EA034723B1 - Консервант для сена и способы консервации сена - Google Patents
Консервант для сена и способы консервации сена Download PDFInfo
- Publication number
- EA034723B1 EA034723B1 EA201791141A EA201791141A EA034723B1 EA 034723 B1 EA034723 B1 EA 034723B1 EA 201791141 A EA201791141 A EA 201791141A EA 201791141 A EA201791141 A EA 201791141A EA 034723 B1 EA034723 B1 EA 034723B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- hay
- preservative
- bales
- pichia
- yeast
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N3/00—Preservation of plants or parts thereof, e.g. inhibiting evaporation, improvement of the appearance of leaves or protection against physical influences such as UV radiation using chemical compositions; Grafting wax
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/14—Pretreatment of feeding-stuffs with enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K30/00—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
- C12N9/2442—Chitinase (3.2.1.14)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01014—Chitinase (3.2.1.14)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Physiology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Food Preservation Except Freezing, Refrigeration, And Drying (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Beans For Foods Or Fodder (AREA)
- Treatment Of Sludge (AREA)
- Storage Of Harvested Produce (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Предложен способ обработки сена для предотвращения и/или уменьшения порчи сена с высоким содержанием влаги в результате теплового воздействия, а также для его консервации, причем этот способ включает добавление в сено консерванта для сена, содержащего эффективное для консервации сена и уменьшения его нагревания количество по меньшей мере одного фермента с хитиназной активностью либо отдельно, либо в комбинации с эффективным для консервации сена и уменьшения его нагревания количеством дрожжей рода Pichia или бактерий рода Pediococcus. Также предложен способ обработки сена для предотвращения и/или уменьшения порчи сена с высоким содержанием влаги в результате теплового воздействия, а также для его сохранения, где способ включает добавление в сено консерванта для сена, содержащего эффективное для консервации сена и уменьшения его нагревания количество дрожжей рода Pichia.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее описание относится к консерванту для сена. В частности, к консерванту для сена, предназначенному для консервации сена с высоким содержанием влаги, и к способу использования консерванта для сена для консервации предназначенного для хранения сена с высоким содержанием влаги.
Уровень техники
Провяливание сена до оптимального уровня влажности на поле перед прессованием в тюки было бы оптимальным для уменьшения потери сухого вещества (СВ), роста плесени и дыхания растительных клеток во время прессования в тюки и хранения сена. Однако этот процесс приводит к значительным потерям питательных веществ из-за продолжающегося дыхания растений, разрушения листьев от механических повреждений и из-за выщелачивания во время дождя. Признание этого факта, а также непредсказуемые погодные условия заставляют многих производителей сена упаковывать сено повышенной, относительно оптимальной влажности (20-30%), чтобы свести к минимуму риск порчи от дождя и потери листьев от механических повреждений. Однако эта практика приводит к потерям, вызванным активностью дрожжей и плесени, а иногда и бактерий и, как результат, нагреванием сена, и к низкой питательной ценности сена к моменту его использования в качестве корма для животных.
Одним из простых подходов является распыление на влажное сено во время его хранения органической кислоты, например пропионовой. Несмотря на то, что органические кислоты, как правило, эффективны в предотвращении размножения грибов в сыроватом сене, более высокие уровни нанесения, увеличенное поле, затраты на обработку, а также экологические проблемы приводят к тому, что большинство производителей сена неохотно пользуются такими методами.
Хотя согласно результатам проведенных исследований органические кислоты, используемые для консервации сена, спрессованного в тюки при содержании влаги, выше оптимального уровня, могут быть потенциально заменены инокулянтами на основе бактерий (Baah et al., Asia-Aust., J. Anim. Sci., 18: 649-660, 2005), результаты других исследований силоса и сенажа были противоречивыми (Zahiroddini et al., Asia-Aust., J. 19: 10: 1429-1436, 2006, Muck, Trans. ASAE 47: 1011-1016, 2004). Существует множество свидетельств того, что выявленное несоответствие в ответах на инокулянты обусловлено взаимодействием между организмами разных видов в отдельных инокулянтах и популяциями эпифитных микробов (бактерий, дрожжей и плесени), содержащихся в сене до инокуляции.
Было бы желательно предоставить улучшенный консервант для сена, в частности для предотвращения и уменьшения порчи сена с высоким содержанием влаги во время его хранения в результате теплового воздействия, а также для его консервации.
Сущность изобретения
Настоящее раскрытие предоставляет способ сохранения качества сена с высоким содержанием влаги во время его хранения. Способ основан на использовании консерванта для сена, способного предотвращать и/или уменьшать порчу сена с высоким содержанием влаги во время его хранения в результате теплового воздействия. Используемый консервант для сена предотвращает и/или уменьшает нагревание сена с высоким содержанием влаги настолько же эффективно или лучше, чем органические кислоты.
В одном из аспектов предложен способ обработки сена для предотвращения и/или уменьшения порчи сена с высоким содержанием влаги в результате теплового воздействия, а также для его консервации, причем этот способ включает добавление в сено консерванта для сена, содержащего эффективное для консервации сена и уменьшения его нагревания количество по меньшей мере одного фермента с хитиназной активностью либо отдельно, либо в комбинации с эффективным для консервации сена и уменьшения их нагревания количеством дрожжей рода Pichia или бактерий рода Pediococcus. В другом аспекте предложен способ обработки сена для предотвращения и/или уменьшения порчи сена с высоким содержанием влаги в результате теплового воздействия, а также для его консервации, причем этот способ включает добавление в сено консерванта для сена, содержащего эффективное для консервации сена и уменьшения его нагревания количество по меньшей мере одного фермента с хитиназной активностью.
В другом аспекте предложен способ обработки сена для предотвращения и/или уменьшения порчи сена с высоким содержанием влаги в результате теплового воздействия, а также для его консервации, причем этот способ включает добавление в сено консерванта для сена, содержащего эффективное для консервации сена и уменьшения его нагревания количество по меньшей мере одного фермента с хитиназной активностью в комбинации с эффективным для консервации сена и уменьшения их нагревания количеством дрожжей рода Pichia.
В другом аспекте предложен способ обработки сена для предотвращения и/или уменьшения порчи сена с высоким содержанием влаги в результате теплового воздействия, а также для его консервации, причем этот способ включает добавление в сено консерванта для сена, содержащего эффективное для консервации сена и уменьшения его нагревания количество по меньшей мере одного фермента с хитиназной активностью в комбинации с эффективным для консервации сена и уменьшения их нагревания количеством бактерий рода Pediococcus.
В другом аспекте предложен способ обработки сена для предотвращения и/или уменьшения порчи сена с высоким содержанием влаги в результате теплового воздействия, а также для его консервации, причем этот способ включает добавление в сено консерванта для сена, содержащего эффективное для
- 1 034723 консервации сена и уменьшения его нагревания количество дрожжей рода Pichia.
В следующем аспекте представлен консервант для сена, содержащий эффективное для консервации сена и уменьшения его нагревания количества по меньшей мере одного фермента с хитиназной активностью.
В еще одном дополнительном аспекте предложен консервант для сена, содержащий эффективное для консервации сена и уменьшения его нагревания количество по меньшей мере одного фермента с хитиназной активностью в комбинации с эффективным для консервации сена и уменьшения его нагревания количеством дрожжей рода Pichia или бактерии рода Pediococcus.
В другом дополнительном аспекте предложен консервант для сена, содержащий эффективное для консервации сена и уменьшения его нагревания количество по меньшей мере одного фермента с хитиназной активностью в комбинации с эффективным для консервации сена и уменьшения его нагревания количеством дрожжей рода Pichia.
В другом аспекте предложен консервант для сена, содержащий эффективное для консервации сена и уменьшения его нагревания количество по меньшей мере одного фермента с хитиназной активностью в комбинации с эффективным для консервации сена и уменьшения его нагревания количеством бактерии рода Pediococcus.
В еще одном аспекте все вышеупомянутые аспекты могут дополнительно содержать по меньшей мере один фермент, имеющий пектин-лиазную активность, глюканазную активность или их смесь.
В другом аспекте предоставляется консервант для сена, содержащий эффективное для консервации сена и уменьшения его нагревания количество дрожжей рода Pichia.
В еще одном аспекте предоставляется сено с высоким содержанием влаги, содержащее либо только эффективное для консервации сена и уменьшения его нагревания количество дрожжей по меньшей мере одного фермента с хитиназной активностью, либо в комбинации с эффективным для консервации сена и уменьшения его нагревания количеством дрожжей рода Pichia или бактерий рода Pediococcus. Сено с высоким содержанием влаги может дополнительно содержать по меньшей мере один фермент, имеющий пектин-лиазную активность, глюканазную активность или их смесь.
В другом аспекте предоставляется сено с высоким содержанием влаги, содержащее эффективное для консервации сена и уменьшения его нагревания количество дрожжей рода Pichia.
Краткое описание чертежей
После приведенного в общем виде описания сущности изобретения далее дается описание сопроводительных чертежей, иллюстрирующих предпочтительный вариант осуществления, где на фиг. 1 показана средненедельная температура хранения тюков сена люцерны, обработанных дрожжами рода Pichia (Р. anomala) или по меньшей мере одним ферментом с хитиназной активностью (фермент), по сравнению с тюками сена люцерны, обработанных и не обработанных пропионовой кислотой (проп. кислота);
на фиг. 2 показана среднесуточная температура во время хранения тюков сена люцерны, обработанных по меньшей мере одним ферментом с хитиназной активностью в комбинации с эффективным для консервации сена и уменьшения его нагревания количеством дрожжей рода Pichia (PichChit) или бактерий рода Pediococcus (Pedio ре), по сравнению с тюками сена люцерны, обработанными и не обработанными пропионовой кислотой (проп. кислота);
на фиг. 3 приведена диаграмма сравнения времени (в мин), в течение которого во время хранения (2012) тюки сена находились при температуре выше 40°C, для тюков люцерны, обработанных по меньшей мере одним ферментом с хитиназной активностью в комбинации с дрожжами рода Pichia (Pichia+ферм.) или бактериями рода Pediociccus (Pedio+ферм.), и тюков сена люцерны, обработанных пропионовой кислотой (проп. кислота) и не обработанных пропионовой кислотой (контроль); и на фиг. 4 приведена диаграмма сравнения времени (в мин), в течение которого во время хранения (2013) тюки сена находились при температуре выше 40°C, для тюков сена люцерны, обработанных по меньшей мере одним ферментом с хитиназной активностью в комбинации с дрожжами рода Pichia (Pichia+ферм.) или бактериями рода Pediociccus (Pedio+ферм.), и тюков сена люцерны, обработанных только дрожжами рода Pichia (Pichia), бактериями рода Pediociccularone (Pedio), пропионовой кислотой (проп. кислота) и не обработанные пропионовой кислотой (контроль).
