EA035374B1 - Антитела против cd48 и их конъюгаты - Google Patents
Антитела против cd48 и их конъюгаты Download PDFInfo
- Publication number
- EA035374B1 EA035374B1 EA201792055A EA201792055A EA035374B1 EA 035374 B1 EA035374 B1 EA 035374B1 EA 201792055 A EA201792055 A EA 201792055A EA 201792055 A EA201792055 A EA 201792055A EA 035374 B1 EA035374 B1 EA 035374B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- antibody
- drug
- administered
- hmem102
- combination therapy
- Prior art date
Links
- 101150023971 Cd48 gene Proteins 0.000 title 1
- 101000716130 Homo sapiens CD48 antigen Proteins 0.000 claims abstract description 104
- 102100036008 CD48 antigen Human genes 0.000 claims abstract description 87
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims abstract description 11
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 claims description 158
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 claims description 151
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 78
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 77
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 67
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 52
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 46
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 38
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 35
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 34
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 claims description 32
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 24
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 20
- 102000046585 human CD48 Human genes 0.000 claims description 17
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 claims description 16
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 15
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 14
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 claims description 14
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 13
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 claims description 12
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 10
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 10
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 7
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 7
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 121
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 88
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 78
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 77
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 66
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 62
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 57
- GOTYRUGSSMKFNF-UHFFFAOYSA-N lenalidomide Chemical compound C1C=2C(N)=CC=CC=2C(=O)N1C1CCC(=O)NC1=O GOTYRUGSSMKFNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 53
- 229960004942 lenalidomide Drugs 0.000 description 52
- GXJABQQUPOEUTA-RDJZCZTQSA-N bortezomib Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)B(O)O)NC(=O)C=1N=CC=NC=1)C1=CC=CC=C1 GXJABQQUPOEUTA-RDJZCZTQSA-N 0.000 description 51
- 229960001467 bortezomib Drugs 0.000 description 50
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 50
- BLMPQMFVWMYDKT-NZTKNTHTSA-N carfilzomib Chemical group C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)[C@]1(C)OC1)NC(=O)CN1CCOCC1)CC1=CC=CC=C1 BLMPQMFVWMYDKT-NZTKNTHTSA-N 0.000 description 41
- 108010021331 carfilzomib Proteins 0.000 description 41
- 229960002438 carfilzomib Drugs 0.000 description 41
- FPOHNWQLNRZRFC-ZHACJKMWSA-N panobinostat Chemical compound CC=1NC2=CC=CC=C2C=1CCNCC1=CC=C(\C=C\C(=O)NO)C=C1 FPOHNWQLNRZRFC-ZHACJKMWSA-N 0.000 description 27
- 229960005184 panobinostat Drugs 0.000 description 26
- 229960002204 daratumumab Drugs 0.000 description 25
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- UVSMNLNDYGZFPF-UHFFFAOYSA-N pomalidomide Chemical compound O=C1C=2C(N)=CC=CC=2C(=O)N1C1CCC(=O)NC1=O UVSMNLNDYGZFPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- -1 his Chemical compound 0.000 description 22
- 229960000688 pomalidomide Drugs 0.000 description 22
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 21
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 20
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 19
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 18
- 229960004137 elotuzumab Drugs 0.000 description 18
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 17
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 17
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 17
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 17
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 16
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 13
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 13
- MXAYKZJJDUDWDS-LBPRGKRZSA-N ixazomib Chemical group CC(C)C[C@@H](B(O)O)NC(=O)CNC(=O)C1=CC(Cl)=CC=C1Cl MXAYKZJJDUDWDS-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 13
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 13
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 12
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 12
- 229960003648 ixazomib Drugs 0.000 description 12
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 11
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 11
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 10
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 10
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 10
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 10
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 10
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 9
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 9
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 9
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 9
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 9
- UEJJHQNACJXSKW-UHFFFAOYSA-N 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1H-isoindole-1,3(2H)-dione Chemical compound O=C1C2=CC=CC=C2C(=O)N1C1CCC(=O)NC1=O UEJJHQNACJXSKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 8
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 8
- XMYQHJDBLRZMLW-UHFFFAOYSA-N methanolamine Chemical compound NCO XMYQHJDBLRZMLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 description 8
- 229960003433 thalidomide Drugs 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 235000005311 Pandanus odoratissimus Nutrition 0.000 description 7
- 240000002390 Pandanus odoratissimus Species 0.000 description 7
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 7
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 7
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 6
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 108010044540 auristatin Proteins 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 229960001924 melphalan Drugs 0.000 description 6
- SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N melphalan Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 6
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 6
- 239000012453 solvate Substances 0.000 description 6
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 6
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 6
- OMRPLUKQNWNZAV-CONSDPRKSA-N (6as)-3-[3-[[(6as)-2-methoxy-8-(4-methoxyphenyl)-11-oxo-6a,7-dihydropyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-3-yl]oxy]propoxy]-8-(4-aminophenyl)-2-methoxy-6a,7-dihydropyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-11-one Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C1=CN2C(=O)C3=CC(OC)=C(OCCCOC=4C(=CC=5C(=O)N6C=C(C[C@H]6C=NC=5C=4)C=4C=CC(N)=CC=4)OC)C=C3N=C[C@@H]2C1 OMRPLUKQNWNZAV-CONSDPRKSA-N 0.000 description 5
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 5
- 208000033559 Waldenström macroglobulinemia Diseases 0.000 description 5
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 5
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 5
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 5
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 5
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 5
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 5
- 125000000951 phenoxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(O*)C([H])=C1[H] 0.000 description 5
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 5
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 5
- 238000001946 ultra-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- 238000012447 xenograft mouse model Methods 0.000 description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 4
- VYZAMTAEIAYCRO-BJUDXGSMSA-N Chromium-51 Chemical compound [51Cr] VYZAMTAEIAYCRO-BJUDXGSMSA-N 0.000 description 4
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- 229940079156 Proteasome inhibitor Drugs 0.000 description 4
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 4
- 208000016025 Waldenstroem macroglobulinemia Diseases 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 4
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 4
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 4
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 4
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 description 4
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 4
- PTCGDEVVHUXTMP-UHFFFAOYSA-N flutolanil Chemical compound CC(C)OC1=CC=CC(NC(=O)C=2C(=CC=CC=2)C(F)(F)F)=C1 PTCGDEVVHUXTMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 201000003444 follicular lymphoma Diseases 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 239000003207 proteasome inhibitor Substances 0.000 description 4
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 4
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 4
- 206010048962 Brain oedema Diseases 0.000 description 3
- 102100024217 CAMPATH-1 antigen Human genes 0.000 description 3
- 108010065524 CD52 Antigen Proteins 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 206010020631 Hypergammaglobulinaemia benign monoclonal Diseases 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 3
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IEDXPSOJFSVCKU-HOKPPMCLSA-N [4-[[(2S)-5-(carbamoylamino)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)hexanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]pentanoyl]amino]phenyl]methyl N-[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(3R,4S,5S)-1-[(2S)-2-[(1R,2R)-3-[[(1S,2R)-1-hydroxy-1-phenylpropan-2-yl]amino]-1-methoxy-2-methyl-3-oxopropyl]pyrrolidin-1-yl]-3-methoxy-5-methyl-1-oxoheptan-4-yl]-methylamino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]-N-methylcarbamate Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H]([C@@H](CC(=O)N1CCC[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)c1ccccc1)OC)N(C)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)OCc1ccc(NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCCN2C(=O)CCC2=O)C(C)C)cc1)C(C)C IEDXPSOJFSVCKU-HOKPPMCLSA-N 0.000 description 3
- 230000005888 antibody-dependent cellular phagocytosis Effects 0.000 description 3
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 208000006752 brain edema Diseases 0.000 description 3
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 3
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 201000005328 monoclonal gammopathy of uncertain significance Diseases 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- IFOHPTVCEBWEEQ-UHFFFAOYSA-N pyrrolo[2,3-i][1,4]benzodiazepine Chemical class N1=CC=NC2=C3C=CN=C3C=CC2=C1 IFOHPTVCEBWEEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 3
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N succinimide Chemical class O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- GHOKWGTUZJEAQD-ZETCQYMHSA-N (D)-(+)-Pantothenic acid Chemical compound OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004214 1-pyrrolidinyl group Chemical group [H]C1([H])N(*)C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 2
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000015713 CD48 Antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010038940 CD48 Antigen Proteins 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000047934 Caspase-3/7 Human genes 0.000 description 2
- 108700037887 Caspase-3/7 Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 2
- 102000003964 Histone deacetylase Human genes 0.000 description 2
- 108090000353 Histone deacetylase Proteins 0.000 description 2
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 2
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000633784 Homo sapiens SLAM family member 7 Proteins 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 2
- 208000025205 Mantle-Cell Lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 206010060880 Monoclonal gammopathy Diseases 0.000 description 2
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000002774 Paraproteinemias Diseases 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 102100029198 SLAM family member 7 Human genes 0.000 description 2
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002253 Tannate Polymers 0.000 description 2
- 108060008539 Transglutaminase Proteins 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 229960000548 alemtuzumab Drugs 0.000 description 2
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 2
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 2
- 206010002022 amyloidosis Diseases 0.000 description 2
- 230000006023 anti-tumor response Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 229940049706 benzodiazepine Drugs 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 2
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 2
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 description 2
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 2
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 2
- 238000000589 high-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 150000004677 hydrates Chemical class 0.000 description 2
- 150000002466 imines Chemical group 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 2
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 2
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 2
- 229940014662 pantothenate Drugs 0.000 description 2
- 235000019161 pantothenic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011713 pantothenic acid Substances 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 2
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 102000003601 transglutaminase Human genes 0.000 description 2
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- MFRNYXJJRJQHNW-DEMKXPNLSA-N (2s)-2-[[(2r,3r)-3-methoxy-3-[(2s)-1-[(3r,4s,5s)-3-methoxy-5-methyl-4-[methyl-[(2s)-3-methyl-2-[[(2s)-3-methyl-2-(methylamino)butanoyl]amino]butanoyl]amino]heptanoyl]pyrrolidin-2-yl]-2-methylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound CN[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N(C)[C@@H]([C@@H](C)CC)[C@H](OC)CC(=O)N1CCC[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MFRNYXJJRJQHNW-DEMKXPNLSA-N 0.000 description 1
- AGGWFDNPHKLBBV-YUMQZZPRSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-amino-3-methylbutanoyl]amino]-5-(carbamoylamino)pentanoic acid Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=O AGGWFDNPHKLBBV-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- LJIOTBMDLVHTBO-CUYJMHBOSA-N (2s)-2-amino-n-[(1r,2r)-1-cyano-2-[4-[4-(4-methylpiperazin-1-yl)sulfonylphenyl]phenyl]cyclopropyl]butanamide Chemical compound CC[C@H](N)C(=O)N[C@]1(C#N)C[C@@H]1C1=CC=C(C=2C=CC(=CC=2)S(=O)(=O)N2CCN(C)CC2)C=C1 LJIOTBMDLVHTBO-CUYJMHBOSA-N 0.000 description 1
- QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[5-[(3aS,6aR)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-[1-bis(4-chlorophenoxy)phosphorylbutylamino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CCCC(NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](Cc1ccc(O)cc1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCC1SC[C@@H]2NC(=O)N[C@H]12)C(C)C)P(=O)(Oc1ccc(Cl)cc1)Oc1ccc(Cl)cc1 QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SVUOLADPCWQTTE-UHFFFAOYSA-N 1h-1,2-benzodiazepine Chemical compound N1N=CC=CC2=CC=CC=C12 SVUOLADPCWQTTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- YXHLJMWYDTXDHS-IRFLANFNSA-N 7-aminoactinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=C(N)C=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 YXHLJMWYDTXDHS-IRFLANFNSA-N 0.000 description 1
- 108700012813 7-aminoactinomycin D Proteins 0.000 description 1
- VGGWNGWXGFWLRK-UHFFFAOYSA-N 8,9-dihydro-1H-[1,3]oxazolo[4,5-i][1,2]benzodiazepine Chemical compound C1=CC=NNC2=C(OCN3)C3=CC=C21 VGGWNGWXGFWLRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023761 AL amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 239000012114 Alexa Fluor 647 Substances 0.000 description 1
- 239000012099 Alexa Fluor family Substances 0.000 description 1
- 241000269858 Anarhichas lupus Species 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000003731 Caspase Glo 3/7 Assay Methods 0.000 description 1
- 102000004225 Cathepsin B Human genes 0.000 description 1
- 108090000712 Cathepsin B Proteins 0.000 description 1
- 102000005600 Cathepsins Human genes 0.000 description 1
- 108010084457 Cathepsins Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 1
- 241000557626 Corvus corax Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- DSLZVSRJTYRBFB-LLEIAEIESA-N D-glucaric acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O DSLZVSRJTYRBFB-LLEIAEIESA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N D-glucopyranuronic acid Chemical compound OC1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical group SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical group C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M Formate Chemical compound [O-]C=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 description 1
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101000633778 Homo sapiens SLAM family member 5 Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 208000005531 Immunoglobulin Light-chain Amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 1
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 1
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 1
- 101100341513 Mus musculus Itgam gene Proteins 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical group NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150092610 PKH2 gene Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- RFCVXVPWSPOMFJ-STQMWFEESA-N Phe-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 RFCVXVPWSPOMFJ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 206010036673 Primary amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108020005091 Replication Origin Proteins 0.000 description 1
- 102100029216 SLAM family member 5 Human genes 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 description 1
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 1
- 229940122803 Vinca alkaloid Drugs 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000006242 amine protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940125644 antibody drug Drugs 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229940077388 benzenesulfonate Drugs 0.000 description 1
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-M benzenesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 150000001557 benzodiazepines Chemical class 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PUJDIJCNWFYVJX-UHFFFAOYSA-N benzyl carbamate Chemical class NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 PUJDIJCNWFYVJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 210000003969 blast cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229930195731 calicheamicin Natural products 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000012054 celltiter-glo Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 208000024207 chronic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940094732 darzalex Drugs 0.000 description 1
- 229940026692 decadron Drugs 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N dihydroxy(oxo)silane Chemical compound O[Si](O)=O IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 229960005501 duocarmycin Drugs 0.000 description 1
- 229930184221 duocarmycin Natural products 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 229940038483 empliciti Drugs 0.000 description 1
- 238000003821 enantio-separation Methods 0.000 description 1
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M ethanesulfonate Chemical compound CCS([O-])(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- PQVSTLUFSYVLTO-UHFFFAOYSA-N ethyl n-ethoxycarbonylcarbamate Chemical compound CCOC(=O)NC(=O)OCC PQVSTLUFSYVLTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 229940050411 fumarate Drugs 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 229940097042 glucuronate Drugs 0.000 description 1
- 229930182480 glucuronide Natural products 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 231100000001 growth retardation Toxicity 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M hydrogensulfate Chemical compound OS([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- TWBYWOBDOCUKOW-UHFFFAOYSA-M isonicotinate Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC=NC=C1 TWBYWOBDOCUKOW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 229940000764 kyprolis Drugs 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 1
- 229940040692 lithium hydroxide monohydrate Drugs 0.000 description 1
- GLXDVVHUTZTUQK-UHFFFAOYSA-M lithium hydroxide monohydrate Substances [Li+].O.[OH-] GLXDVVHUTZTUQK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 229940030115 ninlaro Drugs 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 229940049964 oleate Drugs 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 108010073101 phenylalanylleucine Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229940008606 pomalyst Drugs 0.000 description 1
- 230000003334 potential effect Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 208000022256 primary systemic amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 229940120975 revlimid Drugs 0.000 description 1
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-M salicylate Chemical compound OC1=CC=CC=C1C([O-])=O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960001860 salicylate Drugs 0.000 description 1
- 125000000467 secondary amino group Chemical group [H]N([*:1])[*:2] 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000009168 stem cell therapy Methods 0.000 description 1
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 230000001839 systemic circulation Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- RUPAXCPQAAOIPB-UHFFFAOYSA-N tert-butyl formate Chemical group CC(C)(C)OC=O RUPAXCPQAAOIPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 229940099039 velcade Drugs 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39566—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against immunoglobulins, e.g. anti-idiotypic antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6883—Polymer-drug antibody conjugates, e.g. mitomycin-dextran-Ab; DNA-polylysine-antibody complex or conjugate used for therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
- C07K5/0205—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)3-C(=0)-, e.g. statine or derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
В изобретении представлены мышиные, химерные и гуманизированные антитела, которые специфически связываются с CD48, и их конъюгаты. Данная заявка испрашивает приоритет согласно статье 119(е) раздела 35 Кодекса законов США по предварительной заявке на патент США № 62/134981, поданной 18 марта 2015 г., которая включена в данный документ путем ссылки в полном объеме.
Description
Область изобретения
В данном изобретении представлены мышиные, химерные и гуманизированные антитела, которые специфически связываются с CD48, и их конъюгаты.
Уровень техники
Антиген CD48 (кластер дифференцировки 48) также известен как маркер активации В-лимфоцитов (ВЛАСТНАЯ КЛЕТКА-1) или молекула 2 передачи сигнала лимфоцитарной активации (SLAMF2). CD48 является представителем подсемейства CD2 суперсемейства иммуноглобулинов (IgSF), которое включает белки SLAM (молекулы передачи сигнала активации лимфоцитов), такие как CD84, CD150, CD229 и CD244. CD48 обнаружен на поверхности лимфоцитов и других иммунных клеток, а также дендритных клеток, и он принимает участие в механизмах активации и дифференцировке в этих клетках. Известно, что CD48 экспрессируется на клетках множественной миеломы и других раковых новообразований Вклеточного происхождения, например неходжкинской лимфомы (NHL), хронической лимфоцитарной лейкемии (CLL), моноклональной гаммапатии неясного генеза (MGUS), макроглобулинемии Вальденстрема (WM), опухолевых клетках больного первичным/системным амилоидозом и клетках фолликулярной лимфомы (FL).
Краткое описание сущности изобретения
В одном аспекте данного описания предложено химерное или гуманизированное антитело, которое специфически связывается с белком CD48 человека. Данное антитело включает последовательности CDR тяжелой цепи SEQ ID NO:3-5 и последовательности CDR легкой цепи SEQ ID NO:6-8. Данное антитело проявляет более высокую аффинность связывания с белком CD48 человека по сравнению с мышиным антителом, которое специфически связывается с белком CD48 человека и также включает последовательности CDR тяжелой цепи SEQ ID NO:3-5 и последовательности CDR легкой цепи SEQ ID NO:6-8. В одном варианте реализации изобретения химерное или гуманизированное антитело проявляет по меньшей мере в 2 раза более высокую аффинность связывания для белка CD48 человека по сравнению с мышиным антителом. В другом варианте реализации изобретения антитело представляет собой гуманизированное антитело. В дополнительном варианте реализации изобретения антитело содержит вариабельный участок тяжелой цепи SEQ ID NO:1. В другом варианте реализации изобретения антитело содержит вариабельный участок легкой цепи SEQ ID NO:2. В дополнительном варианте реализации изобретения антитело содержит вариабельный участок тяжелой цепи SEQ ID NO:1 и вариабельный участок легкой цепи SEQ ID NO:2. В одном варианте реализации изобретения антитело конъюгировано с цито токсическим лекарственным средством, присоединенным к линкеру.
В дополнительном варианте реализации изобретения присоединенное к антителу лекарственное средство-линкер имеет формулу
или является ее фармацевтически приемлемой солью, где Z представляет собой органический фрагмент, содержащий реакционноспособный сайт, способный вступать в реакцию с функциональной группой на антителе для образования с ней ковалентного соединения, n находится в диапазоне от 8 до 36, RPR представляет собой атом водорода или защитную группу, R21 представляет собой кэппирующую единицу фрагмента полиэтиленгликоля.
