EA029151B1 - ЛЕЧЕНИЕ ЗАБОЛЕВАНИЙ, СВЯЗАННЫХ С АЛЬФА-СУБЪЕДИНИЦАМИ ПОТЕНЦИАЛЗАВИСИМЫХ НАТРИЕВЫХ КАНАЛОВ (SCNxA), С ПОМОЩЬЮ МАЛЫХ МОЛЕКУЛ - Google Patents

ЛЕЧЕНИЕ ЗАБОЛЕВАНИЙ, СВЯЗАННЫХ С АЛЬФА-СУБЪЕДИНИЦАМИ ПОТЕНЦИАЛЗАВИСИМЫХ НАТРИЕВЫХ КАНАЛОВ (SCNxA), С ПОМОЩЬЮ МАЛЫХ МОЛЕКУЛ Download PDF

Info

Publication number
EA029151B1
EA029151B1 EA201490420A EA201490420A EA029151B1 EA 029151 B1 EA029151 B1 EA 029151B1 EA 201490420 A EA201490420 A EA 201490420A EA 201490420 A EA201490420 A EA 201490420A EA 029151 B1 EA029151 B1 EA 029151B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
expression
cells
disease
compounds
agonist
Prior art date
Application number
EA201490420A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201490420A1 (ru
Inventor
Джозеф КОЛЛАРД
ШЕРМАН Ольга ХОРКОВА
Джейн Х. Хсяо
Original Assignee
Курна, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=47832504&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA029151(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Курна, Инк. filed Critical Курна, Инк.
Publication of EA201490420A1 publication Critical patent/EA201490420A1/ru
Publication of EA029151B1 publication Critical patent/EA029151B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/436—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having oxygen as a ring hetero atom, e.g. rapamycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/365—Lactones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4245—Oxadiazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4409—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof only substituted in position 4, e.g. isoniazid, iproniazid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4422—1,4-Dihydropyridines, e.g. nifedipine, nicardipine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4545—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pipamperone, anabasine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4985—Pyrazines or piperazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A61K31/5513—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/58—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/64—Sulfonylureas, e.g. glibenclamide, tolbutamide, chlorpropamide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/10—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for impotence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/06—Antimigraine agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к низкомолекулярным соединениям, которые модулируют экспрессию и/или функцию альфа-субъединицы потенциалзависимого натриевого канала (SCNxA). Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим указанные малые молекулы, и их применению при лечении заболеваний и нарушений, связанных с экспрессией SCNxA.