Подробное описание изобретения
Одной из проблем, возникающих в случае сена с высоким содержанием влаги, является его порча и гниение, вызываемые спонтанным выделением тепла. Такие нагретые тюки обычно имеют более бледный цвет, меньшую питательную ценность и более заметную плесень. Один из подходов заключается в распылении на сыроватое сено во время его хранения органической кислоты, такой как, например, пропионовая кислота. Несмотря на то, что органические кислоты, как правило, эффективны в предотвращении размножения грибов во влажном сене, более высокие уровни нанесения, увеличенное поле, затраты на обработку, а также экологические проблемы приводят к тому, что большинство производителей сена неохотно пользуются такими методами.
Хотя согласно результатам проведенных исследований, органические кислоты, используемые для консервации сена, спрессованного в тюки при содержании влаги, выше оптимального уровня, могут
- 2 034723 быть потенциально заменены инокулянтами на основе бактерий, результаты других исследований силоса и сенажа были противоречивыми. Существует множество свидетельств того, что выявленное несоответствие в ответах на инокулянты обусловлено взаимодействием между организмами разных видов в отдельных инокулянтах и популяциями эпифитных микробов (бактерий, дрожжей и плесени), содержащихся в сене до инокуляции.
В самом широком аспекте настоящее раскрытие предоставляет способ сохранения качества сена и предотвращения или уменьшения порчи сена с высоким содержанием влаги во время его хранения в результате теплового воздействия, причем способ включает обработку свежего сена консервантом для сена в аэробных условиях.
Консервант для сена содержит эффективное для консервации сена и уменьшения его нагревания количество по меньшей мере одного фермента с хитиназой активностью. Неожиданно было обнаружено, что консервирующее действие консерванта для сена и его способность предотвращать и/или уменьшать порчу сена с высоким содержанием влаги во время его хранения в результате теплового воздействия еще более усиливается в случае комбинирования по меньшей мере одного фермента с хитиназной активностью с дрожжами рода Pichia или бактериями рода Pediococcus. Когда по меньшей мере один фермент с хитиназной активностью объединен с дрожжами рода Pichia или бактериями рода Pediococcus, то, как видно на фиг. 4, температура сена с высоким содержанием влаги значительно уменьшается по сравнению с использованием каждого компонента комбинации по отдельности.
Альтернативно, консервант для сена может содержать только дрожжи рода Pichia в количестве, эффективном для консервации сена и уменьшения его нагревания.
Используемый в настоящем описании термин эффективное для консервации сена и уменьшения его нагревания количество относится к количеству, которое является, по меньшей мере, достаточным для сохранения качества сена. Таким образом, количество является, по меньшей мере, достаточным для предотвращения и/или уменьшения порчи сена с высоким содержанием влаги в результате теплового воздействия, а также для его консервации.
Используемый в настоящем описании термин сено следует понимать как относящийся ко всем формам сена, поскольку этот термин обычно используется в сельском хозяйстве. Сено чаще всего состоит из люцерны, травы или смесей люцерны и травы, собранной при целевом уровне влаги ниже 20%.
Способ обработки сена для предотвращения и/или уменьшения порчи сена с высоким содержанием влаги в результате теплового воздействия, а также для его консервации включает добавление в сено консерванта для сена, содержащего эффективное для консервации сена и уменьшения его нагревания количество по меньшей мере одного фермента с хитиназной активностью. Как упоминалось ранее, по меньшей мере один фермент с хитиназной активностью может быть объединен с дрожжами рода Pichia или бактериями рода Pediococcus.
В одном из вариантов осуществления способ обработки сена для предотвращения и/или уменьшения порчи сена с высоким содержанием влаги в результате теплового воздействия, а также для его консервации включает добавление в сено консерванта для сена, содержащего эффективное для консервации сена и уменьшения его нагревания количество по меньшей мере одного фермента с хитиназной активностью в комбинации с эффективным для консервации сена и уменьшения его нагревания количеством дрожжей рода Pichia.
В другом варианте осуществления способ обработки сена для предотвращения и/или уменьшения порчи сена с высоким содержанием влаги в результате теплового воздействия, а также для его консервации включает добавление в сено консерванта для сена, содержащего эффективное для консервации сена и уменьшения его нагревания количество по меньшей мере одного фермента с хитиназной активностью в комбинации с эффективным для консервации сена и уменьшения их нагревания количеством бактерий рода Pediococcus.
Альтернативно, способ обработки сена для предотвращения и/или уменьшения порчи сена с высоким содержанием влаги в результате теплового воздействия, а также для его консервации включает добавление в сено консерванта для сена, содержащего эффективное для консервации сена и уменьшения его нагревания количество только дрожжей рода Pichia.
Дрожжи рода Pichia включают, без ограничения, Pichia anomala sp. В одном из вариантов осуществления дрожжи рода Pichia могут представлять собой Pichia anomala sp., имеющие все отличительные характеристики штамма Pichia anomala с номером доступа DBVPG 3003. Понятно, что речь идет о любом изоляте, имеющем отличительные признаки штамма Pichia anomala с номером доступа DBVPG 3003, включая его субкультуры и варианты, которые имеют указанные отличительные признаки и активность. Штамм Pichia anomala с номером доступа DBVPG 3003 депонирован в промышленной коллекции дрожжей DBVPG в Biologia Vegetale e Biotecnologie Agroambientalie Zootecniche, Sezione di Microbiologia Agroalimentare ed Ambientale, http//www.agr.unipg.it/dbvpg, Университет Перуджии, Италия.
Бактерии рода Pediococcus включают, без ограничения, Pediococcus pentosaceus sp. В варианте осуществления бактерии рода Pediococcus могут представлять собой Pediococcus pentosaceus sp, имеющие все отличительные признаки штамма Pediococcus pentosaceus BTC328 (с номером доступа NCIMB 12674). В другом варианте осуществления бактерии рода Pediococcus могут представлять собой Pedio- 3 034723 coccus pentosaceus sp, имеющие все отличительные характеристики штамма Pediococcus pentosaceus ВТС401 (с номером доступа NCIMB 12675). Понятно, что речь идет о любом изоляте, имеющем отличительные характеристики штамма Pediococcus pentosaceus BTC328 или ВТС401, включая их субкультуры и варианты, которые имеют указанные отличительные признаки и активность, как раскрыто в настоящем описании. Штаммы Pediococcus pentosaceus с номерами доступа NCIMB 12674 и 12675 были депонированы в Национальной коллекции промышленных, пищевых и морских бактерий Ltd, Ferguson Building, Craibstone Estate, Bucksburn, Aberdeen AB21 9YA.
В одном из вариантов осуществления способа для обработки сена обычно используется количество от 105 до 1015 жизнеспособных организмов дрожжей или бактерий на 1 т сена, предпочтительно от 107 до 1013 жизнеспособных организмов дрожжей или бактерий на 1 т сена и более предпочтительно от 109 до 1012 жизнеспособных организмов дрожжей или бактерий на 1 т сена. Используемый в настоящем описании термин тонна следует понимать как относящийся к метрической тонне (1000 кг).
По меньшей мере один фермент с хитиназной активностью может иметь хитиназную активность в диапазоне от примерно 6 до примерно 300 единиц (U) активности фермента на 1 т подлежащего обработке сена. В одном из вариантов осуществления хитиназная активность может находиться в диапазоне от примерно 6 до примерно 100 U на 1 т подлежащего обработке сена. Единичное значение U определяется как количество фермента, обеспечивающее определенное количество хитиназной активности. Каждая единица (U) активности фермента может высвобождать около 1,0 мг N-ацетил-О-глюкозамина из хитина (г) в час при рН 6,0 и при температуре 25°C в течение 2 ч анализа.
Консервант для сена согласно настоящему описанию может дополнительно содержать по меньшей мере один фермент с пектин-лиазной активностью, глюканазной активностью или их смесь.
Консервант для сена согласно настоящему описанию может находиться либо в жидкой, либо в твердой форме. Консервант для сена согласно настоящему описанию может содержать подходящий носитель или может быть использован в том виде, в котором он представлен. В твердой форме консервант для сена может содержать твердые носители или физические наполнители. Подходящий носитель может быть в жидкой форме на основе воды или в жидкой форме, не содержащей воду, или в твердой форме. Неограничивающие примеры носителя в жидкой форме на основе воды или в жидкой форме, не содержащей воду, включают воду, масла и парафин.
Неограничивающие примеры носителей в твердой форме включают органический или неорганический носитель, такой как, например, мальтодекстрин, крахмалы. Твердая форма может наноситься непосредственно на сено путем напыления легкого порошка или путем опрыскивания сена, если находится в жидком носителе. Понятно, что для целей настоящего описания может использоваться любой другой подходящий носитель. Также понятно, что консервант для сена в соответствии с настоящим изобретением может быть нанесен на сено стандартными методами, обычно используемыми специалистами в данной области техники. Консервант для сена также можно наносить до, во время и/или после прессования сена в тюки. Настоящее изобретение будет более понятным из приведенных ниже примеров, которые приведены для иллюстрации изобретения, а не для ограничения его объема.
Примеры
Пример 1. Сено, условия обработки и прессование в тюки.