В другом аспекте данного описания предложено гуманизированное антитело, которое специфически связывается с белком CD48 человека, которое содержит вариабельный участок тяжелой цепи SEQ ID NO:1 и вариабельный участок легкой цепи SEQ ID NO:2.
Данное антитело в одном варианте реализации изобретения конъюгировано с цитотоксическим лекарственным средством, присоединенным к линкеру. Типовое лекарственное средство-линкер имеет формулу
°γΝΗ о или является ее фармацевтически приемлемой солью, где Z представляет собой органический фрагмент, содержащий реакционноспособный сайт, способный вступать в реакцию с функциональной
- 1 035374 группой на антителе, для образования с ней ковалентного соединения, n находится в диапазоне от 8 до
36, Rpr представляет собой атом водорода или защитную группу, R21 представляет собой кэппирующую единицу фрагмента полиэтиленгликоля.
Другое типовое лекарственное средство-линкер для конъюгации с описанными антителами имеет формулу
или является ее фармацевтически приемлемой солью, где Z представляет собой органический фрагмент, содержащий реакционноспособный сайт, способный вступать в реакцию с функциональной группой на антителе для образования с ней ковалентного соединения, n находится в диапазоне от 8 до 36, RpR представляет собой атом водорода или защитную группу, R21 представляет собой кэппирующую единицу фрагмента полиэтиленгликоля.
Другое типовое лекарственное средство-линкер для конъюгации с описанными антителами имеет формулу
rPr или является ее фармацевтически приемлемой солью, где n находится в диапазоне от 8 до 36, RpR представляет собой атом водорода или защитную группу, R21 представляет собой кэппирующую единицу фрагмента полиэтиленгликоля.
Другое типовое лекарственное средство-линкер для конъюгации с описанными антителами имеет формулу
или является ее фармацевтически приемлемой солью, где n находится в диапазоне от 8 до 36, RpR представляет собой атом водорода или защитную группу, R21 представляет собой кэппирующую единицу фрагмента полиэтиленгликоля.
В некоторых вариантах данного описания значение n может находиться в диапазоне от 8 до 14. В других вариантах данного описания значение n находиться в диапазоне от 10 до 12. В дополнительном варианте реализации данного описания значение n составляет 12. В другом варианте реализации изобретения R21 представляет собой -СН3 или -СН2СН2СО2Н.
В другом аспекте данного описания предложено соединение конъюгата анти-CD48 антителалекарственного средства, имеющего формулу
или ее фармацевтически приемлемая соль, где Z представляет собой органический фрагмент, связывающий антитело и остаток лекарственного средства-линкера посредством ковалентных связей, n находится в диапазоне от 8 до 36, R21 представляет собой кэппирующую единицу фрагмента полиэтиленг- 2 035374 ликоля, а р составляет от 1 до 16. Антитело может быть любым из описанных aHTu-CD48 антител. В предпочтительном варианте реализации изобретения антитело имеет вариабельный участок тяжелой цепи SEQ ID NO:1 и вариабельный участок легкой цепи SEQ ID NO:2.
Другое типовое лекарственное средство-линкер для конъюгации с описанными антителами имеет формулу
или является ее фармацевтически приемлемой солью. Другое типовое лекарственное средстволинкер для конъюгации с описанными антителами имеет формулу
или является ее фармацевтически приемлемой солью, где Rpr представляет собой атом водорода или защитную группу.
Другое типовое лекарственное средство-линкер для конъюгации с описанными антителами имеет формулу
или является ее фармацевтически приемлемой солью.
Другое типовое лекарственное средство-линкер для конъюгации с описанными антителами имеет формулу
или является ее фармацевтически приемлемой солью.
Другое типовое лекарственное средство-линкер для конъюгации с описанными антителами имеет формулу
или является ее фармацевтически приемлемой солью, где RPR представляет собой атом водорода или защитную группу.
- 3 035374
В некоторых вариантах данного описания значение n может находиться в диапазоне от 8 до 14. В других вариантах данного описания значение n находиться в диапазоне от 10 до 12. В дополнительном варианте реализации данного описания значение n составляет 12. В другом варианте реализации изобретения R21 представляет собой -СН3 или -СН2СН2СО2Н.
В другом варианте реализации изобретения любое из описанных конъюгатов антителлекарственных средств имеет значение р, равное 8. В другом варианте реализации изобретения лекарственное средство-линкер присоединено к антителу посредством цистеиновых остатков межцепными дисульфидными связями антител.
В другом варианте реализации изобретения композиция конъюгата антитело-лекарственное средство содержит популяцию молекул конъюгата анти-CD48 антитела-лекарственного средства со средним значением нагрузки лекарственным средством, равным 8, и с преобладающим значением нагрузки лекарственным средством в данной композиции, равным 8.
В другом аспекте данного описания предложены фармацевтические композиции и составы, которые включают конъюгат антитело против CD48-лекарственное средство, описанный в данном документе.
В дополнительном аспекте изобретения конъюгаты антитело против CD48-лекарственное средство применяются для лечения пациентов больных раком, который экспрессирует CD48. Экспрессирующий CD48 рак в одном варианте реализации изобретения представляет собой множественную миелому. В других вариантах реализации изобретения экспрессирующий CD48 рак представляет собой В-клеточную неоплазию, например неходжкинскую лимфому, фолликулярную лимфому, мантийноклеточную лимфому, моноклональную гаммапатию неясного генеза (MGUS), макроглобулинемию Вальденстрема (WM), первичный/системный амилоидоз опухолевых клеток пациента и хроническую лимфоцитарную лейкемию. Другим примером экспрессирующего CD48 ракового заболевания, который можно лечить с использованием способов, описанных в данном документе, является острая миелогенная лейкемия.
Определения.
Термин моноклональные антитело в контексте данного документа относится к антителу, полученному из популяции практически гомогенных антител, т.е. отдельных антител, составляющих популяцию, которые являются идентичными, за исключением возможных мутаций природного происхождения, которые могут присутствовать в незначительных количествах. Модификатор моноклональное указывает на то, что антитело получено из практически гомогенной популяции антител, и его не следует интерпретировать как требование продукции антитела посредством какого-либо конкретного способа. Например, моноклональные антитела, которые предполагается применять в соответствии с настоящим изобретением, могут получать методом гибридом, впервые описанным Kohler et. al. (1975) Nature 256:495, или могут получать методами рекомбинантных ДНК (см., например, патент США № 4816567). Моноклональные антитела также можно выделять из фаговых библиотек антител с использованием методик, например, описанных в Clackson et. al. (1991) Nature, 352:624-628 и Marks et. al. (1991) J. Mol. Biol., 222:581597, или можно получать другими способами. Антитела, описанные в данном документе, являются моноклональными антителами.
Антитела, как правило, представлены в выделенной форме. Это означает, что как правило антитело обладает по меньшей мере 50% об./об. чистоты от мешающих белков и других загрязняющих веществ, возникающих при его продукции или очистке, но не исключая возможности того, что антитело комбинируется с избытком фармацевтически приемлемого (-ых) носителя (-ей) или другого наполнителя, предназначенного для облегчения использования антитела. В отдельных случаях антитела обладают по меньшей мере 60, 70, 80, 90, 95 или 99% мас./мас. чистоты от мешающих белков и загрязняющих веществ из этапа продукции или очистки. Антитела, включая выделенные антитела, можно конъюгировать с цитотоксическими средствами и предлагать их в качестве конъюгатов антитела и лекарственного средства.
Выделенный полинуклеотид относится к полинуклеотиду, которого идентифицировали и отделили и/или выделили из компонентов его природного окружения.
Специфическое связывание моноклонального антитела с целевым антигеном означает аффинность, равную по меньшей мере 106, 107, 108, 109 или 1010 М-1. Специфическое связывание по величине и различимости является выявляемо выше, чем неспецифическое связывание, происходящее по меньшей мере с одной необработанной мишенью. Специфическое связывание может представлять собой результат образования связей между конкретными функциональными группами или конкретным пространственным соответствием (например, типа ключа и замка), тогда как неспецифическое связывание обычно представляет собой результат действия сил Ван-дер-Ваальса. Конъюгаты антитела-лекарственного средства, направленные против CD48, и анти-CD48 антитела специфически связываются с CD48.
Основная структурная единица антитела представляет собой тетрамер из субъединиц. Каждый тетрамер содержит две идентичные пары полипептидных цепей, каждая пара имеет одну легкую (около 25 кДа) и одну тяжелую цепь (около 50-70 кДа). Аминоконцевая часть каждой цепи содержит вариабельный участок из около от 100 до 110 или более аминокислот, главным образом отвечающих за распознавание антигена. Этот вариабельный участок первоначально экспрессируется связанным с отщепляемым сигнальным пептидом. Вариабельный участок без сигнального пептида в отдельных случаях называется зрелым вариабельным участком. Таким образом, например, зрелый вариабельный участок легкой цепи
- 4 035374 означает вариабельный участок легкой цепи без сигнального пептида легкой цепи. Легкие цепи классифицируются как каппа или лямбда. Тяжелые цепи классифицируются как гамма, мю, альфа, дельта или эпсилон и определяют изотип антитела как соответственно IgG, IgM, IgA, IgD и IgE. В пределах легкой и тяжелой цепей нижние и константные участки соединены посредством участка J из около 12 или более аминокислот с включением также в тяжелую цепь участка D из около 10 или более аминокислот (см., в целом, Fundamental Immunology (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y., 1989, Ch. 7, которое включено в данный документ в полном объеме путем ссылки для всех целей). Зрелые вариабельные участки каждой пары легкой/тяжелой цепи образуют антителосвязывающий сайт. Таким образом, интактное антитело имеет два связывающих сайта. Все цепи проявляют одинаковую общую структуру относительно консервативных каркасных участков (FR), соединенных тремя гипервариабельными участками, также называемыми определяющими комплементарность участками или CDR. CDR из двух цепей каждой пары выровнены каркасными участками, что дает возможность связываться со специфическим эпитопом. От Nконца до С-конца и легкая, и тяжелая цепи содержат домены FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. Присвоение аминокислот к каждому домену происходит в соответствии с определениями Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1987 и 1991) или Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); Chothia et. al., Nature 342:878-883 (1989). Кабат также предложил широко применяемое правило нумерации (система нумерации Кабата), согласно которому соответствующим остаткам между различными вариабельными участками тяжелой цепи или между различными вариабельными участками легкой цепи присваиваются одинаковые номера. Нумерация константного участка тяжелой цепи происходит посредством индекса EU, как изложено в Kabat (Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1987 и 1991).
Термин антитело включает интактные антитела и их антигенсвязывающие фрагменты. Интактное антитело представляет собой антитело, содержащее антигенсвязывающий вариабельный домен, а также константный домен легкой цепи (CL) и константные домены тяжелой цепи, СН1, СН2, СН3 и СН4, как соответствует классу антитела. Константные домены могут быть константными доменами нативных последовательностей (например, константные домены нативных последовательностей человека) или их вариантами аминокислотных последовательностей. Фрагменты антител конкурируют с интактным антителом, из которого они получены, за специфическое связывание с мишенью, они включают отдельные Fab тяжелых цепей, легких цепей, Fab', F(ab')2, F(ab)c, диатела, Dab, нанотела и Fv. Фрагменты можно получать методиками рекомбинантных ДНК или ферментативным или химическим разделением интактных иммуноглобулинов. Термин антитело также включает диатело (гомодимерный фрагмент Fv) или мини-тело (Vl-Vh-Ch3), биспецифическое антитело или подобное антитело. Биспецифическое или бифункциональное антитело представляет собой искусственное гибридное антитело, имеющее две различные пары тяжелой/легкой цепи и два различных сайта связывания (см., например, Songsivilai and Lachmann, Clin. Exp. Immunol., 79:315-321 (1990); Kostelny et. al., J. Immunol., 148:1547-53 (1992)).
Термин пациент включает человека и других млекопитающих субъектов, которые получают либо профилактическое, либо терапевтическое лечение.
С целью классификации замен аминокислот как консервативных или неконсервативных аминокислоты группируют следующим образом: группа I (гидрофобные боковые цепи): met, ala, val, leu, ile; группа II (нейтральные гидрофильные боковые цепи): cys, ser, thr; группа III (кислотные боковые цепи): asp, glu; группа IV (основные боковые цепи): asn, gin, his, lys, arg; группа V (остатки, влияющие на ориентацию цепей): gly, pro и группа VI (ароматические боковые цепи): trp, tyr, phe. Консервативные замены включают замены между аминокислотами того же класса. Неконсервативные замены представляют замену представителя одного из указанных классов представителем другого класса.
Процентные значения идентичностей последовательностей определяют по последовательностям антител, максимально выровненных по правилу нумерации Кабата. После выравнивания, если исследуемый участок антитела (например, целый зрелый вариабельный участок тяжелой или легкой цепи) сравнивается с аналогичным участком эталонного антитела, то процентное значение идентичности последовательностей между участками исследуемого и эталонного антитела представляет собой количество положений, занятых одной и той же аминокислотой на участке исследуемого и эталонного антитела, разделенное на общее количество выровненных положений данных двух участков, без учета гэпов, умноженное на 100 для преобразования в процентное значение.
Композиции или способы, включающие один или более перечисленных элементов, могут включать другие элементы, которые специально не перечислялись. Например, композиция, которая содержит антитело, может содержать только антитело или оно будет находится в комбинации с другими ингредиентами.
Термин терапевтически эффективное количество или эффективное количество относится к количеству конъюгата антитела-лекарственного средства, которое эффективно для лечения у млекопитающего заболевания или нарушения. В случае ракового заболевания терапевтически эффективное количество конъюгата может снижать количество раковых клеток, уменьшать размер опухоли, ингибировать (т.е. до некоторой степени замедлять и предпочтительно останавливать) инфильтрацию раковых клеток в периферические органы, ингибировать (т.е. до некоторой степени замедлять и предпочтительно останав- 5 035374 ливать) метастазирование опухоли; ингибировать рост опухоли и/или облегчать один или более симптомов, связанных с данным раковым заболеванием. Для терапии рака эффективность может, например, быть измерена путем оценки периода времени до прогрессирования заболевания (ТТР) и/или определения уровня ответов (RR). Термин эффективный режим относится к комбинации количества вводимого конъюгата и частоты дозировки, необходимой для проведения лечения нарушения.
Термины лечить или лечение, если контекстом не указано иное, относится как к терапевтическому лечению, при котором у объекта должно ингибироваться или замедляться (уменьшаться) нежелательное физиологическое изменение или нарушение, такое как развитие или распространение рака. Благоприятные или желаемые клинические результаты включают, но не ограничиваются ослаблением симптомов, уменьшением степени заболевания, стабилизацией (т.е. отсутствием ухудшения) течения заболевания, задержкой или замедлением прогрессирования заболевания, облегчением или временным облегчением болезненного состояния и ремиссией (частичной или полной), как выявляемыми, так и невыявляемыми. Лечение может также означать повышение периода выживаемости по сравнению с ожидаемой выживаемостью пациента, который не получает лечения. Нуждающиеся в получении лечения включают тех пациентов, у которых заболевание выявляется. Нуждающиеся в получении лечения могут также включать тех пациентов, у которых заболевание не выявляется, например пациентов, которые достигли полного ответа после лечения нарушения с экспрессией CD48, но нуждающихся в терапии для того, чтобы предотвратить рецидив.
Термин фармацевтически приемлемый означает одобренный или допускающий одобрение регуляторным ведомством Федерального правительства или правительства штата или приведенный в Фармакопее США или другой общепризнанной фармакопее для применения у животных и, более конкретно, у человека. Термин фармацевтически совместимый ингредиент относится к фармацевтически приемлемому разбавителю, адъюванту, наполнителю или носителю, с которым анти-CD48 антитело или конъюгат антитело-лекарственное средство вводится субъекту.
Фраза фармацевтически приемлемая соль относится к фармацевтически приемлемым органическим или неорганическим солям. Типовые соли включают сульфатные, цитратные, ацетатные, оксалатные, хлоридные, бромидные, йодидные, нитратные, бисульфатные, фосфатные, гидрофосфатные, изоникотинатные, лактатные, салицилатные, гидроцитратные, тартратные, олеатные, таннатные, пантотенатные, битартратные, аскорбатные, сукцинатные, малеатные, гентизинатные, фумаратные, глюконатные, глюкуронатные, сахаратные, формиатные, бензоатные, глутаматные, метансульфонатные, этансульфонатные, бензолсульфонатные, п-толуолсульфонатные и памоатные соли (т.е. 1,1'-метилен-бис-(2гидрокси-3-нафтоатные) соли). Фармацевтически приемлемая соль может содержать включение другой молекулы, такой как ацетат-ион, сукцинат-ион или другой противоион. Противоионом может быть любой органический или неорганический фрагмент, который стабилизирует заряд на исходном соединении. Кроме того, фармацевтически приемлемая соль может содержать в своей структуре более одного заряженного атома. В случаях, где несколько заряженных атомов являются частью фармацевтически приемлемой соли, она может содержать несколько противоионов. Таким образом, фармацевтически приемлемая соль может содержать один или более заряженных атомов и/или один или более противоионов.
Сольваты в контексте данного изобретения представляют собой такие формы соединений по данному изобретению, что они образуют комплекс в твердом или жидком состоянии через координацию молекул сольвента. Гидраты представляют собой одну конкретную форму сольватов, в которых координация происходит с водой. Предпочтительные сольваты в контексте настоящего изобретения представляют собой гидраты.
Если только из контекста не является очевидным, термин около охватывает значения в пределах стандартного отклонения указанного значения.
Краткое описание графических материалов
На фиг. 1 показаны аминокислотные последовательности вариабельного участка тяжелой цепи мышиного антитела МЕМ102 и гуманизированной тяжелой цепи vHA, vHB и vHC и выбранные последовательности акцепторного вариабельного участка зародышевой линии человека.
На фиг. 2 показаны аминокислотные последовательности вариабельного участка легкой цепи мышиного антитела МЕМ102 и гуманизированной легкой цепи vLA, vLB и vLC и выбранные последовательности акцепторного вариабельного участка зародышевой линии человека.
На фиг. 3 показаны кривые насыщения связывания для антител МЕМ102 на клетках U-266 множественной миеломы человека.
На фиг. 4 показаны кривые насыщения связывания для антител МЕМ102 на клетках СНО, трансфецированных CD48 яванского макака.
На фиг. 5 показана активация каспазы 3/7 (апоптическая гибель клеток) в клетках NCI-H929 множественной миеломы человека после лечения с помощью ADC MEM-102.
На фиг. 6 показана активация каспазы 3/7 в клетках U-266 множественной миеломы человека после лечения с помощью ADC MEM-102.
На фиг. 7 показана активность in vivo ADC hMEM102 в модели ксенотрансплантата мыши, имплантированного клетками NCI-H929. Это диссеминированная модель множественной миеломы.
- 6 035374
На фиг. 8 показана активность in vivo ADC hMEM102 в модели ксенотрансплантата мыши, имплантированного клетками NCI-H929. Это подкожная модель множественной миеломы.
На фиг. 9 показана активность in vivo ADC hMEM102 в модели ксенотрансплантата мыши, имплантированного клетками MM. 1R. Это диссеминированная модель множественной миеломы.
На фиг. 10 показана активность in vivo ADC hMEM102 в модели ксенотрансплантата мыши, имплантированного клетками MM. 1R. Это подкожная модель множественной миеломы.
На фиг. 11 показана активность in vivo ADC hMEM102 в модели ксенотрансплантата мыши, импланированного клетками EJM. Это диссеминированная модель множественной миеломы.