Description

изобретение относится к низкомолекулярным соединениям, которые модулируют экспрессию и/или функцию альфа-субъединицы потенциалзависимого натриевого канала (8СЫхА). Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим указанные малые молекулы, и их применению при лечении заболеваний и нарушений, связанных с экспрессией 8СЫхА.
029151 Β1
029151
Область техники
Настоящая заявка испрашивает приоритет согласно предварительной заявке на патент США № 61/531361, поданной 6 сентября 2011 г., содержание которой полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки.
Варианты реализации настоящего изобретения включают малые молекулы, которые модулируют экспрессию и/или функцию альфа-субъединиц потенциалзависимых натриевых каналов и связанных с ними молекул.
Уровень техники
Обеспечение белков, экспрессия которых недостаточна в биологических системах, с помощью фармацевтических агентов является перспективным вариантом лечения или возможного лечения множества болезненных состояний. Медицинское и фармацевтическое сообщество предпринимало попытки лечения этого типа заболеваний с помощью многочисленных механистических подходов и путей. Согласно одному подходу в качестве мишени был выбран природный антисмысловой транскрипт (ΝΑΤ) мРНК, соответствующей конкретному целевому белку. Для направленного воздействия на ΝΑΤ и "активации" экспрессии целевой мРНК и белка были разработаны олигонуклеотиды и/или модифицированные олигонуклеотиды. Вследствие огромного количества болезненных состояний и заболеваний, которые требуют или нуждаются в новом медикаментозном лечении и/или терапии первой линии, существует значительная потребность в новых подходах и лекарственных препаратах для модуляции экспрессии или сниженной экспрессии белка.
Предшествующий уровень техники в целом включает генную терапию, методики на основе антисмысловых олигонуклеотидов или малых интерферирующих РНК (миРНК), а также применение малых молекул для регулирования экспрессии белка. Большинство методик, основанных на антисмысловых олигонуклеотидах и миРНК, а также связанные с ними патенты или патентные заявки относятся к применению указанных "лекарственных препаратов" для снижения (подавления) экспрессии белков. Терапевтической мишенью часто является мРНК либо ДНК, кодирующая конкретный белок или кодирующая РНК, которая транслируется в белок, представляющий интерес. Примеры различных описаний, приведенные в патентной литературе, представлены ниже.
В патенте США № 5739119 раскрыты антисмысловые олигонуклеотиды, специфичные в отношении мРНК мускаринового рецептора ацетилхолина 2 типа. Введение указанных олигонуклеотидов приводит к улучшению памяти и обучения.
В патенте США № 5985663 раскрыто ингибирование антисмысловыми олигонуклеотидами экспрессии интерлейкина-15.
В патенте США № 6165712 раскрыты молекулы, которые за счет влияния на транскрипцию модулируют экспрессию гена и увеличивают продукцию рекомбинантных белков. В этой публикации описано увеличение уровня экспрессии белков. Модулирующая молекула может содержать антисмысловую нуклеиновую кислоту. Модулирующая молекула может связываться с промоторным участком выше по направлению транскрипции от кодирующей последовательности, кодирующей онкоген или генсупрессор опухоли.
В патенте США № 6165990 раскрыто применение векторов экспрессии, которые кодируют антисмысловые нуклеотиды, направленные на целевую мРНК, связанную с гастрином, геном рака толстой кишки.
В патенте США № 6303374 раскрыта модуляция антисмысловыми нуклеотидами экспрессии каспазы 3. Антисмысловые нуклеотиды направлены на нуклеиновые кислоты, кодирующие каспазу 3 для лечения болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, бокового амиотрофического склероза (БАС) и т.д.
В патенте США № 6376541 раскрыт способ лечения глаукомы путем "активации" продукции простагландинов при лечении пациента агентом, который вызывает увеличение уровня простагландина, где агенты включают интерлейкин-1, трансформирующий фактор роста бета-1, трансформирующий фактор роста бета-2, тромбоцитарный фактор роста, левамизол и др. В этом патенте раскрыт пример применения лекарственного препарата для активации экспрессии малой молекулы, а не белка.
В патенте США № 6444464 раскрыты антисмысловые нуклеотиды, направленные на нуклеиновые кислоты, кодирующие транскрипционные факторы Е2Р.
В патенте США № 6617122 раскрыты полипептиды, молекулы нуклеиновых кислот, экспрессирующие указанные полипептиды, и способ лечения индивидуума, имеющего низкий уровень ЛПВП, который включает введение такому индивидууму полипептида АВС-1 или его фрагмента, регулирующего уровень холестерина. Полипептид АВС-1 представляет собой АВС-1 дикого типа или имеет мутацию, которая увеличивает его устойчивость или его биологическую активность. В патенте также раскрыты соединения-кандидаты, которые модулируют (увеличивают) уровень экспрессии указанного белка.
Также были раскрыты антисмысловые нуклеотиды к кДНК белка АВС-1. В публикации раскрыто, что применение соединения для ингибирования транскрипционного фактора, который подавляет АВС-1, как ожидается, может привести к активации АВС-1 и, следовательно, повышению уровня ЛПВП. Транскрипционный фактор является белком.
В патенте США № 6710174 раскрыто ингибирование антисмысловыми нуклеотидами фактора роста
- 1 029151
эндотелия сосудов (ФРЭС).
В патенте США № 7144999 раскрыты олигонуклеотиды, которые направлены на экспрессию индуцируемого гипоксией фактора 1 альфа (аН1Р), и способы лечения заболеваний, связанных с экспрессией указанного белка. В этом патенте раскрыта гиперэкспрессия природного антисмыслового транскрипта аНГР, который комплементарен З'-нетранслируемому участку Н1Р-1 альфа и который связан с заболеванием человека (непапиллярная светлоклеточная карцинома почки).
В патенте США № 7148204 раскрыты антисмысловые модуляторы экспрессии ВСЬ-Х. Модуляция индуцирует апоптоз.
В патенте США № 7199107 раскрыты антисмысловые модуляторы экспрессии кинезин-подобного белка 1.
В патенте США № 7202357 раскрыты антисмысловые соединения, композиции и способы модулирования экспрессии ацетил-КоА:холестерин-ацилтрансферазы-2. Соединения представляют собой антисмысловые олигонуклеотиды, направленные на нуклеиновые кислоты, кодирующие ацетилКоА:холестерин-ацилтрансферазу-2.
В патенте США № 7229976 раскрыты антисмысловые олигомеры, направленные на нуклеиновую кислоту, кодирующую белок семейства РогкНсаб Ьох 01 А, для модулирования его экспрессии.
В патенте США № 7235534 раскрыты антисмысловые олигонуклеотиды, которые направлены на гены и мРНК, кодирующие альфа- и/или бета-рецепторы эстрогенов (ЭР) млекопитающих и модулирующие ответы рецепторов. Лечение улучшает стабилизацию бляшек, заживление сосудов и восстановление эндотелия после повреждения сосудов.
В патенте США № 7285288 раскрыты олигонуклеотиды, которые гибридизуются с нуклеиновыми кислотами Вс1-2, генные продукты, как известно, взаимодействуют с онкогенным белком Вс1-2.
В патенте США № 7335764 раскрыты антисмысловые модуляторы экспрессии ацетилКоА:холестерин-ацилтрансферазы-2.
В патенте США № 7402574 раскрыты антисмысловые композиции и способы лечения онкологического заболевания. Антисмысловая композиция содержит, по существу, незаряженное антисмысловое соединение, имеющее устойчивую к действию нуклеаз основу, которое может поглощаться раковыми клетками-мишенями субъекта, содержащее от 10 до 40 нуклеотидных оснований и имеющее последовательность оснований, которая способна эффективно гибридизоваться с участком процессированного или предварительно процессированного РНК-транскрипта фактора §ХТА1Ь человека, имеющего специфическую последовательность ГО N0:21.
В патенте США № 7420050 раскрыты антисмысловые молекулы, которые ингибируют экспрессию ТФР-β. Болезнь почек.
В патенте США № 7425545 раскрыта модуляция экспрессии С-реактивного белка.
В патенте США № 7456154 раскрыты антисмысловые олигонуклеотиды, направленные к ацетилхолинэстеразе человека, и их применение.
В патенте США № 7598227 раскрыта модуляция экспрессии аполипопротеина С-111.
В патенте США № 7662948 раскрыты антисмысловые олигонуклеотиды, направленные к УК1 (капсаициновый рецептор), для лечения боли.
В патенте США № 7674895 раскрыты миРНК, специфичные для ФРЭС и генов рецепторов ФРЭС.
В патенте США № 7687617 раскрыты олигонуклеотиды с чередующимися сегментами блокированных и неблокированных нуклеотидов.
В патенте США № 7691995 раскрыто производство малых интерферирующих РНК в условиях ίη
νίνο.
В патенте США № 7709546 раскрыта модуляция экспрессии генов олигомерами, направленными на хромосомную ДНК.
В патенте США № 7709630 раскрыта антисмысловая модуляция экспрессии фактора роста соединительной ткани.
В патенте США № 7723508 раскрыта модуляция экспрессии аполипопротеина (А).
В патенте США № 7732422 раскрыта терапия антисмысловыми нуклеотидами, направленная на ТКРМ-2, для лечения онкологического заболевания.
В патенте США № 7732590 раскрыта модуляция экспрессии диацилглицерол-ацилтрансферазы 2.
В патенте США № 7737265 раскрыта модуляция Н1Р-1 путем РНК-интерференции и ее терапевтическое применение.
В патенте США № 7741305 раскрыта модуляция экспрессии апоА1.
В публикации патентной заявки США И8 2003/0191075 раскрыты способы, обеспечивающие направленное действие генной терапии (антисмысловые нуклеотиды) на конкретные органы с использованием модифицированных конъюгатов олигонуклеотидов и липофильных олигонуклеотидов.
В публикации патентной заявки США И8 2004/0033480 раскрыто применение ресвератрола (3,5,4'тригидрокси-транс-стильбена) для активации экспрессии аполипопротеина А1.
В публикации патентной заявки США И8 2004/0137423 раскрыты композиции и способы идентификации агентов, которые модулируют уровни ЛНВП у животных путем увеличения экспрессии гена
- 2 029151
АВСА1.
В публикации патентной заявки США И8 2004/0175803 раскрыты гены, индуцируемые (активируемые) интерфероном-альфа.
Авторы настоящего изобретения обнаружили новые способы применения известных малых молекул, которые приводят к модуляции экспрессии семейства генов ЗСЫА и их вариантов.
Сущность изобретения
Данное краткое описание приведено с целью изложения в общих чертах предмета и сущности настоящего изобретения. Следует понимать, что представленное описание сущности изобретения не предполагает его использования для интерпретации описания изобретения или ограничения объема либо сущности формулы изобретения.
Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения предложен способ модуляции экспрессии гена, кодирующего альфа-субъединицу потенциалзависимого натриевого канала (ЗСЫхА), включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, по меньшей мере одного активного ингредиента, выбранного из группы, состоящей из диуретика, атипичного антипсихотика, активатора калиевых каналов, блокатора кальциевых каналов, антимикотика, антиоксиданта, ингибитора ФДЭ-5, агониста эстрогена (стероидного или нестероидного), антидепрессанта, ингибитора протонного насоса, агониста рецептора 5ΗΊΊΌ, снотворного, противоязвенного средства, агониста 5НТ4, агониста ГАМК (САВА), антигистаминного препарата или анаболического стероида, для лечения нарушения или заболевания, связанного с ЗСЫхА.
Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения предложен способ модуляции экспрессии гена ЗСЫхА, включающий введение по меньшей мере одной малой молекулы, выбранной из группы, состоящей из милнаципрана, торсемида, рисперидона, пинацидила, бенидипина, кетоконазола, эбселена, тадалафила, зеранола, нефазодона, ломеризина, икариина, омепразола, Ь-694,247, нитрендипина, ниметазепама, амлексанокса, мозаприда, сертралина или станозолола или фармацевтически приемлемых солей, изомеров, энантиомеров, изоформ, полиморфов, гидратов, сольватов или пролекарственных форм указанных соединений.
Согласно одному варианту реализации указанный способ включает проведение скрининга библиотеки соединений малых молекул в отношении биологических систем, которые имеют систему экспрессии гена ЗСЫхА, причем указанный скрининг приводит к идентификации предполагаемых кандидатов, которые увеличивают экспрессию продукта экспрессии и/или генного продукта ЗСЫхА. Предпочтительный продукт экспрессии представляет собой 8СЫ1А.
Согласно другому варианту реализации настоящее изобретение предлагает способ воздействия на функцию РНК ЗСЫхА, причём указанное воздействие приводит к активации генного продукта ЗСЫхА, включающий введение малой молекулы, выбранной из группы, состоящей из милнаципрана, торсемида, рисперидона, пинацидила, бенидипина, кетоконазола, эбселена, тадалафила, зеранола, нефазодона, ломеризина, икариина, омепразола, Ь-694,247, нитрендипина, ниметазепама, амлексанокса, мозаприда, сертралина или станозолола или фармацевтически приемлемых солей, изомеров, энантиомеров, изоформ, полиморфов, гидратов, сольватов или пролекарственных форм указанных соединений, причем функции РНК, на которые направлено воздействие, включают по меньшей мере одну жизненно важную функцию, такую как, например, транскрипция указанной РНК, транслокация РНК к месту трансляции белка, трансляция белка с РНК, сплайсинг РНК с образованием одного или более видов мРНК и каталитическая активность, которая может быть вовлечена или облегчается ферментативной РНК.
Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения предложен способ модулирования функции и/или экспрессии полинуклеотида ЗСЫхА в биологической системе, включающий приведение в контакт указанной системы с малой молекулой, выбранной из группы, состоящей из милнаципрана, торасемида, рисперидона, пинацидила, бенидипина, кетоконазола, эбселена, тадалафила, зеранола, нефазодона, ломеризина, икариина, омепразола, Ь-694,247, нитрендипина, ниметазепама, амлексанокса, мозаприда, сертралина или станозолола или фармацевтически приемлемых солей, изомеров, энантиомеров, изоформ, полиморфов, гидратов, сольватов или пролекарственных форм указанных соединений, обеспечивающий тем самым модулирование функции и/или экспрессии полинуклеотида ЗСЫхА в биологических системах.
Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения предложен способ модулирования функции и/или экспрессии полинуклеотида ЗСЫхА в клетках или тканях пациента в условиях ίη νίνο или ίη νίίτο, включающий приведение в контакт указанных клеток или тканей с малой молекулой, выбранной из группы, состоящей из милнаципрана, торасемида, рисперидона, пинацидила, бенидипина, кетоконазола, эбселена, тадалафила, зеранола, нефазодона, ломеризина, икариина, омепразола, Ь-694,247, нитрендипина, ниметазепама, амлексанокса, мозаприда, сертралина или станозолола или фармацевтически приемлемых солей, изомеров, энантиомеров, изоформ, полиморфов, гидратов, сольватов или пролекарственных форм указанных соединений, что приводит к модулированию функции и/или экспрессии полинуклеотида ЗСЫхА в клетках или тканях пациента в условиях ίη νίνο или ίη νίίτο.
Согласно другому варианту реализации малая молекула, выбранная из группы, состоящей из милнаципрана, торасемида, рисперидона, пинацидила, бенидипина, кетоконазола, эбселена, тадалафила, зе- 3 029151
ранола, нефазодона, ломеризина, икариина, омепразола, Ь-694,247, нитрендипина, ниметазепама, амлексанокса, мозаприда, сертралина или станозолола или фармацевтически приемлемых солей, изомеров, энантиомеров, изоформ, полиморфов, гидратов, сольватов или пролекарственных форм указанных соединений, модифицирует экспрессию полинуклеотидов 8ΟΝχΑ, например нуклеотидов, представленных в 8Еф ГО N0:1, и любых их вариантов, аллелей, гомологов, мутированных вариантов, производных, фрагментов и комплементарных последовательностей.
Согласно другому варианту реализации предложен способ модулирования функции и/или экспрессии полинуклеотида 80Ν1Α в клетках или тканях пациента в условиях ίη νίνο или ίη νίίΓΟ, включающий приведение в контакт указанных клеток или тканей с малой молекулой, выбранной из группы, состоящей из милнаципрана, торасемида, рисперидона, пинацидила, бенидипина, кетоконазола, эбселена, тадалафила, зеранола, нефазодона, ломеризина, икариина, омепразола, Ь-694,247, нитрендипина, ниметазепама, амлексанокса, мозаприда, сертралина или станозолола или фармацевтически приемлемых солей, изомеров, энантиомеров, изоформ, полиморфов, гидратов, сольватов или пролекарственных форм указанных соединений, что приводит к модулированию функции и/или экспрессии полинуклеотида 80Ν1Ά в клетках или тканях пациента в условиях ίη νίνο или ίη νίίτο.
Согласно другому варианту реализации настоящее изобретение охватывает фармацевтическую композицию, содержащую малую молекулу, выбранную из группы, состоящей из милнаципрана, торсемида, рисперидона, пинацидила, бенидипина, кетоконазола, эбселена, тадалафила, зеранола, нефазодона, ломеризина, икариина, омепразола, Ь-694,247, нитрендипина, ниметазепама, амлексанокса, мозаприда, сертралина или станозолола или фармацевтически приемлемых солей, изомеров, энантиомеров, изоформ, полиморфов, гидратов, сольватов или пролекарственных форм указанных соединений, и фармацевтически приемлемый наполнитель, причем указанная композиция модулирует экспрессию полинуклеотида 80ΝχΑ.
Согласно другому варианту реализации малые молекулы вводят указанному пациенту, подкожно, внутримышечно, внутривенно или внутрибрюшинно.
Схема лечения включает введение пациенту малой молекулы по меньшей мере один раз, однако эта схема лечения может быть модифицирована с тем, чтобы включать введение нескольких доз в течение определенного периода времени. Лечение можно комбинировать с одним или более других видов терапии.
Согласно другому варианту реализации малые молекулы инкапсулированы в липосоме или присоединены к молекуле-носителю (например, холестерину, пептиду ТАТ) или нацеленным наночастицам и/или везикулам, которые покрыты антителом, в зависимости от физических и/или химических свойств конкретно выбранных малых молекул.
Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения предложено модулирование экспрессии любой из изоформ членов семейства 80ΝχΑ и их вариантов, включающее введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, фармацевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, указанного в настоящей заявке, причем указанное модулирование приводит в результате к лечению заболевания, связанного по меньшей мере с одним из генов 80ΝχΑ или продуктами их экспрессии.
Другие аспекты настоящего изобретения описаны ниже.
Краткое описание чертежа
Описание перечня последовательностей.
На чертеже показано увеличение уровня мРНК 80Ν1Α в первичных фибробластах кожи, несущих мутацию, связанную с синдромом Драве (заштрихованные столбики), и взрослых первичных кератиноцитах (пустые столбики) после обработки низкомолекулярными соединениями в концентрации 1 мкМ.
8Е0 ГО Ν0:1: транскрипционный вариант 1 мРНК альфа-субъединицы I типа потенциалзависимых натриевых каналов Ното харюнх (80Ν1Α) (код доступа ΝΟΒΙ ΝΜ_001165963).
8Е0 ГО Ν0:2: транскрипционный вариант 1 мРНК альфа-субъединицы II типа потенциалзависимых натриевых каналов Ното харюнх (8ΟΝ2Α) (код доступа ΝΟΒΙ ΝΜ_021007.2).
8Е0 ГО Ν0:3: транскрипционный вариант 1 мРНК альфа-субъединицы III типа потенциалзависимых натриевых каналов Ното харюнх (8ΟΝ3Α) (код доступа NСΒI ΝΜ_006922.3).
8Е0 ГО Ν0:4: мРНК альфа-субъединицы IV типа потенциалзависимых натриевых каналов Ното харюнх (8ΟΝ4Α) (код доступа NСΒI ΝΜ_000334.4).
8Е0 ГО Ν0:5: транскрипционный вариант 1 мРНК альфа-субъединицы V типа потенциалзависимых натриевых каналов Ното харюнх (8ΟΝ5Α) (код доступа NСΒI ΝΜ_198056.2).
8Е0 ГО Ν0:6: мРНК альфа-субъединицы VII типа потенциалзависимых натриевых каналов Ното харюнх (8ΟΝ7Α) (код доступа NСΒI ΝΜ_002976.3).
8Е0 ГО Ν0:7: транскрипционный вариант 1 мРНК альфа-субъединицы VIII типа потенциалзависимых натриевых каналов Ното харюнх (8ΟΝ8Α) (код доступа NСΒI ΝΜ_014191.2).
8Е0 ГО Ν0:8: мРНК альфа-субъединицы IX типа потенциалзависимых натриевых каналов Ното харюнх (8ΟΝ9Α) (код доступа NСΒI ΝΜ_002977.3).
8Е0 ГО Ν0:9: мРНК альфа-субъединицы X типа потенциалзависимых натриевых каналов Ното ха- 4 029151
ρίβηδ (δί'Ν 10Α) (код доступа Νί'Ι’Ι ΝΜ_006514.2).
δΕΟ ΙΌ N0:10: мРНК альфа-субъединицы XI типа потенциалзависимых натриевых каналов Ното
8ар1еп8 (δΟΝ11 А) (код доступа Νί',’ΒΙ ΝΜ_014139.2).
δΕΟ ΙΌ Ν0:11: мРНК альфа-субъединицы потенциалзависимых натриевых каналов Ното 8ар1еп8
δΟΝ12Α (δΟΝ12Α) (код доступа ΝΟΒΙ АЕ109737.1).
Перечни последовательностей, предоставленные во всех случаях, представляют кДНК для последовательности транскрипта РНК.
Подробное описание изобретения
Ниже приведено описание некоторых аспектов настоящего изобретения со ссылкой на примеры осуществления, приведенные в иллюстративных целях. Следует понимать, что многочисленные конкретные детали, взаимосвязи и способы изложены, чтобы обеспечить полное понимание сущности настоящего изобретения. Специалист в данной области техники, однако, легко поймет, что изобретение может быть осуществлено на практике без одной или более конкретных деталей или с помощью других способов. Настоящее изобретение не ограничивается порядком действий или событий, поскольку некоторые действия могут осуществляться в другом порядке и/или одновременно с другими действиями или событиями. Кроме того, не все проиллюстрированные действия или события необходимы для реализации методологии в соответствии с настоящим изобретением.
Все гены, названия генов и генные продукты, раскрытые в настоящей заявке, как подразумевается, соответствуют гомологам из любых видов, для которых применимы композиции и способы, раскрытые в настоящей заявке. Таким образом, термины включают, но не ограничиваются ими, гены и генные продукты человека и мыши. Следует понимать, что если раскрыт ген или генный продукт конкретного вида, то это раскрытие предназначено только для примера и не должно интерпретироваться как ограничивающее область изобретения, если из контекста, в котором оно приведено, прямо не следует иное. Так, например, гены, раскрытые в настоящей заявке, которые в некоторых вариантах реализации настоящего изобретения относятся к нуклеиновой кислоте и аминокислотным последовательностям млекопитающих, включают гомологичные и/или ортологичные гены и генные продукты других животных, включая, но не ограничиваясь ими, других млекопитающих, рыб, амфибий, рептилий и птиц. В другом варианте реализации настоящего изобретения гены или последовательности нуклеиновой кислоты являются человеческими.
Определения.
В настоящей заявке терминология предназначена только для описания конкретных вариантов реализации настоящего изобретения и не предназначена для ограничения объема настоящего изобретения. В настоящей заявке формы единственного числа также включают формы множественного числа, если из контекста явно не следует иное. Кроме того, применительно к терминам "включая", "включает", "имеющий", "имеет", "с" или их вариантам, используемым в подробном описании и/или формуле изобретения, указанные термины являются включающими, аналогично термину "содержащий".
Термин "примерно" или "приблизительно" означает величину в допустимых пределах погрешности для конкретного значения, как определено специалистом в данной области техники, которая частично будет зависеть от способа измерения или определения значения, т.е. от ограничений системы измерения. Например, "примерно" может означать в пределах 1 или более чем 1 стандартного отклонения в соответствии с практикой, принятой в данной области техники. Кроме того, "примерно" может означать диапазон до 20%, предпочтительно до 10%, более предпочтительно до 5% и еще более предпочтительно до 1% от заданного значения. В другом варианте, особенно в отношении биологических систем и процессов, термин может означать величину предпочтительно в пределах 5-кратного и более предпочтительно в пределах 2-кратного порядка какого-либо значения. В случае, когда конкретные значения описаны в заявке и формуле изобретения, если не указано иное, следует предполагать, что термин "примерно" означает величину в допустимых пределах погрешности для конкретного значения.
В настоящей заявке термин "мРНК" означает известный в настоящее время транскрипт(ы) мРНК целевого гена и любые другие транскрипты, которые могут быть выявлены.
В настоящей заявке термины "δΟΝχΑ" и "альфа-субъединица потенциалзависимых натриевых каналов" включают всех членов семейства, мутантные варианты, аллели, изоформы, фрагменты, виды, кодирующие и некодирующие последовательности, смысловые и антисмысловые цепи полинуклеотидов и т.д. Семейство генов δСNxΑ состоит из 11 известных членов (86Ν1Α δСN2Α, δСN3Α, δСN4Α, δСN5Α, δ('Ν7Α (также известный как δСN6Α), δСN8Α, δСN9Α, δСN10Α, δСN11Α и δСN12Α).
В настоящей заявке термины "альфа-субъединица Ι типа потенциалзависимого натриевого канала", δСN1Α, ΡΕΒ3, ΡΕΒ3Α, 0ΕΡδΡ2, ΗΒδΤ’Ι. ΝΑΟ, Ναν1.1, δί'.’Ν1. δΜΕΙ, альфа-1 субъединица белка натриевых каналов мозга, альфа-субъединица Ι типа белка натриевых каналов и альфа-субъединица потенциалзависимых натриевых каналов №-)У1.1 рассматриваются, как соответствующие литературным, и используются в настоящей заявке взаимозаменяемо.
Термин "нуклеотид" включает природные нуклеотиды, а также неприродные нуклеотиды. Для специалиста в данной области техники должно быть очевидно, что различные нуклеотиды, которые ранее рассматривали как "неприродные", были впоследствии обнаружены в природе. Таким образом, термин
- 5 029151
"нуклеотиды" включает не только молекулы, содержащие известные пуриновые и пиримидиновые гетероциклы, но также их гетероциклические аналоги и таутомеры. Иллюстративные примеры других типов нуклеотидов представляют собой молекулы, содержащие аденин, гуанин, тимин, цитозин, урацил, пурин, ксантин, диаминопурин, 8-оксо-И6-метиладенин, 7-деазаксантин, 7-деазагуанин, И4,И4-этаноцитозин, И6,И6-этано-2,6-диаминопурин, 5-метилцитозин, 5-(С3-С6)-алкинилцитозин, 5-фторурацил, 5бромурацил, псевдоизоцитозин, 2-гидрокси-5-метил-4-триазолопиридин, изоцитозин, изогуанин, инозин и "неприродные" нуклеотиды, описанные в работе Веппег с1 а1., в патенте США № 5432272. Термин "нуклеотид" предназначен для включения каждого и всех указанных примеров, а также их аналогов и таутомеров. Особенно интересными нуклеотидами являются нуклеотиды, содержащие аденин, гуанин, тимин, цитозин, урацил, которые рассматриваются как природные нуклеотиды по отношению к терапевтическому и диагностическому применению у человека. Нуклеотиды включают природные 2'-дезокси и 2'-гидроксильные сахара, например, как описано в работе КогпЪегд апб Вакег, ΌΝΑ РерПсШюп. 2пб Ей. (Ртеешап, §ап Ртапс18со, 1992), а также их аналоги.
В настоящей заявке термин "модуляция" означает увеличение (стимуляцию) или уменьшение (ингибирование) экспрессии гена. Термин "модулирование экспрессии" также означает усиление или уменьшение экспрессии данного белка путем воздействия на экспрессию или трансляцию РНК. В случае усиления экспрессии белка лекарственный препарат может блокировать экспрессию генов-супрессоров, например гена-супрессора опухолей или любого другого генного продукта или мутированного гена, который приводит к подавлению или уменьшению экспрессии белкового продукта. В случае уменьшения экспрессии белка лекарственный препарат может непосредственно блокировать экспрессию данного гена или способствует ускоренному расщеплению РНК, которая транскрибируется с этого гена.
Термин "вариант" при использовании применительно к полинуклеотидной последовательности может включать полинуклеотидную последовательность, относящуюся к гену дикого типа. Это определение может также включать, например, "аллельные", "сплайсированные", "видовые" или "полиморфные" варианты. Сплайсированный вариант может иметь существенную идентичность с эталонной молекулой, но обычно будет иметь большее или меньшее количество полинуклеотидов вследствие альтернативного сплайсинга экзонов при процессинге мРНК. Соответствующий полипептид может обладать дополнительными функциональными доменами или не иметь доменов. Видовые варианты представляют собой полинуклеотидные последовательности, которые изменяются от одного вида к другому. Особенно полезными согласно настоящему изобретению являются варианты генных продуктов дикого типа. Варианты могут возникать вследствие по меньшей мере одной мутации в последовательности нуклеиновой кислоты и могут привести к изменению мРНК или полипептидов, чья структура или функция могут быть изменены или оставаться без изменений. Любой конкретный природный или рекомбинантный ген может не иметь ни одной, одну или много аллельных форм. Общие мутационные изменения, которые приводят к появлению вариантов, обычно объясняются природными удалениями, дополнениями или заменами нуклеотидов. Каждый из этих типов изменений может происходить само по себе или в комбинации с другими, один или несколько раз в конкретной последовательности.
Полученные в результате полипептиды в целом будут иметь значительную идентичность аминокислотной последовательности между собой. Полиморфный вариант представляет собой вариацию полинуклеотидной последовательности конкретного гена между особями данного вида. Полиморфные варианты также могут включать "однонуклеотидный полиморфизм" (8ΝΡ) или однонуклеотидные мутации, в которых полинуклеотидная последовательность отличается одним основанием. Наличие δΝΡδ может указывать, например, на определенную популяцию с предрасположенностью к болезненному состоянию, то есть восприимчивость по сравнению с устойчивостью.
"Производный" полипептид или пептид это тот, который модифицирован, например, путем гликозилирования, пегилирования, фосфорилирования, сульфатирования, восстановления/алкилирования, ацилирования, химического связывания или щадящей обработки формалином. Производное может также быть модифицировано, чтобы содержать детектируемую метку, прямо или косвенно, включая, но не ограничиваясь перечисленными, радиоизотопную, флуоресцентную и ферментную метку.
В настоящей заявке термин "животное" или "пациент" включает, например, людей, овец, лосей, оленей, муловых оленей, норок, млекопитающих, обезьян, лошадей, крупный рогатый скот, свиней, коз, собак, кошек, крыс, мышей, птиц, кур, рептилий, рыб, насекомых и паукообразных.
Термин "млекопитающее" включает теплокровных млекопитающих, которые, как правило, находятся под медицинским наблюдением (например, людей и домашних животных). Примеры включают кошек, собак, лошадей, крупный рогатый скот или человека, а также просто человека.
Термин "лечить" или "лечение" охватывает лечение болезненного состояния у млекопитающего и включает: (а) предотвращение развития болезненного состояния у млекопитающего, в частности, если указанное млекопитающее предрасположено к болезненному состоянию, но у которого это состояние еще не было диагностировано; (б) ингибирование болезненного состояния, например купирование его развития; и/или (в) облегчение болезненного состояния, например, вызывая регрессию болезненного состояния до достижения желаемой конечной точки. Лечение также включает улучшение симптома заболевания (например, уменьшение боли или дискомфорта), где улучшение может как непосредственно
- 6 029151
влиять на заболевание, так и не влиять на него (например, причина, передача, выраженность и т.д.).
"Неврологическое заболевание или нарушение" относится к любому заболеванию или нарушению
нервной системы и/или зрительной системы. "Неврологическое заболевание или нарушение" включает заболевание или нарушение, которое связано с центральной нервной системой (головной мозг, ствол мозга и мозжечок), периферической нервной системой (включая черепно-мозговые нервы) и вегетативной нервной системой (части, которые расположены в обеих центральной и периферической нервной системах). Примеры неврологических нарушений включают, но не ограничиваются ими, головную боль, ступор и кому, деменцию, приступы, нарушения сна, травмы, инфекции, новообразования, нейроофтальмологические нарушения, двигательные нарушения, демиелинизирующие заболевания, заболевания спинного мозга и периферических нервов, мышц и нервно-мышечных синапсов. Зависимость и психические заболевания включают, но не ограничиваются ими, биполярное расстройство и шизофрению и также включены в определение неврологического нарушения. Ниже приведен список нескольких неврологических нарушений, симптомов, признаков и синдромов, которые можно лечить с помощью малых молекул, фармацевтических композиций и способов в соответствии с настоящим изобретением: приобретенная эпилептиформная афазия; острый рассеянный энцефаломиелит; адренолейкодистрофия; возрастная макулярная дегенерация; агенезия мозолистого тела; агнозия; синдром Айкарди; болезнь Александера; синдром Альперса; переменная гемиплегия; сосудистая деменция; боковой амиотрофический склероз; анэнцефалия; синдром Энгельмана; ангиоматоз; кислородное голодание; афазия; апраксия; паутинная киста; арахноидит; аномалия Арнольда-Киари; артериовенозная мальформация; синдром Аспергера; синдром атаксии-телеангиэктазии; дефицит внимания и гиперактивности; аутизм; вегетативная дисфункция; боли в спине; болезнь Баттен; болезнь Бехчета; паралич Белла; доброкачественный идиопатический блефароспазм; доброкачественная фокальная амиотрофия; доброкачественная внутричерепная гипертензия, болезнь Бинсвангера; блефароспазм; синдром Блоха-Сульцбергера; травма плечевого сплетения; абсцесс мозга; черепно-мозговая травма; опухоли головного мозга (включая глиобластомы мозга); опухоли спинного мозга; синдром Броун-Секар; болезнь Канавана; кистевой туннельный синдром; каузалгия; таламический синдром; центральный понтинный миелинолиз; цефалическое расстройство; церебральная аневризма; церебральный артериосклероз; атрофия головного мозга; церебральный гигантизм; церебральный паралич; заболевание Шарко-Мари-Тута; невропатия и невропатическая боль, вызванная химиотерапией; аномалия Киари; хорея; хроническая воспалительная демиелинизирующая полинейропатия; хроническая боль; хронический региональный болевой синдром; синдром КоффинаЛоури; кома, включая стойкое вегетативное состояние; врожденная диплегия лица; кортикобазальная дегенерация; черепной артериит; краниосиностоз; болезнь Крейтцфельдта-Якоба; кумулятивные травматические нарушения; синдром Кушинга; цитомегалическая болезнь с тельцами включения; цитомегаловирусная инфекция; синдром танцующих глаз-танцующих ног; синдром Денди-Уокера, болезнь Доусона; синдром Де Мерсье; паралич Дежерин-Клюмпке; деменция; дерматомиозит; диабетическая невропатия; диффузный склероз; синдром Драве, дисаутономия; дисграфия; дислексия; дистония; ранняя детская эпилептическая энцефалопатия; синдром "пустого турецкого седла"; энцефалит; энцефалоцеле; энцефалотригеминальный ангиоматоз; эпилепсия; паралич Эрба; эссенциальный тремор; болезнь Фабри; синдром Фара; обмороки; семейный спастический паралич; фебрильные судороги; синдром Фишера; атаксия Фридрейха; лобно-височная деменция и другие "таупатии"; болезнь Гоше; синдром Герстманна; артериит гигантских клеток; цитомегалия гигантских клеток; лейкодистрофия глобоидных клеток; синдром Гийена-Барре; НТЬУ-1-ассоциированная миелопатия; болезнь Галлерворден-Шпаца; черепно-мозговая травма; головная боль; гемифациальный спазм; наследственная спастическая параплегия; болезнь Рефсума; синдром Ханта; опоясывающий лишай, синдром Хираяма; ВИЧ-ассоциированная деменция и нейропатия (также неврологические проявления СПИДа); голопрозэнцефалия; болезнь Хантингтона и другие заболевания полиглутаминовых повторов; гидроанэнцефалия; гидроцефалия; гиперкортицизм; гипоксия; иммуноопосредованный энцефаломиелит; миозит с тельцами включений; недержание пигмента; детская болезнь накопления фитановой кислоты; детская болезнь Рефсума; детские спазмы; воспалительные миопатии; внутричерепная киста; внутричерепная гипертензия; синдром Жубера; синдром Кернса-Сейра; болезнь Кеннеди; синдром Кинсбурна; синдром Клиппеля-Фейля; болезнь Крабе; болезнь Кугельберга-Веландер; куру, болезнь Лафора; миастенический синдром Ламберта-Итона; синдром Ландау-Клеффнера; латеральный медуллярный (Валленберга) синдром; нарушение обучаемости; болезнь Лея; синдром Леннокса-Гасто; синдром Леша-Нихана; лейкодистрофия; деменция с тельцами Леви; лиссэнцефалия; синдром "запертого внутри"; болезнь Лу Герига (т.е. заболевание двигательных нейронов или боковой амиотрофический склероз); болезнь поясничного диска; неврологические осложнения болезни Лайма; болезнь Мачадо-Джозефа; макроэнцефалия; мегаэнцефалия; синдром МелькерсонаРозенталь; болезнь Меньера; менингит, болезнь Менкеса; метахроматическая лейкодистрофия; микроцефалия; мигрень, синдром Миллера Фишера; микроинсульты; митохондриальные миопатии; синдромом Мебиуса; болезнь Арана-Дюшена; заболевания двигательных нейронов; болезнь мойя-мойя; мукополисахаридозы; многопараметрическая деменция; мультифокальная моторная нейропатия; рассеянный склероз и другие демиелинизирующие нарушения; мультисистемная атрофия с ортостатической гипотензией; мышечная дистрофия; миастения; миелокластический диффузный склероз; миоклоническая энцефалопа- 7 029151
тия младенцев; миоклонус; миопатия; врожденная миотония; нарколепсия; нейрофиброматоз; злокачественный нейролептический синдром; неврологические проявления СПИДа; неврологические осложнения волчанки; нейромиотония; нейронный восковидный липофусциноз; нарушения миграции нейронов; болезнь Ниман-Пика, синдром О'Салливана-Маклеода; затылочная невралгия; скрытая дизрафия спинного мозга; синдром Отахара; оливомостомозжечковая атрофия; синдром пляшущих глаз; неврит зрительного нерва; ортостатическая гипотензия; синдром перегрузки; парестезии; нейродегенеративное заболевание или нарушение (болезнь Паркинсона, болезнь Хантингтона, болезнь Альцгеймера, боковой амиотрофический склероз (АЬ§), деменция, рассеянный склероз и другие заболевания и нарушения, связанные с гибелью нейронов); врожденная парамиотония; паранеопластические заболевания; пароксизмальные приступы, синдром Парри-Ромберга; болезнь Пелицеуса-Мерцбахера; периодические параличи; периферическая нейропатия; болезненная невропатия и невропатическая боль; стойкое вегетативное состояние; распространенное нарушение развития; световой чихательный рефлекс; болезнь накопления фитановой кислоты; болезнь Пика; защемление нерва; опухоли гипофиза; полимиозит; порэнцефалия; синдром постполиомиелита; постгерпетическая невралгия; постинфекционный энцефаломиелит; постуральная гипотензия; синдром Прадера-Вилли; первичный боковой склероз; прионные заболевания; прогрессивная гемифациальная атрофия; прогрессивная мультифокальная лейкоэнцефалопатия; прогрессивная склерозирующая полидистрофия; прогрессирующий супрануклеарный паралич; идиопатическая внутричерепная гипертензия; синдром Рамсея-Ханта (типы I и II); энцефалит Расмуссена; синдром рефлекторной симпатической дистрофии; болезнь Рефсума; повторяющиеся нарушения движения; повторяющиеся стрессовые травмы; синдром беспокойных ног; ретровирус-ассоциированная миелопатия; синдром Ретта, синдром Рейе; пляска святого Витта; болезнь Сандхоффа; болезнь Шильдера; шизэнцефалия; септооптическая дисплазия; тяжелая миоклоническая эпилепсия новорожденных; синдром тряски младенца; опоясывающий лишай, синдром Шая-Дрейджера; синдром Шегрена; апноэ сна, синдром Сото; спастичность; расщепление позвоночника; повреждение спинного мозга; опухоли спинного мозга; спинальная мышечная атрофия; синдром скованного человека; инсульт; синдром Штурге-Вебера; подострый склерозирующий панэнцефалит; подкорковая артериосклеротическая энцефалопатия; хорея Сиденхама; обмороки; сирингомиелия; поздняя дискинезия; болезнь Тея-Сакса; височный артериит; скрытая дизрафия спинного мозга; болезнь Томсена; компрессионный синдром верхней апертуры грудной клетки; невралгия тройничного нерва; паралич Тодда; синдром Туретта; транзиторная ишемическая атака; передающиеся губчатые энцефалопатии; поперечный миелит; черепно-мозговая травма; тремор; невралгия тройничного нерва; тропический спастический парапарез; туберозный склероз; сосудистая деменция (слабоумие при обширном инфаркте); васкулит, включая височный артериит; болезнь Гиппеля-Линдау; синдром Валленберга; болезнь Верднига-Гоффмана; синдром Веста; синдром удара хлыстом; синдром Вильямса; болезнь Вильсона и синдром Зеллвегера.
Сердечно-сосудистые заболевания или нарушения включают заболевания, которые могут быть причиной ишемии или вызваны реперфузией сердца. Примеры включают, но не ограничиваются ими, атеросклероз, болезни коронарных артерий, гранулематозный миокардит, хронический миокардит (не гранулематозный), первичную гипертрофическую кардиомиопатию, заболевания периферических артерий (РАИ), заболевания периферических сосудов, тромбоэмболии, легочную эмболию, инсульт, стенокардию, инфаркт миокарда, повреждения сердечнососудистых тканей, вызванные остановкой сердца, повреждения сердечнососудистых тканей, вызванные сердечным шунтом, кардиогенный шок и связанные состояния, которые должны быть известны специалистам с обычной квалификацией в данной области, или которые включают дисфункцию или повреждение тканей сердца или сосудов, особенно, но не ограничиваясь им, повреждение тканей, связанное с активацией §СЫ1А. Сердечно-сосудистые заболевания включают, но не ограничиваются ими, атеросклероз, гранулематозной миокардит, инфаркт миокарда, фиброз миокарда, вторичный по отношению к клапанной болезни сердца, фиброз миокарда без первичного миокарда, гипертрофическую кардиомиопатию и хронический миокардит (не гранулематозный).
Примеры заболеваний или нарушений, связанных с дисфункцией натриевых каналов включают, но не ограничиваются ими, злокачественную гипертермию, миастению, эпизодическую атаксию, нейропатическую и воспалительную боль, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, шизофрению, гиперэкплексию, δΜΕΙ, РЕВ3, семейную гемиплегическую мигрень 3 типа, миотонии, такие как гипо- и гиперкалеимический периодический паралич, врожденную парамиотонию и усугубляемую калием миотонию, а также сердечные аритмии, такие как синдром удлинения интервала рТ.
Мишени. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения мишени для модуляции включают последовательности нуклеиновых кислот членов семейства альфа-субъединиц потенциалзависимых натриевых каналов (§СЫхА), включая, но не ограничиваясь ими, смысловые и/или антисмысловые некодирующие и/или кодирующие последовательности, а также белковые последовательности, связанные с транскрипцией и/или трансляцией и/или модуляцией ЗСНхА. Предпочтительной мишенью является канал 8СЫ1А.
Потенциалзависимые ионные каналы представляют собой класс трансмембранных белков, которые обеспечивают основу для клеточной возбудимости и способности передавать информацию с помощью мембранных потенциалов, генерируемых ионными потоками. Потенциалзависимые натриевые каналы
- 8 029151
отвечают за генерацию и распространение потенциалов действия в большинстве электрически возбудимых клеток, включая нейроны, клетки сердца и мышцы. Электрическая активность инициируется деполяризацией мембраны, открывающей трансмембранные каналы, которые высокоселективны в отношении ионов натрия. Ионы затем направляются внутрь клетки через открытые каналы за счет электрохимического градиента. Хотя характеристики инициируемых натрием потенциалов действия в различных тканях сопоставимы, электрофизиологические исследования показали, что существует несколько структурно и функционально различных натриевых каналов, также были клонированы многочисленные гены, кодирующие натриевые каналы. Ген §СИ1Л принадлежит к семейству генов потенциалзависимых натриевых каналов (семейство 8СИхЛ).
Потенциалзависимые натриевые каналы играют важную роль в генерации потенциала действия в нервных клетках и мышцах. Альфа-субъединицы (ЗСИхА) являются основными компонентами каналов и при экспрессии в клетках в условиях ίη νίνο обеспечивают генерацию ионного тока. Однако в природе потенциалзависимые натриевые каналы содержат две дополнительные регуляторные бета-субъединицы. Роль этих субъединиц заключается в модификации локализации и плотности натриевых каналов, а также их кинетических свойств, главным образом путем воздействия на инактивацию натриевых токов. Мутации в гене δί','ΝΙΒ связаны с ΟΕΡ3+, синдромом Бругада и пороками проводимости сердца, неспецифическими. Мутации в 8ί'.'Ν3Β также связаны с синдромом Бругада, мутации в 8ί'.'Ν4Β вызывают синдром удлинения интервала ЦТ-10.
Согласно одному варианту реализации малые молекулы выбирают из группы, состоящей из милнаципрана, торсемида, рисперидона, пинацидила, бенидипина, кетоконазола, эбселена, тадалафила, зеранола, нефазодона, ломеризина, икариина, омепразола, Ь-694,247, нитрендипина, ниметазепама, амлексанокса, мозаприда, сертралина или станозолола или фармацевтически приемлемых солей, изомеров, энантиомеров, изоформ, полиморфов, гидратов, сольватов или пролекарственных форм указанных соединений, и применяют для предотвращения или лечения заболеваний или нарушений, связанных с членами семейства ЗСИхА. Примеры заболеваний и нарушений, вызванных альфа-субъединицей I типа потенциалзависимых натриевых каналов (ЗСИ1А), которые можно лечить с помощью лекарственных препаратов и/или с помощью клеток/тканей, регенерированных из стволовых клеток, полученных с использованием соединений, включают неврологическое заболевание или нарушение; судороги; боль (включая хроническую боль); нарушение электрической возбудимости, включая дисфункцию натриевых каналов; заболевание или нарушение, связанное с дисфункцией натриевых каналов; заболевание или нарушение, связанное с нарушением регуляции активности альфа-субъединицы потенциалзависимых натриевых каналов (например, паралич, гиперкалиемический периодический паралич, врожденная парамиотония, усугубляемая калием миотония, синдром удлинения ЦТ 3, заболевание двигательной концевой пластинки, атаксия и др.); заболевание желудочно-кишечного тракта, вызванное дисфункцией кишечной нервной системы (например, колит, илеит, синдром воспалительного кишечника и т.д.); сердечно-сосудистое заболевание или нарушение (например, гипертензия, застойная сердечная недостаточность и т.д.); заболевание или нарушение мочеполовой системы с участием симпатической и парасимпатической иннервации (например, доброкачественная гиперплазия предстательной железы, импотенция); заболевание или нарушение, связанное с нервно-мышечной системой (например, мышечная дистрофия, рассеянный склероз, эпилепсия, аутизм, мигрень (например, спорадические и семейные гемиплегические мигрени и т.д.); тяжелая миоклоническая эпилепсия младенчества (3ΜΕΙ) или синдром Драве; генерализованная эпилепсия с фебрильными судорогами плюс (0ЕРЗ+)и т.д.); и приступы, связанные с δί','ΝΙΑ.
Согласно одному варианту реализации малые молекулы увеличивают уровень полинуклеотиды δί',’ΝΙΑ. δί',’ΝΙА-мишени включают варианты δί',’ΝΙΑ; мутированные варианты δί',’ΝΙА, включая δΝΡδ; некодирующие последовательности δСN1Α; аллели, изоформы, фрагменты и тому подобное. Предпочтительно малую молекулу выбирают из группы, состоящей из милнаципрана, торасемида, респеридона, пинацидила, бенидипина, кетоконазола, эбселена, тадалафила, зеранола, нефазодона, ломеризина, икариина, омепразола, Ь-694,247, нитрендипина, ниметазепама, амлексанокса, мозаприда, сертралина или станозолола или фармацевтически приемлемых солей, изомеров, энантиомеров, изоформ, полиморфов, гидратов, сольватов или пролекарственных форм указанных соединений.
В соответствии с вариантами реализации настоящего изобретения молекула нуклеиновой кислотымишени не ограничивается только полинуклеотидами δСN1Α, но распространяется на любые изоформы, рецепторы, гомологи, некодирующие участки δСN1А и т.п., например семейство δСNxΑ.