Использовали сено третьего покоса, состоящее из 90% люцерны и 10% травы. Сено косили дисковой косой New-Holland™ 17 сентября 2011 г. и оставляли для сушки, не проводя обработку и без ворошения. Уровень влажности оценивали с помощью прибора для определения уровня влажности сена Farmex™ (1205 Danner Drive, Aurora, ОН) через пять дней после покоса, который находился в диапазоне от 20 до 35%. В это же время готовили консерванты для сена путем предварительного взвешивания инокулянтов и смешивания каждого инокулянта в отдельной емкости, содержащей 6,5 л предварительно измеренной дистиллированной воды, а затем встряхивали в течение 1 мин. Емкость распылителя и штангу с распыляющими насадками с одним соплом устанавливали на большой квадратный сенной пресс 4790 Hesston. Шланг размещали таким образом, чтобы распыление покрывало 90% валка с минимальным дрейфом.
Для определения времени, требуемого для завершения нанесения добавки на один тюк, а также для более точного определения уровня влажности прессованного в тюки материала было изготовлено два испытательных тюка. Уровень влажности тюка определяли, используя зонд для сена. Среднее время изготовления одного тюка (0,91 м х 1,22 м х 2,44 м) оказалось равным 2 мин 30 с, а средний вес тюка составлял 820 кг. Количество наносимого P. anomala было равно 1011 КОЕ/л на 1 т сена. Фермент с хитиназной активностью наносили в количестве 1,5 г (суспендированных в 1 л воды) на 1 т сена, что соответствует примерно 6 ед. на 1 т сена. Продукт пропионовой кислоты, состоящий на 68% (об./об.) из пропионовой кислоты, наносили с концентрацией 2,72 л/т и использовали в качестве положительного контроля. Отрицательным контролем служила вода, которую наносили с концентрацией 1 л на 1 т сена. P. anomala и фермент с хитиназной активностью были приобретены в компании Lallemand Specialities Inc. (Milwaukee, WI, USA), а пропионовая кислота была приобретена в компании Wausau Chemical Corporation (Wausau, WI, USA). Для каждого вида обработки было изготовлено по пять тюков. После каждой обработки
- 4 034723 брали образцы P. anomala для проверки жизнеспособности и определения количества организмов. Эту процедуру выполняли для подтверждения количества, нанесенных организмов. Каждый тюк маркировали сразу же после его выхода из пресса, используя аэрозольную краску, после чего маркировали с помощью бирок, которые прикрепляли пластиковыми хомутиками. Все тюки взвешивались через день после прессования в тюки и взятия образцов с помощью бура. Для уменьшения риска возгорания тюки после прессования оставляли в поле на 2 недели перед их транспортировкой и закладкой на хранение в один слой в открытом с одной стороны сарае. На день 90 из тюков снова брали с помощью бура образцы с 4 сторон (исключая верхнюю и нижнюю части тюков), и перекладывали их наверх (стопки из двух тюков). На день 180 снова брали образцы с помощью бура.
Определение химических и микробиологических показателей.
Выполняли химический и микробиологический анализы образцов сена, взятых с шести различных участков поля, и композитных образцов, полученных с помощью бура, из четырех разных мест каждого тюка в дни хранения 1, 90 и 180. Для подсчета общего количества бактерий, бактерий, продуцирующих молочную кислоту (МКБ), дрожжей и плесени использовали процедуры, описанные у McAllister et al. (1995. Intake, digestibility and aerobic stability of barley silage inoculated with mixtures of Lactobacillus plantarum and Enterococcus faecium. Can. J. Anim. Sci. 75:425-432). Сухое вещество (СВ), органическое вещество (OB) и сырой протеин (СП) определяли согласно процедурам АОАС (1990), а нейтральное детергентное волокно (НДВ), кислотное детергентное волокно (КДВ) и кислотный детергентный нерастворимый азот (КДНА) определяли методами, описанными у Van Soest et al. (1991. Methods for dietary fiber, neutral detergent and non-starch polysaccharides in relation to animal nutrition. J. Dairy Sci. 74: 3583-3597).
Таблица 1
Химический состав (СВ, %), рН и микробиологический состав (КОЕ, log10) сена через 90 дней после обработки различными консервантами для сена во время прессования в тюки1
Фактор2 | День 0 | РА | СЕ | В РА | CON |
СВ | 81,95 | 87,32 | 86, 59 | 86, 08 | 84, 68 |
pH | 6, 25 | 6, 11 | 6, 24 | 6, 00 | 6.36 |
ТВ | - | 7,14 | 6, 60 | 6, 10 | 7,51 |
LAB | 3, 80 | 5, 42Ьс | 4,77е | 4, 88е | 6, 29а |
Дрожжи | 6,48 | 5, 57 | 5, 94 | 5, 38 | 6,20 |
Плесень | 5,41 | 5, 25 | 5, 18 | 4,77 | 5, 34 |
ОВ | 87,89 | 88,10а | 85, 28е | 88,27а | 88,02а |
NH3, мг/кг | 0,336 | 0,479 | 0, 841 | 0,583 | 1,017 |
ОА | 3,5 | 3,46 | 3, 67 | 3,58 | 3,55 |
МК, (г/кг) | - | 0,051ь | 0,094а | 0, 099а | 0, 129а |
ндв | 45, 52 | - | - | - | - |
КДВ | 33, 19 | 31,23 | 30,79 | 30,49 | 31,86 |
КДНА | 0,375 | 0,273аЬ | 0,229ь | 0,254ь | 0,255ь |
КДНА, (%ОА) | 10,75 | 7,92аЬ | 6, 23е | 7, 1 6Ьс | 7, 19Ьс |
1PA=Pichia anomala; СЕ=ферменты с хитиназной активностью; ВРА=пропионовая кислота; CON контроль;
2ТВ=бактерии, растущие на питательном агаре без сложных питательных потребностей; LAB=бактерии, растущие на MRS, предположительно Lactobacilli; ОВ=органическое вещество; КН3=аммиачный азот; ОА=общий азот; МК=молочная кислота; КДВ=кислотное детергентное волокно; КДНА=кислотный детергентный нерастворимый азот.
В табл. 1 показано влияние обработки консервантами для сена на химические и микробиологические профили образцов сена, собранных в день 0 (день прессования в тюки) и через 90 дней после прессования в тюки. Помимо молочной кислоты и кислотного детергентного нерастворимого азота (КДНА) различные виды обработки не оказали влияния ни на один из оцениваемых факторов, т.е. на рН, общий азот, аммиачный азот и КДВ. Концентрация молочной кислоты была ниже при обработке P. anomala по сравнению с другими видами обработки. По сравнению с другими видами обработки уровень КДНА (% СВ) был выше при обработке Р. anomala. В образцах сена, полученных через 90 дней, обработка не оказала никакого влияния на популяции всех бактерий (бактерий, растущих на питательном агаре без сложных питательных потребностей), дрожжей и плесени. По сравнению с другими видами обработки популяции молочнокислых бактерий были более многочисленными в тюках, обработанных P. anomala, и в контроле, количество которых увеличилось с log10 3,80 КОЕ/г в день прессования до log10 5,42 и log10 6,29 КОЕ/г, соответственно, в день 90.
- 5 034723
Таблица 2
Химический состав (% СВ), рН и микробиологический состав (КОЕ log10) сена через 180 дней после обработки различными консервантами для сена при прессовании в тюки1
Фактор2 | РА | СЕ | В РА | CON |
СВ | 87, 89а | 87,72аЬ | 85,64ь | 85, 79Ь |
pH | 6, 00ь | 6, 14а | 6, 11а | 6.17а |
NA | 6, 14 | 7,25 | 7,23 | 7,23 |
MRS | 5,21 | 6, 32 | 6,28 | 6, 74 |
Дрожжи | 5, 25аЬ | 5, 82а | 4, 67ь | 4,27ь |
Плесень | 5, 48 | 5, 37 | 6, 24 | 6, 08 |
ОВ | 88,59 | 87, 93 | 87, 80 | 87, 63 |
NH3, мг/кг | 0, 418 | 0, 565 | 0, 635 | 0,704 |
ОА | 3,26 | 3, 57 | 3,56 | 3,53 |
МК, (г/кг) | 0, 983 | 0, 970 | 1,052 | 1,453 |
ндв | 44,18ь | 44,78ь | 46, 33ь | 50,07а |
КДВ | 32,35Ьс | 32,76Ь | 33,72ь | 34,55а |
КД НА | 0,262 | 0,253 | 0,245 | 0,268 |
КДНА, (%ОА) | 8, 03 | 7, 17 | 6, 96 | 7,58 |
1PA=Pichia anomala; СЕ=ферменты с хитиназной активностью; ВРА=пропионовая кислота; CON=контроль;
2ТВ=бактерии, растущие на питательном агаре без сложных питательных потребностей; LAB=бактерии, растущие на MRS, предположительно Lactobacilli; ОВ=органическое вещество; XI13 аммиачный азот; ОА=общий азот; МК=молочная кислота; КДВ=кислотное детергентное волокно; КДНА=кислотный детергентный нерастворимый азот.
В химическом и микробиологическом составах образцов, полученных через 180 дней, не наблюдалось никаких различий между видами обработки, кроме величины рН и популяции дрожжей (см. табл. 2). По сравнению со всеми другими видами обработки величина рН была самой низкой у P. anomala (6,00). Популяция дрожжей была самой многочисленной в случае обработки ферментами с хитиназной активностью.
Таблица 3 Концентрации летучих жирных кислот (ЛЖК) в образцах сена, полученных с помощью бура, через 90 и 180 дней после обработки различными добавками при прессовании в тюки1
ЛЖК | РА | СЕ | В РА | CON |
Ацетат (г/кг) | ||||
90 д | 8,95 | 8,55 | 10,53 | 6, 97 |
180 д | 9, 69 | 9, 58 | 8,38 | 7,28 |
Пропионат (г/кг) | ||||
90 д | 0,1333 | 0,1267 | 0,4667а | 0,1467 |
180 д | 0,0675 | 0, 080 | 0,426а | 0, 052 |
Общее количество | ||||
ЛЖК (г/кг) | ||||
90 д | 9, 14 | 8,72 | 11,04 | 7, 17 |
180 д | 9, 87 | 9,76 | 8,89 | 7,42 |
1PA=Pichia anomala; СЕ=фермент с хитиназной активностью; ВРА=пропионовая кислота; ОСХ=контроль.