Подробное описание сущности изобретения
Настоящее изобретение, в частности, основано на открытии того, что конъюгаты антителалекарственного средства, включая конъюгаты пэгилированного-ММАЕ антитела-лекарственного средства, направленные на CD48, которые особенно эффективны в уничтожении экспрессирующих CD48+ клеток. В частности, было обнаружено, что высокая аффинность гуманизированного антитела МЕМ102 может быть сконструирована с использованием как акцепторной последовательности вариабельного участка тяжелой цепи hIgG VH7-4-1/hIgG-JH5 вариабельного участка тяжелой цепи зародышевой линии человека. Для вариабельного участка легкой цепи предпочтительная акцепторная последовательность представляет собой вариабельный участок легкой цепи hIgG-VK6-21/hIgG-JK4 зародышевой линии человека. Примечательно, что гуманизированное антитело МЕМ102 с высокой активностью сконструировано без необходимости выполнения созревания аффинности и при этом с сохранением идентичности CDR мышиного антитела. Гуманизированное антитело МЕМ102 с высокой активностью также было эффективно при доставке лекарственного средства как части конъюгата антитела и лекарственного средства. В случае конъюгирования с SGD-5088 пэгилированным-ММАЕ полученный конъюгат с 8-кратной нагрузкой hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE был высокоактивным против панели линий клеток множественной миеломы.
Целевые молекулы.
Если не указано иное, CD48 относится к CD48 человека. Типовой человеческой последовательности присвоен номер доступа Genbank CAG33293.1.
Антитела по данному изобретению.
Гуманизированное антитело представляет собой генетически сконструированное антитело, в котором CDR от нечеловеческого антитела-донора привиты на последовательности человеческого антитела-акцептора (см., например, Queen, US 5530101 и 5585089; Winter, US 5225539; Carter, US 6407213; Adair, US 5859205 и Foote, US 6881557). Последовательности антитела-акцептора могут быть, например, зрелой последовательностью антитела человека, совокупностью таких последовательностей, консенсусной последовательностью последовательностей антител человека или последовательностью участка зародышевой линии.
Таким образом, гуманизированное антитело представляет собой антитело, имеющее некоторые или все CDR, целиком или в основном из нечеловеческого антитела-донора, каркасные последовательности вариабельных участков и константные участки, если присутствуют, целиком или в основном из последовательностей человеческих антител. Сходным образом, гуманизированная тяжелая цепь имеет по меньшей мере одно, два и обычно все три CDR, целиком или в основном из тяжелой цепи антитела-донора, каркасную последовательность вариабельного участка тяжелой цепи и константный участок тяжелой цепи, если присутствуют, в основном из последовательностей вариабельного участка каркасных и константных участков тяжелой цепи человека. Сходным образом, гуманизированная легкая цепь имеет по меньшей мере одно, два и обычно все три CDR, целиком или в основном из легкой цепи антителадонора, и каркасной последовательности вариабельного участка легкой цепи и константного участка легкой цепи, если присутствуют, в основном из последовательностей вариабельного участка каркасных и константных участков легкой цепи человека. Отличное от нанотел и диател гуманизированное антитело, как правило, содержит гуманизированную тяжелую цепь и гуманизированную легкую цепь. CDR в гуманизированном или человеческом антителе состоит в основном из или практически идентичный соответствующему CDR в нечеловеческом антителе, когда по меньшей мере 60, 85, 90, 95 или 100% соответствующих остатков (как определено по Кабату) идентичны у соответственных CDR. В некоторых вариантах реализации изобретения CDR в гуманизированном или человеческом антителе состоит в основном из или практически идентичный соответствующему CDR в нечеловеческом антителе, когда в каждом CDR имеется по меньшей мере не более 3 консервативных аминокислотных замен. Каркасные последовательности вариабельного участка цепи антитела или константного участка цепи антитела состоят в основном из каркасной последовательности вариабельного участка человека или константного участка человека, когда являются идентичными по меньшей мере 70, 80, 85, 90, 95 или 100% соответствующих остатков, определенных по Кабату. В некоторых гуманизированных антителах по данному изобретению не существует обратных мутаций в вариабельном каркасном участке тяжелой цепи антитела и не существует обратных мутаций в вариабельном каркасном участке легкой цепи антитела.
Хотя антитела часто включают все шесть CDR (предпочтительно как определено по Кабату) из антитела мыши, они также могут быть созданы из менее чем всего набора CDR (например, по меньшей
- 7 035374 мере 3, 4 или 5) CDR из антитела мыши (например, Pascalis et. al., J. Immunol. 169:3076, 2002; Vajdos et.
al., Journal of Molecular Biology, 320: 415-428, 2002; Iwahashi et. al., Mol. Immunol. 36:1079-1091, 1999;
Tamura et. al, Journal of Immunology, 164:1432-1441, 2000).
Определенные аминокислоты из каркасных остатков вариабельного участка могут выбираться для замены на основе их возможного влияния на конформацию CDR и/или связывание с антигеном. Исследование таких возможных влияний проводится путем моделирования, изучения свойств аминокислот в конкретных положениях или эмпирическом наблюдении эффектов замены или мутагенеза конкретных аминокислот.
В изобретении представлены антитела, направленные против антитела CD48. Предпочтительные антитела являются химерными или гуманизированными антителами, полученными из мышиного антитела МЕМ102.
Предпочтительная акцепторная последовательность для вариабельного остатка тяжелой цепи представляет собой вариабельный участок тяжелой цепи VH7-4-l/hIgG-JH5 зародышевой линии человека. Для вариабельного участка легкой цепи предпочтительная акцепторная последовательность представляет собой вариабельный участок легкой цепи hIgG-VK6-21/hIgG-JK4 зародышевой линии человека.
Типовое анmи-CD48 антитело представляет собой гуманизированное антитело, которое содержит CDR тяжелой цепи, как указано в SEQ ID NO:1, и CDR легкой цепи, как указано в SEQ ID NO:2, и дополнительно имеет зрелый вариабельный участок тяжелой цепи по меньшей мере с 90, 91, 92, 93, 94 или 95% идентичностью SEQ ID NO: 1 и зрелый вариабельный участок легкой цепи по меньшей мере с 90, 91, 92, 93, 94 или 95% идентичностью SEQ ID NO:2. CDR определены по Кабату.
Гуманизированные формы антитела МЕМ102 мыши содержат три иллюстративных гуманизированных зрелых вариабельных участка тяжелой цепи (НА-НС) и три иллюстративных гуманизированных зрелых вариабельных участка легкой цепи (LA-LC). Перестановки этих цепей включают HALA, HALB, HALC, HBLA, HBLB, HBLC, HCLA, HCLB и HCLC. Из этих перестановок предпочтительной является HALA. HALA содержит тяжелую цепь, указанную в SEQ ID NO:1, и легкую цепь, указанную в SEQ ID NO:2. Вместо HALA можно использовать любую из HALB, HALC, HBLA, HBLB, HBLC, HCLA, HCLB и HCLC.
В некоторых аспектах изобретения кажущаяся константа диссоциации (kd) гуманизированных антител МЕМ102 для CD48 человека предпочтительно находится в диапазоне от 0,1 до 10 нМ, даже предпочтительнее в диапазоне от 0,1 до 5 нМ, даже предпочтительно в диапазоне от 1 до 3 нМ или от 2 до около 3 нМ. В одном аспекте изобретения антитела по данному изобретению имеют кажущуюся константу диссоциации в диапазоне от 0,1 до 2,0 раз или даже от 0,5 до 4 раз кратную значению кажущейся константы диссоциации мышиного антитела МЕМ102 для CD48 человека. В некоторых аспектах изобретения значение кажущейся константы диссоциации (kd) антител для CD48 человека составляет около 5,0.
Выбор константного участка.
Вариабельные участки тяжелой и легкой цепи гуманизированных антител МЕМ102 можно связывать по меньшей мере с частью константного участка человека. Выбор константного участка может зависеть, в частности, от необходимости наличия антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности, антителозависимого клеточного фагоцитоза и/или комплементзависимой цитотоксичности. Например, изотипы IgG1 и IgG3 человека обладают сильной комплементзависимой цитотоксичностью, изотип IgG2 обладает слабой комплементзависимой цитотоксичностью, а у IgG4 человека отсутствует комплементзависимая цитотоксичность. IgG1 и IgG3 человека также индуцируют более сильные клеточноопосредованные эффекторные функции, чем IgG2 и IgG4 человека. Константные участки легкой цепи могут быть лямбда или каппа. Антитела могут экспрессироваться как тетрамеры, содержащие две легкие и две тяжелые цепи, как отдельные тяжелые цепи, легкие цепи, как Fab, Fab', F(ab')2 и Fv, или как одноцепочечные антитела, в которых нижние домены тяжелой и легкой цепей связаны посредством спейсера.
Константные участки человека показывают аллотипичную вариацию и изоаллотипичную вариацию между отдельными индивидами, а именно константные участки могут отличаться у различных индивидов по одному или более полиморфных положений. Изоаллотипы отличаются от аллотипов, в которых сыворотка, распознающая изоаллотип, связывается с неполиморфным участком одного или более других изотипов.
В части или всех молекулах могут отсутствовать или быть дериватизированы одна или несколько аминокислот на амино- или карбоксиконце легкой и/или тяжелой цепей, такие как С-концевой лизин тяжелой цепи. Замены можно выполнять в константных участках для уменьшения или увеличения эффекторной функции, такой как комплементопосредованная цитотоксичность или АЗКЦ (см., например, Winter et. al., патент США № 5624821; Tso et al., патент США № 5834597 и Lazar et. al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:4005, 2006), или для продления период полувыведения у людей (см., например, Hinton et al., J. Biol. Chem. 279:6213, 2004).
Константный участок можно модифицировать для обеспечения сайтспецифической конъюгации лекарственного средства-линкера. Такие методики включают применение цистеиновых остатков природного происхождения или сконструированных цистеиновых остатков, дисульфидных мостиков, полигистидиновых последовательностей, гликосконструированных маркеров и последовательностей распо- 8 035374 знавания трансглутаминазы. Типовая замена для сайтспецифической конъюгации с использованием бактериальной трансглутаминазы представляет собой N297S или N297Q. Типовая замена для сайтспецифической конъюгации с использованием сконструированного цистеина представляет собой S239C. Фрагменты антител также можно модифицировать для проведения сайтспецифической конъюгации лекарственного средства-линкера (см. например Kim et. al., Mol Cancer Ther 2008; 7(8)).
Экспрессия рекомбинантных антител.
Гуманизированное или химерное антитело МЕМ102 можно получать путем рекомбинантной экспрессии. Рекомбинантные полинуклеотидные конструкции, как правило, включают последовательности с контролем экспрессии, функционально связанные с кодирующими последовательностями цепей антител, включая ассоциированные естественным образом или гетерологичные промоторные участки. Предпочтительно последовательности с контролем экспрессии представляют собой эукариотические промоторные системы в векторах, способные к трансформации или трансфекции эукариотических клетокхозяев. После включения вектора в соответствующего хозяина хозяин поддерживается в условиях, подходящих для высокого уровня экспрессии нуклеотидных последовательностей, а также сбора и очистки перекрестно реагирующих антител.
Клетки млекопитающих являются предпочтительным хозяином для экспрессии нуклеотидных сегментов, кодирующих иммуноглобулины или их фрагменты (см. Winnacker, From Genes to Clones, (VCH Publishers, NY, 1987)). В данной области техники был разработан ряд подходящих линий клеток-хозяев, способных секретировать интактные гетерологичные белки, и они включают линии клеток СНО (например, DG44), различные линии клеток COS, клетки HeLa, клетки HEK293, L-клетки и не продуцирующие антитела миеломы, включающие Sp2/0 и NS0. Предпочтительно клетки являются нечеловеческими клетками. Экспрессионные векторы для этих клеток могут включать последовательности с контролем экспрессии, такие как точка начала репликации, промотор, энхансер (Queen et. al., Immunol. Rev. 89:49 (1986)), и необходимые информационные сайты процессинга, такие как связывающие рибосому сайты, сайты сплайсинга РНК, сайты полиаденилирования и последовательности транскрипционных терминаторов. Предпочтительные последовательности с контролем экспрессии представляют собой промоторы, происходящие из эндогенных генов, цитомегаловируса, SV40, аденовируса, папилломавируса крупного рогатого скота и тому подобные (см. Со et. al., J. Immunol. 148:1149 (1992)).
После экспрессии антитела можно очищать в соответствии со стандартными процедурами данной области техники, включая ВЭЖХ-очистку, колоночную хроматографию, гель-электрофорез и тому подобные методы (см., в целом, Scopes, Protein Purification (Springer-Verlag, NY, 1982)).
Нуклеиновые кислоты.
В изобретении дополнительно предложены нуклеиновые кислоты, кодирующие любую из гуманизированных тяжелой и легкой цепей, описанных в данном документе. Как правило, нуклеиновые кислоты также кодируют сигнальный пептид, слитый со зрелыми вариабельными участками тяжелой и легкой цепей. Кодирующие последовательности на нуклеиновых кислотах могут находиться в функциональной связи с регуляторными последовательностями для обеспечения экспрессии данных кодирующих последовательностей, такими как промотор, энхансер, связывающий рибосому сайт, сигнал терминации транскрипции и тому подобными. Нуклеиновые кислоты, кодирующие тяжелые и легкие цепи, могут встречаться в выделенной форме или могут быть клонированы в один или более векторов. Нуклеиновые кислоты можно синтезировать, например, путем твердофазного синтеза или ПЦР перекрывающихся олигонуклеотидов. Нуклеиновые кислоты, кодирующие тяжелые и легкие цепи, могут быть соединены как одна непрерывная нуклеиновая кислота, например, в пределах экспрессионного вектора, или могут быть разделенными, например каждая клонирована в своем экспрессионном векторе.
В одном варианте реализации изобретения в данном описании предложен выделенный полинуклеотид, кодирующий вариабельный участок тяжелой цепи антитела, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в НА, НВ или НС. Например, выделенный полинуклеотид может кодировать вариабельный участок тяжелой цепи антитела, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1. Выделенный полинуклеотид может дополнительно кодировать константный участок тяжелой цепи IgG человека. Изотип константного участка IgG представляет собой, например, IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4. В одном варианте реализации изобретения изотип константного участка IgG представляет собой IgG1. В другом варианте реализации изобретения кодированный константный участок IgG1 имеет аминокислотную последовательность, содержащую замену по остатку 239, в соответствии индексом EU, как указано в системе Кабата, т.е. S239C. В описании также предложен экспрессионный вектор, содержащий выделенный полинуклеотид, кодирующий вариабельный участок тяжелой цепи антитела, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в НА, НВ или НС (например, SEQ ID N0:1 или ее вариант), и дополнительно клетка-хозяина, содержащая такой экспрессионный вектор. В некоторых вариантах осуществления клетка-хозяин представляет собой хозяйскую клетку млекопитающего, например клетку СНО.
В другом варианте реализации изобретения в данном описании предложен выделенный полинуклеотид, кодирующий вариабельный участок легкой цепи антитела, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в LA, LB или LC. Например, выделенный полинуклеотид, кодирующий ва- 9 035374 риабельный участок легкой цепи антитела, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2. Выделенный полинуклеотид может дополнительно кодировать константный участок легкой цепи IgG человека. Изотип константного участка легкой цепи IgG представляет собой, например, константный участок каппа. В описании также предложен экспрессионный вектор, содержащий выделенный полинуклеотид, кодирующий вариабельный участок легкой цепи антитела, содержащий аминокислотную последовательность, как указано в LA, или LB, или LC (например, SEQ ID NO:2 или ее вариант), и дополнительно клетка-хозяина, содержащая такой экспрессионный вектор. В некоторых вариантах осуществления клетка-хозяин представляет собой хозяйскую клетку млекопитающего, например клетку СНО.
В другом варианте реализации изобретения в данном описании предложен выделенный полинуклеотид или полинуклеотиды, кодирующие вариабельный участок тяжелой цепи антитела, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, и вариабельный участок легкой цепи антитела, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи, образующие антитело или антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с CD48 человека. В данном описании также предложен экспрессионный вектор, содержащий выделенный полинуклеотид или полинуклеотиды, кодирующие вариабельный участок тяжелой цепи антитела, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, и вариабельный участок легкой цепи антитела, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2. Предложена также клетка-хозяин, содержащая экспрессионный вектор или векторы. Клетка-хозяин предпочтительно представляет собой клетку млекопитающего, например клетку СНО.
В другом варианте реализации изобретения в данном описании предложен первый и второй векторы, содержащие полинуклеотид, кодирующий вариабельный участок тяжелой цепи антитела, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, и полинуклеотид, кодирующий вариабельный участок легкой цепи антитела, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи, образующие антитело или антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с CD48 человека. Предложена клетка-хозяин, содержащая векторы, предпочтительно клетки-хозяева млекопитающих, такие как клетка СНО.
Конгъюгаты антитело-лекарственное средство.
Ahtu-CD48 антитела могут быть конъюгированы с терапевтическими средствами, диагностическими средствами или стабилизирующими средствами с образованием конъюгатов антител. Ahtu-CD48 антитела, конъюгированные с терапевтическими средствами, называются в данном документе конъюгатами антитела-лекарственного средства (ADC). Типовые терапевтические средства обладают цитостатическим или цитотоксическим действием и также могут относится к цитотоксическим или цитостатическим средствам. Типовые цитотоксические средства включают, например, ауристатины, камптотецины, калихеамицины, дуокармицины, этопозиды, майтанзиноиды (например, DM1, DM2, DM3, DM4), таксаны, бензодиазепины (например, пирроло[1,4]бензодиазепины, индолинобензодиазепины и оксазолидинобензодиазепины, включая димеры пирроло[1,4]бензодиазепинов, димеры индолинобензодиазепинов и димеры оксазолидинобензодиазепинов) и алкалоиды барвинка.
Методики для конъюгирования терапевтических средств с белками, и в частности с антителами, хорошо известны (см., например, Alley et. al., Current Opinion in Chemical Biology 2010 14:1-9; Senter, Cancer J., 2008, 14 (3) :154-169). Как правило, терапевтическое средство конъюгировано с антителом посредством линкерной единицы. Линкерная единица может быть отщепляемой или неотщепляемой. Например, терапевтическое средство может быть присоединено к антителу с помощью отщепляемого линкера, который чувствителен к отщеплению во внеклеточном окружении CD48-экспрессирующей раковой клетки, но практически не чувствителен к внеклеточному окружению, так что конъюгат отщепляется от антитела, когда он интернализирован CD48-экспрессирующей раковой клеткой (например, в эндосомальном, лизосомальном окружении или в кавеолярном окружении). В другом примере терапевтическое средство может быть конъюгировано с антителом посредством неотщепляемого линкера, и высвобождение лекарственного средства происходит путем полного разрушения антитела с последующей интернализацией CD48-экспрессирующей раковой клеткой.
Как правило, ADC будет содержать линкерный участок между цитотоксическим или цитостатическим средством и анти-CD48 антителом. Как отмечено выше, линкер может быть отщепляемым во внутриклеточных условиях, таких что отщепление линкера высвобождает терапевтическое средство от антитела во внутриклеточном окружении (например, внутри лизосомы, или эндосомы, или кальвеолы). Линкер может быть, например, пептидильным линкером, который отщепляется внутриклеточным пептидазным или протеазным ферментом, включающим лизосомальную или эндосомальную протеазу. Отщепляющие средства могут включать катепсины В и D и плазмин (см., например, Dubowchik and Walker, Pharm. Therapeutics 83:67-123, 1999). Наиболее часто пептидильные линкеры являются отщепляемыми ферментами, которые присутствуют в CD48-экспрессирующих клетках. Например, пептидильный линкер является отщепляемым тиолзависимой протеазой катепсин-В, которая в высокой степени экспрессируется в раковой ткани, может использоваться (например, линкер, содержащий пептид Phe-Leu или ValCit). Линкер также может быть углеводным линкером, включающим линкер-сахар, который отщепляется внутриклеточной гликозидазой (например, глюкуронидный линкер, отщепляемый глюкоронидазой).
