-
el ácido carboxílico alqueno terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
82
en la que m está comprendida entre 1 y 8, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido anteriormente pero no son hidrógeno.
-
el ácido carboxílico alqueno terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
83
-
el ácido carboxílico alqueno terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
84
-
el ácido carboxílico alqueno terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
85
en la que m está comprendida entre 1 y 8, preferentemente m=1.
-
los anhídridos de ácido de fórmula general \Omega-CO-O-CO-\Omega, en la que \Omega es tal como se ha definido anteriormente.
-
los anhídridos mixtos de ácido de fórmula general \Omega-CO-A, en la que A es un radical seleccionado de entre los sustituyentes siguientes:
metoxiformiloxi de fórmula MeOCOO-,
trifluoroacetiloxi de fórmula CF_{3}COO-,
alquilsulfonoxi de fórmula RSO_{3}-,
fosfoxi de fórmula (RO)_{2}PO-,
halofosfoxi de fórmula ROP(Cl)O-,
trialquilsililoxi de fórmula R_{3}SiO-,
fórmulas en las que R es alquilo,
dimetil-cloruro de formamidinio de fórmula: 
\vskip1.000000\baselineskip
86
aciloxi-bromuro de piridinio de fórmula:
\vskip1.000000\baselineskip
87
y 2,4,6-triclorobenzoiloxi.
-
el anhídrido mixto que presenta la fórmula siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
88 
\vskip1.000000\baselineskip
-
los cloruros de ácido definidos anteriormente, que presentan la fórmula general \Omega-CO-X, en la que X es halógeno.
-
los anhídridos cíclicos que presentan la fórmula siguiente:
89
en la que n, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido anteriormente.
-
el anhídrido cíclico que presenta la fórmula siguiente:
90
En el procedimiento según la invención, el cefalotaxano portador de cadena lateral se purificó en forma de sal mediante cromatografía utilizando una fase estacionaria hidrofóbica similar a fase reversa y una fase móvil sin disolvente orgánico, tal como una solución de pH ajustado a entre 2 y 4,5 con un tampón preparado con un ácido y una sal alcalina o amónica y uno o varios aditivos, tal como un atenuador de efecto silanol, generando dicha sal cefalotaxina a partir de ácido mineral en forma de clorohidrato, sulfato, fosfato, nitrato, perclorato o a partir de un ácido orgánico en forma de tartrato, malato, citrato o lactato.
En el procedimiento según la invención, el cefalotaxano portador de cadena lateral se purificó mediante una etapa de purificación cromatográfica de una homoharringtonina natural, semisintética o sintética con uso farmacéutico, que presenta la fórmula siguiente:
91
con el fin de eliminar la impureza relacionada no deseada denominada 2'-epi-homoharringtonina, resultante de:
a)
un procedimiento semisintético con introducción de un ácido homoharringtónico sintético de pureza enantiomérica inadecuada, mostrado la impureza generada la configuración absoluta que presenta la fórmula siguiente:
92
b)
un procedimiento biosintético en la planta, en la que se ha introducido una cefalotaxina de pureza enantiomérica inadecuada, o en forma de artefacto mediante racemización parcial del fragmento cefalotaxina, mostrando la impureza generada propiedades cromatográficas estrictamente idénticas a las de un sistema no quiral, con una configuración absoluta contraria a la anteriormente indicada (enantiómero) y que presenta la fórmula siguiente:
93
especialmente utilizando uno de los sistemas cromatográficos siguientes:
A)
Fase estacionaria: alquilo o fenilo o alquilfenilo o fenilalquil-silano, preferentemente n-octadecilsilano,
B)
Fase móvil: agua-tetrahidrofurano, agua-metanol, agua-acetonitrilo o tampón pH 2 a 6,5 en sustitución de agua, o cualquier otra fase móvil con selectividad equivalente.
El procedimiento de purificación y control cromatográfico de una homoharringtonina natural, semisintética o sintética permite compensar la doble insuficiencia de la pureza enantiomérica de los semiprecursores, tanto en la cadena lateral precursora (dicho ácido homoharringtónico) como en la cefalotaxina, generándose dichos precursores independientemente mediante procedimiento de síntesis total o semisíntesis o mediante un procedimiento natural dentro de la planta (biosíntesis), de hecho la retirada del enantiómero no natural de la homoharringtonina muestra una configuración absoluta opuesta, mediante la utilización de una fase estacionaria quiral a escala preparativa.
Se ilustra la presente invención sin limitación implícita mediante los esquemas siguientes.
Esquema 1 en el anexo proporciona la definición y las fórmulas de las harringtoninas principales.
Esquema 2 recapitula el procedimiento de preparación de las harringtoninas de la técnica anterior.
Esquema 3 proporciona la secuencia de síntesis de la homoharringtonina que presenta el Ejemplo 25, en el que A representa un grupo 2,4,6-triclofenilo, R representa un metilo y R' representa un fragmento cefalotaxilo.
Esquema 4 representa una variante del procedimiento según la invención, más exactamente, la semisíntesis de harringtoninas mediante ácidos carboxílicos oxacicloalcano. Los sustituyentes R^{6}, R^{7}, R^{8}, R, A, CTX, X y las letras n y m indicadas en el presente esquema se definen en la descripción.
Las definiciones siguientes se aplica a todo el presente documento.
Alcaloides: sustancias naturales presentes en el reino vegetal que permiten por lo menos un nitrógeno básico cíclico o acíclico (extensiones permitidas, reino animal, amina primaria; extensiones rechazadas: nitrógeno amídico debido a que no es básico, por ejemplo taxanos) y que muestran propiedades farmacológicas con frecuencia pronunciadas.
Alcaloide libre o básico: alcaloide que muestra una amina terciaria en una forma no ionizada generalmente existente a pH alcalino y soluble en disolvente orgánicos apróticos.
Sal de alcaloide o simplemente "sal": forma ionizada de alcaloide con función amina que muestra una carga formal positiva y un contraión negativo, de hecho más soluble en agua y en disolventes próticos y menos soluble en disolventes apróticos.
Cefalotaxanos 1 (ver Esquema 1): este término genérico indica la estructura básica, mostrando diversos sustituyentes oxigenados (éter alifático o aromático, alcohol esterificado o libre, enol y/o fenol sustituido o libre, éter con puente, más generalmente todo sustituyente que habitualmente se encuentra en estado natural para este tipo de compuestos).
Cefalotaxinas 2: este término genérico indica cefalotaxanos que posiblemente muestran por lo menos uno de los sustituyentes indicados anteriormente, con excepción de una cadena lateral.
Cefalotaxina 2: una cefalotaxina mayoritariamente presente en el género Cephalotaxus.
Cefalotaxoides: este término genérico indica una cefalotaxina no natural.
Harringtoninas: este término genérico indica un cefalotaxano que muestra por lo menos un grupo alcohol, un fenol o un enol, esterificado con una cadena lateral y posiblemente por uno de los sustituyentes indicados anteriormente.
Harringtonina (la harringtonina): una de los alcaloides principales que portan una cadena lateral en posición 3.
Harringtoides: este término genérico indica una harringtonina no natural, en la que la cadena lateral es un radical éster con por lo menos 3 átomos de carbono.
Cadena lateral de los harringtoides: este término genérico indica un éster formado entre uno de los grupos hidroxilo y un ácido carboxílico con por lo menos 3 átomos de carbono que permite habitualmente un alcohol terciario en posición á y un sustituyente hidrofóbico en posición \Omega en relación al grupo carboxilo.
Adaptación de la nomenclatura empírica aditiva y substractiva a los cefalotaxanos
Los prefijos en la nomenclatura común habitualmente se utilizan en la literatura para indicar variaciones estructurales de la cadena lateral de las harringtoninas (ver Ejemplos en la tabla del Esquema 1). La cadena lateral de referencia es la de harringtonina que se muestra en la fórmula 3b, n=2, R=H, R^{7}=H, R^{6}=2-hidroxiisopropilo.
Homo:
1 carbono adicional.
Bis-homo:
2 carbonos adicionales.
Nor:
una cadena lateral con 1 carbono menos.
Iso:
una cadena lateral con metileno que porta un grupo hidroxilo en el sitio de un carbono yuxtaterminal.
Desoxi:
el grupo hidroxilo de carbono yuxtaterminal es sustituido por un hidrógeno.
Anhidro:
los dos grupos hidroxilo terciarios pierden una molécula de agua, proporcionando el heterociclo oxigenado saturado correspondiente.
Neo:
R^{6} es un grupo fenilo en el sitio de 2-hidroxiisopropilo.
HPLC:
cromatografía líquida de alto rendimiento.
RMN:
resonancia magnética nuclear.
Los ejemplos siguientes, que se proporcionan sin limitación implícita, ilustran la presente invención.
Ejemplo 1 Preparación de etil 2-metoxicarbonilmetil-2-hidroxi-6-metilhepta-5-enoato o etil 6-desoxi-5,6-deshidrohomoharringtonato
94
1º) Preparación del intermediario oxalato
Se añadió gota a gota 5-bromo-2-metil-pent-2-eno (15,6 g, 95,6 mmoles) a una mezcla agitada de magnesio (2,32 g, 95,5 mmoles) (activada con cristal de yodo adicional) en tetrahidrofurano anhidro (75 ml). El inicio de la reacción se vio acompañado de sobrecalentamiento vigoroso y reflujo de la mezcla de reacción. El reflujo se mantuvo hasta que había reaccionado la mayor parte del magnesio y la mezcla de reacción se diluyó con tetrahidrofurano anhidro (150 ml). A una mezcla bajo agitación de dietil oxalato (10,8 ml, 80 mmoles) en tetrahidrofurano anhidro (75 ml) se añadieron el reactivo de Grignard resultante a -78ºC a lo largo de un periodo de 20 minutos. Se mantuvo la agitación a -78ºC\pm5ºC durante 30 minutos y después se elevó la temperatura hasta -10ºC a lo largo de un periodo de 1,5 horas. La mezcla se desactivó con solución al 15% de cloruro de amonio (300 ml) y se evaporó a sequedad. La capa orgánica separada se lavó con una solución de cloruro de amonio al 15% (300 ml) y se evaporó a sequedad. La capa acuosa se extrajo con éter (2 x 300 ml). Las capas orgánicas se combinaron con el concentrado y se lavaron con solución salina concentrada (300 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad. El producto crudo, tras purificación en un aparato de destilación en serie, proporcionó un aceite incoloro (10,3 g, 70%). El \alpha-cetoéster mostraba las características siguientes:
95
IR (ATR) (cm^{-1}): 2790; 2916; 1725; 1068.
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
5,08 (1H, t, J=7,2, HC=); 4,32 (2H, q, J=7,1, OCH_{2}); 2,86 (2H, t, J=7,2, CH_{2}CO); 2,32 (2H, q, J=7,2, CH_{2}-C=); 1,68 (3H, s, CH_{3}); 1,62 (3H, s, CH_{3}); 1,37 (3H, t, J=7,1, OCH_{2}CH_{3}).
2º) Preparación del producto del título
Se añadió acetato de metilo anhidro (0,6 ml, 7,5 mmoles) a una solución comercial bajo agitación de bis(trimetilsililamida) de litio 1M en tetrahidrofurano (7,5 ml, 7,5 mmoles) a -78ºC a lo largo de un periodo de 1 minuto y se dejó reaccionar a -78\pm5ºC durante 20 minutos. A una mezcla agitada de etil 2-oxo-6-metilhepta-5-enoato preparada anteriormente (480 mg, 2,6 mmoles) en tetrahidrofurano anhidro (10 ml) a -78ºC se añadió el enolato de litio a lo largo de un periodo de 5 minutos y la mezcla resultante se agito a -78ºC\pm5ºC durante 30 minutos. Tras el seguimiento en CCM, se retiró del baño de congelación y la mezcla se desactivó con solución al 15% de cloruro amónico (10 ml). La capa orgánica separada se lavó con solución al 15% de cloruro amónico (10 ml) y se evaporó a sequedad. Las capas acuosas se extrajeron con éter (2 x 10 ml). Las capas orgánicas se combinaron con el concentrado y se lavaron con solución salina concentrada (10 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad. El producto crudo resultante (1,13 g) se purificó mediante cromatografía de columna (ciclohexano/acetato de etilo (95:5), sílice (15-40 \mum) 38 g), proporcionando un aceite incoloro (482 mg, 72%). El producto obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
IR (ATR) (cm^{-1}): 3508; 2969; 2919; 1732; 1438; 1193.
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
5,05 (1H, t, J=7,1, HC=); 4,27 (2H, q, J=7,1, OCH_{2}); 3,70 (1H, s, OH); 3,68 (3H, s, OCH_{3}); 2,92 y 2,70 (2H, 2d, J_{AB}=16,1, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 2,12 (1H, m); 1,88 (1H, m); 1,72 (2H, m); 1,67 (3H, s, CH_{3}); 1,58 (3H, s, CH_{3}); 1,31 (3H, t, J=7,1, OCH_{2}CH_{3}).
Ejemplo 2 Preparación de carboxilato de etil 2-metoxicarbonilmetil-2-hidroxi-6,6-dimetil-2-tetrahidropirano o etil anhidrohomoharringtonato
96
1º) Método A
Se añadió ácido p-toluenosulfónico (2,06 g, 10,8 mmoles) a una solución bajo agitación de éster etilénico resultante del Ejemplo 1 (2,8 g, 10,8 mmoles) en tolueno (30 ml) y la mezcla resultante se agitó a 65ºC durante 5 horas. Tras enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se hidrolizó con solución saturada de hidrogenocarbonato sódico. La capa acuosa se extrajo con éter (3 x 50 ml) y las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con solución salina concentrada (100 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad. El producto crudo resultante (2,8 g) se purificó mediante cromatografía de columna (ciclohexano/éter (95:5), sílice (15-40 \mum) 110 g), proporcionando un aceite incoloro (1,94 g, 69%). El producto obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
4,21 (2H, m, O\underline{CH_{2}}CH_{3}); 3,64 (3H, s, OCH_{3}); 2,85 y 2,60 (2H, 2d, J_{AB}=14,0, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 2,30 (1H, dt, J=13,3 y 3,7); 1,87 (1H, qt, J=13,8 y 3,6); 1,62 (1H, m); 1,51 (2H, m); 1,43 (1H, m); 1,31 (3H, t, J=7,1, OCH_{2}\underline{CH_{3}}); 1,22 (3H, s, CH_{3}); 1,13 (3H, s, CH_{3}).
2º) Método B
A una solución bajo agitación de éster etilénico resultante del Ejemplo 1 (50 mg, 0,19 mmoles) en metanol (30 ml) se añadió ácido hidroclórico 1 N (0,5 ml) y la mezcla resultante se sometió a agitación a 65ºC durante 15 horas. Tras la dilución con diclorometano, la capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó a sequedad. El producto crudo resultante (32 mg) se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano, después diclorometano/metanol (9:1), sílice (15-40 \mum) 2,2 g), proporcionando el intermediario diol esperado (20 mg, 37%). El producto obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
97
IR (ATR) (cm^{-1}): 3490; 2966; 1731; 1193; 1177; 1152.
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
4,28 (2H, q, J=7,2, OCH_{2}); 3,75 (1H, s, OH); 3,68 (3H, s, OCH_{3}); 2,93 y 2,69 (2H, 2d, J_{AB}=16,2, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 1,70 (2H, m); 1,53 (1H, m); 1,44 (1H, m); 1,30 (3H, t, J=7,1, OCH_{2} CH_{3}); 1,20 (3H, s, CH_{3}); 1,19 (3H, s, CH_{3}).
A una solución bajo agitación de diol preparada anteriormente (19 mg, 0,069 mmoles) en 1,2-dicloroetano (1,4 ml) se añadió cloruro de cinc anhidro (10 mg, 0,069 mmoles) y la mezcla resultante se agitó a 80ºC durante 1,5 horas. Tras enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se lavó con agua, después con solución salina concentrada y la capa acuosa se extrajo tres veces con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad, proporcionando diéster cíclico (7 mg, 40%). El producto obtenido de esta manera mostraba características idénticas a las obtenidas con el método A.
3º) Método C
Una solución de éster etilénico resultante del Ejemplo 1 (400 mg, 1,55 mmoles) en una mezcla de ácido fórmico (4 ml) y agua (4 ml) se sometió a agitación a 50ºC durante 15 horas. Tras eliminar el ácido fórmico en el vacío, el residuo se trató con solución al 5% de hidrogenocarbonato sódico. La capa acuosa se extrajo tres veces con diclorometano, después las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad. El producto crudo resultante (375 mg) se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano, después diclorometano/metanol (98:2), sílice (15-40 \mum) 16 g), proporcionando un aceite incoloro (235 mg, 55%). El producto obtenido de esta manera mostraba características iguales al obtenido mediante el método A. La ciclización del diol obtenido d esta manera con cloruro de cinc, tal como en el Ejemplo 2 método B anteriormente, proporcionó diéster cíclico que mostraba características idénticas a las obtenidas mediante el método A.
Ejemplo 3 Preparación de ácido 2-carboximetil-2-hidroxi-6-metilhepta-5-enoico o ácido O-demetil-6-desoxi-5,6-deshidrohomoharringtónico
98
Se añadió una mezcla de hidróxido potásico (14,2 g, 252 mmoles) en agua (170 ml) a una solución bajo agitación de éster etilénico resultante del Ejemplo 1 (10,95 g, 42 mmoles) en metanol (300 ml) y la mezcla resultante se agitó bajo reflujo durante 1,5 horas. Tras enfriar a temperatura ambiente y eliminar el metanol en el vacío, el residuo se trató con agua (10 ml) y la capa acuosa resultante se extrajo con éter (250 ml). Tras acidificar (pH 1) con ácido hidroclórico al 10%, la capa acuosa se extrajo con éter (3 x 250 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad, proporcionando un sólido blanco (8,66 g, 95%). El producto crudo obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
IR (ATR) (cm^{-1}): 3500; 3019; 2966; 2931; 1716; 1691; 1656; 1219; 1199; 1111.
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
5,06 (1H, t, J=6,9, HC=); 3,04 y 2,78 (2H, 2d, J_{AB}=17,1, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 2,25-1,20 (4H, m, 2 x CH_{2}); 1,67 (3H, S, CH_{3}); 1,60 (3H, s, CH_{3}).
Ejemplo 4 Preparación de ácido 2-carboximetil-6,6-dimetil-2-tetrahidro-piranocarboxílico o ácido O-demetil-anhidro-homoharringtónico
99
1º) Método A
Se añadió una mezcla de hidróxido de potasio (4,2 g, 75 mmoles) en agua (45 ml) a una solución bajo agitación de diéster cíclico resultante del Ejemplo 2 (1,94 g, 7,5 mmoles) en etanol (75 ml) y la mezcla resultante se agitó bajo reflujo durante 5 horas. Tras enfriar a temperatura ambiente y eliminar el etanol en el vacío, el residuo se trató con agua (10 ml) y la capa acuosa resultante se extrajo con éter (2 x 50 ml). Tras acidificar con ácido hidroclórico 2 N (35 ml), la capa acuosa se saturó con cloruro sódico, después se extrajo con éter (3 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución salina concentrada (2 x 100 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad, proporcionando un aceite amarillo pálido (1,66 g, 98%). El producto crudo obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
IR (ATR) (cm^{-1}): 2974, 2941, 1709; 1215.
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
3,01 y 2,95 (2H, 2d, J_{AB}=16,1, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 1,89 (1H, m); 1,75 (2H, m, CH_{2}); 1,58 (3H, m); 1,31 (6H, s, 2 x CH_{3}).