Из табл. 3 видно, что общая концентрация ЛЖК (летучих жирных кислот) и концентрация ацетата в образцах, полученных через 90 и 180 дней, не изменилась после обработки. Преобладающим среди ЛЖК, полученных через 180 дней хранения, был ацетат, доля которого составляла от 94 до 98% от общего количества ЛЖК, полученных в тюках. Через 180 дней хранения наблюдалась тенденция к увеличению количества ацетата и общего количества ЛЖК в тюках, обработанных P. anomala и ферментами с хити- 6 034723 назной активностью. Концентрация ацетата и общая концентрация ЛЖК в тюках через 180 дней обработки P. anomala и ферментами с хитиназной активностью оказались по меньшей мере на 14% выше, чем в случае других видов обработки, что указывает на то, что обе эти обработки индуцировали в тюках более высокую степень анаэробного микробного брожения по сравнению с другими видами обработки. По сравнению с контрольной обработкой общая концентрация ЛЖК и концентрация ацетата в тюках через 180 дней обработки P. Anomala в комбинации с ферментами с хитиназной активностью были выше примерно на 32%. Как и ожидалось, концентрация пропионата в тюках, обработанных пропионовой кислотой, была соответственно выше через 90 и 180 дней в образцах других видов обработки (см. табл. 3).
Таблица 4 Оценка качества сена, обработанного различными добавками, после 180 дней хранения
Фактор качества | Тюк, № | РА | СЕ | БРА | CON |
ЦВЕТ | 1 2 3 4 5 Среднее | 5 17 17 5 17 12,2 | 18 18 10 0 15, 3 | 10 5 12 10 7 8,8 | 17 5 5 10 15 10,4 |
ЗАПАХ | 1 2 3 4 5 Среднее | 2 10 7 10 17 11,2 | 12 15 5 0 0 10,7 | 12 0 12 5 5 6, 8 | 12 0 0 0 12 4,8 |
ОБЩЕЕ СОСТОЯНИЕ | 1 2 3 4 5 Среднее | 7 27 34 15 34 23,5 | 30 33 15 0 0 26 | 22 5 24 15 12 15, 6 | 29 5 5 10 27 15, 2 |
ОЦЕНКА | 1 2 3 4 5 | Р VP G G G | G G Р | Р VP Р VP Р | А VP VP VP Р |
PA=Pichia anomala; СЕ=ферменты с хитиназной активностью; ВРА=пропионовая кислота; CON=контроль.
Цвет/запах определены на основе Информационного бюллетеня № 644, выпускаемого службой пропаганды знаний при университете штата Мэриленд (Maryland Cooperative Extension Fact Sheet), Оценка качества сена (http://www.extension.umd.edu/publications/pdfs/fs644.pdf).
Цвет.
Сено ярко-зеленого цвета (15-20).
Сено от золотисто-желтого до желтого цвета - от 5 до 15 баллов.
Сено от коричневого до черного цвета - от 0 до 5 баллов.
Запах.
Запах свежескошенного сена имеет самый высокий балл (от 15 до 20 баллов).
Сено с затхлым или другим запахом получает от 5 до 15 баллов.
Сено с плесневелым или необычно пыльным запахом имеет очень низкие баллы (от 0 до 5 баллов). Оценка.
Оценка основана на общей оценке эксперта, которая имела следующие градации: очень плохое (VP), плохое (Р), среднее (А), хорошее (G), очень хорошее (VG) и отличное (Е).
Все тюки вскрывали через 180 дней и их качество оценивали на основе Информационного бюллетеня № 644, выпускаемого службой пропаганды знаний при университете штата Мэриленд (Maryland
- 7 034723
Cooperative Extension Fact Sheet). Исходя из визуальной и сенсорной оценки, сено наихудшего качества оказалось в контроле и в случае обработки пропионовой кислотой, сено, обработанное другими способами, было среднего и хорошего качества (табл. 4).
Т ермостойкость.
Термостойкость тюков контролировали путем постоянного измерения температуры внутри каждого тюка с помощью трех контактных кнопок Dallas Thermochron (Embedded Data Systems, Lawrenceburg, KY), которые были вставлены в отверстия, сделанные с помощью бура, на следующее утро после прессования. Контактные кнопки были выполнены с возможностью записи температуры каждый час в течение первых 60 дней срока хранения. Поскольку результаты измерения температуры не выявили дальнейшего нагревания, зонды не были помещены обратно в тюки через 60 дней. Тюки вскрывали и проводили визуальную оценку порчи и наличия плесени в конце периода хранения (180 дней) на основе Информационного бюллетеня № 644, выпускаемого службой пропаганды знаний при университете штата Мэриленд (Maryland Cooperative Extension Fact Sheet) (http://www.extension.umd.edu/publications/pdfs/fs644.pdf).
Как показано на фиг. 1, средняя недельная температура окружающей среды (зона хранения тюков) понижалась с максимальной, равной примерно 16°C в течение первой недели хранения, до минусовых температур после недели 7. Тем не менее, в течение первых трех недель периода хранения температура во всех кипах оставалась выше 20°C. Самая высокая недельная температура (примерно 34°C) была зарегистрирована на второй неделе в контрольных тюках. Средняя температура в контрольных тюках в течение первых трех недель составляла примерно 30°C. Температура в тюках, обработанных ферментами с хитиназной активностью, последовательно понижалась по сравнению с контрольными тюками с 1 по 7 неделю (фиг. 1). Аналогичная тенденция (за исключением второй недели) наблюдалась при сравнении с обработкой пропионовой кислотой (фиг. 2). Хотя все виды обработки оказали положительное влияние на понижение температуры в тюках во время хранения, наиболее эффективной обработкой по сравнению с контролем и обработкой пропионовой кислотой оказалась обработка ферментами с хитиназной активностью. По сравнению с контрольными тюками и тюками, обработанными пропионовой кислотой, средняя температура в тюках, обработанных ферментами с хитиназной активностью, была на 6-8°C и 4-5°C ниже температуры в контрольных тюках и тюках, обработанных пропионовой кислотой, в течение одного и того же периода времени.
Эксперимент с участием животных.
Скорость in situ и степень исчезновения СВ и НДВ в образцах сена через 180 дней определяли с участием трех коров с установленной на рубец канюлей, которых перед этим кормили стандартным для загона кормом, состоящим из 50% тимофеевки и 50% ячменного силоса (основа СВ). Дополнительные образцы, взятые из образцов сена через 180 дней, полученных из тюков, обработанных тем же самым консервантом, собирали и измельчали, пропуская через 4 мм сито. Примерно 4 г каждого композитного образца взвешивали в мешках Dacron и инкубировали в трех повторах в каждой корове в течение 0, 2, 6, 12, 24, 48, 72, 96 и 120 ч. Мешки были изготовлены из моноволоконной полиэфирной сетки (размер пор 53 мкм, 5 см х 20 см, Ankom, Fairport, New York). В течение двух недель до начала инкубации коровы получали этот корм для адаптации к этому корму. Сразу после инкубации мешки промывали холодной водопроводной водой до полного удаления содержимого рубца с внешней стороны мешков. Мешки стирали в бытовой стиральной машине в холодной воде в течение 3 мин, используя цикл деликатной стирки без моющего средства и отжима. Процедуру стирки выполняли один раз. Дублированные наборы неинкубированных сумок, содержащих образцы каждой обработки, промывали с указанными выше мешками и использовали для оценки 0 ч исчезновения для каждой обработки. Затем все мешки сушили в печи с воздушной конвекцией при 55°C в течение 48 ч. Перед проведением анализа на содержание НДВ согласно описанным выше методам, остатки из трех мешков с одинаковой обработкой, инкубированных в одной корове, объединяли и измельчали, пропуская через 1 мм сито. Выраженное в процентах исчезновение СВ и НДВ рассчитывали исходя из содержимого, оставшегося в мешках после каждого времени инкубации. Данные об исчезновении СВ и НДВ адаптировали к модифицированной версии экспоненциальной модели Орскова и Макдональда (Orskov and McDonald (1979)) с лаг-фазой p=a+b (1-е~с(t~lag)) для t > lag где p - исчезновение СВ или НДВ (%) через t ч, a - быстро исчезающая фракция (%), b - медленно исчезающая фракция (%), c - скорость исчезновения (ч-1) фракции b.
Параметры оценивали с помощью итеративной нелинейной процедуры (метод Маркардта (Marquardt)), используя пакет программного обеспечения SAS (1990). Эффективное исчезновение (EFFD, %) через 48 ч инкубации оценивали исходя из предполагаемой 6% доли выхода фракции.
- 8 034723
Таблица 5
Влияние консерванта для сена1 на исчезновение in situ СВ (%)2 сена, состоящего из люцерны и костра, инкубированного в рубце коров Джерси (Jersey)
Исчезновени е3 | РА | СЕ | В РА | CON |
12ч | 66, 65а | 62,92е | 62,20е | 61,38е |
24ч | 75, 13а | 72,65ь | 72,84ь | 70, 86е |
48ч | 78,37а | 77,22а | 78,57а | 75,62ь |
Кинетически е показатели | ||||
а | 34,13 | 34, 65 | 33,34 | 34,37 |
Ь | 44, 62аЬ | 43,21ь | 46, 38а | 42,11ь |
с, ч-1 | 0,114а | 0, 0 8 9Ьс | 0,083е | 0,087е |
Потенциальн ое | 78,75а | 7 7, 8 6аЬ | 79,72а | 76, 48ь |
Эффективное | 62,92а | 60,40ь | 59,97ь | 59, 09ь |
1PA=Pichia anomala; СЕ=ферменты с хитиназной активностью; ВРА=пропионовая кислота; CON=контроль;
2 средние значения в одной строке с разными надстрочными индексами отличаются (Р<0,05);
3параметры, рассчитанные по уравнению: p=a+b [1-e-c(t-lag)] для t > lag; где p - доля (%) НДВ, исчезающее из нейлоновых мешков через t ч инкубации; a - быстро исчезающая фракция (%); b - медленно исчезающая фракция (%); c - скорость исчезновения (ч-1) фракции b.