- 10 035374
Линкер также может быть неотщепляемым линкером, таким как малеимидоалкиленовый малеимидоарильный линкер, который непосредственно присоединен к терапевтическому средству и высвобождается протеолитическим разрушением антитела.
Ahtu-CD48 антитело может быть конъюгировано с линкером посредством гетероатома антитела. Эти гетероатомы могут присутствовать на антителе в своем естественном состоянии или могут быть введены в антитело. В некоторых аспектах изобретения анти-CD48 антитело будет конъюгировано с линкером посредством атома азота или лизинового остатка. В некоторых аспектах изобретения анти-CD48 антитело будет конъюгировано с линкером посредством атома серы или цистеинового остатка. Цистеиновый остаток может быть встречающимся в природе или таким, который введен в антитело конструированием. Способы конъюгирования линкеров и лекарственных средств-линкеров с антителами посредством лизиновых и цистеиновых остатков известны в данной области техники.
Типовые конъюгаты антитела-лекарственного средства включают конъюгаты антителалекарственного средства на основе ауристатина (т.е. компонент лекарственного средство представляет собой лекарственное средство ауристатин). Было показано, что ауристатины влияют на динамику роста микротрубочек и ядерное и клеточное деление и обладают противораковой активностью. Как правило, конъюгат антитела-лекарственного средства на основе ауристатина содержит линкер между лекарственным средством ауристатином и анти-CD48 антителом. Линкер может быть, например, отщепляемым линкером (например, пептидильный линкер, углеводный линкер) или неотщепляемым линкером (например, линкер, высвобождаемый путем деградации антитела). Ауристатины включают MMAF и ММАЕ. Синтез и структура типовых ауристатинов описаны в публикациях США №№ 7659241, 7498298, 20090111756, 2009-0018086 и 7968687, каждая из которых включена в данный документ путем ссылки в полном объеме и во всех смыслах.
Другие типовые конъюгаты антитела-лекарственного средства включают майтанзиноидные конъюгаты антитела-лекарственного средства (т.е. компонент лекарственного средства представляет собой лекарственное средство майтанзиноид) и бензодиазепиновые конъюгаты антитела-лекарственного средства (например, димеры пирроло[1,4]бензодиазепина (димер PBD), димеры индолинобензодиазепина и димеры оксалидинобензодиазепина)).
Предпочтительный для применения димер PBD в настоящем изобретении представлен формулой I.
Предпочтительная стереохимия димера PBD такая, как показана в формуле Ia
или является фармацевтической солью, сольватом или сольватом этой соли, где нижний индекс n равен 1 или 3.
Сольваты формул (I) и (Ia), как правило, образуются при добавлении воды или спиртового растворителя через иминную функциональную группу одного или обоих мономеров PBD с образованием карбиноламина (-ов) и/или карбиноламинных простых эфиров. Например, положение N10-C11 может быть имином (N=C), карбиноламином (NH-CH(OH)) или карбиноламиновым простым эфиром (NH-CH(ОМе)), как представлено ниже формулами I' и Ia'
где (a) R10 представляет собой Н, a R11 представляет собой ОН или ORA, где RA представляет собой насыщенный C1-4 алкил (предпочтительно метил); или (b) R10 и R11 образует азот-углеродную двойную связь между атомами азота и углерода, с которым они связаны; или (c) один из R10 представляет собой Н, a R11 представляет собой ОН или ORA, где RA представляет собой насыщенный C1-4 алкил (предпочтительно метил), а другой из R10 и R11 образует азот-углеродную двойную связь между атомами азота и углерода, с которым они связаны.
Димер PBD формулы I или Ia (или фармацевтическая соль, сольват или сольват его соли), как пра- 11 035374 вило, связан с антителом посредством линкерной единицы, LU. Линкерная единица действует так, чтобы димер PBD формулы I или Ia (или фармацевтическая соль, сольват или сольват его соли) высвобождался в целевом сайте (например, внутри раковой клетки). PBD-соединение лекарственного средства-линкера для применения в настоящем изобретении представлено ниже формулой II (с предпочтительной стереохимией, показанной в IIa), где LU представляет собой линкерную единицу. Линкерная единица может быть, например, отщепляемой пептидной линкерной единицей (например, линкер, содержащий пептид валин-аланин) или отщепляемой дисульфидной линкерной единицей
или является фармацевтической солью, сольватом или сольватом этой соли, где нижний индекс n равен 1 или 3.
Предпочтительное BD-соединение лекарственного средства-линкера для применения в настоящем изобретении представлено ниже формулой III
или является фармацевтической солью, сольватом или сольватом этой соли, где нижний индекс n равен 1 или 3, а нижний индекс m равен целому числу от 2 до 5.
Предпочтительная стереохимия компонента лекарственного средства PBD лекарственного средства-линкера такая, как показана ниже в формуле IIIa ( ΤΎ η ΎΎ К ο ο Ί| ι — о0 О I н (Illa)
Предпочтительная стереохимия компонентов лекарственного средства PBD и линкера такая, как показана ниже в формуле IIIb
Лекарственное средство PBD-линкер конъюгируют с анти-CD48 антителом для получения нацеленного на CD48 конъюгата антитела-лекарственного средства. Например, антитело можно конъюгировать с лекарственным средством-линкером формулы II или формулы III. Типовой нацеленный на CD48 конъюгат антитела-лекарственного средства показан ниже в формулах IV, IVa и IVb
или является фармацевтической солью, сольватом или сольватом этой соли, где нижний индекс n равен 1 или 3; нижний индекс m равен целому числу от 2 до 5; а нижний индекс р составляет от 1 до 4.
- 12 035374
Типовые лекарственные средства-линкеры включают лекарственные средства ММАЕ-линкеры. Авторами-исследователями обнаружено, что включение полимера полиэтиленгликоля в качестве боковой цепи в отщепляемое β-глюкуронидное лекарственное средство ММАЕ-линкер обеспечивает получение конъюгатов лекарственного средства и антитела с уменьшенным выведением из плазмы и увеличенной противоопухолевой активностью в моделях ксенотрансплантатов по сравнению с не-ПЭГилированным контролем. Соответственно, в частности, преимущественные лекарственные средства-линкеры для присоединения к антителу по данному изобретению являются следующими:
или являются их фармацевтически приемлемой солью.
Предпочтительная стереохимия для такого лекарственного средства-линкера показана ниже
или его фармацевтически приемлемая соль, где для формул V и Va Z представляет собой органический фрагмент, содержащий реакционноспособный сайт, способный вступать в реакцию с функциональной группой на антителе, для образования с ней ковалентного соединения, n находится в диапазоне от 8 до 36, а наиболее предпочтительно находится в диапазоне от 8 до 14 (наиболее предпочтительно 12), R21 представляет собой кэппирующую единицу фрагмента полиэтиленгликоля, предпочтительно -СН3 или -СН2СН2СО2Н.
Предпочтительный фрагмент Z представляет собой малеимидсодержащий фрагмент. В частности, предпочтительные фрагменты Z показаны ниже в лекарственных средствах-линкерах
или являются их фармацевтически приемлемой солью.
Предпочтительная стереохимия для таких лекарственных средств-линкеров показана ниже
- 13 035374
или их фармацевтически приемлемая соль, где для формул VI, Via, VII и Vila n находится в диапазоне от 8 до 36, а наиболее предпочтительно находится в диапазоне от 8 до 14 (наиболее предпочтительно 12), RPR представляет собой атом водорода или защитную группу, например кислотолабильную защитную группу, например ВОС, R21 представляет собой кэппирующую единицу фрагмента полиэтиленгликоля, предпочтительно -СНз или -СН2СН2СО2Н.
Как отмечено выше, RPR может быть атомом водорода или защитной группой. Защитные группы, как используются в данном документе, относятся к группам, которые избирательно блокируют либо временно, либо постоянно реакционноспособный сайт в многофункциональном соединении. Защитная группа является подходящей защитной группой, когда она способна предотвращать или делать невозможными нежелательные побочные реакции, или преждевременная потеря защитной группы в условиях реакции требуется для влияния на требуемое химическое превращение в любом другом месте в данной молекуле и, если требуется, во время очистки новообразованной молекулы, и может удаляться в условиях, которые не оказывают неблагоприятного воздействия на структуру или стереохимическую целостность новообразованной молекулы. Подходящие аминные защитные группы включают кислотолабильные азотсодержащие защитные группы, включающие предложенные Isidro-Llobel et. al. Amino acidprotecting groups Chem. Rev. (2009) 109: 2455-2504. Как правило, кислотолабильная азотсодержащая защитная группа превращает первичную или вторичную аминогруппу в соответствующий ей карбамат и включает т-бутил-, аллил- и бензилкарбаматы.
Как отмечено выше, R21 представляет собой кэппирующую единицу фрагмента полиэтиленгликоля. Как будет понятно специалисту в данной области, единицы полиэтиленгликоля могут быть терминально кэппированы большим разнообразием органических фрагментов, как правило тех, которые относительно нереакционноспособны. Предпочтительными являются алкильные и замещенные алкильные группы, включающие, например, -C1.10 алкил, -С2-10 алкил-СО2Н, -С2-10 алкил-ОН, -С2-10 алкил-ЫН^, С2-10 алкилНН(С1.залкил) или С2-10 алкил-Ы(С1-з алкил )2.
В целом, существует от 1 до 16 лекарственных средств-линкеров, присоединенных к каждому антителу.
Лекарственная нагрузка - р.
По отношению к нацеленным на CD48 конъюгатам антитела-лекарственного средства нижний индекс р представляет собой лекарственную нагрузку и в зависимости от контекста может представлять количество молекул из молекул лекарственного средства-линкера, присоединенных к отдельной молекуле антитела, и, по существу, представлять собой целое значение или может представлять среднюю лекарственную нагрузку, и, по существу, может быть целым или нецелым значением, но, как правило, нецелое значение. Средняя лекарственная нагрузка представлена в популяции средним количеством молекул лекарственного средства-линкера на антитело. Часто, но не всегда, если авторами подразумевается антитело, например моноклональное антитело, то авторы подразумевают популяцию молекул антител. В композиции, содержащей популяцию молекул конъюгатов антитело-лекарственное средство, среднее значение лекарственной нагрузки является важным показателем качества, поскольку оно определяет количество лекарственного средства, которое может доставляться в клетку-мишень. Процентное содержание неконъюгированных молекул антитела в композиции включено в среднее значение лекарственной нагрузки.
В предпочтительных аспектах настоящего изобретения средняя лекарственная нагрузка в отношении композиции, содержащей популяцию соединений конъюгатов антитела-лекарственного средства, составляет от 1 до около 16, предпочтительно от около 2 до около 14, предпочтительнее от около 2 до около 10. Для PBD-конъюгатов антитела-лекарственного средства, таких как приведенные в качестве примера в данном документе, особенно предпочтительная средняя лекарственная нагрузка составляет около 2. В некоторых аспектах изобретения фактическая лекарственная нагрузка на молекулы отдельных
- 14 035374 антител в популяции соединений конъюгатов антитела-лекарственного средства составляет от 1 до 4, от до 3 или от 1 до 2 с преобладающей лекарственной нагрузкой, равной 2. В предпочтительных аспектах изобретения средняя лекарственная нагрузка, равная 2, достигается посредством методик сайтспецифической конъюгации (например, сконструированными цистеинами, введенными в антитело и содержащимися в положении 239 в соответствии с системой нумерации по индексу EU).
Для ADC с ПЭГилированными ММАЕ, таких как приведенные в качестве примера в данном документе, особенно предпочтительная средняя лекарственная нагрузка составляет около 8. В типовых вариантах реализации изобретения лекарственные средства-линкеры конъюгированы с цистеиновыми остатками восстановленными межцепными дисульфидами. В некоторых аспектах изобретения фактическая лекарственная нагрузка на молекулы отдельных антител в популяции соединений конъюгатов антителалекарственного средства составляет от 1 до 10 (или от 6 до 10, или от 6 до 8) с преобладающей лекарственной нагрузкой, равной 8. Можно достигать более высокой лекарственной нагрузки, например, если в добавление к межцепным дисульфидам лекарственное средство-линкер конъюгировано с введенными цистеиновыми остатками (такими как цистеиновый остаток, введенный в положение 239 в соответствии с индексом EU).
Типовые ADC включают следующие элементы:
- 15 035374
или их фармацевтически приемлемую соль, где n находится в диапазоне от 8 до 36, а наиболее предпочтительно находится в диапазоне от 8 до 14 (наиболее предпочтительно 12), RPR представляет собой атом водорода или защитную группу, например кислотолабильную защитную группу, например ВОС, R21 представляет собой кэппирующую единицу фрагмента полиэтиленгликоля, предпочтительно -СН3 или -СН2СН2СО2Н, Ab представляет αнти-CD48 антитело, а р представляет целое число в диапазоне от 1 до 16, предпочтительно от 1 до 14, от 6 до 12, от 6 до 10 или от 8 до 10 при упоминании отдельных молекул антитела, или средняя лекарственная нагрузка составляет от около 4 или до около 6, до около 14, предпочтительно около 8 при упоминании популяции молекул антитела.
Как отмечено выше, часть ПЭГ (полиэтиленгликоль) лекарственного средства и линкера может находится в диапазоне от 8 до 36, однако было обнаружено, что ПЭГ из 12 единиц этиленоксида является особенно предпочтительным. Было обнаружено, что более длинные цепи ПЭГ могут приводить к более медленному выведению, тогда как более короткие цепи ПЭГ могут приводить к пониженной активности. Соответственно нижний индекс п во всех из вариантов реализации изобретения выше предпочтительно составляет от 8 до 14, от 8 до 12, от 10 до 12 или от 10 до 14 и наиболее предпочтительно 12.
Полидисперсные ПЭГ, монодисперсные ПЭГ и дискретные ПЭГ могут использоваться для создания ПЭГилированных конъюгатов антитела и лекарственного средства по данному изобретению. Полидисперсные ПЭГ представляют собой гетерогенную смесь размеров и молекулярных масс, тогда как монодисперсные ПЭГ, как правило, очищены от гетерогенных смесей и поэтому обеспечивают одну длину и молекулярную массу цепи. Предпочтительные единицы ПЭГ представляют собой дискретные ПЭГ - соединения, которые синтезируются поэтапным способом, а не посредством процесса полимеризации. Дискретные ПЭГ представляют одну молекулу с определенной и установленной длиной цепи. Как с нижним индексом р при упоминании популяций конъюгатов антитело-лекарственное средство, значение для нижнего индекса n может быть средним значением и может быть либо целочисленным, либо нецелочисленным значением.
В предпочтительных вариантах реализации изобретения ковалентное присоединение антитела к лекарственному средству-линкеру выполняется посредством сульфгидрильной функциональной группы антитела, взаимодействующей с малеимидной функциональной группой линкера лекарственного средства с образованием тиозамещенного сукцинимида. Сульфгидрильная функциональная группа может быть представлена на лигандной единице в естественном состоянии лиганда, например, в остатке природного происхождения (межцепочные дисульфидные остатки), или может быть введена в лиганд посредством химической модификации или путем биологической инженерии, или комбинацией этих обоих способов. Будет понятно, что антитело с замещенным сукцинимидом может существовать в гидролизированной (ых) форме (-ах). Например, в предпочтительных вариантах реализации изобретения ADC состоит из сукцинимидного фрагмента, который при связывании с антителом представлен структурой из
- 16 035374 или состоит из соответствующего ему кислотно-амидного фрагмента, который при связывании с антителом представлен структурой из
или
НО2С
Волнистые линии указывают связь с остальным лекарственным средством-линкером.
Терапевтические применения.
Нацеленный на CD48 конъюгат антитела-лекарственного средства, описанный в данном документе, можно применять для лечения экспрессирующего CD48 нарушения, такого как экспрессирующее CD48 раковое заболевание. Как правило, такие раковые заболевания показывают детектируемые уровни измеренного CD48 по уровню белка (например, иммуноанализом) или РНК. Некоторые такие раковые заболевания показывают повышенные уровни CD48 относительно нераковой ткани такого же типа, предпочтительно от того же пациента. Необязательно уровень CD48 в раковой опухоли измеряется перед проведением лечения.
Примеры раковых заболеваний, связанных с экспрессией CD48, включают множественную миелому и другие В-клеточные неоплазии, включая заболевание Ходжкина, неходжкинскую лимфому, фолликулярную лимфому, хроническую лимфоцитарную лейкемию (CLL), мантийноклеточную лимфому, макроглобулинемию Валденстрема, первичный/системный амилоидоз опухолевых клеток пациента, MGUS и амилоидоз. Наблюдали, что некоторые линии клеток острой миелоцитарной лейкемии (AML) (например, лейкемические бластные клетки пациента с AML) экспрессируют CD48, и поэтому пациентов с раковыми заболеваниями AML, которые экспрессируют CD48, можно лечить с использованием описанных ADC против CD48.
Способы по данному изобретению включают лечение пациента, который болеет раковым заболеванием, с экспрессией CD48, включая введение пациенту конъюгата антитело-лекарственное средство по данному изобретению. Раковое заболевание может быть любым экспрессирующим CD48 раковым заболеванием, включая, например, множественную миелому.
Направленные на CD48 конъюгаты антитела-лекарственного средства вводят в дозировке, подразумевающей эффективную схему, с путем введения и частотой введения, которые замедляют проявление, снижают тяжесть, подавляют дальнейшее ухудшение состояния и/или облегчают по меньшей мере один признак или симптом ракового состояния.
Типовые дозировки для направленных на CD48 конъюгатов с пэгилированным ММАЕ обычно составляют от около 1,0 мкг/кг до 10,0 мг/кг, или от около 0,1 до 5,0 мг/кг, или от около 0,5 до 1,0, 2,0 или 4,0 мкг/кг, хотя подразумеваются и альтернативные дозировки. Предпочтительный диапазон доз составляет от около 0,3 до около 2,0 мг/кг.
Введение может проводится различными путями введения. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгаты вводят парентерально, например внутривенно, внутримышечно или подкожно. Для введения ADC для лечения рака доставка может проводится в системное кровообращение путем внутривенного или подкожного введения. В конкретном варианте реализации изобретения введение происходит посредством внутривенной доставки. Внутривенное введение может происходит, например, путем инфузии в течение такого периода как 30-90 мин или путем однократной болюсной инъекции. В некоторых аспектах изобретения введение будет проходить посредством в/в вливания (т.е. в течение 30-60 с) в периферически вставленный центральный катетер.
Частота введения зависит от многих различных факторов, включая средства введения, целевой сайт, физиологическое состояние пациента, пациент является человеком или животным и других вводимых лекарственных препаратов. Частота может быть ежедневной, ежемесячной или через нерегулярные интервалы в ответ на изменения состояния пациента или прогрессирование излечиваемого ракового заболевания. Типовая частота для внутривенного введения находится между двух раз в неделю и четырехкратно в течение непрерывного курса лечения, хотя также возможно более или менее частое дозирование. Другие типовые частоты для внутривенного введения составляют каждые три недели и между одним разом в неделю или одним разом в месяц в течение непрерывного курса лечения, хотя также возможно более или менее частое дозирование. Другая типовая частота представляет собой введение каждые шесть недель. Для подкожного введения типовая частота дозирования составляет от ежедневной до ежемесячной, хотя также возможно более или менее частое дозирование.