2º) Método B
A una solución bajo agitación de diácido etilénico resultante del Ejemplo 3 (50 mg, 23 mmoles) en tolueno anhidro (500 \mul) se añadió cloruro de cinc (6 mg, 0,04 mmoles) y la mezcla resultante se sometió a agitación a 80ºC durante 15 horas. Tras enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se hidrolizó con ácido hidroclórico al 10% y la capa acuosa resultante se extrajo tres veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad, proporcionando un sólido amarillo pálido (38 mg, 76%). El producto crudo obtenido de esta manera mostraba características idénticas a las obtenidas mediante el método A.
3º) Método C
Una solución de diácido etilénico resultante del Ejemplo 3 (50 mg, 0,23 mmoles) en una mezcla de ácido fórmico (500 \mul) y agua (500 \mul) se sometió a agitación a 60ºC durante 3 horas. Tras enfriar a temperatura ambiente y eliminar el ácido fórmico en el vacío, el residuo se trató con acetato de etilo. La capa orgánica resultante se lavó con ácido hidroclórico al 10% y la capa acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad, proporcionando un sólido amarillo pálido (50 mg, 100%). El producto crudo obtenido de esta manera mostraba características idénticas a las obtenidas mediante el método A.
Ejemplo 5 Preparación de ácido 2-metoxicarbonilmetil-2-hidroxi-6-metilhepta-5-enoico o ácido 6-desoxi-5,6-deshidrohomoharringtónico
100
Una mezcla de diácido etilénico resultante del Ejemplo 3 (500 mg, 2,3 mmoles) y una solución comercial de complejo trifluoruro de boro-metanol en metanol (4,5 ml, BF3 al 12% p/p) se sometió a agitación a 18\pm5ºC durante 16 horas. Tras la adición lenta de la mezcla de reacción a solución saturada de hidrogenocarbonato sódico (50 ml), la capa acuosa resultante se lavó con éter (50 ml), se acidificó (pH 1) con ácido hidroclórico 2 N (0,5 ml) y se extrajo con éter (3 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad, proporcionando un aceite viscoso de color amarillo (310 mg, 58%). El producto crudo obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
IR (ATR) (cm^{-1}): 3483; 2954; 1731; 1197; 1173.
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
5,06 (1H, m, HC=); 4,12 (2H, br.s, CO_{2}H + OH); 3,73 (3H, s, OCH_{3}); 2,99 y 2,74 (2H, 2d, J_{AB}=16,7, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 2,16 (1H, m); 1,98 (1H, m); 1,85-1,60 (4H, m); 1,67 (3H, s, CH_{3}); 1,60 (3H, s, CH_{3}).
Ejemplo 6 Preparación de ácido 2-metoxicarbonilmetil-6,6-dimetil-2-tetrahidropiranocarboxílico o ácido anhidrohomoharringtónico
101
1º) Preparación a partir de diácido cíclico
Una mezcla de diácido cíclico resultante del Ejemplo 4 (1,6 mg, 7,4 mmoles) y una solución comercial de complejo trifluoruro de boro-metanol en metanol (15,5 ml, BF3 al 12% p/p) se sometió a agitación a 18\pm5ºC durante 15 horas. Tras la adición lenta de la mezcla de reacción a solución saturada de hidrogenocarbonato sódico (50 ml), la capa acuosa resultante se lavó con éter (2 x 50 ml) (ver anejo de preparaciones, posteriormente), se acidificó (pH 1) con ácido hidroclórico 2 N (15 ml) y se extrajo con éter (3 x 75 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad, proporcionando un aceite amarillo (1,17 g, 69%). El producto crudo obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
IR (ATR) (cm^{-1}): 2974; 2951; 1740; 1718; 1437.
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
3,70 (3H, s, OCH_{3}); 3,03 y 2,98 (2H, 2d, J_{AB}=16,1, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 1,82 (1H, m); 1,74 (3H, m); 1,62 (1H, m); 1,48 (1H, m); 1,31 (3H, s, CH_{3}); 1,26 (3H, s, CH_{3}).
Apéndice de preparaciones a) Obtención de diéster
102
Las capas orgánicas combinadas indicadas anteriormente se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad, proporcionando una mezcla de diéster y monoéster (396 mg). Tras el tratamiento de esta mezcla con solución saturada de hidrogenocarbonato sódico, la capa acuosa se extrajo con éter y la capa orgánica resultante se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó a sequedad, proporcionando un aceite (292 mg, 17%). El producto crudo obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
3,75 (3H, s, OCH_{3}); 3,65 (3H, s, OCH_{3}); 2,85 y 2,61 (2H, 2d, J_{AB}=14,1, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 1,85 (1H, m); 1,62 (1H, m); 1,50 (2H, m); 1,43 (1H, m); 1,21 (3H, s, CH_{3}); 1,11 (3H, s, CH_{3}).
b) Obtención de regio-hemiéster mediante mono-saponificación del diéster anteriormente indicado
103
A una solución bajo agitación del diéster cíclico anteriormente indicado (285 mg, 1,17 mmoles) en metanol (11 ml) se añadió una mezcla de hidróxido de potasio (654 mg, 11,7 mmoles) en agua (7 ml) y la mezcla resultante se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 30 minutos. Tras la eliminación del metanol en el vacío, el residuo se trató con agua (7 ml) y la capa acuosa resultante se extrajo tres veces con éter. Tras la acidificación (pH 1) con solución al 10% de ácido hidroclórico, se extrajo la capa acuosa. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad. El producto crudo resultante (236 mg) se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano/metanol (95:5), sílice (15-40 \mum) 6,5 g), proporcionando un sólido amarillo pálido (220 mg, 82%). El producto obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
IR (KBR) (cm^{-1}): 3421; 2960; 2929; 1744; 1705; 1209.
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
3,76 (3H, s, OCH_{3}); 2,76 y 2,67 (2H, 2d, J_{AB}=15,3, \underline{CH_{2}}CO_{\underline{2}}); 2,36 (1H, m, JAB=13,7, J_{\underline{3-4}}=3,5; J_{\underline{3-5}}=1,2, H-3_{\underline{eq}}); 1,85 (1H, m, J_{\underline{AB}} \sim J_{\underline{ax-ax}}=14,0, J_{\underline{ax-eq}}=3,7, H-4_{\underline{ax}}); 1,67 (1H, m, J_{\underline{AB}}=14,1, J_{\underline{4-3,5}}=3,9, H-4_{\underline{eq}}); 1,59 (1H, m, J_{\underline{AB}}=13,4, J_{\underline{5-4}}=3,6, J_{\underline{5-3}}=1,0, H-5_{\underline{eq}}); 1,49 (1H, m, J_{\underline{AB}} \sim J_{\underline{ax-ax}}=13,2, J_{\underline{ax-eq}}=4,0, H-3_{\underline{ax}}); 1,42 (1H, m, J_{\underline{AB}} \sim J_{\underline{ax-ax}}=13,2, J_{\underline{ax-eq}}=4,5, H-5_{\underline{ax}}); 1,33 (3H, s, CH_{3}); 1,16 (3H, s, CH_{3}).
2º) Preparación a partir de hemiéster etilénico
A una solución bajo agitación de hemiéster etilénico resultante del Ejemplo 5 (4,6 g, 20 mmoles) en tolueno (125 ml), se añadió ácido p-toluenosulfónico (3,8 g, 20 mmoles) y la mezcla resultante se sometió a agitación a 65ºC durante 5 horas. Tras enfriar a temperatura amiente, la mezcla se hidrolizó con solución saturada de hidrogenocarbonato sódico (100 ml). La capa acuosa se lavó con éter (2 x 100 ml) y las capas orgánicas se descartaron (para eliminar el diéster resultante de la reacción). Tras la acidificación (pH 1) con ácido hidroclórico 1 N (35 ml), la capa acuosa se saturó con cloruro sódico y seguidamente se extrajo con éter (3 x 100 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución salina concentrada (100 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad.
El producto crudo resultante (3,9 g) se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano/metanol (99:1), sílice (15-40 \mum), 160 g), proporcionando un aceite amarillo (3,1 g, 67%). El producto crudo obtenido de esta manera mostraba características idénticas a las obtenidas anteriormente.
Ejemplo 7 Preparación de anhídrido cíclico de ácido 2-carboximetil-2-hidroxi-6-metilhepta-5-enoico
104
Una mezcla de diácido cíclico resultante del Ejemplo 4 (245 mg, 1,1 mmoles) y anhídrido acético (4 ml) se sometió a agitación bajo reflujo durante 16 horas. Tras evaporar la mezcla de reacción en el vacío, el residuo se trató con tolueno y se evaporó nuevamente en alto vacío, proporcionando un aceite viscoso de color amarillo (189 mg, 84%). El producto obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
IR (ATR) (cm^{-1}): 2976; 2951; 1732; 1188; 1170
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
3,02 (2H, s, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 1,98 (2H, m, CH_{2}); 1,8-1,5 (4H, m, CH_{2}); 1,31 (3H, s, CH_{3}); 1,22 (3H, s, CH_{3}).
Ejemplo 8 Preparación de (-)-cefalotaxil pivalato 
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105
1º) Método con utilización de anhídrido mixto
A una mezcla bajo agitación de ácido piválico (100 mg, 0,98 mmoles) en tolueno anhidro (2 ml) se añadió a temperatura ambiente trietilamina (secada sobre hidróxido de potasio) (138 \mul, 0,98 mmoles) y cloruro de 2,4,6-triclobenzoilo (153 \mul, 0,98 mmoles). Tras agitar a 18\pm5ºC durante 1,5 horas (bajo control de la desaparición del ácido inicial con infrarrojos), se añadió 4-dimetilaminopiridina (139 mg, 1,14 mmoles), la mezcla de reacción se dejó reaccionar durante 5 minutos y se añadió cefalotaxina (103 mg, 0,33 mmoles). Tras agitar a 18\pm5ºC durante 15 horas, la mezcla de reacción se filtró sobre papel y se diluyó con éter (5 ml). La capa orgánica resultante se lavó sucesivamente con agua (5 ml), con solución saturada de hidrogenocarbonato sódico (5 ml), con agua nuevamente (5 ml) y seguidamente se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó en el vacío. El producto crudo resultante se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano/metanol (98:2), sílice (15-40 \mum)), proporcionando un sólido (130 mg, 93%). El producto obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
6,60 (1H, s, H-17*); 6,58 (1H, s, H-14*); 5,84 y 5,83 (2H, 2d, J_{AB}=1,5, OCH_{2}O); 5,83 (1H, d, H-3); 5,02 (1H, s, H-1); 3,77 (1H, d, J_{4-}3=9,6, H-4); 3,69 (3H, s, OCH_{3}); 3,21 (1H, m, J_{AB}=14,0, J=12,5, 7,8, H-11b); 3,09 (1H, m, H-8a); 2,94 (1H, td, J=11,5, 7,1, H-10a); 2,57 (2H, m, H-8b + H-10b); 2,35 (1H, dd, J_{AB}=14,5, J=6,9, H-11a); 2,03 (1H, td, J_{AB}=12,1, J=9,7, H-6_{A}); 1,89 (1H, m, J_{AB}=12,1, J =7,9, 4,0, H-6_{B}); 1,75 (2H, m, CH_{2}-7); 0,83 (9H, s, C(CH_{3})_{3}).
2º) Método con utilización de DCC
A una mezcla bajo agitación de ácido piválico (50 mg, 0,49 mmoles) en tolueno anhidro (2 ml) mantenida en una atmósfera inerte se añadió 1,3-diciclohexilcarbodiimida (130 mg, 0,63 mmoles). Tras agitar durante 10 minutos a temperatura ambiente, se añadieron cefalotaxina (50 mg, 0,16 mmoles) y pirrolidinopiridina (24 mg, 0,16 mmoles). Tras agitar a 18\pm5ºC durante 2 horas, después a 50ºC durante 15 horas (bajo control de la reacción en CCM, eluyente diclorometano/metanol; 9:1), la mezcla de reacción se filtró por un filtro de vidrio sinterizado, el material retenido se lavó con tolueno (5 ml) y el filtrado se evaporó en el vacío. El producto crudo resultante (130 mg) se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano/metanol (9:1), sílice (15-40 \mum) 3 g), proporcionando un sólido blanco (36 mg, 57%). El producto crudo obtenido de esta manera mostró características idénticas a las obtenidas a través del anhídrido mixto.
Ejemplo 9 Preparación de carboxilato de (-)-cefalotaxil-2-metoxicarbonilmetil-6,6-dimetil-2-tetrahidropirano o anhidrohomoharringtonina y carboxilato de metil 2-cefalotaxiloxi-carbonilmetil-6,6-dimetil-2-tetrahidropirano, a partir de anhídrido cíclico resultante del ejemplo 7
106
A una mezcla bajo agitación de anhídrido resultante del Ejemplo 7 (50 mg, 0,24 mmoles) en diclorometano anhidro (0,5 ml) a temperatura ambiente se añadieron sucesivamente piridina (250 \mul, 3,1 mmoles), pirrolidinopiridina (10 mg, 0,07 mmoles) y cefalotaxina (76,4 mg, 0,24 mmoles). Tras agitar a 18\pm5ºC durante 48 horas, se añadieron sucesivamente 1,3-diciclohexilcarbodiimida (100 mg, 0,48 mmoles), metanol (60 \mul, 1,5 mmoles), pirrolidinopiridina (10 mg, 0,07 mmoles) y tolueno (1 ml). Tras agitar a 18\pm5ºC durante 24 horas (bajo control de la reacción en CCM), la mezcla de reacción se filtró y el filtrado se evaporó en el vacío. El producto crudo resultante se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano/metanol (99:1), sílice (15-40 \mum)), proporcionando el producto esperado (12 mg, dos diastereómeros) contaminados con regio-isómero* (dos diastereómeros) resultantes de la apertura del anhídrido. El producto esperado obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
6,61 (1H, s, H-17*); 6,57 (1H, s, H-14*); 5,91 (J_{3-4}=9,8) y 5,84 (2H, 2d, H-3); 5,84 y 5,79 (2d, J_{AB}=1,4, OCH_{2}O); 5,84 y 5,82 (2d, J_{AB}=1,4, OCH_{2}O); 5,04 y 5,01 (1H, 2s, H-1); 3,79 y 3,78 (1H, 2d, J_{4-}3=9,6, H-4); 3,70 y 3,65 (3H, 2s, OCH_{3}); 3,59 (3H, s, OCH_{3}); 3,15 (1H, m, H-11\beta); 3,09 (1H, m, H-8\alpha); 2,94 (1H, m, H-10\alpha); 2,58 (2H, m, H-8\beta + H-10\beta); 2,37 (1H, m, H-11\alpha); 2,16 y 1,81 (2d, J_{AB}=14,4, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 2,13 y 1,66 (2d, J_{AB}=14,3, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 2,02 (1H, m, H-6_{A}); 1,88 (1H, m, H-6_{B}); 1,75 (2H, m, CH_{2}-7); 1,8-1,2 (6H, m, 3 x CH_{2}); 1,11 y 1,02 (2s, 2 x CH_{3}); 1,10 y 1,04 (2s, 2 x CH_{3}).
El regio-isómero anteriormente indicado también se obtuvo a partir de las condiciones siguientes:
A una mezcla bajo agitación del hemiéster resultante del Ejemplo 6 método C (100 mg, 0,43 mmoles) en tolueno anhidro (1 ml) mantenido en una atmósfera inerte a temperatura ambiente se añadió 1,3-diciclohexilcarbodiimida (120 mg, 0,58 mmoles). Tras agitar durante 5 minutos, se añadió cefalotaxina (45 mg, 0,15 mmoles) y pirrolidinopiridina (21 mg, 0,14 mmoles). Tras agitar a 35ºC durante 45 minutos, después a 8ºC durante 15 horas (bajo control de la reacción en CCM, eluyente diclorometano/metanol; 9:1), la mezcla de reacción se filtró, el material retenido se lavó con tolueno (5 ml) y el filtrado se evaporó en el vacío. El producto crudo resultante se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano/metanol (98:2), sílice (15-40 \mum) 4 g), proporcionando el producto esperado (23 mg, 30%, dos diastereómeros). El producto obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
6,61 y 6,58 (1H, 2s, H-17*); 6,57 y 6,53 (1H, 2s, H-14*); 5,89 y 5,86 (2d, J_{AB}=1,5, OCH_{2}O); 5,87 y 5,85 (2d, J_{AB}=1,5, OCH_{2}O); 5,76 (1H, d, J_{3-4}=9,4, H-3); 5,02 (1H, 2s, H-1); 3,73 y 3,72 (1H, 2d, J_{4-3}=9,4, H-4); 3,70 y 3,68 (3H, 2s, OCH_{3}); 3,69 y 3,65 (3H, 2s, OCH_{3} CH_{3} CH_{3}); 3,15 (1H, m, H-11\alpha); 3,07 (1H, m, H-8 \alpha); 2,90 (1H, m, H-10\alpha); 2,74 y 1,95 (2d, J_{AB}=15,3, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 2,56 (2H, m, H-8\beta + H-10\beta); 2,33 (1H, m, H-11 \alpha); 2,28 y 2,23 (2d, J_{AB}=15,4, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 2,16 (m, H-3'_{eq}); 1,97 (1H, m, H-6_{A}); 1,9-1,1 (5H, m, CH_{2}); 1,86 (1H, m, H-6_{B}); 1,73 (2H, m, CH_{2}-7); 1,14 (3H, s, CH_{3}); 1,03 (3H, s, CH_{3}).
Ejemplo 10 Preparación de carboxilato de (-)-cefalotaxil 2-metoxicarbonilmetil-6,6-dimetil-2-tetrahidropirano o anhidrohomoharringtonina, a partir de ácido tetrahidropiranocarboxílico resultante del ejemplo 6
FÓRMULA DEL EJEMPLO 9
1º) Método con utilización de anhídrido mixto
A una mezcla bajo agitación del hemiéster resultante del Ejemplo 6 (50 mg, 0,22 mmoles) en tolueno anhidro (1 ml) a temperatura ambiente se añadió trietilamina (secada sobre hidróxido de potasio) (29,4 \mul, 0,22 mmoles) y cloruro de 2,4,6-triclorobenzoilo (32,7 \mul, 0,22 mmoles). Tras agitar a 25ºC durante 20 horas (controlando la desaparición del ácido inicial mediante infrarrojos), se añadió 4-dimetilaminopiridina (29 mg, 0,24 mmoles), la mezcla de reacción se dejó reaccionar durante 5 minutos y se añadió cefalotaxina (16,5 mg, 0,05 mmoles). Tras agitar a 25ºC durante 24 horas, la mezcla de reacción se filtró sobre papel y se diluyó con éter (5 ml). La capa orgánica resultante se lavó sucesivamente con agua (5 ml), solución saturada de hidrogenocarbonato sódico (5 ml) y nuevamente con agua (5 ml), seguidamente se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó en el vacío. El producto crudo resultante se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano/metanol (98:2), sílice (15-40 \mum)), proporcionando el producto esperado (16 mg, 56%, dos diastereómeros). El producto obtenido de esta manera mostraba características idénticas a las obtenidas en el Ejemplo 9.
2º) Método con utilización de DCC
A una mezcla bajo agitación del hemiéster resultante del Ejemplo 6 (100 mg, 0,43 mmoles) en tolueno anhidro (1 ml) mantenida en una atmósfera inerte a temperatura ambiente se añadió 1,3-diciclohexilcarbodiimida (180 mg, 0,87 mmoles). Tras agitar durante 10 minutos, se añadieron cefalotaxina (165 mg, 0,52 mmoles) y pirrolidinopiridina (77 mg, 0,52 mmoles). Tras agitar a 18\pm5ºC durante 18 horas, se añadió éter, la mezcla de reacción se filtró sobre un filtro de vidrio sinterizado y el material retenido se lavó con éter. La capa orgánica resultante se lavó sucesivamente con solución al 10% de hidrogenocarbonato sódico, con agua, seguidamente se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó en el vacío. El producto crudo resultante se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano/metanol (98:2), sílice (15-40 \mum) 9 g), proporcionando un sólido (110 mg, 48%). El producto obtenido de esta manera mostraba características idénticas a las obtenidas en el Ejemplo 9.