Исчезновение сухого вещества в сумке.
Влияние консервантов на исчезновение СВ через 12, 24 и 48 ч, включая кинетику исчезновения, приведено в табл. 5. Исчезновение СВ происходило без лаг-периода. Образцы сена, обработанные микробной добавкой (P. anomala), имели более высокую скорость исчезновения СВ во всех временных точках инкубации (12, 24 и 48 ч) по сравнению с контролем и обработкой пропионовой кислотой; за исключением 48 ч, когда все добавки (включая ферменты с хитиназной активностью и пропионовую кислоту) были выше, чем в контроле. Аналогично, и скорость, и эффективность исчезновения СВ были выше в образцах сена, обработанных микробными добавками, по сравнению с контролем и обработкой пропионовой кислотой. По сравнению со всеми другими видами обработки образцы сена из тюков, обработанных P. anomala, имели самую высокую скорость исчезновения СВ (0,114 ч-1). Самая низкая скорость 0,083 ч-1 и 0,087 ч-1 наблюдалась в случае обработки пропионовой кислотой и в контроле. Все добавки увеличивали потенциально перевариваемую фракцию СВ, за исключением ферментов с хитиназной активностью, в которой она была аналогичной фракции в контроле. Тем не менее эффективное исчезновение СВ в образце, обработанном P. anomala, было выше, чем в контроле и при обработке пропионовой кислотой.
- 9 034723
Таблица 6
Влияние консервантов1 для сена на исчезновение in situ НДВ (%)2 сена, состоящего из люцерны и костра, инкубированного в рубце коров Джерси (Jersey)
Исчезновени е3 | РА | СЕ | В РА | CON |
12ч | 41, 0 6ь | 37,28е | 39, 04Ьс | 39, 64Ьс |
24ч | 51,88аЬ | 49, 22ь | 51,88аЬ | 51,11ь |
48ч | 58,23ь | 56,07е | 60, 19аЬ | 58,38аЬ |
Кинетически е показатели | ||||
а | 19,28 | 19, 90 | 19, 11 | 18,80 |
Ь | 40,48 | 37, 67 | 43,59 | 41,54 |
с, ч-1 | 0, 078 | 0, 076 | 0, 069 | 0, 070 |
лаг период | 1, 8 9ь | 3, 67а | 2,8 7аЬ | 1,91ь |
Потенциальн ый | 59, 7 6Ьс | 57,57е | 62,70а | 60,34ь |
Эффективный | 39,87ь | 36, 66ь | 38,84ь | 38,94ь |
1PA=Pichia anomala; СЕ=ферменты с хитиназной активностью; ВРА=пропионовая кислота; CON=контроль;
средние значения в одной строке с разными надстрочными индексами отличаются (Р<0,05);
3параметры, рассчитанные по уравнению: p=a+b[1-e'c(t'lag)] для t > lag; где p - доля (%) НДВ, исчезающее из нейлоновых мешков через t ч инкубации; a - быстро исчезающая фракция (%); b - медленно исчезающая фракция (%); c - скорость исчезновения (ч-1) фракции b.
Несмотря на отсутствие различий между обработками с точки зрения скорости исчезновения НДВ, быстро исчезающей фракции и медленно исчезающей фракции, самым эффективным было исчезновение в сене, обработанном P. anomala, по сравнению со всеми другими видами обработки (табл. 6). Самый длительный лаг-период в исчезновении НДВ наблюдали в сене, обработанном ферментами с хитиназной активностью (3,67 ч), а самый короткий лаг-период 1,89 ч наблюдали в случае обработки P. anomala. Однако последний лаг-период не отличался от лаг-периода для других видов обработки. Общий показатель исчезновения НДВ через 12, 24 и 48 ч находился в пределах от 37,28% (самое низкое значение) в сене, обработанном ферментами с хитиназной активностью, до 41,06% (самое высокое значение) в сене, обработанном P. anomala, при этом сено, обработанное другими методами, имело промежуточные значения. Аналогичная тенденция наблюдалась и для 24 ч исчезновения. Исчезновение НДВ через 48 ч было самым низким в случае обработки ферментами с хитиназной активностью по сравнению со всеми другими видами обработки.
Данные по исчезновению СВ из мешков свидетельствуют о том, что P. anomala увеличивает потенциально перевариваемую фракцию, а также скорость и эффективность исчезновения этой фракции сена по сравнению с контролем. Фактически, значения эффективного исчезновения в сене, обработанном P. anomala, были выше, чем в контроле и при обработке пропионовой кислотой.
Пример 2. Сено, условия обработки и прессования в тюки.
Сено представляло собой сено люцерны и было собрано 15 августа 2012 г. в Форт-Маклеод, Альберта, Канада. Сено люцерны сушили в поле до уровня влажности от примерно 24% до примерно 30%. Влажность тюка определяли согласно тому, как описано в примере 1.
Количество наносимой комбинации P. anomala с ферментом с хитиназной активностью составляло соответственно 1011 КОЕ и 1,5 г на 1 л воды на 1 т сена. Соответственно, количество, наносимой комбинации P. pentosaceus в комбинации с ферментом, имеющим хитиназную активность, составляло 1011 КОЕ и 1,5 г на 1 л воды на 1 т сена. Продукт пропионовой кислоты, состоящий из 68% (об./об.) пропионовой кислоты, наносили с концентрацией 2,72 л/т и рассматривали в качестве положительного контроля. Отрицательным контролем была вода, которую наносили с концентрацией 1 л на 1 т сена. Для каждого вида обработки в тот же день изготавливали пять крупных круглых тюков весом примерно 800 кг в соответствии с примером 1. Образцы, полученные из тюков с помощью бура, собирали для каждого вида обработки в дни 0, 90 и 180 после прессования в тюки для оценки их пищевой ценности, продукта ферментации и микробных изменений.
- 10 034723
Полученные с помощью бура образцы, собранные в дни 0 и 90, 180 после прессования в тюки, были подвергнуты микробиологическому и химическому анализу. Микробиологический анализ проводили с целью определения количества, выделения и характеристики микроорганизмов (общего количества бактерий, дрожжей и плесени) на соответствующих планшетах методом серийного разведения.
Таблица 7
Количество микробов в сене люцерны, обработанной различными консервантами для сена при прессовании в тюки
Обработка | Дни | Контроль | Pichia+φ ерменты | Pedio+фе рменты | Пропионовая кислота |
Общее количество бактерий, log КОЕ/г DM | 0 | 5,92 | 5,28 | 6,22 | 6,34 |
90 | 7,7 9аЬ | 7,34Ье | 6, 69е | 8,49а | |
180 | 8,27а | 6,25ь | 6, 08ь | 8,25а | |
ДРОЖЖИ | 0 | 4,94 | 4,98 | 5,86 | 5,49 |
90 | 6, 57 | 4,70 | 5,05 | 6,22 | |
180 | 5,13 | 4,69 | 4,40 | 4,89 | |
ПЛЕСЕНЬ | 0 | 4,83 | 4,79 | 4,99 | 4,66 |
90 | 5,89 | 5,81 | 5,85 | 5,91 | |
180 | 6, 49а | 6, 92а | 6, 69а | 5,36ь |
Во время прессования в тюки микробиологический профиль сена после каждой обработки оставался аналогичным в отношении общего количества бактерий, дрожжей и плесени, даже в случае регистрации количественных различий. Через 90 дней после прессования тюков общее количество бактерий при обработке ферментами с хитиназной активностью в комбинации с Pediococcus pentosaceus уменьшилось по сравнению с контролем и обработкой пропионовой кислотой, тогда как обработка ферментами с хитиназной активностью в комбинации с Pichia anomala привела к уменьшению количества бактерий. Было отмечено восстановление численности дрожжей в двух видах обработки ферментами с хитиназной активностью как в комбинации с Pichia anomala, так и в комбинации с Pediococcus pentosaceus, в отличие от контроля и обработки пропионовой кислотой. Обработка образцов не оказала никакого влияния на количество плесени, кроме образцов, полученных через 180 дней, в которых количество плесени уменьшилось в случае обработки пропионовой кислотой.
Проводили химические анализы для определения величины рН, ЧВ, общего азота, аммиачного азота, НДВ, КДВ, кислотного детергентного нерастворимого азота (КДНА), водорастворимых углеводов, летучих жирных кислот (ЛЖК) и молочной кислоты (МК).
Таблица 8
Химический состав сена люцерны в дни 0, 90 и 180 после обработки консервантом для сена при прессовании в тюки
Обработка | Дни | Контроль | Pichia+φ ерменты | Pedio+фе рменты | Пропионовая кислота |
СВ% | 0 | 68,9ad | 76,5Ье | 80,4а | 66, 9d |
90 | 82,6Ь | 85,6а | 87, За | 79,8е | |
180 | 83,7Ье | 87,9а | 88,5а | 80, Iе | |
ндв% | 0 | 39,3 | 39,6 | 38,6 | 40,1 |
90 | 55,5а | 47,7ed | 45,2d | 53,0аЬ | |
180 | 51,3 | 54,8 | 55,3 | 54,6 | |
кдв% | 0 | 28,3 | 29,4 | 28,9 | 28,7 |
90 | 39,1а | 31,6ed | 30,5d | 37,1аЬ | |
180 | 33,7е | 637,6аЬ | 35,4Ье | 38,2а | |
ОА% | 0 | 3,7 | 3,7 | 3,5 | 3,9 |
90 | 3,7 | 3,7 | 3,8 | 4,1 | |
180 | 3,8Ь | 3,8Ь | 3,8Ь | 4,2 | |
КДНА% N | 0 | 7,2а | 5,0ь | 5,1ь | 7 ,За |
90 | 17,8а | 10,6Ь | 8,7Ь | 18,8а | |
180 | 12, Зь | 16, 9аЬ | 15,4Ь | 20,1а |
Ферменты с хитиназной активностью в комбинации с Pichia anomala или Pediococcus pentosaceus с хитиназной активностью в комбинации с Pichia anomala или Pediococcus pentosaceus, ферменты с хитиназной активностью в комбинации с Pichia anomala или Pediococcus pentosaceus.