Фармацевтические композиции для исходного введения предпочтительно являются стерильными и практически изотоничными и произведенные в условиях соответствия GMP. Фармацевтические композиции могут поставляться в единичной лекарственной форме (т.е. дозировка для однократного введения).
- 17 035374
Фармацевтические композиции могут составляться с использованием одного или более физиологически приемлемых носителей, разбавителей, наполнителей или вспомогательных веществ. Состав может зависеть от выбранного пути введения. Для инъекции конъюгаты могут быть приготовлены в водных растворах, предпочтительно в физиологически совместимых буферных растворах, таких как раствор Хэнкса, раствор Рингера или физиологический солевой раствор или ацетатный буферный раствор (для снижения неприятных ощущений в месте инъекции). Раствор может содержать такие составляющие вещества, как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие вещества. В альтернативном варианте антитела могут быть в лиофилизированной форме для растворения перед использованием подходящим носителем, например стерильной апирогенной водой. Концентрация конъюгата в жидкой лекарственной форме может варьировать в широких пределах. В некоторых аспектах изобретения ADC присутствует в концентрации от около 0,5 до около 30 мг/мл, от около 0,5 до около 10 мг/мл, от около 1 до около 10 мг/мл, от около 2 до около 10 мг/мл или от около 2 до около 5 мг/мл.
Лечение конъюгатами по данному изобретению можно комбинировать с химиотерапией, радиацией, лечением стволовыми клетками, хирургическим вмешательством и другими видами лечения, эффективными против излечиваемого нарушения, включая стандартный уход за конкретным излечиваемым нарушением. Соответственно настоящее изобретение охватывает способы лечения заболевания и нарушений, описанных в данном документе, в виде монотерапии или в комбинированной терапии, например, со стандартом ухода или с исследуемыми лекарственными средствами для лечения таких заболеваний и/или нарушений. Способы для лечения ракового заболевания включают введение пациенту, нуждающемуся в нем, эффективного количества направленного на CD48 конъюгата антитела-лекарственного средства настоящего изобретения в комбинации с дополнительным противораковым средством или другим средством для лечения ракового заболевания.
Типовое средство для комбинированной терапии представляет собой карфилзомиб (например, KYPROLIS®) - протеасомный ингибитор, используемый для лечения множественной миеломы (см. Siegel D.S. et. al. A phase 2 study of single-agent carfilzomib (PX-171-003-A1) in patients with relapsed and refractory multiple myeloma. Blood 2012; 120:2817-2825). Карфилзомиб можно вводить в виде внутривенной (в/в) инфузии. В одном варианте реализации изобретения карфилзомиб вводят в комбинированной терапии с направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения карфилзомиб вводят в комбинированной терапии с конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения карфилзомиб вводят в комбинированной терапии с hMEM102-MDprPEG(12)-gluc-MMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Карфилзомиб также можно вводить в комбинированной терапии с направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению и дополнительным средством. Карфилзомиб комбинировали с различными дополнительными средствами для лечения множественной миеломы. Например, карфилзомиб комбинировали с леналидомидом и дексаметазоном (см. Stewart K.A. et al. Carfilzomib, lenalidomide and dexamethasone for relapsed multiple myeloma. N Engl J Med. 2015; 372:142152). В одном варианте реализации изобретения карфилзомиб вводят в комбинированной терапии с леналидомидом, дексаметазоном и направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения карфилзомиб вводят в комбинированной терапии с леналидомидом, дексаметазоном и конъюгатом антитела hMEM102лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения карфилзомиб вводят в комбинированной терапии с леналидомидом, дексаметазоном и hMEM102-MDprPEG(12)-gluc-MMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Карфилзомиб также комбинировали с дексаметазоном (см. Dimopoulos M.D. et. al. Carfilzomib and dexamethasone versus bortezomib and dexamethasone for patients with relapsed or refractory multiple myeloma (ENDEAVOR): a randomised, phase 3, open-label, multicentre study. Lancet Oncology 2016; 17:27-38). В одном варианте реализации изобретения карфилзомиб вводят в комбинированной терапии с дексаметазоном и направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения карфилзомиб вводят в комбинированной терапии с дексаметазоном и конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения карфилзомиб вводят в комбинированной терапии с дексаметазоном и hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Карфилзомиб также комбинировали с панобиностатом (см. Berdeja J.G. et. al. Phase I/II study of the combination of panobinostat and carfilzomib in patients with relapsed/refractory multiple myeloma. Haematologica 2015; 100:670-676). В одном варианте реализации изобретения карфилзомиб вводят в комбинированной терапии с панобиностатом и направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения карфилзомиб вводят в комбинированной терапии с панобиностатом и конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения карфилзомиб вводят в комбинированной терапии с панобиностатом и hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE с 8
- 18 035374 кратной нагрузкой по данному изобретению.
Карфилзомиб комбинировали с помалидомидом и дексаметазоном (см. Shah J. et al. Carfilzomib, pomalidomide and dexamethasone (CPD) in patients with relapsed and/or refractory multiple myeloma. Blood 2015; 126: 2284-2290). В одном варианте реализации изобретения карфилзомиб вводят в комбинированной терапии с помалидомидом, дексаметазоном и направленным на CD48 конъюгатом антителалекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения карфилзомиб вводят в комбинированной терапии с помалидомидом, дексаметазоном и конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения карфилзомиб вводят в комбинированной терапии с помалидомидом, дексаметазоном и hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Другое типовое средство для комбинированной терапии представляет собой даратумумаб (например, DARZALEX™) - моноклональное антитело человека, которое связывает CD38 (гликопротеин, на высоком уровне экспрессируемый на клетках множественной миеломы). Даратумумаб можно вводить пациентам путем внутривенной инфузии для лечения множественной миеломы (см. Lokhorst H.M. et. al. Targeting CD38 with daratumumab monotherapy in multiple myeloma. N Engl J Med 2015; 373:1207-1219). В одном варианте реализации изобретения даратумумаб вводят в комбинированной терапии с направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения даратумумаб вводят в комбинированной терапии с конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения даратумумаб вводят в комбинированной терапии с hMEM102-MDpr-PEG(12)-glucММАЕ с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Даратумумаб также можно вводить в комбинированной терапии с направленным на CD4 8 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению и дополнительным средством. Даратумумаб комбинировали с различными дополнительными средствами для лечения множественной миеломы. Например, даратумумаб комбинировали с бортезомибом и леналидомидом (см. Phipps С. et. al. Daratumumab and its potential in the treatment of multiple myeloma: overview of the preclinical and clinical development. Ther Adv Hematol 2015; 6:120-127). В одном варианте реализации изобретения даратумумаб вводят в комбинированной терапии с бортезомибом, леналидомидом и направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения даратумумаб вводят в комбинированной терапии с бортезомибом, леналидомидом и конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения даратумумаб вводят в комбинированной терапии с бортезомибом, леналидомидом и hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Даратумумаб также комбинировали с бортезомибом и декаметазоном (см. Phipps С. et. al.). В одном варианте реализации изобретения даратумумаб вводят в комбинированной терапии с бортезомибом, дексаметазоном и направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения даратумумаб вводят в комбинированной терапии с бортезомибом, дексаметазоном и конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения даратумумаб вводят в комбинированной терапии с бортезомибом, дексаметазоном и hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE с 8кратной нагрузкой по данному изобретению.
Другое типовое средство для комбинированной терапии представляет собой элотузумаб (например, EMPLICITI™) - моноклональное антитело человека, которое связывает CD319 или сигнальную молекулу лимфоцитарной активации F7 (SLAMF7), маркер злокачественных клеток множественной миеломы). Элотузумаб можно вводить пациентам путем внутривенной инфузии для лечения множественной миеломы (см. Zonder J.A. et. al. A phase 1, multicenter, open-label, dose escalation study of elotuzumab in patients with advanced multiple myeloma. Blood 2012; 120: 552-559)). В одном варианте реализации изобретения элотузумаб вводят в комбинированной терапии с направленным на CD48 конъюгатом антителалекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения элотузумаб вводят в комбинированной терапии с конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения элотузумаб вводят в комбинированной терапии с hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Элотузумаб также можно вводить в комбинированной терапии с направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению и дополнительным средством. Элотузумаб комбинировали с различными дополнительными средствами для лечения множественной миеломы. Например, элотузумаб комбинировали с леналидомидом и дексаметазоном (см. Lonial S. et. al. Elotuzumab therapy for relapsed or refractory multiple myeloma. N Engl J Med 2015; 373:621-631). В одном варианте реализации изобретения элотузумаб вводят в комбинированной терапии с леналидомидом, дексаметазоном и направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения элотузумаб вводят в комбинированной терапии с леналидомидом, дексаметазоном и конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному
- 19 035374 изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения элотузумаб вводят в комбинированной терапии с леналидомидом, дексаметазоном и hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Другое типовое средство для комбинированной терапии представляет собой леналидомид (например, REVLIMID®) - иммуномодулирующее средство, даваемое пациентам для лечения множественной миеломы (см. Richardson P.G., A randomized phase 2 study of lenalidomide therapy for patients with relapsed or relapsed and refractory multiple myeloma. Blood 2006, 108: 3458-3464). Леналидомид может быть упакован в виде капсулы, пилюли или таблетки для перорального введения. В одном варианте реализации изобретения леналидомид вводят в комбинированной терапии с направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения леналидомид вводят в комбинированной терапии с конъюгатом антитела hMEM102лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения леналидомид вводят в комбинированной терапии с hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Леналидомид также можно вводить в комбинированной терапии с направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению и дополнительным средством. Леналидомид комбинировали с различными дополнительными средствами, которые лечат множественную миелому. Например, леналидомид комбинировали с бортезомидом и дексаметазоном (см. Richardson P.G. et. al. Lenalidomide, bortezomib, and dexamethasone combination therapy in patients with newly diagnosed multiple myeloma. Blood 2010; 116:679-686). В одном варианте реализации изобретения леналидомид вводят в комбинированной терапии с бортезомибом, дексаметазоном и направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения леналидомид вводят в комбинированной терапии с бортезомибом, дексаметазоном и конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения леналидомид вводят в комбинированной терапии с бортезомибом, дексаметазоном и hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Леналидомид также комбинировали с карфилзомибом и дексаметазоном (см. Stewart K.A. et. al.). В одном варианте реализации изобретения леналидомид вводят в комбинированной терапии с карфилзомибом, дексаметазоном и направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения леналидомид вводят в комбинированной терапии с карфилзомибом, дексаметазоном и конъюгатом антитела hMEM102лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения леналидомид вводят в комбинированной терапии с карфилзомибом, дексаметазоном и hMEM102-MDprPEG(12)-gluc-MMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Леналидомид также комбинировали с даратумумабом и бортезомибом (см. Phipps С. et. al.). В одном варианте реализации изобретения леналидомид вводят в комбинированной терапии с даратумумабом, бортезомибом и направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения леналидомид вводят в комбинированной терапии с даратумумабом, бортезомибом и конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения леналидомид вводят в комбинированной терапии с даратумумабом, бортезомибом и hMEM102-MDpr-PEG(12)-glucMMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Леналидомид также комбинировали с элотузумабом и дексаметазоном (см. Lonial S. et. al. Elotuzumab therapy for relapsed or refractory multiple myeloma. N Engl J Med 2015; 373:621-631). В одном варианте реализации изобретения леналидомид вводят в комбинированной терапии с элотузумабом, дексаметазоном и направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения леналидомид вводят в комбинированной терапии с элотузумабом, дексаметазоном и конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения леналидомид вводят в комбинированной терапии с элотузумабом, дексаметазоном и hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Другое типовое средство для комбинированной терапии представляет собой бортезомиб (например, VELCADE®) - протеасомный ингибитор, даваемый пациентам для лечения множественной миеломы и мантийноклеточной миеломы (см. Richardson P.G., A randomized phase 2 study of lenalidomide therapy for patients with relapsed or relapsed and refractory multiple myeloma. N Engl J Med 2003; 348:2609-2617). Бортезомиб можно вводить пациентам посредством внутривенной инъекции. В одном варианте реализации изобретения бортезомиб вводят в комбинированной терапии с направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения бортезомиб вводят в комбинированной терапии с конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения бортезомиб вводят в комбинированной терапии с hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
- 20 035374
Бортезомиб также можно вводить в комбинированной терапии с направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению и дополнительным средством. Бортезомиб комбинировали с различными дополнительными средствами для лечения множественной миеломы. Например, бортезомиб комбинировали с талидомидом и дексаметазоном (см. Kapoor P. et. al. Bortezomib combination therapy in multiple myeloma. Semin Hematol 2012; 3:228-242). В одном варианте реализации изобретения бортезомиб вводят в комбинированной терапии с талидомидом, дексаметазоном и направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения бортезомиб вводят в комбинированной терапии с талидомидом, дексаметазоном и конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения бортезомиб вводят в комбинированной терапии с талидомидом, дексаметазоном и hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Бортезомиб также комбинировали с дексаметазоном, талидомидом, цисплатином, доксорубицином, циклофосфамидом и этопозидом (см. Kapoor P. et. al.). В одном варианте реализации изобретения бортезомиб вводят в комбинированной терапии с дексаметазоном, талидомидом, цисплатином, доксорубицином, циклофосфамидом, этопозидом и направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения бортезомиб вводят в комбинированной терапии с дексаметазоном, талидомидом, цисплатином, доксорубицином, циклофосфамидом, этопозидом и конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения бортезомиб вводят в комбинированной терапии с дексаметазоном, талидомидом, цисплатином, доксорубицином, циклофосфамидом, этопозидом и hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Бортезомиб также комбинировали с даратумумабом и леналидомидом (см. Phipps С. et. al. ). В одном варианте реализации изобретения бортезомиб вводят в комбинированной терапии с даратумумабом, леналидомидом и направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения бортезомиб вводят в комбинированной терапии с даратумумабом, леналидомидом и конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения бортезомиб вводят в комбинированной терапии с даратумумабом, леналидомидом и hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Бортезомиб также комбинировали с леналидомидом и дексаметазоном (см. Richardson P.G. et. al. 2010). В одном варианте реализации изобретения бортезомиб вводят в комбинированной терапии с леналидомидом, дексаметазоном и направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения бортезомиб вводят в комбинированной терапии с леналидомидом, дексаметазоном и конъюгатом антитела hMEM102лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения бортезомиб вводят в комбинированной терапии с леналидомидом, дексаметазоном и hMEM102-MDprPEG(12)-gluc-MMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Бортезомиб также комбинировали с панобиностатом и дексаметазоном (см. Richardson P. et. al. PANORAMA 2: panobinostat in combination with bortezomib and dexamethasone in patients with relapsed and bortezomib-refractory myeloma. Blood 2013; 122:2331-2337). В одном варианте реализации изобретения бортезомиб вводят в комбинированной терапии с панобиностатом, дексаметазоном и направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения бортезомиб вводят в комбинированной терапии с панобиностатом, дексаметазоном и конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения бортезомиб вводят в комбинированной терапии с панобиностатом, дексаметазоном и hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Другое типовое средство для комбинированной терапии представляет собой дексаметазон (например, DECADRON®) - глюкокортикостероид, используемый для лечения ракового заболевания (включающего множественную миелому, лейкемию и лимфому), воспаления, аллергий и тошноты. Дексаметазон можно вводить в виде таблетки, пилюли или капсулы для перорального введения или внутривенной инфузией. В одном варианте реализации изобретения дексаметазон вводят в комбинированной терапии с направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения дексаметазон вводят в комбинированной терапии с конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения дексаметазон вводят в комбинированной терапии с hMEM102-MDprPEG(12)-gluc-MMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению. Дексаметазон также можно вводить в комбинированной терапии с направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению и дополнительным средством.
Другое типовое средство для комбинированной терапии представляет собой циклофосфамид (например, CYTOXAN®) - алкилирующее средство, используемое для лечения ракового заболевания
- 21 035374 (включающего среди прочих множественную миелому, острую миелоцитарную лейкемию, лимфому Ходжкина и неходжкинскую лимфому, рак молочной железы и рак легкого). Циклофосфамид можно вводить путем инъекции, инфузии, в виде таблетки, пилюли или капсулы для перорального введения или инъекцией в мышцу, в брюшную полость или в полость легкого. В одном варианте реализации изобретения циклофосфамид вводят в комбинированной терапии с направленным на CD48 конъюгатом антителалекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения циклофосфамид вводят в комбинированной терапии с конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения циклофосфамид вводят в комбинированной терапии с hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению. Циклофосфамид также можно вводить в комбинированной терапии с направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению и дополнительным средством.
Другое типовое средство для комбинированной терапии представляет собой мелфалан, алкилирующее средство, используемое для лечения ракового заболевания (включающего множественную миелому и рак яичника). Мелфалан можно вводить перорально, в виде инъекции или инфузии. В одном варианте реализации изобретения мелфалан вводят в комбинированной терапии с направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения мелфалан вводят в комбинированной терапии с конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения мелфалан вводят в комбинированной терапии с hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE с 8кратной нагрузкой по данному изобретению.
Мелфалан также можно вводить в комбинированной терапии с направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению и дополнительным средством.