Ejemplo 11 Preparación de carboxilato de (-)-cefalotaxil (2'RS)-2-metoxicarbonilmetil-6,6-dimetil-2-tetrahidropirano o anhidrohomoharringtonina a partir del ácido etilénico resultante del ejemplo 6
FÓRMULA DEL EJEMPLO 9
1º) Método A
Acoplamiento con ciclización utilizando anhídrido mixto
A una mezcla bajo agitación del éster etilénico resultante del Ejemplo 5 (50 mg, 0,22 mmoles) en tolueno anhidro (1 ml) a temperatura ambiente se añadió trietilamina (secada sobre hidróxido de potasio) (29 \mul, 0,22 mmoles) y cloruro de 2,4,6-triclorobenzoilo (34 \mul, 0,22 mmoles). Tras agitar durante 30 minutos (controlando la desaparición del ácido inicial mediante infrarrojos), se añadió 4-dimetilaminopiridina (30 mg, 0,25 mmoles), la mezcla de reacción se dejó reaccionar durante 5 minutos y se añadió cefalotaxina (31 mg, 0,1 mmoles). Tras agitar a 18\pm5ºC durante 65 horas, la mezcla de reacción se filtró sobre papel y se diluyó con éter (5 ml). La capa orgánica resultante se lavó sucesivamente con agua (5 ml), con solución saturada de hidrogenocarbonato sódico (5 ml), nuevamente con agua (5 ml), después se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó en el vacío. El producto crudo resultante se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano/metanol (98:2), sílice (15-40 \mum)), proporcionando el producto esperado (46 mg, 96%, dos diastereómeros 40/60). El producto obtenido de esta manera mostraba características idénticas a las obtenidas en el Ejemplo 9.
2º) Método B
Utilización de DCC, acoplamiento con ciclización
A una mezcla bajo agitación de ácido etilénico resultante del Ejemplo 5 (50 mg, 0,22 mmoles) en tolueno anhidro (2 ml) mantenida en una atmósfera inerte a temperatura ambiente se añadió 1,3-diciclohexilcarbodiimida (270 mg, 1,31 mmoles). Tras agitar durante 5 minutos, se añadieron cefalotaxina (70 mg, 0,22 mmoles) y pirrolidinopiridina (32 mg, 0,22 mmoles). Tras agitar a 18\pm5ºC durante 65 horas (controlando la reacción en CCM, eluyente diclorometano/metanol, 9:1), la mezcla de reacción se filtró sobre un filtro de vidrio sinterizado, el material retenido se lavó con tolueno (5 ml) y el filtrado se evaporó en el vacío. El producto crudo resultante se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano/metanol (98:2), sílice (15-40 \mum) 9 g), proporcionando un sólido (40 mg, 35%). El producto obtenido de esta manera mostraba características iguales a las obtenidas en el Ejemplo 9.
Ejemplo 12 Preparación de (-)-cefalotaxina purificada a partir de extracto alcaloídico total de Cephalotaxus sp 
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107 
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1º) Preparación de extracto de alcaloides totales
En un tanque de 30 litros, se mezclaron hojas trituradas (frescas o secas) de Cephalotaxus sp (10 kg) con metanol (20 l) y se maceraron durante 65 horas, después se percolaron (50 l). La solución se filtró y se concentró en el vacío hasta un volumen de 5 l. La solución concentrada se acidificó con una solución acuosa al 6% de ácido tartárico. A continuación, la solución hidroalcohólica se lavó con diclorometano (5 x 5 l) para eliminar los materiales grasos y pigmentos. La solución acuosa se basificó con amonio acuoso (2,5%) hasta pH 9, después se extrajo con diclorometano (5 x 5 l). Tras concentrar bajo presión reducida, se recuperó el extracto crudo de alcaloides en forma de sólido cristalino de color blanco (24,5 g). El contenido en cefalotaxina era del 71% (HPLC).
2º) Aislamiento y purificación cromatográfica de (-)-cefalotaxina a partir del extracto crudo de alcaloides
El extracto crudo anterior se disolvió en fase móvil (trietilamina (1,55/1.000) en agua desionizada y ácido ortofosfórico para ajusta el pH a 3. La solución se filtró, después se inyectó en un cromatógrafo líquido de alto rendimiento preparativo dotado de compresión axial y bomba de alta presión (fase estacionaria: n-octadecilsilano, 15 \mum, porosidad 100, 1 kg). La elución se llevó a cabo a un caudal de 0,2 l/min. Se llevó a cabo el seguimiento del contenido de las fracciones con un detector de U.V. y mediante TLC. La fracción retenida finalmente se analizó mediante HPLC, después se combinó, se alcalinizó con solución acuosa al 2,5% de amonio y se extrajo con diclorometano (4 x 400 ml). Tras la concentración bajo presión reducida, se obtuvo una resina que, tras triturar con metanol, proporcionó (-)-cefalotaxina (18 g) en forma de sólido cristalino de color blanco (pureza HPLC=99,8%). El producto obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
[\alpha]_{D}^{20}: -174,1 (c=0,20; CHCl_{3})
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
6,68 (1H, s, H-17*); 6,65 (1H, s, H-14*); 5,91 y 5,90 (2H, 2d, J_{AB}=1,5, OCH_{2}O); 4,93 (1H, s, H-1); 4,77 (1H, dd, J_{3-4}=9,4, J_{3-OH}=3,4, H-3); 3,73 (3H, s, OCH_{3}); 3,68 (1H, d, J_{4-3}=9,4, H-4); 3,35 (1H, m, J_{AB}=14,3, J=12,2 y 7,9, H-11\beta); 3,08 (1H, m, J=9,1 y 4,9, H-8\alpha); 2,92 (1H, td, J=11,6 y 7,1, H-10\alpha); 2,59 (2H, m, H-8\alpha + H-10\alpha); 2,35 (1H, dd, J_{AB}=14,4, J=6,9, H-11\alpha); 2,02 (1H, td, J_{AB}=12,1, J=9,7, H-6_{A}); 1,87 (1H, m, J_{AB}=12,1, J=7,9 y 4,4, H-6_{B}); 1,74 (2H, m, CH_{2}-7); 1,62 (1H, d, J_{3-OH}=3,5, 3-OH).
Ejemplo 13 Preparación de alcoolato de litio de (-)-cefalotaxina (atrapado como derivado 3-O-acetilo) 1º) Método del butil-litio
Se añadió una solución comercial de butil-litio en hexano (0,44 ml, 1,6 M en hexano, 0,70 mmoles) a una mezcla bajo agitación de (-)-cefalotaxina (200 mg, 0,63 mmoles) en tetrahidrofurano anhidro (6,8 ml). La mezcla de reacción se mantuvo a -60ºC durante 20 minutos, después a -48ºC durante 30 minutos, se añadió anhídrido acético (90 \mul, 0,095 mmoles) a lo largo de un periodo de 8 minutos y se mantuvo la agitación a -48ºC durante 20 minutos, después a 0ºC durante 1 hora. La mezcla se desactivó con solución saturada de cloruro amónico (5 ml), después se extrajo con acetato de etilo (3 x 8 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución salina concentrada (15 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio y se secaron a sequedad. El producto crudo resultante se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano/metanol (98:2), sílice (15-40 \mum) 6 g), proporcionando un sólido blanco (60 mg, 26%). El producto obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
6,60 (1H, s, H-17*); 6,57 (1H, s, H-14*); 5,89 y 5,86 (2H, 2d, J_{AB}=1,4, OCH_{2}O); 5,80 (1H, d, J_{3-4}=9,3, H-3); 5,05 (1H, s, H-1); 3,77 (1H, d, J_{4-3}=9,4, H-4); 3,72 (3H, s, OCH_{3}); 3,23 (1H, m, J_{AB}=14,3, J=12,3 y 7,9, H-11\beta); 3,08 (1H, m, H-8\alpha); 2,92 (1H, td, J=11,5 y 7,1, H-10\alpha); 2,57 (2H, m, H-8\beta + H-10\beta); 2,36 (1H, dd, J_{AB}=14,4, J=7,0, H-11\alpha); 2,02 (1H, td, J_{AB}=12,1 J=9,7, H-6_{A}); 1,88 (1H, m, J_{AB}=12,1, J=8,0 y 4,0, H-6_{B}); 1,74 (2H, m, CH_{2}-7); 1,57 (3H, s, OAc).
2º) Método de la bis-(trimetilsilil)amida de litio (LHDS)
Se añadió una solución comercial de bis-(trimetilsililamida) de litio 1M en tetrahidrofurano (0,95 ml, 0,95 mmoles) a una solución bajo agitación de (-)-cefalotaxina (200 mg, 0,63 mmoles) en tetrahidrofurano anhidro a -40ºC. Tras agitar durante 5 minutos, se añadió anhídrido acético (90 \mul, 0,95 mmoles) y la mezcla de reacción se trató con un método similar al indicado anteriormente en 1º). El producto obtenido de esta manera mostraba características idénticas a las obtenidas anteriormente en el método del butil-litio.
3º) Método de la diisopropilamida de litio (LDA)
Se añadió una solución comercial de diisopropilamida de litio 2 M en tetrahidrofurano (0,35 ml, 0,70 mmoles) a una solución bajo agitación de (-)-cefalotaxina (200 mg, 0,63 mmoles) en tetrahidrofurano anhidro (6,8 ml) a -60ºC a lo largo de un periodo de 20 minutos. Tras agitar a -60ºC durante 20 minutos, después a -48ºC durante 30 minutos, se añadió anhídrido acético (90 \mul, 0,95 mmoles). La solución se agitó a -48ºC durante 20 minutos, seguidamente a 0ºC durante 1 hora y la mezcla de reacción se trató utilizando el método anteriormente indicado en 1º). El producto obtenido de esta manera mostraba características idénticas a las obtenidas en el método anterior del butil-litio.
4º) Método del hidruro sódico
A una mezcla bajo agitación de hidruro sódico (1,5 g) en dimetilformamida recién destilada (3 ml) se añadieron a -60ºC una solución de cefalotaxina (200 mg, 0,63 mmoles) en dimetilformamida (3 ml) y anhídrido acético (90 \mul, 0,95 mmoles). Tras agitar a temperatura ambiente durante 24 horas, la mezcla de reacción se trató a 0ºC con agua (3 ml) y se extrajo con éter (3 x 5 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron en el vacío. El producto obtenido de esta manera mostraba características idénticas a las obtenidas anteriormente en el método del butil-litio.
Ejemplo 14 Preparación de carboxilato de (-)-cefalotaxil 2-metoxicarbonilmetil-6,6-dimetil-2-tetrahidropirano o anhidrohomoharringtonina, mediante alcoolato de litio de cefalotaxina
FÓRMULA DEL EJEMPLO 9
A una solución bajo agitación de alcoolato de litio de (-)-cefalotaxina (158 mg, 0,5 mmoles) en tetrahidrofurano anhidro preparado según el Ejemplo 13 se añadió anhídrido mixto resultante del Ejemplo 10 (0,75 mmoles) a -50ºC a lo largo de un periodo de 10 minutos. Tras agitar a -50ºC durante 30 minutos, seguidamente a 0ºC durante 2 horas, la mezcla de reacción se desactivó con solución saturada de cloruro amónico (5 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 10 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución salina saturada (15 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron en el vacío. El producto crudo resultante se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano/metanol (98:2), sílice (15-40 \mum) 7 g), proporcionando un sólido blanco (48 mg). El producto obtenido de esta manera mostraba características idénticas a las obtenidas en el Ejemplo 9.
Ejemplo 15 Preparación de mezcla diastereomérica de carboxilatos de (-)-quinidil 2-metoxicarbonil-metil-6,6-dimetil-2-tetrahidropirano, a partir del ácido tetrahidropiranocarboxílico resultante del ejemplo 6
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1º) Método A
Utilización de anhídrido mixto
A una mezcla bajo agitación del ácido resultante del Ejemplo 6 (458 mg, 1,99 mmoles) en tolueno anhidro (8 ml) a temperatura ambiente se añadió trietilamina (secada sobre hidróxido potásico) (270 \mul, 1,92 mmoles) y cloruro de 2,4,6-triclorobenzoilo (300 \mul, 1,91 mmoles). Tras agitar durante 3 horas (controlando la desaparición del ácido inicial con infrarrojos), se añadió 4-dimetilaminopiridina (352 mg, 2,88 mmoles), la mezcla de reacción se dejó reaccionar durante 5 minutos y se añadió quinina (936 mg, 2,88 mmoles). Tras agitar a 18\pm5ºC durante 65 horas, la mezcla de reacción se filtró sobre papel y se diluyó con éter (15 ml). La capa orgánica resultante se lavó sucesivamente con agua (15 ml), con solución saturada de hidrogenocarbonato sódico (15 ml) y nuevamente con agua (15 ml), seguidamente se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó en el vacío. El producto crudo resultante se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano/metanol (99:1), sílice (15-40 \mum) 32 g), proporcionando el producto esperado (930 mg, 84%, dos diastereómeros 50/50). El producto obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
8,73 (1H, m, H-2_{qn}), 8,0 y 7,98 (1H, 2d, J=9,2, H-8_{qn}); 7,63 y 7,50 (1H, 2br.s); 7,45 (br.s) y 7,39 (d, J=4,5) (1H, H-3_{qn}); 7,36 (1H, dd, J=9,1 y 2,6, H-7_{qn}); 6,50 (1H, br.s); 5,89 (1H, m, =CH_{qn}); 5,03 (2H, m, =CH_{2qn}); 3,99 y 3,97 (3H, 2s, OCH_{3}); 3,54 y 3,33 (3H, 2br.s, OCH_{3}); 3,2-1,0 (m, 7xCH_{2} + 3CH); 2,92 y 2,67 (2d, J_{AB}=14,9, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 2,87 (d, J_{AB}=14,8, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 1,17 y 0,99 (2s, 2 x CH_{3}); 1,03 y 0,42 (2br.s, 2 x CH_{3}).
2º) Método B
DCC
A una mezcla bajo agitación de ácido tetrahidrocarboxílico resultante del Ejemplo 6 (200 mg, 0,87 mmoles) en tolueno anhidro (4 ml) mantenida en una atmósfera inerte a temperatura ambiente se añadió 1,3-diciclohexilcarbodiimida (239 mg, 1,16 mmoles). Tras agitar durante 5 minutos, se añadieron quinina (94 mg, 0,29 mmoles) y pirrolidinopiridina (43 mg, 0,29 mmoles). Tras agitar a 18\pm5ºC durante 65 horas (controlando la reacción en CCM, eluyente diclorometano/metanol, 9:1), la mezcla de reacción se filtró sobre un filtro de vidrio sinterizado, el material retenido se lavó con tolueno (5 ml) y el filtrado se evaporó en el vacío. El producto crudo resultante se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano/metanol (9:1), sílice (15-40 \mum)), proporcionando el producto esperado (96 mg, 60%, dos diastereómeros 50/50). El producto obtenido de esta manera mostraba características idénticas a las obtenidas anteriormente.
Ejemplo 16 Preparación de carboxilato de (-)-mentil 2-metoxicarbonilmetil-6,6-dimetil-2-tetrahidro-pirano, ácido tetrahidropirano-carboxílico resultante del ejemplo 6
109
A una mezcla bajo agitación del ácido resultante del Ejemplo 6 (50 mg, 0,22 mmoles) en tolueno anhidro (1 ml) mantenida en una atmósfera inerte a temperatura ambiente se añadió 1,3-diciclohexilcarbodiimida (90 mg, 0,44 mmoles). Tras agitar durante 5 minutos, se añadieron (-)-mentol (68 mg, 0,44 mmoles) y pirrolidinopiridina (64 mg, 0,44 mmoles). Tras agitar a 30ºC durante 1 hora, seguidamente a 8ºC durante 15 horas (control de reacción en CCM, eluyente diclorometano/metanol; 9:1), la mezcla de reacción se filtró sobre un filtro de vidrio sinterizado, el material retenido se lavó con tolueno (5 ml) y el filtrado se evaporó en el vacío. El producto crudo resultante se purificó mediante cromatografía de columna (ciclohexano/acetato de etilo (95:5, después 90:10), sílice (15-40 \mum) 4 g), proporcionando el producto esperado (40 mg, 50%, dos diastereómeros 60/40). El producto obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
4,68 (1H, m, H-1_{mon}); 3,64 (3H, s, OCH_{3}); 2,84 y 2,64 (2d, J_{AB}=14,6, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 2,83 y 2,63 (2d, J_{AB}=14,3, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 2,29 (1H, m, H-3_{eq}); 2,1-0,8 (m, CH y CH_{2}); 1,21 (3H, 2s, CH_{3}); 1,17 y 1,16 (3H, 2s, CH_{3}); 0,9 y 0,88 (6H, 2d, J=6,4, 2 x CH_{3mon}); 0,74 y 0,72 (3H, 2d, J=6,8, CH_{3mon}).
Ejemplo 17 Preparación de carboxilato de (-)-metil mandelato 2-metoxicarbonilmetil-6,6-dimetil-2-tetrahidroprano a partir del ácido tetrahidropiranocarboxílico resultante del ejemplo 6
110
A una mezcla bajo agitación del ácido tetrahidropiranocarboxílico resultante del Ejemplo 6 (226 mg, 0,98 mmoles) en tolueno anhidro (4 ml) mantenido en una atmósfera inerte a temperatura ambiente se añadió 1,3-diciclohexilcarbodiimida (261 mg, 1,2 mmoles). Tras agitar durante 5 minutos, se añadieron mentil mandelato (53 mg, 0,32 mmoles) y pirrolidinopiridina (47 mg, 0,32 mmoles). Tras agitar a 18\pm 5ºC durante 12 horas, la mezcla de reacción se filtró sobre un filtro de vidrio sinterizado, el material retenido se lavó con tolueno (5 ml) y el filtrado se evaporó en el vacío. El producto crudo resultante se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano/metanol (9:1), sílice (15-40 \mum)), proporcionando un aceite incoloro (64 mg, 17%, dos diastereómeros). El producto obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
7,47 (2h, m, Ph); 7,38 (3H, m, Ph); 5,96 (1H, s, CH); 3,73 y 3,72 (3H, 2s, OCH_{3}); 3,54 (3H, 2s, OCH_{3}); 2,88 y 2,72 (2d, J_{AB}=14,4, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 2,85 y 2,65 (2d, J_{AB}=14,2, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 2,35 (1H, m, H-3_{eq}); 2,0-1,15 (5H, m, CH_{2}); 1,23 y 1,22 (3H, 2s, CH_{3}); 1,19 y 1,07 (3H, 2s, CH_{3}).
Ejemplo 18 Separación de (-)-quinil (2'R)-anhidrohomoharringtonato y (-)-quinil (2'S)-anhidrohomoharringtonato a partir de la mezcla diastereomérica resultante del ejemplo 15
Se sometió a HPLC preparativa una mezcla diastereomérica de (-)-quinil (2'R)-anhidrohomoharringtonato y (-)-quinil (2'S)-anhidrohomoharringtonato (5 g). Dicha mezcla se disolvió en tampón (trietilamina (1,55/1.000) en agua desionizada y ácido ortofosfórico para ajustar el pH a 3. La solución se filtró, después se inyectó en un cromatógrafo líquido de alto rendimiento de tipo preparativo dotado de compresión axial y bomba de alta presión (fase estacionaria: n-octadecilsilano, 15 \mum, porosidad 100, 1 kg; fase móvil: tampón/acetonitrilo 70/30). La elución se llevó a cabo a un caudal de 0,2 l/min. El contenido de las fracciones se siguió con un detector de U.V. y mediante TLC. La fracción retenida se analizó finalmente mediante HPLC y después se combinó, se alcalinizó con solución acuosa al 2,5% de amonio y se extrajo con diclorometano (4 x 400 ml). Tras concentrar bajo presión reducida, se obtuvieron los dos isómeros separados en forma de sólidos cristalinos blancos, correspondientes a (-)-quinil (2'R)-anhidrohomoharringtonato (2 g) y (-)-quinil (2'S)-anhidrohomoharringtonato (2,2 g). Los productos obtenidos de esta manera mostraban las características siguientes:
1º) Diastereómero 2'R
111
IR (película de NaCl) (cm^{-1}): 2947; 2871; 1743; 1626; 1509.