- 11 034723
Таблица 9
Продукт ферментации сена люцерны, обработанной различными консервантами для сена при прессовании в тюки
Обработка | Дни | Контроль | Fichia+φ ерменты | Fedio+фе рменты | Пропионовая кислота |
рн | 0 | 6, 1бь | 6,23а | 6,23а | 6, 07е |
90 | 7,64а | 5,92ь | 5, 87ь | 8,29а | |
180 | 7,4 0аЬ | 6, 15е | 6, 03е | 7,80а | |
МК г/кг СВ | 90 | 0,32 | 0,26 | 0, 17 | 0,49 |
180 | 0,26 | 0,11 | 0, 10 | 0, 17 | |
янтарная кислота | 90 | 0,26 | 0,25 | 0,24 | 0,20 |
180 | 0,23 | 0,23 | 0,24 | 0,28 | |
уксусная кислота | 90 | 0, 04 | 0,31 | 0,29 | 0,42 |
180 | 0,29 | 0,29 | 0, 63 | 0,71 | |
пропионовая кислота | 90 | NA | NA | NA | 0, 08 |
180 | NA | NA | NA | 0, 04 | |
Общее количество ЛЖК | 90 | 0, 04 | 0,31 | 0,33 | 0,50 |
180 | 0,29 | 0,29 | 0, 66 | 0,76 |
На процесс ферментации сена не оказала сильного влияния обработка ферментами с хитиназной активностью в комбинации с Pichia anomala или Pediococcus pentosaceus, так как этот кормовой материал не подвержен ферментации. Однако более низкий рН наблюдается через 90 дней в случае обработки ферментами с хитиназной активностью в комбинации с Pichia anomala или Pediococcus pentosaceus.
Полученные с помощью бура образцы сена собирали в день 180 и оценивали его питательную ценность методами in situ и in vitro.
Проводили эксперименты in situ для оценки влияния консервантов для сена на скорость и степень переваривания образцов сена, собранных через 180 дней после прессования тюков. Для этого использовали трех коров с установленной на рубец канюлей, которых перед этим кормили стандартным для загона кормом. Примерно 4 г каждого композитного образца из каждого тюка (с повтором) на каждую обработку взвешивали в мешках Dacron и инкубировали в трех повторах в каждой корове в течение 0, 2, 6, 12, 24, 48, 72, 96 и 120 ч. Мешки извлекали после инкубации и обрабатывали в соответствии с LRC SOP для определения in situ исчезновения СВ и НДВ.
Таблица 11 Параметры in situ для сена люцерны, обработанной консервантами для сена при прессовании тюков
Обработка | Контроль | Pichia+ферм енты | Pedio+ферме нты | Пропионовая кислота |
а | 26, 61Ьс | 30, 05аЬ | 33,79а | 23,64е |
Ь | 4 6, 8 0аЬ | 43, 08Ьс | 39,67е | 51,69а |
с | 0, 05е | 0, 0 6Ьс | 0, 07аЬ | 0, 04е |
лаг период | 1, 8 0Ьс | 3, 90аЬс | 4,3 0аЬс | 1, 70е |
а+Ь | 73,4 | 73, 1 | 73,5 | 75,3 |
a=быстро перевариваемая фракция,
Ъ=медленно перевариваемая фракция, c=скорость переваривания и (мл/ч), lag .Ш1-период (ч).
Данные in situ, приведенные в табл. 11, показывают, что сено, обработанное ферментами с хитиназной активностью в комбинации с Pichia anomala или Pediococcus pentosaceus.
Также проводили эксперимент in vitro для оценки влияния микробных инокулянтов на образование газа и кинетические характеристики образцов сена через 180 дней. Выполняли два теста смешанной жидкости из рубца трех коров с установленной на рубец канюлей, которых перед этим кормили стандартным для загона кормом. Для каждой обработки во флаконах взвешивали примерно 0,5 г каждого композитного образца сена, полученного через 180 дней хранения, и инкубировали в трех повторах для каждого теста, а газ измеряли через 3, 6, 9, 12, 24 и 48 ч. Флаконы извлекали после инкубации и обрабатывали в соответствии с LRC SOP для определения in vitro исчезновения СВ, образования газа, аммиака и ЛЖК.
- 12 034723
Таблица 12
In vitro перевариваемость сена люцерны, обработанного консервантами для сена при прессовании в тюки
Обработка | Контроль | Pichia+ферм енты | Pedio+ферме нты | Пропионовая кислота |
DMD г/кг | 426d | 470ь | 488ь | 431d |
а | 174е | 188ьс | 19 6аЬ | 177е |
с | 6, 4е | 7,7ЬС | 8,4Ь | 6, 6е |
лаг период | 0,54а | 0, 08ь | 0, 0 6ь | 0,48а |
а=асимптотическое образование газа (мл/г СВ), с=скорость ферментации фракции, скорость образования количества газа (мл/ч), lag ла·-период (ч).
In vitro переваримость и ферментируемость сена через 180 дней подтвердили in situ результаты повышенной усвояемости для обоих видов обработки сена ферментами с хитиназной активностью в комбинации как с Pichia anomala, так и Pediococcus pentosaceus.
Термостойкость.
Температуру каждого тюка контролировали путем непрерывного измерения внутренней температуры в течение всего периода хранения с помощью трех (3) контактных кнопок Dallas Thermochron (Embedded Data Systems, Lawrenceburg, KY), введенных во внутреннюю часть каждого тюка сразу же после сбора урожая (показано на чертежах). Температуру регистрировали с интервалом 4 ч в течение 10 недель.
Как показано на фиг. 2, обработка ферментами с хитиназной активностью в комбинации как с Pichia anomala, так и с Pediococcus pentosaceus имела пониженную среднюю температуру в течение 60 дней после прессования в тюки. При обработке пропионовой кислотой средняя температура во всех временных точках была самой высокой.
Значительность этого эффекта хорошо видна на фиг. 3. На фиг. 3 показано насколько долго температура была выше 40°C при каждом виде обработки. Поскольку эта температура общепризнана в качестве пороговой для повреждений, показателем которых является уровень КДНА, она показывает интенсивность внутренней температуры тюков сена. Для обработки пропионовой кислотой период, при котором температура оставалась выше 40°C, оказался самым продолжительным. В случае обработки ферментами с хитиназной активностью в комбинации с Pediococcus pentosaceus время нахождения при температуре выше 40°C было самым коротким, за которым следовало время для обработки ферментами с хитиназной активностью в комбинации с Pichia anomala, причем для обоих видов обработки, проводимых ферментами с хитиназной активностью в комбинации с Pichia anomala или Pediococcus pentosaceus, время нахождения при температуре выше 40°C было короче, чем в контроле.
В заключение следует отметить, что комбинация ферментов с хитиназной активностью с Pichia anomala или Pediococcus pentosaceus снижала внутреннюю температуру тюков сена, величину рН и общее количество бактерий по сравнению с контролем и обработкой пропионовой кислотой во время хранения. Эти виды обработки также привели к увеличению in situ исчезновения сухого вещества (DMD) и скорости расщепления, а также in vitro DMD и скорости газообразования. Это можно объяснить пониженным содержанием НДВ и КДВ в случае этих двух обработок.
Пример 3.
Этот пример показывает, что консервирующее действие фермента с хитиназной активностью и его способность предотвращать и/или уменьшать порчу сена с высоким содержанием влаги в результате теплового воздействия еще более усиливается, если по меньшей мере один фермент с хитиназной активностью объединен с дрожжами рода Pichia или бактериями рода Pediococcus. Сено было собирали и сушили в поле до уровня влажности, как описано в примере 2.
Количество наносимой комбинации P. anomala с ферментом с хитиназной активностью составляло соответственно 1011 КОЕ и 1,5 г на 1 л воды на 1 т сена. Соответственно, количество наносимой комбинации P. pentosaceus в комбинации с ферментом с хитиназной активностью составляло 1011 КОЕ и 1,5 г на 1 л воды на 1 т сена. Количество наносимого только P. Anomala было равно 1011 КОЕ в 1 л на 1 т сена. Количество наносимого только P. anomala было равно 1011 КОЕ в 1 л на 1 т сена. Фермент с хитиназной активностью наносили в количестве 1,5 г (суспендированной в 1 л воды) на 1 т сена. Продукт пропионовой кислоты, состоящий из 68% (об./об.) пропионовой кислоты, наносили с концентрацией 2,72 л/т и рассматривали в качестве положительного контроля. Отрицательным контролем была вода, которую наносили с концентрацией 1 л на 1 т сена. Для каждого вида обработки в тот же день изготавливали пять крупных круглых тюков весом примерно 800 кг в соответствии с примером 1.
Как и в примере 2, температуру каждого тюка контролировали путем непрерывного измерения внутренней температуры в течение всего периода хранения с помощью трех (3) контактных кнопок Dallas Thermochron (Embedded Data Systems, Lawrenceburg, KY), введенных во внутреннюю часть каждого
- 13 034723 тюка сразу после сбора урожая (показано на чертежах). Температуру регистрировали с интервалом 4 ч в течение 10 недель. Как показано на фиг. 4, когда по меньшей мере один фермент с хитиназной активностью объединяют с P. anomala или Р. pentosaceus, то в результате такого комбинирования снижение температуры сена с высоким содержанием влаги неожиданно значимо увеличивается по сравнению с использованием каждого компонента по отдельности.
Пример 4. Задача испытания.
Это испытание расширяет набор доказательств в пользу концепции добавки для сена, которая уменьшила бы нагрев тюков, изготовленных в сложных условиях уборки (содержание влаги, выше оптимального уровня). Оно соответствовало аналогичному испытанию, проводимому в масштабе лаборатории. Анализировали профиль температуры небольших квадратных тюков (~25 кг, 79,9% СВ), инокулированных с использованием различных комбинаций двух микроорганизмов (Pichia anomala или Pediococcus pentosaceus) с двумя ферментами (чистая хитиназа или коммерческий фермент, имеющий пектинлиазную, глюканазную и хитиназную активности).
Метод исследования.