Другое типовое средство для комбинированной терапии представляет собой помалидомид (например, POMALYST®) - иммуномодулирующее средство, используемое для лечения множественной миеломы. Помалидомид можно вводить в виде капсулы, пилюли или таблетки для перорального введения. В одном варианте реализации изобретения помалидомид вводят в комбинированной терапии с направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения помалидомид вводят в комбинированной терапии с конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения помалидомид вводят в комбинированной терапии с hMEM102-MDpr-PEG(12)-glucMMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Помалидомид также можно вводить в комбинированной терапии с направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению и дополнительным средством. Помалидомид комбинировали с различными дополнительными средствами для лечения множественной миеломы. Помалидомид комбинировали с дексаметазоном (см. Richardson P. et.al. Pomalidomide alone or in combination with low-dose dexamethasone in relapsed and refractory multiple myeloma: a randomized phase 2 study. Blood 2014; 123:1826-1832). В одном варианте реализации изобретения помалидомид вводят в комбинированной терапии с дексаметазоном и направленным на CD48 конъюгатом антителалекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения помалидомид вводят в комбинированной терапии с дексаметазоном и конъюгатом антитела hMEM102лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения помалидомид вводят в комбинированной терапии с дексаметазоном и hMEM102-MDpr-PEG(12)-glucMMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Помалидомид комбинировали с карфилзомибом и дексаметазоном (см. Shah J. et. al. Carfilzomib, pomalidomide, and dexamethasone (CPD) in patients with relapsed and/or refractory multiple myeloma. Blood 2015; 126: 2284-2290). В одном варианте реализации изобретения помалидомид вводят в комбинированной терапии с карфилзомибом, дексаметазоном и направленным на CD48 конъюгатом антителалекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения помалидомид вводят в комбинированной терапии с карфилзомибом, дексаметазоном и конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения помалидомид вводят в комбинированной терапии с карфилзомибом, дексаметазоном и hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Другое типовое средство для комбинированной терапии представляет собой панобиностат (например, FARYDAK®) - ингибитор гистоновой деацетилазы (HDAC), используемый для лечения ракового заболевания (включающего множественную миелому) (см. Wolf J.L. et. al. A phase II study of oral panobinostat (LBH589) in adult patients with advanced refractory multiple myeloma. ASH Annual Meeting Abstracts, 2008). Панобиностат можно вводить в виде пилюли, капсулы или таблетки для перорального введения. В одном варианте реализации изобретения панобиностат вводят в комбинированной терапии с направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения панобиностат вводят в комбинированной терапии с конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реа- 22 035374 лизации изобретения панобиностат вводят в комбинированной терапии с hMEM102-MDpr-PEG(12)-glucMMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Панобиностат также можно вводить в комбинированной терапии с направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению и дополнительным средством. Панобиностат комбинировали с различными дополнительными средствами для лечения множественной миеломы. Например, панобиностат комбинировали с карфилзомибом (см. Berdeja J.G. et. al.). В одном варианте реализации изобретения панобиностат вводят в комбинированной терапии с карфилзомибом и направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения панобиностат вводят в комбинированной терапии с карфилзомибом и конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения панобиностат вводят в комбинированной терапии с карфилзомибом и hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Панобиностат также комбинировали с бортезомибом и декаметазоном (см. Richardson P. et. al. 2013). В одном варианте реализации изобретения панобиностат вводят в комбинированной терапии с бортезомибом, дексаметазоном и направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения панобиностат вводят в комбинированной терапии с бортезомибом, дексаметазоном и конъюгатом антитела hMEM102лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения панобиностат вводят в комбинированной терапии с бортезомибом, дексаметазоном и hMEM102-MDprPEG(12)-gluc-MMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Другое типовое средство для комбинированной терапии представляет собой иксазомиб (NINLARO®) - протеасомный ингибитор, используемый для лечения ракового заболевания (включающего множественную миелому). Иксазомиб можно вводить перорально. В одном варианте реализации изобретения иксазомиб вводят в комбинированной терапии с направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения иксазомиб вводят в комбинированной терапии с конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения иксазомиб вводят в комбинированной терапии с hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Иксазомиб также можно вводить в комбинированной терапии с направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению и дополнительным средством. Иксазомиб комбинировали с различными дополнительными средствами для лечения множественной миеломы. Например, иксазомиб комбинировали с леналидомидом и дексаметазоном (см. Moreau P. et. al. Ixazomib, an investigational oral proteasome inhibitor, in combination with lenalidomide and dexamethasone, significantly extends progression-free survival for patients with relapsed and/or refractory multiple myeloma: the phase 3 tourmaline-MM1 study. ASH Annual Meeting Abstracts, 2015). В одном варианте реализации изобретения иксазомиб вводят в комбинированной терапии с леналидомидом, дексаметазоном и направленным на CD48 конъюгатом антитела-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения иксазомиб вводят в комбинированной терапии с леналидомидом, дексаметазоном и конъюгатом антитела hMEM102-лекарственного средства по данному изобретению. В дополнительном варианте реализации изобретения иксазомиб вводят в комбинированной терапии с леналидомидом, дексаметазоном и hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE с 8-кратной нагрузкой по данному изобретению.
Любой признак, этап, элемент, вариант реализации или аспект по данному изобретению может использоваться в сочетании с любым другим, если только конкретно не указано иное. Хотя, для ясности понимания, вышеизложенное изобретение было подробно описано посредством иллюстраций и примеров, очевидно, что в пределах объема прилагаемой формулы изобретения могут быть осуществлены на практике некоторые изменения и модификации.
Примеры
Следующие примеры предложены для иллюстрации, но не для ограничения заявленного изобретения.
Пример 1. Выбор и гуманизация антитела.
Сначала было описано мышиное антитело МЕМ102, связывающееся с белком CD48 человека, в Bazil et. al., Folia Biologica 35:289-297 (1989). Были идентифицированы нуклеиновые кислоты, кодирующие мышиное антитело МЕМ102, их секвенировали и они кодировали последовательности CDR тяжелой и легкой цепей, т.е. SEQ ID NO:3-8. Некоторые гуманизированные антитела МЕМ102 конструировали с использованием вариабельного участка тяжелой цепи hIgG VH7-4-l/hIgG-JH5 зародышевой линии человека и вариабельного участка легкой цепи hIgG-VK6-21/hIgG-JK4 зародышевой линии человека в качестве человеческих акцепторных последовательностей. Антитела, отличавшиеся по выбору аминокислотных остатков, подвергали обратной мутации до последовательности антитела мыши или зародышевой линии мыши. Антитело, обозначенное HALA (тяжелая цепь, указанная в SEQ ID NO:1 (vHA), и легкая
- 23 035374 цепь, указанная в SEQ I D NO:2 (vLA)), выбрали как главное гуманизированное антитело МЕМ102 по сравнению с другими вариантами на основе его: (i) характеристик связывания, (ii) способности доставлять лекарственное средство и (iii) количества обратных мутаций. Гуманизированное антитело МЕМ102 также называют hMEM102.
Вместо антитела HALA в настоящем изобретении можно использовать антитело, обозначенное HCLA (антитело с вариабельным участком тяжелой цепи, обозначенным vHC, и вариабельным участком легкой цепи, обозначенным vLA), HALB (антитело с вариабельным участком тяжелой цепи, обозначенным vHA, и вариабельным участком легкой цепи, обозначенным vLB), HBLA (антитело с вариабельным участком тяжелой цепи, обозначенным vHB, и вариабельным участком легкой цепи, обозначенным vLA), HBLB (антитело с вариабельным участком тяжелой цепи, обозначенным vHB, и вариабельным участком легкой цепи, обозначенным vLB), HCLB (антитело с вариабельным участком тяжелой цепи, обозначенным vHC, и вариабельным участком легкой цепи, обозначенным vLB) (см. фиг. 1 и 2 касательно последовательностей vHA, vHB, vHC, vLA, vLB и vLC). Аффинности связывания для различных гуманизированных форм МЕМ102 являются сходными при исследовании их против клеток, сверхэкспрессирующих как CD48 человека, так и яванского макака.
Пример 2. Характеристика связывания hMEM102.
Методы исследования.
Для определения насыщения связывания анти-CD48 антитела опухолевые клетки U-266 множественной миеломы человека или стабильно трансфецированные CD48 яванского макака клонированные клетки CHO-DG44 окрашивали титрованными антителами (0,8 нг/мл - 50 мкг/мл), конъюгированными с Alexa Fluor-647, нагруженными приблизительно 2-4 флуорофорами на антитело. После одного часа инкубации на льду клетки дважды промывали фосфатно-солевым буферным раствор, содержащим 2% фетальной бычьей сыворотки и 0,02% азида натрия. Флуоресценцию выявляли на проточном цитометре LSRII и определяли значения Kd с использованием нелинейной регрессии с одним сайтом связывания (гипербола) в программе GraphPad Prism.
Результаты.
В табл.1 и на фиг. 3 и 4 показано, что антитело hMEM102-HALA обладает сходной аффинностью связывания по сравнению с сМЕМ102 в клетках U-266, как отмечено низкими значениями Kd. Аффинность связывания hMEM102-HALA и СМЕМ102 с CD48 яванского макака в стабильно трансфецированных клонированных клетках CHO-DG44 также была сравнимая. В обеих линиях клеток как hMEM102HALA, так и СМЕМ102 обладали более чем в 4 раза меньшим значением Kd по сравнению с mMEM102. Ahtu-CD48 антитела обладали приблизительно в 6 раза более сильной аффинностью связывания с CD48 человека по сравнению с CD48 яванского макака.
Таблица 1
Kd (нМ) | |||
Антитело | № серии | U-266 | CHO-DG44CD48 яванского макака |
hMEM102-HALA | 9915029F | 5, 0 | 31, 1 |
СМЕМ102 | 7713039А | 5, 8 | 40, 5 |
ГОМЕМ102 | 275036Т | 20, 8 | 164,7 |
Пример 3. Синтез MDpr-PEG(12)-glyc-MMAE и конъюгация с hMEM102.
Общая информация.
Все коммерчески доступные безводные растворители использовали без дополнительной очистки. Реактивы ПЭГ получали от компании Quanta BioDesign (г. Пауэлл, штат Огайо). Аналитическую тонкослойную хроматографию выполняли на силикагеле 60 F254 на алюминиевой фольге (EMD Chemicals, г. Гибстаун, штат Нью-Джерси). Радиальную хроматографию выполняли на аппарате Chromatotron (Harris Research, г. Пало-Альто, штат Калифорния). Колоночную хроматографию выполняли на системе Biotage Isolera One с флэш-очисткой (г. Шарлотт, штат Северная Каролина). Аналитическую ВЭЖХ выполняли на системе Varian ProStar 210 с подачей растворителей, сконфигурированной с PDA-детектором Varian ProStar 330. Образцы элюировали через обращенно-фазную колонку С12 Phenomenex Synergi 2,0x150 мм, 4 мкм, 80А. Подкисленная подвижная фаза состояла из ацетонитрила и воды, которые содержали либо 0,05% трифторуксусной кислоты, либо 0,1% муравьиной кислоты (отмечено для каждого соединения). Соединения элюировали линейным градиентом подкисленного ацетонитрила от 5% на 1 мин после введения до 95% на 11 мин с последующим изократическим элюированием 95% ацетонитрилом до 15 мин (скорость потока=1,0 мл/мин). Анализ ЖХ-МС выполняли на двух различных системах. Система 1 для ЖХ-МС состояла из масс-спектрометра ZMD Micromass, подключенного к прибору для ВЭЖХ HP Agilent 1100, оборудованному обращенно-фазной колонкой С12 Phenomenex Synergi 2,0x150 мм, 4 мкм, 80А. Подкисленный элюент состоял из линейного градиента ацетонитрила от 5 до 95% в 0,1%-ной водной муравьиной кислоте в течение 10 мин с последующим изократическим элюированием 95%-ным ацетонитрилом в течение 5 мин (скорость потока=0,4 мл/мин). Система 2 для ЖХ-МС состояла из массспектрометра Waters Xevo G2 с Tof, подключенного к модулю для разделений Waters 2695 с фотодиод- 24 035374 ным матричным детектором Waters 2996; колонка, подвижная фаза, градиент и скорость потока были аналогичными как для системы 1. Анализ СВЭЖХ-МС проводили на масс-детекторе Waters SQ, подключенном к сверхвысокоэффективной системе ЖХ Acquity, оборудованной обращенно-фазной колонкой Acquity UPLC ВЕН С18 2,1*50 мм, 1,7 мкм. Подкисленная подвижная фаза (0,1% муравьиной кислоты) состояла из градиента 3% ацетонитрила/97% воды до 100% ацетонитрила (скорость потока=0,5 мл/мин). Препаративную ВЭЖХ проводили на системе Varian ProStar 210 с подачей растворителей, сконфигурированной с PDA-детектором Varian ProStar 330. Продукты очищали на обращенно-фазной колонке С12 Phenomenex Synergi 10,0*250 мм, 4 мкм, 80А, элюированием с помощью 0,1%-ной муравьиной кислоты в воде (растворитель А) и 0,1% муравьиной кислоты в ацетонитриле (растворитель В). Метод очистки состоял из следующего градиента растворителя А и растворителя В: 90:10 от 0 до 5 мин; 90:10 до 10:90 от 5 до 80 мин с последующим изократическим элюированием 10:90 в течение 5 мин. Скорость потока составляла 4,6 мл/мин с мониторингом при 254 нм. Препаративную ВЭЖХ для соединений в схемах 3 и 4 вместо 0,1%-ной муравьиной кислоты проводили с 0,1% трифторуксусной кислотой в обеих подвижных фазах
Схема 1 ν Л..
ΟΑοΟγΝΗ 0Н С’гГЖ
S 1 (пндичата Sa a US 2093/0241128/41 J 2 HN’Fmoc (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-(3-аминопропанамидо)-4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-втор-бутил)-12-(2-((S)-2((1R,2R)-3 -(((1 S,2R)-1-гидрокси-1-фенилпропан-2-ил)амино)-1-метокси-2-метил-3 -оксипропил)пирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)-5,8-диизопропил-4,10-диметил-3,6,9-триоксо-2,13-диокса-4,7,10-триазатетрадецил)фенокси)-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-карбоновая кислота (2).
В колбу, содержащую известный интермедиат 2 глюкуронид-ММАЕ (соединение 8а в US 2008/0241128 А1) (40 мг, 26,8 мкмоль) добавляли 0,9 мл метанола и 0,9 мл тетрагидрофурана. Затем раствор охлаждали на ледяной бане и по каплям добавляли моногидрат гидроксида лития (6,8 мг, 161 мкмоль) в виде раствора в 0,9 мл воды. Затем реакционную смесь перемешивали на льду в течение 1,5 ч, за это время анализом ЖХ/МС выявлено полное превращение в продукт. Затем добавляли ледяную уксусную кислоту (9,2 мкл, 161 мкмоль) и реакционную смесь упаривали до сухого состояния. Препаративная ВЭЖХ дала возможность выделить полностью незащищенный линкерный интермедиат 3 глюкуронида-ММАЕ (26 мг, 87%) в виде маслянистого остатка. Аналитическая ВЭЖХ (0,1%-ная муравьиная кислота): tR 9,3 мин. Система 1 для ЖХ-МС: tR 11,10 мин, обнаруженный m/z (ES+) 1130,48 (М+Н)+, обнаруженный m/z (ES-) 1128,63 (М-Н)-
Схема 2
^)-44-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-38-оксо-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35додекаокса-39-азапентатетраконтан-45-оиловая кислота (4).
В колбу, содержащую Nx-Fmoc-лизин 3 (59 мг, 161 мкмоль), добавляли 2,9 мл безводного дихлорметана с последующим добавлением метокси-ПЭГ12-OSu (100 мг, 146 мкмоль). Затем добавляли DIPEA (127 мкл, 730 мкмоль) и реакционную смесь перемешивали под азотом при комнатной температуре с последующим проведением ТСХ и ХЖ/МС. Через 2 ч анализом ХЖ/МС выявляли превращение в продукт. Реакционный раствор разбавляли в дихлорметане и очищали методом хроматографии на силикагеле. Неподвижную фазу элюировали дихлорметаном с возрастающими количествами метанола (от 0 до 20%) для получения требуемого продукта 4 (153 мг, 112%). СВЭХЖ-МС: tR 1,77 мин, обнаруженный m/z (ES+) 939,58 (М+Н)+.
^)-2,5-диоксопирролидин-1-ил 44-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-38-оксо2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-додекаокса-39-азапентатетраконтан-45-оат (5).
- 25 035374
Колбу заполняли N,,-Fmoc-.in3HH (PEG12)-OH 4 (153 мг, 163 мкмоль) и 1,6 мл безводного гидрофурана. Добавляли N-гидроксисукцинимид (28 мг, 245 мкмоль) с последующим добавлением диизопропилкарбодиимида (38 мкл, 245 мкмоль). Реакционную смесь изолировали под азотом и перемешивали в течение ночи. Неочищенную реакционную смесь разбавляли в дихлорметане с возрастающими количествами метанола (от 0 до 10%) для получения требуемого активированного сложного эфира 5 (155 мг). Вещество использовали без дополнительного определения характеристик. СВЭХЖ-МС: tR 1,92 мин, обнаруженный m/z (ES+) 1036,48 (М+Н)+.
^^^^^)-6-(2-(^)-44-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-38,45-диоксо-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-додекаокса-39,46-диазанонатетраконтанамидо)-4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-вторбутил)-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-гидрокси-1-фенилпропан-2-ил)αмино)-1-метокси-2-метил-3оксопропил)пирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)-5,8-диизопропил-4,10-диметил-3,6,9-триоксо-2,13-диокса4,7,10-триазатетрадецил)фенокси)-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-карбоновая кислота (6).
Незащищенный линкерный интермедиат 2 глюкуронида-ММАЕ (92 мг, 81 мкмоль) растворяли в безводном диметилформамиде (1,6 мл) и добавляли в колбу, содержащую Na-Fmoc-лизин (PEG12)-OSu 5 (101 мг, 97 мкмоль). Затем добавляли диизопропилэтиламин (70 мкл, 405 мкмоль), потом реакционную смесь перемешивали под азотом при комнатной температуре. Через 4,5 ч анализом ХЖ/МС выявляли превращение в продукт. Продукт очищали препаративной ВЭЖХ для получения интермедиата 6 FmocLys (PEG12) -глюкуронид-ММАЕ (111 мг, 62% за две стадии) в виде маслянистого остатка. СВЭХЖ-МС: tR 2,01 мин, обнаруженный m/z (ES+) 2050,92 (М+Н)+.
(28,38,48^6Б)-6-(2-((8)-44-амино-38,45-диоксо-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-додекаокса-39,46диaзанонатетраконтанaмидо)-4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-втор-бутил)-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1гидрокси-1-фенилпропан-2-ил)амино)-1-метокси-2-метил-3-оксопропил)пирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)5,8-диизопропил-4,10-диметил-3,6,9-триоксо-2,13-диокса-4,7,10-триазатетрадецил)фенокси)-3,4,5тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-карбоновая кислота (7).
Растворяли интермедиат 6 Fmoc-Lys (PEG12)-глюкуронид-ММАЕ (111 мг, 54 мкмоль) в 2,2 мл безводного диметилформамида с последующим добавлением 0,5 мл пиперидина. Реакционную смесь перемешивали под азотом в течение 3 ч и затем упаривали до сухого состояния. Продукт очищали препаративной ВЭЖХ для получения интермедиата 7 H-Lys(PEG12)-глюкуронид-ММАЕ (85 мг, 86%) в виде маслянистого остатка. СВЭХЖ-МС: tR 1,50 мин, обнаруженный m/z (ES+) 1829,31 (М+Н)+.
^)-2,5-диоксопирролидин-1-ил 3-((трет-бутоксикарбонил)амино)-2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Нпиррол-1-ил)пропаноат (9).
Растворяли (Ъ)-М,-малеимидо-Ц:-Вос-диаминопропановую кислоту 8 (Nature Biotechnology, 2014, 32, 1059-1062) (400 мг, 1,4 ммоль) в 7 мл безводного диметилформамида. Добавляли Nгидроксисукцинимид (178 мг, 1,5 ммоль) с последующим добавлением 1-этил-3-(3диметиламинопропил)карбодиимид (298 мг, 1,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре под азотом в течение 3 ч. Водную обработку выполняли посредством разбавления в 120 мл воды; затем водный слой экстрагировали три раза с помощью 60 мл этилацетата. Затем объединенный органический слой промывали соляным раствором, высушивали над сульфатом натрия и упаривали до сухого состояния. Очищали продукт флэш-колоночной хроматографией, элюируя смесями из гексана:этилацетата (50:50 до 0:100) для получения сложного эфира NHS и (S) -^-малеимидо-^-Восдиаминопропановой кислоты [MDpr(Вое)-OSu] 9 (297 мг, 55%). Система 1 ХЖ-МС: tR 12,23 мин, обнаруженный m/z (ES+) 282,0599 (М+Н-Вос группа)+. Система 2 ХЖ-МС: tR 11,30 мин, обнаруженный m/z (ES+) 2580,2515 (М+Н)+.
Схема 3
(2R/S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-((S)-44-((S)-3-((трет-бутоксикарбонил)амино)-2-(2,5-диоксо-2,5-дигидро1Н-пиррол-1-ил)пропанамидо)-38,45-диоксо-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-додекаокса-39,46- 26 035374 диазанонатетраконтанамидо)-4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-втор-бутил)-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-lгидрокси-1-фенилпропан-2-ил)амино)-1-метокси-2-метил-3-оксопропил)пирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)5,8-диизопропил-4,10-диметил-3,6,9-триоксо-2,13-диокса-4,7,10-триазатетрадецил)фенокси)-3,4,5тригидрокситетрагидро-2Н-пиран-2-карбоновая кислота (10).