Согласно другому варианту реализации малая молекула модулирует δСN1 А-мишени, включая, но не ограничиваясь ими, варианты, аллели, гомологи, мутированные варианты, производные, фрагменты и комплементарные последовательности к ним.
Согласно одному варианту реализации малые молекулы модулируют экспрессию альфасубъединицы I типа потенциалзависимых натриевых каналов ^СЫ1А) и модулируют экспрессию и/или функцию альфа-субъединицы I типа потенциалзависимых натриевых каналов ^СЫ1А) (ЪЕЦ ΙΌ ΝΟ:1).
Альтернативные транскрипты РНК могут быть получены из той же области геномной ДНК. Указанные альтернативные транскрипты в целом известны как "сплайс-варианты". В частности, "пре-мРНК варианты" представляют собой транскрипты, полученные из геномной ДНК, которая содержит интрон- 9 029151
ные и экзонные последовательности.
После удаления одного или более участков экзонов или интронов или их частей во время сплайсинга из вариантов пре-мРНК получают меньшие "варианты" мРНК. Эти варианты мРНК также известны как "варианты альтернативного сплайсинга". Если не происходит сплайсинг варианта пре-мРНК, то вариант пре-мРНК идентичен варианту мРНК.
Варианты могут быть получены путем использования альтернативных сигналов, чтобы начать или остановить транскрипцию. Пре-мРНК и мРНК могут иметь более одного стартового кодона или стоп кодона. Варианты, полученные из пре-мРНК или мРНК, в которых используются альтернативные стартовые кодоны, известны как "альтернативные старт-варианты" этой пре-мРНК или мРНК. Транскрипты, которые используют альтернативный стоп-кодон, известны как "альтернативные стоп-варианты" этой пре-мРНК или мРНК. Один конкретный тип альтернативного стоп-варианта представляет собой "поли/А [-вариант". в котором полученные мультитранскрипты являются результатом альтернативного выбора одного из "поли(А)-стоп-сигналов" аппаратом транскрипции, таким образом продуцирующего транскрипты, которые заканчиваются на уникальных сайтах поли(А). Применительно к настоящему изобретению типы вариантов, описанных в настоящей заявке, также являются вариантами нуклеиновых кислот-мишеней.
Несмотря на то, что в настоящей заявке представлены конкретные последовательности некоторых примеров сегментов-мишеней для специалиста в данной области будет очевидно, что они приведены в целях иллюстрации и описания конкретных вариантов реализации в пределах объема настоящего изобретения. Дополнительные сегменты-мишени могут быть легко определены специалистом с обычной квалификацией в данной области применительно к настоящему описанию.
Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения "предпочтительные сегментымишени", определенные в настоящей заявке, могут быть использованы для скрининга дополнительных соединений, которые модулируют экспрессию полинуклеотидных последовательностей альфасубъединицы I типа потенциалзависимых натриевых каналов (8ΟΝ1Α). "Модуляторы" - это соединения, которые уменьшают или увеличивают экспрессию молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей альфасубъединицу I типа потенциалзависимого натриевого канала (8ΟΝ1Α), или соответствующего ей белка. Метод скрининга включает стадии приведения в контакт предпочтительного сегмента-мишени молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей смысловые или природные антисмысловые полинуклеотиды альфасубъединицы I типа потенциалзависимых натриевых каналов (8ΟΝ1Α), или соответствующего ей белка с одним или более вероятных модуляторов, и выбор одного или более вероятных модуляторов, которые уменьшают или увеличивают экспрессию молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полинуклеотиды альфа-субъединицы I типа потенциалзависимых натриевых каналов (8ΟΝ1Α), или соответствующего ей белка. После того как будет показано, что вероятный модулятор способен модулировать (например, уменьшать или увеличивать) экспрессию молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полинуклеотиды альфа-субъединицы потенциалзависимых натриевых каналов (δΟΝχΑ), модулятор затем может быть использован для дальнейшего поискового исследования функции полинуклеотидов альфа-субъединицы потенциалзависимых натриевых каналов (δΟΝχΑ) или для применения в качестве исследовательского, диагностического или терапевтического агента в соответствии с настоящим изобретением.
Малые молекулы, применяемые в соответствии с настоящим изобретением, можно целесообразно и рутинно изготавливать с помощью хорошо известных способов синтеза. Для данного синтеза также могут быть использованы любые другие средства; фактический синтез малых молекул находится в пределах квалификации специалиста в данной области техники, либо такие молекулы могут быть получены от коммерческого продавца или поставщика. Каждая из предпочтительных молекул, применяемая согласно способам в соответствии с настоящим изобретением, является известным фармацевтическим лекарственным продуктом и может быть приобретена или получена от производителей активных фармацевтических ингредиентов. Кроме того, способы синтеза таких лекарственных препаратов опубликованы, и специалист с обычной квалификацией в области синтетической химии может синтезировать такие лекарственные препараты с помощью известных способов, либо специалист с обычной квалификацией в данной области может разработать новые синтетические методы. Эти лекарственные препараты и их физические формы и соли могут быть модифицированы с помощью стандартных химических средств, чтобы получить пролекарственные формы. Указанные пролекарственные формы включают сложные эфиры и/или другие химические производные и/или их модификации, причем при введении пролекарственная форма расщепляется на известный активный фармацевтический ингредиент в лекарственной форме (лекарственный препарат). Эти лекарственные препараты в дальнейшем могут быть метаболизированы в известные активные метаболиты, и такие метаболиты включены в объем настоящего изобретения. Изобретение дополнительно включает энантиомеры и/или диастереомеры лекарственных продуктов, различные солевые формы, включая соли натрия и калия, а также гидраты и сольваты таких лекарственных продуктов. Изобретение дополнительно включает применение аморфных форм каждого из лекарственных продуктов или их солей в любой подходящей лекарственной форме. Если конкретный лекарственный продукт содержит остаток амина, настоящее изобретение дополнительно включает кислые соли таких продуктов, где противоион выбран из галогенида, такого как хлорид или бромид и тому подобных. Методы рекри- 10 029151
сталлизации и другие известные методы очистки могут быть использованы для приготовления кристаллических форм таких активных фармацевтических ингредиентов.
Перенос малой молекулы в клетку-хозяина или организм и определение ее влияния на активацию или подавление белка или РНК можно оценить несколькими методами, хорошо известными в данной области. Например, экспрессирующие 8ί'.'Ν1 А фибробласты и/или кератиноциты или другие желаемые типы клеток выбирают и выращивают для проведения конкретных исследований согласно настоящему изобретению. За день до эксперимента клетки высевают в плотности приблизительно 4х104/лунку в 24луночных планшетах в питательной среде и инкубируют при 37°С и 5% СО2 в течение ночи. На следующий день среду в 24-луночных планшетах заменяют свежей питательной средой (1 мл/лунку) и в клетки вводят низкомолекулярные соединения. Исходные растворы соединений готовят в ДМСО в концентрации 1 мМ. Во время эксперимента 1 мМ исходные растворы разбавляют до концентрации 1 мкМ в питательной среде. Для контрольных лунок используют ДМСО, разбавленный в соотношении 1:1000. После 24-48 ч инкубации при 37°С и 5% СО2 среду удаляют и РНК экстрагируют из клеток с использованием системы 8У То1а1 ΚΝΑ Ιδοίαΐίοη 8у81ет от Рготеда (каталожный номер Ζ3105) в соответствии с инструкциями производителя. Шестьсот нанограмм очищенной общей РНК добавляют в реакцию обратной транскрипции, которую проводят с использованием набора для синтеза 8ирег5спр1 У1ЬО οΌΝΑ от Ιηνίйодеп (каталожный номер 11754-250), как описано в инструкции изготовителя. кДНК из этой реакции обратной транскрипции используют для контроля экспрессии генов с помощью ПЦР в режиме реального времени с использованием ΑΒΙ Тадтап Сепе Ехртеккюп Μίχ (каталожный номер 4369510) и праймеров/зондов, разработанных ΑΒΙ (исследования Н§00374696_т1, Н§00897350_т1 или Н§00897341_т1 для 8ΟΝ1Α человека). Используют следующий цикл ПЦР: 50°С в течение 2 мин, 95°С в течение 10 мин, 40 циклов (95°С в течение 15 с, 60°С в течение 1 мин) с использованием системы 81ерОпе Р1и8 Кеа1 Типе РСК (АррПеб ВюхуДетЦ. Набор для 188 производится компанией ΑΒΙ (каталожный номер 4319413Е). Относительные изменения экспрессии генов после обработки соединениями рассчитывают на основании разности 188-нормированных значений ЙС1 между образцами, обработанными соединением или носителем.
Экспрессию РНК после добавления малой молекулы можно детектировать путем измерения ферментативной активности или активности белка-репортера. Например, кодирующий участок гена может быть использован для построения модельного контрольного гена путем вставки области, кодирующей белок-репортер, между геном и его поли(А)-сигнальной последовательностью в самореплицирующуюся плазмиду таким образом, что ген и репортер всегда будут экспрессироваться на одинаковом уровне. Эффективность отдельных малых молекул можно исследовать, наблюдая модуляцию репортерного гена. Репортерные гены, которые можно применять в способах согласно настоящему изобретению, включают синтазу ацетооксикислот (ΑΗΑ8), щелочную фосфатазу (ЩФ), бета-галактозидазу (^асΖ), бетаглюкуронидазу (СИ8), хлорамфеникол ацетилтрансферазу (САТ), зеленый флуоресцентный белок (СЕР), красный флуоресцентный белок (КЕР), желтый флуоресцентный белок (УЕР), голубой флуоресцентный белок (СЕР), пероксидазу хрена (НКР), люциферазу (Ьис), нопалинсинтазу (N08), октопинсинтазу (ОС8) и их производные. Существует ряд селективных маркеров, которые придают устойчивость к ампициллину, блеомицину, хлорамфениколу, гентамицину, гигромицину, канамицину, линкомицину, метотрексату, фосфинотрицину, пуромицину и тетрациклину. Методы определения модуляции репортерного гена хорошо известны в данной области и включают, но не ограничиваются ими, флуорометрические методы (например, флуоресцентная спектроскопия, сортировка флуоресцентно-активированных клеток (ЕΑС8), флуоресцентная микроскопия) и определение устойчивости к антибиотику.
Экспрессию белка 8ΟΝχΑ и мРНК можно исследовать с помощью методов, известных специалистам в данной области и описанных в настоящей заявке в других местах. Например, исследования, такие как иммуногистохимические, можно использовать для оценки уровня белка. Чтобы достичь этой цели, клетки будут выращены в 24-луночных планшетах с использованием соответствующих условий роста. Через сорок восемь часов после добавления малых соединений среда будет удалена, и клетки будут промыты 3 раза фосфатно-солевым буфером Дульбекко без кальция и магния (ФСБ) (МеШаЮсй каталожный номер 21-031-СУ). Затем ФСБ будет удален и клетки будут фиксированы в 24-луночном планшете с использованием 300 мкл 100% метанола в течение 15 мин при -20°С. После удаления метанола и промывки в ФСБ клетки проинкубируют с 3% перекисью водорода (ЕйНег СНенисак каталожный номер Н325-100) в течение 5 мин при 21°С. Клетки будут промыты три раза в течение 5 мин в ФСБ и затем проинкубированы с 300 мкл 0,1% бычьего сывороточного альбумина (БСА) (81дта, каталожный номер А-9647) в ФСБ в течение 30 мин при 21°С. Клетки будут промыты три раза в течение 5 мин в ФСБ и затем проинкубированы с 300 мкл раствора авидина (УесЮг ЬаЬогакопек, каталожный номер 8Р-2001) в течение 30 мин при 21°С. Клетки будут быстро промыты три раза в ФСБ и затем проинкубированы с раствором биотина (УесЮг ЬаЬогакопек, каталожный номер 8Р-2001) в течение 30 мин при 21°С. Клетки будут промыты три раза в ФСБ и затем проинкубированы в течение ночи при 4°С с 300 мкл на лунку кроличьего антитела, которое направлено к синтетическому пептиду (ЕЕ^ΚΚΥΥNΑΜΚΚ^С8ΚΚР), соответствующему Сконцевым аминокислотам 1491-1508 8ΟΝ1Α крысы ^Ьеат, каталожный номер аЬ24820; известно, что
- 11 029151
данное антитело распознает δΟΝΙΆ крысы, δΟΝΙΆ человека и δΟΝΙΆ мыши), разбавленным в ФСБ/БСА 0,1% в соотношении 1:250. После установления равновесия в планшете в течение 5 мин при 21°С клетки будут промыты три раза в течение 5 мин в ФСБ и затем проинкубированы с козьим антителом против 1§ кролика, разбавленным в ФСБ/БСА 0,1% в соотношении 1:200, в течение 30 мин при 21°С. Клетки будут промыты три раза в течение 5 мин в ФСБ и затем проинкубированы с 300 мкл раствора реагента А+В Уес1а81ат ЕШе АВС (УесЮг БаЬогаЮпсх. каталожный номер ПК-6101) в течение 30 мин; раствор реагента А+В Уес1а81аш ЕШе АВС будет приготовлен при 21°С за 30 мин до инкубации с клетками путем последовательного добавления и смешивания 2 капель реагента А к 5 мл ФСБ и затем 2 капель реагента В. Клетки будут промыты 3 раза в течение 5 мин в ФСБ при 21°С и затем проинкубированы с раствором диаминобензидина (ΌΑΒ) (УесЮг ЕаЬогаЮпе^ каталожный номер δΚ-4105), субстрата пероксидазы, до достижения окрашивания клеток; раствор субстрата пероксидазы ΌΑΒ будет восстановлен перед добавлением к клеткам путем смешивания 1 мл разбавителя 1ттРАСТ™ОАВ с 30 мкл концентрата хромогена 1тшРАСТ™ ΌΑΒ. При этом клетки будут быстро промыты три раза в ФСБ, и 300 мкл ФСБ будет оставлено в каждой лунке. Окрашивание клеток будет исследовано непосредственно в лунках 24-луночного планшета с использованием инвертированного микроскопа ΝίΚοη ЕсБрзе Τδ100, оснащенного камерой ΝίΚοη Όδ-Κί1, соединенной с устройством ΝίΚοη Όί§ίΐα1-δί§Εΐ, на экране ноутбука Эе11 ЬаШибе Ό630. Изображения отдельных лунок будут получены с помощью программного обеспечения №3-Е1сшсШ8 Ό версия 3.0, поставляемого с фотокамерой ΝίΚοη.
Также белок δΟΝ1Α можно количественно оценить с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА). Для количественной оценки клетки будут выращены в 24-луночных планшетах с использованием соответствующих условий роста. Через сорок восемь часов после добавления малых соединений среда будет удалена, и клетки будут промыты 3 раза фосфатно-солевым буфером Дульбекко без кальция и магния (ФСБ) (МеШа1есЬ, каталожный номер 21-031-СУ). Затем ФСБ будет удален и клетки будут фиксированы в 24-луночном планшете с использованием 100 мкл 100% метанола в течение 15 мин при -20°С. После удаления метанола и промывки в ФСБ клетки будут проинкубированы с 3% перекисью водорода (Р18йет СНеписак каталожный номер Н325-100) в течение 5 мин при 21°С. Клетки будут промыты три раза в течение 5 мин в ФСБ и затем проинкубированы со 100 мкл 0,1% бычьего сывороточного альбумина (БСА) (Зщпиг каталожный номер А-9647) в ФСБ в течение 30 мин при 21°С. Клетки будут промыты три раза в течение 5 мин в ФСБ и затем проинкубированы с 300 мкл раствора авидина (УесЮг ^аЬο^аίο^^е8, каталожный номер δΡ-2001) в течение 30 мин при 21°С. Клетки будут быстро промыты три раза в ФСБ и затем проинкубированы с раствором биотина (УесЮг ^аЬο^аίο^^е8, каталожный номер δΡ2001) в течение 30 мин при 21°С. Клетки будут промыты три раза в ФСБ и затем проинкубированы в течение ночи при 4°С со 100 мкл на лунку кроличьего антитела, направленного к синтетическому пептиду (ΕΕρΚΚΥΥΝΑΜΚΚΕΟδΚΚΡ), соответствующему С-концевым аминокислотам 1491-1508 δΟΝ1Α крысы (ЛЬеапт Каталожный номер аЬ24820; известно, что данное антитело распознает по меньшей мере δΟΝ1Α крысы, δΟΝ1Α человека и δΟΝ1Α мыши), разбавленным в ФСБ/БСА 0,1% в соотношении 1:250. После установления равновесия в планшете в течение 5 мин при 21°С клетки будут промыты три раза в течение 5 мин в ФСБ и затем проинкубированы с козьим антикроличьим антителом, разбавленным в ФСБ/БСА 0,1% в соотношении 1:200, в течение 30 мин при 21°С. Клетки будут промыты три раза в течение 5 мин в ФСБ и затем проинкубированы с 300 мкл раствора реагента А+В Уес1а81аШ ЕШе ΑΒС (УесЮг Еа^таШпез, каталожный номер ПК-6101) в течение 30 мин; раствор реагента А+В Уес1а81ат ЕШе ΑΒС будет приготовлен при 21°С за 30 мин до инкубации с клетками путем последовательного добавления и смешивания 2 капель реагента А в 5 мл ФСБ и затем 2 капель реагента В. Клетки будут промыты 3 раза в течение 5 мин в ФСБ при 21 °С и затем проинкубированы с раствором тетраметилбензидина (ТМВ) (ТНегию δ^ηΙίΙΈ каталожный номер Ν301), субстрата пероксидазы. После окрашивания супернатанта в синий цвет он будет перенесен в новый 96-луночный планшет для ИФА (Отешет Βίο Оие, каталожный номер 65121), затем будет добавлен 1М серной кислоты. Поглощение будут регистрировать при 450 нм с использованием спектрофотометра МЫШкам ЗрссМпп (Ткетю Зс1сЩ|Пс). Фоновый сигнал, регистрируемый в лунках, окрашенных кроличьим антимышиным 1§О в качестве первичного антитела ^Ьеат, каталожный номер аЬ6709), будут вычитать из всех значений для δΟΝ1Α и актина. Будет использовано кроличье антитело к актину от Α^πω (каталожный номер аЬ1801). Сигнал δΟΝ1Α будет нормализован по отношению к сигналу актина для каждого условия, и нормированные значения для каждого экспериментального варианта будут сопоставлены.
Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения экспрессию ЗСША (например, мРНК или белка) в образце (например, клетки или ткани в условиях ίη νίνο или ίη νίίτο), обработанном малой молекулой согласно настоящему изобретению, оценивают путем сравнения с экспрессией δΟΝ1Α в контрольном образце. Например, экспрессию белка или нуклеиновой кислоты можно сравнить, используя методы, известные специалистам в данной области техники, с экспрессией в образцах, обработанных имитирующим соединением, или в необработанных образцах. Согласно другому варианту в зависимости от желаемой информации сравнение может быть выполнено с образцом, обработанным контрольной неактивной молекулой. Согласно другому варианту разность уровней экспрессии белка ЗСША
- 12 029151
или нуклеиновой кислоты в обработанном по сравнению с необработанным образцом может быть сопоставлена с разностью уровней экспрессии другой нуклеиновой кислоты (включая любой стандарт по усмотрению исследователя, например, конститутивный ген) в обработанном образце по сравнению с необработанным образцом.
Наблюдаемые различия могут быть выражены по усмотрению, например, в виде отношения или фракции для использования в сравнении с контролем. Согласно некоторым вариантам реализации уровень мРНК или белка 8СЫ1Л в образце, обработанном антисмысловым олигонуклеотидом согласно настоящему изобретению, увеличивается или уменьшается примерно от 1,25 раза до приблизительно 10 раз или более по сравнению с необработанным образцом или образцом, обработанным контрольной нуклеиновой кислотой. Согласно некоторым вариантам реализации уровень мРНК или белка 8СЫ1Л увеличивается или уменьшается по меньшей мере приблизительно в 1,25 раза, по меньшей мере приблизительно в 1,3 раза, по меньшей мере приблизительно в 1,4 раза, по меньшей мере приблизительно в 1,5 раза, по меньшей мере приблизительно в 1,6 раза, по меньшей мере приблизительно в 1,7 раза, по меньшей мере приблизительно в 1,8 раза, по меньшей мере приблизительно в 2 раза, по меньшей мере приблизительно в 2,5 раза, по меньшей мере приблизительно в 3 раза, по меньшей мере приблизительно в 3,5 раза, по меньшей мере приблизительно в 4 раза, по меньшей мере, приблизительно в 4,5 раза, по меньшей мере приблизительно в 5 раз, по меньшей мере приблизительно в 5,5 раза, по меньшей мере приблизительно в 6 раз, по меньшей мере приблизительно 6,5 раза, по меньшей мере приблизительно в 7 раз, по меньшей мере приблизительно 7,5 раза, по меньшей мере приблизительно 8 раз, по меньшей мере приблизительно 8,5 раза, по меньшей мере приблизительно в 9 раз, по меньшей мере приблизительно 9,5 раза или по меньшей мере приблизительно в 10 раз или больше.
Помимо изменений экспрессии белка или мРНК 8СЫ1Л можно количественно оценить изменения функции канала Ыау1.1. Например, изменение амплитуды тока натрия, индуцированное активацией 8СЫ1Л под действием малых соединений, можно измерять в диссоциированных интернейронах гиппокампа. Для достижения этой цели гиппокампальные глутаматдекарбоксилаза(САП)-положительные клетки (биполярные ГАМК-эргические интернейроны) будут диссоциированы из 11-16-дневных крыс с помощью гидролиза проназой, а затем термолизином в буфере, который непрерывно оксигенируется смесью 95% О2 и 5% СО2. Диссоциированные клетки будут высеяны в чашки для культивирования тканей и обработаны выбранными низкомолекулярными соединениями в течение 24 ч, после чего будут выполнены электрофизиологические исследования. Токи будут зарегистрированы с использованием метода фиксации потенциала (пэтч-кламп) от целой клетки с помощью усилителя для фиксации потенциала ЕРС-9 (НЕКА). Пипетки для пэтч-кламп будут изготовлены с использованием типового устройства для вытягивания микропипеток Р-97 Напипд-Вгслуп (8ийет йМгитеШ). Стимуляцию и сбор данных будут проводить с помощью программы РиЬ8Е (версия 7.5; НЕКА Е1ек(тошк). Для экспериментов в режиме фиксации потенциала клетки будут постоянно омываться буфером для перфузии, содержащем, в мМ: 19,1 ЫаС1, 19,1 хлорида тетраэтиламмония, 0,95 ВаС12, 1,90 М§02, 52,4 СвСц 0,1 СйС12, 0,95 СаС12, 9,52 НЕРЕ8, 117 глюкозы, рН 7,35, с помощью перистальтического насоса. Пипетка для пэтч-кламп будет содержать, в мМ: 157 Ν-метил-Э-глюкамина, 126 НС1, 0,90 ЫаС1, 3,60 МдС12, 9,01 ЭГТА, 1,80 АТР-Ыа2, 9,01 НЕРЕ8, 4,50 креатинфосфата, рН 7,2. Потенциал клетки буду поддерживать на уровне -100 мВ и деполяризующие шаги от -60 до -15 мВ будут применять с интервалом 5 мВ. Максимальная плотность тока будет определена и сопоставлена между обработанными и необработанными нейронами.
Также будут оценены изменения характеристик тока натрия, вызванные активацией 8ί'.'Ν1 А в интернейронах гиппокампа. САЭ-положительные клетки гиппокампа (биполярные ГАМК-эргические интернейроны) будут диссоциированы из 11-16 дневных крыс путем гидролиза проназой, а затем термолизином в буфере, который непрерывно оксигенируется смесью 95% О2 и 5% СО2. Диссоциированные клетки будут высеяны в чашки для культивирования тканей и обработаны выбранными низкомолекулярными соединениями в течение 24 ч, после чего будут выполнены электрофизиологические исследования. Токи будут зарегистрированы с использованием метода фиксации потенциала (пэтч-кламп) от целой клетки с помощью усилителя для фиксации потенциала ЕРС-9 (НЕКА). Пипетки для пэтч-кламп будут изготовлены с использованием типового устройства для вытягивания микропипеток Р-97 Напппд-Вго\уп (8ийет йЩгитеШ). Стимуляцию и сбор данных будут проводить с помощью программы РЦР8Е (версия 7.5; НЕКА Е1ек(тошк). Для экспериментов в режиме фиксации потенциала клетки будут непрерывно омываться буфером для перфузии, содержащем, в мМ: 19,1 №С1, 19,1 хлорида тетраэтиламмония, 0,95 ВаС12, 1,90 МдС12, 52,4 С§С1, 0,1 СйС12, 0,95 СаС12, 9,52 НЕРЕ8, 117 глюкозы, рН 7,35, с помощью перистальтического насоса. Пипетка для пэтч-кламп будет содержать, в мМ: 157 Ν-метил-Э-глюкамина, 126 НС1, 0,90 №С1, 3,60 М§С12, 9,01 ЭГТА, 1,80 АТР-\а;. 9,01 НЕРЕ8, 4,50 креатинфосфата, рН 7,2. Потенциал клетки будут поддерживать на уровне -100 мВ и деполяризующие шаги от -60 до -15 мВ будут применять с интервалом 5 мВ. Кривые активации (отношение проводимость/потенциал) будут рассчитаны на основании отношений ток/потенциал в соответствии с уравнением д = 1шЛУ-Е№), где ΙΝ представляет максимальный ток натрия, измеренный при потенциале V, и Еш представляет равновесный потенциал. Функция Больцмана будет использована для аппроксимации нормализованных кривых активации и инактивации, после чего будут определены характеристики кривой. Константы времени инактивации
- 13 029151
будут оценивать с помощью аппроксимации времени спада тока с использованием моноэкспоненциальной функции. Профили активации и инактивации будут сопоставлены между обработанными и необработанными клетками, чтобы определить, изменила ли обработка характеристики тока. Для экспериментов в режиме фиксации тока потенциал клетки будут фиксировать на уровне -80 мВ, и характер активности клеток будут регистрировать после 800 мс импульсов, применяемых с шагом в 10 пА. Буфер в электроде будет содержать, в мМ: 135 глюконата калия, 20 КС1, 2 МдС12, 2 АТР-Ыа2, 0,3 ГТФ-Ыа и 10 НЕРЕ8, 0,2 ЭГТА, рН 7,3. Буфер для перфузии будет содержать, мМ: 140 №С1, 5 КС1, 2 СаС12, 1 МдС12, 10 НЕРЕ8, 10 глюкозы и рН 7,4, доведенный с помощью ЫаОН. Отношения ввод-вывод (количество потенциалов действия/введенный ток, пА), полуширина потенциал действия, амплитуда пика и декремент пика будут измерены и сопоставлены между обработанными и необработанными ингибиторными интернейронами гиппокампа. Регистрацию параметров тока через одиночный канал будут выполнять в режиме фиксации потенциала "наружная сторона наружу" с использованием тех же растворов и протоколов, как описано выше для регистрации в режиме фиксации потенциала от целой клетки.
Активация 8США, индуцированная обработкой низкомолекулярными соединениями, может также влиять на внутриклеточный уровень натрия. Такие изменения можно оценить в следующих экспериментах. Клетки будут выращены в 96-луночном планшете и обработаны различными концентрациями малых соединений. Через 48 ч клетки будут промыты буфером Локка (8,6 мМ НЕРЕ8, 5,6 мМ КС1, 154 мМ №01, 5,6 мМ глюкозы, 1,0 мМ МдС12, 2,3 мМ СаС12, 0,0001 мМ глицина, рН 7,4). Фоновая флуоресценция будет измерена перед загрузкой красителя внутрь клеток. Краситель будет загружен внутрь клеток путем инкубации клеток с красителем в течение 1 ч при 37°С с 10 мкМ 8ВР1-АМ (краситель, связывающийся с Ыа+), 0,04% плюроновой кислоты Р-127 (Мо1еси1аг РтоЬек, Орегон, США) и 2,5 мМ пробенецида в буфере Локка (50 мкл/лунку). При этом клетки будут дважды промыты 2,5 мМ пробенецида в буфере Локка (150 мкл/лунку). Планшеты, содержащие загруженные клетки, будут помещены внутрь считывающего устройства, например, РБЕХХаОоп™ II (Мо1еси1аг ОеНсе^ Саннивейл, Калифорния, США). Клетки, загруженные красителем, будут возбуждать при 340 нм и 380 нм; испускание будут регистрировать при 505 нм. Базовая линия сигнала будет измерена в это же время. После измерения базовой линии сигнала в отдельные лунки с клетками в качестве положительного контроля будет добавлен монензин (ЕМИ, Гиббстоун, Нью-Джерси, США, каталожный номер 475895) или грамицидин (ЕМИ, Гиббстоун, Нью-Джерси, США, каталожный номер 368020-25мг). Обработка ТТХ (1 мкМ) будет использована в качестве отрицательного контроля. Затем относительная экспрессия активного 8ί'.'Ν1Α на плазматической мембране в клетках, предварительно обработанных активными соединениями, будет определена в сравнении с контролем, обработанным носителем. Сигналы будут рассчитаны как отношение интенсивностей испускания, регистрируемого при 505 нм, при длине волны возбуждении красителя 340 нм и 380 нм с использованием программного обеспечения Ехсе1.
Влияние активации 8ί'.'Ν1Α на уровни натрия можно также оценить в одиночной клетке. Клетки будут выращены на покровном стекле или в 96-луночном планшете и обработаны различными концентрациями малых соединений. Через 48 ч клетки будут промыты буфером Локка (8,6 мМ НЕРЕ8, 5,6 мМ КС1, 154 мМ ЫаС1, 5,6 мМ глюкозы, 1,0 мМ МдС12, 2,3 мМ СаС12, 0,0001 мМ глицина, рН 7,4). Фоновая флуоресценция будет измерена до загрузки красителя внутрь клеток. Краситель будет загружен путем инкубации клеток с красителем в течение 1 ч при 37°С с 10 мкМ 8ВР1-АМ (краситель, связывающийся с Ыа), 0,04% плюроновой кислоты Р-127 и 2,5 мМ пробенецида в буфере Локка (50 мкл/лунку). При этом клетки будут дважды промыты 2,5 мМ пробенецида в буфере Локка (150 мкл/лунку). Клетки в 96луночном планшете или на покровном стекле будут помещены под эпифлуоресцентный микроскоп, оснащенный ртутной лампой и соответствующими фильтрами для возбуждения и испускания (от Отеда Орйса1 1пс, Братлборо, Вермонт, США, каталожный номер Х-Р04-2 или от СЬтота ТесЬпо1оду Согр, Белоус Фоле, Вермонт, США, каталожный номер 79001). Клетки, загруженные красителем, будут возбуждать при длине волны 340 нм и 380 нм; испускание будут регистрировать при длине волны 505 нм. После измерения базовый линии сигнала в отдельные лунки с клетками в качестве положительного контроля будет добавлен монензин (ЕМИ, Гиббстоун, Нью-Джерси, США, каталожный номер 475895) или грамицидин (ЕМИ, Гиббстоун, Нью-Джерси, США, каталожный номер 368020 - 25 мг). Для определения относительной активации активного 8ί'.'Ν1Λ на плазматической мембране сигналы от клеток, предварительно обработанных активными соединениями, будут сопоставлены с сигналами от контрольных клеток, обработанных носителем. Данные будут собраны с помощью камеры, подключенной к эпифлуоресцентному микроскопу, и количественно оценены с использованием соответствующего программного обеспечения. Необработанные сигналы будут обработаны путем вычисления соотношения интенсивностей испускания, регистрируемого при 505 нм, при длине волны возбуждении 340 нм и 380 нм с помощью программного обеспечения Ехсе1.
Помимо клеточных исследований могут быть использованы животные модели конкретного болезненного состояния. В каждом случае животное будет выбрано на основании конкретного целевого заболевания или состояния. Известно, что животные экспрессируют или способны экспрессировать полипептид ЗСША или его вариант. Соединения согласно настоящему изобретению можно применять для диаг- 14 029151
ностики, терапии и профилактики, а также в качестве исследовательских реагентов и компонентов наборов. Кроме того, соединения, которые способные модулировать экспрессию генов, часто применяются специалистами с обычной квалификацией для выяснения функции определенных генов или для различения функций разных членов биологического пути. Применение соединений в производстве лекарственного средства для лечения любого из заболеваний, указанных в настоящей заявке, является отличительным признаком заявленного изобретения.
Для использования в наборах и при диагностике, а также в различных биологических системах, соединения согласно настоящему изобретению, как по отдельности, так и в комбинации с другими соединениями или терапевтическими средствами, можно использовать в качестве инструментов в дифференциальных и/или комбинаторных исследованиях для выяснения взаимозависимого характера экспрессии части или всего набора генов, экспрессируемых в клетках и тканях.
В настоящей заявке термин "биологическая система" или "система" определяют как любой организм, клетку, культуру клеток или ткани, экспрессирующих или приводимых в состояние компетентности для экспрессии продуктов семейства генов альфа-субъединиц потенциалзависимых натриевых каналов (80ΝχΑ). Они включают, но не ограничиваются перечисленными, человека, трансгенных животных, клетки, клеточные культуры, ткани, ксенотрансплантаты, трансплантаты и их комбинации.
В одном неограничивающем примере характер экспрессии в клетках или тканях, обработанных одним или более соединениями, сравнивают с контрольными клетками или тканями, не обработанными такими соединениями, и полученные характеры экспрессии исследуют для определения дифференциальных уровней экспрессии генов, как они соотносятся, например, со связью с заболеванием, сигнальным путем, клеточной локализацией, уровнем экспрессии, размером, структурой или функцией изучаемых генов. Эти исследования могут быть выполнены на стимулированных или нестимулированных клетках и в присутствии или в отсутствие других соединений, которые влияют на характер экспрессии.
Примеры методов исследования экспрессии генов известны в данной области, включая чипы или микрочипы для ДНК, методику 8ΑΟΕ (серийный анализ экспрессии генов), ΚΕΑΌ8 (усиление рестриктазами расщепленной кДНК), ΤΘΟΑ (общий анализ экспрессии гена), белковые чипы и протеомные методы, секвенирование метки экспрессируемой последовательности (Е8Т), субтрактивный метод "отпечатков пальцев" РНК (8иКР), субстрактивное клонирование, дифференциальный дисплей (ΌΌ), сравнительную геномную гибридизацию Π8Η (флуоресцентная гибридизация ίη δίΐιι) и массспектрометрические методы.
Для проведения терапии животное, предпочтительно человека, у которого подозревают наличие заболевания или нарушения, которое можно лечить путем модуляции экспрессии полинуклеотидов или белков альфа-субъединицы I типа потенциалзависимых натриевых каналов (80Ν1Α), лечат путем введения соединений в соответствии с настоящим изобретением. Например, согласно одному неограничивающему варианту реализации способы включают стадию введения указанному животному, нуждающемуся в лечении, терапевтически эффективного количества модулятора альфа-субъединицы I типа потенциалзависимых натриевых каналов (80Ν1Α). Модуляторы альфа-субъединицы I типа потенциалзависимых натриевых каналов (80Ν1Α) согласно настоящему изобретению эффективно модулируют активность альфа-субъединицы I типа потенциалзависимых натриевых каналов (80Ν1Α) или модулируют экспрессию белка альфа-субъединицы I типа потенциалзависимых натриевых каналов (80Ν1Α). Согласно одному варианту реализации активность или экспрессия альфа-субъединицы I типа потенциалзависимых натриевых каналов (8ί'.'Ν1Λ) у животного ингибируется приблизительно на 10% по сравнению с контролем. Предпочтительно активность или экспрессия 8ΟΝ1Α у животного ингибируется приблизительно на 30%. Более предпочтительно активность или экспрессия альфа-субъединицы I типа потенциалзависимых натриевых каналов (8ΟΝ1Α) у животного ингибируется на 50% или более. Таким образом, низкомолекулярные соединения модулируют экспрессию мРНК или белка альфа-субъединицы I типа потенциалзависимых натриевых каналов (8ΟΝ1Α) по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 50%, по
меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по
меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по
меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98%, по
меньшей мере на 99% или на 100% по сравнению с контролем.
Согласно одному варианту реализации активность или экспрессия альфа-субъединицы I типа потенциалзависимых натриевых каналов (8ΟΝ1Α) у животного увеличивается приблизительно на 10% по сравнению с контролем. Предпочтительно активность или экспрессия альфа-субъединицы I типа потенциалзависимых натриевых каналов (8ΟΝ1Α) у животного увеличивается приблизительно на 30%. Более предпочтительно активность или экспрессия альфа-субъединицы I типа потенциалзависимых натриевых каналов (8ί'.'Ν1 А) у животного увеличивается на 50% или более. Таким образом, соединения модулируют экспрессию мРНК альфа-субъединицы I типа потенциалзависимых натриевых каналов (8ΟΝ1Α) по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по
меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по
меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по
меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% и более по срав- 15 029151
нению с контролем.
Например, уменьшение или увеличение экспрессии альфа-субъединицы I типа потенциалзависимых натриевых каналов (8ΟΝ1Α) можно измерять в крови, жировой ткани, печени или любой другой жидкости организма, ткани или органе животного. Предпочтительно клетки, содержащиеся в указанной исследуемой жидкости, ткани или органе, содержат молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую пептиды альфа-субъединицы I типа потенциалзависимых натриевых каналов (δί'.'Ν1Λ). и/или непосредственно белок альфа-субъединицы I типа потенциалзависимых натриевых каналов (8ΟΝ1Α).
Соединения согласно настоящему изобретению можно применять в фармацевтических композициях путем добавления эффективного количества соединения к подходящему фармацевтически приемлемому разбавителю или носителю. Применение соединений и способов согласно настоящему изобретению также может быть полезно для профилактических целей.
Соединения согласно настоящему изобретению также можно смешивать, инкапсулировать, конъюгировать или связывать иным образом с другими молекулами, молекулярными структурами или смесями соединений, как, например, липосомы, нацеленные на рецепторы молекулы, составы для введения внутрь, ректально, наружно или другим путем, чтобы облегчить поглощение, распределение и/или всасывание. Типичные патенты США, в которых описано получение таких составов, облегчающих поглощение, распределение и/или всасывание, включают, но не ограничиваются ими, патенты США №№ 5108921; 5354844; 5416016; 5459127; 5521291; 5543165; 5547932; 5583020; 5591721; 4426330; 4534899; 5013556; 5108921; 5213804; 5227170; 5264221; 5356633; 5395619; 5416016; 5417978; 5462854; 5469854; 5512295; 5527528; 5534259; 5543152; 5556948; 5580575 и 5595756, которые полностью включены в данную заявку посредством ссылки.
Согласно одному варианту практическое осуществление изобретения включает введение по меньшей мере одного из указанных соединений пациенту, нуждающемуся в таком лечении: милнаципрана, торсемида, рисперидона, пинацидила, бенидипина, кетоконазола, эбселена, тадалафила, зеранола, нефазодона, ломеризина, икариина, омепразола, эзомепразола, Ь-694,247, нитрендипина, ниметазепама, амлексанокса, мозаприда, сертралина или станозолола или фармацевтически приемлемых солей, изомеров, энантиомеров, изоформ, полиморфов, гидратов, сольватов или пролекарственных форм указанных соединений.
Соединения согласно настоящему изобретению включают любые фармацевтически приемлемые соли, сложные эфиры или соли таких эфиров или любое другое соединение, которое при введении в организм животного, включая человека, способно обеспечить (прямо или косвенно) биологически активный метаболит или его остаток.
Термин "фармацевтически приемлемые соли" относится к физиологически и фармацевтически приемлемым солям соединений согласно настоящему изобретению, т.е. солям, которые сохраняют желаемую биологическую активность исходного соединения и не придают ему нежелательных токсикологических свойств.
Настоящее изобретение также обеспечивает фармацевтические композиции и составы, включающие соединения согласно изобретению. Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут быть введены несколькими способами в зависимости от того, требуется местное или системное лечение, и от площади, подлежащей обработке. Введение может быть местным (включая оболочки глаза и слизистые оболочки, включая вагинальный и ректальный путь введения), легочным, например, путем ингаляции или инсуффляции порошков или аэрозолей, в том числе с помощью распылителя; интратрахеальным, интраназальным, трансдермальным и эпидермальным, пероральным или парентеральным. Парентеральное введение включает внутривенную, внутриартериальную, подкожную, внутрибрюшинную или внутримышечную инъекцию или инфузию; или внутричерепное, например интратекальное или внутрижелудочковое введение.
Для лечения тканей в центральной нервной системе введение можно осуществлять, например, путем инъекции или инфузии в спинномозговую жидкость.
Если требуется введение соединений согласно настоящему изобретению в клетки центральной нервной системы, введение можно осуществлять с использованием одного или более агентов, способных облегчать проникновение рассматриваемых соединений через гематоэнцефалический барьер. Введение может быть быстрым, как с помощью инъекции, или осуществляться в течение периода времени, как с помощью медленной инфузии или введения составов с замедленным высвобождением.
Рассматриваемые соединения также могут быть связаны или конъюгированы или комбинированы с агентами, которые обеспечивают желаемые фармацевтические или фармакодинамические свойства. Например, соединения могут быть связаны с любым веществом, которое, как известно в данной области, облегчает проникновение или транспорт через гематоэнцефалический барьер, таким как антитело к рецептору трансферрина, и введены путем внутривенной инъекции. Осмотическое нарушение гематоэнцефалического барьера также может быть достигнуто путем, например, инфузии сахаров, включая, но не ограничиваясь ими, мезоэритрит, ксилит, О(+)галактозу, О(+)лактозу, О(+)ксилозу, дульцит, миоинозит, Ь(-)фруктозу, О(-)маннит, О(+)глюкозу, О(+)арабинозу, О(-)арабинозу, целлобиозу, О(+)мальтозу, О(+)раффинозу, Ь(+)рамнозу, О(+)мелибиозу, О(-)рибозу, адонит, О(+)арабит, Ь(-)арабит, О(+)фукозу,
- 16 029151
Ь(-)фукозу, О(-)ликсозу, Ь(+)ликсозу и Ь(-)ликсозу, или аминокислоты, включая, но не ограничиваясь ими, глутамин, лизин, аргинин, аспарагин, аспарагиновую кислоту, цистеин, глутаминовую кислоту, глицин, гистидин, лейцин, метионин, фенилаланин, пролин, серин, треонин, тирозин, валин и таурин. Методы и материалы, облегчающие проникновение через гематоэнцефалический барьер, описаны, например, в патенте США № 4866042 "Способ доставки генетического материала через гематоэнцефалический барьер"; 6294520 "Материал для прохождения через гематоэнцефалический барьер" и 6936589 "Системы для парентеральной доставки", которые полностью включены в настоящую заявку посредством ссылки.
Рассматриваемые соединения могут быть смешаны, инкапсулированы, конъюгированы или иным образом связаны с другими молекулами, молекулярными структурами или смесями соединений, например липосомами, нацеленными на рецептор молекулами, составами для введения внутрь, ректально, местно, или другими составами для облегчения поглощения, распределения и/или всасывания. Например, катионные липиды могут быть включены в состав, чтобы облегчить поглощение соединения. ПΡΘΡΕΟΊΊΝ является примером состава, который, как показано, облегчает поглощение (доступен у ОШСО-ВКЬ, Бетесда, Мэриленд).
Фармацевтические композиции и составы для местного применения могут включать трансдермальные пластыри, мази, лосьоны, кремы, гели, капли, суппозитории, аэрозоли, жидкости и порошки. Обычные фармацевтические носители, водные, порошковые или масляные основы, загустители и т. п. могут быть необходимы или желательны. Покрытые презервативы, перчатки и т.п. также могут быть полезны.
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению, которые могут быть целесообразно представлены в виде лекарственной формы с однократной дозировкой, могут быть приготовлены в соответствии с обычными методиками, хорошо известными в фармацевтической промышленности. Такие методики включают стадию соединения активных ингредиентов с фармацевтическим носителем(и) или наполнителем(и). В целом композиции готовят путем единообразного и непосредственного соединения активных ингредиентов с жидкими носителями или тонкодисперсными твердыми носителями или обоими, а затем, если необходимо, формованием продукта.
Композиции согласно настоящему изобретению могут быть приготовлены в любой из многих возможных лекарственных форм, таких как, но не ограничиваясь ими, таблетки, капсулы, гелевые капсулы, жидкие сиропы, густые гели, суппозитории и клизмы. Композиции согласно настоящему изобретению могут быть также приготовлены в виде суспензий в водных, неводных или смешанных средах. Водные суспензии могут дополнительно содержать вещества, которые увеличивают вязкость суспензии, включая, например, натрий карбоксиметилцеллюлозу, сорбит и/или декстран. Суспензия может также содержать стабилизаторы.
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению включают, но не ограничиваются ими, растворы, эмульсии, пены и составы, содержащие липосомы. Фармацевтические композиции и композиции согласно настоящему изобретению могут содержать одно или более веществ, облегчающих проницаемость, носителей, наполнителей или других активных или неактивных ингредиентов.
Эмульсии обычно являются гетерогенными системами одной жидкости в другой, диспергированными в виде капель обычно превышающих в диаметре 0,1 мкм. Эмульсии могут содержать дополнительные компоненты, помимо диспергированных фаз, и активный препарат, который может присутствовать в виде раствора в водной фазе, масляной фазе или сам по себе в виде отдельной фазы. Микроэмульсии включены в качестве варианта реализации настоящего изобретения. Эмульсии и способы их использования хорошо известны в данной области и дополнительно описаны в патенте США № 6287860.
Составы согласно настоящему изобретению включают липосомальные составы. В настоящем изобретении термин "липосома" обозначает везикулу, состоящую из амфифильных липидов, формирующих сферический бислой или несколько бислоев. Липосомы представляют собой однослойные или многослойные везикулы, имеющие мембрану, образованную из липофильного материала и внутреннее водное содержимое, которое содержит композицию, предназначенную для доставки.
Липосомы также включают "стерически стабилизированные" липосомы, в настоящей заявке этот термин относится к липосомам, содержащим один или более специализированных липидов. При включении в липосомы эти специализированные липиды приводят к получению липосом с повышенным временем жизни в кровотоке по отношению к липосомам, не содержащим таких специализированных липидов. Примеры стерически стабилизированных липосом включают те, в которых часть формирующих везикулу липидов липосомы содержит один или более гликолипидов либо модифицирована с помощью одного или более гидрофильных полимеров, таких как полиэтиленгликоль (ПЭГ). Липосомы и способы их использования подробно описаны в патенте США № 6287860.
Фармацевтические составы и композиции согласно настоящему изобретению также могут включать поверхностно-активные вещества. Использование поверхностно-активных веществ в лекарственных продуктах, составах и эмульсиях хорошо известно в данной области техники. Поверхностно-активные вещества и их использование подробно описано в патенте США № 6287860, который включен в настоящую заявку посредством ссылки.
Согласно одному варианту реализации в настоящем изобретении используют различные усилители
- 17 029151
проницаемости для реализации эффективной доставки малых молекул. Помимо облегчения диффузии нелипофильных лекарственных препаратов через клеточные мембраны усилители проницаемости также усиливают проницаемость липофильных лекарственных препаратов. Усилители проницаемости могут быть классифицированы как принадлежащие к одной из пяти общих категорий, т.е. поверхностноактивные вещества, жирные кислоты, соли желчных кислот, хелатирующие агенты и нехелатирующие не поверхностно-активные вещества. Усилители проницаемости и их использование подробно описано в патенте США № 6287860, который включен в настоящую заявку посредством ссылки.
Специалисту в данной области будет понятно, что составы обычно разрабатывают в соответствии с их предполагаемым применением, т. е. способом введения.
Предпочтительные составы для местного введения включают те, в которых соединения согласно изобретению, предназначенные для применения, указанного в настоящей заявке, представляют собой смеси с агентами для доставки для местного введения, такими как липиды, липосомы, жирные кислоты, сложные эфиры жирных кислот, стероиды, хелатообразующие агенты и поверхностно-активные вещества. Предпочтительные липиды и липосомы включают нейтральные (например, диолеоилфосфатидильный этаноламин, ΌΟΡΕ, димиристоилфосфатидил холин, ЭМРС. дистеароилфосфатидил холин), отрицательные (например, димиристоилфосфатидил глицерин, ΌΜΡΟ) и катионные (например, диолеоилтетраметиламинопропил, ΌΟΤΑΡ, и диолеоилфосфатидилэтаноламин, ΌΟΤΜΑ).
Для местного или другого способа введения соединения согласно настоящему изобретению могут быть инкапсулированы в липосомы или могут образовывать комплексы с ними, в частности, катионные липосомы. В другом варианте соединения могут образовывать комплексы с липидами, в частности катионными липидами.
Предпочтительные жирные кислоты и сложные эфиры, фармацевтически приемлемые соли и их использование подробно описано в патенте США № 6287860.
Композиции и составы для введения внутрь включают порошки или гранулы, микрочастицы, наночастицы, суспензии или растворы в водных или неводных средах, капсулы, гелевые капсулы, саше, таблетки или мини-таблетки. Загустители, ароматизаторы, разбавители, эмульгаторы, диспергирующие добавки или связующие вещества могут быть желательными. Предпочтительные составы для введения внутрь включают те, в которых соединения согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с одним или более усилителей проницаемости, таких как поверхностно-активные вещества и хелатирующие агенты. Предпочтительные поверхностно-активные вещества включают жирные кислоты и/или сложные эфиры или их соли, желчные кислоты и/или их соли. Предпочтительные желчные кислоты/соли и жирные кислоты и их использование подробно описано в патенте США № 6287860, который включен в настоящую заявку посредством ссылки. Также предпочтительными являются комбинации усилителей проницаемости, например, жирных кислот/солей в комбинации с желчными кислотами/солями. Особенно предпочтительной комбинацией является натриевая соль лауриновой кислоты, каприновая кислота и урсодезоксихолевая кислота. Дополнительные усилители проницаемости включают полиоксиэтилен-9лауриловый эфир, полноксиэтилен-20-цетиловый эфир. Соединения согласно настоящему изобретению могут быть доставлены внутрь в форме гранул, включая распыленные высушенные частицы, или в составе комплекса для формирования микро- или наночастиц.
Композиции и составы для парентерального, интратекального или внутрижелудочкового введения могут включать стерильные водные растворы, которые также могут содержать буферы, разбавители и другие подходящие добавки, такие как, но не ограничиваясь ими, агенты, усиливающие проницаемость, соединения-носители и другие фармацевтически приемлемые носители или наполнители.
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения предложены фармацевтические композиции, содержащие одно или более соединений и один или более других активных фармацевтических ингредиентов. Примеры таких активных фармацевтических ингредиентов включают, но не ограничиваются им, любой активный ингредиент, который является полезным для лечения состояния пациента, нуждающегося в лечении, с помощью соединения согласно настоящему изобретению. Два или более комбинированных соединений могут быть использованы вместе или последовательно.
В другом родственном варианте реализации композиции согласно настоящему изобретению могут содержать одно или более соединений, направленных на первую нуклеиновую кислоту-мишень, и одно или более дополнительных соединений, направленных на вторую нуклеиновую кислоту-мишень. Например, первой мишенью может быть конкретная антисмысловая последовательность альфасубъединицы I типа потенциалзависимых натриевых каналов (8США), а второй мишенью может быть участок из другой нуклеотидной последовательности. В другом варианте композиции согласно настоящему изобретению могут содержать два или более соединений, которые модулируют различные участки одной и той же целевой нуклеиновой кислоты или белка альфа-субъединицы I типа потенциалзависимых натриевых каналов (8США). Два или более комбинированных соединений могут быть использованы вместе или последовательно.
Приготовление терапевтических композиций и их последующее введение (дозирование), как полагают, находится в пределах квалификации специалистов в данной области. Схема дозирования зависит от степени тяжести и чувствительности болезненного состояния, которое лечат, причем курс лечения
- 18 029151
может иметь продолжительность от нескольких дней до нескольких месяцев, или до тех пор пока не будет достигнут лечебный эффект или уменьшение тяжести болезненного состояния. Оптимальные схемы дозирования могут быть рассчитаны на основе измерений накопления препарата в организме пациента. Специалисты в данной области могут легко определить оптимальные дозировки, пути и частоту дозирования. Оптимальные дозировки могут варьировать в зависимости от относительной эффективности индивидуальных активных фармацевтических ингредиентов, и в целом могут быть определены на основании значений ЭК50, которые эффективны на животных моделях в условиях ίη νίίτο и ίη νίνο, а также могут быть определены на основании инструкции по медицинскому применению препарата для каждого из одобренных и выпущенных на рынок лекарственных препаратов. В целом доза составляет от 0,01 мкг до 100 мг на 1 кг массы тела и может быть введена один или несколько раз в день, один раз в неделю или один раз в месяц. Специалисты в данной области техники могут легко оценить частоту повторного дозирования на основе измеренного времени удержания и концентраций препарата в жидкостях или тканях организма. После успешного лечения желательным может быть прохождение пациентом курса поддерживающей терапии для предотвращения рецидива болезненного состояния, когда соединение вводят в поддерживающих дозах в диапазоне от 0,01 мкг до 100 мг на 1 кг массы тела один или несколько раз в сутки.
В некоторых вариантах реализации пациента лечат, используя дозировку лекарственного препарата, которая составляет по меньшей мере приблизительно 1, по меньшей мере приблизительно 2, по меньшей мере, приблизительно 3, по меньшей мере приблизительно 4, по меньшей мере приблизительно 5, по меньшей мере приблизительно 6, по меньшей мере приблизительно 7, по меньшей мере приблизительно 8, по меньшей мере приблизительно 9, по меньшей мере приблизительно 10, по меньшей мере приблизительно 15, по меньшей мере приблизительно 20, по меньшей мере, приблизительно 25, по меньшей мере приблизительно 30, по меньшей мере приблизительно 35, по меньшей мере приблизительно 40, по меньшей мере приблизительно 45, по меньшей мере, приблизительно 50, по меньшей мере приблизительно 60, по меньшей мере приблизительно 70, по меньшей мере приблизительно 80, по меньшей мере приблизительно 90 или по меньшей мере приблизительно 100 мг/кг массы тела.
Выше были описаны различные варианты реализации настоящего изобретения, однако следует понимать, что они были представлены только в качестве примера и не ограничивают сущность настоящего изобретения. Многочисленные изменения в раскрытых вариантах реализации могут быть сделаны в соответствии с раскрытыми вариантами, не отступая от сущности или объема настоящего изобретения. Таким образом, широта и объем настоящего изобретения не должны ограничиваться ни одним из описанных выше вариантов реализации.
Все документы, упомянутые в настоящей заявке, включены в описание посредством ссылки. Все публикации и патентные документы, цитируемые в настоящей заявке, включены посредством ссылки для всех целей в той же степени, как если бы каждая отдельная публикация или патентный документ были указаны индивидуально. Посредством цитирования различных ссылок в данном документе заявители не допускают, что какая-либо конкретная ссылка является «известным уровнем техники» в отношении настоящего изобретения. Варианты реализации композиций согласно настоящему изобретению и способы проиллюстрированы в следующих примерах.
Примеры
Следующие неограничивающие примеры служат для иллюстрации выбранных вариантов реализации настоящего изобретения. Следует иметь в виду, что приведенные вариации в пропорциях и альтернативные варианты элементов компонентов будут очевидны для специалистов в данной области техники и находятся в пределах объема вариантов реализации настоящего изобретения.
Следующие соединения были использованы для оценки модуляции уровней мРНК §СЫ1А:
а) милнаципран НС1 (1К(§),2§(К)[-2-(аминометил)-Ы, Ы-диэтил-1-фенилциклопроапнкарбоксамид гидрохлорид);
б) торасемид (1 -изопропил-3 -[(4-м-толуидино-3 -пиридил-сульфонил] мочевина);
в) рисперидон (3-[2-[4-(6-фтор-1,2-бензизоксазол-3-ил)-1-пиперидинил]этил]-6,7,8,9-тетрагидро-2метил-4Н-пиридо [1,2-а]пиримидин-4-он);
г) пинацидил (М-циано-№-пиридин-4-ил-№-(1,2,2-триметилпропил)гуанидин);
д) бенедипин НС1 (5-О-метил-3О-[(3К)-1-(фенилметил)пиперидин-3-ил]-2,6-диметил-4-(3-нитрофенил)-1,4-дигидропиридин-3,5-дикарбоксилат);
е) кетоконазол (1-[4-(4-{ [(2К,48)-2-(2,4-дихлорфенил)-2-(1Н-имидазол-1-илметил)-1,3-диоксолан-4ил] метокси} фенил)пиперазин-1-ил] этан-1-он);
ж) эбселен (2-фенил-1,2-бензоселенахол-3-он);
з) тадалафил ((6К-транс)-6-(1,3-бензодиоксол-5-ил)-2,3,6,7,12,12а-гексагидро-2-метилпиразино
[1',2':1,6]пиридо[3,4-Ъ]индол-1,4-дион);
и) зеранол ((3 §,7К)-7,14,16-тригидрокси-3-метил-3,4,5,6,7,8,9,10,11,12-декагидро-1Н-2-бензоксациклотетрадецин-1-он);
к) нефазодон НС1 (2-[3-[4-(3-хлорфенил)-1-пиперазинил]пропил]-5-этил-2,4-дигидро-4-(2феноксиэтил)-3Н-1,2,4-триазол-3 -он моногидрохлорид;
- 19 029151
л) ломеризина дигидрохлорид (1-[бис-(4-фторфенил)метил]-4-[2,3,4-триметоксифенилметил]дигидрохлорид);
м) икариин (5-гидрокси-2-(4-метоксифенил)-8-(3-метилбут-2-енил)-7-[(28,3К,4§,58,6К)-3,4,5тригидрокси-6-(гидроксиметил)оксан-2-ил]окси-3-[(2§,3К,4К,5К,6§)-3,4,5-тригидрокси-6-метилоксан-2ил]оксихромен-4-он);
н) омепразола магниевая соль (6-метокси-2-((4-метокси-3,5-диметилпиридин-2-ил)метилсульфинил)-1Н-бензо[Б]имидазол Мд);
о) эзомепразола магниевая соль ((8)-6-метокси-2-[(4-метокси-3,5-диметилпиридин-2-ил)метилсульфинил)-1Н-бензо [ά] имидазол Мд);
п) Ь-694,247 (метансульфонамид, Ы-[4-[[5-[3-(2-аминоэтил)-1Н-индол-5-ил]-1,2,4-оксадиазол-3ил]метил]фенил];
р) нитрендипин ((К8)-этилметил 2,6-диметил-4-(3-нитрофенил)-1,4-дигидропиридин-3,5дикарбоксилат);
с) ниметазепам (2-метил-9-нитро-6-фенил-2,5-диазабицикло[5.4.0]ундека-5,8,10,12-тетраен-3-он);
т) амлексанокс (2-амино-7-изопропил-5-оксо-5Н-хромено[2,3-Ь]пиридин-3-карбоксилат);
у) мозаприда цитрат (4-амино-5-хлор-2-этокси-Ы-[[4-[(4-фторфенил)метил]-2-морфолинил]метил] бензамид 2-гидрокси-1,2,3-пропантрикарбоксилат);
ф) сертралина гидрохлорид ((1§,4§)-4-(3,4-дихлорфенил)-Ы-метил-1,2,3,4-тетрагидронафталин-1амин) и
х) станозолол (17Р-гидрокси-17-метил-5а-андростано[3,2-с]пиразол).
Пример 1. Активация мРНК δΟΝ1 Α в первичных фибробластах человека, несущих мутацию, связанную с синдромом Драве, после обработки низкомолекулярными соединениями.
В примере 1 первичные фибробласты кожи человека, несущие мутацию δΟΝ1Α, связанную с синдромом Драве, обрабатывали низкомолекулярными соединениями в конечной концентрации 1 мкМ. Данные ниже показывают, что после 24-48 ч обработки эти соединения были способны увеличивать количество мРНК δί'.’Ν1 А.
Материалы и методы.
Обработка первичных фибробластов человека, несущих мутацию δΟΝ1Α, связанную с синдромом Драве, низкомолекулярными соединениями.
Первичные фибробласты кожи человека, несущие мутацию δΟΝ1Α, связанную с синдромом Драве, внесенную в культуру доктором Н. Кенон (Ν. Кепуоп) (Университет Майами) выращивали в питательной среде, состоящей из а-МЕМ (ОЛсо, каталожный номер 12561-056) +10% ФБС (МеЙ1а1есЬ, каталожный номер 35-015 СУ) + 1 % антигрибкового антибиотика (О1Ьсо, каталожный номер 15240-062) при 37°С и 5% СО2. За день до эксперимента клетки высевали в плотности приблизительно 4х104/лунку в 24луночные планшеты в питательной среде и инкубировали при 37°С и 5% СО2 в течение ночи. На следующий день среду в 24-луночных планшетах заменяли свежей питательной средой (1 мл/лунку) и клетки обрабатывали низкомолекулярными соединениями. Все соединения были доступны из коммерческих источников. Исходные растворы готовили в ДМСО в концентрации 1 мМ. Во время эксперимента 1 мМ исходные растворы разводили до концентрации 1 мкМ в питательной среде. Для контрольных лунок использовали ДМСО в разбавлении 1:1000. После 24-48 часов инкубации при 37°С и 5% СО2 среду удаляли и РНК экстрагировали из клеток с помощью системы δν То1а1 ΚΝΑ Бок-Шоп δу8ΐет от Рготеда (каталожный номер Ζ3105) в соответствии с инструкциями производителя. Шестьсот нанограмм очищенной общей РНК добавляли к реакции обратной транскрипции, которую проводили с использованием набора δиρе^8с^^ρΐ У1ЬО с^NΑ δλ'ηΐΐκδίδ КБ от 1пуБгодеп (каталожный номер 11754-250), как описано в инструкции изготовителя. кДНК из реакции обратной транскрипции использовали для контроля экспрессии генов с помощью ПЦР в режиме реального времени с помощью ΑΒΙ Тадтап Оепе Ехргеккюп Μίχ (каталожный номер 4369510) и праймеров/зондов, разработанных ΑΒΙ (исследования Н§00374696_т1, Н§00897350_т1 или Н§00897341_т1 для δΟΝ^ человека). Результаты, полученные с использованием всех трех исследований, были очень сходными (данные не приведены). Был использован следующий цикл ПЦР: 50°С в течение 2 мин, 95°С в течение 10 мин, 40 циклов (95°С в течение 15 с, 60°С в течение 1 мин), используя систему δίΌρΟ^ Р1и8 Кеа1 Типе РСК (Αρρ^ά ВюхуЧепъ). Набор для определения 18δ был изготовлен ΑΒΙ (каталожный номер 4319413Е). Относительные изменения экспрессии генов после обработки соединениями рассчитывали на основании разности 18δ-нормированных значений БС1 между образцами, обработанными соединением или носителем.
Результаты.
Результаты показали, что низкомолекулярные соединения различной химической структуры способны увеличивать количество мРНК δΟΝ1Α в 2-4 раза в первичных фибробластах кожи, несущих мутацию, связанную с синдромом Драве (табл. 1).
Пример 2. Активация мРНК δΟΝ1Α во взрослых первичных кератиноцитах человека после обработки низкомолекулярными соединениями.
В примере 2 первичные кератиноциты человека обрабатывали низкомолекулярными соединениями
- 20 029151
в конечной концентрации 1 мкМ. Данные ниже показывают, что после 24-48 ч обработки эти соединения были способны увеличивать количество мРНК 8ΟΝ1 А.
Материалы и методы.
Обработка первичных кератиноцитов человека низкомолекулярными соединениями.
Взрослые первичные кератиноциты человека от РготоСе11 (Гейдельберг, Германия, каталожный номер С-12003) или ЬйеЬте Се11 Тес1то1о8у (Фредерик, Мэриленд, каталожный номер РС-0025) выращивали в питательной среде, поставляемой производителями, при 37°С и 5% СО2. За день до эксперимента клетки высевали в плотности приблизительно 4х104/лунку в 24-луночных планшетах в питательной среде и инкубировали при 37°С и 5% СО2 в течение ночи. На следующий день среду в 24-луночных планшетах заменяли свежей питательной средой (1 мл/лунку), и клетки обрабатывали низкомолекулярными соединениями. Все соединения были доступны из коммерческих источников. Исходные растворы были приготовлены в ДМСО в концентрации 1 мМ. Во время эксперимента 1 мМ исходные растворы разводили до концентрации 1 мкМ в питательной среде. Для контрольных лунок использовали ДМСО в разбавлении 1:1000. После 24-48 ч инкубации при 37°С и 5% СО2 среду удаляли и РНК экстрагировали из клеток с помощью 8V Тοίа1 ΡΝΑ Гок-Фои 8ухίет от Рготеда (каталожный номер Ζ3105) в соответствии с инструкциями производителя. Шестьсот нанограмм очищенной общей РНК добавляли к реакции обратной транскрипции, которую проводили с использованием набора 8ирегхспр1 VI^0 с^NΑ 8уШНех1Х Κίί от ^ν^Ό^η (каталожный номер 11754-250), как описано в инструкции изготовителя. кДНК из реакции обратной транскрипции использовали для контроля экспрессии генов с помощью ПНР в режиме реального времени с помощью ΑΒI Тасрпан Сене Ехргеххюн Μίχ (каталожный номер 4369510) и праймеров/зондов, разработанных ΑΒI (исследования Нх00374696_т1, Нх00897350_т1 или Нх00897341_т1 для 8СN1Α человека). Результаты, полученные с использованием всех трех исследований, были очень сходными (данные не приведены). Был использован следующий цикл ПЦР: 50°С в течение 2 мин, 95°С в течение 10 мин, 40 циклов (95°С в течение 15 с, 60°С в течение 1 мин), используя систему 8ίер0ηе Р1их Кеа1 Т1те РСК (ЛррПеб Вюхух1етх). Набор для определения 188 был изготовлен ΑΒI (каталожный номер 4319413Е). Относительные изменения экспрессии генов после обработки соединениями рассчитывали на основании разности 188-нормированных значений 6С между образцами, обработанными соединением или носителем.
Результаты.
Результаты показали, что низкомолекулярные соединения различной химической структуры могли увеличивать количество мРНК 8СN1Α в 2-5 раз во взрослых первичных кератиноцитах (см. таблицу).
Таблица показывает относительное увеличение уровней мРНК 8СN1Α в первичных фибробластах кожи, несущих мутацию, связанную с синдромом Драве (колонка 1), и взрослых первичных кератиноцитах (колонка 2) после обработки низкомолекулярными соединениями в концентрации 1 мкМ. Ср. - средняя активация; Ст.ошиб.ср. - стандартная ошибка среднего.
- 21 029151
Название Фибробласты 5СЫ1А Кератиноциты Описание
Среднее Ст.ошиб.ср. Среднее Ст.ошиб.ср.
Милнаципран 4,37 3,07 2,72 0,04 5ΝΚΙ. фибромиалгия
Торсемид 3,70 3,44 нет данных Диуретик
Рисперидон 3,48 нет данных 3,02 1,01 Атипичный антипсихотик
Пннацидил 3,48 1,83 нет данных Активатор К+ каналов, антигипертензивный препарат
Бенидипин 3,01 1,16 1,69 нет данных Блокатор Са2+ каналов, для лечениян гипертонической болезни
Кетоконазол 2,95 нет данных 2,73 0,34 Противогрибковый
Эбселен 2,81 нет данных 2,67 0,53 Антиоксидант для лечения инсульта
Тадалафил 2,73 нет данных 2,79 1,37 Сиалис
Зеранол 2,60 0,87 4,51 нет данных Нестероидный агонист эстрогена, для роста сельскохозяйственных животных
Нефазадон 2,39 0,32 4,53 2,22 Антидепрессант
Ломеризин 2,39 0,41 3,47 0,93 Блокатор Са2+ каналов, для лечения мигрени
Икарнин 2,38 0,23 2,29 1,02 Стимулятор, Инь Ян Хо
Омепразол 2,22 0,50 2,46 0,03 Ингибитор протонного насоса, для лечения диспепсии
Ь-694,247 2,20 0,27 1,68 0,02 Агонист 5-НТЮ
Нитрендипин 2,13 0,56 нет данных Блокатор Са2+ каналов, для лечения гипертонической болезни
Ниметазепам 2,03 0,24 2,47 нет данных Агонист Г АМК, снотворное, антиконвульсант
Амлексанокс 2,01 0,09 5,41 нет данных Ингибитор гистамина, противоаллергический препарат
Мозаприд 1,90 нет данных 1,47 нет данных Агонист 5НТ4, гастрокииетический препарат
Сертрадин 1,79 0,31 5,18 2,54 Антидепрессант (Ζο1οί[)
Станозолол 1,75 нет данных 1,76 0,59 Анаболический стероид
Пример 3. Количественная оценка белка 8СЫ1А иммуногистохимическим методом.
Целью этого эксперимента является ранжирование соединений в соответствии с их способностью увеличивать экспрессию белка δί','ΝΙΛ в различных клетках, используя так называемый иммуногистохимический метод.
Материалы и методы.
Белок 8С.'ША будут детектировать внутри клеток с помощью иммуногистохимического метода. Для достижения этой цели клетки будут выращены в 24-луночных планшетах с использованием соответствующих условий роста. Через 48 ч после добавления малых соединений среду удалят, и клетки будут промыты 3 раза фосфатно-солевым буфером Дульбекко без кальция и магния (ФСБ) (МсФШссН. каталожный номер 21-031-СУ). Затем ФСБ будет удален, и клетки будут фиксированы в 24-луночном планшете с использованием 300 мкл 100% метанола в течение 15 мин при -20°С. После удаления метанола и промывки в ФСБ клетки проинкубируют с 3% перекисью водорода (НхНсг С'Неписак каталожный номер Н325-100) в течение 5 мин при 21°С. Клетки будут промыты три раза в течение 5 мин в ФСБ и затем проинкубированы с 300 мкл 0,1% бычьего сывороточного альбумина (БСА) (Мдта, каталожный номер А-9647) в ФСБ в течение 30 мин при 21°С. Клетки будут промыты три раза в течение 5 мин в ФСБ и затем проинкубированы с 300 мкл раствора авидина (Уеског ЬаЪогакопек, каталожный номер 8Р-2001) в течение 30 мин при 21°С. Клетки будут быстро промыты три раза в ФСБ и затем проинкубированы с раствором биотина (Уеског ЬаЪогакопек, каталожный номер 8Р-2001) в течение 30 мин при 21°С. Клетки будут промыты три раза в ФСБ и затем проинкубированы в течение ночи при 4°С с 300 мкл на лунку кроличьего антитела, направленного к синтетическому пептиду (ЕЕЦККУУКАМККЬСЗККР), соответствующему С-концевым аминокислотам 1491-1508 §СЫ1А крысы (АЪеат, каталожный номер аЪ24820; известно, что это антитело распознает δί'.'Ν1 А крысы, δί'.'Ν1 А человека и ЗСША мыши), разбавленным в ФСБ/БСА 0,1% в соотношении 1:250. После уравновешивания планшета в течение 5 мин при 21°С клетки будут промыты три раза в течение 5 мин в ФСБ и затем проинкубированы с козьим антикроличьим антителом, разбавленным в соотношении 1:200 в ФСБ/БСА 0,1%, в течение 30 мин при 21°С. Клетки будут промыты три раза в течение 5 мин в ФСБ и затем проинкубированы с 300 мкл раствора реагента А+В Уескаккаш ЕШе АВС (Уеског ЬаЪогаГопек, каталожный номер РК-6101) в течение 30 мин; раствор реагента А+В Уес1ах1ат ЕШе АВС будет приготовлен при 21 °С за 30 мин до инкубации с клетками путем последовательного добавления и смешивания 2 капель реагента А в 5 мл ФСБ и затем 2 капель реагента В. Клетки будут промыты 3 раза в течение 5 мин в ФСБ при 21°С и затем проинкубированы с раствором диаминобензидина (ИАВ) (УесГог ЬаЪогаГопек, каталожный номер 8К-4105), субстрата пероксидазы, до
- 22 029151
достижения окрашивания клеток; раствор субстрата пероксидазы ΌΑΒ будет восстановлен перед добавлением к клеткам путем смешивания 1 мл разбавителя ΙιηιηΡΑί'.'Τ™ΌΑΒ с 30 мкл концентрата хромогена IттΡΑСΤ™ ΌΑΒ. При этом клетки будут быстро промыты три раза в ФСБ, и по 300 мкл ФСБ будет оставлено в каждой лунке. Окрашивание клеток будут исследовать непосредственно в лунках 24-луночного планшета с использованием инвертированного микроскопа №коп НсНрке Τδ100, оснащенного камерой №коп Όδ-Κίΐ, соединенной с устройством №коп П1д1ка1Шдкк, на экране ноутбука Эе11 ЬаШийе Ό630. Изображения отдельных лунок будут получены с помощью программного обеспечения МБ-Р1етепкк Ό, версия 3.0, поставляемого с фотокамерой №коп.
Пример 4. Количественная оценка белка δί'.'Ν1Α с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА).
Целью этого эксперимента является ранжирование соединений в соответствии с их способностью увеличивать экспрессию белка δί'.'Ν1Α в различных клетках с использованием методики, называемой твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА).
Материалы и методы.
Количество белка δΟΝ1Α, продуцируемого клетками, будет количественно определено с помощью ИФА. Для достижения этой цели клетки будут выращены в 24-луночных планшетах с использованием соответствующих условий роста. Через сорок восемь часов после добавления малых соединений среда будет удалена, и клетки будут промыты 3 раза в фосфатно-солевом буфере Дульбекко без кальция и магния (ФСБ) (МеФакеск, каталожный номер 21-031-СУ). Затем ФСБ будет удален, и клетки будут фиксированы в 24-луночном планшете с использованием 100 мкл 100% метанола в течение 15 мин при -20°С. После удаления метанола и промывки в ФСБ клетки будут проинкубированы с 3% перекисью водорода (Иккег Скенисак каталожный номер Н325-100) в течение 5 мин при 21°С. Клетки будут промыты три раза в течение 5 мин в ФСБ и затем проинкубированы со 100 мкл 0,1% бычьего сывороточного альбумина (БСА) Цщта, каталожный номер А-9647) в ФСБ в течение 30 мин при 21°С. Клетки будут промыты три раза в течение 5 мин в ФСБ и затем проинкубированы с 300 мкл раствора авидина (Уеског ЬаЬогакопек, каталожный номер δΡ-2001) в течение 30 мин при 21°С. Клетки будут быстро промыты три раза в ФСБ и затем проинкубированы с раствором биотина (Уеског ЬаЬогакопек, каталожный номер δΡ-2001) в течение 30 мин при 21°С. Клетки будут промыты три раза в ФСБ и затем проинкубированы в течение ночи при 4°С с 100 мкл на лунку кроличьего антитела, направленного к синтетическому пептиду (ΕΕΟΚΚΥΥΝΑΜΚΚΡΟδΚΚΡ), соответствующему С-концевым аминокислотам 1491-1508 δСN1А крысы ^Ьеат, каталожный номер аЬ24820; известно, что это антитело распознает δСN1Α крысы, δСN1Α человека и δСN1Α мыши), разбавленного ФСБ/БСА 0,1% в соотношении 1:250. После уравновешивания планшета в течение 5 мин при 21°С клетки будут промыты три раза в течение 5 мин в ФСБ и затем проинкубированы с козьим антикроличьим антителом, разбавленным в соотношении 1:200 в ФСБ/БСА 0,1%, в течение 30 мин при 21°С. Клетки будут промыты три раза в течение 5 мин в ФСБ и затем проинкубированы с 300 мкл раствора реагента А+В Уескаккаш БИке ΑΒС (Уеског ЬаЬогакопек, каталожный номер РК-6101) в течение 30 мин; раствор реагента А+В Уескаккаш ИНке ΑΒС будет приготовлен при 21°С за 30 мин до инкубации с клетками путем последовательного добавления и смешивания 2 капель реагента А в 5 мл ФСБ и затем 2 капель реагента В. Клетки будут промыты 3 раза в течение 5 мин в ФСБ при 21 °С и затем проинкубированы с раствором тетраметилбензидина (ТМВ) (Ткегто δ^ηύίΈ, каталожный номер Ν301), субстрата пероксидазы. После окрашивания супернатанта в синий цвет он будет перенесен в новый 96-луночный планшет для ИФА (Огешег Рю 0пе, каталожный номер 65121), в который будет добавлен 1М серной кислоты. Поглощение будут регистрировать при 450 нм с использованием спектрофотометра МиШккап δρеск^ит (Ткегто δ^ηύίΈ). Фоновый сигнал, регистрируемый в лунках, окрашенных кроличьим антимышиным Ι§Ο в качестве первичного антитела Океанк каталожный номер аЬ6709), будет вычтен из всех значений для δСN1Α и актина. Будет использовано кроличье антиактиновое антитело от ΑЬеат (каталожный номер аЬ1801). Сигнал δСN1Α будет нормализован по отношению к сигналу актина для каждого условия, нормированные значения для каждого экспериментального варианта будут сравниваться.
Пример 5. Количественная оценка мРНК актина.
Цель этого эксперимента состоит в том, чтобы с помощью метода, называемого ПЦР в режиме реального времени, убедиться, что ни одно из соединений, увеличивающих количество мРНК δСN1А, не оказывает влияния на мРНК актина в различных клетках.
Материалы и методы.
Общая РНК будет собрана из клеток, выращенных в соответствующих условиях культивирования. Для достижения этой цели через 48 ч после добавления малых соединений среда будет удалена, и РНК будет экстрагирована из клеток с помощью системы δУ Тока1 ΚΝΑ Рок-Шоп δу8кет от Рготеда (каталожный номер Ζ3105) или набора К№аку Тока1 ΚΝΑ Ро1акюп к1к от Ц1адеп (каталожный номер 74181), следуя инструкциям производителя. Шестьсот нанограмм РНК будет добавлено в реакцию обратной транскрипции, проводимую с использованием набора Уегко с^NΑ от Ткегто δ^Φίίκ (каталожный номер АВ1453В) или набора Шдк Сараску с^NΑ Кеуегке Тгапкспркюп Как (каталожный номер 4368813) или
- 23 029151
набора Зирегкспр! У1ЬО с^NΑ §упШе818 Κίΐ от 1пукгодеп (каталожный номер 11754-250), как описано в протоколе производителя. кДНК из этой реакции обратной транскрипции будет использована для контроля экспрессии генов методом ПНР в режиме реального времени с использованием ΑΒΙ Тадтаи Оепе Ехргеккюп Μίχ (Аррйей ВюкукЮтк 1пс, Фостер-сити, Калифорния, США, каталожный номер 4369510) и специфических праймеров/зондов для актина, разработанных ΑΒΙ (Аррйей ВюкукЮшк, набор Тасрпап Оепе Ехргеккюп Аккау для актина человека, каталожный номер Нк99999903_т1*, актина обезьяны, каталожный номер КЬ03043379_§Н или актина мыши, каталожный номер Мт00607939_к1*). Для проведения ПЦР будет использован следующий цикл: 50°С в течение 2 мин, 95°С в течение 10 мин, 40 циклов (95°С в течение 15 сд, 60°С в течение 1 мин), используя устройство 8ЮрОпе Р1ик Кеа1 Типе РСК МасЫпе (АррПей ВюкукЮшк 1пс., Фостер-сити, Калифорния, США). Относительное изменение экспрессии генов после обработки антисмысловыми олигонуклеотидами будет рассчитано на основании разности 188нормированных значений йС1 между образцами, обработанными исследуемыми соединениями, и образцами, трансфецированными имитирующим соединением.
Пример 6. Количественная оценка белка актина иммуногистохимическим методом.
Цель этого эксперимента состоит в том, чтобы убедиться, что ни одно из соединений, увеличивающих количество белка 8США, согласно результатам иммуногистохимического исследования, не оказывает какого-либо влияния на белок актин, детектируемый в тех же условиях. Если количество белка актина не изменяется под действием соединений, увеличивающих количество 8США, то это позволит предположить, что актин может быть использован в ИФА для количественной оценки белка 8ί'.'Ν1 А в качестве контроля для нормализации.
Материалы и методы.
Белок актин будут детектировать внутри клеток с помощью иммуногистохимического метода. Для достижения этой цели через 48 ч после добавления малых соединений среда будет удалена, и клетки будут промыты 3 раза фосфатно-солевым буфером Дульбекко без кальция и магния (ФСБ) (МеФа1еск, каталожный номер 21-031-СУ). Затем ФСБ будет удален, и клетки будут фиксированы в 24-луночном планшете с использованием 300 мкл 100% метанола в течение 15 мин при -20°С. После удаления метанола и промывки в ФСБ клетки проинкубируют с 3% перекисью водорода (Иккег СЬетюа1, каталожный номер Н325-100) в течение 5 мин при 21°С. Клетки будут промыты три раза в течение 5 мин в ФСБ и затем проинкубированы с 300 мкл 0,1% бычьего сывороточного альбумина (БСА) (§1§ша, каталожный номер А-9647) в ФСБ в течение 30 мин при 21°С. Клетки будут промыты три раза в течение 5 мин в ФСБ и затем проинкубированы с 300 мкл раствора авидина (УесЮг ЬаЪогаЮпек, каталожный номер 8Р-2001) в течение 30 мин при 21 °С. Клетки будут быстро промыты три раза в ФСБ и затем проинкубированы с раствором биотина (УесЮг ЬаЪогаЮпек, каталожный номер 8Р-2001) в течение 30 мин при 21°С. Клетки будут промыты три раза в ФСБ и затем проинкубированы в течение ночи при 4°С с 300 мкл на лунку кроличьего антитела, направленного к синтетическому пептиду, полученному из последовательности в пределах аминокислотных остатков 350-450 актина (АЪеат, каталожный номер аЪ1801; известно, что это антитело распознает бета- и гамма-актин человека и мыши), разбавленного в ФСБ/БСА 0,1% в соотношении 1:250. После уравновешивания планшета в течение 5 мин при 21°С клетки будут промыты три раза в течение 5 мин в ФСБ и затем проинкубированы с козьим антикроличьим антителом, разбавленным в соотношении 1:200 в ФСБ/БСА 0,1%, в течение 30 мин при 21°С. Клетки будут промыты три раза в течение 5 мин в ФСБ и затем проинкубированы с 300 мкл раствора реагента А+В УесЕМат Е1йе АВС (УесЮг ЬаЪогаЮпек, каталожный номер РК-6101) в течение 30 мин; раствор реагента А+В УесЕМаш ЕЮе АВС будет приготовлен при 21°С за 30 мин до инкубации с клетками путем последовательного добавления и смешивания 2 капель реагента А к 5 мл ФСБ и затем 2 капель реагента В. Клетки будут промыты 3 раза в течение 5 мин в ФСБ при 21°С и затем проинкубированы с раствором диаминобензидина (ЭАВ) (УесЮг ЬаЪогаЮпек, каталожный номер 8К-4105), субстрата пероксидазы, до достижения окрашивания клеток; раствор субстрата пероксидазы ЭАВ будет восстановлен перед добавлением к клеткам путем смешивания 1 мл разбавителя 1ттРАС.’Т™ОАВ с 30 мкл концентрата хромогена 1ттРАС.’Т™ ЭАВ. При этом клетки будут быстро промыты три раза в ФСБ, и по 300 мкл ФСБ будет оставлено в каждой лунке. Окрашивание клеток будут исследовать непосредственно в лунках 24-луночного планшета с использованием инвертированного микроскопа №коп ЕсПрке Т8100, оснащенного камерой №коп Όδ-КП, соединенной с устройством №коп Όί§ίΐΗΐ-δί§φΐ, на экране ноутбука Эе11 ЬайЮйе Ό630. Изображения отдельных лунок будут получены с помощью программного обеспечения №§-Е1етеп1к Ό, версия 3.0, поставляемого с фотокамерой №коп.
Пример 7. Изменения амплитуды тока натрия, индуцированные активацией ЗС'ША в пирамидальных клетках гиппокампа.
Цель этого эксперимента заключается в том, чтобы убедиться, что активация белка 8СШ А низкомолекулярными соединениями увеличивает амплитуду тока натрия в ГАМК-эргических интернейронах гиппокампа, которые, как показано, повреждаются при синдроме Драве.
Материалы и методы.
ОАО-положительные биполярные клетки гиппокампа (ГАМК-эргические интернейроны) будут
- 24 029151
диссоциированы из 11-16-дневных крыс путем гидролиза проназой, а затем термолизином в буфере, который непрерывно оксигенируется смесью 95% О2 и 5% СО2. Диссоциированные клетки будут высеяны в чашки для культивирования тканей и обработаны выбранными низкомолекулярными соединениями в течение 24 ч, после чего будет проведена регистрация электрофизиологических параметров. Токи будут регистрировать с использованием метода фиксации потенциала (метод пэтч-кламп) от целой клетки с помощью усилителя для фиксации потенциала ЕРС-9 (ΗΕΚΑ). Пипетки для пэтч-кламп будут изготовлены с использованием типового устройства для вытягивания микропипеток Р-97 Р1ат1и§-Вго№и (§ийег ЬвйитеиР). Стимуляцию и сбор данных будут проводить с помощью программы РиЬ8Е, (версия 7.5; ΗΕΚΑ Е1ек!гои1к).
Для экспериментов в режиме фиксации потенциала клетки будут непрерывно омываться буфером для перфузии, содержащем, в мМ: 19,1 №С1, 19,1 хлорида тетраэтиламмония, 0,95 ВаС12, 1,90 МдС12, 52,4 СвС1, 0,1 СбС12, 0,95 СаС12, 9,52 ΗΕΡΕδ, 117 глюкозы, рН 7,35, с помощью перистальтического насоса. Пипетка для пэтч-кламп будет содержать, в мМ: 157 Ν-метил-Э-глюкамин, 126 НС1, 0,90 №С1, МдС12, 3,60 9,01 1,80 ΕΟΤΑ, ΑΤΡ-Να2, 9,01 ΗΕΡΕδ, 4,50 креатинфосфата, рН 7,2. Потенциал клетки будут поддерживать на уровне -100 мВ и деполяризующие шаги от -60 мВ до -15 мВ будут применять с интервалом в 5 мВ. Максимальная плотность тока будет определена и сопоставлена между обработанными и необработанными нейронами.
Пример 8: Изменения характеристик тока натрия, индуцированные активацией δСN1Α в пирамидальных клетках гиппокампа
Цель этого эксперимента заключается в том, чтобы убедиться, что активация белка δСN1Α низкомолекулярными соединениями не изменяет характеристики тока натрия в ГАМК-эргических интернейронах гиппокампа, которые, как показано, повреждаются при синдроме Драве.
Материалы и методы.
ΟΑΌ-положительные биполярные клетки гиппокампа (ГАМК-эргические интернейроны) будут диссоциированы из 11-16-дневных крыс путем гидролиза проназой, а затем термолизином в буфере, который непрерывно оксигенируется смесью 95% О2 и 5% СО2. Диссоциированные клетки будут высеяны в чашки для культивирования тканей и обработаны выбранными низкомолекулярными соединениями в течение 24 ч, после чего будет проведена регистрация электрофизиологических параметров. Токи будут регистрировать с использованием метода фиксации потенциала (метод пэтч-кламп) от целой клетки с помощью усилителя для фиксации потенциала ЕРС-9 (ΗΕΚΑ). Пипетки для пэтч-клампа будут изготовлены с использованием типового устройства для вытягивания микропипеток Р-97 Р1аттд-Вго\уп ЕиПег ЬвйитеиР). Стимуляцию и сбор данных будут проводить с помощью программы ΡυΒδΕ, (версия 7.5; ΗΕΚΑ ΕΜ<Ιιόιπ1<). Для экспериментов в режиме фиксации потенциала клетки будут непрерывно омываться буфером для перфузии, содержащем, в мМ: 19,1 №С1, 19,1 хлорида тетраэтиламмония, 0,95 ВаС12, 1,90 МдС12, 52,4 СвС1, 0,1 СбС12, 0,95 СаС12, 9,52 ΗΕΡΕδ, 117 глюкозы, рН 7,35, с помощью перистальтического насоса. Пипетка для пэтч-кламп будет содержать, в мМ: 157 Ν-метил-Э-глюкамина, 126 Ж1, 0,90 ЫаС1, М§С12, 3,60 9,01 1,80 ΕΟΤΑ, ΑΤΡ-№2, 9,01 ΗΕΡΕδ, 4,50 креатинфосфата, рН 7,2. Потенциал клетки будут поддерживать на уровне -100 мВ и деполяризующие шаги от -60 до -15 мВ будут применять с интервалом в 5 мВ. Кривые активации (отношение проводимость/потенциал) будут рассчитывать на основании отношений ток/потенциал в соответствии с уравнением д = ^/(ν-Ε^,), где Ца представляет максимальный ток натрия, измеренный при потенциале V, и ΕΝει представляет равновесный потенциал. Функция Больцмана будет использована для аппроксимации нормализованных кривых активации и инактивации, после чего будут определены характеристики кривых. Константы времени инактивации будут оценивать с помощью аппроксимации времени спада тока с использованием моноэкспоненциальной функции. Профили активации и инактивации будут сопоставлены между обработанными и необработанными клетками, чтобы определить, изменила ли обработка характеристики тока.
Для экспериментов в режиме фиксации тока потенциал клетки будут поддерживать на уровне -80 мВ и характеристики активности клеток будут регистрировать после 800 мс импульсов, применяемых с шагом в 10 пА. Буфер в электроде будет содержать, в мМ: 135 глюконата калия, 20 КС1, 2 МдС12, 2 ΑΤΡ№2, 0,3 ГТФ-Νπ и 10 ΗΕΡΕδ, 0,2 ЭГТА, рН 7,3. Буфер для перфузии будет содержать, в мМ: 140 №С1, 5 КС1, 2 СаС12, 1 МдС12, 10 ΗΕΡΕδ, 10 глюкозы и рН 7,4, доведенный с помощью ΝηΘΗ. Отношения вводвывод (количество потенциалов действия/введенный ток пА), полуширина потенциала действия, амплитуда пика и декремент пика будут измерены и сопоставлены между обработанными и необработанными ингибиторными интернейронами гиппокампа.
Регистрацию параметров тока через одиночный канал будут выполнять в режиме фиксации потенциала "наружная сторона наружу" с использованием тех же растворов и протоколов, как описано выше для регистрации в режиме фиксации потенциала от целой клетки.
Пример 9. Влияние активации δСN1Α на внутриклеточную концентрацию натрия.
Цель этого эксперимента состоит в том, чтобы проверить, ведет ли активация белка δСN1Α в клетках к изменению внутриклеточной концентрации натрия. Клетки, экспрессирующие различные количества δСN1Α после введения малых соединений, будут загружены красителем, специфичным в отношении Νη'. В качестве положительного контроля для детектирования изменений концентрации Νη' в клет- 25 029151
ках будут использованы монензин и грамицидин, которые являются Ыа+-ионофорами.
Материалы и методы.
Клетки будут выращены в 96-луночном планшете и обработаны различными концентрациями малых соединений. Через 48 ч клетки будут промыты буфером Локка (8,6 мМ ΗΕΡΕδ, 5,6 мМ КС1, 154 мМ ЫаС1, 5,6 мМ глюкозы, 1,0 мМ М§С12, 2,3 мМ СаС12, 0,0001 мМ глицина, рН 7,4). Фоновая флуоресценция будет измерена перед загрузкой красителя внутрь клеток. Краситель будет загружен внутрь клеток путем инкубации клеток с красителем в течение 1 часа при 37°С с 10 мкМ δΒΡΙ-АМ (краситель, связывающийся с Ыа+), 0,04% плюроновой кислоты Р-127 (Мо1еси1аг РгоЬек, Орегон, США) и 2,5 мМ пробенецида в буфере Локка (50 мкл/лунку). При этом клетки будут дважды промыты 2,5 мМ пробенецида в буфере Локка (150 мкл/лунку). Планшеты, содержащие загруженные клетки, будут помещены в устройство для считывания, например, ΡΡΕΧδίαίίοη™ II (Мо1еси1аг ^еν^се8, Саннивейл, Калифорния, США). Клетки, загруженные красителем, будут возбуждать при длине волны 340 нм и 380 нм; испускание будут регистрировать при длине волны 505 нм. Одновременно будет измерена базовая линия сигнала. После измерения базовой линии сигнала в отдельные лунки с клетками в качестве положительного контроля будет добавлен монензин (ΕΜΌ, Гиббстоун, Нью-Джерси, США, каталожный номер 475895) или грамицидин (ΕΜΌ, Гиббстоун, Нью-Джерси, США, каталожный номер 368020-25 мг). Обработка ТТХ (1 мкМ) будет использована в качестве отрицательного контроля. Затем будет определена относительная экспрессия активного δСN1Α на плазматической мембране в клетках, предварительно обработанных активными соединениями, по сравнению с клетками, обработанными носителем. Сигналы будут рассчитаны как отношение интенсивностей испускания, регистрируемого при 505 нм, при возбуждении 340 нм и 380 нм с использованием программного обеспечения Εxсе1.
Пример 10: Влияние активации δСN1Α на концентрацию натрия в одиночной клетке
Цель этого эксперимента состоит в том, чтобы проверить, ведет ли активация белка δСN1Α в клетках к изменению внутриклеточной концентрации натрия в одиночной клетке. Клетки, экспрессирующие различные количества δСN1Α после введения малых соединений, будут загружены красителем, специфичным в отношении Ыа+. В качестве положительного контроля для детектирования изменений концентрации Ыа+ в клетках будут использованы монензин и грамицидин, которые являются Ыа+-ионофорами.
Материалы и методы. Клетки будут выращены на покровном стекле или в 96-луночном планшете и обработаны различными концентрациями малых соединений. Через 48 часов клетки будут промыты буфером Локка (8,6 мМ ΗΕΡΕδ, 5,6 мМ КС1, 154 мМ ЫаС1, 5,6 мМ глюкозы, 1,0 мМ М§С12, 2,3 мМ СаС12, 0,0001 мМ глицина, рН 7,4). Фоновая флуоресценция будет измерена до загрузки красителя внутрь клеток. Краситель будет загружен путем инкубации клеток с красителем в течение 1 ч при 37°С с 10 мкМ δΒРI-АМ (краситель, связывающийся с Ыа+), 0,04% плюроновой кислоты Р-127 и 2,5 мМ пробенецида в буфере Локка (50 мкл/лунку). При этом клетки будут дважды промыты 2,5 мМ пробенецида в буфере Локка (150 мкл/лунку). Клетки в 96-луночном планшете или на покровном стекле будут размещены под эпифлуоресцентным микроскопом, который оснащен ртутной лампой и соответствующими фильтрами для возбуждения и испускания (от Отеда Ор11са1 Шс, Браттлборо, Вермонт, США, каталожный номер набор Х-Р04-2 или от СЬгота ТесЬпо1оду Согр, Беллоу Фол, Вермонт, США, каталожный номер 79001). Клетки, загруженные красителем, будут возбуждать при длине волны 340 нм и 380 нм; испускание будут регистрировать при 505 нм. После измерения сигнала базовой линии в отдельные лунки с клетками в качестве положительного контроля будет добавлен монензин (ΕΜΌ, Гиббстоун, Нью-Джерси, США, каталожный номер 475895) или грамицидин (ΕΜΌ, Гиббстоун, Нью-Джерси, США, каталожный номер 368020-25мг). Для того чтобы установить относительную активацию активного δСN1Α на плазматической мембране будет проведено сравнение сигнала клеток, предварительно обработанных активными соединениями, с сигналом клеток, обработанных носителем. Данные будут собраны с помощью камеры, подключенной к эпифлуоресцентному микроскопу, и количественно оценены, используя соответствующее программное обеспечение. Необработанные сигналы будут обработаны путем вычисления соотношения интенсивностей испускания, регистрируемого при 505 нм, при возбуждении 340 нм и 380 нм с помощью программного обеспечения Εxсе1.
Хотя настоящее изобретение было проиллюстрировано и описано в отношении одного или более вариантов реализации, эквивалентные изменения и модификации будут очевидны для специалистов в данной области техники при чтении и понимании этого описания и прилагаемых чертежей. Кроме того, хотя конкретная отличительная особенность настоящего изобретения могла быть раскрыта в отношении только одного из нескольких вариантов реализации, такая отличительная особенность может быть комбинирована с одним или несколькими иными признаками других вариантов реализации, которые могут быть желаемыми и обеспечивать преимущество для любого данного или конкретного применения.
Реферат настоящего изобретения позволит читателю быстро понять сущность технического раскрытия. Представленный реферат не предполагает его использования для интерпретации или ограничения объема или сущности формулы изобретения, приведенной ниже.
- 26 029151
Перечень последовательностей
<110> КУРНА, ИНК.
КОЛЛАРД, Джозеф ХОРКОВА ШЕРМАН, Ольга ХСЯО, Джейн Х.
<120> ЛЕЧЕНИЕ ЗАБОЛЕВАНИЙ, СВЯЗАННЫХ С АЛЬФА-СУБЪЕДИНИЦАМИ ПОТЕНЦИАЛЗАВИСИМЫХ НАТРИЕВЫХ КАНАЛОВ (8СЫхА), С ПОМОЩЬЮ МАЛЫХ МОЛЕКУЛ
<130> 8СЫхА
<140> И861/531361
<141> 2011-09-06
<160> 11
<170> Ра1епйп νβτδίοη 3.5
<210> 1
<211> 8133
<212> ДНК
<213> Ното 8ар1еп8
<400> 1
аа!д!дсадд а!дасаада! ддадсаааса д!дсйд!ас сассаддасс 1дасадсйс 60
аасйсйса ссададаа!с 1сйдсддс1 айдааадас дсайдсада адааааддса 120
аадаа!ссса аассадасаа аааада!дас дасдаааа!д дсссааадсс ааа!ад!дас 180
йддаадс!д дааадаасс! 1сса1йай 1а1ддадаса йсс!ссада да!дд1д1са 240
дадсссс!дд аддасс!дда сссс1ас1а1 а!саа!аада ааасййа! ад!айдаа! 300
ааадддаадд сса!сйссд дйсад!дсс ассШдссс 1д1асайй аасйссйс 360
аа!сс!сйа ддаааа!адс 1айаадай йдд!асай сайайсад са!дс!аай 420
а!д1дсас!а ййдасааа с!д1д1дй1 а!дасаа!да д1аассс1сс 1дайддаса 480
аадаа!д!ад аа!асассй сасаддаа!а 1а1асййд аа!сасйа! ааааайай 540
дсаадддда! 1с1д1йада адаййас! йссйсддд а!сса!ддаа с1ддс1сда! 600
йсас!д!са йасаЫдс д!асд!саса дад!йд1дд асс!дддсаа 1д1с1сддса 660
йдадааса! 1сададйс1 ссдадсайд аадасдай! сад!сайсс аддсс!дааа 720
ассайд!дд дадссс!да! ссад1с1д1д аадаадсШ садаЩаа! да!сс1дас! 780
д!дйс1д1с 1дадсд1ай 1дс1с1аай дддс!дсадс 1дйса1ддд саасс!дадд 840
аа1ааа1д1а 1асаа1ддсс 1сссассаа1 дсйссйдд аддааса!ад Ейадаааад 900
аа1а1аас1д 1даайа1аа 1дд!асасй а1ааа1дааа с1д1сй!да д!йдас1дд 960
аад1са1а1а йсаадайс аадаЕйса! 1ай1сс1дд адддййй ада!дсас!а 1020
с!а!д1ддаа а1адс1с1да 1дсаддссаа 1д1ссададд да!а1а1д1д 1д1дааадс1 1080
дд!адааа!с ссаайа!дд с!асасаадс 1йда1асс1 1садйдддс йййд!сс 1140
- 27 029151
йдШсдас 1аа1дас1са ддасйс!дд даааа!сй1 а!саас!дас айасд!дс! 1200
дс!дддаааа сд!аса!да1 айййд1а йдд!сай! 1сйдддс1с айс!асс!а 1260
а!ааай1да 1сс1ддс1д1 дд!ддсса!д дсс!асдадд аасадаа!са ддссассйд 1320
даадаадсад аасадааада ддссдаай! садсада!да йдаасадс! !ааааадсаа 1380
саддаддсад с!садсаддс адсаасддса ас!дсс!сад аасайссад ададсссад! 1440
дсадсаддса ддс!с!сада садс!са1с! даадсс!с!а адйдадйс саадад1дс! 1500
ааддааадаа дааа!сддад даадаааада ааасадааад адсад!с!дд 1ддддаадад 1560
ааада!дадд а!даайсса аааа!с!даа 1с1даддаса дса!саддад даааддйй 1620
сдсййсса йдаадддаа ссдайдаса !а!даааада дд!ас1сс1с сссасассад 1680
1с1йдйда дса1ссд!дд с!ссс1ай1 1сассааддс дааа!адсад аасаадссй 1740
йсадсйй дадддсдадс ааадда!д!д дда!с!дада асдасйсдс ада!да!дад 1800
сасадсасс! йдадда!аа сдададссд! ададайсс! 1д1йд1дсс ссдасдасас 1860
ддадададас дсаасадсаа сс!дад!сад ассад!адд! са!сссдда! дс!ддсад!д 1920
1йссадсда а!дддаада! дсасадсас! д!ддайдса а!дд1д1дд! йссйддй 1980
дд!ддассй садйсс!ас а!сдсс!дй ддасадсйс !дссададд! да!аа1ада! 2040
аадссадс!а с!да!дасаа !ддаасаасс ас!дааас!д ааа!дадааа дадаадд!са 2100
адйсШсс асдШсса! ддас!йс1а даада!ссй сссаааддса асдадсаа!д 2160
ад!а!адсса дсайс!аас ааа!асад!а даадаасйд аадаа!ссад дсадааа!дс 2220
ссассс!дй дд!а!ааай йссааса!а йсйаа!с! дддас!дйс 1сса1айдд 2280
йаааад!да ааса!дйд! саасс!ддй д!да!ддасс саШдйда сс!ддсса!с 2340
асса!с!д1а йд!сйааа 1ас1сййс а!ддсса!дд адсас!а!сс аа!дасддас 2400
са!йсаа!а а!д!дсйас ад!аддааас йддййса с!ддда!сй !асадсадаа 2460
а!дй1с1да ааайайдс са!дда1сс! 1ас1айай !ссаадаадд с!ддаа!а!с 2520
1йдасддй йайд!дас дсйадсс!д д!адаасйд дас!сдссаа !д!ддаадда 2580
йа!с!дйс 1ссдйсай 1сдайдс1д сдадййса адйддсааа а!сйддсса 2640
асдйааа!а 1дс1аа1ааа да!са!сддс аайссд!дд дддс!с!ддд ааай1аасс 2700
с!сд!сйдд сса!са1сд! сйсайй! дссд!дд!сд дса!дсадс! с!йдд1ааа 2760
адс!асааад айд!д!с1д саада!сдсс ад!дайд!с аас!сссасд с!ддсаса!д 2820
аа!дасйс! 1ссас1ссй сс!дайд1д йссдсд!дс 1д1д1дддда д!дда!адад 2880
асса!д!ддд ас!д!а1дда ддйдс!дд! саадсса!д! дссйас!д! сйса!да!д 2940
д1са!дд!да йддааасс! ад!дд!сс1д аа!с1сй1с 1ддссйдс1 1с1дадс1са 3000
- 28 029151
Шад1дсад асаассйдс адссас!да! да1да1аа1д ааа!даа!аа 1с1ссаааО 3060
дс1д1дда1а дда!дсасаа аддад1адс11а1д1даааа даааааОИа 1дааШа11 3120
саасад1сс1 йайаддаа асаааадаО йада!дааа йааассас! 1да1да1с1а 3180
аасаасаада аадасадйд 1а1д1ссаа1 са!асадсад аааОдддаа адаййдас 3240
1а1с11ааад а1д1ааа1дд аас1асаад1 ддОИаддаа с!ддсадсад (дОдааааа 3300
(асаПаОд а1дааад1да 11аса1д1са 11са1аааса ассссад1с11ас1д1дас1 3360
д1ассаа11д с1д1аддада а1с1дасШ дааааШаа асасддаада сШад1ад1 3420
даа1сдда1с !ддаадааад сааададааа с1даа1дааа дсад1адс1с а1садаадд1 3480
адсас1д1дд аса!сддсдс асс1д1адаа даасадсссд 1ад1ддаасс 1даадааас1 3540
сйдаассад аадсОдШ сас!дааддс 1д1д1асааа дайсаад!д Нд1сааа1с 3600
аа1д1ддаад ааддсададд аааасаа!дд 1ддаасс1да дааддасд!д Шссдаа1а 3660
дОдаасаШ ас1ддШда дассИсаИ дййса!да йсйсйад 1ад1дд1дс1 3720
с1ддсаШд аада1а1а1а 1айда1сад сдааадасда йаадасда! дОддаа1а1 3780
дс!дасаадд ййсасйа саййсай с1ддааа1дс Нс1аааа1д дд1ддса1а1 3840
ддс1а1сааа са1аШсас саа1дсс1дд 1дйддс1дд асйсйаа! 1дйда1дй 3900
1са11дд1са дШаасадс ааа1дссйд ддйасйад аасйддадс са1сааа1с1 3960
с!саддасас 1аададс1с1 дадасс1с1а ададссйа! с1сдаШда аддда!дадд 4020
д1ддйд1да а1дсссйй аддадсаай сса1сса1са 1даа1д1дс11с1ддШд1 4080
сШ-ИаПс! ддс1ааШ1 садса1са1д ддсдШааО 1дШдс1дд саааОс1ас 4140
сас!д!айа асассасаас !дд!дасадд Шдаса1сд аадасд!даа 1аа1са1ас1 4200
дайдсс!аа аас1аа1ада аадааа!дад ас1дс1сда1 ддааааа!д! дааад!ааас 4260
Шда1аа1д 1аддаШдд д1а1с1с1с1 йдсйсаад йдссасай сааадда!дд 4320
а1дда1а1аа 1д1а1дсадс адйдайсс адааа!д!дд аас!ссадсс 1аад1а1даа 4380
дааад1с1д1 аса1д1а1с1 йасШдй аййсайа 1сШддд1с сйсйсасс 4440
йдаасс!д! На11дд1д1 са1са1ада1 ааШсаасс адсадааааа даадШдда 4500
дд!саадаса 1сШа1дас адаадаасад аадааа1ас1 а1аа1дсаа1 даааааайа 4560
дда!сдаааа аассдсаааа дсс1а1асс1 сдассаддаа асаааШса аддаа1дд1с 4620
ШдасОсд !аассадаса адШОдас а1аадса1са 1даОс1са1 с!д!сйаас 4680
а1дд1сасаа 1да1дд1дда аасада!дас садад!даа! а1д1дас1ас саййд!са 4740
сдса1саа1с 1дд1д11са11д1дс1аШ ас!ддадад! д1д1ас1даа ас1са1с1с1 4800
с!асдссай айаййас саОдда1дд аа1аПШд аййд1дд! 1д1са11с1с 4860
- 29 029151
1ссайд!ад д1а1дШс1 1дссдадс1д а1адаааад1 аШсд1д1с ссс1ассс1д 4920
йссдадХда 1ссд1сйдс 1аддайддс сдаа1сс1ас д1с1да1саа аддадсааад 4980
дддайсдса сдс1дс1сй 1дсШда1д а1д1сссйс с1дсдйдй 1ааса1сддс 5040
с1сс1ас1с11сс1ад1са1 дйса1с!ас дссайШд ддаЩссаа сШдссйИ 5100
дйаададдд аадйддда1 сда1даса1д йсаасШд адассШдд саасадса1д 5160
а1с1дсс1а1 !ссааайас аасс1с1дс1 ддс1ддда1д дайдйадс асссайсй 5220
аасад1аадс сасссдас1д 1дассс1аа1 ааадйаасс с1ддаадс1с адйааддда 5280
дас1дХддда асссаШдХ 1ддааййс йййдйа дйасайа! саРйссПс 5340
с1ддйд1дд 1дааса1д!а сайдсддй а1сс1ддада асйсадХдХ 1дс1ас1даа 5400
дааадХдсад адссЮдад 1дадда1дас 111дада1д11с1а1дадд1 йдддадаад 5460
Шдайссд аЦсаасйа дйса1ддаа Шдааааа1 1а1с1садй 1дсадс1дсд 5520
сйдаассдс с1с1саа1с1 дссасаасса аасааасйс адсйайдс са1ддай1д 5580
ссса1дд1да дХддХдассд да1ссас1д1 сйдаРйс! 1аШдсШ (асааадсдд 5640
дйсйддад ададХддада да1дда1дс1 с1асдаа1ас ада1ддаада дсдайса1д 5700
дс11ссаа1с с11ссаадд1 с1сс1а1сад ссаа1сас1а с1ас111ааа асдаааасаа 5760
даддаад1а1 с1дс1д1са1 1а11садсд1 дс11асадас дссасс1111 ааадсдаас1 5820
д1аааасаад с11сс111ас д1асаа1ааа аасаааа1са аадд1ддддс 1аа1с11с11 5880
а1аааадаад аса1да1аа1 1дасадаа1а аа1даааас1 с1а11асада ааааас1да1 5940
с1дасса1д1 ссас1дсадс 11д1ссасс1 1сс1а1дасс ддд1дасааа дссаа11д1д 6000
даааааса1д адсаадаадд сааада1даа ааадссааад ддааа1ааа1 даааа1ааа1 6060
ааааа1аа11 дддХдасааа йдШасад сс1д1даадд 1да1д1аШ йайаасад 6120
дасйсШа ддаддйаа! дссааас1да с1дШ11ас асаааййс йааддйад 6180
1дсс1асаа1 аадасад1да сссс11д1са дсааас1д1д ас1с1д1д1а ааддддада1 6240
дасс11даса ддадд11ас1 д11с1сас1а ссадс1даса с1дс1даада 1аада1дсас 6300
аа1ддс1ад1 садас1д1ад ддассад111 саадддд1дс ааасс1д1да 1111дддд11 6360
д111ааса1д ааасас111а д1д1ад1аа1 1д1а1ссас1 д111дса111 саас1дссас 6420
а111д1саса 11111а1дда а1с1д11ад1 дда11са1с1 1111д11аа1 сса1д1д111 6480
а11а1а1д1д ас1а11111д 1ааасдаад1 11с1д11дад ааа1аддс1а аддасс1с1а 6540
1аасадд1а1 дссасс1ддд ддд1а1ддса ассаса1ддс сс1сссадс1 асасааад1с 6600
д1дд111дса 1дадддса1д с1дсас11ад ада1са1дса 1дадааааад 1сасаадааа 6660
аасааа11с1 1ааа111сас са1а111с1д ддадддд1аа 11ддд1да1а ад1ддадд1д 6720
- 30 029151
сШдйда! сйдййдс дааа1ссадс сссйдасса ад1адайа1 Пд1ддд1ад 6780
дссад1ааа1 сйадсадд! дсааасйса йсааа1дй 1ддад1са1а аа1д11а1д1 6840
йсйШдХ 1д1а11аааа аааааасс!д аа1ад1даа1 айдссссй асссйсасс 6900
дссадаадас 1даа11дасс ааааПасй й1а1ааай &1дсйй1 сс1дсасШ 6960
дШадсса! с11сддс1с1 садсааддй дасас1д1а1 а1д11аа1да аа1дс1аШ 7020
а11а1д1ааа 1ад1сайй ассс1д1дд1 дсасдШда дсааасааа! аа1дасс1аа 7080
дсасадХай 1а11дса1са аа1а1д1асс асаадааа!д 1ададХдсаа дсШасаса 7140
дд1аа1аааа 1д1а1й1д1 ассаШа1а да1адй1дд а1дс1а1саа 1дса1дШа 7200
1а11асса1д с1дс1д1а1с 1ддШс1с1 сас1дс1сад аа1с1саШ а!дадааасс 7260
а1а1дйад1 дд1ааад!са аддааайдХ 1саасада1с 1саШаШ аадйайаа 7320
дсаайдШ дсадсасШ аасадсйй 1ддйайй 1асаййаа д1дда1ааса 7380
1а1дд1а1а1 адссадас!д 1асадаса1д Шааааааа сасас1дсй аасс1айаа 7440
а1а1д1дШ адааййа1 аадсааа1а1 ааа1ас1д1а аааадйас! йаййай 7500
ййадсай а1д1аса1аа а1а1даадад даааНай! 1саддйда1 айасаайа 7560
сййсйас Шс1дйса 1ад1асйй йа1дааада ааШдсйа а1аадаса1д 7620
аааасаадас 1ддд1адйд 1адаШс1д сШИааа! 1асаШдс1 ааййада1 7680
1аШсасаа ййааддад саааа1адд1 йасдайса 1айсааа11 а1дсй!дса 7740
айддаааад ддШаааа! ШаШа1а Шс1дд1ад 1асс1дсас1 аас1даайд 7800
ааддХадХдс йа1дйай Шдйсй! Шй1дас1 йддШа1д ййсайй 7860
Шддадйа 1дс1дс1с1а дайдйс!а аа1адаа1д1 дддсйса!а айййй! 7920
ссасааааас ададйдйа ас11а1а1ад йааНаса! саддасай! 1д1д11й11 7980
асадаадсаа асса1аддс1 ссйййсс йаааасйс йада1ааас 1д1а1йд1д 8040
аас1дса1дс 1ддаааа1дс 1ас1а11а1д с1ааа1аа1д с!аассааса Шаааа1д1 8100
дсаааас!аа 1ааада11ас айййай йа 8133
<210> 2
<211> 8876
<212> ДНК
<213> Ното 8ар1еп8
<400> 2
ддс1дсйса дасаКИдй 1д1д1д1асд с1д1даадд1 дййййс асадйсссс 60
дсссй1ад1 дд!адйаса а1аа1дсса1 Шд1адйс с1д1асадда аа1дссйП 120
сйасйсад йассадаа! ссййасад даадйаддХ д1ддйШд ааддадаай 180
- 31 029151
аааааааааа аааааааааа аааааааада ййййй Шааадса! да!ддаай1 240
1адс1дсад1 сйсйдд!д ссадсйай аа!сссааас 1с1ддд1д!а ааадайс!а 300
садддсасй 1сйа!дсаа ддадс!ааас ад!дайааа ддадсадда! даааада!дд 360
сасадйад! дс!дд1ассд ссаддасс!д асадсйссд сйсШасс адддаа!ссс 420
Идс1дс1а1 !даасаасдс айдсадаад адааадс!аа дадасссааа саддаасдса 480
адда!дадда 1да1даааа1 ддсссааадс сааасад!да сйддаадса ддаааа1с1с 540
йссаШа! йа!ддадас айссйсад ада1дд1д1с ад1дсссс1д дадда1с1дд 600
асссс1ас1а 1а1саа1аад аааасдШа 1ад1айдаа !ааадддааа дсаа1с1с1с 660
дайсад£дс сасссс!дсс сШасай! 1аас1сссй саасссйй адаааайад 720
с1айаада1 Шдд1аса1 Юйайса а1а1дс1са11а1д1дсасд айсйасса 780
ас1д1д1а111а1дасса1д ад1аассс1с садас!ддас ааадаа1д1д дадйИасс! 840
йасаддаа! йа!асйй даайасйа Паааа1ас1 !дсааддддс ййдййд 900
аадаШсас аШйасдд да1сса1дда айддйдда Шсасадй айасййд 960
са1а1д1дас ададШд1д дасс!дддса а1д1с1садс дйдадааса йсададйс 1020
Юсдадсай даааасаай 1сад1са11с саддсс!даа дассайд1д ддддссс!да 1080
1ссад1сад1 даадаадсй 1с1да1д1са 1да1с11дас 1д1д11с1д1 с1аадсд1д1 1140
Пдсдс1аа1 аддайдсад йдйса!дд дсаасс!асд ааа1ааа1д1 йдсаа1ддс 1200
с1ссада1аа йсйссй! дааа1ааа1а йасйссй сШаасаа! 1са11дда1д 1260
ддаа1дд1ас 1ас1Исаа1 аддасад!да дса1аШаа с!ддда!даа 1а1аПдадд 1320
а1аааад1са сййайй йададдддс аааа1да1дс 1с1дсШд1 ддсаасадс! 1380
сада!дсадд ссад1д1сс1 даадда!аса 1с1д1д1даа ддс1дд1ада аассссаас! 1440
а1ддс1асас дадсШдас ассШадй дддссйй! дссйай! сд1с1са1да 1500
сйаадасй с!дддаааас сШайаас 1дасас1асд 1дс1дс1ддд аааасд!аса 1560
1да1а1ИИ 1д1дс1дд1с аййсйдд дс1сайс1а 1с1аа1ааа1 йдаййдд 1620
с1д1дд1ддс са1ддсс1а1 даддаасада а!саддссас айддаадад дс!даасада 1680
аддаадс!да аШсадсад а1дс1сдаас адйдааааа дсаасаадаа даадс!садд 1740
сддсадс!дс адссдсай! дс1даа1саа дадасйсад 1дд1дс1дд1 ддда!аддад 1800
йййсада дадйсйса д1адса1с1а адйдадсй саааад!даа ааададс!да 1860
аааасадаад ааадааааад ааасадааад аасад1с1дд адаадаадад ааааа!даса 1920
дад!ссдааа а1сддаа1с1 даадасадса !аадаадааа аддШссд! ййссйдд 1980
ааддаад!ад дс1даса1а1 даааадада! Шсйсйс асассад!сс йас1дадса 2040
- 32 029151
1ссд1ддс1с ссШ1с1с1 ссаадасдса асад1адддс дадссИИс адсИсадад 2100
д1сдадсааа ддасаИддс 1с1дадаа1д асШдс1да 1да1дадсас адсассШд 2160
аддасаа1да садссдаада дас1с1с1д11сд1дссдса садаса1дда даасддсдсс 2220
асадсаа1д1 садссаддсс адссд1дсс1 ссаддд1дс1 сссса1сс1д ссса1даа1д 2280
ддаада1дса 1адсдс1д1д дас1дсаа1д д1д1дд1с1с сс1дд1сддд ддссс11с1а 2340
ссс1саса1с 1дс1дддсад с1сс1ассад адддсасаас 1ас1даааса дааа1аадаа 2400
ададасдд1с сад11с11а1 са1д111сса 1дда111а11 ддаада1сс1 аса1сааддс 2460
ааададсаа1 дад1а1адсс ад1а1111да ссаасасса1 ддаадаас11 даадаа1сса 2520
дасадааа1д сссасса1дс 1дд1а1ааа1 11дс1аа1а1 д1д111да11 1дддас1д11 2580
д1ааасса1д д11ааадд1д ааасасс11д 1саасс1дд1 1д1аа1ддас сса111д11д 2640
асс1ддсса1 сасса1с1дс а11д1с11аа а1асас1с11 са1ддс1а1д дадсас1а1с 2700
сса1дасдда дсад11садс ад1д1ас1д1 с1д11ддааа сс1дд1с11с асаддда1с1 2760
1сасадсада аа1д111с1с аада1аа11д сса1дда1сс а1а11а11ас 111саадаад 2820
дс1ддаа1а1 1111да1дд1 111а11д1да дсс11ад111 аа1ддаас11 дд111ддсаа 2880
а1д1ддаадд а11д1сад11 с1ссда1са1 1ссддс1дс1 ссдад1111с аад11ддсаа 2940
аа1с11ддсс аас1с1ааа1 а1дс1аа11а ада1са11дд саа11с1д1д ддддс1с1ад 3000
дааасс1сас с11дд1а11д дсса1са1сд 1с11са1111 1дс1д1дд1с ддса1дсадс 3060
1сШдд1аа дадс1асааа даа1д1д1с1 дсаадаШс саа1да11д1 даас1сссас 3120
дс1ддсаса1 дса1дасШ Иссас1сс11сс1да1сд1 д11ссдсд1д с1д1д1ддад 3180
ад1дда1ада дасса1д1дд дас1д1а1дд адд1сдс1дд ссааасса1д 1дсс11ас1д 3240
1с11са1да1 дд1са1дд1д а11ддааа1с 1ад1дд11с1 даасс1с11с 11ддсс11дс 3300
1111дад11с с11сад11с1 дасаа1с11д с1дссас1да 1да1да1аас дааа1даа1а 3360
а1с1ссада1 1дс1д1ддда адда1дсада ааддаа1сда 1111д11ааа адааааа1ас 3420
д1даа111а1 1садааадсс 111д11адда адсадааадс 111ада1даа а11ааассдс 3480
11даада1с1 ааа1аа1ааа ааадасадс1 д1а111ссаа сса1ассасс а1адааа1ад 3540
дсааадасс1 саа11а1с1с ааадасддаа а1ддаас1ас 1ад1ддса1а ддсадсад1д 3600
1адааааа1а 1д1сд1дда1 дааад1да11 аса1д1са11 1а1ааасаас сс1адсс1са 3660
с1д1дасад1 ассаа11дс1 д11ддадаа1 с1дас111да ааа111ааа1 ас1даадаа1 3720
1садсадсда д1сада1а1д даддааадса аададаадс1 ааа1дсаас1 ад11са1с1д 3780
ааддсадсас дд11да1а11 ддадс1сссд ссдадддада асадсс1дад д11даасс1д 3840
аддаа1ссс1 1даасс1даа дсс1д1111а садаадас1д 1д1асддаад 11саад1д11 3900
- 33 029151
д(сада(аад са(адаадаа ддсаааддда аас1с1дд1д дааШдадд ааааса(дс( 3960
а1аада1ад1 ддадсасаа! (ддйсдааа ссйсайд! сНса1даН с(дс(дадса 4020
д1ддддс1с1 ддссШдаа да1а1а1аса йдадсадсд ааааассай аадасса1д1 4080
1адаа1а1дс (дасааддй йсасйаса 1аНеаНе1 ддааа(дс(д с(ааад(ддд 4140
НдсайИдд Ш1саад1д (аййасса а1дсс1дд1д с(ддс(адас йсс1дайд 4200
11да1д1с1с ас1ддйадс Наас1дсаа а1дссйддд НасЮадаа сйдд1дсса 4260
1сааа1ссс1 садаасас(а ададс1с1да ддссас(дад адсШдЮс сддШдаад 4320
даа(даддд(1дйд1ааа1 дсЮййад дадссайсс а1сйИса1д аа1д1асйс 4380
1ддШд1с1 даЮййдд сШайШса д1а1са1ддд ад1даа1с1с Шдс1ддса 4440
адййасса йд1айаа11асассас1д дадада1дй 1да1д1аадс д(дд(сааса 4500
ас(асад(да д(дсааадс( сЮайдада дсаа(сааас 1дссадд1дд ааааа1д1да 4560
аадШаасй 1да1аасд1а ддасйдда! а1с1д1с1с1 асйсаад1а дссасдШа 4620
аддда(дда( ддайИйИд 1а1дсадс1д йдайсасд ааа(д(адаа йасаассса 4680
адйИдаада саасс1д1ас а1д1а1сШ аШ1д1са1 сШайай Шддйса! 4740
(сШассй даа1сШ1с айдд1д1са 1са1ада1аа сйсаассаа садааааада 4800
адШддадд (саадасай ййИдасад аадаасадаа дааа(ас(ас аа(дсаа(да 4860
ааааас(ддд йсааадааа ссасааааас сса(асс(сд асс(дс(аас ааайссаад 4920
даа1дд1сй 1даййд1а ассааасаад ЮШдайН садса(са(д а1сс1са1с1 4980
дссйааса! дд(сасса(д а(дд(ддааа ссда(дасса дад(саадаа а(дасаааса 5040
11с1д1ас1д дайаа1с1д д1дШайд НОдИеас 1ддадаа1д1 д(дс(дааас 5100
1да1с1с1с11сдйас1ас 1аШсас1а йдда1ддаа 1аШйда1 Шд1дд1дд 5160
1сайс1с1с сайд1адда а1дШс1дд с1даас1да1 адаааадйИ Шд1д1ссс 5220
с1ассс1дй ссдад(да(с сдЮйдсса ддайддссд аа1сс1асд1 с(да(сааад 5280
дадсаааддд да(ссдсасд с1дс1сШд сШда1да1 дЮссйсс! дсдЦдШа 5340
аса(сддсс( ссйсййс с1дд1са1д11са1с1асдс саЮШддд ;Пд1ссаай 5400
11дсс1а1д1 (аададддаа дйдддаЮд а1даса1дй саасШдад ассШддса 5460
асадса(да( с1дсс1дйс сааайасаа сс1с1дс1дд с(ддда(дда йдс1адсас 5520
сйШсйаа 1ад1ддасс1 ссадас(д(д ассс(дасаа ада(сассс( ддаадс(сад 5580
йаааддада с(д(дддаас сса1с1дйд ддаййсй Ш1д1сад11аса1са1са 5640
1а1ссйсс1 ддйд1дд1д ааса(д(аса 1сдсдд1са1 сс(ддадаас йсад1дйд 5700
с(ас(даада аад(дсадад сс1с1дад1д адда1дасй 1дада1дйс йПдаддШ 5760
- 34 029151
дддадаадй 1да1сссда1 дсдасссад! йа!ададй 1дссааас11 Юдаййд 5820
сада1дссс1 дда1сс1сс1 с11с1са1ад саааасссаа сааадТссад сЮайдсса 5880
1дда1с1дсс са1дд1дад1 ддТдассдда 1ссас1д1с11даса1с11а ШдсНйа 5940
сааадсдд й!ддд1дад адТддадада 1дда1дссс1 1сдаа1асад а!ддаададс 6000
дайса1ддс айааасссс 1ссааад1с1 сйа1дадсс сайасдасс асдйдааас 6060
дсааасаада ддадд!д1с1 дйайайа !ссададддс йасадасдс 1асс1сйда 6120
адсааааад! 1ааааадд1а 1саад1а1а1 асаадааада саааддсааа даа1д1да1д 6180
даасассса! сааадаада! асШсайд а1ааас1даа 1дадаайса асйсадада 6240
ааассдайИ дасдссйсс ассасдШс сассс1сд1а 1да1ад1д1д ассааассад 6300
ааааадаааа аШдааааа дасааайад ааааддаада сааадддааа да1а1саддд 6360
ааад!ааааа дТааааадаа ассаадаай йссаййд 1да1саайд Шасадссс 6420
д!да1дд1да 1д1дИ1д1д Юаасаддас Юссасадда дд1с1;йдсс ааас1дас1д 6480
Шйасааа 1дШШсйа адд1сад!дс сйИаасаад асададасс! с1дд1садса 6540
аас1ддаас1 сад1ааас1д дадааа1ад1 а1сда1ддда ддШс1ай йсасаасса 6600
дс1дасас1д с!даададса даддсдЩа! ддс1ас1сад асда!аддаа ссааШааа 6660
ддддддаддд аадйааай Ша1д1ааа йсааса1д1 дасасйда! аа1ад1аай 6720
д1сассад1д Ша1дйй аас!дссаса сс1дсса1а1 ййасаааа сд1д1дс1д1 6780
даайШса сййсйй 1аайсасад дйдШас! айа1а1д1д ас1айШд 6840
1ааа1дддй 1д1дШддд дададддай ааадддаддд аайс1аса1 йс1с1айд 6900
1а11д1а1аа с1дда1а1а1 Шааа1дда ддса1дс1дс аайШсай сасаса1ааа 6960
аааайаса! сасааааддд аададШас йсйдШс адда1дйй 1адаШйд 7020
аддТдсйаа а1адс1айс дШШйаа дд1д1с1са1 ссадаааааа Шаа1д1дс 7080
с1д1ааа1д11сса1адаа1 сасаадсай ааададйд! ШайШа са1аассса1 7140
1ааа1д1аса 1д1а1а1а1д 1а1а1а1д1а 1а1д1дсд1д 1а1а1аса1а 1а1а1д1а1а 7200
сасаса1дса сасасадада 1а1асаса1а ссайасай дйайсаса дсссадсад 7260
са1дас1а1с асайШда 1аад1д1сс1 йддса1ааа а1ааааа4а1 ссйИсадй 7320
сШс1аада адсйдаай дассаааааа сайсссасс ассасШа! ааадйдай 7380
с1дсШа1с с1дсад!ай дШадсса! сйс1дс1с1 1дд1ааддй даса1ад1а1 7440
а1д1сааШ аааааа1ааа ад1с1дсШ д1ааа1ад1а аййассса д1дд1дса1д 7500
Шдадсааа сааааа1да1 даШаадса сас1асйа11дса1сааа1 а1д1ассаса 7560
д1аад1а1ад Шдсаадс! йсаасадд! аа1а1да1д1 аайддйсс айа1адШ 7620
- 35 029151
даадс!д1са с1дс1дса1д Ша1с11дс с1а1дс1дс1 д1а1с11а11 ссйссас(д 7680
йсадаад!с 1аа1а1ддда адсса1а1а1 сад!дд1ааа дХдаадсааа йдйс!асс 7740
аадасс1са11с11са1д1с айаадсаа! аддйдсадс ааасааддаа дадсйсйд 7800
сШйайс йссаассй аайдаасас 1саа1да1да ааадсссдас 1д1асаааса 7860
1д11дсаадс 1дс11ааа1с 1дШаааа1 а1а1дд11ад адййс!аа даааа1а1аа 7920
а1ас1д1ааа аадйсай! 1аШ1аШ йсадссй! 1д1асд1ааа а(дадааай 7980
аааад1а1с11садд1дда1 д1сасад1са с!айдйад й1с(дйсс (адсасйй 8040
ааайдаадс асйсасааа а1аадаадса аддас1адда 1дсад1д1ад дШс1дс11 8100
ййайад! ас1д1ааас1(дсасасай1саа1д1даа асаааШса аас(дадйс 8160
аа1дШа111дсШсаа1 ад1аа1дсс11а1са11даа ададдсйаа адаааааааа 8220
аа1садс1да 1ас1с11ддс айдсйдаа 1ссаа1дШ ссасс1ад1с Шйайса 8280
д1аа1са1са д!сййсса а1дШдШ асасадаШд аШйайда ссса1а1ддс 8340
ас1адаас1д 1а1сада1а1 аа1а1ддда1 сссадсйй Шсс1с1сс сасаааасса 8400
дд1ад1даад йа!айасс адйасадса ааа1асШд 1дШсасаа дсаасаа1аа 8460
а(д!адайс Ша1ас1да адс!айдас Нд1ад1д1д 11дд1дааа1 дса!дсадда 8520
ааа1дс1д11 асса!ааада асддХааасс асайасаа! саадссаааа даа1ааадд1 8580
йсдсййд Шйд!ай 1аа11д11д1 сШдШс! а1сШдааа 1дссаШаа 8640
адд1адаШ с1а1са1д1а аааа1аа1с1 а1с1дааааа сааа1д1ааа даасасаса! 8700
1аа11ас1а1 аайса!сй (еааййй са1ддаа1дд аадйаайа адаадад1д1 8760
айдда!аас 1асШаа1а йддссаааа адс1ада1а1 ддса1садд1 адас1ад1дд 8820
ааадйасаа ааа11аа1аа аааайдас! аасаййаа аааааааааа аааааа 8876
<210> 3
<211> 9141
<212> ДНК
<213> Ното 8ар1еп8
<400> 3
асса1адад1 даа1с1сада асаддаадсд даддса1аад садададда! 1с1ддааадд 60
1с1сШд11 йсйа!сса сададааада аадааааааа а11д1аас1а аШдХааас 120
с1с1д1дд1с аааааааааа аааааааааа аадс!дааса дс!дсададд аадасасдй 180
а1ассс1аас са1с11дда1 дс1дддсШ д11а1дс1д1 аайса1аад дс1с1дШ1 240
аШададай а!ддадсаад аааас!даад ссаадссаса 1сааддШд асаддда!да 300
да1асс1д1с ааддайса! ад1адад1дд с11ас1ддда ааддадсааа даа1с1с11с 360
1аддда1ай д1аадаа1аа а1дада1аа1 !сасадаадд дасс!ддадс ййссддаа 420
- 36 029151
аааддкдскд 1дас1а1с1а адд1аа11сд 1а1дсаадаа дс1асасд1а айааакдкд 480
саддакдааа адакддсаса ддсаскдккд дкасссссад дасскдааад сйссдссй 540
Шас1адад ааксксккдс кдскаксдаа ааасдкдскд садаададаа адссаадаад 600
сссааааадд аасаадакаа кдакдакдад аасааассаа адссааакад кдасккддаа 660
дскддааада ассйссай какйакдда дасакксскс сададакддк дксададссс 720
скддаддасс кддакссска скакаксаак аадаааасй йакадкаак даакааадда 780
ааддсаакй кссдайсад кдссасскск дссккдкака ййаасксс аскааассск 840
дккаддаааа ккдскаксаа даккккддка саккскккак ксадсакдск каксакдкдс 900
аскаккккда ссааскдкдк акккакдасс ккдадсаасс сксскдаскд дасааадаак 960
дкададкаса сакксаскдд аакскакасс кккдадксас ккакааааак сккддсаада 1020
дддййдск кадаадайк касдйксй сдкдакссак ддааскддск ддаккксадк 1080
дксаккдкда кддсакакдк дасададккк дкддасскдд дсаакдкскс адсдккдада 1140
асакксадад ккскссдадс аскдааааса аккксадкса ккссаддккк ааадассакк 1200
дкдддддссс кдакссадкс ддкааадаад скккскдакд кдакдаксск даскдкдккс 1260
кдкскдадсд кдйкдскск саккдддскд садскдйса кдддсаакск даддаакааа 1320
кдйкдсадк ддсссссаад сдаккскдск йкдааасса асассасйс скасйкаак 1380
ддсасаакдд акксааакдд дасакккдкк аакдкаасаа кдадсасакк кааскддаад 1440
дайасайд дадакдасад ксасййак дййддакд ддсааааада сссйкаскс 1500
кдкддааакд дсксадакдс аддссадкдк ссадааддак асакскдкдк дааддскддк 1560
сдааасссса аскакддска сасаадсккк дасассккка дскдддсккк сскдкскска 1620
йксдаскса кдасксаада скаскдддаа аакскйасс адккдасай асдкдскдск 1680
дддаааасак асакдакакк ккккдксскд дксаккккск кдддсксакк ккакккддкд 1740
аайкдаксс кддскдкддк ддссакддсс какдаддадс адааксаддс сассйддаа 1800
даадсадаас ааааададдс сдааккксад садакдсксд аасадсккаа ааадсаасад 1860
даадаадскс аддсадккдс ддсадсакса дскдскксаа дадаккксад кддаакаддк 1920
дддккаддад адскдккдда аадкксккса даадсаксаа адккдадккс саааадкдск 1980
ааадаакдда ддаассдаад даадаааада адасададад адсассккда аддааасаас 2040
аааддадада дадасадскк ксссаааксс даакскдаад асадсдксаа аадаадсадс 2100
ккссккккск ссакддакдд ааасадаскд ассадкдаса аааааккскд скссссксак 2160
садкскскск кдадкакссд кддскссскд ккккссссаа дасдсаакад саааасаадс 2220
акккксадкк ксададдксд ддсаааддак дккддакскд аааакдаскк кдскдакдак 2280
- 37 029151
даасасадса саШдаада садсдааадс аддададас1 сас1дШд1 дссдсасада 2340
са1ддададс дасдсаасад 1аасд11ад1 саддссад!а 1д1са1ссад да1дд1дсса 2400
дддсйссад сааа!дддаа да!дсасадс ас1д1ддаП дсаа1дд1д1 ддШссИд 2460
д1ддд1ддас сйсадсЮ аасд1сасс1 ас!ддасаас йсссссада дддсассасс 2520
асадааасдд аад!садааа дадааддйа адс1с11асс адаШсаа! ддада1дс1д 2580
даддайсс! с!ддааддса аададссд!д адса!адсса дсайс1дас саасасаа!д 2640
даадаасйд аадааШад асадааа1д1 ссдсса1дс1 дд1а1ада111дссаа1д1д 2700
11с11да1с1 дддас1дс1д 1да1дса1дд 11аааад1аа ааса1с11д1 дааШаай 2760
д11а1дда1с саШдйда 1с11дсса1с ас1аШдса йдХсйааа 1ассс1сШ 2820
а1ддсса1дд адсас!ассс са1дас1дад саа11сад1а д1д1д11дас 1д1аддааас 2880
с1дд1сШа с1ддда1Ш сасадсадаа а1дд11с1са ада1са11дс са1дда1сс1 2940
1а11ас1а11 !ссаадаадд с1ддаа1а1с Шда1ддаа ИаПд1сад сс1садШа 3000
а1ддадс11д д1с1д1сааа 1д1ддаддда Ид1с1д1ас 1дсда1са11 садас1дсй 3060
ададййса адйддсааа а1сс1ддссс асас1ааа1а 1дс1аа11аа да1са11ддс 3120
аайс1д1дд дддсШадд ааасс!сасс 11дд1д11дд сса1са1сд1 сйсаШй 3180
дс1д1дд1сд дса1дсадс1 сШдд1аад адс!асааад аа1д1д1с1д саада1саа1 3240
да1дас1д1а сдс!сссасд д1ддсаса1д аасдасйс! 1ссас1сс11 сс1даПд1д 3300
йссдсдХдс 1д1д1ддада д1дда1адад асса1д1ддд ас1д1а1дда дд1сдс1ддс 3360
сааасса1д1 дссйайдХ Шса1д11д д1са1дд1са йддааасс! ХдХддХХсХд 3420
аасс1с111с 1ддсс11а11 д11дад11са 111адс1сад асаасс11дс 1дс1ас1да1 3480
да1дасаа1д ааа1даа1аа 1с1дсада11 дсад1аддаа даа1дсаааа дддаайда! 3540
1а1д1даааа а1аада1дсд ддад1д111с сааааадсс1 11111адааа дссаааад11 3600
а1адааа1сс а1дааддсаа 1аада1адас адс1дса1д1 ссаа1аа1ас 1ддаа11даа 3660
а1аадсааад адсйаайа 1с11адада1 дддаа1ддаа ссассад1дд 1д1адд1ас1 3720
ддаадсад1д 11дааааа1а сд1аа1сда1 даааа1да11 а1а1д1са11 са1ааасаас 3780
сссадсс1са ссд1сасад1 дссаа11дс1 д11ддадад1 с1дас111да ааас11ааа1 3840
ас1даадад1 1садсад1да д1садаас1а даадааадса аададааа11 ааа1дсаасс 3900
адс1са1с1д ааддаадсас ад11да1д11 д11с1асссс дадаадд1да асаадс1даа 3960
ас1даасссд аадаадасс1 1ааассддаа дс11д1111а с1даадда1д 1а11ааааад 4020
111сса11с1 д1саад1аад 1асадаадаа ддсаааддда ада1с1дд1д даа1с11сда 4080
аааасс1дс1 асадХайдХ (дадсасаас 1ддШдада сШсаИд! дйса1да1с 4140
- 38 029151
сйс1сад1а д1дд1дса11 ддссШдаа да1а1а1аса йдаасадсд ааадасйИс 4200
аааасса1дс 1адаа1а1дс 1дасааад1с й!асс!а!а ШПеаПе! ддааа1дсй 4260
с1саа;йддд Идс11а1дд аШсаааса 1аШсас1а а!дсс!дд!д с!ддс!ада! 4320
Псйдайд йд;йдШс Шддйадс с!дд!адсса а!дс!сйдд с1ас1садаа 4380
с1сдд1дсса 1сааа1са11 асддасайа ададсШаа дасс!с!аад адссйаЮс 4440
сддШдаад дса!даддд! дд11д1да;й дс1с11д11д дадсаайсс с1с1а1са1д 4500
аа1д1дс1д11дд1с1д1с1 са1сйс1дд ПдаЮШа дса1са1ддд 1д1дааШд 4560
Шдс1ддса ад11с1асса с1д1дйаас а1дасаасдд д1ааса1дй 1даса11ад1 4620
да1дйааса аШдад1да с1д1саддс1 сйддсаадс аадс1сдд1д дааааасд1д 4680
ааад1ааас1 Пда1а;йд11ддсдс1ддс ййсйдсас 1дсйсаад1 ддссасаШ 4740
аааддс1дда 1дда1ай;й дййдсадс! дйдайсас дада!дйаа асйсадсс! 4800
д1а1а1даад аааа1с1д1а са1д1аШа 1асШд1са 1сШ;йса1 сШдддйа 4860
йсйсас!с 1даа1с1а11 сайддХдХс ;йса1ад;йа асйсаасса дсадааааад 4920
аадШддад д1саадас;й сШ;йдаса даддаасада аааа;йайа са;йдсаа1д 4980
аадааасйд д;йссаадаа ассйадааа ссса1асс1с дсссадсааа сааайссаа 5040
ддаа1дд1с1 йдаШ1д1 аассадасаа д1сШда1а 1садс;йс;й да1сс1с;йс 5100
1дсс1сааса 1дд1сасса1 д;йдд1ддаа асдд;йдасс адддсаа;йа са1дассс1а 5160
дййдХссс ддайаасс! ад1дйсай дйс!дйса с1ддадаай 1д1дс1даад 5220
с1сд1с1ссс 1садасас1а с1асйсас1 ;йаддс1дда асайШда сШд1дд1д 5280
д1да11с1с1 ссайд!адд 1а1дШс1д дс1дад;йда 1адаааад1а Ш1д1д1сс 5340
сс1асс11д11ссдад1да1 ссдХсйдсс аддайддсс да;йсс1асд 1с1д;йсааа 5400
ддадсааадд ддайсдсас дс1дс1сШ дсШда1да 1д1ссс11сс 1дсдйдШ 5460
аасайддсс 1сс1дс1сй сс1дд1с;йд Ш;йс1;йд ссаЮШдд д;йд1ссаас 5520
ШдссйИд йааааадда адс1ддаай д;йдас;йд11саасШда дассШддс 5580
аасадса1да 1с1дсПдП ссааайаса асс1с1дс1д дс1ддд;йдд айдс1адса 5640
ссЕШсйа а1ад1дсасс асссдас1д1 дассс1даса саайсассс 1ддсадс1са 5700
дйаадддад ас1д1дддаа сссаЮдй дддаййс! Шйд1сад йас;йса1с 5760
айИссПсс 1дд11д1дд1 даас;йд1ас ;йсдсдд1са 1сс1ддадаа сйсадХдй 5820
дс1ас1даад ааад1дсада дсссс1дад1 дадда1дас1 йдада!дй сйИдаддП 5880
1дддаааад1 йдайссда (дсдасссад Ш;йадад11с1с1ааас1 с1с1даШ1 5940
дсадс1дссс 1дда1сс1сс 1сйс1с;йа дсаааассса асааадХсса дсйайдсс 6000
- 39 029151
а1дда1с1дс сса1дд1сад 1дд1дассдд а1ссас1д1с 11да1а1111 а111дсс111 6060
асааадсд1д 1Шддд1да дад1ддадад а1дда1дссс 11сдаа1аса да1ддаадас 6120
аддШа1дд са1сааассс с1ссааад1с 1с11а1дадс с1а11асаас сасШдааа 6180
сд1ааасаад аддадд1д1с 1дссдс1а1с а11садсд1а а111сада1д 11а1с1111а 6240
аадсааадд1 1аааааа1а1 а1саад1аас 1а1аасааад аддсаа11аа адддадда11 6300
дас11асс1а 1аааасаада са1да11а11 дасааас1аа а1дддаас1с сас1ссадаа 6360
аааасада1д ддад11сс1с 1ассасс1с1 сс1сс11сс1 а1да1ад1д1 аасаааасса 6420
дасааддааа ад111дадаа адасааасса дааааадааа дсаааддааа ададд1сада 6480
даааа1сааа ад1ааааада аасааадаа1 1а1с111д1д а1саа11д11 1асадсс1а1 6540
даадд1ааад 1а1а1д1д1с аас1ддас11 саададдадд 1сса1дссаа ас1дас1д11 6600
11аасааа1а с1са1ад1са д1дсс1а1ас аадасад1да ад1дасс1с1 с1д1сас1дс 6660
аас1с1д1да адсаддд1а1 сааса11дас аададд11дс 1д11111а11 ассадс1дас 6720
ас1дс1дадд адааасссаа 1ддс1асс1а дас1а1аддд а1ад11д1дс ааад1дааса 6780
11д1аас1ас ассааасасс 111ад1асад 1сс11дса1с са11с1а111 11аас11сса 6840
1а1с1дсса1 а11111асаа аа111д11с1 ад1дса111с са1дд1сссс аа11са1ад1 6900
11а11са1аа 1дс1а1д1са с1а11111д1 ааа1дадд11 1асд11даад ааасад1а1а 6960
саадаассс1 д1с1с1сааа 1да1садаса аадд1д1111 дссададада 1аааа11111 7020
дс1саааасс адааааадаа 11д1аа1ддс 1асад111са д11ас11сса 1111с1ада1 7080
ддсШаай 11дааад1а1 Шад1с1д11а1дШд111с1а1с1даа сад11а1д1д 7140
сс1д1ааад1 с1сс1с1аа1 а111ааадда 11а11111а1 дсааад1а11 с1д111садс 7200
аад1дсааа1 111а11с1аа д111сададс 1с1а1а111а а111адд1са аа1дс111сс 7260
ааааад1аа1 с1аа1ааа1с са11с1адаа ааа1а1а1с1 ааад1а11дс 111адаа1ад 7320
11д11ссас1 11с1дс1дса д1а11дс111 дсса1с11с1 дс1с1садса аадс1да1ад 7380
1с1а1д1саа 11ааа1ассс 1а1д11а1д1 ааа1ад11а1 111а1сс1д1 дд1дса1д11 7440
1дддсааа1а 1а1а1а1адс с1да1аааса ас11с1а11а аа1сааа1а1 д1ассасад1 7500
д1а1д1д1с1 111дсаадс1 1ссаасаддд а1д1а1сс1д 1а1са11са1 1аааса1ад1 7560
11аааддс1а 1сас1аа1дс а1д11аа1а1 1дсс1а1дс1 дс1с1а1111 ас1саа1сса 7620
11с11сасаа д1с11дд11а аадаа1д1са са1а11дд1д а1адаа1даа 11саасс1дс 7680
1с1д1сса11 а1д1саадса даа1аа111д аадс1а111а сааасасс11 1ас1111дса 7740
с1111аа11с ааса1дад1а 1са1а1дд1а 1с1с1с1ада 111сааддаа асасас1дда 7800
1ас1дсс1ас 1дасаааасс 1а11с11са1 а1111дс1аа ааа1а1д1с1 аааас11д11 7860
- 40 029151
!ааа!а!ааа 1аа1д1аааа а1а1аа1саа сШаШд! садсаййд 1аса1аадаа 7920
аайаййс аддйда!да сайасааП !аййасй ЕйдсПйд сййдай! 7980
Паайасаа йссааасй йдаа1сса1 аадаШйс аа1дда1аа1 йсс1аааа1 8040
аааадйада 1аа1дддШ ЕйддаШс й1дйа!аа 1а1а1И1с1 ассайссаа 8100
1аддада1ас аПддйааа сасйааасс 1ада1са1И 1с1ассаас1 а1дд11дсс1 8160
саайИаасс ййайса! ада1дйИ1 ййайсаа сййд1ад! аШасдйИ 8220
дсадас1ад1 сйаййй 1аа11сс1дс 1дсас1ааад с!айасааа 1а1ааса1дд 8280
асШдйс! ййадсса! даасааад1д дсааадйд! дсаайасс! ааса1да1а1 8340
аааШйд! Шйдсаса аассаааад! йаа!дйаа йсШйас аааасШШ 8400
ас1д1ад1д1 айдаадаас 1дса1дсадд даайдсйИ 1дс1ааааад аа1дд1дадс 8460
1асд1са11а йдадссааа адааШаай !сайййа йдсаШса сйайддсс 8520
1с1ддддШ ШдйШд йййдс!д йддсадШ аааа1а1а1а 1аайаа1аа 8580
аасс1д1дс11да1с1даса ШдЕйаса (аааадШа са!даайй асаасааас! 8640
ад1дса1да1 (сассаадса д1ас1асада асаааддсаа айаааадса дсШд1даа 8700
сййа1д1д (дсааадда! саадйсаса (дйссаас! йсаддШд а1аа1аа1ад 8760
1ад1аассас с1асаа1адс ШсааШс ааПаасйс сПддсйИа адса1с1ааа 8820
с1са1сШ1 йсаабйаа 11да1дс1а1 с1сс1аайа с11дд1ддс1 аа1ааа1дй 8880
асайсШд йасйааа! дсайа1а1а аасйсйИд 1а1аса1аад д1айаа1да 8940
1а1адйай дадааШа! айаасйй ййсаадаа сссйддай 1а1д1дадд1 9000
саааассааа Шсйайс! сад1ддаааа Шссадйд! аа1дса1ай Шааадаса 9060
аШдда1с1 ааабйдйИ йсаШайс 1ссса1аа1а аайайИаа дд1ддс1аа1 9120
(ддааааааа аааааааааа а 9141
<210> 4
<211> 7805
<212> ДНК
<213> Ното 8ар1еп8
<400> 4
ссадсасссс ддддс1дсдс ас1дсадс1с сссаддссас ссассассс! 1с1дд1с1с1 60
дадсссадда 1дсдадда1д дссадасса! с1с1д1дсас сс1дд1дсс1 с1дддссс1д 120
ад!дсйдсд ссссйсасс сдддадйас (ддсадсса! адаасадсдд дсдд1ддадд 180
аддаддсссд дс1дсадсдд аа1аадсада (ддадаПда ддадсссдаа сддаадссас 240
даад!дасй ддаддс1ддс аадаасс1ас сса1да1с1а сддадасссс ссдссддадд 300
- 41 029151
ксаксддсак ссссскддад дасскддакс сскаскасад саакаадаад асскксаксд 360
касксаасаа дддсааддсс аксккссдск кскссдссас асскдскскс касскдскда 420
дсссскксад сдкадксадд сдсддддсса ксааддкдск сакссакдсд скдкксадса 480
кдкксаксак даксассакс йдассааск дсдкакксак дассакдадк дасссдсскс 540
сскддкссаа даакдкддад касассккса садддакска сасскккдад ксссксакса 600
адакаскддс ссдаддсккс кдкдксдасд аскксасакк сскссдддас ссскддааск 660
ддскддаскк садкдксакс акдакддсдк асскдасада дкккдкддас ккдддсааса 720
ксксадссск даддассккс сдддкдскдс дддсссксаа аассаксасд дксаксссад 780
ддскдаадас даксдкдддд дссскдаксс адксддкдаа ааадскдксд дакдкдакда 840
кссксаскдк сккскдсскд адсдкскккд сдскддкадд аскдсадскс кксакдддаа 900
асскдаддса даадкдкдкд сдскддсссс сдссдкксаа сдасассаас ассасдкддк 960
асадсаакда сасдкддкас ддсаакдаса сакддкакдд саакдадакд кддкасддса 1020
акдасксакд дкакдссаас дасасдкдда асадссакдс аадскдддсс ассаасдака 1080
сскккдаккд ддасдсскас аксадкдакд аадддааскк скаскксскд дадддсксса 1140
асдакдссск дскскдкддд аасадсадкд акдскдддса скдссскдад ддккакдадк 1200
дсаксаадас сдддсддаас сссааскакд дскасассад скакдасасс кксадскддд 1260
ссйсккддс ксксккссдс сксакдасас аддаскаккд ддадаасскс ккссадскда 1320
ссскксдадс адскддсаад асскасакда ксккскксд! ддксаксакс кксскдддск 1380
скккскасск саксаакскд аксскддссд кддкддссак ддсакакдсс дадсадаакд 1440
аддссассск ддссдаддак ааддадааад аддаддадкк ксадсадакд сккдадаадк 1500
ксааааадса ссаддаддад скддадаадд ссааддссдс ссаадскскд дааддкдддд 1560
аддсадакдд ддасссадсс сакддсааад аскдсаакдд садсскддас асаксдсаад 1620
дддадааддд адссссдадд сададсадса дсддадасад сддсаксксс дасдссакдд 1680
аадааскдда ададдсссас саааадкдсс сассакддкд дкасаадкдс дсссасааад 1740
кдсксакакд дааскдскдс дссссдкддс кдаадкксаа даасаксакс сасскдаксд 1800
ксакддассс дкксдкддас скдддсакса ссакскдсак сдкдсксаас асссксккса 1860
кддссакдда асаккасссс акдасддадс аскккдасаа сдкдсксаск дкдддсаасс 1920
кддкскксас аддсаксккс асадсадада кддккскдаа дскдаккдсс акддасссск 1980
асдадкаккк ссадсадддк кддаакакск ксдасадсак саксдксасс сксадсскдд 2040
кададскадд сскддссаас дкасадддас кдкскдкдск асдскссккс сдкскдскдс 2100
дддкскксаа дскддссаад ксдкддссаа сдскдаасак дсксаксаад аксаккддса 2160
- 42 029151
айсад!ддд ддсдс1ддд1 аасс!дасдс 1дд1дс1ддс 1а1са1сд1д йса!сйсд 2220
ссд1дд1ддд са1дсадс1д Шддсаада дс!асаадда д1дсд1д1дс аадайдсс! 2280
1ддас1дсаа сс1дссдсдс 1ддсаса1дс а!дай1сй ссас1сс11с с1са1сд1с1 2340
1ссдса1сс1 д1дсддддад 1дда1сдада сса1д1ддда с1дса1ддад д1ддссддсс 2400
аадсса1д1д сс1сассд1с 11сс1са1дд 1са1дд1са1 сддсаа1с11 д1дд1сс1да 2460
асс1д11сс1 ддс1с1дс1д с1дадс1сс1 1садсдссда сад1с1ддса дсс1сдда1д 2520
адда1ддсда да1даасаас с1дсада11д сса1сдддсд са1саад11д ддса1сддс1 2580
11дссааддс с11сс1сс1д дддс1дс1дс а1ддсаада1 сс1дадсссс ааддаса1са 2640
1дс1садсс1 сддддаддс1 дасддддссд дддаддс1дд ададдсдддд дадас1дссс 2700
ссдадда1да даадааддад ссдсссдадд аддасс1даа дааддасаа1 саса1сс1да 2760
ассаса1ддд сс1ддс1дас ддсссссса1 ссадсс1сда дс1ддассас с11аас11са 2820
1саасаассс с1асс1дасс а1асадд1дс сса1сдсс1с сдаддад1сс дасс1ддада 2880
1дсссассда ддаддааасс дасас111с1 сададсс1да дда1адсаад аадссдссдс 2940
адсс1с1с1а 1да1дддаас 1сд1ссд1с1 дсадсасадс 1дас1асаад ссссссдадд 3000
аддассс1да ддадсаддса даддадаасс ссдаддддда дсадсс1дад дадХдсйса 3060
с1даддсс1д сдХдсадсдс 1ддссс1дсс 1с1асд1дда саШсссад ддссдХддда 3120
адаад1дд1д дасШдсдс адддсс1дс11саада11д1 сдадсасаас 1дд11сдада 3180
сс11са11д1 с11са1да1с с1дс1садса д1ддддс1с1 ддсс11сдад даса1с1аса 3240
11дадсадсд дсдад1са11 сдсасса1сс 1адаа1а1дс сдасаадд1с 11сасс1аса 3300
1с11са1са1 ддада1дс1д с1сааа1ддд 1ддсс1асдд с111аадд1д 1ас11сасса 3360
асдсс1дд1д с1ддс1сдас 11сс1са1сд 1дда1д1с1с са1са1садс 11дд1ддсса 3420
ас1ддс1ддд с1ас1сддад с1дддассса 1сааа1ссс1 дсддасас1д сдддссс1дс 3480
д1сссс1дад ддсас1д1сс сда11сдадд дса1даддд1 дд1дд1даас дссс1сс1ад 3540
дсдсса1ссс с1сса1са1д аа1д1дс1дс 11д1с1дсс1 са1с11с1дд с1да1с11са 3600
дса1са1ддд 1д1саасс1д 111дссддса ад11с1ас1а с1дса1саас ассассасс1 3660
с1дададд11 сдаса1с1сс дадд1сааса асаад1с1да д1дсдададс с1са1дсаса 3720
саддссадд1 ссдс1ддс1с аа1д1саадд 1саас1асда саасд1ддд1 с1дддс1асс 3780
1с1ссс1сс1 дсаддХддсс ассйсаадд дйдда!дда са1са1д1а1 дсадссдХдд 3840
ас1сссддда дааддаддад садссдсад1 асдадд1даа сс1с1аса1д 1асс1с1ас1 3900
11д1са1с11 са1са1с111 ддс1сс11с1 1сассс1саа сс1с11са11 ддсд1са1са 3960
11дасаас11 саассадсад аадаадаад1 1аддддддаа адаса1с111 а1дасддадд 4020
- 43 029151
аасадаадаа а1ас1а1аас дсса1даада адс11ддс1с саадаадсс1 садаадссаа 4080
йссссддсс ссадаасаад а1ссадддса 1дд1д1а1да сс1сд1дасд аадсаддсс1 4140
1сдаса1сас са1са1да1с с1са1с1дсс 1сааса1дд1 сасса1да1д д1ддадасад 4200
асаассадад ссадс1саад д1ддаса1сс 1д1асааса1 сааса1да1с 11са1са1са 4260
1с11сасадд ддад1дсд1д с1саада1дс 1сдссс1дсд ссад1ас1ас 11сассд11д 4320
дс1ддааса1 с111дас11с д1дд1сд1са 1сс1д1сса1 1д1дддсс11 дссс1с1с1д 4380
асс1да1сса даад1ас11с д1д1сассса сдс1д11ссд 1д1да1ссдс с1ддсдсдда 4440
11дддсд1д1 сс1дсддс1д а1ссдсдддд ссаадддса1 ссддасдс1д с1д11сдссс 4500
1са1да1д1с дс1дсс1дсс с1с11сааса 1сддсс1сс1 сс1с11сс1д д1са1д11са 4560
1с1ас1сса1 с11сддса1д 1ссаас111д сс1асд1саа дааддад1сд ддса1сда1д 4620
а1а1д11саа с11сдадасс 11сддсааса дса1са1с1д сс1д11сдад а1сассасд1 4680
сддссддс1д ддасдддс1с с1саасссса 1сс1саасад сдддссссса дас1д1дасс 4740
ссаасс1дда даасссдддс ассад1д1са аддд1дас1д сддсаасссс 1сса1сддса 4800
1с1дс11с11 с1дсадс1а1 а1са1са1с1 сс11сс1са1 сд1дд1саас а1д1аса1сд 4860
сса1са1сс1 ддадаас11с аа1д1ддсса сададдадад садсдадссс с11дд1даад 4920
а1дас111да да1д11с1ас дадаса1ддд адаад11сда ссссдасдсс асссад11са 4980
1сдсс1асад ссдсс1с1са дас11сд1дд асассс1дса ддаассдс1д адда11дсса 5040
адсссаасаа да1саадс1с а1сасас1дд асПдссса! дд1дссаддд дасаада1сс 5100
ас1дсс1дда са1сс1с111 дссс1дасса аададд1сс1 ддд1дас1с1 ддддааа1дд 5160
асдссс1саа дсадасса1д даддадаад1 1са1ддсадс саасссс1сс аадд1д1сс1 5220
асдадссса1 сассассасс с1саададда адсасдадда дд1д1дсдсс а1саада1сс 5280
ададддсс1а ссдссддсас с1дс1асадс дс1сса1даа дсаддса1сс 1аса1д1асс 5340
дссасадсса сдасддсадс дддда1дасд сссс1дадаа ддаддддс1д с11дссааса 5400
сса1дадсаа да1д1а1ддс сасдадаа1д ддаасадсад с1сдссаадс ссддаддада 5460
адддсдаддс аддддасдсс ддасссас1а 1ддддс1да1 дссса1садс ссс1садаса 5520
с1дсс1ддсс 1сссдсссс1 сссссадддс адас1д1дсд сссадд1д1с ааддад1с1с 5580
11д1с1адса ддсадса1сд ддд1ддссса с1дад1с1сд дса1ад1ссс сададс1ссс 5640
ссд1дд1дсс 1дсасасада д1дадддадд адддс111да а1с1дддас1 д1дсс1ддс1 5700
ссс1да1ддд ддасадда11 1ддссасас1 ддддс1даса сссаддсссд адсдсс1дсд 5760
11сссадасс а1дддааа1д ддаа11дсдс 1саддддс1с са1дс1ддд1 с1даддсссс 5820
1дсс1ссаад а111аасс1д саад11дс1с 1дасс1сс1с 1дддссс1д1 сдсссс1сс1 5880
- 44 029151
йкддсскдд дддаддксад аасакксдаа кскскдсссс ксасккдадд аддадскддс 5940
скдсддкдда дддаксадкк дссссссакс ассададкск каадддксас кддссксксс 6000
ссаддаадкд дсксадассс сксадсссса дсссадасаа адакдкскка ассксаддда 6060
дкдсадасас скаассссад ддсаскдсса дсссассссс кккдаскскд дддкдсадск 6120
ксасссасса ддссадскса ддааккссск ддааааддда аакдкдаскд дкксадааак 6180
адскссксаа адссксаааа сскдаккддс саскддаксс кдскдскккд ддскдддакд 6240
дкдасксскд ааассксккс скаддссасд кссаддкссд кадсксссск ддскддсксс 6300
каддддаада дсадааддаа ддакдссаск кдддаакдаа йдкссйй скаддаадса 6360
сдддддадкд адасаддскд ддксскдсса дскддаксдс кдсасакддс скдадсаксс 6420
адасскдадс дддадксадд дасскдскдс ксадкаадаа дакксксдсс ссккссскск 6480
скссскдсск сасксскссд кдадсассас садддсксса ддадссксак ссадссксад 6540
адакскссск ксксаксксс ссасдсссдк скскккскса ссккксссас сксксксссс 6600
ааадкдаксс каадаакдка садккдадск саддккадак аккксдассс кддддсдкдс 6660
адсадддаад дсссааскдд кксаддскса ассккссаас кксскдкддс скдаадаадс 6720
асккскдскд саксдскдкк скдддсакдд садддссадд сскскдскдд сксаддадда 6780
ддддкдадад асскдсксад дсдксдскдд акккакксас ккдкдкдкдк асскдкддск 6840
дкдкдкскдс ккдкакдскк ккакаддсск дкдкдкакад скдкдкдкдк дкксаадкдс 6900
дкдаскдкак дкдкдкдкдк даассаскдк дкаскддадс скдсаккакд сасдкдкскд 6960
ддкакскккд какакакдкд какакакдкд кдссскддас кдккксаадд кссакддадк 7020
асддскддкд кдксакаскд кдсаддсскд кссскдддад кдкксссдкд сскдддадад 7080
кддасскдкд скдкдадкдк дкддакдсдк дкдаасдсак дкддкааддк дкдкасксад 7140
ддсаккскдк кддсскаадк дссксккскк кккскксккд ккксксакда ааадкккдак 7200
каааакксад даадсадсаа аасскксааа асаадасакд какдкдкдск кдадкдкдкд 7260
аасасдкдкд кдкдкдкдса сакскасакд ссакдсскак дддссададк кдкскйакк 7320
дкссассакд сксксксасс кдсксссадк сскдсскдаа садссскскс ксксаскссс 7380
сксксскссс скксскдккк сксдккдкса сасссакддс сксадссскд скссскдсск 7440
сскдсскакд ксксскскак ддааддаддс скссасксск кссакскскк сскксадаад 7500
ккксдкскаа кдддддсадк сксссскксс кддсасаккд сссскскдсс ккдсссксск 7560
дддссскддд скддсасадс ссскддадсс ксадааакск дкккдаккдд акакксксск 7620
сддаскдкдк дсаддккдса даддаададк адакдадссд ддкссддсск скссскдсск 7680
дкддсссскс ссскдсадас ддакдсссак ксскдсскдд кссадкдддд аасаддкссс 7740
- 45 029151
асдссаддсс адсаддсддд с1сс111д1а садйсйас аа1ааассс1 ссйдд!дсс 7800
1с1дд 7805
<210> 5
<211> 8504
<212> ДНК
<213> Ηοιιιο 5ар1еи5
<400> 5
адасддсддс ддсдсссдра ддаРдсаддд а1сдс1сссс сддддссдсР дадссРдсдс 60
ссадрдсссс дадссссдсд ссдадссдад 1ссдсдссаа дсадсадссд сссассссдд 120
ддсссддссд ддддассадс адсйсссса саддсаасдр даддададсс 1д1дсссада 180
адсадда1да даада1ддса аас11сс1а1 1асс1сдддд сассадсадс 11ссдсадд1 240
1сасасддда д1ссс1ддса дсса1сдада адсдса1ддс ададаадсаа дсссдсддс1 300
саассасс11 дсаддададс сдададдддс 1дсссдадда ддаддс1ссс сддссссадс 360
1ддасс1дса ддсс1ссааа аадс1дссад а1с1с1а1дд саа1ссассс саададс1са 420
1сддададсс сс1ддаддас с1ддасссс1 1с1а1адсас ссаааадас1 11са1сд1ас 480
1даа1ааадд саадасса1с 11ссдд11са д1дссассаа сдсс11д1а1 д1сс1сад1с 540
сс11ссассс са1ссддада дсддс1д1да ада11с1дд1 1сас1сдс1с 11сааса1дс 600
1са1са1д1д сасса1сс1с ассаас1дсд 1д11са1ддс ссадсасдас сс1ссассс1 660
ддассаад1а 1д1сдад1ас асс11сассд сса111асас с111дад1с1 с1дд1саада 720
11с1ддс1сд аддс11с1дс с1дсасдсд1 1сас111сс1 1сдддассса 1ддаас1ддс 780
1ддас111ад 1д1да11а1с а1ддса1аса саас1даа11 1д1ддасс1д ддсаа1д1с1 840
садсс11асд сасс11ссда д1сс1ссддд ссс1даааас 1а1а1сад1с а111садддс 900
1даадасса1 сд1дддддсс с1да1ссад1 с1д1даадаа дс1ддс1да1 д1да1дд1сс 960
1сасад1с11 с1дсс1садс д1с111дссс 1са1сддсс1 дсадс1с11с а1дддсаасс 1020
1ааддсасаа д1дсд1дсдс аасйсасад сдс1саасдд сассаасддс 1ссд1ддадд 1080
ссдасддсй дд1с1дддаа 1ссс1ддасс 111асс1сад 1да1ссадаа аа11асс1дс 1140
1саадаасдд сасс1с1да1 д1д11ас1д1 дрдддаасад с1с1дасдс1 дддаса1д1с 1200
сддадддсРа ссдд1дсс1а ааддсаддсд адаассссда ссасддс1ас ассадсйсд 1260
айссйРдс сРдддссй! с11дсас1с11ссдсс1да1 дасдсаддас 1дс1дддадс 1320
дсс1с1а1са дсадассс1с адд1ссдсад ддаада1с1а са1да1с11с йсаРдсйд 1380
1са1с11сс1 ддддрссйс 1асс1дд1да асс1да1сс1 ддссд1дд1с дсаа1ддсс1 1440
а1даддадса ааассаадсс асса1сдс1д адассдадда дааддаааад сдсйссадд 1500
аддсса1дда аа1дс1саад ааадаасасд аддссс1сас са1садддд1 д1дда1ассд 1560
- 46 029151
1д1сссд1ад сЮсйддад а1д1сссс11 1ддссссад1 ааасадсса1 дададаадаа 1620
дсаададдад аааасдда1д Юйсаддаа с1даддад1д 1ддддаддас аддсЮссса 1680
ад1с1дас1с адаада1дд1 сссададсаа 1даа1са1с1 садссЮасс сдХддссЮа 1740
дсаддасйс ЕИдаадсса сдйссадсс дсдддадса1 ЮсассЮ сдсаддсдад 1800
асс1дддйс 1даадсада1 Шдсада1д а1даааасад сасадсдддд дададсдада 1860
дссассасас а1сас1дс1д д1дссс1ддс ссс1дсдссд дассад!дсс садддасадс 1920
ссадйссдд аассйддс! сс1ддссасд ссс1сса1дд сааааадаас адсас1д1дд 1980
ас1дсаа1дд дд1дд1с1са йас1ддддд саддсдассс ададдссаса Юсссаддаа 2040
дссассйс! ссдссс1д1д а1дс1ададс асссдссада сасдассасд ссаЮддадд 2100
адссаддсдд дссссада1д с1дасс1ссс аддс1ссд1д 1д1ада1ддс йсдаддадс 2160
саддадсасд дсадсдддсс сЮадсдсад 1садсд1сс1 сассадсдса с1ддаадад1 2220
1ададдад1с Юдссасаад 1д1ссасса1 дс1ддаассд 1с1сдсссад сдс1асс1да 2280
1с1дддад1д с1дсссдс1д 1дда1д)сса Юаадсаддд адХдаадйд д1дд)са1дд 2340
асссдШас 1дасс1сасс а1сас1а1д1 дса1сд1ас1 саасасасЮ йса1ддсдс 2400
1ддадсас1а сааса1даса адХдаайсд аддада1дс1 дсаддйдда аасс1дд1с1 2460
1сасаддда1 Шсасадса дада1дасс11саада1са11дссс1сдас ссс1ас1ас1 2520
асйссааса дддс1ддаас аЮйсдаса дса1са1сд1 саЮсйадс с1са1ддадс 2580
1дддсс1д1с ссдса1дадс аасйдХсдд 1дс1дсдс1с сйссдсс1д с1дсддд1с1 2640
1саадс1ддс сааа1са1дд сссассс1да асасасйа! саадаЮаЮ дддаасЮад 2700
1дддддсас1 ддддаасс1д асас1дд1дс 1адсса1са1 сдХдйсаЮ й1дс1дХдд 2760
1дддса1дса дсЮШддс аадаас1ас1 сддадс1дад ддасадсдас 1саддсс1дс 2820
1дсс1сдс1д дсаса1да1д дасйсШс а1дссйсс1 саЮаЮйс сдса1сс1с1 2880
дХддададХд даЮдадасс а1д!дддас1 дса1ддадд! дХсддддсад 1са11а1дсс 2940
ХдсХддХсИ сйдсйдй а1дд1сайд дсаассйдХ дд1сс1даа1 с1сйсс1дд 3000
ссйдсХдсХ садсХссйс ад1дсадаса ассХсасадс ссс1да1дад дасададада 3060
1даасаасс1 ссадс1ддсс с1ддсссдса Хссададддд сс1дсдсШ дХсаадсдда 3120
ссасс1ддда Шс1дс1д1 дд1с1сс1дс ддсадсддсс Хсадаадссс дсадсссйд 3180
ссдсссаддд ссадс1дссс адсХдсайд ссассссс1а сХссссдсса сссссадада 3240
сддадааддХ дссХсссасс сдсааддааа сасддШда ддааддсдад саассаддсс 3300
адддсасссс сддддаХсса дадсссд1д1 д1д1дссса1 сдс1д1ддсс дадХсадаса 3360
сада1дасса адаадаада! даддадааса дсс1дддсас ддаддаддад Хссадсаадс 3420
- 47 029151
адсаддаа1с ссадсс1д1д 1ссдд1ддсс сададдсссс 1ссдда11сс аддасс1дда 3480
дссадд1д1с адсдас1дсс 1сс1с1дадд ссдаддссад 1дса1с1сад дссдас1ддс 3540
ддсадсад1д дааадсддаа ссссаддссс саддд1дсдд 1дадасссса даддасад11 3600
дс1ссдаддд садсасадса даса1дасса асассдс1да дс1сс1ддад сада1ссс1д 3660
асс1сддсса дда1д1саад дасссададд ас1дс11сас 1дааддс1д1 д1ссддсдс1 3720
д1ссс1дс1д 1дсдд1ддас ассасасадд ссссадддаа дд1с1дд1дд сддйдсдса 3780
адасс1дс1а ссаса1сд1д дадсасадс1 дд11сдадас а11са1са1с 11са1да1сс 3840
1ас1садсад 1ддадсдс1д дсс11сдадд аса1с1асс1 ададдадсдд аадасса1са 3900
адд11с1дс1 1дад1а1дсс дасаада1д1 1саса1а1д1 с11сд1дс1д дада1дс1дс 3960
1саад1ддд1 ддсс1асддс 11саадаад1 ас11сассаа 1дсс1дд1дс 1ддс1сдас1 4020
1сс1са1сд1 адасд1с1с1 с1дд1садсс 1дд1ддссаа сассс1дддс 111дссдада 4080
1дддсссса1 саад1сас1д сддасдс1дс д1дсас1ссд 1сс1с1дада дс1с1д1сас 4140
да111даддд са1даддд1д д1дд1саа1д ссс1дд1ддд сдсса1сссд 1сса1са1да 4200
асд1сс1сс1 сд1с1дсс1с а1с11с1ддс 1са1с11сад са1са1дддс д1даасс1с1 4260
11дсддддаа д111дддадд 1дса1саасс адасададдд адас11дсс1 11даас1аса 4320
сса1сд1даа саасаададс сад1д1дад1 сс11даас11 дассддадаа 11д1ас1дда 4380
ссаадд1даа ад1саас111 дасаасд1дд дддссддд1а сс1ддссс11 с1дсадд1дд 4440
сааса111аа аддс1дда1д даса11а1д1 а1дсадс1д1 ддас1ссадд ддд1а1даад 4500
адсадсс1са д1дддаа1ас аасс1с1аса 1д1аса1с1а 1111д1са11 11са1са1с1 4560
11ддд1с111 с11сассс1д аасс1с111а 11дд1д1са1 са11дасаас 11саассаас 4620
адаадааааа д11адддддс саддаса1с1 1са1дасада ддадсадаад аад1ас1аса 4680
а1дсса1даа даадс1дддс 1ссаадаадс сссадаадсс са1сссасдд сссс1дааса 4740
ад1ассаддд с11са1а11с даса11д1да ссаадсаддс с111дасд1с асса1са1д1 4800
11с1да1с1д с11даа1а1д д1дасса1да 1дд1ддадас ада1дассаа ад1сс1дада 4860
ааа1сааса1 с11ддссаад а1саасс1дс 1с111д1ддс са1с11саса ддсдад1д1а 4920
11д1саадс1 ддс1дссс1д сдссас1ас1 ас11сассаа садс1ддаа1 а1с11сдас1 4980
1сд1дд11д1 са1сс1с1сс а1сд1дддса с1д1дс1с1с ддаса1са1с садаад1ас1 5040
1с11с1сссс дасдсйПс сдад1са1сс дсс1ддсссд аа1аддссдс а1сс1садас 5100
1да1ссдадд ддссаадддд а1ссдсасдс 1дс1сШдс сс1са1да1д 1ссс1дсс1д 5160
ссс1с11саа са1сдддс1д с1дс1с11сс 1сд1са1д11 са1с1ас1сс а1с111ддса 5220
1ддссаас11 сдс11а1д1с аад1дддадд с1ддса1сда сдаса1д11с аас11ссада 5280
- 48 029151
сскксдссаа садсакдскд кдсскскксс адаксассас дксддссддс кдддакддсс 5340
кссксадссс сакссксаас аскдддссдс сскаскдсда ссссаскскд сссаасадса 5400
акддсксксд дддддаскдс дддадсссад ссдкдддсак сскскксккс ассасскаса 5460
ксаксакскс сккссксакс дкддксааса кдкасаккдс саксаксскд дадаасккса 5520
дсдкддссас ддаддададс ассдадсссс кдадкдадда сдаскксдак акдккскакд 5580
адакскддда дааакккдас ссададдсса сксадкккак кдадкакксд дксскдкскд 5640
аскккдссда кдссскдкск дадссасксс дкаксдссаа дсссаассад акаадсскса 5700
ксаасакдда сскдсссакд дкдадкдддд ассдсаксса ккдсакддас аккскскккд 5760
сскксассаа аадддксскд ддддадкскд дддадакдда сдссскдаад акссадакдд 5820
аддадаадкк сакддсадсс аасссаксса адаксксска сдадсссакс ассассасас 5880
кссддсдсаа дсасдаадад дкдксддсса кддккаксса дададссккс сдсаддсасс 5940
кдскдсаасд скскккдаад сакдссксск кссксккссд ксадсаддсд ддсадсддсс 6000
кскссдаада ддакдсссск дадсдададд дссксаксдс скасдкдакд адкдадааск 6060
ксксссдасс ссккддссса ссскссадск сскссакскс скссаскксс кксссассск 6120
сскакдасад кдксаскада дссассадсд акаассксса ддкдсддддд кскдаскаса 6180
дссасадкда адаксксдсс дасккссссс сккскссдда садддассдк дадкссаксд 6240
кдкдадсскс ддсскддскд дссаддасас аскдаааадс адсскккккс ассакддсаа 6300
асскааакдс адксадксас ааассадсск ддддсскксс кддскккддд адкаадааак 6360
дддссксадс сссдсддакс аассаддсад адккскдкдд сдссдсдкдд асадссддад 6420
садккддсск дкдсккддад дссксадака дасскдкдас скддкскддк саддсаакдс 6480
сскдсддскс кддааадсаа скксакссса дскдскдадд сдааакакаа ааскдадаск 6540
дкакакдккд кдаакдддск кксакааакк каккакаккк дакакккккк касккдадса 6600
аадааскаад даккккксса кддасакддд садсааккса сдскдкскск ксккаассск 6660
даасаададк дкскакддад садссддаад кскдккскса аадсадаадк ддаакссадк 6720
дкддскссса саддксккса скдсссаддд дксдаакддд дксссссксс сасккдасск 6780
дадакдскдд дадддскдаа сссссаскса сасаадсаса сасасасадк ссксасасас 6840
ддаддссада сасаддссдк дддасссадд сксссадсск аадддадаса ддсскккссс 6900
кдссддсссс ссааддакдд ддкксккдкс сасддддскс аскскддссс сскаккдкск 6960
ссааддкссс аккккссссс кдкдккккса сдсаддксак аккдксадкс скасааааак 7020
ааааддсккс сададдадад кддсскдддк сссадддскд дссскаддса скдакадккд 7080
сскккксккс сссксскдка ададкаккаа саааассааа ддасасаадд дкдсаадссс 7140
- 49 029151
сакксасддс скддсакдса дсккдксскк дсксскддаа сскддсаддс сскдсссадс 7200
садссаксдд аадададддс кдадссакдд дддкккдддд скаадаадкк сассадссск 7260
дадссакддс ддссссксад сскдсскдаа дададдааас кддсдакскс ссадддскск 7320
скддассака сдсддаддад ккккскдкдк ддкскссадс ксскскссад асасададас 7380
акдддадкдд ддадсддадс ккддссскдс дссскдкдса дддаааддда кддксаддсс 7440
садкксксдк дсссккадад дддаакдаас сакддсасск ккдадададд дддсаскдкд 7500
дксаддссса дсскскскдд сксадсссдд даксскдакд дсасссасас ададдасскс 7560
кккддддсаа дакссаддкд дксссакадд ксккдкдааа аддскккккс адддааааак 7620
аккккаскад кссааксасс сссаддасск скксадскдс кдасааксск акккадсака 7680
кдсааакскк ккаасакада дааскдксас сскдаддкаа садддксаас кддсдаадсс 7740
кдадсаддса ддддсккддс кдссссаккс садскскссс акддадсссс кссассдддс 7800
дсакдссксс саддссасск садксксасс кдссддскск дддскддскд сксскаасск 7860
ассксдссда дскдксддад ддскддасак ккдкддсадк дскдаадддд дсаккдссдд 7920
сдадкааадк аккакдкккс кксккдксас сссадккссс ккддкддсаа ссссадассс 7980
аасссакдсс сскдасадак скадккскск ксксскдкдк кссскккдад кссадкдкдд 8040
дасасддккк ааскдкссса дсдасакккс кссаадкдда ааксскаккк ккдкадакск 8100
ссакдскккд сксксааддс ккддададдк акдкдсссск сскдддкдск сассдсскдс 8160
касасаддса ддаакдсддк кдддаддсад дксдддскдс садсссадск ддссддаадд 8220
адаскдкддк ккккдкдкдк дкддасадсс сдддадсккк дадасаддкд сскддддскд 8280
дскдсадасд дкдкддйдд дддкдддадд кдадскадас ссаасссйа дсййадсс 8340
кддскдксас скккккаакк кссадааскд сасаакдасс адсаддаддд ааддасадас 8400
аксаадкдсс адакдккдкс кдааскаакс дадсасккск сассаааскк сакдкакааа 8460
каааакасак акккккаааа сааассаака аакддсккас акда 8504
<210> 6
<211> 7186
<212> ДНК
<213> Ното 8ар1еп8
<400> 6
саддкссксс ассакдкдаа кдссаасакд дссаддксак кададскдад ддааааскад 60
кдсссааада какдаааада дкдкддакск кскддадаад кдскдккдкк саасаддкас 120
ааааккддаа акдккддскк сассадаасс каадддсскк дкксссккса скааададкс 180
ккккдааскк акаааасадс акаккдскаа аасасакаак даадассакд аадаадаада 240
- 50 029151
сккааадсса асксскдакк кддаадккдд сааааадскк ссакккаккк акддааасск 300
кксксаадда акддкдксад адсссккдда адакдкддас ссакаккаск асаадааааа 360
ааакаскккс акадкаккаа акааааакад аасааксккс адакксаакд сддсккссак 420
сккдкдкаса ккдксксскк ксааккдкак кадаадааса аскаксаадд ккккддкаса 480
кссскккккс сааскдккка ккскааккад кдксскдакк даккдсдкак ксакдкссск 540
даскаакккд ссаааакдда дассадкакк ададаакаск ккдсккддаа кккасасакк 600
кдааакаскк дкааааскск ккдсаададд кдкскдддса ддаксакккк ссккссксдд 660
кдакссакдд ааскддсксд аккксадсдк ааскдкдккк даддккакка каадакаскс 720
асскскддас кксаккссаа сдскксааас кдсаадааск ккдадааккк каааааккак 780
ксскккааак сааддкскда ааксссккдк аддддксскд акссаскдск кдаадсадск 840
каккддкдкс аккаксскаа скскдккккк кскдадсака ккккскскаа ккдддакддд 900
дскскксакд ддсаасккда аасакааакд кккксдакдд ссссаадада акдаааакда 960
аассскдсас аасадааскд дааасссака ккакакксда дааасадааа асккккакка 1020
кккддаадда дааадакакд сксксскккд кддсаасадд асадакдскд дксадкдксс 1080
кдааддакак дкдкдкдкаа аадскддсак аааксскдак сааддсккса саааккккда 1140
садккккддс кдддссккак ккдссскакк ксддккаакд дсксаддакк ассскдаадк 1200
аскккаксас садакасккк акдсккскдд дааддкскас акдакакккк ккдкддкддк 1260
аадккккккд кккксскккк акакддсаад кккдккскка ддсакасккд ссакддсска 1320
кдаадаадаа аадсададад ккддкдааак акскаадаад аккдаассаа ааккксааса 1380
даскддаааа дааскксаад ааддааакда аасадакдад дссаадасса касааакада 1440
аакдаадааа аддксассаа кккссасада сасаксаккд дакдкдккдд аадакдскас 1500
ксксадасак ааддаадаас ккдааааакс саадаадака кдсссаккак аскддкакаа 1560
дкккдскааа асккксккда кскддааккд ккскссскдк кддккаааак кдааададкк 1620
кдкссакадд аккакаакдд сассакккас кдаксккккс сккаксакак дсакаакккк 1680
ааасдкакдк кккскдасск кддадсакка кссаакдадк ааасаааска асасксккск 1740
саасаккдда аасскддккк ксаккддаак ккксасадса дааакдаккк ккаааакаак 1800
кдсаакдсак ссакакдддк акккссаадк аддккддаас акккккдака дсакдакадк 1860
дккссакддк ккаакадаас кккдкскадс ааакдккдса ддаакддскс ккскксдакк 1920
акксаддакд ккаадааккк ксаадккддд ааадкаккдд ссаасакксс адаккккдак 1980
дкддкскскк адкаасксак дддкддссск дааадасккд дксскдккдк кдкксасакк 2040
сакскксккк кскдскдсак ксддсакдаа дскдкккддк аадааккакд аадаакккдк 2100
- 51 029151
скдссасака дасааадаск дксааскссс асдскддсас акдсакдаск ккккссаскс 2160
скксскдаак дкдккссдаа ккскскдкдд ададкдддка дадассккдк дддаскдкак 2220
ддаддккдса ддссааксск ддкдкакксс кккккасскд акддксаккк кааккддааа 2280
кккаскддка скккасскдк ккскддсакк ддкдадскса кккадкксак дсааддакдк 2340
аасадскдаа дадаакаакд аадсаааааа кскссадскк дсадкддсаа дааккааааа 2400
аддаакааас какдкдсккс ккаааакаск акдсааааса саааакдксс саааддасас 2460
аакддассак дкааакдадд какакдккаа адаадакакк кскдассака ссскккскда 2520
аккдадсаас асссаадай кксксааада кааддааааа адсадкддса сададааааа 2580
сдскаскдаа аакдададсс ааксасккак ссссадксск адкдксксад аааскдкасс 2640
аайдсйса ддадаакскд акакадаааа кскддакаак ааддадайс ададкаадкс 2700
кддкдакдда ддсадсааад адаааакааа дсаакскадс ксакскдаак дсадкаскдк 2760
кдакаккдск акскскдаад аадаадааак дккскакдда ддкдааадак сааадсакск 2820
дааааакддк кдсадасдсд дакскксаск кддксааакс адкддадсак ссаадааадд 2880
ааааакскдд садаасакса ддаааасскд скдсаадакк дкададааса аккддкккаа 2940
дкдййай дддсйдйа скскдсксад саскддсаск скддсккккд аадакакака 3000
какддаксад адааадасаа йаааайй аккадаакак дскдасакда кскккаскка 3060
какскксакк скддааакдс ккскаааакд дакддсакак ддййаадд сскакккскс 3120
каакддскдд касаддскдд аскксдкддк кдккаккдкд ййдксйа дсккаакадд 3180
саааасксдд даадааскаа аассксккак ккссакдааа йссйсддс сссксададк 3240
кскаксксаа кккдааадаа кдааддкддк кдкдададск ккдаксаааа саассйасс 3300
саскккдаак дкдккксккд кскдсскдак дакскддскд акккккадка ксакдддадк 3360
адасккаккк дскддсадак кскакдаакд сайдассса асаадкддад аааддккксс 3420
кксакскдаа дксакдаака ададксддкд кдааадсскк скдкккаасд аакссакдск 3480
акдддаааак дсааааакда аскккдакаа кдккддааак ддкккссккк скскдсккса 3540
адкадсааса йкаакддак ддаксаскак какдаайса дсаайдай скдйдскдк 3600
каакакасад ссксаййд аадксаасак скасакдкак кдйасйка ксааскккак 3660
какакккдда дкаккксксс скскдадкак дскдаккаск дйаккайд акааккксаа 3720
саадсакааа акааадскдд даддсксааа какскккака асддккааас ададааааса 3780
дкассдсадд скдаадаадс каакдкакда ддакксксаа адассадкас сксдсссакк 3840
ааасаадскс сааддаккса кскккдакдк ддкаасаадс саадскккка акдксаккдк 3900
какддккскк акакдккксс аадсаакадс сакдакдака дасаскдакд кксададкск 3960
- 52 029151
асааа1д1сс а11дс1с1с1 ас1дда11аа с1саа11111 д11а1дс1а1 а1ас1а1дда 4020
а1д1а1ас1д аадс1са1сд с111ссд11д 11111а111с асса11дсд1 ддааса1111 4080
1даШ1а1д д1дд11аШ 1с1сса1сас аддас1а1д1 с1дсс1а1да сад1адда1с 4140
с1асс11д1д сс1сс11сас 11д1дсаас1 да1ас11с1с 1сасдда1са 11саса1дс1 4200
дсд1с11дда аааддассаа адд1д111са 1аа1с1да1д с11сс111да 1дс1д1ссс1 4260
сссадса11а 11дааса1са 11с11с1са1 с11сс1дд1с а1д11са1с1 а1дссд1а11 4320
1ддаа1д1а1 ааййдсс! а!дйааааа адаадс1дда а11аа1да1д 1д1с1ааШ 4380
1дааасс111 ддсаасад1а 1дс1с1д1с1 1111саад11 дсаа1а111д с1дд11ддда 4440
1ддда1дс11 да1дсаа111 1саасад1аа а1дд1с1дас 1д1да1сс1д а1аааа11аа 4500
ссс1дддас1 саад11адад дада11д1дд даасссс1с1 д11ддда111 111а1111д1 4560
сад11а1а1с с1са1а1са1 ддс1да1са1 1д1ааа1а1д 1аса11д11д 11д1са1дда 4620
д11111ааа1 а11дс11с1а адаадааааа саадасс11д ад1даада1д а1111аддаа 4680
а11с111сад д1а1ддаааа дд111да1сс 1да1аддасс сад1аса1ад ас1с1адсаа 4740
дс111сада1 111дсадс1д с1с11да1сс 1сс1с1111с а1ддсаааас сааасааддд 4800
ссадс1са11 дс111ддасс 1сссса1ддс 1д11ддддас адаа11са11 дсс1сда1а1 4860
с11ас11дс1 111асааада дад11а1ддд 1саада1д1д адда1ддада аад11д111с 4920
адааа1адаа 1саддд1111 1д11адссаа ссс1111аад а1саса1д1д адссаа11ас 4980
дас1ас111д ааасдаааас аададдсад1 11садсаасс а1са11саас д1дс11а1аа 5040
ааайассдс йдаддсдаа а1дасааааа 1аса1сада1 а11са1а1да 1ада1дд1да 5100
садада!дй са1дс1ас1а аадаадд1дс сйййдас ааадс1аадд аааад1сасс 5160
1а11сааадс сада1с1аа1 ассас11асс асс1с1111с а1а111с11с аса1а1с1да 5220
аааа1д11да аадсс1аадс саддаа1ааа адаааад1ад ада1аа1аа1 сад11с111а 5280
саассда1дд 1аа11аадс1 1д1а11саса адас11са1д ссааа11сас 11111адса1 5340
1а1а1с1аас ааа1саадад аа1сс11аа1 а11дс1дсад 1дад111ааа д1ддд11ааа 5400
д1ддсса111 дасаа1с1са 1а111д1111 с1с1аса1дд с11а1а1да1 д1д1дсс11с 5460
1адддаа1да адддаад1дд 1да1адада1 садсадсадс аддддс111с 1111а1а111 5520
1а1д1а1аа1 11аа1дддс1 11аад1сасс ас1а11аада с11асааа1а адсааа1ас1 5580
11сс1да1д1 ддда1дд1да аа1дс1аа1д дсса11ааа1 са1ааас11д сс1адасааа 5640
адссаа11дд аадаадддад ададсад11с 111адааад1 дсс111дада 1саасс1сад 5700
ада11с11дд дс1да11ааа ас1дса111д ааааада11д д11даадс1с 1д1д111а11 5760
111д1а1д11 с11д1111са 111ддаас1д ддаа1даа1а дда111са11 д1дс1саадс 5820
- 53 029151
1сс1дд111с 1са1с1с1дд а1ад111сас с1аадс1с1д дс1с11аадс аддасада11 5880
сд1аааасаа даадса1ааа ддададд1а1 адсс111111 1111111111 1111са1111 5940
с11с1са111 асасс1а111 1111ааааад 1а1аса111а с1аааа1да1 д1аа1ааа1а 6000
аса1д11аа1 адас1саадс 111асс11а1 дааа11да1д 1а11111асс ад11а111с1 6060
ааЩааса! 1даа1а1а1а адаЮдаса аа1д1а1д111аааса1даа йадаадад 6120
1дадаас1ас сайаЩРй адддайсй а1ад1дйй ддсссйаа1 1ддааадйд 6180
1ддсаас111 ааад1ас111 11ас1д1а1д 11а1аа11с1 11а1аас11а дадададаса 6240
а1дд1сас1с ааас1а1дад аас1а1даа1 1аддада1аа аад111ааа1 11д11д11д1 6300
111а1аасад 1а1д1асаад 11ад1111сс с11а1а1а11 1асд1111са ад111111аа 6360
1с1са1са1а 1аса1сса1а с1с1а1аааа 1д1111а1а1 1сааадаас1 д1аааа1сс1 6420
аааса11ад1 111сас1а11 дааа11д111 111ааада1а ддса1ааа1а д11д1сс11а 6480
дас11а11са 1асааа1а1а д1са111ас1 1с1а1д1ад1 11дада11с1 дадад11а11 6540
ссаас111а1 даада11да1 11саа1д1дс с1дс1аад1с с1аааада11 садааадааа 6600
а111а1а1а1 1а11да111а аа1а1са1сс 111ааа1а1д 11д1а1ааса 11саа1а1ад 6660
111а1д1а1с ад1да11д1а 1111а11с1д аа1дса1да1 с1саадсс11 аас1ас1а1а 6720
а1с11111с1 дсссс1сада аа11даа1аа сс1аассаад а1дсс111ад ддда1дссс1 6780
аад1ааа1д1 аа111сада1 11саддд111 111111111с с1с1с1аад1 д11сс11ссс 6840
111с11с1сс 1дс1с1сса1 са1д11а1дд адассад1да ддаассад1д 11аас11дд1 6900
дасаа1д1да садс1дд1дс 111а1с1аад с1ссд1111с 1а111с11дд даа1дс111а 6960
11д1ддааас 1дс11сада1 ас11ааа11д аа1са1аас1 1дс11с1д1а аа11дсд1аа 7020
адасаасааа с1да1111ад 111даааад1 11а1с1111а с11д1ааасс 11д111дсса 7080
дйассйсс дааадс1д1д 1ааададйа ШИаасаа адййааса айИаЩПа 7140
сйй1ада1 асРйадааа а1аа1ааа1а 1аасс1д1аа ассаса 7186
<210> 7
<211> 7215
<212> ДНК
<213> Ното 8ар1еп8
<400> 7
дадсдс1сса ада1ддсдсс сассдсад1с ссдсссдссд са1сс1сддс дсс111дсад 60
йсддссдсд ссйссдддс сссдсдйад ддссдссдй дссйссйд ссдссдссдс 120
1дссадс1да сс1дйс1дд асдсадса!а ас1аасдаад с1дс1дсадд а1дадаада1 180
ддсадсдсдд с1дс11дсас сассаддссс 1да1ад111с аадсс111са сссс1дад1с 240
ас1ддсааас а11дададдс дса11дс1да дадсаадс1с аадааассас саааддссда 300
- 54 029151
1ддсад1са1 сдддаддасд а!даддасад саадсссаад ссааасадсд асс!ддаадс 360
адддаадад! йдссШса Юасдддда са!сссссаа ддсйддйд садйсссс! 420
ддаддасй! дассса1ас1 аШдасдса даааассШ д!ад1айаа асададддаа 480
аасЮсйс адай!ад1д ссасдсс!дс сйдйсай йаад!ссй йаасйда! 540
аадаадайа дсййаааа ййда1аса йсадйй! адса!да1са йа1д1дсас 600
йййдасс аас1д1д1а1 1са1дасй1 1ад1аассс1 сйдайдд! сдаадайд! 660
ддад!асасд йсасаддда Ша1аса111даа1сас1а д1даааа1са йдсаададд 720
Шс1дса1а да1ддсй!а ссйШасд ддассса!дд аайддйад ай1сад1д1 780
са1са1да!д дсд!а1а1аа сададШд! ааасс!аддс аа1д!йсад сЮасдсас 840
Шсаддд1а йдадддсй 1даааас1а1 йсдд1аа1с ссаддсс!да адасаайд! 900
ддд!дссс1д айсадЮд 1даадааас1 д!сада1д1д а!да1сс1да сад!дйс1д 960
сс!дад!д!! !!!дсс!!да !сддас!дса дс!д!!са!д дддаасс!!с дааасаад!д 1020
!д!!д!д!дд ссса!ааас! !саасдадад с!а!с!!даа аа!ддсасса ааддс!!!да 1080
!!дддаадад !а!а!сааса а!аааасааа !!!с!асаса д!!сс!ддса !дс!ддаасс 1140
!!!ас!с!д! дддаасад!! с!да!дс!дд дсаа!дссса даддда!асс ад!д!а!даа 1200
адсаддаадд аассссаас! а!дд!!асас аад!!!!дас ас!!!!адс! дддсс!!с!! 1260
ддсайаШ сдссйа!да сссаддас!а йдддаааас йд!а1саа1 1дасй1асд 1320
адсадссддд ааааса!аса 1да1сйсй сд!сйдд1с а1сй1д1дд дйсШйа 1380
!с!дд!даас !!да!с!!дд с!д!дд!ддс са!ддс!!а! даадаасада а!саддсаас 1440
ас!ддаддад дсадаасааа аададдс!да аШааадса а!дйддадс аасйаадаа 1500
дсаасаддаа даддсасадд йдйдсда! ддссасйса дсаддаас!д Юсадаада 1560
!дсса!адад даадаадд!д аадааддадд дддс!сссс! сддадс!с!! с!дааа!с!с 1620
!ааас!садс !сааадад!д саааддааад асд!аасадд адааадаада ддаадсаааа 1680
ддаас!с!с! дааддададд адааадддда !сссдадаад д!д!!!аад! садад!сада 1740
ада!ддса!д адааддаадд сс!!!сддс! дссадасаас адаа!аддда ддааа!!!!с 1800
са!са!даа! сад!сас!дс !садса!ссс аддс!сдссс !!сс!с!ссс дссасаасад 1860
саададсадс а!с!!сад!! !саддддасс !дддсдд!!с сдадасссдд дс!ссдадаа 1920
1дадйсдсд да!дасдадс асадсасдд! ддаддададс дадддссдсс дддайссс! 1980
с!!са!сссс а!ссдддссс дсдадсдссд дадсадс!ас адсддс!аса дсддс!асад 2040
ссадддсадс сдс!сс!сдс дса!с!!ссс садсс!дсдд сдсадсд!да адсдсаасад 2100
сасдд!ддас !дсаасддсд !дд!д!ссс! са!сддсддс сссддс!ссс аса!сддсдд 2160
- 55 029151
дсд1с1сс1д ссададдс1а саас1дадд1 ддааа11аад аадаааддсс с1дда1с1с1 2220
111ад111сс а1ддассаа1 1адсс1сс1а сдддсддаад дасадаа1са асад1а1аа1 2280
дад1д11д11 асааа1асас 1ад1адаада ас1ддаадад 1с1сададаа ад1дсссдсс 2340
а1дс1дд1а1 ааа111дсса асас111сс1 са1с1дддад 1дссасссс1 ас1дда1ааа 2400
ас1дааадад а11д1даас1 1да1ад11а1 ддассс1111 д1дда111ад сса1сасса1 2460
с1дса1сд1с с1даа1асас 1д111а1ддс аа1ддадсас са1сс1а1да сассасаа11 2520
1дааса1д1с 11ддс1д1ад дааа1с1дд1 111сас1дда а1111сасад сддааа1д11 2580
сс1даадс1с а1адсса1дд а1ссс1ас1а 11а111ссаа даадд11дда аса11111да 2640
сдда111а11 д1с1ссс1са д111аа1дда ас1дад1с1а дсадасд1дд аддддс111с 2700
ад1дс1дсда 1с111ссда1 1дс1ссдад1 с11сааа11д дссааа1сс1 ддсссассс1 2760
дааса1дс1а а1саада11а 11ддааа11с ад1ддд1дсс с1дддсаасс 1дасас1дд1 2820
дс1ддсса11 а11д1с11са 1с111дссд1 дд1дддда1д саас1с111д дааааадс1а 2880
сааадад1д1 д1с1дсаада 1саассадда с1д1даас1с сс1сдс1ддс а1а1дса1да 2940
с11111сса1 1сс11сс1са 11д1с111сд ад1д11д1дс ддддад1дда 11дадасса1 3000
д1дддас1дс а1ддаад1дд саддссаддс са1д1дсс1с а11д1с111а 1да1дд1са1 3060
дд1дайддс аасйдд1дд 1дс1даасс1 дШс1ддсс Идс1сс1да дс1ссйсад 3120
1дсадасаас с1ддс1дсса сада1дасда 1ддддааа1д аасаасс1сс ада1с1сад1 3180
да1ссд1а1с аадааддд1д 1ддсс1ддас сааас1ааад д1дсасдсс1 1са1дсаддс 3240
ссас111аад садсд1дадд с1да1дадд1 даадсс1с1д да1дад11д1 а1даааадаа 3300
ддссаас1д1 а1сдссаа1с асассдд1дс адаса1ссас сддаа1дд1д ас11ссадаа 3360
даа1ддсаа1 ддсасаасса дсддса11дд садсадсд1д дадаад1аса 1са11да1да 3420
ддассаса1д 1сс11са1са асаассссаа с11дас1д1а сддд1ассса 11дс1д1ддд 3480
сдад1с1дас 111дадаасс 1саасасада дда1д11адс адсдад1сдд а1сс1даадд 3540
садсааада1 ааас1ада1д асассадс1с с1с1даадда адсасса11д а1а1сааасс 3600
адаад1адаа дадд1ссс1д 1ддаасадсс 1даддаа1ас 11дда1ссад а1дсс1дс11 3660
сасадаадд1 1д1д1ссадс дд11саад1д с1дссадд1с ааса1сдадд аадддс1адд 3720
саад1с11дд 1дда1сс1дс ддаааасс1д с11сс1са1с д1ддадсаса ас1дд111да 3780
дасс11са1с а1с11са1да 11с1дс1дад сад1ддсдсс с1ддсс11сд аддаса1с1а 3840
са11дадсад адааадасса 1ссдсасса1 сс1ддаа1а1 дс1дасааад 1с11сасс1а 3900
1а1с11са1с с1ддада1д1 1дс1саад1д дасадсс1а1 ддс11сд1са ад11с11сас 3960
саа1дсс1дд 1д11ддс1дд ас11сс1са1 1д1ддс1д1с 1с111ад1са дсс11а1адс 4020
- 56 029151
1аа1дссс1д ддс1ас1сдд аас1адд1дс са1ааад!сс сйаддассс 1аададсй1 4080
дадасссйа ададссйа! сасдаШда аддда1дадд д1дд1дд1да а1дссйдд1 4140
дддсдсса1с сссйсайа 1даа1д1дс1 дс1дд1д1д1 с1са1сйс1 ддс1дайй 4200
садса1са1д ддадйаас! 1дШдсддд ааад1ассас 1ас1дсШа а1дадасйс 4260
1дааа1ссда Шдааайд аада1д1саа саа1аааас1 даа1д1дааа адсйа1дда 4320
ддддаасаа! асадада1са да1ддаадаа сд1даада1с аасШдаса а1дйддддс 4380
адда1асс1д дсссйсйс аад1адсаас сйсаааддс 1дда1ддаса 1са1д1а1дс 4440
адс1д1ада1 1сссддаадс с1да1дадса дсс1аад1а1 даддасааШ 1с1аса1д1а 4500
са1с1айй д1са1сйса 1са1сйсдд Лссйсйс ассШдаасс 1дйсайдд 4560
1д1са1сай да1аасйса айаасаааа дааааадйс ддадд1садд асаййса! 4620
дассдаадаа садаадаад! ас1асаа1дс са1дааааад с1дддс1саа адаадссаса 4680
дааассШй ссссдсссс! 1даасаааа1 ссааддаа1с д1сШдай йд1сас1са 4740
дсаадссШ дасайдйа 1са1да1дс1 саШдссй ааса1дд1да саа1да1дд1 4800
ддадасадас асйааадса адсада1дда даасайсй 1ас1ддайа асс1дд1дй 4860
1дйа1сйс йсасс1д1д ад1д1д1дс1 саааа1дШ дсдйдаддс асШсШсй 4920
сассайддс 1ддааса1с1 1сдасйсд1 дд1ад1са1с сШссайд 1дддаа1дй 4980
сс1ддсада1 а1аайдада аа1асШд1 йссссаасс с1айссдад 1са1ссдай 5040
ддсссд1ай дддсдсаШ 1дсд1с1да1 саааддсдсс ааадддайс дШссс1дс1 5100
сШдссйа а1да1д1сс1 1дсс1дссс1 дйсааса1с ддссйШдс 1сйсс1дд1 5160
са1дйса1с 11с1ссаШ йддда1д1с сааййдса 1а1д1даадс асдаддШдд 5220
1а1сда1дас а1дйсаас1 йдадасай 1ддсаасадс а1дйс1дсс 1дШсааа1 5280
сасаассйа дШддйддд а1ддсс1дс1 дс1дссса1с Лааассдсс сссс1дас1д 5340
садсс1ада1 ааддаасасс садддаддд сШааддда дайд!ддда ассссйад! 5400
дддса1сйс йсШд1аа дс1аса1са1 са1с1сШс с1аайд1сд 1дааса1д1а 5460
сайдсса1с а1сс1ддада асйсад1д1 адссасадад даааддсад асссШдад 5520
1дадда1дас Шдадасс! 1с1а1дада1 сдддадаад йсдассссд а1дссассса 5580
дйсайдад Шс1д1аадс 1ддсадасй 1дсада1дсс йддадса1с с1с1ссдад1 5640
дсссаадссс аа1ассайд адс1са1сдс 1а1дда1с1д ссаа1дд1да дсдддда1сд 5700
са1ссас1дс йддаса1сс Шйдссй сассаадсдд д1сс1дддад аШдсдддда 5760
дйддаса1с Шдсддсадс ада1ддаада дсддйсд!д дсайсаай сйссааад! 5820
д!сйасдад ссаайасаа ссасаШдсд 1сдсаадсад даддаддЩ с1дсад1дд1 5880
- 57 029151
сскдсадсдк дсскассддд дасакккддс ааддсддддс кксакскдса аааадасаас 5940
ккскаакаад скддадаакд даддсасаса ссдддадааа ааадададса ссссакскас 6000
адсскссскс ссдксскакд асадкдкаас кааасскдаа ааддадааас адсадсдддс 6060
ададдаадда адаадддааа дадссаааад асааааадад дксададаак ссаадкдкка 6120
даддадааса аааакксадк аккакасада кскааааскс дсаадкдааа даккдкккас 6180
аааскксскд аакаккакса акдсадааса дскдкддада скскаасскд аадакскака 6240
ссааасдксд кскдсккасс асдкаасаса дскдсакскк дадсадкдас скдссааддд 6300
саааддассс сдскссскад асккасадак кккскаакдс ккдддсаддк ддккаскдса 6360
кдккссасак садксаакдс аасккаддас ааааскаасс адакасадаа асадаадада 6420
ддскдссддд ассадсакак ккссдккдса дссааакдда ккккаккккк ксаккккакк 6480
дакксксада адсадааадс аксаскккаа аадкксдккк дкксакдсаа аскакакккд 6540
сакксккаса ккадккаадс каадсадсаа ааадааааса сасасасаса сксасаккка 6600
дсссакдкса кккааккдкс адкккскккд асакааадсд сакскксксс асакдддскк 6660
сасдкддккк ддадакдддк дддддаааас ааксаддккк скксаддскд аддаддаскк 6720
дсксаддссд аккссаааса ккдкдсксдк ксаакдсдка дааакдаккк дсакдакддс 6780
акдссдкдак садаадксак дсакдадакс сакасассас аддасаскас каакскадкс 6840
ссккдсаскд ддксадсскк кддасаддас ссадссскдс ассдкксаск дкакккддад 6900
аааакддкаа дадккссака ссддскасаа ккскккдадк ксккаааадк сскксакаса 6960
ссккскдддк адддааасаа ссааскаакк даскаасасс ассаасааса ааааасааас 7020
ссаакссаас аадсадакдд акссдккдсд кдкакакдкк каасадасак скскаасака 7080
садссаккдк кдсасакккк дсаадакдаа скакккаакд скдскскдкд кссадкасак 7140
дддддадаск ккдаксссаа акддсккдка скакккакдк саскдкаааа ссаааксска 7200
дддскааааа ааааа 7215
<210> 8
<211> 9771
<212> ДНК
<213> Ното 8ар1еп8
<400> 8
сддддскдск асскссасдд дсдсдссскд дсаддадддд сдсадкскдс ккдсаддсдд 60
ксдссадсдс кссадсддсд дскдксддск ккссаакксс дссадсксдд скдаддскдд 120
дскадсскдд дкдссадкдд скдскадсдд саддсдкссс скдадсааса ддадсссада 180
дааааадаад садссскдад ададсдссдд ддааддадад дсссдсдссс ксксскддад 240
- 58 029151
ссадаккскд саддкдсаск дддкддддак даксддсддд скаддккдса адссксккак 300
дкдаддадск даададдаак каааакакас аддакдаааа дакддсаакд ккдссксссс 360
саддасскса дадскккдкс саккксасаа аасадкскск кдсссксакк даасаасдса 420
ккдскдааад ааааксааад даасссааад аадаааадаа адакдакдак даадаадссс 480
сааадссаад садкдасккд даадскддса аасадскдсс скксакскак ддддасаккс 540
сксссддсак ддкдксадад сссскддадд асккддассс скаскакдса дасааааада 600
сккксакадк аккдаасааа дддаааасаа ксккссдккк саакдссаса сскдскккак 660
акакдскккс кссккксадк сскскаадаа даакакскак каадакккка дкасасксск 720
какксадсак дсксаксакд кдсаскаккс кдасаааскд сакакккакд ассакдаака 780
асссассдда скддассааа аакдксдадк асасккккас кддаакакак асккккдаак 840
сасккдкааа аакссккдса ададдсккск дкдкаддада акксаскккк скксдкдасс 900
сдкддааскд дскддакккк дксдксаккд кккккдсдка кккаасадаа кккдкааасс 960
каддсаакдк кксадскскк сдааскккса дадкаккдад адскккдааа аскакккскд 1020
кааксссадд сскдаадаса аккдкадддд скккдаксса дксадкдаад аадскккскд 1080
акдксакдак сскдаскдкд ккскдкскда дкдкдкккдс аскааккдда скасадскдк 1140
ксакдддааа сскдаадсак ааакдккккс дааакксаск кдаааакаак дааасаккад 1200
ааадсакаак даакассска дададкдаад аадаскккад аааакакккк каккасккдд 1260
ааддакссаа адакдскскс скккдкддкк ксадсасада кксаддксад кдкссададд 1320
ддкасасскд кдкдаааакк ддсадааасс скдаккакдд скасасдадс кккдасаскк 1380
ксадскдддс скксккадсс ккдкккаддс каакдассса адаккаскдд даааассккк 1440
ассаасадас дскдсдкдск дскддсаааа сскасакдак сккскккдкс дкадкдаккк 1500
ксскдддскс сккккакска акааасккда ксскддскдк ддккдссакд дсакакдаад 1560
аасадаасса ддсааасакк даадаадска аасадааада аккадааккк саасадакдк 1620
кадассдкск каааааадад саадаадаад скдаддсаак кдсадсддса дсддскдаак 1680
акасаадкак каддадаадс адааккакдд дссксксада дадкксккск дааасаксса 1740
ааскдадскс каааадкдск ааадааадаа дааасадаад ааадааааад ааксаааада 1800
адскскссад кддададдаа аадддадакд скдадааакк дксдааакса дааксададд 1860
асадсаксад аадааааадк ккссассккд дкдксдаадд дсакаддсда дсасакдааа 1920
ададдккдкс касссссаак садксассас ксадсакксд кддскссккд ккккскдсаа 1980
ддсдаадсад садаасаадк скккккадкк ксаааддсад аддаададак акаддакскд 2040
адаскдаакк кдссдакдак дадсасадса кккккддада саакдададс адааддддск 2100
- 59 029151
саскдкккдк дссссасада ссссаддадс дасдсадсад каасаксадс саадссадка 2160
ддкссссасс аакдскдссд дкдаасддда ааакдсасад кдскдкддас кдсаасддкд 2220
кддкскссск ддккдакдда сдсксадссс ксакдскссс саакддасад сккскдссад 2280
адддсасдас сааксааака сасаадаааа ддсдккдкад кксскакскс сккксададд 2340
акакдскдаа кдаксссаас сксадасада дадсаакдад кададсаадс акаккаасаа 2400
асаскдкдда адаасккдаа дадкссадас ааааакдксс ассккддкдд касадакккд 2460
сасасааакк сккдакскдд ааккдскскс сакаккддак аааакксааа аадкдкакск 2520
аккккаккдк аакддаксск кккдкадакс ккдсааккас сакккдсака дккккаааса 2580
саккакккак ддскакддаа сассасссаа кдаскдадда акксааааак дкасккдска 2640
каддаааккк ддкскккаск ддаакскккд садскдааак ддкаккаааа скдаккдсса 2700
кддакссака кдадкакккс саадкаддск ддаакакккк кдасадсскк аккдкдаскк 2760
каадкккадк ддадсксккк скадсадакд кддааддакк дксадккскд сдаксаккса 2820
даскдскссд адкскксаад ккддсаааак сскддссаас аккдаасакд скдаккаада 2880
ксаккддкаа сксадкаддд дскскаддка ассксасскк адкдккддсс аксаксдкск 2940
ксакккккдс кдкддксддс акдсадскск ккддкаадад скасааадаа кдкдкскдса 3000
адаксаакда кдаскдкасд сксссасддк ддсасакдаа сдаскксккс сасксскксс 3060
кдаккдкдкк ссдсдкдскд кдкддададк ддакададас сакдкдддас кдкакддадд 3120
ксдскддкса адскакдкдс сккаккдкй асакдакддк сакддксай ддааасскдд 3180
кддксскааа сскайкскд дссйайак кдадсксакк кадйсадас ааксйасад 3240
сааккдаада адассскдак дсааасаасс кссадаккдс адкдаскада айааааадд 3300
даакааакка кдкдааасаа ассккасдкд аакйаккск аааадсайк кссааааадс 3360
сааадакккс садддадака адасаадсад аадакскдаа каскаадаад дааааскака 3420
йкскаасса касасккдск дааакдадса ааддксасаа кйссксаад дааааадака 3480
аааксадкдд ййддаадс адсдкддаса аасасккдак ддаадасадк дакддксаак 3540
сакккаккса сааксссадс сксасадкда садкдссаак кдсасскддд даакссдакк 3600
кддаааакак даакдскдад даасйадса дкдайсдда кадкдаакас адсааадкда 3660
даккааассд дксаадсксс ксададкдса дсасадккда каассскккд сскддадаад 3720
дадаадаадс ададдскдаа сскакдаакк ссдакдадсс ададдсскдк йсасадакд 3780
дккдкдкасд даддккскса кдскдссаад ккаасакада дксадддааа ддааааакск 3840
ддкддаасак саддаааасс кдскасаада ккдккдааса садккддйк дааадсйса 3900
йдкссксак даксскдскс адсадкддкд ссскддсккк кдаадакакк какаккдааа 3960
- 60 029151
ддааааадас са11аада11 а1сс1ддад1 а1дсадасаа да1с11сас1 1аса1с11са 4020
11с1ддааа1 дс11с1аааа 1дда1адса1 а1дд11а1аа ааса1а111с ассаа1дсс1 4080
дд1дйддс1 ддаШсс1а айдйда1д ШсШдд! 1асШад1д дсааасасй 4140
11ддс1ас1с ада1с11ддс ссса11ааа1 ссс11сддас ас1дададс1 11аадасс1с 4200
1аададсс11 а1с1ада111 дааддаа1да ддд1сд11д1 даа1дсас1с а1аддадсаа 4260
11сс11сса1 са1даа1д1д с1ас11д1д1 д1с11а1а11 с1ддс1да1а 11садса1са 4320
1дддад1ааа 111д111дс1 ддсаад11с1 а1дад1д1а1 1аасассаса да1ддд1сас 4380
дд111сс1дс аад1саад11 ссааа1сд11 ссдаа1д111 1дссс11а1д аа1д11ад1с 4440
аааа1д1дсд а1ддааааас с1дааад1да ас111да1аа 1д1сддас11 дд11асс1а1 4500
с1с1дс11са ад11дсаас1 111ааддда1 ддасда11а1 1а1д1а1дса дсад1дда11 4560
с1д11аа1д1 адасаадсад сссааа1а1д аа1а1адсс1 с1аса1д1а1 а111а1111д 4620
1сд1с111а1 са1с111ддд 1са11с11са с111даас11 д11са11дд1 д1са1са1ад 4680
а1аа111саа ссаасадааа аадаадс11д дадд1саада са1с111а1д асадаадаас 4740
адаадааа1а с1а1аа1дса а1дааааадс 1дддд1ссаа даадссасаа аадссаа11с 4800
с1сдассадд даасаааа1с саадда1д1а 1а111дасс1 ад1дасааа1 саадсс111д 4860
а1а11ад1а1 са1дд11с11 а1с1д1с1са аса1дд1аас са1да1дд1а дааааддадд 4920
д1сааад1са аса1а1дас1 даад1111а1 а11дда1ааа 1д1дд11111 а1аа1сс111 4980
1сас1ддада а1д1д1дс1а ааас1да1с1 ссс1садаса с1ас1ас11с ас1д1адда1 5040
ддаа1айй 1даййд1д дйд1дайа 1с1сса11д1 аддйИдШ с1адс1дай 5100
(дайдааас д!аййд1д 1сссс1ассс 1д11ссдад1 дайсдйП дссаддайд 5160
дссдаа1сс1 асд1с1ад1с аааддадсаа адддда1ссд сасдс1дс1с 111дс111да 5220
1да1д1ссс1 1сс1дсд11д 111ааса1сд дсс1сс1дс1 с11сс1дд1с а1д11са1с1 5280
асдсса1с11 1ддаа1д1сс аас111дсс1 а1д11ааааа ддаада1дда а11аа1даса 5340
1д11саа111 1дадасс111 ддсаасад1а 1да111дсс1 д11ссааа11 асаасс1с1д 5400
с1ддс1ддда 1дда11дс1а дсасс1а11с 11аасад1аа дссасссдас 1д1дасссаа 5460
ааааад11са 1сс1ддаад1 1сад11даад дадас1д1дд 1аассса1с1 д11ддаа1а1 5520
1с1ас111д1 1ад11а1а1с а1са1а1сс1 1сс1дд11д1 дд1дааса1д 1аса11дсад 5580
1са1ас1дда даа1111ад1 д11дссас1д аадааад1ас 1даасс1с1д ад1дадда1д 5640
ас111дада1 д11с1а1дад д111дддада ад111да1сс сда1дсдасс сад111а1ад 5700
ад11с1с1аа ас1с1с1да1 111дсадс1д ссс1дда1сс 1сс1с11с1с а1адсаааас 5760
ссаасааад1 ссадс1са11 дсса1дда1с 1дссса1дд1 1ад1дд1дас сдда1сса11 5820
- 61 029151
дксккдасак сккакккдск кккасааадс дкдккккддд кдададкддд дадакддакк 5880
скскксдккс асадакддаа даааддккса кдкскдсааа кссккссааа дкдксскакд 5940
аасссаксас аассасаска ааасддааас аададдакдк дкскдскаск дксакксадс 6000
дкдсккакад асдккассдс ккааддсааа акдксааааа какаксаадк акакасакаа 6060
аадакддада сададакдак дакккаскса акаааааада какддскккк дакаакдкка 6120
акдадааскс аадкссадаа аааасадакд ссаскксакс сассасскск ссасскксак 6180
акдакадкдк аасааадсса дасааадада аакакдааса адасадааса дааааддаад 6240
асааадддаа адасадсаад дааадсаааа аакададскк сакккккдак акаккдккка 6300
садсскдкда аадкдаккка кккдкдккаа кааааскскк ккдаддаадк скакдссааа 6360
акссккккка ксаааакакк сксдааддса дкдсадксас кааскскдак кксскаадаа 6420
аддкдддсад саккадсада кддккакккк кдсаскдакд аккскккаад ааксдкаада 6480
дааскскдка ддааккаккд аккакадсак асаааадкда кксадккккк кддкккккаа 6540
каааксадаа дассакдкад ааааскккка сакскдсскк дксакскккк сасаддаккд 6600
кааккадкск кдккксссак дкааакааас аасасасдса касадааааа кскаккаккк 6660
акскаккакк кддаааксаа саааадкакк кдссккддск ккдсаакдаа акдсккдака 6720
даадкаакдд асаккадкка кдаакдккка дккаааакдс аккаккаддд адсккдаскк 6780
кккаксаакд касададдкк аккскакакк ккдаддкдск кааакккакк скасаккдса 6840
ксадаассаа кккакакдкд сскакаааак дссакдддак кааааакака кдкаддскак 6900
ксакккскас ааакдккккк сакксакскк дасксасакд ссаасаадда каадасккас 6960
скккададка ккдкдкккса кадсскккск ксккксакак ссскккккдк ксакадаака 7020
ассасадаас ккдааааакк аккскаадка сакаккасас кссксааааа ааасааадак 7080
ааскдадааа ааадккаккд асадаадккс какккдскак какккасака дсскаасакк 7140
кдаскдкдск дсссаааака скдакаакад ксксккааас ксккккдкса аакккксскд 7200
сккксккакд садкаккдкк кадксаксск кксдскдкаа дсааадккда кдаааксскк 7260
сскдакакдс адккадккдк ккдассасдд касакасккд адсадакаак аасккдддса 7320
садкакккак кдсаксаскк дкакасаакс ссдкдкккдд саадскккса ааксакдкаа 7380
какдасадас кккасасада какдкдккка дкакдаакаа аааадсаккд ааакадддак 7440
ксккдссаас ккдскскскк дссассааск касккксска ааккакддаа дкаакскккк 7500
ккддакакас кксаакдкак асаакдадда адакдксасс ккскссккаа ааккскакда 7560
кдкдааакак аккккдсскс ааксаасаса дкассакддд сккскааккк аксаадсаса 7620
какксакккк дсаккадскд кадасакска дккккккдаа аасасскакк аакадкаакк 7680
- 62 029151
1даааадааа 1аасса1аа1 дс1111111с д1дад111а1 11саддаа1а 1дада1с111 7740
с11с1а1ааа д11а11са1д сасаддсааа аа11дадс1а сасадд1ада а1д1ад1111 7800
ас11адаада 11111д1ддд адд1111даа дсааа1а1а1 аааасаас11 1сас1аа111 7860
дс111сса1а 111аааааа1 аа1ааа11ас а111а1а1аа 1ааа1д111а аадсаса1а1 7920
11111д11д1 1с1ддсаа11 1ааааадааа дадда111аа асд1асс1а1 адааасааад 7980
а111а1дд11 ааадаа1дад а1садаад1с 1адаа1д111 11ааа11д1д а1а1а1111а 8040
саасаРссдР РаРРасРРРд адасаРРРдР сс1аа1с1ас дРаРаааасР сааРсРаддд 8100
сРааадаРРс 111а1асса1 сйаддйса РРсаРсРРад дскРйдаа ссасРРРРРа 8160
а111аа1а1д ааадасасса 1дсад1д111 1ссдадас1а са1ада1са1 111а1саса1 8220
ассйассаад ссРдРРддаа аРаддРРРРд аРааРРРаад РадддассРа йасаааайай 8280
аРРасаРРРа РсадаРРйй ааайасайс аайаадаай йаасайсас сРРаааййд 8340
аайсаайсй ассдйаРй сааасРсаса ааРаРаасРд саРРаРдааР асРРасаРаа 8400
РдРадРаада саадаРдРРР дасаддРРсд РдРдРааРРР РсРаРРааРд РРРРРасаРР 8460
дссРРдРРРР РаРдРааааР ааааааРаРд ддсаасРддР РРдРРаасаа сасааРРРсР 8520
РсРРадсаРР РсаааааРаР аРаРааадРР дРРсРРРРРс сРаРРРсаРд аасРаРдРРР 8580
РРРРРРаааа РаасаРддРР аадРРРРаРа РаРаРРРасд РРРдРРРсад дааРдРсРас 8640
РРдРдасРРР РРаРсааРРа ааааРааРаР РРддаадааа дадсРРаРРа адРаРаадсР 8700
РдаадРаааа РРадассРсР сРРРссаРдР адаРРасРдР РРдРасРдаР ддРРРсассс 8760
РРсадааддс асРдРсаРаР РааРаРРРаа аРРРРаРааР сдсРдаасРР аРРасассса 8820
асааРасада ааддсадРРа сасРдаадаа сРРаасРРад ааРааааРдд аадсааасад 8880
дРРРРсРааа аасРРРРРРа адРдассадд РсРсдсРсРд Рсасссаддс РададРдсаа 8940
РддсаРдаРс аРадсРсРсР дсадссРсаа сРсРдддсРс аадсаасссР ссРдссРсад 9000
ссРсссаадР адсРаадасР асаддРасаР дссассаРдс сРддсРааРа РРРаааРРРР 9060
РдРадаРаад дддРсРРдсР аРдРРдссса ддсРадРсРс ааасРссРдд сРРсаадРдР 9120
РссРасРдРс аРдассРдсс аасаРдсРдд ддРРасаддс аРдадссасс аРдссссааа 9180
саддРРРдаа сасаааРсРР РсддаРдааа аРРададаас сРааРРРРад сРРРРРдаРа 9240
дРРассРадР РРдсаааада РРРдддРдас РРдРдадсРд РРРРРаааРд сРдаРРдРРд 9300
аасаРсасаа сссааааРас РРадсаРдаР РРРаРададР РРРдаРадсР РРаРРааааа 9360
дадРдааааР ааааРдсаРа РдРаааРааа дсадРРсРаа аРадсРаРРР сададаааРд 9420
РРааРадаад РдсРдааада адддссаасР аааРРаддаР ддссадддаа РРддссРддд 9480
РРРаддассР аРдРаРдаад дссассааРР РРРРаааааР аРсРдРддРР РаРРаРдРРа 9540
- 63 029151
11а1с11с11 даддааааса а1саадаа11 дс11са1даа аа1ааа1ааа 1адсса1даа 9600
1а1са1ааад с1д111аса1 адда11с111 асааа111са 1ада1с1а1д аа1дс1сааа 9660
а1д111дад1 11дсса1ааа 11а1а11д1а д11а1а11д1 ад11а1ас11 дадас1даса 9720
са11д1аа1а 1аа1с1аада а1аааад11а 1асаааа1аа аааааааааа а 9771
<210> 9
<211> 5874
<212> ДНК
<213> Ното 8ар1еп8
<400> 9
а1ддаа11сс сса11дда1с сс1сдааас1 аасаас11сс д1сдс111ас 1ссддад1са 60
с1дд1ддада (ададаадса аа11дс1дсс аадсадддаа сааадааадс садададаад 120
са1адддадс адааддасса адаададаад сс1сддсссс адс1ддас11 дааадсс1дс 180
аассадс1дс ссаад11с1а 1дд1дадс1с ссадсадаас 1да1сдддда дсссс1ддад 240
да1с1ада1с сд11с1асад сасасассдд аса111а1дд 1дс1даасаа адддаддасс 300
а111сссдд1 11ад1дссас 1сдддссс1д 1ддс1а11са д1сс111саа сс1да1сада 360
адаасддсса 1сааад1д1с 1д1ссас1сд 1дд11сад11 1а111а11ас дд1сас1а11 420
11дд11аа11 д1д1д1дса1 дасссдаас1 дасс11ссад адаааа11да а1а1д1с11с 480
ас1д1са111 асасс111да адсс11да1а аада1ас1дд саададда11 11д1с1ааа1 540
дад11сасд1 асс1дадада 1сс11ддаас 1ддс1дда11 11адсд1са1 1ассс1ддса 600
1а1д11ддса садсаа1ада 1с1ссд1ддд а1с1саддсс 1дсддаса11 садад11с11 660
ададса11аа ааасад111с 1д1да1ссса ддсс1даадд 1са11д1ддд ддссс1да11 720
сас1сад1да адааас1ддс 1да1д1дасс а1сс1сасса 1с11с1дсс1 аад1д11111 780
дсс11дд1дд ддс1дсаас1 с11саадддс аасс1саааа а1ааа1д1д1 саадаа1дас 840
а1ддс1д1са а1дадасаас саас1ас1са 1с1сасадаа аассада1а1 с1аса1ааа1 900
аадсдаддса с11с1дассс с11ас1д1д1 ддсаа1дда1 с1дас1садд ссас1дссс1 960
да1дд11а1а 1с1дсс11аа аас11с1дас аасссддаИ 11аас1асас садсШда! 1020
1ссШдс11 дддсШсс! с1сас1д11с сдсс1са1да сасаддаИс с1дддаасдс 1080
сШассадс адассс1дад дас11с1ддд аааа1с1а1а 1да1сШ111д1дс1сд1а 1140
а1с11сс1дд да1сШс1а сс1дд1саас 11да1с11дд с1д1ад1сас са1ддсд1а1 1200
даддадсада ассаддсаас сас1да1даа аПдаадсаа аддадаадаа дПссаддад 1260
дссс1сдада 1дс1ссддаа ддадсаддад д1дс1адсад сас1аддда1 (дасасаасс 1320
1с1с1ссас1 сссасаа1дд а1сассШа асс1ссаааа а1дссад1да дадааддса! 1380
адаа1ааадс саадад1д1с ададддс1сс асадаадаса асааа1сасс ссдс1с1да1 1440
- 64 029151
ссйасаасс адсдсадда! дХсййсХа ддсс1сдсс1 с1ддаааасд ссдддс1ад1 1500
са1ддсад1д ХдйссаХй ссдд1сссс1 ддссдадаЫ ХсХсасХссс 1дадддад1с 1560
асада1да1д дад1сШсс 1ддадассас дааадсса1с ддддс1с1с1 дс1дс1ддд1 1620
дддддХдсХд дссадсаадд сссссХсссХ адаадссс1с йссХсаасс садсаасссХ 1680
дас1ссаддс а1ддадаада Хдаасассаа ссдссдссса сХадХдадсХ 1дсссс1дда 1740
дсХдХсдаХд ХсХсддсаП сда1дсадда саааадаада сйХсйдХс адсадааХас 1800
йадаХдаас сШссдддс ссааадддса а1дад1д11д 1сад1а1са1 аассХссдХс 1860
сИдаддаас 1сдаддад1с 1даасадаад ХдсссасссХ дсПдассад сйдХсХсад 1920
аадХаХсХда 1с1дддаПд с1дсссса1д 1ддд1даадс ХсаадасааХ 1с1сШддд 1980
с11д1дасдд а1ссс111дс ададс1сасс а1сасс11д1 дса1сд1дд1 даасасса1с 2040
йсаХддсса 1ддадсасса 1ддса1дадс ссХассйсд аадссаХдсХ ссадаШддс 2100
аасаХсдХсХ йассаХай ййасХдсХ дааа1дд1с1 ХсааааХсаХ Хдссйсдас 2160
сса1ас1а11 а111ссадаа даад1ддаа1 а1с111дас1 дса1са1сд1 сас1д1дад1 2220
с1дс1ададс 1дддсд1ддс саадааддда адсс1д1с1д 1дс1дсддад с11ссдс11д 2280
с1дсдсд1а1 1саадс1ддс сааа1сс1дд сссасс11аа асасас1са1 саада1са1с 2340
ддааас1сад 1дддддсас1 ддддаасс1с асса1са1сс 1ддсса1са1 1д1с111д1с 2400
111дс1с1дд 11ддсаадса дс1сс1аддд даааас1асс д1аасаассд аааааа1а1с 2460
1ссдсдсссс а1даадас1д дссссдс1дд саса1дсасд ас11с11сса с1с111сс1с 2520
а11д1с11сс д1а1сс1с1д 1ддадад1дд а11дадааса 1д1дддсс1д са1ддаад11 2580
ддссааааа1 сса1а1дсс1 са1сс1111с 11дасдд1да 1дд1дс1адд даасс1дд1д 2640
д1дс11аасс 1д11са1сдс сс1дс1а11д аас1с111са д1дс1дасаа сс1сасадсс 2700
ссддаддасд а1ддддадд1 даасаасс1д садд1ддссс 1ддсасдда1 ссадд1с111 2760
ддсса1сд1а ссааасаддс 1с111дсадс 11с11садса дд1сс1дссс а11сссссад 2820
сссааддсад адсс1дадс1 дд1дд1дааа с1сссас1с1 ссадс1ссаа ддс1дадаас 2880
саса11дс1д ссаасас1дс садддддадс 1с1ддадддс 1ссаадс1сс сададдсссс 2940
аддда1дадс асад1дас11 са1сдс1аа1 ссдас1д1д1 ддд1с1с1д1 дссса11дс1 3000
даддд1даа1 с1да1с11да 1дас11ддад да1да1дд1д дддаада1дс 1сададс11с 3060
садсаддаад ХдаХссссаа аддасадсад дадсадс1дс адсаад1сда дадд1д1ддд 3120
дассасс1да сасссаддад сссаддсас! ддаасаХсй с1даддасс1 ддс1сса1сс 3180
с1ддд1дада сд1ддааада 1дад1с1д11 сс1садд1сс с1дс1даддд ад1ддасдас 3240
асаадс1сс1 с1дадддсад сасдд1ддас 1дсс1ада1с с1даддааа1 сс1даддаад 3300
- 65 029151
а1ссс1дадс 1ддсада1да сс!ддаадаа ссада1дас1 дсйсасада адда!дсай 3360
сдссас1д1с сс!дс!дсаа ас1дда1асс ассаадад!с са1ддда1д1 дддс!ддсад 3420
д!дсдсаада сйдс!ассд 1а1сд1ддад сасадс1дд1 йдададсй сайаййс 3480
а1да1сс1дс 1садсад1дд а1с1с1ддсс Шдаадас! айасс!дда ссадаадссс 3540
асдд!дааад сШдс1дда д!асас!дас адддййса ссйййй 1д1д11сдад 3600
а1дс1дсйа ад!ддд!ддс сййддсйс ааааад1ас11сассаа1дс с1дд1дс1дд 3660
с!ддасйсс 1са11д1даа 1а1с1сас1д а1аад1с1са садсдаада! 1с1ддаа1а1 3720
1с1даад1дд с1ссса1саа адсссйсда асссйсдсд с1с1дсддсс ас1дсдддс1 3780
сШс1сда1 йдааддса! дсддд1дд1д д!дда!дссс 1дд1дддсдс са1ссса1сс 3840
а1са1даа1д 1сс1сс1сд1 с1дсс1са1с йс1ддс1са 1с11садса1 са1ддд1д1д 3900
аассййсд садддаадй йддадд1дс а1саас1а1а ссда!ддада дййсссй 3960
д1ассШд1 сдайд!даа 1аасаад1с1 дас!дсаада йсаааасй сас!ддсадс 4020
йсйс!ддд 1саа1д1даа адйаасШ дайкйдИд саа!дддйа ссйдсасй 4080
с1дсадд1дд саассШаа аддс1дда1д дасайа1д1 а1дсадс1д11да11сссдд 4140
дадд!сааса !дсаасссаа д!дддаддас аасд1д1аса 1д1а1Ид1а сШд1са1с 4200
йса!саШ йддаддсй сйсасаШд аа1с1сШд йддддйа! аайдасаас 4260
йсаайаас адаааааааа дйадддддс саддасай! 1са1дасада ддадсадаад 4320
ааа1ас1аса а!дсса!даа даадйдддс !ссаадаадс сссадаадсс са!сссасдд 4380
сссс!дааса адйссаддд ййдЮШ даса!сд!да ссадасаадс ййдасай 4440
асса1са1дд 1сс1са1с1д сс1сааса1д а1сасса1да 1дд1ддадас 1да1дассаа 4500
ад!даадааа адасдаааа! 1с1дддсааа айаассад! 1сШд1ддс сдсйсаса 4560
ддсдаа1д1д 1са1даада1 дйсдсШд аддсад1ас1 асйсасааа 1ддс1ддаа1 4620
д1дШдас11сайд1дд1 ддйсййс айдсдадсс 1дайййс 1дсаайсй 4680
аадйасйс ааадйасй с!ссссаасд сййсадад 1са1ссдсс1 ддсссдаай 4740
ддссдса!сс 1садас1да1 ссдадсддсс аадддда!сс дсасас1дс1 сШдсссй 4800
а1да1д1ссс 1дсс1дссс1 сйсаасай дддс!дйдс 1айссйд1 са1д11са1с 4860
1ас1с1а1с11сдд1а1д1с садсШссс са1д1дадд1 дддаддс!дд са!сдасдас 4920
а1дИсаас1 Юсадассй сдссаасадс а1дс1д1дсс 1сйссада11ассасд1сд 4980
дссддс!ддд а1ддсс1сс1 садсссса!с с!саасасад ддсссссс!а с1д1дасссс 5040
аа!с!дссса асадсаа!дд сассададдд дас1д1ддда дсссадссд! аддса1са1с 5100
йсйсасса сс1аса1са1 саййсйс с1са1са1дд 1сааса1д1а сайдсад!д 5160
- 66 029151
аккскддада аскксаакдк ддссасддад дададсаскд адсссскдад кдаддасдас 5220
кккдасакдк кскакдадас скдддадаад кккдасссад аддссаскса дкккаккасс 5280
ккккскдскс ксксддаскк кдсадасаск скскскддкс ссскдадаак сссаааассс 5340
ааксдааака каскдаксса дакддасскд сскккддксс скддадакаа дакссаскдс 5400
ккддасаксс кккккдсккк сассаадаак дксскаддад аакссдддда дккддаккск 5460
скдааддсаа акакддадда даадкккакд дсааскаакс ккксаааакс аксскакдаа 5520
ссаакадсаа ссаскскссд акддаадсаа даадасаккк садссаскдк сакксаааад 5580
дсскаксдда дскакдкдск дсассдсксс акддсаскск скаасасссс акдкдкдссс 5640
ададскдадд аддаддскдс аксаскссса дакдааддкк ккдккдсакк сасадсааак 5700
дааааккдкд касксссада сааакскдаа аскдсккскд ссасаксакк сссассдксс 5760
какдададкд ксаскададд ссккадкдак ададксааса кдаддасакс кадсксаака 5820
саааакдаад акдаадссас садкакддад скдаккдссс скдддссска дкда 5874
<210> 10
<211> 6500
<212> ДНК
<213> Ното 8ар1еп8
<400> 10
ксскдскака сссасадкдд кддксакскс ккскдакскк сасадссаак садсксссаа 60
ддсссскдас сксадсксад сккккдкада кссккакдас ассакссккк аадаскддаа 120
ксскадддса ддскдкккка кксссдсскс скдаддсскк кскдаддакс кдкддсккдк 180
скскдксскд адддкдаада кддакдасад акдскассса дкаакскккс садакдадсд 240
даакккссдс ссскксаскк ссдаскскск ддскдсаакк дадаадсдда ккдссаксса 300
аааддадааа аадаадкска аадассадас аддадаадка ссссадсскс ддссксадск 360
кдасскааад дсскссадда адккдсссаа дскскакддс дасакксскс дкдадсксак 420
аддааадсск скддаадаск кддасссакк скассдааак сакаадасак ккакддкдкк 480
ааасадааад аддасаакск ассдскксад кдссаадсак дссккдккса кккккдддсс 540
ккксааккса аксадаадкк кадссаккад адксксадкс сакксаккдк ксадсакдкк 600
саккаксддс ассдккакса ксааскдсдк дкксакддск асадддсскд скааааасад 660
саасадкаас аакаскдаса ккдсададкд кдкскксаск дддакккака кккккдаадс 720
кккдаккааа акаккддсаа даддккксак кскддакдад кккксккксс кксдадаксс 780
акддааскдд скддасксса ккдксаккдд аакадсдакк дкдксакака ккссаддаак 840
сассаксааа скаккдсссс кдсдкасскк ссдкдкдккс ададскккда аадсаакккс 900
- 67 029151
ад1ад111са сд1с1даадд 1са1сд1ддд ддсс11дс1а сдс1с1д1да адаадс1дд1 960
саасд1дай айсйасс! 1сШ1дсс1 садсайШ дссс1дд1ад дйадсадс! 1020
сйса1ддда адй1даасс 1дааа1дса1 сйдадддас 1д1ааааа1а йадйассс 1080
ддаадсйа1 дассайдс! йдаааадаа адаааайса сйдаайса ааа1д1д1дд 1140
сай1дда1д дд1аасад1д ссЩИсса! асаайИдаа 1д1аадсаса ссаааайаа 1200
1сс1дас1а1 аайайсда аййдасаа сй1ддс1дд йййсйд сса1дйссд 1260
дс1да1дасс саадайсс! дддадаадс! йайаасад ассс1дсд1а с1ас1дддс1 1320
сйсйадй йсйсйса Пд1ддйа11Исс1дддс йс1й1асс 1дайаасй 1380
аассс1ддс1 дйдйасса 1ддса1а1да ддадсадаас аадаа1д1ад с1дсадада1 1440
ададдссаад даааада1д1 йсаддаадс ссадсадс1д йаааддадд ааааддаддс 1500
й1ддйдсс а1дддаа11д асадаадйс асйасйсс сйдаааса! саййИас 1560
сссаааааад адааадсй! Пдд1аа1аа дааааддаад йсйсйй (дадададй 1620
(дддааадас садссйс1д ддйадайс 1да1даада1 (дссаааааа адссасадс! 1680
ссйдадсаа ассааасдас (дйссадаа й1айас1д дассасШд а1дадса1дд 1740
адайсйй саааддсада дадсас1дад 1дс1дйадс айсйасса йасса1даа 1800
ддаасаадаа ааайасаад адссйдй! ссс11д1дда даааасс1дд сайсаадй 1860
сс1сд1д1дд аас1д11дсс сссад1ддс1 д1дсдИаад ааддйс1да даас1д1да1 1920
дас1дасссд Шас1дадс (ддссайас сай1дсай айайааса йдййсй 1980
ддсса1ддад са1сасаада 1ддаддссад 1111дадаад а1д11даа1а 1адддаа111 2040
ддйИсас! адсаййй 1адсадааа1 д1дсс1аааа айаПдсдс йдайссй 2100
ссасйсШ сдссдаддс! ддаасайй (дасадсай дПдсййс 1дадййдс 2160
ада1д1аа1д аас1д1д1ас 11саааадад аадс1ддсса 11с11дсд11 сс11садад1 2220
дс1саддд1с 11саад11ад ссааа1сс1д дссаас111д аасасас1аа 11аада1аа1 2280
сддсаас1с1 д1сддадссс 11ддаадсс1 дас1д1дд1с с1дд1са11д 1да1с111а1 2340
111с1сад1а д11ддса1дс адс11111дд ссд1адс11с аа11сссааа адад1ссааа 2400
ас1с1д1аас ссдасаддсс сдасад1с1с а1д111асдд сас1ддсаса 1ддддда111 2460
с1ддсас1сс 11сс1ад1дд 1а11ссдса1 сс1с1дсддд даа1дда1сд аааа1а1д1д 2520
ддаа1д1а1д саадаадсда а1дса1са1с а1са11д1д1 д11а11д1с1 1са1а11да1 2580
сасдд1да1а ддаааас11д 1дд1дс1саа сс1с11са11 дсс11ас1дс 1саа11сс11 2640
1адсаа1дад дааадааа1д дааас11ада аддададдсс аддаааас1а аад1ссад11 2700
адсас1дда1 сда11ссдсс дддс11111д 1111д1дада сасас1с11д адса111с1д 2760
- 68 029151
ксасаадкдд кдсаддаадс аааасккасс асадсааааа даддкддсад даддскдкдс 2820
кдсасааадс ааадасакса кксссскддк сакддадакд ааааддддск сададассса 2880
ддаддадскк ддкакаскаа сскскдкасс ааадассскд ддсдксаддс акдаккддас 2940
ккддккддса ссасккдсдд аддаддаада кдасдккдаа ккккскддкд аадакаакдс 3000
асадсдсакс асасаасскд адсскдааса асаддсскак дадскссакс аддадаасаа 3060
даадсссасд адссададад кксааадкдк ддаааккдас акдйскскд аадакдадсс 3120
ксакскдасс акасаддакс сссдааадаа дкскдакдкк ассадкакас каксадаакд 3180
кадсассакк даксйсадд акддскйдд акддйасск дадакддйс ссааааадса 3240
ассададада кдйдссса ааддсйкдд йдскдсйк ссакдскдка дсдкддасаа 3300
дадааадсск ссскдддйа йкддкддаа сскдсддааа асскдскасс ааакадкдаа 3360
асасадскдд кккдададск ккаккакскк кдкдаккскд скдадсадкд дддсаскдак 3420
акйдаадак дкксассккд адаассаасс саааакссаа даайаскаа аккдкаскда 3480
саккаййк асасакакй ккаксскдда дакдд!ас!а ааакдддкад сскксддакк 3540
кддааадкак кксассадкд сскддкдскд ссйдакйс аксайдкда ккдкскскдк 3600
дассассскс айаасйаа кддаайдаа дкссйссдд аскскасдад саскдаддсс 3660
ксйсдкдсд скдксссадк ккдааддаак дааддкддкд дксаакдскс ксакаддкдс 3720
сакасскдсс аккскдаакд ййдсйдк скдссксай ккскддсксд каккйдкак 3780
кскдддадка каскксйкк скддаааай кдддааакдс айаакддаа садасксадк 3840
какааайак ассаксайа сааакаааад ксаакдкдаа адкддсаай ксксйддак 3900
саассадааа дксааскккд асаакдкддд ааакдсккас сксдскскдс кдсаадкддс 3960
аасакккаад ддскддакдд акаккакака кдсадскдкк даккссасад адааадааса 4020
асадссадад кккдададса акксасксдд ккасакккас кксдкадкск ккаксакскк 4080
кддсксаккс кксаскскда акскскксак кддсдккакс аккдасааск ксаассааса 4140
дсадааааад ккаддкддсс аадасакккк какдасадаа даасадаада аакаскакаа 4200
кдсаакдааа аааккаддак ссаааааасс ксааааассс аккссасддс скскдаасаа 4260
акдйааддк сксдкдкксд асакадксас аадссадакс йкдасакса ксаксакаад 4320
ксксайакс скааасакда йадсакдак ддскдаакса касаассаас ссааадссак 4380
дааакссакс сккдассакс ксааскдддк скккдкддкс акскккасдк кадаакдкск 4440
саксаааакс кккдскккда ддсаакаска скксассаак ддскддаакк какккдаскд 4500
кдкддксдкд скксккксса ккдккадкас аакдакккск ассккддааа аксаддадса 4560
сакксскккс сскссдасдс кскксадаак кдкссдсккд дсксддаккд дссдааксск 4620
- 69 029151
даддс11д1с сдддс1дсас даддаа1сад дас1с1сс1с 111дс1с1да 1да1д1сдс1 4680
1сс11с1с1д 11сааса11д д1с11с1ас1 с111с1да11 а1д111а1с1 а1дсса11с1 4740
ддд1а1даас 1дд1111сса аад1даа1сс адад1с1дда а1сда1даса 1а11саас11 4800
саадас1111 дссадсадса 1дс1с1д1с1 с11ссада1а адсаса1сад садд11ддда 4860
Пссс1дс1с адсссса1дс 1дсда1сааа адаа1са1д1 аас1с11сс1 садаааас1д 4920
ссасс1ссс1 ддса1адсса са1сс1асй 1д1садйас айа1са1с1 ссШс1са1 4980
1д11д1саас а1д1аса11д с1д1да1111 ададаас11с аа1асадсса с1даадааад 5040
1даддассс1 11ддд1даад а1дасШда са1аШ1а1 даад1д1ддд аааадШда 5100
сссадаадса асасааШа 1сааа1а11с 1дсссШс1 дасШдс1д а1дсс11дсс 5160
1дадсс111д сд1д1сдсаа адссааа1аа а1а1саа111 с1ад1аа1дд ас11дссса1 5220
дд1дад1даа да1сдсс1сс ас1дса1дда 1а11с1111с дсс11сассд с1аддд1ас1 5280
сдд1ддс1с1 да1ддсс1ад а1ад1а1даа адсаа1да1д даададаад1 1са1ддаадс 5340
саа1сс1с1с аадаад11д1 а1даассса1 ад1сассасс ассаададаа аддаададда 5400
аададд1дс1 дс1а11а11с ааааддсс11 1сдааад1ас а1да1даадд 1дассааддд 5460
1дассаадд1 дассаааа1д ас11ддаааа сдддсс1са1 1сассас1сс адас1с111д 5520
саа1ддадас 11д1с1адс1 11дддд1ддс саадддсаад д1ссас1д1д ас1дадссс1 5580
сасс1ссасд сс1асс1са1 адс11сасад сс11дсс11с адсс1с1дад с1ссадддд1 5640
садсадс11а д1д1а1саас адддад1дда 11сассааа1 1адсса11сс а1111с1111 5700
с1ддс1аааа 1ааа1да1а1 11саа111са 1111ааа1аа 1ас11асада да1а1аада1 5760
ааддс1ас11 дасаассад1 дд1ас1а11а 1аа1ааддаа даадасасса ддааддас1д 5820
1ааааддаса 1ассаа1111 адда11дааа 1ад11саддс сдддсдсад1 ддс1са1дсс 5880
1д1аа1ссса дсас111дад аддссааддс адд1дда1са сдадд1саад ада1сдадас 5940
са1сс1ддсс ааса1да1да аас1ссд1с1 с1ас1ааааа 1асааааа11 адс1дддса1 6000
дд1ддсд1дс дсс1д1ад1с ссадс1ас11 дддаддс1да ддсаддадаа 1сдс11ааас 6060
с1дддадасд даддйдсад 1дадссаада 1сд1дссас1 дсас1ссадс с1дд1дасад 6120
ад1дадас1с 1дШсаааа аадаааадаа аадаааса1д дйсааайа 1а1с1аааса 6180
ааааадаа1а адааасаааа аасаса11аа аа1111аад1 1д1а1111с1 а1д111с1ад 6240
а1аса1са11 111д111да1 а1111сс1да 1дсаад1а1д 1дд111а1са са1д1адс1с 6300
1111дса1дс 1ааа1даааа 11саааас11 дссаа1ааа1 даа1адс11а 11дсадаса1 6360
11111ассаа са11аа11а1 111ддд111д 111аааасс1 ададдсасаа 1с11дас11д 6420
1саа11ас1а ссс111саса адс1асса1с 1сада1а1а1 а1а1а1а1а1 ааа11саа1а 6480
- 70 029151
аадскккскд кккдкдкксс 6500
<210> 11
<211> 6528
<212> ДНК
<213> Ното 8ар1еп8
<400> 11
ксскдскака сссасадкдд кддксакскс ккскдакскк сасадссаак садсксссаа 60
ддсссскдас сксадсксад сккккдкада кссккакдас ассакссккк аадаскддаа 120
ксскадддса ддскдкккка кксссдсскс скдаддсскк кскдаддакс кдкддсккдк 180
скскдксскд адддкдаада кддакдасад акдскассса дкаакскккс садакдадсд 240
даакккссдс ссскксаскк ссдаскскск ддскдсаакк дадаадсдда ккдссаксса 300
аааддадааа аадаадкска аадассадас аддадаадка ссссадсскс ддссксадск 360
кдасскааад дсскссадда адккдсссаа дскскакддс дасакксскс дкдадсксак 420
аддааадсск скддаадаск кддасссакк скассдааак сакаадасак ккакддкдкк 480
ааасадааад аддасаакск ассдскксад кдссаадсак дссккдккса кккккдддсс 540
ккксааккса аксадаадкк кадссаккад адксксадкс сакксаккдк ксадсакдкк 600
саккаксддс ассдккакса ксааскдсдк дкксакддск асадддсскд скааааасад 660
саасадкаас аакаскдаса ккдсададкд кдкскксаск дддакккака кккккдаадс 720
кккдаккааа акаккддсаа даддккксак кскддакдад кккксккксс кксдадаксс 780
акддааскдд скддасксса ккдксаккдд аакадсдакк дкдксакака ккссаддаак 840
сассаксааа скаккдсссс кдсдкасскк ссдкдкдккс ададскккда аадсаакккс 900
адкадкккса сдкскдаадд ксаксдкддд ддссккдска сдскскдкда адаадскддк 960
саасдкдакк акссксасск ксккккдсск садсаксккк дссскддкад дксадсадск 1020
скксакддда адкскдаасс кдааакдсак сксдадддас кдкааааака ксадкаассс 1080
ддаадсккак дассаккдск ккдаааадаа адааааккса сскдааккса ааакдкдкдд 1140
сакскддакд ддкаасадкд сскдккссак асаакакдаа кдкаадсаса ссааааккаа 1200
ксскдаскак ааккакасда аккккдасаа скккддскдд кскккксккд ссакдккссд 1260
дскдакдасс саадакксск дддадаадск ккаксаасад ассскдсдка скаскдддск 1320
скасксадкс ккскксккса ккдкддксак ккксскдддс кссккскасс кдаккааскк 1380
аассскддск дккдккасса кддсакакда ддадсадаас аадаакдкад скдсададак 1440
ададдссаад даааадакдк кксаддаадс ссадсадскд ккаааддадд ааааддаддс 1500
кскддккдсс акдддааккд асадаадккс асккаскксс сккдааасак сакаккккас 1560
сссаааааад адааадскск ккддкаакаа дааааддаад кссккскккк кдадададкс 1620
- 71 029151
Рдддааадас садссРссРд ддРсадаРРс РдаРдаадаР Рдссаааааа адссасадсР 1680
ссРададсаа ассааасдас РдРсссадаа РсРаРсасРд дассасРРРд аРдадсаРдд 1740
адаРссРсРс саааддсада дадсасРдад РдссдРсадс аРссРсасса РсассаРдаа 1800
ддаасаадаа аааРсасаад адссРРдРсР сссРРдсдда даааассРдд саРссаадРа 1860
ссРсдРдРдд аасРдРРдсс сссадРддсР дРдсдРРаад ааддРссРда даасРдРдаР 1920
дасРдасссд РРРасРдадс РддссаРсас саРсРдсаРс аРсаРсааса сРдРсРРсРР 1980
ддссаРддад саРсасаада Рддаддссад РРРРдадаад аРдРРдааРа РадддааРРР 2040
ддРРРРсасР адсаРРРРРа РадсадаааР дРдссРаааа аРсаРРдсдс РсдаРсссРа 2100
ссасРасРРР сдссдаддсР ддаасаРРРР РдасадсаРР дРРдсРсРРс РдадРРРРдс 2160
адаРдРааРд аасРдРдРас РРсаааадад аадсРддсса РРсРРдсдРР ссРРсадддР 2220
дсРсадддРс РРсаадРРад ссаааРссРд дссаасРРРд аасасасРаа РРаадаРааР 2280
сддсаасРсР дРсддадссс РРддааассР дасРдРддРс сРддРсаРРд РдаРсРРРаР 2340
РРРсРсадРа дРРддсаРдс адсРРРРРдд ссдРадсРРс ааРРсссааа ададРссааа 2400
асРсРдРаас ссдасаддсс сдасадРсРс аРдРРРасдд сасРддсаса РдддддаРРР 2460
сРддсасРсс РРссРадРдд РаРРссдсаР ссРсРдсддд дааРддаРсд ааааРаРдРд 2520
ддааРдРаРд саадаадсда аРдсаРсаРс аРсаРРдРдР дРРаРРдРсР РсаРаРРдаР 2580
сасддРдаРа ддаааасРРд РддРдсРсаа ссРсРРсаРР дссРРасРдс РсааРРссРР 2640
РадсааРдад дааадаааРд дааасРРада аддададдсс аддаааасРа аадРссадРР 2700
адсасРддаР сдаРРссдсс дддсРРРРРд РРРРдРдада сасасРсРРд адсаРРРсРд 2760
РсасаадРдд Рдсаддаадс аааасРРасс асадсааааа даддРддсад даддсРдРдс 2820
Рдсасааадс ааадасаРса РРссссРддР саРддадаРд ааааддддсР сададассса 2880
ддаддадсРР ддРаРасРаа ссРсРдРасс ааадасссРд ддсдРсаддс аРдаРРддас 2940
РРддРРддса ссасРРдсдд аддаддаада РдасдРРдаа РРРРсРддРд аадаРааРдс 3000
асадсдсаРс асасаассРд адссРдааса асаддссРаР дадсРссаРс аддадаасаа 3060
даадсссасд адссададад РРсааадРдР ддаааРРдас аРдРРсРсРд аадаРдадсс 3120
РсаРсРдасс аРасаддаРс сссдааадаа дРсРдаРдРР ассадРаРас РаРсадааРд 3180
РадсассаРР даРсРРсадд аРддсРРРдд аРддРРассР дадаРддРРс ссааааадса 3240
ассададада РдРРРдссса ааддсРРРдд РРдсРдсРРР ссаРдсРдРа дсдРддасаа 3300
дадааадссР сссРдддРса РРРддРддаа ссРдсддааа ассРдсРасс аааРадРдаа 3360
асасадсРдд РРРдададсР РРаРРаРсРР РдРдаРРсРд сРдадсадРд дддсасРдаР 3420
аРРРдаадаР дРРсассРРд адаассаасс сааааРссаа дааРРасРаа аРРдРасРда 3480
- 72 029151
сайайШ асаса!ай1 11а1сс1дда да1дд1ас1а ааа(ддд(ад ссйсддай 3540
1ддааад1а111сассад1д сс1дд1дс1д ссйдаШс а1са11д1да Нд1с1с1д1 3600
дассассс(с айаасйаа (ддаайдаа д!ссйссдд асШасдад сас(даддсс 3660
1с11сд1дсд с1д1сссад1 йдааддаа! даадд(дд(д д1саа1дс1с 1са1адд1дс 3720
са(асс(дсс а11с1даа1д ййдсйд! с1дсс1са1111с1ддс1сд 1а1Шд1а1 3780
1с1дддад1а (асйсйй с!ддаааай 1дддааа1дс а11аа1ддаа садас(сад( 3840
1а1ааа11а1 асса1са11а сааа(аааад 1саа1д1даа ад!ддсаай 1с1с11дда1 3900
саассадааа д1саасШд асаа(д(ддд ааа1дс11ас с1сдс1с1дс 1дсаад1ддс 3960
аасаШаад ддс(дда(дд а1а11а1а1а 1дсадс1д11 дайссасад адааадааса 4020
асадссадад Шдададса айсасШдд йасаШас 11сд1ад1с111а1са1с11 4080
1ддс1са11с 11сас1с1да а1с1с11са11ддсд11а1с айдасаас! (саассааса 4140
дсадааааад йадд!ддсс аадасайй 1а1дасадаа даасадаада аа1ас1а1аа 4200
1дсаа1дааа ааайадда! ссаааааасс (сааааассс айссасддс с!с!даасаа 4260
а1д1саадд1 с1сд1д11сд аса(ад(сас аадссада(с Шдаса1са 1са1са1аад 4320
1с1са11а1с с(аааса(да 11адса1да1 ддс!даа!са (асаассаас ссааадсса! 4380
дааа!сса!с сйдассаШ 1саас1ддд1 сШд1дд1с а1сШасд11адаа1д1с1 4440
са(саааа(с ШдсШда ддсаа(ас(а сйсассаа! ддШддаай 1аШдас1д 4500
1д1дд1сд1д сйсШсса йдйад1ас аа1даШс1 ассйддааа а(саддадса 4560
сайссШс сс(ссдасдс 1с11садаа11д1ссдс11д дШсддайд дссдаа(сс( 4620
даддсйдШ сдддс(дсас даддаа(сад дас1с1сс1с Шдс1с1да 1да1д1сдс1 4680
1сс11с1с1д йсаасайд д1с11с1ас1 сШс1да11 а1дШа1с1 а1дсса11с1 4740
ддд(а(даас (ддййсса аад(даа(сс адад(с(дда а(сда(даса Шйсаасй 4800
саадасйй дссадсадса 1дс1с1д1с1 сйссада1а адсаса(сад саддйддда 4860
Пссс1дс1с адсссса(дс 1дсда1сааа адаа1са1д1 аас1с11сс1 садаааас(д 4920
ссасс(ссс( ддса(адсса са1сс1ас111д1сад11ас а11а1са1с1 ссШс1са1 4980
1д11д1саас а1д1аса11д с1д1даШ1 ададаасйс аа(асадсса с(даадааад 5040
(даддассс! йддд!даад а1дасШда саШййа! даад(д(ддд аааадШда 5100
сссадаадса асасааШа 1сааа1а11с 1дсссШс1 дасШдс1д а!дссйдсс 5160
(дадссШд сд(д(сдсаа адссааа(аа а1а1сааШ с1ад1аа1дд асйдссса! 5220
дд(дад(даа да(сдсс(сс ас(дса(дда !айсййс дссйсассд с1аддд1ас1 5280
сдд1ддс1с1 да(ддсс(ад а1ад1а1даа адсаа(да(д даададаад! 1са1ддаадс 5340
- 73 029151
сааксскскс аадаадккдк акдаасссак адксассасс ассаададаа аддаададда 5400
аададдкдск дскаккаккс ааааддсскк ксдааадкас акдакдаадд кдассааддд 5460
кдассааддк дассаааакд асккддаааа сдддссксак ксассасксс адаскскккд 5520
саакддадас ккдкскадск ккддддкддс саадддсаад дкссаскдкд аскдадссск 5580
сасскссасд сскассксак адскксасад ссккдссскс адсскскдад скссаддддк 5640
садсадскка дкдкаксаас адддадкдда кксассааак кадссакксс аккккскккк 5700
скддскааак ааакдакакк ксааккксак кккааакдак асккасадад акакаадака 5760
аддскасккд асаассадсд дкаскакккк аакааддаад аадасассад дааддаскдк 5820
ааааддасак кссаакккка ддаккддаак адкксаадсс дддсдсадкд дсксакдсск 5880
ддааксссад саскккдада ддссааддса ддкддаксас даддксаада даксдадасс 5940
аксскддсса ассакдакда ааскссдкск скаскаааак асааааакка дскдддсакд 6000
дккдсдкдсд сскдкадксс садскасккд ддаддскдад дсаддадаак сдсккааасс 6060
кдддадасдд аддккдсадк дадссаадак сдкдксаскд саскссадсс кддкдасада 6120
дкдадаскск дккксааааа адаааадааа адааасакдд кксаааккак акскааасаа 6180
аааадаакаа дааасааааа асасаккааа аккккаадкк дкаккккска кдкккскада 6240
касаксаккк ккдкккдака кккксскдак дсаадкакдк ддкккаксас акдкадскск 6300
кккдсакдск ааакдаааак ксаадасккд ссаакааакд аакадсккак кдсадасакк 6360
ккккассаас аккааккакк ккдддкккдк ккаааасска даддсасаак сккдасккдк 6420
сааккаскас ссккксасаа дскассакск садакакака какакакака аакксаакаа 6480
адскккскдк ккдкдкксса кааааааааа аааааааааа аааааааа 6528

Claims (15)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Способ определения и отбора соединения, которое модулирует экспрессию одного или более полинуклеотидов альфа-субъединицы потенциалзависимого натриевого канала (8СИхА), связанных с болезненным состоянием, для введения ш νί\Ό. включающий проведение клеточного скрининга, включающего систему экспрессии полинуклеотида-мишени 8ЕЦ ГО N0: 1, в отношении по меньшей мере одного соединения, выбранного из группы, состоящей из диуретика, атипичного антипсихотика, активатора калиевых каналов, блокатора кальциевых каналов, антимикотика, антиоксиданта, ингибитора ФДЭ-5, агониста эстрогена (стероидного или нестероидного), антидепрессанта, ингибитора протонного насоса, агониста рецепторов 5НТГО, снотворного, противоязвенного препарата, агониста 5НТ4, агониста ГАМК, антигистаминного препарата или анаболического стероида, и выявления соединений, которые модулируют экспрессию мРНК полинуклеотида-мишени и/или белка по сравнению с контролем.
  2. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что соединения выбраны из группы, состоящей из милнаципрана, торсемида, рисперидона, пинацидила, бенидипина, кетоконазола, эбселена, тадалафила, зеранола, нефазодона, ломеризина, икариина, омепразола, эзомепразола, Ь-694,247, нитрендипина, ниметазепама, амлексанокса, мозаприда, сертралина или станозолола или фармацевтически приемлемых солей, изомеров, энантиомеров, изоформ, полиморфов, гидратов, сольватов или пролекарственных форм указанных соединений.
  3. 3. Способ модулирования функции и/или экспрессии одного или более полинуклеотидов или белков альфа-субъединицы потенциалзависимого натриевого канала (δΟΝχΑ) в биологической системе,
    - 74 029151
    включающий приведение в контакт указанной системы по меньшей мере с одним соединением, которое модулирует экспрессию мРНК полинуклеотида-мишени δΕΟ ГО N0: 1 и/или белка по сравнению с контролем, причем указанное соединение выбрано из группы, состоящей из диуретика, атипичного антипсихотика, активатора калиевых каналов, блокатора кальциевых каналов, антимикотика, антиоксиданта, ингибитора ФДЭ-5, агониста эстрогена (стероидного или нестероидного), антидепрессанта, ингибитора протонного насоса, агониста рецепторов 5ΗΤ1Ό, снотворного, противоязвенного препарата, агониста 5НТ4, агониста ГАМК, антигистаминного препарата или анаболического стероида.
  4. 4. Способ по п.3, отличающийся тем, что указанное по меньшей мере одно соединение выбрано из группы, состоящей из милнаципрана, торасемида, рисперидона, пинацидила, бенидипина, кетоконазола, эбселена, тадалафила, зеранола, нефазодона, ломеризина, икариина, омепразола, эзомепразола, Ь694,247, нитрендипина, ниметазепама, амлексанокса, мозаприда, сертралина или станозолола или фармацевтически приемлемых солей, изомеров, энантиомеров, изоформ, полиморфов, гидратов, сольватов или пролекарственных форм указанных соединений.
  5. 5. Способ модулирования функции и/или экспрессии одного или более полинуклеотидов или белков альфа-субъединицы I типа потенциалзависимого натриевого канала (80Ν1Α) в клетках или тканях пациента ίη νίνο или ίη νίίτο, включающий приведение в контакт указанных клеток или тканей по меньшей мере с одним соединением, которое модулирует экспрессию мРНК полинуклеотида-мишени δΕΟ ГО N0: 1 и/или белка по сравнению с контролем, причем указанное соединение выбрано из группы, состоящей из диуретика, атипичного антипсихотика, активатора калиевых каналов, блокатора кальциевых каналов, антимикотика, антиоксиданта, ингибитора ФДЭ-5, агониста эстрогена (стероидного или нестероидного), антидепрессанта, ингибитора протонного насоса, агониста рецепторов 5НТГО, снотворного, противоязвенного препарата, агониста 5НТ4, агониста ГАМК, антигистаминного препарата или анаболического стероида.
  6. 6. Способ по п.5, отличающийся тем, что указанное по меньшей мере одно соединение выбрано из группы, состоящей из милнаципрана, торсемида, рисперидона, пинацидила, бенидипина, кетоконазола, эбселена, тадалафила, зеранола, нефазодона, ломеризина, икариина, омепразола, Ь-694,247, нитрендипина, ниметазепама, амлексанокса, мозаприда, сертралина или станозолола или фармацевтически приемлемых солей, изомеров, энантиомеров, изоформ, полиморфов, гидратов, сольватов или пролекарственных форм указанных соединений.
  7. 7. Способ по п.6, отличающийся тем, что функция и/или экспрессия альфа-субъединицы I типа потенциалзависимого натриевого канала (80Ν1Α) ίη νίνο или ίη νίίτο увеличивается по сравнению с контролем.
  8. 8. Способ по п.7, отличающийся тем, что указанная экспрессия увеличивается ίη νίνο.
  9. 9. Фармацевтическая композиция для профилактики или лечения заболевания, связанного по меньшей мере с одним полинуклеотидом альфа-субъединицы I типа потенциалзависимого натриевого канала (δΟΝχΑ) и/или по меньшей мере одним продуктом, кодируемым указанным полинуклеотидом, содержащая одно или более соединений, которые модулируют экспрессию мРНК полинуклеотида-мишени δΕΟ ГО N0: 1 и/или белка по сравнению с контролем, причем указанное соединение выбрано из группы, состоящей из диуретика, атипичного антипсихотика, активатора калиевых каналов, блокатора кальциевых каналов, антимикотика, антиоксиданта, ингибитора ФДЭ-5, агониста эстрогена (стероидного или нестероидного), антидепрессанта, ингибитора протонного насоса, агониста рецепторов 5ΗΤ1Ό, снотворного, противоязвенного препарата, агониста 5НТ4, агониста ГАМК, антигистаминного препарата или анаболического стероида.
  10. 10. Композиция по п.9, отличающаяся тем, что указанные соединения выбраны из группы, состоящей из милнаципрана, торасемида, рисперидона, пинацидила, бенидипина, кетоконазола, эбселена, тадалафила, зеранола, нефазодона, ломеризина, икариина, омепразола, эзомепразола, Ь-694,247, нитрендипина, ниметазепама, амлексанокса, мозаприда, сертралина или станозолола или фармацевтически приемлемых солей, изомеров, энантиомеров, изоформ, полиморфов, гидратов, сольватов или пролекарственных форм указанных соединений.
  11. 11. Способ профилактики или лечения заболевания, связанного по меньшей мере с одним полинуклеотидом альфа-субъединицы I типа потенциалзависимого натриевого канала (δΟΝχΑ) и/или по меньшей мере одним продуктом, кодируемым указанным полинуклеотидом, включающий введение пациенту терапевтически эффективной дозы по меньшей мере одного соединения, которое модулирует экспрессию мРНК полинуклеотида-мишени δΕΟ ГО N0: 1 и/или белка по сравнению с контролем, причем указанное соединение выбрано из группы, состоящей из диуретика, атипичного антипсихотика, активатора калиевых каналов, блокатора кальциевых каналов, антимикотика, антиоксиданта, ингибитора ФДЭ-5, агониста эстрогена (стероидного или нестероидного), антидепрессанта, ингибитора протонного насоса, агониста рецепторов 5ΗΤ1Ό, снотворного, противоязвенного препарата, агониста 5НТ4, агониста ГАМК, антигистаминного препарата или анаболического стероида.
  12. 12. Способ по п.11, отличающийся тем, что указанное заболевание представляет собой неврологическое заболевание или нарушение.
  13. 13. Способ по п.11, отличающийся тем, что заболевание представляет собой сердечно-сосудистое
    - 75 029151
    заболевание или нарушение.
  14. 14. Способ по п.11, отличающийся тем, что заболевание, связанное по меньшей мере с одним полинуклеотидом альфа-субъединицы I типа потенциалзависимого натриевого канала (δΟΝ 1Α), выбрано из судорог; боли (включая хроническую боль); нарушения электрической возбудимости с вовлечением дисфункции натриевых каналов; заболевания или нарушения, связанного с дисфункцией натриевых каналов; заболевания или нарушения, связанного с нарушением регуляции активности альфа-субъединицы потенциалзависимого натриевого канала (например, паралич, гиперкалеимический периодический паралич, врожденная парамиотония, усугубляемая калием миотония, синдром удлинения ОТ 3, заболевания двигательной концевой пластинки, атаксия и др.); заболевания желудочно-кишечного тракта, вызванного нарушением функции кишечной нервной системы (например, колит, илеит, синдром воспаленного кишечника и т.д.); гипертонии или сердечной недостаточности; заболевания или нарушения мочеполовой системы с участием симпатической и парасимпатической иннервации (например, доброкачественная гиперплазия предстательной железы, импотенция); заболевания или нарушения, связанного с нервномышечной системой (например, мышечная дистрофия, рассеянный склероз, эпилепсия, аутизм, мигрень (например, спорадическая и семейная гемиплегическая мигрень и т.д.); тяжелой миоклонической эпилепсии младенчества (δΜΕΙ или синдром Драве); генерализованной эпилепсии с фебрильными судорогами плюс (ΟΕΤδ+) и т.д.) и приступов, связанных с δΟΝ1Α.
  15. 15. Способ по п.14, отличающийся тем, что заболевание или нарушение выбрано из тяжелой миоклонической эпилепсии младенчества (δΜΕΙ или синдром Драве), семейной гемиплегической мигрени, генерализованной эпилепсии с фебрильными судорогами плюс (ΟΕΤδ+).
EA201490420A 2011-09-06 2012-08-28 ЛЕЧЕНИЕ ЗАБОЛЕВАНИЙ, СВЯЗАННЫХ С АЛЬФА-СУБЪЕДИНИЦАМИ ПОТЕНЦИАЛЗАВИСИМЫХ НАТРИЕВЫХ КАНАЛОВ (SCNxA), С ПОМОЩЬЮ МАЛЫХ МОЛЕКУЛ EA029151B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161531361P 2011-09-06 2011-09-06
PCT/US2012/052685 WO2013036403A1 (en) 2011-09-06 2012-08-28 TREATMENT OF DISEASES RELATED TO ALPHA SUBUNITS OF SODIUM CHANNELS, VOLTAGE-GATED (SCNxA) WITH SMALL MOLECULES

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201490420A1 EA201490420A1 (ru) 2014-12-30
EA029151B1 true EA029151B1 (ru) 2018-02-28

Family

ID=47832504

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201490420A EA029151B1 (ru) 2011-09-06 2012-08-28 ЛЕЧЕНИЕ ЗАБОЛЕВАНИЙ, СВЯЗАННЫХ С АЛЬФА-СУБЪЕДИНИЦАМИ ПОТЕНЦИАЛЗАВИСИМЫХ НАТРИЕВЫХ КАНАЛОВ (SCNxA), С ПОМОЩЬЮ МАЛЫХ МОЛЕКУЛ

Country Status (12)

Country Link
US (1) US10583128B2 (ru)
EP (1) EP2753317B1 (ru)
JP (1) JP6125505B2 (ru)
KR (1) KR101991980B1 (ru)
CN (2) CN103874486A (ru)
BR (1) BR112014005234A2 (ru)
CA (1) CA2847811C (ru)
CL (1) CL2014000550A1 (ru)
EA (1) EA029151B1 (ru)
MX (1) MX365525B (ru)
TW (1) TWI666325B (ru)
WO (1) WO2013036403A1 (ru)

Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2011325956B2 (en) 2010-11-12 2016-07-14 The General Hospital Corporation Polycomb-associated non-coding RNAs
US9920317B2 (en) 2010-11-12 2018-03-20 The General Hospital Corporation Polycomb-associated non-coding RNAs
EA201492116A1 (ru) 2012-05-16 2015-05-29 Рана Терапьютикс, Инк. Композиции и способы для модулирования экспрессии mecp2
AU2013262649A1 (en) 2012-05-16 2015-01-22 Rana Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating smn gene family expression
AU2013262700A1 (en) 2012-05-16 2015-01-22 Rana Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating hemoglobin gene family expression
US10837014B2 (en) 2012-05-16 2020-11-17 Translate Bio Ma, Inc. Compositions and methods for modulating SMN gene family expression
WO2013173645A1 (en) 2012-05-16 2013-11-21 Rana Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating utrn expression
EA201492120A1 (ru) 2012-05-16 2015-10-30 Рана Терапьютикс, Инк. Композиции и способы для модулирования экспрессии atp2a2
ES2704880T3 (es) 2013-02-08 2019-03-20 Gen Mills Inc Productos alimentarios reducidos en sodio
GB201410693D0 (en) 2014-06-16 2014-07-30 Univ Southampton Splicing modulation
JP6867945B2 (ja) 2014-10-03 2021-05-12 コールド スプリング ハーバー ラボラトリー 核内遺伝子出力の標的とされた増強
WO2016070060A1 (en) 2014-10-30 2016-05-06 The General Hospital Corporation Methods for modulating atrx-dependent gene repression
CN105603053A (zh) * 2014-11-06 2016-05-25 首都医科大学附属北京安贞医院 高血压易感基因SCN7A单核苷酸多态性位点rs7565062的检测试剂盒
US10900036B2 (en) 2015-03-17 2021-01-26 The General Hospital Corporation RNA interactome of polycomb repressive complex 1 (PRC1)
WO2017060731A1 (en) 2015-10-09 2017-04-13 University Of Southampton Modulation of gene expression and screening for deregulated protein expression
WO2017075222A1 (en) * 2015-10-30 2017-05-04 Lieber Institute For Brain Development Treatment of neurological and neurodevelopmental diseases and disorders associated with aberrant ion channel expression and activity
US11096956B2 (en) 2015-12-14 2021-08-24 Stoke Therapeutics, Inc. Antisense oligomers and uses thereof
SG11201804443UA (en) 2015-12-14 2018-06-28 Cold Spring Harbor Laboratory Antisense oligomers for treatment of autosomal dominant mental retardation-5 and dravet syndrome
LT3673080T (lt) 2017-08-25 2023-12-27 Stoke Therapeutics, Inc. Priešprasminiai oligomerai, skirti būklėms ir ligoms gydyti
AU2018375192B2 (en) * 2017-12-01 2023-11-09 Encoded Therapeutics, Inc. Engineered DNA binding proteins
WO2020154462A1 (en) * 2019-01-23 2020-07-30 Rogcon U.R., Inc. Antisense oligonucleotides targeting scn2a retained introns
CN110327332A (zh) * 2019-07-06 2019-10-15 河北医科大学第二医院 氨来呫诺在缓解eae发病上的应用及其实验方法
CN110511936B (zh) * 2019-08-05 2021-07-09 华南农业大学 茄二十八星瓢虫生长发育相关基因chs1及其应用
CA3156791A1 (en) * 2019-11-01 2021-05-06 Peter M. EIMON Methods and compositions for treating a premature termination codon-mediated disorder
TW202146652A (zh) * 2020-03-17 2021-12-16 日商大日本住友製藥股份有限公司 Ｓｃｎ１ａ基因之表現及／或功能調節劑
MX2022014151A (es) 2020-05-11 2022-11-30 Stoke Therapeutics Inc Oligomeros antisentido de opa1 para tratamiento de afecciones y enfermedades.
CN117363580B (zh) * 2023-10-10 2024-07-09 苏州启辰生物科技有限公司 一种异源二聚体膜蛋白离子通道细胞模型的制备方法

Family Cites Families (231)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4252951A (en) * 1979-10-09 1981-02-24 Eli Lilly And Company Isolation of syn-7-(2-amino-4-thiazolyl)-(methoxyimino)acetamido-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylic acid
NZ207394A (en) 1983-03-08 1987-03-06 Commw Serum Lab Commission Detecting or determining sequence of amino acids
US4754065A (en) 1984-12-18 1988-06-28 Cetus Corporation Precursor to nucleic acid probe
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US5506337A (en) 1985-03-15 1996-04-09 Antivirals Inc. Morpholino-subunit combinatorial library and method
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4800159A (en) 1986-02-07 1989-01-24 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences
US5288512A (en) 1987-12-15 1994-02-22 The Procter & Gamble Company Reduced calorie fats made from triglycerides containing medium and long chain fatty acids
NL8800756A (nl) 1988-03-25 1989-10-16 Vereniging Voor Christelijk Wetenschappelijk Onderwijs Genetisch gemanipuleerde plantecellen en planten, alsmede daarvoor bruikbaar recombinant dna.
US6203976B1 (en) 1989-07-18 2001-03-20 Osi Pharmaceuticals, Inc. Methods of preparing compositions comprising chemicals capable of transcriptional modulation
US5457189A (en) 1989-12-04 1995-10-10 Isis Pharmaceuticals Antisense oligonucleotide inhibition of papillomavirus
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
US5852188A (en) 1990-01-11 1998-12-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having chiral phosphorus linkages
US6034233A (en) 1990-05-04 2000-03-07 Isis Pharmaceuticals Inc. 2'-O-alkylated oligoribonucleotides and phosphorothioate analogs complementary to portions of the HIV genome
IE66205B1 (en) 1990-06-14 1995-12-13 Paul A Bartlett Polypeptide analogs
US5650489A (en) 1990-07-02 1997-07-22 The Arizona Board Of Regents Random bio-oligomer library, a method of synthesis thereof, and a method of use thereof
US5218105A (en) 1990-07-27 1993-06-08 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
US5138045A (en) 1990-07-27 1992-08-11 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
US5610289A (en) 1990-07-27 1997-03-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogues
US5432272A (en) 1990-10-09 1995-07-11 Benner; Steven A. Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases
JP3150340B2 (ja) 1990-11-13 2001-03-26 イムネクス コーポレイション 二機能選択可能融合遺伝子
US6307040B1 (en) 1992-03-05 2001-10-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5474796A (en) 1991-09-04 1995-12-12 Protogene Laboratories, Inc. Method and apparatus for conducting an array of chemical reactions on a support surface
US5661134A (en) 1991-10-15 1997-08-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides for modulating Ha-ras or Ki-ras having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US5576302A (en) 1991-10-15 1996-11-19 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides for modulating hepatitis C virus having phosphorothioate linkages of high chiral purity
EP0538194B1 (de) 1991-10-17 1997-06-04 Novartis AG Bicyclische Nukleoside, Oligonukleotide, Verfahren zu deren Herstellung und Zwischenprodukte
US6335434B1 (en) 1998-06-16 2002-01-01 Isis Pharmaceuticals, Inc., Nucleosidic and non-nucleosidic folate conjugates
US5605662A (en) 1993-11-01 1997-02-25 Nanogen, Inc. Active programmable electronic devices for molecular biological analysis and diagnostics
US5573905A (en) 1992-03-30 1996-11-12 The Scripps Research Institute Encoded combinatorial chemical libraries
IL101600A (en) 1992-04-15 2000-02-29 Yissum Res Dev Co Synthetic partially phosphorothioated antisense oligodeoxynucleotides and pharmaceutical compositions containing them
US5288514A (en) 1992-09-14 1994-02-22 The Regents Of The University Of California Solid phase and combinatorial synthesis of benzodiazepine compounds on a solid support
US6710174B2 (en) 2001-09-13 2004-03-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense inhibition of vascular endothelial growth factor receptor-1 expression
EP1138766A3 (en) 1992-10-15 2003-05-02 Toray Industries, Inc. Process for preparing major histocompatibility antigen class II protein and materials having the same immobilized thereon
CN1123038A (zh) 1993-05-11 1996-05-22 北卡罗来纳大学查珀尔希尔分校 阻止异常剪接的反义寡核苷酸及其使用方法
AU6953394A (en) 1993-05-21 1994-12-20 Targeted Genetics Corporation Bifunctional selectable fusion genes based on the cytosine deaminase (cd) gene
AU679566B2 (en) 1993-09-03 1997-07-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Amine-derivatized nucleosides and oligonucleosides
US5491084A (en) 1993-09-10 1996-02-13 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Uses of green-fluorescent protein
ATE178939T1 (de) 1993-11-30 1999-04-15 Univ Mcgill Dna methyltransferase inhibierung
US5908779A (en) 1993-12-01 1999-06-01 University Of Connecticut Targeted RNA degradation using nuclear antisense RNA
US5519134A (en) 1994-01-11 1996-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolidine-containing monomers and oligomers
US5593853A (en) 1994-02-09 1997-01-14 Martek Corporation Generation and screening of synthetic drug libraries
AU1925195A (en) 1994-02-22 1995-09-04 Dana-Farber Cancer Institute Nucleic acid delivery system, method of synthesis and uses thereof
US5539083A (en) 1994-02-23 1996-07-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Peptide nucleic acid combinatorial libraries and improved methods of synthesis
US5902880A (en) 1994-08-19 1999-05-11 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. RNA polymerase III-based expression of therapeutic RNAs
US6551618B2 (en) 1994-03-15 2003-04-22 University Of Birmingham Compositions and methods for delivery of agents for neuronal regeneration and survival
US6015880A (en) 1994-03-16 2000-01-18 California Institute Of Technology Method and substrate for performing multiple sequential reactions on a matrix
US5807522A (en) 1994-06-17 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods for fabricating microarrays of biological samples
US5525735A (en) 1994-06-22 1996-06-11 Affymax Technologies Nv Methods for synthesizing diverse collections of pyrrolidine compounds
US5549974A (en) 1994-06-23 1996-08-27 Affymax Technologies Nv Methods for the solid phase synthesis of thiazolidinones, metathiazanones, and derivatives thereof
US6645943B1 (en) 1994-10-25 2003-11-11 Hybridon, Inc. Method of down-regulating gene expression
GB9501465D0 (en) 1995-01-25 1995-03-15 King S College London Nucleoside phosphorothioate derivatives,synthesis and use thereof
DE19502912A1 (de) 1995-01-31 1996-08-01 Hoechst Ag G-Cap Stabilisierte Oligonucleotide
IT1275862B1 (it) 1995-03-03 1997-10-24 Consiglio Nazionale Ricerche Trascritto antisenso associato ad alcuni tipi di cellule tumorali ed oligodeossinucleotidi sintetici utili nella diagnosi e nel trattamento
IT1276642B1 (it) 1995-03-03 1997-11-03 Consiglio Nazionale Ricerche Trascritto antisenso presente in linfociti b ed oligodeossinucleotidi sintetici utili per inibirne l'azione
US5739311A (en) 1995-06-07 1998-04-14 Gen-Probe Incorporated Enzymatic synthesis of phosphorothioate oligonucleotides using restriction endonucleases
US5569588A (en) 1995-08-09 1996-10-29 The Regents Of The University Of California Methods for drug screening
CA2749312A1 (en) 1996-02-14 1997-08-21 Novartis Ag Sugar-modified gapped oligonucleotides
PT888385E (pt) 1996-03-14 2004-01-30 Genentech Inc Utilizacoes de gdnf e de receptores de gdnf
BR9708701A (pt) 1996-04-17 2000-01-04 Hoechst Marion Roussel De Gmbh Inibidores anti-sense de expressão do fator de crescimento endotelial vascular.
US5786213A (en) 1996-04-18 1998-07-28 Board Of Regents, The University Of Texas System Inhibition of endogenous gastrin expression for treatment of colorectal cancer
US5756710A (en) 1996-06-05 1998-05-26 The Trustees Of Columbia University In City Of New York Phosphorothioate oligonucleotides that bind to the V3-loop and uses thereof
US5898031A (en) 1996-06-06 1999-04-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotides for cleaving RNA
US5849902A (en) 1996-09-26 1998-12-15 Oligos Etc. Inc. Three component chimeric antisense oligonucleotides
US5739119A (en) 1996-11-15 1998-04-14 Galli; Rachel L. Antisense oligonucleotides specific for the muscarinic type 2 acetylcholine receptor MRNA
US7008776B1 (en) 1996-12-06 2006-03-07 Aventis Pharmaceuticals Inc. Compositions and methods for effecting the levels of high density lipoprotein (HDL) cholesterol and apolipoprotein AI very low density lipoprotein (VLDL) cholesterol and low density lipoprotein (LDL) cholesterol
US7235653B2 (en) 1996-12-31 2007-06-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide compositions and methods for the modulation of the expression of B7 protein
JP3756313B2 (ja) 1997-03-07 2006-03-15 武 今西 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体
US5972894A (en) * 1997-08-07 1999-10-26 Cytran, Inc. Peptides having potassium channel opener activity
US6013786A (en) 1997-08-22 2000-01-11 Hybridon, Inc. MDM2-specific antisense oligonucleotides
US6794499B2 (en) 1997-09-12 2004-09-21 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US7572582B2 (en) 1997-09-12 2009-08-11 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
EP2253639A1 (en) 1997-09-12 2010-11-24 Exiqon A/S Bi- and tri-cyclic nucleoside, nucleotide and oligonucleoide analogues
US7285288B1 (en) 1997-10-03 2007-10-23 Board Of Regents, The University Of Texas System Inhibition of Bcl-2 protein expression by liposomal antisense oligodeoxynucleotides
US6034883A (en) 1998-01-29 2000-03-07 Tinney; Charles E. Solid state director for beams
US6175409B1 (en) 1999-04-02 2001-01-16 Symyx Technologies, Inc. Flow-injection analysis and variable-flow light-scattering methods and apparatus for characterizing polymers
US20040186071A1 (en) 1998-04-13 2004-09-23 Bennett C. Frank Antisense modulation of CD40 expression
US7321828B2 (en) 1998-04-13 2008-01-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. System of components for preparing oligonucleotides
US6221587B1 (en) 1998-05-12 2001-04-24 Isis Pharmceuticals, Inc. Identification of molecular interaction sites in RNA for novel drug discovery
US6833361B2 (en) 1998-05-26 2004-12-21 Ribapharm, Inc. Nucleosides having bicyclic sugar moiety
JP2002516256A (ja) 1998-05-26 2002-06-04 アイ・シー・エヌ・フアーマシユーテイカルズ・インコーポレイテツド 二環式糖成分を有する新規ヌクレオシド
US6100090A (en) 1999-06-25 2000-08-08 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense inhibition of PI3K p85 expression
US20030139359A1 (en) 2001-12-04 2003-07-24 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of phospholipid scramblase 3 expression
US6867294B1 (en) 1998-07-14 2005-03-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped oligomers having site specific chiral phosphorothioate internucleoside linkages
US6242589B1 (en) 1998-07-14 2001-06-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Phosphorothioate oligonucleotides having modified internucleoside linkages
US6214986B1 (en) 1998-10-07 2001-04-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of bcl-x expression
AU1607100A (en) 1998-11-06 2000-05-29 Alcon Laboratories, Inc. Upregulation of endogenous prostaglandins to lower intraocular pressure
US5985663A (en) 1998-11-25 1999-11-16 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense inhibition of interleukin-15 expression
WO2000044409A1 (en) 1999-01-27 2000-08-03 University College London Formulations comprising antisense nucleotides to connexins
ID30093A (id) 1999-02-12 2001-11-01 Sankyo Co Analog-analog nukleosida dan oligonukleotida baru
DE60037938T2 (de) 1999-02-26 2009-01-29 The University Of British Columbia, Vancouver Antisense-therapie für trpm-2
US20040137423A1 (en) 1999-03-15 2004-07-15 Hayden Michael R. Compositions and methods for modulating HDL cholesterol and triglyceride levels
US6617122B1 (en) 1999-03-15 2003-09-09 Xenon Genetics, Inc. Process for identifying modulators of ABC1 activity
CA2368169C (en) 1999-03-18 2012-07-10 Exiqon A/S Detection of mutations in genes by specific lna primers
US7084125B2 (en) 1999-03-18 2006-08-01 Exiqon A/S Xylo-LNA analogues
DE60029314T2 (de) 1999-03-24 2007-07-12 Exiqon A/S Verbesserte Synthese für -2.2.1. I Bicyclo-Nukleoside
US6734291B2 (en) 1999-03-24 2004-05-11 Exiqon A/S Synthesis of [2.2.1]bicyclo nucleosides
IL145526A0 (en) 1999-03-26 2002-06-30 Aventis Pharm Prod Inc Compositions and methods for effecting the levels of high density lipoprotein (hdl) chloesterol and apolipoprotein ai, very low density lipopritein (vldl) cholesterol and low density lipoprotein (ldl) cholesterol
ES2300261T3 (es) 1999-04-08 2008-06-16 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Potenciacion de la respuesta inmune para aplicaciones de vacunas y terapia genetica.
WO2000063365A1 (en) 1999-04-21 2000-10-26 Pangene Corporation Locked nucleic acid hybrids and methods of use
EP1178999B1 (en) 1999-05-04 2007-03-14 Santaris Pharma A/S L-ribo-lna analogues
US6525191B1 (en) 1999-05-11 2003-02-25 Kanda S. Ramasamy Conformationally constrained L-nucleosides
DE19925073C2 (de) 1999-06-01 2001-07-19 Stefan Weiss Nucleinsäuremoleküle mit spezifischer Erkennung von nativem PrP·S··c·, Herstellung und Verwendung
US6656730B1 (en) 1999-06-15 2003-12-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides conjugated to protein-binding drugs
WO2001000669A2 (en) 1999-06-25 2001-01-04 Genset A bap28 gene and protein
US20040006031A1 (en) 2002-07-02 2004-01-08 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of HMG-CoA reductase expression
US6147200A (en) 1999-08-19 2000-11-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-O-acetamido modified monomers and oligomers
WO2001021631A2 (en) 1999-09-20 2001-03-29 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Secreted proteins and uses thereof
US6617442B1 (en) 1999-09-30 2003-09-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Human Rnase H1 and oligonucleotide compositions thereof
WO2001025488A2 (en) 1999-10-06 2001-04-12 Quark Biotech, Inc. Method for enrichment of natural antisense messenger rna
US6986988B2 (en) 1999-10-06 2006-01-17 Quark Biotech, Inc. Method for enrichment of natural antisense messenger RNA
JP4048053B2 (ja) * 1999-11-26 2008-02-13 マクギル ユニバーシティー 特発性全身てんかんについてのローカス、当該ローカスのミューテーション、及びてんかんの評価、診断、予後、または治療のための当該ローカスの使用方法
AU2778801A (en) 2000-01-07 2001-07-24 Baylor University Antisense compositions and methods
US7087589B2 (en) 2000-01-14 2006-08-08 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Methanocarba cycloakyl nucleoside analogues
US6303374B1 (en) 2000-01-18 2001-10-16 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of caspase 3 expression
JP2001247459A (ja) 2000-03-03 2001-09-11 Oakland Uniservices Ltd 癌の組み合わせ療法
CA2404780A1 (en) 2000-03-27 2001-10-04 University Of Delaware Targeted chromosomal genomic alterations with modified single stranded oligonucleotides
US6936467B2 (en) 2000-03-27 2005-08-30 University Of Delaware Targeted chromosomal genomic alterations with modified single stranded oligonucleotides
US7402434B2 (en) 2000-05-08 2008-07-22 Newman Stuart A Splice choice antagonists as therapeutic agents
EP1294754A1 (en) 2000-06-29 2003-03-26 Pharma Pacific Pty. Ltd. Interferon-alpha induced gene
WO2002009700A1 (en) 2000-07-28 2002-02-07 Cancer Research Technology Limited Cancer treatment by combination therapy
US7053199B2 (en) 2000-08-29 2006-05-30 Takeshi Imanishi Nucleoside analogs and oligonucleotide derivatives containing these analogs
NZ524894A (en) 2000-09-02 2005-03-24 Gruenenthal Chemie Antisense oligonucleotides against VR1
US6444464B1 (en) 2000-09-08 2002-09-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of E2F transcription factor 2 expression
JP2004509619A (ja) 2000-09-20 2004-04-02 アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド Ｆｌｉｐ−ｃ発現のアンチセンスモジュレーション
US7470718B2 (en) 2000-10-03 2008-12-30 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Method for treating a demyelinating condition
EP1325121A2 (en) 2000-10-13 2003-07-09 Institut de Cardiologie de Montreal Antisense oligonucleotide directed toward mammalian vegf receptor genes and uses thereof
US20030228618A1 (en) 2000-11-24 2003-12-11 Erez Levanon Methods and systems for identifying naturally occurring antisense transcripts and methods, kits and arrays utilizing same
US20050222029A1 (en) 2001-01-04 2005-10-06 Myriad Genetics, Incorporated Compositions and methods for treating diseases
US7423142B2 (en) 2001-01-09 2008-09-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes
US20040175803A1 (en) 2001-02-20 2004-09-09 Jean-Francois Meritet Interferon-alpha induced gene
US20020147165A1 (en) 2001-02-22 2002-10-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of calreticulin expression
AUPR497101A0 (en) 2001-05-14 2001-06-07 Queensland University Of Technology Polynucleotides and polypeptides linked to cancer and/or tumorigenesi
IL143379A (en) 2001-05-24 2013-11-28 Yissum Res Dev Co Oligonucleotide against human ache isoform r and its uses
US7053195B1 (en) 2001-06-12 2006-05-30 Syngenta Participatious Ag Locked nucleic acid containing heteropolymers and related methods
US7153954B2 (en) 2001-07-12 2006-12-26 Santaris Pharma A/S Method for preparation of LNA phosphoramidites
JP4210737B2 (ja) 2001-07-12 2009-01-21 ユニバーシティー オブ マサチューセッツ 遺伝子サイレンシングを仲介する低分子干渉リボ核酸のインビボにおける製造方法
US7425545B2 (en) 2001-07-25 2008-09-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of C-reactive protein expression
US20030096772A1 (en) 2001-07-30 2003-05-22 Crooke Rosanne M. Antisense modulation of acyl CoA cholesterol acyltransferase-2 expression
US7259150B2 (en) 2001-08-07 2007-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of apolipoprotein (a) expression
WO2003020739A2 (en) 2001-09-04 2003-03-13 Exiqon A/S Novel lna compositions and uses thereof
US20040214766A1 (en) 2001-10-01 2004-10-28 Kari Alitalo VEGF-C or VEGF-D materials and methods for treatment of neuropathologies
DE60209380T2 (de) 2001-10-10 2006-10-19 Société des Produits Nestlé S.A. Kaffeepflanze mit verringerter alpha-d-galaktosidase-aktivität
AR037699A1 (es) 2001-12-04 2004-12-01 Monsanto Technology Llc Maiz transgenico con fenotipo mejorado
US7125982B1 (en) 2001-12-05 2006-10-24 Frayne Consultants Microbial production of nuclease resistant DNA, RNA, and oligo mixtures
US6965025B2 (en) 2001-12-10 2005-11-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of connective tissue growth factor expression
CA2365811A1 (en) 2001-12-21 2003-06-21 Institut De Cardiologie A new gene therapy using antisense strategy to estrogen receptors (er .alpha. and/or er .beta.) to optimize vascular healing and cardioprotection after vascular injury
KR20030056538A (ko) 2001-12-28 2003-07-04 주식회사 웰진 리본형 안티센스 올리고뉴클레오티드에 의한 형질전이성장 인자-β1의 효과적 저해제 개발
US7659082B2 (en) * 2002-02-19 2010-02-09 Xenon Pharmaceuticals Inc. Methods for identifying analgesic agents
US20030191075A1 (en) 2002-02-22 2003-10-09 Cook Phillip Dan Method of using modified oligonucleotides for hepatic delivery
US20050143357A1 (en) 2002-02-25 2005-06-30 Ake Pousette Vitamin d upregulated protein 1 (vdup-) methods and uses thereof
AU2003225701A1 (en) 2002-03-08 2003-09-22 Glen Research Corporation Fluorescent nitrogenous base and nucleosides incorporating same
GB2386836B (en) 2002-03-22 2006-07-26 Cancer Res Ventures Ltd Anti-cancer combinations
US7169916B2 (en) 2002-04-01 2007-01-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Chloral-free DCA in oligonucleotide synthesis
US20050215504A1 (en) 2002-04-02 2005-09-29 Bennett C F Antisense modulation of sterol regulatory element-binding protein-1 expression
SI2264172T1 (sl) 2002-04-05 2017-12-29 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligomerne spojine za modulacijo izražanja HIF-1alfa
US7569575B2 (en) 2002-05-08 2009-08-04 Santaris Pharma A/S Synthesis of locked nucleic acid derivatives
US6808906B2 (en) 2002-05-08 2004-10-26 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Directionally cloned random cDNA expression vector libraries, compositions and methods of use
US7199107B2 (en) 2002-05-23 2007-04-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of kinesin-like 1 expression
US7148342B2 (en) 2002-07-24 2006-12-12 The Trustees Of The University Of Pennyslvania Compositions and methods for sirna inhibition of angiogenesis
US20040033480A1 (en) 2002-08-15 2004-02-19 Wong Norman C.W. Use of resveratrol to regulate expression of apolipoprotein A1
WO2004024079A2 (en) 2002-09-10 2004-03-25 The Samuel Roberts Noble Foundation, Inc. Methods and compositions for production of flavonoid and isoflavonoid nutraceuticals
AU2003283966A1 (en) 2002-09-25 2004-04-23 Pharmacia Corporation Antisense modulation of farnesoid x receptor expression
EP2272958A1 (en) 2002-09-26 2011-01-12 ISIS Pharmaceuticals, Inc. Modulation of forkhead box O1A expression
WO2004041838A1 (en) 2002-11-01 2004-05-21 University Of Massachusetts Regulation of transcription elongation factors
US7521431B2 (en) 2002-11-01 2009-04-21 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for siRNA inhibition of HIF-1 alpha
GB2394658A (en) 2002-11-01 2004-05-05 Cancer Rec Tech Ltd Oral anti-cancer composition
AU2003291753B2 (en) 2002-11-05 2010-07-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
AU2003291755A1 (en) 2002-11-05 2004-06-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomers comprising modified bases for binding cytosine and uracil or thymine and their use
US20060009410A1 (en) 2002-11-13 2006-01-12 Crooke Rosanne M Effects of apolipoprotein B inhibition on gene expression profiles in animals
EP2752488B1 (en) 2002-11-18 2020-02-12 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense design
US7144999B2 (en) 2002-11-23 2006-12-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of hypoxia-inducible factor 1 alpha expression
AR042806A1 (es) * 2002-12-27 2005-07-06 Otsuka Pharma Co Ltd Combinacion de derivados de carboestirilo e inhibidores de la reabsorcion de serotonina para el tratamiento de trastornos del animo
US7713738B2 (en) 2003-02-10 2010-05-11 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds for the modulation of survivin expression
WO2004075886A1 (fr) * 2003-02-14 2004-09-10 Pierre Fabre Medicament Utilisation de l’enantiomere (1s, 2r) du milnacipran pour la preparation d’un medicament
US7598227B2 (en) 2003-04-16 2009-10-06 Isis Pharmaceuticals Inc. Modulation of apolipoprotein C-III expression
US7339051B2 (en) 2003-04-28 2008-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the treatment of severe acute respiratory syndrome (SARS)
US7276599B2 (en) 2003-06-02 2007-10-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide synthesis with alternative solvents
CA2524495A1 (en) 2003-06-03 2005-01-13 Eli Lilly And Company Modulation of survivin expression
US7825235B2 (en) 2003-08-18 2010-11-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of diacylglycerol acyltransferase 2 expression
PE20050469A1 (es) 2003-09-18 2005-09-10 Lilly Co Eli Modulacion de la expresion de eif4e
EP1687410A4 (en) 2003-10-07 2008-04-09 Isis Pharmaceuticals Inc ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDES OPTIMIZED TO TARGET THE KIDNEY
EP1675948A2 (en) 2003-10-23 2006-07-05 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED TREATMENT OF PARKINSON DISEASE USING SHORT INTERERING NUCLEIC ACID (siNA)
AU2004303464B2 (en) 2003-12-23 2009-10-01 Santaris Pharma A/S Oligomeric compounds for the modulation of BCL-2
CN1918285B (zh) 2004-01-12 2013-09-25 宾夕法尼亚大学理事会 通过施加由特异性和选择性的电以及电磁信号产生的场上调骨细胞中骨形态发生蛋白(bmp)基因表达的***以及方法
US7468431B2 (en) 2004-01-22 2008-12-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of eIF4E-BP2 expression
GB0403041D0 (en) 2004-02-11 2004-03-17 Milner Anne J Induction of apoptosis
EP1566202A1 (en) 2004-02-23 2005-08-24 Sahltech I Göteborg AB Use of resistin antagonists in the treatment of rheumatoid arthritis
US7402574B2 (en) 2004-03-12 2008-07-22 Avi Biopharma, Inc. Antisense composition and method for treating cancer
US8394947B2 (en) 2004-06-03 2013-03-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Positionally modified siRNA constructs
US7297786B2 (en) 2004-07-09 2007-11-20 University Of Iowa Research Foundation RNA interference in respiratory epitheial cells
US7427675B2 (en) 2004-08-23 2008-09-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for the characterization of oligonucleotides
GB0419849D0 (en) * 2004-09-07 2004-10-13 Pfizer Ltd Pharmaceutical combination
AU2005304112B2 (en) 2004-11-09 2009-06-04 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Potent LNA oligonucleotides for the inhibition of HIF-1a expression
US7220549B2 (en) 2004-12-30 2007-05-22 Helicos Biosciences Corporation Stabilizing a nucleic acid for nucleic acid sequencing
US20080171746A1 (en) * 2005-03-14 2008-07-17 Thomas Klein Method for Preventing Cardiovascular Diseases
MY158766A (en) * 2005-04-11 2016-11-15 Xenon Pharmaceuticals Inc Spiro-oxindole compounds and their uses as therapeutic agents
AU2006261732B2 (en) 2005-06-27 2011-09-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. RNAi modulation of HIF-1 and theraputic uses thereof
US20070213292A1 (en) 2005-08-10 2007-09-13 The Rockefeller University Chemically modified oligonucleotides for use in modulating micro RNA and uses thereof
EP1937312B1 (en) 2005-08-30 2016-06-29 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Chimeric oligomeric compounds for modulation of splicing
US7994220B2 (en) * 2005-09-28 2011-08-09 Cypress Bioscience, Inc. Milnacipran for the long-term treatment of fibromyalgia syndrome
AU2006305886C1 (en) 2005-10-28 2011-03-17 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of huntingtin gene
EP1942948A4 (en) 2005-11-04 2010-03-03 Alnylam Pharmaceuticals Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING THE EXPRESSION OF THE NAV1.8 GENE
US7709456B2 (en) 2005-11-17 2010-05-04 Board Of Regents, The University Of Texas System Modulation of gene expression by oligomers targeted to chromosomal DNA
WO2007102861A2 (en) 2005-12-02 2007-09-13 Sirtris Pharmaceuticals, Inc. Modulators of cdc2-like kinases (clks) and methods of use thereof
CN101378764A (zh) 2005-12-09 2009-03-04 贝勒研究院 通过血液白细胞微阵列分析对***性红斑狼疮的诊断、预后和疾病发展的监测
US20070213274A1 (en) 2005-12-20 2007-09-13 Oy Jurilab Ltd Novel genes and markers associated with high-density lipoprotein-cholesterol (HDL-C)
CN100356377C (zh) 2005-12-20 2007-12-19 无锡永中科技有限公司 文档显示方法
WO2007087113A2 (en) 2005-12-28 2007-08-02 The Scripps Research Institute Natural antisense and non-coding rna transcripts as drug targets
US7569686B1 (en) 2006-01-27 2009-08-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for synthesis of bicyclic nucleic acid analogs
AU2007211080B9 (en) 2006-01-27 2012-05-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-modified bicyclic nucleic acid analogs
EP2008274B1 (en) 2006-03-31 2015-05-27 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of eg5 gene
ES2386578T3 (es) 2006-05-05 2012-08-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compuestos y procedimientos para modular la expresión de PCSK9
ES2389737T3 (es) 2006-05-11 2012-10-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. Análogos de ácidos nucleicos bicíclicos modificados en 5'
US7666854B2 (en) 2006-05-11 2010-02-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bis-modified bicyclic nucleic acid analogs
CN101484588B (zh) 2006-05-11 2013-11-06 阿尔尼拉姆医药品有限公司 抑制pcsk9基因表达的组合物和方法
EP1867338A1 (en) 2006-05-30 2007-12-19 Université Libre De Bruxelles Pharmaceutical composition comprising apolipoproteins for the treatment of human diseases
WO2008066672A2 (en) 2006-11-06 2008-06-05 Beth Israel Deaconess Medical Center Identification and use of small molecules to modulate transcription factor function and to treat transcription factor associated diseases
WO2008057556A2 (en) 2006-11-06 2008-05-15 Beth Israel Deaconess Medical Center Identification and use of small molecules to modulate ese-1 transcription factor function and to treat ese-1 transcription factor associated diseases
US8093222B2 (en) 2006-11-27 2012-01-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia
ES2447840T3 (es) 2007-01-19 2014-03-13 Plant Bioscience Limited Métodos para la modulación de las vías de metilación del SIRNA y ADN dirigido por ARN
WO2008124660A2 (en) 2007-04-06 2008-10-16 The Johns Hopkins University Methods and compositions for the treatment of cancer
US20080293142A1 (en) 2007-04-19 2008-11-27 The Board Of Regents For Oklahoma State University Multiple shRNA Expression Vectors and Methods of Construction
EP2194965B1 (en) * 2007-08-31 2016-07-20 Archimedes Development Limited Non-aqueous pharmaceutical compositions
WO2009064505A1 (en) * 2007-11-16 2009-05-22 The Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona Methods for treating visceral pain
EP2304030B1 (en) 2008-07-01 2015-11-25 Monsanto Technology LLC Recombinant dna constructs and methods for modulating expression of a target gene
ES2727549T3 (es) 2008-10-03 2019-10-17 Curna Inc Tratamiento de las enfermedades relacionadas con la apolipoproteína a1 por inhibición del transcrito antisentido natural a la apolipoproteína a1
EP2177615A1 (en) 2008-10-10 2010-04-21 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Method for a genome wide identification of expression regulatory sequences and use of genes and molecules derived thereof for the diagnosis and therapy of metabolic and/or tumorous diseases
US8606289B2 (en) 2008-11-10 2013-12-10 Qualcomm Incorporated Power headroom-sensitive scheduling
JP2012509306A (ja) 2008-11-22 2012-04-19 ザ ユニバーシティ オブ ブリストル ＶＥＧＦｘｘｘｂの新規な使用
CN103025873B (zh) 2010-06-23 2018-05-08 库尔纳公司 通过抑制电压门控钠通道α亚基(SCNA)的天然反义转录物而治疗SCNA相关疾病

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CATTERALL et al. "International Union of Pharmacology XLVII Nomenclature and structure-function relationships of voltage-gated sodium channels" Pharmacol. Rev, December 2005, Vol. 57, No 4; Pages 397-409. Especially pg. 572 fig. 2, pg. 572 col. 1 para 2 and col. 2 para 1 *
DUFF et al. "Class I and IV Antiarrhythmic Drugs and Cytosolic Calcium Regulate mRNA Encoding the Sodium Channel alpha Subunit in Rat Cardiac Muscle" Mol. Pharmacol; October 1992; Vol. 42, No 4; Pages 570-574 Especially pg. 405 table 6, pg. 407 table 8 *
YAMAMOTO et al. "Up-regulation of sodium channel subunit mRNAs and their cell surface expression by antiepileptic valproic acid- activation of calcium channel and catecholamine secretion in adrenal chromaffin cells"; J. Neurochem; April 1997; Vol. 68, No 4; Pages 1655-1662. Especially pg. 1655 col. 1 para 1, pg. 1659 col. 1 para 1, pg. 1659 fig. 5, pg. 1660 col. 2 para 1 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN103874486A (zh) 2014-06-18
TW201317360A (zh) 2013-05-01
US20140309181A1 (en) 2014-10-16
WO2013036403A1 (en) 2013-03-14
JP2014525446A (ja) 2014-09-29
JP6125505B2 (ja) 2017-05-10
KR101991980B1 (ko) 2019-06-21
CA2847811C (en) 2019-10-22
CA2847811A1 (en) 2013-03-14
EA201490420A1 (ru) 2014-12-30
MX2014002668A (es) 2014-06-04
TWI666325B (zh) 2019-07-21
KR20140147800A (ko) 2014-12-30
EP2753317A1 (en) 2014-07-16
EP2753317A4 (en) 2015-04-08
CL2014000550A1 (es) 2014-09-22
MX365525B (es) 2019-06-06
EP2753317B1 (en) 2020-02-26
BR112014005234A2 (pt) 2017-04-11
CN108272782B (zh) 2021-04-23
US10583128B2 (en) 2020-03-10
CN108272782A (zh) 2018-07-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA029151B1 (ru) ЛЕЧЕНИЕ ЗАБОЛЕВАНИЙ, СВЯЗАННЫХ С АЛЬФА-СУБЪЕДИНИЦАМИ ПОТЕНЦИАЛЗАВИСИМЫХ НАТРИЕВЫХ КАНАЛОВ (SCNxA), С ПОМОЩЬЮ МАЛЫХ МОЛЕКУЛ
US11390868B2 (en) Treatment of filaggrin (FLG) related diseases by modulation of FLG expression and activity
Shook et al. Design and characterization of optimized adenosine A2A/A1 receptor antagonists for the treatment of Parkinson's disease
Shook et al. In vivo characterization of a dual adenosine A2A/A1 receptor antagonist in animal models of Parkinson’s disease
WO2020160192A1 (en) Compounds and uses thereof
Sun et al. Inhibitors of voltage-gated sodium channel Nav1. 7: patent applications since 2010
US20090233274A1 (en) Drug development target protein and target gene, and method of screening
Kuttruff et al. Discovery of BI-2545: A novel autotaxin inhibitor that significantly reduces LPA levels in vivo
US10758522B2 (en) Small molecule analogs of the nemo binding peptide
EP3704092A1 (en) Isoindoline compositions and methods for treating neurodegenerative disease
WO2012164103A2 (en) Blockers of the nogo-a s1pr pathway for the treatment of diseases characterized by neuronal damage and lack of subsequent repair
AU2021308406A1 (en) KAT6 inhibitor methods and combinations for cancer treatment
US11787800B2 (en) BRD9 degraders and uses thereof
US8058009B2 (en) Target protein and target gene in drug designing and screening method
WO2011053977A1 (en) Compounds and methods for inhibiting serotonin synthesis
Du et al. Novel substituted 4-(Arylethynyl)-Pyrrolo [2, 3-d] pyrimidines negative allosteric modulators (NAMs) of the metabotropic glutamate receptor subtype 5 (mGlu5) Treat depressive disorder in mice
US8153385B2 (en) Target protein and target gene in drug designing and screening method
US20230158034A1 (en) Co-treatment with cdk4/6 and cdk2 inhibitors to suppress tumor adaptation to cdk2 inhibitors
Chen et al. Discovery of ZJCK-6-46: A Potent, Selective, and Orally Available Dual-Specificity Tyrosine Phosphorylation-Regulated Kinase 1A Inhibitor for the Treatment of Alzheimer’s Disease
IT202100021863A1 (it) Morfolino pirimidine per l’uso nella prevenzione e/o nel trattamento di stati di ipereccitabilità neuronale
Singh Novel role of the JAK-STAT pathway in mediating the effects of atypical antipsychotics on 5-HT2A receptor signaling