Испытание проводили, используя небольшие квадратные тюки смеси люцерны с травой (45:55) со средним весом на момент сбора урожая 25,0 кг. Средний уровень влажности тюков составлял 79,9% СВ, в пределах ожидаемого уровня сухого вещества (80-83% СВ). Тюки обрабатывали разными инокулянтами с помощью аппарата Дорманна для внесения бактериального раствора после опрыскивания фуража перед камерой резки тюка. Согласно плану эксперимента наносили контрольную и четыре различные дополнительные смеси микробных добавок (без добавок, Pichia anomala+хитиназа, Pichia anomala+смесь ферментов, Pediococcus pentosaceus+хитиназа, Pediococcus pentosaceus+смесь ферментов).
В каждом виде обработки распыление выполняли, используя шесть квадратных тюков, разбитых на три группы по два тюка. Тюки перевозились в хранилище, взвешивали и помещали на поддоны по заранее определенной полностью рандомизированной схеме таким образом, чтобы тюки не контактировали друг с другом. Каждый тюк оснащали температурным зондом, который помещали в геометрический центр тюка. Тюки хранили в течение 100 дней.
Результаты.
Говоря в общем, те виды обработки, которые включали Pichia anomala (№ 2 и 3 в табл. 13), показали более медленный нагрев тюков, но смесь Pichia anomala с хитиназой (№ 3) значительно замедляла нагревание и время, в течение которого температура тюков на 5°C и на 10°C превышала температуру окружающей среды (табл. 13). Эта обработка также показала более низкую температуру между 400 и 600 ч инкубации. Добавление смеси ферментов со штаммом Pichia anomala приводила к некоторому количественному улучшению, хотя улучшение было более низким, чем в случае использования смеси с хитиназой.
До начала нагревания тюков, обработанных смесями Pediococcus pentosaceus (№ 4 и 5), проходило большее количество времени. Использование ферментов обоих типов давало сопоставимые преимущества по уменьшению времени, проведенному при температуре на 10°C выше по сравнению с температурой окружающей среды (табл. 13).
Таблица 13
Описание обработки и данные профиля температуры в зависимости от времени
Номер обработк и | Микробная добавка | ферментная добавка | Время пребывания при температуре на 5°С выше окружающей (ч) | Время пребывания при температуре на 10°С выше окружающей (ч) |
1 | Нет | Нет | 390,6 | 290,6 а |
2 | Pichia anomala | Смесь ферментов | 295,2 | 193,9 ab |
3 | Pichia anomala | Хитиназа | 230,0 | 120,4 Ь |
4 | Pediococcus pentosaceus | Смесь ферментов | 320,4 | 196,3 ab |
5 | Pediococcus pentosaceus | Хитиназа | 329,6 | 224,4 ab |
Р=0,0971 SEM=58,24 | Р=0,0394 SEM=50,43 |
Хотя изобретение было описано на примере конкретных вариантов осуществления, должно быть понятно, что оно может быть модифицировано, и это описание охватывает любые изменения, применения или адаптации изобретения, в общем, согласно принципам изобретения и включают такие отклоне- 14 034723 ния от настоящего раскрытия, которые входят в известную или обычную практику в области, к которой относится изобретение, и которые могут быть применены к существенным признакам, изложенным выше, и находятся в объеме прилагаемой формулы изобретения.
Claims (8)
1. Консервант для сена, содержащий по меньшей мере один фермент с хитиназной активностью в комбинации с дрожжами рода Pichia или бактериями рода Pediococcus в количестве, эффективном для предотвращения и/или уменьшения порчи сена с высоким содержанием влаги в результате теплового воздействия.
2. Консервант для сена по п.1, в котором по меньшей мере один фермент с хитиназной активностью имеет хитиназную активность в интервале от примерно 6 до 300 U на 1 т сена, подлежащего консервации.
3. Консервант для сена по п.1 или 2, в котором дрожжи рода Pichia представляют собой Pichia anomala sp.
4. Консервант для сена по любому из пп.1-3, в котором дрожжи рода Pichia представляют собой штамм Pichia anomal DBVPG 3003.
5. Консервант для сена по п.1 или 2, в котором бактерии рода Pediococcus представляют собой Pediococcus pentosaceus sp.
6. Консервант для сена по пп.1, 2 или 5, в котором бактерии рода Pediococcus представляют собой штамм Pediococcus pentosaceus BTC328 NCIMB 12674 или штамм ВТС401 NCIMB 12675.
7. Консервант для сена по любому из пп.1-6, дополнительно содержащий по меньшей мере один фермент с пектин-лиазной активностью, глюканазной активностью или их смесь.
8. Способ предотвращения и/или уменьшения порчи сена с высоким содержанием влаги в результате теплового воздействия, включающий добавление в сено консерванта по любому из пп.1-7.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP14194567.5A EP3023490A1 (en) | 2014-11-24 | 2014-11-24 | Hay preservative and methods for preservation of hay |
PCT/IB2015/059079 WO2016083996A1 (en) | 2014-11-24 | 2015-11-24 | Hay preservative and methods for preservation of hay |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA201791141A1 EA201791141A1 (ru) | 2017-10-31 |
EA034723B1 true EA034723B1 (ru) | 2020-03-12 |
Family
ID=51947218
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA201791141A EA034723B1 (ru) | 2014-11-24 | 2015-11-24 | Консервант для сена и способы консервации сена |
Country Status (19)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11903397B2 (ru) |
EP (2) | EP3023490A1 (ru) |
JP (2) | JP7233839B2 (ru) |
CN (1) | CN106998750B (ru) |
AR (2) | AR103206A1 (ru) |
AU (1) | AU2015352045B2 (ru) |
BR (1) | BR112017010766B1 (ru) |
CA (1) | CA2967206C (ru) |
CL (1) | CL2017001228A1 (ru) |
CO (1) | CO2017005171A2 (ru) |
DK (1) | DK3224345T3 (ru) |
EA (1) | EA034723B1 (ru) |
ES (1) | ES2864217T3 (ru) |
HU (1) | HUE053811T2 (ru) |
MX (1) | MX2017006721A (ru) |
NZ (1) | NZ731618A (ru) |
PL (1) | PL3224345T3 (ru) |
PT (1) | PT3224345T (ru) |
WO (1) | WO2016083996A1 (ru) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3023490A1 (en) * | 2014-11-24 | 2016-05-25 | Danstar Ferment AG | Hay preservative and methods for preservation of hay |
CN114128792A (zh) * | 2021-12-15 | 2022-03-04 | 内蒙古自治区农牧业科学院 | 一种利用植物精油熏蒸抑制高水分苜蓿贮藏发霉的方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4820531A (en) * | 1987-10-22 | 1989-04-11 | Pioneer Hi-Bred International | Bacterial treatment to preserve hay quality by addition of microorganisms of the genus bacillus |
EP0408220A2 (en) * | 1989-07-10 | 1991-01-16 | ZENECA Corp. | Mould control in forage |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5341205B2 (ru) * | 1971-11-11 | 1978-11-01 | ||
JPS5436113B2 (ru) * | 1972-09-19 | 1979-11-07 | ||
US5371011A (en) * | 1989-07-10 | 1994-12-06 | Zeneca Corp. | Mold control in forage |
GB9027303D0 (en) | 1990-12-17 | 1991-02-06 | Enzymatix Ltd | Enzyme formulation |
EP0906020B1 (en) | 1996-06-07 | 2002-02-06 | Dsm N.V. | Use of a fungal composition for crop protection |
JP3870248B2 (ja) * | 1996-08-02 | 2007-01-17 | 独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構 | 乳酸非資化性キラー酵母 |
JP3762826B2 (ja) * | 1998-01-08 | 2006-04-05 | 独立行政法人理化学研究所 | サイレージ調製用乳酸菌 |
SE513894C2 (sv) * | 1998-03-12 | 2000-11-20 | Bioagri Ab | Förfarande för lufttät lagring av fuktigt spannmål i närvaro av ett biokontrollmedel |
JP3115289B2 (ja) | 1998-08-04 | 2000-12-04 | 山陰建設工業株式会社 | キチナーゼを用いた植物病原菌防除剤 |
JP4856819B2 (ja) | 2001-06-28 | 2012-01-18 | 東芝機械株式会社 | 破砕機 |
US7087810B2 (en) * | 2001-11-07 | 2006-08-08 | Muller Mathis L | Isolated nucleic acids encoding proteins with chitinase activity and uses thereof |
CN104146151A (zh) | 2014-09-01 | 2014-11-19 | 陕西省西安植物园 | 一种垂穗披碱草青贮饲料的生产方法 |
EP3023490A1 (en) * | 2014-11-24 | 2016-05-25 | Danstar Ferment AG | Hay preservative and methods for preservation of hay |
-
2014
- 2014-11-24 EP EP14194567.5A patent/EP3023490A1/en not_active Withdrawn
-
2015
- 2015-11-24 US US15/528,998 patent/US11903397B2/en active Active
- 2015-11-24 HU HUE15804608A patent/HUE053811T2/hu unknown
- 2015-11-24 PT PT158046086T patent/PT3224345T/pt unknown
- 2015-11-24 BR BR112017010766-0A patent/BR112017010766B1/pt active IP Right Grant
- 2015-11-24 AR ARP150103839A patent/AR103206A1/es active IP Right Grant
- 2015-11-24 JP JP2017546270A patent/JP7233839B2/ja active Active
- 2015-11-24 EA EA201791141A patent/EA034723B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2015-11-24 WO PCT/IB2015/059079 patent/WO2016083996A1/en active Application Filing
- 2015-11-24 AU AU2015352045A patent/AU2015352045B2/en active Active
- 2015-11-24 NZ NZ73161815A patent/NZ731618A/en unknown
- 2015-11-24 CN CN201580063520.XA patent/CN106998750B/zh active Active