MDpr(Boc)-OSu 9 (20 мг, 53 мкмоль) растворяли в 2,2 мл безводного диметилформамида и добавляли в колбу, содержащую линкерный интермедиат 7 H-Lys(PEG12)-глюкуронид-ММАЕ (86 мг, 44 мкмоль). Затем добавляли диизопропилэтиламин (15 мкл, 88 мкмоль), потом реакционную смесь перемешивали под азотом при комнатной температуре в течение 2,5 ч. Реакцию останавливали с помощью 15 мкл ледяной уксусной кислоты и очищали препаративной ВЭЖХ для возможности получения интермедиата 10 MDpr(Boc)-Lys(PEG12)-глюкуронид-ММАЕ (37 мг, 40%) в виде смеси диастереоизомеров. Диастереоизомеры разделяли методом хиральной хроматографии. СВЭХЖ-МС: tR 1,84 мин, обнаруженный m/z (ES+) 2095,44 (М+Н)+.
(2Р^.п^^.5Р.6^)-6-(2-((Ъ)-44-((Р)-3-амино-2-(2.5-диоксо-2.5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)пропанамидо)-38,45-диоксо-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-додекаокса-39,46-диазанонатетраконтанамидо)-4((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-втор-бутил)-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-гидрокси-1-фенилπроπан-2ил)амино)-1-метокси-2-метил-3-оксопропил)пирролидин-1-ил)-2-оксоэтил)-5,8-диизопропил-4,10диметил-3,6,9-триоксо-2,13-диокса-4,7,10-триазатетрадецил)фенокси)-3,4,5-тригидрокситетрагидро-2Нпиран-2-карбоновая кислота (11).
Колбу, содержащую интермедиат 10 MDpr(Boc)-Lys(PEG12)-глюкуронид-ММАЕ (34 мг, 16 мкмоль), охлаждали до 0°С на ледяной бане под азотом. По каплям добавляли раствор 10%-ной трифторуксусной кислоты в дихлорметане (0,8 мл). Затем реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч, за это время анализом ЖХ/МС выявлено полную потерю Вос-защиты. Затем реакционную смесь упаривали до неочищенного остатка и очищали препаративной ВЭЖХ для получения линкера 11 MDprLys (PEG12)-глюкуронид-ММАЕ (22 мг, 68%). СВЭХЖ-МС: tR 1,50 мин, обнаруженный m/z (ES+) 1995,18 (М+Н)+.
Соединение 11 конъюгировали посредством его межцепных тиолов с анти-CD48 антителом при средней лекарственной нагрузке 8 молекул лекарственного средства на антитело с использованием способов, известных в данной области техники (см., например, патент США № 7659241).
Пример 4. Цитотоксичность ADC hMEM-102 на линиях раковых клеток множественной миеломы.
Методы исследования.
Линии клеток множественной миеломы человека EJM (DSMZ; IMDM+20% FBS), L363 (DSMZ; RPMI 1640+15% FBS), MM.1R (АТСС; RPMI 1640+10% FBS), NCI-H929 (АТСС: RPMI 1640+10% FBS), U-266 (ATCC; RPMI 1640+15% FBS) и LP-1 (DSMZ; IMDM+20% FBS) культивировали при 37°С, 5% CO2. Конъюгаты анти-CD48 антитела с лекарственным средством ауристатином серийно 3-кратно разбавляли в среде для получения 10-ти точечных кривых зависимости от дозы (1000-0,05081 нг/мл) и наносили на клетки множественной миеломы, культивированные в 96-луночных аналитических планшетах (от 10000 до 15000 клеток на лунку в 200 мкл среды). Клетки инкубировали с ADC в течение всего 96 ч при 37°С, 5% СО2. Анализировали жизнеспособность клеток с использованием люминесцентного анализа цитотоксичности Cell Titer Glo (Promega), а данные собирали с использованием устройства считывания планшетов Envision (PerkinElmer). Все анализы цитотоксичности выполняли с точками четырехкратного повторения данных, и отмечали средние значения IC50 из 2-3 независимых экспериментов.
Апоптическую гибель клеток измеряли с использованием анализа Caspase-Glo 3/7 (Promega), используя идентичные условия анализа, описанные выше.
Результаты.
Результаты показаны в табл.2. Антитело hMEM102 конъюгировали с vcMMAE(4-кратная нагрузка), mcMMAF(4-кратная нагрузка) и MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE, как восьмикратная нагрузка, также называется hMEM102-5088(8). Сходные конъюгации выполняли на контрольном антителе - несвязывающем CD48 антителе. По сравнению с таким же антителом, конъюгированным с vcMMAE(4) и mcMMAF(4), антитело hMEM102-5088(8) проявляло увеличенную цитотоксическую активность. В качестве отрицательного контроля в эксперимент также включена линия клеток, которая не экспрессирует CD48, LP-1.
Таблица 2
Антитело | Линкер лекарств еиного средства | Harp узка лека рств енно го сред ства | Линии клеток множественной миеломы (Кол-во СВ48-рецепторов/клеток) | ||
EJM (13500 0) | L363 (46000 0) | ММ. 1R (33600 0) | NCI-H929 (483000) | U-266 (27000 0) | LP-1 (0J |
- 27 035374
hMEM102 | vcMMAE | 4 | 8,7 | 36 | 12 | 13 | 6, 0 | >1000 |
hMEM102 | mcMMAF | 4 | 4,0 | 34 | 7,0 | He исследов | 3, 0 | >1000 |
hMEM102 | MDpr- PEG(12)glucΜΜΆΕ | S | 2,0 | 11 | 2,0 | 2,5 | 1,0 | >1000 |
hMEM102 | Ауристат ин T | S | M | 15 | 1/7 | 1,5 | 1,0 | >1000 |
hlgG | vcMMAE | 4 | >1000 | >1000 | >1000 | >1000 | >1000 | >1000 |
hlgG | mcMMAF | 4 | >1000 | >1000 | >1000 | >1000 | >1000 | >1000 |
hlgG | MDprPEG(12)gluc- MMAE | 8 | >1000 | >1000 | >1000 | >1000 | >1000 | >1000 |
hlgG | Ауристат ин T | 8 | >1000 | >1000 | >1000 | >1000 | >1000 | >1000 |
Две линии клеток оценивали на апоптическую гибель клеток, NCI-H929 и U-266. Результаты показаны на фиг. 5 и 6. В обеих линиях клеток конъюгат hMEM102- MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE (8) индуцировал апоптическую гибель клеток после 70 ч воздействия данного лекарственного средства. Случаев апоптической гибели не было обнаружено в клетках, обработанных контрольным антителом, конъюгированным с MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE (8). На этой фигуре на одном антителе конъюгированы линкер лекарственного средства, называемый 5088, и восемь линкеров лекарственного средства. На обеих фиг. 5 и 6 конъюгат hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE (8) представлен закрашенными квадратами, тогда как конъюгат контрольного антитела-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE (8) представлен незакрашенными квадратами.
Пример 5. Исследования ксенотрансплантатов множественной миеломы in vivo.
Самкам NSG (NOD scid-гамма; NOD.Cg- Prkdcscid I12rgtm1Wjl/SzJ) мышей имплантировали внутривенно 2,5 миллионов клеток NCI-H929 на животное для получения диссеминированной модели множественной миеломы. Через пять дней после имплантации опухолевых клеток n=8 мышам на группу лечения давали однократную внутрибрюшинную инъекцию ADC hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE (5088) или несвязывающий контрольный ADC hlgG-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE (5088), или hMEM102ауристатин Т (4830), или несвязывающий контрольный hIgG-ауристатин Т (4830). Исследуемые уровни доз ADC составляли 0,33 и 1,0 мг/кг. Мышей с опухолевой нагрузкой на поздней стадии умерщвляли при проявлении симптомов паралича тазовой конечности, отека головного мозга и/или состояния агонии. Как показано на фиг. 7, оба ADC создавали продолжительные полные ответы у 8/8 мышей на всех уровнях доз (однократная доза), тогда как все мыши, которым вводили дозы несвязывающего контрольного ADC, были умерщвлены из-за заболевания на сутки 60 исследования.
Самкам NSG (NOD scid-гамма; NOD.Cg-Prkdcscid I12rgtm1Wjl/SzJ) мышей имплантировали подкожно 1 миллион клеток NCI-H929 множественной миеломы на животное. Когда средний объем опухоли достигал 100 мм3, n=7 мышам на группу лечения давали однократную внутрибрюшинную инъекцию ADC hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE (5088), или несвязывающий контрольный ADC hIgG-MDprPEG(12)-gluc-MMAE (5088), или ΗΜΕΜ102^Ρ№τητήη Т (4830), или ADC hMEM102-vcMMAE (1006), или несвязывающий контрольный hIgG-vcMMAE (1006). Исследуемые уровни доз ADC составляли 0,33 и 1,0 мг/кг. Отдельных мышей умерщвляли, когда объем подкожной опухоли NCI-H929 достигал 1000 мм3. Как показано на фиг. 8, с помощью ADC hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE (5088) получали продолжительные полные ответы у всех мышей при уровнях дозы 1,0 мг/кг. При меньшем уровне дозы 0,33 мг/кг hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE (5088) получали задержку развития опухоли. ADC с vcMMAE и ауристатином Т индуцировали задержку развития опухоли только при наибольших дозах.
Самкам NSG (NOD scid-гамма; NOD.Cg-Prkdcscid I12rgtm1Wjl/SzJ) мышей имплантировали внутривенно 1 миллион клеток MM.1R на животное для получения диссеминированной модели множественной миеломы. Через пять дней после имплантации опухолевых клеток n=7 мышам на группу лечения давали однократную внутрибрюшинную инъекцию ADC hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE (5088), или несвязывающий контрольный ADC hlgG-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE (5088), или hMEM102-ауристатин Т (4830), или несвязывающий контрольный hIgG-ауристатин Т (4830). Исследуемые уровни доз ADC составляли 1,0 и 3,0 мг/кг. Мышей с опухолевой нагрузкой на поздней стадии умерщвляли при проявлении симптомов паралича тазовой конечности, отека головного мозга и/или состояния агонии. Как показано на фиг. 9, оба ADC создавали продолжительные полные ответы у мышей на всех исследованных уровнях доз (однократная доза), тогда как у мышей, которым вводили дозы несвязывающего контрольного ADC, все были умерщвлены из-за заболевания на сутки 60 исследования.
Самкам NSG (NOD scid-гамма; NOD. Cg-Prkdcscid I12rgtm1Wjl/SzJ) мышей имплантировали подкожно
- 28 035374 миллионов клеток MM.1R множественной миеломы на животное. Когда средний объем опухоли достигал 100 мм3, n=7 мышам на группу лечения давали однократную внутрибрюшинную инъекцию ADC hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE (5088), или несвязывающий контрольный ADC hIgG-MDprPEG(12)-gluc-MMAE (5088), или hMEM102-ауристатин Т (4830), или ADC hMEM102-vcMMAE (1006), или несвязывающий контрольный hIgG-vcMMAE (1006). Исследуемые уровни доз ADC составляли 0,33 и 1,0 мг/кг. Отдельных мышей умерщвляли, когда объем подкожной опухоли MM.1R достигал 1000 мм3. Как показано на фиг. 10, с помощью ADC hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE (5088) получали наиболее сильный противоопухолевый ответ и самую длительную задержку развития опухоли.
Самкам NSG (NOD scid-гамма; NOD. Cg-Prkdcscid I12rgtmlWjl/SzJ) мышей имплантировали внутривенно 5 миллионов клеток EJM на животное для получения диссеминированной модели множественной миеломы. Через пять дней после имплантации опухолевых клеток n=8 мышам на группу лечения давали однократную внутрибрюшинную инъекцию ADC hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE (5088), или несвязывающий контрольный ADC hIgG-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE (5088), или ЬМЕМ102-ауристатин Т (4830), или несвязывающий контрольный hIgG-ауристатин Т (4830). Исследуемые уровни доз ADC составляли 0,33 и 1,0 мг/кг. Мышей с опухолевой нагрузкой на поздней стадии умерщвляли при проявлении симптомов паралича тазовой конечности, отека головного мозга и/или состояния агонии. Как показано на фиг. 11, с помощью ADC hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE (5088) получали наиболее сильный противоопухолевый ответ, 6/8 полных ответов при 0,33 мг/кг и 7/8 полных ответов при 1,0 мг/кг. Все мыши, которым вводили дозы несвязывающего контрольного ADC, были умерщвлены из-за заболевания на сутки 60 исследования.
Пример 6. Эффекторная функция.
Методами для клеток-мишеней WIL2-S измеряли антителозависимую клеточную цитотоксичность (АЗКЦ) посредством высвобождения хрома-51 с использованием очищенных клеток естественных киллеров (NK) в сочетании с покрытыми антителами CD48-положительными клетками-мишенями. Опухолевые клетки WIL2-S метили хромом-51 и предварительно инкубировали в течение 30 мин с антителами (0,1 нг/мл - 10 мкг/мл). Затем клетки-мишени объединяли с эффекторными клетками NK (соотношение эффекторная клетка/мишень 10:1) и инкубировали дополнительно 4 ч при 37°С, 5% СО2. Затем в супернатанте количественно определяли хром-51 на устройстве считывания планшетов Perkin Elmer TopCount. Активность АЗКЦ измеряли в виде процента от максимального лизиса относительно обработанных 1% раствором Triton X-100 контрольных клеток-мишеней. АЗКЦ анализировали для нормальных покоящихся Т-клеток человека (все клетки) с использованием аналогичного соотношения эффекторов NK-клеток и анти-CD48 антитела или диапазона титрования ADC, описанного выше. Однако для маркирования клеточной мембраны использовали набор с клеточным линкером и красителем РКН2 с зеленой флуоресценцией (Sigma) (не хром-51). Для измерения жизнеспособности Т-клеток методом проточной цитометрии использовали краситель 7-AAD, применяя проточный цитометр LSRII (Becton Dickinson).
Комплементзависимую цитотоксичность измеряли инкубированием нормальных Т-клеток человека или опухолевых клеток WIL2-S с серийно разведенным антителом (0,02-50 мкг/мл) в культуральной среде RPMI 1640, содержащей 10% инактивированной нагреванием человеческой сыворотки АВ и 5 мкМ флуоресцентного красителя Sytox Green. Затем клетки инкубировали в течение 2 ч при 37°С, 5% СО2. Флуоресценцию от лизированных клеток измеряли на устройстве считывания планшетов Envision. Максимальный специфический лизис клеток-мишеней рассчитывали как процент относительно обработанных 1%-ным раствором Triton X-100 контрольных клеток.
Антителозависимый клеточный фагоцитоз измеряли с использованием происходящих от макрофагов моноцитов как эффекторных клеток и красителя РКН26 с красной флуоресценцией, метившего нормальные человеческие Т-клеткн (все клетки), WIL2-S или опухолевые клетки Raji. Клеткн-мишени предварительно инкубировали с серийно разбавленным антителом (0,2 нг/мл - 2 мкг/мл) в течение 30 мин, а затем промывали два раза с фосфатно-солевым буферным раствором. К клеткам-мишеням добавляли макрофаги в соотношении 4:1 в культуральной среде RPMI 1640, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки с низким содержанием IgG и инкубировали в течение 2 ч при 37°С, 5% CO2. Затем макрофаги метили конъюгированным Alexa Fluor®-488 античеловеческим CD11b-антителом мыши. Были обнаружены положительные к опухолевым клеткам макрофаги в виде событий, показывающих зеленую и красную двойную флуоресценцию на проточном цитометре FACSCalibur. Максимальную специфическую фагоцитарную активность представляли как процент положительных к опухолям макрофагов после вычитания фоновой активности несвязывающего изотипного контроля.
Результаты.
Активность АЗКЦ неконъюгированного антитела hMEM102 и ADC hMEM102-MDpr-PEG(12)-glucMMAE (5088) оценивали и сравнивали с активностью АЗКЦ САМРАТН® (алемтузумаб, анти-CD52 антитело) и ритуксимаба (анти-CD20 антитело). Как показано в табл.3, гуманизированное антитело MEM102-HALA имеет умеренную активность АЗКЦ против нормальных покоящихся Т-клеток и линии опухолевых клеток WIL2-S. Активность АЗКЦ в значительной степени снижена при конъюгации 5088, приводя к 2,7-кратному уменьшению активности АЗКЦ в Т-клетках по сравнению с голым антителом.
- 29 035374
Таблица 3
АЗКЦ
Тип клеток | Кол-во CD48- рецепто ров | Кол-во CD52- рецепто ров | Кол-во CD20- рецепто ров |
Нормаль ные Тклетки человек а (п-2) | 38900 | 115200 | |
WIL2-5 (п-2) | 359558 | 34200 | 502700 |
Максимальный % специфического лизиса клеток | |||
hMEM102- HALA | ЦМЕМ102- HALA5088 | Кампат (CD52) | Ритукси маб (CD20) |
65±3,1 | 24±4,4 | 60±3,5 | |
43+0,6 | 17+1,0 | 42+6,0 |
Результаты определения активности КЗЦ показаны в табл.4. Ни неконъюгированное антитело hMEM102, ни ADC hMEM102-MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE (5088) не проявили активность КЗЦ против нормальных покоящихся Т-клеток и опухолевых клеток WIL2-S. Как алемтузумаб, так и ритуксимаб проявили значительную активность КЗЦ против клеток-мишеней.
Таблица 4
КЗЦ
Максимальный % специфического лизиса клеток | |||||||
Тип клеток | Кол-во CD48рецепто ров | Кол-во CD52рецепто ров | Кол-во CD20рецепто ров | hMEM102 -HALA | ЬМЕМ102 -HALA- 5088 | Кампат (CD52) | Ритукси маб (CD20) |
Нормаль ные Т- клетки человек а (п=2) | 38900 | 115200 | 2,4±0,6 | 1,9±2,7 | 108±5,2 | ||
WIL2-5 (п-2) | 359558 | 34200 | 502700 | 0,9±0,2 | 1,4±0,9 | 6б±1,4 |
Результаты определения АЗКФ показаны в табл.5. Как неконъюгированное антитело hMEM102, так и ADC hMEM102-MDpr-PEG (12)-gluc-MMAE (5088) проявили умеренную активность АЗКФ против нормальных покоящихся Т-клеток или линий опухолевых клеток WIL2-S и Raji, согласующуюся с уровнями, которые наблюдали для кампата и ритуксимаба.
Таблица 5
АЗКФ
Максимальный % специфического лизиса клеток | |||||||
Тип клеток | Кол-во CD48рецепто ров | Кол-во CD52рецепто ров | Кол-во CD20ренепто ров | ИМЕМ102 -HALA | hMEM102 -ΗΆΙ1Ά- 5088 | Кампат (CD52) | Ритукси маб (CD20) |
Нормаль ные Тклетки человек а (п=2) | 38900 | 115200 | 56 | 54 | 57 | ||
WIL2-5 (п-2) | 359558 | 34200 | 502700 | 62 | 60 | 56 | |
Raji | 249023 (24%) | 29200 | 394100 | 37 | 34 | 57 |
- 30 035374
Понятно, что примеры и варианты реализации изобретения, описанные в данном документе, предназначены только для иллюстративных целей и специалистами в данной области могут быть предложены их различные модификации или изменения, которые должны быть включены в сущность и сферу действия данной заявки и объем прилагаемой формулы изобретения. Все публикации, патенты и заявки на патенты, цитируемые в данном документе, тем самым включены в полном объеме путем ссылки во всех смыслах.
SEQ ID 30:1, hMEM102 НА - Вариабельный участок тяжелой цепи
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTFTGEPS
YGNVFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARRHGNGNVFDSWGQGTLVTVSS
SEQ ID 30:2, hMEM102 LA - Вариабельный участок легкой цепи
EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSIGSNIHWYQQKPDQSPKLLIKYTSESISGVP
SRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQSNSWPLTFGGGTKVEIKR
SEQ ID 30:3, CDR1 тяжелой цепи
DFGMN
SEQ ID 30:4, CDR2 тяжелой цепи
WINTFTGEPSYGNVFKG
SEQ ID 30:5, CDR3 тяжелой цепи
RHGNGNVFDS
SEQ ID 30:6, CDR1 легкой цепи
RASQSIG3NIH
SEQ ID 30:7, CDR2 легкой цепи
YTSESIS
SEQ ID 30:8, CDR3 легкой цепи
QQSNSWPLT
SEQ ID 30:9, hMEM102 НА Н-цепь G1
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTFTGEPS
YGNVFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARRHGNGNVFDSWGQGTLVTVSSASTK
GPSVFPLAPSSK3TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV
VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDW LNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPEN3YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSL SLSPGK
SEQ ID 30:10, hMEM102 LA L-цепь
EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSIGSNIHWYQQKPDQSPKLLIKYTSESISGVP
SRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQSNSWPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE
QLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYE KHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:11, Константный участок тяжелой цепи природного происхождения astkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqs sglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpSv fIfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvs vltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltcl vkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskitvdksrwqqgnvisesvmheal hnhytqks1s1spg
SEQ ID NO:12, Константный участок легкой цепи tvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqd skdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
Claims (16)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Гуманизированное антитело, которое специфически связывается с белком CD48 человека, содержащее последовательности CDR тяжелой цепи SEQ ID NO:3-5 и последовательности CDR легкой цепи SEQ ID NO:6-8, и при этом данное антитело проявляет по меньшей мере в два раза более высокую аффинность связывания с белком CD48 человека по сравнению с мышиным антителом, которое специфически связывается с белком CD48 человека, и содержит последовательности CDR тяжелой цепи SEQ ID NO:3-5 и последовательности CDR легкой цепи SEQ ID NO:6-8, содержащее вариабельный участок тяжелой цепи с последовательностью SEQ ID NO:1 и вариабельный участок легкой цепи с последовательностью SEQ ID NO:2.
- 2. Антитело по п.1, конъюгированное с цитотоксическим лекарственным средством посредством линкера, причем лекарственное средство-линкер имеет формулу- 31 035374причем цитотоксическое средство может быть представлено его фармацевтически приемлемой солью, где Z представляет собой органический фрагмент, содержащий реакционноспособный сайт, способный вступать в реакцию с функциональной группой на антителе, образуя с ней ковалентную связь, n находится в диапазоне от 8 до 36,R21 представляет собой кэппирующую единицу фрагмента полиэтиленгликоля.
- 3. Антитело по п.2, отличающееся тем, что лекарственное средство-линкер имеет формулуrPR причем цитотоксическое средство может быть представлено его фармацевтически приемлемой солью, где n находится в диапазоне от 8 до 36,Rpr представляет собой атом водорода или защитную группу,R21 представляет собой кэппирующую единицу фрагмента полиэтиленгликоля.
- 4. Антитело по п.2, отличающееся тем, что лекарственное средство-линкер имеет формулупричем цитотоксическое средство может быть представлено его фармацевтически приемлемой солью, где n находится в диапазоне от 8 до 36,R21 представляет собой кэппирующую единицу фрагмента полиэтиленгликоля.
- 5. Антитело по п.3 или 4, отличающееся тем, что n находится в диапазоне от 8 до 14.
- 6. Антитело по п.3 или 4, отличающееся тем, что n находится в диапазоне от 10 до 12.
- 7. Антитело по п.3 или 4, отличающееся тем, что n равно 12.
- 8. Антитело любому из пп.3-7, отличающееся тем, что R21 представляет собой -СН3 или -СН2СН2СО2Н.
- 9. Конъюгат анти-CD48 антитело-лекарственное средство, имеющий формулупричем цитотоксическое средство может быть представлено его фармацевтически приемлемой солью, где Ab представляет собой анти-CD48 антитело по п.1 или 8, где Z представляет собой органический фрагмент, соединяющий антитело и лекарственное средство посредством ковалентных связей, n находится в диапазоне от 8 до 36,- 32 035374R21 представляет собой кэппирующую единицу фрагмента полиэтиленгликоля, и р составляет от 1 до 16, или имеющий формулупричем цитотоксическое средство может быть представлено его фармацевтически приемлемой солью, или имеющий формулупричем цитотоксическое средство может быть представлено его фармацевтически приемлемой солью, где RPR представляет собой атом водорода или защитную группу, или имеющий формулупричем цитотоксическое средство может быть представлено его фармацевтически приемлемой солью, или имеющий формулупричем цитотоксическое средство может быть представлено его фармацевтически приемлемой солью, или имеющий формулу- 33 035374 причем цитотоксическое средство может быть представлено его фармацевтически приемлемой солью, где RPR представляет собой атом водорода или защитную группу.
- 10. Конъюгат анти-CD48 антитело-лекарственное средство по п.9, отличающееся тем, что n находится в диапазоне от 8 до 14.
- 11. Конъюгат анти-CD48 антитело-лекарственное средство по п.9, отличающееся тем, что n находится в диапазоне от 10 до 12.
- 12. Конъюгат анти-CD48 антитело-лекарственное средство по п.9, отличающееся тем, что n равно 12.
- 13. Конъюгат анти-CD48 антитело-лекарственное средство по п.10, отличающееся тем, что R21 представляет собой -СН3 или -СН2СН2СО2Н.
- 14. Композиция, содержащая конъюгат антитело-лекарственное средство по любому из пп.2-13, для лечения злокачественного новообразования, экспрессирующего CD48, где среднее значение нагрузки лекарственным средством в композиции равно 8 и преобладающее значение нагрузки лекарственным средством равно 8, и фармацевтически приемлемый носитель.
- 15. Способ лечения пациента, страдающего злокачественным новообразованием, экспрессирующим CD48, включающий стадию введения пациенту композиции по п.14.
- 16. Выделенная нуклеиновая кислота, содержащая последовательность, кодирующую антитело по п.1.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201562134981P | 2015-03-18 | 2015-03-18 | |
PCT/US2016/022943 WO2016149535A1 (en) | 2015-03-18 | 2016-03-17 | Cd48 antibodies and conjugates thereof |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA201792055A1 EA201792055A1 (ru) | 2018-01-31 |
EA035374B1 true EA035374B1 (ru) | 2020-06-03 |
Family
ID=56919489
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA201792055A EA035374B1 (ru) | 2015-03-18 | 2016-03-17 | Антитела против cd48 и их конъюгаты |
EA201992756A EA201992756A3 (ru) | 2015-03-18 | 2016-03-17 | Антитела против cd48 и их конъюгаты |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA201992756A EA201992756A3 (ru) | 2015-03-18 | 2016-03-17 | Антитела против cd48 и их конъюгаты |
Country Status (17)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US10722592B2 (ru) |
EP (2) | EP3662933A1 (ru) |
JP (2) | JP6892826B2 (ru) |
KR (1) | KR20170128256A (ru) |
CN (1) | CN107530422B (ru) |
AU (1) | AU2016232839B2 (ru) |
BR (1) | BR112017019617A2 (ru) |
CA (1) | CA2976740A1 (ru) |
DK (1) | DK3270965T3 (ru) |
EA (2) | EA035374B1 (ru) |
ES (1) | ES2795818T3 (ru) |
HK (1) | HK1248538A1 (ru) |
IL (1) | IL254027B (ru) |
MX (1) | MX2017011432A (ru) |
SG (1) | SG11201706786UA (ru) |
WO (1) | WO2016149535A1 (ru) |
ZA (1) | ZA201705935B (ru) |
Families Citing this family (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP7073266B2 (ja) | 2016-03-25 | 2022-05-23 | シージェン インコーポレイテッド | Peg化薬物リンカー及びその中間体を調製するためのプロセス |
IL269398B2 (en) | 2017-03-24 | 2024-05-01 | Seagen Inc | A process for the preparation of glucuronide-drug binders and their intermediates |
BR112020023623A2 (pt) | 2018-05-29 | 2021-02-17 | Intocell, Inc. | derivados de benzodiazepina e seus usos |
AU2020219732A1 (en) * | 2019-02-05 | 2021-08-05 | Seagen Inc. | Anti-CD228 antibodies and antibody-drug conjugates |
CA3155634A1 (en) | 2019-10-04 | 2021-04-08 | Seagen Inc. | Anti-pd-l1 antibodies and antibody-drug conjugates |
WO2021067820A1 (en) | 2019-10-04 | 2021-04-08 | Seagen Inc. | Formulation of antibody-drug conjugate |
JP2022550851A (ja) | 2019-10-04 | 2022-12-05 | シージェン インコーポレイテッド | カンプトテシンペプチドコンジュゲート |
BR112022020332A2 (pt) | 2020-04-10 | 2022-12-13 | Seagen Inc | Composto conjugado anticorpo-droga, composição, método de tratamento de câncer e de um distúrbio autoimune |
EP4251648A2 (en) | 2020-11-24 | 2023-10-04 | Novartis AG | Anti-cd48 antibodies, antibody drug conjugates, and uses thereof |
KR20230138444A (ko) * | 2020-11-24 | 2023-10-05 | 노파르티스 아게 | Mcl-1 억제제 항체-약물 접합체 및 사용 방법 |
BR112023018676A2 (pt) | 2021-03-18 | 2023-10-10 | Seagen Inc | Conjugado anticorpo-fármaco, composição farmacêutica, métodos de tratamento de uma doença ou condição e de um câncer, e, composição de conjugado ligante-fármaco |
WO2022251850A1 (en) | 2021-05-28 | 2022-12-01 | Seagen Inc. | Anthracycline antibody conjugates |
TW202400137A (zh) | 2022-03-17 | 2024-01-01 | 美商思進公司 | 喜樹鹼偶聯物 |
WO2024129756A1 (en) | 2022-12-13 | 2024-06-20 | Seagen Inc. | Site-specific engineered cysteine antibody drug conjugates |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050260213A1 (en) * | 2004-04-16 | 2005-11-24 | Scott Koenig | Fcgamma-RIIB-specific antibodies and methods of use thereof |
US20090280116A1 (en) * | 2007-11-13 | 2009-11-12 | Cogenesys, Inc. | Humanized antibodies against tl1a |
US20120076790A1 (en) * | 2010-09-27 | 2012-03-29 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-cd48 antibodies and uses thereof |
US20130266579A1 (en) * | 2012-03-08 | 2013-10-10 | Ge Wei | Conditionally active anti-epidermal growth factor receptor antibodies and methods of use thereof |
US20130333061A1 (en) * | 2008-02-05 | 2013-12-12 | Wei Wu | Isolated novel nucleic acid and protein molecules from soy and methods of using those molecules to generate transgenic plants with enhanced agronomic traits |
Family Cites Families (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US5225539A (en) | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
DE3883899T3 (de) | 1987-03-18 | 1999-04-22 | Sb2, Inc., Danville, Calif. | Geänderte antikörper. |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
US5859205A (en) | 1989-12-21 | 1999-01-12 | Celltech Limited | Humanised antibodies |
DK0590058T3 (da) | 1991-06-14 | 2004-03-29 | Genentech Inc | Humaniseret heregulin-antistof |
JP2000509015A (ja) * | 1996-03-27 | 2000-07-18 | シーアールシー フォー バイオファーマシューティカル リサーチ ピーティーワイ.リミテッド | T細胞及びb細胞リンパ腫及び白血病の治療のためのcd48に対する抗体の使用 |
US5834597A (en) | 1996-05-20 | 1998-11-10 | Protein Design Labs, Inc. | Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same |
MXPA05000511A (es) | 2001-07-12 | 2005-09-30 | Jefferson Foote | Anticuepros super humanizados. |
DK1545613T3 (da) | 2002-07-31 | 2011-11-14 | Seattle Genetics Inc | Auristatinkonjugater og deres anvendelse til behandling af cancer, en autoimmun sygdom eller en infektiøs sygdom |
KR101520209B1 (ko) | 2003-11-06 | 2015-05-13 | 시애틀 지네틱스, 인크. | 리간드에 접합될 수 있는 모노메틸발린 화합물 |
US20070178072A1 (en) | 2004-03-31 | 2007-08-02 | Kirin Beer Kabushiki Kaisha | Method for inducing differentiation of regulatory t cells usinggip-anchored protein agonist and pharmaceutical composition therefor ( as amended |
US8871720B2 (en) | 2005-07-07 | 2014-10-28 | Seattle Genetics, Inc. | Monomethylvaline compounds having phenylalanine carboxy modifications at the C-terminus |
EP2722051B1 (en) | 2005-07-07 | 2018-11-07 | Seattle Genetics, Inc. | Monomethylvaline compounds having phenylalanine side-chain modifications at the C-terminus |
CA2616005C (en) * | 2005-07-18 | 2015-09-22 | Seattle Genetics, Inc. | Beta-glucuronide-linker drug conjugates |
PT2532681E (pt) * | 2005-12-20 | 2014-12-23 | Sbi Biotech Co Ltd | Anticorpos anti-ilt7 |
PT2211904T (pt) | 2007-10-19 | 2016-11-02 | Seattle Genetics Inc | Agentes de ligação a cd19 e seus usos |
US9097717B2 (en) | 2009-04-10 | 2015-08-04 | Osaka University | Methods of killing myeloma stem and precursor cells by administering anti-CD48 antibodies |
EP2287197A1 (en) * | 2009-08-21 | 2011-02-23 | Pierre Fabre Medicament | Anti-cMET antibody and its use for the detection and the diagnosis of cancer |
CN103596974B (zh) * | 2011-04-15 | 2016-08-31 | 卡姆普根有限公司 | 多肽和多核苷酸及其用于治疗免疫相关失调和癌症的用途 |
NZ724892A (en) | 2012-05-15 | 2018-04-27 | Seattle Genetics Inc | Self-stabilizing linker conjugates |
NZ717668A (en) | 2013-10-15 | 2024-03-22 | Seagen Inc | Pegylated drug-linkers for improved ligand-drug conjugate pharmacokinetics |
-
2016
- 2016-03-17 KR KR1020177024226A patent/KR20170128256A/ko not_active Application Discontinuation
- 2016-03-17 CN CN201680013161.1A patent/CN107530422B/zh active Active
- 2016-03-17 CA CA2976740A patent/CA2976740A1/en not_active Abandoned
- 2016-03-17 ES ES16765773T patent/ES2795818T3/es active Active
- 2016-03-17 MX MX2017011432A patent/MX2017011432A/es unknown
- 2016-03-17 JP JP2017548953A patent/JP6892826B2/ja active Active
- 2016-03-17 EA EA201792055A patent/EA035374B1/ru unknown
- 2016-03-17 BR BR112017019617-4A patent/BR112017019617A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2016-03-17 WO PCT/US2016/022943 patent/WO2016149535A1/en active Application Filing
- 2016-03-17 EA EA201992756A patent/EA201992756A3/ru unknown
- 2016-03-17 EP EP19219476.9A patent/EP3662933A1/en not_active Withdrawn
- 2016-03-17 DK DK16765773.3T patent/DK3270965T3/da active
- 2016-03-17 AU AU2016232839A patent/AU2016232839B2/en not_active Ceased
- 2016-03-17 SG SG11201706786UA patent/SG11201706786UA/en unknown
- 2016-03-17 US US15/557,910 patent/US10722592B2/en active Active
- 2016-03-17 EP EP16765773.3A patent/EP3270965B1/en active Active
-
2017
- 2017-08-16 IL IL254027A patent/IL254027B/en active IP Right Grant
- 2017-08-31 ZA ZA2017/05935A patent/ZA201705935B/en unknown
-
2018
- 2018-06-26 HK HK18108175.0A patent/HK1248538A1/zh unknown
-
2020
- 2020-05-26 JP JP2020091335A patent/JP2020141700A/ja active Pending
- 2020-06-04 US US16/892,529 patent/US20200289661A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050260213A1 (en) * | 2004-04-16 | 2005-11-24 | Scott Koenig | Fcgamma-RIIB-specific antibodies and methods of use thereof |
US20090280116A1 (en) * | 2007-11-13 | 2009-11-12 | Cogenesys, Inc. | Humanized antibodies against tl1a |
US20130333061A1 (en) * | 2008-02-05 | 2013-12-12 | Wei Wu | Isolated novel nucleic acid and protein molecules from soy and methods of using those molecules to generate transgenic plants with enhanced agronomic traits |
US20120076790A1 (en) * | 2010-09-27 | 2012-03-29 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-cd48 antibodies and uses thereof |
US20130266579A1 (en) * | 2012-03-08 | 2013-10-10 | Ge Wei | Conditionally active anti-epidermal growth factor receptor antibodies and methods of use thereof |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2976740A1 (en) | 2016-09-22 |
EA201992756A2 (ru) | 2020-03-31 |
KR20170128256A (ko) | 2017-11-22 |
JP6892826B2 (ja) | 2021-06-23 |
IL254027B (en) | 2021-05-31 |
ZA201705935B (en) | 2021-01-27 |
EP3270965A1 (en) | 2018-01-24 |
CN107530422B (zh) | 2021-09-21 |
AU2016232839A1 (en) | 2017-08-31 |
SG11201706786UA (en) | 2017-09-28 |
HK1248538A1 (zh) | 2018-10-19 |
CN107530422A (zh) | 2018-01-02 |
JP2018509908A (ja) | 2018-04-12 |
EP3270965B1 (en) | 2020-05-06 |
EA201992756A3 (ru) | 2020-06-30 |
EA201792055A1 (ru) | 2018-01-31 |
EP3270965A4 (en) | 2018-09-05 |
US20200289661A1 (en) | 2020-09-17 |
DK3270965T3 (da) | 2020-06-08 |
IL254027A0 (en) | 2017-10-31 |
US20180092984A1 (en) | 2018-04-05 |
MX2017011432A (es) | 2017-11-10 |
US10722592B2 (en) | 2020-07-28 |
ES2795818T3 (es) | 2020-11-24 |
AU2016232839B2 (en) | 2021-02-25 |
EP3662933A1 (en) | 2020-06-10 |
JP2020141700A (ja) | 2020-09-10 |
BR112017019617A2 (pt) | 2018-05-22 |
WO2016149535A1 (en) | 2016-09-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20200289661A1 (en) | Cd48 antibodies and conjugates thereof | |
US20210128742A1 (en) | CD123 Antibodies and Conjugates Thereof | |
CA3082160C (en) | Anti-mesothelin antibody and antibody drug conjugate thereof | |
JP7402807B2 (ja) | グリピカン3抗体およびそのコンジュゲート | |
JP2023082096A (ja) | エリブリンをベースとする抗体-薬物コンジュゲート及び使用方法 | |
JP7390315B2 (ja) | スプライシング調節薬抗体-薬物コンジュゲート及びその使用方法 | |
US20230173093A1 (en) | Charge variant linkers | |
TW202400137A (zh) | 喜樹鹼偶聯物 | |
CN113121639A (zh) | 澳瑞他汀类似物及其偶联物、其制备方法及其应用 | |
KR20240082348A (ko) | 항체, 이의 항체-약물 접합체 및 이의 용도 | |
CN114652853A (zh) | 抗il-4r抗体-药物偶联物及医药用途 | |
EA044092B1 (ru) | Анти-ntb-a антитела и терапевтические композиции, их содержащие |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
TC4A | Change in name of a patent proprietor in a eurasian patent |