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
8,73 (1H, d, J=4,4, H-2_{qn}), 8,0 (1H, d, J=9,2, H-8_{qn}); 7,50 (1H, br.s); 7,39 (1H, d, J=4,5, H-3_{qn}); 7,36 (1H, dd, H-7_{qn}); 6,39 (1H, br.s); 5,88 (1H, m, =CH_{qn}); 5,03 (2H, m, =CH_{2qn}); 3,97 (3H, s, OCH_{3}); 3,31 (3H, br.s, OCH_{3}); 3,5-1,2 (m, 7 x CH_{2} + 3CH); 2,86 y 2,64 (2H, 2d, J_{AB}=15,0, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 1,17 (3H, s, CH_{3}); 0,99 (3H, s, CH_{3}).
2º) Diastereómeros 2'S
112
IR (película de NaCl) (cm^{-1}): 2947; 2871; 1743; 1626; 1509.
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
8,74 (1H, d, J=4,4, H-2_{qn}); 7,99 (1H, d, J=9,2, H-8_{qn}); 7,65 (1H, br.s, H-3_{qn}); 7,44 (1H, br.s, H-5_{qn}); 7,36 (1H, dd, J=9,2 y 2,7, H-7_{qn}); 6,55 (1H, br.s); 5,89 (1H, m, =CH_{qn}); 5,05 (2H, m, =CH_{2qn}); 3,99 (3H, s, OCH_{3}); 3,54 (3H, s, OCH_{3}); 3,1-1,0 (m, 7 x CH_{2} + 3CH); 2,91 y 2,67 (2H, 2d, J_{AB}=15,0, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 1,03 (3H, br.s, CH_{3}); 0,44 (3H, br.s, CH_{3}).
Ejemplo 19 Preparación del ácido (2R)-anhidrohomoharringtónico a partir del (-)-quinil (2'R)-anhidrohomoharringtonato resultante del ejemplo 18
113
1º) Obtención mediante hidrogenolisis
A una solución bajo agitación de quinil (2'R)-anhidroharringtonato (100 mg, 0,19 mmoles) en acetato de etilo (11 ml) se añadió 10% de paladio sobre carbono (40 mg). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente bajo presión de hidrógeno (50 p.s.i.) durante 20 horas, y tras el control en CCM, la mezcla de reacción se filtró y la capa orgánica resultante se trató con solución saturada de hidrogenocarbonato sódico. La capa acuosa se lavó con acetato de etilo y tras acidificar con ácido hidroclórico 1 N, se extrajo con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución salina concentrada, se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad, proporcionando un sólido de color amarillo (20 mg, 50%). El producto obtenido de esta manera presentaba las características siguientes:
[\alpha]_{D}^{20}: -23 (c=0,38; CHCl_{3}).
IR (película de NaCl) (cm^{-1}): 2974; 2951; 1740; 1718; 1437.
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz): los espectros de ^{1}H-RMN del producto obtenido de esta manera eran iguales a los indicados en el Ejemplo 6-1.
2º) Obtención mediante saponificación total seguida de metilación selectiva
Se añadió una mezcla de hidróxido de potasio (396 mg, 7,1 mmoles) en agua (8 ml) a una solución bajo agitación de quinil (2'R)-anhidroharringtonato (396 g, 0,72 mmoles) en etanol (15 ml) y la mezcla resultante se agitó bajo reflujo durante 24 horas. Tras enfriar a temperatura ambiente y eliminar el etanol en el vacío, el residuo se trató con agua (10 ml) y la capa acuosa resultante se extrajo con éter (4 x 15 ml). Tras acidificar (pH 1) con ácido hidroclórico 2 N y saturar con cloruro sódico, la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 15 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad, proporcionando un sólido amarillo (110 mg, 72%). El diácido intermediario obtenido de esta manera presentaba las características siguientes:
[\alpha]_{D} ^{20}: -14 (c=0,54; CHCl_{3})
IR (película de NaCl) (cm^{-1}): 2975; 2941; 1716; 1217.
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz): los espectros de ^{1}H-RMN del producto obtenido de esta manera eran iguales a los indicados en el Ejemplo 4.
Una mezcla del diácido (2R)-cíclico anteriormente indicado (110 mg, 0,5 mmoles) y una solución comercial de complejo trifluoruro de boro-metanol en metanol (1,1 ml, BF3 al 12% p/p) se agitó a 18\pm5ºC durante 15 horas. Tras la adición lenta de la mezcla de reacción a una solución saturada de hidrogenocarbonato sódico (20 ml), la capa acuosa resultante se lavó con éter (3 x 15 ml), se acidificó (pH 1) con ácido hidroclórico 2 N y se extrajo con éter (3 x 15 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad, proporcionando un aceite viscoso de color amarillo (69 mg, 59%). El producto obtenido de esta manera mostraba características idénticas a las obtenidas en el método 1º) anteriormente indicado.
Ejemplo 20 Preparación de ácido (2S)-anhidrohomoharringtónico a partir del (-)-quinil (2'R)-anhidrohomoharringtonato resultante del ejemplo 18 
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114 
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1º) Obtención mediante hidrogenolisis
A una solución bajo agitación de quinil (2'S)-anhidroharingtonato (100 mg, 0,19 mmoles) en acetato de etilo (11 ml) se añadió 10% de paladio sobre carbono (40 mg). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente bajo presión de hidrógeno (50 p.s.i.) y tras el control en CCM, la mezcla de reacción se filtró y la capa orgánica resultante se trató con solución saturada de hidrogenocarbonato sódico. La capa acuosa se lavó con acetato de etilo y tras acidificar con ácido hidroclórico 1 N, se extrajo con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución salina concentrada, se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad, proporcionando un sólido amarillo (23 mg, 53%). El producto obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
[\alpha]_{D}^{20}: +30 (c=0,36; CHCl_{3})
IR (película de NaCl) (cm^{-1}): 2975; 2951; 1740; 1718; 1439.
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz): los espectros de ^{1}H-RMN del producto obtenido de esta manera eran iguales a los indicados en el Ejemplo 6-1.
2º) Obtención mediante saponificación total seguida de metilación selectiva
Una mezcla de hidróxido de potasio (430 mg, 7,7 mmoles) en agua (9 ml) se añadió a una solución bajo agitación de quinil (2'S)-anhidroharringtonato (447 g, 0,81 mmoles) en etanol (16 ml) y la mezcla resultante se agitó bajo reflujo durante 24 horas. Tras enfriar a temperatura ambiente y eliminar el etanol en el vacío, el residuo se trató con agua (10 ml) y la capa acuosa resultante se extrajo con éter (4 x 15 ml). Tras acidificar (pH 1) con ácido hidroclórico 2 N y saturar con cloruro sódico, la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 15 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad, proporcionando un sólido de color amarillo (140 mg, 80%). El diácido cíclico obtenido de esta manera presentaba las características siguientes:
[\alpha]_{D}^{20}: +8 (c=0,19; CHCl_{3})
IR (película de NaCl) (cm^{-1}): 2975; 2945; 1717.
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz): los espectros de ^{1}H-RMN del producto obtenido de esta manera eran iguales a los indicados en el Ejemplo 4.
Una mezcla del diácido (2S)-cíclico anteriormente indicado (136 mg, 0,62 mmoles) y una solución comercial de complejo de trifluoruro de boro-metanol en metanol (1,3 ml, BF_{3} al 12% p/p) se agitó a 18\pm5ºC durante 15 horas. Tras la adición lenta de la mezcla de reacción a una solución saturada de hidrogenocarbonato sódico (20 ml), la capa acuosa resultante se lavó con éter (3 x 15 ml), se acidificó (pH 1) con ácido hidroclórico 2 N y se extrajo con éter (3 x 15 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad, proporcionando un aceite viscoso de color amarillo (81 mg, 63%). El producto obtenido de esta manera mostraba características iguales a las obtenidas en el método 1º) anteriormente.
Ejemplo 21 Preparación de anhidrohomoharringtonina mediante esterificación de cefalotaxina con ácido (2R)-(+)-anhidrohomoharringtónico
115
A una mezcla bajo agitación del hemiéster (R) resultante del Ejemplo 19 (65 mg, 0,28 mmoles) en tolueno anhidro (1 ml) a temperatura ambiente se añadió trietilamina (secada sobre hidróxido de potasio) (38 \mul, 0,28 mmoles) y cloruro de 2,4,6-triclorobenzoilo (43 \mul, 0,28 mmoles). Tras agitar a 30ºC durante 1,5 horas (controlando la desaparición del ácido inicial con infrarrojos), se añadió 4-dimetilaminopiridina (50 mg, 0,41 mmoles), la mezcla de reacción se dejó reaccionar durante 5 minutos y se añadió cefalotaxina (129 mg, 0,41 mmoles). Tras agitar a 30ºC durante 18 horas, la mezcla de reacción se filtró sobre papel y se diluyó con éter (5 ml). La capa orgánica resultante se lavó sucesivamente con agua (5 ml), con solución saturada de hidrogenocarbonato sódico (5 ml), nuevamente con agua (5 ml) y seguidamente se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó en el vacío. El producto crudo resultante se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano/metanol (99:1), sílice (15-40 \mum)), proporcionando el producto esperado (65 mg, 43%). El producto obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
6,61 (1H, s, H-17*); 6,58 (1H, s, H-14*); 5,92 (1H, d, J3_{-4}=9,6, H-3); 5,87 y 5,79 (2H, 2s, OCH_{2}O); 5,04 (1H, br.s, H-1); 3,80 (1H, d, J_{4-3}=9,2, H-4); 3,70 (3H, s, OCH_{3}); 3,59 (3H, s, OCH_{3}); 3,12 (2H, m, H-11\beta + H-8\alpha); 2,95 (1H, m, H-10\alpha); 2,60 (2H, m, H-8\beta + H-10\beta); 2,38 (1H, m, H-11\alpha); 2,13 y 1,66 (2H, 2d, J_{AB}=14,3, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 2,02 (1H, m, H-6_{A}); 1,90 (1H, m, H-6_{B}); 1,76 (2H, m, CH_{2}-7); 1,8-1,2 (6H, m, 3 x CH_{2}); 1,10 (3H, s, CH_{3}); 1,04 (3H, s, CH_{3}).
Ejemplo 22 Preparación de anhidroepihomoharringtonina mediante esterificación de cefalotaxina con ácido (2S)-(+)-anhidrohomoharringtónico 
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116 
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A una mezcla bajo agitación del hemiéster (S) resultante del Ejemplo 20 (87 mg, 0,38 mmoles) en tolueno anhidro (1,7 ml) a temperatura ambiente se añadió trietilamina (secada sobre hidróxido de potasio) (52 \mul, 0,38 mmoles) y cloruro de 2,4,6-triclorobenzoilo (57 \mul, 0,38 mmoles). Tras agitar a 30ºC durante 1,5 horas (controlando la desaparición del ácido inicial con infrarrojos, se añadió 4-dimetilaminopiridina (70 mg, 0,57 mmoles), la mezcla de reacción se dejó reaccionar durante 5 minutos y se añadió cefalotaxina (180 mg, 0,57 mmoles). Tras agitar a 30ºC durante 18 horas, la mezcla de reacción se filtró sobre papel y se diluyó con éter (5 ml). La capa orgánica resultante se lavó sucesivamente con agua (5 ml), con solución saturada de hidrogenocarbonato sódico (5 ml), nuevamente con agua (5 ml), después se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó en el vacío. El producto crudo resultante se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano/metanol (99:1), sílice (15-40 \mum)), proporcionando el producto esperado (101 mg, 50%). El producto obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
6,61 (1H, s, H-17*); 6,57 (1H, s, H-14*); 5,84 (3H, m, H-3) + OCH_{2}O); 5,04 (1H, s, H-1); 3,78 (1H, d, J_{4-}3=9,7, H-4); 3,65 (3H, s, OCH_{3}); 3,59 (3H, s, OCH3); 3,23 (1H, m, H-11\beta); 3,09 (1H, m, H-8\alpha); 2,93 (1H, m, H-10\alpha); 2,58 (2H, m, H-8\beta + H-10\beta); 2,39 (1H, dd, J_{AB}=14,4, J=7,0, H-11\alpha); 2,16 y 1,83 (2H, 2d, J_{AB}=14,5, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 2,06 (1H, m, H-6_{A}); 1,88 (1H, m, H-6_{B}); 1,74 (2H, m, CH_{2}-7); 1,5-1,2 (6H, m, 3 x CH_{2}); 1,11 (3H, s, CH_{3}); 1,02 (3H, s, CH_{3}).
Ejemplo 23 Preparación de 6'-bromo-6'-desoxihomoharringtonina a partir de anhidrohomoharringtonina resultante del ejemplo 21 
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A una solución bajo agitación del producto resultante del Ejemplo 21 (60 mg, 0,114 mmoles) en diclorometano anhidro (300 \mul) se añadió a -10ºC una solución comercial de ácido bromhídrico en ácido acético (205 \mul, 1,02 mmoles, HBr al 30% p/p). Tras agitar a -10ºC durante 3 horas, se añadió solución saturada de hidrogenocarbonato sódico hasta pH 8. La capa acuosa resultante se extrajo tres veces con diclorometano y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad, proporcionando un aceite de color amarillo (60 mg, 87%). El producto crudo obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
IR (ATR) (cm^{-1}): 2957; 1744; 1653; 1487; 1223.
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
6,63 (1H, s, H-17*); 6,54 (1H, s, H-14*); 5,99 (1H, d, J3_{-4}=9,8, H-3); 5,87 (2H, m, OCH_{2}O); 5,05 (1H, s, H-1); 3,78 (1H, d, J_{4-3}=9,8, H-4); 3,69 (3H, s, OCH_{3}); 3,58 (3H, s, OCH_{3}); 3,54 (1H, s, 2'-OH); 3,10 (2H, m, H-11\beta + H-8\alpha); 2,94 (1H, m, H-10\alpha); 2,60 (2H, m, H-8\beta + H-10\beta); 2,39 (1H, dd, J_{AB}=14,0, J=6,8, H-11\alpha); 2,26 y 1,89 (2H, 2d, J_{AB}=16,5, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 2,03 (1H, m, H-6_{A}); 1,91 (1H, m, H-6_{A}); 1,75 (2H, m, CH_{2}-7); 1,74 (3H, s, CH_{3}); 1,72 (3H, s, CH_{3}); 1,6-1,2 (6H, m, 3 x CH_{2}).
Ejemplo 24 Preparación de 6'-bromo-6'-desoxi-epihomoharringtonina a partir de la anhidroepihomoharringtonina resultante del ejemplo 22
118
Una solución comercial de ácido bromhídrico en ácido acético (205 \mul, 1,02 mmoles, HBr al 30% p/p) se añadió a una solución bajo agitación del producto resultante del Ejemplo 22 (60 mg, 0,114 mmoles) en diclorometano anhidro (300 \mul) a 10ºC. Tras agitar a -10ºC durante 3 horas, se añadió una solución saturada de hidrogenocarbonato sódico hasta pH 8 y la capa acuosa resultante se extrajo tres veces con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad, proporcionando un aceite de color amarillo (63 mg, 91%). El producto crudo obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
IR (ATR) (cm^{-1}): 2957; 1744; 1653; 1487; 1223.
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
6,64 (1H, s, H-17*); 6,59 (1H, s, H-14*); 5,97 y 5,87 (2H, 2d, J_{AB}=1,1, OCH_{2}O); 5,95 (1H, d, J3_{-4}=9,7, H-3); 5,04 (1H, s, H-1); 3,78 (1H, d, J_{4-}3=9,7, H-4); 3,67 (3H, s, OCH_{3}); 3,66 (3H, s, OCH_{3}); 3,49 (1H, s, 2'-OH); 3,10 (2H, m, H-11\beta + H-8\alpha); 2,93 (1H, m, H-10\alpha); 2,62 y 2,54 (2H, 2d, J_{AB}=16,5, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 2,60 (2H, m, H-8\beta + H-10\beta); 2,40 (1H, m, H-11\alpha); 2,03 (1H, m, H-6_{A}); 1,89 (1H, m, H-6_{B}); 1,74 (2H, m, CH_{2}-7); 1,72 (3H, s, CH_{3}); 1,70 (3H, s, CH_{3}); 1,6-0,7 (6H, m, 3 x CH_{2}).
Ejemplo 25 Preparación de homoharringtonina a partir del 6'-bromo-6'-desoxihomoharringtonina resultante del ejemplo 23
119
1) Método A
Se añadió una solución al 5% de hidrogenocarbonato sódico (3 ml) a una solución bajo agitación del producto resultante del Ejemplo 23 (60 mg, 0,099 mmoles) en acetona (1,5 ml). Tras agitar a temperatura ambiente durante 2 horas, la mezcla de reacción se evaporó en el vacío y la capa acuosa residual se extrajo tres veces con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad. El producto crudo resultante (55 mg) se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano, después diclorometano/metanol (99:1, después 95:5), sílice (15-40 \mum) 2,75 g), proporcionando homoharringtonina (29 mg, 47%). El producto obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
[\alpha]_{D}^{20}: -110 (c=0,24; CHCl_{3})
IR (película de NaCl) (cm^{-1}): 3468; 2961; 1745; 1656; 1487; 1224; 1033.
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
6,63 (1H, s, H-17*); 6,55 (1H, s, H-14*); 6,01 (1H, d, J3_{-4}=9,8, H-3); 5,87 (2H, m, OCH_{2}O); 5,05 (1H, s, H-1); 3,78 (1H, d, J_{4-3}=9,8, H-4); 3,68 (3H, s, OCH_{3}); 3,58 (3H, s, OCH_{3}); 3,54 (1H, s, 2'-OH); 3,10 (2H, m, H-11\beta + H-8\alpha); 2,95 (1H, m, H-10\alpha); 2,59 (2H, m, H-8\beta + H-10\beta); 2,38 (1H, dd, J_{AB}=14,0, J=6,7, H-11\alpha); 2,27 y 1,90 (2H, 2d, J_{AB}=16,5, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 2,02 (1H, m, H-6_{A}); 1,90 (1H, m, H-6_{B}); 1,76 (2H, m, CH_{2}-7); 1,5-1,15 (6H, m, 3 x CH_{2}); 1,30 (1H, s, 6'-OH); 1,19 (6H, 2s, 2 x CH_{3}).
2) Método B
Una solución saturada de carbonato de calcio (3 ml) se añadió a una solución bajo agitación del producto resultante del Ejemplo 23 (60 mg, 0,099 mmoles) en acetona (3 ml). Tras agitar a temperatura ambiente durante 2 horas, el CCM indicó que se había obtenido el producto resultante del método A.
3) Método C
Una solución saturada de carbonato de bario (9 ml) se añadió a una solución bajo agitación del producto resultante del Ejemplo 23 (60 mg, 0,099 mmoles) en acetona (3 ml). Tras agitar a temperatura ambiente durante 2 horas, el CCM indicó que se había obtenido el producto resultante del método A.
4) Método D
A una solución bajo agitación del producto resultante del Ejemplo 23 (60 mg, 0,099 mmoles) en una mezcla de acetona/agua (3/2, 2,15 ml) se añadió nitrato de plata (25 mg, 0,149 mmoles). Tras agitar a temperatura ambiente durante 2 horas, el CCM indicó que se había obtenido el producto resultante del método A.
Ejemplo 26 Preparación de epihomoharringtonina
120
1º) A partir de la 6'-bromo-6'-desoxiepihomoharringtonina resultante del ejemplo 24
a) Método A
Se añadió una solución al 5% de hidrogenocarbonato sódico (3 ml) a una solución bajo agitación del producto resultante del Ejemplo 24 (60 mg, 0,099 mmoles) en acetona (1,75 ml). Tras agitar a temperatura ambiente durante 2 horas, la mezcla de reacción se evaporó en el vacío y la capa acuosa residual se extrajo tres veces con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad. El producto crudo resultante (60 mg) se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano, después diclorometano/metanol (99:1, después 97:3), sílice (15-40 \mum) 3 g), proporcionando epihomoharringtonina (29 mg, 47%). El producto obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
[\alpha]_{D}^{20}: -92 (c=0,29; CHCl_{3})
IR (película de NaCl) (cm^{-1}): 3514; 2961; 1744; 1655; 1488; 1223; 1035.
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
6,65 (1H, s, H-17*); 6,60 (1H, s, H-14*); 5,95 (1H, d, H-3); 5,95 y 5,86 (2H, 2d, OCH_{2}O); 5,05 (1H, s, H-1); 3,78 (1H, d, J_{4-3}=9,7, H-4); 3,68 (3H, s, OCH_{3}); 3,66 (3H, s, OCH_{3}); 3,52 (1H, br.s, 2'-OH); 3,13 (2H, m, H-11\beta + H-8\alpha); 2,97 (1H, m, H-10\alpha); 2,63 (2H, m, H-8\beta + H-10\beta); 2,61 y 2,52 (2H, 2d, J_{AB}=16,5, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 2,40 (1H, dd, J_{AB}=13,8, J=6,3, H-11\alpha); 2,04 (1H, m, H-6_{A}); 1,94 (1H, m, H-6_{B}); 1,78 (2H, m, CH_{2}-7); 1,45-0,7 (6H, m, 3 x CH_{2}); 1,16 (3H, s, CH_{3}); 1,15 (3H, s, CH_{3}).
b) Método B
Se añadió una solución saturada de carbonato de calcio (3 ml) a una solución bajo agitación del producto resultante del Ejemplo 24 (60 mg, 0,099 mmoles) en acetona (3 ml). Tras agitar a temperatura ambiente durante 2 horas, el CCM indicó que se había obtenido el producto resultante del método A.
c) Método C
Se añadió una solución saturada de carbonato de bario (9 ml) a una solución bajo agitación del producto resultante del Ejemplo 24 (60 mg, 0,099 mmoles) en acetona (3 ml). Tras agitar a temperatura ambiente durante 2 horas, EL CCM indicó que se había obtenido el producto resultante del método A.
d) Método D
A una solución bajo agitación del producto resultante del Ejemplo 24 (60 mg, 0,099 mmoles) en una mezcla de acetona/agua (3/2, 2,15 ml) se añadió nitrato de plata (25 mg, 0,149 mmoles). Tras agitar a temperatura ambiente durante 2 horas, EL CCM indicó que se había obtenido el producto resultante del método A.
2º) A partir de la anhidroepihomoharringtonina resultante del ejemplo 22
A una solución bajo agitación de la anhidroepihomoharringtonina resultante del Ejemplo 22 (58 mg, 0,109 mmoles) en diclorometano anhidro (0,3 ml) se añadió a -10ºC una solución comercial de ácido bromhídrico en ácido acético (0,195 ml, 0,98 mmoles, HBr al 30% p/p). Tras agitar a -10ºC durante 3 horas, se añadió agua (2,8 ml) y después la temperatura se elevó hasta 20ºC. Tras agitar a 20ºC durante 3 horas, se añadió una solución de carbonato sódico (0,76 M; 6 ml) hasta alcanzar pH 8. La capa acuosa resultante, tras saturar con cloruro sódico, se extrajo con diclorometano (3 x 10 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad, proporcionando epihomoharringtonina (45 mg brutos, 75%). El producto crudo obtenido de esta manera mostraba características iguales a las obtenidas con el método A.
Ejemplo 27 Preparación de homoharringtonina de uso farmacéutico a partir de homoharringtonina semisintética cruda resultante del ejemplo 25 mediante cromatografía líquida de alto rendimiento preparativa
121
1º) Método A
Se disolvió homoharringtonina cruda (35 g) en tampón (trietilamina (1,55/1.000) en agua desionizada y ácido ortofosfórico para ajustar el pH a 3. La solución se filtró y después se inyectó en un cromatógrafo líquido de alto rendimiento de tipo preparativo dotado de compresión axial y bomba de alta presión (fase estacionaria: n-octadecilsilano, 15 \mum, porosidad 100, 1 kg; fase móvil: tampón/tetrahidrofurano 85/15). La elución se llevó a cabo a un caudal de 0,2 l/min. El contenido de las fracciones se analizó mediante detector de U.V. y TLC. La fracción retenida finalmente se analizó mediante HPLC, después se combinó, se alcalinizó con solución acuosa al 2,5% de amonio y se extrajo con diclorometano (4 x 400 ml). Tras concentrar bajo presión reducida, se obtuvo homoharringtonina en forma de resina de color amarillo pálido que al triturarla en una mezcla 8/2 de agua-metanol proporcionó homoharringtonina pura en forma de sólido cristalino de color blanco (p.f.=127ºC); la pureza según la HPLC era superior al 99,8%.
2º) Método B
Se utilizó el mismo procedimiento de purificación del método A excepto en que se utilizó la fase móvil tampón/metanol (68/32) en lugar de tampón/tetrahidrofurano.
3º) Método C
Se utilizó el mismo procedimiento de purificación del método A excepto en que se utilizó la fase móvil tampón/acetonitrilo (85/15) en lugar de tampón/tetrahidrofurano.
Ejemplo 28 Preparación de homoharringtonina de uso farmacéutico a partir de cefalotaxina natural semipurificada
La homoharringtonina cruda, preparada de acuerdo con el Ejemplo 25 a partir de cefalotaxina natural parcialmente racemizada y purificada mediante cromatografía y cristalización de acuerdo con el método A del Ejemplo 27, proporcionó una homoharringtonina que mostraba un contenido en epihomoharringtonina enantiomérica no natural inferior al 0,05%.
Ejemplo 29 Preparación de 2'-de-(metoxicarbonilmetil)-(2-O-3')-dehidroneoharringtonina o feniglicidato de cefalotaxilo, mediante esterificación de cefalotaxina con ácido fenilglicídico
122
A una mezcla bajo agitación de ácido (2R,3R)-cis-fenilglicídico (78 mg, 0,48 mmoles) en tolueno anhidro (2 ml) se añadió 1,3-diciclohexilcarbodiimida (130 mg, 0,63 mmoles). Tras agitar durante 10 minutos a temperatura ambiente, se añadió cefalotaxina (50 mg, 0,16 mmoles) y pirrolidinopiridina (24 mg, 0,16 mmoles). Tras agitar a 18\pm5ºC durante 15 horas (control de la reacción en CCM, eluyente diclorometano/metanol, 8:2), la mezcla de reacción se filtró sobre un filtro de vidrio sinterizado, el material retenido se lavó con tolueno (5 ml) y el filtrado se evaporó en el vacío. El producto crudo resultante (200 mg) se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano/metanol (98:2), sílice (15-40 \mum) 4 g), proporcionando el producto esperado (19 mg, 27%). El producto obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
7,27 (3H, m, Ph); 7,18 (2H, m, Ph); 6,63 (1H, s, H-17*); 6,40 (1H, s, H-14*); 5,96 y 5,85 (2H, 2d, J_{AB}=1,5, OCH_{2}O); 5,73 (1H, d, J_{3-4}=9,4, H-3); 5,01 (1H, s, H-1); 4,01 (1H, d, J_{3''-2'}=4,6, H-3'); 3,65 (3H, s, OCH_{3}); 3,62 (1H, d, J_{4-3}=9,3, H-4); 3,40 (1H, d, J_{2'-2'}=4,5, H-2'); 3,27 (1H, m, J_{AB}=14,3, J=12,1 y 7,8, H-11\beta); 3,05 (1H, m, H-8\alpha); 2,91 (1H, td, J=11,7 y 7,4, H-10\alpha); 2,57 (2H, m, H-8\beta + H-10\beta); 2,43 (1H, dd, J _{AB}=14,5, J=7,0, H-11\alpha); 1,93 (1H, m, H-6_{A}); 1,84 (1H, m, H-6_{B}); 1,68 (2H, m, CH_{2}-7).
Ejemplo 30 Preparación de 2'-de-(metoxicarbonilmetil)-neoharringtonina mediante hidrogenolisis del fenilglicidato de cefalotaxilo resultante del ejemplo 29
123
A una solución bajo agitación del fenilglicidato de cefalotaxilo resultante del Ejemplo 29 (200 mg, 0,433 mmoles) en metanol (10 ml) se añadió 10% de paladio sobre carbono (100 mg). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente bajo presión de hidrógeno (50 p.s.i.) durante 4 horas y la mezcla de reacción se filtró y se evaporó a sequedad. El producto crudo resultante (175 mg) se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano/metanol (99:1, después 98:2), sílice (15-40 \mum) 5,5 g), proporcionando un sólido de color ámbar (86 mg, 43%). El producto obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
IR (pastilla de KBr) (cm^{-1}): 3436; 2937; 1747; 1655; 1487; 1224 y 1035.
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
7,25 (3H, m, p-Ph); 7,0 (2H, m, o-Ph); 6,65 (1H, s, H-17*); 6,63 (1H, s, H-14*); 5,98 (1H, d, J_{3-4}=9,3, H-3); 5,85 (2H, 2d, J_{AB}=1,2, OCH_{2}O); 5,09 (1H, s, H-1); 4,17 (1H, m, H-2'); 3,85 (1H, d, J_{4-3}=9,6, H-4); 3,71 (3H, s, OCH_{3}); 3,20 (1H, m, H-11\beta); 3,10 (1H, m, H-8\alpha); 2,95 (1H, m, H-10\alpha); 2,60 (2H, m, H-8\beta + H-10\beta); 2,39 (2H, m, H-11 \alpha + H-3'A); 2,04 (1H, m, H-6_{A}); 2,0 (1H, dd, J_{AB}=14,3, J_{3''B-2'}=9,5, H-3'B); 1,91 (1H, m, H-6_{B}); 1,77 (2H, m, CH_{2}-7).
Ejemplo 31 Preparación de 2'R-de-(metoxicarbonilmetil)-3'S-azido-neoharringtonina a partir del fenilglicidato de cefalotaxilo resultante del ejemplo 29
124
A una solución bajo agitación de fenilglicidato de cefalotaxilo resultante del Ejemplo 29 (100 mg, 0,217 mmoles) en una mezcla de metanol/agua (8/1, 1,27 ml) se añadió azida sódica (70 mg, 1,08 mmoles) y formato de metilo (174 \mul, 2,82 mmoles). Tras agitar a 50ºC durante 68 horas y enfriar a temperatura ambiente, se añadió solución al 5% de hidrogenocarbonato sódico hasta pH 8. La capa acuosa resultante se extrajo tres veces sobre sulfato de magnesio y se evaporó a sequedad. El producto crudo resultante (120 mg) se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano/metanol (99:1), sílice (15-40 \mum) 3,5 g), proporcionando un aceite viscoso de color amarillo (84 mg, 76%). El producto obtenido de esta manera presentaba las características siguientes:
IR (ATR) (cm^{-1}): 3488; 2935; 2105; 1748; 1654; 1486; 1223; 1034.
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
7,38 (3H, m, m, p-Ph); 7,29 (2H, m, o-Ph); 6,74 (1H, s, H-17*); 6,67 (1H, s, H-14*); 6,08 (1H, d, J_{3-4}=9,8, H-3); 5,90 (2H, 2d, J_{AB}=1,4, OCH_{2}O); 5,08 (1H, s, H-1); 4,07 (1H, d ancho, H-2'); 3,85 (1H, d, J_{4-3}=9,7, H-4); 3,78 (1H, br.s, H-3'); 3,69 (3H, s, OCH_{3}); 3,23 (1H, m, H-11\beta); 3,11 (1H, m, H-8\alpha); 2,98 (1H, m, H-10\alpha); 2,90 (1H, d, J_{2'-OH}=8,2, 2'-OH); 2,63 (2H, m, H-8\beta + H-10\beta); 2,47 (1H, dd, J_{AB} =14,2, J=6,9, H-11\alpha); 2,05 (1H, m, H-6_{A}); 1,92 (1H, m, H-6_{B}); 1,78 (2H, m, CH_{2}-7).
Ejemplo 32 Preparación de 2'R-de-(metoxicarbonilmetil)-3'S-amino-neoharringtonina mediante hidrogenolisis de la azida resultante del ejemplo 31
125
A una solución bajo agitación del producto resultante del Ejemplo 29 (80 mg, 0,158 mmoles) en una mezcla de acetato de etilo-metanol (9/1, 10 ml) se añadió 10% de paladio sobre carbono (40 mg). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente bajo presión de hidrógeno (50 p.s.i.) durante 15 horas y tras el control en CCM la mezcla de reacción se filtró y se evaporó a sequedad, proporcionando un sólido de color blanco (67 mg, 88%). El producto crudo obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
IR (ATR) (cm^{-1}): 3299; 2935; 1740; 1654; 1486; 1222 y 1034.
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
7,27 (5H, m, Ph); 6,69 (1H, s, H-17*); 6,67 (1H, s, H-14*); 6,0 (1H, d, J_{3-4}=9,7, H-3); 5,85 (2H, m, OCH_{2}O); 5,09 (1H, br.s, H-1); 4,06 (1H, d, J=1,2, H-2'); 3,86 (1H, d, J_{4-3}=9,5, H-4); 3,72 (3H, s, OCH_{3}); 3,38 (1H, br.s); 3,25 (1H, m, H-11\beta); 3,14 (1H, m, H-8\alpha); 2,99 (1H, m, H-10\alpha); 2,64 (2H, m, H-8 \beta + H-10\beta); 2,49 (1H, m, H-11\alpha); 2,05 (1H, m, H-6_{A}); 1,94 (1H, m, H-6_{B}); 1,79 (2H, m, CH_{2}-7).
Ejemplo 33 Preparación de acetonida de 2'-de-(metoxicarbonilmetil)-3'-hidroxi-neoharringtonina mediante esterificación de cefalotaxina
126
A una mezcla bajo agitación de ácido isopropilideno-2,3-dihidroxi-3-fenilpropiónico (17,5 mg, 0,078 mmoles) en tolueno anhidro (1 ml) se añadió 1,3-diciclohexilcarbodiimida (25 mg, 0,12 mmoles). Tras agitar durante 10 minutos a temperatura ambiente, se añadieron cefalotaxina (75 mg, 0,24 mmoles) y pirrolidinopiridina (12 mg, 0,08 mmoles). Tras agitar a 18\pm5ºC durante 15 horas (con un control de reacción en CCM, eluyente diclorometano/metanol; 8:2), la mezcla de reacción se filtró sobre un filtro de vidrio sinterizado, el material retenido se lavó con tolueno (5 ml) y el filtrado se evaporó en el vacío. El producto crudo resultante se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano, después diclorometano/metanol (98:2), sílice (15-40 \mum)), proporcionando el producto esperado (22 mg, 53%). El producto obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
7,27 (5H, Ph); 6,63, 6,62, 6,60 y 6,57 (1H, 4s, H-14*); 6,51, 6,49, 6,42 y 6,41 (1H, 4s, H-17*); 5,93 (J_{3-4}=9,6); 5,89, 5,43 (J_{3-4}=9,5) y 5,31 (J_{3-4}=9,3) (1H, 4d, H-3); 5,89 (s); 5,87 + 5,84 (2d, J_{AB}=1,5); 5,85 + 5,80 (2d) y 5,84 + 5,77 (2d, J_{AB}=1,5) (2H, OCH_{2}O); 5,23 (J_{5'-4'}=7,3); 5,20 (J_{5'-4'}=7,4); 4,58 (J_{5'-4'}=8,0) y 4,49 (J_{5'-4'}=6,2) (1H, 4d, H-5'); 5,07, 5,03 y 4,83 (1H, 3s, H-1); 4,32 (J_{4'-5'}=7,4); 4,21 (J_{4'-5'}=6,2), 4,18 (J_{4'-5'}=7,4) y 3,75 (1H, 4d, H-4'); 3,86 (J_{4-}3=9,6); 3,76 y 3,60 (J_{4-}3=9,5) (1H, 4d, H-4); 3,76, 3,75, 3,70 y 3,43 (3H, 4s, OCH_{3}); 3,3-1,6 (10H, m); 1,66 + 1,41, 1,65 + 1,37, 1,51 + 1,44 y 1,47 + 1,22 (6H, 8s, 2 x CH3).
Ejemplo 34 Preparación de cefalotaxil N-bencil-3-fenil-aciridina-1-carboxilato mediante esterificación de cefalotaxina
127
A una mezcla bajo agitación de ácido (2S,3S)-cis-N-bencil-3-fenil-aziridina-1-carboxílico (360 mg, 1,42 mmoles) en tolueno anhidro (5 ml) se añadió 1,3-diciclohexilcarbodiimida (390 mg, 1,9 mmoles). Tras agitar durante 5 minutos a temperatura ambiente, se añadieron cefalotaxina (150 mg, 0,47 mmoles) y pirrolidinopiridina (70 mg, 0,47 mmoles). Tras agitar a 18\pm5ºC durante 2 horas (con un control de reacción en CCM, eluyente diclorometano/metanol; 8:2), la mezcla de reacción se filtró sobre un filtro de vidrio sinterizado, el material retenido se lavó con tolueno (15 ml) y el filtrado se evaporó en el vacío. El producto crudo resultante (785 mg) se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano, después diclorometano/metanol (98:2), sílice (15-40 \mum) 23 g), proporcionando un sólido (240 mg, 92%). El producto obtenido de esta manera presentaba las características siguientes:
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
7,24 (10H, m, 2xPh); 6,63 (1H, s, H-17*); 6,60 (1H, s, H-14*); 5,85 y 5,80 (2H, 2d, J_{AB}=1,4, OCH_{2}O); 5,64 (1H, d, J_{3-4}=9,3, H-3); 4,97 (1H, s, H-1); 3,92 y 3,20 (2H, 2d, J_{AB}=13,7, \underline{CH_{2}}Ph); 3,71 (1H, d, J_{4-3}=9,4, H-4); 3,56 (3H, s, OCH_{3}); 3,25 (1H, m, H-11\beta); 3,07 (1H, m, H-8\alpha); 2,93 (1H, m, H-10\alpha); 2,86 (1H, d, J_{3'-2'}=6,8, H-3'); 2,57 (2H, m, H-8\beta + H-10\beta); 2,38 (1H, dd, J_{AB}=14,4, J=7,0, H-11\alpha); 2,07 (1H, d, J_{2'-3'}=6,8, H-2'); 1,96 (1H, m, H-6_{A}); 1,82 (1H, m, H-6_{B}); 1,70 (2H, m, CH_{2}-7).
Ejemplo 35 Preparación de N,O-anhidro-2'-de-(metoxicarbonilmetil)-3'-benzamido-neo-harringtonina o cefalotaxil N,O-anhidro-N-benzoil-fenilisoserinato mediante esterificación de cefalotaxina
128
A una mezcla bajo agitación de ácido (4S,5R)-2,4-difenil-4,5-dihidrooxazol-5-carboxílico (510 mg, 1,91 mmoles) en tolueno anhidro (7 ml) se añadió 1,3-diciclohexilcarbodiimida (525 mg, 2,54 mmoles). Tras agitar durante 15 minutos a temperatura ambiente, se añadió cefalotaxina (200 mg, 0,63 mmoles) y pirrolidinopiridina (95 mg, 0,64 mmoles). Tras agitar a 18\pm5ºC durante 3,5 horas (con un control de reacción en CCM, eluyente diclorometano/metanol; 9:1), la mezcla de reacción se filtró a través de un filtro de vidrio sinterizado, el material retenido se lavó con tolueno (15 ml) y el filtrado se evaporó en el vacío. El producto crudo resultante (1 g) se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano, después diclorometano/metanol (98:2), sílice (15-40 \mum), proporcionando un sólido de color amarillo (330 mg, 91%). El producto obtenido de esta manera presentaba las características siguientes:
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
8,0 (2H, d, J=7,3, o-PhC=N); 7,52 (1H, t, J=7,4, p-PhC=N); 7,44 (2H, t, J=7,5, m-PhC=N); 7,32 (2H, t, J=7,2, m-Ph); 7,26 (1H, m, p-Ph); 7,15 (2H, d, J=7,1, o-Ph); 6,58 (1H, s, H-17*); 6,51 (1H, s, H-14*); 5,98 (1H, d, J_{3-4}=9,5, H-3); 5,85 y 5,76 (2H, 2d, J_{AB}=1,3, OCH_{2}O); 5,08 (1H, s, H-1); 4,67 (1H, d, J_{4'-5'}=5,6, H-4'); 4,52 (1H, d, J_{5'-4'}=5,6, H-5'); 3,85 (1H, d, J_{4-3}=9,6, H-4); 3,70 (3H, s, OCH_{3}); 3,17 (1H, m, H-11\beta); 3,08 (1H, m, H-8\alpha); 2,93 (1H, m, H-10\alpha); 2,59 (2H, m, H-8\beta + H-10\beta); 2,31 (1H, dd, J_{AB}=14,2, J=6,8, H-11\alpha); 2,04 (1H, m, H-6_{A}); 1,91 (1H, m, H-6_{B}); 1,75 (2H, m, CH_{2}-7).
Ejemplo 36 Preparación de N,O-metoximetilén-2'-de-(metoxicarbonilmetil)-3'-benzamido-neoharringtonina o cefalotaxil N,O-metoximetilén-N-benzoil-fenilisoserinato mediante esterificación de cefalotaxina
129
A una mezcla bajo agitación de ácido (4S,5R)-3-N-benzoil-2-p-metoxifenil-4-feniloxazolidín-5-carboxílico (165 mg, 0,5 mmoles) en tolueno anhidro (2 ml) se añadió 1,3-diciclohexilcarbodiimida (140 mg, 0,68 mmoles). Tras agitar durante 5 minutos a temperatura ambiente, se añadió cefalotaxina (53 mg, 0,17 mmoles) y pirrolidinopiridina (25 mg, 0,17 mmoles). Tras agitar a 18\pm5ºC durante 15 horas (con un control de reacción en CCM, eluyente diclorometano/metanol; 9:1), la mezcla de reacción se filtró por un filtro de vidrio sinterizado, el material retenido se lavó con tolueno (5 ml) y el filtrado se evaporó en el vacío. El producto crudo resultante (230 mg) se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano, después diclorometano/metanol (98:2), sílice (15-40 \mum) 7 g), proporcionando el producto esperado (90 mg, 86%). El producto obtenido de esta manera presentaba las características siguientes:
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
7,66 (2H, br.s, o-BzN); 7,41 (4H, m, BzN + Ph); 7,32 (2H, m, Ph); 7,26 (2H, m, Ph); 6,56 (1H, s, H-17*); 6,54 (1H, s, H-14*); 5,89 (1H, d, J_{3-4}=9,5, H-3); 5,83 y 5,80 (2H, 2m, OCH_{2}O); 5,76 (1H, br.s, H-2'); 5,10 (1H, s, H-1); 4,85 (1H, br.s, H-4'); 4,42 (1H, br.s, H-5'); 3,84 (1H, d, J_{4-3}=9,5, H-4); 3,72 (3H, s, OCH_{3}); 3,28 (3H, br.s, 2'-OCH_{3}); 3,19 (1H, m, H-11\beta); 3,09 (1H, m, H-8\alpha); 2,93 (1H, m, H-10\alpha); 2,60 (2H, m, H-8 \beta + H-10\beta); 2,37 (1H, dd, J_{AB}=14,4, J=6,6, H-11\alpha); 2,03 (1H, m, H-6_{A}); 1,90 (1H, m, J_{AB}=12,2, J=7,8 y 4,4, H-6_{B}); 1,76 (2H, m, CH_{2}-7).
Ejemplo 37 Preparación de 2'-de-(metoxicarbonilmetil)-3'-benzamido-neoharringtonina o cefalotaxil N-benzoil-fenilisoserinato
130
1º) Mediante hidrólisis ácida del producto resultante del ejemplo 35
A una solución bajo agitación de cefalotaxil (4S,5R)-2,4-difenil-4,5-dihidrooxazol-5-carboxilato resultante del Ejemplo 35 (300 mg, 0,53 mmoles) en una mezcla de metanol/tetrahidrofurano 50/50 (10 ml) se añadió a temperatura ambiente ácido hidroclórico 1 N (3,2 ml). Tras agitar a 18\pm5ºC durante 3 horas (con un control de reacción en CCM), se añadió una solución saturada de hidrogenocarbonato sódio (19 ml) y una mezcla de metanol/tetrahidrofurano 50/50 (50 ml). Tras agitar a 18 + 5ºC durante 20 horas (con un control de reacción CCM), la mezcla de reacción se trató con acetato de etilo y agua. La capa acuosa resultante se extrajo con acetato de etilo y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad. El producto crudo resultante (170 mg) se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano/metanol (98:2), sílice (15-40 \mum) 8 g), proporcionando un sólido de color blanco (180 mg, 58%; pureza según HPLC del 92,3%). El producto obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
[\alpha]_{D} 20: -119,2 (c=0,141; CHCl_{3})
1H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm, J Hz):
7,75 (2H, d, J=7,3, o-BzN); 7,51 (1H, t, J=7,3, p-BzN); 7,13 (2H, t, J=7,3, m-BzN); Ph); 7,27 (5H, m, Ph); 6,88 (1H, d, J_{3'-NH}=7,9, 3'-NH); 6,59 (1H, s, H-17*); 6,57 (1H, s, H-14*); 5,93 (1H, d, J_{3-4}=9,7, H-3); 5,78 y 5,69 (2H, 2d, J_{AB}=1,5, OCH_{2}O); 5,06 (1H, s, H-1); 4,98 (1H, dd, J_{3'-NH} =7,9, H-3'); 4,22 (1H, br.s, H-2'); 3,81 (1H, d, J_{4-}3=9,6, H-4); 3,58 (3H, s, OCH_{3}); 3,19 (1H, m, J=12,8, 7,9, H-11b); 3,07 (1H, m, H-8a); 2,93 (1H, m, H-10a); 2,72 (1H, br.s, 2'-OH); 2,58 (2H, m, H-8b + H10b); 2,43 (1H, dd, J_{AB}=14,2, J=7,0, H-11a); 2,01 (1H, m, H-6_{A}); 1,88 (1H, m, J_{AB}=12,0, J=7,8, 3,8, H-6_{B}); 1,75 (2H, m, CH_{2}-7).
2º) Mediante amidificación del producto resultante del ejemplo 32
A una solución bajo agitación del producto resultante del Ejemplo 32 (60 mg, 0,125 mmoles) en acetato de etilo (850 \mul) se añadió una solución saturada de hidrogenocarbonato sódico (850 \mul) y cloruro de benzoilo (19 \mul, 0,163 mmoles). Se formó un precipitado de color blanco durante el curso de la reacción. Tras agitar a temperatura ambiente durante 1 hora, la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y la capa orgánica se lavó con una solución saturada de hidrogenocarbonato sódico. La capa acuosa resultante se extrajo tres veces con acetato de etilo y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad. El producto crudo resultante (65 mg) se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano/metanol (98:2), sílice (15-40 \mum) 2,5 g), proporcionando un sólido de color blanco (41 mg, 56%). El producto obtenido de esta manera mostraba características iguales a las obtenidas mediante el método anteriormente indicado.
Ejemplo 38 Preparación de N-terbutoxicarbamoil-2'-de-(metoxicarbonilmetil)-3'-amino-neoharringtonina o cefalotaxil N-terbutoxicarbamoil-fenil-isoserinato mediante amidificación del producto resultante del ejemplo 32
131
A una solución bajo agitación del producto resultante del Ejemplo 32 (60 mg, 0,125 mmoles) en diclorometano (850 \mul) se añadió una solución saturada de hidrogenocarbonato sódico (850 \mul) y diterbutildicarbonato (27 mg, 0,125 mmoles). Tras agitar a temperatura ambiente durante 1 hora, la mezcla de reacción se diluyó con diclorometano y la capa orgánica se lavó con solución salina concentrada. La capa acuosa resultante se extrajo tres veces con diclorometano y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad. El producto crudo resultante (70 mg) se purificó mediante cromatografía de columna (diclorometano/metanol (98:2), sílice (15-40 \mum) 3 g), proporcionando un sólido de color blanco (40 mg, 55%). El producto obtenido de esta manera mostraba las características siguientes:
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (ppm, J Hz):
7,27 (3H, m, m,p-Ph); 6,94 (2H, d, J=6,6, o-Ph); 6,71 (1H, s, H-17*); 6,66 (1H, s, H-14*); 6,01 (1H, d, J_{3-4}=9,7, H-3); 5,90 (2H, s, OCH_{2}O); 5,06 (1H, s, H-1); 5,05 (1H, m, NH); 4,56 (1H, m, H-3'); 4,15 (1H, m, H-2'); 3,81 (1H, d, J_{4-3}=9,7, H-4); 3,69 (3H, s, OCH_{3}); 3,19 (1H, m, H-11\beta); 3,10 (1H, m, H-8\alpha); 2,93 (1H, m, H-10\alpha); 2,61 (2H, m, H-8 \beta + H-10\beta); 2,51 (1H, m, H-11\alpha); 2,05 (1H, m, H-6_{A}); 1,89 (1H, m, H-6_{B}); 1,77 (2H, m, CH_{2}-7); 1,44 (9H, s, OC(CH_{3})_{3}).
Ejemplo 39 Preparación de tert-butil 2-metoxicarbonilmetil-2-hidroxi-6-metilhepta-5-enoato
132
1º) Preparación del intermediario oxalato
Se añadió gota a gota 5-bromo-2-metil-pent-2-eno (1,34 g, 8,2 mmoles) a una mezcla bajo agitación de magnesio (240 g, 10 mmoles) (activado con cristales adicionales de yodo) en tetrahidrofurano anhidro (8 ml). El inicio de la reacción se ve acompañado de un sobrecalentamiento y reflujo vigorosos de la mezcla de reacción. El reflujo se mantuvo hasta que la mayor parte del magnesio había reaccionado y la mezcla de reacción se diluyó con tetrahidrofurano anhidro (16 ml). A una mezcla bajo agitación de tert-butil etil oxalato (1,4 g, 8 mmoles) en tetrahidrofurano anhidro (8 ml) se añadió el reactivo de Grignard resultante a -78ºC a lo largo de un periodo de 20 minutos. La temperatura se dejó que se incrementarse hasta -15ºC a lo largo de un periodo de 2 horas y la mezcla se desactivó con ácido hidroclórico 1 N. La capa orgánica separada se lavó tres veces con solución salina concentrada, se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó a sequedad. El producto crudo resultante (2 g) se purificó mediante cromatografía de columna (ciclohexano/acetato de etilo (98:2), sílice (15-40 \mum) 80 g), proporcionando un aceite (660 mg, 39%). El intermediario \alpha-cetoéster mostraba las características siguientes:
133
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (ppm J Hz):
5,08 (1H, m, H-5); 2,80 (2H, tJ=7,3, CH_{2}-3); 2,28 (2H, m, CH_{2}-4); 1,68 (3H, s, CH_{3}); 1,62 (3H, s, CH_{3}); 1,54 (9H, s, O-tertBu).
2º) Preparación del compuesto del título
A una solución bajo agitación de bis-(trimetilsililamida) de litio 1M en tetrahidrofurano (9 ml, 9 mmoles) se añadió acetato de metilo anhidro (0,7 ml, 8,75 mmoles) a -78ºC a lo largo de un periodo de 1 minuto y se dejó reaccionar a -78\pm5ºCdurante 20 minutos. A una mezcla bajo agitación de tert-butil 2-oxo-6-metilhepta-5-enoato preparada anteriormente (640 mg, 3 mmoles) en tetrahidrofurano anhidro (10 ml) se añadió el enolato de litio a -78ºC a lo largo de un periodo de 5 minutos y la mezcla resultante se agitó a -78\pm5ºC durante 30 minutos. Tras el análisis en CCM, se retiró el baño de congelación y la mezcla se desactivó con solución al 15% de cloruro amónico (10 ml). La capa orgánica separada se lavó con solución al 15% de cloruro amónico (10 ml) y se evaporó a sequedad. Las capas acuosas se extrajeron con éter (2 x 10 ml). Las capas orgánicas se combinaron con el concentrado y se lavaron con solución salina concentrada (10 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad. El producto crudo resultante (1,3 g) se purificó mediante cromatografía de columna (ciclohexano/acetato de etilo (95:5), sílice (15-40 \mum) 60 g), proporcionando un aceite (222 mg, 26%). El producto obtenido de esta manera presentaba las características siguientes:
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (ppm, J Hz):
5,07 (1H, m, HC=); 3,67 (3H, s, OCH,); 3,66 (1H, s, OH); 2,86 y 2,67 (2H, 2d, J_{AB}=15,8, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 2,13 (1H, m, CH,); 1,85 (1H, m, CH,); 1,67 (3H, s, CH_{3}) y (2H, m, CH); 1,59 (3H, s, CH_{3}); 1,51 (9H, s, tert-BuO).
Ejemplo 40 Preparación de etil 2-N-[(4'S)-isopropil-2'-oxazolidino]carbonilmetil-2-hidroxi-6-metilhepta-5- enoato
134
Se añadió una solución comercial de bis-(trimetilsililamida) de litio 1M en tetrahidrofurano (1,28 ml, 1,28 mmoles) a una solución bajo agitación de (4S)-3-acetil-4-isopropil-2-oxazolidinona (200 mg, 1,17 mmoles) en tetrahidrofurano anhidro a -78ºC y se dejó reaccionar a -78ºC durante 30 minutos. Seguidamente, se añadió una solución de etil 2-oxo-6-metilhepta-5-enoato (323 mg, 1,75 mmoles) en tetrahidrofurano anhidro (5 ml) y la mezcla resultante se sometió a agitación a -78ºC durante 1 hora. Tras el análisis en CCM, la mezcla se desactivó con solución al 15% de cloruro amónico (5 ml). La capa orgánica separada se lavó con solución al 15% de cloruro amónico (10 ml), seguidamente con solución salina concentrada (10 ml), se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó a sequedad. Los espectros de ^{1}H-RMN del producto crudo mostraron una mezcla diastereomérica \sim2,5/1. El producto crudo resultante (516 mg) se purificó mediante cromatografía de columna (ciclohexano/acetato de etilo (90:10 a 80:20), sílice (15-40 \mum) 25 g), proporcionando el diastereómero minoritario en forma de un aceite de color amarillo (55 mg, 13,7%), que mostraba las características siguientes:
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (ppm, J Hz):
5,06 (1H, m, H-3'); 4,41 (1H, m, H-4''); 4,25 (4H, m, CH_{2}-5'' y \underline{OCH_{2}} CH_{3}); 3,72 (1H, s, OH); 3,52 y 3,41 (2H, 2d, J_{AB}=17,9, CH_{2}-3); 2,36 (1H, m, H-6''); 2,16 (1H, m, CH_{2}'); 1,92 (1H, m, CH_{2}'); 1,75 (2H, m, CH_{2}'); 1,67 (3H, s, CH_{3}'); 1,59 (3H, s, CH_{3}'); 1,30 (3H, t, J=7,1, OCH_{2} \underline{CH_{3}}); 0,89 (3H, d, J=7,0, CH_{3}''); 0,87 (3H, d, J=6,9, CH_{3}'').
A continuación, se proporcionó el diastereómero más abundante en forma de aceite de color amarillo pálido (93 mg, 23,2%), que mostraba las características siguientes:
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (ppm, J Hz):
5,06 (1H, m, H-3'); 4,40 (1H, m, H-4''); 4,23 (4H, m, CH_{2}-5'' y O\underline{CH_{2}}CH_{3}), 3,68 (1H, s, OH); 3,46 (2H, s, CH_{2-3}); 2,33 (1H, m, H-6''); 2,16 (1H, m, CH_{2}'); 1,91 (1H, m, CH_{2}'); 1,75 (2H, m, CH_{2}'); 1,67 (3H, s, CH_{3}'); 1,59 (3H, s, CH_{3}'); 1,28 (3H, t, J=7,1, OCH_{2}\underline{CH_{3}}); 0,90 (3H, d, J=7,0, CH_{3}''); 0,87 (3H, d, J=6,9, CH_{3}'').
Ejemplo 41 Preparación de etil 2-(1'R,2'S,5'R)-mentoxicarbonilmetil-2-hidroxi-6-metilhepta-5-enoato 
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135
A una solución comercial bajo agitación de bis-(trimetilsililamida) de litio 1M en tetrahidrofurano (14 ml, 14 mmoles) se añadió mentil (1R,2S,5R)-(-)-acetato (2,8 g, 14,1 mmoles) a -78ºC y se dejó reaccionar a -78ºC durante 30 minutos. A una mezcla bajo agitación de etil 2-oxo-6-metilhepta-5-enoato preparada anteriormente (867 mg, 4,7 mmoles) en tetrahidrofurano anhidro (12 ml) se añadió enolato de litio a -78ºC a lo largo de un periodo de 15 minutos y la mezcla resultante se agitó a -78ºC durante 3 minutos (seguimiento en CCM). La mezcla se desactivó con ácido hidroclórico 1 N (30 ml). La capa acuosa separada se extrajo con tert-butil metil éter (2 x 15 ml) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución salina concentrada (3 x 15 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad. Los espectros de ^{1}H-RMN del producto crudo mostraron una mezcla diastereomérica \sim6/4. El producto crudo resultante se purificó mediante cromatografía de columna (ciclohexano/acetato de etilo (98:2), sílice (15-40 \mum) 70 g), proporcionando los productos esperados (1 g, 57%). Los diastereómeros separados obtenidos de esta manera mostraban las características siguientes:
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (ppm, J Hz):
5,03 (1H, t, J=7,0, H-3'); 4,69 (1H, td, J=10,9 y 4,3, H-1_{Men}); 4,24 (2H, q, J=7,0, O\underline{CH_{2}} CH_{3}); 3,77 (1H, s, 2-OH); 2,91 y 2,67 (2H, 2d, J_{AB}=16,4, CH_{2}CO_{2}); 2,13 (1H, m, CH'); 1,97 (1H, m, H-6eq_{Men}); 1,85 (2H, m, CH' y H-7_{Men}); 1,75-1,6 (4H, m, CH_{2}' y H-3eq, 4eq_{Men}); 1,67 (3H, s, CH_{3}'); 1,58 (3H, s, CH_{3}'); 1,45 (1H, m, H-5_{Men}); 1,35 (1H, m, H-2ax_{Men}); 1,30 (3H, t, J=6,9, OCH_{2}CH_{3}); 1,03 (1H, m, H-3ax_{Men}); 0,93 (1H, m, H-6ax_{Men}); 0,89 (6H, d, J=6,8, 2 x CH_{3(Men)}); 0,87 (1H, m, H-4ax_{Men}); 0,73 (3H, d, J=6,9, CH_{3(Men)}).
Diastereómero minoritario:
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (ppm, J Hz):
5,05 (1H, t, J=7,0, H-3'); 4,67 (1H, td, J=10,7 y 4,7, H-1_{Men}); 4,25 (2H, m, O\underline{CH_{2}} CH_{3}); 3,74 (1H, s, 2-OH); 2,92 y 2,65 (2H, 2d, J_{AB}=15,9, \underline{CH_{2}}CO_{2}); 2,12 (1H, m, CH'); 1,97 (1H, m, H-6eq_{Men}); 1,86 (2H, m, CH' y H-7_{Men}); 1,75-1,6 (4H, m, CH_{2}' y H-3eq, 4eq_{Men}); 1,67 (3H, s, CH_{3}'); 1,58 (3H, s, CH_{3}'); 1,48 (1H, m, H-5Men); 1,36 (1H, m, H-2ax_{Men}); 1,31 (3H, t, J=7,0, OCH_{2} CH_{3}); 1,15-0,8 (3H, m, H-3ax, 6ax, 4ax_{Men}); 0,89 (6H, d, J=6,9, 2 x CH_{3 \ (Men)}); 0,76 (3H, d, J=7,0, CH_{3 \ (Men)}).
Ejemplo 42 Preparación de etil 2-[(R)-1',2',2'-trifenil-etán-2'-ol]etoxicarbonilmetil-2-hidroxi-6-metilhepta-5-enoato 
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Se añadió una solución comercial de bis(trimetilsililamida) de litio 1M en tetrahidrofurano (6 ml, 6 mmoles) a una solución bajo agitación de 2-acetato de R-(+)-1,1,2-trifenil-1,2-etanodiol (665 mg, 2 mmoles) en tetrahidrofurano anhidro (6 ml) a -78ºC. La temperatura se dejó que se incrementase hasta 0ºC a lo largo de un periodo de 3 horas, seguidamente se añadió heptano anhidro (10 ml). A esta mezcla de reacción bajo agitación a -78ºC se añadió una solución de etil 2-oxo-6-metilhepta-5-enoato (368 mg, 2 mmoles) en tetrahidrofurano anhidro (2 ml) y la temperatura se dejó que se incrementarse hasta -40ºC a lo largo de un periodo de 1 hora. Tras el seguimiento en CCM, el baño de congelación se retiró y la mezcla se desactivó con solución al 15% de cloruro de amonio (10 ml). La capa orgánica separada se lavó con solución al 15% de cloruro de amonio (10 ml) y se evaporó a sequedad. Las capas acuosas se extrajeron con diclorometano (2 x 10 ml). Las capas orgánicas se combinaron con el concentrado y se lavaron con solución salina concentrada (10 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad. Los espectros de ^{1}H-RMN del producto crudo mostraron una mezcla diastereomérica \sim60/40. El producto crudo resultante (820 mg) se purificó mediante cromatografía de columna (ciclohexano/acetato de etilo (97:3 a 95:5), sílice (15-40 \mum) 80 g), proporcionando los productos esperados (361 mg, 35%). Los diastereómeros separados obtenidos de esta manera, tal como compuestos cristalinos de color blanco, mostraban las características siguientes:
Diastereómero minoritario:
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (ppm, J Hz):
7,66 (2H, d, J=7,5, o-Ph); 7,43 (2H, t, J=7,7, m-Ph); 7,35-7,0 (11H, m, Ph); 6,72 (1H, s, H-1''); 4,95 (1H, m, H-3'); 4,41 (2H, m, O\underline{CH_{2}}CH_{3}); 3,42 (1H, s, 2-OH); 2,90 y 2,67 (2H, 2d, J_{AB}=16,5, CH_{2}-3); 2,53 (1H, s, 2''-OH); 1,98 (1H, m, CH_{2}); 1,8-1,5 (3H, m, CH_{2}); 1,63 (3H, s, CH_{3}); 1,52 (3H, s, CH_{3}); 1,38 (3H, t, J=7,1, OCH_{2}CH_{3}).
Diastereómero mayoritario:
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (ppm J Hz):
7,52 (2H, d, J=7,5, o-Ph); 7,36 (2H, t, J=7,6, m-Ph); 7,27 (1H, t, J=7,3, p-Ph); 7,2-7,0 (10H, m, Ph); 6,59 (1H, s, H-1''); 4,98 (1H, m, H-3'); 3,90 y 3,34 (2H, 2m, O\underline{CH_{2}}CH_{3}); 3,56 (1H, s, 2-OH); 3,22 (1H, s, 2''-OH); 2,88 y 2,69 (2H, 2d, JAB=16,7, CH_{2}-_{3}); 2,06 y 1,79 (2H, 2m, CH_{2}); 1,7-1,5 (2H, m, CH_{2}); 1,64 (3H, s, CH_{3}); 1,54 (3H, s, CH_{3}); 0,99 (3H, t, J=7,1, OCH_{2}CH_{3}).
Ejemplo 43 Preparación de tert-butil 2-[(R)-1',2',2'-trifenil-etán-2'-ol]etoxicarbonilmetil-2-hidroxi-6-metilhepta-5-enoato 
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137 
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Se añadió una solución comercial de bis-(trimetilsililamida) de litio 1M en tetrahidrofurano (3 ml, 3 mmoles) a una solución bajo agitación de R-(+)-1,1,2-trifenil-1,2-etanodiol-2-acetato (330 mg, 1 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (3,5 ml) a -78ºC. La temperatura se dejó que se incrementase hasta -10ºC a lo largo de un periodo de 3 horas y seguidamente se añadió heptano anhidro (5 ml). A esta mezcla de reacción bajo agitación a -78ºC se añadió una solución de tert-butil 2-oxo-6-metilhepta-5-enoato (276 mg, 1,5 mmoles) en tetrahidrofurano anhidro (2 ml) y la temperatura se dejó que se incrementase hasta -40ºC a lo largo de un periodo de 1 hora. Tras el seguimiento en CCM, se retiró el baño de congelación y la mezcla se desactivó con solución al 15% de cloruro de amonio (5 ml). La capa orgánica separada se lavó con solución al 15% de cloruro de amonio (5 ml) y se evaporó a sequedad. Las capas acuosas se extrajeron con diclorometano (2 x 10 ml). Las capas orgánicas se combinaron con el concentrado y se lavaron con solución salina concentrada (5 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad. Los espectros de ^{1}H-RMN del producto crudo mostraban una mezcla diastereomérica \sim75/25. El producto crudo resultante (550 mg) se purificó mediante cromatografía de columna (ciclohexano/acetato de etilo (96:4, 95/5, seguidamente 90:10), sílice (15-40 \mum) 60 g), proporcionando los productos esperados (217 mg, 40%). El diastereómero mayoritario obtenido de esta manera en forma de compuesto cristalino de color blanco mostraba las características siguientes:
^{1}H RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (ppm, J Hz):
7,53 (2H, d, J=7,4, o-Ph); 7,36 (2H, t, J=7,6, m-Ph); 7,28 (1H, t, J=7,3, p-Ph); 7,2-7,0 (10H, m, Ph); 6,66 (1H, s, H-1''); 5,00 (1H, m, H-3'); 3,50 (1H, s, 2-OH); 2,94 (1H, s, 2''-OH); 2,76 y 2,61 (2H, 2d, J_{AB}=16,3, \underline{CH_{2}}-CO_{2}); 2,06 y 1,78 (2H, 2m, CH_{2}); 1,65 (3H, s, CH_{3}); 1,55 (3H, s, CH_{3} y 2H, m, CH_{2}); 1,23 (9H, s, tert-BuO).
Ejemplo 44 Preparación de ácido 2-carboximetil-6,6-dimetil-2-tetrahidropiranocarboxílico o ácido O-demetilanhidrohomoha- rringtónico
138 
\newpage
Método D
Se sometió a agitación a 60ºC durante 16 horas una solución del diácido etilénico resultante del Ejemplo 3 (1,5 g, 6,94 mmoles) en ácido fórmico (2,6 ml). Tras retornar a la temperatura ambiente, se eliminó el ácido fórmico en el vacío y el producto crudo resultante se secó a 40ºC en el vacío durante 20 horas (1,5 g, 100%).
Ejemplo 45 Preparación de ácido 2-metoxicarbonilmetil-6,6-dimetil-2-tetrahidropiranocarboxílico o ácido anhidrohomoharringtónico a partir del producto resultante del ejemplo 39
139
Una solución de tert-butil 2-metoxicarbonilmetil-2-hidroxi-6-metilheptanoato resultante del Ejemplo 39 (50 mg, 0,175 mmoles) en ácido fórmico (0,5 ml) se sometió a agitación a temperatura ambiente durante 9 días. Tras eliminar el ácido fórmico en el vacío, el residuo se trató con solución al 5% de hidrogenocarbonato sódico hasta pH 8. A continuación, la capa acuosa se lavó con acetato de etilo, tras acidificar (pH 1) con ácido hidroclórico 1 N y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó a sequedad, proporcionando ácido anhidrohomoharringtónico (20 mg, 50%).
Ejemplo 46 Preparación de (-)cefalotaxina purificada a partir del extracto alcaloídico total de Cephalotaxus sp 
\vskip1.000000\baselineskip
140 
\vskip1.000000\baselineskip
Cefalotaxina parcialmente racemizada [H. Wenkui; L. Yulin; P. Xinfu, Scientia Sinica 23; 7; 835 (1980)].
La ^{1}H-RMN de dos lotes de cefalotaxina (extraída en las mismas condiciones que las indicadas anteriormente) con el reactivo ópticamente activo de desplazamiento de RMN europio (III) tris[3-(heptafluoropropilhidroximetilén-(+)-canforato] (1 eq) mostraba los resultados siguientes:
Lote A: ^{1}H-RMN 400 MHz (CDCl_{3}) (\delta ppm): 6,06 (1H, OCH_{2}O (+)-cefalotaxina) y 5,82 (1H, OCH_{2}O (+)-cefalotaxina); 5,99 (1H, OCH_{2}O (-)-cefalotaxina) y 5,76 (1H, OCH_{2}O (-)-cefalotaxina).
Presencia de 11\pm5% de (+)-cefalotaxina.
[\alpha]^{22}=-134,0º (c=0,214; CHCl_{3}): tasa calculada 25\pm5%
Lote B: ligeramente racemizado (1%)
[\alpha]^{19}=-173,3º (c=0,208; CHCl_{3})
Enriquecimiento enantiomérico de la cefalotaxina natural
Se disolvió cefalotaxina cromatografiada cruda (20 g) a 55ºC en metanol seco (100 ml). La cristalización se da mediante enfriamiento con un evaporador rotatorio y, tras filtrar el producto obtenido de esta manera se obtuvo una pureza según HPLC del 99,9%.
[\alpha]_{C}^{20}=-130ºC (C1, CHD3), que presenta un 10% de racemización. El producto cristalizado obtenido de esta manera (20 g) se disolvió nuevamente en metanol caliente (100 ml).
El enfriamiento lento de la solución permite la aparición de prismas traslúcidos compuestos de (-)-cefalotaxina enantiomérica pura [\alpha]_{D}^{20}=-185º (C1, CHCl_{3}).
Tras la filtración, los licores madre se dejaron evaporar lentamente a temperatura ambiente y se obtuvieron cristales en forma de agujas macladas compuestas exclusivamente de cefalotaxina racémica [\alpha]_{D}^{20}=0,5º (C1; CHCl_{3}).
Tras la filtración, los segundos licores madre proporcionaron prismas compuestos de (-)-cefalotaxina iguales a los obtenidos en la primera cristalización.
Tras la filtración, los terceros licores madre todavía proporcionaron agujas macladas (de erizo) compuestas de (\pm)-cefalotaxina.
El ciclo se repitió tres veces. Los cristales prismáticos combinados se recristalizaron una vez, proporcionando (-)-cefalotaxina enantioméricamente pura, mientras que las agujas macladas combinadas que habían sido tratadas de la misma manera proporcionaban cefalotaxina racémica 100%.
Evaluación química de la pureza enantiomérica de la cefalotaxina natural
Se introdujo en el procedimiento una muestra de cefalotaxina natural parcialmente racemizada, cuya secuencia se describe en los Ejemplos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 15, 19 y 21, utilizando un ácido (2R)-homoharringtónico puro del Ejemplo 19.
El análisis de HPLC de la mezcla diastereomérica de anhidro-homoharringtonina obtenida de esta manera mostraba una tasa significativa enantio-epi-homoharringtonina (11%\pm3%), que presenta el contenido en (+)-cefalotaxina de la mezcla racémica deorigen (se ha demostrado que las dos antípodas del ácido homoharringtónico reaccionan de una manera estequiométrica comparable a la de la cefalotaxina enantiomérica pura).
Ejemplo 47 Preparación de homoharringtonina a partir de anhidro-homoharringtonina
141
1º) Método A
Se añadió una solución comercial de ácido bromhídrico en ácido acético (17,4 ml, 86,6 mmoles, HBr al 30% p/p) a una solución bajo agitación de anhidrohomoharringtonina resultante del Ejemplo 21 (50,8 g, 9,63 mmoles) en diclorometano anhidro (25,6 ml) a -10ºC. Tras agitar a -10ºC durante 3 horas se añadió agua (240 ml) y la mezcla de reacción se hizo viscosa. Se dejó que la temperatura se incrementase hasta la temperatura ambiente y tras agitar durante 2,5 horas se añadió carbonato sódico 0,76 M (406 ml) hasta pH 8. La capa acuosa resultante se saturó con cloruro sódico, después se extrajo con diclorometano (3 x 230 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad, proporcionando una espuma. Tras la cromatografía en fase reversa anteriormente indicada, se obtuvieron 4,03 g de homoharringtonina (77%). El producto obtenido de esta manera mostraba características iguales a las del producto resultante del Ejemplo 25.
2º) Método B
A una solución bajo agitación de la anhidrohomoharringtonina resultante del Ejemplo 21 (214 mg, 0,406 mmoles) en diclorometano anhidro (1,1 ml) se añadió a -10ºC una solución comercial de ácido bromhídrico en ácido acético (0,728 ml, 3,6 mmoles; HBr al 30% p/p). Tras agitar a -10ºC durante 3 horas, se añadió agua (13 ml) y después la temperatura se incrementó a 20ºC. Tras agitar a 20ºC durante 3 horas, se añadió una solución de carbonato sódico (0,76 M; 31,5 ml) hasta pH 8. La capa acuosa resultante, tras saturar con cloruro sódico, se extrajo con diclorometano (3 x 20 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron a sequedad. El producto crudo resultante se purificó mediante la cromatografía en fase reversa anteriormente indica, proporcionando homoharringtonina (166 mg, 75%). El producto obtenido de esta manera muestra características iguales a las del producto resultante del Ejemplo 25.
142
143
144
145
146

Claims (74)

1. Procedimiento para la preparación de cefalotaxano que porta cadena lateral que presenta la fórmula siguiente, y/o una sal del mismo:
\Omega-CO-O-CTX
en la que
\Omega ("omega") es un radical representativo del fragmento de cadena terminal y -CO- es el carbonilo del grupo éster unido al cefalotaxano;
el radical \Omega-CO- se corresponde con:
-
la fórmula de heterocicloalcano sustituido siguiente:
147
en la que n está comprendida entre 0 y 8;
Z es heteroátomo de oxígeno o de azufre, ó NH;
R^{5} es hidrógeno; alquilo, CH_{2}COOCH_{3}, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heterocicloalquilo, éter de oxígeno que porta uno de los radicales anteriormente indicados;
R^{6} y R^{8} son, independientemente,
hidrógeno;
alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heterocicloalquilo, R^{6} y R^{8} pueden estar incluidos en un ciclo;
el éter de oxígeno porta uno de los radicales anteriormente indicados;
ó
-
la siguiente fórmula de alqueno lineal:
148
en la que m está comprendida entre 1 y 8;
Z, R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido anteriormente;
ó
-
la fórmula siguiente:
149
en la que n, R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido anteriormente;
Z y Q^{2} son, independientemente, oxígeno, NH ó heteroátomo de azufre;
Q^{1} es un átomo de carbono o de silicio;R^{9} y R^{10} son, independientemente, hidrógeno, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heterocicloalquilo;
R^{9} y/o R^{10} tienen la posibilidad de no representar nada, o incluso, representar un heteroátomo y/o de establecer un enlace múltiple con Q^{1}, R^{9} y R^{11} que tienen la posibilidad de no representar nada o de establecer un enlace múltiple entre dos átomos de carbono que los portan; y
R^{11} es hidrógeno, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo o alquilcarbonilo;
en la que
-
O-CTX es un fragmento cefalotaxano que presenta la fórmula siguiente, o una sal del mismo:
150
estando unidos los dos tipos de radicales -\Omega y -CTX anteriormente indicados con un enlace éster -CO-O-
reuniendo dicho procedimiento:
-
cualquiera de los dos ácidos carboxílicos con la fórmula general \Omega-CO-OH o una sal del mismo; o
-
una forma activada de un ácido que presenta la fórmula general \Omega-CO-A o una sal del mismo,
\bullet
presentando \Omega-CO la fórmula siguiente:
151
en la que n, Z, R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido anteriormente;
\bullet
ó presentando \Omega-CO la fórmula siguiente:
152
en la que m está comprendida entre 1 y 8, Z, R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido anteriormente;
\bullet
ó presentando \Omega-CO la fórmula siguiente:
153
en la que n, Z, Q^{1}, Q^{2}, R^{5}, R^{6}, R^{8}, R^{9}, R^{10} y R^{11} son tal como se han definido anteriormente
\bullet
ó representando \Omega-CO-A un anhídrido cíclico que presenta la fórmula siguiente:
154
en la que n, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido anteriormente;
con
-
o un cefalotaxano que porta un grupo hidroxilo o una sal del mismo que presenta la fórmula H-O-CTX, en la que CTX es tal como se ha definido anteriormente; o
-
un alcóxido metálico de fórmula M-O-CTX, en la que CTX es tal como se ha definido anteriormente y M es un metal; ó
-
una forma activada de su grupo hidroxilo de fórmula Y-O-CTX, en la que -O-CTX es tal como se ha definido anteriormente e Y o bien es un grupo saliente que proporciona una carga negativa sobre un átomo de oxígeno mediante la escisión entre Y- e -O-CTX, o bien proporciona una carbocación mediante la escisión entre Y-O- y -CTX:
con la posible presencia de uno o varios aditivos de reacción para formar dicho cefalotaxano que porta una cadena lateral y/o una sal del mismo.
2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que Z es un átomo de oxígeno y el cefalotaxano es una cefalotaxina que presenta la fórmula siguiente, o una sal de la misma:
155
en la que R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4} son, independientemente, hidrógeno, un grupo hidroxilo o alcóxido.
3. Procedimiento según la reivindicación 2, en el que dicho cefalotaxano es la cefalotaxina que presenta la fórmula siguiente, o una sal de la misma, en la que R^{1} es hidroxilo, R^{2} es metoxilo, R^{3} y R^{4} son hidrógeno.
156
4. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que R^{5} es hidrógeno.
5. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que R^{5} es -CH_{2}-CO-O-Me.
6. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que n=1 a 4, R^{6} y R^{8} son metil.
7. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que n=1 ó 2, R^{6} es fenilo y R^{8} es hidrógeno.
8. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que R^{5} es -CH_{2}-CO-O-Me, siendo dicho cefalotaxano tal como se ha definido en la reivindicación 3, n=0, Z es NH y R^{8} es hidrógeno.
9. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que A es un radical \Omega-CO-O-, siendo \Omega tal como se ha definido en la reivindicación 1.
10. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que A es haluro.
11. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que A es un radical del compuesto \Omega-CO-A que posee la capacidad de generar una escisión del enlace entre el grupo carbonilo y el sustituyente A en \Omega-CO-A para proporcionar \Omega-CO^{+} y A^{-}.
12. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que A es un radical seleccionado de entre los sustituyentes siguientes:
metoxiformiloxi de fórmula MeOCOO-,
trifluoroacetiloxi de fórmula CF3COO-,
alquilsulfonoxi de fórmula RSO3-,
fosfoxi de fórmula (RO_{2})PO-,
halofosfoxi de fórmula ROP(Cl)O-,
trialquilsililoxi de fórmula R3SiO-,
cloruro de dimetil-formamidinio de fórmula:
\vskip1.000000\baselineskip
157
o bromuro de aciloxi-piridinio de fórmula:
\vskip1.000000\baselineskip
158
siendo R en dichas fórmulas alquilo.
13. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que A es un radical 2,4,6-triclorobenzoiloxi.
14. Procedimiento según la reivindicación 13, en el que el reactivo de fórmula \Omega-CO-A, siendo A un radical 2,4,6-triclorobenzoiloxi, se obtiene poniendo en contacto un ácido \Omega-CO-OH, tal como se ha definido en la reivindicación 1, con cloruro de 2,4,6-triclorobenzoilo en presencia de uno o más aditivos de O-acilación.
15. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que el radical A se corresponde con la fórmula siguiente:
159
16. Procedimiento según la reivindicación 15, en el que el reactivo de fórmula \Omega-CO-A se obtiene poniendo en contacto un ácido \Omega-CO-OH, tal como se ha definido en la reivindicación 1, con carbonil-diimidazol en presencia de un alcóxido.
17. Procedimiento según las reivindicaciones anteriores, en el que el aditivo de acoplamiento es una carbodiimida sustituida y/o un aditivo básico, tal como una amina terciaria por ejemplo.
18. Procedimiento según la reivindicación 17, en el que la carbodiimida sustituida se selecciona de entre la ciclohexilcarbodiimida (DCC), la 1,3-diisopropilcarbodiimida (DIC) y el clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etil-carbodiimida.
19. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el alcóxido de cefalotaxano se corresponde con la fórmula siguiente:
M-O-CTX,
en la que M y CTX son tal como se han definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3,
se obtiene poniendo en contacto un cefalotaxano que presenta la fórmula siguiente:
H-O-CTX
en la que CTX es tal como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3,
con el metal propiamente dicho, una amida, un hidruro metálico o un metal alcalino.
20. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, en el que M es un metal alcalino tal como el litio, el potasio o el sodio.
21. Alcóxido de litio de cefalotaxina que presenta la fórmula siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
160 
\vskip1.000000\baselineskip
22. Alcóxido de sodio de cefalotaxina que presenta la fórmula siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
161 
\vskip1.000000\baselineskip
23. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20, en el que
-
cuando la cadena lateral cíclica del cefalotaxano que porta una cadena lateral, y/o una sal del mismo, que presenta la fórmula siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
162 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que n, R^{5}, R^{6}, R^{8}, CTX y Z son tal como se han definido en las reivindicaciones 1 a 3;
dicha cadena se abre con un agente y/o con un radical electrofílico E protónico o no protónico en un medio acuoso o no acuoso, para proporcionar un compuesto intermedio que presenta la fórmula siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
163 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que n, CTX, R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido anteriormente, E es hidrógeno o el radical electrofílico provisional o definitivamente fijado;
pudiendo dicho compuesto intermedio ser atacado con un agente o con un radical nucleofílico Z', añadido deliberadamente o posiblemente presente en el medio, y
-
cuando la cadena lateral cíclica del cefalotaxano que porta una cadena lateral, y/o una sal del mismo, que presenta la fórmula siguiente:
164
en la que n, R^{5}, R^{6}, R^{8}, R^{9}, R^{10} y R^{11} son tal como se han definido en la reivindicación 1 y Z' es un heteroátomo;
dicha cadena se abre mediante hidrólisis o solvólisis lenta con posible presencia de un aditivo de activación y/o de apertura;
-
para proporcinoar un cefalotaxano que porta una cadena lateral abierta que presenta la fórmula siguiente:
165
en la que n, CTX, R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido en las reivindicaciones 1 a 3;
Z' es:
-
un halógeno o un heteroátomo que porta un hidrógeno o un radical R^{11}, tal como se ha definido en la reivindicación 1;
-
o un hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo o heterocicloalquilo.
24. Procedimiento según la reivindicación 23, en el que la cadena lateral cíclica del cefalotaxano que porta una cadena lateral, y/o una sal del mismo, que presenta la fórmula siguiente:
166
en la que n, R^{8}, R^{6}, R^{5}, CTX y Z se definen según las reivindicaciones 1 a 3,
se abre mediante tratamiento con una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, en un disolvente halogenado, preferentemente diclorometano, seguido de hidrólisis in situ para proporcionar sin aislamiento del intermediario, un cefalotaxano que porta una cadena lateral, que presenta la fórmula siguiente:
167
en la que n, CTX, R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido en las reivindicaciones 1 a 3.
25. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20 y según la reivindicación 23, en el que los ácidos se corresponden con la fórmula siguiente:
\Omega-CO-OH
en la que el radical \Omega es tal como se ha definido en la reivindicación 1,
habiéndose obtenido dicha fórmula, equivalente a una mezcla racémica que contiene compuestos de fórmulas (+)-\Omega-CO-OH y (-)-\Omega-CO-OH, en las que (+)-\Omega-CO-OH representa el enantiómero dextrógiro y (-)-\Omega-CO-OH representa el enantiómero levógiro,
a)
poniendo en contacto dicha mezcla racémica o una de sus formas activadas de fórmula
\Omega-CO-A
que es tal como se ha definido en la reivindicación 1 y en las reivindicaciones 9 a 18;
con una forma enantiomérica pura de carácter quiral, presentando dicho "agente de resolución" simbolizado con \Delta* (delta asterisco), poseyendo la capacidad de formar:
-
una combinación estable, mediante unión covalente;
-
o una combinación lábil fácilmente reversible, mediante unión de hidrógeno o mediante interacción hidrofóbica;
-
o una unión de labilidad intermedia, mediante interacción electrostática;
para proporcionar una mezcla diastereomérica de \Omega-CO-O-\Delta* y de \Omega-CO-\Delta*;
b)
separando físicamente a continuación la mezcla de los dos diastereómeros o dos compuestos complejos o más generalmente, de dos nuevas entidades física y/o químicamente diferentes obtenidas;
c)
regenerando y sepraando por último cada uno de los enantiómeros de fórmula genérica \Omega*-CO-OH,
en la que \Omega* ("omega estrella") representa el símbolo genérico del mismo radical quiral en cualquiera de las formas enantioméricas puras que se corresponden con las fórmulas siguientes: (+)-\Omega-CO-OH y (-)-\Omega-CO-OH, que son tal como se han definido anteriormente.
26. Procedimiento según la reivindicación 25, en la que \Omega-CO- es un radical que presenta la fórmula siguiente:
168
en la que n, Z, R^{6}, R^{8} y R^{5} son tal como se han definido en la reivindicación 1.
27. Procedimiento según la reivindicación 25, en el que \Omega-CO- es un radical que presenta la fórmula siguiente:
169
en la que m, Z, R^{6}, R^{8} y R^{5} son tal como se han definido en la reivindicación 1.
28. Procedimiento según la reivindicación 25, en el que \Omega-CO- es un radical que presenta la fórmula siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
170 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que n, R^{5}, R^{6}, R^{8}, Z, Q^{2}, Q^{1}, R^{9}, R^{10} y R^{11} son tal como se han definido en la reivindicación 1.
29. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 25 a 28, en el que la combinación estable se representa mediante un éster que presenta la fórmula siguiente: \Omega-CO-O-\Delta*, en la que \Omega y \Delta* son tal como se han definido en la reivindicación 25, siendo obtenida dicha combinación estable poniendo en contacto un ácido con un alcohol quiral que presenta la fórmula HO-\Delta*, en la que \Delta* es tal como se ha definido en la reivindicación 25, según el procedimiento de la reivindicación 1.
30. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 25 a 28, en el que la combinación iónica está representada por una sal preparada simplemente poniendo en contacto un ácido con una amina quiral que presenta cualquiera de las tres fórmulas siguientes:
\Omega-CO-O^{-} [NH-\Delta*]^{+}
\Omega-CO-O^{-} [NH_{2}-\Delta*]^{+}
\Omega-CO-O^{-} [NH_{3}-\Delta*]^{+}
en las que \Omega y \Delta* son tal como se han definido en la reivindicación 25.
31. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 25 a 28, en el que se consigue una combinación basada en un enlace lábil en forma de cromatografía con ayuda de una fase estacionaria quiral.
32. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 25 a 28, en el que se consigue una combinación basada en un enlace interatómico o intermolecular lábil, dentro de una red cristalina, en forma de una cristalización fraccionada iniciada por un precursor quiral.
33. Procedimiento según la reivindicación 29, en el que el alcohol quiral HO-\Delta* es la (-)-quinina, que presenta la fórmula siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
171 
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34. Procedimiento según la reivindicación 29, en el que el alcohol quiral HO-\Delta* es el mandelato de (-)- ó (+)-metil, que presenta las fórmulas siguientes:
\vskip1.000000\baselineskip
172 
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35. Procedimiento según la reivindicación 29, en el que el alcohol quiral HO-\Delta* es el mentol (-)- ó (+), que presenta las fórmulas siguientes:
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173 
\vskip1.000000\baselineskip
36. Procedimiento según la reivindicación 30, en el que la amina quiral H_{2}N-\Delta* es la efederina (-)- ó (+), que presenta las fórmulas siguientes:
174
37. (2'R)-(-)-anhidro-homoharringtonato de (-)-quinidil y (2'S)-(-)-anhidro-homoharringtonato de (-)-quinidil, que presentan respectivamente las dos fórmulas siguientes:
175
38. (2'R)-(-)-anhidro-homoharringtonato de (-)-mentil y (2'S)-(-)-anhidro-homoharringtonato de (-)-mentil, que presentan respectivamente las dos fórmulas siguientes:
176
39. (2'R)-(-)-anhidro-homoharringtonato de (-)-metilmandelil y (2'S)-(-)-anhidro-homoharringtonato de (-)-metilmandelil, que presentan respectivamente las dos fórmulas siguientes:
177
40. (2'R)-(-)-anhidro-homoharringtonato de (-)-efedrinio y (2'S)-(-)-anhidro-homoharringtonato de (-)-efedrinio, que presentan respectivamente las dos fórmulas siguientes:
178
41. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20 y 23 a 36, en el que el ácido carboxílico es:
-
el ácido carboxílico heterocicloalcano terciario que presenta la fórmula siguiente:
179
en la que n, Z, R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido en la reivindicación 1,
obteniéndose dicho ácido mediante tratamiento en disolvente aprótico o prótico, eventualmente en presencia de un aditivo de ciclización y/o de un agente deshidratante, estando facilitado eventualmente dicho tratamiento por el transporte físico del agua formada,
-
o un ácido etilénico terciario abierto que presenta la fórmula siguiente:
180
en la que m, Z, R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido en la reivindicación 1,
-
o un éster que presenta la fórmula siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
181 
\vskip1.000000\baselineskip
en la que m está comprendida entre 1 y 8, Z, R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido en la reivindicación 1, R^{12} no es un radical CTX según la reivindicación 1, y representa R^{5} y/o un grupo protector de ácidos y/o un grupo quiral;
posteriormente se elimina R^{12}, mediante simple saponificación, o mediante hidrogenolisis, o más generalmente, mediante el procedimiento del estado de la técnica para eliminar grupos protectores de ácidos.
42. Procedimiento según la reivindicación 41, en el que, en ausencia de aditivo de ciclización, la reacción de ciclización tiene lugar simplemente mediante calentamiento.
43. Procedimiento según la reivindicación 41, en el que el aditivo de ciclización es un ácido prótico o un ácido aprótico, incorporado en forma inmovilizada.
44. Procedimiento según la reivindicación 41, en el que el ácido es ácido sulfónico o ácido fórmico.
45. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 41 a 44, en el que Z es un átomo de oxígeno.
46. Ácido carboxílico heterocicloalcano terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras, en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
182
en la que n está comprendida entre 1 y 8, Z, R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido en la reivindicación 1, y R^{5} no es hidrógeno;
excepto los compuestos en los que Z es un átomo de oxígeno y,
1º)
n=0 y R^{5} no es -CH_{2}COOH ó -CH_{2}CO_{2}CH_{3};
2º)
n=0 y R^{5} es -CH_{2}CO_{2}CH_{3} y R^{6}=R^{8}=metilo;
3º)
n=2 y R^{6}=R^{8}=metilo y R^{5} es O-Me ó OH;
4º)
n=2 y R^{6}=R^{8}=metilo y R^{5} es Me ó -CH_{2}CO_{2}CH_{3};
5º)
n=3 y simultáneamente R^{6} es hidroxilo y R^{8} es metilo y R^{5} es -CH_{2}CO_{2}CH_{3};
6º)
n=3 y simultáneamente R^{6}=R^{8}=metilo y R^{5} es -OH ó metilo o etilo;
7º)
cuando n=2 ó 3 y R^{5}= CH_{3}, R^{6} y R^{8} independientemente representan H ó Me;
8º)
cuando n=3 y R^{6}=R^{8}=H, R^{5} representa un grupo etilo o un grupo metilo;
9º)
cuando n=3 y R6=R8=H, R5 representa -CH(CH_{3})=CHCH_{3}, -CH_{2}CH(CH_{3})=CH=2, -CH_{2}CH=CH_{2} ó un grupo 3-ciclohexenilo;
10º)
cuando n=2, R^{5} representa etilo, n-pentilo o fenilo, R^{6}=R^{8}=H.
47. Ácido carboxílico oxacicloalcano terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras, en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
183
en la que n está comprendida entre 0 y 8, R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido en la reivindicación 46, pero no son hidrógeno simultáneamente.
48. Ácido carboxílico heterocicloalcano terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras, en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
184
en la que n está comprendida entre 0 y 8, Z, R^{5}, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido en la reivindicación 46, y R^{5} no es hidrógeno y R^{12} es tal como se ha definido en la reivindicación 41.
49. Hemiéster carboxílico oxacicloalcano terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas, en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
185
en la que n está comprendida entre 0 y 8, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido en la reivindicación 46.
50. Hemiéster carboxílico oxacicloalcano terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras, en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
186
en la que n está comprendida entre 0 y 8, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido en la reivindicación 46 y R^{12} es tal como se ha definido en la reivindicación 41.
51. Hemiéster carboxílico oxacicloalcano terciario o ácido anhidrohomoharringtónico, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras, en mezcla racémica o en composición variable, que presentan la fórmula siguiente:
187
52. Hemiéster carboxílico oxacicloalcano terciario o ácido anhidro-harringtónico, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras, en mezcla racémica o en composición variable, que presentan la fórmula siguiente:
188
53. Ácido carboxílico oxacicloalcano terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras, en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
189
en la que n está comprendida entre 0 y 8, R^{5} es tal como se ha definido en la reivindicación 46.
54. Ácido carboxílico oxacicloalcano terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras, en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
190
en la que n está comprendida entre 1 y 8.
55. Ácido carboxílico oxacicloalcano terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras, en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
191
en la que n está comprendida entre 0 y 8.
56. Ácido carboxílico oxacicloalcano terciario o ácido oxanhidroneoharringtónico, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras, en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
192
57. Ácido carboxílico oxacicloalcano terciario o ácido oxanhidroneohomoharringtónico, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras, en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
193
58. Ácido carboxílico oxacicloalcano terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras, en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
194
59. Ácido carboxílico alqueno terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras, en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
195
en la que m está comprendida entre 1 y 8, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido en la reivindicación 1, pero no son hidrógeno simultáneamente, y R^{5} no es hidrógeno ni un heteroátomo.
60. Ácido carboxílico alqueno terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras, en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
196
en la que m está comprendida entre 1 y 8, m' está comprendida entre 1 y 8, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido en la reivindicación 1 y R^{12} es tal como se ha definido en la reivindicación 41.
61. Ácido carboxílico alqueno terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras, en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
197
en la que m está comprendida entre 1 y 8, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido en la reivindicación 1 pero no son hidrógeno.
62. Ácido carboxílico alqueno terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras, en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
198
63. Ácido carboxílico alqueno terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras, en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
199
64. Ácido carboxílico alqueno terciario, incluidas sus sales y cada una de sus formas enantioméricas puras, en mezcla racémica o en composición variable, que presenta la fórmula siguiente:
200
en la que m está comprendida entre 1 y 8.
65. Compuesto según la reivindicación 64, en el que m=1.
66. Anhídridos del ácido preparado según cualquiera de las reivindicaciones 45 a 57, de fórmula general \Omega-CO-O-CO-\Omega, en la que \Omega es tal como se ha definido en la reivindicación 1.
67. Anhídridos mixtos del ácido preparado según cualquiera de las reivindicaciones 45 a 57, de fórmula general \Omega-CO-A, en la que A es tal como se ha definido según cualquiera de las reivindicaciones 12, 13 ó 15.
68. Anhídrido mixto que presenta la fórmula siguiente:
201
69. Cloruros del ácido preparado según cualquiera de las reivindicaciones 45 a 57, y que corresponde a la fórmula general \Omega-CO-X, en la que X es halógeno.
70. Anhídridos cíclicos que presenta la fórmula siguiente:
202
en la que n, R^{6} y R^{8} son tal como se han definido en la reivindicación 1.
71. Anhídrido cíclico que presenta la fórmula siguiente:
203
72. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20 y 23 a 26, en el que el cefalotaxano portador de una cadena lateral se purificó en forma de sal mediante cromatografía utilizando una fase estacionaria de fase inversa y una fase móvil sin disolvente orgánico tal como una solución ajustada a un pH de 2 a 4,5 con un tampón preparado con un ácido y una sal alcalina o de amonio y uno o varios aditivos, tal como un atenuador del efecto silanol, siendo dicha sal cefalotaxina preparada a partir de un ácido mineral en forma de clorhidrato, sulfato, fosfato, nitrato, perclorato o de un ácido orgánico en forma de tartrato, malato, citrato o lactato.
73. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20 y 23 a 36, que comprende una etapa de purificación cromatográfica de una homoharringtonina natural, semisintética o sintética de utilización farmacéutica que presenta la fórmula siguiente:
204
con el fin de eliminar las impurezas relacionadas no deseadas denominadas 2-epihomoharringtonina, resultante de:
a)
un proceso semisintético con introducción de un ácido homoharringtónico sintético de pureza enantiomérica inadecuada, mostrando la impureza generada la configuración absoluta que presenta la fórmula siguiente:
205
b)
o un proceso biosintético en una planta, en la que se ha introducido una cefalotaxina de pureza enantiomérica inadecuada, o en forma de artefacto mediante racemización parcial del fragmento cefalotaxina, mostrando la impureza generada propiedades cromatográficas estrictamente iguales a las de un sistema no quiral,
\quad
con una configuración absoluta opuesta a la indicada anteriormente (enantiómero) y que presenta la fórmula siguiente:
206
\quad
especialmente utilizando uno de los sistemas cromatográficos siguientes:
A)
Fase estacionaria:
\quad
Alquil- o fenil- o alquilfenil- o fenilalquil-silano, preferentemente n-octadecilsilano,
B)
Fase móvil:
\quad
Agua-tetrahidrofurano, agua-metanol, agua-acetonitrilo o tampón pH 2 a 6,5 en sustitución de agua o cualquier otra fase móvil de selectividad equivalente.
74. Procedimiento para la purificación y el control cromatográfico según la reivindicación 73 de una homoharringtonina natural, semisintética o sintética, que permite compensar la doble insuficiencia de la pureza enantiomérica de los semiprecursores, tanto en el precursor de la cadena lateral (dicho ácido homoharringtónico) como en la cefalotaxina; generándose los dos precursores indicados anteriormente independientemente cada uno mediante un proceso de síntesis total o de semisíntesis, o mediante un proceso natural en una planta (biosíntesis), mostrando de hecho la retirada del enantiómero no natural de la homoharringtonina una configuración absoluta opuesta, mediante la utilización de una fase estacionaria quiral en escala preparativa.
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