- 2015-11-24 ES ES15804608T patent/ES2864217T3/es active Active
- 2015-11-24 MX MX2017006721A patent/MX2017006721A/es unknown
- 2015-11-24 PL PL15804608T patent/PL3224345T3/pl unknown
- 2015-11-24 CA CA2967206A patent/CA2967206C/en active Active
- 2015-11-24 DK DK15804608.6T patent/DK3224345T3/da active
- 2015-11-24 EP EP15804608.6A patent/EP3224345B1/en active Active
-
2017
- 2017-05-12 CL CL2017001228A patent/CL2017001228A1/es unknown
- 2017-05-24 CO CONC2017/0005171A patent/CO2017005171A2/es unknown
-
2020
- 2020-10-16 JP JP2020174369A patent/JP2021035952A/ja not_active Withdrawn
-
2022
- 2022-04-12 AR ARP220100932A patent/AR125341A2/es unknown
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4820531A (en) * | 1987-10-22 | 1989-04-11 | Pioneer Hi-Bred International | Bacterial treatment to preserve hay quality by addition of microorganisms of the genus bacillus |
EP0408220A2 (en) * | 1989-07-10 | 1991-01-16 | ZENECA Corp. | Mould control in forage |
Non-Patent Citations (9)
Title |
---|
H ZAHIRODDINI, BAAH J., MCALLISTER T.A.: "Effects of Microbial Inoculants on the Fermentation, Nutrient Retention, and Aerobic Stability of Barley Silage", ASIAN-AUSTRALASIAN JOURNAL OF ANIMAL SCIENCES, vol. 19, no. 10, 1 October 2006 (2006-10-01), pages 1429 - 1436, XP055171970, DOI: 10.5713/ajas.2006.1429 * |
M B BRURBERG, HAANDRIKMAN A J, LEENHOUTS K J, VENEMA G, NES LI F: "Expression of a chitinase gene from Serratia marcescens in Lactococcus lactis and Lactobacillus plantarum", APPL MICROBIOL BIOTECHNO, SPRINGER-VERLAG, vol. 42, 1 January 1994 (1994-01-01), pages 108 - 115, XP055184211, DOI: 10.1007/BF00170232 * |
MEHMET LEVENT OZDUVEN, ZEYNEP KURSUN ONAL, FISUN KOC: "Bakteriyal İnokulantlar ve/veya Enzimlerin Tritikale Silajlarında Fermantasyon, Aerobik Stabilite ve in vitro Kuru ve Organik Madde Sindirilebilirliği �zerine Etkileri", KAFKAS UNIVERSITESI VETERINER FAKULTESI DERGISI, 1 January 2009 (2009-01-01), XP055184339, ISSN: 13006045, DOI: 10.9775/kvfd.2009.1628 * |
OLSTORPE, M. ; BORLING, J. ; SCHNURER, J. ; PASSOTH, V.: "Pichia anomala yeast improves feed hygiene during storage of moist crimped barley grain under Swedish farm conditions", ANIMAL FEED SCIENCE AND TECHNOLOGY, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 156, no. 1-2, 28 February 2010 (2010-02-28), AMSTERDAM, NL, pages 47 - 56, XP026895076, ISSN: 0377-8401, DOI: 10.1016/j.anifeedsci.2009.12.008 * |
PETERSSON S, SCHNUERER J: "BIOCONTROL OF MOLD GROWTH IN HIGH-MOISTURE WHEAT STORED UNDER AIRTIGHT CONDITIONS BY PICHIA ANOMALA, PICHIA GUILLIERMONDII, AND SACCHAROMYCES CEREVISIAE", APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, AMERICAN SOCIETY FOR MICROBIOLOGY, US, vol. 61, no. 03, 1 March 1995 (1995-03-01), US, pages 1027 - 1032, XP001120388, ISSN: 0099-2240 * |
STINA PETERSSON, NILS JONSSON, JOHAN SCHN�RER: "Pichia anomala as a biocontrol agent during storage of high-moisture feed grain under airtight conditions", POSTHARVEST BIOLOGY AND TECHNOLOGY, ELSEVIER, vol. 15, no. 2, 1 February 1999 (1999-02-01), pages 175 - 184, XP055184361, ISSN: 09255214, DOI: 10.1016/S0925-5214(98)00081-7 * |
TENGERDY R. P.: "ENSILING ALFALFA WITH ADDITIVES OF LACTIC ACID BACTERIA AND ENZYMES.", JOURNAL OF THE SCIENCE OF FOOD AND AGRICULTURE, WILEY & SONS, CHICHESTER., GB, vol. 55., no. 02., 1 January 1991 (1991-01-01), GB, pages 215 - 228., XP000215852, ISSN: 0022-5142 * |
ULRIKA DRUVEFORS, JONSSON NILS, BOYSEN MARIANNE E, SCHNU JOHAN, RER �: "E⁄cacy of the biocontrol yeast Pichia anomala during long-term storage of moist feed grain under di�erent oxygen and carbon dioxide regimens", FEMS YEAST RESEARCH, ELSEVIER, vol. 2, pages 389 - 394, XP055184359 * |
WEINBERG Z. G., MUCK R. E.: "NEW TRENDS AND OPPOTUNITIES IN THE DEVELOPMENT AND USE OF INOCULANTS FOR SILAGE.", FEMS MICROBIOLOGY REVIEWS, ELSEVIER, AMSTERDAM; NL, vol. 19., no. 01., 1 January 1996 (1996-01-01), AMSTERDAM; NL, pages 53 - 68., XP000960647, ISSN: 0168-6445, DOI: 10.1016/0168-6445(96)00025-3 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
BR112017010766B1 (pt) | 2022-04-19 |
CA2967206C (en) | 2022-08-16 |
PT3224345T (pt) | 2021-03-12 |
US11903397B2 (en) | 2024-02-20 |
CO2017005171A2 (es) | 2017-10-31 |
CA2967206A1 (en) | 2016-06-02 |
CN106998750B (zh) | 2022-04-15 |
AU2015352045A1 (en) | 2017-05-25 |
MX2017006721A (es) | 2018-03-16 |
WO2016083996A1 (en) | 2016-06-02 |
AU2015352045B2 (en) | 2022-01-27 |
EP3224345A1 (en) | 2017-10-04 |
BR112017010766A2 (pt) | 2018-01-09 |
AR103206A1 (es) | 2017-04-26 |
PL3224345T3 (pl) | 2021-07-12 |
JP2021035952A (ja) | 2021-03-04 |
HUE053811T2 (hu) | 2021-07-28 |
CL2017001228A1 (es) | 2018-05-11 |
DK3224345T3 (da) | 2021-03-15 |
EP3224345B1 (en) | 2020-12-23 |
AR125341A2 (es) | 2023-07-05 |
NZ731618A (en) | 2019-09-27 |
EP3023490A1 (en) | 2016-05-25 |
CN106998750A (zh) | 2017-08-01 |
ES2864217T3 (es) | 2021-10-13 |
EA201791141A1 (ru) | 2017-10-31 |
JP7233839B2 (ja) | 2023-03-07 |
US20170311625A1 (en) | 2017-11-02 |
JP2017537980A (ja) | 2017-12-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Zahiroddini et al. | Effect of an inoculant and hydrolytic enzymes on fermentation and nutritive value of whole crop barley silage | |
Moselhy et al. | Improving the nutritive value, in vitro digestibility and aerobic stability of Hedychium gardnerianum silage through application of additives at ensiling time | |
Wang et al. | Dynamics of fermentation profile and bacterial community of silage prepared with alfalfa, whole-plant corn and their mixture | |
Müller et al. | Effect of forage conservation method on microbial flora and fermentation pattern in forage and in equine colon and faeces | |
Baah et al. | Effects of homolactic bacterial inoculant alone or combined with an anionic surfactant on fermentation, aerobic stability and in situ ruminal degradability of barley silage | |
CN105567585A (zh) | 一种青贮用复合微生物菌剂及其在全株玉米青贮中的应用 | |
Nkosi et al. | Effects of ensiling forage soybean (Glycine max (L.) Merr.) with or without bacterial inoculants on the fermentation characteristics, aerobic stability and nutrient digestion of the silage by Damara rams | |
Koç et al. | Effect of pre-fermented juice, Lactobacillus plantarum and Lactobacillus buchneri on the fermentation characteristics and aerobic stability of high dry matter alfalfa bale silage | |
CA2436823A1 (en) | Mixed cultures for improved fermentation and aerobic stability of silage | |
Santos et al. | Lactic acid bacteria in tropical grass silages | |
Müller et al. | Methods for reduction of water soluble carbohydrate content in grass forages for horses | |
JP6514201B2 (ja) | 単離された微生物株ラクトバチルス・プランタルムtak59 ncimb42150およびその使用 | |
JP2021035952A (ja) | 乾草防腐剤及び乾草の保存方法 | |
Mitiku et al. | Silage making of maize stover and banana pseudostem under South Ethiopian conditions: evolution of pH, dry matter and microbiological profile | |
Pinto et al. | Effects of natamycin and Lactobacillus buchneri on the fermentative process and aerobic stability of maize silage | |
De Boever et al. | The effect of a mixture of Lactobacillus strains on silage quality and nutritive value of grass harvested at four growth stages and ensiled for two periods | |
Alba-Mejía et al. | The effect of biological and chemical additives on the chemical composition and fermentation process of Dactylis glomerata silage | |
Pereira et al. | Nutritive value, fermentation profile and effluent loss in sweet potato vine silage, with or without microbial inoculant | |
Baah et al. | Effect of Lactobacillus buchneri 40788 and buffered propionic acid on preservation and nutritive value of alfalfa and timothy high-moisture hay | |
Adesoji et al. | Effect of Lactobacillus plantarum starter culture on the microbial succession, chemical composition, aerobic stability and acceptability by ruminant of fermented Panicum maximum grass | |
Dailidavičienė et al. | Fermentation and microbial dynamics of perennial grasses silage prepared with biological inoculant | |
Weinberg | THE ENSILING FERMENTATION OF FORAGE CROPS | |
Adesogan | Recent advances in bacterial silage inoculant technology | |
Haile | The effect of a feruloyl esterase producing inoculant along with mechanical treatment prior to ensiling on fibre digestibility of grass silage | |
Hao et al. | Formic acid enhances whole-plant mulberry silage fermentation by boosting lactic acid production and inhibiting harmful bacteria |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM |